JP5688027B2 - c−Met抗体 - Google Patents
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Description
a)ヒトc−Metのα鎖内のエピトープに結合し、
b)細胞表面のヒトc−Metの内部移行を誘導する、
モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
a)121VVDTYYDDQL130(配列番号77)、
b)131ISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQS156(配列番号78)、
c)179ALGAKVLSSVKDRFINF195(配列番号79)、及び
d)216VRRLKETKDGFM227(配列番号80)
から成る群から選択されるアミノ酸配列内で結合する、前述の抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
a)123DTYYDD128(配列番号81)、
b)144HVFPHNHTADIQS156(配列番号82)、
c)192FINF195(配列番号83)、及び
d)220KETKDGFM227(配列番号84)
から成る群から選択されるアミノ酸配列内で結合する、前述の抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
前記3つのLCDR及び前記3つのHCDRが、
a)アミノ酸配列SVSSSISSTNLH(配列番号49)を含むLCDR1、
アミノ酸配列GTSX1LX2S(配列番号87)(配列中、X1はY又はRであり、且つX2はA又はRである)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QQWSSYPYS(配列番号51)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTSRYIH(配列番号59)を含むHCDR1、
アミノ酸配列WIYPVTGDTYYX7EX8FKG(配列番号90)(配列中、X7はN、I、又はRであり、且つX8はK又はPである)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列GYGAFX9Y(配列番号91)(配列中、X9はY又はFである)を含むHCDR3、並びに
b)アミノ酸配列SVSSSVX3SIYLH(配列番号88)(配列中、X3はS又はRである)を含むLCDR1、
アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含むLCDR2、
アミノ酸配列X4X5YX6GYPLT(配列番号89)(配列中、X4はI又はQであり、X5はQ又はVであり、且つX6はS又はRである)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含むHCDR1、
アミノ酸配列RVNPX10RX11X12TTYNQKFEG(配列番号92)(配列中、X10はN又はYであり、X11はG又はRであり、且つX12はG又はSである)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列X13NX14LDY(配列番号93)(配列中、X13はT又はAであり、且つX14はW又はIである)を含むHCDR3、
から成る群から選択され、
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、前記ヒトc−Metのα鎖内のエピトープに結合し、且つ細胞表面のヒトc−Metの内部移行を誘導する、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
前記抗体が、3つの軽鎖相補性決定領域(LCDR)と、前記3つの重鎖相補性決定領域(HCDR)とを含み、
LCDR1が、アミノ酸配列SVSSSISSTNLH(配列番号49)を含み、
LCDR2が、アミノ酸配列GTSX1LX2S(配列番号87)(配列中、X1はY又はRであり、且つX2はA又はRである)を含み、
LCDR3が、アミノ酸配列QQWSSYPYS(配列番号51)を含み、
HCDR1が、アミノ酸配列GYTFTSRYIH(配列番号59)を含み、
HCDR2が、アミノ酸配列WIYPVTGDTYYX7EX8FKG(配列番号90)(配列中、X7はN、I、又はRであり、且つX8はK又はPである)を含み、
HCDR3が、アミノ酸配列GYGAFX9Y(配列番号91)(配列中、X9はY又はFである)を含む、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
LCDR1が、アミノ酸配列SVSSSVX3SIYLH(配列番号88)(配列中、X3はS又はRである)を含み、
LCDR2が、アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含み、
LCDR3が、アミノ酸配列X4X5YX6GYPLT(配列番号89)(配列中、X4はI又はQであり、X5はQ又はVであり、且つX6はS又はRである)を含み、
HCDR1が、アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含み、
HCDR2が、アミノ酸配列RVNPX10RX11X12TTYNQKFEG(配列番号92)(配列中、X10はN又はYであり、X11はG又はRであり、且つX12はG又はSである)を含み、
HCDR3が、アミノ酸配列X13NX14LDY(配列番号93)(配列中、X13はT又はAであり、且つX14はW又はIである)を含む、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
前記3つのLCDR及び前記3つのHCDRが、
a)アミノ酸配列SVSSSISSTNLH(配列番号49)を含むLCDR1、
アミノ酸配列GTSYLAS(配列番号50)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QQWSSYPYS(配列番号51)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTSRYIH(配列番号59)を含むHCDR1、
アミノ酸配列WIYPVTGDTYYNEKFKG(配列番号60)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列GYGAFYY(配列番号61)を含むHCDR3、
b)アミノ酸配列SVSSSISSTNLH(配列番号49)を含むLCDR1、
アミノ酸配列GTSYLAS(配列番号50)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QQWSSYPYS(配列番号51)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTSRYIH(配列番号59)を含むHCDR1、
アミノ酸配列WIYPVTGDTYYIEKFKG(配列番号62)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列GYGAFFY(配列番号63)を含むHCDR3、
c)アミノ酸配列SVSSSISSTNLH(配列番号49)を含むLCDR1、
アミノ酸配列GTSRLRS(配列番号52)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QQWSSYPYS(配列番号51)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTSRYIH(配列番号59)を含むHCDR1、
アミノ酸配列WIYPVTGDTYYREPFKG(配列番号64)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列GYGAFYY(配列番号61)を含むHCDR3、
d)アミノ酸配列SVSSSVSSIYLH(配列番号53)を含むLCDR1、
アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含むLCDR2、
アミノ酸配列IQYSGYPLT(配列番号55)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含むHCDR1、
アミノ酸配列RVNPNRGGTTYNQKFEG(配列番号66)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列TNWLDY(配列番号67)を含むHCDR3、
e)アミノ酸配列SVSSSVSSIYLH(配列番号53)を含むLCDR1、
アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QVYSGYPLT(配列番号56)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含むHCDR1、
アミノ酸配列RVNPNRRGTTYNQKFEG(配列番号68)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列ANWLDY(配列番号69)を含むHCDR3、並びに
f)アミノ酸配列SVSSSVRSIYLH(配列番号57)を含むLCDR1、
アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QVYRGYPLT(配列番号58)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含むHCDR1、
アミノ酸配列RVNPYRGSTTYNQKFEG(配列番号70)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列ANILDY(配列番号71)を含むHCDR3
から成る群から選択され、
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、前記ヒトc−Metのα鎖内のエピトープに結合し、且つ細胞表面のヒトc−Metの内部移行を誘導する、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
a)アミノ酸配列SVSSSISSTNLH(配列番号49)を含むLCDR1、
アミノ酸配列GTSYLAS(配列番号50)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QQWSSYPYS(配列番号51)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTSRYIH(配列番号59)を含むHCDR1、
アミノ酸配列WIYPVTGDTYYNEKFKG(配列番号60)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列GYGAFYY(配列番号61)を含むHCDR3、
b)アミノ酸配列SVSSSISSTNLH(配列番号49)を含むLCDR1、
アミノ酸配列GTSYLAS(配列番号50)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QQWSSYPYS(配列番号51)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTSRYIH(配列番号59)を含むHCDR1、
アミノ酸配列WIYPVTGDTYYIEKFKG(配列番号62)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列GYGAFFY(配列番号63)を含むHCDR3、並びに
