RU2130464C1 - Антагонист лг-рилизинг-фактора (lhrh), комплекс, способ химической кастрации и/или лечения гонадотропинзависимых расстройств - Google Patents
Антагонист лг-рилизинг-фактора (lhrh), комплекс, способ химической кастрации и/или лечения гонадотропинзависимых расстройств Download PDFInfo
- Publication number
- RU2130464C1 RU2130464C1 RU95122703A RU95122703A RU2130464C1 RU 2130464 C1 RU2130464 C1 RU 2130464C1 RU 95122703 A RU95122703 A RU 95122703A RU 95122703 A RU95122703 A RU 95122703A RU 2130464 C1 RU2130464 C1 RU 2130464C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antide
- lys
- lhrh
- antagonist
- conjugates
- Prior art date
Links
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 6
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 title claims description 4
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 claims abstract description 15
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 claims abstract description 9
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims description 84
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 claims description 77
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 claims description 77
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 claims description 77
- QRYFGTULTGLGHU-NBERXCRTSA-N iturelix Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCNC(=O)C=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)CCCNC(=O)C1=CC=CN=C1 QRYFGTULTGLGHU-NBERXCRTSA-N 0.000 claims description 74
- 108010083551 iturelix Proteins 0.000 claims description 56
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 27
- -1 adenosilcobalamin Substances 0.000 claims description 17
- RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M cyanocobalamin Natural products N#C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M 0.000 claims description 15
- 229940124041 Luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) antagonist Drugs 0.000 claims description 12
- 235000000639 cyanocobalamin Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011666 cyanocobalamin Substances 0.000 claims description 8
- 229960002104 cyanocobalamin Drugs 0.000 claims description 8
- 239000002474 gonadorelin antagonist Substances 0.000 claims description 8
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- OAJLVMGLJZXSGX-NDSREFPTSA-L (2r,3s,4s,5r)-2-(6-aminopurin-9-yl)-5-methanidyloxolane-3,4-diol;cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12 Chemical compound [Co+3].O[C@H]1[C@H](O)[C@@H]([CH2-])O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1.C1([C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)[N-]\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O OAJLVMGLJZXSGX-NDSREFPTSA-L 0.000 claims description 2
- OAJLVMGLJZXSGX-SLAFOUTOSA-L (2s,3s,4r,5r)-2-(6-aminopurin-9-yl)-5-methanidyloxolane-3,4-diol;cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7 Chemical compound [Co+3].O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]([CH2-])O[C@@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1.[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O OAJLVMGLJZXSGX-SLAFOUTOSA-L 0.000 claims description 2
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940058303 antinematodal benzimidazole derivative Drugs 0.000 claims description 2
- 150000001556 benzimidazoles Chemical class 0.000 claims description 2
- BYLXFSREGROOBJ-UVKKECPRSA-K cobalt(3+) [(2R,3S,4R,5S)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2R)-1-[3-[(2R,3R,4Z,7S,9Z,12S,13S,14Z,17S,18S,19R)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2,7,12,17-tetrahydro-1H-corrin-21-id-3-yl]propanoylamino]propan-2-yl] phosphate chloride Chemical compound [Cl-].[Co+3].C[C@H](CNC(=O)CC[C@]1(C)[C@@H](CC(N)=O)C2[N-]\C1=C(C)/C1=N/C(=C\C3=N\C(=C(C)/C4=N[C@]2(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]4CCC(N)=O)\[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]3CCC(N)=O)/C(C)(C)[C@@H]1CCC(N)=O)OP([O-])(=O)O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H]([C@@H]1O)n1cnc2cc(C)c(C)cc12 BYLXFSREGROOBJ-UVKKECPRSA-K 0.000 claims description 2
- UUWYBLVKLIHDAU-UHFFFAOYSA-K cobalt(3+);[5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] 1-[3-[2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2,7,12,17-tetrahydro-1h-corrin-21-id-3-yl]propanoylamino]propan-2 Chemical compound [Co+3].[O-]N=O.OCC1OC(N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)C(O)C1OP([O-])(=O)OC(C)CNC(=O)CCC1(C)C(CC(N)=O)C2[N-]\C1=C(C)/C(C(C\1(C)C)CCC(N)=O)=N/C/1=C\C(C(C/1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\1=C(C)/C1=NC2(C)C(C)(CC(N)=O)C1CCC(N)=O UUWYBLVKLIHDAU-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- WBSXYJYELWQLCJ-UHFFFAOYSA-K cobalt(3+);[5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] 1-[3-[2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2,7,12,17-tetrahydro-1h-corrin-21-id-3-yl]propanoylamino]propan-2 Chemical compound O.[OH-].[Co+3].OCC1OC(N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)C(O)C1OP([O-])(=O)OC(C)CNC(=O)CCC1(C)C(CC(N)=O)C2[N-]\C1=C(C)/C(C(C\1(C)C)CCC(N)=O)=N/C/1=C\C(C(C/1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\1=C(C)/C1=NC2(C)C(C)(CC(N)=O)C1CCC(N)=O WBSXYJYELWQLCJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- ZIHHMGTYZOSFRC-UWWAPWIJSA-M cobamamide Chemical compound C1(/[C@](C)(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC2[C@H]([C@H](O[C@@H]2CO)N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O)[C@@H](CC(N)=O)[C@]2(N1[Co+]C[C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O1)N1C3=NC=NC(N)=C3N=C1)O)[H])=C(C)\C([C@H](C/1(C)C)CCC(N)=O)=N\C\1=C/C([C@H]([C@@]\1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N/C/1=C(C)\C1=N[C@]2(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]1CCC(N)=O ZIHHMGTYZOSFRC-UWWAPWIJSA-M 0.000 claims description 2
- 235000006279 cobamamide Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011789 cobamamide Substances 0.000 claims description 2
- 150000001990 dicarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- DQOCFCZRZOAIBN-WZHZPDAFSA-L hydroxycobalamin Chemical compound O.[Co+2].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O DQOCFCZRZOAIBN-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims description 2
- JEWJRMKHSMTXPP-BYFNXCQMSA-M methylcobalamin Chemical compound C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O JEWJRMKHSMTXPP-BYFNXCQMSA-M 0.000 claims description 2
- 235000007672 methylcobalamin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011585 methylcobalamin Substances 0.000 claims description 2
- 229940080818 propionamide Drugs 0.000 claims description 2
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 claims description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims 2
- SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- 229960005452 cobamamide Drugs 0.000 claims 1
- 125000002235 cyanocobalamin group Chemical group 0.000 claims 1
- CKTNHGVJKUQEBM-UHFFFAOYSA-N ethylazanide Chemical compound CC[NH-] CKTNHGVJKUQEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 38
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 abstract description 15
- 238000009739 binding Methods 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 4
- HQMLIDZJXVVKCW-UWTATZPHSA-N (2r)-2-aminopropanamide Chemical compound C[C@@H](N)C(N)=O HQMLIDZJXVVKCW-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 abstract 1
- 229940029329 intrinsic factor Drugs 0.000 description 21
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 20
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 18
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 14
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 11
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- QLHLYJHNOCILIT-UHFFFAOYSA-N 4-o-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 1-o-[2-[4-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-4-oxobutanoyl]oxyethyl] butanedioate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCC(=O)OCCOC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O QLHLYJHNOCILIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 5
- GKSPIZSKQWTXQG-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[1-(pyridin-2-yldisulfanyl)ethyl]benzoate Chemical compound C=1C=C(C(=O)ON2C(CCC2=O)=O)C=CC=1C(C)SSC1=CC=CC=N1 GKSPIZSKQWTXQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 4
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 229920000370 gamma-poly(glutamate) polymer Polymers 0.000 description 4
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000008238 LHRH Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010021290 LHRH Receptors Proteins 0.000 description 3
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 3
- 102100026397 ADP/ATP translocase 3 Human genes 0.000 description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000718437 Homo sapiens ADP/ATP translocase 3 Proteins 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 102000011409 Transcobalamins Human genes 0.000 description 2
- 108010023603 Transcobalamins Proteins 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- NXVYSVARUKNFNF-NXEZZACHSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) (2r,3r)-2,3-dihydroxybutanedioate Chemical compound O=C([C@H](O)[C@@H](O)C(=O)ON1C(CCC1=O)=O)ON1C(=O)CCC1=O NXVYSVARUKNFNF-NXEZZACHSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 125000005414 dithiopyridyl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 2
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004682 mucosal barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 2
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QYEAAMBIUQLHFQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 QYEAAMBIUQLHFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOTJUWBJENROFB-UHFFFAOYSA-N 1-[3-[[3-(2,5-dioxo-3-sulfopyrrolidin-1-yl)oxy-3-oxopropyl]disulfanyl]propanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCSSCCC(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O VOTJUWBJENROFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTTUQCIBNSCQRH-UHFFFAOYSA-N 2,3,4-trimethylpentan-3-amine Chemical compound CC(C)C(C)(N)C(C)C CTTUQCIBNSCQRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIRFMIKBXCMIPE-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-[6-[[2-[1-(pyridin-2-yldisulfanyl)ethyl]benzoyl]amino]hexanoyloxy]pyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound C=1C=CC=C(C(=O)NCCCCCC(=O)ON2C(C(CC2=O)S(O)(=O)=O)=O)C=1C(C)SSC1=CC=CC=N1 IIRFMIKBXCMIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIWXLVBZDMAARO-UHFFFAOYSA-N 2-decylsulfanylethanamine Chemical compound CCCCCCCCCCSCCN OIWXLVBZDMAARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RMPVHUOWPLNAOG-UHFFFAOYSA-N 3-(ethyliminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine;1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione;hydrochloride Chemical compound Cl.ON1C(=O)CCC1=O.CCN=C=NCCCN(C)C RMPVHUOWPLNAOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMUAKWNHKQBPGJ-UHFFFAOYSA-N 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)-n-[4-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]butyl]propanamide Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSCCC(=O)NCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JMUAKWNHKQBPGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMYMYHFDUZQQLA-UHFFFAOYSA-N 4-(2,5-dioxo-3-sulfopyrrolidin-1-yl)oxy-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O FMYMYHFDUZQQLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPRDZAMUYMOJTA-UHFFFAOYSA-N 5,6-dichloro-1h-benzimidazole Chemical compound C1=C(Cl)C(Cl)=CC2=C1NC=N2 IPRDZAMUYMOJTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000003931 anilides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000001273 butane Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- WUPRCGRRQUZFAB-DEGKJRJSSA-N corrin Chemical group N1C2CC\C1=C\C(CC/1)=N\C\1=C/C(CC\1)=N/C/1=C\C1=NC2CC1 WUPRCGRRQUZFAB-DEGKJRJSSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- LSXWFXONGKSEMY-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl peroxide Chemical compound CC(C)(C)OOC(C)(C)C LSXWFXONGKSEMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012969 di-tertiary-butyl peroxide Substances 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- FRTGEIHSCHXMTI-UHFFFAOYSA-N dimethyl octanediimidate Chemical compound COC(=N)CCCCCCC(=N)OC FRTGEIHSCHXMTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRPQMNYCTSPGCX-UHFFFAOYSA-N dimethyl pimelimidate Chemical compound COC(=N)CCCCCC(=N)OC LRPQMNYCTSPGCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- MBAXWTVHCRPVFW-UHFFFAOYSA-N methyl 3-[(3-imino-3-methoxypropyl)disulfanyl]propanimidate Chemical compound COC(=N)CCSSCCC(=N)OC MBAXWTVHCRPVFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000002762 monocarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000002763 monocarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N n-pentane Natural products CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000018889 transepithelial transport Effects 0.000 description 1
- 150000003627 tricarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к новым антагонистам LHRH и комплексам между этими антагонистами и VВ12. В частности, в настоящем изобретении предусматривается пероральное введение антагонистов LHRH. Антагонисты настоящего изобретения выбирают из группы, состоящей из ANTIDE-1, ANTIDE-2 и ANTIDE-3, которые являются подходящими для конъюгации с VB12, а именно: N-Ac-D-Nal (2), D-Phe(pCl), D-Pal (3), ser, Lys (Nic), D-Lys, Leu, Lys (iPr), Pro, O-Ala-NH2 (D-Lys6ANTIDE) или (ANTIDE-1), N-Ac-D-Nal (2), D-Phe (pCl), D-Pal (3), Ser, Lys, (Nic), D-Lys (Nic), Leu, Lys, Pro, D-Ala-NH2 (Lys8ANTIDE или ANTIDE-3). Во втором аспекте изобретение относится к комплексу между VВ12 или аналогом VB12 и антагонистами LHRH, рассматриваемыми в первом аспекте изобретения, где для поглощения и транспорта VВ12 в хозяине-позвоночном необходимо, чтобы указанный VB12 или его аналог обладал способностью вступать в реакцию связывания, и где активность антагониста LHRН сохраняется в основном на постоянном уровне. Описывается также способ химической кастрации и/или лечения гонадотропинзависимых расстройств индивидуума, заключающийся во введении вышеуказанных соединений. 3 с. и 6 з.п. ф-лы, 4 ил., 6 табл.
Description
Изобретение относится к антагонистам LHPH и к системной и пероральной "доставке" этих антагонистов путем введения комплекса, содержащего антагонисты, связанные с витамином B12 (VB12) или его аналогом. В частности, настоящее изобретение относится к способам синтеза указанных комплексов.
Гипоталамический фактор выделения гонадотропина (или гонадотропин-рилизинг-фактор, GnRH, известный также как фактор, высвобождающий лютеинизирующий гормон, ЛГ-рилизинг-фактор LHRH) опосредует регуляцию синтеза и секреции гипофизарного гонадотропина. С тех пор, как Schally и др. (1971) впервые выделили LHRH, было синтезировано большое количество аналогов, которые могут быть классифицированы по своему сильному воздействию на высвобождение гонадотропина, либо как антагонисты (ингибирующие высвобождение). Агонисты характеризуются увеличением аффинности связывания с рецепторами гипофизарного LHRH (Loumay и др., 1982, Perrin и др., 1980) и повышенной резистентностью к протеолитической деградации, что способствует быстрому выведению нативного LHRH.
В результате наблюдений, которые показали, что указанные сильные аналоги могут индуцировать медикоментозную кастрацию, был разработан новый способ лечения различных гонадотропинзависимых расстройств, а в частности гормонозависимый простатит и рак молочной железы. При индуцировании кастрации имеют место две различные фазы. Сначала аналог стимулирует систему гипофиз - гонада, вызывая кратковременное увеличение секреции гонадотропина и половых стероидных гормонов в первые две недели или около того. По истечении этого времени происходит снижение регуляции рецепторов гипофизарного LHRH с последующим уменьшением секреции гонадотропина и стероидных половых гормонов. Эта первоначальная стимуляция является главным недостатком использования агонистов в лечении злокачественных опухолей представленной железы, поскольку первоначальная стимуляция тестостерона может стимулировать внезапное и тяжелое обострение болезни с последующими неблагоприятными клиническими эффектами (Eisenberger & Abrams, 1988, Crawford & Davis, 1988). В противоположность этому, первый успешный синтез антагонистов должен дать положительный результат по предотвращению начального обострения болезни. Первые попытки продуцирования антагонистов привели к получению соединений, отличающихся нежелательной способностью к высвобождению гистамина (Karten & Rivier, 1986, Schmidt et al., 1984; Phillips et al., 1988). Однако затем были разработаны новые антагонисты, обладающие повышенной эффективностью и меньшей склонностью к высвобождению гистамина (например, Karten & Rivier, 1986). Одним из наиболее сильных антагонистов, описанных до настоящего времени, является аналог N-Ac-D-NaI (2), D-Phe (pCI), D-PaI (3), Ser, Lys (Nic), D-Lys (Nic), Leu, Lys (iPr), Pro, D-AIa-NH2 (ANTIDE), который был синтезирован Folkers & Bowers. Этот аналог обладает высокой эффективностью в ингибировании овуляции у крыс (Ljundquist и др. , 1988), а одноразовые дозы указанного аналога оказывают сильное и продолжительное ингибирующее действие на концентрацию LH в сыворотке кастрированных самок собакоподобных обезьян (Leal et al., 1988). Было также показано, что данный аналог обладает способностью индуцировать продолжительную химическую кастрацию у интактных половозрелых крыс самцов и собакоподобных обезьян и оказывает ингибирующее действие на опухолевый рост в модели карциномы простаты Dunning R3327, аналогично тому, как это имеет место при кастрации (Habennicht et al., 1990). Поэтому новый антагонист должен представлять особый клинический интерес во всех случаях, при которых лекарственная кастрация является весьма желательной, особенно при лечении рака представленной железы и различных гинекологических расстройств (MeLachlan et al., 1986). Применяемый в настоящее время способ введения антагониста ограничивается парентеральным введением. Однако при этом способе введения доза аналога, которая может быть "доставлена" к нужному участку организма, ограничена из-за плохой растворимости указанного антагониста. Так, например, при клинических испытаниях продолжительности действия ANTIDE, дозы были снижены до 2,5 мг или менее.
Пероральное введение пептидов, таких как LHRH и их аналоги в качестве фармацевтических средств для лечения системных заболеваний, оказалось малоуспешным. Другими словами, количество пептида, необходимое для успешного перорального введения, в 100 - 1000 раз превышает количество, требуемое для парентеральной "доставки" этих агентов, что делает их применение путем перорального введения недопустимо дорогостоящим. Неудача перорального введения была обусловлена двумя основными причинами. Во-первых, среда в кишечнике обладает высокой степенью протеолитической активности, способствующей быстрой деградации большинства пептидов. И во-вторых, хотя механизмы поглощения отдельных аминокислот и депептидов хорошо известны, однако, общий механизм транспорта полипептидов через мембрану эпителия слизистой в кровоток пока не ясен. Эта мембрана скорее всего является основным барьером, препятствующим поглощению многочисленных чужеродных белков, присутствующих в окружающей среде. Поэтому, хотя для защиты от ферментативного расщепления, происходящего в кишечнике, пептид и может быть модифицирован, однако такая модификация будет малоэффективной, если данный пептид не сможет затем преодолеть барьер слизистой оболочки и войти в большой круг кровообращения.
Однако в последней работе автора настоящей заявки (PCT/AU86/00299) был разработан метод, позволяющий преодолеть барьер слизистой оболочки. В этом методе эффективно используется механизм опосредованного нативным внутренним фактором (IF) поглощения витамина B12 (VB12). VB12 представляет собой природную поступающую в организм вместе с пищей молекулу, которая активно поглощается организмом из кишечника, в процессе чего, указанная молекула сначала связывается с IF в верхней тонкой кишке. После этого комплекс "VB12-IF" проходит по тонким кишкам и связывается с IF-рецептором, локализованным на поверхности эпителия подвздошной кишки. Затем, посредством рецепторопосредованного эндоцитоза, происходит интернационализация всего комплекса "VB12-IF-Рецептор", после чего через некоторое время VB-12 появляется в сыворотке.
В PCT-заявке PCT/AU86/00299 (087/02251) описаны способы химической модификации VB12, осуществляемые в целях введения соответствующих функциональных групп для конъюгации VB12 с различными лекарственными средствами и пептидными/протеиновыми фармацевтическими средствами. Если комплекс "VB12-фармацевтическое средство" вводят перорально, то для доставки фармацевтического средства в кровоток может быть использована система поглощения VB12, опосредованного натуральным IF.
Поскольку пероральный способ введения является наиболее предпочтительным способом доставки фармацевтически активного агента, то любой способ, обеспечивающий пероральную доставку антагонистов LHRH в организм человека, будет пользоваться большим спросом на имеющемся рынке предложений. Такой способ может быть осуществлен путем образования комплекса между VB12 или его аналогами и антагонистами LHRH.
В своем первом аспекте настоящее изобретение относится к аналогам ANTIDE.
ANTIDE представляет собой молекулу, которая является особенно подходящей для перорального введения, поскольку она содержит очень небольшое количество природных аминокислот и является в высокой степени резистентной к действию пепсина, трипсина или химотрипсина. Однако саму молекулу ANTIDE необходимо слегка модифицировать в целях сообщения ей подходящего сайта для конъюгации с VB12. Заявителем было обнаружено, что могут быть синтезированы три аналога ANTIDE, которые являются подходящими для конъюгации с VB12, а именно N-Ac-D-Nal(2), D-Shc(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys (Nic), D-Lys, Leu, Lus (iPr), Pro, D-Ala-NH2(D-Lus6 ANTIDE или ANTIDE-1), N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys, D-Lys(Nic), Leu Lys (iPr), Pro, D-Ala-NH2 (Lys5 ANTIDE или ANTIDE-2), и N-Ac-D- Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys(Nic), D-Lys(Nic), Leu, Lys, Pro, D-Ala-NH2(Lys8 ANTIDE или ANTIDE-3).
Во втором варианте настоящее изобретение относится к комплексу между VB12 или аналогом VB12 и антагонистами LHRH, рассматриваемыми в первом аспекте изобретения, где для поглощения и транспорта VB12 в хозяине-позвоночном необходимо, чтобы указанный VB12 или его аналог обладал способностью вступать в реакцию связывания, и где активность антагониста I HPH сохраняется в основном на постоянном уровне.
Аналоги VB12 представляют собой любой вариант или любое производное VB12, которые обладают способностью к связыванию с внутренним фактором (IF). Предпочтительными аналогами VB12 являются цианокобаламин (CN-CbI), аквокобаламин, аденозилкобаламин, метилкобаламин, гидроксикобаламин, цианокобаламина карбаналид, 5-метоксибензилкобаламин [(5-MeOBz)CN-CbI], а также десдиметиловые, моноэтиламидные и метиламидные аналоги всех указанных выше соединений. Другими аналогами являются кофермент B12, 5'-дезоксиаденозилкобаламин, хлорокобаламин, сульфитокобаламин, нитрокобаламин, тиоцианатокобаламин, производные бензимидазола, такие как 5,6-дихлоробензимидазол, 5-гидроксибензимидазол, триметилбензимидазол, а также аденозилцианокобаламин [(Ade)CN-CbI] , кобаламинлактон, кобаламинлактам и анилидные, этиламидные, монокарбоновокислотные и дикарбоновокислотные производные VB12 или его аналоги.
Предпочтительными производными VB12 также являются моно- ди- и трикарбоновокислотные производные пропионамидных производных VB12. Другими производными являются аналоги VB12, в которых вместо кобальта присутствует цинк или никель. Корриновое кольцо витамина B12 или его аналогов может быть также замещено любым заместителем, не оказывающим какого-либо влияния на связывание VB12 IF, причем эти производные VB12 или его аналоги также являются частью настоящего изобретения. Другие производные и аналоги витамина B12 обсуждаются в работе Schneider Z. и Stroinski A. (Walter De Gruyter, Berlin, NY; 1987), и это обсуждение вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Подходящими для конъюгации протяженными спейсерами являются дисукцинимидилсуберат (DSS), бис(сульфосукцинимидил)суберат (BSS), этиленгликольбис(сукцинимидилсукцинат)(EGS), этиленгликольбис(сульфосукцинимидилсукцинат) (сульфо-EGS), n-аминофенилуксусная кислота, дитиобис(сукцинимидилпропионат) (DSP), 3,3'-дитиобис(сульфосукцинимидилпропионат) (DTSSP), дисукцинимидилтартарат (DST), дисульфосукцинимидилтартарат (сульфо-DST) бис[2-(сукцинимидооксикарбонилокси) -этилен] сульфон (BSOCOES), бис[2-сульфосукцинимидооксикарбонилокси)-этилен] сульфон (сульфо-BSOCOES), диметиладипимидат, 2HCl (DMA), диметилпимелимидат, 2HCl (DMP), диметилсуберимидат, 2HCl (DMS).
Перекрестносшивающими агентами, подходящими для использования в получении расщепляемых тиолом биологически разлагаемых линкеров, являются N-сукцинимидил 3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), иминотиолан, сульфосукцинимидил 6-[3-(2-пиридилдитио) пропионамидо] гексаноат (Сульфо-IC-SPDP), сукцинимидил 6-[3-(2- пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат (IC-SPDP), сульфосукцинимидил 6-[ α -метил- α -(2-пиридилдитио)толуамидо]гексаноат (Сульфо-IC-SMPT), 1,4-ди-[3'-(2'-пиридилдитио)пропионамидо] бутан (DPDPB), 4-сукцинимидилоксикарбонил- α метил- α -(2-пиридилдитио)-толуол (SMPT), диметил 3,3'-дитиобиспропионимидат, 2 HCl (DTBP).
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения биологически расщепляемых комплексов между VB12 и антагонистами LHRH, такими как аналоги ANTIDE, описанные при обсуждении первого изобретения, причем указанный комплекс получают таким образом, чтобы VB12 отщеплялся от антагониста IHRH in vivo.
В следующем аспекте настоящее изобретение относится к комплексу, содержащему аналог ANTIDE первого аспекта, связанный с носителем VB12 или его аналогом, где с указанным носиетлем связывается более, чем один аналог ANTIDE.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу пероральной "доставки" антагониста IHRH, в соответствии с которой антагонист LHRH подвергается трансэпителиальному транспорту из кишечника в кровоток хозяина-позвоночного.
В еще одном аспекте настоящего изобретения рассматривается новый класс аналогов ANTIDE, которые обладают повышенной растворимостью в физиологических растворах. Эти аналоги могут быть введены системно.
Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приводится описание его предпочтительных вариантов со ссылками на нижеследующие примеры и чертежи, где:
На фиг. 1 представлен график, иллюстрирующий средние ингибирующие концентрации (IC50) ANTIDE, их аналогов и VB12-конъюгатов, определенные с помощью in vitro - биоанализа на блокирование IHPH-стимулированного высвобождения IH из клеток гипофиза крыс. Средние ингибирующие концентрации ANTIDE, аналога ANTIDE и конъюгатов VB12-ANTIDE для подавления LHRH-стимулированного высвобождения LH из культур клеток передней доли гипофиза крыс определяли после 4-часового культивирования. Результаты для конъюгатов даны в нг введенного аналога/мл (конечная концентрация в лунке с культурой). Результаты, которые не отличались друг от друга (т.е. P>0,05), сгруппированы под общей строчной буквой.
На фиг. 1 представлен график, иллюстрирующий средние ингибирующие концентрации (IC50) ANTIDE, их аналогов и VB12-конъюгатов, определенные с помощью in vitro - биоанализа на блокирование IHPH-стимулированного высвобождения IH из клеток гипофиза крыс. Средние ингибирующие концентрации ANTIDE, аналога ANTIDE и конъюгатов VB12-ANTIDE для подавления LHRH-стимулированного высвобождения LH из культур клеток передней доли гипофиза крыс определяли после 4-часового культивирования. Результаты для конъюгатов даны в нг введенного аналога/мл (конечная концентрация в лунке с культурой). Результаты, которые не отличались друг от друга (т.е. P>0,05), сгруппированы под общей строчной буквой.
На фиг. 2 представлен график, иллюстрирующий in vitro - биоанализ на блокирование LHRH-стимулированного высвобождения из клеток гипофиза крыс ANTIDE, ANTIDE-3- и их VB12-конъюгатами. Анализ проводили в условиях, аналогичных условиям, описанным на фиг. 1.
На фиг. 3 представлен график, иллюстрирующий снижение уровня LH в сыворотке кастрированных крыс после инъекции ANTIDE, ANTIDE-1- или конъюгатов ANTIDE-1-VB12. Действие подкожных инъекций ANTIDE или конъюгатов VB12-ANTIDE оценивают с использованием 6-недельных кастрированных крыс. Через 24 часа после инъекции 100 мкг-дозы различных аналогов ANTIDE крыс умерщвляют, а кровь собирают для проведения РИА-анализа (см. Puente & Catt, 1986) на уровни LH в сыворотке.
На фиг. 4 представлен график, иллюстрирующий снижение уровней IH в сыворотке кастрированных крыс после подкожной инъекции 100 мкг-доз ANTIDE, ANTIDE-3- или ANTIDE-3-VB12-конъюгатов.
Материалы.
Анализ клеток гипофиза на высвобождение IH.
Культуры клеток получают от передней доли гипофиза 4-месячных крыс Sprague-Dawley. Клетки диспергируют с получением суспензии одиночных клеток, содержащей 250 000 жизнеспособных клеток на 1 мл среды Игла, модифицированной по способу Дульбекко, в которую были добавлены 10% фетальная телячья сыворотка и антибиотики. Затем 0,5 мл-аликвоты вносят в многолуночные планшеты для культивирования тканей и выдерживают при 30oC в закрытом виде во влажной атмосфере 5% CO2 в воздухе. Клетки культивируют в течение 5 дней, после чего среду удаляют. Эту среду заменяют свежей средой, содержащей различные дозы ANTIDE, аналогов ANTIDE или конъюгатов VB12-ANTIDE. Через 4 часа к каждой лунке добавляют 10 нМ LHRH. Затем клетки инкубируют еще 4 часа, после чего среду удаляют для определения высвобожденного в среду количества FSH и LH с помощью радиоиммуноанализа (РИА).
Модель кастрированных крыс.
Взрослых особей крыс Sprague-Dawley кастрируют и за неделю до введения испытуемых соединений выдерживают в специальном помещении для животных. Испытуемые ANTIDE или его аналоги вводят кастрированным крысам путем подкожной инъекции. Группы из 5 крыс используют в качестве контроля, и для сбора проб крови, которые берут из наружной яремной вены через 24 часа после ввода дозы, определение уровня LH осуществляют с помощью стандартного радиоиммуноанализа.
Анализ на IF.
Аффинность различных конъюгатов VB12 ANTIDE по отношению к внутреннему фактору (IF) определяют с помощью анализа на конкурентное связывание (Russel-Jones 1994). Для этого разведения немеченного B12 или аналога VB12 или конъюгата смешивают с 1 нг 57Co VB12 (Amersham). Затем к смеси добавляют IIU IF (единица IF представляет собой количество IF, необходимое для связывания 1 нг VB12), и полученную смесь инкубируют при комнатной температуре (РТ) в течение 20 минут, после чего добавляют раствор 5% активированного угля в 0,1% BSA (несодержащий IF и VB12, Sigma). Пробы центрифугируют и проводят подсчеты для супернатанта (связанное IF) и для осадка (свободного 57Co VB12), которые используют для определения относительной аффинности IF по отношению к испытуемому материалу.
Синтез аналогов ANTIDE.
Три аналога ANTIDE, содержащие отдельные, немодифицированные лизины, а именно D-Lys6 ANTIDE или ANTIDE-1; Lys5 ANTIDE или ANTIDE-2; и LYS8 ANTIDE или ANTIDE-3 (см. таблицу 1) синтезируют на пептидном синтезаторе Applied Biosystems. Пептиды отщепляют от смолы и очищают с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ, используя градиент 5 - 100% ацетонитрила в 0,1% TFA.
Два аналога - ANTIDE-1 и ANTIDE-3 обладают значительной in vitro - активностью, а аналог ANTIDE-3 имел активность, сравнимую с in vivo - активностью нативного ANTIDE. Было установлено, что прямое ковалентное связывание "e"-изомерного карбоксилата VB12 (eV VB12) с ANTIDE-1, ANTIDE-2 или ANTIDE-3 приводит к снижению биоактивности аналога ANTIDE до уровней в основном ниже, чем уровень самого ANTIDE, как при in vitro, так и при in vivo-испытаниях.
Прямое связывание аналога ANTIDE с монокарбокси - VB12.
В целях получения функциональной группы, подходящей для конъюгирования VB12 с ANTIDE, цианокобаламин (VB12) сначала гидролизуют в 0,4 M HCl в течение 72 часов. "e"-Изомер монокарбокси- VB12 (e VB12, e-изомер), который, как было предварительно установлено, из всех трех изомеров обладает наиболее высокой аффинностью по отношению к IF, отделяют от b- и d-изомеров (образуемых также в процессе кислотного гидролиза цианокобаламина) с помощью комбинации Dowex IX2-хроматографии и полупрепаративной обращенно-фазовой (С-18) ВЭЖХ с использованием градиента 5 - 100% ацетонитрила в 0,1% TFA.
Аминоэтил-e VB12 получают посредством реакции e VB12-изомера с 1,2-диаминоэтаном при pH 6,5 с использованием 20-кратного молярного избытка диамина по сравнению с e-изомером и 20-кратного молярного избытка 1-этил-3-(4-диметил-аминопропил)-карбодиимида (EDAC, Biorad, Richmond, CA). Аминоэтиловое производное очищают с помощью обращенно-фазовых ВЭЖХ на полупрепаративной C-4-колонке с использованием градиента 5 - 100% ацетонитрила в 0,1% TFA. Элюированный материал затем очищают с помощью хроматографии на S-Сефарозе. Аминопроизводное элюируют 0,1 M HCl и экстрагируют в фенол, а затем после добавления в феноловую фазу дихлорометана, подвергают обратной экстракции в воду. После этого аминоэтил-e VB12 выделяют из водной фазы путем лиофилизации.
Три аналога ANTIDE подвергают конъюгации с e VB12, используя карбодиимид. EDAC и полученные продукты (B12-ANT1, B12-ANT2 и B12-ANT3 в зависимости от того, был ли данный комплекс образован между ANTIDE-1, ANTIDE-2 или ANTIDE-3 соответственно) очищают с помощью хроматографии на Сефадексе G-25 в 10% уксусной кислоте, а затем с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на полупрепаративной C-4 колонке, как описано выше.
Конъюгирование VB12 с ANTIDE с использованием перекрестносшивающего агента, содержащего пространственно затрудненный тиол.
Аминоэтил-e VB12 подвергают реакции с 4-сукцинимидилоксикарбонил- α -метил- α -(2 пиридилдитио)толуолом (SMPT; Pierce). Иминотиолированные ANTIDE-1 и ANTIDE-3 получают, как описано выше. Затем SNPT-производное аминоэтил-e VB12 подвергают реакции с тиолированными производными ANTIDE-1- и -3, как описано выше, с последующей очисткой B12-TSS -ANTI и B12-TSS - ANT3 стандартным методом (таблица 2).
Образование нерасщепляемой тиоэфирной связи между VB12 и ANTIDE.
6-(Иодоацетамидо)гексиламидо-e VB12 в диизопропилэтиламиде/диметилформамиде (ДМФ/DTEA, 1:20 об./об.) подвергают дезоксигенированию с использованием аргона в течение 10 минут и к размешанному раствору по капле добавляют раствор иминотиолированного ANTIDE-1 или -3 в ДМФ. Каждую реакционную смесь перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре, после чего разводят водой, фильтруют, а продукты B12- SC- ANTI и B12-SC-ANT-3 очищают с помощью препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ (таблица 2).
Конъюгирование VB12 с ANTIDE с использованием связи, расщепляемой трансглутаминазой.
ANTIDE-1 и -3 растворяли в 5% DIEA/ДМФ, а затем добавляли N- сукцинимидилэфирное производное e VB12-GGEA-OMe (e VB12-GlyGlyGly Ala)в ДМФ (100 мкл). Каждую реакционную смесь размешивали в течение 30 минут при комнатной температуре, затем разводили 2% уксусной кислотой и фильтровали. Продукты B12-TP-ANTI и B12-TP-ANT3 очищали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ, лиофилизовали и перед использованием хранили под осушителем (таблица 2).
Статистический анализ.
Данные, полученные от дублированных индивидуумов (in vivo - испытания) и из дублированных экспериментов (in vitro испытания), подвергают одностороннему анализу дисперсии, и для попарного сравнения средних значений, которые, как предполагается, значительно отличаются по степени вероятности p<0,05, применяют post hoc - критерии HSD Тьюки.
Аффинность конъюгатов VB12-ANTIDE по отношению к внутреннему фактору.
Все испытанные конъюгаты VB12-ANTIDE показывают хорошую аффинность по отношению к внутреннему фактору (таблица 2). Действительно, большинство конъюгатов имеет относительную аффинность, которая превышает аффинность изомера e B12, использованного для получения конъюгата (обычно около 35%).
Пример 1. Образование конъюгатов "VB12-аналог ANTIDE" с использованием нерасщепляемых гомо-бифункциональных перекрестносшивающих агентов.
Путем прямого связывания VB12 с ANTIDE-1 и ANTIDE-3 получают конъюгаты с гораздо меньшей биоактивностью по сравнению с ANTIDE. Тесная пространственная близость VB12 c ANTIDE, обеспечиваемая описанной методикой конъюгирования, стерически препятствует связыванию ANTIDE с LHRH-рецептором. Для снижения стерического эффекта, связанного очевидно с прямым конъюгированием, используют нерасщепляемые линкеры для получения ковалентных комплексов между аминоэтил-e VB12 и ANTIDE-1 и ANTIDE-3. Для этого ANTIDE-1 и -3 подвергают реакции с 1,5-молярным избытком дисукцинимидилсуберата (DSS) или этиленгликольбис (сукцинимидилсукцинат) (EGS) в течение 10 минут при комнатной температуре (RT). Затем добавляют аминоэтил -"e" VB12, и смесь оставляют на ночь для прохождения реакции. Конъюгированный материал очищают с помощью хроматографии на Сефадексе G-25 в 10% уксусной кислоте, а затем с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ). Конъюгаты VB12-анилидо- ANTIDE-1 и ANTIDE-3 получают посредством реакции аминоэтил- "e" VB12 с n-аминофенилукусуной кислоты с использованием EDAC-NHS. Затем VB12-анилид в свою очередь подвергают конъюгированию c ANTIDE-1 и ANTIDE-3 с использованием EDAC/NHS. Конъюгированный материал очищают с помощью хроматографии на Сефадексе G-25 в 10% уксусной кислоте, а затем с помощью ОФ-ВЭЖХ.
Пример 2. Образование конъюгатов "VB12-аналог ANTIDE" с использованием спейсеров.
Получение конъюгатов между VB12 и ANTIDE-1 и ANTIDE-3 с использованием либо гидрофильных спейсеров, таких как EGS (16,1 ), либо гидрофобных спейсеров, таких как DSS (11,4 ), либо более короткой объемной анилидогруппы, позволяет значительно повысить in vitro - биологическую активность конъюгатов до уровней, сравнимых с уровнем активности исходного аналога (фиг. 1 и 2). Так, например, все B12-PA-ANTI, B12-EGS-ANT3 и B12-DSS-ANT3 имеют биоактивности, сравнимые с активностью нативного ANTIDE (фиг. 1 и 2). В противоположность этому, биологическая in vivo-активность указанных конъюгатов, введенных подкожно крысам, оказалась очень низкой, о чем свидетельствовала неспособность этих конъюгатов вызывать заметное снижение уровней LH в сыворотке кастрированных крыс даже при введении аналога в дозах 100 мкг. С другой стороны ANTIDE и ANTIDE-3 обладают активностью уже при дозах 12,5 мкг (фиг. 3 и 4). Поэтому очевидно, что помимо пространственного затруднения, на in vivo - активность указанных конъюгатов VB12- ANTIDE оказывают влияние и другие факторы (ср. фиг. 1 с фиг. 3 и фиг. 2 с фиг. 4).
Пример 3. Образование конъюгатов "VB12 ANTIDE" с использованием расщепляемых тиолом перекрестносшивающих агентов.
Посредством связывания VB12 с аналогами ANTIDE с использованием протяженных гидрофильных или гидрофобных спейсеров получают конъюгаты, которые обладают in vitro-активностью, аналогичной активности нативного ANTIDE. Однако парентеральное введение этих конъюгатов дает незначительный эффект в снижении уровней LH в сыворотке кастрированных крыс в пределах испытанных доз. Эти результаты дают основание предложить, что, хотя общая стратегия повышения биоактивности конъюгатов "VB12-ANTIDE" путем введения протяженных спейсеров является правильной, однако образованный таким образом конъюгат имеет, тем не менее пониженную in vivo-активность, что вероятно обусловлено присутствием в конъюгате молекулы VB12. Поэтому были получены конъюгаты, в которых ковалентный линкер (сшивающий агент) содержал биологически расщепляемую дисульфидную связь, которая должна быть восстановлена in vivo, вероятно с помощью глутатиона, присутствующего в сыворотке. Для этого аминоэтил-e VB12 подвергают реакции с N-сукцинимидил 3-(2-пиридилдитио)пропионатом (SPDP). Полученный продукт дитиопиридил-аминоэтил "e" VB12 (DTP "e" VB12) очищают с помощью обращенно-фазовых ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ). Свободный тиол вводят в ANTIDE-1 посредством реакции с SPDP. Дитиопиридильную группу затем восстанавливают с использованием меркапто-этанола, после чего продукт очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ. Аналогичным образом свободный тиол вводят в ANTIDE-3 посредством реакции с иминотиоланом. Тиолированный продукт (SH-NH+ ANTIDE-3) очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ. Образование связанных посредством дисульфидной связи конъюгатов "VB12-ANTIDE-1" и "VB12-ANTIDE-2" осуществляют с помощью реакции тиолированного производного ANTIDE с DTP "e" VB12 в 2,5% уксусной кислоте в течение 24 часов. Конъюгированный материал очищают с помощью хроматографии на Сефадексе G-25, а затем с помощью ОФ-ВЭЖХ.
Пример 4. Образование конъюгатов "VB12-аналог ANTIDE" с использованием биолологически разлагаемых линкеров.
Для снижения вероятности удаления конъюгатов "VB12-ANTIDE" из кровотока после их инъекции были получены конъюгаты "VB12-ANTIDE" с использованием расщепляемого тиолом дисульфидсодержащего спейсера. Этот спейсер потенциально должен обеспечивать отщепление ANTIDE от VB12 при низких уровнях восстановленного глутатиона в сыворотке. Для этого получают конъюгаты между ANTIDE-1 и ANTIDE-3 с использованием расщепляемого тиолом спейсера (SS) и пространственно затрудненной тиоловой группы (TSS). Присутствие пространственно затрудненного тиола в указанном спейсере должно гарантировать более медленное его расщепление под действием сывороточного глутатиона. Был получен также конъюгат, содержащий нерасщепляемый тиоэфирный линкер с аналогичной длиной (SC).
Было установлено, что расщепляемые тиолом конъюгаты B12-SS-ANTI и B12-SS-NH+ANT3 имеют in vitro - биоактивность, аналогичную биоактивности конъюгатов с протяженным спейсером, описанных выше (фиг. 1 и 2; таблицы 5 и 6). Парентеральное введение B12-SS-NH+ ANT3 кастрированным крысам приводило к снижению уровня LH в сыворотке аналогично тому, которое наблюдалось в случае немодифицированного ANTIDE-3, хотя B12-SS-ANTI имеет такую же биоактивность in vivo, что и нативный ANTIDE (таблица 6). Таким образом, использование расщепляемого тиолом спейсера (вместо нерасщепляемого спейсера) для получения VB12-ANTIDE-конъгатов, хотя и оказывает небольшое влияние на IC50 конъюгатов "VB12-спейсер-ANTIDE" в in vitro - анализе, но при этом оно значительно повышает активность конъюгатов in vivo до уровней, аналогичных уровню ANTIDE (фиг. 3 и 4, таблицы 5 и 6). Введение толильной группы или пространственно затрудненного тиола не оказывает значительного влияния ни на in vitro, ни на in vivo - активность любого аналога по сравнению с соответствующим аналогом, содержащим пространственно незатрудненный тиол. Было установлено, что нерасщепляемые конъюгаты, образованные посредством тиоэфирной связи, имели при испытаниях in vitro активность, аналогичную активности тиолового аналога однако при испытании in vivo, этот аналог обнаруживал гораздо более низкую активность.
Прим. к таблице 3:
Среднее ингибирующие концентрации (IC50) ABTIDE, аналогов ANTIDE и BV12-ANTIDE-конъюгатов для ингибирования LHRH-стимулированного высвобождения LH из культур клеток передней доли гипофиза крысы определяют после 4-часового культивирования. Результаты для конъюгатов (среднее значение +/- ср.кв. ош.) даны в "нг" введенного аналога ANTIDE/мл (конечная концентрация в лунке с культурой) по n независимым испытаниям. Результаты, которые не имели значимого отличия друг от друга (т.е. P>0,05), сгруппированы под общей строчной буквой.
Среднее ингибирующие концентрации (IC50) ABTIDE, аналогов ANTIDE и BV12-ANTIDE-конъюгатов для ингибирования LHRH-стимулированного высвобождения LH из культур клеток передней доли гипофиза крысы определяют после 4-часового культивирования. Результаты для конъюгатов (среднее значение +/- ср.кв. ош.) даны в "нг" введенного аналога ANTIDE/мл (конечная концентрация в лунке с культурой) по n независимым испытаниям. Результаты, которые не имели значимого отличия друг от друга (т.е. P>0,05), сгруппированы под общей строчной буквой.
Пример 5. Образование конъюгатов "VB12-аналог ANTIDE" с использованием линкера, расщепляемого трансглутаминазой.
Было установлено, что конъгаты между VB12 и ANTIDE-1 и ANTIDE-3, образованные с использованием расщепляемой трансглутаминазой γ-глутамил-ε-лизиновой связи, (B12-TP-ANTI и B12-TP-ANT3) имеют плохую активность in vitro, и ничтожно малую активность in vivo при испытуемых дозах, что дает основание предположить, что эта связь не расщепляется ни in vitro, ни in vivo. Возможно, стереоспецифичность ингибирует расщепление ANTIDE-1-конъюгатов (благодаря присутствию D-лизиновой группы), тогда как пространственное затруднение, возможно, препятствует расщеплению ANTIDE-1- и ANTIDE-3-конъюгатов трансглутаминазой.
Пример 6. Образование конъюгатов "VB12-ANTIDE-аналог-лизилполиглутамат" с использованием перекрестносшивающих агентов, расщепляемых тиолом.
Желательно увеличить количество лекарственного средства или его аналогов, которое может быть доставлено VB12-транспортной системой, посредством присоединения множества копий лекарственного средства к полимерному остову, с которым связана одна или несколько молекул VB12. Ниже описан способ получения таких VB12-лекарственное средство-полимерных комплексов.
a) Образование DTP-лизил-полиглутамата.
Полиглутамат (100 мг) (MW 64600 - 70000; Sigma) подвергают реакции с EDAC (100 мг) и NHS (50 мг в ацетоне) в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавляют лизин (400 мг в 4 мл 1 % NaHCO3) и реакционную смесь оставляют на ночь для протекания реакции (O/N). Продукт лизил-полиглутамат (LPG) очищают путем экстензивного диализа против DW, а затем лиофилизуют.
Дитиопиридиловое производное LPT получают с помощью реакции дитиопиридил-пропионовой кислоты (50 мг) с тетрафтороборатом O-(N- сукцинимидил)-N,N, N',N'-тетраметилилурония (TSTU) (100 мг) и N- этилдиизопропиламином (100 мг; DIEA) в ДМФ в течение 1 часа. Полученный таким образом сукцинимидиловый сложный эфир вносят непосредственно в 100 мг LPG, растворенного в 4 мл 2% NaHCO3. Реакционную смесь оставляют на ночь для протекания реакции, после чего продукт (DTP-IPG) очищают путем исчерпывающего диализа против DW, а затем лиофилизуют.
b) Получение иминотиолированного ANTIDE-1.
ANTIDE-1 (20 мг) растворяют в 300 мкл 5% DIEA в ДМФ, содержащем 5 мг EDTA и 5 мг DTT, который был дегазирован в присутствии аргона. Затем добавляют иминотиолан (20 мг в 50 мкл DIEA/ДФМ и 50 мкл боратного буфера, 100 мМ, pH 8,2) и проводят реакцию в течение 60 минут, после чего продукт очищают с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ и лиофилизуют.
c) Получение иминотиолированного аминоэтил- VB12.
Аминоэтил "e" VB12 (20 мг) растворяют в 300 мкл 5% DIEA в ДМФ, содержащем 5 мг EDTA и 5 мг DTT, который был дегазирован в присутствии аргона. Затем добавляют иминотиолан (20 мг в 50 мкл DIEA/ДМФ и 50 мкл боратного буфера, 100 мМ, pH 8,2) и проводят реакцию в течение 60 минут, после чего продукт очищают с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ и лиофилизуют.
d) Образование VB12-ANTIDE-лизил-полиглутамата.
DTP-IPG растворяют в DW при 20 мг/мл. Иминотиолированный аминоэтил-VB12 растворяют в DW при 5мг/мл и добавляют к DTP-IPG (1:20 мас./мас.), оставляют на 20 минут при комнатной температуре для прохождения реакции, после чего, размешивая, по капле добавляют иминотиолированный ANTIDE-1 (50 мг/мл в DW). Реакционную смесь выдерживают при pH 6,5 - 7,0 путем добавления Трис-HCl, pH 7,0 и ацетата натрия, pH 5,5. Реакция протекает в течение ночи, после чего продукт очищают путем диализа, а затем лиофилизуют. Состав продукта определяют с помощью аминокислотного анализа, который показывает, что полученный продукт имеет следующий состав: 1:5:21=ANTIDE-1:лизин:глутамат или по грубой оценке этот продукт содержит 25 мас.% ANTIDE.
Ранее получение антагониста LHRH, подходящего для использования в целях лечения гормонозависимого рака молочной железы и простаты у человека, было ограничено низкой активностью этих молекул, их плохой растворимостью в физиологических буферах и плохой биологической усвоямосью при пероральном введении. В попытке разрешить эти проблемы автором настоящего изобретения была рассмотрена возможность совмещения относительно высокой биологической активности сильного антагониста LHRH, а именно ANTIDE, с высокой биологической усвояемостью при пероральном введении витамина B12. ANTIDE является особенно подходящим для пероральной "доставки", поскольку он состоит из многих не встречающихся в природе аминокислот, кроме того, он является резистентным к действию трипсина или химотрипсина. Однако указанный ANTIDE должен быть модифицирован таким образом, чтобы он содержал сайт, необходимый для конъюгации с VB12, но при этом он должен полностью сохранять свою биологическую активность. Обычно ANTIDE имеет модифицированные лизиновые остатки в положениях 5, 6 и 8, а именно: Lys (Nic), D-Lys (Nic) и Lys (iPr) соответственно. Удаление этих модифицикаций в любом из трех положений дает свободный амин, подходящий для конъюгации с VB12. Были синтезированы два производных ANTIDE, а именно: D-Lys6-ANTIDE (ANTIDE-1) и Lys8-ANTIDE (ANTIDE-3), подходящих для конъюгации с VB12, и при этом было установлено, что они обладают высокой степенью активности в in vitro - анализе клеток гипофиза. Было также обнаружено, что ANTIDE-3 обладает высокой активностью при подкожном введении крысам, хотя ANTIDE-1, как было обнаружено, обладает ничтожно малой антагонистической активностью, что вероятно обусловлено изменением скорости его выведения из сыворотки. Однако in vitro- и in vivo -активность любого их этих аналогов значительно снижается при прямом конъюгировании с VB12 (таблицы 3 и 4), что вероятно обусловлено стерическим препятствием связыванию конъюгата с гипофизарным рецептором для LHRH посредством объемной молекулы VB12, находящейся в непосредственной близости с ANTIDE.
Для уменьшения стерического эффекта, наблюдающегося при прямом конъюгировании VB12 с ANTIDE-1 и ANTIDE-3, продуцируют ковалентные комплексы между аминоэтил-e VB12 и ANTIDE-1 и -3 с использованием нерасщепляемых линкеров, которые отделяют объемную группу VB12 от аналога ANTIDE. Все продуцированные конъюгаты, а именно конъюгаты VB12-ANTIDE-1, образованные с помощью либо анилидо (PA)-, либо EGS - спейсера, или конъюгаты VB12-ANTIDE-3, образованные с помощью анилидо-, EGS- или DSS - спейсера, обнаруживали in vitro - активность, аналогичную активности нативного ANTIDE (фиг. 1), что дает основание предположить, что размещение B12-группы на некотором расстоянии от ANTIDE позволяет сохранить аффинность ANTIDE по отношению к его рецептору. Эти конъюгаты имели очень низкую активность in vivo (фиг. 2), что вероятно обусловлено удалением указанных конъюгатов из кровотока VB12-связывающими белками, такими как транскобаламин I или транскобаламин II, которые в значительной степени могут снижать их in vivo-активность.
В попытке уменьшить возможность стерического затруднения минимизировать возможность снижения системной биологической доступности конъюгатов, обусловленного выведением их из кровотока VB12-связывающими белками, были получены VB12- ANTIDE - конъюгаты с использованием линкеров, которые повержены биолоческому расщеплению in vivo. Для этого была вабрана дисульфтдная связь, поскольку эта связь наиболее легко расщепляется in vivo и, кроме того, она присутствует в биологических конъюгатах, таких как A-SS-B субъединичные токсины, столбнячный токсин и дифтерийный токсин (Sabdvig & Olsens, 1981; Matsuda & Yoneda, 1974). Было показано, что дисульфидные связи расщепляются при низких уровнях глутатиона, присутствующего в сыворотке, либо в цитоплазме клеток (Anderson & Meister, 1980).
Было установлено, что образованные с помощью дисульфидной связи конъюгаты VB12-ANTIDE-1 и VB12-ANTIDE-3 имеют немного меньшую in vitro - активность по сравнению с ANTIDE или по сравнению с конъюгатами VB12-ANTIDE-1 и ANTIDE-3, полученными с использованием анилидо- и EGS-спейсеров. В противоположность этому, конъюгаты с дисульфидной связью обнаруживают резкое увеличение своей in vivo - активности по сравнению с конъюгатами, полученными с использованием нерасщепляемого протяженного спейсера (фиг. 3 и 4, таблицы 5 и 6). Что касается B12-SS-NH+-ANT3-конъюгата, то его in vivo - биоактивность слегка превышает активность NS-NH+-ANT3-аналога. Использование спейсера аналогичной длины, содержащего нерасщепляемую тиоэфирную связь вместо дисульфидной связи, приводит к значительному снижению in vivo - активности, что дает основание предположить, что увеличение активности конъюгата с дисульфидной связью обусловлено его способностью расщепляться in vivo. Было установлено, что все конъюгаты, описанные выше, независимо от того, были ли они получены путем прямого связывания, либо путем связывания посредством расщепляемого или нерасщепляемого спейсера, имеют гораздо более высокую растворимость в физиологических буферах, таких как PBS или физиологический раствор, чем нативная молекула ANTIDE (результаты не показаны).
Были получены также конъюгаты между VB12 и ANTIDE-1 и -3, образованные спейсером, содержащим γ -глутамил- ε -лизиновую связь, которая может расщепляться сывороточными трансглутаминазами. Несмотря на высокую in vitro - активность этих конъюгатов, их in vivo - активность оказалась очень низкой, что объясняется очевидно тем, что указанный спейсер не расщепляется in vivo.
Было установлено, что аффинность конъюгатов VB12-ANTIDE-1 и -3 в отношении IF равна или превышает аффинность e VB12-изомера, из которого эти конъюгаты были получены. Аналогичные наблюдения были сделаны и в отношении других конъюгатов e VB12-изомера (Russell - Jones, 1994).
Эти исследования показали, что две молекулы, имеющие в принципе различные биологические активности, могут быть связаны друг с другом и при этом может быть в основном сохранена биологическая активность каждого отдельного компонента. Однако в процессе конъюгирования необходимо следить за тем, чтобы сохранялась активность связывания "рецептор-лиганд" для обеих молекул, а также сохранялась биологическая доступность фармакологического агента. Так, например, оказалось вполне возможным получить несколько комплексов между VB12 и ANTIDE с использованием спейсеров, которые обнаруживали не только высокую in vitro - активность в анализе клеток гипофиза, но и высокую относительную аффинность по отношению к IF, однако биологическая активность in vivo этих конъюгатов была значительно более низкой. В этих случаях положительные результаты дает альтернативный способ конъюгирования двух молекул, предусматривающий использование биологически расщепляемых спейсеров.
Необходимо отметить, что любой специалист может внести в данное изобретение, проиллюстрированное выше конкретными примерами, различные изменения и/или модификации, не выходящие однако за рамки объема и существа этого изобретения. Поэтому представленные примеры осуществления изобретения должны рассматриваться как иллюстративные и не ограничивающие его объема.
Claims (9)
1. Антагонист ЛГ-рилизинг-фактора (LHRH), выбранный из группы, состоящей из N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys(Nic), D-Lys, Leu, Lys/iPr/, Pro, D-Ala-NH2(D-Lys6ANTIDE или ANTIDE-1), N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys, D-Lys(Nic), Leu, Lys(iPr), Pro, D-Ala-NH2(Lys5ANTIDE или ANTIDE-2) и N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(PCl), D-Pal(3), Ser Lys(Nic), D-Lys(Nic), Leu, Lys, Pro, D-Ala-NH2(Lys8 ANTIDE или ANTIDE-3).
2. Комплекс, предназначенный для химической кастрации индивидуума и/или для лечения гонадотропинзависимых расстройств, включающий в себя пептид, связанный с носителем, являющимся витамином B12 или его аналогом, отличающийся тем, что указанным пептидом является антагонист LHRH по.1, который связан с носителем посредством линкерной группы, причем эта линкерная группа характеризуется тем, что указанный антагонист LHRH отщепляется от носителя in vivo.
3. Комплекс по п.2, где указанный антагонист выбирают из группы, состоящей из ANTIDE-1, ANTIDE-2 и ANTIDE-3.
4. Комплекс по п.3, где указанным антагонистом является ANTIDE-3.
5. Комплекс по любому из пп.2 - 4, где с указанным носителем связан более чем один антагонист LHRH.
6. Комплекс по любому из пп.2 - 5, где указанный носитель выбирают из группы, включающей в себя цианокобаламин, аквокобаламин, аденосилкобаламин, метилкобаламин, гидроксикобаламин, цианокобаламин, карбаналид, 5-о-метилбензилкобаламин и все их дездиметиловые, моноэтиламидные и метиламидные аналоги, аналоги и гомологи кобамамида, кофермент B12, 5'-дезоксиаденозилкобаламин, хлоркобаламин, сульфитокобаламин, нитрокобаламин, тиоцианатокобаламин, бензимидазоловые производные, аденозилцианокобаламин, лактон кобаламина, лактам кобаламина, и анилидные, этиламидные, пропионамидные, монокарбоновокислые и дикарбоновокислотные производные витамина B12 или его аналогов.
7. Комплекс по любому из пп.2 - 6, в котором указанный антагонист LHRH связан с указанным носителем посредством расщепляемого тиолом перекрестносшивающего агента.
8. Комплекс по п.6, в котором указанный антагонист LHRH связан с указанным носителем посредством дисульфидной связи.
9. Способ химической кастрации и/или лечения гонадотропинзависимых расстройств индивидуума, заключающийся во введении указанному индивидууму эффективного количества комплекса по любому из пп.2 - 8.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AUPL888093 | 1993-05-20 | ||
AUPL8880 | 1993-05-20 | ||
PCT/AU1994/000262 WO1994028015A1 (en) | 1993-05-20 | 1994-05-20 | Lhrh antagonists |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95122703A RU95122703A (ru) | 1998-01-10 |
RU2130464C1 true RU2130464C1 (ru) | 1999-05-20 |
Family
ID=3776905
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95122703A RU2130464C1 (ru) | 1993-05-20 | 1994-05-20 | Антагонист лг-рилизинг-фактора (lhrh), комплекс, способ химической кастрации и/или лечения гонадотропинзависимых расстройств |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5863900A (ru) |
EP (1) | EP0698040A4 (ru) |
JP (1) | JPH08510260A (ru) |
KR (1) | KR960702476A (ru) |
CA (1) | CA2163225A1 (ru) |
RU (1) | RU2130464C1 (ru) |
SG (1) | SG50426A1 (ru) |
WO (1) | WO1994028015A1 (ru) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5574018A (en) * | 1994-07-29 | 1996-11-12 | Amgen Inc. | Conjugates of vitamin B12 and proteins |
US5843901A (en) * | 1995-06-07 | 1998-12-01 | Advanced Research & Technology Institute | LHRH antagonist peptides |
PT1007533E (pt) | 1996-08-27 | 2005-09-30 | Univ Utah Res Found | Bioconjugados e administracao de agentes bioactivos |
AUPP405098A0 (en) * | 1998-06-12 | 1998-07-02 | Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited | Novel methods of preparation of vitamin b12 derivatives suitable for conjugation to pharmaceuticals |
FR2822834B1 (fr) * | 2001-04-02 | 2005-02-25 | Flamel Tech Sa | Suspension colloidale de nanoparticules a base de copolymeres amphiphile pour la vectorisation de principes actifs et leur mode de preparation |
FR2843117B1 (fr) * | 2002-07-30 | 2004-10-15 | Flamel Tech Sa | Polyaminoacides fonctionnalises par au moins un groupement hydrophobe et leurs applications notamment therapeutiques |
GB0307777D0 (en) | 2003-04-04 | 2003-05-07 | Medical Res Council | Conjugate compounds |
FR2855521B1 (fr) * | 2003-05-28 | 2005-08-05 | Flamel Tech Sa | Polyaminoacides fonctionnalises par au moins un groupement h ydrophobe et leurs applications notamment therapeutiques. |
US7232805B2 (en) * | 2003-09-10 | 2007-06-19 | Inflabloc Pharmaceuticals, Inc. | Cobalamin conjugates for anti-tumor therapy |
FR2860516B1 (fr) * | 2003-10-03 | 2006-01-13 | Flamel Tech Sa | Homopolyaminoacides telecheliques fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques |
FR2862536B1 (fr) * | 2003-11-21 | 2007-11-23 | Flamel Tech Sa | Formulations pharmaceutiques pour la liberation prolongee de principe(s) actif(s), ainsi que leurs applications notamment therapeutiques |
US20080233135A1 (en) * | 2007-03-19 | 2008-09-25 | Gebhard John R | Cobalamin taxane bioconjugates |
WO2011130716A2 (en) | 2010-04-16 | 2011-10-20 | Access Pharmaceuticals, Inc. | A nanostructures containing vitamin b12 for facilitated delivery of drugs across biological barriers |
CN103501821A (zh) | 2011-03-08 | 2014-01-08 | 艾克塞斯制药公司 | 用于递送活性剂穿过生物膜的靶向纳米载体系统 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU587658B2 (en) * | 1985-10-10 | 1989-08-24 | Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited | Oral delivery of biologically active substances bound to vitamin b12, or analogues thereof |
NZ217821A (en) * | 1985-10-10 | 1989-07-27 | Biotech Australia Pty Ltd | Oral delivery system; complex of active agent and vitamin b12 or analogue thereof |
US4935491A (en) * | 1987-08-24 | 1990-06-19 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Effective antagonists of the luteinizing hormone releasing hormone which release negligible histamine |
GB2218102B (en) * | 1988-04-08 | 1992-09-16 | Sandoz Ltd | Calcitonin peptide derivatives |
US5169935A (en) * | 1990-06-20 | 1992-12-08 | The Salk Institute For Biological Studies | Method of making peptides |
-
1994
- 1994-05-20 JP JP7500011A patent/JPH08510260A/ja active Pending
- 1994-05-20 WO PCT/AU1994/000262 patent/WO1994028015A1/en not_active Application Discontinuation
- 1994-05-20 EP EP94916085A patent/EP0698040A4/en not_active Withdrawn
- 1994-05-20 RU RU95122703A patent/RU2130464C1/ru active
- 1994-05-20 CA CA002163225A patent/CA2163225A1/en not_active Abandoned
- 1994-05-20 SG SG1996001146A patent/SG50426A1/en unknown
- 1994-05-20 KR KR1019950705129A patent/KR960702476A/ko not_active Application Discontinuation
-
1995
- 1995-05-20 US US08/537,941 patent/US5863900A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
AU В-65289/86, 1987. AU В-32637/89, 1989. AU В-57178/86, 1987. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0698040A4 (en) | 1999-01-07 |
CA2163225A1 (en) | 1994-12-08 |
JPH08510260A (ja) | 1996-10-29 |
KR960702476A (ko) | 1996-04-27 |
SG50426A1 (en) | 1998-07-20 |
WO1994028015A1 (en) | 1994-12-08 |
EP0698040A1 (en) | 1996-02-28 |
US5863900A (en) | 1999-01-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Russell-Jones et al. | Synthesis of LHRH antagonists suitable for oral administration via the vitamin B12 uptake system. | |
JP4778405B2 (ja) | 標的細胞毒性アントラサイクリン類似体の合成方法 | |
RU2139732C1 (ru) | Амплификация системы поглощения витамина b12 при помощи полимеров | |
RU2130464C1 (ru) | Антагонист лг-рилизинг-фактора (lhrh), комплекс, способ химической кастрации и/или лечения гонадотропинзависимых расстройств | |
US6262253B1 (en) | Vitamin B12 conjugates with gcsf, analogues thereof and pharmaceutical compositions | |
Siemion et al. | Tuftsin: on the 30-year anniversary of Victor Najjar’s discovery | |
Janaky et al. | Analogues of luteinizing hormone-releasing hormone containing cytotoxic groups. | |
JPH10502334A (ja) | 受容体調節剤およびこれに関連した方法 | |
Radulovic et al. | Cytotoxic analog of somatostatin containing methotrexate inhibits growth of MIA PaCa-2 human pancreatic cancer xenografts in nude mice | |
US6326467B1 (en) | Hormone-recombinant toxin compounds and methods for using same | |
JPH04224600A (ja) | 細胞毒性成分を有する黄体形成ホルモン放出ホルモン類似体 | |
US20060100154A1 (en) | Long-acting gonadotropin-releasing hormone analogs and methods of use thereof | |
US7368431B2 (en) | Polypeptide, the conjugate thereof with doxorubicine and a pharmaceutical composition based thereon | |
CA2500897A1 (en) | Long-acting gonadotropin-releasing hormone analogs and methods of use thereof | |
AU706979B2 (en) | LHRH antagonists | |
RU2277930C1 (ru) | Векторный полипептид - аналог фрагмента трансформирующего фактора роста альфа (тфральфа), его противоопухолевый конъюгат и фармацевтическая композиция на основе конъюгата | |
Toth et al. | Liposaccharides: Utilisation for Peptide Delivery and for Enhancing Synthetic Peptide Immunogenicity | |
CZ200132A3 (cs) | Podávači systém |