JP5180060B2 - 有機酸生産菌及び有機酸の製造法 - Google Patents
有機酸生産菌及び有機酸の製造法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5180060B2 JP5180060B2 JP2008502748A JP2008502748A JP5180060B2 JP 5180060 B2 JP5180060 B2 JP 5180060B2 JP 2008502748 A JP2008502748 A JP 2008502748A JP 2008502748 A JP2008502748 A JP 2008502748A JP 5180060 B2 JP5180060 B2 JP 5180060B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- activity
- succinic acid
- gene
- strain
- odh
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/44—Polycarboxylic acids
- C12P7/46—Dicarboxylic acids having four or less carbon atoms, e.g. fumaric acid, maleic acid
Description
ばれる)については、コリネ型細菌において活性が確認されたという報告(非特許文献2)や、遺伝子がクローニングされたという報告(非特許文献3)がある。また、2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低減した微生物を用いたアミノ酸の製造法が開示されている(特許文献6)。
しかしながら、2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼの活性を増強させた細菌を用いて有機酸を製造することは、これまで報告されていなかった。
(1)コハク酸生産能を有し、プラスミドを用いた形質転換、染色体上への遺伝子導入およびプロモーター置換から選択される手段により、2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性およびピルビン酸カルボキシラーゼ活性が該酵素の非改変株と比較して増強するように改変され、かつ、遺伝子破壊によりラクテートデヒドロゲナーゼ活性が低減化するように改変されたコリネ型細菌。
(2)コハク酸生産能を有し、プラスミドを用いた形質転換、染色体上への遺伝子導入およびプロモーター置換から選択される手段により、2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が該酵素の非改変株と比較して増強するように改変され、遺伝子破壊によりラクテートデヒドロゲナーゼ活性が低減化するように改変され、かつ、
遺伝子破壊により、アセテートキナーゼ活性、ホスホトランスアセチラーゼ活性、アセチル−CoAハイドロラーゼ活性、およびピルベートオキシダーゼ活性が低減化するように改
変されたことによって酢酸の生成が低減したコリネ型細菌。
(3)さらに、プラスミドを用いた形質転換、染色体上への遺伝子導入およびプロモーター置換から選択される手段により、ピルビン酸カルボキシラーゼ活性が増強するように改変された、(2)のコリネ型細菌。
(4)(1)〜(3)のいずれかのコリネ型細菌あるいはその処理物を、炭酸イオン、重炭酸イオン又は二酸化炭素ガスを含有する反応液中で有機原料に作用させることによってコハク酸を生成させ、該コハク酸を採取する事を特徴とするコハク酸の製造方法。
(5)前記コリネ型細菌あるいはその処理物を嫌気的雰囲気下で有機原料に作用させることを特徴とする、(4)のコハク酸の製造方法。
(6)前記コリネ型細菌あるいはその処理物を炭酸水素ナトリウムの存在下、有機原料に作用させることを特徴とする、(4)または(5)のコハク酸の製造方法。
(7)前記有機原料が、グルコースまたはシュークロースである、(4)〜(6)のいずれかのコハク酸の製造方法。
(8)(4)〜(7)のいずれかの方法によりコハク酸を製造する工程、及び前記工程で得られたコハク酸を原料として重合反応を行う工程を含む、コハク酸含有ポリマーの製造方法。
本発明の細菌は、有機酸生産能を有し、2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ(以下、ODHとも呼ぶ)活性が非改変株と比較して増強するように改変された細菌である。
本発明において、「有機酸の生産能」とは、本発明の細菌を培養したときに、培地中に有機酸を蓄積する能力をいう。また、「有機酸」とは、TCA回路の代謝中間体の有機酸が挙げられ、例えば、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、クエン酸、イソクエン酸、シス−アコニット酸などが挙げられるが、この中でもコハク酸、リンゴ酸、フマル酸が好ましく、コハク酸がより好ましい。
このような細菌は、本来的に有機酸生産能を有する細菌又は育種により有機酸生産能を付与された細菌において、ODH活性を増強する改変を行ったものでもよいし、ODH活性を増強する改変を行うことにより有機酸生産能を有するようになったものでもよい。育種により有機酸生産能を付与する手段としては、例えば、変異処理、遺伝子組換え処理などが挙げられるが、より具体的には、後述するようなラクテートデヒドロゲナーゼ活性を低減するような改変やピルビン酸カルボキシラーゼ活性を増強するような改変などが挙げられる。
なお、本発明に用いる細菌は2種類以上の有機酸を生産する能力を有するものであってもよい。
例えば、エシェリヒア属細菌としてはエシェリヒア・コリなどが挙げられ、ラクトバチルス属細菌としてはラクトバチルス・ヘルヴェチカスが挙げられ(J Appl Microbiol, 2001, 91, p846-852)、バチルス属細菌としては、バチルス・ズブチリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・プミルス、バチルス・ステアロサーモフィルス等が挙げられ、リゾビウム属細菌としては、リゾビウム・エトリ(Rhizobium etli)などが挙げられる。
コリネ型細菌は、これに分類されるものであれば特に制限されないが、コリネバクテリウム属に属する細菌、ブレビバクテリウム属に属する細菌又はアースロバクター属に属する細菌などが挙げられ、このうち好ましくは、コリネバクテリウム属又はブレビバクテリウム属に属するものが挙げられ、更に好ましくは、コリネバクテリウム・グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)、ブレビバクテリウム・フラバム(Brevibacterium flavum)、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス(Brevibacterium ammoniagenes)又はブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム(Brevibacterium lactofermentum)に分類される細菌が挙げられる。
ブレビバクテリウム・フラバムMJ−233は、1975年4月28日に通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所(現独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター)(〒305-8566 日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1 中央第6)に受託番号FERM P-3068として寄託され、1981年5月1日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、FERM BP-1497の受託番号で寄託されている。
また、親株として用いられる上記細菌は、野生株だけでなく、UV照射やNTG処理等の通常の変異処理により得られる変異株、細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法により誘導される組換え株などのいずれの株であってもよい。
ここで、「ODH活性」とは、2−オキソグルタル酸(α−ケトグルタル酸)を酸化的に脱炭酸し、サクシニル−CoA(succinyl-CoA)を生成する反応を触媒する活性をいい、「ODH活性が増強する」とは、ODH非改変株と比較してODH活性が増強していることをいう。ODH活性は、ODH非改変株と比較して、単位菌体重量当たり1.5倍以上増強されていることが好ましく、2倍以上増強されていることがより好ましい。なお、ODH活性は、Shiioらの方法(Isamu Shiio and Kyoko Ujigawa-Takeda, Agric.Biol.Chem.,44(8),1897-1904,1980)に従って測定することができる。
プラスミドなどを用いた形質転換や相同組換えなどによってODH遺伝子を宿主細菌に導入する場合に用いることのできるODH遺伝子としては、宿主細菌に導入したときにODH活性を増加させる遺伝子、すなわち、ODH活性を有するタンパク質をコードする遺伝子である限り特に限定されないが、例えば、配列番号3に示す塩基配列を有するコリネ型細菌由来のODH遺伝子(odhA)を挙げることができる。ODH遺伝子は、ODH活性を有するタンパク質をコードする限り、上記塩基配列を有するDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズするDNA、または上記塩基配列と90%以上、好ましくは95%以上、より好ましくは99%以上の相同性を有するDNAのようなホモログ遺伝子であってもよい。
ここで、ストリンジェントな条件としては、通常のサザンハイブリダイゼーションの洗いの条件である60℃、1×SSC,0.1%SDS、好ましくは、0.1×SSC、0.1%SDSに相当する塩濃度でハイブリダイズする条件が挙げられる。
また、コリネ型細菌以外の細菌、または他の微生物又は動植物由来のODH遺伝子を使用することもできる。微生物または動植物由来のODH遺伝子は、既にその塩基配列が決定されている遺伝子、ホモロジー等に基いてODH活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を微生物、動植物等の染色体より単離し、塩基配列を決定したものなどを使用することができる。また、塩基配列が決定された後には、その配列にしたがって合成した遺伝子を使用することもできる。これらは、例えば、ハイブリダイゼーション法やPCR法によりそのプロモーターおよびORF部分を含む領域を増幅することによって、取得することができる。
なお、ODH活性の増強は、公知の相同組換え法によって染色体上にODH遺伝子を多コピー組み込んで高発現化させることによっても行うことができる。
以上、コリネ型細菌を用いる例を述べたが、他の細菌を用いる場合も同様の方法によって、ODH活性の増強を達成することができる。
プロモーター置換の方法としては、例えば、後述の実施例に示すようなsacB遺伝子を用いる方法(Schafer,A.et al.Gene 145 (1994)69-73)が挙げられる。
酢酸生産が低減するような改変としては、たとえば、アセテートキナーゼ(以下、ACKとも呼ぶ)、ホスホトランスアセチラーゼ(以下、PTAとも呼ぶ)、アセチル−CoAハイドラーゼ(以下、ACHとも呼ぶ)、ピルベートオキシダーゼ(以下、POXBとも呼ぶ)の活性を低減するような改変が挙げられる。
酢酸はオキサロ酢酸及びオキサロ酢酸誘導体生合成経路の中間体であるアセチル−CoAから生成されるため、酢酸合成経路をブロックして酢酸の副生を低減させるためには、上記酵素のいずれか一つあるいは全ての活性を低下させることが好ましい。
なお、本発明において使用する細菌は、ODH活性を増強する改変に加え、上記改変のうちの2種類以上の改変を組み合わせて得られる細菌であってもよい。複数の改変を行う場合、その順番は問わない。
なお、ach遺伝子及びpoxB遺伝子の破壊は、上述のpta遺伝子の破壊と同様に、公知の方法により行うことができる。
ヒト [Biochem.Biophys.Res.Comm., 202, 1009-1014, (1994)]
マウス[Proc.Natl.Acad.Sci.USA., 90, 1766-1779, (1993)]
ラット[GENE, 165, 331-332, (1995)]
酵母;サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)
[Mol.Gen.Genet., 229, 307-315, (1991)]
シゾサッカロマイセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)
[DDBJ Accession No.; D78170]
バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)
[GENE, 191, 47-50, (1997)]
リゾビウム・エトリ(Rhizobium etli)
[J.Bacteriol., 178, 5960-5970, (1996)]
なお、PC活性の増強は上述したようなODHの活性増強と同様の方法にて行うことができる。
本発明の有機酸の製造方法は、上記細菌またはその処理物を、炭酸イオン、重炭酸イオンまたは二酸化炭素ガスを含有する反応液中で有機原料に作用させ、有機酸を生成させ、これを採取する事を特徴とする有機酸の製造方法である。製造する有機酸は上述した有機酸であるが、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸又はピルビン酸が好ましく、コハク酸がより好ましい。
近年、環境に配慮した工業製品が数を増す中、植物由来の原料を用いたポリマーに注目が集まってきており、本発明において製造されるコハク酸は、ポリエステルやポリアミドといったポリマーに加工されて用いる事が出来る。コハク酸含有ポリマーとして具体的には、ブタンジオールやエチレングリコールなどのジオールとコハク酸を重合させて得られるコハク酸ポリエステル、ヘキサメチレンジアミンなどのジアミンとコハク酸を重合させて得られるコハク酸ポリアミドなどが挙げられる。
また、本発明の製造法により得られるコハク酸または該コハク酸を含有する組成物は食品添加物や医薬品、化粧品などに用いることができる。
(A)MJ233株ゲノムDNAの抽出
A培地[尿素 2g、(NH4)2SO4 7g、KH2PO4 0.5g、K2HPO4 0.5g、MgSO4・7H2O 0.5g、FeSO4・7H2O 6mg、MnSO4・4−5H2O6mg、ビオチン 200μg、チアミン 100μg、イーストエキストラクト 1g、カザミノ酸 1g、グルコース 20g、蒸留水1Lに溶解]10mLに、ブレビバクテリウム・フラバムMJ−233株を対数増殖期後期まで培養し、遠心分離(10000g、5分)により菌体を集めた。得られた菌体を10mg/mLの濃度にリゾチームを含む10mM NaCl/20mMトリス緩衝液(pH8.0)/1mM EDTA・2Na溶液0.15mLに懸濁した。次に、上記懸濁液にプロテナーゼKを、最終濃度が100μg/mLになるように添加し、37℃で1時間保温した。さらにドデシル硫酸ナトリウムを最終濃度が0.5%になるように添加し、50℃で6時間保温して溶菌した。この溶菌液に、等量のフェノール/クロロフォルム溶液を添加し、室温で10分間ゆるやかに振盪した後、全量を遠心分離(5,000×g、20分間、10〜12℃)し、上清画分を分取し、酢酸ナトリウムを0.3Mとなるように添加した後、2倍量のエタノールを加え混合した。遠心分離(15,000×g、2分)により回収した沈殿物を70%エタノールで洗浄した後、風乾した。得られたDNAに10mMトリス緩衝液(pH7.5)−1mM EDTA・2Na溶液5mLを加え、4℃で一晩静置し、以後のPCRの鋳型DNAに使用した。
プロモーター領域を含むブレビバクテリウム・フラバムMJ233株由来2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ複合体E1コンポーネントの遺伝子(odhA)の取得は上記(A)で調製したDNAを鋳型とし、全ゲノム配列が報告されているコリネバクテリウム・グルタミカム ATCC13032株の該遺伝子の配列(GenBank Database Accession No.BA000036の1172498..1176271の相補鎖)を基に設計した合成DNA(配列番号1および配列番号2)を用いたPCRによって行った。反応液組成:鋳型DNA1μL、PfxDNAポリメラーゼ(インビトロジェン社製)0.5μL、1倍濃度添付バッファー、0.4μM各々プライマー、1mM MgSO4、0.2μMdNTPsを混合し、全量を50μLとした。反応温度条件:DNAサーマルサイクラー PTC−200(MJResearch社製)を用い、94℃で10秒、68℃で5分からなるサイクルを35回繰り返した。但し、1サイクル目の94℃での保温は2分、最終サイクルの68℃での保温は10分とした。PCR反応終了後、Takara Ex Taq(宝バイオ)を0.1μL加え、さらに72℃で30分保温した。増幅産物の確認は、0.75%アガロース(SeaKem GTG agarose:FMCBioProducts製)ゲル電気泳動により分離後、臭化エチジウム染色により可視化することにより行い、約4.4kbの断片を検出した。ゲルからの目的DNA断片の回収は、QIAQuick Gel Extraction Kit(QIAGEN製)を用いて行った。回収したDNA断片を、PCR産物クローニングベクターpT7Blue T−Vector(Novagen製)と混合し、ライゲーションキットver.2(宝バイオ)を用いて連結後、得られたプラスミドDNAで大腸菌(DH5α株)を形質転換した。この様にして得られた組換え大腸菌を50μg/mLアンピシリンおよび50μg/mLX−Galを含むLB寒天培地に塗抹した。この培地上で白色のコロニーを形成したクローンを、常法により液体培養した後、プラスミドDNAを精製した。得られたプラスミドDNAを制限酵素SseIおよびBamHIで切断することにより、約4.4kbの挿入断片が認められ、これをpODH1.0と命名した。
(i)ストレプトマイシン/スペクチノマイシン耐性遺伝子の導入
pTZ4と共存可能なコリネ型細菌ベクターは、pTZ4と和合性を示す複製領域を持つプラスミドベクターpC3(Plasmid 36 62(1996))のカナマイシン耐性遺伝子をストレプトマイシン/スペクチノマイシン耐性遺伝子に置き換えることによって構築した。なお、pTZ4とは、後述のMJ233/PC/ΔLDH株に導入されているPC増幅用プラスミドのオリジナルプラスミドである。
ストレプトマイシン/スペクチノマイシン耐性遺伝子(大腸菌Tn7)の取得は、同遺伝子を有する植物形質転換用バイナリーベクターpLAN421(Plant Cell Reports 10, 286 (1991))を鋳型としたPCRによって行った。
反応液組成:鋳型DNA10ng、PfxDNAポリメラーゼ(インビトロジェン社製)0.2μL、1倍濃度添付バッファー、0.3μM各々プライマー、(配列番号10および配列番号11で示した合成DNA)、1mM MgSO4、0.25μMdNTPsを混合し、全量を20μLとした。
反応温度条件:DNAサーマルサイクラー PTC−200(MJResearch社製)を用い、94℃で20秒、60℃で20秒、72℃で60秒からなるサイクルを20回繰り返した。但し、1サイクル目の94℃での保温は1分20秒、最終サイクルの72℃での保温は2分とした。
増幅産物の確認は、0.8%アガロース(SeaKem GTG agarose:FMCBioProducts製)ゲル電気泳動により分離後、臭化エチジウム染色により可視化することにより行い、937bpの断片を検出した。ゲルからの目的DNA断片の回収は、QIAQuick Gel Extraction Kit(QIAGEN製)を用いて行い、回収後同DNA断片を、T4 ポリヌクレオチドキナーゼ(T4 Polynucleotide Kinase:宝バイオ)により5'末端をリン酸化した。
pC3を制限酵素HindIIIおよびNruIで切断後、クレノウフラグメント(Klenow Fragment:宝バイオ)により両末端を平滑化したDNA断片の末端を、上記で調製したストレプトマイシン/スペクチノマイシン耐性遺伝子と混合し、ライゲーションキットver.2(宝バイオ)を用いて結合した。得られたプラスミドDNAで大腸菌(DH5α株)を形質転換し、50μg/mLスペクチノマイシンをLB寒天培地に塗抹した。得られたコロニーから、液体培養後、定法によりプラスミドDNAを調製し、配列番号10および配列番号11の合成DNA をプライマーとした上記PCRによって解析した結果、ストレプトマイシン/スペクチノマイシン耐性遺伝子が挿入されていることが確認され、これをpC3と命名した。
次に、pC3を制限酵素BamHIおよびPvuIIで切断して調製したDNA断片をクレノウフラグメントにて末端を平滑化し、これにpBglIIリンカー(宝バイオ:CAGATCTG)を混合し、ライゲーションキットver.2(宝バイオ)を用いて連結後、得られたプラスミドDNAで大腸菌(DH5α株)を形質転換し、50μg/mLスペクチノマイシンを含むLB寒天培地に塗抹した。得られたコロニーから、液体培養後、定法によりプラスミドDNAを調製し、制限酵素BglIIにて切断されるプラスミドを選抜し、これをpC3.1と命名した。
大腸菌プラスミドpT7Blue(Novagen社)を鋳型としてLacZマルチクローニングサイトを含むα−ペプチド遺伝子を配列番号12および配列番号13で示す合成DNAをプライマーとしたPCRにより調製した。
反応液組成:鋳型DNA10ng、PfxDNAポリメラーゼ(インビトロジェン社製)0.2μL、1倍濃度添付バッファー、0.3μM各々プライマー、1mM MgSO4、0.25μMdNTPsを混合し、全量を20μLとした。
反応温度条件:DNAサーマルサイクラー PTC−200(MJResearch社製)を用い、94℃で20秒、60℃で20秒、72℃で30秒からなるサイクルを20回繰り返した。但し、1サイクル目の94℃での保温は1分20秒、最終サイクルの72℃での保温は2分とした。
増幅産物の確認は、1.0%アガロース(SeaKem GTG agarose:FMCBioProducts製)ゲル電気泳動により分離後、臭化エチジウム染色により可視化することにより行い、5777bpの断片を検出した。ゲルからの目的DNA断片の回収は、QIAQuick Gel Extraction Kit(QIAGEN製)を用いて行い、回収後同DNA断片を、T4 ポリヌクレオチドキナーゼ(T4 Polynucleotide Kinase:宝バイオ)により5'末端をリン酸化した。
pC3.1を制限酵素PstIおよびHpaIで切断後、クレノウフラグメント(Klenow Fragment:宝バイオ)により末端を平滑化したDNA断片を、上記で調製したα−ペプチドの遺伝子断片と混合し、ライゲーションキットver.2(宝バイオ)を用いて結合した。得られたプラスミドDNAで大腸菌(DH5α株)を形質転換し、50μg/mLX-Galおよび50μg/mLスペクチノマイシンを含むLB寒天培地に塗抹した。得られたコロニーの中から青色を呈するもの選抜し、液体培養後、定法によりプラスミドDNAを調製した。このプラスミドDNAは、挿入したLacZマルチクローニングサイトに由来するEcoRVの切断部位を有することが確認され、これをpC3.14と命名した(図1に構築手順を示す)。
ODH増強用プラスミドpODH3.2のブレビバクテリウム・フラバムMJ233/PC/ΔLDH株(PC遺伝子が増強され、LDH遺伝子が破壊された株:特開2005−95169:WO2005/21770)への導入は、電気パルス法(Res.Microbiol.、Vol.144, p.181-185, 1993)によってそれぞれ行い、得られた形質転換体をストレプトマイシン10μg/mLおよびカナマイシン25μg/mLを含むLBG寒天培地[トリプトン10g、イーストエキストラクト5g、NaCl 5g、グルコース 20g、及び寒天15gを蒸留水1Lに溶解]に塗抹した。この培地上に生育したそれぞれの株から、常法により液体培養した後、プラスミドDNAを抽出、制限酵素切断による解析を行った結果、同株がpODH3.2を保持していることを確認し、該株をブレビバクテリウム・フラバムMJ233/pODH/PC/ΔLDH株と命名した。
上記ブレビバクテリウム・フラバムMJ233/pODH/PC/ΔLDH株をグルコース2%を含むA培地100mlで終夜培養を行った。得られた培養液50 mlを4℃で4,000rpm x 10 分の遠心分離により回収後、30 mlの100 mM TES-NaOH buffer (pH 7.5) で2回洗浄した。洗浄後の菌体は、10 mlのBufferA (100 mM TES-NaOH buffer (pH 7.5), 30% glycerol) に懸濁した。菌体懸濁液1 ml を破砕用15 ml ファルコンに移し、ガラスビーズ1 mgを加え、バイオラプター(コスモバイオ製)で4℃に冷却しながら超音波破砕 (Highレベルで1 分破砕, 2 分休止のサイクルを1サイクルとしてこれを7サイクル)を行った。この菌体破砕液を4℃で18,000 x g, 5 min遠心してビーズを除去後、さらに18,000 x g, 25 minの遠心を行い、得られた上清を粗酵素画分としてODH酵素活性測定に供した。なお、タンパク濃度の測定はBSA濃度を指標とし、Protein Assay (BIO-RAD, #500-0006 )を用いて行った。
ODH活性測定は、Agric. Boil. Chem., 44(8), 1897-1904, 1980, I Shiio and K Ujigawa-Takedaに記載の方法を参考に、以下の通りに行った。まず、終濃度100 mM TES (DOJINDO, #344-02653)-NaOH buffer (pH 7.7), 0.2 mM coenzyme A(和光, #306-50481), 0.3 mM thiamin pyrophosphate (SIGMA, #C-8754), 5 mM 2-oxoglutarate (SIGMA, #305-72-6), 3 mM L-cysteine (和光, #033-05272), 5 mM MgCl2, 1 mM 3-acetylpyridine adenine dinucleotide (和光, #44047000)になるよう反応液を調製した。測定用キュベットに反応液を移した後、粗酵素液の添加により反応を開始し365nmでの吸光度(A365)の上昇を測定した。1Uは1分間にA365が1増加する時の酵素量とした。上記測定法によるブレビバクテリウム・フラバムMJ233/pODH/PC/ΔLDH株のODH比活性は0.028U/mg-蛋白質であった。なお親株であるブレビバクテリウム・フラバムMJ233/PC/ΔLDH株を同様に培養した菌体では、同活性は0.009U/mg-蛋白質であり、ODH遺伝子プラスミド増強株では約3倍にODH活性が増加していることが確認された。
(A)アンモニア嫌気条件