c)アミノ酸配列SVSSSISSTNLH(配列番号49)を含むLCDR1、
アミノ酸配列GTSRLRS(配列番号52)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QQWSSYPYS(配列番号51)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTSRYIH(配列番号59)を含むHCDR1、
アミノ酸配列WIYPVTGDTYYREPFKG(配列番号64)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列GYGAFYY(配列番号61)を含むHCDR3
から成る群から選択される、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
a)アミノ酸配列SVSSSVSSIYLH(配列番号53)を含むLCDR1、
アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含むLCDR2、
アミノ酸配列IQYSGYPLT(配列番号55)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含むHCDR1、
アミノ酸配列RVNPNRGGTTYNQKFEG(配列番号66)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列TNWLDY(配列番号67)を含むHCDR3、
b)アミノ酸配列SVSSSVSSIYLH(配列番号53)を含むLCDR1、
アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QVYSGYPLT(配列番号56)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含むHCDR1、
アミノ酸配列RVNPNRRGTTYNQKFEG(配列番号68)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列ANWLDY(配列番号69)を含むHCDR3、並びに
c)アミノ酸配列SVSSSVRSIYLH(配列番号57)を含むLCDR1、
アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含むLCDR2、
アミノ酸配列QVYRGYPLT(配列番号58)を含むLCDR3、
アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含むHCDR1、
アミノ酸配列RVNPYRGSTTYNQKFEG(配列番号70)を含むHCDR2、及び
アミノ酸配列ANILDY(配列番号71)を含むHCDR3
から成る群から選択される、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
LCDR1が、アミノ酸配列SVSSSVSSIYLH(配列番号53)を含み、
LCDR2が、アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含み、
LCDR3が、アミノ酸配列IQYSGYPLT(配列番号55)を含み、
HCDR1が、アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含み、
HCDR2が、アミノ酸配列RVNPNRGGTTYNQKFEG(配列番号66)を含み、
HCDR3が、アミノ酸配列TNWLDY(配列番号67)を含む、前述のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
LCDR1が、アミノ酸配列SVSSSVSSIYLH(配列番号53)を含み、
LCDR2が、アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含み、
LCDR3が、アミノ酸配列QVYSGYPLT(配列番号56)を含み、
HCDR1が、アミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含み、
HCDR2が、アミノ酸配列RVNPNRRGTTYNQKFEG(配列番号68)を含み、
HCDR3が、アミノ酸配列ANWLDY(配列番号69)を含む、前述のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
a)配列番号94及び配列番号96、並びに
b)配列番号95及び配列番号97、
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、前記ヒトc−Metのα鎖内のエピトープと結合し、且つ細胞表面のヒトc−Metの内部移行を誘導する、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
a)LCVRが配列番号1であり、且つHCVRが配列番号13である、
b)LCVRが配列番号2であり、且つHCVRが配列番号14である、
c)LCVRが配列番号3であり、且つHCVRが配列番号15である、
d)LCVRが配列番号4であり、且つHCVRが配列番号16である、
e)LCVRが配列番号5であり、且つHCVRが配列番号17である、及び
f)LCVRが配列番号6であり、且つHCVRが配列番号18である、
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
a)LCVRが配列番号1であり、且つHCVRが配列番号13である、
b)LCVRが配列番号2であり、且つHCVRが配列番号14である、及び
c)LCVRが配列番号3であり、且つHCVRが配列番号15である、
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
a)LCVRが配列番号4であり、且つHCVRが配列番号16である、
b)LCVRが配列番号5であり、且つHCVRが配列番号17である、及び
c)LCVRが配列番号6であり、且つHCVRが配列番号18である、
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前述のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片のいずれか1つ。
a)軽鎖が配列番号25であり、且つ重鎖が配列番号37である、
b)軽鎖が配列番号26であり、且つ重鎖が配列番号38である、
c)軽鎖が配列番号27であり、且つ重鎖が配列番号39である、
d)軽鎖が配列番号28であり、且つ重鎖が配列番号40である、
e)軽鎖が配列番号29であり、且つ重鎖が配列番号41である、及び
f)軽鎖が配列番号30であり、且つ重鎖が配列番号42である、
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前述のモノクローナル抗体のいずれか1つ。
a)軽鎖が配列番号25であり、且つ重鎖が配列番号37である、
b)軽鎖が配列番号26であり、且つ重鎖が配列番号38である、
c)軽鎖が配列番号27であり、且つ重鎖が配列番号39である、
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前述のモノクローナル抗体のいずれか1つ。
a)軽鎖が配列番号28であり、且つ重鎖が配列番号40である、
b)軽鎖が配列番号29であり、且つ重鎖が配列番号41である、及び
c)軽鎖が配列番号30であり、且つ重鎖が配列番号42である、
から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、前述のモノクローナル抗体のいずれか1つ。
自然界に存在するとき完全長抗体は、ジスルフィド結合により相互に連結されている2本の重(H)鎖と2本の軽(L)鎖とを含む免疫グロブリン分子である。各鎖のアミノ末端部は、可変領域内に含まれる相補性決定領域(CDR)を介して抗原認識に主に関与する、約100〜110又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部は、エフェクタ機能に主に関与する定常領域を画定する。
(a)アクセプタフレームワークのヒトフレームワーク領域におけるアミノ酸が、その位置におけるヒトフレームワークとしては珍しいアミノ酸であるが、ドナー免疫グロブリンにおける対応するアミノ酸が、その位置におけるヒトフレームワークに典型的なアミノ酸である;
(b)アミノ酸の位置が、CDRの1つに直接隣接する;又は
(c)フレームワークアミノ酸の任意の側鎖原子が、三次元免疫グロブリンモデルにおけるCDRアミノ酸の任意の原子の約5〜6オングストローム以内に存在する(中心間)。
PSI:プレキシン、セマフォリン、及びインテグリンドメイン
IPT:4つの免疫グロブリン、プレキシン、及び転写因子ドメイン
TM:膜貫通領域
JM:膜近傍ドメイン
KD:キナーゼドメイン
調節が解除されたc−Met経路は、転写のアップレギュレーション、c−Met遺伝子の増幅、特定の遺伝子変化、又はリガンド依存性自己分泌若しくは傍分泌機構により誘導され得る。ヒト腫瘍における恒常的なc−Metの活性化の最も多い原因は、遺伝子増幅の非存在下において、転写がアップレギュレーとされた結果としてタンパク質発現が増加することである。更に、後にタンパク質の過剰発現及び恒常的なキナーゼの活性化が結果として生じる、MET遺伝子の増幅が、胃癌及び食道癌、非小細胞肺(NSCL)癌、及び髄芽腫を含むヒト原発腫瘍の多くで報告されている。骨肉腫及び黄紋筋肉種等の間葉系起源の腫瘍は、HGFの生成による自己分泌機構を用いることが多い。高濃度のHGF及びc−Metの過剰発現は、より侵攻性の高い疾患、腫瘍転移の増加、及び患者の生存期間の短縮を含む臨床転帰不良に関連することが多い。更に、腫瘍における高濃度のHGF及び/又はc−Metタンパク質は、化学療法及び放射線療法に対する耐性を付与する。異常なHGF及びc−Met発現に加えて、c−Met経路は、c−Metの突然変異、遺伝子の増幅、及び遺伝子の再構成等の遺伝子変化を通じて活性化され得る。c−METのミスセンス突然変異は、特徴のはっきりした遺伝性乳頭状腎細胞癌(PRCC)の全ての個体、及び散発性PRCCサンプルの小集団(13%)で見られる。前記突然変異の一部は、キナーゼ活性が高いので発癌能を有している。HGF及びc−MET遺伝子の両方が存在する場合、7番染色体のトリソミーがPRCCで頻繁に生じ、その結果突然変異体のc−MET対立遺伝子が非ランダムに重複する。更に、c−METの体細胞突然変異は、胃癌、頭頸部癌、肝癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、及び甲状腺癌を含む他のヒト癌に加えて、これら癌のうちの幾つかの転移で同定されている。典型的には突然変異がキナーゼドメインに限定されているPRCCとは異なり、これら突然変異は、受容体の他の領域、例えば膜近傍ドメインに位置することが多い。突然変異に加えて、c−MET遺伝子は、乳癌、肝癌、脳癌、結腸直腸癌、胃癌、肺癌、及び胃癌で増幅されることが多く、これは一部の患者において疾患進行と相関している。
