JP2002505665A

JP2002505665A - Ｔｈ１型アジュバントを含有する抗ヘリコバクターワクチン組成物

Info

Publication number: JP2002505665A
Application number: JP54668498A
Authority: JP
Inventors: ギィ，ブリューノ; アアンスレ，ジャン
Original assignee: メリュー・オラバックス
Priority date: 1997-04-30
Filing date: 1998-04-30
Publication date: 2002-02-19
Also published as: KR20010020418A; CA2287976A1; AU7658498A; BR9809381A; EP0979100A1; AU750379B2; WO1998048836A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、哺乳動物におけるヘリコバクター感染の防止または処置のための、１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）の免疫応答を誘発するように設計された医薬組成物を製造するための、ＱＳ−２１、ＤＣ−ｃｈｏｌまたはＢａｙＲ１００５のようなアジュバントを伴う、ヘリコバクター由来の免疫原性物質の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】Ｔｈ１型アジュバントを含有する抗ヘリコバクターワクチン組成物本発明の主題は、哺乳動物において粘膜に感染する病原性生物に対する（特に、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）細菌に対する）防御免疫応答を誘発することが意図されたワクチン調製物の特定の使用である。ヘリコバクターは、グラム陰性のらせん状細菌によって特徴付けられる細菌属である。いくつかの種が哺乳動物の胃腸管に生息する。特に、エイチ・ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）、エイチ・ヘイルマニ（Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｉｉ）、エイチ・フェリス（Ｈ．ｆｅｌｉｓ）およびエイチ・ムステラエ（Ｈ．ｍｕｓｔｅｌａｅ）に言及し得る。ヒトの感染に最も一般的に関連する種はエイチ・ピロリであるが、いくつかの稀な場合、ヒトにおいてエイチ・ヘイルマニおよびエイチ・フェリスを単離することも可能であった。ヒトにおいて、ヘリコバクター型の細菌であるガストロスピリルム・ホミニス（Ｇａｓｔｒｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍｈｏｍｉｎｉｓ）も記載されている。ヘリコバクターは先進国における５０％より多く、そして発展途上国のほぼ１００％の成人集団に感染しており、世界中で優勢な感染因子の１つとなっている。エイチ・ピロリはこれまでに、もっぱらヒトの胃粘膜の表面において、より特定すると胃および十二指腸潰瘍のクレーター病変の周辺で見出されている。この細菌は、前底部胃炎の病因として現在認識されており、潰瘍の発達に必要とされる補因子の１つであるようである。さらに、胃ガンの発達はエイチ・ピロリの存在に関連しているかもしれないようである。それゆえ、ヘリコバクター感染を防止または処置するように意図されたワクチンを開発することは非常に望ましいと考えられる。現在までに、いくつかのヘリコバクタータンパク質がワクチン抗原としてすでに提唱されており、一般に推奨されているワクチン接種法は、抗原を胃粘膜のレベルで、すなわちまさに免疫応答が所望される部位で送達することを含む。それゆえ、このために、経口投与が選択された。同じ目的（胃のレベルでの免疫応答の誘発）で、例えば鼻粘膜または直腸粘膜のような胃粘膜以外の粘膜部位で抗原を送達することが最近提唱されている（ＷＯ９６／３１２３５）。いわゆるインデューサー粘膜領域において抗原によって刺激されたリンパ球は、選択的に、他のいわゆるエフェクター粘膜領域に行って、免疫応答を誘発するように移動および循環することができる。この方法の改変は、鼻内経路によって抗原を投与する前に、全身経路による第１の免疫を実施することを含む。粘膜経路による投与のために、抗原（たいていは、細菌溶解物または精製タンパク質）を、コレラ毒素（ＣＴ）またはイー・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来の易熱毒（ＬＴ）のような適切なアジュバントと組み合わせる。粘膜経路による投与を使用する場合、観察される体液性応答は主にＩｇＡ型である。これは実際、局所的免疫応答が存在していることを示す。何人かの著者らは、非常に初期に、ＩｇＡ型の強い応答と防御効果との間に良好な相関があると考えた（Ｃｚｉｎｎら，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９３）１１：６３７）。他者はより控えめの意見を提出した（Ｂｏｇｓｔｅｄｔら，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９６）１０５：２０２）。現在までにこの主題に関して真の確実性は存在していないが、それにもかかわらず、特にＩｇＡ型の抗体誘発が大部分の著者らにとって所望されているようである。一般に、ＩｇＡの出現は、２型ヘルパーＴリンパ球の側での応答（Ｔｈ２応答）の開始の指標である。実際、特定の抗原によるヘルパーＴリンパ球の刺激によって、異なるサイトカイン合成プロフィールによって特徴付けられるヘルパーＴ細胞の種々の亜集団を得ることが可能になる。Ｔｈ１細胞は特に、選択的にインターロイキン−２（ＩＬ−２）およびインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を産生し、一方Ｔｈ２細胞はむしろＩＬ−４、− ５および−１０を分泌する。差別的なサイトカイン産生のために、これら２つの型のヘルパーＴ細胞は異なる役割を有する：Ｔｈ１細胞は細胞媒介性免疫、とりわけ炎症型応答を促進し、一方Ｔｈ２細胞はＩｇＡ、ＩｇＥおよび特定のＩｇＧサブクラス型の体液性応答を刺激する。マウスＴｈ１細胞によって産生されるサイトカインが抗体応答を刺激できること、および特に、ＩＦＮ−γがＩｇＧ２ａ応答を誘発することも知られている。従って、先行技術における種々の研究から、ＩｇＡの出現によって特徴付けられるＴｈ２応答の誘発が、防御効果を得るために、十分ではないにせよ、必要であるという考えが浮かぶ。驚くべきことに、Ｔｈ２応答は、たとえ損害を与えなくても、高いＴｈ１応答を誘発するためにも必要であることが現在見出されている。実際、実験データによって、防御効果が、Ｔｈ２応答よりもＴｈ１応答と容易に相関され得ることが現在実証されている。それゆえ、最初の目的に反して（Ｄ’Ｅｌｉｏｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９７）１５８：９６２）、本出願は、それなしでは防御効果が観察され得ない、免疫時における炎症型Ｔｈ１応答の誘発の重要性を明らかにする。多数の要因（例えば、アジュバントの型のような）を調整することによってヘリコバクターに対するＴｈ１応答を誘発することが可能である。特定のアジュバントを使用することによって、細菌毒素のようなアジュバントおよび粘膜経路を使用した場合に観察されるのと同様なまたはそれより高いレベルの防御を得ることができることが実際実証されている。従って、本発明の主題は下記のとおりである：（ａ）ヘリコバクター由来の免疫原性物質およびヘリコバクターに対する１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）型免疫応答の誘発を促進可能な化合物の、ヘリコバクター感染を防止または処置するための、全身経路によって投与することが意図される医薬品の製造における共同使用。（ｂ）ヘリコバクター由来の免疫原性物質ならびに：（ｉ）キラジャ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａ）の抽出物から精製されたサポニン；（ｉｉ）カチオン性脂質またはその塩であって；該脂質はプロテインキナーゼＣの弱いインヒビターであり、コレステロール由来の親油基、カルボキシアミドおよびカルバモイルから選択される結合基、１〜２０個の炭素原子の分岐または非分岐直鎖状アルキル鎖からなるスペーサーアーム、ならびに第１級、第２級、第３級および第４級アミンから選択されるカチオン性アミン基を含む構造を有しており、組成物がサポニンまたは式（Ｉ）で表されるグリコリポペプチドを含有しない場合、この脂質はリポソームの形態では提供されないカチオン性脂質またはその塩；ならびに（ｉｉｉ）式（Ｉ）：［式中、Ｒ¹は、飽和または１回もしくは数回不飽和の、１〜５０個の炭素原子、好ましくは１〜２０個の炭素原子を含有するアルキル残基を表し、Ｘは、−ＣＨ₂−、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒ²は、水素原子または飽和または１回もしくは数回不飽和の、１〜５０個の炭素原子、好ましくは１〜２０個の炭素原子を含有するアルキル残基を表し、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、各々互いに独立して、水素原子またはアシル−ＣＯ−Ｒ⁶ 残基｛式中、Ｒ⁶は、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル残基を表す｝を表し、Ｒ⁷は、水素原子、Ｃ₁−Ｃ₇アルキル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、メルカプトメチル、２−（メチルチオ）エチル、３−アミノプロピル、３− ウレイドプロピル、３−グアニジルプロピル、４−アミノブチル、カルボキシメチル、カルバモイルメチル、２−カルボキシエチル、２−カルバモイルエチル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、３−インドリルメチルまたは４−イミダゾリルメチル基を表し、Ｒ⁸は、水素原子またはメチル基を表し、Ｒ⁹は、水素原子、アセチル、ベンゾイル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、メトキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニル基を表し、Ｒ⁷およびＲ⁸は、一緒にされる場合、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基を表してもよい］で表されるグリコリポペプチド、から選択される少なくとも１つの（ヘリコバクターに対する１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）型免疫応答の誘発を促進可能な）化合物を含有する医薬組成物。（ｃ）ヘリコバクター由来の免疫原性物質および上記化合物（ｉ）〜（ｉｉｉ）から選択される少なくとも１つの化合物の、ヘリコバクターに対する１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）型免疫応答を誘発可能な医薬組成物の製造における使用。