尿素:4g、硫酸アンモニウム:14g、リン酸1カリウム:0.5g、リン酸2カリウム0.5g、硫酸マグネシウム・7水和物:0.5g、硫酸第一鉄・7水和物:20mg、硫酸マンガン・水和物:20mg、D−ビオチン:200μg、塩酸チアミン:200μg、酵母エキス:5g、カザミノ酸:5g、及び蒸留水:1000mLの培地100mLを500mLの三角フラスコにいれ、120℃、20分加熱滅菌した。これを室温まで冷やし、あらかじめ滅菌した50%グルコース水溶液を4mL、無菌濾過した5%カナマイシン水溶液:50μL、無菌濾過した2%ストレプトマイシン水溶液:50μLを添加し、実施例1の(D)で作製したブレビバクテリウム・フラバムMJ233/ODH/PC/ΔLDH株を接種して24時間30℃にて種培養した。
硫酸アンモニウム:42g、リン酸1カリウム:1.5g、リン酸2カリウム1.5g、硫酸マグネシウム・7水和物:1.5g、硫酸第一鉄・7水和物:60mg、硫酸マンガン・水和物:60mg、D−ビオチン:600μg、塩酸チアミン:600μg、酵母エキス15g、カザミノ酸15g、消泡剤(アデカノールLG294:旭電化製):1mL及び蒸留水:2500mLの培地を5Lの発酵糟に入れ、120℃、20分加熱滅菌した。これを室温まで冷やした後、あらかじめ滅菌した12%グルコース水溶液:500mL、無菌濾過した5%カナマイシン水溶液:1.5mL、無菌濾過した2%ストレプトマイシン水溶液:1.5mLを添加し、これに前述の種培養液を100mL加えて、30℃に保温した。pHは2M炭酸アンモニウムを用いて7.5に保ち、通気は毎分500mL、攪拌は毎分500回転で16時間本培養を行った。
硫酸マグネシウム・7水和物:0.2g、硫酸第一鉄・7水和物:8mg、硫酸マンガン・水和物:8mg、D−ビオチン:80μg、塩酸チアミン:80μg、消泡剤(アデカノールLG294:旭電化製):1ml及び蒸留水:200mLの培地を500mLの三角フラスコに入れ、120℃、20分加熱滅菌した。室温まで冷やした後、上記の本培養により得られた培養液を8000rpm、5分の遠心分離により集菌した菌体に添加して、O.D.(660nm)が60になるように再懸濁した。この懸濁液200mLとあらかじめ滅菌した20%グルコース溶液200mLを1Lのジャーファーメンターに入れて混合し、35℃に保温した。pHは2M炭酸アンモニウムを用いて7.6に保ち、無通気、毎分400回転で攪拌しながら反応を行った。反応開始後約47時間で反応を終了した。
その結果、ブレビバクテリウム・フラバムMJ233/pODH/PC/ΔLDH株は、MJ233/PC/ΔLDH株と比較して、コハク酸収率が3.4%増大し、コハク酸の生産量に対するアミノ酸生産量が47%減少した。すなわち、ODHの増強により、明らかなコハク酸収率向上、アミノ酸収率低減の効果が見られた。
尿素:4g、硫酸アンモニウム:14g、リン酸1カリウム:0.5g、リン酸2カリウム0.5g、硫酸マグネシウム・7水和物:0.5g、硫酸第一鉄・7水和物:20mg、硫酸マンガン・水和物:20mg、D−ビオチン:200μg、塩酸チアミン:200μg、酵母エキス:5g、カザミノ酸:5g、及び蒸留水:1000mLの培地100mLを500mLの三角フラスコにいれ、120℃、20分加熱滅菌した。これを室温まで冷やし、あらかじめ滅菌した50%グルコース水溶液を4mL、無菌濾過した5%カナマイシン水溶液:50μL、無菌濾過した2%ストレプトマイシン水溶液:50μLを添加し、実施例1の(D)で作製したブレビバクテリウム・フラバムMJ233/pODH/PC/ΔLDH株を接種して24時間30℃にて種培養した。
硫酸アンモニウム:42g、リン酸1カリウム:1.5g、リン酸2カリウム1.5g、硫酸マグネシウム・7水和物:1.5g、硫酸第一鉄・7水和物:60mg、硫酸マンガン・水和物:60mg、D−ビオチン:600μg、塩酸チアミン:600μg、酵母エキス15g、カザミノ酸15g、消泡剤(アデカノールLG294:旭電化製):1mL及び蒸留水:2500mLの培地を5Lの発酵糟に入れ、120℃、20分加熱滅菌した。これを室温まで冷やした後、あらかじめ滅菌した12%グルコース水溶液:500mL、無菌濾過した5%カナマイシン水溶液:1.5mL、無菌濾過した2%ストレプトマイシン水溶液:1.5mLを添加し、これに前述の種培養液を100mL加えて、30℃に保温した。pHは2M炭酸アンモニウムを用いて7.5に保ち、通気は毎分500mL、攪拌は毎分500回転で16時間本培養を行った。
硫酸マグネシウム・7水和物:0.2g、硫酸第一鉄・7水和物:8mg、硫酸マンガン・水和物:8mg、D−ビオチン:80μg、塩酸チアミン:80μg、消泡剤(アデカノールLG294:旭電化製):1ml及び蒸留水:200mLの培地を500mLの三角フラスコに入れ、120℃、20分加熱滅菌した。室温まで冷やした後、上記の本培養により得られた培養液を8000rpm、5分の遠心分離により集菌した菌体に添加して、O.D.(660nm)が60になるように再懸濁した。この懸濁液200mLとあらかじめ滅菌した20%グルコース溶液200mLを1Lのジャーファーメンターに入れて混合し、35℃に保温した。pHは2M炭酸ナトリウムを用いて7.6に保ち、無通気、毎分400回転で攪拌しながら反応を行った。反応開始後約47時間で反応を終了した。
その結果、ブレビバクテリウム・フラバムMJ233/pODH/PC/ΔLDH株は、MJ233/PC/ΔLDH株と比較して、コハク酸収率が3.8%増大し、コハク酸生産量に対する酢酸生産量が27%減少した。すなわち、ODHの増強により、明らかなコハク酸収率向上、酢酸収率低減の効果が見られた。
(A)ODH増幅株の作製
酢酸の生成が低減化された株の2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼの増強効果を確認した。酢酸生成が低減化された株として、ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム2256(コリネバクテリウム・グルタミカムATCC13869)のラクテートデヒドロゲナーゼ(ldh)、アセチル−CoAハイドロラーゼ(ach)、ホスホトランスアセチラーゼ(pta)、アセテートキナーゼ(ack)、ピルビン酸オキシダーゼ(poxB)活性を低減化した株(2256Δ(ldh,pta,ack,ach,poxB)株)を用いた(国際公開WO2005/113744、WO2005/113745号パンフレット)。
ODH増幅用プラスミドとして、ODH遺伝子を含むpPKS-X (国際公開WO95/34672号パンフレット)を、また対照としてそのベクターであるpPK4(国際公開WO95/34672号パンフレット)を用いて、ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム2256Δ(ldh,pta,ack,ach,poxB)株を電気パルス法により形質転換し、カナマイシン25μg/mlを含むCM-Dex寒天培地(グルコース 5g/L、ポリペプトン 10g/L、イーストエキストラクト 10g/L、KH2PO4 1g/L、MgSO4・7H2O 0.4g/L、FeSO4・7H2O 0.01g/L、MnSO4・7H2O 0.01g/L、尿素 3g/L、大豆加水分解物 1.2g/L、pH7.5(KOH)に寒天1.5%を含む)に塗布し、31.5℃で約24時間培養した。出現したコロニーを純化し、定法によりプラスミドを抽出し、目的のプラスミドが導入されていることを確認した。酢酸低減株にODH増幅プラスミドを導入した株を2256Δ(ldh,pta,ack,ach,poxB)/pPKS-X、ベクターを導入した株を2256Δ(ldh,pta,ack,ach,poxB)/pPK4と名づけた。
上述のODH増幅プラスミド導入株(2256Δ(ldh,pta,ack,ach,poxB)/pPKS-X)、ベクター導入株(2256Δ(ldh,pta,ack,ach,poxB)/pPK4)をCM-Dex寒天培地にて培養し、得られた菌体をシード培地 3ml(グルコース 20g/L、(NH4)2SO4 14g/L、KH2PO4 0.5g/L、K2HPO4 0.5g/L、MgSO4・7H2O 0.5g/L、尿素 4g/L、FeSO4・7H2O 0.02g/L、MnSO4・7H2O 0.02g/L、ビオチン 200μg/L、VB1・HCl 200μg/L、イーストエキストラクト 1g/L、カザミノ酸 1g/L)に接種し、好気条件にて31.5℃にて試験管で約8時間振とう培養を行った。
その後、その試験管にメイン培地 3ml(グルコース200g/Lをフィルターろ過したものに、乾熱滅菌した炭酸マグネシウムを終濃度143g/Lとなるように混合)を接種し、通気を防ぐためシリコン栓で密栓し、31.5℃で約48時間振とうしつつコハク酸生産培養を行った。生成したコハク酸量を液体クロマトグラフィーにより分析した。カラムはRezex ROA-Organic Acid H+(Phenomenex)を二本直列接続したものを用い、サンプルは5mM p-トルエンスルホン酸を用いて50℃で溶出した。溶出液を5mM p-トルエンスルホン酸および100μM EDTAを含む20mM Bis-Tris水溶液を用いて中和し、CDD-10AD(Simadzu)にて電気伝導度を測定することによりコハク酸を測定した。各菌株について、複数検体の評価を行った平均の結果を表1に示した。Yield(%)は糖に対するコハク酸の収率、α-KG/SA(%)は、培養液中のコハク酸(SA)に対するα-ケトグルタル酸(α-KG)の濃度比を示す。
Claims (8)
- コハク酸生産能を有し、
プラスミドを用いた形質転換、染色体上への遺伝子導入およびプロモーター置換から選択される手段により、2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性およびピルビン酸カルボキシラーゼ活性が該酵素の非改変株と比較して増強するように改変され、かつ、
遺伝子破壊によりラクテートデヒドロゲナーゼ活性が低減化するように改変されたコリネ型細菌。 - コハク酸生産能を有し、
プラスミドを用いた形質転換、染色体上への遺伝子導入およびプロモーター置換から選択される手段により、2−オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が該酵素の非改変株と比較して増強するように改変され、
遺伝子破壊によりラクテートデヒドロゲナーゼ活性が低減化するように改変され、かつ、遺伝子破壊により、アセテートキナーゼ活性、ホスホトランスアセチラーゼ活性、アセチル−CoAハイドロラーゼ活性、およびピルベートオキシダーゼ活性が低減化するように改変されたことによって酢酸の生成が低減したコリネ型細菌。 - さらに、プラスミドを用いた形質転換、染色体上への遺伝子導入およびプロモーター置換から選択される手段により、ピルビン酸カルボキシラーゼ活性が増強するように改変された、請求項2に記載のコリネ型細菌。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載されたコリネ型細菌あるいはその処理物を、炭酸イオン、重炭酸イオン又は二酸化炭素ガスを含有する反応液中で有機原料に作用させることによってコハク酸を生成させ、該コハク酸を採取する事を特徴とするコハク酸の製造方法。
- 前記コリネ型細菌あるいはその処理物を嫌気的雰囲気下で有機原料に作用させることを特徴とする、請求項4に記載のコハク酸の製造方法。
- 前記コリネ型細菌あるいはその処理物を炭酸水素ナトリウムの存在下、有機原料に作用させることを特徴とする、請求項4または請求項5に記載のコハク酸の製造方法。
- 前記有機原料が、グルコースまたはシュークロースである、請求項4〜6のいずれか一項に記載のコハク酸の製造方法。
- 請求項4〜7のいずれか一項に記載の方法によりコハク酸を製造する工程、及び前記工程で得られたコハク酸を原料として重合反応を行う工程を含む、コハク酸含有ポリマーの製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008502748A JP5180060B2 (ja) | 2006-02-24 | 2007-02-23 | 有機酸生産菌及び有機酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006048060 | 2006-02-24 | ||
JP2006048060 | 2006-02-24 | ||
PCT/JP2007/053360 WO2007099867A1 (ja) | 2006-02-24 | 2007-02-23 | 有機酸生産菌及び有機酸の製造法 |
JP2008502748A JP5180060B2 (ja) | 2006-02-24 | 2007-02-23 | 有機酸生産菌及び有機酸の製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2007099867A1 JPWO2007099867A1 (ja) | 2009-07-16 |
JP5180060B2 true JP5180060B2 (ja) | 2013-04-10 |
Family
ID=38458977
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008502748A Expired - Fee Related JP5180060B2 (ja) | 2006-02-24 | 2007-02-23 | 有機酸生産菌及び有機酸の製造法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7993888B2 (ja) |
EP (1) | EP1995308B1 (ja) |
JP (1) | JP5180060B2 (ja) |
CN (1) | CN101389752B (ja) |
BR (1) | BRPI0707674A2 (ja) |
WO (1) | WO2007099867A1 (ja) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4469568B2 (ja) | 2003-07-09 | 2010-05-26 | 三菱化学株式会社 | 有機酸の製造方法 |
CN100575496C (zh) | 2003-08-28 | 2009-12-30 | 三菱化学株式会社 | 产生琥珀酸的方法 |
WO2005113745A1 (ja) * | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Ajinomoto Co., Inc. | コハク酸生産菌及びコハク酸の製造方法 |
WO2005113744A1 (ja) | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Ajinomoto Co., Inc. | コハク酸生産菌及びコハク酸の製造方法 |
WO2010001960A1 (ja) * | 2008-07-03 | 2010-01-07 | 株式会社カネカ | 組換えブレビバチルス属細菌による組換え蛋白質の製造方法 |
JP6032198B2 (ja) | 2011-03-18 | 2016-11-24 | 三菱化学株式会社 | ポリマーの製造方法、有機酸の製造方法及び有機酸生産菌 |
HUE032394T2 (en) * | 2011-07-29 | 2017-09-28 | Mitsui Chemicals Inc | Microorganism with carbon dioxide fixation pathway introduced |
KR20140066553A (ko) | 2012-11-23 | 2014-06-02 | 삼성전자주식회사 | 코리네박테리움 속 균주의 신규 프로모터 |
MY172023A (en) * | 2013-01-24 | 2019-11-12 | Mitsui Chemicals Inc | Microorganism having carbon dioxide fixation cycle introduced thereinto |
CN103087972B (zh) * | 2013-02-01 | 2014-11-05 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 生产萜类化合物的重组微生物及构建方法 |
JP2014150747A (ja) * | 2013-02-06 | 2014-08-25 | Sekisui Chem Co Ltd | 変異微生物、並びに、コハク酸の生産方法 |
JP6649249B2 (ja) * | 2013-05-17 | 2020-02-19 | ザイレコ,インコーポレイテッド | バイオマスの加工 |
KR101547651B1 (ko) * | 2014-06-03 | 2015-08-26 | 씨제이제일제당 주식회사 | O-숙시닐호모세린 또는 숙신산의 생산능을 갖는 미생물 및 이를 이용한 숙신산 또는 o-숙시닐호모세린의 생산 방법 |
US9938542B2 (en) | 2015-02-27 | 2018-04-10 | White Dog Labs, Inc. | Mixotrophic fermentation method for making acetone, isopropanol, butyric acid and other bioproducts, and mixtures thereof |
KR101735935B1 (ko) * | 2015-07-20 | 2017-05-16 | 씨제이제일제당 (주) | 퓨트레신 또는 오르니틴 생산 미생물 및 이를 이용한 퓨트레신 또는 오르니틴 생산방법 |
CN109897796A (zh) * | 2019-01-29 | 2019-06-18 | 天津大学 | 厌氧快速生长的大肠杆菌平台菌株及用途 |
CN113774096A (zh) * | 2021-10-21 | 2021-12-10 | 呼伦贝尔东北阜丰生物科技有限公司 | 一种苏氨酸生产提取工艺的优化方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040152159A1 (en) * | 2002-11-06 | 2004-08-05 | Causey Thomas B. | Materials and methods for the efficient production of acetate and other products |