異常なHGF/c−METシグナル伝達は、膀胱癌、乳癌、頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、腎癌、肝癌、肺癌、上咽頭癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、及び甲状腺癌に加えて、胆管癌、骨肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、及びMFH/線維肉腫を含む広範囲のヒト悪性腫瘍で報告されている。更に、異常なHGF及び/又はc−Met発現は、急性骨髄性白血病、成人T細胞白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫等の血液悪性腫瘍に加えて、黒色腫、中皮腫、ウィルムス腫瘍、神経膠芽細胞腫、及び星状細胞腫等の他の腫瘍でも報告されている(Liuら(2008年)Expert Opin.Investig.Drugs17(7):997−1011に要約されている)。本発明のc−Met抗体は、HGF依存性及びHGF非依存性腫瘍の両方を阻害することができる。
c−Met抗体
本ヒト改変抗体の軽鎖及び重鎖可変領域のアミノ酸配列、完全軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列、並びに前述のアミノ酸をコードするそれぞれのヌクレオチド配列を、「アミノ酸及びヌクレオチド配列」と題した以下の段落に列挙する。軽鎖及び重鎖CDRアミノ酸配列を、それぞれ表1及び表2に示す。
X9はY又はFである;
X10はN又はYであり、X11はG又はRであり、且つX12はG又はSである;
X13はT又はAであり、且つX14はW又はIである;
D11−抗体軽鎖可変領域共通配列(配列番号94)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSVSSSISSTNLHWYQQKPGQAPRLLIY
GTSX1LX2SGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPYSFG
QGTKLEIK
(配列中、X1はY又はRであり、且つX2はA又はRである);
C8−抗体軽鎖可変領域共通配列(配列番号95)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVX3SIYLHWYQQKPGKAPKLLIY
STSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCX4X5YX6GYPLTFG
GGTKVEIK
(配列中、X3はS又はRであり、X4はI又はQであり、X5はQ又はVであり、且つX6はS又はRである);
D11−抗体重鎖可変領域共通配列(配列番号96)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSRYIHWVRQAPGQGLEWMGW
IYPVTGDTYYX7EX8FKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGY
GAFX9YWGQGTLVTVS
(配列中、X7はN、I、又はRであり、X8はK又はPであり、且つX9はY又はFである);
C8−抗体重鎖可変領域共通配列(配列番号97)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQGLEWMGR VNPX10RX11X12TTYNQKFEGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARX13NX14LDYWGQGTTVTVS
(配列中、X10はY又はNであり、X11はG又はRであり、X12はS又はGであり、X13はA又はTであり、且つX14はI又はWである)。
種々のc−Met細胞外ドメインに対するc−Met抗体の結合動態
ヒト、カニクイザル、及びラットのc−Met配列の細胞外ドメイン(ECD)を、Fc(配列番号72〜74)のC末端にflagタグ及びHisタグ(Flisタグ)を有するFc融合タンパク質として発現させる。これらc−Met ECD Fc融合タンパク質を、実施例1に記載のように、HEK293 EBNA細胞中で別個に一過的に発現させ、精製する。
エピトープマッピング
本c−Met抗体のエピトープを、水素−重水素交換質量分析(HDXMS)(Yamadaら(2002年)Rapid Commun. Mass Spectrom.16(4):293−299)及びピロ炭酸ジエチル(DEPC)標識(Mendozaら(2008年)Analy.Chem.80(8):2895−2904)の組み合わせによりマッピングする。ヒトc−MetのSemaドメインの水素−重水素交換反応は、c−Met抗体の存在下又は非存在下で実施する。抗体の非存在下よりも抗体の存在下の方が重水素の獲得が少ないSemaドメイン領域を、抗体のエピトープ(単数又は複数)として同定する。DEPCは、Semaドメインの表面に露出しているリジン又はヒスチジン残基のアミノ基と反応して、エチルカルバメートリジン又はヒスチジンを形成し得る。これらアミノ酸がエピトープ領域に位置する場合、抗体と結合した際に前記アミノ酸は保護され、DEPCとは反応しないであろう。これは、HDXMSにより決定されるエピトープ領域の場所を更に特定及び/又は確認するのに役立つ。
121VVDTYYDDQL130(配列番号77)、
131ISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQS156(配列番号78)、
179ALGAKVLSSVKDRFINFF196(配列番号79)、及び
216VRRLKETKDGFM227(配列番号80)。
123DTYYDD128(配列番号81)(包括的)、
144HVFPHNHTADIQS156(配列番号82)(包括的)、
192FINF195(配列番号83)(包括的)、及び
220KETKDGFM227(配列番号84)(包括的)。
RON及びプレキシンA2のECDへの抗体の結合に対する、c−MetのECDへの抗体の優先的結合
c−Metに対して最も高い配列同一性を有するヒトタンパク質は、RON及びプレキシンA2である。この実験では、c−Met、RON、及びプレキシンA2のECDに対するc−Met抗体の結合特異性を比較する。
c−Met抗体によるHGF/c−Met結合のブロック
インビトロ結合アッセイを用いて、本c−Met抗体による、c−Metに対するHGFの結合阻害を測定する。
肝細胞成長因子及びアゴニストMab 5D5と比べて弱い、c−Met抗体によるc−Metリン酸化誘導
HGFで刺激すると、A549肺癌腫細胞株は、チロシン残基1349におけるc−Metのリン酸化増加を示す。リン酸化c−Met(p−Met)ELISAアッセイを用いて、HGFの非存在下における種々のc−Met抗体のアゴニスト活性、並びにMab 5D5及びHGF自体のアゴニスト活性を測定する。
c−Met抗体のHGF誘導性c−Metリン酸化の阻害
HGFがc−Metに結合すると、c−Met分子のチロシンがリン酸化され、c−Metシグナル伝達経路が活性化される。この実施例では、HGFに対して応答性であるヒト結腸癌細胞株HCT116を用いて、本c−Met抗体による、c−Metのチロシン残基1230、1234、及び1235におけるHGF誘導性リン酸化の阻害を評価する。
c−Met抗体によるc−Metの内部移行の誘導
この実施例に記載される実験は、蛍光活性化細胞選別(FACS)分析を使用して、本c−Met抗体が細胞表面のc−Met分子に結合し、c−Metの内部移行を誘導することを示す。使用されるMKN45細胞は、高レベルの全c−Metを恒常的に発現し、且つMET遺伝子増幅の結果としてc−MetのHGF非依存性リン酸化を示す。c−Metの内部移行は、c−Met分解を誘導し(実施例10及び19を参照)、その結果c−Metシグナル伝達経路を阻害すると思われる。
内部移行率(%)=[1−(試験抗体の平均蛍光/アイソタイプ抗体対照の平均蛍光)]×100
インビトロにおける抗体のリガンド非依存性腫瘍細胞増殖の阻害
このアッセイでは、HGFリガンドの非存在下のHGF非依存性MKN45細胞における、c−Met抗体によるインビトロの腫瘍細胞増殖阻害を評価する。
c−Met抗体に応答する、リン酸化c−Met及び全c−Metの減少、並びにc−Met細胞外ドメインの脱落の欠如
この実施例は、本発明のc−Met抗体でMKN45細胞を処理すると、リン酸化c−Met(p−Met)及び全c−Metが減少するかどうかを調べる。更に、このアッセイを用いて、c−Met抗体処理が、c−Met ECDのMKN45馴化培地中への脱落を誘導するかどうかを判定する。
チロシン残基1230、1234、及び1235におけるc−Metのリン酸化は、実施例7に記載のように測定される。
全c−Met及びc−MetのECDのELISAのために、c−Met捕捉抗体をコーティングバッファ(BioFX,Glendora,CA,COAT−1000−01)で2μg/mLに希釈する。110μLの希釈抗体をELISAプレート(Greiner Bio−One,Monroe,NC,#655081)の各ウェルに添加し、4℃で一晩プレートをインキュベートする。ウェルを吸引し、TBS−Tで2回洗浄し、次いで室温で1時間、ブロッキングバッファ(2%(w/v)のBSAを加えたTBS−T)200μLでブロッキングする。次いで、プレートをTBS−Tで2回洗浄する。次に、MKN45細胞溶解物、MKN45馴化培地、又はc−Met細胞外ドメイン(ECD)(配列番号75)(標準物質として)を添加し、室温で2時間プレートをインキュベートする。次いで、プレートをTBS−Tで4回洗浄する。ブロッキングバッファで希釈した捕捉抗体とは異なるc−Metエピトープに結合する、0.5μg/mLのビオチン化された第2のc−Met抗体(Mab5D5)100μLを各ウェルに添加し、室温で2時間プレートをインキュベートする。次に、プレートをTBS−Tで4回洗浄する。次いで、ブロッキングバッファで1/12,000に希釈したペルオキシダーゼ共役ストレプトアビジン(Jackson ImmunoResearch Laboratories,West Grove,PA,#016−030−084)100μLを添加し、混合物を室温で1時間インキュベートする。次いで、プレートをTBS−Tで6回洗浄する。3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン溶液(BioFX,#TMBW−1000−01)100μLを各ウェルに添加し、続いて100μLの停止溶液(BioFX,#LSTP−1000−01)を添加する。SpectraMax190プレートリーダー(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)を用いて、570nmで補正し、450nmでプレートを読み取る。4−パラ−メータ分析を用いて検量線を作成し、SOFTmax Pro3.1.2ソフトウェア(Molecular Devices)を用いてサンプルの値を測定する。
HGF非存在下のCaki−1腫瘍細胞における抗体のアゴニスト活性
Caki−1腎癌細胞は、HGFに応答して増殖する。本発明のc−Met抗体のアゴニスト活性を評価するために、この実施例では、HGFの非存在下における、c−Met抗体によるCaki−1細胞中のc−Metの活性化について調べる。
HGF非存在下の初代ヒト肝細胞における抗体のアゴニスト活性
HGFの非存在下で、HGF応答性である初代ヒト肝細胞(PHH)における本c−Met抗体のアゴニスト活性を更に評価する。
HGF非存在下のHepG2細胞における管形態形成に対する抗体の効果
HGFは、基底膜の成分を含有する細胞外マトリクス物質であるMatrigel(商標)(Becton−Dickinson,#354234)中で増殖するHepG2細胞の管形態形成の変化を誘導する。この実験では、HepG2細胞における管形態形成の変化誘導に対する、本発明の抗体のHGF様アゴニスト活性を評価する。
細胞の運動性に対する抗体の効果:DU145細胞散乱アッセイ及びH441細胞スクラッチアッセイ
HGFで刺激すると、DU145前立腺癌細胞は、互いに解離し、H441細胞は、コンフルエントな細胞層に作製された引っ掻き傷を充填する。H441細胞は、高水準のc−Met発現及びこの受容体の恒常的リン酸化を示すが、依然としてHGF応答性である。以下の実験は、散乱アッセイ及びスクラッチアッセイによって、細胞の運動性に対する本発明の抗体のアゴニスト効果を評価する。
5%(v/v)CO2下、37℃で、MEM培地(Invitrogen,#11095)+10%FBS(Invitrogen,#10082)中にて増殖させたDU145細胞(ATCC,#HTB−81)を、黒色ViewPlate96ウェルプレート(Perkin Elmer,Waltham,MA,#6005182)に、70μLの体積で、2×103細胞/ウェルになるようにプレーティングし、5%(v/v)CO2下、37℃で一晩インキュベートする。c−Met抗体及び対照抗体を細胞培養培地で希釈して最終濃度20μg/mLで添加し、HGFを最終濃度20ng/mLで添加し、それぞれ30μLの体積で、12回繰り返し、5%(v/v)CO2下、37℃で48時間インキュベートする。次いで、培地を吸引し、室温で15分間2%のホルムアルデヒド中にて細胞を固定する。ウェルをPBSで3回洗浄し、5U/mLのAlexa Fluor 488ファロイジン(Invitrogen,#A12379)50μLを室温で30分間添加する。ウェルをPBSで3回洗浄し、15μMのヨウ化プロピジウム(Invitrogen,#P3566)50μLを添加する。次いで、コロニー中のDU145細胞の割合を測定するために、Jockyssソフトウェアを用いて、Acumen Explorer(商標)レーザースキャニング蛍光マイクロプレート血球計数器(TTP Labtech Ltd,Cambridge,MA)でプレートを読み取る。
H441スクラッチアッセイでは、RPMI−1640(Invitrogen,#11835);10%(v/v)FBS(Invitrogen,#10082);2mMのL−グルタミン(Invitrogen,#25030);100U/500mLのペニシリンG、及び100μg/500mLのストレプトマイシン(Invitrogen,#15140))中でH441細胞(ATCC,#HTB−174)を増殖させ、6ウェル組織培養プレート(Costar,#3598)のウェル内の培養培地に1×106細胞/2mL/ウェルで播種する。相対湿度95%及び5%(v/v)CO2下で3日間プレートをインキュベートする。次いで、培地を吸引し、細胞を低血清培地(RPMI培地中0.5%(v/v)FBS)中で16時間飢餓状態にする。各ウェルの中央の、ウェルの底部に存在するコンフルエンな細胞層を、5mLのピペット先端で引っ掻き、浮遊細胞を吸引する。残りの細胞を低血清培地で1回洗浄する。低血清培地を添加し、引っ掻いた領域を4倍の対物レンズを備える明視野顕微鏡を用いて画像化する。これらの間隙を、0時間における間隙として定義する。
HepG2細胞の侵襲性に対するc−Met抗体の効果
HGF及びアゴニストc−Met抗体は、c−Met保有細胞の侵襲を刺激する。この実施例は、侵襲アッセイにおいてHGF応答性であるHepG2細胞を使用する細胞侵襲アッセイにおいて、本c−Met抗体のアゴニスト活性を評価する。
C8−及びD11−抗体はCaki−1細胞をスタウロスポリン誘導性アポトーシスから保護しない
HGF及びアゴニストc−Met抗体は、細胞をスタウロスポリン誘導性細胞死から保護する。この実施例は、HGF応答性Caki−1細胞を使用するスタウロスポリン誘導性アポトーシスアッセイにおいて、本発明のc−Met抗体のアゴニスト活性を評価する。
血管新生に対するC8−抗体の効果
HGF及びアゴニストc−Met抗体は、血管新生を刺激する。ADSC/ECFC共培養管形成アッセイにおいて、この機能的アゴニスト特性について本発明のc−Met抗体を評価する。脂肪由来幹細胞(ADSC)は、HGFを発現し;内皮コロニー形成細胞(ECFC)は、HGFによる刺激に応答して管を形成する。
異種移植モデルにおけるHGF非依存性及びHGF依存性腫瘍細胞増殖の阻害
本発明のc−Met抗体による、HGF非依存性及びHGF依存性腫瘍細胞増殖の阻害を、それぞれ、MKN45細胞及びU87MG(ヒト神経膠芽腫)細胞マウス異種移植モデルを使用するインビボアッセイにおいて評価する。MKN45細胞は、高水準のc−Metを恒常的に発現し、HGFの非存在下でc−Metをリン酸化する。U87MG細胞は、自己分泌様式でHGFを分泌し、且つHGF応答性である。
MKN45異種移植腫瘍における全c−Met及びリン酸化c−Metの抗体減少
この実施例では、MKN45(HGF非依存性)異種移植腫瘍を有するマウスにおける全c−Met及びリン酸化c−Metに対するc−Met抗体C8−H241のインビボ活性について調べる。全c−Met及び(チロシン1349が)リン酸化されたc−Metの両方が用量依存的に減少することが、抗体投与の24時間後に観察される。
全c−MetELISAでは、c−Met捕捉抗体をBup Hコーティングバッファ(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,#28382)で2μg/mLに希釈する。1ウェル当たり100μLの希釈した抗体を、ELISAプレート(ThermoFisherScientific,Waltham,MA #439454)に添加し、プレートを4℃で一晩インキュベートする。ウェルを吸引し、TBS−Tで2回洗浄し、次いで、室温で1時間、200μLのブロッキングバッファ(2%(w/v)BSAを加えたTBS−T)を用いてブロッキングする。プレートをTBS−Tで2回洗浄する。次いで、腫瘍溶解物又はc−Met細胞外ドメイン(配列番号75のアミノ酸25〜932)の希釈液を添加し、プレートを4℃で一晩インキュベートする。次いで、プレートをTBS−Tで3回洗浄する。0.5μg/mLのビオチン化Mab 5D5(捕捉抗体とは異なるc−Metエピトープに結合する第2のc−Met抗体として)100μLをブロッキングバッファで希釈し、次いで各ウェルに添加し、プレートを室温で2時間インキュベートする。次いで、プレートをTBS−Tで3回洗浄する。次いで、ブロッキングバッファで1/10,000に希釈したペルオキシダーゼ共役ストレプトアビジン(Jackson ImmunoResearch Laboratories,West Grove,PA,#016−030−084)100μLを添加し、混合物を室温で1時間インキュベートする。次いで、プレートをTBS−Tで3回洗浄する。3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン溶液(BioFX,#TMBW−1000−01)100μLを各ウェルに添加し、次いで、100μLの停止溶液(BioFX,#LSTP−1000−01)を添加する。SOFTmax Pro3.1.2ソフトウェア(Molecular Devices)を備えるSpectraMax250プレートリーダー(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)を用いて、450nmでプレートを読み取る。
ホスホ−c−MetELISAでは、c−Met捕捉抗体をBup Hコーティングバッファ(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,#28382)で2μg/mLに希釈する。1ウェル当たり100μLの希釈した抗体を、ELISAプレート(ThermoFisherScientific,Waltham,MA #439454)に添加し、プレートを4℃で一晩インキュベートする。ウェルを吸引し、TBS−Tで2回洗浄し、次いで、室温で1時間、200μLのブロッキングバッファ(2%(w/v)BSAを加えたTBS−T)を用いてブロッキングする。プレートをTBS−Tで2回洗浄する。次いで、MKN45細胞溶解物を添加し、プレートを室温で一晩インキュベートする。次いで、プレートをTBS−Tで3回洗浄する。次いで、ブロッキングバッファで希釈した0.5μg/mLの抗pY1349 c−Met抗体(Cell Signaling Technology,Danvers,Massachusetts,#3121)100μLを各ウェルに添加し、プレートを室温で2時間インキュベートする。次いで、プレートをTBS−Tで3回洗浄する。次いで、ブロッキングバッファで1/10,000に希釈したペルオキシダーゼ共役抗ウサギIgG(Jackson ImmunoResearch Laboratories,West Grove,PA,#111−035−144)100μLを添加し、混合物を室温で1時間インキュベートする。次いで、プレートをTBS−Tで3回洗浄する。3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン溶液(BioFX,#TMBW−1000−01)100μLを各ウェルに添加し、次いで、100μLの停止溶液(BioFX,#LSTP−1000−01)を添加する。SOFTmax Pro3.1.2ソフトウェア(Molecular Devices)を備えるSpectraMax250プレートリーダー(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)を用いて、450nmでプレートを読み取る。
軽鎖可変領域アミノ酸配列
D11−S17Y(配列番号1)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSVSSSISSTNLHWYQQKPGQAPRLLIYGTSYLASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPYSFGQGTKLEIK
D11−8B8(配列番号2)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSVSSSISSTNLHWYQQKPGQAPRLLIYGTSYLASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPYSFGQGTKLEIK
D11−C27G3(配列番号3)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSVSSSISSTNLHWYQQKPGQAPRLLIYGTSRLRSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPYSFGQGTKLEIK
C8−6(配列番号4)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVSSIYLHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCIQYSGYPLTFGGGTKVEIK
C8−H241(配列番号5)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVSSIYLHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQVYSGYPLTFGGGTKVEIK
C8−co−16(配列番号6)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVRSIYLHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQVYRGYPLTFGGGTKVEIK
軽鎖可変領域核酸配列
D11−S17Y(配列番号7)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGTGTCAGCTCAAGTATAAGTTCCACCAACTTACACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGCACATCCTATCTGGCTTCTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAGTGGAGTAGTTACCCGTACAGTTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAGATCAAA
D11−8B8(配列番号8)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGTGTCAGCTCAAGTATAAGTTCCACCAACTTACACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGCACATCCTACCTGGCTTCTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAGTGGAGTAGTTACCCGTACAGTTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAGATCAAA
D11−C27G3(配列番号9)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGTGTCAGCTCAAGTATAAGTTCCACCAACTTACACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGCACATCCAGACTGAGATCTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAGTGGAGTAGTTACCCGTACAGTTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAGATCAAA
C8−6(配列番号10)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGTGTCAGCTCAAGTGTAAGTTCCATTTACTTGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGCACATCCAACTTGGCTTCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTATTCAGTACAGTGGTTACCCGCTCACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
C8−H241(配列番号11)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGTGTCAGCTCAAGTGTAAGTTCCATTTACTTGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGCACATCCAACTTGGCTTCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGGTGTACAGTGGTTACCCGCTCACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
C8−co−16(配列番号12)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGTGTCAGCTCAAGTGTACGTTCCATTTACTTGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGCACATCCAACTTGGCTTCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGGTGTACAGGGGTTACCCGCTCACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
重鎖可変領域アミノ酸配列
D11−S17Y(配列番号13)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSRYIHWVRQAPGQGLEWMGWIYPVTGDTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGAFYYWGQGTLVTVS
D11−8B8(配列番号14)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSRYIHWVRQAPGQGLEWMGWIYPVTGDTYYIEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGAFFYWGQGTLVTVS
D11−C27G3(配列番号15)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSRYIHWVRQAPGQGLEWMGWIYPVTGDTYYREPFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGAFYYWGQGTLVTVS
C8−6(配列番号16)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQGLEWMGRVNPNRGGTTYNQKFEGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARTNWLDYWGQGTTVTVS
C8−H241(配列番号17)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQGLEWMGRVNPNRRGTTYNQKFEGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARANWLDYWGQGTTVTVS
C8−co−16(配列番号18)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQGLEWMGRVNPYRGSTTYNQKFEGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARANILDYWGQGTTVTVS
重鎖可変領域核酸配列
D11−S17Y(配列番号19)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGTAGGTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATTTATCCTGTAACTGGTGATACTTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTACGGAGCTTTTTACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCC
D11−8B8(配列番号20)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGTAGGTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATTTATCCTGTAACTGGTGATACTTACTACATCGAGAAGTTCAAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTATGGTGCTTTTTTCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCC
D11−C27G3(配列番号21)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGTAGGTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATTTATCCTGTAACTGGTGATACTTACTACAGAGAGCCTTTCAAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTATGGGGCTTTTTACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCC
C8−6(配列番号22)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGTGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGTGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCGACTACTACATGCACTGGGTGCGTCAGGCCCCTGGTCAAGGTCTTGAGTGGATGGGTCGTGTTAATCCTAACCGGGGTGGTACTACCTACAACCAGAAATTCGAGGGCCGTGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGCGTAGCCTGCGTTCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTACGAACTGGCTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCACCGTCACCGTCTCC
C8−H241(配列番号23)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGTGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGTGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCGACTACTACATGCACTGGGTGCGTCAGGCCCCTGGTCAAGGTCTTGAGTGGATGGGTCGTGTTAATCCTAACCGGAGGGGTACTACCTACAACCAGAAATTCGAGGGCCGTGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGCGTAGCCTGCGTTCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTGCGAACTGGCTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCACCGTCACCGTCTCC
C8−co−16(配列番号24)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGTGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGTGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACATTCACTGACTACTACATGCACTGGGTGCGTCAGGCCCCTGGTCAAGGTCTTGAGTGGATGGGTCGTGTTAATCCTTATCGGGGTAGTACTACCTACAACCAGAAATTCGAGGGCCGTGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGCGTAGCCTGCGTTCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTGCGAACATTCTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCACCGTCACCGTCTCC
完全軽鎖アミノ酸配列
D11−S17Y カッパ(配列番号25)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSVSSSISSTNLHWYQQKPGQAPRLLIYGTSYLASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPYSFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
D11−8B8 カッパ(配列番号26)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSVSSSISSTNLHWYQQKPGQAPRLLIYGTSYLASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPYSFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
D11−C27G3 カッパ(配列番号27)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSVSSSISSTNLHWYQQKPGQAPRLLIYGTSRLRSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPYSFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
C8−6 カッパ(配列番号28)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVSSIYLHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCIQYSGYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
C8−H241 カッパ(配列番号29)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVSSIYLHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQVYSGYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
C8−co−16 カッパ(配列番号30)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVRSIYLHWYQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQVYRGYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
完全軽鎖核酸配列
D11−S17Y IgG2 LC(配列番号31)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGTGTCAGCTCAAGTATAAGTTCCACCAACTTACACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGCACATCCTACCTGGCTTCTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAGTGGAGTAGTTACCCGTACAGTTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
D11−8B8 IgG2 LC(配列番号32)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGTGTCAGCTCAAGTATAAGTTCCACCAACTTACACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGCACATCCTACCTGGCTTCTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAGTGGAGTAGTTACCCGTACAGTTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
D11−C27G3 IgG2 LC(配列番号33)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGTGTCAGCTCAAGTATAAGTTCCACCAACTTACACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGCACATCCAGACTGAGATCTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAGTGGAGTAGTTACCCGTACAGTTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
C8−6 IgG4 LC(配列番号34)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGTGTCAGCTCAAGTGTAAGTTCCATTTACTTGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGCACATCCAACTTGGCTTCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTATTCAGTACAGTGGTTACCCGCTCACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
C8−H241 IgG4 LC(配列番号35)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGTGTCAGCTCAAGTGTATCCTCCATTTACTTGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGCACATCCAACTTGGCTTCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAAGTCTACAGTGGTTACCCGCTCACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
C8−co16 IgG4 LC(配列番号36)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGTGTCAGCTCAAGTGTACGTTCCATTTACTTGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGCACATCCAACTTGGCTTCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGGTGTACAGGGGTTACCCGCTCACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
完全重鎖アミノ酸配列
D11−S17Y IgG2(配列番号37)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSRYIHWVRQAPGQGLEWMGWIYPVTGDTYYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGAFYYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
D11−8B8 IgG2(配列番号38)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSRYIHWVRQAPGQGLEWMGWIYPVTGDTYYIEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGAFFYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
D11−C27G3 IgG2(配列番号39)
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C8−6 IgG2(配列番号40)
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C8−H241 IgG2(配列番号41)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQGLEWMGRVNPNRRGTTYNQKFEGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARANWLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
C8−co−16 IgG2(配列番号42)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQGLEWMGRVNPYRGSTTYNQKFEGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARANILDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
完全重鎖核酸配列
D11−S17Y IgG2 HC(配列番号43)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGTAGGTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATTTATCCTGTAACTGGTGATACTTACTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTATGGGGCTTTTTACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCATGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
D11−8B8 IgG2 HC(配列番号44)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGTAGGTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATTTATCCTGTAACTGGTGATACTTACTACATCGAGAAGTTCAAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTATGGTGCTTTTTTCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCATGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
D11−C27G3 IgG2 HC(配列番号45)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGTAGGTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATTTATCCTGTAACTGGTGATACTTACTACAGAGAGCCTTTCAAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTACGGAGCTTTTTACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCATGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
C8−6 IgG4 HC(配列番号46)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGTGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGTGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCGACTACTACATGCACTGGGTGCGTCAGGCCCCTGGTCAAGGTCTTGAGTGGATGGGTCGTGTTAATCCTAACCGGGGTGGTACTACCTACAACCAGAAATTCGAGGGCCGTGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGCGTAGCCTGCGTTCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTACGAACTGGCTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCACCGTCACCGTCTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
C8−H241 IgG4 HC(配列番号47)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGTGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGTGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACATTCACTGACTACTACATGCACTGGGTGCGTCAGGCCCCTGGTCAAGGTCTTGAGTGGATGGGTCGTGTTAATCCTAACCGGAGGGGTACTACCTACAACCAGAAATTCGAGGGCCGTGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGCGTAGCCTGCGTTCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTGCGAACTGGCTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCACCGTCACCGTCTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
C8−co16 IgG4 HC(配列番号48)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGTGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGTGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACATTCACTGACTACTACATGCACTGGGTGCGTCAGGCCCCTGGTCAAGGTCTTGAGTGGATGGGTCGTGTTAATCCTTATCGGGGTAGTACTACCTACAACCAGAAATTCGAGGGCCGTGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGCGTAGCCTGCGTTCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTGCGAACATTCTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCACCGTCACCGTCTCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCGCTAGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAAAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGT
ヒトcMet−ECD−Fc−Flis(配列番号72)
MKAPAVLAPGILVLLFTLVQRSNGECKEALAKSEMNVNMKYQLPNFTAETPIQNVILHEHHIFLGATNYIYVLNEEDLQKVAEYKTGPVLEHPDCFPCQDCSSKANLSGGVWKDNINMALVVDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSISVRRLKETKDGFMFLTDQSYIDVLPEFRDSYPIKYVHAFESNNFIYFLTVQRETLDAQTFHTRIIRFCSINSGLHSYMEMPLECILTEKRKKRSTKKEVFNILQAAYVSKPGAQLARQIGASLNDDILFGVFAQSKPDSAEPMDRSAMCAFPIKYVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPNHEHCFNRTLLRNSSGCEARRDEYRTEFTTALQRVDLFMGQFSEVLLTSISTFIKGDLTIANLGTSEGRFMQVVVSRSGPSTPHVNFLLDSHPVSPEVIVEHTLNQNGYTLVITGKKITKIPLNGLGCRHFQSCSQCLSAPPFVQCGWCHDKCVRSEECLSGTWTQQICLPAIYKVFPNSAPLEGGTRLTICGWDFGFRRNNKFDLKKTRVLLGNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDPVITSISPKYGPMAGGTLLTLTGNYLNSGNSRHISIGGKTCTLKSVSNSILECYTPAQTISTEFAVKLKIDLANRETSIFSYREDPIVYEIHPTKSFISGGSTITGVGKNLNSVSVPRMVINVHEAGRNFTVACQHRSNSEIICCTTPSLQQLNLQLPLKTKAFFMLDGILSKYFDLIYVHNPVFKPFEKPVMISMGNENVLEIKGNDIDPEAVKGEVLKVGNKSCENIHLHSEAVLCTVPNDLLKLNSELNIEWKQAISSTVLGKVIVQPDQNFTLEVLFQGPDIEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQEYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKRIDYKDDDDKHVHHHHHH
太字のイタリック体のアミノ酸は、シグナル配列を表し;太字の下線を引いたアミノ酸はFlisタグを表す。
カニクイザルcMet−ECD−Fc−Flis(配列番号73)
MKAPAVLVPGILVLLFTLVQRSNGECKEALAKSEMNVNMKYQLPNFTAETAIQNVILHEHHIFLGATNYIYVLNEEDLQKVAEYKTGPVLEHPDCFPCQDCSSKANLSGGVWKDNINMALVVDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPNQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPHHPLHSISVRRLKETKDGFMFLTDQSYIDVLPEFRDSYPIKYIHAFESNNFIYFLTVQRETLNAQTFHTRIIRFCSLNSGLHSYMEMPLECILTEKRKKRSTKKEVFNILQAAYVSKPGAQLARQIGASLNDDILFGVFAQSKPDSAEPMDRSAMCAFPIKYVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPNHEHCFNRTLLRNSSGCEARRDEYRAEFTTALQRVDLFMGQFSEVLLTSISTFVKGDLTIANLGTSEGRFMQVVVSRSGPSTPHVNFLLDSHPVSPEVIVEHPLNQNGYTLVVTGKKITKIPLNGLGCRHFQSCSQCLSAPPFVQCGWCHDKCVRSEECPSGTWTQQICLPAIYKVFPTSAPLEGGTRLTICGWDFGFRRNNKFDLKKTRVLLGNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDPIITSISPKYGPMAGGTLLTLTGNYLNSGNSRHISIGGKTCTLKSVSNSILECYTPAQTISTEFAVKLKIDLANRETSIFSYREDPIVYEIHPTKSFISGGSTITGVGKNLHSVSVPRMVINVHEAGRNFTVACQHRSNSEIICCTTPSLQQLNLQLPLKTKAFFMLDGILSKYFDLIYVHNPVFKPFEKPVMISMGNENVLEIKGNDIDPEAVKGEVLKVGNKSCENIHLHSEAVLCTVPNDLLKLNSELNIEWKQAISSTVLGKVIVQPDQNFTLEVLFQGPDIEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQEYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKRIDYKDDDDKHVHHHHHH
太字のイタリック体のアミノ酸は、シグナル配列を表し;太字の下線を引いたアミノ酸はFlisタグを表す。
ラットcMet−ECD−Fc−Flis(配列番号74)
MKAPTALAPGILLLLLTLAQRSHGECKEALVKSEMNVNMKYQLPNFTAETPIHNVVLHGHHIYLGATNYIYVLNDKDLQKVSEFKTGPVVEHPDCFPCQDCSSKANVSGGVWKDNVNMALLVDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVLPPDNAADIQSEVHCMFSPLAEEESGQCPDCVVSALGAKVLLSEKDRFINFFVGNTINSSYPPDYSLHSISVRRLKETQDGFKFLTDQSYIDVLPEFRDSYPIKYIHAFESNHFIYFLTVQKETLDAQTFHTRIIRFCSVDSGLHSYMEMPLECILTEKRRKRSTREEVFNILQAAYVSKPGANLAKQIGASPYDDILYGVFAQSKPDSAEPMNRSAVCAFPIKYVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPNHEHCFNRTLLRNSSGCEVRSDEYRTEFTTALQRVDLFMGRLNHVLLTSISTFIKGDLTIANLGTSEGRFMQVVLSRTAHFTPHVNFLLDSYPVSPEVIVEHPSNQNGYTLVVTGKKITKIPLNGLGCGHFQSCSQCLSAPYFIQCGWCHNRCVHSNECPSGTWTQEICLPAVYKVFPTSAPLEGGTMLTICGWDFGFKKNNKFDLRKTKVLLGNESCTLTLSESTTNTLKCTVGPAMSEHFNVSVIVSNSRETTQYSAFSYVDPVITSISPRYGPHAGGTLLTLTGKYLNSGNSRHISIGGKTCTLKSVSDSILECYTPGHTVSAEFPVKLKIDLADRVTSSFSYREDPVVSEIHPTKSFISGGSTITGIGKNLNSVSTPKLVIEVHDVGVNYTVACQHRSSSEIICCTTPSLQQLDLQLPLKTKAFFLLDGILSKHFDLTYVHDPMFKPFEKPVMISMGNENVVEIKGDDIDPEAVKGEVLKVGNKSCENLHWHSEALLCTVPSDLLKLNGGELNIEWKQAVSSTVLGKVIVQPDQNFALEVLFQGPDIEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQEYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKRIDYKDDDDKHVHHHHHH
太字のイタリック体のアミノ酸は、シグナル配列を表し;太字の下線を引いたアミノ酸はFlisタグを表す。
ヒトc−Met ECD(配列番号75)
MKAPAVLAPGILVLLFTLVQRSNGECKEALAKSEMNVNMKYQLPNFTAETPIQNVILHEHHIFLGATNYIYVLNEEDLQKVAEYKTGPVLEHPDCFPCQDCSSKANLSGGVWKDNINMALVVDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSISVRRLKETKDGFMFLTDQSYIDVLPEFRDSYPIKYVHAFESNNFIYFLTVQRETLDAQTFHTRIIRFCSINSGLHSYMEMPLECILTEKRKKRSTKKEVFNILQAAYVSKPGAQLARQIGASLNDDILFGVFAQSKPDSAEPMDRSAMCAFPIKYVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPNHEHCFNRTLLRNSSGCEARRDEYRTEFTTALQRVDLFMGQFSEVLLTSISTFIKGDLTIANLGTSEGRFMQVVVSRSGPSTPHVNFLLDSHPVSPEVIVEHTLNQNGYTLVITGKKITKIPLNGLGCRHFQSCSQCLSAPPFVQCGWCHDKCVRSEECLSGTWTQQICLPAIYKVFPNSAPLEGGTRLTICGWDFGFRRNNKFDLKKTRVLLGNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDPVITSISPKYGPMAGGTLLTLTGNYLNSGNSRHISIGGKTCTLKSVSNSILECYTPAQTISTEFAVKLKIDLANRETSIFSYREDPIVYEIHPTKSFISGGSTITGVGKNLNSVSVPRMVINVHEAGRNFTVACQHRSNSEIICCTTPSLQQLNLQLPLKTKAFFMLDGILSKYFDLIYVHNPVFKPFEKPVMISMGNENVLEIKGNDIDPEAVKGEVLKVGNKSCENIHLHSEAVLCTVPNDLLKLNSELNIEWKQAISSTVLGKVIVQPDQNFT
太字のイタリック体のアミノ酸は、シグナル配列を表す。
Flisタグを有するヒトc−Met Semaドメイン(配列番号76)
MKAPAVLAPGILVLLFTLVQRSNGECKEALAKSEMNVNMKYQLPNFTAETPIQNVILHEHHIFLGATNYIYVLNEEDLQKVAEYKTGPVLEHPDCFPCQDCSSKANLSGGVWKDNINMALVVDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSISVRRLKETKDGFMFLTDQSYIDVLPEFRDSYPIKYVHAFESNNFIYFLTVQRETLDAQTFHTRIIRFCSINSGLHSYMEMPLECILTEKRKKRSTKKEVFNILQAAYVSKPGAQLARQIGASLNDDILFGVFAQSKPDSAEPMDRSAMCAFPIKYVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPNHEHCFNRTLLRNSSGCEARRDEYRTEFTTALQRVDLFMGQFSEVLLTSISTFIKGDLTIANLGTSEGRFMQVVVSRSGPSTPHVNFLLDSHPVSPEVIVEHTLNQNGYTLVITGKKITKIPLNGLGCRHFQSCSQCLSAPPFVQCGWCHDKCVRSEECLSGTWTQQICLDYKDDDDKHVHHHHHH
太字のイタリック体のアミノ酸は、シグナル配列を表し;太字の下線を引いたアミノ酸はFlisタグを表す。
ヒトc−Met細胞外ドメインにおけるC8−抗体エピトープ
121VVDTYYDDQL130(配列番号77)
131ISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQS156(配列番号78)
179ALGAKVLSSVKDRFINF195(配列番号79)
216VRRLKETKDGFM227(配列番号80)
123DTYYDD128(配列番号81)
144HVFPHNHTADIQS156(配列番号82)
192FINF195(配列番号83)
220KETKDGFM227(配列番号84)
ヒトc−Met細胞外ドメインにおけるD11−抗体エピトープ
84YKTGPVLEHPDCFPCQDCSSKANL95(配列番号85)
95CFPCQDCSSKA105(配列番号86)
共通CDR配列
D11−抗体軽鎖CDR2
GTSX1LX2S(配列番号87)(配列中、X1はY又はRであり、且つX2はA又はRである);
C8−抗体軽鎖CDR1
SVSSSVX3SIYLH(配列番号88)(配列中、X3はS又はRである);
C8−抗体軽鎖CDR3
X4X5YX6GYPLT(配列番号89)(配列中、X4はI又はQであり、X5はQ又はVであり、且つX6はS又はRである);
D11−重鎖抗体CDR2
WIYPVTGDTYYX7EX8FKG(配列番号90)(配列中、X7はN、I又はRであり、且つX8はK又はPである);
D11−抗体重鎖CDR3
GYGAFX9Y(配列番号91)(配列中、X9はY又はFである);
C8−抗体重鎖CDR2
RVNPX10RX11X12TTYNQKFEG(配列番号92)(配列中、X10はN又はYであり、X11はG又はRであり、且つX12はG又はSである);
C8−抗体重鎖CDR3
X13NX14LDY(配列番号93)(配列中、X13はT又はAであり、且つX14はW又はIである);
共通軽鎖可変領域配列
D11−抗体軽鎖可変領域共通配列(配列番号94)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCSVSSSISSTNLHWYQQKPGQAPRLLIY
GTSX1LX2SGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWSSYPYSFG
QGTKLEIK
(配列中、X1はY又はRであり、且つX2はA又はRである);
C8−抗体軽鎖可変領域共通配列(配列番号95)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVX3SIYLHWYQQKPGKAPKLLIY
STSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCX4X5YX6GYPLTFG
GGTKVEIK
(配列中、X3はS又はRであり、X4はI又はQであり、X5はQ又はVであり、且つX6はS又はRである);
共通重鎖可変領域配列
D11−抗体重鎖可変領域共通配列(配列番号96)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSRYIHWVRQAPGQGLEWMGW
IYPVTGDTYYX7EX8FKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGY
GAFX9YWGQGTLVTVS
(配列中、X7はN、I又はRであり、X8はK又はPであり、且つX9はY又はFである);
C8−抗体重鎖可変領域共通配列(配列番号97)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQGLEWMGR
VNPX10RX11X12TTYNQKFEGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARX13NX14LDYWGQGTTVTVS
(配列中、X10はY又はNであり、X11はG又はRであり、X12はS又はGであり、X13はA又はTであり、且つX14はI又はWである)。
Claims (11)
- 2つの軽鎖可変領域(LCVR)と2つの重鎖可変領域(HCVR)とを含むモノクローナル抗体であって、ここに、各LCVRが3つの軽鎖相補性決定領域(LCDR)を含み、各HCVRが3つの重鎖相補性決定領域(HCDR)を含み、該3つのLCDRがアミノ酸配列SVSSSVSSIYLH(配列番号53)を含むLCDR1、アミノ酸配列STSNLAS(配列番号54)を含むLCDR2、及びアミノ酸配列QVYSGYPLT(配列番号56)を含むLCDR3であり、該3つのHCDRがアミノ酸配列GYTFTDYYMH(配列番号65)を含むHCDR1、アミノ酸配列RVNPNRRGTTYNQKFEG(配列番号68)を含むHCDR2、及びアミノ酸配列ANWLDY(配列番号69)を含むHCDR3である、モノクローナル抗体。
- 軽鎖可変領域(LCVR)と、重鎖可変領域(HCVR)とを含む請求項1に記載のモノクローナル抗体であって、前記LCVRが配列番号5のアミノ酸配列を含み、前記HCVRが配列番号17のアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗体。
- カッパ定常領域を有する軽鎖と、IgG4重鎖定常領域を有する重鎖とを含む、請求項1または2に記載のモノクローナル抗体。
- 配列番号29のアミノ酸配列を有する軽鎖と、IgG4重鎖定常領域を有する重鎖とを含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
- 配列番号29のアミノ酸配列を有する2つの軽鎖と、IgG4重鎖定常領域を有する2つの重鎖とを含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
- 軽鎖のアミノ酸配列が配列番号35によってコードされ、重鎖のアミノ酸配列が配列番号47によってコードされる、請求項1〜5のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体であって、前記抗体が2つの軽鎖および2つの重鎖を含み、前記軽鎖のアミノ酸配列が配列番号35によってコードされ、前記重鎖のアミノ酸配列が配列番号47によってコードされる、モノクローナル抗体。
- ヒトにおける癌の治療において使用するための請求項1〜7のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体であって、前記癌が胃癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、前立腺癌又は肺癌である、モノクローナル抗体。
- 請求項1〜8のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体と、薬学的に許容できる担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む、医薬組成物。
- 治療で用いるための、請求項1〜8のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
- ヒトの癌の治療で用いるための、請求項1〜8のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
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