（ｄ）哺乳動物に、全身経路によって、１回以上の適用で、少なくとも１つの、微生物由来の（例えば、ヘリコバクター由来の）免疫原性物質、および、少なくとも１つの、例えば、ヘリコバクターに対する１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）型免疫応答の誘発を促進可能な化合物を含有する組成物が投与される、哺乳動物の胃十二指腸粘膜に感染可能な微生物によって促進される感染（例えば、ヘリコバクター感染）の防止または処置方法。（ｅ）哺乳動物に、１回以上の適用で、少なくとも１つの、微生物由来の（例えば、ヘリコバクター由来の）免疫原性物質、および上記化合物（ｉ）〜（ｉｉｉ）から選択され、それによって、例えば、ヘリコバクターに対してＴｈ１型免疫応答が誘発される少なくとも１つの化合物を含有する組成物が投与される、哺乳動物の胃十二指腸粘膜に感染可能な微生物によって促進される感染（例えば、ヘリコバクター感染）の防止または処置方法。有用なＴｈ１応答の誘発を、本発明の目的のために、Ｔｈ２応答に比較してのＴｈ１応答の相対的レベルを評価することによって、例えば、ヘリコバクターに対してマウスにおいて誘発されるＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１のレベル（これらはそれぞれ、Ｔｈ１およびＴｈ２応答の開始の指標である）を比較することによって、実証することができる。実際、目的とするＴｈ１応答は、一般に、Ｔｈ２応答に伴われる。しかし、Ｔｈ２応答はＴｈ１応答に比較して、顕著に優勢であるべきではないと考えられる。マウスにおいて誘発されるＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１のレベルを、各々の２つのサブアイソタイプに使用される試験が同じ感度であれば、特に、抗ＩｇＧ２ａおよび抗ＩｇＧ１抗体が同じ親和性であれば、ＥＬＩＳＡ試験を使用して常法により評価することができる。ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１の量を、特に、下記と同一または類似のＥＬＩＳＡ試験を使用して測定してもよい。ポリカーボネートＥＬＩＳＡプレートのウェルを、炭酸緩衝液中約１０μｍ／ｍｌのヘリコバクター（例えば、エイチ・ピロリ）由来の細菌抽出物１００μｌでコートする。ＥＬＩＳＡプレートを２時間３７ ℃で、次いで一晩４℃でインキュベートする。プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ緩衝液（リン酸緩衝化生理食塩水）（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液）で洗浄する。抗体の非特異的結合を防止するために、ウェルを１％ウシ血清アルブミンを含有するＰＢＳ２５０μｌで飽和させる。１時間３７℃ でインキュベートした後、プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液で洗浄する。ヘリコバクターに対するＴｈ１型免疫応答を誘発するように意図される組成物を与えた数日後にマウスから採集した抗血清を、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液中で段階希釈する。１００μｌの希釈物をウェルに添加する。プレートを９０分間３７℃ でインキュベートし、洗浄し、標準的手順に従って評価する。例えば、ペルオキシダーゼのような酵素に結合したマウスＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ１に対するヤギ抗体を使用する。この抗体の存在下でのインキュベーションを９０分間３７℃で継続する。プレートを洗浄し、次いで反応物を適切な基質（例えば、使用する酵素がペルオキシダーゼである場合はＯ−フェニルジアミンジヒドロクロリド）を用いて発色させる。反応を比色定量によって（分光測定法によって吸光度を測定することによって）評価する。抗血清のＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ１力価は、４９０ｎｍにおける吸光度１．５を与える希釈の逆数に相当する。本発明の目的に有用なＴｈ１応答の誘発は、マウスにおけるＥＬＩＳＡＩｇＧ２ａ：ＩｇＧ１力価の比によって示され、これは１／１００、１／５０または１／２０より大きく、有利には１／１０より大きく、好ましくは１／３より大きく、最も好ましくは１／２、５または１０より大きくあるべきである。この比がほぼ１である場合、Ｔｈ１／Ｔｈ２応答は混合または均衡であるという。比が５以上の場合、Ｔｈ１応答は優勢であるという。マウスにおけるＴｈ１（またはＴｈ２）応答の生成は、ヒトにおけるＴｈ１（またはＴｈ２）応答の予測となる。マウスにおいて応答の型を評価することはより容易であるが、一方でＴｈ１応答に特異的なサイトカインのレベルを測定し、他方でその後に誘発されるＴｈ２応答に特異的なサイトカインのレベルを測定することによって、ヒトにおいても実施することができる。Ｔｈ１およびＴｈ２応答を、２つの型の応答に特異的なサイトカイン（上記参照）のレベルに基づいて、例えば、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比に基づいて、互いに比較してヒトにおいて直接的に評価することができる。あるいは、上記のアッセイ法を使用する場合、ＩｇＧ２ａの量を反映するＥＬＩＳＡ力価が１０，０００以上、好ましくは１００，０００以上、特に好ましくは１，０００，０００以上であるべきであると予測することが可能である；これはＴｈ１応答が顕著であることを意味する。医薬組成物または方法が意図される哺乳動物は有利には霊長類であり、好ましくはヒトである。本発明の目的に有用なサポニンは、特に米国特許第５，０５７，５４０号に、その構造に関してではなく、キラジャ・サポナリア・モリナ（ＱｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａＭｏｌｉｎａ）樹皮の水性抽出物の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）およびシリカの低圧クロマトグラフィーによる分画後に存在する画分に関して記載されている。特に、画分ＱＡ−７、ＱＡ−１７、ＱＡ−１８およびＱＡ−２１（ＱＳ−２１とも呼ばれる）に言及し得る。その使用は特に有利である。ＱＳ−２１は、優勢にＴｈ１型の免疫応答の誘発を促進するアジュバントであることが知られている。従って、このアジュバントは、Ｔｈ１型であるという。本発明の目的に有用なカチオン性脂質は、特に米国特許第５，２８３，１８５号に記載されている。例として、コレステリル−３β−カルボキシルアミドエチレントリメチルアンモニウムヨーダイド、１−ジメチルアミノ−３−トリメチルアンモニオ−ＤＬ−２−プロピルコレステリルカルボキシレートヨーダイド、コレステリル−３β−カルボキシアミドエチレンアミンヨーダイド、コレステリル −３β−オキシスクシンアミドエチレントリメチルアンモニウムヨーダイド、１ −ジメチルアミノ−３−トリメチルアンモニオ−ＤＬ−２−プロピルコレステリル−３β−オキシスクシネートヨーダイド、２−［（２−トリメチルアンモニオ）エチルメチルアミノ］エチルコレステリル−３β−オキシスクシネートヨーダイド、３β−［Ｎ−（ポリエチレンイミン）カルバモイル］コレステロールおよび３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−ｃｈｏｌ）またはその塩に言及し得る。ＤＣ−ｃｈｏｌ（またはその塩形態）はＴｈ１／Ｔｈ２型混合均衡応答の誘発を促進するアジュバントであることが知られている。従って、このアジュバントはＴｈ１／Ｔｈ２またはＴｈ１＋Ｔｈ２型であるという。これらのカチオン性脂質は分散して使用してもよく、あるいはリポソームの形態で製造してもよい。リポソームは、米国特許第５，２８３，１８５号に記載のように、カチオン性脂質を中性リン脂質（例えば、ホスファチジルコリンまたはホスファチジルエタノールアミン）と組み合わせることによって製造してもよい。本発明の目的に有用なグリコリポペプチドは、特に米国特許第４，８５５，２８３号およびＥＰ２０６，０３７に記載されている。それらは特に、一般式（Ｉ）［式中、糖残基は２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコースまたは２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトース残基である］で表される糖脂質である。アミノ糖の２−アミノ基は、Ｄ型またはＬ型のグリシン、サルコシン、馬尿酸、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、オルニチン、シトルリン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、プロリン、トリプトファンまたはヒスチジンに、Ｄ型またはＬ型のα−アミノ酪酸、α−アミノ吉草酸、α−アミノカプロン酸またはα−アミノヘプタン酸のようなアミノカルボン酸で結合されてもよい。より詳細には、以下のグリコリポペプチドに言及し得る：Ｎ−（２−グリシンアミド−２−デオキシ−β−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−ドデシルドデカノイルアミド、Ｎ−（２−グリシンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ− ドデシルアクタデカノイルアミド、Ｎ−（２−グリシンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ− テトラデシルドデカノイルアミド、Ｎ−（２−Ｌ−アラニンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）− Ｎ−ドデシルドデカノイルアミド、Ｎ−（２−Ｄ−アラニンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）− Ｎ−ドデシルオクタデカノイルアミド、Ｎ−（２−Ｌ−フェニルアラニンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−ドデシルオクタデカノイルアミド、Ｎ−（２−Ｌ−バリンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ −オクタデシルドデカノイルアミド、Ｎ−（２−Ｌ−バリンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ −オクタデシルテトラデカノイルアミド、Ｎ−（２−Ｌ−ロイシンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）− Ｎ−ドデシルドデカノイルアミド、Ｎ−（２−Ｌ−ロイシンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）− Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド（ＢａｙＲ１００５）、およびＮ−（２−サルコシンアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ −オクタデシルドデカノイルアミド。本発明による組成物は、１つ以上の上記化合物を含有してもよい。有利な実施態様によれば、２つの化合物を使用する：（ａ）一方はキラジャ・サポナリアの抽出物から精製されたサポニンから選択され、（ｂ）他方は（１）カチオン性脂質またはその塩であって、該脂質はプロテインキナーゼＣの弱いインヒビターであり、コレステロール由来の親油基、カルボキシアミドおよびカルバモイルから選択される結合基、１〜２０個の炭素原子の分岐または非分岐直鎖状アルキル鎖からなるスペーサーアーム、ならびに第１級、第２級、第３級および第４級アミンから選択されるカチオン性アミン基を含む構造を有しているカチオン性脂質またはその塩、または（ｉｉ）式（Ｉ）で表されるグリコリポペプチドから選択される。例として、混合物ＱＳ２１＋ＤＣ−ＣｈｏｌおよびＱＳ−２１＋ＢａｙＲ１００５に言及し得る。他のＴｈ１型免疫応答を促進可能なアジュバント（すなわち、Ｔｈ１またはＴｈ１／Ｔｈ２型アジュバント）は当該分野の技術水準に存在し、当業者はその必要性に最も対応するものを選択することができる。案内として、特に、リポソーム；ＩＳＣＯＭ；ミクロスフェア；タンパク質コクリエート（chochleate）；非イオン性界面活性剤からなる小胞；水中カチオン性両親媒性分散物；油／水乳濁液；ムラミジルジペプチド（ＭＤＰ）ならびにグルコシルムラミジルジペプチド（ＧＭＤＰ）、トレオニル−ＭＤＰ、ムラメチドおよびムラパルミチンのようなその誘導体；ならびに細菌（例えば、イー・コリ、サルモネラ・ミネソタ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｍｉｎｎｅｓｏｔａ）、サルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）またはシゲラ・フレクスネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉ））の壁由来のモノホスホリルーリピドＡ（ＭＰＬＡ）主要リポ多糖；アルガン−グルカン；γ−イヌリン；カルシトリオールおよびロクソリビンのような種々の他の化合物に言及し得る。本発明の目的に有用なリポソームは、特に、コレステロールヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）およびジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を混合することによって形成されるようなｐＨ感受性リポソーム；米国特許第５，２８３，１８５号およびＷＯ９６／１４８３１に記載の３−β−（Ｎ−（Ｎ ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−ｃｈｏｌ）およびその誘導体、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、ＥＰ９１６４５およびＥＰ２０６０３７に記載のＢＡＹ化合物（例えば、ＢａｙＲ１００５（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ− β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミドアセテート））のようなその融合体形成性（fusiogenic）特性が認識されるカチオン性脂質を含有するリボソーム；ならびにＭＤＰ（ムラミジルジペプチド）の親油性誘導体であるＭＴＰ−ＰＥを含有するリポソームから選択してもよい。これらのリポソームは、全ての記載する免疫原性物質にアジュバントとして添加するために有用である。本発明の目的に有用なＩＳＣＯＭは、特に、コレステロールと、そして所望によりホスファチジルコリンのようなリン脂質とも組み合わせたＱｕｉｌＡまたはＱＳ−２１の化合物から選択してもよい。これらは特に脂質含有抗原の処方に有利である。本発明の目的に有用なミクロスフェアは、特に、ポリラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＡＧＡ）、アルギネート、キトサン、ポリホスファゼンおよび多数のその他のポリマーのような化合物から形成してもよい。本発明の目的に有用なタンパク質コクリエートは、特に、コレステロールおよび所望によりさらにホスファチジルコリンのようなリン脂質から形成されるものから選択してもよい。これらは特に脂質含有抗原の処方に有利である。本発明の目的に有用な非イオン性界面活性剤からなる小胞は、特に、１−モノパルミトイルグリセロール、コレステロールおよびジセチルホスフェートの混合物によって形成してもよい。これらは従来のリポソームの代替物であり、全ての記載する免疫原性物質の処方に使用してもよい。本発明の目的に有用な油／水乳濁液は、特に、ＭＦ５９（Ｂｉｏｃｉｎｅ−Ｃｈｉｒｏｎ）、ＳＡＦ１（Ｓｙｎｔｅｘ）ならびにモンタニドＩＳＡ５１およびＩＳＡ７２０（Ｓｅｐｐｉｃ）から選択してもよい。ヘリコバクター由来の免疫原性物質は、不活化ヘリコバクター細菌の調製物、ヘリコバクター細胞溶解物、精製形態のヘリコバクター由来ペプチドおよびポリペプチドから有利に選択される。本発明の目的のために、不活化細菌の調製物を、当業者に周知の常法に従って得てもよい。細菌溶解物も同様である。当業者は、予防または治療目的に適切な不活化細菌または細胞溶解物の用量を決定することができ、この用量は、当業者が決定することができるような、ワクチンが意図される個体（例えば、年齢）、抗原自体、投与の経路および様式、アジュバントの有無または型のような多数の要因に依存する。一般に、適切な用量は約５０μｇ〜１ｍｇ〜約１ｍｇの溶解物であることが示されている。ヘリコバクター由来のペプチドまたはポリペプチドを、ヘリコバクターから精製してもよく、遺伝子工学技術または化学合成によって得てもよい。後者の方法はペプチドの場合に有利である。「ペプチド」は、その大きさが約５０アミノ酸より小さいいずれかのアミノ酸鎖である。大きさがより大きい場合、用語「ポリペプチド」を使用し、この用語は、用語「タンパク質」とも交換可能である。本発明の目的に有用なペプチドまたはポリペプチドは、天然条件下で存在するペプチドまたはポリペプチドと同一または類似であってもよい。ペプチドまたはポリペプチドは、同じ型の免疫応答を誘発可能であるという点では類似しているが、例えば変異、脂質特性の残基の付加のような特定の構造的変化を含んでもよく、あるいは融合ポリペプチドまたはペプチド形態であってもよい。当業者は、予防または治療目的に適切なペプチドまたはポリペプチドの用量を決定することができ、この用量は、当業者が決定することができるような、ワクチンが意図される個体（例えば、年齢）、抗原自体、投与の経路および様式、アジュバントの有無または型のような多数の要因に依存する。一般に、適切な用量は約１０μｇ〜約１ｍｇ、好ましくは約１００μｇであることが示されている。ヘリコバクター由来の免疫原物質は、ヘリコバクター（例えば、エイチ・ピロリ）由来のいずれかのポリペプチドであってもよい。これは特に、細胞質中に存在するポリペプチド、内膜もしくは外膜のポリペプチド、または外部培地中に分泌されるポリペプチドであってもよい。クローン化されたかもしくは同定された対応する遺伝子の配列から推定されたアミノ酸配列に関してか、または天然環境のその他のものから単離された形態で得ることを可能にする精製方法に関してのいずれかで、ヘリコバクター由来の多数のポリペプチドがすでに文献に記載されている。案内として、以下の文献に特に言及し得る：ＷＯ９４／２６９０１およびＷＯ９６／３４６２４（ＨｓｐＡ）、ＷＯ９４／０９０２３（ＣａｇＡ）、ＷＯ９６／３８４７５（ＨｐａＡ）、ＷＯ９３／１８１１５０（サイトトキシン）、ＷＯ９５／２７５０６およびＨａｚｅｌｌら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（１９９１）１３７：５７（カタラーゼ）、ＦＲ２７２４９３６（ヒトラクトフェリンの膜受容体）、ＷＯ９６／４１８８０（ＡｌｐＡ）、ＥＰ７５２４７３（ＦｉｂＡ）ならびにＯ’Ｔｏｏｌｅら，Ｊ．Ｂａｃｔ．（１９９１）１７３：５０５（ＴｓａＡ）。他のポリペプチドも、ＷＯ９６／４０８９３、ＷＯ９６／３３２７４、ＷＯ９６／２５４３０およびＷＯ９６／３３２２０に記載されている。本発明の目的に有用なポリペプチドは、それがヘリコバクターに対する免疫応答を促進可能であれば、参考として引用するものの１つと同一または類似していてもよい。この最後の条件に合致させるために、免疫原性物質は、参考に引用するポリペプチドから誘導されるペプチドであってもよい。有利には、ヘリコバクターウレアーゼのＵｒｅＡおよびＵｒｅＢサブユニットから選択されるポリペプチドを使用する（ＷＯ９０／４０３０参照）。好ましくは、両方を、ウレアーゼアポ酵素形態で組み合わせて、あるいは多量体形態で使用する（ＷＯ９６／３３７３２参照）。本発明の目的に有用な医薬組成物は、単一またはいくつかの免疫原性物質を含んでもよい。例えば、有利な組成物は、ＵｒｅＡおよびＵｒｅＢ（例えばアポ酵素形態の）ならびに１つ以上の、特に上記のものから選択される他のポリペプチドを含有してもよい。本発明の目的に有用な医薬組成物は、さらに、免疫原性物質自体およびＴｈ１またｈＴｈ１／Ｔｈ２型アジュバント以外の化合物を含有してもよく、これらの化合物の性質はある程度、免疫原性物質、不活化細菌、細胞溶解物、ペプチドまたはポリペプチドの性質に依存する。例えば、組成物は、Ｔｈ２型免疫応答の誘発を促進可能なアジュバント（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムまたはアルミニウムヒドロキシホスフェートのようなアルミニウム化合物）を含有してもよい。これは、本発明の目的に有用なアジュバントがＱＳ−２１のようなＴｈ１型アジュバントである限り有利であり得る。本発明による方法または使用の治療または予防効力を、標準的方法に従って、例えば、Ｌｅｅら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ＆Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９５）７：３０３またはＬｅｅら，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．（１９９５）１７２：１６１に記載のマウス／エイチ・フェリスモデルおよび手順を使用して、免疫応答の誘発または治療もしくは防御免疫の誘発を測定することによって評価してもよい。当業者は、エイチ・フェリスをマウスモデルにおいて別のヘリコバクター種に置き換えることができることを認識する。例えば、エイチ・ピロリ由来の免疫原性物質の効力を、好ましくは、マウスに適合させたエイチ・ピロリ株を使用するマウスモデルにおいて評価する。効力は、胃組織における感染のレベルを対照群におけるレベルと（ウレアーゼ活性、細菌負荷または胃炎の状態を測定することによって）比較することによって決定してもよい。治療効果または予防効果は、感染が対照群に比較して低減される場合に存在する。本発明の目的に有用な医薬組成物は、常法で製造してもよい。特に、医薬上許容される担体または希釈剤（例えば、水または生理食塩水溶液）とともに処方してもよい。一般に、希釈剤または担体を、投与の様式および経路ならびに標準的な医薬の慣例に従って選択してもよい。適切な担体または希釈剤ならびに医薬組成物の製造に必要なものは、この分野の標準的な参考文献であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。本発明による方法ならびにこの目的に有用な組成物を、とりわけ、ヘリコバクター感染およびその結果この感染に関連する胃十二指腸疾患（急性、慢性もしくは萎縮性胃炎、消化性潰瘍（例えば、胃または十二指腸潰瘍）を含む）を処置または防止するために使用してもよい。本発明による医薬組成物を常法で、特に粘膜経路によって（例えば、眼、経口（例えば、頬もしくは胃）、肺、腸、直腸、膣または泌尿経路によって）または全身（特に、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、表皮内および皮下））経路によって投与してもよい。好ましくは、非経口経路を使用する。非経口経路を使用する場合、好ましくは、個体の横隔膜下に位置する投与部位を選択する。例えば、腰背領域は、特に表皮内、筋肉内、皮内および皮下経路に適切な投与部位を構成し、静脈内経路よりむしろこれらの経路が選択される。防御または治療効果を得るために、本発明の目的に有用な医薬組成物を投与することを含む操作を１回または数回、好ましくは少なくとも２回、各投与の間に特定の間隔（この間隔は、週または月の単位である）をおいて反復してもよい。その正確な決定は当業者の能力の範囲内であり、免疫原性物質の性質、個体の年齢などのような種々の要因に従って変動し得る。特定の態様によれば、ワクチン接種手順を第１の免疫および追加免疫の間の投与経路と同じ投与経路を使用して実施する。この特定の場合、投与は、例えば、厳密な全身型であるという。「免疫原性物質の投与が厳密な全身経路によって実施される方法」は、全身経路以外の投与経路を使用しない方法として定義される。例えば、免疫原性物質が全身経路および粘膜経路によって投与される方法は、上記の定義に相当しない。換言すると、「免疫原性物質の投与が厳密な全身経路によって実施される方法」は、免疫原性物質がいずれの他の経路（特に粘膜経路）も含まないで全身経路によって投与される方法を意味すると理解するべきである。非限定的例示として、ウレアーゼアポ酵素をＱＳ−２１、ＤＣ−ｃｈｏｌまたはその等価物の１つと組み合わせて、３回皮下経路で、腰背領域で、各投与間の２〜４週間の間隔で投与することを含むワクチン接種スキームに言及し得る。本発明による医薬組成物の投与が、より念入りなワクチン接種手順の一部を形成する１つの工程であってもよいと予測することも可能である。例えば、本発明による医薬組成物の前または後に、上記のものから独立して選択されたヘリコバクター由来か、またはとりわけワクチンベクターもしくはＤＮＡ分子のような免疫原性物質を含有するが、ＱＳ−２１、ＤＣ−ｃｈｏｌもしくはその等価物の１つを含有しない医薬組成物を投与してもよい。後者を完全に異なるアジュバントに置き換えることが可能であり、２つの組成物を同一のまたは異なる経路によって投与することが可能である。非限定的な例示として、下記の手順に言及し得る。 − 全身経路による、ＱＳ−２１の存在下でのウレアーゼアポ酵素での第１の免疫、続いて、粘膜経路による、ＱＳ−２１またはＬＴの存在下でのウレアーゼアポ酵素での２回の追加免疫。 − 全身経路による、ＵｒｅＡおよびＵｒｅＢをコードするポックスウイルスでの第１の免疫、続いて、全身または粘膜経路による、ＱＳ−２１の存在下でのウレアーゼアポ酵素での２回の追加免疫。上記以外の、本発明の目的に有用な医薬品または本発明による組成物を使用する投与工程を含む多工程ワクチン接種手順において使用できる免疫原性物質は、ポリヌクレオチド分子、特に、哺乳動物細胞における発現に必要なエレメントの制御下に配置されたヘリコバクター由来のペプチドまたはポリペプチドをコードする配列を含むＤＮＡ分子；あるいは哺乳動物細胞（ウイルスベクターの場合）または原核生物（細菌ベクターの場合）における発現に必要なエレメントの制御下に配置されたヘリコバクター由来のペプチドまたはポリペプチドをコードする配列を含むワクチンベクターから選択してもよい。ＤＮＡ分子は有利には、複製および哺乳動物のゲノム中への実質的な組込みの両方ができないプラスミドであってもよい。上記のコード配列を、哺乳動物細胞における発現を可能にするプロモーターの制御下に配置する。このプロモーターは偏在性であってもよく、組織に特異的であってもよい。偏在性プロモーターの中で、サイトメガロウイルス初期プロモーター（米国特許第４，１６８，０６２号に記載）およびラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＮｏｒｔｏｎおよびＣｏｆｆｉｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８５）５：２８１に記載）に言及し得る。選択的プロモーターであるデスミンプロモーター（Ｌｉら，Ｇｅｎｅ（１９８９）７８：２４４４４３；ＬｉおよびＰａｕｌｉｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９３）２６８：１０４０３）は筋肉細胞および皮膚細胞における発現を可能にする。筋肉細胞に特異的なプロモーターは、例えば、ミオシンまたはジストロフィン遺伝子のプロモーターである。本発明の目的に使用できるプラスミドベクターは、とりわけ、ＷＯ９４／２１７９７およびＨａｒｔｉｋｋａら，ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ（１９９６）７：１２０５に記載されている。本発明の目的に有用な医薬組成物中に、ヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子）を処方などしてもよい。処方の選択は非常に変動する。ＤＮＡを単に、担体とともにまたは担体なしで、生理学的に許容される溶液中に希釈してもよい。担体が存在する場合、等張性または弱く高張性であってもよく、低イオン強度を有してもよい。例えば、この条件をスクロース溶液（例えば、２０％）によって満たしてもよい。あるいは、ポリヌクレオチドを、細胞中への侵入を促進する薬剤と組み合わせてもよい。これは（ｉ）ブピバカイン（例えば、ＷＯ９４／１６７３７参照）のような細胞透過性を改変する化学的薬剤または（ｉｉ）ポリヌクレオチドと組み合わされ、ポリヌクレオチドの輸送を容易にするビヒクルとして作用する薬剤であってもよい。後者は特に、カチオン性ポリマー、例えば、ポリリジンまたはポリアミン、例えば、スペルミンの誘導体であってもよい（ＷＯ９３／１８７５９参照）。これはまた、融合体形成性（fusogenic）ペプチド（例えば、ＧＡＬＡまたはグラミシジンＳ（ＷＯ９３／１９７６８参照））あるいはウイルス融合タンパク質由来のペプチドであってもよい。これは、アニオン性またはカチオン性脂質であってもよい。アニオン性または中性脂質は、長い間、ポリヌクレオチドを含む多数の化合物のための輸送剤として（例えば、リポソームの形態で）作用できることが知られていた。これらのリポソーム、その成分および製造方法の詳細な記載は、例えばＬｉｐｏｓｏｍｅ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＲＰＣＮｅｗＥｄ．，ＩＲＬｐｒｅｓｓ（１９９０）によって提供される。カチオン性脂質も公知であり、ポリヌクレオチドのための輸送剤として一般的に使用されている。例えば、ＤＯＴＭＡ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド）の名称によつても知られるＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ^TM、ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン）、ＤＤＡＢ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン）およびＤＣ−ｃｈｏｌ（３−β−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル）コレステロール）のようなコレステロール誘導体に言及し得る。これらの脂質の記載は、ＥＰ１８７，７０２、ＷＯ９０／１１０９２、米国特許第５，２８３，１８５号、ＷＯ９１／１５５０１、ＷＯ９５／２６３５６および米国特許第５，５２７，９２８号によって提供される。カチオン性脂質は、好ましくは、例えば、ＷＯ９０／１１０９２に記載のように、ＤＯＰＥ（ジオレイルホスファチジルエタノールアミン）のような中性脂質とともに使用される。ＷＯ９１／３５９、ＷＯ９３／１７７０６およびＴａｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ（１９９２）３５６：１５２に記載のように、金またはタングステン微粒子を輸送剤として使用してもよい。この特定の場合、ポリヌクレオチドを微粒子上に塩化カルシウムおよびスペルミジンの存在下で沈殿させ、次いで全体を、米国特許第４，９４５，０５０号および同第５，０１５，５８０号ならびにＷＯ９４／２４２４３に記載のような針なしの装置を使用して皮膚または表皮中に高速ジェットによって投与する。個体をワクチン接種するために使用し得るＤＮＡの量は、例えば、抗原を発現させるために使用するプロモーターの強さ、発現させる産物の免疫原性、投与が意図される哺乳動物の状態（例えば、体重、年齢および一般的健康状態）、投与の様式ならびに処方の型のような多数の要因に依存する。一般に、ヒト種の成体における予防的または治療的使用に適切な用量は約１μｇ〜約５ｍｇ、好ましくは約１０μｇ〜約１ｍｇ、最も好ましくは約２５μｇ〜約５００μｇである。ワクチンベクターは上記の免疫原性物質に入る。特にアデノウイルスおよびポックスウイルスは、ウイルス起源のベクターに入る。アデノウイルス由来のベクターの例および本発明の目的に有用なペプチドまたはポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を発現できるベクターの構築方法は、米国特許第４，９２０，２０９号に記載されている。同様に使用し得るポックスウイルスは、例えば、ワクシニアウイルスおよびカナリアポックスウイルスである。これらはそれぞれ米国特許第４，７２２，８４８号および同第５，３６４，７７３号に記載されている（例えば、Ｔａｒｔａｇｌｉａら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９２）１８８：２１７およびＴａｙｌｏｒら，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９５）１３：５３９も参照のこと）。本発明の目的に有用なペプチドまたはポリペプチドを発現できるポックスウイルスは、ペプチドまたはポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントが哺乳動物細胞における発現に適切な条件下に置かれるように、Ｋｉｅｎｙら，Ｎａｔｕｒｅ（１９８４）３１２：１６３に記載のような相同組換えによって得てもよい。胆汁カルメット−ゲラン桿菌のような細菌ベクターを意図してもよい。一般に、予防または治療目的に意図されるウイルスベクターの用量は、１キログラムあたり約１×１０⁴〜約１×１０¹¹、有利には約１×１０⁷〜約１×１０¹⁰ 、好ましくは約１×１０⁷〜約１×１０⁹プラーク形成単位であってもよい。細菌ベクターの中で、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、ビブリオ・コレラエ（Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ）、ラクトバスラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）およびストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）に言及し得る。生ワクチンとして有用であり得るビブリオ・コレラエの非毒性変異株は、Ｍｅｋａｌａｎｏｓら，Ｎａｔｕｒｅ（１９８３）３０６：５５１および米国特許第４，８８２，２７８号（機能的な毒素が生産され得ないように２つの対立遺伝子ｃｔｘＡの各々をコードする領域の実質的部分が欠失されている株）；ＷＯ９２／１１３５４（ｉｇｒＡ遺伝子座が変異によって不活化されている株；この変異を同じ株中でｃｔｘＡ変異と組み合わせてもよい）；ならびにＷＯ９４／１５３３（機能的なｃｔｘＡおよびａｔｔＳ１配列を欠く欠失によって得られた変異体）に記載されている。ＷＯ９４／１９４８２に記載のように、異種抗原を発現させるために、これらの株を遺伝的に改変してもよい。異種抗原の組換え発現のために遺伝的に改変などされたサルモネラ・チフィムリウムの弱毒化株およびそのワクチンとしての使用は、Ｎａｋａｙａｍａら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８８）６：６９３およびＷＯ９２／１１３６１に記載されている。ワクチンベクターとして有用な他の細菌は、Ｈｉｇｈら，ＥＭＢＯ（１９９２）１１：１９９１およびＳｉｚｅｍｏｒｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９５）２７０：２９９（シゲラ・フレクスネリ）；Ｍｅｄａｇｌｉｎｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９５）９２：６８６８（ストレプチコッカス．ゴルダニ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｇｏｒｄｏｎｉｉ））；ならびにＦｌｙｎｎＪ．Ｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９４）４０（補遺Ｉ）：３１、ＷＯ８８／６６２６、ＷＯ９０／０５９４、ＷＯ９１／１３１５７、ＷＯ９２／１７９６およびＷＯ９２／２１３７６（カルメット−ゲラン桿菌）に記載されている。細菌ベクターにおいて、ヘリコバクター由来のペプチドまたはポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、細菌ゲノム中に挿入してもよく、あるいはプラスミドに保有されて遊離状態のままにしてもよい。同様に、ＤＮＡ分子またはワクチンベクターは、上記のいずれかのポリペプチドまたはペプチドをコードする配列を含んでもよい。ＤＮＡ分子（好ましくは、ウイルスワクチンベクター）は、哺乳動物細胞における発現に適切なエレメントの制御下の、サイトカイン（例えばインターロイキン−２または−１２のようなリンホカイン）をコードする配列を含んでもよい。このオプションの代替はまた、ＤＮＡ分子またはベクターを含有する本発明の目的に有用な医薬組成物へ、サイトカインをコードする別の分子またはウイルスベクターを添加することを含む。それゆえ、一般に、本発明の主題はまた、連続投与のために、：（ｉ）（ａ）不活化ヘリコバクター細菌の調製物、ヘリコバクター細胞溶解物、精製形態のヘリコバクター由来のペプチドおよびポリペプチドから独立して選択されるヘリコバクター由来の免疫性物質および（ｂ）Ｔｈ１型免疫応答の誘発を促進可能な化合物を含有する第１の製造物、ならびに（ｉｉ）不活化ヘリコバクター細菌の調製物、ヘリコバクター細胞溶解物、精製形態のヘリコバクター由来のペプチドおよびポリペプチド、発現に必要なエレメントの制御下に配置されたヘリコバクター由来のペプチドまたはポリペプチドをコードする配列を含むＤＮＡ分子、ならびに発現に必要なエレメントの制御下に配置されたヘリコバクター由来のペプチドまたはポリペプチドをコードする配列を含むワクチンベクターから独立して選択されるヘリコバクター由来の免疫性物質を含有する第２の製造物を含有するヘリコバクター感染を処置または防止するように意図される医薬組成物であり、好ましくは、第１の製造物がペプチドまたはポリペプチドを含有し、第２の製造物がＤＮＡ分子またはワクチンベクターを含有する場合、ＤＮＡ分子またはワクチンベクターのコード配列は、第１の製造物に含有されるペプチドまたはポリペプチドをコードする。上記の記載において、本質的にヘリコバクター感染およびその防止および予防による攻撃のための手段に言及した。しかし、上記の原理および方法を、必要な変更を加えて、その病巣が胃、十二指腸または腸であるいずれかの微生物によって誘発されるいずれかの他の感染に適用することができることを理解するべきである。さらに、刊行され本出願において引用したすべての文献を出典明示で援用することを明記する。以下、本発明を、以下の図面を参照して例示する。図１は、実施例１に関し、Ｄ０、Ｄ２８およびＤ５６に３回与えたマウスの屠殺の４時間後に測定した、チャレンジ後のウレアーゼ活性のレベルを示す：（ａ）腰背筋肉における、ＤＣ−ｃｈｏｌリポソーム中約８０％で被包されたウレアーゼ調製物；または（ｂ）胃内経路による、コレラ毒素アジュバントを有するウレアーゼ調製物。実験（ｃ）および（ｄ）は、それぞれ陽性対照および陰性対照に相当する。図２は、実施例１に関し、Ｄ０、Ｄ２８およびＤ５６に３回与えたマウスの屠殺の４時間後に測定した、チャレンジ後のウレアーゼ活性のレベルを示す：（ａ）胃内経路による、コレラ毒素アジュバントを有するウレアーゼ調製物または（ｂ）左後腰下部における皮下経路による、ＰＣＰＰアジュバントを有するウレアーゼ調製物；または（ｃ）下方背中における皮下経路による、ＱＳ−２１アジュバントを有するウレアーゼ調製物。実験（ｃ）および（ｄ）は、それぞれ陽性対照および陰性対照に相当する。図３は、実施例２に記載の免疫手順に供したサルにおいて誘発され、ＥＬＩＳＡ力価で表した血清免疫グロブリンの量を示す。４匹のサルを含む対照群および３つの試験群を形成し、試験群の各々は８匹のサルを含む；各試験群を４匹のサルの２つの小群に分割し、一方には不活化エイチ・ピロリ調製物のみを与え（１、２および３）他方には不活化エイチ・ピロリ調製物および組換えウレアーゼを与える（１ｕ、２ｕおよび３ｕ）。群１および１ｕは投与手順［鼻内＋胃内、４回］に対応し；群２および２ｕは投与手順［筋肉内、４回］に対応し；群１および１ｕは投与手順［鼻内＋胃内、筋肉内、鼻内＋胃内、筋肉内］に対応する。ＥＬＩＳＡ力価を３回測定する：Ｄ０に１回目（白棒）、Ｄ４２に２回目（斜線棒）、Ｄ７８に３回目（黒棒）。図４は、実施例３に記載の免疫手順に供したマウスにおいて誘発され、ＥＬＩＳＡ力価で表した血清免疫グロブリンの量を示す。○はＥＬＩＳＡＩｇＧ２ａ力価を示し、◆はＥＬＩＳＡＩｇＧ１力価を示す。２つの対照群（陽性対照および陰性対照）、４つの試験群（Ａ１〜Ａ４）ならびに参照群（ＬＴ）を形成し、各々の群は１０匹のマウスを含む。血清免疫グロブリンの量の測定を１０匹中５匹のマウスについてのみ実施した。Ａ１〜Ａ４群のマウスには、１０μｇ用量のウレアーゼを左後腰下部における皮下経路によって、ＱＳ−２１（Ａ１）、ＢａｙＲ１００５（Ａ２）、ＤＣ−ｃｈｏｌ（Ａ３）またはＰＣＰＰ（Ａ４）の存在下で与えた。参照群のマウスには４０μｇ用量のウレアーゼを経口経路によって、イー・コリ易熱タンパク質の存在下で与えた。図５は、胃粘膜のレベルで、ＯＤ₅₅₀で、実施例３に記載の免疫手順に供したマウスを屠殺した４時間後に測定したウレアーゼ活性のレベルを示す。群は図４において記載したとおりである。図６は、胃粘膜のレベルで、ＯＤ₅₅₀で、実施例３に記載の免疫手順に供したマウスを屠殺した２４時間後に測定したウレアーゼ活性のレベルを示す。群は図４において記載したとおりである。図７は、胃粘膜のレベルで、実施例３に記載の免疫手順に供したマウスを屠殺した後に測定した細菌負荷を示す。群は図４において記載したとおりである。図８Ａおよび８Ｂは、エイチ・ピロリに感染させ、次いで種々の処置Ａ〜Ｈ［Ａ：経口経路によるＬＴ＋ウレアーゼ；Ｂ：首における非経口経路によるＱＳ２１＋ウレアーゼ；Ｃ：腰領域における非経口経路によるＱＳ２１＋ウレアーゼ；Ｄ：腰領域における皮下経路によるＱＳ２１単独；Ｅ：首における非経口経路によるＢａｙＲ１００５＋ウレアーゼ；Ｆ：腰領域における非経口経路によるＢａｙＲ１００５＋ウレアーゼ；Ｇ：腰領域における皮下経路によるＢａｙＲ１００５単独（対照）；Ｈ：腰領域における皮下経路による生理食塩水溶液（陽性対照）］に供したマウスにおける、４時間後に（５５０ｎｍでのＯＤ）Ｊａｔｒｏｘ試験（Ｐｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ）を用いて評価したウレアーゼ活性（図６Ａ）および細菌負荷（図６Ｂ）を示す。Ｉは陰性対照を表す。実施例１：マウスにおける免疫研究１Ａ − 材料および方法マウス６／８週齢雌性ＳｗｉｓｓマウスをＪａｎｖｉｅｒ（Ｆｒａｎｃｅ）より得た。実験全体の間、滅菌材料を使用した；ケージを「イソキャップ（isocap）」によって保護した；マウスに濾過水および照射食物を与えた。投与手順各実験の間、マウスに３用量の同じ製造物を与えた；各用量を２８日間隔で（０、２８および５６日目）。製造物の投与を、鼻内経路（覚醒マウスに５０μｌまで）、経口経路（胃管強制栄養法により０．２ＭＮａＨＣＯ₃中３００μｌ）、または皮下経路（首の皮下または腰領域の左側の皮下３００μｌ）によって実施した。いくつかの場合、筋肉内接種を麻酔したマウスの腰背筋肉において実施した（５０μｌ）。１０μｇのウレアーゼを鼻内、皮下または筋肉内経路によって投与し、４０μｇを経口経路によって投与した。不活化細菌調製物に関しては、４００μｇの細胞を皮下経路または経口経路によって投与した。抗原およびアジュバントエイチ・ピロリウレアーゼアポ酵素を、ＷＯ９６／３１２３５の実施例５に記載のように、イー・コリにおいて発現させ、精製した。以下、本明細書において、単にウレアーゼという用語を使用して、このアポ酵素を示す。ウレアーゼを含有するＤＣ−ｃｈｏｌリポソームを以下のように製造する：まず、１００ｍｇのＤＣ−ｃｈｏｌ（Ｒ−ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）および１００ｍｇのＤＯＰＣ（ジオレイルホスファチジルコリン）（ＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ）を含有する乾燥脂質フィルムを得るために、これらの製造物を約５ｍｌのクロロホルム中で粉末形態で混合する。この溶液をロータリーエバポレーターを使用して真空下で蒸発させる。このようにして容器の壁上に得られたフィルムを高真空下で少なくとも４時間乾燥させる。平行して、２０ｍｇのウレアーゼ凍結乾燥物および１００ｍｇのスクロースを１３．３３ｍｌの２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．２）中で希釈する。この調製物１０ｍｌ（１．５ｍｇのウレアーゼおよび０．７５％スクロースを含有する）を０．２２０μｍＭｉｌｌｅｘフィルターで濾過し、次いでこれを使用して脂質フィルムを再水和する。懸濁物を４時間撹拌し、次いで押し出すか（０．２μｍポリカーボネート膜に１０回通過）、またはマイクロフルイダイザーに供する（ＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓＣｏＹ１０マイクロフルイダイザー中５００ｋＰａの圧力で１０回通過）。このようにして得られたリポソーム懸濁物において、被包されたウレアーゼのレベルは１０〜６０％である。この懸濁物を、スクロース濃度を５％に調整した後（１０ｍｌあたり４２５ｍｇのスクロースを添加する）凍結乾燥する。使用前に、凍結乾燥物を適切な容量の水または緩衝液中に取り出し、懸濁物をスクロースの非連続的勾配（０、３０および６０％の段階）で精製して、被包されたウレアーゼの量がウレアーゼの総量に比較して約７０％より多い調製物を得る。コレラ毒素を粘膜アジュバントとしてウレアーゼまたは細菌調製物の１用量あたり１０μｇの量で使用する。ＱＳ−２１（ＣａｍｂｉｄｇｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をアジュバントとしてウレアーゼの１用量あたり１５μｇの量で使用する。ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）（ＶｉｒｕｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）をアジュバントとしてウレアーゼの１用量あたり１００μｇの量で使用する。チャレンジ２回目の追加免疫の２週間後に、マウスを、マウスに適合されたエイチ・ピロリ株であるＯＲＶ２００２株の懸濁物（２００μｌのＰＢＳ中１×１０⁷の生菌；ＯＤ₅₅₀約０．５）３００μｌでの胃管強制栄養法に供した。抗原の用量を与えず、対照とする１つの群を同様にチャレンジする。チャレンジの分析チャレンジの４週間後、頚椎を折ることによってマウスを屠殺した。ウレアーゼ活性を評価し、組織学的分析をするために、胃を取り出した。ウレアーゼ活性を４時間後および２４時間後にＪａｔｒｏｘ試験（Ｐｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ）を用いて評価し（５５０ｎｍでのＯＤ）、２４時間後になお陰性（ＯＤ０．１未満）のマウスの数を記録した。ＥＬＩＳＰＯＴによる局所抗体応答の測定（唾液腺および胃）ＥＬＩＳＰＯＴをＭｅｇａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９２）１４８：２０３０に従って実施した。プレートを、５０μｇ／ｍｌの濃度のエイチ・ピロリタンパク質の抽出物でコートした。胃のレベルでの抗体応答を試験するために、本発明者らは、方法を以下のように改変した：胃の半分を、ヒト組織切断用自動装置（ＭｃＩｌｌｗａｉｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇｉｌｆｏｒｄ，ＵＫ）を用いて１ｍｍ²片に切断し、消化をＤｉｓｐａｓｅ（２ｍｇ／ｍｌ、ＢｏｅｒｉｎｇｈｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）を用いて、１０％ウマ血清（Ｇｉｂｃｏ）、グルタミンおよび抗生物質を添加した改変Ｊｏｋｌｉｌ溶液２ｍｌ中で実施した。４時間半の消化を３７℃で穏やかに混合しながら実施した。このようにして消化した細胞を各工程後７０μｍフィルター（Ｆａｌｃｏｎ）を使用して濾過し、次いで５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ）の溶液中で３回洗浄し、同じ溶液中で少なくとも４時間、ニトロセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で覆ったプレート中でインキュベートした（１００μｌ／ウェル、４ウェル）。半分の胃あたり１〜３×１０⁵の細胞が得られる（大きな細胞およびマクロファージは計数しなかった）。ビオチン化ＩｇＡおよびストレプトアビジン−ビオチン化ペルオキシダーゼ複合体をＡｍｅｒｓｈａｍから得た。スポットをＡＥＣ基質（Ｓｉｇｍａ）の作用で出現させ、プレートが乾燥するとすぐに、それらを顕微鏡下で計測した（倍率 ×１６または×４０）。４つのウェルにおけるＩｇＡスポットの数に相当する平均値を算出し、スポット／１０⁶細胞の数として表した。ＥＬＩＳＡによる応答の分析ＥＬＩＳＡによる分析を標準的手順に従って実施した（ビオチン化結合体およびストレプトアビジン−ペルオキシダーゼをＡｍｅｒｓｈａｍから得、ＯＰＤ（Ｏ−フェニルジアミンジヒドロクロリド）基質をＳｉｇｍａから得た）。プレートを炭酸緩衝液中のエイチ・ピロリ抽出物（５μｌ／ｍｌ）でコートした。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抽出物に対するマウス由来の対照血清を各実験において導入した。力価は、４９０ｎｍにおいてＯＤ１．５を与える希釈の逆数に相当する。１Ｂ − 結果結果を上記図１および２ならびに以下のコメントによって示す：図１および２の主題に関する全てのコメントの前に、これらの図が、コレラ毒素アジュバントとともに使用し、胃内経路によって投与した抗原を用いて得られた結果を示すことに留意するべきである。先行技術のＣＴ／ＩＧの組み合わせが現在までで最良の結果を与えるものであるので、この実験を標準参照実験と名付ける。図１は、ＤＣ−ｃｈｏｌリポソーム中に被包されたウレアーゼ調製物が、標準参照実験で得られる結果と同様に良好な結果を与えることを示す。さらに、マウスを屠殺した４時間後のウレアーゼ活性に関する結果を図１に示す実験（ａ）〜（ｄ）に言及することができる。屠殺後２４時間でもなおウレアーゼ活性が陰性のマウスの数がそれぞれ（ａ）５／１０、（ｂ）４／１０、（ｃ）０／１０および（ｄ）１０／１０であることが示されている。これは、先の段落で結論したことに一致する；すなわち、実験（ａ）によって、標準参照実験の間に得られる結果と同様の結果が導かれる。図２は、ＱＳ−２１アジュバントを含むウレアーゼ調製物が、標準参照実験で得られる結果と同様に良好な結果を与えることを示す。さらに、この図は、アジュバントとしてＰＣＰＰを使用して得られる結果が、ＱＳ−２１を用いて得られる結果よりずっと不満足であることを示す。このことは、下記の表に示すように、ＰＣＰＰが優先的にウレアーゼとともにＴｈ２型応答を誘発し、一方ＱＳ−２１がウレアーゼとともにＴｈ１／Ｔｈ２均衡応答を誘発することで説明することができる。さらに、マウスを屠殺した４時間後のウレアーゼ活性に関する結果を図２に示す実験（ａ）〜（ｅ）に言及することができる。屠殺後２４時間でもなおウレアーゼ活性が陰性のマウスの数がそれぞれ（ａ）１／８、（ｂ）０／８、（ｃ）５／８、（ｄ）０／８および（ｅ）１０／１０であることが示されている。これは、先の段落で結論したことに一致する。すなわち、実験（ｃ）によって、標準参照実験の間に得られる結果と同様の結果が導かれる。下記の表は、ウレアーゼ活性に関する結果を図１および２に示す実験の間に誘発された血清ＩｇＡ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの量、ならびにウレアーゼ活性が屠殺後４時間および２４時間でＯＤ０．１未満であることによって特徴付けられるマウスの数を示す。ＩｇＡ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの量をＥＬＩＳＡ力価として表す。上記表に示す結果は、皮下経路（およびこの経路に適切なアジュバント）を使用した場合、血清抗体レベルは高く、胃内経路（およびこの経路に適切なアジュバント）を使用した後はそうではないことを示す。さらに、これらの結果は、ＤＣ−ｃｈｏｌまたはＱＳ−２１を使用した場合、桁でＩｇＧ１のレベルに匹敵する高いレベルのＩｇＧ２ａが得られることを示す。このことは、これらのアジュバントがＴｈ２応答だけではなく、Ｔｈ１応答も誘発する能力を有することを示す。他方、ＰＣＰＰを使用した場合、得られるＩｇＧ２ａレベルはＩｇＧ１レベルよりも実質的に低い。後者のアジュバントは本質的にＴｈ２応答を誘発し、それゆえ本発明の目的に有用なアジュバントとはなり得ないと結論することができる。実施例２：サルにおける免疫研究２Ａ − 材料および方法サルＭａｕｒｉｔｉｕｓから得た２８匹の２歳のサル（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）をこの研究において使用した。サルを下記の種々の免疫手順に供する前に、生検によって、その大部分がガストロスピリルム・ホミニス（ＧＨＬＯ）またはエイチ・ヘイルマニに類似の生物に慢性的に感染していることが示された。投与手順ほぼ全てのサルがＧＨＬＯに感染していたので、治療における種々の手順の効力を試験することに決定した。下記の表にまとめるような３つの手順を使用した：筋肉内経路による投与を腰背筋肉において実施したことを明記する。抗原およびアジュバントＧＰＬＯとエイチ・ピロリとの間には交叉反応性が存在するので、実施例１Ａに記載の不活化エイチ・ピロリ細菌の調製物を、単独でか、または実施例１Ａに記載の方法に従って製造した組換えウレアーゼと組み合わせて使用することを選択した。イー・コリ易熱毒（ＬＴ）（Ｓｉｇｍａ）またはコレラ毒素のＢサブユニットｓ）を粘膜アジュバントとして使用し、一方ＤＣ−ｃｈｏｌを非経口アジュバントとして使用した。ＤＣ−ｃｈｏｌ粉末を抗原調製物とともに単に再水和する。使用する用量は下記のとおりである：生検、ウレアーゼ試験および細菌学的／組織学的研究生検を、各々のサルについて、免疫の前後に（３回目の追加免疫の１ヶ月後）実施した。生検を使用して、ウレアーゼ試験および組織学的研究を実施した。ウレアーゼ活性をＪａｔｒｏｘキット（Ｐｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ）を使用して評価する。この活性のレベルを以下のように評価する（低下して行く）：レベル３、最初の１０分間の間にピンク色が出現する；レベル２、試薬の添加後１０〜３０分間でピンク色が出現する；レベル１、３０分間〜４時間でピンク色が出現する、およびレベル０、４時間後に薄い色または無色。組織学的研究をホルマリン中で固定した生検を使用して実施し、細菌負荷を以下のように定量した：細菌非存在（０）；ヘリコバクター型の細菌少し（０．５）；幾分多数の細菌（１）；多数の細菌（２）；非常に多数の細菌（３）。レベル１つの差（例えば、１から２への）は、５倍多い細菌数に相当する。ＥＬＩＳＡ試験による応答の分析ＥＬＩＳＡ試験を実施例１Ａに記載のように実施する。１Ｂ − 結果下記の表は、免疫の前後に、（ｉ）ウレアーゼ活性を評価することによる、および（ｉｉ）組織学的研究を実施することによる、２つの試験を使用して評価される細菌負荷に関する。これに関する結果を列３〜６に示す。最後の３つの列は、各群（対照、１、２または３）について、細菌負荷が２つの試験に従って免疫後荷を示すサルの数を示す。２つの試験の結果が同様な変化を示す場合、上向きまたは下向きの矢印は２重である。このように、この表は、厳密な粘膜経路による免疫手順に供した群において、結果が陰性対照群について得られた結果と実質的に同一であることを示す。他方、混合した粘膜および筋肉内経路によるか、または厳密な筋肉内経路による免疫手順に供した群において、細菌負荷の顕著な減少が観察される。このことは、免疫条件の重要性および特に使用するアジュバントの重要性を強調する；結果として、均衡Ｔｈ１およびＴｈ２応答を促進可能なＤＣ−ｃｈｏｌのようなアジュバントの使用が、防御効果を得るために推奨される。これらの結果は、図３に示す血清抗体レベルに関する他の結果と関連付けるべきである。この図は、厳密な粘膜経路による免疫スキーム（１および１ｕ）によって、陰性対照群の結果と非常に類似した結果が導かれることを示す。他方、混合した粘膜および筋肉内経路による免疫スキーム（２および２ｕ）ならびに、なお良いことに、厳密な筋肉内経路による免疫スキーム（３および３ｕ）によって、対照群より実質的に高い抗体レベルを誘発することが可能になる。従って、高い血清応答は、防御効果と相関している可能性があり、一方反対に、低い応答は防御効果がないことに関連する。所望の効果（高い血清応答および防御免疫）を得ることを可能にする免疫条件は、横隔膜下領域に標的化された非経口経路またはＴｈ１アジュバントの使用を含む。実施例３：マウスにおける他の免疫研究３Ａ − 材料および方法マウス６／８週齢雌性ＳｗｉｓｓマウスをＪａｎｖｉｅｒ（Ｆｒａｎｃｅ）より得た。実験全体の間、滅菌材料を使用した；ケージを「イソキャップ」によって保護した；マウスに濾過水および照射食物を与えた。投与手順各実験の間、マウスに３用量の同じ製造物を与えた；各用量を２１日間隔で（０、２１および４２日目）。製造物の投与を、経口経路（胃管強制栄養法により０．２ＭＮａＨＣＯ₃中３００μｌ）、または皮下経路（腰領域の左側の皮下３００μｌ）によって実施した。１０μｇのウレアーゼを皮下で、４０μｇを経口経路によって投与した。抗原およびアジュバントエイチ・ピロリウレアーゼアポ酵素を、ＷＯ９６／３１２３５の実施例５に記載のように、イー・コリにおいて発現させ、精製した。以下、本明細書において、単にウレアーゼという用語を使用して、このアポ酵素を示す。イー・コリ易熱毒（Ｓｉｇｍａ）を粘膜アジュバントとしてウレアーゼの１用量あたり１μｇの量で使用する。ＱＳ−２１（ＣａｍｂｉｄｇｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をアジュバントとしてウレアーゼの１用量あたり１５μｇの量で使用する。ＢａｙＲ１００５（Ｂａｙｅｒ）をアジュバントとしてウレアーゼの１用量あたり４００μｇの量で使用する。ＤＣ−ｃｈｏｌ（Ｒ−ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）をアジュバントとしてウレアーゼの１用量あたり６５μｇの量で使用する。ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）（ＶｉｒｕｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）をアジュバントとしてウレアーゼの１用量あたり１００μｇの量で使用する。チャレンジ２回目の追加免疫の４週間後に、マウスを、マウスに適合されストレプトマイシンに耐性なエイチ・ピロリ株であるＯＲＶ２００１株の懸濁物３００μｌ（３ ×１０⁶の生菌）での胃管強制栄養法に供した。抗原の用量を与えず、対照とする１つの群を同様にチャレンジする。チャレンジ懸濁物を以下のように製造する：エイチ・ピロリを、以下のＳｉｇｍａの抗生物質（トリメトプリム５μｇ／ｍｌ）バンコマイシン１０μｇ／ｍｌ、ポリミキシンＢ１．３μｇ／ｍｌ、アンホテリシン５μｇ／ｍｌおよびストレプトマイシン５０μｇ／ｍｌ）を含有する５％ヒツジ血液（ｂｉｏＭＨＡ培地）上で培養する。培養ディッシュを３日間３７℃で微好気性条件下で（ＡｎａｅｒｏｃｕｌｔＣ、Ｍｅｒｃｋ）インキュベートする。この培養物を採集して、５％ウシ胎児血清および上記の抗生物質を補充したＢｒｕｃｅｌｌａブロス５０ｍｌを含有する、日を備えた７５ｃｍ²フラスコ（Ｃｏｓｔａｒ）に接種する。フラスコを、微好気性条件下で、穏やかに振盪しながら２４時間インキュベートする。次いで、懸濁物を、５５０ｎｍでのＯＤ０．１（すなわち、１０⁷ ＣＦＵ／ｍｌ）を与えるようにＢｒｕｃｅｌｌａブロス中で希釈する。チャレンジの分析チャレンジの４週間後、頸椎を折ることによってマウスを屠殺した。ウレアーゼ活性を、そして定量的培養によって細菌負荷を評価するために、胃を取り出した。胃（幽門洞＋体）の縦の１／４を各々の試験に使用する。ウレアーゼ活性を４時間後および２４時間後にＪａｔｒｏｘ試験（Ｐｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ）を用いて評価し（５００ｎｍでのＯＤ）、２４時間後になお陰性（ＯＤ０．１未満）のマウスの数を記録した。エイチ・ピロリの定量的培養による感染の評価ｏｒｔａｇｅｍ培地中に入れ、次いで次の２時間以内に、培養チャンバー中に移す。次いで、試料を１ｍｌのＢｒｕｃｅｌｌａ培地（Ｂｒｕｃｅｌｌａブロス）を含有するＤｏｕｎｃｅホモジナイザー（Ｗｈｅａｔｏｎ、ＭｉｌｌｖｉｌｌｅＵＳＡ）を使用してホモジナイズし、１０^-3まで段階希釈する。各希釈物（１０⁰ 、１０^-1、１０^-2および１０^-3）１００μｌを、上記の抗生物質を補充したＭＨＡ培地を含有するペトリ皿に広げ、３７℃で微好気性条件下で４日間または５日間培養する。次いで、生菌数を計数する。エイチ・ピロリは、グラム染色によって示される形態ならびにウレアーゼ、カタラーゼおよびオキシダーゼ試験に対する陽性反応によって同定される。ＥＬＩＳＡによる応答の分析ＥＬＩＳＡによる分析を標準的手順に従って実施した（ビオチン化結合体およびストレプトアビジン−ペルオキシダーゼをＡｍｅｒｓｈａｍから得、ＯＰＤ基質をＳｉｇｍａから得た）。プレートを炭酸緩衝液中のエイチ・ピロリ抽出物（５μｌ／ｍｌ）でコートした。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抽出物に対するマウス由来の対照血清を各実験において導入した。力価は、４９０ｎｍにおいてＯＤ１．５を与える希釈の逆数に相当する。３Ｂ − 結果図４〜７の主題に関する全てのコメントの前に、これらの図が、ＬＴアジュバントとともに使用し、胃内経路によって投与した抗原を用いて得られた結果を示すことに留意するべきである。先行技術のＬＴ／ＩＧの組み合わせが現在までで最良の結果を与えるものであるので、この実験を標準参照実験と名付ける。血清応答図４に示すように、３回の免疫後、皮下経路によって免疫したマウスの全てが高い血清ＩｇＧ応答を有する。ＩｇＧ１：ＩｇＧ２ａ比に基づくと、ＰＣＰＰはＴｈ２型の優勢応答（高ＩｇＧ１レベル、低ＩｇＧ２ａレベル）を誘発することを示すことができる。ＢａｙＲ１００５およびＤＣ−ｃｈｏｌは、Ｔｈ１／Ｔｈ２型のより均衡した応答を誘発する。最後に、ＱＳ−２１は、Ｔｈ１型の優勢応答を誘発する。実際、マウスの４つの群Ａ１〜Λ４の間の主な差は、それらのＩｇＧ２ａ力価にあり、ＩｇＧ１力価は全て類似している。チャレンジ後の防御図５〜７は、群Ａ１およびＡ２における防御のレベルが、参照群（ＬＴ）において観察されたレベルと同様であるかまたはそれより良好でさえあることを示す。これらは、それぞれＱＳ−２１およびＢａｙＲ１００５の存在下でウレアーゼの用量を与えた群である。群Ａ３（ＤＣ−ｃｈｏｌ）は幾分低いレベルの防御を示す。他方、群４Ａ（ＰＣＰＰ）においては、高い防御効果を示すことはできない。図５〜７に示す結果が互いに一致することに留意するべきである。一方で図４に、そして他方で図５〜７に示す結果を比較すると、Ｔｈ１またはＴｈ１／Ｔｈ２応答を誘発可能なアジュバント（ＱＳ−２１、ＢａｙＲ１００５またはＤＣ−ｃｈｏｌ）を使用することによって、Ｔｈ２型アジュバント（ＰＣＰＰ）を使用する場合とは反対に、防御効果の開始が促進されると間違いなく結論することができる。実施例４：マウスにおけるエイチ・ピロリ感染の処置本発明者らは、マウスモデルにおいて、エイチ・ピロリ感染を処置する皮下経路（ＳＣ）による免疫の効力を、粘膜経路と比較した。ＯＦ１マウスに１０⁶コロニー形成単位（ｃｆｕ）のエイチ・ピロリＯＲＶ２００１株を感染させた。１ヶ月後、感染が実際に確立されたことを、１０／１００匹のマウスを無作為に屠殺し、胃全体の１／４についてウレアーゼ活性を試験することによってチェックした。全ての結果が陽性であるという条件で、本発明者らは次いで、マウス（１群あたり１０匹）を３回、３週間間隔で、アジュバントとしてのＱＳ２１（Ａｑｕｉｌａ）１５μｇもしくは４００μｇのＢａｙＲ１００５アジュバント（Ｂａｙｅｒ）を補充した１０μｇの組換えウレアーゼを使用して皮下経路によってか、または１μｇのＬＴと混合した４０μｇのウレアーゼを使用して経口経路によってかのいずれかで免疫した。非経口経路によって投与した２つのアジュバントの各々について、免疫を、首（身体の上方領域のリンパ節に到達させるために）または腰領域（腹部リンパ節に到達させるために）のいずれかで実施した。１０匹のマウスを非感染および非免疫のままにし（陰性対照）、一方、陽性対照群のマウスには、生理食塩水溶液、ＱＳ２１またはＢａｙアジュバントを皮下経路（腰領域）によって与えた。３回目の免疫の１ヶ月後、全てのマウスを屠殺し、生息の程度を、ウレアーゼ活性を測定することによって（各群において１０／１０匹のマウスを分析した）、そして定量的培養を実施することによって（５／１０匹マウスを分析した）評価するために、胃を取り出した。図６Ａ（ウレアーゼに関する試験）および図６Ｂ（培養）は、腰領域における皮下経路によってアジュバントとしてＱＳ２１を補充したウレアーゼで免疫したマウスにおいて、感染が実際上消失したことを示す（４／５匹のマウスは定量的培養において陰性であった）。ＱＳ２１の存在下で、首における皮下経路によってウレアーゼで免疫したマウス、および経口経路によってウレアーゼ＋ＬＴを与えたマウスは、非免疫マウスに比較して１０〜１００の感染の低下を示した。Ｂａｙアジュバントは、同じ低下を誘発し、これは腰領域において免疫したマウスにおいてより顕著であった。これらの同じマウスに対して実施した組織病理学によっては、対照に比較してより重篤な胃炎は示されなかった。本発明者らの以前の予防研究（実施例１）において観察されたように、防御されたマウスは、２つのアイソタイプＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａについて高い血清レベル（均衡Ｔｈ２／Ｔｈ１応答を表す）を示した。さらに、腰領域における皮下経路によって免疫したマウスは、最高の血清ＩｇＡレベル（粘膜応答を示す）を示した。これらの結果は、標的化全身免疫が、マウスにおいて獲得されたエイチ・ピロリ感染を治癒できること、およびＴｈ１／Ｔｈ２型均衡粘膜応答を誘発するアジュバントの使用がこの目的を達成するために所望されることを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．ヘリコバクター由来の免疫原性物質ならびに：（ｉ）キラジャ・サポナリアの抽出物から精製されたサポニン；（ｉｉ）カチオン性脂質またはその塩であって；該脂質はプロテインキナーゼＣの弱いインヒビターであり、コレステロール由来の親油基、カルボキシアミドおよびカルバモイルから選択される結合基、１〜２０個の炭素原子の分岐または非分岐直鎖状アルキル鎖からなるスペーサーアーム、ならびに第１級、第２級、第３級および第４級アミンから選択されるカチオン性アミン基を含む構造を有しており、組成物がサポニンまたは式（Ｉ）で表されるグリコリポペプチドを含有しない場合、該脂質はリポソームの形態では提供されないカチオン性脂質またはその塩；ならびに（ｉｉｉ）式（Ｉ）：［式中、Ｒ¹は、飽和または１回もしくは数回不飽和の、１〜５０個の炭素原子を含有するアルキル残基を表し、Ｘは、−ＣＨ₂−、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒ²は、水素原子または飽和または１回もしくは数回不飽和の、１〜５０個の炭素原子を含有するアルキル残基を表し、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、各々互いに独立して、水素原子またはアシル−ＣＯ−Ｒ⁶ 残基｛式中、Ｒ⁶は、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル残基を表す｝を表し、Ｒ⁷は、水素原子、Ｃ₁−Ｃ₇アルキル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、メルカプトメチル、２−（メチルチオ）エチル、３−アミノプロピル、３− ウレイドプロピル、３−グアニジルプロピル、４−アミノブチル、カルボキシメチル、カルバモイルメチル、２−カルボキシエチル、２−カルバモイルエチル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、３−インドリルメチルまたは４−イミダゾリルメチル基を表し、Ｒ⁸は、水素原子またはメチル基を表し、Ｒ⁹は、水素原子、アセチル、ベンゾイル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、メトキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニル基を表し、Ｒ⁷およびＲ⁸は、一緒にされる場合、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基を表してもよい］で表されるグリコリポペプチド、から選択される少なくとも１つの化合物を含有する医薬組成物。２．少なくとも２つの化合物を含有し、第１の化合物はキラジャ・サポナリアの抽出物から精製されたサポニンから選択され、第２の化合物は、カチオン性脂質またはその塩であって；該脂質はプロテインキナーゼＣの弱いインヒビターであり、コレステロール由来の親油基、カルボキシアミドおよびカルバモイルから選択される結合基、１〜２０個の炭素原子の分岐または非分岐直鎖状アルキル鎖からなるスペーサーアーム、ならびに第１級、第２級、第３級および第４級アミンから選択されるカチオン性アミン基を含む構造を有しているカチオン性脂質またはその塩から選択される、請求項１記載の組成物。３．化合物がキラジャ・サポナリアの抽出物から精製されたＱＳ−２１画分であるサポニンである請求項１または２記載の組成物。４．化合物が分散形態で製造されたカチオン性脂質である請求項１または２記載の組成物。５．化合物が３−β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−ｃｈｏｌ）またはその塩であるカチオン性脂質である請求項１、２または４記載の組成物。６．化合物がＮ−（２−Ｌ−ロイシン−アミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド（ＢａｙＲ１００５）であるグリコリポペプチドである請求項１記載の組成物。７．ヘリコバクター由来の免疫原性物質が、不活化ヘリコバクター細菌の調製物、ヘリコバクター細胞溶解物、精製形態のヘリコバクター由来ペプチドおよびポリペプチドから選択される、請求項１〜６のいずれか１項記載の組成物。８．ヘリコバクター由来の免疫原性物質が、ヘリコバクターウレアーゼのＵｒｅＢまたはＵｒｅＡサブユニットである、請求項７記載の組成物。９．免疫原性物質がヘリコバクター・ピロリ由来である、請求項１〜８のいずれか１項記載の組成物。１０．ヘリコバクター由来の免疫原性物質ならびに：（ｉ）キラジャ・サポナリアの抽出物から精製されたサポニン；（ｉｉ）カチオン性脂質またはその塩であって；該脂質はプロテインキナーゼＣの弱いインヒビターであり、コレステロール由来の親油基、カルボキシアミドおよびカルバモイルから選択される結合基、１〜２０個の炭素原子の分岐または非分岐直鎖状アルキル鎖からなるスペーサーアーム、ならびに第１級、第２級、第３級および第４級アミンから選択されるカチオン性アミン基を含む構造を有しており、組成物がサポニンまたは式（Ｉ）で表されるグリコリポペプチドを含有しない場合、該脂質はリポソームの形態では提供されないカチオン性脂質またはその塩；ならびに（ｉｉｉ）式（Ｉ）：［式中、Ｒ¹は、飽和または１回もしくは数回不飽和の、１〜５０個の炭素原子を含有するアルキル残基を表し、Ｘは、−ＣＨ₂−、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒ²は、水素原子または飽和または１回もしくは数回不飽和の、１〜５０個の炭素原子を含有するアルキル残基を表し、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、各々互いに独立して、水素原子またはアシル−ＣＯ−Ｒ⁶ 残基｛式中、Ｒ⁶は、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル残基を表す｝を表し、Ｒ⁷は、水素原子、Ｃ₁−Ｃ₇アルキル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、メルカプトメチル、２−（メチルチオ）エチル、３−アミノプロピル、３− ウレイドプロピル、３−グアニジルプロピル、４−アミノブチル、カルボキシメチル、カルバモイルメチル、２−カルボキシエチル、２−カルバモイルエチル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、３−インドリルメチルまたは４−イミダゾリルメチル基を表し、Ｒ⁸は、水素原子またはメチル基を表し、Ｒ⁹は、水素原子、アセチル、ベンゾイル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル、メトキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニル基を表し、Ｒ⁷およびＲ⁸は、一緒にされる場合、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基を表してもよい］で表されるグリコリポペプチド、から選択される少なくとも１つの化合物の、ヘリコバクターに対する１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）型免疫応答を誘発可能な医薬組成物の製造における使用。１１．ヘリコバクター由来の免疫原性物質ならびに少なくとも２つの化合物の請求項１０記載の使用であって、第１の化合物はキラジャ・サポナリアの抽出物から精製されたサポニンから選択され、第２の化合物は、カチオン性脂質またはその塩であって；該脂質はプロテインキナーゼＣの弱いインヒビターであり、コレステロール由来の親油基、カルボキシアミドおよびカルバモイルから選択される結合基、１〜２０個の炭素原子の分岐または非分岐直鎖状アルキル鎖からなるスペーサーアーム、ならびに第１級、第２級、第３級および第４級アミンから選択されるカチオン性アミン基を含む構造を有しているカチオン性脂質またはその塩から選択される使用。１２．化合物がキラジャ・サポナリアの抽出物から精製されたＱＳ−２１画分であるサポニンである請求項１０または１１記載の使用。１３．化合物が分散形態で製造されたカチオン性脂質である請求項１０または１１記載の使用。１４．化合物が３−β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−ｃｈｏｌ）またはその塩である請求項１０、１１または１３記載の使用。１５．化合物がＮ−（２−Ｌ−ロイシン−アミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド（ＢａｙＲ１００５）であるグリコリポペプチドである請求項１０記載の使用。１６．Ｔｈ１型免疫応答がマウスにおいて測定され、（ｉ）１：１００以上のＥＬＩＳＡＩｇＧ２ａ：ＩｇＧ１力価の比または（ｉｉ）１：１００以上のＥＬＩＳＡＩｇＧ２ａ：ＩｇＡ力価の比のいずれかによって特徴付けられる、請求項１０〜１５のいずれか１項記載の使用。１７．Ｔｈ１型免疫応答がマウスにおいて測定され、（ｉ）１：１０以上のＥＬＩＳＡＩｇＧ２ａ：ＩｇＧ１力価の比または（ｉｉ）１：１０以上のＥＬＩＳＡＩｇＧ２ａ：ＩｇＡ力価の比のいずれかによって特徴付けられる、請求項１６記載の使用。１８．Ｔｈ１型免疫応答がマウスにおいて測定され、（ｉ）１：２以上のＥＬＩＳＡＩｇＧ２ａ：ＩｇＧ１力価の比または（ｉｉ）１：２以上のＥＬＩＳＡＩｇＧ２ａ：ＩｇＡ力価の比のいずれかによって特徴付けられる、請求項１７記載の使用。１９．ヘリコバクター由来の免疫原性物質が、不活化ヘリコバクター細菌の調製物、ヘリコバクター細胞溶解物、精製形態のヘリコバクター由来ペプチドおよびポリペプチドから選択される、請求項１０〜１８のいずれか１項記載の使用。２０．ヘリコバクター由来の免疫原性物質が、ヘリコバクターウレアーゼのＵｒｅＢまたはＵｒｅＡサブユニットである、請求項１９記載の使用。２１．免疫原性物質がヘリコバクター・ピロリ由来である、請求項１０〜２０のいずれか１項記載の使用。２２．医薬組成物が全身経路によって投与されることが意図される請求項１０〜２１のいずれか１項記載の使用。２３．医薬組成物が厳密な全身経路によって投与されることが意図される請求項２２記載の使用。２４．医薬組成物が、横隔膜下に位置する、哺乳動物、特に霊長類の部分における全身経路によって投与されることが意図される請求項２２または２３記載の使用。２５．医薬組成物が、哺乳動物、特に霊長類の腰背領域における全身経路によって投与されることが意図される請求項２２〜２４のいずれか１項記載の使用。２６．医薬組成物が、皮下経路、筋肉内経路および皮内経路から選択される全身経路によって投与されることが意図される請求項２２〜２５のいずれか１項記載の使用。２７．医薬組成物が、ヘリコバクター感染を防止または処置するために、同一の処置の間に２回または３回、全身経路によって投与されることが意図される請求項１０〜２６のいずれか１項記載の使用。２８．ヘリコバクター由来の免疫原性物質およびヘリコバクターに対する１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）型免疫応答の誘発を促進可能な化合物の、ヘリコバクター感染を防止または処置するために全身経路によって投与されることが意図される医薬組成物の製造における共同使用。