WO2005021770A1 (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-10 | Mitsubishi Chemical Corporation | コハク酸の製造方法 |
WO2005113744A1 (ja) * | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Ajinomoto Co., Inc. | コハク酸生産菌及びコハク酸の製造方法 |
WO2005113745A1 (ja) * | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Ajinomoto Co., Inc. | コハク酸生産菌及びコハク酸の製造方法 |
JP2006238843A (ja) * | 2005-03-07 | 2006-09-14 | Mitsubishi Heavy Ind Ltd | コハク酸の製造方法、コハク酸、生分解性プラスチックの製造方法および生分解性プラスチック |
JP2006320208A (ja) * | 2005-05-17 | 2006-11-30 | Mitsubishi Chemicals Corp | コハク酸の製造方法 |
Family Cites Families (69)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6696561B1 (en) * | 1909-07-09 | 2004-02-24 | Basf Aktiengesellschaft | Corynebacterium glutamicum genes encoding proteins involved in membrane synthesis and membrane transport |
JPS57134500A (en) * | 1981-02-12 | 1982-08-19 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Plasmid pcg1 |
JPS57183799A (en) * | 1981-04-17 | 1982-11-12 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Novel plasmid |
JPS5835197A (ja) | 1981-08-26 | 1983-03-01 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | プラスミドpcg2 |
ZA816779B (en) | 1981-09-30 | 1982-09-29 | American Cyanamid Co | Process for trimerizing isocyanic acid to make cyanuric acid |
JPS5867679A (ja) | 1981-09-30 | 1983-04-22 | アメリカン・サイアナミド・カンパニ− | イソシアン酸を三量化してシアヌル酸をつくる方法 |
JPS5877895A (ja) | 1981-11-02 | 1983-05-11 | Ajinomoto Co Inc | プラスミドphm1519 |
JPS58192900A (ja) | 1982-05-04 | 1983-11-10 | Ajinomoto Co Inc | 複合プラスミド |
JPS61209596A (ja) | 1985-03-12 | 1986-09-17 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 固定化微生物による有機酸の製法 |
JPH0636746B2 (ja) | 1985-08-24 | 1994-05-18 | 味の素株式会社 | L―グルタミン酸の製造方法 |
JPH0796522B2 (ja) | 1986-04-08 | 1995-10-18 | 軽質留分新用途開発技術研究組合 | カルボン酸アンモニウム水溶液からのカルボン酸の製造法 |
JPS62238232A (ja) | 1986-04-09 | 1987-10-19 | Res Assoc Util Of Light Oil | カルボン酸アンモニウム水溶液からのカルボン酸の製造法 |
ES2036188T3 (es) | 1986-06-11 | 1993-05-16 | Michigan Biotechnology Institute | Un procedimiento para la produccion de acido succinico por fermentacion anaerobia. |
US5168055A (en) * | 1986-06-11 | 1992-12-01 | Rathin Datta | Fermentation and purification process for succinic acid |
US5143834A (en) | 1986-06-11 | 1992-09-01 | Glassner David A | Process for the production and purification of succinic acid |
US5143832A (en) * | 1987-08-25 | 1992-09-01 | Schering Corporation | ATCC 53620 production of a triacetylenic dioxolone with Microbispora sp. SCC 1438 |
JPH01191686A (ja) | 1988-01-26 | 1989-08-01 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 複合プラスミド |
JP2678995B2 (ja) | 1988-09-08 | 1997-11-19 | 三菱化学株式会社 | トリプトフアンシンターゼの製造法 |
US5185262A (en) | 1988-07-27 | 1993-02-09 | Mitsubishi Petrochemical Co., Ltd. | DNA fragment containing gene which encodes the function of stabilizing plasmid in host microorganism |
US5034105A (en) * | 1989-07-27 | 1991-07-23 | Michigan Biotechnology Institute | Carboxylic acid purification and crystallization process |
JP2820279B2 (ja) | 1989-08-11 | 1998-11-05 | 日本合成化学工業株式会社 | ソルビン酸の製造方法 |
JP2973446B2 (ja) | 1990-01-11 | 1999-11-08 | 三菱化学株式会社 | 新規プラスミドベクター |
US5142834A (en) * | 1990-07-12 | 1992-09-01 | Donnelly Corporation | Vehicle trim assembly and fastener therefor |
US5132456A (en) * | 1991-05-07 | 1992-07-21 | The Regents Of The University Of California | Sorption of carboxylic acid from carboxylic salt solutions at PHS close to or above the pKa of the acid, with regeneration with an aqueous solution of ammonia or low-molecular-weight alkylamine |
JP2526836B2 (ja) | 1991-08-23 | 1996-08-21 | 味の素株式会社 | 酢酸資化性遺伝子 |
CA2126365C (en) * | 1993-07-06 | 1999-08-24 | Steven W. Felman | Recovery of citric acid from impure process streams by addition of strong acids and salts thereof |
JP2844511B2 (ja) | 1993-09-02 | 1999-01-06 | 味の素株式会社 | 酢酸資化性遺伝子及びその利用 |
JP3394593B2 (ja) | 1994-05-11 | 2003-04-07 | 昭和高分子株式会社 | 生分解性脂肪族ポリエステルの製造方法 |
