JPH10502334A

JPH10502334A - 受容体調節剤およびこれに関連した方法

Info

Publication number: JPH10502334A
Application number: JP7526497A
Authority: JP
Inventors: モーガン、エー・チャールズ; ウイルバー、ディー・スコット; パサレ、プラディップ・エム
Original assignee: University of Washington
Current assignee: University of Washington
Priority date: 1994-04-08
Filing date: 1995-04-07
Publication date: 1998-03-03
Also published as: KR100361075B1; WO1995027723A1; AU2283595A; CA2187346C; US5840712A; DE69528523D1; CA2187346A1; ATE225799T1; EP0754189B1; DE69528523T2; KR970702290A; EP0754189A1; US6083926A

Abstract

(57)【要約】細胞表面受容体輸送経路に影響を及すことにより、細胞表面受容体を調節することができる受容体調節剤。受容体調節剤は、共有結合する経路変更部分とターゲッティング部分とを有する。

Description

【発明の詳細な説明】受容体調節剤およびこれに関連した方法〔技術分野〕本発明は、一般的には、細胞表面受容体を調節する受容体調節剤に関する。特に、本発明は細胞表面受容体に結合し、受容体をやり取りする経路に影響を与える受容体調節剤と、これに関連した方法に関する。〔発明の背景〕細胞表面受容体は、特定のリガンドの受容体で媒介されるエンドサイトーシスの誘引となるタンパク質類を構成する。基本的には、該受容体は細胞内の目的部位へリガンドを輸送するための搬送体として働く。リガンドの輸送は、一般的には、「被覆ピット（coated pits）」と呼ばれる原形質膜上の被覆された領域を介して達成される。これらのピットは陥入すると共に連続的に切り取られ、細胞質内に「被覆小胞（coated vesicles）」を形成する。この被覆ピットおよび被覆小胞は、受容体で媒介される特定のリガンドのエンドサイトーシスのための経路を提供する。特定の細胞表面受容体に結合するリガンドは被覆ピットを介して取り込まれるので、同時に大容量の細胞外液体を取り込むことなく、多数の特定のリガンドを細胞に摂取することができる。取り込まれた被覆小胞は、これらの被覆を失っても又は失わなくてもよいが、他の小胞と結合して「エンドソーム」と呼ばれる大きな小胞を形成する。エンドソーム内において、リガンドと受容体は分離され又は「区分け」される。リガンドと受容体とを区分けするエンドソームは、「受容体とリガンドを解離する区画室（co mpartment of uncoupling of recepter and ligand）」又は「ＣＵＲＬ」として知られる。エンドソームは一次リソソーム（ここで、これらの内用物が消化される。）と融合してもよく、又は他の細胞内の目的部位に運ばれてもよい。一般に、この受容体タンパク質は消化されず、むしろ「エキソサイトーシス」と呼ばれる過程を介して細胞膜表面に再生されるか、又は多小胞体を介して初期若しくは後期エンドソームに移される。この全経路は、「受容体受け渡し経路（rece-ptor traf-f icking pathway）」と称される。幾つかの受容体は、細胞質または他の特定の細胞内位置へ直接これらのリガンドを輸送する。おそらく、最もよく研究された受容体受け渡し経路は、鉄の輸送の受け渡し経路である。この経路では、血清輸送タンパク質（即ちトランスフェリン）が鉄と結合し、これを血漿膜表面のトランスフェリン受容体に輸送する。被覆ピットを介して結合し、取り込まれた後、得られた小胞はまず初期エンドソームと結合し、次いで後期エンドソームと結合する。この過程において、小胞内のｐＨが徐々に低下する。このｐＨの低下によって、トランスフェリン輸送タンパク質は鉄に対する親和性を喪失する。このｐＨの低下が起こると、鉄は小胞の膜を通って位置を変え、細胞内の酵素貯蔵部位に結合する。次に、トランスフェリン受容体は細胞表面に戻され、ここで上記過程が繰り返される。他の受容体は、これらのリガンドを消化のためのリソソームへ直接輸送しうる。例えば、表皮成長因子（「ＥＧＦ」）受容体は、そのリガンドを分解のためのリソソームに直接輸送する（Prog ．Histochem．Cytochem. 26: 39-48，1992）。ＥＧＦ受容体は、そのリン酸化の状態に応じて細胞表面に戻される（Cancer Tre at.Rep. 61:139-160，1992; J ．Cell Biol. 116:321-330，1992）。単一の受容体は、同じ細胞内で１以上の受容体受け渡し経路を利用し得る。例えば、特異化した輸送上皮細胞のような分極した細胞では、膜輸送が細胞の頂点側と基底側との間で明瞭に区別される（Sem ．Cell．Biol. 2:387-396，1991）。更に、分極していない上皮細胞は、同時に２種類の別々の区分経路に従う。細胞表面受容体の制御および調節は、種々の技術によって達成することができる。細胞表面受容体の調節は、天然に存在するリガンドの結合によって、非常に基本的なレベルで達成される。先に議論したように、リガンドの受容体への結合は、一般に、リガンド−受容体複合体の取り込みの引き金になるであろう。このような取り込みによって、細胞は、更なるリガンドとの結合に対する感受性を喪失する（J ．Immunol. 150:3161-9，1993; Mol ．Endocrinol. 6:2090-102; J ．Ce ll Physiol. 154:181-8,1993; Mol ．Endcrinol. 6:2090-102，1992; J ．Cell.Ph ysiol. 154:218-8，1993; Receptor 1:12-32，1990-91; Biochem ．J. 288:55- 61，1992; J ．Immunol. 148:2709-11，1992; J．Cell．Physiol. 148:24-34，19 91）。しかし、このタイプの調節は、天然では一時的であり、生物学的な応答の減少を起こさない。細胞表面受容体の調節は、受容体拮抗剤又は作用剤の投与によっても達成される。受容体拮抗剤は、経験的な構造−機能の研究から、又はリガンドと受容体との相互作用の詳細な情報を使用して一般的に誘導される、有機タンパク質若しくはペプチドリガンドである。本質的には、拮抗剤は天然のリガンドに対して同様の結合活性を有する何れかの分子から構成されうるが、天然のリガンドによって通常誘導される生物学的応答を誘導することができない。従って、拮抗剤は完全に受容体活性をブロックする。競争的拮抗剤の場合、その受容体活性の調節は、受容体に対する拮抗剤の親和性、並びに所定時間に亘るその細胞外濃度の両方に依存する。受容体作用剤は、拮抗剤と同様の方法で誘導されるタンパク質又はペプチドリガンドである。本質的に、作用剤は、天然のリガンドよりも優れた方法で受容体に結合する何れかの分子で構成されるであろう。特に興味のある受容体の１つは、ビタミンＢ₁₂受容体である。in vitro での実験データ、前臨床動物モデル、および患者での研究で示されているように、ビタミンＢ₁₂は細胞分裂、並びに増殖する正常細胞および新生物細胞における細胞の代謝に必要な補酵素である。ビタミンＢ₁₂が不足すると、機能が停止したままで細胞分裂が起こり、最終的に枯死を引き起こす可能性がある。この栄養素は、一般に摂取した食餌に由来し、輸送タンパク質と複合体を形成して全身に輸送される。輸送タンパク質とビタミンＢ₁₂との複合体は、該複合体を取り込み且つ細胞内で該ビタミンを遊離する細胞性受容体によって識別される。この全プロセスは、GUT 31:59，1991に概説されている。ビタミンＢ₁₂は食餌を介して摂取される。唾液（Ｒ−バインダー）および消化管（内因性因子（ＩＦ））内の結合タンパク質は、酵素および胃内の低ｐＨの作用によって内因性結合タンパク質から誘導された後にビタミンＢ₁₂と複合体を形成する。ビタミンＢ₁₂は、受容体に特異的な様式で、腸間上皮を越えてトランスコバラミンII（Ｔｃ II）に運ばれる。次に、ビタミンＢ₁₂／トランスコバラミンII複合体は全身に運ばれ、分裂する細胞上に存在する受容体によって認識され、取り込まれて細胞内に放出され、そこで一定の酵素により共因子として利用される。ビタミンＢ₁₂の取り込みを生じる分裂組織又は細胞内の高親和性受容体は、ビタミンＢ₁₂との複合体を形成したトランスコバラミンIIを認識する。ビタミンＢ₁₂ ／Ｔｃ II受容体は、ビタミンＢ₁₂／Ｔｃ II受容体のみを認識し、血清輸送タンパク質又はビタミンを単独では認識しない。該受容体は、分裂しない細胞には検出されない。ビタミンＢ₁₂を分裂しない細胞に供給するためのメカニズムは、それほど理解されていない。しかし、代謝の間よりも細胞分裂の際により多くのビタミンＢ₁₂が必要であることが知られており、またビタミンＢ₁₂／Ｔｃ II受容体は、細胞分裂の際にビタミンＢ₁₂を細胞内に取り込む唯一の高親和性手段であることが知られている。分裂を刺激すると、細胞はビタミンＢ₁₂の取り込みを導くこの受容体の一時的な発現を示し、これによって実際のＤＮＡ合成が進行する（J ．Lab．Clin．Med. 103:70,1984）。ビタミンＢ₁₂受容体のレベルは、血清を含まない化学的に定義された培地で成長させた複製培養物上での、トランスコバラミンII（血清中に存在）と複合体を形成した⁵⁷Ｃｏ−ビタミンＢ₁₂の結合によって測定することができる。受容体に媒介される取り込みは、担体タンパク質の非存在下では全く起こらない。分裂細胞は、分化を誘導されると受容体発現を喪失し、もはやビタミンＢ₁₂を取り込まない。より重要なことは、ビタミンＢ₁₂が枯渇した白血病細胞は分裂を停止し、死亡することである（Acta Haemat, 81:61，1989）。典型的な実験において、白血病細胞培養物を、３日間は血清を使わず、次いで血清（ビタミンＢ₁₂ 源）又はビタミンＢ₁₂の代謝不能類縁体の何れかを補給し、５日まで培養した。ビタミンＢ₁₂を補給された細胞培養物は連続して増殖したが、活性な栄養素を使用しなかったものは増殖を停止し、死亡した。これらの観測に基づけば、全身からビタミンＢ₁₂を枯渇させることは、癌又は制御不能な細胞増殖によって特徴づけられる他の疾患の治療に有効であろうことが示唆される。更に、細胞分裂の際にはビタミンＢ₁₂を含む酵素が決定的な役割を演じているので、ビタミンＢ₁₂を奪うことは、細胞の複製を阻害する化学療法剤と組み合わせて使用され得ると思われる。例えば、ビタミンＢ₁₂の枯渇消耗をメトトレキゼートと組み合わせると、二種類の薬剤を一緒に使用することによって、何れかを単独で使用するよりも、白血病細胞内の葉酸のレベルを消耗するのに効果的である（FASEB J. 4:1450，1990; Arch ．Biochem．Biophys. 2 70: 729，1989; Leukemia Reseach 15: 165，1991）。葉酸はＤＮＡおよびタンパク質の産生の前駆体である。典型的な実験において、白血病細胞の培養は、数時間亜酸化窒素にさらし、内因性ビタミンＢ₁₂の活性形態を不活性形態に変換する。次に、複製培養物を更に処置しないままでおくか、又は更にメトトレキゼートで処理する。細胞の葉酸レベルを三日後まで測定する。この組合せ（即ち、メトトレキゼートおよび不活性ビタミンＢ₁₂の両方）で処理した細胞は、２つのアプローチの何れか単独の場合よりも細胞の葉酸レベルの顕著な減少を示した。この組合せは、in vitroでより高い細胞の殺傷も引き起こした。このアプローチは、動物モデルでの侵攻性の高い白血病／リンパ腫の治療に適用した場合（Am.J ． Haematol ，34:128,1990; Anticancer Res. 6:737，1986; Cancer Chemother.Pha rmacol. 17:114，1986; Br ．J．Cancer 50:793，1984）、抗腫瘍活性の追加、又は共同作用が観測され、緩解および治癒が延長された。上述の実験における重要な所見は、ビタミンＢ₁₂を全身から短期間（数時間から数日）だけ涸渇させることと、化学療法剤（例えば、メトトレキゼートおよび５−ＦＵ）の使用とが相乗的に作用し、腫瘍の増殖を阻害して、白血病／リンパ腫をもつ動物を治療することができることである。相乗作用的な抗腫瘍活性があるにもかかわらず、正常細胞を増殖するための短期間のビタミンＢ₁₂の涸渇に起因する毒性は全くない。この組合せ治療は、複数の動物モデルで行われた。患者での観測は、正常組織に有為な毒性をもたらすには長期間（数カ月から数年）のビタミンＢ₁₂の涸渇が必要であることを示している。これらの場合でさえも、引き続きビタミンＢ₁₂を投与すれば容易に総合的症状を反転させることができる（ Br．J．Cancer 5:810，1989）。この治療的アプローチは有望であることから、種々の方法が探査され、ビタミンＢ₁₂の一時的な涸渇が効果的且つ制御しうるように行われている。しかし、このような方法は、ビタミンＢ₁₂の全ての体内の貯蔵に影響を及ぼす。これらには、食餌制限、ビタミンＢ₁₂類縁体（酵素阻害剤として作用する代謝され得ない競争的類縁体）の高投与、および亜酸化窒素（ビタミンＢ₁₂の不活性型への変換）が含まれる。これらの異なった方法は、培養系およびビタミンＢ₁₂を涸渇させる動物で使用される。最も効果的で有効な方法は、亜酸化窒素（笑気ガス）の吸入である。典型的には、動物を、数時間から数日間５０％から７０％の亜酸化窒素の雰囲気下に維持し、内因性のビタミンＢ₁₂を不活性型に変換させる。ビタミンＢ₁₂を涸渇させる更なる方法には、本質的に活性型の効果を弱めたビタミンＢ₁₂の代謝し得ない類縁体の注入が含まれる。この治療形態は、分裂する細胞に対しては特異的でないが、肝臓に依存した代謝過程に影響を与える。他のアプローチには、ビタミンＢ₁₂の食餌での取り込みを制限することが含まれる。しかしながら、この方法は、非常に長期間の食餌制限が必要であり、ビタミンＢ₁₂ の肝臓の貯蔵によって相殺される。これらの方法は全て、該方法がビタミンＢ₁₂ 依存性増殖並びに基礎代謝の両方に影響するので、特異性に問題がある。従って、抗増殖性の薬学的製品の開発には特に適していない。細胞表面受容体の生物学的重要性を考慮すれば、受容体制御剤が薬学的な医薬として浮かび上がってくる。更に、細胞表面受容体に対する遺伝子の単離および増幅のための遺伝子操作、並びにリガンドおよび受容体間の相互作用をモデリングするコンピュータプログラム（即ち、「理論的」ドラッグデザイン」の出現により、受容体を制御する医薬の製造が十分に高められている。今日まで、多年月に渡る科学的な研究、並びに十分な財源が、新規な受容体拮抗剤又は作用剤を製品化するために必要であった。このプロセスをスピードアップするために、ペプチド又は抗体組換えライブラリーを用いた新たなスクリーニング技術が開発されている（例えば、Gene 73:305，1988; Proc ．Nat．Acad．Sc i．(USA) 87:6378，1990; Biochromatography 5:22，1990; Protein Engi-neeri ng 3:641，1989）。ライブラリースクリーニングは特異的受容体／リガンド系の同程度の情報を必要としないが、機能的な受容体特異性試験を用いた集中的なスクリーニングの努力が含まれる。更に、このようなスクリーニングプログラムによって同定される初期化合物は、一般に、より典型的な構造−機能評価を介した治療製品を開発するための単なる前駆体である。拮抗剤および作用剤は、一般に、生物学的応答を調節することができるが、このようなリガンドに結合する表面受容体は、細胞表面に継続的に再発現される。従って、拮抗剤または作用剤による効果的な調節は、細胞表面に継続的に発現される新たな表面受容体に結合するために、相対的に高く且つ継続した血清濃度に依拠しなければならない。従って、当分野においては、細胞表面受容体に結合し、これに関連した生物学的応答を制御する医薬、および結合した受容体の正常な細胞性輸送に更に影響する医薬に対するニーズがある。当分野においてはまた、細胞受容体に結合して取り込まれた場合に、受容体が細胞内に保持されることを促進する医薬に対するニーズが存在する。更に、生物学的応答を調節するためのこのような医薬の投与に関連した方法のニーズも存在する。本発明は、これらのニーズを完全に満たし、更に関連した利点を提供する。〔発明の概要〕概略的に言えば、本発明は、細胞の受容体の輸送経路に影響を与えることができる、受容体調節剤を提供する。本発明の受容体調節剤は、ターゲッティング部分(targeting moiety)に結合した経路変更部分(rerouting moiety)からなっている。適切なターゲッティング部分には、例えば、ビタミンＢ₁₂分子または幾つかのタンパクおよびペプチドの何れかが含まれる。適切な経路変更部分には、例えば、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン及びストレプトマイシンのようなリソゾーム向性部分(lysosomotropic moiety)；ジペプチドエステル及びロイシンジッパーのような細胞間重合部分；小胞体保持ペプチド、ゴルジ体保持ペプチド、リソゾーム保持ペプチド、生体特異的保持ペプチドおよびクラスリン結合性ポリペプチドのようなペプチド区分け配列；荷電したグルタメート、アスパルテート、およびヒスチジンのような条件的膜結合性ペプチド；及び二価または多価の架橋部分が含まれる。本発明の好ましい態様において、受容体調節剤は、リンカーによって経路変更部分に結合されたビタミンＢ₁₂分子からなっている。一般に、このリンカーは少なくとも４原子の長さであり、典型的には、該リンカーは約６〜２０原子の長さであり、好ましくは、該リンカーは１２原子の長さである。適切なリンカーには、ジアミノアルキル、ジアミノアルキルアリール、ジアミノヘテロアルキル、ジアミノヘテロアルキルアリールおよびジアミノアルカン類のような、アミノ基を含むリンカーが含まれる。該リンカーは、−ＮＨ（ＣＨ₂）_xＮＨ−［ここで、ｘ＝２〜２０］、または−ＮＨ（ＣＨ₂）_yＣＯ−［ここで、ｙ＝３〜１２］であるのが好ましい。一実施例において、該リンカーは三官能性リンカーである。本発明のこの側面の好ましい実施例において、Ｂ₁₂分子は、ｂ−，ｄ−またはｅ−カップリング部位で経路変更部分に結合される。本発明の特に好ましい実施例において、Ｂ₁₂分子は、ｄ−またはｅ−カップリング部位で経路変更部分に結合される。他の実施例において、Ｂ₁₂分子は、リボースカップリング部位で経路変更部分に結合される。更に別の実施例において、Ｂ₁₂分子はトランスコバラミンに結合される。本発明の受容体調節剤は、幾つかの方法の何れかで受容体輸送経路に影響を及ぼすことによって作用するが、これらの方法には、薬剤／受容体複合体の方向を変更すること；一以上の細胞表面受容体を架橋すること；細胞表面受容体を膜中に固定すること；受容体をエンドソーム中に保持することが含まれる。本発明の他の側面には、ａ〜ｇのカップリング部位、カップリング部位ｈおよびカップリング部位ｉからなる群から独立に選択されたカップリング部位を介して結合された、第一及び第二のビタミンＢ₁₂を有するビタミンＢ₁₂二量体が含まれる。好ましい実施例において、このＢ₁₂分子は、ｅ−またはｄ−カップリング部位を介して結合される。他の実施例において、Ｂ₁₂分子はリンカーによって結合される。一般に、このリンカーは少なくとも４原子の長さであり、典型的には、該リンカーは約１０〜５５原子の長さであり、好ましくは、該リンカーは３５〜４５原子の長さである。好ましい実施例において、該リンカーは三官能性リンカーである。適切なリンカーには、ジアミノアルキル、ジアミノアルキルアリール、ジアミノヘテロアルキル、ジアミノヘテロアルキルアリールおよびジアミノアルカン類のような、アミノ基を含むリンカーが含まれる。該リンカーは、−ＮＨ（ＣＨ₂）_xＮＨ−［ここで、ｘ＝２〜２０］、または−ＮＨ（ＣＨ₂）_yＣＯ−［ここで、ｙ＝３〜１２］であるのが好ましい。この態様の他の側面において、ビタミンＢ₁₂二量体は、少なくとも一つのトランスコバラミンII分子に結合される。この態様の更に別の側面において、前記二量体の第一および第二のビタミンＢ₁₂分子の少なくとも一つは、ビタミンＢ₁₂の誘導体である。本発明のこれら側面及び他の側面は、以下の詳細な説明及び添付の図面を参照することによって明らかになるであろう。加えて、以下では一定の方法または組成をより詳細に記載している種々の参照文献が挙げられるが、これらはその全体が参照として本明細書組み込まれる。〔図面の簡単な説明〕図１は、本発明の受容体調節剤の作用機構を模式的に示す図である。健康な受容体は、適切なリガンドが結合すると該リガンドを細胞内に放出し、次いで細胞表面に戻す。本発明の受容体調節剤は、細胞表面への受容体の再循環を阻害することによって、受容体輸送経路を妨害する。本質的に、受容体調節剤上のターゲッティング部分は受容体に結合する。また、経路変更部分は、受容体／受容体調節剤複合体を細胞内の他点へと経路変更し、該複合体はそこで保持または分解される。（この図では、デノボ(de novo)合成された受容体は示されていない。）図２〜５は、経路変更部分として作用する抗体ファミリーを示す式である。ターゲッティング部分と結合するための好ましい反応基が示されている。これらの経路変更部分は、受容体／受容体調節剤複合体にプロトン付加することにより、該複合体の保持を容易にし、最終的には分解のためにリソゾームへと送り出す。図２は、ゲンタマイシン、シソミシン(sisomicin)およびネチルミシン(netilm icin)科の抗体を表す式を図示している。図３は、カナマイシン、トブラマイシン(tobramycin)及びアミカシン(amicaci n)科の抗体を表す式を図示している。図４は、ネオマイシン、パロモマイシン、リポスタマイシン及びブチロシン科の抗体を表す式を図示している。図５は、ストレプトマイシン科の抗体を表す式を図示している。図６は、置換アミノキノリン（例えばクロロキン）、置換アミノアクリジン（例えばキナクリン）及び置換アミノナフタリン（例えばダンシルカダベリン）を表す式を図示しており、これらは全て本発明の経路変更部分の代表例である。これらの経路変更部分は、プロトン付加および細胞内保持を介して受容体輸送経路を阻害する。図７は、グリコシル化阻害剤を表す式を図示しており、これらは全て本発明の代表的な経路変更部分である。これらの糖は、典型的なオリゴマー糖鎖のリンカーを用いて、ターゲッティング部分に結合すればよい。得られた受容体調節剤は、内部グリコシルトランスレラーゼによって認識され、細胞内に保持され、最終的にはリソゾーム中で分解される。図８は、ビタミンＢ₁₂（シアノコバラミン）分子を表す式を図示しており、また本発明において誘導及び結合のために使用するのに適した好ましいカップリング部位を同定している。図９は、ビタミンＢ₁₂−ＧＡＢＡ付加物を合成するための代表的な反応図式の描写である。図１０ａは、ビタミンＢ１２分子と、そのｄ−，ｅ−またはｂ−カップリング部位の何れかに結合したアミノドデカンリンカーアームとを具備する、ビタミンＢ₁₂誘導体を合成するための代表的な反応経路の描写である。図１０ｂは、ビタミンＢ₁₂／ジアミノドデカン付加物をアミノ反応部位をもった経路変更部分または他の分子に結合するために、該ビタミンＢ₁₂／ジアミノドデカン付加物に無水コハク酸を結合する代表的な反応経路の描写である。図１１は、ビタミンＢ₁₂分子およびリボースカップリング部位に結合したジアミノドデカンリンカーアームを有するビタミンＢ₁₂分子を合成するための、代表的な反応経路を示す図である。図１２は、ビタミンＢ₁₂またはビタミンＢ₁₂−ＧＡＢＡ付加物をアミカシンに結合するための代表的な反応経路を示している。図１３は、ビタミンＢ₁₂またはビタミンＢ₁₂−ＧＡＢＡ付加物をストレプトマイシンに結合するための代表的な反応経路を示している。図１４は、ビタミンＢ₁₂カルボキシレート誘導体またはビタミンＢ₁₂−ＧＡＢＡ付加物をアクリジンに結合するための代表的な反応経路を示す図である。図１５は、三官能性のリンカーを用いて、二価の受容体調節剤（即ちビタミンＢ₁₂二量体）を合成するための代表的な反応経路を示す図である。この三官能のリンカーは、例えばアミノグルコシド（図２〜５）、アミノアクリジン（図６）、グリコシル化阻害剤（図７）およびビオチンのような追加の化合物との結合を可能にする。図１６は、ホモ二官能またはホモ三官能の架橋剤を用いて、ビタミンＢ₁₂二量体を合成するための代表的な反応経路を示す図である。図１７は、ヘテロ二官能架橋剤を用いて、ビタミンＢ₁₂二量体を合成するための代表的な反応経路を示す図である。図１８〜２１は、一般に図２〜７に示すものから選択される経路変更部分（反応基およびＲで示す）と、ターゲッティング部分としてのビタミンＢ₁₂またはその誘導体とを有する種々の受容体調節剤を合成するための、代表的な反応経路を示す図である。図２２は、実施例１で製造されたシアノコバラミンモノカルボン酸に対するトランスコバラミンIIの結合曲線を示すグラフである。ＡＤ＝シアノコバラミン（１）；ＡＬ＝シアノコバラミンｂ−モノカルボン酸（２）；ＡＭ＝シアノコバラミンｅ−モノカルボン酸（３）；およびＡＮ＝シアノコバラミンｄ−モノカルボン酸（４）図２３は、実施例３および４で製造されたシアノコバラミン／ジアミノドデカン付加物に対するトランスコバラミンIIの結合曲線を示すグラフである。ＡＨ＝シアノコバラミンｂ−モノカルボン酸複ジアミノドデカン（７）；ＡＩ＝シアノコバラミンｅ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン（８）；ＡＪ＝シアノコバラミンｄ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン（９）；ＡＫ＝コバラミンｅ− モノカルボン酸複合ジアミノドデカン（１０）；およびＡＥ＝シアノコバラミンリボース−コハク酸（１１）図２４は、一連のビタミンＢ₁₂二量体に対するトランスコバラミンIIの結合曲線を示すグラフである。二量体Ｘ＝イソフタル酸二塩化物とのｂ−酸二量体（３６）；二量体Ｙ＝イソフタル酸二塩化物とのｅ−酸二量体（３７）；二量体Ｚ＝イソフタル酸二塩化物とのｄ−酸二量体（３８）；二量体Ａ＝ｐ−ヨードベンゾイルイソフタル酸二塩化物とのｂ−酸二量体（５８）；二量体Ｂ＝ｐ−ヨードベンゾイルイソフタル酸二塩化物とのｅ−酸二量体（５９）；二量体Ｃ＝ｐ −ヨードベンゾイルイソフタロル酸二塩化物とのｄ−酸二量体（６０）。これらの二量体は、後述の実施例に示すようにして製造された（実施例１３および１６を参照のこと）。図２５は、ビオチニル化された一連のビタミンＢ₁₂分子に対するトランスコバラミンIIの結合曲線を示すグラフである。ＡＡ＝シアノコバラミンｂ−モノカルボン酸とジアミノドデカンおよびビオチンとの複合体（１７）；ＡＢ＝シアノコバラミンｅ−モノカルボン酸とジアミノドデカンおよびビオチンとの複合体（１８）；ＡＣ＝シアノコバラミンｄ−モノカルボン酸とジアミノドデカンおよびビオチンとの複合体（１９）；ＡＦ＝シアノコバラミンリボース-スクシネート複合ジアミノドデカン（１３）；ＡＧ＝シアノコバラミンリボース-スクシネートとジアミノドデカンおよびビオチンとの複合体（２０）；これらのビオチニルか分子は、後述の実施例に示すようにして製造された（実施例８を参照のこと）。〔発明の詳細な説明〕本発明は一般に、細胞表面受容体に結合して、受容体調節剤／受容体複合体（「薬剤／受容体複合体」）を形成することができる受容体調節剤に向けられている。細胞表面受容体への適切な受容体調節剤の結合は、天然のリガンドと同様にして、薬剤／受容体複合体の細胞内および小胞体系への陥入を生じる。しかしながら、一旦内部に取り込まれ、または取り込みプロセスの一部になると、本発明の受容体調節剤は、受容体が細胞表面に戻るのを阻害もしくは妨害し、または遅延させることによって受容体輸送経路に影響を及ぼし、その天然のリガンドに結合できる受容体を細胞から奪い、関連した生物学邸応答をトリガーする。本発明において、「受容体輸送経路に影響を及ぼす」とは、生物学的応答に影響するような仕方で、受容体輸送経路を阻害することを言う。これには、細胞表面受容体をトラップし、遅延させ、保持し、経路を変更し、または分解することが含まれる。「受容体調節剤」は、少なくとも一つの経路変更部分に共有結合的に連結された、少なくとも一つのターゲッティング部分を有している。「ターゲッテイング部分」は、以下に詳述するように、細胞表面受容体に特異的に結合して薬剤／受容体複合体を生じることができ、また好ましい態様においては、当該受容体に対して、天然リガンドの親和性の１００倍以内、より好ましくは１０倍以内の親和性を有している。好ましいターゲッティング部分はビタミンＢ₁₂分子である。一方、「経路変更部分」は、薬剤／受容体複合体の経路を変える部分であり、細胞内または細胞表面における受容体の保持時間の延長、分解、および／または調節をもたらす。これには、例えば細胞膜の中に該受容体を保持し、または該受容体を細胞内のリソソームへ向かわせることが含まれる。ターゲッティング部分は、受容体調節剤を得るために、適切な化学的リンカーの直接的な共有結合、または非共有結合による極めて緊密な会合を含む公知の何れかの手段により、経路変更部分に結合される。一つの態様における後者の例は、アビジンまたはストレプトアビジンとビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体との組合せによって達成される。ターゲッティング部分と経路変更部分との結合は、細胞の内部において通常遭遇するような、酵素および低ｐＨ条件による開裂に抵抗する性質をもっていなければならない。適切なリンカー類については以下で述べる。開裂に抵抗する能力は、公知の何れかの手段によって検出することができる。その中には、受容体調節剤を低ｐＨで酵素に晒し、放出されたターゲッティング部分および経路変更部分を公知の技術を用いて検出することが含まれる。ターゲッティング部分と経路変更部分との結合は、細胞表面受容体に特異的に結合するターゲッティング部分の能力を著しく妨げるものであってはならない。この受容体調節剤はまた、ターゲッティング部分または経路変更部分の何れかを妨げない限り、追加の部分を含んでいてもよい。例えば、このような部分は、三官能性リンカーを用いることによって受容体調節剤に結合しても良く、または経路変更部分またはターゲッティング部分に結合してもよい。二つの部分の最適な結合は、結合阻害試験において、受容体調節剤とターゲッティング部分との結合の親和性を比較することによって決定することができる。これらの技術および他の適切な技術は、サムブルック等によって詳細に説明されている（Sambrook et al.，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，Cold Spring Habor，1989）。ターゲッティング部分と経路変更部分との結合はまた、薬剤／受容体複合体を細胞内で保持または遅延させるという、経路変更部分の能力に顕著な影響を及ぼしてはならない。これは、当該技術において公知の幾つかの方法の何れかによって経験的に決定することができる。そのような方法には、ターゲット部分の細胞内保持時間と、以下に例示するような受容体調節剤の細胞内保持時間とを比較するためのラベリング技術を用いることが含まれる。上記のように、受容体調節剤のターゲッティング部分は、細胞表面受容体に特異的に結合する何らかの部分を含んでいる。次に列挙するものもまた、本発明のターゲッティング部分を構成する適切なターゲッティング部分の代表的例に含まれる：ボンベシン、ガストリン放出ペプチド、細胞付着ペプチド、サブスタンスＰ、ニューロメジンＢ、ニューロメジンＣおよびメテンケファリンを含むペプチド類；ＥＧＦ、α−およびβ−ＴＧＦ、エストラジオール、ニューロテンシン、メラニン細胞刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモンおよびヒト成長ホルモンを含むホルモン類；低密度リポタンパク、トランスフェリンおよびインスリンを含む、公知の細胞表面受容体のリガンドに対応したタンパク類；繊維素溶解酵素；およびインターロイキン、インターフェロン、エリスロポエチンおよびコロニー刺激因子。更に、細胞表面受容体に特異的に結合する能力を保持した上記ターゲッティング部分の類縁体もまた、適切なターゲッティング部分である。好ましい実施例において、ターゲッティング部分はビタミンＢ₁₂分子である。ビタミンＢ₁₂は分裂している細胞に必須の栄養素である。その摂取を阻害することによって、分裂細胞の成長を停止させることができる。ビタミンＢ₁₂の細胞表面受容体はトランスコバラミンII／ビタミンＢ₁₂（「Ｔｃ II／Ｂ₁₂」）受容体であり、これはビタミンＢ₁₂と複合体（「Ｔｃ II／Ｂ₁₂」）を形成したときのキャリアタンパク、即ちトランスコバラミンII（Ｔｃ II）に対する高い親和性によって特徴付けられる。このＴｃ II／Ｂ₁₂受容体は単独のビタミンＢ₁₂は認識しないが、キャリアタンパクＴｃ IIについては、ビタミンＢ₁₂と複合体を形成したときよりも低い親和性で認識する。この受容体系は、その最終目的がビタミンＢ₁₂を細胞内に放出して、これをＤＮＡ合成に含まれる酵素に利用させることである点等、多くの点において、トランスフェリン／鉄の受容体系と類似している。本発明において、「ビタミンＢ₁₂」の語は、コバラミンおよびその誘導体（例えばシアノコバラミンを含む）として知られた化合物群を言う。「ビタミンＢ₁₂」の語は、シアノコバラミンの語と互換的に用いられる。適切なビタミンＢ₁₂分子には、Ｔｃ II／Ｂ₁₂受容体複合体を形成する能力を維持しながら他の分子に結合できる如何なるビタミンＢ₁₂も包含される。好ましいビタミンＢ₁₂ターゲッティング部分は、一般にはシアノコバラミンのようなビタミンＢ₁₂分子および以下に詳述するリンカーを有している。このリンカーは、ビタミンＢ₁₂分子の幾つかの部位の何れかに結合されればよい。このカップリング部位には、潜在的なカルボキシカップリング部位ａ〜ｇ、アルコール（リボース）カップリング部位（カップリング部位ｈ）またはベンズイミダゾールカップリング部位（カップリング部位ｉ）が含まれる（下記の構造Ｉを参照のこと）。好ましくは、リンカーはビタミンＢ₁₂のカップリング部位ｂ，ｄまたはｅに結合される。更に好ましくは、リンカーはカップリング部位ｄまたはｅに結合される。本発明のこの態様には、下記の式で表される化合物が含まれる。上記式において、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄，Ｒ₅，Ｒ₆およびＲ₇の少なくとも一つはリンカーである。当業者は、ビタミンＢ₁₂分子の他の多くのカップリング部位が、当該分子の結合に影響を与えることなく化学的に変更され得ることを理解するであろう。リンカーに占有されていないカップリング部位は、当該部位に結合された種々の化学的部分、例えばアミノ基、二級アミノ基、三級アミノ基、水酸基、低級アルキル基、低級アルコシキ基、アルコキシアルキル基、アルコキシアルコキシ基、シクロアルキルアルコキシ基、およびチオアルキル基を有していてもよい。好ましい態様において、Ｒ₁，Ｒ₂またはＲ₄はリンカーであり、Ｒ₇を除く残りのＲは−ＮＨ₂基、Ｒ₇は好ましくは−ＯＨ基である。特に好ましい態様においては、Ｒ₂はリンカーであり、Ｒ₁，Ｒ₃〜Ｒ₆は−ＮＨ₂基、Ｒ₇は−ＯＨである。他の好ましい態様においては、Ｒ₇はリンカーであり、Ｒ₁〜Ｒ₆は−ＮＨ₂基である。適切なリンカーには、好ましくは、該リンカーがビタミンＢ₁₂および経路変更部分の両者に結合するのを可能にする少なくとも二つの結合基または反応基を含んだ、幾つかのリンカーの何れかが含まれる。本発明において、「結合基」および「反応基」の語は互換的に用いられる。例えば、リンカーはホモ二官能、ヘテロ二官能、ホモ三官能、またはヘテロ三官能の何れであってもよい。ホモ二官能剤は、ビタミンＢ₁₂分子の一段階での架橋または二量体化を容易にすることができる。何故なら、以下に詳細に説明する二量体の合成におけるように、二量体化が望ましい結果でないとすれば、これらを用いたカップリング反応は過剰の二官能剤を用いて行わなければならないからである。適切なホモ二官能剤には、表１に挙げたもの、並びに以下に詳述するものが含まれる。ヘテロ二官能剤は、二以上のリンカーを組み込むことを可能にし、またビタミンＢ₁₂のような種々のターゲッティング剤を結合させることによって、一段階胞での架橋を容易にする。ホモ三官能リンカーおよびヘテロ三官能リンカーは、該リンカーの第三のカップリング部位の追加の利点をもちながら、上記のようにして経路変更部分およびビタミンＢ₁₂分子に結合される。当業者はこれによって、例えば放射能ラベルされた分子および蛍光ラベルされた分子のようなマーカー類；抗体のようなタンパクおよびペプチド類；およびビオチンのような複合化分子を含む異なった分子が、如何なる数だけ経路変更成分に結合するかを知ることができる。適切な三官能リンカー類は表３に列挙されている。ホモ二官能、ヘテロ二官能、ホモ三官能およびヘテロ三官能のリンカーは、商業的に入手することができる。適切なリンカー類は、一般には比較的線形の分子であり、その長さは４原子よりも長く、典型的には６原子〜３０原子であり、好ましくは８〜２０原子の長さである。特に好ましい態様において、該リンカーは１２原子の長さの線形分子である。本発明において、「原子」の語は、例えばＣ，Ｎ，ＯまたはＳのような化学元素を言う。上記の範囲は、リンカーの比較的直線的な計数に基づいている。当業者は、リンカーが線形であっても分岐していてもよく、また環状部分を含んでいてもよいことを理解するであろう。結合基または反応基には、リンカーをビタミンＢ₁₂分子に結合することができる如何なる官能基も含まれる。適切な結合基には、求核的または親電子的な官能器が含まれる。適切な求核基には、水酸基、アミノ基、およびチオ基が含まれる。適切な親電子基には、カルボン酸基およびカルボン酸誘導体（酸ハロゲン化物、酸無水物およびＮＨＳエステルのような活性エステルを含む）が含まれる。適切なホモ二官能リンカーには、例えば、ＮＨ₂（ＣＨ₂）_xＮＨ₂の式（ｘ＝２〜２０）で表されるようなジアミノアルカンが含まれる。この中で、好ましいリンカーはジアミノドデカンである。また、適切なヘテロ二官能リンカーには、ＮＨ₂（ＣＨ₂）_yＣＯＯＨの式（ｙ＝３〜１２）で表されるものが含まれる。当業者は、ヘテロ二官能基を利用するときに保護基が必要になるかも知れないことを了解するであろう。リンカーは、幾つかの適切な手段のうちの一つを用いることにより、好ましいｂ−，ｄ−またはｅ−カップリング部位（上記の構造Ｉを参照のこと）に結合させればよい。好ましい手段には、例えばビタミンＢ₁₂分子のプロピオンアミド基をモノカルボン酸に加水分解して活性化し、得られたモノカルボン酸を精製し、次いで選択されたカップリング部位にリンカーを結合させれることが含まれる。この加水分解は好ましくは、アミドを、室温で希釈酸水溶液に約６〜１２日、典型的には約９〜１１日、最も好ましくは約１０日間晒すことによって達成することができる。適切な酸水溶液には、例えば、0.1Ｎ塩酸、0.5Ｎリン酸または0.5 Ｎ硫酸が含まれる。ｂ−，ｄ−およびｅ−モノカルボン酸の精製は、浸透クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび逆相クロマトグラフィーのようなカラムクロマトグラフィーを含む幾つかの手段の何れかによって達成することができる。好ましくは、カラムクロマトグラフィーは、分取タイプの逆相液体クロマトグラフィーである。これらの技術は、リムの著書（Lim，HPLC of Small Molecules，IRL Press，Washington,D.C. ,1986）に詳述されている。分取型液体クロマトグラフィー（ＬＣ）によるモノカルボン酸の精製は、非常に遅い流速で行わなければならない。例えば、ＬＣ精製は、58μＭの酢酸ピリジン（Ｈ２Ｏ中のpH4.4）：ＴＨＦ（９６：４）溶液で溶出させる５μｍ、4.6×250mmのプロピルアミンカラム（RAININ micro-sorb-MV アミノカラム）上で、0.15ｍＬ／minの流速で行えばよい。より好ましくは、分析用の高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いてカップリング反応をモニターする。逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーは、好ましくは、１ｍＬ／minの流速で濃度勾配溶媒系(gradient solvent system)を使用した、分析バーションの上記プロピルアミンカラムを用いて行われる。本発明においては、ＬＣカラムから溶出させたとき、ｄ−異性体は最も長い（第三の）保持ピークとして同定され、ｅ−異性体は第二保持ピークとして同定され、ｂ−異性体は最も短い（第一の）保持ピークとして同定される。このｄ−異性体はまた、以下に述べる最も大きな生物学的活性を示すビタミンＢ₁₂誘導体として同定される。リボースカップリング部位（カップリング部位ｈ、構造式Ｉを参照のこと）は、適切な試薬（例えば無水コハク酸）との反応によりカップリング部位の水酸基を活性化させる等の幾つかの適切な手段の何れかによって活性化されて、反応基（例えばカルボキシル基）を有するリボース誘導体を生じることができる。この技術は、トラヤの文献（Toraya，Bioinorg．Chem．4:245-255，1975）に詳述されている。この活性化された分子の分離および精製は、以下で述べるＣ１８上で行えばよい。カップリング部位ｈが活性化されると、以下に述べる方法と同様にして、リンカーがこの部位に結合される。第二のカップリング部位でビタミンＢ₁₂分子を活性化した後、幾つかの手段のうちの何れかを用いてリンカーがビタミンＢ₁₂分子にカップリングされ、ビタミンＢ₁₂のリンカー付加物が形成される。この手段には、例えばリンカーのアミノ基とビタミンＢ₁₂分子のカルボキシル基とを用いたアミド形成反応が含まれる。或いは、リンカーのカルボキシル基とビタミンＢ₁₂分子のアミノ基とを用いたアミド形成反応によって、リンカーをビタミンＢ₁₂に結合させてもよい。このアミド形成反応には、カップリング剤の使用が含まれてもよい。適切なカップリング剤には、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノブロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、１−ベンジル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＢＤＣ）、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−４− エチル）カルボジイミド（ＣＭＣ）、および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）が含まれる。好ましくは、カップリング剤は水溶性である。より好ましくは、このカップリング剤はＥＤＣである。或いは、リンカーをビタミンＢ₁₂分子にカップリングさせるアミド形成反応には、反応性のカルボンサン基とアミンとを用いてもよい。適切な反応性カルボン酸基には、アミンとの反応に際してアミドを生じるカルボン酸誘導体が含まれる。このような反応性基には、例えば、例えば、酸塩化物および酸臭化物のようなカルボン酸ハロゲン化物；無水酢酸および無水トリフルオロ酢酸のような酸無水物；ｐ−ニトロフェニルエステルおよびＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルのようなエステルを含む、何れかの反応性カルボンサン誘導体が含まれる。このような技術は、ボダンツキーの著書（Bodanszky，Principles of Peptide Syn thesis，Springer Verlag，Berlin，1984）に詳述されている。シアノカップリング部位を介してのリンカーのカップリングは可能であるが、この部位に結合したリンカーは不安定であるため好ましくない（Dolphin,D.,[20 5]Methods Enzymol．18C:34-52，1971）。更に、ヤコブセンの文献（Jacobsen， Anal．Biochem．113:164-171，1981）に詳述されている技術を用いて、リンカーをベンズイミダゾール（カップリング部位ｉ、構造Ｉを参照のこと）に結合してもよい。ビタミンＢ₁₂とリンカーとの付加物は、浸透クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび逆相クロマトグラフィーのようなカラムクロマトグラフィーを含む幾つかの手段の何れかによって分離および精製することができる。好ましくは、このカラムクロマトグラフィーは分取型のＬＣである。これらの技術は、リムの著書（Lim，H PLC of Small Molecules，IRL Press，Washington，D.C.,1986）に詳述されている。上記のように、本発明のビタミンＢ₁₂受容体調節剤は、トランスコバラミンII に結合できなければならない。Ｔｃ IIに結合する受容体調節剤の能力は、天然のビタミンＢ₁₂と競合する受容体調節剤を用いた拮抗結合試験を含む、当該技術において公知の何れかの手段を用いて確認すればよい。本発明の経路変更部分には、受容体輸送経路に影響を及ぼすことができる何れかの成分が含まれる。この特徴は、放射能ラベルされたターゲッティング部分を有する受容体調節剤を用い、細胞全体での経路を追跡することによって評価することができる。これは当該技術で公知の技術を用いて達成されるが、そのような技術には、放射能ラベルされるか、或いはビオチニル化もしくはＦＩＴＣでラベルされたターゲッティング部分を使用し、続いて結合試験、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーを行うことが含まれる。好ましい受容体調節剤は、最大時間に亘って、受容体の最大除去パーセントを生じるものである。本発明の適切な経路変更部分は、ターゲッティング部分の選択性を顕著に低下させることはない。経路変更部分がターゲッティング部分の選択性を低減するか否かは、当該技術において公知の幾つかの方法の何れかを用いて決定することができる。このような方法には、ＥＩＳＡ、フローサイトメトリーまたは他の結合試験によって評価された、受容体陽性および受容体陰性の細胞に対する受容体調節剤の結合を比較することが含まれる。経路変更部分は、必ずしも全ての細胞においてではないが、少なくとも一つの細胞タイプにおいて、薬剤／受容体複合体の保持／分解を生じる。同じように、経路変更部分は幾つかの細胞において薬剤／受容体複合体の保持を生じるが、他の細胞内での他の薬剤／受容体複合体については必ずしもそうではない。また、異なった経路変更成分は、例えば分極した上皮のように、細胞の頂部、底部または基底外側を同じ受容体が独立に輸送される受容体種を識別し得る。特定の経路変更部分が適切であるか否かを決定するために、経路変更成分をターゲッティング部分に共有結合的に結合し、得られた受容体調節剤を、当該技術において公知の結合試験または機能試験を用いて、異なった受容体をもった細胞に対する受容体調節に関して比較する。本発明の適切な経路変更部分は、機能的に異なる次の五つのテゴリーに分類することができる。即ち、（１）リソソーム向性部分；（２）細胞内重合性部分；（３）タンパクを区分する信号または配列；（４）条件的膜結合ペプチド；（５）二価または三価の受容体架橋部分である。このような経路変更部分は異なった機能的作用機構を有し得るけれども、全て、細胞内小胞対系における薬剤／受容体複合体の保持を促進する。これら全ての種類の経路変更部分は、受容体輸送経路に影響を及ぼす能力を賦与する。本発明の一つの側面においては、第一の機能的分類の経路変更部分、即ちリソソーム向性部分が開示される。本発明において、「リソソーム向性部分」の語は、薬剤／受容体複合体をリソソームに向かわせる部分を言う。多くの適切なリソソーム向性部分が公知であり、生化学薬学（Biochem．Pharmacol．23:2495-2531 ,1974）に概説されている。好ましいリソソーム向性部分には、細胞内プロトン付加の後にリソソーム中に蓄積する特徴的な能力によって識別される、アミノグリコシド系抗生物質が含まれる。細胞内プロトン付加は、初期エンドソームから後期エンドソームへ、最終的にはリソソームへと移行する際に生じる、増大する酸性条件下において起こる。強い陽電荷は、リソソーム向性部分が膜に包まれた小胞から離れるのを阻止して、薬剤／受容体複合体を該管組織の中にトラップする。アミノグリコシド系抗生物質は同様の構造を有しているが、糖ユニットに基づいて、構造的に関連した複数の化合物ファミリー（科）に分けられる。各ファミリーのアミノグリコシド系抗生物質は、その代表的な構成員と共に、図２〜図５に挙げられている。これらのファミリーには、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシンおよびストレプトマイシンが含まれる。ゲンタマイシン科には、ゲンタマイシンＣ₁、ゲンタマイシンＣ₂、ゲンタマイシンＣ_1a、シソミシンおよびネチルミシンが含まれる。カナマイシン科には、カナマイシンＡ、トブラマイシンおよびアミカシンが含まれる。ネオマイシン科には、ネオマイシンＢ、パロモマイシン、リポスタマイシンおよびビチロシンＢが含まれる。また、ストレプトマイシン科には、ストレプトマイシンＡおよびストレプトマイシンＢが含まれる。本発明の特に好ましい態様において、経路変更部分はゲンタマイシンであり、これは細胞外濃度の３００倍も高い濃度でリソソーム中に蓄積する（J．Pharma- col．Exp．Ther．255:867-74，1990; Ren．Fail．14:351-7，1992）。適切なアミノグリコシドは、ペプチドまたは他の化学的リンカーを介してカップリングできる反応性アミン基を有している。こうして、ターゲッティング部分は、例えばチオエーテル、ジスルフィド、エーテル、エステルおよびペプチド結合を用いることにより、共有結合を介して容易にこれらの経路変更部分に結合することができる。多くのアミノグリコシド系抗生物質は複合化プロセスにおいて誘導し得る幾つかのアミンを有しているから、これら化合物に含まれる一級アミンは、このアミン（図２〜図４に矢印で示したアミンを参照のこと）を介してターゲッティング部分に共有結合的に結合するように選択的に反応することができる。ストレプトマイシンの場合、ターゲッティング部分への共有結合は、図５に示したアルデヒド部分をアミンに変換し、カルボジイミドまたは他の適切な活性化されたカルボン酸を用いてターゲッティング部分に結合することにより達成される。アミノグリコシド類は水溶性で、且つ他のペプチドには容易に結合しないので、受容体調節剤への非特異的結合を与えない。特に好ましいアミノグリコシドには、選択されたアミンの優先的な誘導を可能にするものが含まれる。詳細に言えば、好ましいアミノグリコシドには、その種々の窒素原子に対して保護基を結合させ、続いて選択的に脱保護して一つの遊離アミンを生じることができる化合物が含まれる。この遊離アミンは、例えばペプチドリンカーの付加により、または共有結合的に直接ターゲッティング部分に結合することにより、更に誘導される。これらの経路変更部分には、リポスタマイシン（図４を参照のこと）、カナマイシン（図３を参照のこと）アミカシン、およびストレプトマイシンが含まれる。リポスタマイシンは特に好ましいが、その理由は相対的に毒性が低く、また水酸基を保護したリポスタマイシンに対してアシル移動反応を行ない、そのアミン付加物を生じさせる化学的誘導が可能であるためである。カナマイシンはまた、選択的保護／アシル化反応に用いてもよい。アミカシンは、そのアミノ基またはアルコール基を脱保護することなく結合させることが可能な形で商業的に入手可能である。また、ストレプトマイシンもまた、生理学的条件下でグアニジニウム基を保護することによって容易に誘導化し、細胞性またはリソソーム性の保持に必要な多価陽イオンを与えることができる。本発明の他の側面においては、細胞内プロトン付加の後に蓄積され得る非アミノグリコシド系のリポソーム向性化合物もまた、適切な経路変更部分である（図６を参照のこと）。この特徴を示す適切な非アミノグリコシド系化合物は当該分野で公知であり、一連のアミノアクリジンおよびアミノキノリン染料（典型的にはクロロキンおよびキナクリン）；一群のナフタレン（典型的にはダンシルカダベリン(dansyl cadaverine)；およびこれらの誘導体が挙げられる。このような染料は、細胞性の保持および低毒性によって特徴付けられる。これら全ての化合物は、図６に示した窒素を介してターゲッティング部分に共有結合するための特徴的な部位を有しており、上記のようにしてそこに結合される。本発明の他の側面では、細胞内の条件下で荷電状態の変化を受けるリソソーム向性ペプチドが、経路変更部分として利用される。荷電状態が変化すると、この経路変更ペプチドは、膜の流れが薬剤／受容体複合体を分解のためにリソソームへ放出するまで、この複合体を細胞の小胞体系の中に保持するように作用する。好ましくは、これらのペプチドは、細胞内プロテインキナーゼによってリン酸化されることができる。細胞内酵素によってリン酸化されると、このようなペプチドは高度に陰イオン性になるであろう。荷電に基づく保持は、経路変更ペプチドの固有の性質であってもよく、または細胞内での修飾によって賦与されてもよい。細胞内での修飾は、幾つかの受容体（例えばＥＧＦ受容体）の一定の残基のリン酸化を含む、当該分野で公知の幾つかの手段のうちの何れかによって達成すればよく、これは細胞内での経路変更を生じるであろう（Cancer Treat．Res．61:139-160，1992; J．Cell．Biol．116: 321-30，1992）。この経路変更ペプチドは、例えば該ペプチドをターゲッティング部分に直接共有結合させること、またはＧ−Ｇ−Ｇのように誘導化してターゲッティング部分に共有結合させ得る適切なリンカー部分を用いることを含む、何れかの手段によってターゲッティング部分に共有結合させればよい。好ましい経路変更ペプチドには、セリンを含むキナーゼ基質ペプチドが含まれる。これらのペプチドは、セリンまたはチロシンのプロテインキナーゼ活性のレベルが増大した標的腫瘍細胞において、受容体の経路変更を向上させるために特に好ましい。腫瘍細胞内での増大したキナーゼ活性レベルは、腫瘍細胞原形質膜の原形質側での、Ｈ−ｒａｓのような発ガン遺伝子産物の存在に帰することができる（C.I.B.A．Found．Sympp．164:208-18，1992）。適切な経路変更ペプチドにはまた、プロテインキナーゼ基質および一価の陽電荷を有するペプチドが含まれる。後者のタイプの経路変更ペプチドは、受容体の残基に結合しまたは緊密に会合した「グルタミン様」残基とイオン対を形成してもよい。特に好ましい経路変更ペプチドは、当該技術で公知の技術を用いて、表４に記載したタンパクおよびアミノ酸配列から誘導すればよい。本発明の他の側面において、経路変更部分はリソソーム向性のアミノ酸エステルであり、これは高濃度において、ＮＫ細胞、細胞溶解性Ｔ細胞および単球のような顆粒含有細胞の溶解を生じることができる。その濃度は、溶解を回避するために、一般には100ｍＭ未満に維持される。適切なリソソーム向性アミノ酸エステルおよびその供給源は、表５に与えられている。表５に挙げたリソソーム向性アミノ酸エステルは、該エステルの細胞内開裂の後に、薬剤／受容体複合体をリソソーム中に保持するために用いることができる。一つの態様において、このようなアミノ酸エステルは、リンカー配列および／またはリン酸化基質配列を含む大きなペプチドのＣ−末端保護として利用することができる。また、システインのような適切な残基と共に、所定の細胞表面受容体のペプチドリガンドまたはタンパクリガンドをコードする配列のようなターゲッティング部分に共有結合するために利用することができる。本発明の他の態様では、第二の分類の経路変更部分が開示される。この分類には、エンドソームまたはリソソームの中で重合を受けて、細胞内膜の通過を阻害するペプチドが含まれる。細胞内で重合する化合物は、ターゲッティング部分およびリンカーを含む大きなペプチドの中に組み込むことができる。適切なペプチドには、表５に挙げたジペプチドエステル（即ち、Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシン−Ｏ−Ｍｅ）が含まれる。細胞内に輸送されると、これらのジペプチドエステルは、リソソームおよび細胞障害性細胞の二次顆粒の中に優先的に蓄積する。これらのジペプチドはまた、自己会合および自己重合を受け、これによって低濃度でのトラッピングおよび高濃度での膜破壊を生じる。また、適切な細胞内重合性化合物には、自己会合して「ロイシンジッパー」と称するアルファヘリックス構造を取り得るペプチド類も含まれる。本発明において、このような構造は、細胞内小胞を出ることができない細胞内ポリマーを形成するために用いてもよい。このような配列は、溶液中での化合物の自己会合、およびＤＮＡに結合できるポリマーの形成を観察することによって選択することができる。アルファヘリックス構造に自己会合できる適切なペプチド配列は、表７に提示されている。本発明の他の態様では、第三の分類の経路変更部分が開示される。この分類には、細胞内受容体によって認識され得る経路変更部分が含まれる。このような配列は、内因的に合成されたタンパクの細胞表面への移動を停止させる能力によって同定される。適切なペプチドには、内因的に合成されたタンパクの輸送に関連した一定のペプチド配列（区分け配列またはシグナル配列）が含まれる（Our．O pin．Cell．Biol．3:634-41，1991）。このようなペプチド配列は、外因的に加えられたターゲッティング部分のＣ末端に共有結合的に連結されると、小胞体（「ＥＲ」）、ゴルジ装置、またはリソソーム内での薬剤／受容体複合体の保持をもたらす。このようなペプチド配列は、細胞内受容体によって認識されるが、その例には、文献（J．Cell．Biol．120:325-8，1993; Embo．J．11:4187-95，1992; Natur e348:162-3，1990）に詳述されている哺乳動物およびバクテリアの両方のＥＲ受容体が含まれる。細胞内受容体に認識され得るペプチド配列およびその変種（括弧内に示す）の更なる例が、表８のセクションＡおよびＢに挙げられている。一定のシグナル配列は、或るタイプの生物にとっては、他のタイプの生物にとってよりも好ましい。例えば、ＲＥＤＬＫは原核細胞によって認識される好ましい配列であり、真核細胞にはそれほど好ましいものではない（表８のセクションＣを参照のこと）。従って、この配列を経路変更部分として用いれば、バクテリア内での受容体媒介プロセスを選択的に阻害する一方、哺乳動物細胞に対しては少ししか影響を与えないよう受容体調節剤を構築することができる。「取り込み信号(internalization signal)と称する本発明の更に別の分類のペプチド配列は、被覆ピット内、並びにクラスリン被覆を保持する内部小胞体の両方において、クラスリンに結合することにり機能する。このようなクラスリン結合性ペプチド（ＣＢＰ）の代表例は、表８のセクションＤに開示されている。ＣＢＰは、初期には細胞表面位置する被覆ピットの中でクラスリンに結合し、それが結合するターゲッティング部分の保持を生じる。細胞内受容体を認識できる更に別の分類に属する部分には、糖鎖が含まれる。適切な糖鎖には、細胞内糖鎖（ＣＨＯ）受容体には結合できるが、細胞表面ＣＨＯ受容体には結合できない何れかの糖鎖が含まれる。このような糖鎖には、マンノース−６−リン酸およびグルコース−６−リン酸が含まれる。適切な糖鎖部分には、マンノース−６−リン酸の類縁体を含むインスリン様成長因子II／マンノース−６−リン酸（ＩＧＦ II／Ｍ６Ｐ）受容体に結合するもの、並びに他のリン酸化糖が含まれる（Carbohydrate Res．213:37-46，1991;FEBS Lett.262:142- 4，1990）。経路変更部分の親和性は、リン酸化糖の化学的性質を変化させることによって変更することができる（J．Biol．Chem．264:7970-5，1989; J．Biol．Chem．26 4:7962-9，1989）（単糖は最も低い親和性で結合する一方、二糖または二糖は増大する高い親和性で結合する）。タンパクキャリア上にリン酸化された糖を集めて覆うことにより、細胞内受容体に対する親和性を劇的に増大させることができる。種々のオリゴ糖の合成は、文献（Sem．Cell．Biol．2:319-326，1991）に概説されている。マンノース−６−リン酸受容体の発現は主に細胞内で生じるが、細胞表面においても発現される。従って、本発明においては、マンノース−６−リン酸受容体に結合する糖鎖へのターゲッティング部分の結合は、ターゲッティング部分と経路変更部分との間の結合親和性において少なくとも100倍の相違を生じるように構成しなければならない。例えば、ビタミンＢ₁₂／トランスコバラミンII受容体ターゲッティング部分（この場合はビタミンＢ₁₂）は、キャリアタンパク、即ちトランスコバラミンII（Ｔｃ II）に対して≧１０^-10の親和性を有し、またＩＧＦ II／Ｍ−６−Ｐ受容体似に対して１０^-8Ｍ以下の親和性を有する。これは、血清Ｍ−６−Ｐ可溶性受容体〜細胞表面受容体への受容体調節剤の移行を可能にしながら、ビタミンＢ₁₂結合の特異性を維持するであろう。ＩＧＦ II／Ｍ−６−Ｐ受容体部分に加えて、糖鎖に基づく他の経路変更部分もまた、ＥＲまたはゴルジ複合体中での調節剤／受容体複合体の保持を促進する。このような部分は、種々のグリコシルトランスフェラーゼによる糖鎖部分の認識（天然基質として又は阻害剤として）に基づいている。このような部分は、文献（Sem．Cell．Biol．2:289-308，1991）に概説されている。例えば、糖認識部分は、グルコースおよびＮ−アセチルグルコサミン（天然基質）のような後ろから二番目の糖を含んでいる。しかし、より好ましいのは、グリコシルトランスフェエラーゼに認識されるけれども、成長鎖に更なる残基を付加するようには作用できないグリコシル化阻害剤である（Sem．Cell．Biol．2:309-318，1991）(図７を参照のこと)。本発明の更に別の態様においては、第四の機能分類に属する経路変更部分が開示される。この分類は一般に、受容体を細胞膜に固定する経路変更部分を有している。例えば、この分類には、条件的なｐＨ依存性膜結合を示す膜結合性ペプチドが含まれる。このようなペプチドは、酸の中ではα−ヘリックスの特徴を示すが、中性ｐＨ溶液中ではそのような特徴を示さない。条件的膜結合性ペプチドが酸性ｐＨでヘリックスコンホメーションを取るときには、両親媒性が要求される（例えぱ、それは疎水性および親水性の両方の界面を有する）。より詳細に言えば、略5.0〜5.5のｐＨ領域内において、このようなペプチドは、該ペプチドの標的膜への挿入を容易にするアルファヘリックスの両親媒性構造を形成する。アルファヘリックスを誘導する酸性ｐＨ環境は、例えば、細胞内のエンドソーム又はリソソームに存在する低ｐＨ環境に見出される。生理学的ｐＨの水溶液中において、条件的膜結合性ペプチドは折り畳まれておらず、膜と相互作用できない。適切な条件的膜結合ペプチド配列には、荷電アミノ酸であるグルタミン酸、アスパラギン酸およびヒスチジンが含まれる。好ましい条件的膜結合ペプチドには、グルタミン酸、メチオニン、アラニンおよびロイシンのようなヘリックス形成残基を高パーセンテージで有するものが含まれる。更に、条件的膜結合性ペプチド配列には、ｐＨ５のペプチド内に十分な非荷電の膜結合性ドメインが存在して、標的細胞膜中に挿入できるように、ｐＨ５〜７の範囲のｐＫを有するイオン化可能な残基が含まれる。条件的膜結合性ペプチドは、共有結合を介して、化学的ターゲッティング部分またはペプチド性ターゲッティング部分に結合することができ、またはリンカーおよびペプチド性ターゲッティング部分を含む全体のペプチド配列として合成することができる。特に好ましい条件的膜結合性ペプチドは、ａａ１−ａａ２−ａａ３−ＥＡＡＬＡ（ＥＡＬＡ）₄−ＥＡＬＥＡＬＡＡ−アミドであり、これは刊行物に記載された配列の改良である（Biochemistry 26:2964，1987）。このペプチド配列内の第一アミノ酸残基（ａａ１）は、好ましくはシステイン又はリジンのような独特の残基であり、条件的膜結合性ペプチドのターゲッティングタンパクへの結合を容易にする。このペプチドはまた、タンパク又はペプチドのターゲッティング部分と共に融合タンパク内に組み込むことができる（実施例７を参照のこと）。アミノ酸残基２〜３（即ち、ａａ２〜ａａ３）は、異なった膜に対するトランスロケーティングペプチドの親和性を調節するように選択すればよい。例えば、残基２および３の両方がリジン又はアルギニンであれば、当該ペプチドは、膜または表面陰電荷を有する脂質片に結合する能力を有するであろう。もし、残基２〜３が中性アミノ酸であれば、当該ペプチドは中性の膜中に挿入されるであろう。更に好ましい条件的膜結合性ペプチドは、次のようなアポリポタンパクＡ−１およびＢから誘導することができる：メリチン(melittin)、ボンボリチン(bombo littin)、デルタヘモリシン(delta hemoysin)およびパラダクシン(paradaxins) のようなペプチドトキシン；アラメチシン(alamethicin)のような抗生物質ペプチド；カルシトニン(calcitonin)、コルチコトロフィン放出因子、ベータエンドルフィン(beta endorphin)、グルカゴン、パラチロイドホルモン、および膵臓性ポリペプチドのようなペプチドホルモン。このようなペプチドは通常は生理学的ｐＨで膜に結合ずるが、置換基が結合させることによって、当該ペプチドは酸性ｐＨでアルファヘリックスを形成する能力を増大することができ、また生理学的ｐＨでの膜結合性を低下することができる。酸性ｐＨにおいてｐＨ依存性膜結合性を有するこのような修飾ペプチドの一例は、完全にコハク酸化されたメリチンである。この例において、通常は生理学的ｐＨで膜に結合するペプチド（メリチン）は、リジンのコハク酸化によってｐＨ依存性のペプチドに変換される。コハク酸化すると、当該ペプチドは酸性ｐＨでのみ両親媒性の特徴を示す。条件的膜結合ペプチドの標的細胞膜への挿入は、両親媒性のアルファヘリックスの安定化によって増大する。ヘリックスの安定化は、次の手段によって達成される。（１）「ＥＡＬＡ」繰り返し単位を追加して、より長いペプチドを形成する。（２）ヘリックスダイポールを中和するために、ペプチドのＣ末端にアミドを配置する。（３）当該ペプチドを重合させる。（４）一以上の累積グルタミン酸の代わりに、中性ヘリックス形成体を置換する。（５）膜結合性ペプチドと該ペプチドのターゲッティング部分との間に十分な距離を与えて、当該ペプチドを標的細胞の細胞内膜と接触させ、且つ相互作用させるために、長いリンカーを用いることにより当該ペプチドをターゲッティング部分に結合する。本発明の更に別の態様においては、第五の機能的分類の経路変更部分が開示される。ここでは、経路変更部分は調節剤として機能するに過ぎず、当該部分は受容体を架橋することによって不能にする。この分類には、一価の結合性ターゲッティング部分から形成された二価又は多価の受容体架橋部分が含まれる。幾つかの受容体システムにおける受容体を架橋することは、細胞表面受容体を受容体再循環経路ではなく、分解のためにリソソームへと経路変更させるために十分である。二価の受容体調節剤の合成については、後述の実施例で詳細に例示する。好ましい架橋性受容体調節剤は、ビタミンＢ₁₂二量体である。この態様において、夫々のビタミンＢ₁₂分子はターゲッティング剤および経路変更剤として作用する。Ｂ₁₂を架橋することはビタミンＢ₁₂受容体を架橋することになり、受容体輸送経路を阻害する。好ましいビタミンＢ₁₂二量体は、一般に、ａ−ｇ、ｈ（リボース）およびｉ（ベンズイミダゾール）から独立に選択されたカップリング部位を介して一以上のリンカーによりカップリングされた、シアノコバラミンのような二つのビタミンＢ₁₂分子からなっている。好ましくは、架橋は両分子のｄまたはｅカップリング部位の間で生じる。この二量体は、Ｂ₁₂／Ｔｃ II複合体を形成できなければならない。上記のように、この特徴は、競合結合試験を含む当該技術で公知の幾つかの技術の何れかを用いて試験すればよい。ビタミンＢ₁₂は、経路変更部分をビタミンＢ₁₂ターゲッティング部分に結合させるために詳細に説明したのと同様にして、第二のビタミンＢ₁₂分子にカップリングさせればよい。上記のように、二量体は種々の長さの一以上のリンカーを用いて、またホモ二官能リンカー、ヘテロ二官能リンカー、ホモ三官能リンカーまたはヘテロ三官能リンカーの何れかの組合せを用いて合成すればよい。上記のように、三官能リンカーを使用することによって、幾つかの追加の部分をカップリングさせることが可能である。二量体合成の選択において、ビタミンＢ₁₂の間のリンカーを構成する原子の全数は、一般には１０原子よりも多くなければならず、典型的には３０〜５５原子の範囲であり、好ましくは４５であることに留意すべきである。上記のように、原子の数は原子の直鎖に関連して計算されるが、直鎖、分岐鎖および環状鎖のリンカーまたはこれらの組合せの何れもが適切であることを、当業者は理解するであろう。従って、リンカー内における原子鎖の構造には、例えばアルキル、ヘテロアルキル、アルキルアリール、およびヘテロアルキルアリールが含まれるであろう。二量体は、例えば二つの異なったビタミンＢ₁₂リンカー付加物を、カップリング剤の存在下で組み合わせることによって合成してもよい。リンカーはカップリングされ、次いで二量体は上記に概説したのと同じ方法を用いて分離および精製される。或いは、活性化されたビタミンＢ₁₂は、ホモ二官能リンカーまたはホモ三官能リンカー（表１および表３）と単純に結合される。好ましくは、この態様において、リンカーに対するビタミンＢ₁₂の比率は２：１である。好ましくは、混合二量体（例えば、ｂ−酸誘導体とｅ−酸誘導体）または混合リガンド（例えば、Ｂ₁₂ とホルモン）の調製においては１：１の比率が用いられる。二量体は、上記のようにして分離され、精製される。更に別の態様において、上記のようにして合成されたビタミンＢ₁₂リンカー付加物は、第三のリンカーによってカップリングされる。この第三のリンカー（即ち架橋剤）は、ビタミンＢ₁₂リンカー付加物上のリンカーを橋渡しするように働く。適切な架橋剤には、表１、２および３に記載したものが含まれる。ペプチドの重合は、システイン残基をペプチドの各末端に配置し、続いて溶存酸素または他の穏和な酸化剤（例えば酸化型グルタチオン）を用いて酸化することにより達成される。重合したポリペプチドの平均長さは、重合反応条件を変化させることによって制御することができる。本発明の何れかのペプチドのアミノ酸配列は、5.0〜9.0の側鎖ｐＫａを有する全てのＬ−アミノ酸および全てのＤ−アミノ酸を含むように選択すればよい。Ｄ −アミノ酸は、細胞内で代謝されないので、非タンパク分解性ペプチドを形成するために有利に用いることができる。更に、本発明のペプチドは、Ｌ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸の組合せを含んでいてもよく、この場合、タンパク分解性の開裂部位の何れかの側でＤ−アミノ酸がＬ−アミノ酸を置換する。更に好ましい非開裂性ペプチドは、細胞性酵素によるタンパク分解的開裂を受け難いペプチド結合類縁体を組み込んでいる。上記で述べたように、本発明の受容体調節剤は、経路変更部分に結合したターゲッティング部分を有している。上記で同定した経路変更部分は、当該技術において公知の幾つかの技術の何れかによって、ターゲッティング部分に共有結合的に結合される。この技術には、（ａ）ジスルフィド形成、チオエーテル形成、アミド形成または還元型または非還元型シッフ塩基の形成、（ｂ）融合タンパクにおけるような直接的なペプチド結合、または（ｃ）化学的リンカーまたはペプチドリンカーの使用が含まれる。適切なペプチドリンカーはこの点において、ターゲッティング部分との相互作用からは独立して、経路変更ペプチドがその活性なコンホメーションを取ることを可能にし、また経路変更部分がターゲッティング部分のペプチド結合部位から細胞内膜へとアクセスするための十分な距離を可能にする、二以上のアミノ酸残基に対応する。一態様において、経路変更部分は幾つかの手段の何れかによりビタミンＢ₁₂ に結合させることができる。このような手段には、例えば経路変更部分を、ビタミンＢ₁₂リンカー付加物の反応基にカップリングさせること；ビタミンＢ₁₂を、経路変更部分リンカー付加物またはその適切な側鎖上の反応基にカップリングさせること；ビタミンＢ₁₂を、経路変更部分リンカー付加物またはその適切な側鎖にカップリングさせること；経路変更部分／ビオチン結合性タンパク複合体を、ビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体にカップリングさせること；または経路変更部分／ビオチン複合体を、ビタミンＢ₁₂／ビオチン結合性タンパク複合体にカップリングさせることが含まれる。経路変更部分をビタミンＢ₁₂リンカー付加物にカップリングさせること、またはビタミンＢ₁₂を経路変更部分リンカー付加物にカップリングさせることは、ビタミンＢ₁₂分子をリンカーに結合させるために上記で述べた技術と同じ方法を用いて達成することができる。本発明のこの側面の唯一の重要な考慮は、リンカーの全長が立体障害を回避するのに充分でなければならないことである。好ましくは、リンカーの全長は少なくとも６原始である。経路変更部分／ビオチン結合性タンパク複合体のビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体へのカップリングは、アビジン−ビオチンの化学（Abidin-Biotin Chemis-try : A Handbook，ed．D．Savage，Pierce Chemical Co.，1992）に詳細に記載されている幾つかの手段のうちの何れかを用いて達成することができる。簡単にいえば、ビオチン結合性タンパク複合体は、経路変更部分、または第二の態様においてはビタミンＢ₁₂分子を用いて調製される。適切なビオチン結合性タンパクには、アビジンまたはストレプトアビジンが含まれる。幾つかの環境において、リンカーはこれら分子を離間するために利用すればよい。例えば、ビタミンＢ₁₂をアビジンにカップリングさせるときには、少なくとも６原子のリンカーが好ましい。ビオチン複合体は、ビタミンＢ₁₂分子、または第二の態様においては経路変更部分を用いて調製される。例えば、ビタミンＢ₁₂分子は、ビオチンのＮＨＳエステルと結合される。好ましくは、ビタミンＢ₁₂分子は上記のようにビタミンＢ₁₂ リンカー付加物である。更に好ましくは、ビタミンＢ₁₂分子は、ｄ−またはｅ− カップリング部位に結合した１２原子の線形リンカーにより特徴付けられるビタミンＢ₁₂リンカー付加物である。処方されると、ビオチン複合体とビオチン結合性タンパク複合体との間のカップリングは、相補的な複合体、即ち、ビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体と経路変更部分／アビジン複合体とを組み合わせることによって容易に達成される。本発明の他の側面において、Ｂ₁₂／ビオチン複合体は、ビタミンＢ₁₂をビオチン結合性タンパク複合体を介して幾つかの化合物に結合させるために利用される。ビオチン結合性タンパクを結合できる何れかの化合物は、ビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体を用いてビタミンＢ₁₂に結合され、これによってビタミンＢ₁₂受容体を発現している細胞の中に取り込まれる。このような化合物には、以下で詳述する経路変更部分に加えて、ホルモン、酵素、抗体もしくはその断片、マーカー、または治療剤が含まれる。これら化合物の何れかを、アビジンまたはストレプトアビジンのようなビオチン結合性タンパクに結合させることは、アビジン−ビオチンの化学（Abidin-Biotin Chemistry: A Handbook，ed．D．Savage，Pierce C hemical Co.，1992）に詳細に説明されている技術を用いて達成することができる。この態様の一つの側面において、ビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体は、新生物疾患に向けられた治療剤／アビジン複合体に結合される。アビジンを介してビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体に結合され得る新生物疾患治療剤には、ドクソルビシン (doxorubicin)、ダウノルビシン(daunorubicin)、エトポシド(etoposide)、テニポシド(teniposide)、ビンブラスチン(vinblastine)、ビンクリスチン(vincrist in)、シクロフォファミド(cyclophophamide)、シスブラチン(cisplatin)、およびアラビノシルシトシン、アラビノシルアデニンおよびフルダラビン(fludarabi ne)のようなヌクレオシド抗代謝剤(nucleoside antimetabo-lites)が含まれる。この態様の他の側面において、ビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体は、ビオチン結合性タンパクと複合化されたマーカーに結合される。適切なマーカーには、例えば、蛍光性分子または放射能ラベルされた分子が含まれる。この組み合わせは、受容体量の低い細胞をもった患者を同定するために、或いは、例えば広範な受容体調節障害の何れかについて患者を治療した後に受容体上方調節を評価する際に、スクリーニング装置に組み込まれた検出系として利用することができる。この態様の他の側面において、ビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体は、ビオチン結合性タンパクに結合された放射性アイソトープにカップリングされる。適切な放射性アイソトープには、ビオチン結合性タンパクに結合することができる高エネルギー放出性の何れかの放射性アイソトープが含まれる。この組合せは、ターゲッティングによる放射線診断または放射線治療に利用することができる。この態様の更に別の側面においては、ビタミンＢ₁₂／ビオチン複合体は、固体マトリックスまたはアビジン被覆基板にビタミンＢ₁₂を固定化するために用いられる。これにより、例えばＴｃ II、Ｔｃ II受容体を単離することができ、またビタミンＢ₁₂のカップリング部位を評価することが可能になるであろう。本発明の受容体調節剤は、受容体輸送経路の変更を介して、受容体依存性の生物学的応答を調節する。本発明の受容体調節剤が結合すると、被覆ピットは陥入して小胞を形成する。次いで、この小胞は経路変更剤によって受容体分解のためのリソソームに向けられ、或いはエンドソーム（ここでは経路変更剤が確実に結合され、または薬剤／受容体複合体が遅延される）に送られる。こうして、受容体調節剤は、受容体が正常に再循環しないようにすることができる。新たに合成された受容体は、最終的には細胞表面の取り込まれた受容体に取って代わるであろう。しかしながら、このプロセスは再循環よりも遥かに多くの時間を要する。多くの細胞は、最大の受容体再発現を行うために数時間または数日を必要とする。細胞を受容体調節剤に連続して露出させると、細胞内の受容体備蓄は空になるであろう。従って、原形質膜受容体を調節することによって、該受容体の再発現を実質的に遅延させ、これによって当該受容体に関連した生物学的応答を調節することができる。本発明の受容体調節剤の生物学的活性は、競合結合試験または細胞増殖試験を含む当該技術分野で公知の幾つかの手段の何れかによって、in vitroで確認することができる。これらの技術は、文献（Laboratory Techniques in Biochem-ist ry and Molecular Biology: An Introduction to Radioimmunoassay and Reated Tecchniques，３^rdEd．Burdon and van Knippengerg，Elsevier，1987）に詳述されている。例えば、受容体調節剤は、in vivo条件に対応した条件下で、Ｋ５６２細胞（ATCC CCL 243）のような適切な細胞系と共に培養することができる。このような条件には、Ｔｃ IIのヒト供給源（例えばヒト血清）、ビタミンＢ₁₂を与え、好ましくは、増殖が既知の外因性Ｔｃ IIにのみ依存するように、クロマトグラフィーによって他の培地成分から全てのＴｃ IIを注意深く除去することが含まれる。ビタミンＢ₁₂を奪われた培養細胞は徐々にその増殖能を喪失し、最終的には細胞死に至る。生物学的活性は、文献（Shieh et al.，J．Im-mu nol．152(2): 859-866，1994）に詳述された技術を用いて、in vivoで評価することができる。この場合、ヒト腫瘍細胞系がヌードマウスに注入され、続いて受容体調節剤を用いて治療される。次に、腫瘍細胞を除去し、単一の細胞懸濁液を調製し、フローサイトメトリー並びにビオチン化ビタミンＢ₁₂およびアビジンFI TCによってＴｃ II細胞表面受容体密度を評価すればよい。本発明の受容体調節剤は、一以上の受容体型および関連する生物学的応答を調節することによって疾患プロセスまたは症候群の制御が達成されることを特徴とする種々の病気を治療するために、治療的に有効な量で投与すればよい。このような疾患には、新生物疾患、自己免疫疾患、リュウマチ性関節炎、心臓血管系疾患、神経変性疾患が含まれる。多くの非新生物疾患プロセスに共通しているのは、疾病プロセス自身またはその症候群が、ビタミンＢ₁₂／Ｔｃ II受容体調節剤のような抗増殖剤の使用によって停止または改善され得ることである。これらの共通に認識される段階には、当該疾患の原因である免疫細胞が抗原特異的または抗原非特異的手段によってターンオンされるに至る感作または誘導フェーズ、続いてその免疫細胞の数が爆発的に増大する増殖フェーズ、および増大した免疫細胞が直接的または間接的に組織損傷を与える最終的な症候群フェーズが含まれる。新生物疾患には、例えば白血病、ザルコーマ、ミエローマ、カルチノーマ、神経腫、ミエローマ、乳癌、肺癌、肝臓癌、脳癌、結腸癌、頸癌、前立腺癌、ホジキン氏病、非ホジキン氏リンパ腫が含まれる。このため、癌以外の多くの疾患の治療において抗増殖性化学療法剤が利用されるが、これに伴う毒性に起因して、生命が脅かされる状況での使用は制限される。本発明のような抗増殖剤（化学療法剤の直接的毒性は少ししかない）は、より広範に使用することができる。より詳細に言うと、本発明のビタミンＢ₁₂受容体調節剤は、原形質膜プロセス（例えばイオン輸送）に対して有害ではない。加えて、この抗増殖活性はビタミンＢ₁₂の投与によって反転される。更に、本発明の薬剤は、原形質膜のレベルで作用し、核のレベルでの作用や挿入および架橋によるＤＮＡのレベルで作用（多くの化学療法剤はこのようにして作用する）はしないから、突然変異誘発性、催奇形性および発癌性はない。Ｂ₁₂／Ｔｃ II受容体調節剤の薬学的応用を理解するためには、このような治療の標的となる細胞タイプに関する知識が必要である。この目的で、種々の薬学的応用を下記の表９に記載する。増殖および活性化したＴ細胞は、クローン病の慢性炎症から急性の臓器移植拒否反応に亘る広範な疾患を引き起こす。これらの全ての疾患において、Ｔ細胞は中心的な病理学的役割または副次的な役割を果たす。抗増殖性化学療法剤は、症状を低減するように作用し、幾つかの場合には長期間の緩解に導く。同様に、増殖性の繊維芽細胞が細胞および上皮細胞は、細胞の過増殖を特徴とする疾患を発生することがある。ビタミンＢ₁₂受容体調節剤は、これら疾患の現存の化学療法レジメの代わりに、またはこれと組み合わせて使用してもよい。この抗増殖性のビタミンＢ₁₂受容体調節剤を使用することの重要な側面は、正常な治癒（付着、はん痕）または細胞再生（乾せん）のプロセスもまた同時に阻害されないように、それほど激しく、或いは不適切なタイミングでは適用しないことである。こうして、治癒の間は低投与量の受容体調節剤を使用し、治癒が完結したら、高投与量で使用する。或いは、受容体調節剤は、治癒が完結した後までは全く投与しなくてもよい。先に述べたように、Ｂ₁₂／Ｔｃ II受容体調節剤は、新生物細胞からビタミンＢ₁₂を枯渇させるために用いることができる。十分な枯渇によって、迅速に増殖しているリンパ様新生物の死が導かれることが既に示されている。更に、この栄養素の細胞による利用可能性を低下させる短期間の治療と、現存の化学療法剤とを組み合わせることによって、治療効果は顕著に改善される。固形腫瘍については、ビタミンＢ₁₂の枯渇によって、細胞死と共に細胞性塞栓および分化が誘導される。従って、Ｂ₁₂／Ｔｃ II受容体調節剤は、ホルモンに応答する固形腫瘍の分化を誘導するために用いることができる。分化したフェノタイプを発現する細胞の数の増加は、ホルモン受容体の発現の増大に翻訳される。乳癌および前立腺癌のような腫瘍のホルモン受容体の状態は、そのホルモン治療に対する応答性と直接関連している。従って、Ｂ₁₂／Ｔｃ II受容体調節剤は、引き続くホルモン治療の効率を増大させるために、受容体陽性腫瘍細胞の数を増大させ、または受容体密度を増加するように用いることができる。ビタミンＢ₁₂受容体調節剤は、新生物細胞および正常細胞の両者の複製に影響を与えることができる。しかし、骨髄前駆体は分化感受性または応答性を示す。従って、Ｂ₁₂受容体調節剤は、化学療法剤の毒性に対する骨髄前駆体の耐性を高めるように、骨髄前駆体の感受性を調節するために用いることができる。このような化学療法剤は主に複製する細胞に対して作用し、非複製細胞の感受性は遥かに低い。毒性薬物に対する前駆体の感受性を低下させることは、保存骨髄を増大し、引き続くコロニー刺激因子に対する応答を高め、化学療法剤の高投与量を可能にし、また再形成の間隔を短くする。また、癌に対するＢ₁₂受容体療法の必然的結果としての、骨髄前駆体に対するこのような積極的な効果は、５−ＦＵおよびメトトレキセート以外の化学療法剤の治療インデックスを改善する別のメカニズムであることに留意しなければならない。種々の自己免疫疾患、移植片vs宿主病、異所性アレルギー、および臓器移植においては、患者が自己抗原またはアロ抗原に対して感作される初期の「誘導相」の後に、Ｂ細胞またはＴ細胞の禁止された又は正規でない「増殖相」が続く。抗増殖剤、誘導に続いて化学療法剤で治療することにより、禁止されたクローンの増殖を阻害し、疾患の進行を阻害し、また安定な耐性状態を修復できることが、かなり以前から知られている。炎症は、臨床的トライアルにおいて抗体が既に利用されている適用である。主に強調されているのは、回復阻害による、または損傷組織の血管内皮への炎症性細胞の結合による炎症の初期発現である。また、炎症部位での細胞の増殖は、病理、並びに急性および慢性炎症の組織破壊に寄与することが良く知られている。このため、炎症の続発を阻止するために抗増殖剤、化学療法剤が広範に使用されている。メトトレキセートは、リューマチ性関節炎に関連した症状を治療するために通常用いられている薬剤の一つである。この薬剤は、疾患の進行に伴う局所的炎症（例えば滑液）または全身的炎症の両者を低減するように作用する。メトトレキセートは、白血病の治療において、ビタミンＢ₁₂の枯渇と相乗的に作用する。従って、Ｂ₁₂受容体調節剤は、リューマチ性関節炎における効果を高めるために、メトトレキセートと組み合わせることができる。メトトレキセートの他の応用には、慢性心臓疾患および結腸炎に関連した破壊性炎症の治療が含まれる。腹部の外科手術、放射線治療または化学療法は、組織の付着（癒着）によって面倒なものになることが多い。これらは、弓部閉塞を導き、また外科的介入を必要とするため、かなりの臨床的問題を提示する。腹腔癒着は、腹部の内側を覆っている腹膜の細胞増殖の結果として生じる。このような増殖を防ぐ非毒性の手段によって、これらの正常細胞をホメオステーシス制御機構に復帰させ、これにより癒着形成を阻止できるであろう。良性の増殖およびこれに続くはん痕(scarrin g)の同様のプロセスは、網膜手術の合併症である。抗体受容体拮抗剤の小分子類縁体の直接的な点滴によって、このような損傷性の合併症を防止することができるであろう。本発明の範囲で用いる「治療」の語は、患者の症状を低減または緩和し、症状が悪化または進行を防止し、原因物質を阻害または除去し、或いは感染または疾患にかかっていない対象を感染または疾患から予防することをいう。従って、例えば、感染の治療には、感染物質を破壊すること、その増殖および成熟を阻害または妨害すること、その病理学的影響を中和すること等が含まれる。欠乏(defic iency)を生じまたはそれをより重篤にする欠乏を、部分的にまたは全体的に補償することによって、病気は「治療」される。本発明の受容体調節剤は、治療的に有効な量で投与される。治療的に有効な投与量は、in vivoでの実験に続いてin vitroでの研究を行うことによって決定することができる。薬学的キャリアまたは希釈剤との混合物の形で受容体調節剤を含む薬学的組成物は、従来の薬学的処方技術に従って調製することができる。このキャリアは、投与に望ましい製剤形態（例えば、静脈内注射、経口局所、エアロゾル、座薬、非経腸的または脊髄注射）に応じて、広範な形態を取ることができる。好ましくは、投与は定位注射によって行われる。例要約すると、以下の例には、異なる官能性のクラスの経路変更部分を用いる本発明のいくつかの受容体調節剤の合成を開示する。より具体的には、受容体調節剤におけるターゲッティング部分として、ビタミンＢ₁₂を用いる一連の例を示す。商業的な供給元から購入された全ての化学物質は、分析用等級又はそれ以上であり、別段のことわりがない限り更なる精製をすることなく用いられた。イソフタロイルジクロリドは、Lancaster Synthesis Inc．(Windham，NH)から購入した。他の全ての試薬は、Aldrich Chemical Co．(Milwaukee，WI)から入手した。ＨＰＬＣ分析用溶媒は、ＨＰＬＣ等級として入手され、使用前にフィルター（０．２μｍ）にかけた。イオン交換クロマトグラフィーは、２００〜４００メッシュ強塩基アニオン２％架橋Dowex-1-クロリド(Aldrich Chemical Co.)を用いて行った。Amberlite XAD-2 非イオン性ポリマー吸着剤及びカラムクロマトグラフィー用オクタデシル官能化シリカゲルは、Aldrich Chemical Co.から入手した。¹ ＨＮＭＲは、Bruker AC-500（500MHz）装置で入手した。化学シフトは、内部参照としてテトラメチルシランを用いてｐｐｍ（δ）として表す。ＩＲデータは、Perkin-Elmer 1420赤外分光光度計により入手した。ＵＶデータは、Perkin-El mer Lambda 2 UV/V分光光度計により入手した。重量分析データは、高速原子衝撃法（ＦＡＢ）を用いてVG 7070H重量分析計で入手した。化合物のＨＰＬＣ分離は、ＵＶ検知器を備えるHewlett-Packard４基１０５０勾配ポンプシステムにより入手した。ＨＰＬＣデータの分析は、Hewlett-Packar d HPLC Chemstationソフトウエアーにより入手した。モノマーのＨＰＬＣ：ＨＰＬＣ分離は、5mm，4.6 250mmＮＨ₂カラム(RAININ m icrosorb-MV amino column)上で、１ｍＬ／分の流速において、Ｈ₂O：ＴＨＦ（９６：４）溶液中の５８ｍＭ酢酸ピリジン、ｐＨ４．４により溶出した。保持時間は、１＝４．３分；２＝６．５分；３＝８．０分；４＝８．８分；５＝１０．９分；６＝２．３分；７＝２．３分；８＝３．０分；９＝２．９分；１０＝２．９分；１３＝３．４分である。逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーは、Hewlett-Pa ckard Lichrospher 100 RP-18（5mm，125 x 4mm）C-18カラムを用いて、１ｍＬ／分の流速における勾配溶媒システムを用いて行った。勾配において溶媒Ａは、メタノールである。溶媒Ｂは、H₂Oである。４０％Ａから出発して、１０分間で１００％Ａまで上昇させた。次いで、勾配は、５分かけて４０％Ａまで戻した。ビオチン複合体についてのこれらの条件における保持時間は、１７＝７．１分；１８＝７．２分；１９＝６．９分；２０＝６．４分である。分取ＬＣは、モノカルボン酸の混合物を分離するために、DYNAMAX（モデルUV-1）ＵＶ−可視検知器を備えたRAININ Rabbit-plusペリスタポンプシステムを用いて、流速０．１５ｍＬ／分において行った。アミノプロピルシリカ（４０〜６３ｍｍ）を充填したＩＤカラム(Alltech，150psi)， (1000mm x 25mm)を用いた。ダイマーのＨＰＬＣ：ダイマー３６、３７及び３８には、勾配をかけた溶媒Ａは、メタノールである。溶媒Ｂは、H₂Oである。勾配は、７０％Ａの開始混合物で２分間維持し、その後、次の１０分間をかけて、Ａの割合を直線的に１００％まで上昇させた。勾配は、１００％において２０分間維持した。これらの条件下におけるダイマーの保持時間は、３６＝８．７分；３７＝９．０分；３８＝８．９分であった。ダイマー５８〜６０及びダイマー６４〜６６については、勾配をかけた溶媒Ａはメタノールであった。溶媒Ｂは、１％酢酸水溶液であった。勾配は、４０％において開始し、２分間その組成に保ち、次いでＡの割合を次の１０分間をかけて直線的に１００％に上昇させた。これらの条件下における試験された化合物の保持時間は、５８＝１４．０分；５９＝１４．１分；６０＝１３．９分；６４＝８．７分；６５＝８．６分；６６＝９．０分であった。例１シアノコバラミンモノカルボキシレートの合成及び精製：コリン環(corrin ring)での修飾この例は、ビタミンＢ₁₂分子上のｂ−、ｄ−及びｅ−プロピオンアミド部位へのリンカーの結合の準備として、前記プロピオンアミド部位の希酸を用いた加水分解を例証するために供される。重要なことには、ｂ−、ｄ−及びｅ−プロピオンアミドの加水分解は、ベンズイミダゾールを連結する複素環鎖におけるａ−、ｃ−及びｇ−アセトアミド又はｆ−アミドの加水分解に対して選択的である。ジ −及びトリ−カルボキシレート誘導体に対するモノカルボキシレートの最適収量は、室温において０．１ＮＨＣｌ中において１０日間で得られる。非加水分解ビタミンＢ₁₂及び生成したジ−及びトリ−カルボキシレートは、分取液体クロマトグラフィーにより、所望のモノカルボキシレートから容易に分離された。具体的には、シアノコバラミン（１）（３．７ｍｍｏｌ，５ｇ）を５００ｍＬの０．１ＮＨＣｌに溶解し、アルゴン雰囲気下に１０日間室温で撹拌した。次いで、溶液を６ＮＮａＯＨで中和し、コバミド(cobamide)をフェノール内へ抽出することにより脱塩し、２００ｇ（60 x ４cm、200-400メッシュ）Dowex Cl^-X2カラム(アセテートの形態；Ｃｌ^-がなくなるまで飽和酢酸ナトリウムで洗浄し、次いで２００ｍＬの水で洗浄することにより調製される）に適用した。不反応のシアノコバラミンを除去するためにカラムを水で溶出し、次いで０．０４Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．６７）で溶出した。溶出の第１の画分は、３種のモノカルボン酸を包含していた。それらを１００ｍＬの９０％（Ｗ／Ｗ）フェノール中に、２回は２５ｍＬで、さらに１回は１０ｍＬで抽出することにより脱塩した。３体積のエチルエーテル（３×１６０ｍＬ）及び１体積のアセトン（１６０ｍＬ）を、集めたフェノール抽出物に添加した。モノカルボン酸は、水（２×１００ｍＬ）により抽出することにより有機相から除去した。集めた水相は、２０ｍＬのエーテルで２回抽出し、残留フェノールを除去した。モノカルボン酸の水溶液は、蒸発乾固した。収率：２．５ｇ（５０％）。次いで、３種の酸の混合物（０．３５０ｇ）を２００ｇ（１０００ｍｍ×２５ｍｍ）アミノプロピル塗布シリカのカラム（４０〜６３ｍｍ）に適用し、H₂Ｏ：ＴＨＦ（９６：４）中の５８ｍＭ酢酸ビリジンｐＨ４．４で溶出し、溶出物を自動画分コレクタにより集めた。初めに溶出した酸は、ｂ−モノカルボン酸（２）、２番目に溶出した酸は、ｅ−モノカルボン酸（３）、そして３番目に溶出した酸は、ｄ−モノカルボン酸（４）であることが分った。酸画分をフェノール抽出により脱塩した。得られた固体をアセトン水溶液から結晶化させた。 b-酸 (2)：収量 0.122g(35%)，mp267-270℃で分解。¹H NMR(MeOH-d₄，d)0.43( s，3H，C-20 CH₃); 1.00(m，2H); 1.18(s，3H，C-46 CH₃); 1.24(d，3H， Pr₃ CH₃); 1.36(br s，9H，C-47 CH₃，C-54 CH₃); 1.4(s，3H，C-25 CH₃); 1.9( d，7H，C-36 CH₃，C-30 CH₂，C-48 CH₂); 2.26(d，6H，B10 & B11，CH₃); 2.36( d，2H，C-26 CH₂); 2.57(s，10H，C-35 CH₃，C-31 CH₂，C-37 CH₂，C-53 CH₃); 2.8(m，2H，C-60 CH₂); 3.3(m，3H，C-8H，C-13H); 3.6(m，2H，Pr₁ CH₂); 3.7( d，1H，R₅); 3.9(d，1H，R₅); 4.0(m，1H，R₄); 4.12(d，1H，C-19); 4.17(s，1 H，C-3); 4.3(m，1H，R₂); 4.5(m，1H); 4.7(m，1H，R₃); 6.0(s，1H，C-10); 6 .2(s，1H，R₁); 6.5(s，1H，B4)，7.1(s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7)．MS(FAB⁺) ： m/e 1357(M⁺ +1)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1 060cm^-1.UV(MeOH)： 1360(e23441) e-酸 (3):収量 0.168g(48%)，mp 245-250℃で分解。¹H NMR(MeOH-d₄，d)0.43( s，3H，C-20 CH₃); 1.01(m,2H); 1.15(s，3H，C-46 CH₃); 1.23(d，3H，Pr₃CH₃) ; 1.36(br s，9H，C-47 CH₃，C-54 CH₃); 1.4(s,3H，C-25 CH₃); 1.83(s，4H，C -55 CH₂); 1.93(m，6H，C-36 CH₃，C-30 CH₂，C-48 CH₂); 2.22(d，6H，B10& B1 1 CH₃); 2.35(s，3H，C-26 CH₂); 2.5(d，13H，C-35 CH₃，C-31 CH₂，C-37 CH₂ ，C-53 CH₃); 2.9(m，1H，C-60 H); 3.2(m，1H，C-13H); 3.4(m，1H，C-8H); 3. 6(d，1H，Pr1 CH); 3.7(d，1H); 3.9(d，1H); 4.0(m，2H); 4.1(d，1H); 4.2(m ，2H); 4.6(m，1H); 6.0(s，1H，C-10); 6.3(d，1H，R1); 6.5(s，1H，B4); 7.0 (s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7)．MS(FAB⁺): m/e 1357(M⁺ +1)．IR(KBr): 3400，3 200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1．UV(MeOH): 1360(e21 842) d-酸 (4): 収量 0.060g(17%)，mp〉300℃，¹H NMR(MeOH-d₄，d)0.43(s，3H，C -20 CH₃); 1.04(m，2H); 1.15(s，3H，C-46 CH₃); 1.25(d，3H，Pr₃ CH₃); 1.36 (br s，9H，C-47 CH₃，C-54 CH₃); 1.4(s，3H，C-25 CH₃); 1.85(s，4H); 2.01( s，6H); 2.23(d，8H，B10 & B11 CH₃); 2.38(d，3H，C-26 CH₂); 2.53(d,13H，C -36 CH₃，C-30 CH₂，C-48 CH₂); 2.6(m，5H); 2.9(m，1H，C-60 H); 3.3(d，1H ，C-13H); 3.4(m，1H，C-8 H); 3.6(d，1H，Pr1 CH); 3.7(d，1H); 3.9(d，1H); 4.0(m，2H); 4.1(d，1H); 4.3(m，2H); 6.0(s，1H，C-10); 6.3(d，1H，R1); 6 .5(s，1H，B4); 7.1(s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7); UV(MeOH): 1360(e22127)．M S(FAB⁺): m/e 1357(M⁺ +1)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660， 1570，1490，1060cm^-1. 例２リボースで修飾されたシアノコバラミン：スクシネート複合体（５）この例は、無水コハク酸によるリボース結合部位結合部位ｈ（構造Ｉを参照）の活性化を例証するために供する。シアノコバラミン（１）（０．１５ｍｍｏＬ，２００ｍg）を８ｇ（８０ｍｍｏＬ）の無水コハク酸及び６．４ｍＬのピリジンを含有するジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）４０ｍＬ中に溶解した。室温において１４〜１６時後に、５００ｍＬの水を添加し、１０％ＫＯＨにより反応混合物のｐＨを６に維持することにより過剰の無水コハク酸を分解させた。次いで、ＫＣＮを最終濃度０．０１Ｍになるよう添加し、３ＮＨＣｌにより溶液のｐＨを６に再調整した。１時間後、シアノコバラミン成分をフェノール抽出により脱塩し、１００ｇのDowex Cl^-(60 x 2.5cm)カラム（アセテートの形態、２００〜４００メッシュ）に適用した。シアノコバラミンを水で溶出した。スクシネート複合体（５）をＮａＯＡｃ（０．０４Ｍ，ｐＨ４．６７）により溶出し、分離後、１８０ｍｇ（８５％）を回収した。Ｏ２’，Ｏ５’−ジスクシニル誘導体は、これらの条件下にカラム上に吸収されたままであった。ｍｐ２０８〜２１０℃ において分解。¹ H NMR(D₂O-d₄，d):0.43(s，3H，C-20 CH₃); 0.95(m，2H); 1.15(s，3H); 1.2( d，3H); 1.35(d，7H); 1.4(s，3H); 1.8(s，3H); 1.9(s，12H); 2.2(d，6H); 2. 36(d，2H); 2.5(d，10H); 2.6-2.7(m，7H); 3.0(m，1H); 3.3(d，1H); 3.37(m， 1H); 3.5(d，1H); 4.0(d，1H); 4.18(m，2H); 4.25(m，3H); 4.54(d，1H); 6.0( s，1H); 6.3(d，1H); 6.4(s，1H); 7.0(s，1H); 7.2(s，1H)．MS(FAB⁺): m/e 14 55(M⁺ +1)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1; UV(MeOH): 1360(e26041). 例３シアノコバラミンモノカルボン酸と１，１２−ジアミノドデカンとの結合：シアン化ナトリウムを用いない反応この例は、シアノコバラミンモノカルボキシレートへのリンカーの結合を例証するために供される。ジアミノドデカンとのモノカルボキシレート（２，３，４）の結合は、まず、ヤマダ及びホーゲンカンプ、J．Biol．Chem．247，6266-627 0，1972に従い、Ｈ₂Ｏ中のＮ−エチル−Ｎ‘−ジメチルアミノ−プロピル−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を用いて試みられた。しかしながら、得られた生成物は、反応性アミノ基を有していなかった。反応混合物をＤＭＦ／Ｈ₂Ｏに変更し、反応混合物にＮａＣＮ／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（例４を参照）を添加することにより反応条件を変更し、所望のジアミノドデカン付加物が得られた。１００ｍＬのＨ₂Ｏ中のシアノコバラミンモノカルボン酸（０．３７０ｍｍｏＬ，５００ｍｇ）と１，１２−ジアミノドデカン（３．６ｇ）との混合物を、１ＮＨＣｌによりｐＨ６に調整した。次いで、溶液をＮ−エチル−Ｎ‘−ジメチルアミノ−プロピル−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（７２６ｍｇ）により処理し、室温で２２時間撹拌した。６ないし１４時間の５回の間隔の間に、６５０ｍｇのＥＤＣを反応混合物に添加した。全反応時間４日（ＨＰＬＣモニター）の後、溶液を蒸発乾固し、残渣を１００ｍＬのアセトンで温浸させ、溶媒をデカントした。固体残渣を５０ｍＬの水に溶解し、１７５ｇ Amberlite XAD-2(60 x 4c m)カラムに適用した。汚染物を１Ｌの水によりカラムから洗浄し、次いで、粗生成物を５００ｍＬのメタノールにより溶出した。溶液を蒸発乾固し、残渣を２５ｍＬの水に溶解し、１００ｇ Dowex Cl^-(60 x 2.5cm)カラム（アセテートの形態、２００〜４００メッシュ）に適用した。最終生成物を２５０ｍＬの水を用いて溶出し、未置換の酸をカラムに結合させて残留させ、これは後に、０．０４ｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．６７により溶出した。最終生成物を包含する分画を蒸発乾固した。得られた質量分析値は、ＨＣＮが所望の生成物から失われていることを示した。さらに¹ＨＮＭＲデータは、いくつかのプロトンがコバルトにより影響されることを示唆した。従って、この反応は、ＮａＣＮ（例４）により行われ、平衡をＣｏ−ＣＮの保持の方向に向けた。結合反応を容易にするために、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドも添加した。 e-酸付加物(6): 収量: 222 mg(40%)．mp 172-174℃ with decoposition．¹H N MR(MeOH-d₄，d): 0.43(m，3H，C-20 CH₃); 1.06(t，4H ,C-46 CH₃); 1.16(m，5H ); 1.2(m，5H); 1.33(m，7H); 1.43(s，3H); 1.68(m，4H); 1.86(m，5H);2.2(m ，8H); 2.3(m，6H)，2.4(m，10H); 2.55(m，10H); 2.8(m，4H); 3.1(m，6H); 3. 3(m，5H); 3.6(m，2H); 3.7(m，2H); 3.8(m，1H); 4.0(m，1H); 4.1(m，1H); 4. 16(m，1H); 4.3(m，1H); 4.3(m，1H); 4.48(m，1H); 4.6(m，1H); 6.0(d 1H，C- 10); 6.2(m，1H，R1); 6.5(m，1H，B4)，7.1(m，1H，B2); 7.2(m，1H，B7)．MS( FAB⁺)：m/e 1512，IR(KBr): 3400，3200，2950，1660，1570，1490，1060cm^-1; UV(MeOH): 1360(e21 877). d-酸付加物(7): 収量: 225mg(45%)，mp 195-198℃で分解。¹H NMR(MeOH-d₄，d ): 0.43(m，3H，C-20 CH₃); 1.09(m，7H):1.14(m，6H); 1.2(m，10H)，1.27(m， 10H); 1.33(m，6H); 1.5(m，3H); 1.77(s，3H); 2.2(m，8H); 2.26(s，2H); 2.5 (m，10H); 2.7(m，5H); 3.0(m，2H); 3.1(m，2H); 3.2(m，3H); 3.5(m，2H);3.6 (m，1H); 3.8（m，1H); 3.9(m，1H); 4.0(m，1H); 4.1(m，1H); 4.2(m，1H);4.4 (m，1H); 4.6(m，1H); 6.0(d 1H，C-10); 6.1(m，1H，R₁); 6.4(m，1H，B4)，7. 0(m，1H，B2); 7.1(m，1H，B7); MS(FAB⁺): m/e 1512，IR(KBr): 3400，3200，2 950，1660，1570，1490，1060cm^-1; UV(MeOH): 1360(e22 680). 例４１，１２−ジアミノドデカンとシアノコバラミンモノカルボン酸の結合：シアン化ナトリウムを包含する反応シアノコバラミンモノカルボン酸（２，３，４）（０．３７０ｍｍｏＬ，５００ｍｇ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１．４８ｍｍｏＬ，１７０ｍｇ）をＤＭＦ：Ｈ₂Ｏ（１：１）の混合物（１８．４ｍＬ）中に溶解し、３６３ｍｇのＮａＣＮを添加した。１，１２−ジアミノドデカンをＤＭＦ：Ｈ₂Ｏ（１：１）の混合物（１８．４ｍＬ）に溶解し、１ＮＨＣｌによりｐＨを６に調整した。次いで、ジアミノドデカン溶液の一部分をシアノコバラミン溶液に添加した。ＥＤＣ（２８５ｍｇ）を添加し、溶液のｐＨを５．５に再調整した。次いで、反応混合物を室温において暗所で１夜撹拌した。６〜１４時間の５回の間隔の間に、ｐＨ値を各々の回で５．５に再調整しながら、１７０ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド及び２８５ｍｇのＥＤＣを溶液に添加した。全反応時間４日（ＨＰＬＣにより反応を追う）の後、溶液を蒸発乾固した。残渣を１００ｍＬのアセトンで温浸させ、溶媒をデカントした。固体残渣を５０ｍＬのＨ₂Ｏに溶解し、２００ｇ Amberlite XAD-2(60 x 4cm)カラムに適用した。所望しない物質を除去するために、１Ｌの水によりカラムを溶出し、次いで、所望の生成物をを５００ｍＬのメタノールにより溶出した。溶液を蒸発乾固し、残渣を２５ｍＬの水に溶解し、１００ｇDowex Cl^-(60 x 2.5cm)カラム（アセテートの形態、２００〜４００メッシュ）に適用した。最終生成物を２５０ｍＬの水を用いてカラムから溶出し、未置換酸をカラムに結合させて残留させた。次いで、０．０４ｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．７により溶出した。最終生成物を包含する分画を徐湯発乾固した。 b-アイソマー(8): 収量 410mg(82%)，mp 172-174℃で分解。¹H NMR(MeOH-d₄， d)0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.18(s，4H); 1.3(m，13H); 1.39(m，13H); 1.45(s ，5H); 1.6(m，4H); 1.72(m，2H); 1.9(s，6H);2.25(d，6H，B10 & B11 CH₃); 2 .35(m，5H); 2.56(m，5H); 2.8-3.0(m，8H); 3.15(m，4H); 3.3(m，2H); 3.4(m ，2H); 3.6(m，1H); 3.68(m，1H); 3.75(m，1H); 3.9(d，1H); 4.07(m，1H); 4. 12(d，1H); 4.2(br s，1H); 4.3(m，1H); 4.47(m，1H);4.7(m，1H); 6.0(s，1H ，C-10); 6.2(d，1H，R₁); 6.5(s，1H，B4); 7.1(s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7); MS(FAB⁺): m/e 1539(M⁺ +1)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570 ，1490，1060cm^-1．UV(MeOH): 1360(e15409). e-アイソマー(9): 収量430mg(86%)，mp 175-180℃で分解，¹H NMR(MeOH-d₄,d) 0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.17(s，4H，C-46 CH₃); 1.22(d，4H，Pr₃ CH₃); 1.29 (s，24H); 1.36(br s，6H); 1.4(s，6H); 1.6(m，3H); 1.87(s,8H); 2.05(m，2H ); 2.25(s，6H，B10 & B11 CH₃); 2.36(m，3H); 2.55(d，10H); 2.8(s，4H); 3. 06(t，2H); 3.1(m，3H); 3.3(s，1H); 3.34(m，1H); 3.4(m，1H); 3.58(m， 1H); 3.65(m，1H); 3.75(d，1H); 3.9(d，1H); 4.0(m，1H); 4.1(d，1H); 4.16( m，1H); 4.3(m，2H); 4.48(m，2H); 4.6(m，1H); 6.0(s，1H，C-10); 6.3(d，1H ，R1); 6.5(s，1H，B4); 7.0(s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7); MS(FAB⁺): m/e 153 9(M⁺ +1)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1．U V(MeOH): 1360(e16 720) d-アイソマー(10): 収量: 400mg(80%)，mp 174-178℃で分解。¹H NMR(MeOH-d₄ ，d)0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.07(m，3H，C-46 CH₃); 1.2(d，4H，Pr₃ CH₃); 1 .27(m，15H); 1.35(br s，9H); 1.42(s，3H); 1.53(m，2H); 1.6(m，4H); 1.86( s，4H); 2.25(d，6H，B10 & B11 CH₃); 2.5(d，10H); 2.8(s，3H); 2.9(m，6H); 3.15(m，3H); 3.2(m，4H); 3.4(m，3H); 3.6(d，1H); 3.75(d，1H); 3.96(d，1 H); 4.08(m，2H); 4.19(m，1H); 4.3(m，2H); 4.65(m，1H); 6.0(s，1H，C-10); 6.3(d，1H，R₁); 6.5(s，1H，B4); 7.1(s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7); UV(MeOH ): 1360(e17 665)．MS(FAB⁺): m/e 1539(M⁺ +1)．IR(KBr): 3400，3200，2950， 2060，1660，1570，1490，1060cm^-1. 例５シアノコバラミンモノカルボン酸のガンマーアミノブチル酸（ＧＡＢＡ）との結合この例は、ビタミンＢ₁₂分子へのガンマーアミノブチル酸（ＧＡＢＡ）リンカーの結合を例証するために供される。この反応スキームを図９に示す。ガンマーアミノブチル酸（ＧＡＢＡ）tert−ブチルエステル（１１）（１ｍｍｏｌ）及びシアノコバラミンモノカルボキシレート（２，３，４）（０．１ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＨ₂Ｏ中で混合し、十分量の０．１ＮＨＣｌを添加してｐＨを６．０に調整した。Ｎ−エチル−Ｎ¹−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（０．５ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで、混合物を真空下で乾燥した。この反応混合物をＴＦＡにより処理し、tert−ブチルエステルを除去した。シアノコバラミン−ＧＡＢＡ付加物（１２）を精製した。逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーを上述したように行う。シアノコバラミンＧＡＢＡ付加物（１２）は、カルボジイミドによりさらに活性化され得、以下に記載ずるように残基に結合する。例６リボースに修飾されたシアノコバラミン：スクシネート−ジアミノドデカン複合体（１３）シアノコバラミン−リボース−スクシネート（５）（０．３７０ｍｍｏＬ，５３８ｍｇ）及びＮ−ヒドロキシルスクシンイミド（１．４８ｍｍｏＬ，１７０ｍｇ）をＤＭＦ：Ｈ₂Ｏ（１：１）の混合物（１８．４ｍＬ）に溶解し、３６３ｍｇのＮａＣＮを添加した。この反応スキームを図１１に示す。１，１２−ジアミノドデカンをＤＭＦ：Ｈ₂Ｏ（１：１）の混合物（１８．４ｍＬ）中に取り、１ＮＨＣｌによりｐＨを６に調整した。次いで、ジアミノドデカン溶液を一部分シアノコバラミン溶液に添加した。ＥＤＣ（２８５ｍｇ）を添加し、溶液のｐＨを５．５に再調整し、反応混合物を室温において暗所で１夜撹拌した。６ないし１４時間の５回の間隔の間に、各々の回ごとにｐＨを５．５に再調整しながら、１７０ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド及び２８５ｍｇのＥＤＣを溶液に添加した。全反応時間４日（ＨＰＬＣによりモニター）の後、溶液を蒸発乾固し、残渣を１００ｍＬのアセトンで温浸させ、溶媒をデカントした。固体残渣を５０ｍＬのＨ₂Ｏに溶解し、２００ｇ Amberlite XAD-2(60 x 4cm)カラムに適用した。汚染物は、１Ｌの水によりカラムから溶出し、次いで、粗生成物を５００ｍＬのメタノールにより溶出した。溶液を蒸発乾固し、残渣を２５ｍＬの水に溶解し、１００ｇ Dowex Cl^-(60 x 2.5cm)カラム（アセテートの形態、２００〜４００メッシュ）に適用した。最終生成物を２５０ｍＬの水を用いて溶出し、未置換の酸をカラムに結合させて残留させ、これは後に０．０４ｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．７により溶出した。最終生成物（１３）を包含する分画を蒸発乾固した。収量：４２５ｍｇ（７０％），ｍｐ１８５〜１８７℃で分解。¹ H NMR(MeOH-d₄，d)0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.15(s，3H); 1.2(d，3H); 1.3(s ，27H); 1.4(m，3H); 1.55(m，6H); 1.85(m，12H); 2.2(d，6H); 2.3(d，6H); 2.5(d，10H); 2.8(m，10H); 3.0(t，3H); 3.1(t，3H); 3.2(s，6H); 3.3(m，4H) ; 3.58(m，2H); 3.6(d，1H); 4.1(d，1H); 4.2(m，2H); 4.3(m，1H); 4.4(d，1H ); 6.0(s，1H); 6.2(d，1H); 6.5(s，1H); 7.1(s，1H); 7.2(s，1H)．MS(FAB⁺): m/e 1638(M⁺)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1 ; UV(MeOH): 1360. 例７１，１２−ジアミノドデカンと結合したシアノコバラミンモノカルボン酸の修飾：無水コハク酸との反応この例は、アミノ末端結合部位のカルボキシレート末端への修飾を例証するために供される。そのような修飾は、アミノ含有経路変更剤（例えばアミノ糖）をリンカー含有シアノコバラミン誘導体に結合させるために必要であり得る。シアノコバラミンカルボン酸ジアミノドデカン複合体（８，９，１０）（０．１３８ｍｍｏＬ，２００ｍｇ）を、８ｇ（８０ｍｍｏＬ）の無水コハク酸及び６．４ｍＬのピリジンを含有する４０ｍＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解した。室温において１４〜１６時間後、５００ｍＬの水を添加し、かつ１０％ＫＯＨにより反応混合物のｐＨを６に保することにより過剰の無水コハク酸を除いた。次いで、ＫＣＮを最終濃度０．０１Ｍになるように添加し、３ＮＨＣｌにより溶液のｐＨを６に再調整した。１時間後、シアノコバラミン成分をフェノール抽出により脱塩した。残渣を１００ｍＬのアセトンで温浸させ、溶媒をデカントした。それを４０ｍＬのＨ₂Ｏに溶解した。１ＮＮａＯＨ（２ｍＬ）をそれに添加し、反応混合物を室温で１５〜２０分撹拌した。次いで、それを１ＮＨＣｌにより中和し、シアノコバラミン成分（１４，１５，１６）をフェノール抽出により脱塩した。収量：８０ｍｇ（４０％）；ｍｐ１９０〜１９８℃で分解。¹ H NMR(MeOH-d₄，d): 0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.17(s，4H，C-46 CH₃); 1.23(d ，4H，Pr₃ CH₃); 1.29(s，24H); 1.36(br s，6H); 1.4(s，6H); 1.87(s，4H); 2 .05(m，2H); 2.25(s，6H，B10 & B11 CH₃); 2.35(m，3H); 2.4(m，5H); 2.55(d ， 10H); 2.7(s，5H); 2.8(m，2H); 3.1(m，6H); 3.3(s，6H); 3.4(m，1H); 3.65(m ，2H); 3.75(d，1H); 3.9(d，1H); 4.0(m，1H); 4.1(d，1H); 4.16(m，1H); 4.3 (m，1H); 4.48(m，1H); 4.6(m，2H); 6.0(s，1H，C-10); 6.3(d，1H，R₁); 6.5( s，1H，B4); 7.1(s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7)．MS(PAB⁺): m/e 1639(M⁺)．IR(K Br): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1．UV(MeOH): 1360( e22 564). 例８モノカルボン酸で修飾されたシアノコバラミン：ジアミノドデカン−ビオチン複合体この例は、ビタミンＢ₁₂誘導体とビオチンとの結合を例証するために供される。ビオチン複合体（１７、１８、１９）は、活性化シアノコバラミンモノカルボン酸ジアミノドデカン（１４）、（１５）及び（１６）のビオチンのＮＨＳエステル(Sigma Chemical Co.)との反応により得られる。ＤＭＦ（３５ｍＬ）中のシアノコバラミンモノカルボン酸ジアミノドデカン複合体（１４、１５、１６）（３００ｍｇ，０．１９５ｍｍｏＬ）の溶液に、トリエチルアミン（０．０２７ｍＬ，０．１９５ｍｍｏＬ）を添加した。次いで、Ｎ −ヒドロキシスクシンイミドビオチン（１００ｍｇ，０．２９５ｍｍｏＬを１０〜１５分間かけて添加し、蒸発乾固した。固体残渣を２０ｍＬの水に溶解し、７５ｇのDowex Cl^-(40 x 2cm)（アセテートの形態、２００〜４００メッシュ）カラムに適用した。生成物を２５０ｍＬの水を用いて溶出した。次いで、それを蒸発に供し、乾燥し、残渣を１０ｍＬのメタノール−水（７：３ｖ／ｖ）中に溶解し、溶液を逆相Ｃ−１８カラム(500 mm x 25mm，Alltech，150psi)に適用し、同じ溶媒で展開した。RAININ Rabbit-plus ペリスタポンプシステムをDYNAMAX（モデル UV-1）ＵＶ−可視検知器とともに用いた。溶出物を自動画分コレクタにより回収した。最終生成物を含有する画分（ＨＰＬＣでモニターされる）は、蒸発乾固した。 b-アイソマー(17): 収量 159mg(53%)，mp 210-212℃で分解。1H NMR(MeOH- d₄，d): 0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.18(s，4H); 1.3(m，13H); 1.39(m，13H); 1 .45(s，5H); 1.6(m，4H); 1.72(m，2H); 1.9(s，6H); 2.2(d，8H，B10 & B11 CH₃ ); 2.6(d，12H); 2.7(m，3H); 2.8-3.0(m，8H); 3.1(m，3H); 3.2(m，2H);3.4( s，1H); 3.6(m，2H); 3.68(d，1H); 3.75(m，1H); 3.9(d，1H); 4.07(m，1H); 4 .12(d，1H); 4.2(s，1H); 4.3(m，1H); 4.47(m，1H); 4.7(m，1H); 6.0(s，1H， C-10); 6.2(d，1H，R1); 6.5(s，1H，B4); 7.1(s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7); M S(FAB⁺): m/e 1764(M⁺)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490 ，1060cm^-1．UV(MeOH): 1360(e23 746). C₈₅H₁₂₇N₁₇O₁₆CoPS・11H₂Oに対する計算値: C，51.98; H，7.59; N，12.13．測定値: C,51.91; H,7.81; N,12.31. e-アイソマー(18): 収量 174mg(58%)，mp 222-224℃ with decomposition，¹H NMR(MeOH-d₄，d): 0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.17(s，4H，C-46 CH₃); 1.22(d,4 H，Pr₃ CH₃); 1.29(s，24H); 1.36(br s，6H); 1.4(s，6H); 1.6(m，4H); 1.72( m，2H); 1.87(s，4H); 2.17(m，3H); 2,25(s，6H，B10 & B11 CH₃); 2.36(m，3H ); 2.55(d，10H); 2.64(m，2H); 2.8(s，4H); 2.97(s，4H); 3.1(m，3H); 3.3(m ，1H); 3.4(m，1H); 3.58(m，1H); 3.65(m，1H); 3.75(d，1H); 3.9(d，1H);4.0 (m，1H);4.1(d，1H);4.16(m，1H); 4.3(m，2H); 4.48(m，2H); 4.6(m，1H); 6.0 (s，1H，C-10); 6.3(d，1H，R1); 6.5(s，1H，B4); 7.0(s，1H，B2); 7.2(s，1H ，B7); MS(FAB⁺): m/e 1764(M⁺)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，15 70，1490，1060cm^-1．UV(MeOH); 1360(e24 441). C₈₅H₁₂₇N₁₇O₁₆CoPS・9H₂O(13)に対する計算値: C，52.96; H，7.53; N，12.35 ．測定値: C,52.85; H,7.55; N,12.30. d-アイソマー(19): 収量 165mg(55％)，mp 216-218℃で分解。¹H NMR(MeOH-d₄ ，d); 0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.16(s，3H，C-46 CH₃); 1.2(d，4H，Pr₃ CH₃); 1.28(s，15H); 1.35(br s，9H); 1.42(s，3H); 1.53(m，2H); 1.6(m，4H); 1.7 2(m，2H);１.86(s，6H); 2.16(m，3H); 2.02(m，4H); 2.25(d，6H，B10 & B11 C H₃); 2.5(d，10H); 2.7(d，1H); 2.8(m，5H); 3.1(m，6H); 3.2(m，3H); 3.4(m ，1H); 3.57(m，1H); 3.6(d，1H); 3.7(d，1H); 3.9(d，1H);4.0(m，1H); 4.11( d，1H); 4.17(m，1H); 4.3(m，2H); 4.4(m，2H); 4.6(m，1H); 6.0(s，1H， C-10); 6.3(d，1H，R1); 6.5(s，1H，B4); 7.1(s，1H，B2); 7.2(s，1H，B7); M S(FAB⁺): m/e 1764(M⁺); IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490 ，1060cm^-1; UV(MeOH): 1360(e29 824). C₈₅H₁₂₇N₁₇O₁₆CoPS・10H₂Oに対する計算値: C，52.46; H，7.56; N，12.24．測定値: C,52.27; H,7.56; N,12.34. 例９リボースに修飾されたシアノコバラミン：スクシネート−ジアミノドデカン−ビオチン複合体（２０）この例は、ビオチンとのリボース結合ジアミノドデカン付加物（１３）の結合により、シアノコバラミンビオチン複合体（２０）の生成を例証するために供される。ＤＭＦ（３５ｍＬ）中の（１１）の溶液（３００ｍｇ，０．１８３ｍｍｏＬ）の溶液に、トリエチルアミン（０．０２５ｍＬ，０．１８３ｍｎｏＬ）を添加した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドビオチン（１００ｍｇ，０．２９５ｍｍｏＬ）を１０〜１５分の期間をかけて添加し、次いで、蒸発乾固した。固体残渣を２０ｍＬの水に溶解し、１ＮＮａＯＨによりｐＨ１０に調整し、７５ｇのDowex Cl^-(40 x 2cm)（２００〜４００メッシュ）カラムに適用した。水画分は無視した。次いで、生成物を０．１ＮＮＨ₄ＯＡｃにより溶出し、フェノール抽出により脱塩した。残渣を１０ｍＬのメタノール−水（７：３ｖ／ｖ）に溶解し、溶液を逆相カラム（オクタデシル）に適用し、これを同じ溶媒で展開した。最終生成物（２０）を含有する画分（ＨＰＬＣによりモニターされる）を蒸発乾固した。収量１３５ｍｇ（４５％）、ｍｐ１９８〜２０５℃で分解。¹ H NMR(MeOH-d₄，d): 0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.15(s，3H); 1.2(d，3H); 1.3( s，27H); 1.36(m，6H); 1.4(m，3H); 1.6(m，4H); 1.7(m，2H); 1.85(m，12H); 2.0(d，3H); 2.17(m，3H); 2.2(d，6H); 2.3(d，6H); 2.5(d，10H); 2.64(m，2H ); 2.8(m，10H); 3.1(m，6H); 3.25(m，6H); 3.58(m，2H); 4.0(m，1H); 4.1(m ，1H); 4.16(m，1H); 4.4(m，1H); 4.6(s，2H); 4.7(m，1H); 6.0(s， 1H); 6.2(d，1H); 6.5(s，1H); 7.1(s，1H); 7.2(s，1H)．MS(FAB⁺): m/e 1866( M⁺)．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1. UV(MeO H): 1360(e28 434). 例１０シアノコバラミン／リソソーム向性化合物の合成（ストレプトマイシン）受容体調節剤この例は、ストレプトマイシンのシアノコバラミン又はコバラミン誘導体への結合を例証する。ストレプトマイシン（２１）を、シアノコバラミンモノカルボキシレート（２、３、４）又はジアミノアルキルスクシネート誘導体（１４、１５、１６）と、オキシム結合された結合部位（図１３）を通して結合する。結合基（（３−アミノプロピル）アミノオキシ）アセトアミド（２２）を、１，１− ジメチルエトキシカルボニル−アミノオキシ酢酸（２３）(J．Med，Chem．36:12 55-126,1993)のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルの、無水ＴＨＦ中の過剰のジアミノプロパンとの反応により合成する。結合基を、分取クロマトグラフィーにより、反応混合物中の他の化合物から分離する。次いで、リンカー（１ｇ）を、酢酸ナトリウムを含有する１０ｍＬのＨ₂Ｏ中のストレプトマイシン（０．５ｇ）と混合する。水溶液を、水浴中で１０分間暖め、粗ストレプトマイシン −リンカー付加物（２５）を得、これは、酸洗浄されたアルミナ上のクロマトグラフィーにより精製し得る(J．Am．Chem．Soc．68:1460,1946)。ストレプトマイシンリンカー付加物（０．１５ｍｍｏｌ）を含有する水溶液を、活性化されたシアノコバラミン（２、３、４）（０１．ｍｍｏｌ）の水溶液と混合し、ＥＤＣ（０．５ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を、２４時間室温において撹拌し、逆相分取クロマトグラフィーカラム上で流し、シアノコバラミン−ストレプトマイシン受容体調節剤（２６）の精製に供する。例１１シアノコバラミン／リソソーム向性化合物（アクリジン）受容体調節剤この例は、アクリジンへのビタミン₁₂の結合を例証する。クロロキン、キナクリン及びアクリジンは、比較的非毒性のリソソーム向性色素であり、リソソーム内において数百倍にも濃縮される。アクリジン誘導体は、図１４に示す反応スキームの方法Ａにより、又は同様にして方法Ｂに記載されるように、（シアノコバラミンのような）ターゲティング部分へ共有結合し得る。両反応スキームによりシアノコバラミン−アクリジン複合体が生成される。方法Ａ：キナクリンの側鎖と類似の様式により、ジアミン側鎖をまず合成する。具体的には、モノ−フタロイル保護１，４−ジアミノブタン（２７）を、フェノール中で６，９−ジクロロ−２−メトキシアクリジン（２８）と反応させる(J ．Am．Chem．Soc．66:1921-1924，1944)。次いで、反応混合物を過剰の２ＮＮａＯＨ中に注ぎ、エーテルで抽出する。エーテル抽出物を１ＭＮａＨＣＯ₃で、次いで、Ｈ₂Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ₄上で乾燥する。粗生成物をＨ₂Ｏ−アルコールから再結晶させる。フタロイル保護基は、ＭｅＯＨ中で無水ヒドラジンを用いて除去し(Bioconjugate Chem．2:435-440，1991)、アミノアクリジン（２９）が得られる。次いで、アミノアクリジン（２９）をビタミンＢ₁₂モノカルボン酸（２、３、４）と結合させ、シアノコバラミン−アクリジン複合体（３０）が得られる。方法Ｂ：アクリジン誘導体（３１）（０．０９８ｍｍｏｌ，０．０４５ｇ）を０．５ｍＬのトリフルオロ酢酸に溶解した。この溶液を０．５時間室温で撹拌した。ＴＦＡをアスピレーター真空により除去した。残渣を５ｍＬのアセトニトリルに溶解し、２、３滴のトリエチルアミンにより中和した。次いで、アセトニトリルをアスピレーター真空により除去した。残渣をＤＭＳＯ（１０ｍＬ）に溶解し、シアノコバラミンカルボン酸−ジアミノドデカン−スクシニル誘導体（１５、１６、１７）（０．０９８ｍｍｏｌ，１３４ｍｇ）を添加し、次いで、トリエチルアミン（１２μＬ）を添加した。次いで、反応混合物を２４時間室温で撹拌し（ＨＰＬＣによりモニター）、蒸発乾固した。残渣を１００ｍＬのアセトンで温浸し、溶媒をデカントし、シアノコバラミン−アクリジン複合体（３２）を得た。収量：１２０ｍｇ(６２％)。ｍｐ１８２〜１８８℃。¹ H NMR(MeOH-d₄，d): 0.43(s，3H，C-20 CH₃); 1.17(s，4H，C-46 CH₃); 1.23(d ，4H，Pr₃ CH₃); 1.29(s，24H); 1.36(br s，6H); 1.4(s，6H);1.65(m，2H); 1. 87(s，4H); 2.05(m，2H); 2.25(s，6H，B10 & B11 CH₃); 2.35(m，3H); 2.4(d， 5H); 2.44(d，2H); 2.55(d，10H); 2.64(s，5H); 2.8-2.9(m，8H); 3.1-3.15(m ，6H); 3.3(s，6H); 3.4(m，1H); 3.65(m，2H); 3.75(d，1H); 3.9(d，1H); 3.9 8(s，2H); 4.0(m，2H); 4.1(d，1H); 4.16(m，1H); 4.3(m，1H); 4.48(m，1H); 4.6(m，2H); 6.0(s，1H，C-10); 6.3(d，1H，R₁); 6.5(s，1H，B4); 7.1(s，1H ，B2); 7.2(s，1H，B7); 7.3(t，1H); 7.4(dd，1H); 7.6(dd，1H); 7.7(2dd，2H ); 7.8(d，1H); 7.9(d，1H); 8.4(d，1H). 例１２シアノコバラミン／リソソーム向性化合物（アミカシン）受容体調節剤この例は、シアノコバラミン分子へアミカシンを結合させ、シアノコバラミン −アミカシン複合体を生成させることを例証する。結合の反応スキームは、図１２に示されている。上述したように、リソソーム内に保持される化学残基は、リソソーム向性と呼ばれる。アミノグリコシドは、リソソーム向性化合物であり、従って、本発明の経路変更剤として用い得る。アミノグリコシドであるアミカシン（図３参照）のヒドロキシアミノブチル酸側鎖上の主長鎖アミンは、優先的に反応する。具体的には、アミカシン（３３）(Sigma Chemical Co.，St．Louis) をビタミンＢ₁₂モノカルボキシレート（２、３、４）とＥＤＣの存在下に反応させる。次いで、シアノコバラミン−アミカシン複合体（３４）を分離し、上述の条件下の逆相ＬＣクロマトグラフィーにより精製する。例１３シアノコバラミンモノカルボン酸ジアミノドデカン複合体ダイマー：イソフタロイルジクロリド架橋この例は、架橋受容体調節剤として用いるために好適なシアノコバラミンダイマーの合成を例証する。いくつかの受容体システムにおいて受容体を架橋することは、細胞表面受容体を、それらの正常な受容体再循環経路よりもむしろリソソームへの経路変更を起こさせ分解に供することに十分である。ＤＭＦ（３０ｍＬ）中のシアノコバラミンモノカルボン酸ジアミノドデカン複合体（８、９、１０）（０．１９２ｍｍｏｌ，０．３００ｇ）の溶液にトリエチルアミン（１８μＬ）を添加した。イソフタロイルジクロリド（３５）（０．０９６ｍｍｏｌ，０．０１９５ｇ）を１０〜１５分かけて添加した。反応混合物を５５〜６０℃で４８時間撹拌し（ＨＰＬＣによりモニター）、蒸発乾固した。固体残渣を２０ｍＬのメタノール：Ｈ₂Ｏ（７：３）に溶解し、逆相Ｃ−１８カラム(500mm x 25mm，Alltech，150psi)に適用し、同じ溶媒で展開した。ＲＡＩＮＩＮＲａｂｂｉｔ−ｐｌｕｓペリスタポンプシステムをＤＹＮＡＭＡＸ(model UV-1)ＵＶ可視吸収検知機とともに用い、溶出物を自動画分コレクタにより回収した。最終生成物を含有する画分（ＨＰＬＣによりモニター）を蒸発乾固した。 b-酸ダイマー(36): 収量 96mg(30%)，mp 217-220℃で分解，¹H NMR(D₂O，d)0. 43(s，6H，C-20 CH₃); 1.18(s，8H); 1.3(m，36H); 1.37(m，12H); 1.46(s，10H ); 1.6(m，8H); 1.9(d，12H); 2.05(m，10H); 2.2(d，16H，B10 & B11 CH₃); 2. 35(m，8H); 2.6(d，18H); 2.8-3.0(m，16H); 3.15(m、 6H); 3.3(s，8H); 3.37( m，14H); 3.6(m，4H); 3.76(m，2H); 3.9(d，2H); 4.07(m，2H); 4.12(m，2H); 4.18(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4.6(s，2H); 4.68(m，2H); 6.0(s，2H ，2C-10); 6.26(d，2H，2R1); 6.6(s，2H，2B4); 7.1(s，2H，2B2); 7.25(s，2H ，2B7); 7.54(t，1H); 7.95(d，2H); 8.25(s，1H); MS(FAB⁺); m/e 3208.IR(KBr ); 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1; UV:1360(e42 380). e-酸ダイマー(37): 収量 121mg(38%),mp 220-222℃で分解，¹H NMNR(D₂O,d)0. 43(s，6H，C-20 CH₃); 1.17(s，8H); 1.22(d，13H); 1.29(s，45H); 1.36(d，22 H); 1.44(s，10H); 1.6(m，8H); 1.87(s，8H); 2.04(m，10H); 2.25(s，12H，B1 0 & B11 CH₃); 2.36(m，8H); 2.55(d，20H); 2.8(m，8H); 3.15(m，8H); 3.29(s，10H); 3.36(m，14H); 3.6(m，4H); 3.73(m，2H); 3.9(d, 2H); 4.07(m，2H); 4.12(m，2H); 4.16(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4.6 (s，2H); 4.66(m，2H); 6.0(s，2H，2C-10); 6.26(d，2H，2R1); 6.6(s，2H, 2B 4); 7.1(s，2H，2B2); 7.25(s，2H，2B7); 7.54(t,1H); 7.93(d，2H); 8.25(s， 1H); MS(FAB⁺): m/e 3208．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1 490，1060cm^-1．UV(MeOH): 1360(e33 854). d-酸ダイマー(38): 収量 96mg(30%)，mp 225-228℃で分解，¹H NMR(D₂O，d)0. 43(s，6H，C-20 CH₃); 1.16(s，8H); 1.29(m，36H); 1.35(d，12H); 1.44(s，10 H); 1.53(m，6H); 1.6(m，8H); 1.85(s，12H); 2.03(m，8H); 2.25(d，12H，B10 & B11 CH₃); 2.33(m，8H); 2.54(d，20H); 2.8(m，8H); 3.13(m，8H); 3.28(s ，12H); 3.35(m，12H); 3.6(m，4H); 3.73(m，2H); 3.9(d，2H); 4.07(m，2H); 4.12(m，2H); 4.16(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4.64(m，2H); 4.7(s，2H ); 6.0(s，2H，2C-10); 6.26(d，2H，2R1); 6.6(s，2H，2B4); 7.1(s，2H，2B2) ; 7.25(s，2H，2B7); 7.54(t，1H); 7.93(d，2H); 8.25(s，1H); MS(FA^B+): m/e 3208．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1 UV(Me OH): 1360(e31 747). 例１４シアノコバラミンモノカルボン酸ジアミノドデカン複合体：ＥＴＡＣ架供この例は、ヘテロ三官能性架橋剤を用いる二価の受容体調節剤の合成を説明するために供される。この合成のための反応スキームは、図１５に記載されている。ヘトロ三官能性架橋剤は、ＥＴＡＣ試薬により形成される(Bioconjugate Chem .1:36-50，1990; Bioconjugate Chem,1:51-59，1990; J．Am．Chem．Soc．101： 3097-3110,1979)。二価であることは、結合の親和性を高めることに加えて、隣接する受容体を架橋しかつエンドサイトーシスを誘発する能力も付与する。架橋剤の二価「アーム」は、ペプチド又は他のリンク分子により延長することができ、両「腕」を同時に結合することを可能にする。ビタミンＢ₁₂の場合、このことはゲルろ過により評価することができる。もしリンカーが同時相互作用を許容するならば、８０，０００ｍ．ｗ．のシングルピーク中に存在するＥＴＡＣダイマーの各モルに対して、２モルのＴｃＩＩがあるだろう（４０，０００ｍ．ｗ．のモノマーＴｃＩＩに対して）。従って、ＴｃＩＩ２モルが同時に結合することは、細胞表面受容体に二価結合する潜在能力を有するであろう。このことは、受容体に対するモノマーとダイマーとの結合親和性を比較することにより試験することができる。二価の調節剤は、リボソーム目標性及び保持性を高めるところの本発明のいずれもの経路変更剤を含むように合成することができるが、放射性標識に有用なものを説明のために開示する。図１５を参照すると、カルボキシ−ＥＴＡＣ（３９）をLiberatoreら(Bioconj ugate Chem．1:1990)の方法により合成する。カルボキシ−ＥＴＡＣは、チオニルクロリド中での反応によりその酸クロリドに変換される。アミン（４０）の添加により、アミン−ＥＴＡＣ付加物（４１）が得られる。ＣＨ₃ＣＮ中のアミン −ＥＴＡＣ（１ｍｍｏｌ）の１Ｍシステアミン（１０ｍｍｏｌ）水溶液との反応が、室温で２４時間撹拌することにより行われる。この化合物を、酸性条件下にＮａＣＮＢＨ₃により還元する。粗アミン−ＥＴＡＣ−システアミン付加物（４２）を、上述した条件を用いて逆相ＬＣにより精製する。ビタミンＢ₁₂モノカルボキシレート（２、３、４）は、Ｈ₂Ｏ中のＥＤＣとの反応により、チラミン− ＥＴＡＣ−システアミン化合物と複合する。得られたビタミンＢ₁₂−ＥＴＡＣ− チラミンダイマー（４３）は、上述した条件を用いて逆相ＬＣにより精製する。例１５シアノコバラミンモノカルボン酸ジアミノドデカン複合体ダイマー：ビオチン部位と架橋するイソフタレートこの例は、ビオチン部位（４４）に追加的に結合した二価受容体調節剤の合成を説明する。さらなる修飾は、この分子とアビジン又はストレプトアビジン部分との結合により得ることができる。反応工程Ａ：ビオチン（１２．３ｍｍｏｌ，３ｇ）を暖かい（浴温度７０℃）のＤＭＦ（６０ｍＬ）にアルゴン雰囲気下に溶解した。次いで、周囲の温度に冷却し、ＤＣＣ（１３．５ｍｍｏｌ，２．７９ｇ）を、次いで、テトラフルオロフェノール（２４．６ｍｍｏｌ，４．０８ｇ）を添加した。次いで、反応混合物を０℃に冷却し、０．５時間撹拌した。それを室温に戻し、さらに４〜５時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を蒸発乾固した。沈殿をアセトニトリル（５０ｍＬ）で洗浄し、ろ過し、５ｇ（９８％）の白色固体（４５）を得た。¹ H NMR(DMSO,δ): 1.4(m，2H); 1.7(m，2H); 2.5(t，2H); 2.8(t，2H); 3.1(m， 1H); 4.1(m，1H); 4.3(m，1H); 6.4(d，2H); 7.9(m，1H) 反応工程Ｂ：６−アミノカプロン酸（４６）（７．５ｍｍｏｌ，０．９９ｇ）をＨ₂Ｏ（７５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（０．５ｍL）を添加し、次いで、暖かいアセトニトリル（３００ｍＬ）中のビオチンのＴＦＰエステル（５ｍｍｏｌ，１．９６ｇ）の溶液を添加した。反応混合物を室温で１夜撹拌した。次いで、それをろ過し、Ｈ₂Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄し、高真空上で乾燥した。収量：０．８７０ｇ（４７％）。ろ液を蒸発乾固した。残渣を沸騰アセトニトリル（７５ｍＬ）中にとり、ろ過し、熱いアセトニトリルで洗浄した。固体（４７）を高真空上で乾燥し、０．６ｇを得た。総収量１．４７ｇ（７９％）。¹ H NMR(DMSO-d6，δ): 1.2-1.6(m，8H); 2.0(t，2H); 2.2(t，2H); 2.5(dd，2H) ; 2.8(dd，2H); 3.1(m，3H); 4.1(m，1H); 4.3(m，1H); 6.4(d，2H); 7.7(m，1H ) 反応工程Ｃ：ビオチンが複合したカプロン酸（４７）（２．６８ｍｍｏｌ，１ｇ）をＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中に溶解した。トリエチルアミン（０．４ｍＬ）を添加し、次いで、ＴＦＰアセテート（４．０２ｍｍｏｌ，１．０５ｇ）を添加した。次いで、反応混合物を１５〜２０分間室温で撹拌した（ＨＰＬＣによりモニター）。次いで、それを蒸発乾固した。残渣をエーテル及びジクロロメタンで洗浄し、高真空上で乾燥した（４８）。収量：１．２４ｇ（８９％）。¹ H NMR(DMSO-d6,δ): 1.2(t，2H); 1.3-1.7(m，5H); 2.1(t，2H); 2.6(dd，2H); 2.8(m，4H); 3.1(m，4H); 4.2(m，1H); 4.4(m，1H); 6.4(d，2H); 7.8(m，1H); 8.0(m，1H) 反応工程Ｄ：ビオチン−カプロン酸のＴＦＰエステル（４８）（０．６７ｍｍｏｌ，０．３５ｇ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）中に溶解した。トリエチルアミン（８０μＬ）、次いでアミノイソフタル酸（１．００５ｍｍｏｌ，０．１８２ｇ）を添加した。反応混合物を室温で８日間撹拌し（ＨＰＬＣによりモニター）、一方で、トリエチルアミン（８０μＬ）を各々２４時間後に添加した。次いで、蒸発乾固した。次いで、残渣をシリカのカラムに適用し、初めはアセトニトリル（４５０ｍL）で溶出した。次いで、メタノールで溶出し、２０ｍＬの画分を回収し、画分２のときに溶媒をＤＭＦに変更した。最終生成物を含有する画分（ＨＰＬＣによりモニター）を蒸発乾固し（４９）、収量２３０ｍｇ（６５％）を得た。¹ H NMR(DMSO-d6,δ): 1.3-1.7(m，8H); 2.1(t，2H); 2.3(t，2H); 2.6(m，2H); 2.8(m，2H); 3.1(m，3H); 4.1(m，1H); 4.3(m，1H); 6.4(d，2H); 7.8(t，1H); 8.1(m，1H); 8.46(s，2H) 反応工程Ｅ：ビオチン−カプロン酸−イソフタル酸（４９）（０．３７６ｍｍｏｌ，２００ｍｇ）をアルゴン雰囲気下にＤＭＦ（３０ｍＬ）中に溶解した。ＴＦＰアセテート（０．９４ｍｍｏｌ，２４１ｍｇ）を二重端針により添加し、次いで、トリエチルアミン（１１２μＬ）を添加した。次いで、反応混合物を室温で２４時間撹拌した（ＨＰＬＣによりモニター）。次いで、蒸発乾固した。薄い茶色のオイルをエーテル中にとり、固体をろ過し、エーテル（５０ｍＬ）で洗浄し（５０）、２５０ｍｇ（８６％）を得た。¹ H NMR(DMSO-d6,δ): 1.3-1.7(m，8H); 2.1(t，2H); 2.3(t，2H); 2.6(m，2H); 2.8(m，2H); 3.1(m，3H); 4.2(m，1H); 4.4(m，1H); 6.4(d，2H); 7.8(t，1H); 8.1(m，2H); 8.57(s，1H); 8.9(s，2H) 反応工程Ｆ：ＤＭＦ：Ｈ₂Ｏ（３：１）混合物（４０mL）中のシアノコバラミンカルボン酸−ジアミノドデカン複合体（８、９、１０）（０．１３０ｍｍｏｌ，０．２ｇ）の溶液にトリエチルアミン（１２μＬ）を添加した。ビオチン−カブロン酸−イソフタル酸のＤｉＴＦＰエステル（５０）（０．０６５ｍｍｏｌ，０．０５０ｇ）を５〜１０分かけて添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した（ＨＰＬＣによりモニター）。それを蒸発乾固した。残渣を１００ｍＬのアセトンで温浸し、溶媒をデカントし、２３０ｍｇ（６２％）を得た（５１）。ｍｐ１９５〜１９８℃で分解。例１６シアノコバラミンモノカルボン酸ジアミノドデカン複合体ダイマー：パラ−ヨードベンゾイル部位と結合するイソルタレートこの例は、パラ−ヨードベンゾイル部位にも結合する二価受容体調節剤の例である。反応工程Ａ：５ｇ（２８ｍｍｏｌ）量の５−アミノイソフタル酸（５２）を３０ｍＬの１ＮＮａＯＨに溶解し、氷／水浴中に置いた。冷たい溶液に、６０ｍＬのアセトニトリル中の７．５ｇ（２８ｍｍｏｌ）４−ヨードベンゾイルクロリド（５２）を滴下した。次いで、氷／水浴から出す前に、薄い白色沈殿を１０分間撹拌し、さらに１０分間撹拌した。反応混合物を酢酸によりｐＨ４に調整し、得られた固体を回収した。次いで、この固体を３０ｍＬの１ＮＮａＯＨに溶解し、エーテル（２×５０ｍＬ）で洗浄した。得られた水溶液をろ過し、酢酸によりｐＨ４に酸性化した。白色沈殿を回収し、高真空上で乾燥し、．６ｇ（９９％）の（５４）を得た。ｍｐ＞３００℃; IR(Nujol,cm-1)3570(m)，3300(m)，1645 ，1580(m)，1525(m)，760(m);¹H NMR(DMSO-d6，δ)，8.51(2H，d，J=0.7Hz)，8. 27(1H，s); 7.94(2H，d，J=4.2Hz); 7.84(2H，d，J=4.1Hz) 反応工程Ｂ：５ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）量の５−［Ｎ−ヨードベンジル）アミノ］イソフタル酸（５４）を１００ｍＬ無水酢酸エチル中に懸濁させた。これに１２．５ｇ（７３ｍｍｏｌ）の２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（５５）を、次いで、５ｇ（２４．２ｍｍｏｌ）の１．３−ジクロロヘキシルカルボジイミドを添加した。次いで、この懸濁液を３日間室温で撹拌し、その後、固体をろ過し、追加の酢酸エチル２０ｍＬで洗浄した。次いで、ろ液を蒸発乾固した。得られた粘性白色固体を５０ｍＬアセトニトリルに懸濁させ、３０分間撹拌した。ろ過により３．７５ｇの白色固体（４３％）（５６）を得た。ｍｐ２５０〜２５１℃；IR(Nujol,cm-1)3220(m)，3060(m)，1750，1655，1520，1485，1330， 1195，1110，1085,955(m)，945(m); ¹H NMR(DMSO-d₆，δ)，9.06(2H，d， j=0.7Hz)，8.57(1H，t，J=1.4Hz)，8.04(2H，m); 7.94(2H，d，J:4.2Hz)，7.81( 2H，d，J=4.3) 反応工程Ｃ：ＤＭＦ：Ｈ₂Ｏ（３：１）の混合物（４０ｍＬ）中のシアノコバラミンカルボン酸−ジアミノドデカン複合体（５６）（０．１９２ｍｍｏｌ，０．３ｇ）の溶液にトリエチルアミン（０．０１８ｍＬ）を添加した。この溶液に５−［Ｎ−（ｐ−ヨードベンゾイル）アミノ］−イソフタル酸のＤｉＴＦＰエステル（５７）（０．０９６ｍｍｏｌ，０．０６８ｇ）を５〜１０分かけて添加した。反応混合物を室温で４〜５時間撹拌した（ＨＰＬＣによりモニター）。次いで、これを蒸発乾固した。固体残渣を２０ｍＬのメタノール：Ｈ₂Ｏ（８：２）に溶解し、逆相Ｃ−１８カラム(500mm x 25mm，Alltech，150psi)に適用し、同じ溶媒で溶出した。ＲＡＩＮＩＮＲａｂｂｉｔ−ｐｌｕｓペリスタポンプシステムをＤＹＮＡＭＡＸ（モデルＵＶ−１）ＵＶ可視吸収検知機とともに用い、溶出物は、自動画分コレクタにより回収した。最終生成物を含有する画分（ＨＰＬＣによりモニター）を蒸発乾固した。 b-酸ダイマー(58): 収量:280mg(76％)，mp 230-233℃で分解，¹H NMR(D₂O，d) 0.43(s，6H，C-20 CH₃); 1.19(s，8H); 1.3(m，36H); 1.37(d，12H); 1.46(s，1 0H); 1.63(m，8H); 1.87(s，12H); 2.05(m，10H); 2.27(d，16H，B10 & B11 CH₃ ); 2.35(m，8H)); 2.6(d，18H); 2.8(s，8H); 3.0(s，10H); 3.15(m，8H); 3.3( d，8H); 3.37(m，14H); 3.6(m，2H); 3.68(d，2H); 3.76(m，2H); 3.9(d，2H); 4.07(m，2H); 4.12(m，2H); 4.18(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4.64(m，4 H); 6.0(s，2H，2C-10); 6.26(d，2H，2R₁); 6.6(s，2H，2B4); 7.1(s，2H，2B2 ); 7.25(s，2H，2B7); 7.7(d，2H); 7.9(d，2H); 7.99(d，1H); 8.28(s，2H); M S(FAB⁺)，m/e 3453．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，10 60cm^-1．UV(MeOH): 1360.6(e48 871) e-酸ダイマー(59): 収量: 258mg(70％)，mp 285-290 で分解。¹H NMR(D₂O，d) 0.43(s，6H，C-20 CH₃); 1.17(s，8H); 1.22(d，13H); 1.29(s，45); 1.36(d，2 2H); 1.44(s，10H); 1.6(m，8H); 1.86(s，12H); 2.04(m，10H)); 2.25(s，12H ，B10 & B11 CH₃); 2.36(m，8H); 2.55(d，20H); 2.83(m，8H); 3.15(m，8H); 3 .29(s，10H); 3.36(m，8H); 3.58(m，2H); 3.65(m，2H); 3.75(m，2H); 3.9(d， 2H); 4.06(m，2H); 4.12(m，2H); 4.16(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4.57 (s，2H); 4.65(m，2H); 6.0(s，2H，2C-10); 6.26(d，2H，2R1); 6.5(s，2H，2B 4); 7.1(s，2H，2B2); 7.25(s，2H，2B7); 7.7(d，2H); 7.89(d，2H); 7.98(s， 1H); 8.26(s，2H); MS(FAB⁺): m/e 3453．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1 660，1570，1490，1060cm^-1; UV(MeOH): 1360(e41 481). d−酸ダイマー(60): 収量265mg(72%)，mp 253-255℃で分解，¹H NMR(D₂O,d)0. 43(s，6H，C-20 CH₃); 1.16(s，8H); 1.22(d，12H); 1.33(m，36H); 1.43(s，10 H); 1.53(m，6H); 1.6(m，8H); 1.86(s，12H); 2.03(m，8H); 2.25(d，12H，B10 & B11 CH₃); 2.33(m，8H); 2.54(d，20H); 2.8(s，4H); 3.0(s，4H); 3.28(s， 10H); 3.35(m，8H); 3.58(m，2H); 3.65(m，2H); 3.73(m，2H); 3.88(d，2H); 4 .05(m，2H); 4.1(m，2H); 4.17(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4.57(s，2H) ; 4.63(m，2H)，6.0(s，2H，2C-10); 6.26(d，2H，2R₁); 6.5(s，2H，2B4); 7.1 (s，2H，2B2); 7.25(s，2H，2B7); 7.7(d，2H); 7.89(d，2H); 7.98(s，1H); 8. 26(s，2H); (FAB⁺): m/e 3453．IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570 ，1490，1060cm^-1；UV(MeOH): 1360(e48 245). 例１７シアノコバラミンモノカルボン酸ジアミノドデカン複合体ダイマー：パラ−（トリブチルスタニル）ベンゾイル部位と架供するイソフタレートこの例は、パラ−トリ−Ｎ−ブチルスタニル(para-tri-N-butyl stannyl)部位に結合する二価受容体調節剤の例である。反応工程Ａ：２ｇ（２．８ｍｍｏｌ）量の（上で合成した）５−［Ｎ−（ｐ− ヨードベンジル）アミノ］−イソフタル酸のｄｉＴＦＰエステル（５７）をアルゴン下に乾燥トルエン２０ｍＬ中に溶解した。これに２．８ｍＬ（５．５ｍｍｏｌ）のビス（トリブチルチン）（６１）を、次いで、４０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（６２）を添加した。混合物を室温で１５分間撹拌し、その後、８０℃で２時間加熱した。混合物は２時間かかってわずかに褐色になったのみだったため、追加の４０ｍｇのパラジウム触媒を添加した。１時間以内に混合物は黒色になった。室温に冷却した後に、ロータリーエバポレーションによりトルエンを除去した。次いで、得られた黒色オイル（固形物を含む）を２０ｍＬの酢酸エチル中にとり、１０ｇのシリカゲル上で（ロータリーエバポレーションにより）乾燥した。次いで、この固体を２５０ｇ(40 x 3.5cm)シリカゲルカラムに添加し、初めは、５％酢酸を含有するヘキサンで溶出した。６００ｍＬの溶出の後に、溶媒を９０／１０ヘキサン／酢酸エチル（５％酢酸を含む）に変更した。画分１４〜１６を合わせ、乾燥し、１．５ｇ（６２％）の白色固体（６２）を得た。ｍｐ１２０〜１２３℃。¹ H NMR(CDCl₃，d); 8.87(2H，d，J=0.7Hz)，8.76(1H，t,J=1.6Hz)，8.38(1H，s) ，7.84(2H，d，J=4.1Hz)，7.62(2H，d，J=4.1Hz)，7.07(2H，m)，1.55(6H，m)， 1.36(15H，m)，1.11(6H，m)，0.89(9H，t，J=7.3Hz); MS(FAB⁺)M⁺Hパターン計算値 870(75.1%)，871(52.9%)，872(100%)，873(41.0%)，874(21.4%)，測定値 870 (82.1%)，871(55.1%)，872(100%)，873(42.1%)，874(25.2%). IR(Nujol，cm^-1)1750，1645，1520，1480(m)，1185，1100，1085. 反応工程Ｂ：ＤＭＦ：Ｈ₂Ｏ（３：１）の混合物（４０ｍＬ）中のシアノコバラミンカルボン酸−ジアミノドデカン複合体（８、９、１０）（０．０６５ｍｍｌ，０．１ｇ）の溶液に、トリエチルアミン（０．００６ｍＬ）を添加した。５− ［Ｎ−（ｐ−トリブチルチンベンゾイル）アミノ］−イソフタル酸のｄｉＴＦＰエステル（６３）（０．０３２５ｍｍｏｌ，０．０２８ｇ）を５〜１０分かけて添加した。反応混合物を室温で１２〜１４時間撹拌した（ＨＰＬＣによりモニター）。それを蒸発乾固した。残渣を１００ｍＬのアセトンで温浸し、溶媒をデカントした。 b-酸ダイマー(64): 収量: 90mg(70%)，mp 208-212℃で分解，¹H NMR(D₂O，d)0 .43(s，6H，C-20 CH₃); 0.88(t，9H); 1.15(t，12H); 1.19(s，8H); 1.3(m，36H ); 1.37(d，12H); 1.46(s，10H); 1.6(m，8H); 1.9(s，12H); 2.05(m，10H); 2. 28(d，16H，B10 & B11 CH₃); 2.35(m，8H); 2.6(d，18H); 2.8-2.9(m，16H); 3. 15(m，8H); 3.3(s，8H); 3.37(m，14H); 3.6(m，4H); 3.76(m，2H); 3.9(d，2H) ; 4.07(m，2H); 4.12(m，2H); 4.18(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4.68(m ，2H); 6.0(s，2H，2C-10); 6.26(d，2H，2R₁); 6.6(s，2H，2B4); 7.1(s， 2H，2B2); 7.25(d，2H，2B7); 7.6(d，2H); 7.9(d，2H); 7.99(br s，1H); 8.28 (br s，2H); IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1. e-酸ダイマー(65): 収量: 93mg(72%)，mp〉300℃，¹H NMR(D₂O，d)0.43(s，6H ，C-20 CH₃); 0.88(t，9H); 1.12(t，12H); 1.17(d，8H); 1.22(d，13H); 1.29( s，45H); 1.36(d，22H); 1.44(s，10H); 1.6(m，8H); 1.87(d，12H); 2.04(m，1 0H); 2.25(s，12H，B10 & B11 CH₃); 2.36(m，8H); 2.55(d，20H); 2.8(m，8H); 3.15(m，8H); 3.29(s，10); 3.36(m，14H); 3.6(m，4H); 3.73(m，2H); 3.9(d ，2H); 4.07(m，2H); 4.12(m，2H)，4.16(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4. 66(m，2H); 6.0(s，2H，2C-10); 6.26(d，2H，2R₁); 6.6(s，2H，2B4); 7.1(s， 2H，2B2); 7.25(s，2H，2B7); 7.6(d，2H); 7.9(d，2H); 7.98(br s，1H); 8.28 (br s，2H); IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^-1. d-酸ダイマー(66): 収量:100mg(78%)，mp 202-205℃で分解，¹H NMR(D₂O₁d)0. 43(s，6H，C-20 CH₃); 0.88(t，9H)1.12(t，12H); 1.15(s，8H); 1.29(m，36H); 1.35(d，12H); 1.44(s，10H); 1.53(m，6H); 1.6(m，8H); 1.86(d，12H); 2.03 (m，8H); 2.25(d，12H，B10 & B11 CH₃);2.33(m，8H); 2.54(d，20H); 2.8(m，8 H); 3.13(m，8H); 3.28(s，10H); 3.35(m，10H); 3.6(m，4H); 3.73(m，2H); 3. 9(d，2H); 4.05(m，2H); 4.1(m，2H); 4.17(m，2H); 4.3(m，2H); 4.5(m，2H); 4.6(m，2H); 6.0(s，2H，2C-10); 6.26(d，2H，2R1); 6.6(s，2H，2B4); 7.1(s ，2H，2B2); 7.25(s，2H，2B7); 7.6(d，2H); 7.9(d，2H); 7.98(br s，1H); 8. 28(br s，2H); IR(KBr): 3400，3200，2950，2060，1660，1570，1490，1060cm^- ¹ . 例１８ビタミンＢ₂₁受容体調節剤のＴＣＩＩに結合する能力の評価この例は、ビタミンＢ₁₂受容体調節剤がＴｃＩＩに結合する能力を評価するために好適な競争的結合アッセイを例証するために供される。ビタミン₁₂誘導体の組み替えトランスコバラミンＩＩへの結合をピコモル濃度で行い、結合した割合を測定した。この競争的結合アッセイでは、ビタミンＢ₁₂受容体調節剤を含む各種のビタミンＢ₁₂誘導体を、放射性標識されたＢ₁₂に関してＴｃＩＩに結合するそれらの能力について評価した。変化する濃度の各々の誘導体を、一定量の放射性標識されたＢ₁₂の存在下に固定化されたＴｃＩＩとともにインキュベートした。３７℃で２０分間インキュベートした後に、上澄みの除去により、遊離の放射性標識されたＢ₁₂をＴｃＩＩ結合トレーサーから分離した。次いで、上澄み溶液の放射線活性を測定し、各々の競争の終りに存在する放射性標識された遊離のＢ₁₂の量を測定した。各々の競争について放射性標識されたＢ₁₂の量を測定することにより、各々の誘導体の放射性標識されたＢ₁₂結合を阻害する能力を測定した。次いで、各々のＢ₁₂誘導体について結合曲線を書いた。ここで、結合した放射性標識されたＢ₁₂の量（結合した放射性標識％）をもとの混合物中に存在する誘導体の濃度と相関させた。誘導体が、ＴｃＩＩに結合することに有効であればあるほど、放射性標識されたビタミンＢ₁₂の割合は低くなる。図２２は、トランスコバラミンＩＩの、例１において合成したシアノコバラミンモノカルボン酸との結合曲線を表わす。ＡＤ＝シアノコバラミン（１）；ＡＬ＝シアノコバラミンｂ−モノカルボン酸（２）；ＡＭ＝シアノコバラミンｅ−モノカルボン酸（３）；ＡＮ＝シアノコバラミンｄ−モノカルボン酸（４）。ｄ− カルボキシレート（３）は、シアノコバラミンとほほ同様に結合するようである。１つは既知の標準として、もう一つは不明として、２つのビタミンＢ₁₂試料が用いられた。図２３は、トランスコバラミンＩＩの、上記例３及び４において合成したシアノコバラミンジアミノドデカン付加物（８、９、１０）及びスクシネート付加物（１３）との結合曲線を表わす。ＡＨ＝シアノコバラミンｂ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン（７）；ＡＩ＝シアノコバラミンｅ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン（８）；ＡＪ＝シアノコバラミンｄ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン（９）；ＡＫ＝コバラミンｅ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン；ＡＥ＝シアノコバラミンリボース−スクシネート（１１）。ｂ−複合体（１７）は、最も低い結合能を有しする一方で、ｅ−複合体（１８）は、中間の結合能を有し、ｄ−複合体（１９）は、究めてよく結合する。リボース部位に結合したビオチン複合体（１３）は、その前駆体アミノ誘導体（１２）と同様に究めてよく結合するようである。試験した追加の化合物は、未知の構造のものであるが、（７）マイナスＨＣＮとしての適切な重量を有することが重量分析により示されたので、コバルト原子に配位するアミン基を有し得る。この未知の化合物は、ＴｃＩＩに結合しそうにないことが明らかである。図２４には、一連のビタミンＢ₁₂ダイマーのトランスコバラミンＩＩへの結合曲線が示される。ダイマーＸ＝イソフタロイルジクロリドを有するｂ−酸ダイマー（３６）；ダイマーＹ＝イソフタロイルジクロリドを有するｅ−酸ダイマー（３７）；ダイマーＺ＝イソフタロイルジクロリドを有するｄ−酸ダイマー（３８）；ダイマーＡ＝ｐ−ヨードベンゾイルイソフタロイルジクロリドを有するｂ− 酸ダイマー（５８）；ダイマーＢ＝ｐ−ヨードベンゾイルイソフタロイルジクロリドを有するｅ−酸ダイマー（５９）；ダイマーＣ＝ｐ−ヨードベンゾイルイソフタロイルジクロリドを有するｄ−酸ダイマー（６０）。図２５は、トランスコバラミンＩＩの、一連のビオチニレート化されたビタミンＢ₁₂分子への結合曲線を表わす。ＡＡ＝シアノコバラミンｂ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン及びビオチン（１７）；ＡＢ＝シアノコバラミンｅ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン及びビオチン（１８）；ＡＣ＝シアノコバラミンｄ−モノカルボン酸複合ジアミノドデカン及びビオチン（１９）；ＡＦ＝シアノコバラミンリボース−スクシネート複合ジアミノドデカン及びビオチン；ＡＧ＝シアノコバラミンリボース−スクシネート複合ジアミノドデカン及びビオチン（２０）。例１９ビタミンＢ₁₂受容体調節剤の生物学的活性のアッセイこの例は、本発明の受容体調節剤の生物学的活性を確認するためのアッセイの利用を例証するために供される。受容体下方調節には、Ｋ５６２のようなターゲット細胞系の処理の比較が含まれ、各々の試料を、ビタミンＢ₁₂又はビタミンＢ₁₂受容体調節剤により４℃で２４時間処理する。この期間の後に、各々の試料の細胞を、遠心によりビタミンＢ₁₂ 又はビタミンＢ₁₂受容体調節剤から分離する。次いで、細胞を洗浄し、４℃において１５分を超えない短い期間２ｍＭＥＤＴＡを含有するリン酸緩衝塩水中に再懸濁させる。次いで、細胞を再洗浄し、４℃の組織培養培地に戻す。組織培養培地は、ＴｃＩＩ及び放射性標識されたＴｃＩＩ／Ｂ₁₂複合体を含有する。細胞受容体に結合するＴｃＩＩ／Ｂ₁₂の時間経過を、０、１５、３０、６０、１２０及び２４０分において細胞に結合した放射性標識の割合を測定することにより求める。本発明のビタミンＢ₁₂受容体調節剤にさらした試料は、ビタミンＢ 12 中で培養した細胞と比較して、有意に低減されたＴｃＩＩ／Ｂ₁₂複合体結合を示す。トリプシン処理細胞は、細胞内又は細胞上において、標識されたビタミンＢ₁₂ のいずれもの非特異的結合又は取込みを示さなかった。例２０受容体調節剤の生物学的活性のアッセイのための方法この例は、本発明の受容体調節剤の生物学的活性のアッセイするために好適な方法を例証するために供される。０．２×１０⁶細胞／ミリリットルＫ５６２細胞を、１０μＭＭｅＴＨＦ、２．７ｎＭビタミンＢ₁₂及び１％ヒト血清により修飾したＲＰＭＩ培地中で培養した。フォレート(folate)は添加しなかった。１０μＭｄ−ジアミノドデカン付加物（７）を添加し、３７℃で９日間培養した。（７）と同一の条件下に培養した１０μＭビタミンＢ₁₂を対照として用いた。次いで、トリパンブルー排除により、培養物の増殖及び細胞死について別々にアッセイした。この場合はｄ−ジアミノドデカン付加物（７）である受容体調節剤は、受容体調節剤の顕著な生物学的活性を明らかに示している。例２１抗炎症受容体調節剤の合成合成ペプチドｆ−ｍｅｔ−ｌｅｕ−ｐｈｅは、バクテリア細胞壁成分と等価である（Biochem．Soc．Trans．19:1127-9，1991; Agents Actions Suppl．35:3-8 ,1991; Agents Actions Suppl．35:11-6，1991; J Immunol．146:975-80，1991) 。このペプチドは、ペプチドの勾配にそって局所的炎症の位置に走化性により反応し得るところのＰＭＮ上の受容体により認識される。炎症中、受容体発現は、細胞内プールから受容体を可動化することにより劇的に増化させ得る。この上方制御を廃棄するために用いられる非特異的方法も走化性及びおそらく、局所的炎症に伴う抗炎症反応も阻害する(J．Immunol．145:2633-8，1990)。初期炎症の阻害剤として有用な受容体調節剤の合成を以下に記載する。ペプチドf−ｍｅｔ−ｌｅｕ−ｐｈｅ−（ｇｌｙ）₃−ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅは、Me rrifield et al．(Biochemistry 21:5020-31，1982)及びHoughten(Proc.Nat'l． Acad．Sci．(USA)82:5131-35，1985)により記載されるティーバッグ方法論若しくは固相ペプチド合成方法を用いて、又はApplied Biosystems 430 A ペプチド合成機のような商業的に入手可能な自動化された合成機を用いて合成する。ペプチドアミドは、４５％トリフルオロ酢酸−５１％メチレンクロリド−２％エタンジチオール−２％アニソール中で４５分間脱保護し、Tam-Merrifield低−高HF方法(J．P．Tam et al.，J．Am．Chem．Soc．105:6442-55，1983)を用いて４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂から解裂する。次いで、０．１Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ８を用いてペプチドを樹脂から抽出し、凍結乾燥する。粗ペプチドをVydac C-4分析用カラム上の逆相ＨＰＬＣ(The Separation Group，He speria，Calif.)を用いて、１００％アセトニトリル＋０．１％ｖ／ｖトリフルオロアセテートから１００％アセトニトリル＋０．１％トリフルオロアセテートまで０．５〜１．０％／分の直線的勾配を用い精製する。ＨＰＬＣ−精製されたペプチドは、気相加水分解(N．M．Meltzer et al.，Anal．Biochem．160:356-61 ，1987)の後に、アミノ酸分析により分析した(R．L．Heinriksen及びS．C．Mere dith，Anal．Biochem．160:65-74，1984)。精製したペプチドの配列は、商業的に入手可能なシークエンサー上でエドマン分解により確認することができる(R． H．Hewick et al.，J．Biol．Chem．15:7990-8005，1981):。ペプチドアミドは、過剰のメチルアイオダイド（４当量）中の１．３当量のＮａＨＣＯ₃を包含するジメチルホルムアミド（５ｇ／６０ｍＬ）により処理することにより、Ｏ−メチルエステル（すなわちｆ−ｍｅｔ−ｌｅｕ−ｐｈｅ−（ｇｌｙ）₃−ｌｅｕ− Ｏ−Ｍｅ）に変換する。混合物を室温で４０時間アルゴン雰囲気下に撹拌する。もし必要ならば、ペプチドを抽出し、酢酸エチル１５０ｍＬで乾燥する。調節剤の受容体は、ＰＭＮを処理するために用い、（ｆＭＬＰ受容体の発現を増加させるために）ＧＭ−ＣＳＦにより活性化する。ビオチニル化されたｆＭＬＰの結合の損失を、ｆＭＬＰ対ｆ−ＭＬＰ受容体調節剤処理細胞上で比較した。例２２融合タンパク受容体調節剤の合成遺伝子工学による融合タンパクを包含するＥＧＦ受容体調節剤をここに記載する。要約すると、ＥＧＦをコードするＤＮＡ配列のＣ−末端、又はその受容体結合領域を通常の方法（例えば、Ｔ₄ＤＮＡリガーゼを用いて）ＧＧＧスペーサーに対応するＤＮＡ配列に結合させる。次いで、ＥＧＦ−ＧＧＧＤＮＡ配列のＣ −末端を、条件的膜結合ペプチドＫＧＥＡＡＬＡ（ＥＡＬＡ）₄−ＥＡＬＥＡＬＡＡをコードするＤＮＡのＮ−末端に融合させる。代りに、ペプチド−スペーサーＤＮＡ配列は、標準のオリゴヌクレオチド合成方法（例えば、米国特許第４，５００，７０７号及び第４，６６８，７７７号を参照）を用いてインビトロで合成することができる。組替えＥＧＦペプチドＤＮＡ配列は、通常の方法を用いてＥ．ｃｏｌｉ発現ベクター内にクローン化される。Ｅ．ｃｏｌｉ系ＨＢ１０１は、融合された組替えＤＮＡ配列により変換され、培養され、ＥＧＦペプチドを生産する。融合タンパクは、抗ＥＧＦ親和性クロマトグラフィーを含む標準の方法により、転換されたＥ．ｃｏｌｉから精製することができる。融合タンパクは、高塩、カオトロピック剤、又は高い若しくは低いｐＨのような標準の技術を用いて親和性マトリックスから溶出させることができる。ＥＧＦ受容体の損失は、流れ血球計算法(flow cytometry)及びＥＧＦ受容体へのマウスモノクローナル抗体により測定する。本発明の具体的な態様を説明することを目的として記載したが、本発明の精神と範囲から外れることなく各種の修飾をし得ることが以上述べたことから理解されるであろう。すなわち、本発明は、請求の範囲によるものを除いて限定されない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＣＪＡ６１Ｋ 37/02 ＡＤＡＡＣＳＡＣＤＡＣＶＡＣＳＡＤＡＡＣＪＡＤＶＡＣＶ (31)優先権主張番号０８／４０６，１９２ (32)優先日 1995年３月16日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０８／４０６，１９４ (32)優先日 1995年３月16日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＫＲ，ＮＯ，ＮＺ (72)発明者モーガン、エー・チャールズアメリカ合衆国、ワシントン州 98020、エドモンズ、ドリフトウッド・プレイス 803 (72)発明者ウイルバー、ディー・スコットアメリカ合衆国、ワシントン州 98026、エドモンズ、ワンハンドレッドアンドサーティーセブンス・プレイス・エスダブリュ 6015 (72)発明者パサレ、プラディップ・エムアメリカ合衆国、ワシントン州 98133、シアトル、ナンバー301シー、グリーンウッド・アベニュー・エヌ 13407

Claims

【特許請求の範囲】１．経路変更部分に結合したビタミンＢ₁₂分子を有する受容体調節剤。２．該Ｂ₁₂分子が、リンカーにより該経路変更部分に結合する請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。３．該リンカーが、少なくとも４原子の長さである請求の範囲第２項に記載の受容体調節剤。４．該リンカーが、６原子ないし２０原子の長さである請求の範囲第３項に記載の受容体調節剤。５．該リンカーが、１２原子の長さである請求の範囲第４項に記載の受容体調節剤。６．該リンカーが、少なくとも１種のアミノ基を有する請求の範囲第２項に記載の受容体調節剤。７．該リンカーが、スルフヒドリル及びカルボキシルからなる群から選択される基をさらに有する請求の範囲第６項に記載の受容体調節剤。８．該リンカーが、ジアミノアルキル、ジアミノアルキルアリール、ジアミノヘテロアルキル、ジアミノヘテロアルキルアリール及びジアミノアルカンからなる群から選択される請求の範囲第６項に記載の受容体調節剤。９．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_xＮＨ−（ここでｘは、２〜２０）からなる群から選択される請求の範囲第６項に記載の受容体調節剤。１０．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_yＣＯ−（ここでｙは、３〜１２）からなる群から選択される請求の範囲第６項に記載の受容体調節剤。１１．該リンカーが、該ビタミンＢ₁₂上のｂ−結合部位、ｄ−結合部位及びｅ− 結合部位からなる群から選択される結合部位を経由して、該経路変更部分に結合する請求の範囲第２項に記載の受容体調節剤。１２．該リンカーが、ｄ−結合部位及びｅ−結合部位から成る群から選択される結合部位を経由して結合する請求の範囲第１１項に記載の受容体調節剤。１３．該リンカーが、該ビタミンＢ₁₂分子上のリボース結合部位に結合する請求の範囲第２項に記載の受容体調節剤。１４．該リンカーが、三官能性リンカーである請求の範囲第２項に記載の受容体調節剤。１５．ビオチン分子が、該三官能性リンカーの反応部位を経由して結合する請求の範囲第１４項に記載の受容体調節剤。１６．該経路変更部分が、リソソーム向性部分、細胞内ポリマー化部分、ペプチド区分け配列、条件膜結合ペプチド、及び二価又は多価受容体架橋部分膜アンカーから成る群から選択される請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。１７．該受容体調節剤が、調節剤／受容体複合体を向性変更することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。１８．該受容体調節剤が、１又はそれ以上の受容体を架橋することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。１９．該受容体調節剤が、ビタミンＢ₁₂ダイマーである請求の範囲第１８項に記載の受容体調節剤。２０．該受容体調節剤が、細胞膜内において受容体をアンカーすることにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。２１．該受容体調節剤が、調節剤／受容体複合体をエンドソーム内に保持することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。２２．該経路変更部分が、ゲンタマイシン、シソミシン、ネチルミシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ネオマイシン、パロモマイシン、リポスタマイシンブチロシン、及びストレプトマイシンから成る群から選択されるリソソーム向性部分である請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。２３．該経路変更部分が、ジペプチドエステル及びロイシンジッパーから成る群から選択される細胞内ポリマー化部分である請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。２４．該経路変更部分が、小胞体保持ペプチド、ゴルジ保持ペプチド、リソソーム保持ペプチド、細胞特異的保持ペプチド及びクラスリン結合ペプチドから成る群から選択されるペプチド区分け配列である請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。２５．該経路変更部分が、電荷グルタメート、アスパルテート及びヒスチジンから成る群から選択される条件膜結合ペプチドである請求の範囲第１項に記載の受容体調節剤。２６．結合部位ａ〜ｇ、結合部位ｈ、及び結合部位ｉから成る群から独立して選択される結合部位を経由して結合する第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子を有するビタミンＢ₁₂ダイマー。２７．該第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子が、該第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子上のｄ−結合部位及びｅ−結合部位から成る群から独立して選択される結合部位を経由して結合する請求の範囲第２６項に記載のダイマー。２８．該第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子の少なくとも１つが、ビタミンＢ₁₂誘導体である請求の範囲第２６項に記載のダイマー。２９．該第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子が、少なくとも１種のリンカーにより結合される請求の範囲第２６項に記載のダイマー。３０．該リンカーが、少なくとも４原子の長さである請求の範囲第２９項に記載のダイマー。３１．該リンカーが、１０原子ないし５５原子の長さである請求の範囲第３０項に記載のダイマー。３２．該リンカーが、３５原子ないし４５原子の長さである請求の範囲第３１項に記載のダイマー。３３．該リンカーが、少なくとも１種のアミノ基を有する請求の範囲第２９項に記載のダイマー。３４．該リンカーが、スルフヒドリル及びカルボキシルからなる群から選択される基をさらに有する請求の範囲第３３項に記載のダイマー。３５．該リンカーが、ジアミノアルキル、ジアミノアルキルアリール、ジアミノヘテロアルキル、ジアミノヘテロアルキルアリール及びジアミノアルカンからなる群から選択される請求の範囲第３３項に記載のダイマー。３６．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_xＮＨ−（ここでｘは、２〜２０）からなる群から選択される請求の範囲第３３項に記載のダイマー。３７．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_yＣＯ−（ここでｙは、３〜１２）からなる群から選択される請求の範囲第３３項に記載のダイマー。３８．該リンカーが、三官能性リンカーである請求の範囲第２９項に記載のダイマー。３９．ビタミンＢ₁₂受容体を調節するための方法であって、有効量の受容体調節剤をビタミンＢ₁₂受容体が調節されるように温血動物に投与することを包含し、該受容体調節剤が、経路変更部分に結合したビタミンＢ₁₂分子を有する方法。４０．該Ｂ₁₂分子が、リンカーにより該経路変更部分に結合する請求の範囲第３９項に記載の方法。４１．該リンカーが、少なくとも４原子の長さである請求の範囲第４０項に記載の方法。４２．該リンカーが、６原子ないし２０原子の長さである請求の範囲第４１項に記載の方法。４３．該リンカーが、１２原子の長さである請求の範囲第４２項に記載の方法。４４．該リンカーが、少なくとも１種のアミノ基を有する請求の範囲第４０項に記載の方法。４５．該リンカーが、スルフヒドリル及びカルボキシルからなる群から選択される基をさらに有する請求の範囲第４４項に記載の方法。４６．該リンカーが、ジアミノアルキル、ジアミノアルキルアリール、ジアミノヘテロアルキル、ジアミノヘテロアルキルアリール及びジアミノアルカンからなる群から選択される請求の範囲第４４項に記載の方法。４７．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_xＮＨ−（ここでｘは、２〜２０）からなる群から選択される請求の範囲第４４項に記載の方法。４８．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_yＣＯ−（ここでｙは、３〜１２）からなる群から選択される請求の範囲第４４項に記載の方法。４９．該リンカーが、該ビタミンＢ₁₂上のｂ−結合部位、ｄ−結合部位及びｅ− 結合部位からなる群から選択される結合部位を経由して、該経路変更部分に結合する請求の範囲第４０項に記載の方法。５０．該リンカーが、ｄ−結合部位及びｅ−結合部位から成る群から選択される結合部位を経由して結合する請求の範囲第４９項に記載の方法。５１．該リンカーが、該ビタミンＢ₁₂分子上のリボース結合部位に結合する請求の範囲第４０項に記載の方法。５２．該リンカーが、三官能性リンカーである請求の範囲第４０項に記載の方法。５３．該経路変更部分が、リソソーム向性部分、細胞内ポリマー化部分、ペプチド区分け配列、条件膜結合ペプチド、及び二価又は多価受容体架橋部分膜アンカーから成る群から選択される請求の範囲第３９項に記載の方法。５４．該受容体調節剤が、調節剤／受容体複合体を向性変更することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第３９項に記載の方法。５５．該受容体調節剤が、１又はそれ以上の受容体を架橋することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第３９項に記載の方法。５６．該受容体調節剤が、ビタミンＢ₁₂ダイマーである請求の範囲第５５項に記載の方法。５７．該受容体調節剤が、細胞膜内において受容体をアンカーすることにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第３９項に記載の方法。５８．該受容体調節剤が、調節剤／受容体複合体をエンドソーム内に保持することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第３９項に記載の方法。５９．該経路変更部分が、ゲンタマイシン、シソミシン、ネチルミシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ネオマイシン、パロモマイシン、リポスタマイシンブチロシン、及びストレプトマイシンから成る群から選択されるリソソーム向性部分である請求の範囲第３９項に記載の方法。６０．該経路変更部分が、ジペプチドエステル及びロイシンジッパーから成る群から選択される細胞内ポリマー化部分である請求の範囲第３９項に記載の方法。６１．該経路変更部分が、小胞体保持ペプチド、ゴルジ保持ペプチド、リソソーム保持ペプチド、細胞特異的保持ペプチド及びクラスリン結合ペプチドから成る群から選択されるペプチド区分け配列である請求の範囲第３９項に記載の方法。６２．該経路変更部分が、電荷グルタメート、アスパルテート及びヒスチジンから成る群から選択される条件膜結合ペプチドである請求の範囲第５２項に記載の方法。６３．該ビタミンＢ₁₂ダイマーが、結合部位ａ〜ｇ、結合部位ｈ、及び結合部位ｉから成る群から独立して選択される結合部位を経由して結合する第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子を有する請求の範囲第５６項に記載の方法。６４．該第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子が、該第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子上のