JP4988352B2 - 有効成分の放出の延長のための薬学的調製物およびその適用、特に治療学的適用 - Google Patents

Description

本発明は、有効成分、特に蛋白及びペプチド有効成分の延長された放出のための、安定な流体水性コロイド懸濁液に基づく新規な薬学的調製物、および該調製物の適用、特に治療学的適用に関するものである。
これら有効な薬学的調製物は、人間及び獣医学的双方の療法に重要である。

薬学的有効成分、特に治療蛋白の延長された放出の分野においては、多くの場合において、患者の血漿蛋白又はペプチド濃度を健康な対象において観察される値に近づけることを可能な限り確実にする必要性がある。

この目標は、血漿中における蛋白の短命により、繰り返し治療蛋白を注射する必要性のため、妥協されている。治療蛋白の血漿濃度は、その時、高濃度ピークおよび極低最小濃度により特徴付けられる「ぎざぎざ」プロファイルを有する。濃度ピークは、健康対象における基礎的な濃度より極めて高い、この濃度ピークは、インターロイキンＩＬ２等の治療蛋白の高毒性のせいで、著しく有害な影響を有する。更に、最小濃度は治療効果を奏するために必要な濃度より低く、患者は不十分な治療援護しか受けられず、深刻な長期間の副作用に苦しむ。

また、患者の治療蛋白の血漿濃度を患者の治療のための理想値に確実に近づけるために、当該薬学的調製物は、血漿濃度の変動をずっと制限させるべく、治療蛋白の放出を延長させ得るものでなければならない。

更に、この活性調製物は、好ましくは、当業者に既に周知の下記特性：
１．血漿濃度を治療学的値に維持するための、活性且つ変性されていない治療蛋白（例えば、ヒト又は合成蛋白）の延長された放出；
２．０．２ミクロン以下の孔サイズを有するフィルターでの濾過により、容易に注射可能且つ殺菌し得るよう十分流動性のある液体形態；
３．安定な液体形態；
４．生体適合性及び生分解性；
５．非毒性；
６．非免疫原性；
７．優れた局所的耐性；
を満たすものである。

これらの目的を達成する試みにおいて先行技術においては既にいくつかのアプローチが提案されている。

第一のアプローチでは、天然の治療蛋白が１又は２以上のポリマー鎖の共有結合グラフトにより、またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）等の蛋白の共有結合グラフトにより修飾される。このように修飾された蛋白はそのレセプタに対する親和力が低く、通常の循環における半減期がかなり増加する。これにより血漿濃度のピークと谷の間の濃度における変化の振幅はかなり減少する。従って、分子量１２ｋＤのポリエチレングリコール鎖のグラフトにより化学的に修飾されたインターフェロンアルファ２ｂは、名称ＶＩＲＡＦＥＲＯＮ（登録商標）ＰＥＧにおいて、Ｓｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈにより入手可能である。この化学修飾の効果は、患者における半減期を６．８時間から３３時間に増加させることである。治療蛋白の化学修飾であるこの手段には、概して二つの重大な不利益がある。一つは、蛋白の不可逆修飾（もはやヒト蛋白ではない。）が毒性及び長期間における免疫原性の問題を招来し得ることである。二つ目の不利益は、修飾された治療蛋白の生物活性の部分的損失に由来する。

第二のアプローチでは、少なくとも一種のポリマーと一種の有効成分を含有する調製物であって、周囲温度及び雰囲気中において液体であり、注射可能であり、注射後に例えばｐＨおよび／または温度の変化の影響下においてより粘性になる調製物を使用することにより活性の持続時間を増加させることが提案されている。

従って、この傾向において、特許ＵＳ−Ｂ−６１４３３１４号は、注射後に固体インプラントを形成するＡＰの調節された放出のための有機ポリマー溶液を開示している。この溶液は、
（Ａ）生体適合性、生分解性を有し、水又は生理流体（例えば、ポリ乳酸および／またはポリグリコール酸ポリマー）に不溶性である１０〜８０質量％の塩基熱可塑性ポリマー；
（Ｂ）生理流体中に分散した有機溶媒（例えば、Ｎ−メチルピロリドン）；
（Ｃ）有効成分（ＡＰ）；
（Ｄ）最終的に１〜５０質量％の、ポリ乳酸−グリコール酸／ポリエチレングリコール型のブロック共重合体からなる調節された放出剤；
を含有する。

注入後、（Ｂ）は生理流体中で分散又は消散する。（Ａ）は（Ｃ）を被包するインプラントであり、（Ａ）又は（Ｄ）いずれにも共有結合していないインプラントを形成し、これによりインヴィヴォで徐々に放出される。

この技術における主たる不利益は、有機溶媒（Ｂ）の使用であり、ＡＰ（Ｃ）（例えば、治療蛋白）を潜在的に変性し、患者に毒性となる。加えて、ポリマー（Ａ）の加水分解により局所的耐性の問題を引き起こし得る酸がインヴィヴォにおいて生じる。

ＰＣＴ出願ＷＯ−Ａ−９９／１８１４２号及びＷＯ−Ａ−００／１８８１２号は、溶解された形態又はコロイド形態においてＡＰを含有するポリマー水溶液が、温血動物に、特に注射により投与され、生理学的温度がそのゲル化以上であるためインヴィヴォにおいてＡＰ（例えば、インスリン）のゲル化沈殿物を形成し得ることに関するものである。このように形成されたゲルは、延長された形態においてＡＰを放出する。これら特定の生分解性ポリマーはＡＢＡ又はＢＡＢ三ブロック（ここで、Ａ＝ポリ乳酸−グリコール酸共重合体（ＰＬＡＧＡ）又はポリ乳酸ポリマー（ＰＬＡ）であり、Ｂ＝ポリエチレングリコールである。）である。これら三ブロックポリマーの液体→ゲル変質温度は、例えば３６℃、３４℃、３０℃及び２６℃である。ＵＳ−Ｂ−６１４３３１４号に記載のポリマー（Ａ）のように、これらＡＢＡ又はＢＡＢ三ブロックポリマーのインヴィヴォにおける加水分解により、正確な局所的耐性を有し得ない酸を生ずる。

ＰＣＴ出願ＷＯ−Ａ−９８／１１８７４号には、脂肪親和性の有効成分、ゲル化ポリマー（ゲルライト（Gelrite）（登録商標）＝脱アセチル化されたゲラン（gellan）ガム又はエチルヒドロキシセルロース）及び界面活性剤を含有する薬学的調製物が開示されている。ポリマーゲルライト（登録商標）の場合には、生理濃度において、ポリマー／界面活性剤相互作用、及びおそらくＣａ^＋＋イオン等の電解質の存在のみが、脂肪親和性の有効成分が非共有結合的に結合しているポリマー／界面活性剤凝集体からなるゲルの形成をもたらす。該調製物は、標的器官（例えば、眼）への局所的投与に向けられている。インシトゥにおいて形成する凝集体／有効成分会合が標的器官への有効成分のゆるやかな放出を可能とする。

蛋白の生物活性を保ちつつその活性の持続時間を延長する試みにおいて採用された第三のアプローチは、変性されていない治療蛋白を使用し、これを生体適合性ポリマーに基づくミクロスフェア又はインプラントに組み込むことであった。このアプローチは、特に特許ＵＳ−Ｂ−６５００４４８号及び特許出願ＵＳ−Ａ−２００３／０１３３９８０号に詳しく、そこにはヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の延長された放出のための組成物が開示され、ホルモン蛋白がまず金属を用いた錯形成反応により安定化され、次いで生体適合性ポリマーマトリックス中に分散されている。生体適合性ポリマーは、例えばポリラクチド、ポリグリコリド、又はポリ（ラクチド−コ−グリコリド）共重合体である。この組成物は、例えば、ミクロスフェアのナトリウムカルボキシメチルセルロース溶液の懸濁液の形態において提供される。このアプローチにはいくつかの不利益がある。第一に、ミクロスフェア製造工程の間に、蛋白が潜在的に変性有機溶媒と接触する。また、ミクロスフェアは大きく（１〜１０００ミクロン）、注射及びフィルターでの滅菌に関して制限的である。最後に、局所的耐性の問題はポリマーがインシトゥにおいて加水分解されるときに生じ得る。

第四のアプローチによると、治療蛋白が充填されたナノ粒子の低粘度液体懸濁液からなる治療蛋白の延長された放出の形態が開発された。該懸濁液は天然治療蛋白の容易な投与を可能とした。

放出延長ナノ粒子懸濁液の第一の形態は、修飾されていない天然治療蛋白が被包されたリポソームの懸濁液からなる。注射後、蛋白は徐々にリポソームから放出され、通常の循環において蛋白が存在する時間を延長する。従って、フロッセン（Ｆｒｏｓｓｅｎ）等は、論文、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，４３、ｐ．５４６、１９８３、において、抗腫瘍性試薬の効能を強化するために、リポソームにおける抗腫瘍性試薬の被包について記載している。しかしながら、かかる薬剤の放出が早すぎ延長された放出を実現するものではない。その特許ＵＳ−Ｂ−５３９９３３１号において、リポソーム・カンパニー・インコーポレーテッド（Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ）は、リポソームにインターロイキン２を共有結合によりグラフトさせることによりインターロイキン２のインヴィトロにおける放出時間を改善することを提案しており、前記方法は上述した「修飾蛋白」アプローチと同じ欠点を有するものである。

低粘度の液体ナノ粒子調製物の利点を維持しつつ同時にリポソームの安定性欠如の欠点を解決すべく、フラメル・テクノロジーズ（Ｆｒａｍｅｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、他の方法を提供する。該方法では、治療蛋白が「疎水性修飾された」、すなわち、疎水基をグラフトすることにより修飾された水溶性ポリアミノ酸と会合している。このポリマーは、特に疎水性グラフトを有するポリアミノ酸（ポリグルタメート又はポリアスパルテート）から選択される。

これらの疎水性修飾されたポリマーの着目すべき利点の一つは、これらポリマーがナノ粒子を形成するために水中で自発的に自己会合することである。

これらの系における他の利点は、蛋白又はペプチド（特に治療蛋白）が疎水性修飾されたポリマーのナノ粒子と自発的に会合することである。この会合は非共有結合であり、界面活性剤や潜在的に変性させる変質工程によることなく起こることである。これは、特許ＵＳ−Ｂ−６５００４４９号及び特許出願ＵＳ−Ａ−２００３／０１３３９８０号に開示されているような、ミクロスフェア中の蛋白の被包を必要としない。全体的な対比において、これらの疎水性修飾されたコポリアミノ酸のナノ粒子は、化学修飾や変性することなく、また「乳化」及び「溶媒エバポレーション」等の集中的な処置を施すことなく、溶液中で蛋白を自発的に吸着する。該調製物は、液体又は凍結乾燥形態において保存することができる。

例えば皮下における注射後、蛋白を充填されたナノ粒子懸濁液は、インヴィヴォにおいて生物活性非変性蛋白を徐々に放出する。かかる蛋白有効成分（ＡＰ）／ポリ［Ｇｌｕ］又はポリ［Ａｓｐ］の非共有結合会合は、特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８号に開示されている。

前記特許出願には、特に、ヒトインスリンと「疎水性修飾された」ポリグルタメートとの会合を含有するｐＨ７．４のコロイド懸濁液が記載されている。下記表には、ＷＯ−Ａ−００／３０６１８号の実施例で使用された「疎水性修飾された」ポリアミノ酸及び得られた会合度が示されている。

これらコロイド懸濁液は、インスリン１．４ｍｇ／ｍｌ、「疎水性修飾された」ポリアミノ酸１０ｍｇ／ｍｌを含む。

ＷＯ−Ａ−００／３０６１８号の図１には、上述した懸濁液によりベクトル化されたインスリンのインヴィヴォにおける放出時間が１２時間であることが示されている。この放出時間は有利に増大させることができた。

従って、前記ＰＣＴ出願には既にかなりの進歩が示されているが、その技術内容は上記において列挙した詳述、特にインヴィヴォにおける放出時間を延ばすことに関して更に至適化することができる。

未公開のフランス特許出願第０２０７００８号（０７／０６／２００２）、第０２０９６７０号（３０／０７／２００２）、第０３５０１９０号（２８／０５／２００３）、及び第０１５０６４１号（０３／１０／２００３）は、アスパラギン酸ユニットおよび／またはグルタミン酸ユニットを含有する新規な水溶性両親媒性ポリアミノ酸に関わり、これらユニットの少なくともいくつかが疎水性グラフトを有している。特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８号に開示された疎水性修飾されたポリアミノ酸のように、これら新規なポリマー出発物質は、水性液体媒体中においてＡＰ（インスリン）の延長された放出のために使用され得るナノ粒子のコロイド懸濁液を自発的に形成する。それらは生体適合性及び生分解性を有し、蛋白（特に治療蛋白）が化学修飾又は変性を施すことなくこれらナノ粒子上に自発的に吸着する。

前記特許出願は、更に、これらポリアミノ酸に基づく新規な薬学的組成物、化粧品組成物、食品組成物、又は植物衛生組成物に関するものである。

フランス特許出願第０２０７００８号に記載の両親媒性「疎水性修飾された」ポリアミノ酸は、少なくとも一つのアルファ−トコフェロールユニットを含む疎水性グラフトを有するアスパラギン酸ユニットおよび／またはグルタミン酸ユニット（例えば、合成又は天然由来のアルファ−トコフェロールでグラフトされたポリグルタメート又はポリアスパルテート）を含有する。

前記未公開特許出願は特に、ポリマー／活性蛋白会合から形成されるナノ粒子を含み且つ、アルファ−トコフェロールでグラフトされたポリグルタメート１ｍｇと、ｐＨ７．０の水１ｍｌ中のインスリン７ｍｇを混合することにより得られるコロイド懸濁液を開示している。

フランス特許出願第０２０９６７０号に記載の両親媒性「疎水性修飾された」ポリアミノ酸は、少なくとも一つの疎水性ユニットを含み且つ、二つのアミド基を含む回転結合（rotating linkage）（より正確には、リシン又はオルニチン型の「スペーサー」）を介してアスパラギン酸ユニットおよび／またはグルタミン酸ユニットに結合している疎水性グラフトを有するアスパラギン酸ユニットおよび／またはグルタミン酸ユニットを含有する。

前記未公開特許出願は特に、ポリマー／活性蛋白会合から形成されるナノ粒子を含み且つ、リシン「スペーサー」を介してパルミチン酸でグラフトされたポリグルタメート１０ｍｇと、ｐＨ７．４の水１ｍｌ中のインスリン（７．４ｍｇ）２００ＩＵを混合することにより得られるコロイド懸濁液を開示している。

フランス特許出願第０３５０１９０号に記載の両親媒性「疎水性修飾された」ポリアミノ酸は、アスパラギン酸ユニットおよび／またはグルタミン酸ユニットを含有するものであり、その中にはＬｅｕおよび／またはＩＬｅｕおよび／またはＶａｌおよび／またはＰｈｅに基づく「アミノ酸」「スペーサー」を介してアスパラギン酸ユニット又はグルタミン酸ユニットに結合する少なくとも一つのグラフトを有し、Ｃ６〜Ｃ３０疎水基がエステル結合を介して「スペーサー」に結合されているアスパラギン酸ユニットおよび／またはグルタミン酸ユニットを含有するものがある。

前記未公開特許出願は特に、ポリマー／活性蛋白会合から形成されるナノ粒子を含み且つ、−Ｌｕｅ−ＯＣ８、−Ｖａｌ−ＯＣ１２、又は−Ｖａｌ−コレステリルグラフトでグラフトされたポリグルタメート１０ｍｇと、ｐＨ７．４の水１ｍｌ当たりインスリン（７．４ｍｇ）２００ＩＵを混合することにより得られるコロイド懸濁液を開示している。

フランス特許出願ＦＲ−Ａ−０１５０６４１号は、アスパラギン酸ユニット又はグルタミン酸ユニットを含有する両親媒性直鎖ホモポリアミノ酸であって、８〜３０個の炭素原子を含む疎水基を末端に有する両親媒性直鎖ホモポリアミノ酸を開示している。

特に、「疎水性修飾された」テレケリック（telechelic）ホモポリアミノ酸は、例えば、ＰｈｅＯＣ１８／Ｃ１８末端を有するポリ［ＧｌｕＯＮａ］またはＰｈｅＯＣ１８／アルファ−トコフェロール末端を有するポリ［ＧｌｕＯＮａ］である。前記未公開特許出願はまた、ポリマー／活性蛋白会合から形成されるナノ粒子を含み且つ、上記ポリマーの中の１種とｐＨ７．４の水１ｍｌ当たりインスリン（７．４ｍｇ）２００ＩＵを混合することにより得られるコロイド懸濁液を開示している。

前記未公開特許出願に記載の懸濁液により「ベクトル化された」インスリンのインヴィヴォにおける放出時間は、有利に増加させることができた。

いずれにおいても、疎水性修飾されたポリアミノ酸のナノ粒子のコロイド懸濁液に関するこれら先行技術において、以下を可能とした調製物を開示するものはない。

（Ｉ）腸管外注射、特に皮下注射後の活性蛋白の放出時間を十分増大させること；
（ＩＩ）および／または活性蛋白を含む調製物の注射後に活性蛋白の血漿濃度ピークを減少させること。

上述した状況下ゆえに、本発明の本質的な目的は、先行技術の欠点を解決し、特に腸管外（例えば、皮下）注射後における、変性されていない有効成分（ＡＰ）（例えば、治療蛋白及びペプチド及び小分子）、例えばヒト又は合成蛋白のインヴィヴォにおける延長された放出時間を達成することを可能とする、有効成分の延長された放出のための液体薬学的調製物を提供することである。

本発明の他の本質的な目的は、インヴィヴォにおけるＡＰの延長された放出のための液体薬学的調製物であって、孔サイズが０．２ミクロン以下であるフィルターでの濾過により容易に注射することができ且つ滅菌することができる程度に十分な流動性を有する液体薬学的調製物を提供することである。

本発明の他の本質的な目的は、インヴィヴォにおけるＡＰの延長された放出のための液体薬学的調製物であって、物理化学的及び生物学的用語の双方において、貯蔵時に安定である液体薬学的調製物を提供することである。

本発明の他の本質的な目的は、インヴィヴォにおけるＡＰの延長された放出のための液体薬学的調製物であって、以下の特性：生体適合性、生分解性、非毒性、優れた局所的耐性のうち少なくとも一つの特性を有する液体薬学的調製物を提供することである。

本発明の他の本質的な目的は、インヴィヴォにおけるＡＰの緩慢な延長された放出のための薬学的調製物であって、少なくとも一つのＡＰと自己会合するポリマーＰＯのサブミクロン粒子を含有する低粘度の水性コロイド懸濁液であり、該ポリマーＰＯは疎水基を有する水溶性の生分解性ポリマーである薬学的調製物を提供することである。

本発明の他の本質的な目的は、インヴィヴォにおけるＡＰの緩慢な延長された放出のための薬学的調製物であって、少なくとも一つのＡＰと自己会合するポリマーＰＯのサブミクロン粒子を含有する低粘度の水性コロイド懸濁液であり、該ポリマーＰＯは、例えばアスパラギン酸ユニットおよび／またはグルタミン酸ユニットから形成されるポリアミノ酸であって、少なくともこれらユニットの中には少なくとも１の疎水基（ＨＧ）を含むグラフトを有するユニットが含まれ、ＰＯはまた生分解性であり、水溶性であり、且つ両親媒性である薬学的調製物を提供することである。

本発明の他の本質的な目的は、上に挙げた目的において言及した調製物の誘導生成物および／または前駆体を提供することである。

生理温度において低粘度であり、驚くべきことに、人間又は温血動物への容易な腸管外投与後にインヴィヴォにおいてゲル化沈殿物を形成する水性液体の薬学的調製物を開発したことは、特に本出願人の功績である。この沈殿物の調製物は、腸管外注射時のｐＨ又は温度変化により、もしくは生理濃度における電解質（Ｃａ^＋＋イオン等）、及び／又は少なくとも１の界面活性剤の存在により、もしくは生理媒体中の有機溶媒の分散により誘発されない。このようにして形成されるゲル化沈殿物は、ＡＰのインヴィヴォにおける放出時間を有意に増加させる。