US5977331A (en) * | 1994-06-14 | 1999-11-02 | Ajinomoto Co., Inc. | α-Ketoglutarate dehydrogenase gene |
US5504004A (en) * | 1994-12-20 | 1996-04-02 | Michigan Biotechnology Institute | Process for making succinic acid, microorganisms for use in the process and methods of obtaining the microorganisms |
US5770435A (en) * | 1995-11-02 | 1998-06-23 | University Of Chicago | Mutant E. coli strain with increased succinic acid production |
US5869301A (en) * | 1995-11-02 | 1999-02-09 | Lockhead Martin Energy Research Corporation | Method for the production of dicarboxylic acids |
KR19990013007A (ko) | 1997-07-31 | 1999-02-25 | 박원훈 | 형질전환된 대장균 ss373(kctc 8818p)과 이를 이용한숙신산의 생산방법 |
US5958744A (en) * | 1997-08-18 | 1999-09-28 | Applied Carbochemicals | Succinic acid production and purification |
JP4197754B2 (ja) | 1997-10-09 | 2008-12-17 | 三菱化学株式会社 | 乳酸又はコハク酸の製造方法 |
JP3480274B2 (ja) | 1997-10-29 | 2003-12-15 | 三菱化学株式会社 | 脂肪族ポリエステル共重合体の製造方法 |
JP3967812B2 (ja) | 1998-01-16 | 2007-08-29 | 三菱化学株式会社 | ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子組み換え菌体による有機酸の製造法 |
JPH11196887A (ja) | 1998-01-16 | 1999-07-27 | Mitsubishi Chemical Corp | ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子組み換え菌体による有機酸の製造法 |
JP4074365B2 (ja) | 1998-01-28 | 2008-04-09 | 三菱化学株式会社 | ラクテートデヒドロゲナーゼ遺伝子及び該遺伝子破壊株 |
CA2325598A1 (en) | 1998-04-13 | 1999-10-21 | The University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Pyruvate carboxylase overexpression for enhanced production of oxaloacetate-derived biochemicals in microbial cells |
US20030087381A1 (en) * | 1998-04-13 | 2003-05-08 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Metabolically engineered organisms for enhanced production of oxaloacetate-derived biochemicals |
JP4132253B2 (ja) | 1998-07-24 | 2008-08-13 | 株式会社武蔵野化学研究所 | アンモニア耐性l(+)−乳酸産生能菌およびl(+)−乳酸の生産方法 |
DE19951975A1 (de) | 1999-10-28 | 2001-05-03 | Degussa | Neue für das poxB-Gen codierende Nuleotidsequenzen |
DE19959650A1 (de) * | 1999-12-10 | 2001-06-13 | Degussa | Neue für die Gene sdhA, sdhB und sdhC codierende Nukleotidsequenzen |
JP4623825B2 (ja) | 1999-12-16 | 2011-02-02 | 協和発酵バイオ株式会社 | 新規ポリヌクレオチド |
US6670505B1 (en) | 2000-03-07 | 2003-12-30 | Eastman Chemical Company | Process for the recovery of organic acids from aqueous solutions |
DE10044681A1 (de) * | 2000-09-09 | 2002-03-21 | Degussa | Neue für das lldD2-Gen kodierende Nukleotidsequenzen |
US6911329B2 (en) * | 2000-09-23 | 2005-06-28 | Degussa Ag | Process for the fermentative preparation of D-pantothenic acid using coryneform bacteria |
ATE274575T1 (de) | 2000-09-30 | 2004-09-15 | Degussa | Prozess zur fermentativen herstellung von d- pantothensäure mit coryneformen bakterien |
WO2002036797A2 (en) | 2000-11-04 | 2002-05-10 | Degussa Ag | Process for the fermentative preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family |
DE10112102A1 (de) | 2001-03-14 | 2002-09-19 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
JP2002291477A (ja) | 2001-03-30 | 2002-10-08 | Mitsubishi Chemicals Corp | フマラーゼをコードするdna及びその利用 |
US6743610B2 (en) * | 2001-03-30 | 2004-06-01 | The University Of Chicago | Method to produce succinic acid from raw hydrolysates |
US7338792B2 (en) * | 2001-07-07 | 2008-03-04 | Degussa Ag | Process for the preparation of D-pantothenic acid and/or salts thereof |
JP3754014B2 (ja) | 2001-09-26 | 2006-03-08 | 株式会社東芝 | 共重合体樹脂組成物およびその製造方法 |
US7026379B2 (en) * | 2001-09-26 | 2006-04-11 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Copolymer resin composition and production process thereof |
JP2003199522A (ja) | 2002-01-09 | 2003-07-15 | Inobakkusu Kk | 食用調味料 |
JP2003235592A (ja) | 2002-02-13 | 2003-08-26 | Mitsubishi Chemicals Corp | 有機酸の製造方法 |
JP4032765B2 (ja) | 2002-02-13 | 2008-01-16 | 三菱化学株式会社 | 有機酸の製造方法 |
JP4469568B2 (ja) * | 2003-07-09 | 2010-05-26 | 三菱化学株式会社 | 有機酸の製造方法 |
WO2005010182A1 (ja) * | 2003-07-29 | 2005-02-03 | Research Institute Of Innovative Technology For The Earth | コリネ型細菌形質転換体及びそれを用いるジカルボン酸の製造方法 |
JP4575086B2 (ja) | 2003-08-28 | 2010-11-04 | 三菱化学株式会社 | コハク酸の製造方法 |
BRPI0414300A (pt) * | 2003-09-17 | 2006-11-07 | Mitsubishi Chem Corp | método para produzir ácido orgánico não amino |
EP1669459B1 (en) * | 2003-09-30 | 2014-10-22 | Ajinomoto Co., Inc. | Method of purifying succinic acid from fermentation liquid |
US7262046B2 (en) * | 2004-08-09 | 2007-08-28 | Rice University | Aerobic succinate production in bacteria |
EP3130676A1 (en) * | 2004-08-27 | 2017-02-15 | Rice University | Mutant e. coli strain with increased succinic acid production |
JP2008513023A (ja) * | 2004-09-17 | 2008-05-01 | ライス ユニバーシティー | 高コハク酸生産細菌 |
WO2006069174A2 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Rice University | Simultaneous anaerobic production of isoamyl acetate and succinic acid |
CN101297043B (zh) * | 2005-10-18 | 2013-01-16 | 味之素株式会社 | 用于产生琥珀酸的方法 |
-
2007
- 2007-02-23 WO PCT/JP2007/053360 patent/WO2007099867A1/ja active Application Filing
- 2007-02-23 BR BRPI0707674-6A patent/BRPI0707674A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2007-02-23 JP JP2008502748A patent/JP5180060B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-02-23 EP EP07714831.0A patent/EP1995308B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-02-23 US US12/280,426 patent/US7993888B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-02-23 CN CN200780006557.4A patent/CN101389752B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040152159A1 (en) * | 2002-11-06 | 2004-08-05 | Causey Thomas B. | Materials and methods for the efficient production of acetate and other products |
WO2005021770A1 (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-10 | Mitsubishi Chemical Corporation | コハク酸の製造方法 |
WO2005113744A1 (ja) * | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Ajinomoto Co., Inc. | コハク酸生産菌及びコハク酸の製造方法 |
WO2005113745A1 (ja) * | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Ajinomoto Co., Inc. | コハク酸生産菌及びコハク酸の製造方法 |
JP2006238843A (ja) * | 2005-03-07 | 2006-09-14 | Mitsubishi Heavy Ind Ltd | コハク酸の製造方法、コハク酸、生分解性プラスチックの製造方法および生分解性プラスチック |
JP2006320208A (ja) * | 2005-05-17 | 2006-11-30 | Mitsubishi Chemicals Corp | コハク酸の製造方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6012037275; J. Biosci. Bioeng., 1999, Vol.87, No.1, p.28-36 * |
JPN6012037276; Microbiology, 1996, Vol.142 (Pt 12), p.3347-54 * |
JPN6012037278; Eur. J. Biochem. vol.141, 1984, p.351-9 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BRPI0707674A2 (pt) | 2011-05-10 |
CN101389752A (zh) | 2009-03-18 |
EP1995308A1 (en) | 2008-11-26 |
US7993888B2 (en) | 2011-08-09 |
WO2007099867A1 (ja) | 2007-09-07 |
EP1995308B1 (en) | 2014-07-30 |
CN101389752B (zh) | 2015-08-05 |
US20090156779A1 (en) | 2009-06-18 |
EP1995308A4 (en) | 2010-03-24 |
JPWO2007099867A1 (ja) | 2009-07-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5180060B2 (ja) | 有機酸生産菌及び有機酸の製造法 | |
JP5023701B2 (ja) | コハク酸生産菌及びコハク酸の製造方法 | |
JP5572279B2 (ja) | コハク酸生産菌及びコハク酸の製造方法 | |
US7563606B2 (en) | Method for producing non-amino organic acid | |
US7763447B2 (en) | Method of producing succinic acid with bacterium comprising a modified fumarate reductase gene or a modified succinate dehydrogenase gene | |
JP4575086B2 (ja) | コハク酸の製造方法 | |
JP4760121B2 (ja) | コハク酸の製造方法 | |
JP5034630B2 (ja) | 有機酸生産微生物の菌体の調製法及び有機酸の製造法 | |
JP2009065972A (ja) | コハク酸の製造方法 | |
JP5602982B2 (ja) | コハク酸の製造方法 | |
JP2008067623A (ja) | 非アミノ有機酸の製造方法 | |
JP4720114B2 (ja) | オキザロ酢酸またはオキザロ酢酸誘導体の製造方法 | |
JP4428999B2 (ja) | 非アミノ有機酸の製造方法 | |
JP5034395B2 (ja) | 有機酸生産菌及び有機酸の製造方法 | |
JP5663859B2 (ja) | 非アミノ有機酸生産菌および非アミノ有機酸の製造方法 | |
JP2008067624A (ja) | 非アミノ有機酸の製造方法 | |
JP2008067627A (ja) | 非アミノ有機酸生産菌および非アミノ有機酸の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100107 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120724 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120920 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121016 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20121218 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130110 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5180060 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |