CN117529499A - 抗met抗体和其用途 - Google Patents

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N·杰拉
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Abstract

本文提供了抗体和其用途。

Description

抗MET抗体和其用途
相关申请交叉引用
本申请要求于2021年2月3日提交的美国临时专利申请序列号63/145,348的优先权，所述美国临时专利申请的完整内容通过引用并入本文。
技术领域
本公开涉及生物技术领域，并且更具体地涉及抗原结合性分子，如抗体。
背景技术
已经设计了抗体-药物缀合物来对抗多种疾病。这种方法的一个特定优点是抗体-药物缀合物能够具有细胞抑制或细胞毒性作用。尽管经过多年的开发，但需要改良的抗体-药物缀合物。
发明内容
本发明基于以下概念：可以生成抗体，其展示出增强的功效(例如，以下中的一者或多者：靶哺乳动物细胞中毒素释出增加(例如，可检测到的增加)、靶哺乳动物细胞杀伤增加(例如，可检测到的增加)和内溶酶体递送增加(例如，可检测到的增加))。
本文提供了抗体，其包含：(a)选自以下的组的重链可变结构域和轻链可变结构域：(i)分别为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；(ii)分别为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；(iii)分别为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；(iv)分别为SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；(v)分别为SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；(vi)分别为SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；(vii)分别为SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；(viii)分别为SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；(ix)分别为SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；(x)分别为SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；(xi)分别为SEQID NO:25和SEQ ID NO:26；(xii)分别为SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；(xiii)分别为SEQID NO:29和SEQ ID NO:30；(xiv)分别为SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；(xv)分别为SEQ IDNO:33和SEQ ID NO:34；以及(b)SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列，所述序列包括以下中的一者或多者：(i)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；(ii)在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；(iii)在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；(iv)在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代；和/或SEQ ID NO:157的轻链CL序列，所述序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:35和SEQ IDNO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:51和SEQ IDNO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:131和SEQ IDNO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:139和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:147和SEQID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQID NO:68和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ IDNO:84和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ IDNO:100和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ IDNO:116和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:124和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQID NO:132和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:148和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQID NO:77和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQID NO:93和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ IDNO:109和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQID NO:125和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:42；(ii)分别为SEQ ID NO:43和SEQ IDNO:50；(iii)分别为SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:58；(iv)分别为SEQ ID NO:59和SEQ IDNO:66；(v)分别为SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:74；(vi)分别为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:82；(vii)分别为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:90；(viii)分别为SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:98；(ix)分别为SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:106；(x)分别为SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:114；(xi)分别为SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:122；(xii)分别为SEQ ID NO:123和SEQ IDNO:130；(xiii)分别为SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:138；(xiv)分别为SEQ ID NO:139和SEQID NO:146；或(xv)分别为SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:154。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:42；(ii)分别为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:50；(iii)分别为SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:58；(iv)分别为SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:66；(v)分别为SEQID NO:68和SEQ ID NO:74；(vi)分别为SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:82；(vii)分别为SEQ IDNO:84和SEQ ID NO:90；(viii)分别为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:98；(ix)分别为SEQ IDNO:100和SEQ ID NO:106；(x)分别为SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:114；(xi)分别为SEQ IDNO:116和SEQ ID NO:122；(xii)分别为SEQ ID NO:124和SEQ ID NO:130；(xiii)分别为SEQID NO:132和SEQ ID NO:138；(xiv)分别为SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:146；或(xv)分别为SEQ ID NO:148和SEQ ID NO:154。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:42；(ii)分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:50；(iii)分别为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:58；(iv)分别为SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:66；(v)分别为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:74；(vi)分别为SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:82；(vii)分别为SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:90；(viii)分别为SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98；(ix)分别为SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:106；(x)分别为SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:114；(xi)分别为SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:122；(xii)分别为SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:130；(xiii)分别为SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:138；(xiv)分别为SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:146；或(xv)分别为SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:154。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：氨基酸在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:78和SEQID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:94和SEQID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:110和SEQID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:118和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:142和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:150和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中；所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQID NO:79和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQID NO:95和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ IDNO:111和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQID NO:127和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:151和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:112和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:120和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:136和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:152和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体进一步包括与以下中的一者或多者缀合的细胞毒性药物：(a)SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3，所述重链CH1-CH2-CH3包括以下中的一者或多者：(i)在氨基酸位置103处的半胱氨酸；(ii)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸；(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸；以及(iv)在氨基酸位置112处的半胱氨酸；和/或(b)在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体进一步包括与SEQ IDNO:157的位置98处的半胱氨酸缀合的细胞毒性或细胞抑制剂。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体进一步包括与SEQ IDNO:155或SEQ ID NO:189的位置1处的半胱氨酸缀合的细胞毒性或细胞抑制剂。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述细胞毒性或细胞抑制剂是缀合的毒素、放射性同位素、药物或小分子。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，(a)所述抗体在约4.0至约6.5的pH下的解离速率比在约7.0至约8.0的pH下的解离速率快；或(b)所述抗体在约4.0至约6.5的pH下的解离常数(KD)比在约7.0至约8.0的pH下的KD大。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，包括所述抗体的组合物：提供以下中的一者或多者：与包括相同量的对照抗体的组合物相比，靶哺乳动物细胞中的毒素释出增加；与包括相同量的对照抗体的组合物相比，靶哺乳动物细胞杀伤增加；以及与包括相同量的对照抗体的组合物相比，所述靶哺乳动物细胞中的内溶酶体递送增加。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，与包括相同量的对照抗体的组合物相比，包括所述抗体的组合物使在靶哺乳动物细胞的表面上呈递的MET的水平降低更少；或包括所述抗体的组合物不引起在所述靶哺乳动物细胞的表面上呈递的MET的水平的可检测的降低。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，在所述抗体被靶哺乳动物细胞内化之后，所述抗体在靶哺乳动物细胞中降解。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述靶哺乳动物细胞是癌细胞。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体对所述靶哺乳动物细胞有细胞毒性或细胞抑制性。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体具有亲合力，所述亲合力引起相对于非癌性细胞对癌细胞的选择性增加。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体与非人灵长类动物MET和人MET具有交叉反应性，或与非人灵长类动物MET、人MET以及大鼠MET和小鼠MET中的一者或两者具有交叉反应性。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，与对照抗体在体内的半衰期相比，所述抗体在体内的半衰期增加。
本文还提供了药物组合物，所述药物组合物包括有效量的本文所描述的抗体中的任一种。本文还提供了试剂盒，所述试剂盒包含至少一个剂量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
本文还提供了减小受试者的肿瘤的体积的方法，其中所述肿瘤的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
本文还提供了诱导受试者的癌细胞的细胞死亡的方法，其中所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
本文还提供了降低患有癌症的受试者发生转移的风险或降低所述受试者发生另外的转移的风险的方法，其中所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
本文还提供了包含以下的抗体：(a)选自由以下组成的组的重链可变结构域和轻链可变结构域：(i)分别为SEQ ID NO:159和SEQ ID NO:160；(ii)分别为SEQ ID NO:161和SEQ ID NO:162；以及(iii)分别为SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164；以及(b)SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列，所述序列包括以下取代中的一者或多者：(i)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及氨基酸在位置106和108处的苏氨酸缺失；(ii)在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；(iii)在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；(iv)在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代；和/或SEQ ID NO:157的轻链CL序列，所述序列包括在位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:165和SEQID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:187。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ IDNO:166和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:174和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQID NO:182和SEQ ID NO:187。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:167和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:175和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:183和SEQ ID NO:187。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包含在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:165和SEQ ID NO:172；(ii)分别为SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:180；或(iii)分别为SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:188。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包含在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:166和SEQ ID NO:172；(ii)分别为SEQ ID NO:174和SEQ ID NO:180；或(iii)分别为SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:188。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包含在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:167和SEQ ID NO:172；(ii)分别为SEQ ID NO:175和SEQ ID NO:180；或(iii)分别为SEQ ID NO:183和SEQ ID NO:188。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:168和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:176和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:184和SEQ ID NO:187。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中；所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:169和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:177和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:185和SEQ ID NO:187。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包含：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:178和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:186和SEQ ID NO:187。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体进一步包括与以下中的一者或多者缀合的细胞毒性药物：(a)SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3，所述重链CH1-CH2-CH3包括以下中的一者或多者：(i)在氨基酸位置103处的半胱氨酸；(ii)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸；(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸；(iv)在氨基酸位置112处的半胱氨酸；和/或(b)在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体进一步包括与SEQ IDNO:157的位置98处的半胱氨酸缀合的细胞毒性或细胞抑制剂。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体进一步包括与SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的位置1处的半胱氨酸缀合的细胞毒性或细胞抑制剂。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述细胞毒性或细胞抑制剂是缀合的毒素、放射性同位素、药物或小分子。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体对靶哺乳动物细胞有细胞毒性或细胞抑制性。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，在所述抗体被所述靶哺乳动物细胞内化之后，所述抗体在所述靶哺乳动物细胞中降解。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述靶哺乳动物细胞是癌细胞。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体具有亲合力，所述亲合力引起相对于非癌性细胞对癌细胞的选择性增加。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述抗体与非人灵长类动物MET和人MET具有交叉反应性，或与非人灵长类动物MET、人MET以及大鼠MET和小鼠MET中的一者或两者具有交叉反应性。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，与对照抗体在体内的半衰期相比，所述抗体在体内的半衰期增加。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，所述靶哺乳动物细胞是癌细胞。
本文还提供了药物组合物，所述药物组合物包括有效量的本文所描述的抗体中的任一种。本文还提供了试剂盒，所述试剂盒包含至少一个剂量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种。
本文还提供了治疗癌症的方法，所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
本文还提供了减小受试者的肿瘤的体积的方法，其中所述肿瘤的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
本文还提供了诱导受试者的癌细胞的细胞死亡的方法，其中所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
本文还提供了降低患有癌症的受试者发生转移的风险或降低所述受试者发生另外的转移的风险的方法，其中所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
“抗原结合结构域”是能够特异性结合到一种或多种不同抗原的一个或多个蛋白质结构域(例如，由来自单一多肽的氨基酸形成或由来自两种或更多种多肽(例如，相同或不同的多肽)的氨基酸形成)。在一些实例中，抗原结合结构域可能以与天然存在的抗体相似的特异性和亲和力结合到抗原或表位。在一些实施例中，抗原结合结构域可以是抗体或其片段。在一些实施例中，抗原结合结构域可以包含替代支架。抗原结合结构域的非限制性实例在本文描述。抗原结合结构域的额外实例是本领域已知的。在一些实例中，抗原结合结构域可以与单个抗原结合。
术语“抗体”在本文中以其最广泛的意义使用并且包括某些类型的免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子包括与抗原或表位特异性结合的一个或多个抗原结合结构域。抗体特别包含例如完整抗体(例如完整免疫球蛋白，例如人IgG(例如人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4))、抗体片段和多特异性抗体。抗原结合结构域的一个实例是由VH-VL二聚体形成的抗原结合结构域。抗体的额外实例在本文描述。抗体的额外实例是本领域已知的。
短语“内体/溶酶体途径”指哺乳动物细胞的细胞质中的内体(早期内体、多泡体、晚期内体和溶酶体)的网络，其中分选通过细胞介导的内化过程(例如，胞饮作用、微胞饮作用、受体介导的内吞作用和/或吞噬作用)内化的分子。
内体/溶酶体途径中的内体一经纯化或分离，就可以使用本领域已知的方法(ELISA、蛋白质印迹(Western blot)、免疫荧光和免疫沉淀，随后进行蛋白浓度的测定)来进行靶蛋白(例如，本文所描述的抗体)的测定，并且可以用于测定内体中靶蛋白的浓度或相对水平。可替代地，可以使用免疫荧光显微镜术，使用与内体中存在的特征性蛋白质(例如，早期核内体的EEA1)特异性结合的可检测标记的抗体(例如，荧光团标记的抗体、染料标记的抗体或GFP标记的抗体，例如，CellLightTM早期内体-GFP)和与目标蛋白(例如，抗体)特异性结合的荧光团标记的抗体来对内体/溶酶体途径中的内体成像，并且可以通过定量两种不同抗体的荧光发射中的重叠来测定内体中的靶蛋白水平。
短语“内溶酶体递送”是指在哺乳动物细胞(例如，本文所描述的示例性靶哺乳动物细胞中的任一种)的内体/溶酶体途径中抗体(例如，本文所描述的抗体中的任一种)随时间推移的累积率或在特定时间点的总累积率。
用于测量本文所描述的抗体中的任一种的内溶酶体递送的示例性测定法包含涉及以下的那些：用荧光染料标记抗体，随后将标记的抗体与细胞一起温育并且测量细胞荧光作为抗体内溶酶体递送的指标(例如，如Wustner,《Traffic杂志(Traffic)》7(6):699-715,2006中大体所述)。可替代地，优先在酸性pH而不是中性pH下发出荧光的pH敏感染料可以用于标记本文所描述的抗体中的任一种，然后可以将抗体与细胞一起温育并且测量细胞荧光作为抗体递送到酸性内溶酶体区室中的指标。
术语“群体”在名词前使用时，意指两个或更多个特定名词。例如，短语“癌细胞的群体”意指“两个或更多个癌细胞”。癌细胞的非限制性实例在本文描述。
短语“对细胞有细胞抑制性”是指细胞(例如，癌细胞)在体内或在体外的增殖(细胞分裂)的直接或间接减少。当药剂对细胞有细胞抑制性时，该药剂可以例如直接或间接地导致细胞(例如，癌细胞)的细胞周期停滞。在一些实例中，对细胞有细胞抑制性的药剂可以减少细胞群体中处于S期的细胞数目(与在和药剂接触之前细胞群体中处于S期的细胞数目相比)。在一些实例中，对细胞有细胞抑制性的药剂可以使处于S期的细胞百分比减少至少20％、至少40％、至少60％或至少80％(例如，与在和药剂接触之前细胞群体中处于S期的细胞百分比相比)。
短语“对细胞有细胞毒性”是指直接或间接诱导细胞(例如，哺乳动物细胞，例如癌细胞)的死亡(例如坏死或凋亡)。
“亲和力”是指抗原结合位点与其结合配偶体(例如，抗原或表位)之间的非共价相互作用的总和强度。除非另外说明，否则如本文所使用的，“亲和力”是指固有结合亲和力，其反映抗原结合结构域与抗原或表位的成员之间的1:1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力可以用解离平衡常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常用方法(包括本文描述的那些方法)来测量。亲和力可以例如使用表面等离子体共振(SPR)技术(例如，)或生物层干涉测量术(例如，/>)来确定。用于确定对抗原结合结构域及其对应的抗原或表位的亲和力的额外的方法是本领域已知的。
术语“表位”意指抗原的一部分，该部分由抗原结合结构域通过以下之间的一组物理相互作用特异性结合：(i)抗原结合结构域的特异性结合抗原的部分上的所有单体(例如单独的氨基酸残基、糖侧链和翻译后修饰的氨基酸残基)，以及(ii)抗原被抗原结合结构域特异性结合的部分上的所有单体(例如单独的氨基酸残基、糖侧链、翻译后修饰的氨基酸残基)。表位可以例如由表面可及的氨基酸残基、糖侧链、磷酸化氨基酸残基、甲基化氨基酸残基和/或乙酰化氨基酸残基组成并且可以具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象表位和非构象表位的区别在于与前者的结合，而不是与后者的结合，可能在变性溶剂的存在下丧失。在一些实施例中，表位由至少约3至6个氨基酸或约10至15个氨基酸的线性氨基酸序列限定。在一些实施例中，表位是指由三维结构(例如，蛋白质折叠)限定的全长蛋白质的一部分或其一部分。在一些实施例中，表位是经由蛋白质折叠聚集在一起的不连续氨基酸序列限定的。在一些实施例中，表位是通过四级结构(例如，通过两条不同的多肽链的相互作用形成的裂隙)聚集在一起的不连续氨基酸序列限定的。限定表位的残基之间的氨基酸序列对于表位的三维结构可能不是关键的。可以使用将抗体与抗原的变性型式的结合进行比较的测定法来确定和筛选构象表位，以便生成线性表位。表位可以包含结合直接牵涉的氨基酸残基和结合不直接牵涉的其它氨基酸残基。
用于鉴定抗原结合结构域特异性结合的表位的方法是本领域已知的，例如基于结构的分析(例如，X射线晶体学、NMR和/或电子显微镜术)(例如，基于抗原和/或抗原-抗原结合结构域复合物)和/或基于诱变的分析(例如，丙氨酸扫描诱变、甘氨酸扫描诱变和同源扫描诱变)，其中结合测定法中用结合配偶体测量突变体，其中许多突变体是本领域已知的。
术语“互补位”意指抗原结合结构域的一部分，该部分通过以下之间的一组物理相互作用特异性与抗原结合：(i)抗原结合结构域的特异性结合抗原的部分上的所有单体(例如单独的氨基酸残基、糖侧链、翻译后修饰的氨基酸残基)，以及(ii)抗原被抗原结合结构域特异性结合的部分上的所有单体(例如单独的氨基酸残基、糖侧链、翻译后修饰的氨基酸残基)。互补位可以例如由表面可及的氨基酸残基组成并且可以具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。在一些实施例中，互补位是指由三维结构(例如，蛋白质折叠)限定的全长抗原结合结构域的一部分或其一部分。在一些实施例中，互补位是经由蛋白质折叠聚集在一起的不连续氨基酸序列限定的。在一些实施例中，表位是通过四级结构(例如，通过两条不同的多肽链的相互作用形成的裂隙)聚集在一起的不连续氨基酸序列限定的。限定互补位的残基之间的氨基酸序列对于互补位的三维结构可能不是关键的。互补位可以包括结合直接牵涉的氨基酸残基和结合不直接牵涉的其它氨基酸残基。
用于鉴定抗原结合结构域特异性结合的互补位的方法是本领域已知的，例如基于结构的分析(例如，X射线晶体学、NMR和/或电子显微镜术)(例如，基于抗原结合结构域，和/或抗原结合结构域-抗原复合物)，和/或基于诱变的分析(例如，丙氨酸扫描诱变、甘氨酸扫描诱变和同源扫描诱变)，其中结合测定法中用结合配偶体测量突变体，其中许多突变体是本领域已知的。
短语“存在于哺乳动物细胞表面上”意指(1)物理附着于或至少部分地嵌入哺乳动物细胞的质膜的抗原(例如，跨膜蛋白、外周膜蛋白、脂锚定蛋白(例如，GPI-锚)、N-肉豆蔻酸化的蛋白或S-棕榈酰化蛋白)或(2)稳定结合至其同源受体的抗原，其中所述同源受体物理附着于哺乳动物细胞的质膜(例如，结合至其同源受体的配体，其中所述同源受体物理附着于质膜)。用于确定哺乳动物细胞表面上抗原的存在的非限制性方法包括荧光活化细胞分选(FACS)、免疫组织化学、细胞分级测定法和蛋白质印迹。
短语“对照抗体”意指：(i)能够与在哺乳动物细胞(例如，靶哺乳动物细胞)的表面上呈递的MET或MET的表位特异性结合的抗体，其中以下中的一者或两者为真：(a)所述第一抗原结合结构域在约4.0至约6.5(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任何子范围)的pH下的解离速率是在约7.0至约8.0(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任何子范围)的pH下的解离速率的不大于3倍(例如，不大于2.8倍、不大于2.6倍、不大于2.5倍、不大于2.4倍、不大于2.2倍、不大于2.0倍、不大于1.8倍、不大于1.6倍、不大于1.5倍、不大于1.4倍、不大于1.2倍、不大于1.0倍、不大于0.8倍、不大于0.6倍、不大于0.5倍、不大于0.4倍、不大于0.3倍、不大于0.2倍或不大于0.1倍)；或者(b)所述第一抗原结合结构域在约4.0至约6.5(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任何子范围)的pH下的解离常数(KD)是在约7.0至约8.0(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任何子范围)的pH下的KD的不大于3倍(例如，不大于2.8倍、不大于2.6倍、不大于2.5倍、不大于2.4倍、不大于2.2倍、不大于2.0倍、不大于1.8倍、不大于1.6倍、不大于1.5倍、不大于1.4倍、不大于1.2倍、不大于1.0倍、不大于0.8倍、不大于0.6倍、不大于0.5倍、不大于0.4倍、不大于0.3倍、不大于0.2倍或不大于0.1倍)；和/或(ii)特立妥珠单抗；(iii)依玛妥珠单抗；和/或(iv)P3D12。
术语“细胞外空间”意指哺乳动物细胞的质膜外部的液体。当哺乳动物细胞在体外时，胞外空间可以是液体培养基。当哺乳动物细胞在体内时，胞外空间可以是例如血浆、血清、血液、间质液或淋巴。
术语“内溶酶体空间”意指由哺乳动物细胞中构成内体/溶酶体途径的囊泡和细胞器包封的流体。
短语“降低的水平”或“下降的水平”可以是相较于参考水平或参考值的降低或下降至少1％(例如，至少2％、至少4％、至少6％、至少8％、至少10％、至少12％、至少14％、至少16％、至少18％、至少20％、至少22％、至少24％、至少26％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％)。
术语“细胞杀伤效力”是指按照随时间推移或在相关时间点的速率测量的药剂(例如，本文所描述的抗体中的任一种)直接或间接诱导哺乳动物细胞(例如，癌细胞)凋亡和/或坏死的能力。用于测定细胞的细胞杀伤效力的方法是本领域已知的(例如台盼蓝染色、显微镜术、荧光辅助的细胞分选和检测凋亡标志物(例如，膜联蛋白V)的测定法)。在非限制性实例中，细胞杀伤效力可通过以下方式测量，例如通过在药剂的单一浓度下的细胞杀伤，通过药剂的IC50(即，达到最大细胞杀伤效力一半的药剂浓度)，或通过哺乳动物细胞上药剂的解离常数KD除以其IC50的比率。在一些非限制性实例中，将本文所描述的IC50和/或KD比率与对照抗体(如本文定义)的比率进行比较，并且任选地证明本文所描述的抗体相较于对照抗体，具有更高的细胞杀伤效力。
术语“毒素释出”是指按照随时间推移或在特定时间点的速率测量的哺乳动物细胞(例如，非癌哺乳动物细胞或癌细胞)使与毒素缀合的本文所描述的抗体中的任一种(例如，本文所描述的抗体或对照抗体中的任一种)内化(例如，经由胞饮作用和/或受体介导的内吞作用)并且随后释放与抗体缀合的毒素的能力。毒素释出可以使用多种不同的示例性测定法评估，例如ELISA、免疫荧光、细胞杀伤测定法、细胞周期停滞测定法、DNA损伤测定法、质谱法、HPLC和/或同位素标记的毒素。
短语“靶细胞”或“靶哺乳动物细胞”或“哺乳动物靶细胞”意指在其表面上具有至少一个MET存在的哺乳动物细胞。在一些实例中，哺乳动物靶细胞可以是癌细胞。在一些实施例中，靶哺乳动物细胞可以具有存在于靶哺乳动物细胞的质膜上的总共约1至约10,000,000、约1至约9,000,000、约1至约8,000,000、约1至约7,000,000、约1至约6,000,000、约1至约5,000,000、约1至约4,000,000、约1至约3,000,000、约1至约2,000,000、约1至约1,000,000、约1至约800,000、约1至约600,000、约1至约400,000、约1至约200,000、约1至约100,000、约1至约80,000、约1至约80,000、约1至约75,000、约1至约70,000、约1至约65,000、约1至约60,000、约1至约55,000、约1至约50,000、约1至约45,000、约1至约40,000、约1至约35,000、约1至约30,000、约1至约25,000、约1至约20,000、约1至约15,000、约1至约10,000、约1至约7,500、约1至约5,000、约1至约4,000、约1至约3,000、约1至约2,000、约1至约1,000、约1至约500、约1至约100、约1至约50、约1至约10、约10至约10,000,000、约10至约9,000,000、约10至约8,000,000、约10至约7,000,000、约10至约6,000,000、约10至约5,000,000、约10至约4,000,000、约10至约3,000,000、约10至约2,000,000、约10至约1,000,000、约10至约800,000、约10至约600,000、约10至约400,000、约10至约200,000、约10至约100,000、约10至约80,000、约10至约80,000、约10至约75,000、约10至约70,000、约10至约65,000、约10至约60,000、约10至约55,000、约10至约50,000、约10至约45,000、约10至约40,000、约10至约35,000、约10至约30,000、约10至约25,000、约10至约20,000、约10至约15,000、约10至约10,000、约10至约7,500、约10至约5,000、约10至约4,000、约10至约3,000、约10至约2,000、约10至约1,000、约10至约500、约10至约100、约10至约50、约50至约10,000,000、约50至约9,000,000、约50至约8,000,000、约50至约7,000,000、约50至约6,000,000、约50至约5,000,000、约50至约4,000,000、约50至约3,000,000、约50至约2,000,000、约50至约1,000,000、约50至约800,000、约50至约600,000、约50至约400,000、约50至约200,000、约50至约100,000、约50至约80,000、约50至约80,000、约50至约75,000、约50至约70,000、约50至约65,000、约50至约60,000、约50至约55,000、约50至约50,000、约50至约45,000、约50至约40,000、约50至约35,000、约50至约30,000、约50至约25,000、约50至约20,000、约50至约15,000、约50至约10,000、约50至约7,500、约50至约5,000、约50至约4,000、约50至约3,000、约50至约2,000、约50至约1,000、约50至约500、约50至约100、约100至约10,000,000、约100至约9,000,000、约100至约8,000,000、约100至约7,000,000、约100至约6,000,000、约100至约5,000,000、约100至约4,000,000、约100至约3,000,000、约100至约2,000,000、约100至约1,000,000、约100至约800,000、约100至约600,000、约100至约400,000、约100至约200,000、约100至约100,000、约100至约80,000、约100至约75,000、约100至约70,000、约100至约65,000、约100至约60,000、约100至约55,000、约100至约50,000、约100至约45,000、约100至约40,000、约100至约35,000、约100至约30,000、约100至约25,000、约100至约20,000、约100至约15,000、约100至约10,000、约100至约7,500、约100至约5,000、约100至约4,000、约100至约3,000、约100至约2,000、约100至约1,000、约100至约500、约500至约10,000,000、约500至约9,000,000、约500至约8,000,000、约500至约7,000,000、约500至约6,000,000、约500至约5,000,000、约500至约4,000,000、约500至约3,000,000、约500至约2,000,000、约500至约1,000,000、约500至约800,000、约500至约600,000、约500至约400,000、约500至约200,000、约500至约100,000、约500至约80,000、约500至约75,000、约500至约70,000、约500至约65,000、约500至约60,000、约500至约55,000、约500至约50,000、约500至约45,000、约500至约40,000、约500至约35,000、约500至约30,000、约500至约25,000、约500至约20,000、约500至约15,000、约500至约10,000、约500至约7,500、约500至约5,000、约500至约4,000、约500至约3,000、约500至约2,000、约500至约1,000、约1,000至约10,000,000、约1,000至约9,000,000、约1,000至约8,000,000、约1,000至约7,000,000、约1,000至约6,000,000、约1,000至约5,000,000、约1,000至约4,000,000、约1,000至约3,000,000、约1,000至约2,000,000、约1,000至约1,000,000、约1,000至约800,000、约1,000至约600,000、约1,000至约400,000、约1,000至约200,000、约1,000至约100,000、约1,000至约80,000、约1,000至约75,000、约1,000至约70,000、约1,000至约65,000、约1,000至约60,000、约1,000至约55,000、约1,000至约50,000、约1,000至约45,000、约1,000至约40,000、约1,000至约35,000、约1,000至约30,000、约1,000至约25,000、约1,000至约20,000、约1,000至约15,000、约1,000至约10,000、约1,000至约7,500、约1,000至约5,000、约1,000至约4,000、约1,000至约3,000、约1,000至约2,000、约2,000至约10,000,000、约2,000至约9,000,000、约2,000至约8,000,000、约2,000至约7,000,000、约2,000至约6,000,000、约2,000至约5,000,000、约2,000至约4,000,000、约2,000至约3,000,000、约2,000至约2,000,000、约2,000至约1,000,000、约2,000至约800,000、约2,000至约600,000、约2,000至约400,000、约2,000至约200,000、约2,000至约100,000、约2,000至约80,000、约2,000至约75,000、约2,000至约70,000、约2,000至约65,000、约2,000至约60,000、约2,000至约55,000、约2,000至约50,000、约2,000至约45,000、约2,000至约40,000、约2,000至约35,000、约2,000至约30,000、约2,000至约25,000、约2,000至约20,000、约2,000至约15,000、约2,000至约10,000、约2,000至约7,500、约2,000至约5,000、约2,000至约4,000、约2,000至约3,000、约3,000至约10,000,000、约3,000至约9,000,000、约3,000至约8,000,000、约3,000至约7,000,000、约3,000至约6,000,000、约3,000至约5,000,000、约3,000至约4,000,000、约3,000至约3,000,000、约3,000至约2,000,000、约3,000至约1,000,000、约3,000至约800,000、约3,000至约600,000、约3,000至约400,000、约3,000至约200,000、约3,000至约100,000、约3,000至约80,000、约3,000至约75,000、约3,000至约70,000、约3,000至约65,000、约3,000至约60,000、约3,000至约55,000、约3,000至约50,000、约3,000至约45,000、约3,000至约40,000、约3,000至约35,000、约3,000至约30,000、约3,000至约25,000、约3,000至约20,000、约3,000至约15,000、约3,000至约10,000、约3,000至约7,500、约3,000至约5,000、约3,000至约4,000、约4,000至约10,000,000、约4,000至约9,000,000、约4,000至约8,000,000、约4,000至约7,000,000、约4,000至约6,000,000、约4,000至约5,000,000、约4,000至约4,000,000、约4,000至约3,000,000、约4,000至约2,000,000、约4,000至约1,000,000、约4,000至约800,000、约4,000至约600,000、约4,000至约400,000、约4,000至约200,000、约4,000至约100,000、约4,000至约80,000、约4,000至约75,000、约4,000至约70,000、约4,000至约65,000、约4,000至约60,000、约4,000至约55,000、约4,000至约50,000、约4,000至约45,000、约4,000至约40,000、约4,000至约35,000、约4,000至约30,000、约4,000至约25,000、约4,000至约20,000、约4,000至约15,000、约4,000至约10,000、约4,000至约7,500、约4,000至约5,000、约5,000至约10,000,000、约5,000至约9,000,000、约5,000至约8,000,000、约5,000至约7,000,000、约5,000至约6,000,000、约5,000至约5,000,000、约5,000至约4,000,000、约5,000至约3,000,000、约5,000至约2,000,000、约5,000至约1,000,000、约5,000至约800,000、约5,000至约600,000、约5,000至约400,000、约5,000至约200,000、约5,000至约100,000、约5,000至约80,000、约5,000至约7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0、约60,000至约9,000,000、约60,000至约8,000,000、约60,000至约7,000,000、约60,000至约6,000,000、约60,000至约5,000,000、约60,000至约4,000,000、约60,000至约3,000,000、约60,000至约2,000,000、约60,000至约1,000,000、约60,000至约800,000、约60,000至约600,000、约60,000至约400,000、约60,000至约200,000、约60,000至约100,000、约60,000至约80,000、约60,000至约75,000、约60,000至约70,000、约60,000至约65,000、约65,000至约10,000,000、约65,000至约9,000,000、约65,000至约8,000,000、约65,000至约7,000,000、约65,000至约6,000,000、约65,000至约5,000,000、约65,000至约4,000,000、约65,000至约3,000,000、约65,000至约2,000,000、约65,000至约1,000,000、约65,000至约800,000、约65,000至约600,000、约65,000至约400,000、约65,000至约200,000、约65,000至约100,000、约65,000至约80,000、约65,000至约75,000、约65,000至约70,000、约70,000至约10,000,000、约70,000至约9,000,000、约70,000至约8,000,000、约70,000至约7,000,000、约70,000至约6,000,000、约70,000至约5,000,000、约70,000至约4,000,000、约70,000至约3,000,000、约70,000至约2,000,000、约70,000至约1,000,000、约70,000至约800,000、约70,000至约600,000、约70,000至约400,000、约70,000至约200,000、约70,000至约100,000、约70,000至约90,000、约70,000至约80,000、约80,000至约10,000,000、约80,000至约9,000,000、约80,000至约8,000,000、约80,000至约7,000,000、约80,000至约6,000,000、约80,000至约5,000,000、约80,000至约4,000,000、约80,000至约3,000,000、约80,000至约2,000,000、约80,000至约1,000,000、约80,000至约800,000、约80,000至约600,000、约80,000至约400,000、约80,000至约200,000、约80,000至约100,000、约80,000至约90,000、约90,000至约10,000,000、约90,000至约9,000,000、约90,000至约8,000,000、约90,000至约7,000,000、约90,000至约6,000,000、约90,000至约5,000,000、约90,000至约4,000,000、约90,000至约3,000,000、约90,000至约2,000,000、约90,000至约1,000,000、约90,000至约800,000、约90,000至约600,000、约90,000至约400,000、约90,000至约200,000、约90,000至约100,000、约100,000至约10,000,000、约100,000至约9,000,000、约100,000至约8,000,000、约100,000至约7,000,000、约100,000至约6,000,000、约100,000至约5,000,000、约100,000至约4,000,000、约100,000至约3,000,000、约100,000至约2,000,000、约100,000至约1,000,000、约100,000至约800,000、约100,000至约600,000、约100,000至约400,000、约100,000至约200,000、约200,000至约10,000,000、约200,000至约9,000,000、约200,000至约8,000,000、约200,000至约7,000,000、约200,000至约6,000,000、约200,000至约5,000,000、约200,000至约4,000,000、约200,000至约3,000,000、约200,000至约2,000,000、约200,000至约1,000,000、约200,000至约800,000、约200,000至约600,000、约200,000至约400,000、约400,000至约10,000,000、约400,000至约9,000,000、约400,000至约8,000,000、约400,000至约7,000,000、约400,000至约6,000,000、约400,000至约5,000,000、约400,000至约4,000,000、约400,000至约3,000,000、约400,000至约2,000,000、约400,000至约1,000,000、约400,000至约800,000、约400,000至约600,000、约600,000至约10,000,000、约600,000至约9,000,000、约600,000至约8,000,000、约600,000至约7,000,000、约600,000至约6,000,000、约600,000至约5,000,000、约600,000至约4,000,000、约600,000至约3,000,000、约600,000至约2,000,000、约600,000至约1,000,000、约600,000至约800,000、约800,000至约10,000,000、约800,000至约9,000,000、约800,000至约8,000,000、约800,000至约7,000,000、约800,000至约6,000,000、约800,000至约5,000,000、约800,000至约4,000,000、约800,000至约3,000,000、约800,000至约2,000,000、约800,000至约1,000,000、约1,000,000至约10,000,000、约1,000,000至约9,000,000、约1,000,000至约8,000,000、约1,000,000至约7,000,000、约1,000,000至约6,000,000、约1,000,000至约5,000,000、约1,000,000至约4,000,000、约1,000,000至约3,000,000、约1,000,000至约2,000,000、约2,000,000至约10,000,000、约2,000,000至约9,000,000、约2,000,000至约8,000,000、约2,000,000至约7,000,000、约2,000,000至约6,000,000、约2,000,000至约5,000,000、约2,000,000至约4,000,000、约2,000,000至约3,000,000、约3,000,000至约10,000,000、约3,000,000至约9,000,000、约3,000,000至约8,000,000、约3,000,000至约7,000,000、约3,000,000至约6,000,000、约3,000,000至约5,000,000、约3,000,000至约4,000,000、约4,000,000至约10,000,000、约4,000,000至约9,000,000、约4,000,000至约8,000,000、约4,000,000至约7,000,000、约4,000,000至约6,000,000、约4,000,000至约5,000,000、约5,000,000至约10,000,000、约5,000,000至约9,000,000、约5,000,000至约8,000,000、约5,000,000至约7,000,000、约5,000,000至约6,000,000、约6,000,000至约10,000,000、约6,000,000至约9,000,000、约6,000,000至约8,000,000、约6,000,000至约7,000,000、约7,000,000至约10,000,000、约7,000,000至约9,000,000、约7,000,000至约8,000,000、约8,000,000至约10,000,000、约8,000,000至约9,000,000或约9,000,000至约10,000,000个MET。
短语“抗原密度”意指存在于靶哺乳动物细胞表面上的MET的数目或存在于特定类型的靶哺乳动物细胞群体的表面上的MET的平均数目。“抗原密度”可以使用例如Quantibright珠粒试剂盒或放射性标记(例如，BD Biosciences PE藻红蛋白荧光定量试剂盒，目录号340495)来测量。
短语“氨基酸被组氨酸取代”意指参考多肽序列中不是组氨酸的氨基酸残基被组氨酸取代。本文描述了用组氨酸取代参考多肽中的氨基酸残基的非限制性方法。本领域中已知用组氨酸取代参考多肽中的氨基酸残基的另外的方法。
短语“氨基酸被丙氨酸取代”意指参考多肽序列中是组氨酸的氨基酸残基被丙氨酸取代。本文描述了用丙氨酸取代参考多肽中的组氨酸的非限制性方法。本领域中已知用丙氨酸取代参考多肽中的组氨酸的另外的方法。
除非另有定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域普通技术人员所通常理解的相同含义。本文描述了用于在本发明中使用的方法和材料；也可以使用本领域已知的其它合适的方法和材料。材料、方法和实例仅仅是说明性的，而不意图进行限制。本文提及的全部出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献均全文以引用方式并入。在发生冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。
从以下详细描述和图看，以及从权利要求看，本发明的其它特征和优点将显而易见。
附图说明
图1A-C：依玛妥珠单抗和P3D12的组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体在Detroit 562细胞中的内化和内溶酶体递送。使用Incucyte Human FabFluor-pH红色抗体标记试剂，在指定的时间点和ABPC的最终浓度下，测定MYT4826(依玛妥珠单抗)和MYT4325(P3D12)、重链组合组氨酸扫描变体和丙氨酸扫描变体在Detroit 562细胞上的内化。内化和内溶酶体递送的增加倍数由上述各变体的数字指示。所有变体都包含TH和YTE取代形式。
图2：通过生物膜干涉技术测定的特立妥珠单抗的组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体与MET的结合。MYT4953重链组合组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体捕获在抗人Fc生物传感器上并且在pH 7.4下与MET缔合。解离在pH 7.4(黑色迹线)或pH 5.4(灰色迹线)下进行。所有变体都包含TH和YTE取代形式。
图3A至3C：通过生物膜干涉技术测定的P3D12的组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体与MET的结合。如图中所说明的，MYT4312、MYT4313和MYT4325重链组合组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体捕获在抗人Fc生物传感器上并且在低pH或高pH下与MET缔合。所有变体都包含TH和YTE取代形式。
图4A至4D：通过生物膜干涉技术测定的P3D12和依玛妥珠单抗的组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体与MET的结合。MYT5344、MYT5351、MYT5367和MYT4826、配对的重链和轻链组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体、组合轻链组氨酸和丙氨酸扫描变体或轻链组合组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体与重链组氨酸和丙氨酸扫描变体或重链组合组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体捕获在抗人Fc传感器上并且在pH 7.4下与MET缔合。解离在pH 7.4(黑色迹线)或pH 5.4(灰色迹线)下进行。所有变体都包含TH和YTE取代形式。
图5：列出了不同测试抗体以及可变重链序列和可变轻链序列的表。
图6：MYT变体的组氨酸扫描变体和丙氨酸扫描变体在Detroit 562细胞中的内化和内溶酶体递送。
使用Incucyte Human FabFluor-pH红色抗体标记试剂，在指定的时间点和抗体的最终浓度下，测定MYT4826、MYT4827、MYT4837、MYT4325、MYT5351、MYT4312、MYT5309、MYT4849、MYTH4888、MYT5344、MYT4313、MYT5367、MYT4942、MYT4953和MYT4940、重链组合组氨酸扫描变体和丙氨酸扫描变体在Detroit 562细胞上的内化。内化和内溶酶体递送的增加倍数由每个变体旁边的数字指示。所有变体都包含TH和YTE取代形式。
图7A-G：通过生物膜干涉技术测定的组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体与MET的结合
MYT4940、MYT4942、MYT4888、MYT4827、MYT4837、MYT4849和MYT5309、配对的重链和轻链组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体、组合轻链组氨酸和丙氨酸扫描变体或轻链组合组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体与重链组氨酸和丙氨酸扫描变体或重链组合组氨酸扫描和丙氨酸扫描变体捕获在抗人Fc传感器上并且在pH 7.4下与MET缔合。黑色迹线表示pH 7.4，红色迹线表示在7.4下的缔合以及然后在pH 6.4下的解离，并且橙色迹线表示pH 6.4。所有变体都包含TH和YTE取代形式。
具体实施方式
本文提供了能够特异性地结合MET或在靶哺乳动物细胞表面上呈递的MET的表位的抗体，其中：(a)在约4.0至约6.5的pH下的解离速率比在约7.0至约8.0的pH下的解离速率快；和/或(b)在约4.0至约6.5的pH下的解离常数(KD)比在约7.0至约8.0的pH下的KD大。在这些抗体的一些实例中，在所述抗体被所述靶哺乳动物细胞内化之后，所述抗体在所述靶哺乳动物细胞中降解。本文所描述的抗体中的任一种的一些实例可以进一步包含缀合的毒素、放射性同位素、药物或小分子(例如，荧光团或染料)。
还提供了能够特异性地结合MET或在靶哺乳动物细胞表面上呈递的MET的表位的抗体；以及缀合的毒素、放射性同位素、药物或小分子，其中：(a)在约4.0至约6.5的pH下的解离速率比在约7.0至约8.0的pH下的解离速率快；和/或在约4.0至约6.5的pH下的解离常数(KD)比在约7.0至约8.0的pH下的KD大；并且(b)包含所述抗体的组合物提供以下中的一者或多者(例如，两者或三者)：与包括相同量的对照抗体的组合物相比，所述靶哺乳动物细胞中的毒素释出增加(例如，可检测到的增加)；与包括相同量的对照抗体的组合物相比，靶哺乳动物细胞杀伤增加(例如，可检测到的增加)；以及与包括相同量的对照抗体的组合物相比，所述靶哺乳动物细胞中的内溶酶体递送增加(例如，可检测到的增加)。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述抗体包括特立妥珠单抗的重链可变结构域和轻链可变结构域和或特立妥珠单抗的重链CH1-CH2-CH3结构域和/或CL结构域中的更多个取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述抗体包含依玛妥珠单抗的重链可变结构域和轻链可变结构域以及依玛妥珠单抗的重CH1-CH2-CH3结构域和/或CL结构域中的一个或更多个氨基酸取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述抗体包含P3D12抗cMET的重链可变结构域和轻链可变结构域以及P3D12-cMet的重CH1-CH2-CH3结构域和/或CL结构域中的一个或更多个氨基酸取代。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述抗体包括(a)选自以下的组的重链可变结构域和轻链可变结构域：(i)分别为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；(ii)分别为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；(iii)分别为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；(iv)分别为SEQID NO:11和SEQ ID NO:12；(v)分别为SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；(vi)分别为SEQ IDNO:15和SEQ ID NO:16；(vii)分别为SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；(viii)分别为SEQ IDNO:19和SEQ ID NO:20；(ix)分别为SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；(x)分别为SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；(xi)分别为SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；(xii)分别为SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；(xiii)分别为SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；(xiv)分别为SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；(xv)分别为SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；以及(b)SEQ ID NO:155或SEQID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列，所述序列包括以下中的一者或多者：(i)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；(ii)在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；(iii)在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；(iv)在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代；和/或SEQ ID NO:157的轻链CL序列，所述序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ IDNO:43和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ IDNO:59和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ IDNO:139和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:124和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:148和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:141和SEQ IDNO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:42；(ii)分别为SEQ IDNO:43和SEQ ID NO:50；(iii)分别为SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:58；(iv)分别为SEQ IDNO:59和SEQ ID NO:66；(v)分别为SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:74；(vi)分别为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:82；(vii)分别为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:90；(viii)分别为SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:98；(ix)分别为SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:106；(x)分别为SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:114；(xi)分别为SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:122；(xii)分别为SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:130；(xiii)分别为SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:138；(xiv)分别为SEQ IDNO:139和SEQ ID NO:146；或(xv)分别为SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:154。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ IDNO:36和SEQ ID NO:42；(ii)分别为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:50；(iii)分别为SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:58；(iv)分别为SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:66；(v)分别为SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:74；(vi)分别为SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:82；(vii)分别为SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:90；(viii)分别为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:98；(ix)分别为SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:106；(x)分别为SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:114；(xi)分别为SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:122；(xii)分别为SEQ ID NO:124和SEQ ID NO:130；(xiii)分别为SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:138；(xiv)分别为SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:146；或(xv)分别为SEQ ID NO:148和SEQ ID NO:154。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:42；(ii)分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:50；(iii)分别为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:58；(iv)分别为SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:66；(v)分别为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:74；(vi)分别为SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:82；(vii)分别为SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:90；(viii)分别为SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98；(ix)分别为SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:106；(x)分别为SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:114；(xi)分别为SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:122；(xii)分别为SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:130；(xiii)分别为SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:138；(xiv)分别为SEQ ID NO:141和SEQ IDNO:146；或(xv)分别为SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:154。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQID NO:70和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ IDNO:86和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ IDNO:102和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ IDNO:118和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQID NO:134和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:142和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:150和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:143和SEQ IDNO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:151和SEQ ID NO:153。
在本文所描述的抗体中的任一种的任一种的一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:40和SEQID NO:41；(ii)分别为SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49；(iii)分别为SEQ ID NO:56和SEQ IDNO:57；(iv)分别为SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65；(v)分别为SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73；(vi)分别为SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81；(vii)分别为SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89；(viii)分别为SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97；(ix)分别为SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105；(x)分别为SEQ ID NO:112和SEQ ID NO:113；(xi)分别为SEQ ID NO:120和SEQ ID NO:121；(xii)分别为SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:129；(xiii)分别为SEQ ID NO:136和SEQ IDNO:137；(xiv)分别为SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145；或(xv)分别为SEQ ID NO:152和SEQID NO:153。
在一些实施例中，(a)所述抗体在约4.0至约6.5的pH下的解离速率不比在约7.0至约8.0的pH下的解离速率快；或(b)所述抗体在约4.0至约6.5的pH下的解离常数(KD)比在约7.0至约8.0的pH下的KD大。
在此类实例中，所述抗体包括(a)选自由以下组成的组的重链可变结构域和轻链可变结构域：(i)分别为SEQ ID NO:159和SEQ ID NO:160；(ii)分别为SEQ ID NO:161和SEQID NO:162；(iii)分别为SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164；(b)SEQ ID NO:155或SEQ IDNO:189的重链CH1-CH2-CH3序列，所述序列包括以下取代中的一者或多者：(i)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及氨基酸在位置106和108处的苏氨酸缺失；(ii)在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；(iii)在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及(iv)在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代；和/或SEQ ID NO:157的轻链CL序列，所述序列包括在位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
在此类实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失。在一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:165和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:187。
在一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重CH1-CH2-CH3序列包括：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代。在一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:166和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:174和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ IDNO:182和SEQ ID NO:187。
在一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:165和SEQ ID NO:172；(ii)分别为SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:180；或(iii)分别为SEQ ID NO:181和SEQ IDNO:188。
在一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；并且所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ IDNO:166和SEQ ID NO:172；(ii)分别为SEQ ID NO:174和SEQ ID NO:180；或(iii)分别为SEQID NO:182和SEQ ID NO:188。
在一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；并且所述SEQID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。在一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:167和SEQ ID NO:172；(ii)分别为SEQID NO:175和SEQ ID NO:180；或(iii)分别为SEQ ID NO:183和SEQ ID NO:188。
在此类实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在此类实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:168和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:176和SEQID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:184和SEQ ID NO:187。
在一些实例中，SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:169和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:177和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:185和SEQ ID NO:187。
在一些实例中，所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；以及在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。在一些实例中，重链序列和轻链序列：(i)分别为SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:171；(ii)分别为SEQ ID NO:178和SEQ ID NO:179；或(iii)分别为SEQ ID NO:186和SEQ ID NO:187。
本文还提供了包含本文所描述的抗体中的任一种的药物组合物。本文还提供了治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，与包含相同量的对照抗体(例如，本文所描述的示例性对照抗体中的任一种)的组合物相比，包含抗体(例如，本文所描述的抗体中的任一种)的组合物可以提供靶哺乳动物细胞(例如，本文所描述的靶哺乳动物细胞中的任一种)中毒素释放的增加(例如，可检测的增加)(例如，至少1％的增加、至少2％的增加、至少5％的增加、至少10％的增加、至少15％的增加、至少20％的增加、至少25％的增加、至少30％的增加、至少35％的增加、至少40％的增加、至少45％的增加、至少50％的增加、至少55％的增加、至少60％的增加、至少65％的增加、至少70％的增加、至少75％的增加、至少80％的增加、至少85％的增加、至少90％的增加、至少95％的增加、至少100％的增加、至少120％的增加、至少140％的增加、至少160％的增加、至少180％的增加、至少200％的增加、至少250％的增加、至少300％的增加、至少350％的增加、至少400％的增加、至少450％的增加、至少500％的增加、至少1,000％的增加、至少2,000％的增加、至少3,000％的增加、至少4,000％的增加、至少5,000％的增加、至少6,000％的增加、至少7,000％的增加、至少8,000％的增加、至少9,000％的增加、或至少10,000％的增加、或约1％的增加至约10,000％的增加、约1％的增加至约9,000％的增加、约1％的增加至约8,000％的增加、约1％的增加至约7,000％的增加、约1％的增加至约6,000％的增加、约1％的增加至约5,000％的增加、约1％的增加至约4,000％的增加、约1％的增加至约3,000％的增加、约1％的增加至约2,000％的增加、约1％的增加至约1,000％的增加、约1％的增加至约500％的增加、约1％的增加至约450％的增加、约1％的增加至约400％的增加、约1％的增加至约350％的增加、约1％的增加至约300％的增加、约1％的增加至约250％的增加、约1％的增加至约200％的增加、约1％的增加至约180％的增加、约1％的增加至约160％的增加、约1％的增加至约140％的增加、约1％的增加至约120％的增加、约1％的增加至约100％的增加、约1％的增加至约95％的增加、约1％的增加至约90％的增加、约1％的增加至约85％的增加、约1％的增加至约80％的增加、约1％的增加至约75％的增加、约1％的增加至约70％的增加、约1％的增加至约65％的增加、约1％的增加至约60％的增加、约1％的增加至约55％的增加、约1％的增加至约50％的增加、约1％的增加至约45％的增加、约1％的增加至约40％的增加、约1％的增加至约35％的增加、约1％的增加至约25％的增加、约1％的增加至约20％的增加、约1％的增加至约15％的增加、约1％的增加至约10％的增加、约1％的增加至约5％的增加、约2％的增加至约10,000％的增加、约2％的增加至约9,000％的增加、约2％的增加至约8,000％的增加、约2％的增加至约7,000％的增加、约2％的增加至约6,000％的增加、约2％的增加至约5,000％的增加、约2％的增加至约4,000％的增加、约2％的增加至约3,000％的增加、约2％的增加至约2,000％的增加、约2％的增加至约1,000％的增加、约2％的增加至约500％的增加、约2％的增加至约450％的增加、约2％的增加至约400％的增加、约2％的增加至约350％的增加、约2％的增加至约300％的增加、约2％的增加至约250％的增加、约2％的增加至约200％的增加、约2％的增加至约180％的增加、约2％的增加至约160％的增加、约2％的增加至约140％的增加、约2％的增加至约120％的增加、约2％的增加至约100％的增加、约2％的增加至约95％的增加、约2％的增加至约90％的增加、约2％的增加至约85％的增加、约2％的增加至约80％的增加、约2％的增加至约75％的增加、约2％的增加至约70％的增加、约2％的增加至约65％的增加、约2％的增加至约60％的增加、约2％的增加至约55％的增加、约2％的增加至约50％的增加、约2％的增加至约45％的增加、约2％的增加至约40％的增加、约2％的增加至约35％的增加、约2％的增加至约25％的增加、约2％的增加至约20％的增加、约2％的增加至约15％的增加、约2％的增加至约10％的增加、约2％的增加至约5％的增加、约5％的增加至约10,000％
的增加、约5％的增加至约9,000％的增加、约5％的增加至约8,000％的增加、约5％的增加至约7,000％的增加、约5％的增加至约6,000％的增加、约5％的增加至约5,000％的增加、约5％的增加至约4,000％的增加、约5％的增加至约3,000％的增加、约5％的增加至约2,000％的增加、约5％的增加至约1,000％的增加、约5％的增加至约500％的增加、约5％的增加至约450％的增加、约5％的增加至约400％的增加、约5％的增加至约350％的增加、约5％的增加至约300％的增加、约5％的增加至约250％的增加、约5％的增加至约200％的增加、约5％的增加至约180％的增加、约5％的增加至约160％的增加、约5％的增加至约140％的增加、约5％的增加至约120％的增加、约5％的增加至约100％的增加、约5％的增加至约95％的增加、约5％的增加至约90％的增加、约5％的增加至约85％的增加、约5％的增加至约80％的增加、约5％的增加至约75％的增加、约5％的增加至约70％的增加、约5％的增加至约65％的增加、约5％的增加至约60％的增加、约5％的增加至约55％的增加、约5％的增加至约50％的增加、约5％的增加至约45％的增加、约5％的增加至约40％的增加、约5％的增加至约35％的增加、约5％的增加至约25％的增加、约5％的增加至约20％的增加、约5％的增加至约15％的增加、约5％的增加至约10％的增加、约10％的增加至约10,000％的增加、约10％的增加至约9,000％的增加、约10％的增加至约8,000％的增加、约10％的增加至约7,000％的增加、约10％的增加至约6,000％的增加、约10％的增加至约5,000％的增加、约10％的增加至约4,000％的增加、约10％的增加至约3,000％的增加、约10％的增加至约2,000％的增加、约10％的增加至约1,000％的增加、约10％的增加至约500％的增加、约10％的增加至约450％的增加、约10％的增加至约400％的增加、约10％的增加至约350％的增加、约10％的增加至约300％的增加、约10％的增加至约250％的增加、约10％的增加至约200％的增加、约10％的增加至约180％的增加、约10％的增加至约160％的增加、约10％的增加至约140％的增加、约10％的增加至约120％的增加、约10％的增加至约100％的增加、约10％的增加至约95％的增加、约10％的增加至约90％的增加、约10％的增加至约85％的增加、约10％的增加至约80％的增加、约10％的增加至约75％的增加、约10％的增加至约70％的增加、约10％的增加至约65％的增加、约10％的增加至约60％的增加、约10％的增加至约55％的增加、约10％的增加至约50％的增加、约10％的增加至约45％的增加、约10％的增加至约40％的增加、约10％的增加至约35％的增加、约10％的增加至约30％的增加、约10％的增加至约25％的增加、约10％的增加至约20％的增加、约10％的增加至约15％的增加、约15％的增加至约10,000％的增加、约15％的增加至约9,000％的增加、约15％的增加至约8,000％的增加、约15％的增加至约7,000％的增加、约15％的增加至约6,000％的增加、约15％的增加至约5,000％的增加、约15％的增加至约4,000％的增加、约15％的增加至约3,000％的增加、约15％的增加至约2,000％的增加、约15％的增加至约1,000％的增加、约15％的增加至约500％的增加、约15％的增加至约450％的增加、约15％的增加至约400％的增加、约15％的增加至约350％的增加、约15％的增加至约300％的增加、约15％的增加至约250％的增加、约15％的增加至约200％的增加、约15％的增加至约180％的增加、约15％的增加至约160％的增加、约15％的增加至约140％的增加、约15％的增加至约120％的增加、约15％的增加至约100％的增加、约15％的增加至约95％的增加、约15％的增加至约90％的增加、约15％的增加至约85％的增加、约15％的增加至约80％的增加、约15％的增加至约75％的增加、约15％的增加至约70％的增加、约15％的增加至约65％的增加、约15％的增加至约60％的增加、约15％的增加至约55％的增加、约15％的增加至约50％的增加、约15％的增加至约45％的增加、约15％的增加至约40％的增加、约15％的增加至约35％的增加、约15％的增加至约30％的增加、约15％的增加至约25％的增加、约15％的增加至约20％的增加、约20％的增加至约10,000％的增加、约20％的增加至约9,000％的增加、约20％的增加至约8,000％的增加、约20％的增加至约7,000％的增加、约20％的增加至约6,000％的增加、约20％的增加至约5,000％的增加、约20％的增加至约4,000％的增加、约20％的增加至约3,000％的增加、约20％的增加至约2,000％的增加、约20％的增加至约1,000％的增加、约20％的增加至约500％的增加、约20％的增加至约450％的增加、约20％的增加至约400％的增加、约20％的增加至约350％的增加、约20％的增加至约300％的增加、约20％的增加至约250％的增加、约20％的增加至约200％的增加、约20％的增加至约180％的增加、约20％的增加至约160％的增加、约20％的增加至约140％的增加、约20％的增加至约120％的增加、约20％的增加至约100％的增加、约20％的增加至约95％的增加、约20％的增加至约90％的增加、约20％的增加至约85％的增加、约20％的增加至约80％的增加、约20％的增加至约75％的增加、约20％的增加至约70％的增加、约20％的增加至约65％的增加、约20％的增加至约60％的增加、约20％的增加至约55％的增加、约20％的增加至约50％的增加、约20％的增加至约45％的增加、约20％的增加至约40％的增加、约20％的增加至约35％的增加、约20％的增加至约30％的增加、约20％的增加至约25％的增加、约25％的增加至约10,000％的增加、约25％的增加至约9,000％的增加、约25％的增加至约8,000％的增加、约25％的增加至约7,000％的增加、约25％的增加至约6,000％的增加、约25％的增加至约5,000％的增加、约25％的增加至约4,000％的增加、约25％的增加至约3,000％的增加、约25％的增加至约2,000％的增加、约25％的增加至约1,000％的增加、约25％的增加至约500％的增加、约25％的增加至约450％的增加、约25％的增加至约400％的增加、约25％的增加至约350％的增加、约25％的增加至约300％的增加、约25％的增加至约250％的增加、约25％的增加至约200％的增加、约25％的增加至约180％的增加、约25％的增加至约160％的增加、约25％的增加至约140％的增加、约25％的增加至约120％的增加、约25％的增加至约100％的增加、约25％的增加至约95％的增加、约25％的增加至约90％的增加、约25％的增加至约85％的增加、约25％的增加至约80％的增加、约25％的增加至约75％的增加、约25％的增加至约70％的增加、约25％的增加至约65％的增加、约25％的增加至约60％的增加、约25％的增加至约55％的增加、约25％的增加至约50％的增加、约25％的增加至约45％的增加、约25％的增加至约40％的增加、约25％的增加至约35％的增加、约25％的增加至约30％的增加、约30％的增加至约10,000％的增加、约30％的增加至约9,000％的增加、约30％的增加至约8,000％的增加、约30％的增加至约7,000％的增加、约30％的增加至约6,000％的增加、约30％的增加至约5,000％的增加、约30％的增加至约4,000％的增加、约30％的增加至约3,000％的增加、约30％的增加至约2,000％的增加、约30％的增加至约1,000％的增加、约30％的增加至约500％的增加、约30％的增加至约450％的增加、约30％的增加至约400％的增加、约30％的增加至约350％的增加、约30％的增加至约300％的增加、约30％的增加至约250％的增加、约30％的增加至约200％的增加、约30％的增加至约180％的增加、约30％的增加至约160％的增加、约30％的增加至约140％的增加、约30％的增加至约120％的增加、约30％的增加至约100％的增加、约30％的增加至约95％的增加、约30％的增加至约90％的增加、约30％的增加至约85％的增加、约30％的增加至约80％的增加、约30％的增加至约75％的增加、约30％的增加至约70％的增加、约30％的增加至约65％的增加、约30％的增加至约60％的增加、约30％的增加至约55％的增加、约30％的增加至约50％的增加、约30％的增加至约45％的增加、约30％的增加至约40％的增加、约30％的增加至约35％的增加、约35％的增加至约10,000％的增加、约35％的增加至约9,000％的增加、约35％的增加至约8,000％的增加、约35％的增加至约7,000％的增加、约35％的增加至约6,000％的增加、约35％的增加至约5,000％的增加、约35％的增加至约4,000％的增加、约35％的增加至约3,000％的增加、约35％的增加至约2,000％的增加、约35％的增加至约1,000％的增加、约35％的增加至约500％的增加、约35％的增加至约450％的增加、约35％的增加至约400％的增加、约35％的增加至约350％的增加、约35％的增加至约300％的增加、约35％的增加至约250％的增加、约35％的增加至约200％的增加、约35％的增加至约180％的增加、约35％的增加至约160％的增加、约35％的增加至约140％的增加、约35％的增加至约120％的增加、约35％的增加至约100％的增加、约35％的增加至约95％的增加、约35％的增加至约90％的增加、约35％的增加至约85％的增加、约35％的增加至约80％的增加、约35％的增加至约75％的增加、约35％的增加至约70％的增加、约35％的增加至约65％的增加、约35％的增加至约60％的增加、约35％的增加至约55％的增加、约35％的增加至约50％的增加、约35％的增加至约45％的增加、约35％的增加至约40％的增加、约40％的增加至约10,000％的增加、约40％的增加至约9,000％的增加、约40％的增加至约8,000％的增加、约40％的增加至约7,000％的增加、约40％的增加至约6,000％的增加、约40％的增加至约5,000％的增加、约40％的增加至约4,000％的增加、约40％的增加至约3,000％的增加、约40％的增加至约2,000％的增加、约40％的增加至约1,000％的增加、约40％的增加至约500％的增加、约40％的增加至约450％的增加、约40％的增加至约400％的增加、约40％的增加至约350％的增加、约40％的增加至约300％的增加、约40％的增加至约250％的增加、约40％的增加至约200％的增加、约40％的增加至约180％的增加、约40％的增加至约160％的增加、约40％的增加至约140％的增加、约40％的增加至约120％的增加、约40％的增加至约100％的增加、约40％的增加至约95％的增加、约40％的增加至约90％的增加、约40％的增加至约85％的增加、约40％的增加至约80％的增加、约40％的增加至约75％的增加、约40％的增加至约70％的增加、约40％的增加至约65％的增加、约40％的增加至约60％的增加、约40％的增加至约55％的增加、约40％的增加至约50％的增加、约40％的增加至约45％的增加、约45％的增加至约10,000％的增加、约45％的增加至约9,000％的增加、约45％的增加至约8,000％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在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，与包含相同量的对照抗体(例如，本文所描述的示例性对照抗体中的任一种)的组合物相比，包含抗体(例如，本文所描述的抗体中的任一种)的组合物可以提供靶哺乳动物细胞(例如，本文所描述的靶哺乳动物细胞中的任一种)中毒素释放的增加(例如，可检测到的增加)(例如，至少0.1倍的增加、至少0.2倍的增加、至少0.3倍的增加、至少0.4倍的增加、至少0.5倍的增加、至少0.6倍的增加、至少0.7倍的增加、至少0.8倍的增加、至少0.9倍的增加、至少1.0倍的增加、至少1.2倍的增加、至少1.4倍的增加、至少1.5倍的增加、至少1.6倍的增加、至少1.8倍的增加、至少2.0倍的增加、至少2.2倍的增加、至少2.4倍的增加、至少2.5倍的增加、至少2.6倍的增加、至少2.8倍的增加、至少3.0倍的增加、至少3.5倍的增加、至少4.0倍的增加、至少4.5倍的增加、至少5.0倍的增加、至少5.5倍的增加、至少6.0倍的增加、至少6.5倍的增加、至少7.0倍的增加、至少7.5倍的增加、至少8.0倍的增加、至少8.5倍的增加、至少9.0倍的增加、至少9.5倍的增加、至少10倍的增加、至少15倍的增加、至少20倍的增加、至少25倍的增加、至少30倍的增加、至少35倍的增加、至少40倍的增加、至少45倍的增加、至少50倍的增加、至少55倍的增加、至少60倍的增加、至少65倍的增加、至少70倍的增加、至少75倍的增加、至少80倍的增加、至少85倍的增加、至少90倍的增加、至少95倍的增加、或至少100倍的增加、或约0.1倍的增加至约100倍的增加、约0.1倍的增加至约90倍的增加、约0.1倍的增加至约80倍的增加、约0.1倍的增加至约70倍的增加、约0.1倍的增加至约60倍的增加、约0.1倍的增加至约50倍的增加、约0.1倍的增加至约40倍的增加、约0.1倍的增加至约30倍的增加、约0.1倍的增加至约20倍的增加、约0.1倍的增加至约10倍的增加、约0.1倍的增加至约9.5倍的增加、约0.1倍的增加至约9.0倍的增加、约0.1倍的增加至约8.5倍的增加、约0.1倍的增加至约8.0倍的增加、约0.1倍的增加至约7.5倍的增加、约0.1倍的增加至约7.0倍的增加、约0.1倍的增加至约6.5倍的增加、约0.1倍的增加至约6.0倍的增加、约0.1倍的增加至约5.5倍的增加、约0.1倍的增加至约5.0倍的增加、约0.1倍的增加至约4.5倍的增加、约0.1倍的增加至约4.0倍的增加、约0.1倍的增加至约3.5倍的增加、约0.1倍的增加至约3.0倍的增加、约0.1倍的增加至约2.8倍的增加、约0.1倍的增加至约2.6倍的增加、约0.1倍的增加至约2.5倍的增加、约0.1倍的增加至约2.4倍的增加、约0.1倍的增加至约2.2倍的增加、约0.1倍的增加至约2.0倍的增加、约0.1倍的增加至约1.8倍的增加、约0.1倍的增加至约1.6倍的增加、约0.1倍的增加至约1.5倍的增加、约0.1倍的增加至约1.4倍的增加、约0.1倍的增加至约1.2倍的增加、约0.1倍的增加至约1.0倍的增加、约0.1倍的增加至约0.9倍的增加、约0.1倍的增加至约0.8倍的增加、约0.1倍的增加至约0.7倍的增加、约0.1倍的增加至约0.6倍的增加、约0.1倍的增加至约0.5倍的增加、约0.1倍的增加至约0.4倍的增加、约0.1倍的增加至约0.3倍的增加、约0.2倍的增加至约100倍的增加、约0.2倍的增加至约90倍的增加、约0.2倍的增加至约80倍的增加、约0.2倍的增加至约70倍的增加、约0.2倍的增加至约60倍的增加、约0.2倍的增加至约50倍的增加、约0.2倍的增加至约40倍的增加、约0.2倍的增加至约30倍的增加、约0.2倍的增加至约20倍的增加、约0.2倍的增加至约10倍的增加、约0.2倍的增加至约9.5倍的增加、约0.2倍的增加至约9.0倍的增加、约0.2倍的增加至约8.5倍的增加、约0.2倍的增加至约8.0倍的增加、约0.2倍的增加至约7.5倍的增加、约0.2倍的增加至约7.0倍的增加、约0.2倍的增加至约6.5倍的增加、约0.2倍的增加至约6.0倍的增加、约0.2倍的增加至约5.5倍的增加、约0.2倍的增加至约5.0倍的增加、约0.2倍的增加至约4.5倍的增加、约0.2倍的增加至约4.0倍的增加、约0.2倍的增加至约3.5倍的增加、约0.2倍的增加至约3.0倍的增加、约0.2倍的增加至约2.8倍的增加、约0.2倍的增加至约2.6倍的增加、约0.2倍的增加至约2.5倍的增加、约0.2倍的增加至约2.4倍的增加、约0.2倍的增加至约2.2倍的增加、约0.2倍的增加至约2.0倍的增加、约0.2倍的增加至约1.8倍的增加、约0.2倍的增加至约1.6倍的增加、约0.2倍的增加至约1.5倍的增加、约0.2倍的增加至约1.4倍的增加、约0.2倍的增加至约1.2倍的增加、约0.2倍的增加至约1.0倍的增加、约0.2倍的增加至约0.9倍的增加、约0.2倍的增加至约0.8倍的增加、约0.2倍的增加至约0.7倍的增加、约0.2倍的增加至约0.6倍的增加、约0.2倍的增加至约0.5倍的增加、约0.2倍的增加至约0.4倍的增加、约0.3倍的增加至约100倍的增加、约0.3倍的增加至约90倍的增加、约0.3倍的增加至约80倍的增加、约0.3倍的增加至约70倍的增加、约0.3倍的增加至约60倍的增加、约0.3倍的增加至约50倍的增加、约0.3倍的增加至约40倍的增加、约0.3倍的增加至约30倍的增加、约0.3倍的增加至约20倍的增加、约0.3倍的增加至约10倍的增加、约0.3倍的增加至约9.5倍的增加、约0.3倍的增加至约9.0倍的增加、约0.3倍的增加至约8.5倍的增加、约0.3倍的增加至约8.0倍的增加、约0.3倍的增加至约7.5倍的增加、约0.3倍的增加至约7.0倍的增加、约0.3倍的增加至约6.5倍的增加、约0.3倍的增加至约6.0倍的增加、约0.3倍的增加至约5.5倍的增加、约0.3倍的增加至约5.0倍的增加、约0.3倍的增加至约4.5倍的增加、约0.3倍的增加至约4.0倍的增加、约0.3倍的增加至约3.5倍的增加、约0.3倍的增加至约3.0倍的增加、约0.3倍的增加至约2.8倍的增加、约0.3倍的增加至约2.6倍的增加、约0.3倍的增加至约2.5倍的增加、约0.3倍的增加至约2.4倍的增加、约0.3倍的增加至约2.2倍的增加、约0.3倍的增加至约2.0倍的增加、约0.3倍的增加至约1.8倍的增加、约0.3倍的增加至约1.6倍的增加、约0.3倍的增加至约1.5倍的增加、约0.3倍的增加至约1.4倍的增加、约0.3倍的增加至约1.2倍的增加、约0.3倍的增加至约1.0倍的增加、约0.3倍的增加至约0.9倍的增加、约0.3倍的增加至约0.8倍的增加、约0.3倍的增加至约0.7倍的增加、约0.3倍的增加至约0.6倍的增加、约0.3倍的增加至约0.5倍的增加、约0.4倍的增加至约100倍的增加、约0.4倍的增加至约90倍的增加、约0.4倍的增加至约80倍的增加、约0.4倍的增加至约70倍的增加、约0.4倍的增加至约60倍的增加、约0.4倍的增加至约50倍的增加、约0.4倍的增加至约40倍的增加、约0.4倍的增加至约30倍的增加、约0.4倍的增加至约20倍的增加、约0.4倍的增加至约10倍的增加、约0.4倍的增加至约9.5倍的增加、约0.4倍的增加至约9.0倍的增加、约0.4倍的增加至约8.5倍的增加、约0.4倍的增加至约8.0倍的增加、约0.4倍的增加至约7.5倍的增加、约0.4倍的增加至约7.0倍的增加、约0.4倍的增加至约6.5倍的增加、约0.4倍的增加至约6.0倍的增加、约0.4倍的增加至约5.5倍的增加、约0.4倍的增加至约5.0倍的增加、约0.4倍的增加至约4.5倍的增加、约0.4倍的增加至约4.0倍的增加、约0.4倍的增加至约3.5倍的增加、约0.4倍的增加至约3.0倍的增加、约0.4倍的增加至约2.8倍的增加、约0.4倍的增加至约2.6倍的增加、约0.4倍的增加至约2.5倍的增加、约0.4倍的增加至约2.4倍的增加、约0.4倍的增加至约2.2倍的增加、约0.4倍的增加至约2.0倍的增加、约0.4倍的增加至约1.8倍的增加、约0.4倍的增加至约1.6倍的增加、约0.4倍的增加至约1.5倍的增加、约0.4倍的增加至约1.4倍的增加、约0.4倍的增加至约1.2倍的增加、约0.4倍的增加至约1.0倍的增加、约0.4倍的增加至约0.9倍的增加、约0.4倍的增加至约0.8倍的增加、约0.4倍的增加至约0.7倍的增加、约0.4倍的增加至约0.6倍的增加、约0.5倍的增加至约100倍的增加、约0.5倍的增加至约90倍的增加、约0.5倍的增加至约80倍的增加、约0.5倍的增加至约70倍的增加、约0.5倍的增加至约60倍的增加、约0.5倍的增加至约50倍的增加、约0.5倍的增加至约40倍的增加、约0.5倍的增加至约30倍的增加、约0.5倍的增加至约20倍的增加、约0.5倍的增加至约10倍的增加、约0.5倍的增加至约9.5倍的增加、约0.5倍的增加至约9.0倍的增加、约0.5倍的增加至约8.5倍的增加、约0.5倍的增加至约8.0倍的增加、约0.5倍的增加至约7.5倍的增加、约0.5倍的增加至约7.0倍的增加、约0.5倍的增加至约6.5倍的增加、约0.5倍的增加至约6.0倍的增加、约0.5倍的增加至约5.5倍的增加、约0.5倍的增加至约5.0倍的增加、约0.5倍的增加至约4.5倍的增加、约0.5倍的增加至约4.0倍的增加、约0.5倍的增加至约3.5倍的增加、约0.5倍的增加至约3.0倍的增加、约0.5倍的增加至约2.8倍的增加、约0.5倍的增加至约2.6倍的增加、约0.5倍的增加至约2.5倍的增加、约0.5倍的增加至约2.4倍的增加、约0.5倍的增加至约2.2倍的增加、约0.5倍的增加至约2.0倍的增加、约0.5倍的增加至约1.8倍的增加、约0.5倍的增加至约1.6倍的增加、约0.5倍的增加至约1.5倍的增加、约0.5倍的增加至约1.4倍的增加、约0.5倍的增加至约1.2倍的增加、约0.5倍的增加至约1.0倍的增加、约0.5倍的增加至约0.9倍的增加、约0.5倍的增加至约0.8倍的增加、约0.5倍的增加至约0.7倍的增加、约0.6倍的增加至约100倍的增加、约0.6倍的增加至约90倍的增加、约0.6倍的增加至约80倍的增加、约0.6倍的增加至约70倍的增加、约0.6倍的增加至约60倍的增加、约0.6倍的增加至约50倍的增加、约0.6倍的增加至约40倍的增加、约0.6倍的增加至约30倍的增加、约0.6倍的增加至约20倍的增加、约0.6倍的增加至约10倍的增加、约0.6倍的增加至约9.5倍的增加、约0.6倍的增加至约9.0倍的增加、约0.6倍的增加至约8.5倍的增加、约0.6倍的增加至约8.0倍的增加、约0.6倍的增加至约7.5倍的增加、约0.6倍的增加至约7.0倍的增加、约0.6倍的增加至约6.5倍的增加、约0.6倍的增加至约6.0倍的增加、约0.6倍的增加至约5.5倍的增加、约0.6倍的增加至约5.0倍的增加、约0.6倍的增加至约4.5倍的增加、约0.6倍的增加至约4.0倍的增加、约0.6倍的增加至约3.5倍的增加、约0.6倍的增加至约3.0倍的增加、约0.6倍的增加至约2.8倍的增加、约0.6倍的增加至约2.6倍的增加、约0.6倍的增加至约2.5倍的增加、约0.6倍的增加至约2.4倍的增加、约0.6倍的增加至约2.2倍的增加、约0.6倍的增加至约2.0倍的增加、约0.6倍的增加至约1.8倍的增加、约0.6倍的增加至约1.6倍的增加、约0.6倍的增加至约1.5倍的增加、约0.6倍的增加至约1.4倍的增加、约0.6倍的增加至约1.2倍的增加、约0.6倍的增加至约1.0倍的增加、约0.6倍的增加至约0.9倍的增加、约0.6倍的增加至约0.8倍的增加、约0.7倍的增加至约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增加、约2.2倍的增加至约5.0倍的增加、约2.2倍的增加至约4.5倍的增加、约2.2倍的增加至约4.0倍的增加、约2.2倍的增加至约3.5倍的增加、约2.2倍的增加至约3.0倍的增加、约2.2倍的增加至约2.8倍的增加、约2.2倍的增加至约2.6倍的增加、约2.2倍的增加至约2.5倍的增加、约2.2倍的增加至约2.4倍的增加、约2.4倍的增加至约100倍的增加、约2.4倍的增加至约90倍的增加、约2.4倍的增加至约80倍的增加、约2.4倍的增加至约70倍的增加、约2.4倍的增加至约60倍的增加、约2.4倍的增加至约50倍的增加、约2.4倍的增加至约40倍的增加、约2.4倍的增加至约30倍的增加、约2.4倍的增加至约20倍的增加、约2.4倍的增加至约10倍的增加、约2.4倍的增加至约9.5倍的增加、约2.4倍的增加至约9.0倍的增加、约2.4倍的增加至约8.5倍的增加、约2.4倍的增加至约8.0倍的增加、约2.4倍的增加至约7.5倍的增加、约2.4倍的增加至约7.0倍的增加、约2.4倍的增加至约6.5倍的增加、约2.4倍的增加至约6.0倍的增加、约2.4倍的增加至约5.5倍的增加、约2.4倍的增加至约5.0倍的增加、约2.4倍的增加至约4.5倍的增加、约2.4倍的增加至约4.0倍的增加、约2.4倍的增加至约3.5倍的增加、约2.4倍的增加至约3.0倍的增加、约2.4倍的增加至约2.8倍的增加、约2.4倍的增加至约2.6倍的增加、约2.6倍的增加至约100倍的增加、约2.6倍的增加至约90倍的增加、约2.6倍的增加至约80倍的增加、约2.6倍的增加至约70倍的增加、约2.6倍的增加至约60倍的增加、约2.6倍的增加至约50倍的增加、约2.6倍的增加至约40倍的增加、约2.6倍的增加至约30倍的增加、约2.6倍的增加至约20倍的增加、约2.6倍的增加至约10倍的增加、约2.6倍的增加至约9.5倍的增加、约2.6倍的增加至约9.0倍的增加、约2.6倍的增加至约8.5倍的增加、约2.6倍的增加至约8.0倍的增加、约2.6倍的增加至约7.5倍的增加、约2.6倍的增加至约7.0倍的增加、约2.6倍的增加至约6.5倍的增加、约2.6倍的增加至约6.0倍的增加、约2.6倍的增加至约5.5倍的增加、约2.6倍的增加至约5.0倍的增加、约2.6倍的增加至约4.5倍的增加、约2.6倍的增加至约4.0倍的增加、约2.6倍的增加至约3.5倍的增加、约2.6倍的增加至约3.0倍的增加、约2.6倍的增加至约2.8倍的增加、约2.8倍的增加至约100倍的增加、约2.8倍的增加至约90倍的增加、约2.8倍的增加至约80倍的增加、约2.8倍的增加至约70倍的增加、约2.8倍的增加至约60倍的增加、约2.8倍的增加至约50倍的增加、约2.8倍的增加至约40倍的增加、约2.8倍的增加至约30倍的增加、约2.8倍的增加至约20倍的增加、约2.8倍的增加至约10倍的增加、约2.8倍的增加至约9.5倍的增加、约2.8倍的增加至约9.0倍的增加、约2.8倍的增加至约8.5倍的增加、约2.8倍的增加至约8.0倍的增加、约2.8倍的增加至约7.5倍的增加、约2.8倍的增加至约7.0倍的增加、约2.8倍的增加至约6.5倍的增加、约2.8倍的增加至约6.0倍的增加、约2.8倍的增加至约5.5倍的增加、约2.8倍的增加至约5.0倍的增加、约2.8倍的增加至约4.5倍的增加、约2.8倍的增加至约4.0倍的增加、约2.8倍的增加至约3.5倍的增加、约2.8倍的增加至约3.0倍的增加、约3.0倍的增加至约100倍的增加、约3.0倍的增加至约90倍的增加、约3.0倍的增加至约80倍的增加、约3.0倍的增加至约70倍的增加、约3.0倍的增加至约60倍的增加、约3.0倍的增加至约50倍的增加、约3.0倍的增加至约40倍的增加、约3.0倍的增加至约30倍的增加、约3.0倍的增加至约20倍的增加、约3.0倍的增加至约10倍的增加、约3.0倍的增加至约9.5倍的增加、约3.0倍的增加至约9.0倍的增加、约3.0倍的增加至约8.5倍的增加、约3.0倍的增加至约8.0倍的增加、约3.0倍的增加至约7.5倍的增加、约3.0倍的增加至约7.0倍的增加、约3.0倍的增加至约6.5倍的增加、约3.0倍的增加至约6.0倍的增加、约3.0倍的增加至约5.5倍的增加、约3.0倍的增加至约5.0倍的增加、约3.0倍的增加至约4.5倍的增加、约3.0倍的增加至约4.0倍的增加、约3.0倍的增加至约3.5倍的增加、约3.5倍的增加至约100倍的增加、约3.5倍的增加至约90倍的增加、约3.5倍的增加至约80倍的增加、约3.5倍的增加至约70倍的增加、约3.5倍的增加至约60倍的增加、约3.5倍的增加至约50倍的增加、约3.5倍的增加至约40倍的增加、约3.5倍的增加至约30倍的增加、约3.5倍的增加至约20倍的增加、约3.5倍的增加至约10倍的增加、约3.5倍的增加至约9.5倍的增加、约3.5倍的增加至约9.0倍的增加、约3.5倍的增加至约8.5倍的增加、约3.5倍的增加至约8.0倍的增加、约3.5倍的增加至约7.5倍的增加、约3.5倍的增加至约7.0倍的增加、约3.5倍的增加至约6.5倍的增加、约3.5倍的增加至约6.0倍的增加、约3.5倍的增加至约5.5倍的增加、约3.5倍的增加至约5.0倍的增加、约3.5倍的增加至约4.5倍的增加、约3.5倍的增加至约4.0倍的增加、约4.0倍的增加至约100倍的增加、约4.0倍的增加至约90倍的增加、约4.0倍的增加至约80倍的增加、约4.0倍的增加至约70倍的增加、约4.0倍的增加至约60倍的增加、约4.0倍的增加至约50倍的增加、约4.0倍的增加至约40倍的增加、约4.0倍的增加至约30倍的增加、约4.0倍的增加至约20倍的增加、约4.0倍的增加至约10倍的增加、约4.0倍的增加至约9.5倍的增加、约4.0倍的增加至约9.0倍的增加、约4.0倍的增加至约8.5倍的增加、约4.0倍的增加至约8.0倍的增加、约4.0倍的增加至约7.5倍的增加、约4.0倍的增加至约7.0倍的增加、约4.0倍的增加至约6.5倍的增加、约4.0倍的增加至约6.0倍的增加、约4.0倍的增加至约5.5倍的增加、约4.0倍的增加至约5.0倍的增加、约4.0倍的增加至约4.5倍的增加、约4.5倍的增加至约100倍的增加、约4.5倍的增加至约90倍的增加、约4.5倍的增加至约80倍的增加、约4.5倍的增加至约70倍的增加、约4.5倍的增加至约60倍的增加、约4.5倍的增加至约50倍的增加、约4.5倍的增加至约40倍的增加、约4.5倍的增加至约30倍的增加、约4.5倍的增加至约20倍的增加、约4.5倍的增加至约10倍的增加、约4.5倍的增加至约9.5倍的增加、约4.5倍的增加至约9.0倍的增加、约4.5倍的增加至约8.5倍的增加、约4.5倍的增加至约8.0倍的增加、约4.5倍的增加至约7.5倍的增加、约4.5倍的增加至约7.0倍的增加、约4.5倍的增加至约6.5倍的增加、约4.5倍的增加至约6.0倍的增加、约4.5倍的增加至约5.5倍的增加、约4.5倍的增加至约5.0倍的增加、约5.0倍的增加至约100倍的增加、约5.0倍的增加至约90倍的增加、约5.0倍的增加至约80倍的增加、约5.0倍的增加至约70倍的增加、约5.0倍的增加至约60倍的增加、约5.0倍的增加至约50倍的增加、约5.0倍的增加至约40倍的增加、约5.0倍的增加至约30倍的增加、约5.0倍的增加至约20倍的增加、约5.0倍的增加至约10倍的增加、约5.0倍的增加至约9.5倍的增加、约5.0倍的增加至约9.0倍的增加、约5.0倍的增加至约8.5倍的增加、约5.0倍的增加至约8.0倍的增加、约5.0倍的增加至约7.5倍的增加、约5.0倍的增加至约7.0倍的增加、约5.0倍的增加至约6.5倍的增加、约5.0倍的增加至约6.0倍的增加、约5.0倍的增加至约5.5倍的增加、约5.5倍的增加至约100倍的增加、约5.5倍的增加至约90倍的增加、约5.5倍的增加至约80倍的增加、约5.5倍的增加至约70倍的增加、约5.5倍的增加至约60倍的增加、约5.5倍的增加至约50倍的增加、约5.5倍的增加至约40倍的增加、约5.5倍的增加至约30倍的增加、约5.5倍的增加至约20倍的增加、约5.5倍的增加至约10倍的增加、约5.5倍的增加至约9.5倍的增加、约5.5倍的增加至约9.0倍的增加、约5.5倍的增加至约8.5倍的增加、约5.5倍的增加至约8.0倍的增加、约5.5倍的增加至约7.5倍的增加、约5.5倍的增加至约7.0倍的增加、约5.5倍的增加至约6.5倍的增加、约5.5倍的增加至约6.0倍的增加、约6.0倍的增加至约100倍的增加、约6.0倍的增加至约90倍的增加、约6.0倍的增加至约80倍的增加、约6.0倍的增加至约70倍的增加、约6.0倍的增加至约60倍的增加、约6.0倍的增加至约50倍的增加、约6.0倍的增加至约40倍的增加、约6.0倍的增加至约30倍的增加、约6.0倍的增加至约20倍的增加、约6.0倍的增加至约10倍的增加、约6.0倍的增加至约9.5倍的增加、约6.0倍的增加至约9.0倍的增加、约6.0倍的增加至约8.5倍的增加、约6.0倍的增加至约8.0倍的增加、约6.0倍的增加至约7.5倍的增加、约6.0倍的增加至约7.0倍的增加、约6.0倍的增加至约6.5倍的增加、约6.5倍的增加至约100倍的增加、约6.5倍的增加至约90倍的增加、约6.5倍的增加至约80倍的增加、约6.5倍的增加至约70倍的增加、约6.5倍的增加至约60倍的增加、约6.5倍的增加至约50倍的增加、约6.5倍的增加至约40倍的增加、约6.5倍的增加至约30倍的增加、约6.5倍的增加至约20倍的增加、约6.5倍的增加至约10倍的增加、约6.5倍的增加至约9.5倍的增加、约6.5倍的增加至约9.0倍的增加、约6.5倍的增加至约8.5倍的增加、约6.5倍的增加至约8.0倍的增加、约6.5倍的增加至约7.5倍的增加、约6.5倍的增加至约7.0倍的增加、约7.0倍的增加至约100倍的增加、约7.0倍的增加至约90倍的增加、约7.0倍的增加至约80倍的增加、约7.0倍的增加至约70倍的增加、约7.0倍的增加至约60倍的增加、约7.0倍的增加至约50倍的增加、约7.0倍的增加至约40倍的增加、约7.0倍的增加至约30倍的增加、约7.0倍的增加至约20倍的增加、约7.0倍的增加至约10倍的增加、约7.0倍的增加至约9.5倍的增加、约7.0倍的增加至约9.0倍的增加、约7.0倍的增加至约8.5倍的增加、约7.0倍的增加至约8.0倍的增加、约7.0倍的增加至约7.5倍的增加、约7.5倍的增加至约100倍的增加、约7.5倍的增加至约90倍的增加、约7.5倍的增加至约80倍的增加、约7.5倍的增加至约70倍的增加、约7.5倍的增加至约60倍的增加、约7.5倍的增加至约50倍的增加、约7.5倍的增加至约40倍的增加、约7.5倍的增加至约30倍的增加、约7.5倍的增加至约20倍的增加、约7.5倍的增加至约10倍的增加、约7.5倍的增加至约9.5倍的增加、约7.5倍的增加至约9.0倍的增加、约7.5倍的增加至约8.5倍的增加、约7.5倍的增加至约8.0倍的增加、约8.0倍的增加至约100倍的增加、约8.0倍的增加至约90倍的增加、约8.0倍的增加至约80倍的增加、约8.0倍的增加至约70倍的增加、约8.0倍的增加至约60倍的增加、约8.0倍的增加至约50倍的增加、约8.0倍的增加至约40倍的增加、约8.0倍的增加至约30倍的增加、约8.0倍的增加至约20倍的增加、约8.0倍的增加至约10倍的增加、约8.0倍的增加至约9.5倍的增加、约8.0倍的增加至约9.0倍的增加、约8.0倍的增加至约8.5倍的增加、约8.5倍的增加至约100倍的增加、约8.5倍的增加至约90倍的增加、约8.5倍的增加至约80倍的增加、约8.5倍的增加至约70倍的增加、约8.5倍的增加至约60倍的增加、约8.5倍的增加至约50倍的增加、约8.5倍的增加至约40倍的增加、约8.5倍的增加至约30倍的增加、约8.5倍的增加至约20倍的增加、约8.5倍的增加至约10倍的增加、约8.5倍的增加至约9.5倍的增加、约8.5倍的增加至约9.0倍的增加、约9.0倍的增加至约100倍的增加、约9.0倍的增加至约90倍的增加、约9.0倍的增加至约80倍的增加、约9.0倍的增加至约70倍的增加、约9.0倍的增加至约60倍的增加、约9.0倍的增加至约50倍的增加、约9.0倍的增加至约40倍的增加、约9.0倍的增加至约30倍的增加、约9.0倍的增加至约20倍的增加、约9.0倍的增加至约10倍的增加、约9.0倍的增加至约9.5倍的增加、约9.5倍的增加至约100倍的增加、约9.5倍的增加至约90倍的增加、约9.5倍的增加至约80倍的增加、约9.5倍的增加至约70倍的增加、约9.5倍的增加至约60倍的增加、约9.5倍的增加至约50倍的增加、约9.5倍的增加至约40倍的增加、约9.5倍的增加至约30倍的增加、约9.5倍的增加至约20倍的增加、约9.5倍的增加至约10倍的增加、约10倍的增加至约100倍的增加、约10倍的增加至约90倍的增加、约10倍的增加至约80倍的增加、约10倍的增加至约70倍的增加、约10倍的增加至约60倍的增加、约10倍的增加至约50倍的增加、约10倍的增加至约40倍的增加、约10倍的增加至约30倍的增加、约10倍的增加至约20倍的增加、约20倍的增加至约100倍的增加、约20倍的增加至约90倍的增加、约20倍的增加至约80倍的增加、约20倍的增加至约70倍的增加、约20倍的增加至约60倍的增加、约20倍的增加至约50倍的增加、约20倍的增加至约40倍的增加、约20倍的增加至约30倍的增加、约30倍的增加至约100倍的增加、约30倍的增加至约90倍的增加、约30倍的增加至约80倍的增加、约30倍的增加至约70倍的增加、约30倍的增加至约60倍的增加、约30倍的增加至约50倍的增加、约30倍的增加至约40倍的增加、约40倍的增加至约100倍的增加、约40倍的增加至约90倍的增加、约40倍的增加至约80倍的增加、约40倍的增加至约70倍的增加、约40倍的增加至约60倍的增加、约40倍的增加至约50倍的增加、约50倍的增加至约100倍的增加、约50倍的增加至约90倍的增加、约50倍的增加至约80倍的增加、约50倍的增加至约70倍的增加、约50倍的增加至约60倍的增加、约60倍的增加至约100倍的增加、约60倍的增加至约90倍的增加、约60倍的增加至约80倍的增加、约60倍的增加至约70倍的增加、约70倍的增加至约100倍的增加、约70倍的增加至约90倍的增加、约70倍的增加至约80倍的增加、约80倍的增加至约100倍的增加、约80倍的增加至约90倍的增加或约90倍的增加至约100倍的增加)。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，与包含相同量的对照抗体(例如，本文所描述的示例性对照抗体中的任一种)的组合物相比，包含抗体(例如，本文所描述的抗体中的任一种)的组合物可以提供靶哺乳动物细胞杀伤(例如，本文所描述的示例性靶哺乳动物细胞中的任一种)的增加(例如，可检测的增加)(例如，至少1％的增加、至少2％的增加、至少5％的增加、至少10％的增加、至少15％的增加、至少20％的增加、至少25％的增加、至少30％的增加、至少35％的增加、至少40％的增加、至少45％的增加、至少50％的增加、至少55％的增加、至少60％的增加、至少65％的增加、至少70％的增加、至少75％的增加、至少80％的增加、至少85％的增加、至少90％的增加、至少95％的增加、至少100％的增加、至少120％的增加、至少140％的增加、至少160％的增加、至少180％的增加、至少200％的增加、至少250％的增加、至少300％的增加、至少350％的增加、至少400％的增加、至少450％的增加、至少500％的增加、至少1,000％的增加、至少2,000％的增加、至少3,000％的增加、至少4,000％的增加、至少5,000％的增加、至少6,000％的增加、至少7,000％的增加、至少8,000％的增加、至少9,000％的增加或至少10,000％的增加、或约1％的增加至约10,000％的增加(例如，或本文所描述的此范围的子范围中的任一者))。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，与包含相同量的对照抗体(例如，本文所描述的示例性对照抗体中的任一种)的组合物相比，包含抗体(例如，本文所描述的抗体中的任一种)的组合物可以提供靶哺乳动物细胞杀伤(例如，本文所描述的示例性靶哺乳动物细胞中的任一种)的增加(例如，可检测的增加)(例如，至少0.1倍的增加、至少0.2倍的增加、至少0.3倍的增加、至少0.4倍的增加、至少0.5倍的增加、至少0.6倍的增加、至少0.7倍的增加、至少0.8倍的增加、至少0.9倍的增加、至少1.0倍的增加、至少1.2倍的增加、至少1.4倍的增加、至少1.5倍的增加、至少1.6倍的增加、至少1.8倍的增加、至少2.0倍的增加、至少2.2倍的增加、至少2.4倍的增加、至少2.5倍的增加、至少2.6倍的增加、至少2.8倍的增加、至少3.0倍的增加、至少3.5倍的增加、至少4.0倍的增加、至少4.5倍的增加、至少5.0倍的增加、至少5.5倍的增加、至少6.0倍的增加、至少6.5倍的增加、至少7.0倍的增加、至少7.5倍的增加、至少8.0倍的增加、至少8.5倍的增加、至少9.0倍的增加、至少9.5倍的增加、至少10倍的增加、至少15倍的增加、至少20倍的增加、至少25倍的增加、至少30倍的增加、至少35倍的增加、至少40倍的增加、至少40倍的增加、至少45倍的增加、至少50倍的增加、至少55倍的增加、至少60倍的增加、至少65倍的增加、至少70倍的增加、至少80倍的增加、至少85倍的增加、至少90倍的增加、至少95倍的增加或至少100倍的增加、或约0.1倍的增加至约100倍的增加(或本文所描述的此范围的子范围中的任一者))。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，包含本文所描述的抗体中的任一种的组合物(例如，在与在其表面上呈递MET的靶哺乳动物细胞接触时)引起相较于包含相同量的对照抗体(例如，本文所描述的对照抗体中的任一种)的组合物的IC50(例如，在与相同的靶哺乳动物细胞接触时)，(靶哺乳动物细胞杀伤的)IC50下降(例如，至少1％下降、至少5％下降、至少10％下降、至少15％下降、至少20％下降、至少25％下降、至少30％下降、至少35％下降、至少40％下降、至少45％下降、至少50％下降、至少55％下降、至少60％下降、至少65％下降、至少70％下降、至少75％下降、至少80％下降、至少85％下降、至少90％下降、至少95％下降或至少99％下降、约1％下降至约99％下降或本文所描述的此范围的子范围中的任一者)。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，例如与对照抗体(例如，本文所描述的示例性对照抗体中的任一种)相比，包含本文所描述的抗体中的任一种的组合物(例如，在与在其表面上呈递MET的靶哺乳动物细胞接触时)可以提供在中性pH(约7.0至约8.0的pH)下在其表面上呈递MET的靶哺乳动物细胞上的KD与在相同靶细胞上在中性pH下的IC50的比率的增加(例如，至少0.1倍的增加、至少0.2倍的增加、至少0.4倍的增加、至少0.6倍的增加、至少0.8倍的增加、至少1倍的增加、至少2倍的增加、至少5倍的增加、至少10倍的增加、至少15倍的增加、至少20倍的增加、至少25倍的增加、至少30倍的增加、至少35倍的增加、至少40倍的增加、至少45倍的增加、至少50倍的增加、至少55倍的增加、至少60倍的增加、至少65倍的增加、至少70倍的增加、至少75倍的增加、至少80倍的增加、至少85倍的增加、至少90倍的增加、至少95倍的增加、或至少100倍的增加或约0.1倍的增加至约500倍的增加(或本文所描述的此范围的子范围中的任一者))。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，与包含相同量的对照抗体(例如，本文所描述的示例性对照抗体中的任一种)的组合物相比，包含抗体(例如，本文所描述的抗体中的任一种)的组合物可以提供靶哺乳动物细胞(例如，本文所描述的示例性靶哺乳动物细胞中的任一种)中的内溶酶体递送的增加(例如，可检测的增加)(例如，至少1％的增加、至少2％的增加、至少5％的增加、至少10％的增加、至少15％的增加、至少20％的增加、至少25％的增加、至少30％的增加、至少35％的增加、至少40％的增加、至少45％的增加、至少50％的增加、至少55％的增加、至少60％的增加、至少65％的增加、至少70％的增加、至少75％的增加、至少80％的增加、至少85％的增加、至少90％的增加、至少95％的增加、至少100％的增加、至少120％的增加、至少140％的增加、至少160％的增加、至少180％的增加、至少200％的增加、至少250％的增加、至少300％的增加、至少350％的增加、至少400％的增加、至少450％的增加、至少500％的增加、至少1,000％的增加、至少2,000％的增加、至少3,000％的增加、至少4,000％的增加、至少5,000％的增加、至少6,000％的增加、至少7,000％的增加、至少8,000％的增加、至少9,000％的增加或至少10,000％的增加、或约1％的增加至约10,000％的增加(例如，或本文所描述的此范围的子范围中的任一者))。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，与包含相同量的对照抗体(例如，本文所描述的示例性对照抗体中的任一种)的组合物相比，包含抗体(例如，本文所描述的抗体中的任一种)的组合物可以提供靶哺乳动物细胞(例如，本文所描述的示例性靶哺乳动物细胞中的任一种)中的内溶酶体递送的增加(例如，可检测的增加)(例如，至少0.1倍的增加、至少0.2倍的增加、至少0.3倍的增加、至少0.4倍的增加、至少0.5倍的增加、至少0.6倍的增加、至少0.7倍的增加、至少0.8倍的增加、至少0.9倍的增加、至少1.0倍的增加、至少1.2倍的增加、至少1.4倍的增加、至少1.5倍的增加、至少1.6倍的增加、至少1.8倍的增加、至少2.0倍的增加、至少2.2倍的增加、至少2.4倍的增加、至少2.5倍的增加、至少2.6倍的增加、至少2.8倍的增加、至少3.0倍的增加、至少3.5倍的增加、至少4.0倍的增加、至少4.5倍的增加、至少5.0倍的增加、至少5.5倍的增加、至少6.0倍的增加、至少6.5倍的增加、至少7.0倍的增加、至少7.5倍的增加、至少8.0倍的增加、至少8.5倍的增加、至少9.0倍的增加、至少9.5倍的增加、至少10倍的增加、至少15倍的增加、至少20倍的增加、至少25倍的增加、至少30倍的增加、至少35倍的增加、至少40倍的增加、至少45倍的增加、至少50倍的增加、至少55倍的增加、至少60倍的增加、至少65倍的增加、至少70倍的增加、至少75倍的增加、至少80倍的增加、至少85倍的增加、至少90倍的增加、至少95倍的增加或至少100倍的增加、或约0.1倍的增加至约100倍的增加(或本文所描述的此范围的子范围中的任一者))。
在本文所描述的抗体中的任一种的实例中，与表达对照细胞(例如，HUVEC-赛默飞世尔(ThermoFisher)#C0035C)的FcRn相比，靶哺乳动物细胞不表达FcRn受体或表达较低(可检测地较低)水平(例如，至少1％下降、至少2％下降、至少5％下降、至少10％下降、至少15％下降、至少20％下降、至少25％下降、至少30％下降、至少35％下降、至少40％下降、至少45％下降、至少50％下降、至少55％下降、至少60％下降、至少65％下降、至少70％下降、至少75％下降、至少80％下降、至少85％下降、至少90％下降、至少95％下降或至少99％下降水平)的FcRn受体。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，靶哺乳动物细胞为癌细胞。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，抗体对靶哺乳动物细胞有细胞毒性或细胞抑制性。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，包含本文所描述的抗体中的任一种的组合物(例如，在施用于受试者时)引起相较于包含相同量的对照抗体(例如，本文所描述的对照抗体中的任一种)的组合物，在靶细胞的表面上呈递的MET的水平的更少(例如，1％下降至约99％下降或本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的降低。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，所述组合物不引起在靶哺乳动物细胞的表面上呈递的MET的水平的可检测到的降低。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，抗体与非人灵长类动物MET和人MET具有交叉反应性。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，抗体与非人灵长类动物MET、人MET以及大鼠MET和小鼠MET中的一者或两者具有交叉反应性。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，抗体与非人灵长类动物MET、人MET、大鼠MET和小鼠MET具有交叉反应性。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，抗体与小鼠MET和大鼠MET具有交叉反应性。在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，抗原结合结构域与存在于来自旧世界猴(Old World Monkey)的细胞的表面上的MET的表位结合。
本文所描述的抗体中的任一种的一些实例可以进一步包含第二抗原结合结构域(例如，本文所描述的示例性抗原结合结构域中的任一种)。
这些方法的非限制性方面在下面进行了描述，并且可以不受限制地以任何组合使用。这些方法另外的方面是本领域已知的。
MET或MET的表位
MET原癌基因受体酪氨酸激酶(MET)是本领域已知的肿瘤抗原，并且是肿瘤学中治疗性抗体的靶标(Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关(ABBV-399,c-Met Antibody-DrugConjugate that Targets Both MET-Amplified and c-Met-Overexpressing Tumors,Irrespective of MET Pathway Dependence),《临床癌症研究(Clin Cancer Res)》,23:992-1000)。成熟人MET的序列可见于SEQ ID NO:1。编码成熟人MET的cDNA的序列可见于SEQID NO:2。MET的细胞外结构域的序列可见于SEQ ID NO:3。编码MET的细胞外结构域的cDNA的序列可见于SEQ ID NO:4。
抗体的示例性性质
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，在约4.0至约6.5(例如，约4.0至约6.4、约4.0至约6.3、约4.0至约6.2、约4.0至约6.1、约4.0至约6.0、约4.0至约5.9、约4.0至约5.8、约4.0至约5.7、约4.0至约5.6、约4.0至约5.5、约4.0至约5.4、约4.0至约5.3、约4.0至约5.2、约4.0至约5.1、约4.0至约5.0、约4.0至约4.9、约4.0至约4.8、约4.0至约4.7、约4.0至约4.6、约4.0至约4.5、约4.0至约4.4、约4.0至约4.3、约4.0至约4.2、约4.0至约4.1、约4.1至约6.5、约4.1至约6.4、约4.1至约6.3、约4.1至约6.2、约4.1至约6.1、约4.1至约6.0、约4.1至约5.9、约4.1至约5.8、约4.1至约5.7、约4.1至约5.6、约4.1至约5.5、约4.1至约5.4、约4.1至约5.3、约4.1至约5.2、约4.1至约5.1、约4.1至约5.0、约4.1至约4.9、约4.1至约4.8、约4.1至约4.7、约4.1至约4.6、约4.1至约4.5、约4.1至约4.4、约4.1至约4.3、约4.1至约4.2、约4.2至约6.5、约4.2至约6.4、约4.2至约6.3、约4.2至约6.2、约4.2至约6.1、约4.2至约6.0、约4.2至约5.9、约4.2至约5.8、约4.2至约5.7、约4.2至约5.6、约4.2至
约5.5、约4.2至约5.4、约4.2至约5.3、约4.2至约5.2、约4.2至约5.1、约4.2至约5.0、约4.2至约4.9、约4.2至约4.8、约4.2至约4.7、约4.2至约4.6、约4.2至约4.5、约4.2至约4.4、约4.2至约4.3、约4.3至约6.5、约4.3至约6.4、约4.3至约6.3、约4.3至约6.2、约4.3至约6.1、约4.3至约6.0、约4.3至约5.9、约4.3至约5.8、约4.3至约5.7、约4.3至约5.6、约4.3至约5.5、约4.3至约5.4、约4.3至约5.3、约4.3至约5.2、约4.3至约5.1、约4.3至约5.0、约4.3至约4.9、约4.3至约4.8、约4.3至约4.7、约4.3至约4.6、约4.3至约4.5、约4.3至约4.4、约4.4至约6.5、约4.4至约6.4、约4.4至约6.3、约4.4至约6.2、约4.4至约6.1、约4.4至约6.0、约4.4至约5.9、约4.4至约5.8、约4.4至约5.7、约4.4至约5.6、约4.4至约5.5、约4.4至约5.4、约4.4至约5.3、约4.4至约5.2、约4.4至约5.1、约4.4至约5.0、约4.4至约4.9、约4.4至约4.8、约4.4至约4.7、约4.4至约4.6、约4.4至约4.5、约4.5至约6.5、约4.5至约6.4、约4.5至约6.3、约4.5至约6.2、约4.5至约6.1、约4.5至约6.0、约4.5至约5.9、约4.5至约5.8、约4.5至约5.7、约4.5至约5.6、约4.5至约5.5、约4.5至约5.4、约4.5至约5.3、约4.5至约5.2、约4.5至约5.1、约4.5至约5.0、约
4.5至约4.9、约4.5至约4.8、约4.5至约4.7、约4.5至约4.6、约4.6至约
6.5、约4.6至约6.4、约4.6至约6.3、约4.6至约6.2、约4.6至约6.1、约
4.6至约6.0、约4.6至约5.9、约4.6至约5.8、约4.6至约5.7、约4.6至约
5.6、约4.6至约5.5、约4.6至约5.4、约4.6至约5.3、约4.6至约5.2、约
4.6至约5.1、约4.6至约5.0、约4.6至约4.9、约4.6至约4.8、约4.6至约
4.7、约4.7至约6.5、约4.7至约6.4、约4.7至约6.3、约4.7至约6.2、约
4.7至约6.1、约4.7至约6.0、约4.7至约5.9、约4.7至约5.8、约4.7至约
5.7、约4.7至约5.6、约4.7至约5.5、约4.7至约5.4、约4.7至约5.3、约
4.7至约5.2、约4.7至约5.1、约4.7至约5.0、约4.7至约4.9、约4.7至约
4.8、约4.8至约6.5、约4.8至约6.4、约4.8至约6.3、约4.8至约6.2、约
4.8至约6.1、约4.8至约6.0、约4.8至约5.9、约4.8至约5.8、约4.8至约
5.7、约4.8至约5.6、约4.8至约5.5、约4.8至约5.4、约4.8至约5.3、约
4.8至约5.2、约4.8至约5.1、约4.8至约5.0、约4.8至约4.9、约4.9至约
6.5、约4.9至约6.4、约4.9至约6.3、约4.9至约6.2、约4.9至约6.1、约
4.9至约6.0、约4.9至约5.9、约4.9至约5.8、约4.9至约5.7、约4.9至约
5.6、约4.9至约5.5、约4.9至约5.4、约4.9至约5.3、约4.9至约5.2、约
4.9至约5.1、约4.9至约5.0、约5.0至约6.5、约5.0至约6.4、约5.0至约
6.3、约5.0至约6.2、约5.0至约6.1、约5.0至约6.0、约5.0至约5.9、约
5.0至约5.8、约5.0至约5.7、约5.0至约5.6、约5.0至约5.5、约5.0至约
5.4、约5.0至约5.3、约5.0至约5.2、约5.0至约5.1、约5.1至约6.5、约
5.1至约6.4、约5.1至约6.3、约5.1至约6.2、约5.1至约6.1、约5.1至约
6.0、约5.1至约5.9、约5.1至约5.8、约5.1至约5.7、约5.1至约5.6、约
5.1至约5.5、约5.1至约5.4、约5.1至约5.3、约5.1至约5.2、约5.2至约
6.5、约5.2至约6.4、约5.2至约6.3、约5.2至约6.2、约5.2至约6.1、约
5.2至约6.0、约5.2至约5.9、约5.2至约5.8、约5.2至约5.7、约5.2至约
5.6、约5.2至约5.5、约5.2至约5.4、约5.2至约5.3、约5.3至约6.5、约
5.3至约6.4、约5.3至约6.3、约5.3至约6.2、约5.3至约6.1、约5.3至约
6.0、约5.3至约5.9、约5.3至约5.8、约5.3至约5.7、约5.3至约5.6、约
5.3至约5.5、约5.3至约5.4、约5.4至约6.5、约5.4至约6.4、约5.4至约
6.3、约5.4至约6.2、约5.4至约6.1、约5.4至约6.0、约5.4至约5.9、约
5.4至约5.8、约5.4至约5.7、约5.4至约5.6、约5.4至约5.5、约5.5至约
6.5、约5.5至约6.4、约5.5至约6.3、约5.5至约6.2、约5.5至约6.1、约5.5至约6.0、约5.5至约5.9、约5.5至约5.8、约5.5至约5.7、约5.5至约5.6、约5.6至约6.5、约5.6至约6.4、约5.6至约6.3、约5.6至约6.2、约5.6至约6.1、约5.6至约6.0、约5.6至约5.9、约5.6至约5.8、约5.6至约5.7、约5.7至约6.5、约5.7至约6.4、约5.7至约6.3、约5.7至约6.2、约5.7至约6.1、约5.7至约6.0、约5.7至约5.9、约5.7至约5.8、约5.8至约6.5、约5.8至约6.4、约5.8至约6.3、约5.8至约6.2、约5.8至约6.1、约5.8至约6.0、约5.8至约5.9、约5.9至约6.5、约5.9至约6.4、约5.9至约6.3、约5.9至约6.2、约5.9至约6.1、约5.9至约6.0、约6.0至约6.5、约6.0至约6.4、约6.0至约6.3、约6.0至约6.2、约6.0至约6.1、约6.1至约6.5、约6.1至约6.4、约6.1至约6.3、约6.1至约6.2、约6.2至约6.5、约6.2至约6.4、约6.2至约6.3、约6.3至约6.5、约6.3至约6.4或约6.4至约6.5)的pH下的解离速率更快(例如，(例如，至少5％更快、至少10％更快、至少15％更快、至少20％、至少25％更快、至少30％更快、至少35％更快、至少40％更快、至少45％更快、至少50％更快、至少55％更快、至少60％更快、至少65％更快、至少70％更快、至少75％更快、至少80％更快、至少85％更快、至少90％更快、至少95％更快、至少100％更快、至少120％更快、至少140％更快、至少160％更快、至少180％更快、至少200％更快、至少220％更快、至少240％更快、至少260％更快、至少280％更快、至少300％更快、至少320％更快、至少340％更快、至少360％更快、至少380％更快、至少400％更快、至少420％更快、至少440％更快、至少460％更快、至少480％更快、至少500％更快、至少1,000％更快、至少2,000％更快、至少3,000％更快、至少4,000％更快、至少5,000％、至少6,000％更快、至少7,000％更快、至少8,000％更快、至少9,000％更快、或至少10,000％更快、或约5％更快至约10,000％更快、约5％更快至约9,000％更快、约5％更快至约8,000％更快、约5％更快至约7,000％更快、约5％更快至约6,000％更快、约5％更快至约5,000％更快、约5％更快至约4,000％更快、约5％更快至约3,000％更快、约5％更快至约2,000％更快、约5％更快至约1,000％更快、约5％更快至约500％更快、约5％更快至约480％更快、约5％更快至约460％更快、约5％更快至约440％更快、约5％更快至约420％更快、约5％更快至约400％更快、约5％更快至约380％更快、约5％更快至约360％更快、约5％更快至约340％更快、约5％更快至约320％更快、约5％更快至约300％更快、约5％更快至约280％更快、约5％更快至约260％更快、约5％更快至约240％更快、约5％更快至约220％更快、约5％更快至约200％更快、约5％更快至约180％更快、约5％更快至约160％更快、约5％更快至约140％更快、约5％更快至约120％更快、约5％更快至约100％更快、约5％更快至约95％更快、约5％更快至约90％更快、约5％更快至约85％更快、约5％更快至约80％更快、约5％更快至约75％更快、约5％更快至约70％更快、约5％更快至约65％更快、约5％更快至约60％更快、约5％更快至约55％更快、约5％更快至约50％更快、约5％更快至约45％更快、约5％更快至约40％更快、约5％更快至约35％更快、约5％更快至约30％更快、约5％更快至约25％更快、约5％更快至约20％更快、约5％更快至约15％更快、约5％更快至约10％更快、约10％更快至约10,000％更快、约10％更快至约9,000％更快、约10％更快至约8,000％更快、约10％更快至约7,000％更快、约10％更快至约6,000％更快、约10％更快至约5,000％更快、约10％更快至约4,000％更快、约10％更快至约3,000％更快、约10％更快至约2,000％更快、约10％更快至约1,000％更快、约10％更快至约500％更快、约10％更快至约480％更快、约10％更快至约460％更快、约10％更快至约440％更快、约10％更快至约420％更快、约10％更快至约400％更快、约10％更快至约380％更快、约10％更快至约360％更快、约10％更快至约340％更快、约10％更快至约320％更快、约10％更快至约300％更快、约10％更快至约280％更快、约10％更快至约260％更快、约10％更快至约240％更快、约10％更快至约220％更快、约10％更快至约200％更快、约10％更快至约180％更快、约10％更快至约160％更快、约10％更快至约140％更快、约10％更快至约120％更快、约10％更快至约100％更快、约10％更快至约95％更快、约10％更快至约90％更快、约10％更快至约85％更快、约10％更快至约80％更快、约10％更快至约75％更快、约10％更快至约70％更快、约10％更快至约65％更快、约10％更快至约60％更快、约10％更快至约55％更快、约10％更快至约50％更快、约10％更快至约45％更快、约10％更快至约40％更快、约10％更快至约35％更快、约10％更快至约30％更快、约10％更快至约25％更快、约10％更快至约20％更快、约10％更快至约15％更快、约15％更快至约10,000％更快、约15％更快至约9,000％更快、约15％更快至约8,000％更快、约15％更快至约7,000％更快、约15％更快至约6,000％更快、约15％更快至约5,000％更快、约15％更快至约4,000％更快、约15％更快至约3,000％更快、约15％更快至约2,000％更快、约15％更快至约1,000％更快、约15％更快至约500％更快、约15％更快至约480％更快、约15％更快至约460％更快、约15％更快至约440％更快、约15％更快至约420％更快、约15％更快至约400％更快、约15％更快至约380％更快、约15％更快至约360％更快、约15％更快至约340％更快、约15％更快至约320％更快、约15％更快至约300％更快、约15％更快至约280％更快、约15％更快至约260％更快、约15％更快至约240％更快、约15％更快至约220％更快、约15％更快至约200％更快、约15％更快至约180％更快、约15％更快至约160％更快、约15％更快至约140％更快、约15％更快至约120％更快、约15％更快至约100％更快、约15％更快至约95％更快、约15％更快至约90％更快、约15％更快至约85％更快、约15％更快至约80％更快、约15％更快至约75％更快、约15％更快至约70％更快、约15％更快至约65％更快、约15％更快至约60％更快、约15％更快至约55％更快、约15％更快至约50％更快、约15％更快至约45％更快、约15％更快至约40％更快、约15％更快至约35％更快、约15％更快至约30％更快、约15％更快至约25％更快、约15％更快至约20％更快、约20％更快至约10,000％更快、约20％更快至约9,000％更快、约20％更快至约8,000％更快、约20％更快至约7,000％更快、约20％更快至约6,000％更快、约20％更快至约5,000％更快、约20％更快至约4,000％更快、约20％更快至约3,000％更快、约20％更快至约2,000％更快、约20％更快至约1,000％更快、约20％更快至约500％更快、约20％更快至约480％更快、约20％更快至约460％更快、约20％更快至约440％更快、约20％更快至约420％更快、约20％更快至约400％更快、约20％更快至约380％更快、约20％更快至约360％更快、约20％更快至约340％更快、约20％更快至约320％更快、约20％更快至约300％更快、约20％更快至约280％更快、约20％更快至约260％更快、约20％更快至约240％更快、约20％更快至约220％更快、约20％更快至约200％更快、约20％更快至约180％更快、约20％更快至约160％更快、约20％更快至约140％更快、约20％更快至约120％更快、约20％更快至约100％更快、约20％更快至约95％更快、约20％更快至约90％更快、约20％更快至约85％更快、约20％更快至约80％更快、约20％更快至约75％更快、约20％更快至约70％更快、约20％更快至约65％更快、约20％更快至约60％更快、约20％更快至约55％更快、约20％更快至约50％更快、约20％更快至约45％更快、约20％更快至约40％更快、约20％更快至约35％更快、约20％更快至约30％更快、约20％更快至约25％更快、约25％更快至约10,000％更快、约25％更快至约9,000％更快、约25％更快至约8,000％更快、约25％更快至约7,000％更快、约25％更快至约6,000％更快、约25％更快至约5,000％更快、约25％更快至约4,000％更快、约25％更快至约3,000％更快、约25％更快至约2,000％更快、约25％更快至约1,000％更快、约25％更快至约500％更快、约25％更快至约480％更快、约25％更快至约460％更快、约25％更快至约440％更快、约25％更快至约420％更快、约25％更快至约400％更快、约25％更快至约380％更快、约25％更快至约360％更快、约25％更快至约340％更快、约25％更快至约320％更快、约25％更快至约300％更快、约25％更快至约280％更快、约25％更快至约260％更快、约25％更快至约240％更快、约25％更快至约220％更快、约25％更快至约200％更快、约25％更快至约180％更快、约25％更快至约160％更快、约25％更快至约140％更快、约25％更快至约120％更快、约25％更快至约100％更快、约25％更快至约95％更快、约25％更快至约90％更快、约25％更快至约85％更快、约25％更快至约80％更快、约25％更快至约75％更快、约25％更快至约70％更快、约25％更快至约65％更快、约25％更快至约60％更快、约25％更快至约55％更快、约25％更快至约50％更快、约25％更快至约45％更快、约25％更快至约40％更快、约25％更快至约35％更快、约25％更快至约30％更快、约30％更快至约10,000％更快、约30％更快至约9,000％更快、约30％更快至约8,000％更快、约30％更快至约7,000％更快、约30％更快至约6,000％更快、约30％更快至约5,000％更快、约30％更快至约4,000％更快、约30％更快至约3,000％更快、约30％更快至约2,000％更快、约30％更快至约1,000％更快、约30％更快至约500％更快、约30％更快至约480％更快、约30％更快至约460％更快、约30％更快至约440％更快、约30％更快至约420％更快、约30％更快至约400％更快、约30％更快至约380％更快、约30％更快至约360％更快、约30％更快至约340％更快、约30％更快至约320％更快、约30％更快至约300％更快、约30％更快至约280％更快、约30％更快至约260％更快、约30％更快至约240％更快、约30％更快至约220％更快、约30％更快至约200％更快、约30％更快至约180％更快、约30％更快至约160％更快、约30％更快至约140％更快、约30％更快至约120％更快、约30％更快至约100％更快、约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％更快至约7,000％更快、约2,000％更快至约6,000％更快、约2,000％更快至约5,000％更快、约2,000％更快至约4,000％更快、约2,000％更快至约3,000％更快、约3,000％更快至约10,000％更快、约3,000％更快至约9,000％更快、约3,000％更快至约8,000％更快、约3,000％更快至约7,000％更快、约3,000％更快至约6,000％更快、约3,000％更快至约5,000％更快、约3,000％更快至约4,000％更快、约4,000％更快至约10,000％更快、约4,000％更快至约9,000％更快、约4,000％更快至约8,000％更快、约4,000％更快至约7,000％更快、约4,000％更快至约6,000％更快、约4,000％更快至约5,000％更快、约5,000％更快至约10,000％更快、约5,000％更快至约9,000％更快、约5,000％更快至约8,000％更快、约5,000％更快至约7,000％更快、约5,000％更快至约6,000％更快、约6,000％更快至约10,000％更快、约6,000％更快至约9,000％更快、约6,000％更快至约8,000％更快、约6,000％更快至约7,000％更快、约7,000％更快至约10,000％更快、约7,000％更快至约9,000％更快、约7,000％更快至约8,000％更快、约8,000％更快至约10,000％更快、约8,000％更快至约9,000％更快或约9,000％更快至约10,000％更快)于在约7.0至约8.0(例如，约7.0至约7.9、约7.0至约7.8、约7.0至约7.7、约7.0至约7.6、约7.0至约7.5、约7.0至约7.4、约7.0至约7.3、约7.0至约7.2、约7.0至约7.1、约7.1至约8.0、约7.1至约7.9、约7.1至约7.8、约7.1至约7.7、约7.1至约7.6、约7.1至约7.5、约7.1至约7.4、约7.1至约7.3、约7.1至约7.2、约7.2至约8.0、约7.2至约7.9、约7.2至约7.8、约7.2至约7.7、约7.2至约7.6、约7.2至约7.5、约7.2至约7.4、约7.2至约7.3、约7.3至约8.0、约7.3至约7.9、约7.3至约7.8、约7.3至约7.7、约7.3至约7.6、约7.3至约7.5、约7.3至约7.4、约7.4至约8.0、约7.4至约7.9、约7.4至约7.8、约7.4至约7.7、约7.4至约7.6、约7.4至约7.5、约7.5至约8.0、约7.5至约7.9、约7.5至约7.8、约7.5至约7.7、约7.5至约7.6、约7.6至约8.0、约7.6至约7.9、约7.6至约7.8、约7.6至约7.7、约7.7至约8.0、约7.7至约7.9、约7.7至约7.8、约7.8至约8.0、约7.8至约7.9或约7.9至约8.0)的pH下的解离速率。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，在约4.0至约6.5(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的pH下的解离常数(KD)更大(例如，可检测地更大)(例如，至少5％更大、至少10％更大、至少15％更大、至少20％更大、至少25％更大、至少30％更大、至少35％更大、至少40％更大、至少45％更大、至少50％更大、至少55％更大、至少60％更大、至少65％更大、至少70％更大、至少80％更大、至少85％更大、至少90％更大、至少95％更大、至少100％更大、至少120％更大、至少140％更大、至少160％更大、至少180％更大、至少200％更大、至少220％更大、至少240％更大、至少260％更大、至少280％更大、至少300％更大、至少320％更大、至少340％更大、至少360％更大、至少380％更大、至少400％更大、至少420％更大、至少440％更大、至少460％更大、至少480％更大、至少500％更大、至少1,000％更大、至少2,000％更大、至少3,000％更大、至少4,000％更大、至少5,000％更大、至少6,000％更大、至少7,000％更大、至少8,000％更大、至少9,000％更大、或至少10,000％更大、或约5％更大至约10,000％更大、约5％更大至约9,000％更大、约5％更大至约8,000％更大、约5％更大至约7,000％更大、约5％更大至约6,000％更大、约5％更大至约5,000％更大、约5％更大至约4,000％更大、约5％更大至约3,000％更大、约5％更大至约2,000％更大、约5％更大至约1,000％更大、约5％更大至约500％更大、约5％更大至约480％更大、约5％更大至约460％更大、约5％更大至约440％更大、约5％更大至约420％更大、约5％更大至约400％更大、约5％更大至约380％更大、约5％更大至约360％更大、约5％更大至约340％更大、约5％更大至约320％更大、约5％更大至约300％更大、约5％更大至约280％更大、约5％更大至约260％更大、约5％更大至约240％更大、约5％更大至约220％更大、约5％更大至约200％更大、约5％更大至约180％更大、约5％更大至约160％更大、约5％更大至约140％更大、约5％更大至约120％更大、约5％更大至约100％更大、约5％更大至约95％更大、约5％更大至约90％更大、约5％更大至约85％更大、约5％更大至约80％更大、约5％更大至约75％更大、约5％更大至约70％更大、约5％更大至约65％更大、约5％更大至约60％更大、约5％更大至约55％更大、约5％更大至约50％更大、约5％更大至约45％更大、约5％更大至约40％更大、约5％更大至约35％更大、约5％更大至约30％更大、约5％更大至约25％更大、约5％更大至约20％更大、约5％更大至约15％更大、约5％更大至约10％更大、约10％更大至约10,000％更大、约10％更大至约9,000％更大、约10％更大至约8,000％更大、约10％更大至约7,000％更大、约10％更大至约6,000％更大、约10％更大至约5,000％更大、约10％更大至约4,000％更大、约10％更大至约3,000％更大、约10％更大至约2,000％更大、约10％更大至约1,000％更大、约10％更大至约500％更大、约10％更大至约480％更大、约10％更大至约460％更大、约10％更大至约440％更大、约10％更大至约420％更大、约10％更大至约400％更大、约10％更大至约380％更大、约10％更大至约360％更大、约10％更大至约340％更大、约10％更大至约320％更大、约10％更大至约300％更大、约10％更大至约280％更大、约10％更大至约260％更大、约10％更大至约240％更大、约10％更大至约220％更大、约10％更大至约200％更大、约10％更大至约180％更大、约10％更大至约160％更大、约10％更大至约140％更大、约10％更大至约120％更大、约10％更大至约100％更大、约10％更大至约95％更大、约10％更大至约90％更大、约10％更大至约85％更大、约10％更大至约80％更大、约10％更大至约75％更大、约10％更大至约70％更大、约10％更大至约65％更大、约10％更大至约60％更大、约10％更大至约55％更大、约10％更大至约50％更大、约10％更大至约45％更大、约10％更大至约40％更大、约10％更大至约35％更大、约10％更大至约30％更大、约10％更大至约25％更大、约10％更大至约20％更大、约10％更大至约15％更大、约15％更大至约10,000％更大、约15％更大至约9,000％更大、约15％更大至约8,000％更大、约15％更大至约7,000％更大、约15％更大至约6,000％更大、约15％更大至约5,000％更大、约15％更大至约4,000％更大、约15％更大至约3,000％更大、约15％更大至约2,000％更大、约15％更大至约1,000％更大、约15％更大至约500％更大、约15％更大至约480％更大、约15％更大至约460％更大、约15％更大至约440％更大、约15％更大至约420％更大、约15％更大至约400％更大、约15％更大至约380％更大、约15％更大至约360％更大、约15％更大至约340％更大、约15％更大至约320％更大、约15％更大至约300％更大、约15％更大至约280％更大、约15％更大至约260％更大、约15％更大至约240％更大、约15％更大至约220％更大、约15％更大至约200％更大、约15％更大至约180％更大、约15％更大至约160％更大、约15％更大至约140％更大、约15％更大至约120％更大、约15％更大至约100％更大、约15％更大至约95％更大、约15％更大至约90％更大、约15％更大至约85％更大、约15％更大至约80％更大、约15％更大至约75％更大、约15％更大至约70％更大、约15％更大至约65％更大、约15％更大至约60％更大、约15％更大至约55％更大、约15％更大至约50％更大、约15％更大至约45％更大、约15％更大至约40％更大、约15％更大至约35％更大、约15％更大至约30％更大、约15％更大至约25％更大、约15％更大至约20％更大、约20％更大至约10,000％更大、约20％更大至约9,000％更大、约20％更大至约8,000％更大、约20％更大至约7,000％更大、约20％更大至约6,000％更大、约20％更大至约5,000％更大、约20％更大至约4,000％更大、约20％更大至约3,000％更大、约20％更大至约2,000％更大、约20％更大至约1,000％更大、约20％更大至约500％更大、约20％更大至约480％更大、约20％更大至约460％更大、约20％更大至约440％更大、约20％更大至约420％更大、约20％更大至约400％更大、约20％更大至约380％更大、约20％更大至约360％更大、约20％更大至约340％更大、约20％更大至约320％更大、约20％更大至约300％更大、约20％更大至约280％更大、约20％更大至约260％更大、约20％更大至约240％更大、约20％更大至约220％更大、约20％更大至约200％更大、约20％更大至约180％更大、约20％更大至约160％更大、约20％更大至约140％更大、约20％更大至约120％更大、约20％更大至约100％更大、约20％更大至约95％更大、约20％更大至约90％更大、约20％更大至约85％更大、约20％更大至约80％更大、约20％更大至约75％更大、约20％更大至约70％更大、约20％更大至约65％更大、约20％更大至约60％更大、约20％更大至约55％更大、约20％更大至约50％更大、约20％更大至约45％更大、约20％更大至约40％更大、约20％更大至约35％更大、约20％更大至约30％更大、约20％更大至约25％更大、约25％更大至约10,000％更大、约25％更大至约9,000％更大、约25％更大至约8,000％更大、约25％更大至约7,000％更大、约25％更大至约6,000％更大、约25％更大至约5,000％更大、约25％更大至约4,000％更大、约25％更大至约3,000％更大、约25％更大至约2,000％更大、约25％更大至约1,000％更大、约25％更大至约500％更大、约25％更大至约480％更大、约25％更大至约460％更大、约25％更大至约440％更大、约25％更大至约420％更大、约25％更大至约400％更大、约25％更大至约380％更大、约25％更大至约360％更大、约25％更大至约340％更大、约25％更大至约320％更大、约25％更大至约300％更大、约25％更大至约280％更大、约25％更大至约260％更大、约25％更大至约240％更大、约25％更大至约220％更大、约25％更大至约200％更大、约25％更大至约180％更大、约25％更大至约160％更大、约25％更大至约140％更大、约25％更大至约120％更大、约25％更大至约100％更大、约25％更大至约95％更大、约25％更大至约90％更大、约25％更大至约85％更大、约25％更大至约80％更大、约25％更大至约75％更大、约25％更大至约70％更大、约25％更大至约65％更大、约25％更大至约60％更大、约25％更大至约55％更大、约25％更大至约50％更大、约25％更大至约45％更大、约25％更大至约40％更大、约25％更大至约35％更大、约25％更大至约30％更大、约30％更大至约10,000％更大、约30％更大至约9,000％更大、约30％更大至约8,000％更大、约30％更大至约7,000％更大、约30％更大至约6,000％更大、约30％更大至约5,000％更大、约30％更大至约4,000％更大、约30％更大至约3,000％更大、约30％更大至约2,000％更大、约30％更大至约1,000％更大、约30％更大至约500％更大、约30％更大至约480％更大、约30％更大至约460％更大、约30％更大至约440％更大、约30％更大至约420％更大、约30％更大至约400％更大、约30％更大至约380％更大、约30％更大至约360％更大、约30％更大至约340％更大、约30％更大至约320％更大、约30％更大至约300％更大、约30％更大至约280％更大、约30％更大至约260％更大、约30％更大至约240％更大、约30％更大至约220％更大、约30％更大至约200％更大、约30％更大至约180％更大、约30％更大至约160％更大、约30％更大至约140％更大、约30％更大至约120％更大、约30％更大至约100％更大、约30％更大至约95％更大、约30％更大至约90％更大、约30％更大至约85％更大、约30％更大至约80％更大、约30％更大至约75％更大、约30％更大至约70％更大、约30％更大至约65％更大、约30％更大至约60％更大、约30％更大至约55％更大、约30％更大至约50％更大、约30％更大至约45％更大、约30％更大至约40％更大、约30％更大至约35％更大、约35％更大至约10,000％更大、约35％更大至约9,000％更大、约35％更大至约8,000％更大、约35％更大至约7,000％更大、约35％更大至约6,000％更大、约35％更大至约5,000％更大、约35％更大至约4,000％更大、约35％更大至约3,000％更大、约35％更大至约2,000％更大、约35％更大至约1,000％更大、约35％更大至约500％更大、约35％更大至约480％更大、约35％更大至约460％更大、约35％更大至约440％更大、约35％更大至约420％更大、约35％更大至约400％更大、约35％更大至约380％更大、约35％更大至约360％更大、约35％更大至约34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大、约220％更大至约3,000％更大、约220％更大至约2,000％更大、约220％更大至约1,000％更大、约220％更大至约500％更大、约220％更大至约480％更大、约220％更大至约460％更大、约220％更大至约440％更大、约220％更大至约420％更大、约220％更大至约400％更大、约220％更大至约380％更大、约220％更大至约360％更大、约220％更大至约340％更大、约220％更大至约320％更大、约220％更大至约300％更大、约220％更大至约280％更大、约220％更大至约260％更大、约220％更大至约240％更大、约240％更大至约10,000％更大、约240％更大至约9,000％更大、约240％更大至约8,000％更大、约240％更大至约7,000％更大、约240％更大至约6,000％更大、约240％更大至约5,000％更大、约240％更大至约4,000％更大、约240％更大至约3,000％更大、约240％更大至约2,000％更大、约240％更大至约1,000％更大、约240％更大至约500％更大、约240％更大至约480％更大、约240％更大至约460％更大、约240％更大至约440％更大、约240％更大至约420％更大、约240％更大至约400％更大、约240％更大至约380％更大、约240％更大至约360％更大、约240％更大至约340％更大、约240％更大至约320％更大、约240％更大至约300％更大、约240％更大至约280％更大、约240％更大至约260％更大、约260％更大至约10,000％更大、约260％更大至约9,000％更大、约260％更大至约8,000％更大、约260％更大至约7,000％更大、约260％更大至约6,000％更大、约260％更大至约5,000％更大、约260％更大至约4,000％更大、约260％更大至约3,000％更大、约260％更大至约2,000％更大、约260％更大至约1,000％更大、约260％更大至约500％更大、约260％更大至约480％更大、约260％更大至约460％更大、约260％更大至约440％更大、约260％更大至约420％更大、约260％更大至约400％更大、约260％更大至约380％更大、约260％更大至约360％更大、约260％更大至约340％更大、约260％更大至约320％更大、约260％更大至约300％更大、约260％更大至约280％更大、约280％更大至约10,000％更大、约280％更大至约9,000％更大、约280％更大至约8,000％更大、约280％更大至约7,000％更大、约280％更大至约6,000％更大、约280％更大至约5,000％更大、约280％更大至约4,000％更大、约280％更大至约3,000％更大、约280％更大至约2,000％更大、约280％更大至约1,000％更大、约280％更大至约500％更大、约280％更大至约480％更大、约280％更大至约460％更大、约280％更大至约440％更大、约280％更大至约420％更大、约280％更大至约400％更大、约280％更大至约380％更大、约280％更大至约360％更大、约280％更大至约340％更大、约280％更大至约320％更大、约280％更大至约300％更大、约300％更大至约10,000％更大、约300％更大至约9,000％更大、约300％更大至约8,000％更大、约300％更大至约7,000％更大、约300％更大至约6,000％更大、约300％更大至约5,000％更大、约300％更大至约4,000％更大、约300％更大至约3,000％更大、约300％更大至约2,000％更大、约300％更大至约1,000％更大、约300％更大至约500％更大、约300％更大至约480％更大、约300％更大至约460％更大、约300％更大至约440％更大、约300％更大至约420％更大、约300％更大至约400％更大、约300％更大至约380％更大、约300％更大至约360％更大、约300％更大至约340％更大、约300％更大至约320％更大、约320％更大至约10,000％更大、约320％更大至约9,000％更大、约320％更大至约8,000％更大、约320％更大至约7,000％更大、约320％更大至约6,000％更大、约320％更大至约5,000％更大、约320％更大至约4,000％更大、约320％更大至约3,000％更大、约320％更大至约2,000％更大、约320％更大至约1,000％更大、约320％更大至约500％更大、约320％更大至约480％更大、约320％更大至约460％更大、约320％更大至约440％更大、约320％更大至约420％更大、约320％更大至约400％更大、约320％更大至约380％更大、约320％更大至约360％更大、约320％更大至约340％更大、约340％更大至约10,000％更大、约340％更大至约9,000％更大、约340％更大至约8,000％更大、约340％更大至约7,000％更大、约340％更大至约6,000％更大、约340％更大至约5,000％更大、约340％更大至约4,000％更大、约340％更大至约3,000％更大、约340％更大至约2,000％更大、约340％更大至约1,000％更大、约340％更大至约500％更大、约340％更大至约480％更大、约340％更大至约460％更大、约340％更大至约440％更大、约340％更大至约420％更大、约340％更大至约400％更大、约340％更大至约380％更大、约340％更大至约360％更大、约360％更大至约10,000％更大、约360％更大至约9,000％更大、约360％更大至约8,000％更大、约360％更大至约7,000％更大、约360％更大至约6,000％更大、约360％更大至约5,000％更大、约360％更大至约4,000％更大、约360％更大至约3,000％更大、约360％更大至约2,000％更大、约360％更大至约1,000％更大、约360％更大至约500％更大、约360％更大至约480％更大、约360％更大至约460％更大、约360％更大至约440％更大、约360％更大至约420％更大、约360％更大至约400％更大、约360％更大至约380％更大、约380％更大至约10,000％更大、约380％更大至约9,000％更大、约380％更大至约8,000％更大、约380％更大至约7,000％更大、约380％更大至约6,000％更大、约380％更大至约5,000％更大、约380％更大至约4,000％更大、约380％更大至约3,000％更大、约380％更大至约2,000％更大、约380％更大至约1,000％更大、约380％更大至约500％更大、约380％更大至约480％更大、约380％更大至约460％更大、约380％更大至约440％更大、约380％更大至约420％更大、约380％更大至约400％更大、约400％更大至约10,000％更大、约400％更大至约9,000％更大、约400％更大至约8,000％更大、约400％更大至约7,000％更大、约400％更大至约6,000％更大、约400％更大至约5,000％更大、约400％更大至约4,000％更大、约400％更大至约3,000％更大、约400％更大至约2,000％更大、约400％更大至约1,000％更大、约400％更大至约500％更大、约400％更大至约480％更大、约400％更大至约460％更大、约400％更大至约440％更大、约400％更大至约420％更大、约420％更大至约10,000％更大、约420％更大至约9,000％更大、约420％更大至约8,000％更大、约420％更大至约7,000％更大、约420％更大至约6,000％更大、约420％更大至约5,000％更大、约420％更大至约4,000％更大、约420％更大至约3,000％更大、约420％更大至约2,000％更大、约420％更大至约1,000％更大、约420％更大至约500％更大、约420％更大至约480％更大、约420％更大至约460％更大、约420％更大至约440％更大、约440％更大至约10,000％更大、约440％更大至约9,000％更大、约440％更大至约8,000％更大、约440％更大至约7,000％更大、约440％更大至约6,000％更大、约440％更大至约5,000％更大、约440％更大至约4,000％更大、约440％更大至约3,000％更大、约440％更大至约2,000％更大、约440％更大至约1,000％更大、约440％更大至约500％更大、约440％更大至约480％更大、约440％更大至约460％更大、约460％更大至约10,000％更大、约460％更大至约9,000％更大、约460％更大至约8,000％更大、约460％更大至约7,000％更大、约460％更大至约6,000％更大、约460％更大至约5,000％更大、约460％更大至约4,000％更大、约460％更大至约3,000％更大、约460％更大至约2,000％更大、约460％更大至约1,000％更大、约460％更大至约500％更大、约460％更大至约480％更大、约480％更大至约10,000％更大、约480％更大至约9,000％更大、约480％更大至约8,000％更大、约480％更大至约7,000％更大、约480％更大至约6,000％更大、约480％更大至约5,000％更大、约480％更大至约4,000％更大、约480％更大至约3,000％更大、约480％更大至约2,000％更大、约480％更大至约1,000％更大、约480％更大至约500％更大、约500％更大至约10,000％更大、约500％更大至约9,000％更大、约500％更大至约8,000％更大、约500％更大至约7,000％更大、约500％更大至约6,000％更大、约500％更大至约5,000％更大、约500％更大至约4,000％更大、约500％更大至约3,000％更大、约500％更大至约2,000％更大、约500％更大至约1,000％更大、约1,000％更大至约10,000％更大、约1,000％更大至约9,000％更大、约1,000％更大至约8,000％更大、约1,000％更大至约7,000％更大、约1,000％更大至约6,000％更大、约1,000％更大至约5,000％更大、约1,000％更大至约4,000％更大、约1,000％更大至约3,000％更大、约1,000％更大至约2,000％更大、约2,000％更大至约10,000％更大、约2,000％更大至约9,000％更大、约2,000％更大至约8,000％更大、约2,000％更大至约7,000％更大、约2,000％更大至约6,000％更大、约2,000％更大至约5,000％更大、约2,000％更大至约4,000％更大、约2,000％更大至约3,000％更大、约3,000％更大至约10,000％更大、约3,000％更大至约9,000％更大、约3,000％更大至约8,000％更大、约3,000％更大至约7,000％更大、约3,000％更大至约6,000％更大、约3,000％更大至约5,000％更大、约3,000％更大至约4,000％更大、约4,000％更大至约10,000％更大、约4,000％更大至约9,000％更大、约4,000％更大至约8,000％更大、约4,000％更大至约7,000％更大、约4,000％更大至约6,000％更大、约4,000％更大至约5,000％更大、约5,000％更大至约10,000％更大、约5,000％更大至约9,000％更大、约5,000％更大至约8,000％更大、约5,000％更大至约7,000％更大、约5,000％更大至约6,000％更大、约6,000％更大至约10,000％更大、约6,000％更大至约9,000％更大、约6,000％更大至约8,000％更大、约6,000％更大至约7,000％更大、约7,000％更大至约10,000％更大、约7,000％更大至约9,000％更大、约7,000％更大至约8,000％更大、约8,000％更大至约10,000％更大、约8,000％更大至约9,000％更大或约9,000％更大至约10,000％更大)于在约7.0至约8.0(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的pH下的KD。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，在约4.0至约6.5(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的pH下的解离速率更快(例如，至少0.2倍更快、至少0.3倍、至少0.4倍、至少0.5倍、至少0.6倍、至少0.7倍、至少0.8倍、至少0.9倍、至少1.0倍、至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少10.5倍、至少11.0倍、至少11.5倍、至少12.0倍、至少12.5倍、至少13.0倍、至少13.5倍、至少14.0倍、至少14.5倍、至少15.0倍、至少15.5倍、至少16.0倍、至少16.5倍、至少17.0倍、至少17.5倍、至少18.0倍、至少18.5倍、至少19.0倍、至少19.5倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少55倍、至少60倍、至少65倍、至少70倍、至少75倍、至少80倍、至少85倍、至少90倍、至少95倍或至少100倍更快或约0.2倍至约100倍更快、约0.2倍至约90倍更快、约0.2倍至约80倍更快、约0.2倍至约70倍更快、约0.2倍至约60倍更快、约0.2倍至约50倍更快、约0.2倍至约40倍更快、约0.2倍至约30倍更快、约0.2倍至约20倍更快、约0.2倍至约15倍更快、约0.2倍至约10倍更快、约0.2倍至约5倍、约0.2倍至约2倍更快、约0.2倍至约1倍更快、约0.2倍至约0.5倍更快、约0.5倍至约100倍更快、约0.5倍至约90倍更快、约0.5倍至约80倍更快、约0.5倍至约70倍更快、约0.5倍至约60倍更快、约0.5倍至约50倍更快、约0.5倍至约40倍更快、约0.5倍至约30倍更快、约0.5倍至约20倍更快、约0.5倍至约15倍更快、约0.5倍至约10倍更快、约0.5倍至约5倍、约0.5倍至约2倍更快、约0.5倍至约1倍更快、约1倍至约100倍更快、约1倍至约90倍更快、约1倍至约80倍更快、约1倍至约70倍更快、约1倍至约60倍更快、约1倍至约50倍更快、约1倍至约40倍更快、约1倍至约30倍更快、约1倍至约20倍更快、约1倍至约15倍更快、约1倍至约10倍更快、约1倍至约5倍、约1倍至约2倍更快、约2倍至约100倍更快、约2倍至约90倍更快、约2倍至约80倍更快、约2倍至约70倍更快、约2倍至约60倍更快、约2倍至约50倍更快、约2倍至约40倍更快、约2倍至约30倍更快、约2倍至约20倍更快、约2倍至约15倍更快、约2倍至约10倍更快、约2倍至约5倍、约5倍至约100倍更快、约5倍至约90倍更快、约5倍至约80倍更快、约5倍至约70倍更快、约5倍至约60倍更快、约5倍至约50倍更快、约5倍至约40倍更快、约5倍至约30倍更快、约5倍至约20倍更快、约5倍至约15倍更快、约5倍至约10倍更快、约10倍至约100倍更快、约10倍至约90倍更快、约10倍至约80倍更快、约10倍至约70倍更快、约10倍至约60倍更快、约10倍至约50倍更快、约10倍至约40倍更快、约10倍至约30倍更快、约10倍至约20倍更快、约10倍至约15倍更快、约15倍至约100倍更快、约15倍至约90倍更快、约15倍至约80倍更快、约15倍至约70倍更快、约15倍至约60倍更快、约15倍至约50倍更快、约15倍至约40倍更快、约15倍至约30倍更快、约15倍至约20倍更快、约20倍至约100倍更快、约20倍至约90倍更快、约20倍至约80倍更快、约20倍至约70倍更快、约20倍至约60倍更快、约20倍至约50倍更快、约20倍至约40倍更快、约20倍至约30倍更快、约30倍至约100倍更快、约30倍至约90倍更快、约30倍至约80倍更快、约30倍至约70倍更快、约30倍至约60倍更快、约30倍至约50倍更快、约30倍至约40倍更快、约40倍至约100倍更快、约40倍至约90倍更快、约40倍至约80倍更快、约40倍至约70倍更快、约40倍至约60倍更快、约40倍至约50倍更快、约50倍至约100倍更快、约50倍至约90倍更快、约50倍至约80倍更快、约50倍至约70倍更快、约50倍至约60倍更快、约60倍至约100倍更快、约60倍至约90倍更快、约60倍至约80倍更快、约60倍至约70倍更快、约70倍至约100倍更快、约70倍至约90倍更快、约70倍至约80倍更快、约80倍至约100倍更快、约80倍至约90倍更快或约90倍至约100倍更快)于在约7.0至约8.0(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的pH下的解离速率。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，在约4.0至约6.5(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的pH下的解离常数(KD)更大(例如，可检测地更大)(例如，至少0.2倍更大、至少0.3倍、至少0.4倍、至少0.5倍、至少0.6倍、至少0.7倍、至少0.8倍、至少0.9倍、至少1.0倍、至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少10.5倍、至少11.0倍、至少11.5倍、至少12.0倍、至少12.5倍、至少13.0倍、至少13.5倍、至少14.0倍、至少14.5倍、至少15.0倍、至少15.5倍、至少16.0倍、至少16.5倍、至少17.0倍、至少17.5倍、至少18.0倍、至少18.5倍、至少19.0倍、至少19.5倍、至少20倍更大、至少25倍更大、至少30倍更大、至少35倍更大、至少40倍更大、至少45倍更大、至少50倍更大、至少55倍更大、至少60倍更大、至少65倍更大、至少70倍更大、至少75倍更大、至少80倍更大、至少85倍更大、至少90倍更大、至少95倍更大或至少100倍更大、或约0.2倍至约100倍更大、约0.2倍至约90倍更大、约0.2倍至约80倍更大、约0.2倍至约70倍更大、约0.2倍至约60倍更大、约0.2倍至约50倍更大、约0.2倍至约40倍更大、约0.2倍至约30倍更大、约0.2倍至约25倍更大、约0.2倍至约20倍更大、约0.2倍至约15倍更大、约0.2倍至约10倍更大、约0.2倍至约8倍更大、约0.2倍至约5倍更大、约0.2倍至约2倍更大、约0.2倍至约1倍更大、约0.2倍至约0.5倍更大、约0.5倍至约100倍更大、约0.5倍至约90倍更大、约0.5倍至约80倍更大、约0.5倍至约70倍更大、约0.5倍至约60倍更大、约0.5倍至约50倍更大、约0.5倍至约40倍更大、约0.5倍至约30倍更大、约0.5倍至约25倍更大、约0.5倍至约20倍更大、约0.5倍至约15倍更大、约0.5倍至约10倍更大、约0.5倍至约8倍更大、约0.5倍至约5倍更大、约0.5倍至约2倍更大、约0.5倍至约1倍更大、约1倍至约100倍更大、约1倍至约90倍更大、约1倍至约80倍更大、约1倍至约70倍更大、约1倍至约60倍更大、约1倍至约50倍更大、约1倍至约40倍更大、约1倍至约30倍更大、约1倍至约25倍更大、约1倍至约20倍更大、约1倍至约15倍更大、约1倍至约10倍更大、约1倍至约8倍更大、约1倍至约5倍更大、约1倍至约2倍更大、约2倍至约100倍更大、约2倍至约90倍更大、约2倍至约80倍更大、约2倍至约70倍更大、约2倍至约60倍更大、约2倍至约50倍更大、约2倍至约40倍更大、约2倍至约30倍更大、约2倍至约25倍更大、约2倍至约20倍更大、约2倍至约15倍更大、约2倍至约10倍更大、约2倍至约8倍更大、约2倍至约5倍更大、约5倍至约100倍更大、约5倍至约90倍更大、约5倍至约80倍更大、约5倍至约70倍更大、约5倍至约60倍更大、约5倍至约50倍更大、约5倍至约40倍更大、约5倍至约30倍更大、约5倍至约25倍更大、约5倍至约20倍更大、约5倍至约15倍更大、约5倍至约10倍更大、约5倍至约8倍更大、约8倍至约100倍更大、约8倍至约90倍更大、约8倍至约80倍更大、约8倍至约70倍更大、约8倍至约60倍更大、约8倍至约50倍更大、约8倍至约40倍更大、约8倍至约30倍更大、约8倍至约25倍更大、约8倍至约20倍更大、约8倍至约15倍更大、约8倍至约10倍更大、约10倍至约100倍更大、约10倍至约90倍更大、约10倍至约80倍更大、约10倍至约70倍更大、约10倍至约60倍更大、约10倍至约50倍更大、约10倍至约40倍更大、约10倍至约30倍更大、约10倍至约25倍更大、约10倍至约20倍更大、约10倍至约15倍更大、约15倍至约100倍更大、约15倍至约90倍更大、约15倍至约80倍更大、约15倍至约70倍更大、约15倍至约60倍更大、约15倍至约50倍更大、约15倍至约40倍更大、约15倍至约30倍更大、约15倍至约25倍更大、约15倍至约20倍更大、约20倍至约100倍更大、约20倍至约90倍更大、约20倍至约80倍更大、约20倍至约70倍更大、约20倍至约60倍更大、约20倍至约50倍更大、约20倍至约40倍更大、约20倍至约30倍更大、约20倍至约25倍更大、约25倍至约100倍更大、约25倍至约90倍更大、约25倍至约80倍更大、约25倍至约70倍更大、约25倍至约60倍更大、约25倍至约50倍更大、约25倍至约40倍更大、约25倍至约30倍更大、约30倍至约100倍更大、约30倍至约90倍更大、约30倍至约80倍更大、约30倍至约70倍更大、约30倍至约60倍更大、约30倍至约50倍更大、约30倍至约40倍更大、约40倍至约100倍更大、约40倍至约90倍更大、约40倍至约80倍更大、约40倍至约70倍更大、约40倍至约60倍更大、约40倍至约50倍更大、约50倍至约100倍更大、约50倍至约90倍更大、约50倍至约80倍更大、约50倍至约70倍更大、约50倍至约60倍更大、约60倍至约100倍更大、约60倍至约90倍更大、约60倍至约80倍更大、约60倍至约70倍更大、约70倍至约100倍更大、约70倍至约90倍更大、约70倍至约80倍更大、约80倍至约100倍更大、约80倍至约90倍更大或约90倍至约100倍更大)于在约7.0至约8.0(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的pH下的KD。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，在约7.0至约8.0(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的pH下的KD在约1pM至约5μM之间(例如，约1pM至约2μM、约1pM至约1μM、约1pM至约500nM、约1pM至约250nM、约1pM至约240nM、约1pM至约230nM、约1pM至约220nM、约1pM至约210nM、约1pM至约200nM、约1pM至约190nM、约1pM至约180nM、约1pM至约170nM、约1pM至约160nM、约1pM至约150nM、约1pM至约140nM、约1pM至约130nM、约1pM至约120nM、约1pM至约110nM、约1pM至约100nM、约1pM至约95nM、约1pM至约90nM、约1pM至约85nM、约1pM至约80nM、约1pM至约75nM、约1pM至约70nM、约1pM至约65nM、约1pM至约60nM、约1pM至约55nM、约1pM至约50nM、约1pM至约45nM、约1pM至约40nM、约1pM至约35nM、约1pM至约30nM、约1pM至约25nM、约1pM至约20nM、约1pM至约15nM、约1pM至约10nM、约1pM至约5nM、约1pM至约2nM、约1pM至约1nM、约1pM至约950pM、约1pM至约900pM、约1pM至约850pM、约1pM至约800pM、约1pM至约750pM、约1pM至约700pM、约1pM至约650pM、约1pM至约600pM、约1pM至约550pM、约1pM至约500pM、约1pM至约450pM、约1pM至约400pM、约1pM至约350pM、约1pM至约300pM、约1pM至约250pM、约1pM至约200pM、约1pM至约150pM、约1pM至约100pM、约1pM至约90pM、约1pM至约80pM、约1pM至约70pM、约1pM至约60pM、约1pM至约50pM、约1pM至约40pM、约1pM至约30pM、约1pM至约20pM、约1pM至约10pM、约1pM至约5pM、约1pM至约4pM、约1pM至约3pM、约1pM至约2pM、约2pM至约5μM、约2pM至约2μM、约2pM至约1μM、约2pM至约500nM、约2pM至约250nM、约2pM至约240nM、约2pM至约230nM、约2pM至约220nM、约2pM至约210nM、约2pM至约200nM、约2pM至约190nM、约2pM至约180nM、约2pM至约170nM、约2pM至约160nM、约2pM至约150nM、约2pM至约140nM、约2pM至约130nM、约2pM至约120nM、约2pM至约110nM、约2pM至约100nM、约2pM至约95nM、约2pM至约90nM、约2pM至约85nM、约2pM至约80nM、约2pM至约75nM、约2pM至约70nM、约2pM至约65nM、约2pM至约60nM、约2pM至约55nM、约2pM至约50nM、约2pM至约45nM、约2pM至约40nM、约2pM至约35nM、约2pM至约30nM、约2pM至约25nM、约2pM至约20nM、约2pM至约15nM、约2pM至约10nM、约2pM至约5nM、约2pM至约2nM、约2pM至约1nM、约2pM至约950pM、约2pM至约900pM、约2pM至约850pM、约2pM至约800pM、约2pM至约750pM、约2pM至约700pM、约2pM至约650pM、约2pM至约600pM、约2pM至约550pM、约2pM至约500pM、约2pM至约450pM、约2pM至约400pM、约2pM至约350pM、约2pM至约300pM、约2pM至约250pM、约2pM至约200pM、约2pM至约150pM、约2pM至约100pM、约2pM至约90pM、约2pM至约80pM、约2pM至约70pM、约2pM至约60pM、约2pM至约50pM、约2pM至约40pM、约2pM至约30pM、约2pM至约20pM、约2pM至约10pM、约2pM至约5pM、约2pM至约4pM、约2pM至约3pM、约5pM至约5μM、约5pM至约2μM、约5pM至约1μM、约5pM至约500nM、约5pM至约250nM、约5pM至约240nM、约5pM至约230nM、约5pM至约220nM、约5pM至约210nM、约5pM至约200nM、约5pM至约190nM、约5pM至约180nM、约5pM至约170nM、约5pM至约160nM、约5pM至约150nM、约5pM至约140nM、约5pM至约130nM、约5pM至约120nM、约5pM至约110nM、约5pM至约100nM、约5pM至约95nM、约5pM至约90nM、约5pM至约85nM、约5pM至约80nM、约5pM至约75nM、约5pM至约70nM、约5pM至约65nM、约5pM至约60nM、约5pM至约55nM、约5pM至约50nM、约5pM至约45nM、约5pM至约40nM、约5pM至约35nM、约5pM至约30nM、约5pM至约25nM、约5pM至约20nM、约5pM至约15nM、约5pM至约10nM、约5pM至约5nM、约5pM至约2nM、约5pM至约1nM、约5pM至约950pM、约5pM至约900pM、约5pM至约850pM、约5pM至约800pM、约5pM至约750pM、约5pM至约700pM、约5pM至约650pM、约5pM至约600pM、约5pM至约550pM、约5pM至约500pM、约5pM至约450pM、约5pM至约400pM、约5pM至约350pM、约5pM至约300pM、约5pM至约250pM、约5pM至约200pM、约5pM至约150pM、约5pM至约100pM、约5pM至约90pM、约5pM至约80pM、约5pM至约70pM、约5pM至约60pM、约5pM至约50pM、约5pM至约40pM、约5pM至约30pM、约5pM至约20pM、约5pM至约10pM、约10pM至约5μM、约10pM至约2μM、约10pM至约1μM、约10pM至约500nM、约10pM至约250nM、约10pM至约240nM、约10pM至约230nM、约10pM至约220nM、约10pM至约210nM、约10pM至约200nM、约10pM至约190nM、约10pM至约180nM、约10pM至约170nM、约10pM至约160nM、约10pM至约150nM、约10pM至约140nM、约10pM至约130nM、约10pM至约120nM、约10pM至约110nM、约10pM至约100nM、约10pM至约95nM、约10pM至约90nM、约10pM至约85nM、约10pM至约80nM、约10pM至约75nM、约10pM至约70nM、约10pM至约65nM、约10pM至约60nM、约10pM至约55nM、约10pM至约50nM、约10pM至约45nM、约10pM至约40nM、约10pM至约35nM、约10pM至约30nM、约10pM至约25nM、约10pM至约20nM、约10pM至约15nM、约10pM至约10nM、约10pM至约5nM、约10pM至约2nM、约10pM至约1nM、约10pM至约950pM、约10pM至约900pM、约10pM至约850pM、约10pM至约800pM、约10pM至约750pM、约10pM至约700pM、约10pM至约650pM、约10pM至约600pM、约10pM至约550pM、约10pM至约500pM、约10pM至约450pM、约10pM至约400pM、约10pM至约350pM、约10pM至约300pM、约10pM至约250pM、约10pM至约200pM、约10pM至约150pM、约10pM至约100pM、约10pM至约90pM、约10pM至约80pM、约10pM至约70pM、约10pM至约60pM、约10pM至约50pM、约10pM至约40pM、约10pM至约30pM、约10pM至约20pM、约15pM至约5μM、约15pM至约2μM、约15pM至约1μM、约15pM至约500nM、约15pM至约250nM、约15pM至约240nM、约15pM至约230nM、约15pM至约220nM、约15pM至约210nM、约15pM至约200nM、约15pM至约190nM、约15pM至约180nM、约15pM至约170nM、约15pM至约160nM、约15pM至约150nM、约15pM至约140nM、约15pM至约130nM、约15pM至约120nM、约15pM至约110nM、约15pM至约100nM、约15pM至约95nM、约15pM至约90nM、约15pM至约85nM、约15pM至约80nM、约15pM至约75nM、约15pM至约70nM、约15pM至约65nM、约15pM至约60nM、约15pM至约55nM、约15pM至约50nM、约15pM至约45nM、约15pM至约40nM、约15pM至约35nM、约15pM至约30nM、约15pM至约25nM、约15pM至约20nM、约15pM至约15nM、约15pM至约10nM、约15pM至约5nM、约15pM至约2nM、约15pM至约1nM、约15pM至约950pM、约15pM至约900pM、约15pM至约850pM、约15pM至约800pM、约15pM至约750pM、约15pM至约700pM、约15pM至约650pM、约15pM至约600pM、约15pM至约550pM、约15pM至约500pM、约15pM至约450pM、约15pM至约400pM、约15pM至约350pM、约15pM至约300pM、约15pM至约250pM、约15pM至约200pM、约15pM至约150pM、约15pM至约100pM、约15pM至约90pM、约15pM至约80pM、约15pM至约70pM、约15pM至约60pM、约15pM至约50pM、约15pM至约40pM、约15pM至约30pM、约15pM至约20pM、约20pM至约5μM、约20pM至约2μM、约20pM至约1μM、约20pM至约500nM、约20pM至约250nM、约20pM至约240nM、约20pM至约230nM、约20pM至约220nM、约20pM至约210nM、约20pM至约200nM、约20pM至约190nM、约20pM至约180nM、约20pM至约170nM、约20pM至约160nM、约20pM至约150nM、约20pM至约140nM、约20pM至约130nM、约20pM至约120nM、约20pM至约110nM、约20pM至约100nM、约20pM至约95nM、约20pM至约90nM、约20pM至约85nM、约20pM至约80nM、约20pM至约75nM、约20pM至约70nM、约20pM至约65nM、约20pM至约60nM、约20pM至约55nM、约20pM至约50nM、约20pM至约45nM、约20pM至约40nM、约20pM至约35nM、约20pM至约30nM、约20pM至约25nM、约20pM至约20nM、约20pM至约15nM、约20pM至约10nM、约20pM至约5nM、约20pM至约2nM、约20pM至约1nM、约20pM至约950pM、约20pM至约900pM、约20pM至约850pM、约20pM至约800pM、约20pM至约750pM、约20pM至约700pM、约20pM至约650pM、约20pM至约600pM、约20pM至约550pM、约20pM至约500pM、约20pM至约450pM、约20pM至约400pM、约20pM至约350pM、约20pM至约300pM、约20pM至约250pM、约20pM至约20pM、约200pM至约150pM、约20pM至约100pM、约20pM至约90pM、约20pM至约80pM、约20pM至约70pM、约20pM至约60pM、约20pM至约50pM、约20pM至约40pM、约20pM至约30pM、约30pM至约5μM、约30pM至约2μM、约30pM至约1μM、约30pM至约500n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00nM、约200nM至约5μM、约200nM至约2μM、约200nM至约1μM、约200nM至约500nM、约200nM至约250nM、约200nM至约240nM、约200nM至约230nM、约200nM至约220nM、约200nM至约210nM、约210nM至约5μM、约210nM至约2μM、约210nM至约1μM、约210nM至约500nM、约210nM至约250nM、约210nM至约240nM、约210nM至约230nM、约210nM至约220nM、约220nM至约5μM、约220nM至约2μM、约220nM至约1μM、约220nM至约500nM、约220nM至约250nM、约220nM至约240nM、约220nM至约230nM、约230nM至约5μM、约230nM至约2μM、约230nM至约1μM、约230nM至约500nM、约230nM至约250nM、约230nM至约240nM、约240nM至约5μM、约240nM至约2μM、约240nM至约1μM、约240nM至约500nM、约240nM至约250nM、约250nM至约5μM、约250nM至约2μM、约250nM至约1μM、约250nM至约500nM、约500nM至约5μM、约500nM至约2μM、约500nM至约1μM、约1μM至约5μM、约1μM至约2μM或约2μM至约5μM)。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实施例中，在约4.0至约6.5(例如，本文所描述的此范围的子范围中的任一者)的pH下的KD可以大于1nM(例如，介于约1nM至约1mM、约1nM至约900μM、约1nM至约800μM、约1nM至约700μM、约1nM至约600μM、约1nM至约500μM、约1nM至约400μM、约1nM至约300μM、约1nM至约200μM、约1nM至约100μM、约1nM至约90μM、约1nM至约80μM、约1nM至约70μM、约1nM至约60μM、约1nM至约50μM、约1nM至约40μM、约1nM至约30μM、约1nM至约20μM、约1nM至约10μM、约1nM至约5μM、约1nM至约4μM、约1nM至约2μM、约1nM至约1μM、约1nM至约900nM、约1nM至约800nM、约1nM至约700nM、约1nM至约600nM、约1nM至约500nM、约1nM至约400nM、约1nM至约300nM、约1nM至约200nM、约1nM至约100nM、约1nM至约90nM、约1nM至约80nM、约1nM至约70nM、约1nM至约60nM、约1nM至约50nM、约1nM至约40nM、约1nM至约30nM、约2nM至约1mM、约2nM至约900μM、约2nM至约800μM、约2nM至约700μM、约2nM至约600μM、约2nM至约500μM、约2nM至约400μM、约2nM至约300μM、约2nM至约200μM、约2nM至约100μM、约2nM至约90μM、约2nM至约80μM、约2nM至约70μM、约2nM至约60μM、约2nM至约50μM、约2nM至约40μM、约2nM至约30μM、约2nM至约20μM、约2nM至约10μM、约2nM至约5μM、约2nM至约4μM、约2nM至约2μM、约2nM至约1μM、约2nM至约900nM、约2nM至约800nM、约2nM至约700nM、约2nM至约600nM、约2nM至约500nM、约2nM至约400nM、约2nM至约300nM、约2nM至约200nM、约2nM至约100nM、约2nM至约90nM、约2nM至约80nM、约2nM至约70nM、约2nM至约60nM、约2nM至约50nM、约2nM至约40nM、约2nM至约30nM、约5nM至约1mM、约5nM至约900μM、约5nM至约800μM、约5nM至约700μM、约5nM至约600μM、约5nM至约500μM、约5nM至约400μM、约5nM至约300μM、约5nM至约200μM、约5nM至约100μM、约5nM至约90μM、约5nM至约80μM、约5nM至约70μM、约5nM至约60μM、约5nM至约50μM、约5nM至约40μM、约5nM至约30μM、约5nM至约20μM、约5nM至约10μM、约5nM至约5μM、约5nM至约4μM、约5nM至约2μM、约5nM至约1μM、约5nM至约900nM、约5nM至约800nM、约5nM至约700nM、约5nM至约600nM、约5nM至约500nM、约5nM至约400nM、约5nM至约300nM、约5nM至约200nM、约5nM至约100nM、约5nM至约90nM、约5nM至约80nM、约5nM至约70nM、约5nM至约60nM、约5nM至约50nM、约5nM至约40nM、约5nM至约30nM、约10nM至约1mM、约10nM至约900μM、约10nM至约800μM、约10nM至约700μM、约10nM至约600μM、约10nM至约500μM、约10nM至约400μM、约10nM至约300μM、约10nM至约200μM、约10nM至约100μM、约10nM至约90μM、约10nM至约80μM、约10nM至约70μM、约10nM至约60μM、约10nM至约50μM、约10nM至约40μM、约10nM至约30μM、约10nM至约20μM、约10nM至约10μM、约10nM至约5μM、约10nM至约4μM、约10nM至约2μM、约10nM至约1μM、约10nM至约900nM、约10nM至约800nM、约10nM至约700nM、约10nM至约600nM、约10nM至约500nM、约10nM至约400nM、约10nM至约300nM、约10nM至约200nM、约10nM至约100nM、约10nM至约90nM、约10nM至约80nM、约10nM至约70nM、约10nM至约60nM、约10nM至约50nM、约10nM至约40nM、约10nM至约30nM、约20nM至约1mM、约20nM至约900μM、约20nM至约800μM、约20nM至约700μM、约20nM至约600μM、约20nM至约500μM、约20nM至约400μM、约20nM至约300μM、约20nM至约200μM、约20nM至约100μM、约20nM至约90μM、约20nM至约80μM、约20nM至约70μM、约20nM至约60μM、约20nM至约50μM、约20nM至约40μM、约20nM至约30μM、约20nM至约20μM、约20nM至约10μM、约20nM至约5μM、约20nM至约4μM、约20nM至约2μM、约20nM至约1μM、约20nM至约900nM、约20nM至约800nM、约20nM至约700nM、约20nM至约600nM、约20nM至约500nM、约20nM至约400nM、约20nM至约300nM、约20nM至约200nM、约20nM至约100nM、约20nM至约90nM、约20nM至约80nM、约20nM至约70nM、约20nM至约60nM、约20nM至约50nM、约20nM至约40nM、约20nM至约30nM；约1μM至约1mM、约1μM至约900μM、约1μM至约800μM、约1μM至约700μM、约1μM至约600μM、约1μM至约500μM、约1μM至约400μM、约1μM至约300μM、约1μM至约200μM、约1μM至约100μM、约1μM至约90μM、约1μM至约80μM、约1μM至约70μM、约1μM至约60μM、约1μM至约50μM、约1μM至约40μM、约1μM至约30μM、约1μM至约20μM、约1μM至约10μM、约1μM至约5μM、约1μM至约4μM、约1μM至约3μM、约1μM至约2μM、约2μM至约1mM、约2μM至约900μM、约2μM至约800μM、约2μM至约700μM、约2μM至约600μM、约2μM至约500μM、约2μM至约400μM、约2μM至约300μM、约2μM至约200μM、约2μM至约100μM、约2μM至约90μM、约2μM至约80μM、约2μM至约70μM、约2μM至约60μM、约2μM至约50μM、约2μM至约40μM、约2μM至约30μM、约2μM至约20μM、约2μM至约10μM、约2μM至约5μM、约2μM至约4μM、约2μM至约3μM、约5μM至约1mM、约5μM至约900μM、约5μM至约800μM、约5μM至约700μM、约5μM至约600μM、约5μM至约500μM、约5μM至约400μM、约5μM至约300μM、约5μM至约200μM、约5μM至约100μM、约5μM至约90μM、约5μM至约80μM、约5μM至约70μM、约5μM至约60μM、约5μM至约50μM、约5μM至约40μM、约5μM至约30μM、约5μM至约20μM、约5μM至约10μM、约10μM至约1mM、约10μM至约900μM、约10μM至约800μM、约10μM至约700μM、约10μM至约600μM、约10μM至约500μM、约10μM至约400μM、约10μM至约300μM、约10μM至约200μM、约10μM至约100μM、约10μM至约90μM、约10μM至约80μM、约10μM至约70μM、约10μM至约60μM、约10μM至约50μM、约10μM至约40μM、约10μM至约30μM、约10μM至约20μM、约20μM至约1mM、约20μM至约900μM、约20μM至约800μM、约20μM至约700μM、约20μM至约600μM、约20μM至约500μM、约20μM至约400μM、约20μM至约300μM、约20μM至约200μM、约20μM至约100μM、约20μM至约90μM、约20μM至约80μM、约20μM至约70μM、约20μM至约60μM、约20μM至约50μM、约20μM至约40μM、约20μM至约30μM、约30μM至约1mM、约30μM至约900μM、约30μM至约800μM、约30μM至约700μM、约30μM至约600μM、约30μM至约500μM、约30μM至约400μM、约30μM至约300μM、约30μM至约200μM、约30μM至约100μM、约30μM至约90μM、约30μM至约80μM、约30μM至约70μM、约30μM至约60μM、约30μM至约50μM、约30μM至约40μM、约40μM至约1mM、约40μM至约900μM、约40μM至约800μM、约40μM至约700μM、约40μM至约600μM、约40μM至约500μM、约40μM至约400μM、约40μM至约300μM、约40μM至约200μM、约40μM至约100μM、约40μM至约90μM、约40μM至约80μM、约40μM至约70μM、约40μM至约60μM、约40μM至约50μM、约50μM至约1mM、约50μM至约900μM、约50μM至约800μM、约50μM至约700μM、约50μM至约600μM、约50μM至约500μM、约50μM至约400μM、约50μM至约300μM、约50μM至约200μM、约50μM至约100μM、约50μM至约90μM、约50μM至约80μM、约50μM至约70μM、约50μM至约60μM、约60μM至约1mM、约60μM至约900μM、约60μM至约800μM、约60μM至约700μM、约60μM至约600μM、约60μM至约500μM、约60μM至约400μM、约60μM至约300μM、约60μM至约200μM、约60μM至约100μM、约60μM至约90μM、约60μM至约80μM、约60μM至约70μM、约70μM至约1mM、约70μM至约900μM、约70μM至约800μM、约70μM至约700μM、约70μM至约600μM、约70μM至约500μM、约70μM至约400μM、约70μM至约300μM、约70μM至约200μM、约70μM至约100μM、约70μM至约90μM、约70μM至约80μM、约80μM至约1mM、约80μM至约900μM、约80μM至约800μM、约80μM至约700μM、约80μM至约600μM、约80μM至约500μM、约80μM至约400μM、约80μM至约300μM、约80μM至约200μM、约80μM至约100μM、约80μM至约90μM、约90μM至约1mM、约90μM至约900μM、约90μM至约800μM、约90μM至约700μM、约90μM至约600μM、约90μM至约500μM、约90μM至约400μM、约90μM至约300μM、约90μM至约200μM、约90μM至约100μM、约100μM至约1mM、约100μM至约900μM、约100μM至约800μM、约100μM至约700μM、约100μM至约600μM、约100μM至约500μM、约100μM至约400μM、约100μM至约300μM、约100μM至约200μM、约200μM至约1mM、约200μM至约900μM、约200μM至约800μM、约200μM至约700μM、约200μM至约600μM、约200μM至约500μM、约200μM至约400μM、约200μM至约300μM、约300μM至约1mM、约300μM至约900μM、约300μM至约800μM、约300μM至约700μM、约300μM至约600μM、约300μM至约500μM、约300μM至约400μM、约400μM至约1mM、约400μM至约900μM、约400μM至约800μM、约400μM至约700μM、约400μM至约600μM、约400μM至约500μM、约500μM至约1mM、约500μM至约900μM、约500μM至约800μM、约500μM至约700μM、约500μM至约600μM、约600μM至约1mM、约600μM至约900μM、约600μM至约800μM、约600μM至约700μM、约700μM至约1mM、约700μM至约900μM、约700μM至约800μM、约800μM至约1mM、约800μM至约900μM或约900μM至约1mM之间)。
本领域已知的多种不同方法可以用于测定本文所描述的抗体中的任一种的KD值(例如，电泳迁移率变化测定法、过滤器结合测定法、表面等离子共振、生物分子结合动力学测定法、对抗原表达细胞的体外结合测定法等)。
在一些实施例中，本文所描述的抗体中的任一种的半衰期，抗体在体内的半衰期相对于对照抗体(例如，相同的抗体，但不包含重链的CH1-CH2-CH3中的氨基酸取代或插入，或CL结构域中的任何氨基酸取代)增加(例如，可检测的增加)。在一些实施例中，一个或多个氨基酸取代可以增加本文所描述的抗体中的任一种的半衰期。可以增加抗体在体内的半衰期的氨基酸取代的非限制性实例包含在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；和/或在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代。在一些实施例中，抗体在体内的半衰期增加(例如，可检测的增加)(例如，至少1％减少、至少5％减少、至少10％减少、至少15％减少、至少20％减少、至少25％减少、至少30％减少、至少35％减少、至少40％减少、至少45％减少、至少50％减少、至少55％减少、至少60％减少、至少65％减少、至少70％减少、至少75％减少、至少80％减少、至少85％减少、至少90％减少、至少95％减少或至少99％减少、或约1％减少至约99％减少、约1％减少至约95％减少、约1％减少至约90％减少、约1％减少至约85％减少、约1％减少至约80％减少、约1％减少至约75％减少、约1％减少至约70％减少、约1％减少至约65％减少、约1％减少至约60％减少、约1％减少至约55％减少、约1％减少至约50％减少、约1％减少至约45％减少、约1％减少至约40％减少、约1％减少至约35％减少、约1％减少至约30％减少、约1％减少至约25％减少、约1％减少至约20％减少、约1％减少至约15％减少、约1％减少至约10％减少、约1％减少至约5％减少、约5％减少至约99％减少、约5％减少至约95％减少、约5％减少至约90％减少、约5％减少至约85％减少、约5％减少至约80％减少、约5％减少至约75％减少、约5％减少至约70％减少、约5％减少至约65％减少、约5％减少至约60％减少、约5％减少至约55％减少、约5％减少至约50％减少、约5％减少至约45％减少、约5％减少至约40％减少、约5％减少至约35％减少、约5％减少至约30％减少、约5％减少至约25％减少、约5％减少至约20％减少、约5％减少至约15％减少、约5％减少至约10％减少、约10％减少至约99％减少、约10％减少至约95％减少、约10％减少至约90％减少、约10％减少至约85％减少、约10％减少至约80％减少、约10％减少至约75％减少、约10％减少至约70％减少、约10％减少至约65％减少、约10％减少至约60％减少、约10％减少至约55％减少、约10％减少至约50％减少、约10％减少至约45％减少、约10％减少至约40％减少、约10％减少至约35％减少、约10％减少至约30％减少、约10％减少至约25％减少、约10％减少至约20％减少、约10％减少至约15％减少、约15％减少至约99％减少、约15％减少至约95％减少、约15％减少至约90％减少、约15％减少至约85％减少、约15％减少至约80％减少、约15％减少至约75％减少、约15％减少至约70％减少、约15％减少至约65％减少、约15％减少至约60％减少、约15％减少至约55％减少、约15％减少至约50％减少、约15％减少至约45％减少、约15％减少至约40％减少、约15％减少至约35％减少、约15％减少至约30％减少、约15％减少至约25％减少、约15％减少至约20％减少、约20％减少至约99％减少、约20％减少至约95％减少、约20％减少至约90％减少、约20％减少至约85％减少、约20％减少至约80％减少、约20％减少至约75％减少、约20％减少至约70％减少、约20％减少至约65％减少、约20％减少至约60％减少、约20％减少至约55％减少、约20％减少至约50％减少、约20％减少至约45％减少、约20％减少至约40％减少、约20％减少至约35％减少、约20％减少至约30％减少、约20％减少至约25％减少、约25％减少至约99％减少、约25％减少至约95％减少、约25％减少至约90％减少、约25％减少至约85％减少、约25％减少至约80％减少、约25％减少至约75％减少、约25％减少至约70％减少、约25％减少至约65％减少、约25％减少至约60％减少、约25％减少至约55％减少、约25％减少至约50％减少、约25％减少至约45％减少、约25％减少至约40％减少、约25％减少至约35％减少、约25％减少至约30％减少、约30％减少至约99％减少、约30％减少至约95％减少、约30％减少至约90％减少、约30％减少至约85％减少、约30％减少至约80％减少、约30％减少至约75％减少、约30％减少至约70％减少、约30％减少至约65％减少、约30％减少至约60％减少、约30％减少至约55％减少、约30％减少至约50％减少、约30％减少至约45％减少、约30％减少至约40％减少、约30％减少至约35％减少、约35％减少至约99％减少、约35％减少至约95％减少、约35％减少至约90％减少、约35％减少至约85％减少、约35％减少至约80％减少、约35％减少至约75％减少、约35％减少至约70％减少、约35％减少至约65％减少、约35％减少至约60％减少、约35％减少至约55％减少、约35％减少至约50％减少、约35％减少至约45％减少、约35％减少至约40％减少、约40％减少至约99％减少、约40％减少至约95％减少、约40％减少至约90％减少、约40％减少至约85％减少、约40％减少至约80％减少、约40％减少至约75％减少、约40％减少至约70％减少、约40％减少至约65％减少、约40％减少至约60％减少、约40％减少至约55％减少、约40％减少至约50％减少、约40％减少至约45％减少、约45％减少至约99％减少、约45％减少至约95％减少、约45％减少至约90％减少、约45％减少至约85％减少、约45％减少至约80％减少、约45％减少至约75％减少、约45％减少至约70％减少、约45％减少至约65％减少、约45％减少至约60％减少、约45％减少至约55％减少、约45％减少至约50％减少、约50％减少至约99％减少、约50％减少至约95％减少、约50％减少至约90％减少、约50％减少至约85％减少、约50％减少至约80％减少、约50％减少至约75％减少、约50％减少至约70％减少、约50％减少至约65％减少、约50％减少至约60％减少、约50％减少至约55％减少、约55％减少至约99％减少、约55％减少至约95％减少、约55％减少至约90％减少、约55％减少至约85％减少、约55％减少至约80％减少、约55％减少至约75％减少、约55％减少至约70％减少、约55％减少至约65％减少、约55％减少至约60％减少、约60％减少至约99％减少、约60％减少至约95％减少、约60％减少至约90％减少、约60％减少至约85％减少、约60％减少至约80％减少、约60％减少至约75％减少、约60％减少至约70％减少、约60％减少至约65％减少、约65％减少至约99％减少、约65％减少至约95％减少、约65％减少至约90％减少、约65％减少至约85％减少、约65％减少至约80％减少、约65％减少至约75％减少、约65％减少至约70％减少、约70％减少至约99％减少、约70％减少至约95％减少、约70％减少至约90％减少、约70％减少至约85％减少、约70％减少至约80％减少、约70％减少至约75％减少、约75％减少至约99％减少、约75％减少至约95％减少、约75％减少至约90％减少、约75％减少至约85％减少、约75％减少至约80％减少、约80％减少至约99％减少、约80％减少至约95％减少、约80％减少至约90％减少、约80％减少至约85％减少、约85％减少至约99％减少、约85％减少至约95％减少、约85％减少至约90％减少、约90％减少至约99％减少、约90％减少至约95％减少或约95％减少至约99％减少)，如与对照抗体的半衰期(例如，相同抗体，但不包含重链的CH1-CH2-CH3中的氨基酸取代或插入或CL结构域中的任何氨基酸取代)相比。
在本文所描述的抗体中的任一种的一些实例中，抗体在体内的半衰期减少(例如，可检测的减少)(例如，至少1％减少、至少5％减少、至少10％减少、至少15％减少、至少20％减少、至少25％减少、至少30％减少、至少35％减少、至少40％减少、至少45％减少、至少50％减少、至少55％减少、至少60％减少、至少65％减少、至少70％减少、至少75％减少、至少80％减少、至少85％减少、至少90％减少、至少95％减少或至少99％减少、或约1％减少至约99％减少、约1％减少至约95％减少、约1％减少至约90％减少、约1％减少至约85％减少、约1％减少至约80％减少、约1％减少至约75％减少、约1％减少至约70％减少、约1％减少至约65％减少、约1％减少至约60％减少、约1％减少至约55％减少、约1％减少至约50％减少、约1％减少至约45％减少、约1％减少至约40％减少、约1％减少至约35％减少、约1％减少至约30％减少、约1％减少至约25％减少、约1％减少至约20％减少、约1％减少至约15％减少、约1％减少至约10％减少、约1％减少至约5％减少、约5％减少至约99％减少、约5％减少至约95％减少、约5％减少至约90％减少、约5％减少至约85％减少、约5％减少至约80％减少、约5％减少至约75％减少、约5％减少至约70％减少、约5％减少至约65％减少、约5％减少至约60％减少、约5％减少至约55％减少、约5％减少至约50％减少、约5％减少至约45％减少、约5％减少至约40％减少、约5％减少至约35％减少、约5％减少至约30％减少、约5％减少至约25％减少、约5％减少至约20％减少、约5％减少至约15％减少、约5％减少至约10％减少、约10％减少至约99％减少、约10％减少至约95％减少、约10％减少至约90％减少、约10％减少至约85％减少、约10％减少至约80％减少、约10％减少至约75％减少、约10％减少至约70％减少、约10％减少至约65％减少、约10％减少至约60％减少、约10％减少至约55％减少、约10％减少至约50％减少、约10％减少至约45％减少、约10％减少至约40％减少、约10％减少至约35％减少、约10％减少至约30％减少、约10％减少至约25％减少、约10％减少至约20％减少、约10％减少至约15％减少、约15％减少至约99％减少、约15％减少至约95％减少、约15％减少至约90％减少、约15％减少至约85％减少、约15％减少至约80％减少、约15％减少至约75％减少、约15％减少至约70％减少、约15％减少至约65％减少、约15％减少至约60％减少、约15％减少至约55％减少、约15％减少至约50％减少、约15％减少至约45％减少、约15％减少至约40％减少、约15％减少至约35％减少、约15％减少至约30％减少、约15％减少至约25％减少、约15％减少至约20％减少、约20％减少至约99％减少、约20％减少至约95％减少、约20％减少至约90％减少、约20％减少至约85％减少、约20％减少至约80％减少、约20％减少至约75％减少、约20％减少至约70％减少、约20％减少至约65％减少、约20％减少至约60％减少、约20％减少至约55％减少、约20％减少至约50％减少、约20％减少至约45％减少、约20％减少至约40％减少、约20％减少至约35％减少、约20％减少至约30％减少、约20％减少至约25％减少、约25％减少至约99％减少、约25％减少至约95％减少、约25％减少至约90％减少、约25％减少至约85％减少、约25％减少至约80％减少、约25％减少至约75％减少、约25％减少至约70％减少、约25％减少至约65％减少、约25％减少至约60％减少、约25％减少至约55％减少、约25％减少至约50％减少、约25％减少至约45％减少、约25％减少至约40％减少、约25％减少至约35％减少、约25％减少至约30％减少、约30％减少至约99％减少、约30％减少至约95％减少、约30％减少至约90％减少、约30％减少至约85％减少、约30％减少至约80％减少、约30％减少至约75％减少、约30％减少至约70％减少、约30％减少至约65％减少、约30％减少至约60％减少、约30％减少至约55％减少、约30％减少至约50％减少、约30％减少至约45％减少、约30％减少至约40％减少、约30％减少至约35％减少、约35％减少至约99％减少、约35％减少至约95％减少、约35％减少至约90％减少、约35％减少至约85％减少、约35％减少至约80％减少、约35％减少至约75％减少、约35％减少至约70％减少、约35％减少至约65％减少、约35％减少至约60％减少、约35％减少至约55％减少、约35％减少至约50％减少、约35％减少至约45％减少、约35％减少至约40％减少、约40％减少至约99％减少、约40％减少至约95％减少、约40％减少至约90％减少、约40％减少至约85％减少、约40％减少至约80％减少、约40％减少至约75％减少、约40％减少至约70％减少、约40％减少至约65％减少、约40％减少至约60％减少、约40％减少至约55％减少、约40％减少至约50％减少、约40％减少至约45％减少、约45％减少至约99％减少、约45％减少至约95％减少、约45％减少至约90％减少、约45％减少至约85％减少、约45％减少至约80％减少、约45％减少至约75％减少、约45％减少至约70％减少、约45％减少至约65％减少、约45％减少至约60％减少、约45％减少至约55％减少、约45％减少至约50％减少、约50％减少至约99％减少、约50％减少至约95％减少、约50％减少至约90％减少、约50％减少至约85％减少、约50％减少至约80％减少、约50％减少至约75％减少、约50％减少至约70％减少、约50％减少至约65％减少、约50％减少至约60％减少、约50％减少至约55％减少、约55％减少至约99％减少、约55％减少至约95％减少、约55％减少至约90％减少、约55％减少至约85％减少、约55％减少至约80％减少、约55％减少至约75％减少、约55％减少至约70％减少、约55％减少至约65％减少、约55％减少至约60％减少、约60％减少至约99％减少、约60％减少至约95％减少、约60％减少至约90％减少、约60％减少至约85％减少、约60％减少至约80％减少、约60％减少至约75％减少、约60％减少至约70％减少、约60％减少至约65％减少、约65％减少至约99％减少、约65％减少至约95％减少、约65％减少至约90％减少、约65％减少至约85％减少、约65％减少至约80％减少、约65％减少至约75％减少、约65％减少至约70％减少、约70％减少至约99％减少、约70％减少至约95％减少、约70％减少至约90％减少、约70％减少至约85％减少、约70％减少至约80％减少、约70％减少至约75％减少、约75％减少至约99％减少、约75％减少至约95％减少、约75％减少至约90％减少、约75％减少至约85％减少、约75％减少至约80％减少、约80％减少至约99％减少、约80％减少至约95％减少、约80％减少至约90％减少、约80％减少至约85％减少、约85％减少至约99％减少、约85％减少至约95％减少、约85％减少至约90％减少、约90％减少至约99％减少、约90％减少至约95％减少或约95％减少至约99％减少)，如与对照抗体的半衰期(例如，相同抗体，但不包含重链的CH1-CH2-CH3中的氨基酸取代或插入或CL结构域中的任何氨基酸取代)相比。
缀合
在一些实施例中，本文提供的抗体可以与药物(例如，化学治疗药物、小分子)、毒素或放射性同位素缀合。药物、毒素和放射性同位素(例如，已知可用于治疗癌症)的非限制性实例是本领域已知的。
在一些实施例中，本文所描述的抗体中的任一种的至少一种多肽通过可切割接头与毒素、放射性同位素或药物缀合。在一些实施例中，可切割接头包含蛋白酶切割位点。在一些实施例中，可切割接头一旦通过靶哺乳动物细胞转运至溶酶体或晚期核内体，就可在抗体上切割。在一些实施例中，接头的切割在功能上活化药物或毒素。
在一些实施例中，本文所描述的抗体中的任一种的至少一种多肽通过不可切割接头与毒素、放射性同位素或药物缀合。在一些实施例中，缀合的毒素、放射性同位素或药物在抗体的溶酶体和/或晚期内体降解期间释放。
可切割接头的非限制性实例包含：腙接头、肽接头、二硫化物接头和硫醚接头。参见例如，Carter等人,《癌症杂志(Cancer J.)》14(3):154-169,2008；Sanderson等人,《临床癌症研究(Clin.Cancer Res.)》11(2Pt1):843-852,2005；Chari等人,《化学研究述评(Acc.Chem.Res.)》41(1):98-107,2008；Oflazoglu等人,《临床癌症研究》14(19):6171-6180,2008；以及Lu等人,《国际分子科学杂志(Int.J.Mol.Sci.)》17(4):561,2016。
不可切割接头的非限制性实例包含：马来酰亚胺烷烃接头和马来酰亚胺环己烷接头(MMC)(参见例如，McCombs等人，《AAPS J.》17(2):339-351,2015中描述的那些)。
在一些实施例中，本文所描述的抗体中的任一种对靶哺乳动物细胞有细胞毒性或细胞抑制性。
在一些实施例中，本文提供的抗体可以包括一个或多个氨基酸取代以提供缀合位点(例如，与药物、毒素、放射性同位素缀合)。在一些实施例中，本文提供的抗体可以具有一个缀合位点。在一些实施例中，本文所描述的抗体可以具有两个缀合位点。在一些实施例中，本文提供的抗体可以具有三个或更多个缀合位点。产生缀合位点(例如，“三铰链”缀合位点)的氨基酸取代的非限制性实例在美国专利申请第2017/0348429号中描述，所述美国专利申请通过引用以其整体并入本文。例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失可以在本文所描述的抗体中的任一者中提供“三铰链”缀合位点。在一些实施例中，在SEQ IDNO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代可以为本文所描述的抗体中的任一种提供缀合位点。在一些实施例中，在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代可以为本文所描述的抗体中的任一种提供缀合位点。
天然存在的半胱氨酸氨基酸也可以提供缀合(例如，与药物、毒素、放射性同位素缀合)。在一些实施例中，本文提供的抗体可以具有在一个或多个(例如，一个、两个、三个或四个)天然存在的缀合位点处缀合的药物、毒素或放射性同位素。在一些实施例中，在SEQID NO:155或189的氨基酸位置103处的半胱氨酸是天然存在的缀合位点。在一些实施例中，在SEQ ID NO:155或189的氨基酸位置109处的半胱氨酸是天然存在的缀合位点。在一些实施例中，在SEQ ID NO:155或SEQ 189的氨基酸位置112处的半胱氨酸是天然存在的缀合位点。在一些实施例中，在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸是天然存在的缀合位点。
在一些实施例中，本文提供的抗体可以具有在一个或多个(例如，两个、三个或四个)天然存在的缀合位点(例如，SEQ ID NO:155或SEQ 189的氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸)处缀合的药物、毒素或放射性同位素。在一些实施例中，本文提供的抗体可以具有在一个或多个(例如，两个、三个或四个)天然存在的缀合位点以及一个或多个(例如，两个或三个)工程化缀合位点(例如，通过氨基酸取代、缺失、添加等工程化)处缀合的药物、毒素或放射性同位素。
通过工程化半胱氨酸的缀合是通过本领域已知的方法实现的。简言之，通过用还原剂，例如，三(2-羧基乙基)膦(TCEP)、二硫苏糖醇(DTT)或2-巯基乙醇(BME)处理来制备含工程化半胱氨酸的抗体以进行缀合。在还原反应中，还原试剂与抗体中的二硫键结合，破坏链间二硫化物并从工程化半胱氨酸中去除二硫帽。通过将溶液暴露于空气或氧化剂(如脱氢抗坏血酸)实现的任选的再氧化步骤允许链间二硫键的重组，使工程化的半胱氨酸具有硫醇盐反应基团。通过在含有如乙醇、二甲基乙酰胺(DMA)或二甲基亚砜(DMSO)等共溶剂的缓冲溶液中与有效载荷反应来实现在接头有效载荷，即马来酰亚胺-vc-MMAE上具有官能团的缀合。通过尺寸排阻色谱法或选择性过滤方法，如切向流过滤，纯化粗缀合抗体溶液。在此步骤中，从反应混合物中去除残余的未反应的有效载荷、还原剂和氧化剂，并且可以将缀合的ADC产物转移到期望的调配物缓冲液中。
通过类似方法，使用具有或不具有另外的经工程化的半胱氨酸缀合位点的抗体，通过铰链半胱氨酸实现缀合。简言之，通过用还原剂，例如，三(2-羧基乙基)膦(TCEP)或二硫苏糖醇(DTT)处理来制备抗体以进行缀合。选择还原剂的还原强度和浓度，使得链间二硫键中的一些或所有链间二硫键减少，留下游离半胱氨酸用于缀合。溶液可以在存在过量还原剂的情况下直接缀合。通过在含有如乙醇、二甲基乙酰胺(DMA)或二甲基亚砜(DMSO)等共溶剂的缓冲溶液中与有效载荷反应来实现在接头有效载荷，即马来酰亚胺-vc-MMAE上具有官能团的缀合。未反应的接头有效载荷可以通过添加牺牲性硫醇盐分子(如乙酰半胱氨酸)而变得无反应性。粗缀合抗体溶液可以通过本领域已知的方法进一步纯化，所述方法包含疏水相互作用色谱法、离子交换色谱法或混合模式色谱法，如陶瓷羟基磷灰石色谱法。色谱法级分的分离允许选择期望的抗体与有效载荷的比率以及去除未反应的抗体、蛋白质聚集体和片段以及有效载荷相关反应副产物。经纯化的抗体药物缀合物可以进一步纯化，并且通过尺寸排阻色谱法，或选择性过滤方法，如切向流过滤。在此步骤中，缀合的ADC产物也可以转移到期望的调配物缓冲液中。
在一些实例中，可以制备包括通过缬氨酸-瓜氨酸(vc)接头与一甲基澳瑞他汀E(monomethyl auristatin E，MMAE)连接的抗体(以下称为MET-IgG-DC)的抗体缀合物。抗原结合蛋白构建体与vcMMAE的缀合开始于MET-IgG的部分还原，接着与马来酰亚胺己酰基-Val-Cit-PABC-MMAE(vcMMAE)反应。通过添加TCEP(TCEP:mAb的摩尔当量为2:1)随后在4℃下过夜温育使MET-IgG(10mg/mL)部分减少。然后将还原反应物温热至25℃。为了缀合所有硫醇，添加vcMMAE达到1:10的最终vcMMAE:还原Cys摩尔比。缀合反应在存在10％v/v的二甲基乙酰胺(DMA)的情况下进行并且使其在25℃下进行60分钟。
在一些实例中，制备抗体缀合物(ADC)，所述ADC包括通过缬氨酸-瓜氨酸(vc)接头(下文被称为MET-IgG-DC)与一甲基澳瑞他汀E(MMAE)连接的本文所描述的MET结合性IgG(下文被称为MET-IgG)。抗原结合蛋白构建体与vcMMAE的缀合开始于MET-IgG的部分还原，接着与马来酰亚胺己酰基-Val-Cit-PABC-MMAE(vcMMAE)反应。通过添加DTT(DTT:mAb的摩尔当量为100:1)随后在25℃下过夜温育使MET-IgG(10mg/mL)减少。然后通过暴露于DHAA(DHAA:mAb的摩尔当量为10:1)将还原的MET-IgG(10mg/mL)再氧化，随后在25℃下温育2小时。为了缀合所有硫醇，添加vcMMAE达到4:1的最终vcMMAE:mAb摩尔比。缀合反应在存在10％v/v的DMA的情况下进行并且使其在25℃下进行3小时。
抗体在细胞中的表达
本文还提供了生成表达抗体(例如，本文所描述的抗体中的任一种)的重组细胞的方法，所述方法包含：将编码所述抗体的核酸引入到细胞中以产生重组细胞；以及在足以表达所述抗体的条件下培养所述重组细胞。在一些实施例中，引入步骤包含将包含编码抗体的核酸的表达载体引入到细胞中以产生重组细胞。
本文所描述的抗体中的任一种可以由任何细胞，例如真核细胞或原核细胞产生。如本文所用，术语“真核细胞”是指具有不同膜结合的细胞核的细胞。此类细胞可包括例如哺乳动物(例如，啮齿动物、非人灵长类动物或人)、昆虫、真菌或植物细胞。在一些实施例中，真核细胞是酵母细胞，如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。在一些实施例中，真核细胞是高等真核生物细胞，诸如哺乳动物、禽类、植物或昆虫细胞。如本文所用，术语“原核细胞”是指没有不同膜结合的细胞核的细胞。在一些实施例中，原核细胞是细菌细胞。
培养细胞的方法是本领域熟知的。细胞可以在体外维持在有利于增殖、分化和生长的条件下。简言之，可以通过使细胞(例如，任何细胞)与包含支持细胞活力和生长的必需生长因子和补充剂的细胞培养基接触来培养细胞。
将核酸和表达载体引入细胞(例如，真核细胞)中的方法是本领域已知的。可用于将核酸引入细胞中的方法的非限制性实例包括脂质转染、转染、电穿孔、显微注射、磷酸钙转染、基于树状大分子的转染、阳离子型聚合物转染、细胞挤压、超声处理、光学转染、impalection、流体动力学递送、磁转染、病毒转导(例如，腺病毒和慢病毒转导)和纳米颗粒转染。
本文提供的方法进一步包含使用本领域熟知的技术(例如，硫酸铵沉淀、聚乙二醇沉淀、离子交换色谱法(阴离子或阳离子)、基于疏水相互作用的色谱法、金属亲和色谱法、配体亲和色谱法和尺寸排阻色谱法)从细胞(例如，真核细胞)中分离抗体。
治疗方法
本文提供了治疗癌症的方法，所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的药物组合物中的任一种或本文所描述的抗体中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
本文还提供了减小受试者的肿瘤的体积的方法，其中所述肿瘤的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的药物组合物中的任一种或本文所描述的抗体中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。在本文所描述的方法中的任一种的一些实施例中，至少一个(例如，1个、2个、3个、4个或5个)肿瘤(例如，实体瘤)或肿瘤位置(例如，转移位点)的体积与施用抗体之前所述至少一个肿瘤(例如，实体瘤)的大小相比减小(例如，可检测地减小)(减小至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少10％、至少12％、至少14％、至少16％、至少18％、至少20％、至少22％、至少24％、至少26％、至少28％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％)。
本文还提供了诱导受试者的癌细胞的细胞死亡的方法，其中所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的药物组合物中的任一种或本文所描述的抗体中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。在一些实施例中，所诱导的细胞死亡是坏死。在一些实施例中，所诱导的细胞死亡是凋亡。
在本文所述的任何方法的一些实施例中，所述癌症是原发性肿瘤。
在本文所述的任何方法的一些实施例中，所述癌症为转移。
在本文所述的任何方法的一些实施例中，所述癌症是非T细胞浸润肿瘤。在本文所述的任何方法的一些实施例中，所述癌症是T细胞浸润肿瘤。
本文提供了降低患有癌症的受试者发生转移的风险或降低所述受试者发生另外的转移的风险的方法，其中所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包含：向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的药物组合物中的任一种或本文所描述的抗体中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。在一些实施例中，与患有类似癌症，但未施用治疗或施用不包含施用本文所描述的抗体中的任一种的治疗的受试者的风险相比，受试者发生转移的风险或发生另外的转移的风险降低(例如，可检测地降低)至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少10％、至少12％、至少14％、至少16％、至少18％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
在本文所述的任何方法的一些实施例中，所述癌症是非T细胞浸润肿瘤。在本文所述的任何方法的一些实施例中，所述癌症是T细胞浸润肿瘤。在本文所述的任何方法的一些实施例中，细胞区室是内体/溶酶体途径的一部分。在本文所述的任何方法的一些实施例中，细胞区室是核内体。
术语“受试者”是指任何哺乳动物。在一些实施例中，受试者或“适合治疗的受试者”可以是犬科动物(例如，狗)、猫科动物(例如，猫)、马科动物(例如，马)、绵羊科动物、牛科动物、猪科动物、山羊科动物、灵长类动物，例如猿猴(例如，猴(例如，狨猴、狒狒)或类人猿(例如，大猩猩、黑猩猩、红毛猩猩或长臂猿)或人；或啮齿动物(例如，小鼠、豚鼠、仓鼠或大鼠)。在一些实施例中，受试者或“适合治疗的受试者”可以是非人哺乳动物，特别是可以采用常规用作证明在人(例如，鼠科动物、兔科动物、猪科动物、犬科动物或灵长类动物)中的治疗功效的模型的哺乳动物。
如本文所用，治疗包括降低患有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者中癌症的一种或多种(例如，两种、三种、四种或五种)体征或症状的数量、频率或严重程度。例如，治疗可以在患有癌症的受试者中降低癌症进展，降低癌症的严重程度，或降低癌症复发的风险。
本文提供了抑制受试者(例如，本文所描述的受试者中的任一者)的实体瘤生长的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种(例如，与治疗之前受试者的实体瘤的生长或接受不同治疗或未接受治疗的不同受试者的类似实体瘤的生长相比)。
在本文所述的任何方法的一些实施例中，实体瘤的生长是实体瘤的初级生长。在本文所述的任何方法的一些实施例中，实体瘤的生长是实体瘤的复发性生长。在本文所述的任何方法的一些实施例中，实体瘤的生长是实体瘤的转移性生长。在一些实施例中，治疗引起受试者中的实体瘤的生长(例如，与治疗之前受试者中的实体瘤的生长或接受不同治疗或未接受治疗的不同受试者中的类似实体瘤的生长相比)下降约1％至下降约99％(或本文所述的该范围的任何子范围)。可以通过多种不同的成像方法，例如正电子发射断层扫描、X射线计算机断层扫描、计算机轴向断层扫描和磁共振成像来评估受试者中的实体瘤的生长。
本文还提供了降低鉴定为患有癌症(例如，本文所述的任何示例性癌症)的受试者中在一段时间内发生转移的风险或发生另外的转移的风险的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的任何蛋白质或本文所述的任何药物组合物(例如，与患有类似癌症且接受不同治疗或未接受治疗的受试者相比)。在本文所述的任何方法的一些实施例中，转移或另外的转移是向骨、淋巴结、脑、肺、肝、皮肤、胸壁(包括骨、软骨和软组织)、腹腔、对侧乳腺、软组织、肌肉、骨髓、卵巢、肾上腺和胰腺的一种或多种转移。
在本文所述的方法中的任何方法的一些实施例中，时间段为约1个月至约3年(例如，约1个月至约2.5年、约1个月至约2年、约2个月至约1.5年、约1个月至约1年、约1个月至约10个月、约1个月至约8个月、约1个月至约6个月、约1个月至约5个月、约1个月至约4个月、约1个月至约3个月、约1个月至约2个月、约2个月至约3年、约2个月至约2.5年、约2个月至约2年、约2个月至约1.5年、约2个月至约1年、约2个月至约10个月、约2个月至约8个月、约2个月至约6个月、约2个月至约5个月、约2个月至约4个月、约2个月至约3个月、约3个月至约3年、约3个月至约2.5年、约3个月至约2年、约3个月至约1.5年、约3个月至约1年、约3个月至约10个月、约3个月至约8个月、约3个月至约6个月、约3个月至约5个月、约3个月至约4个月、约4个月至约3年、约4个月至约2.5年、约4个月至约2年、约4个月至约1.5年、约4个月至约1年、约4个月至约10个月、约4个月至约8个月、约4个月至约6个月、约4个月至约5个月、约5个月至约3年、约5个月至约2.5年、约5个月至约2年、约5个月至约1.5年、约5个月至约1年、约5个月至约10个月、约5个月至约8个月、约5个月至约6个月、约6个月至约3年、约6个月至约2.5年、约6个月至约2年、约6个月至约1.5年、约6个月至约1年、约6个月至约10个月、约6个月至约8个月、约8个月至约3年、约8个月至约2.5年、约8个月至约2年、约8个月至约1.5年、约8个月至约1年、约8个月至约10个月、约10个月至约3年、约10个月至约2.5年、约10个月至约2年、约10个月至约1.5年、约10个月至约1年、约1年至约3年、约1年至约2.5年、约1年至约2年、约1年至约1.5年、约1.5年至约3年、约1.5年至约2.5年、约1.5年至约2年、约2年至约3年、约2年至约2.5年或约2.5年至约3年)。
在一些实施例中，例如与患有类似癌症，接受不同治疗或未接受治疗的受试者中的风险相比，鉴定为患有癌症的受试者中在一段时间内发生或发生另外的转移的风险降低约1％至约99％(例如，或本文所述的该范围的任何子范围)。
癌症的非限制性实例包括：急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、肾上腺皮质癌、肛门癌、附件癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、脑肿瘤、胆道癌、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt Lymphoma)、原发原因不明的癌、心脏肿瘤、宫颈癌、脊索瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓增生性肿瘤、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、导管癌、胚胎肿瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、鼻腔神经胶质瘤、纤维组织细胞瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、眼癌、生殖细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤、妊娠滋养细胞疾病、神经胶质瘤、头颈癌、毛细胞白血病、肝细胞癌、组织细胞增多病、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、下咽癌、眼内黑素瘤、胰岛细胞瘤、卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)、肾癌、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、喉癌、白血病、嘴唇和口腔癌、肝癌、原位小叶癌、肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、恶性纤维组织细胞瘤、黑色素瘤、默克尔细胞癌、间皮瘤、隐性原发性转移性鳞状颈部癌、牵涉NUT基因的中线呼吸道癌、口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、鼻腔和鼻旁鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头瘤病、副神经节瘤、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌样瘤、唾液腺癌、塞扎里综合征(Sezary syndrome)、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、脊髓瘤、胃癌、T细胞淋巴瘤、畸胎瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌、外阴癌和威尔姆斯瘤(Wilms'tumor)。癌症的其它实例是本领域已知的。
在一些实施例中，进一步向患者施用一种或多种附加治疗剂(例如，化学治疗剂、重组细胞因子或白细胞介素蛋白、激酶抑制剂和检查点抑制剂中的一种或多种)。在一些实施例中，所述一种或多种附加治疗剂在与本文所描述的抗体中的任一种施用于患者大致相同的时间施用于患者。在一些实施例中，所述一种或多种附加治疗剂在本文所描述的抗体中的任一种施用于患者之后施用于患者。在一些实施例中，所述一种或多种附加治疗剂在本文所描述的抗体中的任一种施用于患者之前施用于患者。
在本文所述的任何方法的一些实施例中，癌症是实体癌(例如，乳腺癌、前列腺癌或非小细胞肺癌)。
亲合力
抗体及其抗原结合片段是多价的，并且因此包括多于一个结合位点。通常，抗体在其结合位点处的总结合强度的量度被称为亲合力。一般地，术语“亲合力倍数”和“选择性”可以指抗体的亲和力与抗体的亲合力之间的差异倍数，例如，当测量抗体在具有高靶表达的细胞系(亲合力；例如癌细胞，例如Detroit-562细胞)上的总结合强度与抗体在具有低靶表达的细胞系(亲和力，例如非癌细胞，例如HUVEC细胞)上的总结合强度相比时所见。通常，亲合力由四个因素确定：结合亲和力(例如，在单个结合位点处结合的强度)；化合价(例如，结合位点的总数)；结构布置(例如，抗原和抗体的结构)；以及抗原密度(例如，每细胞的抗原数目)。
本文提供了降低患有癌症的受试者发生转移的风险或降低所述受试者发生另外的转移的风险的方法，其中所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。在一些实施例中，与非癌细胞相比，本文所描述的抗体对癌细胞的选择性可以具有至少新的至少5％、至少10％、至少15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少105％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少155％、至少160％、至少165％、至少170％、至少175％、至少180％、至少185％、至少190％、至少195％、或至少200％、至少205％、至少210％、至少215％、至少220％、至少225％、至少230％、至少235％、至少240％、至少245％、至少250％、至少255％、至少260％、至少265％、至少270％、至少275％、至少280％、至少285％、至少290％、至少295％、至少300％、至少305％、至少310％、至少315％、至少320％、至少325％、至少330％、至少335％、至少340％、至少345％、至少350％、至少355％、至少360％、至少365％、至少370％、至少375％、至少380％、至少385％、至少390％、至少395％或至少400％的增加。
组合物
本文还提供了包含本文所描述的抗体中的任何抗体中的至少一种的组合物(例如，药物组合物)。在一些实施例中，所述组合物(例如，药物组合物)可以置于无菌小瓶或预装注射器中。
在一些实施例中，所述组合物(例如，药物组合物)配制用于不同的施用途径(例如，静脉内、皮下、肌内或肿瘤内)。在一些实施例中，所述组合物(例如，药物组合物)可以包括药学上可接受的载剂(例如，磷酸盐缓冲盐水)。本文所述的任何药物组合物的单次或多次施用可以根据例如：患者需要和耐受的剂量和频率给予受试者。药物组合物的剂量应提供足够量的抗体以有效地治疗或改善病状、疾病或症状。
本文还提供了治疗患有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的受试者的方法，所述方法包括施用治疗有效量的本文提供的任何组合物或药物组合物中的至少一种。
试剂盒
本文还提供了包含本文所描述的抗体中的任一种、本文所描述的组合物中的任一种或本文所描述的药物组合物中的任一种的试剂盒。在一些实施例中，所述试剂盒可包括用于进行本文所述的任何方法的说明书。在一些实施例中，所述试剂盒可包括至少一个剂量的本文所述的任何组合物(例如，药物组合物)。在一些实施例中，所述试剂盒可提供用于施用本文所述的任何药物组合物的注射器。
本发明在以下实施例中进一步描述，这些实施例不限制权利要求中所描述的本发明的范围。
实例
实例1.MET结合因子的生成和pH结合依赖性的工程改造
使用两种方法产生对MET有特异性的经pH工程化的抗体。在第一种方法中，将针对MET的公开的单克隆抗体用作引入附加突变的起始模板，所述附加突变允许工程改造与MET的pH依赖性结合和i)增强缀合的毒素的内溶酶体累积，以及ii)增强MET再循环到细胞表面。第二种方法涉及通过抗体展示方法从天然文库或具有限定的CDR组成的文库中发现对MET有特异性的新生抗体，以及在被设计用于选择对MET有特异性的经pH工程化的抗体的条件下进行筛选。在任一情况下，组氨酸残基在工程改造pH依赖性结合蛋白中都起重要作用。
由于组氨酸残基的pKa为6.0，因此在低于6.5的pH下组氨酸残基至少部分质子化。因此，如果抗原结合结构域中的组氨酸侧链参加与其抗原的静电结合相互作用，则其将开始在等于或低于6.5的pH下转变为带正电荷。基于抗原表位的相应电荷和与抗原表位的相互作用，这可减弱或增强在低于6.5的pH下相互作用的结合亲和力。因此，组氨酸向抗体或其它结合因子文库(例如，scFv文库)中的抗体互补决定区(CDR)中的系统引入，可以用于鉴定将影响抗原结合结构域与抗原在较低pH值下的相互作用的取代。因此第一种方法牵涉公开的单克隆抗体的可变区序列的组氨酸扫描，以鉴定pH依赖性变体。
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。简言之，对于抗体序列的子集，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)(DIANE出版公司(DIANEpublishing)))和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号(The IMGT unique numbering for Immunoglobulins,T cell receptors andIg-like domains)”《免疫学家(The Immunologist)》7,132-136)描述的方法鉴定每条链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了对pH依赖性序列变体进行工程化，用组氨酸系统性取代重链和/或轻链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基为组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。使用本领域已知的方法，通过将Expi293细胞与a)一个重链或轻链序列变体，和b)对应的起始抗体(例如，起始MET结合性单克隆抗体)轻链或重链共转染，生成在重链/轻链CDR中具有仅一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达期之后，收集、定量细胞培养上清液，并且使用生物膜干涉技术(BLI)或本领域已知的其它方法评价变体的pH依赖性。简言之，将细胞培养上清液归一化为50μg/mL的抗体表达水平，并且捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用1X动力学缓冲液(Forte Bio)建立基线，并且使传感器在pH 7.4的1X PBS中与100nM的MET缔合300秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 5.5或pH 7.4的1X PBS，持续300-500秒。检查起始抗体和每个对应抗体变体在pH 5.5和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.5下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.5下抗体变体本身和起始抗体相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择在pH 5.5下显示出解离增强或在pH 7.4下显示出解离减少或两者的变体以供进一步分析。还注意到，虽然一些组氨酸和丙氨酸突变使MET结合消除，但其它突变则耐受，MET结合动力学变化很小(例如，KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的组氨酸变体和丙氨酸变体以可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。选择用于进一步分析的变体以较大规模表达，并使用蛋白A亲和色谱法纯化。在pH 5.5和pH 7.4下使用Biacore(通用电气医疗公司(GE Healthcare))测量纯化的起始抗体和变体抗体的结合动力学(kon和koff)。抗体解离速率的比率(在pH 7.4下的koff除以在pH 5.5下的koff)也用作pH依赖性结合的定量评估；类似地，在pH 5.5和pH 7.4下按照koff除以kon来计算解离常数KD，并且抗体解离常数的比率(在pH 7.4下的KD除以在pH 5.5下的KD)也用作pH依赖性的定量评估。选择解离速率小于起始抗体的解离速率和/或解离常数比率小于起始抗体的解离常数比率的抗体用于组合取代的进一步评估。也可以组合有利的组氨酸和/或丙氨酸氨基酸位置以增强pH依赖性；这可以通过例如组合性或合理地组合给定重链或轻链上单独改善pH依赖性的组氨酸和/或丙氨酸取代来完成，例如通过组合性或合理地组合经修饰的重链和轻链，使得两条链上都存在组氨酸和/或丙氨酸取代，或其组合。使用本文所述的方法和方案或本领域已知的其它方法和方案，生成并测试/分析此类组合变体的差异性pH依赖性。选择具有最低解离速率比率和/或解离常数比率的抗体变体作为候选物以供进一步分析(下文被称为“对MET有特异性的经pH工程化的抗体”)。
用于选择对MET有特异性的经pH工程化的抗体的第二种方法涉及筛选文库以鉴定对MET有特异性的新生pH依赖性抗体或可以用作如本文所描述的用于对pH依赖性结合进行工程化的模板的抗体。两种类型的文库可用于这些选择：原初噬菌体/酵母展示抗体文库(例如Fab、scFv、VHH、VL或本领域已知的其它文库)或其中CDR已突变以表达氨基酸残基的子集的噬菌体/酵母展示文库。使用本领域已知的方法筛选文库中的可溶性重组MET细胞外结构域，对在pH 5.0下弱结合(例如，从珠粒洗脱)而在pH 7.4下强结合(例如，与珠结合)的变体进行正向选择。进行三轮选择。使用ELISA，对于与人MET和食蟹猴MET和小鼠MET的结合或在流式细胞分析中经由平均荧光强度筛选最后一轮结合因子。如果需要具有食蟹猴或鼠类交叉反应性的更多结合因子，则可以对食蟹猴MET或鼠类MET进行最后一轮选择。将选定的结合蛋白亚克隆到哺乳动物表达载体中，并且在Expi293细胞中表达为完全IgG蛋白或Fc融合物。如本文所述进行BLI分析以选择pH依赖性结合因子变体并使用Biacore确认。
实例2.与对MET有特异性的对照抗体相比，在暴露于对MET有特异性的经pH工程化的抗体后与MET的pH依赖性结合、MET的pH依赖性释放、MET+细胞中增强的内溶酶体递送以及MET+细胞中增加的MET抗原密度的体外证明。
如本文所讨论的，对MET有特异性的经pH工程化的抗体表现出在酸性pH(例如，pH5.0、pH 5.5)下MET结合下降，但在较高pH(例如，pH7.4)下结合增强的期望性质，所述期望性质增强了所述经pH工程化的抗体在生理条件下在内溶酶体中的累积。
与细胞上的MET的pH依赖性结合
为了证明对MET有特异性的经pH工程化的抗体在中性pH下与细胞表面MET结合，进行了细胞表面结合测定。组装一组MET+的人细胞(例如，Hs 746T ATCC Cat#HTB-135,NCI-H441 ATCC Cat#HTB-174,NCI-H820 ATCC Cat#HTB-181)。鉴定和定量给定细胞系的基因表达(例如，MET)的方法是本领域已知的，并且包括例如，查阅《癌细胞系百科全书》(CCLE；https://portals.broadinstitute.org/ccle)以确定肿瘤细胞系中给定基因的表达水平和/或突变状态)，rtPCR、微阵列或RNA-Seq分析，或用本领域已知的抗体(例如，特立妥珠单抗或细胞信号传导技术公司(Cell Signaling Technology)Met(D1C2)XP兔mAb，目录号8198，或针对MET的R&D系统公司(R&DSystems)人HGFR/c-MET抗体克隆编号95106，目录号MAB3582)进行细胞染色。将细胞以每孔大约5-10,000个接种在150μL的pH 7.4培养基中并且在37℃下用以下抗体之一在1pM至1μM的若干剂量(例如，两倍稀释序列)下温育5分钟：对MET有特异性的已知对照抗体(例如，抗体，特立妥珠单抗、依玛妥珠单抗、hucMET27Gv1.3或P3D12)；对MET有特异性的经pH工程化的抗体；以及适当的阴性同种型对照mAb(例如，Biolegend纯化的人IgG1同种型对照重组抗体，目录号403501)。在实验开始之前，使用本领域已知的方法验证所有抗体的结合特性。在温育5分钟后，将细胞用4％甲醛固定(在室温下20分钟)，并与适当的荧光团标记的二抗(例如，ThermoFisher小鼠抗人IgG1 Fc二抗，AlexaFluor 488，目录号A-10631)温育60分钟。用一系列PBS洗涤液洗涤未结合的试剂，并且使用共聚焦显微镜术对细胞组进行成像。在对图像进行分析时，可以在与对MET有特异性的已知对照抗体以及对MET有特异性的经pH工程化的抗体结合的细胞的表面上观察到显著荧光，但对于同种型阴性对照可以观察到很少的表面结合。为了分离pH对表面结合的作用，重复相同实验两次，其中一抗温育在依序降低的pH(例如，pH 6.5和5.5和5.0)下进行。对所得共聚焦显微术图像的分析可以显示出除了同种型阴性对照之外，在与所测试的所有mAb结合的细胞的表面上有显著荧光，并且对于对MET有特异性的经pH工程化的抗体，这种荧光随着pH降低而降低。可替代地，使用本领域已知的方法，通过流式细胞术分析细胞的平均荧光强度。通过本领域已知的非线性回归方法(例如，斯卡查德图)确定所分析的抗体在中性pH下在细胞上的解离常数KD。总的来说，结果可以显示，pH工程化过程引起对MET有特异性的在其结合性质方面为pH依赖性的经pH工程化的抗体的产生，并且相较于更具酸性的pH，所述抗体在中性pH下更有效地结合。评估对MET有特异性的经pH工程化的抗体的pH依赖性的其它方法是本领域已知的，并且包含例如使用流式细胞术以测量抗体表面结合。
细胞上MET的pH依赖性释放
为了证明对MET有特异性的经pH工程化的抗体能够在中性pH下结合后在低pH下释放MET，使用本领域已知的方法(例如，如Gera N.(2012)《公共科学图书馆：综合(PLoSONE)》7(11):e48928中大体描述的那样)进行上文所描述的细胞表面结合测定的变型。简言之，收获适当的MET+细胞系(传代数小于25)，并且在U形底96孔微型板中每孔接种50,000个细胞。测试三个条件：在pH 7.4下结合和二次染色，在pH 5.0下结合和二次染色和在pH 7.4下结合，接着在pH 5.0下释放30分钟并且在pH 7.4下二次染色。测试对MET有特异性的经pH工程化的抗体以及对MET有特异性的对照抗体两者。根据所测试的条件，在pH 7.4或5.0下，用200μL的FACS缓冲液(1×含3％胎牛血清的PBS)洗涤细胞两次。将纯化的蛋白质样品稀释到适当pH的FACS缓冲液中并添加到细胞中，并使其在冰上结合一小时。在用一抗温育之后，如前将pH 7.4和pH 5.0条件洗涤两次，然后将100μl二次大鼠抗人Fc AF488(BioLegend410706)或其它适当抗体(1:50稀释)或抗Myc-Tag小鼠mAb-AF488(Cell SignalingTechnologies 2279S)(1:50稀释)添加在适当pH的FACS缓冲液中，并且在冰上温育30分钟。将pH 5.0释放条件用pH 7.4的FACS缓冲液洗涤两次，然后重悬于100μl的pH 5.0的FACS缓冲液中，并且在冰上温育30分钟，接着如针对其它条件所述的那样在pH7.4的FACS缓冲液中进行二次染色。如前将板洗涤两次并且重悬于在适当FACS缓冲液中的1％多聚甲醛中，以使它们固定用于流式细胞术分析。在流式细胞仪(Accuri C6,BD Biosciences)上对所有条件进行读数。作为FLl信号(作为平均荧光强度)相对于单独的二次染色的转变观察到结合。在数据分析后，可以确定对MET有特异性的经pH工程化的抗体以及对MET有特异性的对照抗体两者在中性pH下有效地结合MET+细胞的表面，但是对MET有特异性的经pH工程化的抗体在pH 5.0下结合不良；类似地，可以确定对MET有特异性的经pH工程化的抗体在pH 7.4下有效地结合，但然后在pH5.0下释放MET/与MET解结合。
与对MET有特异性的对照抗体(pHrodo)相比增强的对MET有特异性的经pH工程化的抗体在MET+细胞中的内溶酶体递送
为了验证和证明对MET有特异性的抗体实现了在细胞摄取后的内溶酶体定位，使用本领域已知的方法(例如，Mahmutefendic等人,《国际生物化学与细胞生物学杂志(Int.J.Biochem.Cell Bio.)》,2011)进行内化测定。简言之，如本文所述，使用本领域已知的方法组装一种高度表达MET的人类细胞。将细胞铺板，用PBS洗涤三次，并在37℃下于中性pH的培养基中温育60分钟，培养基中添加了浓度为每毫升2微克的对MET有特异性的已知对照抗体(例如，如本文所描述)、对MET有特异性的经pH工程化的抗体和适当的阴性同种型对照mAb(例如，如本文所描述)。在细胞子集中，使用本领域已知的方法进行抗体内化和内体定位的验证；例如，将细胞在如本文所述的4％甲醛中固定，使用TWEEN 20或本领域已知的其它方法渗透化(Jamur MC等人(2010)细胞膜的渗透性(Permeabilization of cellmembranes),《分子生物学方法(Methods Mol Biol.)》588:63-6)，另外用内体标志物，例如荧光RAB11抗体(RAB11抗体，Alexa Fluor 488，3H18L5，ABfinityTM兔单克隆抗体)染色，用适当的荧光标记的抗人第二抗体(例如，如本文所述)染色，并且如本文所述，使用共聚焦荧光显微镜术进行成像。对共聚焦图像的分析可以用于显示对MET有特异性的经pH工程化的抗体以及对MET有特异性的对照抗体两者均被内化并在内溶酶体中累积。
为了证明对MET有特异性的经pH工程化的抗体实现了相对于对MET有特异性的对照抗体的增强的内溶酶体累积，使用对MET有特异性的已知对照抗体(例如，如本文所描述)以及对MET有特异性的经pH工程化的抗体两者进行基于pHrodo的内化测定。该测定利用pHrodoTMiFL(P36014，ThermoFisher)，一种荧光随着pH降低而增加，使其在中性pH下细胞外部的荧光水平低于其在内溶酶体的酸性pH环境内部的荧光水平的染料。简言之，将适当的MET+细胞系(传代数小于25)悬浮在其推荐培养基中(例如，通过细胞库或细胞库数据库ATCC、DSMZ或ExPASy Cellosaurus)，并以2,000,000个细胞/mL，每孔1mL的密度接种在24孔板中。在将细胞保持在冰上的同时，将1mL的2x pHrodo iFL标记的抗体(根据制造商的说明书制备)添加到每个孔中，将孔移取/混合五次，并且将板在冰上在避光环境中温育45分钟。还将相同但单独的板在冰上温育，冰意指为非内化阴性对照。在这样温育后，将实验板移动到37℃培养箱，将阴性对照板保持在冰上以减缓或阻断内化，并且在指定时间点取样以产生内化时间过程。将样品置于U形底96孔板中，并且通过添加200μL/孔的冰冷FACS缓冲液淬灭内化。将板以2000xg旋转2分钟，重悬于200μL冰冷FACS缓冲液中，再次旋转，并再次重悬于FACS缓冲液中。最后，将样品上样到流式细胞仪中，使用与pHrodo iFL红色染料的激励和发射最大值一致的激励波长和发射波长(分别为566nm和590nm)读出细胞pHrodo荧光。在完成流式细胞术实验和对数据的分析后，可以观察到，用对MET有特异性的经pH工程化的抗体处理的细胞具有相对于对MET有特异性的已知对照抗体更高的pHrodo iFL信号，这表明对MET有特异性的经pH工程化的抗体实现了相对于对MET有特异性的对照抗体增强的内溶酶体累积。
可替代地，为了证明对MET有特异性的经pH工程化的抗体实现了相对于对MET有特异性的对照抗体增强的内溶酶体累积，进行上述实验的变型。将MET+细胞铺板，用PBS洗涤三次并且在37℃下于中性pH的培养基中温育60分钟，培养基中添加了浓度为2μg/mL的对MET有特异性的经pH工程化的抗体或对MET有特异性的对照抗体。温育后，将细胞用PBS洗涤三次，固定并渗透化，并用一组适当选择的结合晚期内体标志物以及溶酶体的抗体(例如，RAB7和LAMP1；Cell Signaling Technology，内体标志物抗体取样试剂盒#12666；AbCam，抗LAMP2抗体[GL2A7]，ab13524)染色。在一抗染色后，用荧光标记的二抗的适当混合物(例如，山羊抗人IgG(H&L)二抗(Alexa Fluor 647)目录号A-21445和Abcam山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor488)目录号ab150077)染色，并且使用共聚焦荧光显微镜术成像，并且对来自MET特异性抗体和内体标志物的信号的共同定位区域进行可视化和定量。在对数据进行分析时，可以揭示，相较于用对MET有特异性的对照抗体处理的孔，用对MET有特异性的经pH工程化的抗体处理的孔中的内溶酶体和MET特异性抗体信号的共同定位增加，并且由此可以证明对MET有特异性的经pH工程化的抗体实现了相对于对MET有特异性的对照抗体增强的内溶酶体累积。
与对MET有特异性的对照抗体相比，暴露于对MET有特异性的经pH工程化的抗体之后MET+细胞中的MET抗原密度增加
为了证明用对MET有特异性的经pH工程化的抗体对细胞进行处理不引起暴露于对MET有特异性的经pH工程化的抗体的细胞的表面上的MET的水平的可检测到的降低，或所述处理引起暴露于对MET有特异性的经pH工程化的抗体的细胞的表面上的MET的水平的降低相对于对MET有特异性的对照抗体较少，使用流式细胞术进行了抗原密度研究。简言之，将4.0x10^5个表达MET的细胞接种在96孔板中每孔的100μL培养基中。用滴度为1pM至1μM的以下各项对细胞进行处理：i)对MET有特异性的经pH工程化的抗体；ii)对MET有特异性的第一对照抗体；iii)适当同种型对照；以及iv)未经处理的对照。将细胞在37℃下温育2小时，此时将所有细胞用200nM对MET有特异性的荧光团标记的第二对照抗体(例如，如本文所描述)在4℃下温育30分钟，所述第二对照抗体具有与对MET有特异性的第一对照抗体或对MET有特异性的经pH工程化的抗体不同的表位(如通过例如关于细胞的竞争性结合研究所确定的)。在这30分钟温育之后，使用例如流式细胞术，使用本领域的普通技术人员已知的方法读出所有细胞的平均荧光强度(MFI)。并行地，可以使用可商购的定量试剂盒(例如，BDBiosciences PE藻红蛋白荧光定量试剂盒，目录号340495)生成可用于定量经处理的细胞表面上随MFI而变化的MET的存在的定量标准曲线；该定量标准曲线通过遵循制造商的说明书而创建。测定细胞表面上MET的绝对数目的其它方法是本领域已知的并且包括例如使用放射性同位素标记的试剂。在对数据进行分析时，可以揭示在至少一个抗体浓度下，用对MET有特异性的对照抗体处理的细胞经历其表面上的MET的水平的降低，而用对MET有特异性的经pH工程化的抗体处理的细胞经历相对于同种型对照和未经处理的对照两者显著更小的降低或完全无降低。
实例3.对MET有特异性的经pH工程化的抗体和对照抗体与细胞毒性药物缀合
制备抗体缀合物(ADC)，所述ADC包括通过缬氨酸-瓜氨酸(vc)接头(下文被称为MET-IgG-DC)与一甲基澳瑞他汀E(MMAE)连接的本文所描述的MET结合性IgG(下文被称为MET-IgG)。抗原结合蛋白构建体与vcMMAE的缀合开始于MET-IgG的部分还原，接着与马来酰亚胺己酰基-Val-Cit-PABC-MMAE(vcMMAE)反应。通过添加TCEP(TCEP:mAb的摩尔当量为2:1)，接着在0℃下温育过夜，使MET-IgG(20mg/mL)部分还原。然后将还原反应物温热至20℃。为了缀合所有硫醇，添加vcMMAE达到1:15的最终vcMMAE:还原Cys摩尔比。缀合反应在10％v/v的DMSO的存在下进行并且使其在20℃下进行60分钟。
在缀合反应之后，添加过量的游离N(乙酰基)-半胱氨酸(2个当量相对于vcMMAE电荷)以淬灭未反应的vcMMAE以生成Cys-Val-Cit-MMAE加合物。允许Cys淬灭反应在20℃下进行大约30分钟。如下纯化Cys淬灭反应混合物。上述缀合方法还可用于将马来酰亚胺己酰基一甲基澳瑞他汀F(mcMMAF)缀合至抗原结合蛋白构建体。
使用分批纯化方法纯化MET-IgG-DC。用适量的经水洗涤的Bu-HIC树脂(ToyoPearl；Tosoh Biosciences)处理反应混合物，即向混合物中添加七个重量的树脂。将树脂/反应混合物搅拌适当时间，并且通过分析疏水相互作用色谱法监测药物缀合物产物的去除，并通过粗聚丙烯过滤器过滤，并且用两个床体积的缓冲液(0.28M氯化钠、7mM磷酸钾，pH 7)洗涤。将合并的滤液和冲洗液合并，并且通过HIC HPLC分析产物概况。合并的滤液和冲洗液用10倍透析体积的15nM组氨酸缓冲液通过超滤/渗滤(UF/DF)进行缓冲液交换到15mM组氨酸(pH 6)中。
可以使用类似方案将如SG3249和SGD-1910等DNA毒素与MET-IgG缀合(参见Tiberghien AC等人(2016)“Tesirine(临床抗体)-药物缀合物吡咯并苯并二氮杂二聚体有效载荷的设计和合成(Design and Synthesis of Tesirine,a Clinical Antibody-DrugConjugate Pyrrolobenzodiazepine Dimer Payload)”,《ACS药物化学快报(ACS Med ChemLett)》7:983-987)。简言之，对于SG3249，将MET-IgG(15mg，100纳摩尔)稀释到13.5mL含有10mM硼酸钠pH 8.4、2.5mM EDTA和1.11mg/mL最终抗体浓度的还原缓冲液中。添加10mMTCEP溶液(1.5摩尔当量/抗体，150纳摩尔，15微升)，并将还原混合物在+37℃下于培养箱中加热1.5小时。在冷却至室温后，作为DMSO溶液(5摩尔当量/抗体，500纳摩尔，于1.5mL DMSO中)添加SG3249。将溶液在室温下混合1.25小时，然后通过添加N-乙酰半胱氨酸(1微摩尔，100微升，10mM)猝灭缀合，并使用装满了Superdex 200PG的GE Healthcare HiLoadTM 26/600柱注入到AKTATMPure FPLC中，并用2.6mL/min无菌过滤的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗脱。汇集对应于MET-IgG-DC单体峰的级分，使用15mL Amicon Ultracell 50KDa MWCO旋转过滤器浓缩，分析并无菌过滤。在Shimadzu Prominence系统上使用Phenomenex Aeris 3.6uXB-C18 150x 2.1mm柱，用一定梯度的水和乙腈洗脱，在280nm和330nm下对MET-IgG-DC还原样品(SG3249特异性)进行的UHPLC分析可以显示轻链和重链混合物与几个SG3249分子附接，与每个抗体有1至4个SG3249分子的药物/抗体比率(DAR)一致。在Shimadzu Prominence系统上使用Phenomenex Yarra 3u SEC-3000 300mm x 4.60mm柱，用含有200mM磷酸钾pH6.95、250mM氯化钾和10％异丙醇(v/v)的无菌过滤SEC缓冲液洗脱，在280nm下对MET-IgG-DC样品进行的UHPLC分析可以显示单体纯度超过90％，未检测到杂质。UHPLC SEC分析允许测定大于30％的最终MET-IgG-DC产率。
可替代地，经由赖氨酸残基将毒素缀合至抗体的方法是本领域已知的(例如，参见Catcott KC等人(2016)作为美登素抗体-药物缀合物的抗体库的微尺度筛选(Microscalescreening of antibody libraries as maytansinoid antibody-drug conjugates),《单克隆抗体》8:513-23)。另外，与上文类似的方法可用于将药物和毒素经二硫键缀合至非IgG形式，诸如Vh-Fc。
实例4.证明在MET+细胞中与对MET有特异性的对照ADC相比对MET有特异性的经pH工程化的ADC的增强的细胞毒性
对一组表达多种抗原密度(例如，如本文所描述)的MET+细胞系和使用本文所描述的方法选择的MET-细胞系(例如，T-47D ATCC目录号HTB-133)，以及任选地，表达转基因MET的细胞，例如用MET使用本领域已知的方法转染的HEK293细胞(例如，Expi293TM表达系统试剂盒赛默飞世尔目录号：A14635)，单独评价对MET有特异性的经pH工程化的ADC(例如，经pH工程化的MET-IgG-DC)和对MET有特异性的对照抗体ADC(例如，对照抗体MET-IgG-DC)两者的细胞毒性活性。出于验证的目的，在使用之前，使用本领域已知的方法，例如qPCR、流式细胞术、mRNARPKM和使用本领域已知的抗MET抗体(例如，如本文所述)进行抗体染色，接着使用荧光显微镜术、免疫组织化学法、流式细胞术、ELISA或本领域已知的其它方法进行染色可视化，测试所有细胞系的MET表达。为了评价化合物的细胞毒性，将细胞以大约10-40,000个/孔接种在150微升培养基中，然后在测定开始时用1pM至1μM分级剂量的化合物处理，一式四份。在添加测试化合物后进行细胞毒性测定96小时。在温育的最后4至6小时期间，向每个孔中添加五十微升的刃天青染料，以评估培养结束时的活细胞。使用分别535nm和590nm的激发波长和发射波长通过荧光光谱法确定染料减少。对于分析，将经处理的细胞的刃天青减少程度与未处理的对照细胞的程度进行比较，并且确定细胞毒性百分比。可替代地，使用WST-8试剂盒根据制造商的说明书(例如，Dojindo Molecular Technologies目录号CCK-8)测量细胞毒性。使用本领域已知的曲线拟合方法计算观察到半最大杀时的浓度IC50。在对数据进行分析时，可以确定对MET有特异性的经pH工程化的抗体ADC和对照抗体ADC对一种或多种MET+细胞系有显著细胞毒性，但对MET-细胞具有较低毒性。还可以确定，对MET有特异性的经pH工程化的ADC对一种或多种MET+细胞系比对MET有特异性的对照抗体ADC更具细胞毒性，这是因为：a)其在一种或多种浓度下显示出更大的杀伤深度，或者b)其显示出更低的IC50，或者c)其显示出在中性pH下在细胞上的解离常数KD(如本文所描述)除以其在那些相同细胞上的IC50的比率更高。
另外地，可以在二次ADC测定中测量对MET有特异性的抗体的细胞毒性活性。二次ADC测定是本领域已知的(例如，Moradec目录号αHFc-NC-MMAF和目录号αHFc-CL-MMAE，以及相关制造商的说明书)。简言之，除了用对MET有特异性的ADC取代对MET有特异性的抗体之外，如前一段落中那样进行测定，并且为了评价化合物的细胞毒性，将细胞以每孔大约10-40,000个接种在150微升培养基中，然后在测定开始时用1pM至1μM分级剂量的对MET有特异性的抗体进行处理(培养基中的最终浓度，已经与培养基中100nM最终浓度的Moradec目录号αHFc-NC-MMAF二次ADC试剂预混合并且在将混合物添加到培养基之前，在37℃下预温育30分钟)，一式四份。
通过采用以下方案的细胞增殖测定，另外测量对MET有特异性的经pH工程化的ADC和对MET缀合物有特异性的对照抗体ADC，以及对MET有特异性的抗体在二次ADC测定中的细胞毒性(普洛麦格公司(Promega Corp.)《技术简报(Technical Bulletin)》TB288；Mendoza等人,《癌症研究》62:5485-5488,2002)：
1.将100微升含有约104个细胞(例如，如本文所述的MET+细胞)的细胞培养等分试样沉积在不透明壁96孔板的每个孔中。
2.制备含有培养基且不含细胞的对照孔。
3.将对MET有特异性的ADC以1pM-1uM的浓度范围添加到实验孔中并温育1-5天。可替代地，在二次ADC测定中，将100nM二次ADC试剂(培养基中的最终浓度，Moradec目录号αHFc-NC-MMAF)和1pM-1uM(培养基中的最终浓度)浓度范围的对MET有特异性的抗体预混合并且在37℃下预温育30分钟，然后将混合物添加到培养基中，并且温育1-5天。
4.将板平衡至室温大约30分钟。
5.添加与每孔中存在的细胞培养基体积相等的体积的CellTiter-Glo试剂。
6.将内容物在轨道振荡器上混合2分钟以诱导细胞裂解。
7.将板在室温下温育10分钟以稳定发光信号。
8.将发光作为RLU＝相对发光单位在图中记录和报告。
实例5.证明在MET+细胞中与对MET有特异性的对照ADC相比对MET有特异性的经pH工程化的ADC的增强的毒素释出
对MET有特异性的经pH工程化的ADC(例如，经pH工程化的MET-IgG-DC)也可以展示出相较于对MET有特异性的对照抗体DC(例如，对照抗体MET-IgG-DC)在MET+细胞中增加的毒素释出。在用如本文所描述的对MET有特异性的经pH工程化的抗体ADC和对照抗体ADC处理MET+细胞之后，使用LC-MS/MS方法来对经处理的MET+细胞中未缀合(即，释出的)MMAE进行定量(Singh,A.P.和Shah,D.K.《药物代谢与处置(Drug Metabolism and Disposition)》45.11(2017):1120-1132)。使用具有电喷射间期和三重四极质谱仪的LC-MS/MS系统。对于MMAE的检测，使用XBridge BEH Amide柱(Waters,Milford,MA)，其流动相A为水(含5mM甲酸铵和0.1％甲酸)而流动相B为95:5乙腈/水(其中0.1％甲酸和1mM甲酸铵)，使用在40℃下流速为0.25mL/分钟的梯度。色谱运行的总持续时间为12分钟，其中监测两次MRM扫描(718.5/686.5和718.5/152.1amu)。将氘代(d8)MMAE(MCE MedChem Express,Monmouth Junction,NJ)用作内标。首先，通过将每种药物标准品的峰面积除以内标获得的峰面积来推导出用于定量生物样品中未缀合的MMAE的方程。然后根据标准品浓度绘制所得峰面积比，并使用线性回归将数据点拟合为曲线。将三个QC样品包括在标准曲线的低、中和高范围中，以评估所开发的标准曲线的预测能力。然后使用获得的标准曲线推断生物样品中MMAE的观测浓度。为了测量MMAE浓度，将经过处理的细胞样品沉淀并在新鲜培养基中重构至25万个细胞/100μL的最终浓度。用d8-MMAE(1ng/mL)对样品进行加标，然后通过添加2倍体积的冰冷甲醇进行细胞裂解，接着在-20℃下冻融循环45分钟。通过在4℃下以13,000rpm将样品离心15分钟，接着收集上清液，获得最终细胞裂解产物。对于标准品和QC样品的制备，在类似于上面提到的细胞裂解的程序之前，用已知浓度的MMAE和内标(d8-MMAE)对新鲜细胞悬浮液(25万个/100μl)进行加标。然后将所得细胞裂解物蒸发并重组在流动相B中，然后注射到LC-MS/MS中。观察到未缀合的MMAE在用对MET有特异性的经pH工程化的ADC处理的MET+细胞的裂解物中的浓度大于在用对MET有特异性的对照抗体ADC处理的MET+细胞中的浓度。
对于微管蛋白抑制性毒素，还通过监测细胞活力和细胞周期阶段评估了毒素释出。将约2.0x 10^5个MET+细胞铺板在96孔平底板中并用如本文所述的对MET有特异性的经pH工程化的抗体ADC和对照抗体ADC进行处理。处理后，将细胞转移到96圆底板中，并且将板以400rcf离心2分钟以倾析上清液。用活/死eFluor 660对倾析的细胞染色。然后将细胞离心并用FACS缓冲液(含2％ FBS的PBS)洗涤，之后用BD CycletestTMPlus DNA试剂盒(目录号340242)分析细胞周期分布。简言之，将细胞重悬于76ul溶液A中并在室温下温育10分钟。然后添加61μL溶液B，并且将细胞在室温下再温育10分钟。最后，添加61μL冷溶液C，并且将细胞再次在室温下温育10分钟。在最后一个温育步骤之后立即通过流式细胞术(不洗涤)以10μL/秒的流速分析细胞。在暴露于对MET有特异性的经pH工程化的ADC的情况下可以观察到相较于对MET有特异性的对照抗体ADC增加的G2/M期阻滞。
对于损伤DNA的毒素(例如，吡咯并苯二氮卓或“PBD”)，通过测量磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)来评估DNA损伤。H2AX通常响应于DNA双链断裂而磷酸化；然而，由于用DNA交联毒素诸如PBD或顺铂处理也可以观察到γH2AX水平增加(Huang,X.等人2004,CytometryPart A58A,99–110)。将MET+细胞用如本文所述的对MET有特异性的经pH工程化的抗体ADC和对照抗体ADC进行处理。处理后，用PBS冲洗细胞，然后在0℃下在PBS中的1％无甲醇甲醛(Polysciences,Warrington,PA)中悬浮固定15分钟。在-20℃下将细胞重悬于70％乙醇中至少2小时。然后将细胞在PBS中洗涤两次并且悬浮于在1％(w/v)的BSA(Sigma)的PBS溶液中的0.2％ Triton X-100(Sigma)中30分钟以阻抑非特异性抗体结合。将细胞再次离心(200g，5分钟)并且将细胞沉淀悬浮于100μL含有1:800稀释的抗组蛋白γH2AX多克隆抗体(Trevigen,Gaithersburg,MD)的1％ BSA中。然后将细胞在4℃下温育过夜，用PBS洗涤两次，并且于室温下在黑暗中重悬于100μL的1:30稀释的FITC缀合的猪抗兔免疫球蛋白的F(ab')2片段(DAKO,Carpinteria,CA)中30分钟。然后在室温下将细胞用溶解在含有100μg/mL无DNA酶的RNA酶A(Sigma)的PBS中的5μg/mL的PI(Molecular Probes,Eugene,OR)复染20分钟。使用本领域已知的方法，使用流式细胞术测量FITCγH2AX信号和PI复染剂的细胞荧光。当比较处于细胞周期相同阶段内的细胞(基于总DNA含量)时，可观察到经处理的MET+细胞相对于未处理的MET+细胞(其充当基线)具有增加的FITCγH2AX信号。此外，可以观察到用对MET有特异性的经pH工程化的ADC处理的MET+细胞具有相较于用对MET有特异性的对照抗体ADC处理的细胞超过基线的γH2AX水平的更大增加。除γH2AX测定法外，DNA交联可以用Comet测定法更直接地评估(Chandna,S.(2004)Cytometry 61A,127–133)。
另外，如本文所公开的，可以使用本实施例中的方法，不直接缀合，通过进行二次ADC测定，而不使用一次缀合ADC来测定经pH工程化的抗体和对照抗体。
实例6.在携带肿瘤的动物中，与对MET有特异性的对照抗体相比，对MET有特异性的经pH工程化的抗体的半衰期缩短的证明
本发明所描述的对MET有特异性的经pH工程化的抗体的令人惊讶的方面之一可以是其在携带肿瘤的动物中促进抗体与MET在核内体或溶酶体内的解离增加从而使血清半衰期相对于对MET有特异性的对照抗体或对MET无特异性的抗体有所缩短的能力。这种缩短的血清半衰期是由对MET有特异性的经pH工程化的抗体由于其在与MET结合时增强的通过肿瘤细胞的细胞内化而从循环中清除的频率的增强引起的，所述细胞内化随时间推移可以通过携带肿瘤的动物中的未结合的对MET有特异性的经pH工程化的抗体的血清浓度的下降而观察到。为了证明这些性质，使用对MET有特异性的经pH工程化的抗体和对MET有特异性的对照抗体，使用本领域已知的方法(例如，Gupta,P.等人(2016),《单克隆抗体(mAbs)》,8:5,991-997)进行在荷瘤小鼠体内的一系列动物研究。简言之，为了进行小鼠研究，通过尾静脉向两组异种移植有MET+细胞系(例如，如本文所描述)的NOD SCID小鼠(例如杰克逊实验室(Jackson Labs)NOD.CB17-Prkdcscid/J储存号：001303)施用对MET有特异性的经pH工程化的抗体或对MET有特异性的对照抗体的单次静脉内团注(例如，5mg/kg)。异种移植小鼠是通过使100-500万个MET+细胞在体外生长并且皮下接种到小鼠右胁腹来制备的。肿瘤在300mm3时大小匹配。肿瘤的长度(L)和宽度(W)的测量经由电子卡尺进行并且根据以下公式计算体积：V＝L×W^2/2。在以下时间点中的每个时间点经由眶后放血从每组收集血样：15分钟、30分钟、1小时、8小时、24小时和3天、7天、10天、14天、17天、21天和28天。对样品进行加工以收集血清，并且使用ELISA或本领域已知的其它方法(例如，PAC测定法或MAC测定法；Fischer,S.K.等人(2012),mAbs,4:5,623-631，利用例如抗人IgG抗体JacksonImmunoResearch Labs，目录号109–006–006)来定量抗体浓度。根据时间推移绘制对MET有特异性的经pH工程化的抗体和对MET有特异性的对照抗体的抗体浓度。在对数据进行分析时，可以观察到，对MET有特异性的经pH工程化的抗体具有相对于对MET有特异性的对照抗体显著更短的血清半衰期，由此证明了对MET有特异性的经pH工程化的抗体的pH依赖性能够促进相对于与同一抗原结合但在其pH依赖性方面不同的其它相似结合因子(例如，对MET有特异性的对照抗体)在核内体或溶酶体内增强的解离。
另外，可以使用以上方法，通过用对MET有特异性的经pH工程化的抗体和对照抗体取代对MET有特异性的经pH工程化的抗体ADC和对照抗体ADC(即，研究如本文所述与药物或毒素缀合之后的抗体)来评估对MET有特异性的经pH工程化的抗体ADC和对照抗体ADC的半衰期。
实例7.对MET有特异性的经pH工程化的ADC相对于对MET有特异性的对照抗体ADC在小鼠异种移植模型中增加的效力
可在MET+细胞的皮下异种移植模型中证明对MET有特异性的pH工程化ADC对MET+肿瘤的抗肿瘤活性增强。对于实验，使100-500万个MET+细胞在体外生长并且每只小鼠皮下接种到雌性免疫缺陷(例如，SCID-Beige或NOD scid)小鼠的右胁腹中。肿瘤在100-200mm3时大小匹配，并且经腹膜内(IP)给药(每～4-7天1剂，总共～2-6剂)。肿瘤的长度(L)和宽度(W)的测量经由电子卡尺进行并且根据以下公式计算体积：V＝L×W^2/2。通过尾静脉施用对MET有特异性的经pH工程化的ADC或对MET有特异性的对照抗体ADC的团注(例如，5mg/kg)。在施用对MET有特异性的经pH工程化的ADC的情况下，肿瘤生长抑制(TGI)和肿瘤生长延迟(TGD)以及存活率相较于以同一方案施用对MET有特异性的对照抗体ADC得到显著改善。
任选地，在处死动物中确定肿瘤细胞向各组织的扩散。根据Schneider,T.等人，Clin.Exp.Metas.19(2002)571-582测量转移。简言之，收获组织并且通过实时PCR定量人Alu序列。通过实时PCR定量的较高人DNA水平对应于较高转移水平。相较于以同一方案用对MET有特异性的对照抗体ADC治疗的小鼠，人Alu序列的水平(与肿瘤细胞侵入到次级组织相关)在用对MET有特异性的经pH工程化的ADC治疗的动物体内显著较低，这对应于转移减少。可替代地，可以在MET+患者来源的异种移植模型(例如，可从The Jackson Laboratory获得)中显示对MET有特异性的pH工程化ADC的抗肿瘤活性增强。
实例8.产生经pH工程化的双特异性MET双特异性抗体和证明相较于对照双特异性抗体的示例性性质
为了产生具有改良的毒性和内化性质的对MET有特异性的经pH工程化的抗体，构建了与MET上的两个不同表位结合的双特异性抗体。本领域已知，双互补位抗体可以显示出增加的抗原依赖性内化，因此可用于诸如抗体-药物缀合物的应用(例如，参见Li等人(2016)在对HER2靶向治疗不耐受或不适合的初级模型中双极性HER2靶向抗体-药物缀合物诱导肿瘤消退(A Biparatopic HER2-Targeting Antibody-Drug Conjugate InducesTumor Regression in Primary Models Refractory to or Ineligible for HER2-Targeted Therapy),《癌细胞(Cancer Cell)》29:117-29)。简言之，使用来自各自与MET上的不与另一表位重叠的不同表位结合的两种不同的对MET有特异性的经pH工程化的抗体的轻链/重链对组装对MET有特异性的经pH工程化的MET x MET双特异性、双互补位抗体。例如，使用本文所描述的方法或本领域的普通技术人员已知的其它方法，发现一组与非重叠性表位结合的对MET有特异性的经pH工程化的抗体。简言之，基于它们结合MET上基本上不同的表位来选择两种结合因子，如Abdiche YN等人(2009)“探索使用Octet,ProteOn和Biacore生物传感器的阻断测定(Exploring blocking assays using Octet,ProteOn,andBiacore biosensors)”,《分析生物化学(Anal Biochem)》386:172-80中那样，通过例如结合竞争测定确定的。可替代地，简言之，如本文所描述的，将用对MET有特异性的第一抗体转染的细胞的细胞培养上清液相对于50μg/mL的抗体表达水平归一化，并且捕获在抗人Fc传感器(福特生物科学公司(Forte Bio))上。使用1X动力学缓冲液(福特生物科学公司)建立基线，并且使传感器与50nM含MET的1X PBS(已经混合并且在37℃下与对MET有特异性的第二抗体转染上清液或对MET有特异性的第一抗体转染上清液预温育30分钟，两种转染上清液都相对于50ug/mL归一化)在pH 7.4下缔合300秒以生成缔合曲线。如果存在对MET有特异性的第二抗体时的缔合速率显著快于存在对MET有特异性的第一抗体时的缔合速率(如通过仪器软件计算的，或如通过缔合水平随时间推移升高所看到的)，则对MET有特异性的第二抗体被视为与MET的非重叠性表位结合。任选地，针对与表达MET的细胞上的表位结合时的内化性质对每种抗体进行筛选，并且选择良好内化抗体。用于确定存在于细胞表面上的分子的内化速率的测定法是本领域已知的。参见，例如，Wiley等人(1991)J.Biol.Chem.266:11083-11094；及Sorkin和Duex(2010)Curr.Protoc.CellBiol.Chapter,Unit-15.14；Vainshtein等人(2015)Pharm Res.32:286-299。一经选择，为两条臂合成具有用于重链和轻链配对的工程化突变的重链和轻链构建体(Spiess等人,“双特异性抗体的替代分子形式及其治疗应用(Alternative molecular formats andtherapeutic applications of bispecific antibodies),”2015)。对MET有特异性的双特异性抗体通过对应重链和轻链质粒在例如Expi293细胞中的共表达产生。收获细胞培养上清液并经受蛋白质A纯化。通过如离子交换色谱法、疏水相互作用色谱法和混合模式色谱法等额外纯化步骤将对MET有特异性的异源二聚化抗体与同源二聚化物种分离。将经纯化的对MET有特异性的经pH工程化的MET x MET双特异性、双互补位抗体通过质谱法表征以确认同源二聚化物种的纯度和不存在，并且通过尺寸排阻色谱法表征以确认单体抗原结合性蛋白构建体物种的存在。对于产物抗体，经由Biacore分析确认与MET的结合。产生双特异性抗体的其它方法是本领域已知的，并且也可以用于产生双特异性抗体，例如本文所描述的对MET有特异性的MET x MET双特异性、双互补位抗体(Labrijn等人(2014)“用于产生稳定的双特异性IgG1的受控Fab组交换(Controlled Fab-arm exchange for the generation ofstable bispecific IgG1)”《自然-实验室指南(Nature Protocols)》9:2450-2463,访问http://www.nature.com/nprot/journal/v9/n10/abs/nprot.2014.169.html)，如本领域的普通技术人员将显而易见的。可替代地，代替对MET有特异性的MET x MET抗体，可以使用对本领域的技术人员显而易见的类似方法构建对MET有特异性的经pH工程化的MET xBINDER抗体，其中结合因子是本领域已公开的或使用像本文的那些方法或本领域已知的那些方法(例如，基于展示或基于免疫的方法)的方法发现的任何抗体。
接下来，可以使用本文所描述的方法证明对MET有特异性的经pH工程化的MET xMET抗体的示例性性质，其中适当的对照为对MET有特异性的对照抗体单特异性或双特异性抗体。简言之，可以证实与对照相比，对MET有特异性的经pH工程化的MET x MET抗体：a)以pH依赖性方式与细胞结合，例如，在中性pH下结合但在酸性pH下不结合；并且b)以pH依赖性方式从细胞中释放，例如在中性pH下结合并且在酸性pH下释放；并且c)显示出在MET+细胞中增强的内溶酶体累积；并且d)显示出在暴露于MET+细胞之后增加的MET抗原密度；并且e)当与毒素缀合时，显示出对MET+细胞增加的细胞毒性；并且f)当与毒素缀合时，显示出在与MET+细胞一起温育时增加的毒素释出；并且g)显示出在暴露于相关动物模型中的MET抗原时缩短的半衰期；并且h)当与毒素缀合时，显示出在MET+细胞的小鼠异种移植模型中增加的功效。类似地，可以使用本文所述的方法证明对MET有特异性的经pH工程化的MET xBINDER抗体的示例性性质，其中适当的对照为对MET有特异性的对照抗体MET x BINDER双特异性抗体。
实例9.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。选择特立妥珠单抗(重链SEQ ID NO:159、轻链SEQ ID NO:160)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，用组氨酸系统性取代重链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种重链序列变体和b)对应的起始抗体轻链共转染来生成重链CDR中仅有一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 384仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价该变体的pH依赖性。简言之，将15μL细胞培养上清液稀释到185μL的pH7.4的1x PBST中，以上样到传感器尖端上。这导致41.1μg/mL的高浓度、13.7μg/mL的低浓度和26.5μg/mL的平均浓度。然后将此稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H，批号LC11SE2008)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链变体以供进一步分析。还注意到，虽然一些组氨酸和丙氨酸突变消除了MET结合，但其它突变则耐受MET结合动力学的变化很小(例如，解离常数KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。
特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的变体以重链中可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。
实例10.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。选择特立妥珠单抗(重链SEQ ID NO:159、轻链SEQ ID NO:160)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，用组氨酸系统性取代轻链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种轻链序列变体和b)对应的起始抗体重链共转染来生成轻链CDR中仅有一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nMMET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链变体以供进一步分析(例如，MYT2040)。还注意到，一些组氨酸和丙氨酸突变耐受MET结合动力学的变化很小(例如，解离常数KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的组氨变体以轻链中可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。
实例11.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。选择特立妥珠单抗(重链SEQ ID NO:159、轻链SEQ ID NO:160)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例9中选择用于进一步分析的重链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种重链组合序列变体和b)对应的起始抗体轻链共转染来生成重链CDR中有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1XPBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET，Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链组合变体以供进一步分析。
实例12.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。选择特立妥珠单抗(重链SEQ ID NO:159、轻链SEQ ID NO:160)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例10中选择用于进一步分析的轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种轻链组合序列变体和b)对应的起始抗体重链共转染来生成轻链CDR中有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1XPBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链组合变体以供进一步分析。
实例13.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。选择特立妥珠单抗(重链SEQ ID NO:159、轻链SEQ ID NO:160)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链和轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例9-12中选择用于进一步分析的重链和轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。使用本领域已知的方法，通过用a)一种轻链序列变体或轻链组合序列变体，和b)一种重链序列变体或重链组合序列变体共转染Expi293细胞，产生具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1xPBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择在pH 5.4下表现出解离增强或在pH 7.4下表现出解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的成对的重链和轻链变体进行进一步分析(MYT3463、MYT3477、MYT3491、MYT3603、MYT3604、MYT3606、MYT3607、MYT3608、MYT3609、MYT3610、MYT3611、MYT3612、MYT3614、MYT3615、MYT4211、MYT4212、MYT4214、MYT4217和MYT4220)。
实例14.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。选择特立妥珠单抗(重链SEQ ID NO:159、轻链SEQ ID NO:160)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例9中选择用于进一步分析的重链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法用下列物质共转染Expi293细胞产生在重链CDR中具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体：a)一种重链组合序列变体，其含有分别描述于(Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000)和(Dall,WF等人“增加人IgG1对新生儿Fc受体的亲和力：生物学后果(Increasing the Affinity of a Human IgG1 for theNeonatal Fc Receptor:Biological Consequences)”《免疫学杂志(The Journal ofImmunology)》(2002)；169:5171-5180)中的三铰链(TH)和YTE突变；和b)对应的起始抗体轻链。在允许四天的蛋白质表达后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，使用蛋白A磁珠(Genscript L00273)纯化，并评价在Detroit 562细胞(ATCC CCL-138)上的内溶酶体递送。收集Detroit 562细胞(ATCC；CCL-138)并将其重悬于EMEM培养基(ATCC；30-2003)10％ GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(Genesee Scientific；25-514H)中。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释至100,000个细胞/mL，将100ul接种到96孔平底细胞培养板中，并在37C 5％CO2中过夜附着。然后将一抗在天然培养基中稀释至20nM，然后与60nM Incucyte HumanFabFluor-pH红色抗体标记试剂(Sartorius；4722)以1:1混合。将混合物在室温下温育20分钟，接着添加到细胞中。然后将板立即放入Incucyte S3活细胞分析系统中进行图像获取和分析。检测起始抗体(无取代)的内溶酶体递送，并检测每种对应抗体变体，以便告知与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代而增强的内溶酶体递送。选择例如图1所示的显示增强的内溶酶体递送(与起始抗体相比)的重链组合变体用于进一步分析。使用OctetRED 96e仪器上的生物膜干涉技术(BLI)评价所选变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的MET(cMET,SinoBiological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4或pH 5.4的1X PBST，持续300-600秒。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 7.4和pH 5.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；和b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择例如图2所示的显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链组合变体以供进一步分析。
实例15.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。选择特立妥珠单抗(重链SEQ ID NO:159、轻链SEQ ID NO:160)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例10中选择用于进一步分析的轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法用下列物质共转染Expi293细胞产生在轻链CDR中具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体：a)一种轻链组合序列变体；和b)对应的起始抗体重链，其含有分别描述于(Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000)和(Dall,WF等人“增加人IgG1对新生儿Fc受体的亲和力：生物学后果”《免疫学杂志》(2002)；169:5171-5180)中的三铰链(TH)和YTE突变。在允许四天的蛋白质表达后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，使用蛋白A磁珠(Genscript L00273)纯化，并评价在Detroit562细胞(ATCC CCL-138)上的内溶酶体递送。收集Detroit 562细胞(ATCC；CCL-138)并将其重悬于EMEM培养基(ATCC；30-2003)10％ GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(GeneseeScientific；25-514H)中。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释至100,000个细胞/mL，将100ul接种到96孔平底细胞培养板中，并在37C 5％ CO2中过夜附着。然后将一抗在天然培养基中稀释至20nM，然后与60nM Incucyte Human FabFluor-pH红色抗体标记试剂(Sartorius；4722)以1:1混合。将混合物在室温下温育20分钟，接着添加到细胞中。然后将板立即放入Incucyte S3活细胞分析系统中进行图像获取和分析。检测起始抗体(无取代)的内溶酶体递送，并检测每种对应抗体变体，以便告知与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代而增强的内溶酶体递送。
实例16.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Feng Y等人“MET抗体药物缀合物(MET Antibody Drug Conjugate)”美国专利申请US2020/0061204 A1(2020))。选择依玛妥珠单抗(重链SEQ ID NO:161、轻链SEQ ID NO:162)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(LefrancMP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，用组氨酸系统性取代重链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种重链序列变体和b)对应的起始抗体轻链共转染来生成重链CDR中仅有一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将此稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1xPBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链变体以供进一步分析(例如，MYT2319)。还注意到，虽然一些组氨酸和丙氨酸突变消除了MET结合(例如，MYT2341)，但其它突变则耐受MET结合动力学的变化很小(例如，解离常数KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。
特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的变体以重链中可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。
实例17.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Feng Y等人“MET抗体药物缀合物”美国专利申请US 2020/0061204A1(2020))。选择依玛妥珠单抗(重链SEQ ID NO:161、轻链SEQ ID NO:162)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，用组氨酸系统性取代轻链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种轻链序列变体和b)对应的起始抗体重链共转染来生成轻链CDR中仅有一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始ABPC(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链变体以供进一步分析(例如，MYT3978)。还注意到，一些组氨酸和丙氨酸突变耐受MET结合动力学的变化很小(例如，解离常数KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的组氨变体以轻链中可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。
实例18.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Feng Y等人“MET抗体药物缀合物”美国专利申请US 2020/0061204A1(2020))。选择依玛妥珠单抗(重链SEQ ID NO:161、轻链SEQ ID NO:162)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例16中选择用于进一步分析的重链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种重链组合序列变体和b)对应的起始抗体轻链共转染来生成重链CDR中有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1XPBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET，SinoBiological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链组合变体以供进一步分析(例如，MYT2850、MYT2861)。
实例19.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Feng Y等人“MET抗体药物缀合物”美国专利申请US 2020/0061204A1(2020))。选择依玛妥珠单抗(重链SEQ ID NO:161、轻链SEQ ID NO:162)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例17中选择用于进一步分析的轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种轻链组合序列变体和b)对应的起始抗体重链共转染来生成轻链CDR中有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1XPBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的MET(cMET,SinoBiological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链组合变体以供进一步分析(例如，MYT4326)。
实例20.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Feng Y等人“MET抗体药物缀合物”美国专利申请US 2020/0061204A1(2020))。选择依玛妥珠单抗(重链SEQ ID NO:161、轻链SEQ ID NO:162)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链和轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例16-19中选择用于进一步分析的重链和轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。使用本领域已知的方法，通过用a)一种轻链序列变体或轻链组合序列变体，和b)一种重链序列变体或重链组合序列变体共转染Expi293细胞，产生具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1xPBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1xPBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1XPBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线使传感器与在pH 7.4的1XPBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择在pH 5.4下表现出解离增强或在pH 7.4下表现出解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的成对的重链和轻链变体进行进一步分析(例如，MYT3999、MYT4001、MYT4007、MYT4010、MYT4011、MYT4012、MYT4013、MYT4014、MYT4015、MYT4016、MYT4017、MYT4018、MYT4019、MYT4023、MYT4032、MYT4034、MYT4040)。
实例21.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Feng Y等人“MET抗体药物缀合物”美国专利申请US 2020/0061204A1(2020))。选择依玛妥珠单抗(重链SEQ ID NO:161、轻链SEQ ID NO:162)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例16中选择用于进一步分析的重链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法用下列物质共转染Expi293细胞产生在重链CDR中具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体：a)一种重链组合序列变体，其含有分别描述于(Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000)和(Dall,WF等人“增加人IgG1对新生儿Fc受体的亲和力：生物学后果”《免疫学杂志》(2002)；169:5171-5180)中的三铰链(TH)和YTE突变；和b)对应的起始抗体轻链。在允许四天的蛋白质表达后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，使用蛋白A磁珠(Genscript L00273)纯化，并评价在Detroit 562细胞(ATCC CCL-138)上的内溶酶体递送。收集Detroit562细胞(ATCC；CCL-138)并将其重悬于EMEM培养基(ATCC；30-2003)10％GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(Genesee Scientific；25-514H)中。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释至100,000个细胞/mL，将100ul接种到96孔平底细胞培养板中，并在37C 5％ CO2中过夜附着。然后将一抗在天然培养基中稀释至20nM，然后与60nM Incucyte Human FabFluor-pH红色抗体标记试剂(Sartorius；4722)以1:1混合。将混合物在室温下温育20分钟，接着添加到细胞中。然后将板立即放入Incucyte S3活细胞分析系统中进行图像获取和分析。检测起始抗体(无取代)的内溶酶体递送，并检测每种对应抗体变体，以便告知与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代而增强的内溶酶体递送。
实例22.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板(Hicks，SW和Lai，K“MET抗体和免疫缀合物和其用途(MET Antibodies andImmunoconjugates and uses thereof)”国际专利申请WO 2020/014306 A1(2020))。选择hucMET27Gv1.3(重链SEQ ID NO:225、轻链SEQ ID NO:235)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，用组氨酸系统性取代重链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种重链序列变体和b)对应的起始抗体轻链共转染来生成重链CDR中仅有一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1xPBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1XPBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链变体以供进一步分析。还注意到，虽然一些组氨酸和丙氨酸突变消除了MET结合，但其它突变则耐受MET结合动力学的变化很小(例如，解离常数KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。
特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的变体以重链中可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。
实例23.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板(Hicks，SW和Lai，K“MET抗体和免疫缀合物和其用途”国际专利申请WO 2020/014306 A1(2020))。选择hucMET27Gv1.3(重链SEQ ID NO:225、轻链SEQ ID NO:235)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，用组氨酸系统性取代轻链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种轻链序列变体和b)对应的起始抗体重链共转染来生成轻链CDR中仅有一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1xPBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1XPBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1xPBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)轻链变体以供进一步分析。还注意到，一些组氨酸和丙氨酸突变耐受MET结合动力学的变化很小(例如，解离常数KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的组氨变体以轻链中可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。
实例24.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板(Hicks，SW和Lai，K“MET抗体和免疫缀合物和其用途”国际专利申请WO 2020/014306 A1(2020))。选择hucMET27Gv1.3(重链SEQ ID NO:225、轻链SEQ ID NO:235)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例22中选择用于进一步分析的重链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种重链组合序列变体和b)对应的起始抗体轻链共转染来生成重链CDR中有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET，Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链组合变体以供进一步分析。
实例25.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板(Hicks，SW和Lai，K“MET抗体和免疫缀合物和其用途”国际专利申请WO 2020/014306 A1(2020))。选择hucMET27Gv1.3(重链SEQ ID NO:225、轻链SEQ ID NO:235)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例23中选择用于进一步分析的轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种轻链组合序列变体和b)对应的起始抗体重链共转染来生成轻链CDR中有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链组合变体以供进一步分析(例如，MYT4230)。
实例26.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板(Hicks，SW和Lai，K“MET抗体和免疫缀合物和其用途”国际专利申请WO 2020/014306 A1(2020))。选择hucMET27Gv1.3(重链SEQ ID NO:225、轻链SEQ ID NO:235)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例22中选择用于进一步分析的重链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法用下列物质共转染Expi293细胞产生在重链CDR中具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体：a)一种重链组合序列变体，其含有分别描述于(Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000)和(Dall,WF等人“增加人IgG1对新生儿Fc受体的亲和力：生物学后果”《免疫学杂志》(2002)；169:5171-5180)中的三铰链(TH)和YTE突变；和b)对应的起始抗体轻链。在允许四天的蛋白质表达后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，使用蛋白A磁珠(Genscript L00273)纯化，并评价在Detroit 562细胞(ATCC CCL-138)上的内溶酶体递送。收集Detroit 562细胞(ATCC；CCL-138)并将其重悬于EMEM培养基(ATCC；30-2003)10％GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(Genesee Scientific；25-514H)中。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释至100,000个细胞/mL，将100ul接种到96孔平底细胞培养板中，并在37C 5％CO2中过夜附着。然后将一抗在天然培养基中稀释至20nM，然后与60nM Incucyte Human FabFluor-pH红色抗体标记试剂(Sartorius；4722)以1:1混合。将混合物在室温下温育20分钟，接着添加到细胞中。然后将板立即放入Incucyte S3活细胞分析系统中进行图像获取和分析。检测起始抗体(无取代)的内溶酶体递送，并检测每种对应抗体变体，以便告知与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代而增强的内溶酶体递送。
实例27.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板(Hicks，SW和Lai，K“MET抗体和免疫缀合物和其用途”国际专利申请WO 2020/014306 A1(2020))。选择hucMET27Gv1.3(重链SEQ ID NO:225、轻链SEQ ID NO:235)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例23中选择用于进一步分析的轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法用下列物质共转染Expi293细胞产生在轻链CDR中具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体：a)一种轻链组合序列变体；和b)对应的起始抗体重链，其含有分别描述于(Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000)和(Dall,WF等人“增加人IgG1对新生儿Fc受体的亲和力：生物学后果”《免疫学杂志》(2002)；169:5171-5180)中的三铰链(TH)和YTE突变。在允许四天的蛋白质表达后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，使用蛋白A磁珠(Genscript L00273)纯化，并评价在Detroit 562细胞(ATCC CCL-138)上的内溶酶体递送。收集Detroit 562细胞(ATCC；CCL-138)并将其重悬于EMEM培养基(ATCC；30-2003)10％GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(Genesee Scientific；25-514H)中。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释至100,000个细胞/mL，将100ul接种到96孔平底细胞培养板中，并在37C 5％CO2中过夜附着。然后将一抗在天然培养基中稀释至20nM，然后与60nM Incucyte Human FabFluor-pH红色抗体标记试剂(Sartorius；4722)以1:1混合。将混合物在室温下温育20分钟，接着添加到细胞中。然后将板立即放入Incucyte S3活细胞分析系统中进行图像获取和分析。检测起始抗体(无取代)的内溶酶体递送，并检测每种对应抗体变体，以便告知与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代而增强的内溶酶体递送。选择显示增强的内溶酶体递送(与起始抗体相比)的轻链组合变体用于进一步分析。使用Octet RED 96e仪器上的生物膜干涉技术(BLI)评价所选变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1xPBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4或pH 5.4的1X PBST，持续300-600秒。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 7.4和pH 5.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；和b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链组合变体以供进一步分析。
实例28.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Fujita，R等人(2020)一种在c-Met扩增和非扩增癌症中的效力优于c-Met酪氨酸激酶抑制剂的新的非激动剂c-Met抗体药物缀合物(ANovel Non-Agonist c-Met Antibody DrugConjugate with Superior Potency Over a c-Met Tyrosine Kinase Inhibitor in c-Met Amplified and Non-Amplified Cancers),《癌症生物学与治疗(Cancer Biology andTherapy)》,21(6):549-559)。选择P3D12(重链SEQ ID NO:163、轻链SEQ ID NO:164)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，用组氨酸系统性取代重链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种重链序列变体和b)对应的起始抗体轻链共转染来生成重链CDR中仅有一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1xPBST中以上样到传感器尖端上。然后将此稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链变体以供进一步分析(例如，MYT3698和MYT3701)。还注意到，一些组氨酸和丙氨酸突变耐受MET结合动力学的变化很小(例如，解离常数KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。
特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的变体以重链中可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。
实例29.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Fujita，R等人(2020)一种在c-Met扩增和非扩增癌症中的效力优于c-Met酪氨酸激酶抑制剂的新的非激动剂c-Met抗体药物缀合物,《癌症生物学与治疗》,21(6):549-559)。选择P3D12(重链SEQ ID NO:163、轻链SEQ ID NO:164)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，用组氨酸系统性取代轻链CDR内的单独氨基酸残基，一次一个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种轻链序列变体和b)对应的起始抗体重链共转染来生成轻链CDR中仅有一个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链变体以供进一步分析(例如，MYT3735和MYT3740)。还注意到，一些组氨酸和丙氨酸突变耐受MET结合动力学的变化很小(例如，解离常数KD或解离速率的变化小于1倍)或无变化。特别是因为组氨酸是大的带正电荷的氨基酸，这些无变化的组氨变体以轻链中可耐受广泛突变并且产生具有不同序列但相似结合特性的抗体的位置而闻名，这是在其它方面并不明显的名称。
实例30.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Fujita，R等人(2020)一种在c-Met扩增和非扩增癌症中的效力优于c-Met酪氨酸激酶抑制剂的新的非激动剂c-Met抗体药物缀合物,《癌症生物学与治疗》,21(6):549-559)。选择P3D12(重链SEQ ID NO:163、轻链SEQ ID NO:164)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例28中选择用于进一步分析的重链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种重链组合序列变体和b)对应的起始抗体轻链共转染来生成重链CDR中有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1XPBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET，Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(即，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(即，koff值更低)。选择例如图3A-3C所示的显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链组合变体以供进一步分析(例如，MYT4313)。
实例31.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Fujita，R等人(2020)一种在c-Met扩增和非扩增癌症中的效力优于c-Met酪氨酸激酶抑制剂的新的非激动剂c-Met抗体药物缀合物,《癌症生物学与治疗》,21(6):549-559)。选择P3D12(重链SEQ ID NO:163、轻链SEQ ID NO:164)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例29中选择用于进一步分析的轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法，将Expi293细胞用a)一种轻链组合序列变体和b)对应的起始抗体重链共转染来生成轻链CDR中有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1XPBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链组合变体以供进一步分析(例如，MYT4247)。
实例32.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Fujita，R等人(2020)一种在c-Met扩增和非扩增癌症中的效力优于c-Met酪氨酸激酶抑制剂的新的非激动剂c-Met抗体药物缀合物,《癌症生物学与治疗》,21(6):549-559)。选择P3D12(重链SEQ ID NO:163、轻链SEQ ID NO:164)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链和轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例28-31中选择用于进一步分析的重链和轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。使用本领域已知的方法，通过用a)一种轻链序列变体或轻链组合序列变体，和b)一种重链序列变体或重链组合序列变体共转染Expi293细胞，产生具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1xPBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4或pH 5.4的1X PBST，持续300-600秒。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择例如图4A-4D所示的在pH 5.4下表现出解离增强或在pH 7.4下表现出解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的成对的重链和轻链变体进行进一步分析(例如，MYT5342、MYT5343、MYT5344、MYT5345、MYT5346、MYT5350、MYT5351、MYT5352、MYT5353、MYT5354、MYT5355、MYT5356、MYT5357、MYT5359、MYT5360、MYT5366、MYT5367、MYT5369、MYT5370、MYT5372、MYT5373、MYT5375、MYT5376和MYT5381)。
实例33.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Fujita，R等人(2020)一种在c-Met扩增和非扩增癌症中的效力优于c-Met酪氨酸激酶抑制剂的新的非激动剂c-Met抗体药物缀合物,《癌症生物学与治疗》,21(6):549-559)。选择P3D12(重链SEQ ID NO:163、轻链SEQ ID NO:164)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例28中选择用于进一步分析的重链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法用下列物质共转染Expi293细胞产生在重链CDR中具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体：a)一种重链组合序列变体，其含有分别描述于(WangJ等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000)和(Dall,WF等人“增加人IgG1对新生儿Fc受体的亲和力：生物学后果”《免疫学杂志》(2002)；169:5171-5180)中的三铰链(TH)和YTE突变；和b)对应的起始抗体轻链。在允许四天的蛋白质表达后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，使用蛋白A磁珠(Genscript L00273)纯化，并评价在Detroit 562细胞(ATCC CCL-138)上的内溶酶体递送。简言之，收集Detroit 562细胞(ATCC；CCL-138)并将其重悬于EMEM培养基(ATCC；30-2003)10％ GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(GeneseeScientific；25-514H)中。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释至100,000个细胞/mL，将100ul接种到96孔平底细胞培养板中，并在37C 5％ CO2中过夜附着。然后将一抗在天然培养基中稀释至20nM，然后与60nM Incucyte Human FabFluor-pH红色抗体标记试剂(Sartorius；4722)以1:1混合。将混合物在室温下温育20分钟，接着添加到细胞中。然后将板立即放入Incucyte S3活细胞分析系统中进行图像获取和分析。检测起始抗体(无取代)的内溶酶体递送，并检测每种对应抗体变体，以便告知与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代而增强的内溶酶体递送。选择显示增强的内溶酶体递送(与起始抗体相比)的重链组合变体用于进一步分析。使用Octet RED 96e仪器上的生物膜干涉技术(BLI)评价所选变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1XPBST中的MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4或pH 5.4的1X PBST，持续300-600秒。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 7.4和pH 5.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；和b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的重链组合变体以供进一步分析。
实例34.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已描述了多种MET结合单克隆抗体，其可用作工程改造pH依赖性结合的模板(Fujita，R等人(2020)一种在c-Met扩增和非扩增癌症中的效力优于c-Met酪氨酸激酶抑制剂的新的非激动剂c-Met抗体药物缀合物,《癌症生物学与治疗》,21(6):549-559)。选择P3D12(重链SEQ ID NO:163、轻链SEQ ID NO:164)作为用于通过组氨酸扫描进行pH工程化的MET结合性单克隆抗体。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。为了产生pH依赖性序列变体，将先前已在实例29中选择用于进一步分析的轻链CDR内的单独氨基酸突变系统性组合，一次两个或更多个。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。通过使用本领域已知的方法用下列物质共转染Expi293细胞产生在轻链CDR中具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体：a)一种轻链组合序列变体；和b)对应的起始抗体重链，其含有分别描述于(Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000)和(Dall,WF等人“增加人IgG1对新生儿Fc受体的亲和力：生物学后果”《免疫学杂志》(2002)；169:5171-5180)中的三铰链(TH)和YTE突变。在允许四天的蛋白质表达后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，使用蛋白A磁珠(Genscript L00273)纯化，并评价在Detroit562细胞(ATCC CCL-138)上的内溶酶体递送。简言之，收集Detroit 562细胞(ATCC；CCL-138)并将其重悬于EMEM培养基(ATCC；30-2003)10％ GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(Genesee Scientific；25-514H)中。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释至100,000个细胞/mL，将100ul接种到96孔平底细胞培养板中，并在37C 5％ CO2中过夜附着。然后将一抗在天然培养基中稀释至20nM，然后与60nM Incucyte Human FabFluor-pH红色抗体标记试剂(Sartorius；4722)以1:1混合。将混合物在室温下温育20分钟，接着添加到细胞中。然后将板立即放入Incucyte S3活细胞分析系统中进行图像获取和分析。检测起始抗体(无取代)的内溶酶体递送，并检测每种对应抗体变体，以便告知与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代而增强的内溶酶体递送。选择显示增强的内溶酶体递送(与起始抗体相比)的轻链组合变体用于进一步分析。使用Octet RED 96e仪器上的生物膜干涉技术(BLI)评价所选变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1XPBST中的MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4或pH 5.4的1X PBST，持续300-600秒。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 7.4和pH 5.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；和b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。选择显示出在pH 5.4下解离增强或在pH 7.4下解离减少或两种情况(与起始抗体相比)的轻链组合变体以供进一步分析。
实例35.抗MET抗体的重组
通过用编码与具有或不具有TH和YTE突变的人IgG1 Fc基因融合的可变重区的质粒转染Expi293细胞产生选定的pH工程化抗MET变体作为野生型IgG1分子(例如，在实例9-13、16-20、22-25和28-32中)和以下IgG1分子，其含有如(Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000)所述的三铰链(TH)突变，以及如(Dall,WF等人“增加人IgG1对新生儿Fc受体的亲和力：生物学后果”《免疫学杂志》(2002)；169:5171-5180)所述的YTE突变。使用本领域已知的方法，用a)一条重链序列，所述重链序列由对应于野生型人IgG1同种型或除了TH和YTE突变外相同的序列的可变重链区和恒定区组成，和b)一条轻链序列共转染Expi293细胞。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线，并且使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。检查每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据三项标准提供信息：a)与对应的起始抗体相比，在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；b)与在pH 5.4下抗体变体本身相比，在pH7.4下的解离减少(例如，koff值更低)；以及c)野生型人IgG1抗体及其含有TH和YTE的变体的比较。野生型人IgG1和含有TH和YTE突变的重组人IgG1抗体显示出大致相似的缔合和解离曲线。我们从这些数据中得出结论，我们的可变结构域序列变体的所需特性，包括但不限于pH依赖性和内溶酶体递送，无论是在IgG1形式中还是在具有TH和YTE突变的IgG1形式中都被保留。
实例36.表征经pH工程化的抗MET抗体的细胞内化和内溶酶体递送
分析来自实施例9-13、16-20、22-25和28-31的选择的抗MET pH工程化抗体变体在U-87MG细胞(MET+)、SNU-5细胞(MET+)、NCI-H1373细胞(MET+)、NCI-H1573细胞(MET+)和/或Detroit 562细胞(MET+)中的内化和内溶酶体递送。收集U-87MG细胞(ATCC HTB-14)、Detroit 562细胞(ATCC CCL-138)、NCI-H1373细胞(ATCC CRL-5866)、NCI-H1573细胞(ATCCCRL-5877)或SNU-5细胞(ATCC CRL-5973)，并重悬于EMEM培养基(U-87MG和Detroit 562，ATCC；30-2003)、IMDM培养基(SNU-5，ATCC；30-2005)或RPMI培养基(NCI-H1373和NCI-H1573，ATCC 30-2001)加5％(NCI-H1573)、10％(U-87MG，Detroit 562，NCI-H1373)或20％(SNU-5)GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(GeneseScientific；25-514H)。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释到2,000,000个细胞/mL，并将50μl/孔接种到96孔平底细胞培养板(GeneseeScientific；25-109)中。将抗MET经pH工程化的抗体变体、起始抗体抗体、对照IgG1同种型对照(BP0297，Bioxcell公司(Bioxcell))和媒剂对照在天然培养基中稀释，随后1:1与3x摩尔比Zenon pHrodo iFL人IgG标记试剂(赛默飞世尔公司(ThermoFisher)；Z25611)混合。将混合物在室温下温育20分钟，随后加入1:1的细胞至终体积为100μL。将细胞、抗MET抗体变体和Zenon pHrodo iFL人IgG标记试剂的混合物在37℃、5％ CO2下温育1-24小时。温育后，向每个孔添加100μL冰冷流式细胞术(FC)缓冲液(磷酸盐缓冲盐水(PBS)，pH 7.4+2mM乙二胺四乙酸(EDTA)+2％(v/v)HI FBS。然后将细胞在4℃下以2000rpm旋转2分钟，用200μL冰冷FC缓冲液洗涤并重悬于100μL冰冷FC缓冲液中。使用BD Accuri C6流式细胞仪检测平均绿色荧光强度。使用Flowjo分析软件对数据进行分析。pHrodo绿为pH敏感型染料，其在核内体和溶酶体的低pH环境中发荧光，并且因此可以用于对抗体内化和内溶酶体递送进行量化。在U-87MG(MET+)、Detroit 562(MET+)、SNU-5(MET+)、NCI-H1573(MET+)或NCI-H1373(MET+)细胞中，通过pHrodo绿平均荧光强度测量抗MET起始抗体和变体在一定浓度下的内化和内溶酶体递送。若干种经pH工程化的抗MET抗体变体显示出相对于其对应起始抗体增加的平均荧光强度，这证明了在较低pH下增加的解离使细胞内部的内化和内溶酶体递送增强，如通过相较于IgG1同种型对照增加的荧光或增加的荧光示出的。将每个条顶部的每种经pH工程化的抗MET抗体变体的增加的内溶酶体递送按以下比率定量：变体的平均荧光强度减去IgG对照的平均荧光强度，然后整体除以变体的对应起始抗体的平均荧光强度减去IgG对照的平均荧光强度。例如，MYT2040、MYT3609、MYT3611和MYT3615，即特立妥珠单抗的抗体变体，显示出相对于特立妥珠单抗(MYT0886)增加的内化和内溶酶体递送。例如，MYT2319、MYT2850、MYT2861和MYT4326，即依玛妥珠单抗的抗体变体，显示出相对于依玛妥珠单抗增加的内化和内溶酶体递送。例如，MYT3698、MYT3735、MYT3740、MYT4247和MYT4325，即P3D12的抗体变体，显示出相对于P3D12增加的内化和内溶酶体递送。选择具有相对于其起始抗体增加的平均荧光强度的此类经pH工程化的抗MET抗体变体以供进一步分析。
实例37.抗MET mAb的热稳定性
通过使用差示扫描量热法(DSF)测量蛋白质熔融温度(Tm)。DSF通过测量当蛋白质由于加热而解折叠时来自分子Sypro Orange(Thermo Scientific目录号S6650)的荧光信号而使蛋白质解折叠可视化。当蛋白质解折叠时，它将更多亲水性区域暴露于SyproOrange染料，该染料转而与这些亲水性区域结合，导致信号增加。计算蛋白质的Tm作为解折叠转变的半最大值，并且可以通过绘制Sypro Orange信号的第一导数并找到该导数图的局部最大值而可视化。将20μL含蛋白质样品的1x PBS，pH 7.4与5μL的25X Sypro Orange主混合物混合，得到5x Sypro Orange的最终浓度。将样品添加到96孔PCR板(ThermoScientific目录号AB-2400/W)中并用光学盖(Thermo Scientific目录号4360954)密封。将PCR板插入实时PCR机(Thermo Scientific Quant Studio 3)并且使板温稳定在25℃下3分钟，然后以0.2℃的增量升温至95℃，在测量Sypro Orange信号之前稳定1秒。测定抗MET起始抗体和变体的熔融温度(Tm)值。若干种变体显示出与其起始抗体相似的熔融温度值，证实了通过pH工程化产生的变体与其对应的起始抗体(例如，依玛妥珠单抗、hucMET27Gv1.3或P3D12)相比可以保持功能上适当的热稳定性。所有测试的变体具有大于或等于其对应起始抗体(例如，米妥昔单抗(mirvetuximab))的熔融温度减去10℃的熔融温度，并且因此被选择用于进一步分析。
本文的发现与其它抗原诸如CLEC12a和两个其它靶上的类似工程化大不相同，其中每个靶标的多个变体显示出在低pH下解离增强，然而尽管这些变体具有有利的pH依赖性结合特性(这些变体特异性结合CLEC12a和两个其它靶标)，但是与对应的起始抗体(例如，起始抗体)相比，其在细胞内化和内溶酶体递送方面具有小于10％的增加。这些变体(特异性结合CLEC12a和两个其它靶标)也具有与相应的起始抗体(例如，起始抗体)相似的生物物理特性(例如，抗体表达、热稳定性、在pH 7.4下的亲和力等)，证实这并非是测试的变体的生物物理特性(即，与pH 5.4下解离增强无关的生物物理特性)所特有的。
实例38.MYT5351恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT5351包含包括SEQ ID NO:5的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:6的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:35的重链和SEQ ID NO:41的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:36和轻链：SEQ ID NO:4)1；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:37的重链和SEQ ID NO:41的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:35的重链和SEQ ID NO:42的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:36的重链和SEQ ID NO:42的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:37的重链和SEQ ID NO:42的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:38的重链和SEQ ID NO:41的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:39的重链和SEQ ID NO:41的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:40的重链和SEQ NO:41的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例39.MYT4313恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4313包含包括SEQ ID NO:7的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:8的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:43的重链和SEQ ID NO:49的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:44和轻链：SEQ ID NO:49)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:45的重链和SEQ ID NO:49的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:43的重链和SEQ ID NO:50的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:44的重链和SEQ ID NO:50的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:45的重链和SEQ ID NO:50的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:46的重链和SEQ ID NO:49的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:47的重链和SEQ ID NO:49的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:48的重链和SEQ NO:49的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例40.MYT4325恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4325包含包括SEQ ID NO:9的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:10的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:51的重链和SEQ ID NO:57的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:51和轻链：SEQ ID NO:57)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:51的重链和SEQ ID NO:57的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:51的重链和SEQ IDNO:58的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:52的重链和SEQ ID NO:58的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:53的重链和SEQ ID NO:58的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:54的重链和SEQ ID NO:57的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:55的重链和SEQ ID NO:57的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:56的重链和SEQ NO:57的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例41.MYT4826恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4826包含包括SEQ ID NO:11的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:12的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:59的重链和SEQ ID NO:65的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:60和轻链：SEQ ID NO:65)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:61的重链和SEQ ID NO:65的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:59的重链和SEQ IDNO:66的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:60的重链和SEQ ID NO:66的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:61的重链和SEQ ID NO:66的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:62的重链和SEQ ID NO:65的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:63的重链和SEQ ID NO:65的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:64的重链和SEQ NO:65的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例42.MYT4837恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4837包含包括SEQ ID NO:13的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:14的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:67的重链和SEQ ID NO:73的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:68和轻链：SEQ ID NO:73)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:69的重链和SEQ ID NO:73的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:67的重链和SEQ IDNO:74的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:68的重链和SEQ ID NO:74的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:69的重链和SEQ ID NO:74的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:70的重链和SEQ ID NO:73的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:71的重链和SEQ ID NO:73的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:72的重链和SEQ NO:73的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例43.MYT4849恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4849包含包括SEQ ID NO:15的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:16的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:75的重链和SEQ ID NO:81的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:76和轻链：SEQ ID NO:81)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:77的重链和SEQ ID NO:81的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:75的重链和SEQ IDNO:82的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:76的重链和SEQ ID NO:82的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:77的重链和SEQ ID NO:82的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:78的重链和SEQ ID NO:11的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:79的重链和SEQ ID NO:81的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:80的重链和SEQ NO:81的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例44.MYT4942恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4942包含包括SEQ ID NO:17的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:18的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:83的重链和SEQ ID NO:89的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:84和轻链：SEQ ID NO:89)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:85的重链和SEQ ID NO:89的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:83的重链和SEQ IDNO:90的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:84的重链和SEQ ID NO:90的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:85的重链和SEQ ID NO:90的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:86的重链和SEQ ID NO:89的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:87的重链和SEQ ID NO:89的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:88的重链和SEQ NO:89的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例45.MYT5309恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT5309包含包括SEQ ID NO:19的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:20的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:91的重链和SEQ ID NO:97的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:92和轻链：SEQ ID NO:97)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:93的重链和SEQ ID NO:97的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:91的重链和SEQ IDNO:98的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:92的重链和SEQ ID NO:98的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:93的重链和SEQ ID NO:98的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:94的重链和SEQ ID NO:97的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:95的重链和SEQ ID NO:97的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:96的重链和SEQ NO:97的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例46.MYT5344恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT5344包含包括SEQ ID NO:21的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:22的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:99的重链和SEQ ID NO:105的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:100和轻链：SEQ ID NO:105)；三铰链取代和YTE取代(SEQ IDNO:101的重链和SEQ ID NO:105的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:99的重链和SEQ ID NO:106的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:100的重链和SEQ IDNO:106的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:101的重链和SEQ ID NO:106的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:102的重链和SEQ ID NO:105的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:103的重链和SEQ ID NO:105的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:104的重链和SEQ NO:105的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例47.MYT5367恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT5367包含包括SEQ ID NO:23的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:24的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:107的重链和SEQ ID NO:113的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:108和轻链：SEQ ID NO:113)；三铰链取代和YTE取代(SEQ IDNO:109的重链和SEQ ID NO:113的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:107的重链和SEQ ID NO:114的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:108的重链和SEQ IDNO:114的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:109的重链和SEQ ID NO:114的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:110的重链和SEQ ID NO:113的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:111的重链和SEQ ID NO:113的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:112的重链和SEQ NO:113的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例48.MYT4827恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4827包含包括SEQ ID NO:25的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:26的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:115的重链和SEQ ID NO:121的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:116和轻链：SEQ ID NO:121)；三铰链取代和YTE取代(SEQ IDNO:117的重链和SEQ ID NO:121的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:115的重链和SEQ ID NO:122的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:116的重链和SEQ IDNO:122的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:117的重链和SEQ ID NO:122的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:118的重链和SEQ ID NO:121的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:119的重链和SEQ ID NO:121的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:120的重链和SEQ NO:121的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例49.MYT4312恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4312包含包括SEQ ID NO:27的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:28的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:123的重链和SEQ ID NO:129的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:124和轻链：SEQ ID NO:129)；三铰链取代和YTE取代(SEQ IDNO:125的重链和SEQ ID NO:129的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:123的重链和SEQ ID NO:130的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:124的重链和SEQ IDNO:130的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:125的重链和SEQ ID NO:130的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:126的重链和SEQ ID NO:129的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:127的重链和SEQ ID NO:129的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:128的重链和SEQ NO:129的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例50.MYT4953恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4953包含包括SEQ ID NO:29的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:30的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:131的重链和SEQ ID NO:137的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:132和轻链：SEQ ID NO:137)；三铰链取代和YTE取代(SEQ IDNO:133的重链和SEQ ID NO:137的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:131的重链和SEQ ID NO:138的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:132的重链和SEQ IDNO:138的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:133的重链和SEQ ID NO:138的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:134的重链和SEQ ID NO:137的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:135的重链和SEQ ID NO:137的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:136的重链和SEQ NO:137的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例51.MYT4940恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4940包含包括SEQ ID NO:31的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:32的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:139的重链和SEQ ID NO:145的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:140和轻链：SEQ ID NO:145)；三铰链取代和YTE取代(SEQ IDNO:141的重链和SEQ ID NO:145的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:139的重链和SEQ ID NO:146的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:140的重链和SEQ IDNO:146的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:141的重链和SEQ ID NO:146的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:142的重链和SEQ ID NO:145的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:143的重链和SEQ ID NO:145的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:144的重链和SEQ NO:145的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例52.MYT4888恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
因此，MYT4888包含包括SEQ ID NO:33的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:34的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:147的重链和SEQ ID NO:153的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:148和轻链：SEQ ID NO:153)；三铰链取代和YTE取代(SEQ IDNO:149的重链和SEQ ID NO:153的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:147的重链和SEQ ID NO:154的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:148的重链和SEQ IDNO:154的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:149的重链和SEQ ID NO:154的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:150的重链和SEQ ID NO:153的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:151的重链和SEQ ID NO:153的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:152的重链和SEQ NO:153的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例53.特立妥珠单抗恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
包含恒定结构域取代的特立妥珠单抗变体包含包括SEQ ID NO:159的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:160的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:159、SEQID NO:160)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:165的重链和SEQ ID NO:171的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:166和轻链：SEQ ID NO:171)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:167的重链和SEQ ID NO:171的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:165的重链和SEQ ID NO:172的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:166的重链和SEQ ID NO:172的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:167的重链和SEQ ID NO:172的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:168的重链和SEQ ID NO:171的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:169的重链和SEQ ID NO:171的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:170的重链和SEQ NO:171的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例54.依玛妥珠单抗恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
包含恒定结构域取代的依玛妥珠单抗变体包含包括SEQ ID NO:161的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:162的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:161、SEQID NO:162)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:173的重链和SEQ ID NO:179的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:174和轻链：SEQ ID NO:179)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:175的重链和SEQ ID NO:179的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:173的重链和SEQ ID NO:180的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQ NO:174的重链和SEQ ID NO:180的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQ ID NO:175的重链和SEQ ID NO:180的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:176的重链和SEQ ID NO:179的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:177的重链和SEQ ID NO:179的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:178的重链和SEQ NO:179的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例55.P3D12抗-cMET恒定结构域取代的表征
如上文所讨论的，进行组氨酸扫描，其中使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。选择某些重可变链结构域和轻可变链结构域用于另外的实验。
另外地，将细胞毒性或细胞抑制剂与抗体缀合的各种方法是已知的。例如，缀合在天然存在的氨基酸位置和/或在引入(例如，经工程化的氨基酸)处是可能的。如本文所讨论的，将缀合位点引入到抗体中的各种方法是已知的。
工程化的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：产生“三铰链”缀合位点的取代，例如，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失产生三铰链缀合位点，在SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
天然存在的氨基酸缀合位点的实例包含但不限于以下：在氨基酸位置103处的半胱氨酸、在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸、(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸和/或在氨基酸位置112处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
本文所提供的抗体还可以包含经修饰的恒定区。例如，可以将一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失引入(例如，工程化)到本文所提供的抗体中的任一种的恒定结构域(例如，恒定重和/或恒定轻)中。恒定区中的氨基酸取代可以对抗体产生不同的影响，包含例如延长抗体的半衰期。此类取代的非限制性实例包含以下：在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代；在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代；以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代(例如，“YTE”取代)；以及在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代(例如，“LS”取代)。
包含恒定结构域取代的P3D12抗cMET变体包含包括SEQ ID NO:163的可变重链结构域和包括SEQ ID NO:164的可变轻链结构域。各种经修饰的恒定区(例如，经修饰的重恒定区、经修饰的轻恒定区)可以与本文所描述的可变链(例如，分别为SEQ ID NO:163、SEQID NO:164)组合。以下表示以下重链和轻链组合：仅三铰链缀合(SEQ ID NO:181的重链和SEQ ID NO:187的轻链)；三铰链缀合和LS取代(重链：SEQ ID NO:182和轻链：SEQ ID NO:187)；三铰链取代和YTE取代(SEQ ID NO:183的重链和SEQ ID NO:187的轻链)；三铰链缀合和V205取代(SEQ ID NO:181的重链和SEQ ID NO:188的轻链)；三铰链取代和LS取代和V205取代(SEQNO:182的重链和SEQ ID NO:188的轻链)；三铰链取代和YTE取代和V205C取代(SEQID NO:183的重链和SEQ ID NO:188的轻链)；三铰链取代和A118C取代(SEQ ID NO:184的重链和SEQ ID NO:187的轻链)；三铰链取代和LS取代和A118C取代(SEQ ID NO:185的重链和SEQ ID NO:187的轻链)；三铰链取代和YTE取代和A118C取代(SEQ ID NO:186的重链和SEQNO:187的轻链)。
可以通过上述实例中所描述的测定中的任一者来评估上述组合。
实例56.pH工程化抗体的选择性结合亲和力的提高
通过FACS分析，对具有cMET表达范围的细胞系、Detroit-562细胞(ATCC；CCL-138)、NCI-H1975(ATCC CRL-5908)和HUVEC(C2519A，龙沙公司(Lonza))进行对MET有特异性的经pH工程化的抗体的亲和力的测量。为本研究选择的细胞系是从商业来源获得的，并且使用制造商推荐的条件对其进行培养。在接收时培养所有细胞系，扩增并以类似的传代编号将其冷冻保存，用于亲和力实验。简言之，在100μL培养基中，将1.0x 10^5个表达MET的细胞按孔铺板在96孔板中。在pH 7.4下，用200μL的FACS缓冲液(1x含3％胎牛血清的PBS)将细胞洗涤两次。将纯化的蛋白质样品稀释到pH 7.4的FACS缓冲液中，进行从100nM至1pM的滴定，并且添加到细胞中，并且允许在冰上结合2小时。在用一级抗体温育之后，与以前一样，将细胞洗涤两次，并且然后将100μl的1:200稀释的二级山羊抗人AF488(IgG交叉吸附的多克隆二级抗体)添加到pH 7.4的FACS缓冲液中，并在冰上温育1小时。将板洗涤两次，在流式细胞仪(Accuri C6，BD生物科学公司(BD Biosciences))上读取结合。作为FLl信号(作为平均荧光强度)相对于单独的二次染色的转变观察到结合。
与表达高水平MET的Detroit-562细胞结合的亲本抗体和与表达低水平MET的HUVEC细胞结合的亲本抗体显示出类似的亲和力。出乎意料的是，与具有较低MET表达的靶细胞HUVEC细胞相比，选择的对MET有特异性的经pH工程化的抗体更强烈地与具有较高MET表达水平的靶细胞Detroit-562结合。表1中呈现了一系列测试制品对若干细胞系的亲和力。因此，经pH工程化的抗体构建体在其亲合力上与亲本化合物不同，这可能被期望转化为在治疗cMET过表达的恶性肿瘤中对高表达靶细胞的选择性增加，并且所选抗体与正常肝细胞的结合减少。
表1.
实例57.与对MET有特异性的对照ADC相比，对MET有特异性的经pH工程化的ADC的半衰期增加的证明
本发明所描述的对MET有特异性的经pH工程化的ADC的另一方面可以是其相对于对MET有特异性的对照抗体ADC促进血清半衰期增加的能力。为了证明这些性质，使用对MET有特异性的经pH工程化的ADC和对MET有特异性的对照抗体ADC，使用本领域已知的方法(例如，Gupta,P.等人(2016),《单克隆抗体》,8:5,991-997)进行在猕猴体内的一系列动物研究。以2.7mg/kg的剂量向雌性猴(每种测试制品3只)通过隐静脉注射施用对MET有特异性的经pH工程化的ADC或对MET有特异性的对照抗体ADC的团注。可替代地，在一组几只猴中施用几个不同剂量的MET结合蛋白。在以下时间点通过外周静脉或股静脉采集血液样品：给药前、给药后15分钟、12小时、2天、3天、4天、7天、10天、14天、17天、21天和28天。使用本领域已知的方法(例如，ELISA)分析血液样品中是否存在对MET有特异性的经pH工程化的ADC或对MET有特异性的对照抗体ADC。
根据时间推移绘制对MET有特异性的经pH工程化的ADC和对MET有特异性的对照抗体ADC的抗体浓度。在分析数据后，可以观察到，相对于对MET有特异性的对照抗体ADC，对MET有特异性的经pH工程化的ADC的血清半衰期显著更长，由此证明血清稳定性和暴露情况改善。
实例58.对MET有特异性的经pH工程化的ADC相对于对MET有特异性的对照抗体ADC在小鼠异种移植模型中增加的效力
可在MET+细胞的皮下异种移植模型中证明对MET有特异性的pH工程化ADC对MET+肿瘤的抗肿瘤活性增强。对于实验，使500万H1375人肺腺癌细胞(部分##)或H1975人肺腺癌细胞(部分#)在体外生长并且每只小鼠皮下接种到雌性免疫缺陷型(例如，CB.17SCID Jax对查尔斯河(Charles river)部分#)小鼠的右胁腹中。另外地，使1000万Detroit 562人咽癌细胞(部分##)在体外生长并且每只小鼠皮下接种到雌性无胸腺裸鼠的右胁腹中(NCrnu/nu，Jax/对查尔斯河部分#)。H1375和H1975异种移植物的肿瘤大小匹配为100-150mm3，并且Detroit-562异种移植物的肿瘤大小匹配为125-175mm3。肿瘤的长度(L)和宽度(W)的测量经由电子卡尺进行并且根据以下公式计算体积：V＝L×W^2/2。通过尾静脉施用对MET有特异性的经pH工程化的ADC或2mg或4mg对MET有特异性的对照抗体ADC的团注(4mg/kg)。在施用对MET有特异性的经pH工程化的ADC的情况下，肿瘤生长抑制(TGI)和肿瘤生长延迟(TGD)以及存活率相较于以同一方案施用对MET有特异性的对照抗体ADC得到显著改善。
任选地，在以下时间点中的每个时间点通过下颌放血从每组采集血液样品：第2天、第7天、第14天。对样品进行加工以收集血清，并且使用ELISA或本领域已知的其它方法(例如，PAC测定法或MAC测定法；Fischer,S.K.等人(2012),mAbs,4:5,623-631，利用例如抗人IgG抗体Jackson ImmunoResearch Labs，目录号109–006–006)来定量抗体浓度。根据时间推移绘制对MET有特异性的经pH工程化的抗体和对MET有特异性的对照抗体的抗体浓度。
任选地，在处死动物中确定肿瘤细胞向各组织的扩散。根据Schneider,T.等人，Clin.Exp.Metas.19(2002)571-582测量转移。简言之，收获组织并且通过实时PCR定量人Alu序列。通过实时PCR定量的较高人DNA水平对应于较高转移水平。相较于以同一方案用对MET有特异性的对照抗体ADC治疗的小鼠，人Alu序列的水平(与肿瘤细胞侵入到次级组织相关)在用对MET有特异性的经pH工程化的ADC治疗的动物体内显著较低，这对应于转移减少。可替代地，可以在MET+患者来源的异种移植模型(例如，可从The Jackson Laboratory获得)中显示对MET有特异性的pH工程化ADC的抗肿瘤活性增强。
实例59.表征经pH工程化的抗MET抗体的细胞内化和内溶酶体递送
分析选择的抗MET pH工程化抗体变体在U-87MG细胞(MET+)、SNU-5细胞(MET+)、NCI-H1373细胞(MET+)、NCI-H1573细胞(MET+)和/或Detroit 562细胞(MET+)中的内化和内溶酶体递送。收集U-87MG细胞(ATCC HTB-14)、Detroit 562细胞(ATCC CCL-138)、NCI-H1373细胞(ATCC CRL-5866)、NCI-H1573细胞(ATCC CRL-5877)或SNU-5细胞(ATCC CRL-5973)，并重悬于EMEM培养基(U-87MG和Detroit 562，ATCC；30-2003)、IMDM培养基(SNU-5，ATCC；30-2005)或RPMI培养基(NCI-H1373和NCI-H1573，ATCC 30-2001)加5％(NCI-H1573)、10％(U-87MG，Detroit 562，NCI-H1373)或20％(SNU-5)GenClone热灭活胎牛血清(HI FBS)(GeneseScientific；25-514H)。使用台盼蓝染色和Countess II FL自动细胞计数仪(Thermofisher；AMQAF1000)确定细胞计数。然后将细胞稀释到2,000,000个细胞/mL，并将50μl/孔接种到96孔平底细胞培养板(Genesee Scientific；25-109)中。将抗MET经pH工程化的抗体变体、起始抗体抗体、对照IgG1同种型对照(BP0297，Bioxcell公司)和媒剂对照在天然培养基中稀释，随后1:1与3x摩尔比Zenon pHrodo iFL人IgG标记试剂(赛默飞世尔公司；Z25611)混合。将混合物在室温下温育20分钟，随后加入1:1的细胞至终体积为100μL。将细胞、抗MET抗体变体和Zenon pHrodo iFL人IgG标记试剂的混合物在37℃、5％ CO2下温育1-24小时。温育后，向每个孔添加100μL冰冷流式细胞术(FC)缓冲液(磷酸盐缓冲盐水(PBS)，pH 7.4+2mM乙二胺四乙酸(EDTA)+2％(v/v)HI FBS。然后将细胞在4℃下以2000rpm旋转2分钟，用200μL冰冷FC缓冲液洗涤并重悬于100μL冰冷FC缓冲液中。使用BD Accuri C6流式细胞仪检测平均绿色荧光强度。使用Flowjo分析软件对数据进行分析。pHrodo绿为pH敏感型染料，其在核内体和溶酶体的低pH环境中发荧光，并且因此可以用于对抗体内化和内溶酶体递送进行量化。在U-87MG(MET+)、Detroit 562(MET+)、SNU-5(MET+)、NCI-H1573(MET+)或NCI-H1373(MET+)细胞中，通过pHrodo绿平均荧光强度测量抗MET起始抗体和变体在一定浓度下的内化和内溶酶体递送。若干种经pH工程化的抗MET抗体变体显示出相对于其对应起始抗体增加的平均荧光强度，这证明了在较低pH下增加的解离使细胞内部的内化和内溶酶体递送增强，如通过相较于IgG1同种型对照增加的荧光或增加的荧光示出的。将每个条顶部的每种经pH工程化的抗MET抗体变体的增加的内溶酶体递送按以下比率定量：变体的平均荧光强度减去IgG对照的平均荧光强度，然后整体除以变体的对应起始抗体的平均荧光强度减去IgG对照的平均荧光强度。
MYT4826、MYT4827、MYT4837、MYT4325、MYT5351、MYT4312、MYT5309、MYT4849、MYTH4888、MYT5344、MYT4313、MYT5367、MYT4942、MYT4953和MYT4940显示出相对于其相应对照抗体的增加的内化和内溶酶体递送。
例如，MYT2040、MYT3609、MYT3611和MYT3615，即特立妥珠单抗的抗体变体，显示出相对于特立妥珠单抗(MYT0886)增加的内化和内溶酶体递送。例如，MYT2319、MYT2850、MYT2861和MYT4326，即依玛妥珠单抗的抗体变体，显示出相对于依玛妥珠单抗增加的内化和内溶酶体递送。例如，MYT3698、MYT3735、MYT3740、MYT4247和MYT4325，即P3D12的抗体变体，显示出相对于P3D12增加的内化和内溶酶体递送。选择具有相对于其起始抗体增加的平均荧光强度的此类经pH工程化的抗MET抗体变体以供进一步分析。
实例60.经pH工程化的MET抗体的构建和筛选
文献中已经描述了多种MET结合单克隆抗体，并且可以用作工程改造pH依赖性结合的模板[Wang J等人(2017)ABBV-399，一种靶向经MET扩增和c-Met-过表达肿瘤的c-Met抗体药物偶缀合物，与MET通路依赖无关,《临床癌症研究》,23:992-1000]。选择了MYT4940、MYT4942、MYT4888、MYT4827、MYT4837、MYT4849和MYT5309 MET结合单克隆抗体用于通过组氨酸扫描进行pH工程化。简言之，使用Kabat等人(Kabat等人(1992)具有免疫学意义的蛋白质的序列,DIANE出版公司)和IMGT(Lefranc MP(1999)“IMGT对免疫球蛋白、T细胞受体和Ig样结构域的独特编号”《免疫学家》7,132-136)描述的方法鉴定重链和轻链中的CDR，并且对于每个CDR，属于Kabat和IMGT CDR定义中的任一者或两者的残基称为CDR残基。在起始CDR残基是组氨酸的情况下，组氨酸突变为丙氨酸。使用本领域已知的方法，通过用a)一种轻链序列变体或轻链组合序列变体，和b)一种重链序列变体或重链组合序列变体共转染Expi293细胞，产生具有两个或更多个组氨酸或丙氨酸突变的抗体变体。在允许蛋白质表达四天后，收集细胞培养上清液，通过SDS-PAGE分析定量，并且在Octet RED 96e仪器上使用生物膜干涉技术(BLI)评价此变体的pH依赖性。简言之，基于通过对SDS-PAGE凝胶的目视检查确定的变体定性表达水平来稀释细胞培养上清液，对于高表达因子将5μL细胞培养上清液稀释到195μL的pH 7.4的1x PBST中，对于中等表达因子将25μL细胞培养上清液稀释到175μL的pH 7.4的1x PBST中，并且对于低表达因子将100μL细胞培养上清液稀释到100μL的pH 7.4的1x PBST中以上样到传感器尖端上。然后将稀释的上清液捕获在抗人Fc传感器(Forte Bio)上。使用pH 7.4的1X PBST(50mM磷酸钾缓冲液+150mM NaCl+0.05％吐温20)建立基线使传感器与在pH 7.4的1X PBST中的50nM MET(cMET,Sino Biological目录号10692-H08H)缔合120秒以生成缔合曲线。在解离阶段，将传感器上的抗体-抗原复合物暴露于pH 7.4的1X PBST，持续300-600秒。在单独的条件下，使用pH 5.4的1x PBST重复基线、缔合和解离。用基线和使用1x PBST(pH 7.4)的缔合以及使用1x PBST(pH 5.4)的解离运行附加条件。检查起始抗体(无取代)和每个对应抗体变体在pH 5.4和pH 7.4下的缔合和解离阶段曲线，以根据两项标准提供信息：a)与起始抗体(无取代)相比，由于组氨酸或丙氨酸取代在pH 5.4下的解离增强(例如，koff值更高)；以及b)与在pH 5.4下抗体变体本身和起始抗体(无取代)相比，在pH 7.4下的解离减少(例如，koff值更低)。
其它实施例
应当理解，尽管已经结合本发明的具体实施方式描述了本发明，但是前述描述旨在说明而不限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其它方面、优势和修改在以下权利要求的范围内。
序列附录成熟人MET(SEQ ID NO:1)
编码成熟人MET的cDNA(SEQ ID NO:2)
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MET的细胞外结构域(SEQ ID NO:3)
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编码MET的细胞外结构域的cDNA(SEQ ID NO:4)
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P3D12抗cMET轻链V205C(SEQ ID NO:188)
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序列表
<110> 神话治疗股份有限公司
<120> 抗MET抗体和其用途
<130> 45395-0044WO1
<150> 63/145,348
<151> 2021-02-03
<160> 235
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 1366
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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<210> 2
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<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
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gccaatttat caggaggtgt ttggaaagat aacatcaaca tggctctagt tgtcgacacc 300
tactatgatg atcaactcat tagctgtggc agcgtcaaca gagggacctg ccagcgacat 360
gtctttcccc acaatcatac tgctgacata cagtcggagg ttcactgcat attctcccca 420
cagatagaag agcccagcca gtgtcctgac tgtgtggtga gcgccctggg agccaaagtc 480
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tatttcccag atcatccatt gcattcgata tcagtgagaa ggctaaagga aacgaaagat 600
ggttttatgt ttttgacgga ccagtcctac attgatgttt tacctgagtt cagagattct 660
taccccatta agtatgtcca tgcctttgaa agcaacaatt ttatttactt cttgacggtc 720
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<211> 908
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile Ser Asn Gly His Gly Thr Thr Gln
610 615 620
Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr Ser Ile Ser Pro
625 630 635 640
Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly Thr Leu Leu Thr Leu Thr Gly Asn
645 650 655
Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg His Ile Ser Ile Gly Gly Lys Thr
660 665 670
Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn Ser Ile Leu Glu Cys Tyr Thr Pro
675 680 685
Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe Ala Val Lys Leu Lys Ile Asp Leu
690 695 700
Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe Ser Tyr Arg Glu Asp Pro Ile Val
705 710 715 720
Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser Phe Ile Ser Gly Gly Ser Thr Ile
725 730 735
Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn Ser Val Ser Val Pro Arg Met Val
740 745 750
Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg Asn Phe Thr Val Ala Cys Gln His
755 760 765
Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys Cys Thr Thr Pro Ser Leu Gln Gln
770 775 780
Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys Thr Lys Ala Phe Phe Met Leu Asp
785 790 795 800
Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp Leu Ile Tyr Val His Asn Pro Val
805 810 815
Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val Met Ile Ser Met Gly Asn Glu Asn
820 825 830
Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile Asp Pro Glu Ala Val Lys Gly
835 840 845
Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys Ser Cys Glu Asn Ile His Leu His
850 855 860
Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val Pro Asn Asp Leu Leu Lys Leu Asn
865 870 875 880
Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys Gln Ala Ile Ser Ser Thr Val Leu
885 890 895
Gly Lys Val Ile Val Gln Pro Asp Gln Asn Phe Thr
900 905
<210> 4
<211> 2724
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 4
gagtgtaaag aggcactagc aaagtccgag atgaatgtga atatgaagta tcagcttccc 60
aacttcaccg cggaaacacc catccagaat gtcattctac atgagcatca cattttcctt 120
ggtgccacta actacattta tgttttaaat gaggaagacc ttcagaaggt tgctgagtac 180
aagactgggc ctgtgctgga acacccagat tgtttcccat gtcaggactg cagcagcaaa 240
gccaatttat caggaggtgt ttggaaagat aacatcaaca tggctctagt tgtcgacacc 300
tactatgatg atcaactcat tagctgtggc agcgtcaaca gagggacctg ccagcgacat 360
gtctttcccc acaatcatac tgctgacata cagtcggagg ttcactgcat attctcccca 420
cagatagaag agcccagcca gtgtcctgac tgtgtggtga gcgccctggg agccaaagtc 480
ctttcatctg taaaggaccg gttcatcaac ttctttgtag gcaataccat aaattcttct 540
tatttcccag atcatccatt gcattcgata tcagtgagaa ggctaaagga aacgaaagat 600
ggttttatgt ttttgacgga ccagtcctac attgatgttt tacctgagtt cagagattct 660
taccccatta agtatgtcca tgcctttgaa agcaacaatt ttatttactt cttgacggtc 720
caaagggaaa ctctagatgc tcagactttt cacacaagaa taatcaggtt ctgttccata 780
aactctggat tgcattccta catggaaatg cctctggagt gtattctcac agaaaagaga 840
aaaaagagat ccacaaagaa ggaagtgttt aatatacttc aggctgcgta tgtcagcaag 900
cctggggccc agcttgctag acaaatagga gccagcctga atgatgacat tcttttcggg 960
gtgttcgcac aaagcaagcc agattctgcc gaaccaatgg atcgatctgc catgtgtgca 1020
ttccctatca aatatgtcaa cgacttcttc aacaagatcg tcaacaaaaa caatgtgaga 1080
tgtctccagc atttttacgg acccaatcat gagcactgct ttaataggac acttctgaga 1140
aattcatcag gctgtgaagc gcgccgtgat gaatatcgaa cagagtttac cacagctttg 1200
cagcgcgttg acttattcat gggtcaattc agcgaagtcc tcttaacatc tatatccacc 1260
ttcattaaag gagacctcac catagctaat cttgggacat cagagggtcg cttcatgcag 1320
gttgtggttt ctcgatcagg accatcaacc cctcatgtga attttctcct ggactcccat 1380
ccagtgtctc cagaagtgat tgtggagcat acattaaacc aaaatggcta cacactggtt 1440
atcactggga agaagatcac gaagatccca ttgaatggct tgggctgcag acatttccag 1500
tcctgcagtc aatgcctctc tgccccaccc tttgttcagt gtggctggtg ccacgacaaa 1560
tgtgtgcgat cggaggaatg cctgagcggg acatggactc aacagatctg tctgcctgca 1620
atctacaagg ttttcccaaa tagtgcaccc cttgaaggag ggacaaggct gaccatatgt 1680
ggctgggact ttggatttcg gaggaataat aaatttgatt taaagaaaac tagagttctc 1740
cttggaaatg agagctgcac cttgacttta agtgagagca cgatgaatac attgaaatgc 1800
acagttggtc ctgccatgaa taagcatttc aatatgtcca taattatttc aaatggccac 1860
gggacaacac aatacagtac attctcctat gtggatcctg taataacaag tatttcgccg 1920
aaatacggtc ctatggctgg tggcacttta cttactttaa ctggaaatta cctaaacagt 1980
gggaattcta gacacatttc aattggtgga aaaacatgta ctttaaaaag tgtgtcaaac 2040
agtattcttg aatgttatac cccagcccaa accatttcaa ctgagtttgc tgttaaattg 2100
aaaattgact tagccaaccg agagacaagc atcttcagtt accgtgaaga tcccattgtc 2160
tatgaaattc atccaaccaa atcttttatt agtggtggga gcacaataac aggtgttggg 2220
aaaaacctga attcagttag tgtcccgaga atggtcataa atgtgcatga agcaggaagg 2280
aactttacag tggcatgtca acatcgctct aattcagaga taatctgttg taccactcct 2340
tccctgcaac agctgaatct gcaactcccc ctgaaaacca aagccttttt catgttagat 2400
gggatccttt ccaaatactt tgatctcatt tatgtacata atcctgtgtt taagcctttt 2460
gaaaagccag tgatgatctc aatgggcaat gaaaatgtac tggaaattaa gggaaatgat 2520
attgaccctg aagcagttaa aggtgaagtg ttaaaagttg gaaataagag ctgtgagaat 2580
atacacttac attctgaagc cgttttatgc acggtcccca atgacctgct gaaattgaac 2640
agcgagctaa atatagagtg gaagcaagca atttcttcaa ccgtccttgg aaaagtaata 2700
gttcaaccag atcagaattt caca 2724
<210> 5
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351重链可变区
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351轻可变区
<400> 6
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser His Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4313重链可变区
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4313轻链可变区
<400> 8
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325重链可变区
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325轻链可变区
<400> 10
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826重链可变区
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826轻链可变区
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837重链可变区
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro His Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837轻链可变区
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4849重链可变区
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4849轻链可变区
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr His Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 17
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4942重链可变区
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr His Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4942轻链可变区
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 19
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5309重链可变区
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5309轻链可变区
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5344重链可变区
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys His Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5344轻链可变区
<400> 22
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser His
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 23
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5367重链可变区
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5367轻链可变区
<400> 24
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser His Tyr His
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4827重链可变区
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala His Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4827轻链可变区
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 27
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4312重链可变区
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4312轻链可变区
<400> 28
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 29
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953重链可变区
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
His Arg Ser Glu Ile Thr His Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953轻链可变区
<400> 30
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940重链可变区
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940轻链可变区
<400> 32
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 33
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888重链可变区
<400> 33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888轻链可变区
<400> 34
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351重链三铰链
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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195 200 205
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His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
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355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 36
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351重链三铰链+ LS突变
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
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195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
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260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu
420 425 430
His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 37
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351重链三铰链+ YTE突变
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 38
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351重链三铰链和A118C
<400> 38
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 39
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351重链三铰链+ LS突变和A118C
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
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Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu
420 425 430
His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 40
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351重链三铰链+ YTE突变和A118C
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
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His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5351轻链
<400> 41
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1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser His Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
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85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
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Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
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<211> 215
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<213> 人工
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1 5 10 15
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Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
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Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
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<211> 446
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<213> 人工
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<213> 人工
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<212> PRT
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<223> MYT4313重链三铰链+ YTE突变和A118C
<400> 48
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<212> PRT
<213> 人工
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<400> 49
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Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 51
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325重链三铰链
<400> 51
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 52
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325重链三铰链+ LS突变
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
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340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
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435 440 445
<210> 53
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325重链三铰链+ YTE突变
<400> 53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
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165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
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195 200 205
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His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
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245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 54
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325重链三铰链和A118C
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 55
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325重链（三铰链+ LS突变和A118C）
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu
420 425 430
His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 56
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325重链（三铰链+ YTE突变和A118C）
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 57
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325轻链
<400> 57
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 58
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4325轻链V205C
<400> 58
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 59
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826重链三铰链
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 60
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826重链（三铰链+ LS突变）
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
340 345 350
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 61
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826重链三铰链+ YTE突变
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 62
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 仅MYT4826重链三铰链和A118
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
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195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
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Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
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Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
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<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826重链三铰链+ LS突变和A118C
<400> 63
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
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Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
340 345 350
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 64
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826重链三铰链+ YTE突变和A118C
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 65
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826轻链
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 66
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4826轻链V205C
<400> 66
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 67
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837重链三铰链
<400> 67
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro His Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 68
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837重链三铰链+ LS突变
<400> 68
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro His Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
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Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
340 345 350
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 69
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837重链（三铰链+ YTE突变）
<400> 69
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro His Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 70
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837重链三铰链和A118C
<400> 70
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro His Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 71
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837重链三铰链+ LS突变和A118C
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro His Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
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195 200 205
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Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
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245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
340 345 350
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
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405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
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<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837重链（三铰链+ YTE突变和A118C）
<400> 72
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
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Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
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Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 73
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837轻链
<400> 73
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
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130 135 140
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Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4837轻链V205C
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 75
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4849重链三铰链
<400> 75
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
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245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
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370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 76
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4849重链三铰链+ LS突变
<400> 76
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
340 345 350
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 77
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4849重链三铰链+ YTE突变
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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100 105 110
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115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 78
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4849重链三铰链和A118C
<400> 78
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 79
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4849重链三铰链+ LS突变和A118C
<400> 79
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
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245 250 255
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275 280 285
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290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
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405 410 415
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420 425 430
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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<223> MYT4942重链三铰链和A118C
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Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
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Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
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275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
420 425 430
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 88
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4942重链三铰链+ YTE突变和A118C
<400> 88
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
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<223> MYT5309重链三铰链+ YTE突变和A118C
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<211> 215
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<220>
<223> MYT5344轻链V205C
<400> 106
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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210 215
<210> 107
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT5367重链三铰链
<400> 107
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
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<220>
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435 440
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<400> 117
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Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
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Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
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Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
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Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<213> 人工
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<223> MYT4827重链三铰链和A118C
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50 55 60
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Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
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100 105 110
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
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275 280 285
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290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
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Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
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<213> 人工
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<400> 121
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
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His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<213> 人工
<220>
<223> MYT4312重链三铰链+ YTE突变
<400> 125
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Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
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275 280 285
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
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325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
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370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
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435 440 445
<210> 126
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4312重链三铰链和A118C
<400> 126
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 127
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4312重链三铰链+ LS突变和A118C
<400> 127
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
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His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
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260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
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435 440 445
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<213> 人工
<220>
<223> MYT4312重链（三铰链+ YTE突变和A118C）
<400> 128
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Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
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<223> MYT4312轻链
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<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4312轻链V205C
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210 215
<210> 131
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953重链三铰链
<400> 131
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
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65 70 75 80
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Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953重链三铰链+ LS突变
<400> 132
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
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Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
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Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 133
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953重链三铰链+ YTE突变
<400> 133
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
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Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 134
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953重链三铰链和A118C
<400> 134
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
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Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
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405 410 415
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420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 135
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953重链三铰链+ LS突变和A118C
<400> 135
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
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145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
420 425 430
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 136
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953重链三铰链+ YTE突变和A118C
<400> 136
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
His Arg Ser Glu Ile Thr His Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
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<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953轻链
<400> 137
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4953轻链V205C
<400> 138
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Cys Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940重链三铰链
<400> 139
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
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225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
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275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
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Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940重链（三铰链+ LS突变）
<400> 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
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Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
420 425 430
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
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<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940重链三铰链+ YTE突变
<400> 141
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
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<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940重链三铰链和A118C
<400> 142
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
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145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
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210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 143
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940重链三铰链+ LS突变和A118C
<400> 143
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
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275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
420 425 430
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 144
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940重链三铰链+ YTE突变和A118C
<400> 144
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
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Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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100 105 110
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115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 145
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940轻链
<400> 145
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
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115 120 125
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165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 146
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4940轻链V205C
<400> 146
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Cys Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 147
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888重链三铰链
<400> 147
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
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290 295 300
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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435 440 445
<210> 148
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888重链三铰链+ LS突变
<400> 148
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
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195 200 205
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His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu
420 425 430
His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 149
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888重链三铰链+ YTE突变
<400> 149
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 150
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888重链三铰链和A118C
<400> 150
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 151
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888重链三铰链+ LS突变和A118C
<400> 151
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu
420 425 430
His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 152
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888重链三铰链+ YTE突变和A118C
<400> 152
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys
210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 153
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888轻链
<400> 153
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 154
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> MYT4888轻链V205C
<400> 154
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 155
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 155
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 156
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 重链恒定结构域A118C
<400> 156
Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro Cys Pro Ala
100 105 110
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
115 120 125
Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val
130 135 140
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
145 150 155 160
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
165 170 175
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
180 185 190
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
195 200 205
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
210 215 220
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
225 230 235 240
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
245 250 255
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
260 265 270
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
275 280 285
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
290 295 300
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys
305 310 315 320
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 157
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 智人
<400> 157
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 158
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 轻链恒定结构域V205C
<400> 158
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 159
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗重链可变区
<400> 159
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 160
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗轻链可变区
<400> 160
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
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100 105 110
<210> 161
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗重链可变区
<400> 161
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 162
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗轻链可变区
<400> 162
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 163
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12抗cMET重链可变区
<400> 163
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 164
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 3D12抗cMET轻链可变区
<400> 164
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 165
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗重链三铰链
<400> 165
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 166
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗重链三铰链+ LS
<400> 166
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
420 425 430
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 167
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗重链三铰链+ YTE
<400> 167
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 168
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗重链三铰链和A118C
<400> 168
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
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Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 169
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗重链三铰链+ LS和A118C
<400> 169
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
420 425 430
Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 170
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗重链三铰链+ YTE和A118C
<400> 170
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
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Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 171
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗轻链
<400> 171
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
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Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
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Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
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165 170 175
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180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 172
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗轻链V205C
<400> 172
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1 5 10 15
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<211> 442
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<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗重链和三铰链
<400> 173
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1 5 10 15
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50 55 60
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115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
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<210> 175
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗重链和三铰链以及YTE
<400> 175
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Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
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Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗重链和三铰链以及A118C
<400> 176
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Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 177
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
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<400> 177
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
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Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
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Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
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Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
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385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 178
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗重链和三铰链以及YTE和A118C
<400> 178
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
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195 200 205
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245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 179
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗轻链
<400> 179
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
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100 105 110
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 180
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗轻链V205C
<400> 180
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
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<400> 185
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<212> PRT
<213> 人工
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<223> P3D12抗cMET重链和三铰链以及YTE和A118C
<400> 186
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12抗cMET轻链
<400> 187
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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145 150 155 160
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195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 188
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12抗cMET轻链V205C
<400> 188
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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210 215
<210> 189
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 189
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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
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195 200 205
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Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 190
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号1的轻链
<400> 190
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
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Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu His Gly Val Pro Asp
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65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 191
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号2的轻链
<400> 191
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala His Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 192
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号3的轻链
<400> 192
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 193
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号1的重链
<400> 193
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 194
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号2的重链
<400> 194
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 195
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号3的重链
<400> 195
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr His Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 196
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号4的重链
<400> 196
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 197
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号5的重链组合
<400> 197
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 198
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号6的重链组合
<400> 198
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr His Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 199
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号7的重链组合
<400> 199
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 200
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号8的重链组合
<400> 200
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr His Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 201
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号9的重链组合
<400> 201
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr His Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 202
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号10的重链组合
<400> 202
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr His Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 203
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号11的重链组合
<400> 203
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 204
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号12的重链组合
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Ile Thr His Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 205
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号1的轻链组合
<400> 205
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala His Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 206
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号2的轻链组合
<400> 206
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala His Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 207
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号3的轻链组合
<400> 207
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala His Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu His Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 208
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号4的轻链组合
<400> 208
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 209
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号5的轻链组合
<400> 209
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu His Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 210
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号6的轻链组合
<400> 210
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Thr Arg Glu His Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 211
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号7的轻链组合
<400> 211
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala His Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 212
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号8的轻链组合
<400> 212
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala His Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu His Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 213
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号9的轻链组合
<400> 213
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala His Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Thr Arg Glu His Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 214
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号10的轻链组合
<400> 214
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr His Ala Ser Thr Arg Glu His Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 215
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号1的轻链
<400> 215
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 216
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号1的重链
<400> 216
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val His Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 217
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号2的重链组合
<400> 217
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val His Pro His Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 218
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号3的重链组合
<400> 218
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val His Pro Asn Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 219
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号4的重链组合
<400> 219
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro His Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 220
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号5的重链组合
<400> 220
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro His Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala His Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 221
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号6的重链组合
<400> 221
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val His Pro His Arg Arg His Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 222
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号7的重链组合
<400> 222
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val His Pro His Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala His Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 223
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号1的轻链
<400> 223
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val His Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 224
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 依玛妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号2的轻链
<400> 224
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly His Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 225
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> hucMET27Gv1.3 IgG的重链
<400> 225
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Ser Asn Gly Val Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Glu Ile Thr Thr Glu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 226
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> hucMET27Gv1.3 IgG组氨酸扫描变体编号1的轻链组合
<400> 226
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser His Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Glu His Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 227
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12 IgG组氨酸扫描变体编号1的重链
<400> 227
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ala Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 228
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12 IgG组氨酸扫描变体编号2的重链
<400> 228
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser His Gly Asn Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 229
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12 IgG组氨酸扫描变体编号1的重链组合
<400> 229
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr His Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 230
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12 IgG组氨酸扫描变体编号2的重链组合
<400> 230
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr His Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 231
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12 IgG组氨酸扫描变体编号3的重链组合
<400> 231
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Lys Pro Ser Thr Asp Asn Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Gly His Tyr Pro Leu Met His Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 232
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12 IgG组氨酸扫描变体编号1的轻链
<400> 232
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
His Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 233
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3D12 IgG组氨酸扫描变体编号1的轻链组合
<400> 233
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser His His His
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 234
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 特立妥珠单抗IgG组氨酸扫描变体编号13的重链组合
<400> 234
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala His Ser Glu Ile Thr His Glu Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 235
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> hucMET27Gv1.3 IgG的轻链
<400> 235
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Glu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
100 105 110

Claims (74)

1.一种抗体，其中所述抗体包括：
(a)选自以下的组的重链可变结构域和轻链可变结构域：
(i)分别为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；
(ii)分别为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；
(iii)分别为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；
(iv)分别为SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；
(v)分别为SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；
(vi)分别为SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；
(vii)分别为SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；
(viii)分别为SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；
(ix)分别为SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；
(x)分别为SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；
(xi)分别为SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；
(xii)分别为SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；
(xiii)分别为SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；
(xiv)分别为SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；
(xv)分别为SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；以及
(b)SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列，所述序列包括以下中的一者或多者：
(i)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；
(ii)在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；
(iii)在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及
(iv)在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代；
和/或
SEQ ID NO:157的轻链CL序列，所述序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失。
3.根据权利要求2所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:41；
(ii)分别为SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:49；
(iii)分别为SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:57；
(iv)分别为SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:65；
(v)分别为SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:73；
(vi)分别为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:81；
(vii)分别为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:89；
(viii)分别为SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97；
(ix)分别为SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:105；
(x)分别为SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:113；
(xi)分别为SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:121；
(xii)分别为SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:129；
(xiii)分别为SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:137；
(xiv)分别为SEQ ID NO:139和SEQ ID NO:145；或
(xv)分别为SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:153。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代。
5.根据权利要求4所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:41；
(ii)分别为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:49；
(iii)分别为SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；
(iv)分别为SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:65；
(v)分别为SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:73；
(vi)分别为SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:81；
(vii)分别为SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:89；
(viii)分别为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:97；
(ix)分别为SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:105；
(x)分别为SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:113；
(xi)分别为SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:121；
(xii)分别为SEQ ID NO:124和SEQ ID NO:129；
(xiii)分别为SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:137；
(xiv)分别为SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:145；或
(xv)分别为SEQ ID NO:148和SEQ ID NO:153。
6.根据权利要求1所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代。
7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:41；
(ii)分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:49；
(iii)分别为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:57；
(iv)分别为SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:65；
(v)分别为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:73；
(vi)分别为SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:81；
(vii)分别为SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:89；
(viii)分别为SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:97；
(ix)分别为SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:105；
(x)分别为SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:113；
(xi)分别为SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:121；
(xii)分别为SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:129；
(xiii)分别为SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:137；
(xiv)分别为SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:145；或
(xv)分别为SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:153。
8.根据权利要求1所述的抗体，其中：
所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；并且
所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
9.根据权利要求8所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:42；
(ii)分别为SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:50；
(iii)分别为SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:58；
(iv)分别为SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:66；
(v)分别为SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:74；
(vi)分别为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:82；
(vii)分别为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:90；
(viii)分别为SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:98；
(ix)分别为SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:106；
(x)分别为SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:114；
(xi)分别为SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:122；
(xii)分别为SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:130；
(xiii)分别为SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:138；
(xiv)分别为SEQ ID NO:139和SEQ ID NO:146；或
(xv)分别为SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:154。
10.根据权利要求1所述的抗体，其中：
所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；并且
所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
11.根据权利要求10所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:42；
(ii)分别为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:50；
(iii)分别为SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:58；
(iv)分别为SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:66；
(v)分别为SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:74；
(vi)分别为SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:82；
(vii)分别为SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:90；
(viii)分别为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:98；
(ix)分别为SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:106；
(x)分别为SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:114；
(xi)分别为SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:122；
(xii)分别为SEQ ID NO:124和SEQ ID NO:130；
(xiii)分别为SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:138；
(xiv)分别为SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:146；或
(xv)分别为SEQ ID NO:148和SEQ ID NO:154。
12.根据权利要求1所述的抗体，其中：
所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；并且
所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
13.根据权利要求12所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:42；
(ii)分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:50；
(iii)分别为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:58；
(iv)分别为SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:66；
(v)分别为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:74；
(vi)分别为SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:82；
(vii)分别为SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:90；
(viii)分别为SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98；
(ix)分别为SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:106；
(x)分别为SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:114；
(xi)分别为SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:122；
(xii)分别为SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:130；
(xiii)分别为SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:138；
(xiv)分别为SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:146；或
(xv)分别为SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:154。
14.根据权利要求1所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
氨基酸在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。
15.根据权利要求14所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:41；
(ii)分别为SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:49；
(iii)分别为SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:57；
(iv)分别为SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:65；
(v)分别为SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:73；
(vi)分别为SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:81；
(vii)分别为SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:89；
(viii)分别为SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97；
(ix)分别为SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:105；
(x)分别为SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:113；
(xi)分别为SEQ ID NO:118和SEQ ID NO:121；
(xii)分别为SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:129；
(xiii)分别为SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:137；
(xiv)分别为SEQ ID NO:142和SEQ ID NO:145；或
(xv)分别为SEQ ID NO:150和SEQ ID NO:153。
16.根据权利要求1所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；
在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及
在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。
17.根据权利要求16所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:41；
(ii)分别为SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49；
(iii)分别为SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57；
(iv)分别为SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:65；
(v)分别为SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73；
(vi)分别为SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:81；
(vii)分别为SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:89；
(viii)分别为SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97；
(ix)分别为SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:105；
(x)分别为SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:113；
(xi)分别为SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:121；
(xii)分别为SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:129；
(xiii)分别为SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:137；
(xiv)分别为SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:145；或
(xv)分别为SEQ ID NO:151和SEQ ID NO:153。
18.根据权利要求1所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；
在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；以及
在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。
19.根据权利要求18所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:41；
(ii)分别为SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49；
(iii)分别为SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57；
(iv)分别为SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65；
(v)分别为SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73；
(vi)分别为SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81；
(vii)分别为SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89；
(viii)分别为SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97；
(ix)分别为SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105；
(x)分别为SEQ ID NO:112和SEQ ID NO:113；
(xi)分别为SEQ ID NO:120和SEQ ID NO:121；
(xii)分别为SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:129；
(xiii)分别为SEQ ID NO:136和SEQ ID NO:137；
(xiv)分别为SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145；或
(xv)分别为SEQ ID NO:152和SEQ ID NO:153。
20.根据权利要求2至19中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包括与以下中的一者或多者缀合的细胞毒性药物：
(a)SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3，所述重链CH1-CH2-CH3包括以下中的一者或多者：
(i)在氨基酸位置103处的半胱氨酸；
(ii)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸；
(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸；
(iv)在氨基酸位置112处的半胱氨酸；和/或
(b)在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
21.根据权利要求8至13和20中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包括与SEQ IDNO:157的位置98处的半胱氨酸缀合的细胞毒性或细胞抑制剂。
22.根据权利要求14至20中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包括与SEQ IDNO:155或SEQ ID NO:189的位置1处的半胱氨酸缀合的细胞毒性或细胞抑制剂。
23.根据权利要求20至22所述的抗体，其中所述细胞毒性或细胞抑制剂是缀合的毒素、放射性同位素、药物或小分子。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的抗体，
其中：
(a)所述抗体在约4.0至约6.5的pH下的解离速率比在约7.0至约8.0的pH下的解离速率快；或
(b)所述抗体在约4.0至约6.5的pH下的解离常数(KD)比在约7.0至约8.0的pH下的KD大。
25.根据权利要求20至24中任一项所述的抗体，其中包括所述抗体的组合物：
提供以下中的一者或多者：
与包括相同量的对照抗体的组合物相比，靶哺乳动物细胞中的毒素释出增加；
与包括相同量的对照抗体的组合物相比，靶哺乳动物细胞杀伤增加；
与包括相同量的对照抗体的组合物相比，所述靶哺乳动物细胞中的内溶酶体递送增加。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的抗体，其中：
与包括相同量的对照抗体的组合物相比，包括所述抗体的组合物使在靶哺乳动物细胞的表面上呈递的MET的水平降低更少；或
包括所述抗体的组合物不引起在所述靶哺乳动物细胞的表面上呈递的MET的水平的可检测的降低。
27.根据权利要求25或26所述的抗体，其中在所述抗体被靶哺乳动物细胞内化之后，所述抗体在靶哺乳动物细胞中降解。
28.根据权利要求25至27中任一项所述的抗体，其中所述靶哺乳动物细胞是癌细胞。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的抗体，其中所述抗体对所述靶哺乳动物细胞有细胞毒性或细胞抑制性。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有亲合力，所述亲合力引起相对于非癌性细胞对癌细胞的选择性增加。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的抗体，其中：
所述抗体与非人灵长类动物MET和人MET具有交叉反应性；或
所述抗体与非人灵长类动物MET、人MET以及大鼠MET和小鼠MET中的一者或两者具有交叉反应性。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的抗体，其中与对照抗体在体内的半衰期相比，所述抗体在体内的半衰期增加。
33.一种药物组合物，其包括有效量的根据权利要求1至32所述的抗体中的任一种。
34.一种试剂盒，其包括至少一个剂量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或根据权利要求33所述的药物组合物。
35.一种治疗癌症的方法，所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括：
向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或根据权利要求33所述的药物组合物，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
36.一种减小受试者的肿瘤的体积的方法，其中所述肿瘤的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括：
向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或根据权利要求33所述的药物组合物，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
37.一种诱导受试者的癌细胞的细胞死亡的方法，其中所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括：
向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或根据权利要求33所述的药物组合物，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
38.一种降低患有癌症的受试者发生转移的风险或降低所述受试者发生另外的转移的风险的方法，其中所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括：
向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或根据权利要求33所述的药物组合物，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
39.一种抗体，其中所述抗体包括：
(a)选自由以下组成的组的重链可变结构域和轻链可变结构域：
(i)分别为SEQ ID NO:159和SEQ ID NO:160；
(ii)分别为SEQ ID NO:161和SEQ ID NO:162；
(iii)分别为SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164；
(b)SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列，所述序列包括以下取代中的一者或多者：
(i)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及氨基酸在位置106和108处的苏氨酸缺失；
(ii)在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；
(iii)在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及
(iv)在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代；
和/或
SEQ ID NO:157的轻链CL序列，所述序列包括在位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
40.根据权利要求39所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失。
41.根据权利要求40所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:165和SEQ ID NO:171；
(ii)分别为SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:179；或
(iii)分别为SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:187。
42.根据权利要求39所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；
在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代。
43.根据权利要求42所述的抗体，其中抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:166和SEQ ID NO:171；
(ii)分别为SEQ ID NO:174和SEQ ID NO:179；或
(iii)分别为SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:187。
44.根据权利要求39所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代。
45.根据权利要求44所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:167和SEQ ID NO:171；
(ii)分别为SEQ ID NO:175和SEQ ID NO:179；或
(iii)分别为SEQ ID NO:183和SEQ ID NO:187。
46.根据权利要求39所述的抗体，其中：
所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；并且
所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
47.根据权利要求46所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:165和SEQ ID NO:172；
(ii)分别为SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:180；或
(iii)分别为SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:188。
48.根据权利要求39所述的抗体，其中：
所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；并且
所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
49.根据权利要求48所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:166和SEQ ID NO:172；
(ii)分别为SEQ ID NO:174和SEQ ID NO:180；或
(iii)分别为SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:188。
50.根据权利要求39所述的抗体，其中：
所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；并且
所述SEQ ID NO:157的轻链CL序列包括在氨基酸位置98处的缬氨酸变为半胱氨酸的取代。
51.根据权利要求50所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:167和SEQ ID NO:172；
(ii)分别为SEQ ID NO:175和SEQ ID NO:180；或
(iii)分别为SEQ ID NO:183和SEQ ID NO:188。
52.根据权利要求39所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；以及
在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。
53.根据权利要求52所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:168和SEQ ID NO:171；
(ii)分别为SEQ ID NO:176和SEQ ID NO:179；或
(iii)分别为SEQ ID NO:184和SEQ ID NO:187。
54.根据权利要求39所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；
在氨基酸位置311处的甲硫氨酸变为亮氨酸的取代以及在氨基酸位置317处的天冬酰胺变为丝氨酸的取代；以及
在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。
55.根据权利要求54所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:169和SEQ ID NO:171；
(ii)分别为SEQ ID NO:177和SEQ ID NO:179；或
(iii)分别为SEQ ID NO:185和SEQ ID NO:187。
56.根据权利要求39所述的抗体，其中所述SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3序列包括：
在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代以及在氨基酸位置106和108处的苏氨酸缺失；
在氨基酸位置135处的甲硫氨酸变为酪氨酸的取代、在氨基酸位置137处的丝氨酸变为苏氨酸的取代以及在氨基酸位置139处的苏氨酸变为谷氨酸的取代；以及
在氨基酸位置1处的丙氨酸变为半胱氨酸的取代。
57.根据权利要求56所述的抗体，其中所述抗体包括选自以下的组的重链序列和轻链序列：
(i)分别为SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:171；
(ii)分别为SEQ ID NO:178和SEQ ID NO:179；或
(iii)分别为SEQ ID NO:186和SEQ ID NO:187。
58.根据权利要求40至57中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包括与以下中的一者或多者缀合的细胞毒性药物：
(a)SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:189的重链CH1-CH2-CH3，所述重链CH1-CH2-CH3包括以下中的一者或多者：
(i)在氨基酸位置103处的半胱氨酸；
(ii)在氨基酸位置105处的赖氨酸变为半胱氨酸的取代的半胱氨酸；
(iii)在氨基酸位置109处的半胱氨酸；以及
(iv)在氨基酸位置112处的半胱氨酸；和/或
(b)在SEQ ID NO:157的氨基酸位置107处的半胱氨酸。
59.根据权利要求46至51和58中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包括与SEQID NO:157的位置98处的半胱氨酸缀合的细胞毒性或细胞抑制剂。
60.根据权利要求52至58中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包括与SEQ IDNO:155或SEQ ID NO:189的位置1处的半胱氨酸缀合的细胞毒性或细胞抑制剂。
61.根据权利要求58至60中任一项所述的抗体，其中所述细胞抑制或细胞毒性剂是缀合的毒素、放射性同位素、药物或小分子。
62.根据权利要求58至61中任一项所述的抗体，其中所述抗体对靶哺乳动物细胞有细胞毒性或细胞抑制性。
63.根据任何权利要求62所述的抗体，其中在所述抗体被所述靶哺乳动物细胞内化之后，所述抗体在所述靶哺乳动物细胞中降解。
64.根据权利要求62或63所述的抗体，其中所述靶哺乳动物细胞是癌细胞。
65.根据权利要求39至64中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有亲合力，所述亲合力引起相对于非癌性细胞对癌细胞的选择性增加。
66.根据权利要求39至65中任一项所述的抗体，其中：
所述抗体与非人灵长类动物MET和人MET具有交叉反应性；或
所述抗体与非人灵长类动物MET、人MET以及大鼠MET和小鼠MET中的一者或两者具有交叉反应性。
67.根据权利要求39至66中任一项所述的抗体，其中与对照抗体在体内的半衰期相比，所述抗体在体内的半衰期增加。
68.根据权利要求62至64所述的抗体，其中所述靶哺乳动物细胞是癌细胞。
69.一种药物组合物，其包括有效量的根据权利要求39至68所述的抗体中的任一种。
70.一种试剂盒，其包括至少一个剂量的根据39至68中任一项所述的抗体或根据权利要求69所述的药物组合物。
71.一种治疗癌症的方法，所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括：
向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求39至68中任一项所述的抗体或根据权利要求69所述的药物组合物，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
72.一种减小受试者的肿瘤的体积的方法，其中所述肿瘤的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括：
向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求39至68中任一项所述的抗体或根据权利要求69所述的药物组合物，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
73.一种诱导受试者的癌细胞的细胞死亡的方法，其中所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括：
向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求39至68中任一项所述的抗体或根据权利要求69所述的药物组合物，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
74.一种降低患有癌症的受试者发生转移的风险或降低所述受试者发生另外的转移的风险的方法，其中所述癌症的特征在于具有癌细胞的群体，所述癌细胞具有在所述癌细胞的表面上呈递的MET或MET的表位，所述方法包括：
向被鉴定为患有癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求39至68中任一项所述的抗体或根据权利要求69所述的药物组合物，所述癌症的特征在于具有所述癌细胞的群体。
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