このように、本発明は、有効成分（ＡＰ）の延長された放出のための液体薬学的調製物に関するものであり、該薬学的調製物は疎水基（ＨＧ）を有する水溶性の生分解性ポリマー（ＰＯ）のサブミクロン粒子に基づく低粘度の水性コロイド懸濁液を含有し、前記粒子は少なくとも１の有効成分（ＡＰ）と非共有結合的に会合している薬学的調製物であって、
・懸濁液の分散媒体が本質的に水からなり、
・前記調製物が腸管外により注射され得、その後インヴィヴォにおいてゲル化沈殿物を形成することができ（ここで、このゲル化沈殿物の形成は、
・一方では、少なくとも一部はインヴィヴォにおいて存在する少なくとも一つの生理蛋白に起因し、
・他方では、投与後２４時間を超えてＡＰのインヴィヴォにおける放出時間を延長し調節することを可能とするものである。）、
・注射条件下において液体であり、
・生理温度および／または生理ｐＨおよび／または下記存在下：
・生理濃度における生理電解質、および／または
・少なくとも一つの界面活性剤
においてもまた液体である、ことを特徴とする薬学的調製物である。

有利なことに、このインヴィヴォにおけるゲル化は、ｐＨ及び／又は温度変化、または生理濃度における電解質（例えば、Ｃａ^＋＋）、及び／又は少なくとも１の界面活性剤の存在、または注射された調製物中に存在し得る１又は２以上の有機溶媒のインヴィヴォにおける分散に起因しない。

理論による拘束を押し付けられることなしに、生理濃度においてインヴィヴォに存在する生理蛋白により、少なくとも一つのＡＰと会合するＰＯのナノ粒子が凝集し得ると考えることができる。このようなゲル化は、とりわけ、例えば１時間又は１時間以上、２４時間、４８時間又は７２時間後に起こる。

本発明の最適化された態様において、調製物中の［ＰＯ］濃度は、少なくとも１の生理蛋白の存在下において、腸管外による注射後にインヴィヴォにおいてゲル化沈殿物の形成を可能ならしめるのに十分な程度に高値に設定される。

上記に示したようなインヴィヴォにおける作用ではなくインヴィトロにおける作用に基づく定義の一形態によれば、本発明は、有効成分の延長された放出のための液体薬学的調製物に関するものであり、
・雰囲気において液体であり、
・生理温度および／または生理ｐＨおよび／または下記存在：
・生理濃度における生理電解質、および／または
・少なくとも一つの界面活性剤
においても液体であり、
・該薬学的調製物は疎水基ＨＧを有する水溶性の生分解性ポリマーＰＯのサブミクロン粒子に基づく低粘度の水性コロイド懸濁液を含有し、前記粒子は少なくとも１の有効成分ＡＰと非共有結合的に会合しており、前記懸濁液の分散媒体は本質的に水からなる薬学的調製物であって、
［ＰＯ］濃度が、少なくとも一つの蛋白の存在下に、インヴィトロにおけるゲル化沈殿物の形成を可能ならしめるに十分な程度に高値にされていることを特徴とする液体薬学的調製物である。

好ましくは、本発明による液体薬学的調製物はその［ＰＯ］濃度が以下のものである：
・［ＰＯ］≧０．９．Ｃ１、
・好ましくは、２０．Ｃ１≧［ＰＯ］≧Ｃ１、
・特に好ましくは、１０．Ｃ１≧［ＰＯ］≧Ｃ１である。

ここでＣ１は、ＩＧ試験において測定される、ＰＯ粒子の「誘発されたゲル化」濃度である。

該調製物の腸管外投与後に得られるゲル化沈殿物により、ＡＰ（例えば、治療蛋白）の放出時間の重要な延長、並びに血漿濃度ピークの減少が達成され得る。

ＡＰの放出時間は、先行技術の調製物、特に発行されたＰＣＴ出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８号及び未発行のフランス特許出願第０２０７００８号、第０２０９６７０号、第０３５０１９０号及び第０１５０６４１号に開示された調製物の放出時間と比較し、有意に増加している。

本発明の調製物により誘導されるインヴィヴォにおけるＡＰの放出時間の延長は、ＡＰ（例えば、治療蛋白）はまだ十分に生物活性であり変性されていないため、極めて価値がある。

本発明の開示を通して、ＡＰと会合している、もしくは会合していないポリマーＰＯの超分子アレンジメントは、任意に、「サブミクロン粒子」又は「ナノ粒子」と言われ得る。これらは、動的直径１乃至５００ｎｍ、より好ましくは５乃至２５０ｎｍ（後掲の実施例において規定するＭｄ手順により測定）を有する（液体又は固体）粒子に相当する。

さらに、これら調製物が液体であること、すなわち、有利なことに、これら調製物は極低粘度であり、そのため注射し易いことに注目することは大変重要である。これらはインヴィヴォにおいてのみゲル化する。

本発明によれば、「液体」、「低粘度」又は「極低粘度」の性質は、２０℃における動的粘度が５Ｐａ．ｓ以下に有利に相当する。粘度において参照される測定は、例えば、２０℃において、円錐−平板ジオメトリー（４ｃｍ、２°）を備えたＡＲ１０００レオメーター（ＴＡインストルメンツ）を用いて行われ得る。粘度ｖは、１０ｓ^−１のせん断勾配で測定される。

従って、本発明による調製物の粘度は、例えば、１．１０^−３〜５Ｐａ．ｓ、好ましくは１．１０^−３〜０．８Ｐａ．ｓ、特に好ましくは１．１０^−３〜０．５Ｐａ．ｓ、であり得る。

本発明の調製物は、低粘度であるために、とりわけ腸管外（特に、筋肉内又は皮下）に注射することが容易であるのみならず、孔サイズ０．２μｍの滅菌フィルターでの滅菌により、削減したコストで容易に滅菌することも可能である。

本発明の調製物におけるこの液体状態又は低粘度は、周囲温度（例えば、４〜３０℃）に対応する注射温度及び生理温度の双方において存在する。

本発明による調製物は、好ましくは、１又は２以上のＡＰと会合したナノ粒子の水性コロイド懸濁液である。本発明において、これはかかる懸濁液の分散媒体が本質的に水から形成されることを意味する。実際には、この水は、例えば調製物の全質量に対して少なくとも５０質量％以上であることを表わす。

本発明に関して、用語「蛋白」は、蛋白またはペプチドのいずれも意味し、修飾されていない蛋白又はペプチドでも、また例えば１又は２以上のポリオキシエチレン基のグラフトにより修飾された蛋白又はペプチドであってよい。

本発明に関して「生理蛋白」は、注射部位に存在する温血動物の内因性蛋白および／またはペプチドを意味するものと理解される。

本発明に関して「生理温度」は、温血動物の生理温度、すなわち、約３７〜４２℃を意味するものと理解される。

本発明に関して「生理ｐＨ」は、例えば、ｐＨ６〜７．６を意味するものと理解される。

本発明に関して「ゲル」は、生理ｐＨおよび／または生理温度および／または生理電解質（例えば、Ｃa^＋＋）および／または注射された調製物中に存在し得る有機溶媒のインヴィヴォにおける分散（又は消散）が本質的に介入することなく、本発明の液体調製物が生理蛋白の存在によってのみ自発的に変質する半固体状態を意味するものと理解される。

本発明に関して「生理電解質」は、温血動物中に存在するすべての電解質種（例えば、Ｃa^＋＋イオン）を意味するものと理解される。

本発明に関して「生理濃度」は、当該生理媒体の温血動物において見られるすべての生理濃度を意味するものと理解される。

加えて、本発明の調製物は非毒性であり、優れた局所的耐性を有し、安定である。
また、本発明による好ましい調製物の集団を選択し、該調整物におけるＰＯの好適濃度を決定するためのインヴィトロにおけるＩＧ試験を開発したことは、本発明者等の功績である。

本発明によれば、ゲル化濃度Ｃ１を測定するためのＩＧ試験は、本発明の各コロイド調製物を特徴付ける臨界濃度Ｃ１（以下において、誘導ゲル化濃度Ｃ１と称する。）を規定するための参照試験である。

誘導ゲル化濃度Ｃ１を決定するためのＧＩ試験は以下の通りである。
濃度Ｃ１は、本発明による両親媒性ポリマーを様々な濃度において含有するコロイド調製物と治療蛋白を一定濃度において含有するコロイド調製物を調製することにより決定する。このために、乾燥粉末ポリマー量を増加させて脱イオン化水に溶解する。溶液は、治療蛋白の濃縮溶液と混合する前に、磁気攪拌しながら２５℃において１６時間おく。治療蛋白のこの溶液の容量及び濃度を、調製物において所望される蛋白濃度となるよう調整する［例えば、インターフェロン２ｂ ０．３ｍｇ／ｍｌ、又はインターロイキン２（ＩＬ２） ２．５ｍｇ／ｍｌ］。

このように調製されたコロイド調製物を、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）３０ｍｇを含有する濃縮水溶液と混合し、次いで１５分間３０００ｒｐｍにおいて遠心分離機にかける。混合物を静かに２４時間攪拌し、特徴づけのために回収する。

円錐−プレートジオメトリー（直径４ｃｍ、角度１．５９°）を備えたＴＡインストルメンツ ＡＲ１０００レオメーターで粘弾性測定を行う。０．０１ｒａｄの変形（線形粘弾性領域に位置する。）が、０．１〜３００ｒａｄ／ｓの周波数範囲に亘り、正弦的に変調して置かれる。サンプル温度は、ペルチエセル（Peltier cell）の手段により２０℃に保たれる。

弾性Ｇ’の変調及び粘度の変調又は損失変調Ｇ”の振動スペクトルは、特有の緩和時間Ｔｒを規定させることができ、該緩和時間Ｔｒは、弾性Ｇ’の変調が粘性Ｇ”の変調と交差する周波数の逆数として本発明において規定される。これらの詳細な説明は、フェリーによるビスコエラスティック・プロパティーズ・オブ・ポリマー（Viscoelastic Properties of Polymers）と題された著書（Ｊ．Ｄ．Ｆｅｒｒｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ、ＮＹ、１９８０）及びＪ．ＲＥＧＡＬＡＤＯ等による論文マクロモルキュールズ（Macromolecules）（１９９９、３２、８５８０）に見出すことができる。

該調製物のポリマー濃度の関数として緩和時間Ｔｒの測定により、この時間Ｔｒが１秒を超える際の濃度Ｃ１を規定することが可能となる。ゲル化濃度Ｃ１の値の例は、後掲の例８に記載されている。

同様に、緩和時間が各々０．１秒及び１０秒を超える際の濃度Ｃ０．１及びＣ１０を規定することができる。これらの濃度は次の増加順：Ｃ０．１＜Ｃ１＜Ｃ１０に分類される。

本発明に係る調製物の変形例の一つは、
・［ＰＯ］≧Ｃ０．１、
・好ましくは、［ＰＯ］≧Ｃ１、
・特に好ましくは、［ＰＯ］≧Ｃ１０、である。

有利な更なる特徴は、［ＰＯ］≦２０．Ｃ１、である。

本発明に関しては本開示を通して、１又は２以上の有効成分とポリマーＰＯ（例えば、ポリアミノ酸）との間の関係を限定するために使用される「会合」および「会合体」の用語は、有効成分がポリマーＰＯ（例えば、ポリアミノ酸）に、例えば、静電的及び／又は疎水相互作用的及び／又は水素結合及び／又は立体障害により非共有結合的に結合していることを特に意味する。

本発明によるポリマーＰＯは、疎水基ＨＧを有する水溶性の生分解性ポリマーである。疎水基は、鎖の残部に比例して数が減少していることがあり、鎖の側部に結合し又は鎖の間に挿入されており、不規則に分布し(ランダム共重合)、または連続形態で又はグラフト形態で分布し得る（ブロック共重合又はシーケンス共重合）。

限定するものではないが、疎水性修飾されたポリマーＰＯは、両親媒性コポリアミノ酸、多糖類（好ましくは、プルラン（pullulan）及び／又はキトサン及び／又はムコ多糖を含有する小群における多糖類）、ゼラチン、およびこれらの混合物を含有する群から選択され得る。

本発明の好ましい一形態は、ＰＯが両親媒性コポリアミノ酸から選択される。
本発明に関しては本開示を通して、「ポリアミノ酸」の用語は、２〜２０個の「アミノ酸」ユニットを含有するオリゴアミノ酸および２０個を超える「アミノ酸」ユニットを含有するポリアミノ酸の双方を含む。

好ましくは、本発明によるポリアミノ酸は、グルタミン酸又はアスパラギン酸繰り返しユニットを含むオリゴマー又はホモポリマー、またはこれら二つの型の「アミノ酸」の混合物を含む共重合体である。これらポリマーにおける当該ユニットはＤ、Ｌ、又はＤ／Ｌ配置を有するアミノ酸であり、グルタメート又はグルタミン酸ユニットの場合にはアルファ又はガンマ位を介して、アスパラギン酸又はアスパルテートの場合にはアルファ又はベータ位を介して結合している。

好ましいポリアミノ酸主鎖の「アミノ酸」ユニットはＬ配置およびアルファ型結合を有するものである。

本発明の特に好ましい一形態において、ポリマーＰＯは、少なくともいくつかが少なくとも一つの疎水基ＨＧを含むグラフトを有するアスパラギン酸ユニット及び／又はグルタミン酸ユニットから形成されるポリアミノ酸である。これらのポリアミノ酸は、特にＰＣＴ出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８号に開示されている型である。

第一の可能性によると、調製物のＰＯは、下記一般式（Ｉ）により規定される：

式中、
・Ｒ^１は、Ｈ、直鎖Ｃ２〜Ｃ１０アルキル又は分岐鎖Ｃ３〜Ｃ１０アルキル、ベンジル、末端アミノ酸ユニット又は−Ｒ^４−［ＨＧ］であり；
・Ｒ^２は、Ｈ、直鎖Ｃ２〜Ｃ１０アシル又は分岐鎖Ｃ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート又は−Ｒ^４−［ＨＧ］であり；
・Ｒ^３は、Ｈ、又は好ましくは以下を含む群から選択されるカチオン体であり：
−ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムを含む小群から有利に選択される金属カチオン、
−以下の小群から有利に選択される有機カチオン：
・アミンに基づくカチオン、
・オリゴアミンに基づくカチオン、
・ポリアミン（特に好ましくはポリエチレンアミン）に基づくカチオン、
・リシン又はアルギニンに基づくカチオンを含むクラスから有利に選択されるアミノ酸に基づくカチオン、
−ポリリシンおよびオリゴリシンを含む小群から有利に選択されるカチオンポリアミノ酸；
・Ｒ^４は、直接結合又は１〜４個のアミノ酸ユニットに基づく「スペーサー」であり；
・Ａは、独立に、ラジカル−ＣＨ_２−（アスパラギン酸ユニット）又は−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（グルタミン酸ユニット）であり；
・ｎ／（ｎ＋ｍ）は、モルグラフト化率として定義され、その値は、ｐＨ７、２５℃において水中に溶解しているＰＯがＰＯのサブミクロン粒子のコロイド懸濁液を形成するのに十分低く、ｎ／（ｎ＋ｍ）は好ましくは１〜２５ｍｏｌ％であり、特に好ましくは１〜１５ｍｏｌ％である；
・ｎ＋ｍは重合度として定義され、１０〜１０００であり、好ましくは５０〜３００である；
・ＨＧは疎水基である。

第二の可能性によると、調製物のＰＯは、下記一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（ＩＶ）のいずれかを有する：

式中、
・ＨＧは、疎水基であり；
・Ｒ^３０は、直鎖Ｃ２〜Ｃ６アルキル基であり；
・Ｒ^３’は、Ｈ、または好ましくは以下：
−ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムを含む小群から有利に選択される金属カチオン、
−以下を含む小群から有利に選択される有機カチオン：
・アミンに基づくカチオン、
・オリゴアミンに基づくカチオン、
・ポリアミン（特に好ましくはポリエチレンアミン）に基づくカチオン、
・リシン又はアルギニンに基づくカチオンを含むクラスから有利に選択されるアミノ酸に基づくカチオン；
−ポリリシンおよびオリゴリシンを含む小群から有利に選択されるカチオンポリアミノ酸；
を含む群から選択されるカチオン体であり；
・Ｒ^５０は、Ｃ２〜Ｃ６アルキル、ジアルコキシ又はジアミン基であり；
・Ｒ^４は、直接結合又は１〜４個のアミノ酸ユニットに基づく「スペーサー」であり；
・Ａは、独立に、ラジカル−ＣＨ_２−（アスパラギン酸ユニット）又は−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（グルタミン酸ユニット）であり；
・ｎ’＋ｍ’又はｎ”は、重合度として規定され、１０〜１０００であり、好ましくは５０〜３００である。

有利には、ＰＯのＨＧは各々独立に、下式で表される一価ラジカルである：

式中、
−Ｒ^５は、メチル（アラニン）、イソプロピル（バリン）、イソブチル（ロイシン）、ｓｅｃブチル（イソロイシン）、又はベンジル（フェニルアラニン）であり；
−Ｒ^６は、６〜３０個の炭素原子を含む疎水性ラジカルであり；
−ｌは、０〜６である。

本発明の顕著な一つの特徴によると、ＰＯのすべて又はいくつかの疎水基Ｒ^６は、各々独立に、以下を含むラジカル群から選択される：
・６〜３０個の炭素原子を含む直鎖又は分岐鎖のアルコキシであり、少なくとも１個のヘテロ原子（好ましくは、Ｏ及び／又はＮ及び／又はＳ）、および／または少なくとも１個の不飽和ユニットを任意に含むアルコキシ、
・６〜３０個の炭素原子を含むアルコキシであり、１個又は２個以上の縮合炭素環を有し、任意に少なくとも１個の不飽和ユニット及び／又は少なくとも１個のヘテロ原子（好ましくは、Ｏ及び／又はＮ及び／又はＳ）を含むアルコキシ、
・７〜３０個の炭素原子を含むアルコキシアリールまたはアリールオキシアルキルであり、任意に少なくとも１個の不飽和ユニット及び／又は少なくとも１個のヘテロ原子（好ましくは、Ｏ及び／又はＮ及び／又はＳ）を含むアルコキシアリールまたはアリールオキシアルキル。

限定するものではないが、実際には、ＰＯのグラフトの疎水基Ｒ^６は、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロールおよびコレステロールを含む群から選択されるアルコール前駆体から誘導される。

本発明の第一の態様において、ポリアミノ酸の主鎖は、アルファ−Ｌ−グルタメート又はアルファ−Ｌ−グルタミン酸ホモポリマーである。

本発明の第二の態様において、ポリアミノ酸の主鎖は、アルファ−Ｌ−アスパルテート又はアルファ−Ｌ−アスパラギン酸ホモポリマーである。

本発明の第三の態様において、ポリアミノ酸の主鎖は、アルファ−Ｌ−アスパルテート／アルファ−Ｌ−グルタメート又はアルファ−Ｌ−アスパラギン酸／アルファ−Ｌ−グルタミン酸共重合体である。

有利には、ＰＯの主鎖ポリアミノ酸のアスパラギン酸及び／又はグルタミン酸ユニットの分布は、得られるポリマーがランダム又はブロック型又はマルチブロック型の何れかであるような分布である。

規定される他の態様によれば、本発明による調製物において使用されるＰＯは、分子量が２０００〜１０００００ｇ／ｍｏｌであり、好ましくは５０００〜４００００ｇ／ｍｏｌである。

変形の一例において、本発明による調製物のＰＯは、グルタメート及び／又はアスパルテートユニットに結合するポリアルキレングリコール型の少なくとも一つのグラフトを有する。

有利には、このポリアルキレングリコール型のグラフトは下記式（Ｖ）を有する：

式中、
−Ｒ’^４は、直接結合又は１〜４個のアミノ酸ユニットに基づく「スペーサー」であり、
−Ｘは、酸素、窒素および硫黄を含む群から選択されるヘテロ原子であり；
−Ｒ^７およびＲ^８は、各々独立に、Ｈ又は直鎖Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
−ｎ’’’は、１０〜１０００であり、好ましくは５０〜３００である。

実際には、ポリアルキレングリコールは、例えば、ポリエチレングリコールである。

本発明においては、グラフトするポリアルキレングリコールのモル百分率は、１〜３０％の範囲であることが望ましい。

ポリアミノ酸ＰＯはまた、調節可能なグラフト化率を有し、ｐＨ７．４の水（例えば、ホスフェートバッファー）中に分散してコロイド懸濁液を提供する点で極めて重要である。

さらに、蛋白等の有効成分、ペプチド又は小分子は、これらのポリアミノ酸ＰＯを含むナノ粒子と自発的に会合することができる。

ポリアミノ酸に基づくＰＯは、ｐＨおよび組成により中性（ＣＯＯＨ型）又はイオン化（ＣＯＯ⁻アニオン）のいずれかをとるカルボキシル基を含むことは理解されるであろう。このため、水相中の溶解性は、ＰＯ（疎水ユニットでグラフトされていない。）中のフリーＣＯＯＨ基の割合及びｐＨの直接関数である。水溶液中において、対カチオンはナトリウム、カルシウム又はマグネシウム等の金属カチオン、又はトリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等の有機カチオン、又はポリエチレンイミン等のポリアミンであり得る。

本発明の調製物において使用することが可能なポリアミノ酸型のＰＯは、例えば当業者に公知の方法により得られる。ランダムポリアミノ酸は、予め「スペーサー」で官能化された疎水グラフトを、従来のカップリング反応によりポリマーに直接的にグラフトすることにより得ることができる。ブロック又はマルチブロックポリアミノ酸ＰＯは、対応するアミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）の連続重合により得ることができる。

例えば、ホモポリグルタメート又はホモポリアスパルテートポリアミノ酸、またはブロック、マルチブロック又はランダムグルタメート／アスパルテート共重合体は、従来法により調製される。

アルファ型のポリアミノ酸を得るための最も一般的な技術は、アミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）の重合に基づき、例えば、論文「バイオポリマーズ」（"Biopolymers"）、1976、15、1869及び、「アルファ−アミノ・エーシッド・Ｎ−カルボキシ・アンハイドライド・アンド・リレーテッド・ヘテロサイクルズ」（"Alpha-amino acid N-carboxy anhydrides and related heterocycles"）、Springer Verlag (1987)に記載されている。該ＮＣＡ誘導体は、好ましくはＮＣＡ−Ｏ−Ｍｅ、ＮＣＡ−Ｏ−Ｅｔ又はＮＣＡ−Ｏ−Ｂｚ誘導体である（Ｍｅ＝メチル、Ｅｔ＝エチル、及びＢｚ＝ベンジル）。ポリマーは、次いで好適条件下において加水分解され、その酸性形体においてポリマーを提供する。これらの方法は、特許ＦＲ−Ａ−２８０１２２６号に開示された記載に基づいている。本発明において使用され得る多くのポリマー、例えば、様々な分子量のポリ（アルファ−Ｌ−アスパラギン酸）、ポリ（アルファ−Ｌ−グルタミン酸）、ポリ（アルファ−Ｄ−グルタミン酸）、及びポリ（ガンマ-Ｌ-グルタミン酸）型が商業的に入手可能である。アルファ−ベータ型のポリアスパラギン酸ポリマーが、アスパラギン酸の縮合（ポリスクシンイミドを得るため）、それに続く塩基性加水分解により得られる（ｃｆ．トミダ等、ポリマー、１９９７、３８、４７３３−３６）。

ポリマーの酸性基とのグラフトのカップリングは、カップリング試薬としてカルボジイミド、及び任意に４−ジメチルアミノピリジン等の触媒の存在下、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の好適な溶媒中でポリアミノ酸を反応させることにより容易に影響される。グラフト化率は、組成および反応物の化学量論により、または反応時間により化学的に調節される。「スペーサーで」官能化された疎水グラフトは、従来のペプチドカップリング又は酸触媒下における直接的な縮合により得られる。これらの技術は、当業者に周知である。

ブロック又はマルチブロック共重合体は、ＮＣＡ誘導体を用いて合成され、好ましくは疎水グラフトで合成される。例えば、疎水ＮＣＡ誘導体はＮＣＡ−Ｏ−ベンジルを用いて共重合され、該ベンジル基は次いで加水分解により選択的に除去される。

ポリアミノ酸ＰＯの合成は、好ましくはＰＯのナノ粒子の水性懸濁液を製造する。

かかる懸濁液は、当業者に知られた適切な方法（例えば、加熱（オーブン等）、排気、乾燥剤の使用、凍結乾燥、又は噴霧化）における乾燥によりＰＯの紛化ナノ粒子に転化され得る。

これらＰＯのナノ粒子は、懸濁液又は粉状物において、本発明による調製物の製造のための出発物質を形成する。

この点において、本発明による調製物は、水性液体媒体中において、少なくとも１のＰＯ及び少なくとも１のＡＰに基づくナノ粒子の非共有結合的会合に起因するということができる。

製造において、ＰＯおよび／またはＡＰは、固体形態（好ましくは粉末）、および／または液体形態（好ましくはコロイド水性懸濁液）であり得る。

本開示における用語において、ＡＰ／ＰＯ会合は、ＡＰがポリマーＰＯ［例えば、１又は２以上のポリアミノ酸］と共有結合形の化学結合以外の１又は２以上の結合により会合していることを意味する。

本発明による１又は２以上のＡＰとＰＯとの会合のための技術は、特に特許出願ＷＯ−Ａ−００／３０６１８号に詳しい。該技術は、少なくとも１のＡＰをＰＯのナノ粒子を含む液体媒体に含ませ、１又は２以上の有効成分を充填又は会合させたナノ粒子のコロイド懸濁液を提供することからなる。

従って、本発明は更に、前記調製物の製造方法に関するものである。

本発明を実施する第一の好ましい形態において、該方法は、本質的に下記：
・少なくとも１のＰＯのナノ粒子のコロイド懸濁液を得ること、
・このＰＯのナノ粒子のコロイド懸濁液と少なくとも１のＡＰとを、好ましくは水溶液中で混合すること、
・任意に、少なくとも１の賦形剤を加えること、
・必要に応じｐＨおよび／または浸透圧濃度を調整すること、
・任意に、得られる懸濁液を濾過すること、
からなることを特徴とする。

ＡＰは、ＰＯのナノ粒子のコロイド懸濁液と混合するために、水性懸濁液又は溶液の形態であることが有利である。

本発明を実施する第二の形態において、該方法は、本質的に下記：
・少なくとも１のポリマーＰＯの粉末を得ること、
・この粉末と少なくとも１のＡＰの水性懸濁液又は水溶液とを、好ましくは水溶液中で混合すること、
・任意に、少なくとも１の賦形剤を加えること、
・必要に応じｐＨおよび／または浸透圧濃度を調整すること、
・任意に、得られる懸濁液を濾過すること、
からなることを特徴とする。

このようにして得られる調製物はまた、当業者に公知の従来法、とりわけ、濾過又はエバポレーションによる濃縮、コーティング、噴霧化又は凍結乾燥によりゲル、粉末又はフィルターに変えることができる。これらの方法は任意に組み合わせてもよい。

よって、本発明による液体調製物の製造方法を実施する第三の形態があり、この第三の形態は、本質的に下記：
・上記に規定の本発明による液体調製物を乾燥することにより製造される粉末を得ること、
・この粉末を水性液体媒体とを、好ましくは攪拌しながら混合すること、
・任意に、少なくとも１の賦形剤を加えること、
・必要に応じｐＨおよび／または浸透圧濃度を調整すること、
・任意に、得られる懸濁液を濾過すること、
からなる。

加えられ得る賦形剤の例としては、抗菌薬、バッファー、抗酸化薬、等浸透圧性を調製するための試薬が挙げられ、これらは当業者に公知である。参考文献としては、論文Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｐ．Ｋ．Ｇｕｐｔａ等、Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｄｅｎｖｅｒ、Ｃｏｌｏｒａｄｏ、１９９９．が挙げられる。

効果がある場合には、例えば、液体調製物を０．２μｍの孔を有するフィルターで濾過することにより滅菌することができる。

本発明による液体調製物の製造におけるこれらすべての具体例は、雰囲気及び周囲温度（例えば、２５℃）において有利に実行される。

他の特徴において、本発明には、上記に規定した本発明による液体調製物から得られるすべての誘導生成物が含まれ、上記に規定のＰＯ／ＡＰ非共有結合会合の形成されたサブミクロン粒子を含む。

実際には、これら誘導生成物は特に、とりわけ粉末、ゲル、インプラント又はフィルムからなり得る。

本発明は更に、上記に規定した注射可能な液体調製物のすべての前駆体に関するものである。

これら誘導生成物の主題に関してはまた、本発明が更に、上記に規定した調製物から得られる粉末誘導体の製造方法に関するものであることを強調しなければならない。この方法は前記粉末が上記に規定の乾燥調製物により得られることを特徴とする。

本発明において、ＡＰは、蛋白、糖蛋白、１又は２以上のポリアルキレングリコール鎖と結合した蛋白［好ましくは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖：「ＰＥＧ化蛋白」］、多糖、リポサッカリド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド又はペプチドであり得る。

ＡＰは、好ましくは、ヘモグロビン、シトクロム、アルブミン、インターフェロン、サイトカイン、抗原、抗体、エリトロポイエチン、インスリン、成長ホルモン、第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子、インターロイキン又はその混合物、造血刺激因子、及びこれらの混合物から選択される。

変形例の一つにおいて、該有効成分は、アントラサイクリン、タキソイド又はカンプトテシン族に属する型、もしくはペプチド族に属する型の疎水性、親水性、又は両親媒性「小」有機分子であり、例えば、ロイプロリド又はシクロスポリン、及びこれらの混合物である。

本発明の開示において、「小」分子は、特に、小さな非蛋白分子である。
小分子を除く全てのＡＰに関連する、本発明による調製物の重要な変形例の一つにおいて、ポリマーＰＯのナノ粒子と会合しない有効成分ＡＰの重量画分（調製物の合計質量に対する％）は：
・［非会合ＡＰ］≦１、
・好ましくは、［非会合ＡＰ］≦０．５、
である。

本発明による調製物の第一の特徴には、その注射可能性及び、生理蛋白又は類縁体の存在下、インヴィヴォにおいてナノ粒子のゲル化又は凝集により注射位置に沈殿物を形成する性能が含まれる。

本発明による調製物は、特に腸管外、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内又は大脳内経路により注射され得、あるいは腫瘍内へ注射され得る。

本発明による調製物はまた、経口、経鼻腔、経膣、又は眼内経路によっても投与され得る。

有利には、該調製物は、特に腸管外、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内又は大脳内経路による投与又は腫瘍内への投与、もしくは経口、経鼻腔、経膣、又は眼内経路による投与用の薬物の製造を意図されている。

本発明による調製物は、好ましくは薬学的に用いられるが、上記に規定の少なくとも１のＰＯ及び少なくとも１の対応する有効成分を含有する化粧品調製物、食品調製物、又は植物衛生調製物を除外するものではない。

さらに他の特徴によると、本発明は、特に腸管外経路、皮下経路、筋肉内経路、皮内経路、腹腔内経路又は大脳内経路による投与又は腫瘍内への投与、もしくは経口、経鼻腔、経膣又は眼内経路による投与用の薬物の製造方法に関するものであり、本質的に上記に規定された少なくとも一つの調製物および／または該調製物の誘導生成物および／または前駆体を使用することからなることを特徴とする。

本発明は更に、本質的に、本開示により規定した調製物を、腸管外、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内又は大脳内経路により投与すること又は腫瘍内へ投与すること、もしくは経口、経鼻腔、経膣又は眼内経路により投与することからなる治療学的処置方法に関するものである。

本発明の特定の一変形例において、この治療学的処置方法は、本質的に、上記に規定の調製物を、注射により、腸管外、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内又は大脳内経路により又は腫瘍内へ投与することからなり、好ましくはかかる方法において、注射部位にゲル化又は架橋結合した沈殿物を形成する。

後掲の実施例から、本発明はより明確に理解され、その有利性及び変形は、はっきりと明瞭になるであろう。該実施例では、疎水基でグラフトされたポリアミノ酸から形成されたＰＯの合成、及びＡＰの延長された放出のための系への転化、すなわち、本発明による調製物（安定な水生コロイド懸濁液）について記載され、かかる系の、インヴィヴォにおけるかなり延長された態様において治療蛋白を放出するために治療蛋白のみならず、特にゲル／架橋に関連付けられる性能について示している。

例１：両親媒性ポリマーＰ１
合成由来のアルファ−トコフェロールでグラフトされたポリグルタメートの合成
アルファ−Ｌ−ポリグルタメート（ポリオキシエチレン標準との比較において、約１０，０００Ｄａに相当する分子量を有し、特許出願ＦＲ−Ａ−２８０１２２６号に記載されているように、ＮＣＡＧｌｕＯＭｅの重合、次いで水分解により得られる。）５．５ｇを、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）９２ｍｌに４０℃で２時間加熱することにより可溶化する。いったんポリマーが溶解したら、温度を２５℃に下げ、連続してＤ，Ｌ−アルファ−トコフェロール（＞９８％、Ｆｌｕｋａ（登録商標）から入手）１．４９ｇを好ましくはＤＭＦ６ｍｌに溶解させて加え、４−ジメチルアミノピリジン０．０９ｇを好ましくはＤＭＦ６ｍｌに溶解させて加え、ジイソプロピルカルボジイミド０．５７ｇを好ましくはＤＭＦ６ｍｌに溶解させて加える。攪拌しながら２５℃において８時間後、反応媒体を、塩化ナトリウム１５％及び塩酸（ｐＨ２）を含む水８００ｍｌに注ぐ。次いで、沈殿したポリマーを濾過して回収し、０．１Ｎの塩酸、次いで水で洗浄する。続いてポリマーをＤＭＦ７５ｍｌに再溶解させ、次いで上述した塩および酸（ｐＨ２）を含む水で再沈殿させる。水で２回洗浄した後、沈殿物をジイソプロピルエーテルで数回洗浄する。次いでポリマーを減圧下においてオーブンで４０℃で乾燥させ、８５％の収率を得る。

例２：両親媒性ポリマーＰ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６
これらポリマーをポリマーＰ１と同様に得る。下記表１にこれらポリマーの特徴を要約する。ポリマーＰ１の特徴は比較として与えられる。

例３：ポリマーＰ６に基づくインターフェロンアルファ２ｂ（ＩＦＮ）３０ｍｌの製造
（ａ）両親媒性ポリマーのコロイド溶液の調製
前記例１の両親媒性ポリアミノ酸Ｐ６の冷凍乾燥粉末１．５ｇをフラスコに入れる。この粉末を注射用の滅菌水３０ｍｌに溶解する。ポリマー溶液を磁気攪拌しながら１６時間３５℃に保つ。Ｆｉｓｋｅ Ｍａｒｋ ３ 浸透圧計を利用し、溶液の浸透圧濃度を、必要量のＮａＣｌ水溶液（３０％ｗ／ｗ）５．１３Ｍを入れることにより２７５±２０ｍＯｓｍｏｌに調整する。必要に応じて１ＮのＮａＯＨ溶液を添加することにより、ｐＨを７．４±０．２に調整する。滅菌した０．１５ＭのＮａＣｌ水溶液を添加して、ポリマー濃度を４５ｍｇ／ｍｌに調整する。続いて、ポリマー溶液を孔サイズ０．８及び０．２ミクロンのフィルターで濾過し、次いで４℃で保存する。

（ｂ）蛋白とポリマーとの会合
次に、上記ポリマーＰ６のコロイド溶液２６．６５ｍｌとＩＦＮ溶液１．８５ｍｌ（ＰＣ ＧＥＮ；２．４２ｍｇ／ｍｌを含む濃縮溶液）をガラスフラスコ内で混合する。必要に応じ、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液及び０．９％滅菌塩化ナトリウムを添加して、浸透圧濃度及びｐＨを、３００±２０ｍＯｓｍｏｌ及び７．４±０．２に再調整する。蛋白が充填された溶液をオーブン中において２５℃で５時間熟成させ、次いで０．８〜０．２ミクロンフィルターで濾過する。これにより、ＩＦＮ０．１５ｍｇ／ｍｌ及びポリマーＰ６ ４０ｍｇ／ｍｌを含む既成の注射調製物３０ｍｌが得られる。

例４：ポリマーＰ１〜Ｐ５に基づく、本発明による長活性ＩＦＮ調製物の製造
本製造は例３に従い、まず、所望の最終濃度の１．２５倍のコロイド溶液を調製し、次いでこの溶液を、インターフェロンを２．４２ｇ含む濃縮インターフェロン溶液と混合することにより実施する。蛋白溶液の容量は、意図する蛋白濃度に対するポリマー濃度比を選択することにより決定する。例３に記載のように、濃度及びｐＨ調整は、ＮａＣｌ溶液及び水酸化ナトリウム溶の添加によりなされる。

例５：Ｐ３に基づく、本発明による長活性インターロイキン２（ＩＬ２）の製造
両親媒性ポリマーの凍結乾燥粉末及び滅菌水を、調製物における所望される最終濃度に対しポリマー濃度Ｘ＝１．３倍を得るための必要量においてフラスコに入れる。溶解は、磁気攪拌しながら１６時間続ける。

凍結乾燥したＩＬ２（Ｐｒｏｓｐｅｃ）の必要量を、所望される最終濃度のＸ／（Ｘ−１）倍まで濃縮する。

濃縮されたＩＬ２溶液の正確な濃度を、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｌａｍｂｄａ ３５ＵＶ分光光度計を用いてＵＶアッセイにより２８０ｎｍにおいて決定する。このＩＬ２溶液を０．８〜０．２μｍフィルターで濾過し、４℃で保存する。１Ｍ ＮａＯＨを添加してそのｐＨを１１に調整する。調製物において所望される濃度に対するこの溶液の蛋白濃度の比をＹと称する。

次いで、蛋白溶液及びポリマー溶液を周囲温度において混合する。蛋白溶液のＸ−１体積がポリマー体積当たり加えられる。ｐＨ及び浸透圧濃度が、各々、７．４±０．２、３００±２０ｍＯｓｍに調整される。

このように、ポリマーＰ３に基づき、ポリマーＰ３ ２０ｍｇ／ｍｌ及びＩＬ２ ２．５ｍｇ／ｍｌを含む本発明による長期活性ＩＬ２調製物を製造するために、当初のポリマー溶液を２６ｍｇ／ｍｌに濃縮する。当初のＩＬ２溶液を１１ｍｇ／ｍｌに濃縮する。ポリマー体積当たり蛋白溶液０．３体積を加える。

例６：本発明による異なるポリマーＰＯのナノ粒子の平均流体力学直径の測定
本発明によるポリマーＰＯ粒子の平均流体力学的直径を以下に規定のＭｄ手順により測定する。

ＰＯ溶液を０．１５Ｍ ＮａＣｌ媒体中に１又は２ｍｇ／ｍｌの濃度において調製し、２４時間攪拌する。次いで、これらの溶液を、波長４８８ｎｍの垂直偏光レーザービームで作動するブルックヘーブン装置を用い動的光散乱により分析する前に、０．８〜０．２μｍフィルターで濾過する。

ポリマーＰＯのナノ粒子の流体力学直径を、著述”Surfactant Science Series” 22巻, Surfactant Solutions, Ed. R. Zana, 第3章, M. Dekker, 1984に記載されているように、加重法により電場自己相関関数から計算する。

例２のポリマーＰＯ Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４及びＰ６について得られた結果を以下に示す。

例７：蛋白とポリマーＰＯｍｐナノ粒子との自発的会合
ホスフェートバッファー溶液２５ｍＭを、粉末ＮａＨ_２ＰＯ_４（Ｓｉｇｍａ Ｒｅｆ．Ｓ−０７５１）から調製し、１Ｎ水酸化ナトリウム（ＳＤＳ ｒｅｆ．３４７００１５）を用いてｐＨ７．２に調整する。

上記ホスフェートバッファー溶液中で凍結乾燥ポリマー５ｍｇ／ｍｌを一晩溶解することにより、ポリマーＰ１のナノ粒子のコロイド懸濁液を調製する。同じバッファー中に蛋白１０ｍｇ／ｍｌを２時間溶解することにより、ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ Ａ−２９３４）の貯蔵液を調製する。

該貯蔵液とバッファーを０．２２μｍフィルターで濾過する。

予め決めた容量の二つの貯蔵液とホスフェートバッファー中の希釈溶液の添加により混合物を構成し、最終的に一定ポリマー濃度（０．１ｍｇ／ｍｌ）と増加する蛋白濃度（０〜１．８ｍｇ／ｍｌ）を有するサンプル群を得る。

サンプルを２５℃において５時間放置して会合させた後、いわゆる前端法（frontal method）を用いた毛管電気泳動により分析する。該分析では、蛋白と蛋白−ポリマー錯体が別々に視覚化される。この技術に関する更なる詳細は、論文：Cao J.Y., Dublin P.L., Muhoberac B.B., Anal. Chem., 1997, 69, 2945を調べることにより得られる。該分析は、溶融シリカバブルキャピラリー(Ｇ１６００-６２-２３２型)を具備するＡｇｉｌｅｎｔ Ｇ１６０００Ａ装置で実施される。フリー蛋白に相当する最初の平坦部の高さにより、非会合ＢＳＡの濃度の決定が可能となる。実験により、ポリマー１ｇ当たり蛋白０．１ｇ以下の蛋白量について、蛋白がポリマーのナノ粒子と会合していることが示される。

例８：ポリマーＰＯ Ｐ１〜Ｐ４、及びＰ６についてのゲル濃度Ｃ１の決定
例１及び例２のポリマーＰ１〜Ｐ６と会合しているＩＦＮ及びＩＬ２の調製物についてＩＧ試験を実施する。これら調製物の蛋白濃度を下表に示す。ＢＳＡ（濃度３０ｍｇ／ｍｌ）が存在する調製物の緩和時間はＩＧ試験の手法により測定する。緩和時間が１ｓを超える臨界濃度Ｃ１を、ＩＦＮ及びＩＬ２について各々表３及び表４に示す。

例９：本発明による選択に属するＩＦＮ調製物の皮下注射後のイヌにおけるＩＦＮの薬物動力学
ＩＦＮ（濃度０．３ｍｇ／ｍｌ）及び両親媒性ポリマーＰ１（濃度３０ｍｇ／ｍｌ）の調製物（Ａ）を例３に記載の手順により調製する。この調製物を６０μｇ／ｋｇの投与量にてビーグル犬（ｎ＝３）に皮下注射する。漿液サンプルを１、５、１１、２４、３６、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８及び２４０時間において採取する。血漿ＩＦＮ濃度をこれらサンプルにおいてＥＬＩＳＡ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ ＩＭ ３１９３ｋｉｔ）により測定する。

これから図１に示す平均血漿濃度が得られる。図１には、ＩＦＮ（濃度０．３ｍｇ／ｍｌ）及び両親媒性ポリマーＰ６（濃度４０ｍｇ／ｍｌ）の本発明によらないコントロール調製物（Ｄ）（表５、例１０を参照）と比較し、漿液内への蛋白の延長された放出がはっきりと示されている。

量的観点から、本発明の調製物によるＩＦＮの放出延長は下記測定により評価される：
（ａ）時間Ｔmax；血漿濃度が最大になる時間のメジアン、
（ｂ）時間Ｔ50；血漿濃度曲線下の領域がその測定された最大値の５０％に達するまでの時間の平均。

この調製物の場合において、時間Ｔmax及びＴ50は下記の値である：
Ｔmax＝４８時間
Ｔ50＝５４．２時間
例１０：両親媒性ポリアミノ酸に基づく種々のＩＦＮ調製物の皮下注射後のイヌにおけるＩＦＮの薬物動力学
例３に記載の手順により下記調製物を製造する。

調製物Ａのポリマー濃度は例８で測定されたゲル化濃度Ｃ１より大きい。換言すれば、ＩＧ試験で即泳された緩和時間は１秒以上大きい。従って、この調製物Ａは、本発明による選択に属する。一方、調製物Ｂ、Ｃ及びＤの濃度は、そのゲル化濃度より小さく、故に前記調製物は本発明による選択に属しない。

これら調製物を、６０μＧ／ｋｇの投与量においてビーグル犬に注射する。血漿サンプルを１、５、１１、２４、３６、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８及び２４０時間において採取する。血漿ＩＦＮ濃度を前記例に従い測定する。

調製物Ａ，Ｂ，Ｃ及びＤの時間Ｔmax及びＴ50を下記表６に示す。

このように本発明の選択に属する調製物Ａは、本発明に属しない調製物Ｂ、Ｃ及びＤよりかなり放出時間が長い。

例１１：両親媒性ポリアミノ酸に基づく種々の調製物の皮下注射後のサルにおけるインターロイキン２（ＩＬ２）の薬物動力学
例５に記載の手順により下記調製物を製造する。

調製物Ｅ及びＦは、そのポリマー濃度が例８で測定されるゲル化濃度Ｃ１より大きく、そのため本発明による選択に属する。一方、調製物Ｇの濃度はゲル化濃度Ｃ１より小さく、それ故前記調製物は本発明による選択に属しない。

これら調製物をカニクイザルに０．５ｍｇ／ｋｇの投与量において注射する。血漿サンプルを１、５、１１、２４、３６、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８及び２４０時間において採取する。血漿ＩＬ２濃度をこれらサンプルにおいてＥＬＩＳＡ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ ＩＭ ３５８３ｋｉｔ）により測定する。調製物Ｅ、Ｆ及びＧの時間Ｔmax及びＴ50を下記表８に示す。

このように本発明による選択に属する調製物Ｅ及びＦは、本発明による選択に属しない調製物Ｇに比べ、放出時間がかなり長い。

例１２：皮下注射後、インヴィヴォにおける本発明による調製物のゲル化の観察
本発明による調製物の皮下行動を家畜ブタについて研究した。６頭の家畜ブタの腹部の皮膚の深さ４ｍｍに、下記調製物０．３ｍｌを注射した。

調製物Ａ：例２のポリマーＰ６の濃度４５ｍｇ／ｍｌにおける等浸透圧水溶液（ｐＨ７．３）
調製物Ｂ：例１のポリマーＰ１の濃度２０ｍｇ／ｍｌにおける等浸透圧水溶液（ｐＨ７．３）
投与から７２時間後、注射部位からサンプルを採取した。組織構造試験が調製物Ｂについてポリマーのゲル化沈殿物の存在を開示している。色づいたプラークの形態をしている。これとは対照的に、この現象は調製物Ａについては観察されず、ポリマーはコラーゲン繊維の間に浸透した。

２１日後、組織は通常の状態に完全に戻ったので、ポリマーマトリックスＢは完全に生分解性であることを強調することができる。

皮下注射後のイヌにおいて記録された血漿ＩＦＮ濃度（ピコグラム／ｍｌ）の曲線（ＩＦＮ投与量６０μｇ／ｋｇにおける時間Ｔ（ｈ）の関数として）：・本発明によるＩＦＮ調製物（Ａ）（例９及び１０）：→曲線−■−■−、・本発明によらないコントロールＩＦＮ調製物（Ｄ）（例１０）：→曲線−▲−▲−． 皮下注射後のサルにおいて記録された血漿ＩＬ２濃度（ピコグラム／ｍｌ）の曲線（ＩＬ２投与量０．５ｍｇ／ｋｇにおける時間Ｔ（ｈ）の関数として）：・本発明によるＩＬ２調製物（例１１）：→曲線−□−□、・本発明によらないコントロールＩＬ２調製物（Ｆ）（例１１）：→曲線−●−●−、・本発明によらないコントロールＩＬ２調製物（Ｇ）（例１１）：→曲線−■−■−．

Claims (21)

1. 有効成分（ＡＰ）の延長された放出のための液体薬学的調製物であり、水溶性の下記一般式（Ｉ）により規定される生分解性ポリマー（ＰＯ）のサブミクロン粒子に基づく低粘度水性コロイド懸濁液を含有し、前記粒子は少なくとも１の有効成分（ＡＰ）と非共有結合的に会合している液体薬学的調製物であって、
   ・懸濁液の分散媒体が水媒体であり、
   ・［ＰＯ］の濃度が［ＰＯ］≧０．９×Ｃ１であり、ここで、Ｃ１は下記工程からなるＩＧ試験において測定される、ＰＯ粒子の「誘発されたゲル化」濃度である：
   - 乾燥粉末形態の両親媒性ポリマー（ＰＯ）量を増加させて脱イオン化水に溶解し、得られた溶液を磁気攪拌しながら２５℃において１６時間おくこと、
   - 前記溶液を有効成分の濃縮溶液と混合し所望される有効成分濃度とすること、
   - 前記溶液を、３０ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む濃縮水溶液と混合し、１５分間３０００ｒｐｍにおいて遠心分離機にかけること、
   - 混合物を静かに２４時間撹拌すること、
   - ポリマー（ＰＯ）の緩和時間Ｔｒを測定し、当該緩和時間Ｔｒが１秒を超える際の濃度Ｃ１を規定すること；
   ・前記調製物が腸管外注射され得、それによりインヴィヴォにおいてゲル化沈殿物を形成することができ（ここで、このゲル化沈殿物の形成は、
   ・一方において、少なくとも一部はインヴィヴォに存在する少なくとも１の生理蛋白に起因し、
   ・他方において、投与後２４時間を超えてＡＰのインヴィヴォにおける放出時間を延長し調節することを可能とするものである。）、
   ・前記調製物は注射条件下において液体であり、
   ・前記調製物は生理温度および／または生理ｐＨおよび／または下記存在下：
   ・生理濃度における生理電解質、および／または
   ・少なくとも１の界面活性剤
   においてもまた液体である、
   ことを特徴とする液体薬学的調製物。
   

   

   式中、
   ・Ｒ^１は、Ｈ、直鎖Ｃ２〜Ｃ１０アルキル又は分岐鎖Ｃ３〜Ｃ１０アルキル、ベンジル、末端アミノ酸ユニット又は−Ｒ^４−［ＨＧ］であり；
   ・Ｒ^２は、Ｈ、直鎖Ｃ２〜Ｃ１０アシル又は分岐鎖Ｃ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート又は−Ｒ^４−［ＨＧ］であり；
   ・Ｒ^３は、Ｈ、または下記を含む群から選択されるカチオン体であり：
   −ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムを含む小群から選択される金属カチオン、
   −下記小群から選択される有機カチオン：
   ・アミンに基づくカチオン、
   ・オリゴアミンに基づくカチオン、
   ・ポリアミンに基づくカチオン、及び
   ・リシン又はアルギニンに基づくカチオンを含むクラスから選択されるアミノ酸に基づくカチオン、
   −ポリリシンおよびオリゴリシンを含む小群から選択されるカチオンポリアミノ酸；
   ・Ｒ^４は、直接結合又は１〜４個のアミノ酸ユニットに基づく「スペーサー」であり；
   ・Ａは、独立に、ラジカル−ＣＨ_２−（アスパラギン酸ユニット）又は−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（グルタミン酸ユニット）であり；
   ・ｎ／（ｎ＋ｍ）は、モルグラフト化率として定義され、１〜２５モル％の範囲の値をとり、
   ・ｎ／（ｎ＋ｍ）は、モルグラフト化率として定義され、その値は、ｐＨ７、２５℃において水中に溶解しているＰＯが該ＰＯのサブミクロン粒子のコロイド懸濁液を形成するのに十分低く；
   ・ｎ＋ｍは１０〜１０００の範囲の値をとり；
   ・ＨＧはトコフェロールである。
2. 有効成分（ＡＰ）の延長された放出のための液体薬学的調製物であり、
   ・生理温度および／または生理ｐＨおよび／または下記存在下：
   ・生理濃度における生理電解質、および／または
   ・少なくとも１の界面活性剤
   において液体であり、
   ・水溶性の下記一般式（Ｉ）により規定される生分解性ポリマーＰＯのサブミクロン粒子に基づく低粘度水性コロイド懸濁液を含有し、前記粒子は少なくとも１の有効成分（ＡＰ）と非共有結合的に会合しており、前記懸濁液の分散媒体は水媒体である液体薬学的調製物であって、
   その［ＰＯ］濃度が［ＰＯ］≧０．９×Ｃ１であり、ここで、Ｃ１は下記工程からなるＩＧ試験において測定される、ＰＯ粒子の「誘発されたゲル化」濃度である：
   - 乾燥粉末形態の両親媒性ポリマー（ＰＯ）量を増加させて脱イオン化水に溶解し、得られた溶液を磁気攪拌しながら２５℃において１６時間おくこと、
   - 前記溶液を有効成分の濃縮溶液と混合し所望される有効成分濃度とすること、
   - 前記溶液を、３０ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む濃縮水溶液と混合し、１５分間３０００ｒｐｍにおいて遠心分離機にかけること、
   - 混合物を静かに２４時間撹拌すること、
   - ポリマー（ＰＯ）の緩和時間Ｔｒを測定し、当該緩和時間Ｔｒが１秒を超える際の濃度Ｃ１を規定すること；
   且つ、［ＰＯ］濃度が少なくとも１の蛋白の存在下において、インヴィトロにおいてゲル化沈殿物を形成させ得ることを特徴とする液体薬学的調製物。
   

   

   式中、
   ・Ｒ^１は、Ｈ、直鎖Ｃ２〜Ｃ１０アルキル又は分岐鎖Ｃ３〜Ｃ１０アルキル、ベンジル、末端アミノ酸ユニット又は−Ｒ^４−［ＨＧ］であり；
   ・Ｒ^２は、Ｈ、直鎖Ｃ２〜Ｃ１０アシル又は分岐鎖Ｃ３〜Ｃ１０アシル基、ピログルタメート又は−Ｒ^４−［ＨＧ］であり；
   ・Ｒ^３は、Ｈ、または下記を含む群から選択されるカチオン体であり：
   −ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムを含む小群から選択される金属カチオン、
   −下記小群から選択される有機カチオン：
   ・アミンに基づくカチオン、
   ・オリゴアミンに基づくカチオン、
   ・ポリアミンに基づくカチオン、及び
   ・リシン又はアルギニンに基づくカチオンを含むクラスから選択されるアミノ酸に基づくカチオン、
   −ポリリシンおよびオリゴリシンを含む小群から選択されるカチオンポリアミノ酸；
   ・Ｒ^４は、直接結合又は１〜４個のアミノ酸ユニットに基づく「スペーサー」であり；
   ・Ａは、独立に、ラジカル−ＣＨ_２−（アスパラギン酸ユニット）又は−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（グルタミン酸ユニット）であり；
   ・ｎ／（ｎ＋ｍ）は、モルグラフト化率として定義され、１〜２５モル％の範囲の値をとり、
   ・ｎ／（ｎ＋ｍ）は、モルグラフト化率として定義され、その値は、ｐＨ７、２５℃において水中に溶解しているＰＯが該ＰＯのサブミクロン粒子のコロイド懸濁液を形成するのに十分低く；
   ・ｎ＋ｍは１０〜１０００の範囲の値をとり；
   ・ＨＧはトコフェロールである。
3. 請求項１又は２に記載の調製物であって、その［ＰＯ］濃度が２０×Ｃ１≧［ＰＯ］≧Ｃ１（ここでＣ１は、前記ＩＧ試験において測定される、ＰＯ粒子の「誘発されたゲル化」濃度である。）であることを特徴とする調製物。
4. ２０℃における粘度が５Ｐａ．ｓ以下であることを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか1項に記載の調製物。
5. Ａは、ラジカル−ＣＨ _２ −ＣＨ _２ −であることを特徴とする、請求項１に記載の調製物。
6. Ａは、ラジカル−ＣＨ _２ −であることを特徴とする、請求項１に記載の調製物。
7. ＰＯにおいて、少なくとも１のＨＧユニットを含むグラフトを有するアスパラギン酸および／またはグルタミン酸ユニットの分布が、得られるポリマーがランダム又はブロック型又はマルチブロック型の何れかであるような分布であることを特徴とする、請求項１に記載の調製物。
8. ＰＯの分子量が２０００〜１０００００ｇ／ｍｏｌであることを特徴とする、請求項１に記載の調製物。
9. ＡＰが、蛋白、糖蛋白、１又は２以上のポリアルキレングリコール鎖と結合した蛋白、多糖、リポサッカリド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド又はペプチドであることを特徴とする、請求項１乃至８いずれか1項に記載の調製物。
10. ＡＰは、ヘモグロビン、シトクロム、アルブミン、インターフェロン、サイトカイン、抗原、抗体、エリトロポイエチン、インスリン、成長ホルモン、第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子、インターロイキン又はその混合物、及び造血刺激因子から選択されることを特徴とする、請求項１乃至９いずれか1項に記載の調製物。
11. サブミクロン粒子と会合していないＡＰ［非会合ＡＰ］の重量画分（質量％）が下記であることを特徴とする、請求項１乃至１０のいずれか1項に記載の調製物：
    ・［非会合ＡＰ］≦１
12. 腸管外、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内又は大脳内経路により、または腫瘍内へ注射可能であることを特徴とする、請求項１乃至１１いずれか1項に記載の調製物。
13. 薬物の製造に用いられることが意図された調製物であり、腸管外、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内又は大脳内経路による投与又は腫瘍内への投与、もしくは経口、経鼻腔、経膣又は眼内経路により投与される薬物の製造用であることを特徴とする、請求項１乃至１２いずれか1項に記載の調製物。
14. 薬物、腸管外、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内又は大脳内経路による投与又は腫瘍内への投与、もしくは経口、経鼻腔、経膣又は眼内経路により投与される薬物の製造方法であって、請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の少なくとも１の調製物を使用することからなることを特徴とする製造方法。
15. 請求項１に規定の非共有結合的ＰＯ／ＡＰ会合が形成されたサブミクロン粒子を含有し、且つ請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の調製物から得られることを特徴とする生成物。
16. 粉末又はゲルからなることを特徴とする、請求項１５に記載の生成物。
17. 請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の調製物の製造方法であって、
    ・少なくとも１のＰＯのナノ粒子のコロイド懸濁液を得ること、
    ・このＰＯのナノ粒子のコロイド懸濁液と少なくとも１のＡＰとを混合すること、
    ・ｐＨおよび／または浸透圧濃度を調整すること、
    を含むことを特徴とする製造方法。
18. ＡＰは、ＰＯのナノ粒子のコロイド懸濁液と混合されるために水性懸濁液又は水溶液の形態であることを特徴とする、請求項１７に記載の方法。
19. 請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の調製物の製造方法であって、
    ・少なくとも１のＰＯのナノ粒子の粉末を得ること、
    ・この粉末と少なくとも１のＡＰの水性懸濁液又は水溶液とを混合すること、
    ・ｐＨおよび／または浸透圧濃度を調整すること、
    を含むことを特徴とする製造方法。
20. 請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の調製物の製造方法であって、
    ・請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の液体調製物を乾燥することにより製造される粉末を得ること、
    ・この粉末と水性液体媒体とを混合すること、
    ・ｐＨおよび／または浸透圧濃度を調整すること、
    を含むことを特徴とする製造方法。
21. 請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の調製物から誘導される粉末の製造方法であって、前記粉末が請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の調製物を乾燥することにより得られることを特徴とする製造方法。

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