JP5054546B2 - 新規ワクチン担体 - Google Patents
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Description
Fukutome, K., et al., Developmental and Comparative Immunology, 25, 2001, 475-484 Li, W., et al., Developmental and Comparative Immunology, 28, 2004, 29-38
SucPGを含むリポソームとして、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)(Sigma)とジオレオイルホスファチジルエタノールアミン(DOPE)(Sigma)のモル比1:1(それぞれ10μモル)からなる脂質組成に、SucPGを脂質重量比で10%、20%または30%添加し、SucPG濃度の異なる3種類のSucPGを含むリポソームを作製した。本実施例で使用するSucPGは、アルキル基として炭素数10のn-デシル基を有するものであり、文献に記載された方法にしたがって、合成した(Kono K., et al., J. Controlled Release, 68, 225-235 (2000);Kono K., et al., Biochim. Biophys. Acta, 1325, 143-154 (1997);またはKono K., et al., Biochim. Biophys. Acta, 1193, 1-9 (1994))。具体的には、ポリエピクロロホドリンをジメチルホルムアミド中、酢酸カリウム存在下で、175℃、6時間反応させることによりポリグリシジルアセテートを作製し、作製されたポリグリシジルアセテートをさらにメチルカルビトール中、酢酸カリウム存在下で150℃、1時間反応させることによりポリグリシドールを合成した。この様に合成した合成高分子ポリグリシドールを無水コハク酸とN,N-ジメチルフォルムアミド中において80℃で6時間反応させることによりSucPGを作製した。
本実施例は、実施例1において作製したSucPGを含むリポソームによるワクチンを経粘膜投与した場合の免疫応答について、SucPGを含まないリポソームによるワクチンと比較検討することを目的として行った。
実施例2において、SucPGを含むリポソームによるワクチンを用いて抗原を経粘膜投与を通じて免疫することにより、細胞性免疫応答の誘導を行う可能性が示されたことから、本実施例においては、SucPGを含むリポソームによるワクチンを用いた場合の細胞性免疫応答能について検討した。
フォワードプライマー:5'-tgcatcttggcttgcagctcttcctcatggc-3'(SEQ ID NO: 1)、および
リバースプライマー:5'-tggacctgtgggttgttgacctcaaacttggc-3'(SEQ ID NO: 2)、
そしてマウスIL-4遺伝子を増幅するためのプライマーとして、
フォワードプライマー:5'-ccagctagttgtcatcctgctcttctttctcg-3'(SEQ ID NO: 3)、および
リバースプライマー:5'-cagtgatgtggacttggactcattcatggtgc-3'(SEQ ID NO: 4)、
を使用した(それぞれCLONTEC社)。対照としてマウスG3PDH遺伝子を増幅するためのプライマーとして、
フォワードプライマー:5'-accacagtccatgccatcac-3'(SEQ ID NO: 5)、および
リバースプライマー:5'-tccaccaccctgttgctgta-3'(SEQ ID NO: 6)、
も使用した。
本実施例は、実施例1において作製したSucPGを含むリポソームによるワクチンを非経粘膜投与した場合の免疫応答について、SucPGを含まないリポソームによるワクチン比較検討することを目的として行った。
実施例4において、SucPGを含むリポソームを用いて抗原を免疫することにより、細胞性免疫応答の誘導を行う可能性が示されたことから、本実施例においては、SucPGを含むリポソームを用いた場合の細胞性免疫応答能について検討した。
本実施例は、Salmonella Enteritidis抗原を免疫原として含むSucPGを含むリポソームによるワクチンを、ニワトリに対して、点眼(経粘膜)投与した場合の免疫応答について、検討することを目的として行った。
本実施例は、トリパノソーマ(Trypanosoma brucei)の抗原を免疫原として含むSucPGを含むリポソームによるワクチンを、マウスに対して、経鼻(経粘膜)投与した場合の免疫応答について、検討することを目的として行った。
本実施例は、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)の抗原を免疫原として含むSucPGを含むリポソームによるワクチンを、ウシに対して、経鼻(経粘膜)投与した場合の免疫応答について、検討することを目的として行った。
本実施例は、Aeromonas salmonicidaの抗原を免疫原として含むSucPGを含むリポソームによるワクチンを、コイに対して、経口(経粘膜)投与した場合の免疫応答について、検討することを目的として行った。
本実施例は、Mycoplasma gallisepticumの抗原を免疫原として含むSucPGを含むリポソームによるワクチンを、マウスに対して、経鼻(経粘膜)投与した場合の免疫応答について、検討することを目的として行った。
本実施例は、ニューカッスル病ウイルスの抗原を免疫原として含むSucPGを含むリポソームによるワクチンを、マウスに対して、経鼻(経粘膜)投与した場合の免疫応答について、検討することを目的として行った。
Claims (22)
- サクシニル化ポリグリシドールを含むリポソームから構成される、ペプチドまたはタンパク質を免疫原とするワクチン担体。
- サクシニル化ポリグリシドールを、10〜40重量%含む、請求項1に記載のワクチン担体。
- サクシニル化ポリグリシドールを、30重量%含む、請求項2に記載のワクチン担体。
- リポソームを構成する脂質が、ジオレイルフォスファチジルエタノールアミン(DOPE)、ジステアロイルフォスファチジルエタノールアミン(DSPE)、ジパルミトイルフォスファチジルセリン(DPPS)、ジパルミトイルフォスファチジルコリン(DPPC)、ジステアロイルフォスファチジルコリン(DSPC)、ジミリストイルフォスファチジルコリン(DMPC)、卵黄レシチン(egg PC)またはコレステロールのいずれか、もしくはこれらのいずれかの組み合わせから構成される、請求項1〜3のいずれか1項に記載のワクチン担体。
- リポソームが、ジオレイルフォスファチジルエタノールアミン(DOPE)およびジステアロイルフォスファチジルエタノールアミン(DSPE)の組み合わせから構成される、請求項1〜4のいずれか1項に記載のワクチン担体。
- リポソーム中に含まれるペプチドまたはタンパク質の免疫原を抗原提示細胞への内在化 を可能にすることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか1項に記載のワクチン担体。
- リポソーム中に含まれるペプチドまたはタンパク質の免疫原を経粘膜的に投与するための、請求項1〜6のいずれか1項に記載のワクチン担体。
- リポソーム中に含まれるペプチドまたはタンパク質の免疫原を非経粘膜的に投与するための、請求項1〜6のいずれか1項に記載のワクチン担体。
- 免疫化のために投与すべきペプチドまたはタンパク質の免疫原を、サクシニル化ポリグリシドールを含むリポソームから構成されるワクチン担体中に含ませた、ワクチン。
- ペプチドまたはタンパク質の免疫原に対する細胞性免疫を誘導させるための、請求項9に記載のワクチン。
- ペプチドまたはタンパク質の免疫原に対する体液性免疫もまた誘導させるための、請求項10に記載のワクチン。
- ワクチン担体中にサクシニル化ポリグリシドールを10〜40重量%含む、請求項9〜11のいずれか1項に記載のワクチン。
- ワクチン担体中にサクシニル化ポリグリシドールを30重量%含む、請求項12に記載のワクチン。
- ワクチン担体のリポソームを構成する脂質が、ジオレイルフォスファチジルエタノールアミン(DOPE)、ジステアロイルフォスファチジルエタノールアミン(DSPE)、ジパルミトイルフォスファチジルセリン(DPPS)、ジパルミトイルフォスファチジルコリン(DPPC)、ジステアロイルフォスファチジルコリン(DSPC)、ジミリストイルフォスファチジルコリン(DMPC)、卵黄レシチン(egg PC)またはコレステロールのいずれか、もしくはこれらのいずれかの組み合わせから構成される、請求項9〜13のいずれか1項に記載のワクチン。
- ワクチン担体中のリポソームが、ジオレイルフォスファチジルエタノールアミン(DOPE)およ びジステアロイルフォスファチジルエタノールアミン(DSPE)の組み合わせから構成される、請求項9〜14のいずれか1項に記載のワクチン。
- リポソーム中に含まれるペプチドまたはタンパク質の免疫原を抗原提示細胞中に内在化させることを可能にする、請求項9〜15のいずれか1項に記載のワクチン。
- ペプチドまたはタンパク質の免疫原を経粘膜的に投与するための、請求項9〜16のいずれか1項に記載のワクチン。
- ペプチドまたはタンパク質の免疫原を非経粘膜的に投与するための、請求項9〜16のいずれか1項に記載のワクチン。
- ペプチドまたはタンパク質の免疫原が、細菌、ウィルス、原虫のいずれかに由来するペプチドまたはタンパク質の抗原から選択される、請求項9〜18のいずれかに記載のワクチン。
- 細菌が、サルモネラ、黄色ブドウ球菌、エロモナス、マイコプラズマから選択される、請求項19に記載のワクチン。
- ウィルスが、ニューカッスル病ウイルスである、請求項19に記載のワクチン。
- 原虫が、トリパノソーマである、請求項19に記載のワクチン。
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