JP5993933B2

JP5993933B2 - 安定性を改善したオタミキサバン製剤

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Publication number: JP5993933B2
Application number: JP2014501567A
Authority: JP
Inventors: カム，バルター; ブツセマー，テイル; アンデルト，ドリス; クーン，ベルント; トート，エルンスト−ヨーゼフ
Original assignee: Sanofi SA
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Priority date: 2011-03-29
Filing date: 2012-03-27
Publication date: 2016-09-14
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Description

本発明は（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルもしくはその医薬的に許容可能な塩と医薬的に許容可能な酸性反応性化合物を含有する医薬組成物又は前記組成物の水溶液もしくは水性分散液、並びにその製造方法及び第Ｘａ因子阻害剤の投与により改善することができる病態に罹患している対象を治療するための前記組成物の使用方法に関する。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル（ＣＡＳ番号１９３１５３−０４−７）は国際非商標名オタミキサバンであり、式Ｉに図示する構造を示す。

第Ｘａ因子阻害剤の投与により改善することができる病態に罹患している患者又は罹患する傾向のある患者の治療用医薬の製造における（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの使用はＷＯ９７／２４１１８に開示されている。

第Ｘａ因子は凝固カスケードで最後から２番目に作用する酵素である。第Ｘａ因子（ＦＸａ）は血液凝固カスケードの内因系経路と外因系経路の合流点に位置する重要なセリンプロテアーゼである。ＦＸａはプロトロンビンがプロトロンビナーゼ複合体を介してトロンビンに転換されるのを触媒する。ＦＸａはトロンビン生成におけるその特異な役割と共にその血栓形成増強作用により、治療介入の魅力的なターゲットとなる。

遊離型第Ｘａ因子と、プロトロンビナーゼ複合体（第Ｘａ因子、第Ｖａ因子、カルシウム及びリン脂質）で結合した第Ｘａ因子のいずれもオタミキサバンにより阻害される。第Ｘａ因子阻害は阻害剤と酵素の直接的な複合体形成により得られるため、血漿補助因子アンチトロンビンＩＩＩに依存しない。有効な第Ｘａ因子阻害は静脈内連続輸液、静脈内ボーラス投与又は第Ｘａ因子により誘導されるプロトロンビンからトロンビンの形成を妨げるという望ましい作用を達成するような任意の他の非経口経路により前記化合物を投与することにより達せられる。オタミキサバンは血栓症の齧歯類、イヌ及びブタモデルで非常に有効であることがインビボ実験により立証されている。更に、最近の臨床報告によると、オタミキサバンはヒトにおいて有効且つ安全で忍容性が良好であるため、急性冠症候群の治療に利用できる可能性が高いことが分かっている（Ｋ．Ｒ．ＧｕｅｒｔｉｎａｎｄＹｏｎｇ−ＭｉＣｈｏｉ；２００７；ＣｕｒｒｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．２３；ｐ．２４７１−２４８１）。用量変動臨床試験における臨床報告によると、オタミキサバンは最高用量レジメンで未分画ヘパリンよりも有意にプロトロンビンフラグメント１＋２を低下させた（Ｃｏｈｅｎｅｔａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１１５，Ｎｏ．２０，Ｍａｙ２００７，ｐａｇｅｓ２６４２−２６５１）が、前記臨床報告は年齢又は腎機能障害の比較データを示していない。他の臨床試験の結果、オタミキサバンは軽度腎機能障害をもつ患者を含めて通常の薬物を服用中の安定型冠動脈疾患患者に用量依存的で迅速且つ直接的な第Ｘａ因子の阻害を誘導することが立証された（Ｈｉｎｄｅｒｅｔａｌ．，ＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．８０，Ｎｏ．６，２００６，ｐａｇｅｓ６９１−７０２）。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの注射及び輸液用医薬組成物が臨床試験用に開発された。最終滅菌処理（オートクレーブ滅菌処理）中及び安定性試験中に注目された点の１つは２種類の分解生成物の顕著な増加であった。前記分解生成物の一方は（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸であり、式ＩＩに示す構造をもつ。

前記分解生成物の他方は（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルであり、式ＩＩＩに示す構造をもつ。

推奨保存条件下でも（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルを含有する水性医薬組成物中の（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸と（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの濃度は高濃度に達する。

国際公開第９７／２４１１８号

Ｋ．Ｒ．ＧｕｅｒｔｉｎａｎｄＹｏｎｇ−ＭｉＣｈｏｉ；２００７；ＣｕｒｒｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．２３；ｐ．２４７１−２４８１Ｃｏｈｅｎｅｔａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１１５，Ｎｏ．２０，Ｍａｙ２００７，ｐａｇｅｓ２６４２−２６５１Ｈｉｎｄｅｒｅｔａｌ．，ＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．８０，Ｎｏ．６，２００６，ｐａｇｅｓ６９１−７０２

本発明の目的は最終滅菌処理中又は長期保存中に生じる（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸又は（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの濃度上昇という欠点のない（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの長期安定医薬組成物を見出すことである。

薬剤の長期保存中の（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸又は（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの形成は以下のように逆の作用を受けることが判明した。
−オートクレーブ滅菌処理中に（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの濃度は液体医薬組成物のｐＨ上昇と共に有意に上昇するが、オートクレーブ滅菌処理中に液体製剤のｐＨが（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の形成に強い影響を与えることは認められなかった。従って、医薬組成物のｐＨが低いほど好適である。
−長期保存中に（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の濃度は液体医薬組成物のｐＨ低下と共に有意に上昇するが、長期保存中に液体製剤のｐＨが（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの形成に強い影響を与えることは認められなかった。従って、医薬組成物のｐＨが高いほど好適である。

ｐＨが５未満の（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩の液体医薬組成物はオートクレーブ滅菌処理又は長期保存により逆の作用を受ける（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸と（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの双方の増加を抑制するのに有利であることが判明した。

５未満のｐＨは、（ｉ）長期安定した医薬組成物、並びに減菌のためのシンプルで経済的、及び安全な方法である（ＩＩ）オートクレープ（蒸気減菌）による減菌注射用溶液である、本発明の医薬組成物の明確な利点を提供する。

本発明は（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と、医薬的に許容可能な酸性反応性化合物の医薬組成物を提供する。

本発明は更に（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と、医薬的に許容可能な酸性反応性化合物の滅菌医薬組成物も提供する。

本願で使用する用語は本明細書に定義する意味である。

「医薬的に許容可能な酸性反応性化合物」とは、（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩の水溶液又は水性分散液を５未満のｐＨにすることが可能な非毒性化合物を意味する。酸性反応性化合物の具体例はクエン酸、酢酸、グリコール酸、アジピン酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、グルクロン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、ヒアルロン酸、アセチルサリチル酸、又は無機酸（例えば塩酸）もしくは無機酸塩（例えばリン酸二水素カリウム）、又はアミノ酸（例えばグリシン）とその塩、又は前記酸性反応性化合物の１種以上の混合物である。前記酸性反応性化合物はクエン酸が好ましい。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩の水溶液又は水性分散液ｐＨを５未満にするために必要な医薬的に許容可能な酸性反応性化合物の量は個々の化合物によって異なり、例えば約１ｍｇの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルを含有するサンプルを約１ｍＬの精製水に懸濁又は溶解し、上清のｐＨ測定値が５未満になるまで十分な医薬的に許容可能な酸性反応性化合物を加えることにより当業者が決定することができる。上清のｐＨはｐＨ計又はｐＨ指示薬で測定する。

「緩衝溶液」とは、弱酸とその共役塩基又は弱塩基とその共役酸の混合物から構成される水溶液である。少量の強酸又は塩基を加えると溶液のｐＨがごく僅かに変化するという性質をもつ。緩衝溶液は多種多様な化学用途でｐＨをほぼ一定の値に維持する手段として使用される。

「分解生成物」とは、本発明の医薬組成物の製造後に生成される任意の薬剤由来生成物を意味する。不純物と分解生成物の分析は当分野で公知の通り、サンプルで逆相ＨＰＬＣ技術を使用して実施される。

「フリーズドライ」ないし「凍結乾燥」とは脱水法を意味する。フリーズドライは材料を凍結させた後に周囲の圧力を下げ、材料中の凍結水を固相から気相に直接昇華させるために十分な熱を加えることにより実施される。

「ｉ．ｖ．」とは静脈内注射又は輸液を意味し、液体物質を静脈内に直接投与することである。静脈内なる用語は分かりやすく言えば、「静脈の内側」という意味である。

「長期」とは１〜３カ月間を意味する。

「長期保存」とは医薬組成物を４０℃及び相対湿度７５％にて１〜３カ月間保存することを意味する。

「非常に長期」とは３〜６カ月間を意味する。

「非常に長期の保存」とは医薬組成物を４０℃及び相対湿度７５％にて３〜６カ月間保存することを意味する。

「ｍＬ」とは１リットルの１０００分の１として定義されるミリリットルを意味し、ＳＩ系単位名で立方センチメートルと言うことも多い。

「非ＳＴ上昇型心筋梗塞」とはＡＣＣ／ＡＨＡ、ＥＳＣ及びＷＨＦコンセンサスに基づく心筋梗塞の定義を意味する。Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｎｏｎ−ＳＴｓｅｇｍｅｎｔｅｌｅｖａｔｉｏｎａｃｕｔｅｃｏｒｏｎａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｓ；ＥｕｒＨｅａｒｔＪ，２００７，２８（１３）：１５９８−１６６０も参照。

「生理食塩水」ないし「等張食塩水」とは血漿とほぼ同一の浸透圧を示す約３０８ｍＯｓｍｏｌ／Ｌの浸透圧を有する塩化ナトリウムの０．９％水溶液を意味する。

「オタミキサバン」とは（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの国際非商標名を意味する。

「患者」とはヒト又は温血動物（例えばラット、マウス、イヌ、ネコ又はモルモット）等の霊長類を意味する。

「病態」とは患者における疾患、障害ないし状態、特に第Ｘａ因子が関与している可能性のあるものを意味する。

「ｐＨ」は溶液の酸性度又は塩基性度の尺度である。溶存水素イオン（Ｈ^＋）のモル濃度の負の対数（底１０）であるｐ［Ｈ］と近似するが、同一ではない。本発明の固体医薬組成物におけるｐＨ測定は約１ｍｇのオタミキサバンを含有する前記医薬組成物のサンプルを約１ｍＬの精製水に懸濁又は溶解することにより実施される。上清のｐＨをｐＨ計又はｐＨ指示薬で測定する。ｐＨは溶液やストリップ型ｐＨ試験紙の形態のフェノールフタレイン等のｐＨ指示薬を使用するか、又は電位差測定法を使用して測定することができる。ストリップ型試験紙は０．２〜０．５のｐＨ単位の精度が必要な場合に非常に有用である。より高精度が必要な場合には、ｐＨ計が唯一の試験法である。電位差測定法では、既知参照電極とｐＨ測定電極の電位差を測定する。ｐＨ電極の電位はヒドロニウムイオンの活性に依存する。この依存性はネルンストの式により表されるので、電位を測定すれば、活性を計算することができる。一次近似活性はイオン濃度に等しいので、ｐＨ計は電位差測定法によるｐＨ測定に使用される装置である。ｐＨ計はｐＨ電極に接続され、電位測定値の代わりにｐＨ値を直接表示するように目盛りを付けた精密電圧計に外ならない。

「医薬的に許容可能な塩」は基本化合物である（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの塩であって、前臨床用及び臨床用医薬組成物として投与することが可能な任意の酸性塩である。適切な塩を形成する無機酸の具体例としては、塩酸、リン酸及びスルファミン酸等の無機酸や、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、安息香酸等の有機酸や、アミノ酸等が挙げられる。酸付加塩は無機酸から誘導されることが好ましく、塩酸が好ましい。

「ＲＨ」とは相対湿度を意味し、空気−水混合物の相対湿度は所定温度における混合物中の水蒸気の分圧と水の飽和蒸気圧の比として定義される。

「滅菌」とは真菌、細菌、ウイルス又は胞子形態等の伝染性病原体を医薬組成物から有効に殺滅又は除去する任意方法を意味する。滅菌は例えば熱、薬品、放射線、高圧もしくは濾過又はその組合せの適用により実施することができる。

「蒸気滅菌」とは広く使用されているオートクレーブでの加熱滅菌法を意味する。オートクレーブは一般に１２１℃〜１３４℃まで加熱した蒸気を使用する。無菌状態に達するためには、１２１℃で少なくとも１５分間又は１３４℃で３分間の有効滞留時間が必要である。適正なオートクレーブ処理では全真菌、細菌、ウイルスに加え、非常に耐性が大きくなる細菌胞子も不活性化される。

「濾過滅菌」とは加熱、放射線又は薬品による滅菌では損傷してしまう液体に対して一般に使用される方法を意味する。細孔寸法０．２μｍのフィルターは細菌を有効に除去する。ウイルスも除去する必要がある場合には、２０ｎｍ付近の著しく小さい細孔寸法が必要である。

「治療有効量」とは指定する障害ないし病態の治療に有効な化合物の量を意味する。

「張性」とは半透膜により隔てられた２種類の溶液の（前記２種類の溶液の水ポテンシャルにより規定される）浸透圧の尺度を意味する。この用語は外液に浸漬した生細胞の応答を表す場合に一般に使用される。半透膜を透過できない溶質のみが浸透圧に影響を与えるので、浸透圧と同様に、張性もこのような溶質のみに左右される。半透膜を自由に透過できる溶質は所定時間後に半透膜の両側で同一濃度になるので、張性に影響を与えない。

「治療」ないし「治療する」とは任意治療を意味し、限定されないが、症状の緩和、症状の原因の一時的もしくは永久的な排除、又は指定する障害ないし病態の症状の出現及び進行の予防もしくは遅延が挙げられる。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの合成については従来開示されており、当業者に周知の方法により実施される。例えば、国際出願ＷＯ９７／２４１１８は合成方法を開示している。

酸性反応性化合物の例はクエン酸、酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、ヒアルロン酸、アセチルサリチル酸、桂皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びスルホン酸類（例えばメタンスルホン酸や２−ヒドロキシエタンスルホン酸）等の有機酸もしくはその塩又は前記有機酸及びその塩の１種以上の混合物である。酸性反応性化合物の他の例は無機酸（例えば塩酸やリン酸）もしくは無機酸塩（例えばリン酸二水素カリウム）、又はアミノ酸とその塩、又は前記無機酸もしくはアミノ酸及びその塩の１種以上の混合物である。酸性反応性化合物はクエン酸もしくはクエン酸ナトリウム又はその混合物が好ましい。

本発明の別の態様では、酸性反応性化合物をオタミキサバンに添加し、本発明の医薬組成物のｐＨを約ｐＨ３〜約ｐＨ４．５、又は約ｐＨ３．７〜約ｐＨ４．３、又は約ｐＨ３．８〜約ｐＨ４．３、又は約ｐＨ４．０〜約ｐＨ４．２、又は約ｐＨ４．０とする。ｐＨ測定は前記医薬組成物からサンプルを採取後に実施する。ｐＨはｐＨ計又はｐＨ指示薬で測定する。

別の態様において本発明は、
ａ）０．１ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ、又は１．５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ、又は５ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸エステルと、
ｂ）１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１０００ｍｍｏｌ／Ｌ、又は２０ｍｍｏｌ〜２５ｍｍｏｌ、又は４ｍｍｏｌ〜６ｍｍｏｌの酸性反応性化合物もしくはその塩又はその混合物を含有しており、
ｃ）ｐＨが５．０未満である注射用水性医薬組成物に関する。

別の態様において、本発明は０．８ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、又は０．９ｍｇ／ｍＬ〜２６ｍｇ／ｍＬ、又は０．９ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸エステルを含有する水性医薬組成物に関する。別の態様において、本発明は２．０ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、又は２．０ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬ、又は１６ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬ、又は３．０ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸エステルを含有する水性医薬組成物に関する。

別の態様において、本発明は（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩の組成物の水溶液又は水性分散液を５．０未満のｐＨにすることが可能な酸性反応性化合物として緩衝溶液を使用する水性医薬組成物に関する。この別の態様では、緩衝溶液をオタミキサバンに添加し、前記水性医薬組成物のｐＨを約ｐＨ３〜約ｐＨ５．０、又は約ｐＨ３〜約ｐＨ４．７、又は約ｐＨ３．５〜約ｐＨ４．６、又は約ｐＨ３．６〜約ｐＨ４．３、又は約ｐＨ３．６〜約ｐＨ４．２、又は約ｐＨ３．６〜約ｐＨ４．１とする。

適切な緩衝液の具体例は、クエン酸とそのナトリウムもしくはカリウム塩、リン酸とそのナトリウムもしくはカリウム塩もしくはリン酸水素塩ないし第二リン酸ナトリウム、酢酸とそのナトリウム塩、乳酸とその塩、コハク酸とその塩、酒石酸とその塩、アスコルビン酸とその塩、アスパラギン酸とその塩、安息香酸とその塩、アジピン酸とその塩、グルクロン酸とその塩、又は塩酸等の無機酸もしくはその塩、グリシンやセリン等のアミノ酸とその塩等の緩衝物質、又はこのような緩衝物質の混合物を含有する。好ましい例はクエン酸及びクエン酸ナトリウムの混合物である。このような混合物の例はクエン酸とクエン酸ナトリウム（クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム）の混合物及びクエン酸とリン酸二水素カリウム又はリン酸水素カリウムの混合物である。

本発明の別の態様において、水性医薬組成物のｐＨを５．０未満にする緩衝溶液の濃度は１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１０００ｍｍｏｌ／Ｌ、又は２０ｍｍｏｌ〜２５ｍｍｏｌ、又は４ｍｍｏｌ〜６ｍｍｏｌである。

本発明の別の態様では、２６０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ〜３５０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、又は血漿とほぼ同一もしくは同等の約３０８ｍＯｓｍｏｌ／Ｌの浸透圧を示す溶液が得られるように本発明の液体医薬製剤に更に張性調整剤を添加してもよい。

張性調整剤の具体例は塩化ナトリウム等の塩類又はグルコース等の糖類又はマンニトール等の糖アルコール類である。オートクレーブ滅菌による滅菌処理の場合には、塩類又はマンニトール等の糖アルコール類が好ましい。塩類の濃度はオタミキサバンと酸性反応性化合物の濃度に応じて０ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬとすることができる。グルコース又はマンニトール等の糖アルコール類の濃度はオタミキサバンと酸性反応性化合物の濃度に応じて０ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬとすることができる。溶液全体の張性は浸透圧が２６０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ〜３５０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ以内となるようにすべきである。

本発明の水性医薬組成物は各々必要量の（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と酸性反応性化合物を水に加え、必要に応じて本願に記載する他の各種成分も加えた後、適切な時間混合することにより製造することができる。

別の態様において、本発明は（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と、医薬的に許容可能な酸性反応性化合物からなる水溶液状の滅菌医薬組成物又は前記組成物の分散液に関する。

別の態様において、本発明は（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と、医薬的に許容可能な酸性反応性化合物と、水からなり、ｐＨが５．０未満である滅菌水性医薬組成物又は前記組成物の分散液に関する。

滅菌医薬組成物は本発明の医薬組成物を滅菌処理することにより製造することができる。滅菌とは真菌、細菌、ウイルス又は胞子形態等の伝染性病原体を医薬組成物から有効に殺滅又は除去する任意方法を意味する。滅菌は熱、薬品、放射線、高圧又は濾過の適用により実施することができる。蒸気滅菌が好ましい滅菌法であり、オートクレーブでの加熱滅菌法を意味する。オートクレーブは一般に１２１℃ 〜１３４℃まで加熱した蒸気を使用する。無菌状態に達するためには、１２１℃で少なくとも１５分間又は１３４℃で３分間の滞留時間が必要である。溶液又は粉末を充填したバイアルを更に布層で覆っている場合には、必要な温度に達するために更に時間がかかると思われるので、液体と器具に更に滅菌時間が必要になると思われる。

本発明の滅菌液体医薬組成物は各々必要量の（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と医薬的に許容可能な酸性反応性化合物を水に加え、場合により必要に応じて本願に記載する他の各種成分も加えた後、滅菌処理することにより製造することができる。滅菌は熱、薬品、放射線、高圧又は濾過の適用により実施することができる。

一般に、分散液は分散媒と本願に記載する他の成分を含有する滅菌ビヒクルに滅菌後の（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と医薬的に許容可能な酸性反応性化合物を加えることにより製造することができる。

注射又は輸液用粉末は（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルと医薬的に許容可能な酸性反応性化合物を含有する固体滅菌物質又は物質の混合物をその最終容器に分配したものであり、所定容量の所定の滅菌液を加えて振盪すると、粒子を実質的に含まない透明な溶液を形成する。溶解後に、注射又は輸液の要件を満たす。前記物質の混合は当分野で公知の混合技術のいずれかを使用して実施することができる。

非経口用フリーズドライ製剤が注射又は輸液用粉末とみなされる。

オタミキサバンと医薬的に許容可能な酸性反応性化合物からなる固形状組成物を提供するには、オタミキサバンと医薬的に許容可能な酸性反応性化合物と場合により本発明の医薬組成物の他の成分を粉末として混合すればよい。この混合は当分野で公知の混合技術のいずれかを使用して実施することができる。混合は高剪断ミキサー、Ｖ型ブレンダー（又は他の双子円筒形混合機）、ビン型ブレンダー又はターブラシェーカーミキサーを使用して実施することが好ましい。ブレンディングは完全な混合を確保するために十分な時間実施するのが一般的である。ブレンドが形成されたら、当分野で公知の手順により固体形態を作製する。

滅菌医薬組成物の調製用滅菌粉末の場合、好ましい製造方法としては、（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と、医薬的に許容可能な酸性反応性化合物と、場合により本願に記載する他の任意成分の予め滅菌濾過した溶液や蒸気滅菌した溶液等からその粉末を生成することができる真空乾燥とフリーズドライ技術が挙げられる。製造した粉末の滅菌処理は熱、薬品又は放射線の適用により実施することができる。蒸気滅菌が好ましい滅菌法であり、オートクレーブでの加熱滅菌法を意味する。粉末を適切なバイアル又はビヒクルに入れて滅菌処理する。

予め滅菌処理した適切な溶媒（例えば水）を加えた後に組成物を混合することにより、滅菌注射用溶液の調製時まで滅菌粉末を保存することができる。予め滅菌処理した適切な溶媒を加え、調製した液体医薬組成物を保存することも可能である。

別の態様において、本発明は長期保存後の（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の最高不純物濃度が約８．０％を越えない注射用水性医薬組成物に関する。所定態様において、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の最高不純物濃度は０．３％〜４．０％、又は０．４％〜３．０％、又は０．４％〜１．８％、又は０．４％〜０．８％、又は０．４３％〜０．７％である。

別の態様において、本発明は長期保存後の（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの最高不純物濃度が約５．０％を越えない注射用水性医薬組成物に関する。所定態様において、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの最高不純物濃度は０．７％〜４．５％、又は０．８％〜４．０％、又は０．９％〜３．５％、又は１．２％〜２．２％、又は１．４％〜２．０％である。

別の態様において、本発明は最高総不純物濃度が約１３％を越えない注射用水性医薬組成物に関する。所定態様において、前記総不純物濃度は１．０％〜８．５％、又は１．１％〜８．０％、又は１．３％〜６．０％、又は１．６％〜４．０％、又は１．８％〜３．５％である。

その塩における（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルと酸性対イオンの相対量は例えば選択される特定の酸や、塩の製造に利用される方法により変動し得る。本発明の塩は（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル約１当量当たり約１当量の酸を含有することが好ましい。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの酸付加塩は適切な酸を予め含有しているか又は適切な酸を添加する水溶液又はアルコール水溶液又は他の適切な溶媒に遊離塩基を溶解し、溶液を蒸発させて塩を分離することにより製造してもよいし、遊離塩基と酸を有機溶媒中で反応させることにより製造してもよく、後者の場合には、塩を直接分離してもよいし、及び／又は溶液の濃縮により得ることもできる。

本発明の医薬組成物は第Ｘａ因子の阻害に有用であると思われる。従って、本発明は第Ｘａ因子の産生を阻害することにより緩和することが可能な病態の治療又は予防方法を提供する。

本発明の医薬組成物で治療することが可能であると思われる病態の例としては、例えば急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、非ＳＴ上昇型心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、血栓溶解療法、経皮経管的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）に伴う急性血管閉塞症、一過性脳虚血発作、脳卒中、間欠性跛行及び再狭窄が挙げられる。

従って、本願に記載する医薬組成物はトロンビンを阻害するのではなく、凝固カスケードで最後から２番目に作用する酵素である第Ｘａ因子を阻害できるというその一般的な特徴により、血液凝固を抑制するために特に有用であると思われる。インビトロ試験はヒト及び他の哺乳動物における薬理活性と相関すると考えられるが、本発明の範囲に含まれる医薬組成物はインビボ試験とインビトロ試験を含む文献記載の試験により顕著な薬理活性を示すと思われる。例えば、遊離型第Ｘａ因子と、プロトロンビナーゼ複合体（第Ｘａ因子、第Ｖａ因子、カルシウム及びリン脂質）で結合した第Ｘａ因子のいずれも阻害すると思われる。第Ｘａ因子阻害は阻害剤と酵素の直接的な複合体形成により得ることができるため、血漿補助因子アンチトロンビンＩＩＩに依存しない。有効な第Ｘａ因子阻害は静脈内連続輸液、静脈内ボーラス投与又は第Ｘａ因子により誘導されるプロトロンビンからトロンビンの形成を妨げるという望ましい作用を達成するような任意の他の適切な経路により本発明の医薬組成物を投与することにより達することができる。

抗凝固療法でのその用途に加え、第Ｘａ因子阻害剤はトロンビンの生成が病理学的役割を果たす可能性のある他の疾患の治療又は予防でも有用であると思われる。例えば、トロンビンは細胞表面トロンビン受容体の特異的開裂と活性化により多数の異なる細胞種を調節する特性をもつため、関節炎、癌、アテローム性動脈硬化症及びアルツハイマー病等の慢性変性疾患の罹病率と死亡率に寄与することが報告されている。第Ｘａ因子の阻害はトロンビン生成を有効に阻止し、従って種々の細胞種に及ぼすトロンビンの病理学的作用をなくすことができる。

注射用水性医薬組成物の非経口送達方法は当分野で周知である。例えば、注射用水性医薬組成物を特定剤形で静脈内に送達することができる。前記剤形は静脈内輸液投与で送達することができる。

一般に、成人において（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの適切な輸液用量としては体重１ｋｇ当たり毎時０．０７ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり毎時０．１４ｍｇが挙げられる。更に適切な用量としては体重１ｋｇ当たり毎時０．０８ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり毎時０．１２ｍｇが挙げられる。前記剤形は静脈内ボーラス投与で送達することもできる。一般に、成人において（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルの適切な輸液用量としては体重１ｋｇ当たり０．０７ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり０．１４ｍｇが挙げられる。更に、患者の安全性と効力のバランスを取った適切な用量は体重１ｋｇ当たり約０．０８ｍｇの静脈内ボーラス投与後に体重１ｋｇ当たり毎時０．１ｍｇに近似する用量となろう。

前記注射用剤形は糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩａ阻害剤、未分画ヘパリン、低分子量ヘパリン、エノキサパリン又はクロピドグレル等の他の薬剤と併用投与してもよい。あるいは、前記注射用剤形は限定されないが、クマジン、ワルファリン又はアスピリン等の抗凝血剤と併用してもよい。

本発明の液体注射用医薬組成物は必要量の（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と酸性反応性化合物又は緩衝液を水に加え、場合により必要に応じて本願に記載する他の各種成分も加えた後、適切な時間混合することにより製造することができる。

液体医薬組成物は更に医薬組成物の製剤化に日常的に利用される他の成分を含有していてもよい。このような成分の１例はレシチンである。本発明の組成物における乳化剤としてのその使用量としては、約０．０５〜約１重量％と、この間の範囲のあらゆる組合せ及び部分組合せ並びに特定量が挙げられる。より好ましくは、約０．１〜約０．５重量％の量の乳化剤を利用することができる。使用することができる成分の他の例は安息香酸やパラベン等の抗微生物防腐剤と、ポリソルベート８０等の懸濁化剤である。このような非必須成分の選択と本発明の組成物におけるその使用量は当業者に容易に判断され、以下の実施例から更によく理解されよう。

一般に、液体医薬組成物に適した溶媒としては、水、適切な油類、生理食塩水及びグリコール類（例えばプロピレングリコールやポリエチレングリコール）が挙げられる。液体医薬組成物の適切な溶液は（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩と酸性反応性化合物を溶媒に溶解し、必要に応じて緩衝物質を添加することにより調製することができる。更に、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸等の酸化防止剤を単独又は併用して添加してもよい。ＥＤＴＡナトリウムも利用できる。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩の投与に有用な医薬剤形は以下のように説明することができる。

注射剤
注射による投与に適した非経口組成物は重量換算で１ｍｇ〜３０ｍｇ／ｍＬの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル又はその医薬的に許容可能な塩を水１ｍＬ〜２００ｍＬ中で撹拌し、重量換算で２ｍｇ／ｍＬ〜４ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウムと、２ｍｇ／ｍＬ〜４ｍｇ／ｍＬのクエン酸一水和物と、５ｍｇ／ｍＬ〜８ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを混合下に添加することにより製造することができる。最後に水酸化ナトリウム又は塩酸を添加してｐＨをｐＨ４に調整する。調製した溶液を濾過し、適切なバイアルに充填する。溶液とバイアルをオートクレーブで蒸気滅菌により滅菌処理する。オートクレーブは一般に１２１℃〜１３４℃まで加熱した蒸気を使用する。無菌状態に達するためには、少なくとも１５分間の滞留時間を使用することができる。

以下、非限定的な実施例により本発明の医薬組成物の本発明者による好ましい製造及び使用方法を例証する。

［実施例１］−化合物（Ｖ）の製造

ＴｓＯＨは式ＣＨ_３Ｃ_６Ｈ_４ＳＯ_３Ｈを有するｐ−トルエンスルホン酸である。ＴｓＯＨは一水和物を意味する。反応器に化合物（ＩＶ）（１００．０ｇ）と無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（３２０ｇ）を仕込んだ。得られた懸濁液を−２０±３℃まで冷却し、リチウムヘキサメチルジシラジド（ＬｉＨＭＤＳ）（４７５．６ｇ，１．３ＭＴＨＦ溶液）を５５分間かけて加え、−２０±３℃にて２０分間撹拌した。次に温度を−２０±３℃に維持しながらα−ブロモ−ｍ−トルニトリルのＴＨＦ溶液（ＴＨＦ１８１ｇ中６５．１ｇ）を４０分間かけて反応器に加え、更に３０分間撹拌した。安息香酸（１２６．６ｇ）を固体として反応器に加えた。次に水（１０００ｇ）を加え、混合物を６５±３℃のジャケット温度及び２００〜２３３ｍｂａｒ減圧下で蒸留した。槽温度が５７℃の一定となり、ヘッド温度が４５℃の一定となるまで蒸留後、蒸留を停止した。トルエン（４３２ｇ）を高温溶液に加え、１０±２℃まで冷却しながら撹拌した。得られた懸濁液を次に濾過し、フィルターケーキを水（２５０ｇ）とトルエン（４３２ｇ）で洗浄した。重量が一定になるまで化合物（Ｖ）を窒素流下に４５〜５０℃で約３５０ｍｂａｒ減圧下にて２４時間乾燥した。単離された固体を計量した処、７６．０ｇであった（６２．０％収率）。

［実施例２］−化合物（ＶＩＩ）の製造

化合物（Ｖ）をジクロロメタンと炭酸ナトリウム水溶液に分配した。（（Ｖ）の遊離塩基を含有する）有機層を更に炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、減圧蒸留し、溶媒をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に交換した。この溶液の（Ｖ）のｗｔ／ｗｔ含量を定量した。（ＶＩ）（（Ｖ）に対して１．０当量）のＤＭＦ懸濁液に４−メチルモルホリン２当量とＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）１．１当量を加えた。この混合物をエステル活性化が完了するまで（約９０分間）周囲温度にて撹拌した。化合物（Ｖ）（１当量）のＤＭＦ溶液を加え、得られた溶液を一晩撹拌後、ＨＰＬＣは反応が完了したことを示した。水を７５℃で加え、混合物を冷却して生成物を結晶化させた。混合物を５℃まで冷却し、濾過し、フィルターケーキを水洗した。生成物を７０℃にて減圧乾燥した。

［実施例３］−化合物（ＶＩＩＩ）の製造

十分な撹拌下の反応器で、化合物（ＶＩＩ）４５ｇをジクロロメタン４５０ｍＬに溶解した溶液をモノペルオキシフタル酸マグネシウム６１ｇ（有効酸素濃度６６．４％，１．５当量）で水４５０ｇに溶解した溶液と反応が完了するまで少なくとも５時間反応させた。相分離し、有機相を同容量の水、５％重炭酸ナトリウム水溶液及び水で順次洗浄した。得られた溶液を約４０重量％溶液まで濃縮し、メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）１８０ｇで希釈した。更に蒸留して残留するジクロロメタンを除去し、適切な結晶を種晶として添加し、冷却し、結晶質固体として生成物を得た。結晶を濾過し、ＭＩＢＫ３０ｇでリンスし、５０℃にて減圧乾燥し、化合物（ＶＩＩＩ）４１．８ｇを得た（８９．３％収率）。

［実施例４］−化合物（ＩＸ）の製造

ジャケット付き２００ｍＬ容反応フラスコに化合物（ＶＩＩＩ）（５０．０ｇ，１１６ｍｍｏｌ）とメタノール（５０ｍＬ）を仕込んだ。この混合物を−５℃まで冷却し、部分真空（約１００ｔｏｒｒ）に達した後に密閉した。反応温度を０℃未満に維持しながら無水ＨＣｌ（５２．２ｇ，１．４３ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を密閉条件下で０±１℃にて撹拌した。１６時間後に反応は完了した（ＨＰＬＣによると（ＶＩＩＩ）２Ａ％未満）。温度を５℃未満に維持しながら中間生成物溶液に無水メタノール（１００ｍＬ）を加えた。温度を０℃未満に維持しながら溶液をＮＨ_３（２７．７ｇ，１．６２ｍｏｌ）で処理した。混合物を室温まで昇温する前に、蒸留水に溶解したアリコートのｐＨを確認した（ｐＨが８〜１０ならば、アンモニア添加量が十分であると判断する）。反応混合物を２０℃にて一晩撹拌すると、その時点で反応は完了した。

［実施例５］液体医薬組成物の製造方法
液体医薬組成物を以下のように製造した。

Ｉ．不活性材料（例えばステンレス鋼又はガラス）製の容器で（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル（量については表１参照）を注射用水に撹拌下に溶解した。

ＩＩ．不活性材料（例えばステンレス鋼又はガラス）製の容器で塩化ナトリウム、クエン酸一水和物及びクエン酸ナトリウム（二水和物）（量については表１参照）を注射用水に完全に溶けるまで撹拌下に溶解した。この溶液にステップＩからの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチル溶液を撹拌下に加えた。

必要に応じて水酸化ナトリウム溶液（例えば１Ｍ水酸化ナトリウム）又は希塩酸（例えば１Ｍ塩酸）を使用してｐＨ値を調整した。注射用水を加えて最終重量を調整した。

ＩＩＩ．粒子負荷低減のための濾過：
公称細孔寸法０．２μｍの滅菌済みメンブレンフィルター（例えばポリビニリデンジフルオライド、ポリエーテルスルホン又はポリアミド）を使用してステップＩＩからの溶液を濾過した。

ＩＶ．ステップＩＩＩからの溶液を滅菌済み無色注射用バイアルに充填した。次にシーリングディスクを挿入した滅菌済みフリップオフキャップ又は注射器ストッパーとティアオフ蓋付きフランジキャップで注射用バイアルを密封した。

Ｖ．密封した容器をオートクレーブでＰｈ．Ｅｕｒ．／ＵＳＰに従って（例えば≧＋１２１℃にて≧１５分間）飽和水蒸気により滅菌した。

ＶＩ．滅菌した容器を粗大異物、無傷シーリング及び粒子について検査した。

使用した装置の滅菌法

（生成物と直接接触する装置の一部としての）濾過装置、注射器ストッパー及びシーリングディスクを挿入したフリップオフキャップを例えば≧＋１２１℃で少なくとも１５分間（Ｐｈ．Ｅｕｒ．／ＵＳＰ）蒸気滅菌した。

製造した液体医薬組成物の組成を表１に示す。

［実施例６］ｐＨ及び反復オートクレーブ滅菌処理に対する不純物濃度の依存性
１ｍｇ／ｍＬのオタミキサバンを含有する液体医薬組成物を実施例５に記載したように製造した。水酸化ナトリウム溶液（１Ｍ水酸化ナトリウム）又は希塩酸（１Ｍ塩酸）を使用することにより適切なｐＨ値に調整した。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルと（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の含有量をＨＰＬＣにより分析し、表２及び３に示す。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの濃度はｐＨが最低のときに最低であり、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の濃度はｐＨ４で最低値を示した。

最終滅菌処理
≧＋１２１℃で≧１５分間の標準条件下にオートクレーブで最終滅菌処理を実施した。

グラジエント高性能液体クロマトグラフィーシステム（ＨＰＬＣ）によりオタミキサバン、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステル及び（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の定量を以下のように行った。

移動相Ａ
典型的には、無水リン酸二水素カリウム８．１６ｇをガラスビーカーに仕込んだ。水２０００ｍＬを加え、ｐＨ計を使用してリン酸（約４ｍＬ）でｐＨ２．１５に調整した。移動相を１．５μｍフィルターで濾過した。
移動相Ａの安定性：室温にて１カ月。

移動相Ｂ
典型的には、移動相Ａ５００ｍＬをアセトニトリル５００ｍＬに加える。混合し、脱気する。
移動相Ｂの安定性：室温にて１カ月。

標準の分析とシステム適合性試験（ブランクを除く）ではグラジエントを以下のように短縮してもよい。

［実施例７］オタミキサバン濃度とオートクレーブ滅菌処理に対する不純物濃度の依存性
１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ又は５０ｍｇ／ｍＬのオタミキサバンを含有する液体医薬組成物を実施例５に記載したように製造した。水酸化ナトリウム溶液（１Ｍ水酸化ナトリウム）又は希塩酸（１Ｍ塩酸）を使用することにより適切なｐＨ値に調整した。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの含有量を実施例６に記載したようにＨＰＬＣにより分析し、表４に示す。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの濃度はオタミキサバンの濃度又はバイアル容量に依存しなかった。オートクレーブ滅菌処理回数を増やすと、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの濃度は上昇するが、オタミキサバンの濃度又はバイアル容量に依存しなかった。

［実施例８］ｐＨ及び保存期間に対する不純物濃度の依存性
１ｍｇ／ｍＬのオタミキサバンを含有する液体医薬組成物を実施例５に記載したように製造した。水酸化ナトリウム溶液（１Ｍ水酸化ナトリウム）又は希塩酸（１Ｍ塩酸）を使用することにより適切なｐＨ値に調整した。製造したバイアルを１回オートクレーブ滅菌処理し、４０℃及び７５％ＲＨ（相対湿度）で保存した。
（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルと（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の含有量を実施例６に開示したようにＨＰＬＣにより分析し、表５及び６に示す。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の濃度はｐＨが低いほど迅速に上昇したが、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの濃度はｐＨ値が変化しても同等であり、保存期間を通して同一の傾きと上昇率であることが分かった。

［実施例９］酸性反応性化合物と保存期間に対する不純物濃度の依存性
基本的に実施例５に記載したように、１ｍｇ／ｍＬのオタミキサバンを含有する液体医薬組成物を製造した。実施例５で使用したクエン酸一水和物とクエン酸ナトリウム二水和物の代わりに、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸及びリン酸を２２．８ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で使用した。比較のために、酸性反応性化合物を添加しないサンプルも試験した。水酸化ナトリウム溶液（１Ｍ水酸化ナトリウム）又は希塩酸（１Ｍ塩酸）を使用することにより全サンプル（「非添加」サンプルも含む）を適切なｐＨ値に調整した。製造したバイアルを１回オートクレーブ滅菌処理し、４０℃及び７５％ＲＨ（相対湿度）で保存した。

グラジエント高性能液体クロマトグラフィーシステム（ＨＰＬＣ）によりオタミキサバン、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステル及び（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の定量を以下のように実施し、表７に示す。

移動相Ａ
無水リン酸二水素カリウム６．８ｇをガラスビーカーに仕込み、水２０００ｍＬを加える。ｐＨ計を使用してリン酸（約０．５ｍＬ）でｐＨを３．１に調整する。

移動相Ｂ
移動相Ａ２００ｍＬをアセトニトリル８００ｍＬに加えた後、混合、脱気する。
移動相Ｂの安定性：室温にて１カ月。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の濃度はｐＨの増減と共に迅速に上昇したが、（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの濃度はｐＨ値が変化しても同等であり、保存期間を通して同一の傾きと上昇率であることが分かった。どちらの傾向も使用した酸性反応性化合物に依存しなかった。

［実施例１０］クエン酸と保存期間に対する不純物濃度の依存性
実施例９に記載したように、１ｍｇ／ｍＬのオタミキサバンを含有する液体医薬組成物を製造した。クエン酸を２２．８ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で使用した。水酸化ナトリウム溶液（１Ｍ水酸化ナトリウム）又は希塩酸（１Ｍ塩酸）を使用することにより適切なｐＨ値に調整した。製造したバイアルを１回オートクレーブ滅菌処理し、４０℃及び７５％ＲＨ（相対湿度）で保存した。
（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸（式ＩＩ）と（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステル（式ＩＩＩ）の含有量を実施例９に開示したようにＨＰＬＣにより分析し、表９に示す。

［実施例１１］酸性反応性化合物、ｐＨ及び反復オートクレーブ滅菌処理に対する不純物濃度の依存性
基本的に実施例５に記載したように、１ｍｇ／ｍＬのオタミキサバンを含有する液体医薬組成物を製造した。実施例５で使用したクエン酸一水和物とクエン酸ナトリウム二水和物の代わりに、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸及びリン酸を２２．８ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で使用した。比較のために、酸性反応性化合物を添加しないサンプルも試験した。水酸化ナトリウム溶液（１Ｍ水酸化ナトリウム）又は希塩酸（１Ｍ塩酸）を使用することにより適切なｐＨ値に調整した。製造したバイアルを最終滅菌処理により１回及び２回オートクレーブ滅菌処理した。最終滅菌処理はオートクレーブで≧＋１２１℃にて≧１５分間の標準条件下に実施した。

（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸（式ＩＩ）と（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステル（式ＩＩＩ）の含有量を実施例９に開示したようにＨＰＬＣにより分析し、表１０及び１１に示す。

式ＩＩＩの濃度は式ＩＩの濃度よりも高く、オートクレーブ滅菌処理回数にほぼ線形に依存して上昇する。式ＩＩ及び式ＩＩＩの不純物濃度は試験した液体医薬組成物のｐＨに依存し、使用した酸性反応性化合物には依存しない。

Claims

ａ）０．１ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルと、
ｂ）１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１０００ｍｍｏｌ／Ｌの酸性反応性化合物もしくはその塩又はその混合物を含有しており、
ｃ）ｐＨを約ｐＨ３〜約ｐＨ５．０に調整した注射用水性医薬組成物。
前記酸性反応性化合物がクエン酸、酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ヒアルロン酸、アセチルサリチル酸、又はアミノ酸、又は塩酸もしくはリン酸から構成される群から選択される無機酸、又は当該有機酸の塩、当該アミノ酸の塩、当該無機酸の塩、又は当該酸性反応性化合物の１種以上の混合物から構成される群から選択される請求項１に記載の医薬組成物。
前記酸性反応性化合物がクエン酸及びクエン酸ナトリウム又はこれらの混合物から選択される請求項２に記載の医薬組成物。
１．０ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルと、２０ｍｍｏｌ〜２５ｍｍｏｌの酸性反応性化合物もしくは該酸性反応性化合物の塩又はこれらの混合物を含有する請求項１から３のいずれか一項に記載の水性医薬組成物。
１．０ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの（２Ｒ，３Ｒ）−２−｛３−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−３−｛［４−（１−オキシドピリジン−４−イル）ベンゾイル］アミノ｝ブタン酸メチルと、２０ｍｍｏｌ〜２５ｍｍｏｌの酸性反応性化合物もしくは該化合物の塩又はこれらの混合物を含有する請求項４に記載の水性医薬組成物。
水性医薬組成物が該医薬組成物の水溶液又は水性分散液を約ｐＨ３〜約ｐＨ４．７にするｐＨを有する請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
酸性反応性化合物が約ｐＨ３．７〜約ｐＨ４．３のｐＨを生じる請求項６に記載の医薬組成物。
酸性反応性化合物が約ｐＨ４．０〜約ｐＨ４．２のｐＨを生じる請求項６に記載の医薬組成物。
長期保存後の（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバミミドイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸の最高不純物濃度が約８．０％を超えない請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
最高不純物濃度が０．３％〜４．０％、好ましくは０．４％〜１．８％である請求項９に記載の医薬組成物。
長期保存後の（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−カルバモイルベンジル）−３−［４−（１−オキシピリジン−４−イル）ベンゾイルアミノ］酪酸メチルエステルの最高不純物濃度が約５．０％を超えない請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
最高不純物濃度が０．７％〜４．５％、好ましくは０．９％〜３．５％である請求項１１に記載の医薬組成物。
医薬組成物が滅菌されている請求項１から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
急性心筋梗塞、非ＳＴ上昇型心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、血栓溶解療法、経皮経管的冠動脈形成術に伴う急性血管閉塞症、一過性脳虚血発作、脳卒中、間欠性跛行及び再狭窄の治療用の請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。