JP5599090B2 - Ｉ型コラーゲン産生促進剤 - Google Patents

Description

本発明は、Ｉ型コラーゲン産生促進剤に関する。

皮膚は、表皮、基底膜及び真皮から構成されている。真皮は、線維芽細胞と該細胞から分泌されるコラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸等の細胞外マトリックスとにより構成されている。基底膜は、表皮と真皮との境界部に存在し、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしている（非特許文献１参照）。

若い皮膚においては、線維芽細胞の増殖が活発であり、線維芽細胞とコラーゲン等の皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、また、基底膜の働きにより、表皮と真皮との相互作用が恒常性を保つことで、水分保持力、柔軟性、弾力性等が確保され、外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。

ところが、皮膚が紫外線、著しい空気の乾燥、過度の皮膚洗浄、ストレス、喫煙等の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの分解や変質が生じたり、線維芽細胞の増殖が遅くなったりする。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が起こり、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等が生じる。

したがって、コラーゲンの産生を促進することにより皮膚の老化を防止又は改善することができると考えられる。

そこで、コラーゲン産生促進作用を有する物質を安全性の高い天然物から入手することが望まれている。これまで、コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、例えば、スターフルーツ葉抽出物（特許文献１）、クスノハガシワ抽出物（特許文献２）等が知られている。

しかしながら、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有する天然物由来の製剤は、未だ提供されていないのが現状である。

特開２００２−２２６３２３号公報 特開２００３−１４６８３７号公報

Marinkovich MP et al., J. Cell. Biol., 1992, Vol.199, p.695-703

本発明は、従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。すなわち、本発明は、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有するＩ型コラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。

上記課題を解決するため、本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡより選ばれる１種又は２種以上の化合物が、優れたＩ型コラーゲン産生促進剤として有用であることを知見した。

本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤を提供する。

本発明によれば、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有するＩ型コラーゲン産生促進剤を提供することができ、かかるＩ型コラーゲン産生促進剤は、皮膚の老化、すなわち、シワやくすみ、きめの消失、弾力性の低下等を予防、治療又は改善することができる。

本実施形態のＩ型コラーゲン産生促進剤は、ルブソサイド（１３β−(β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ)カウラ−１６−エン−１８−酸β−Ｄ−グルコピラノシル）、ステビオサイド（１３−[(２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル)オキシ]カウラ−１６−エン−１８−酸β−Ｄ−グルコピラノシル）、レバウディオサイドＣ（１３−[[２−Ｏ−(６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル)−３−Ｏ−(β−Ｄ−グルコピラノシル)−β−Ｄ−グルコピラノシル]オキシ]カウラ−１６−エン−１８−酸β−Ｄ−グルコピラノシル）及びズルコサイドＡ（１３−[[２−Ｏ−(６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル)−β−Ｄ−グルコピラノシル]オキシ]−カウラ−１６−エン−１８−酸β−Ｄ−グルコピラノシル）より選ばれる１種又は２種以上から選ばれる化合物を有効成分として含有する。

ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡは、エントカウレン型ジテルペン配糖体の一種であり、これらの化合物のうちの少なくとも１種を含有する植物抽出物から単離・精製することにより製造することができる。なお、本実施形態において「抽出物」には、植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。

ルブソサイドを含有する植物抽出物、並びにステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡのうちの少なくとも１種を含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法によって得ることができる。ルブソサイドを含有する植物としては、甜茶（学名：Rubus suavissimus）が挙げられ、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡを含有する植物としては、ステビア（学名：Stevia rebaudiana）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

甜茶（Rubus suavissimus）は、バラ科キイチゴ属に属する植物であって、中国南部で自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、特に限定されないが、葉部が好適である。従来、甜茶抽出物は、抗アレルギー剤等として用いられている。

ステビア（Stevia rebaudiana）は、キク科ステビア属に属する植物であって、南米にて自生・栽培されており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、特に限定されないが、葉部が好適である。従来、ステビア抽出物は、甘味料等として用いられている。

甜茶及びステビアの抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用するのが好ましい。

抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。

２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。

抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。

以上のようにして得られた甜茶抽出物からルブソサイドを単離・精製する方法、並びにステビア抽出物からステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡのそれぞれを単離・精製する方法は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。例えば、甜茶抽出物又はステビア抽出物を、シリカゲルやアルミナ等の多孔質物質、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体やポリメタクリレート等の多孔性樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、水、アルコールの順で溶出させ、アルコールで溶出される画分として得ることができる。

カラムクロマトグラフィーにて溶出液として用いられるアルコールは、特に限定されるものではなく、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール又はそれらの水溶液等が挙げられる。

さらに、カラムクロマトグラフィーにより得られた各アルコール画分を、ＯＤＳを用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィー、再結晶、液−液向流抽出、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製してもよい。

以上のようにして得られる、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡは、それぞれＩ型コラーゲン産生促進作用を有しているため、その作用を利用してＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分として使用することができる。

本実施形態のＩ型コラーゲン産生促進剤は、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物のみからなるものでもよいし、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物を製剤化したものでもよい。

本実施形態のＩ型コラーゲン産生促進剤における、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物の含有量は、目的に応じて適宜設定することができる。また、上記化合物の２種以上を有効成分として用いる場合、それらの配合比は、それらの化合物の有するＩ型コラーゲン産生促進作用の程度に応じて、適宜調整すればよい。

ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物を製剤化したＩ型コラーゲン産生促進剤の形態としては、例えば、健康補助食品、外用剤等が挙げられる。

なお、本実施形態のＩ型コラーゲン産生促進剤は、必要に応じて、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を有する他の天然抽出物等を、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物とともに配合して有効成分として用いることができる。

本実施形態のＩ型コラーゲン産生促進剤は、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物が有するＩ型コラーゲン産生促進作用を通じて、Ｉ型コラーゲンの産生を促進することができ、これにより皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等を予防又は改善することができる。ただし、本実施形態のＩ型コラーゲン産生促進剤は、これらの用途以外にもＩ型コラーゲン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

なお、本実施形態のＩ型コラーゲン産生促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。

以下、製造例及び試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。

〔製造例１〕ルブソサイドの製造
甜茶抽出物（製品名：甜茶エキス粉末，丸善製薬社製）１００ｇに水（１０００ｍＬ）を加え、攪拌後ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学社製）に付し、水、メタノールで順次溶出し、それぞれを濃縮してメタノール画分（４９．２ｇ）を得た。得られたメタノール画分（３８．０ｇ）をＯＤＳカラム（移動相として、６０％メタノールを使用）、ＳｉＯ_２カラム（移動相として、ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（１０：５：１）を使用）で分画した後、メタノールを用いて再結晶し、精製物（５．８ｇ）を得た。得られた精製物を^１３Ｃ−ＮＭＲにより分析した結果を下記に示す。

＜^１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）：＞
176.9(19-C)，154.5(16-C)，104.4(17-C)，99.6(Glc-1-C)，95.8(Glc-1'-C)，85.9(13-C)，79.2(Glc-5'-C)，79.1(Glc-3'-C)，78.8(Glc-5-C)，77.9(Glc-3-C)，75.5(Glc-2-C)，74.0(Glc-2'-C)，72.4(Glc-4-C)，71.2(Glc-4'-C)，63.1(Glc-6-C)，62.2(Glc-6'-C)，57.4(5-C)，54.0(9-C)，47.8(15-C)，44.6(14-C)，44.1(4-C)，42.5(8-C)，41.7(7-C)，40.8(1-C)，39.8(10-C)，38.4(3-C)，37.2(12-C)，28.4(18-C)，22.2(6-C)，20.7(11-C)，19.4(2-C)，15.7(20-C)

得られた精製物についての上記ＮＭＲデータと、文献値（Tanaka T., et al., Agric. Biol. Chem., 45, 2165-2166 (1981)）とを比較したところ、上記精製物がルブソサイド（試料１）であることが同定された。

〔試験例１〕Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験
ルブソサイド（製造例１，試料１）、ステビオサイド（和光純薬社製，試料２）、レバウディオサイドＣ（和光純薬社製，試料３）及びズルコサイドＡ（和光純薬社製，試料４）について、以下のようにＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。

ヒト正常線維芽細胞（Ｄｅｔｒｏｉｔ５５１）を、１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ及び１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。

回収した細胞を２×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、９６ウェルマイクロプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。

培養終了後、培地を抜き、０．５％ＦＢＳ含有ＭＥＭに溶解した試料（試料１〜４，試料濃度は下記表１を参照）を各ウェルに１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定し、得られた結果から、下記式によりＩ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。

Ｉ型コラーゲン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時のコラーゲン量」を表し、Ｂは「試料無添加時のコラーゲン量」を表す。
結果を表１に示す。

表１に示すように、ルブソサイド、ステビオサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡは、いずれも優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。

本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤は、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等の予防又は改善に大きく貢献できる。

Claims (2)

1. ルブソサイド、レバウディオサイドＣ及びズルコサイドＡからなる群より選ばれる１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤。
2. ステビオサイドのみを有効成分として含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤。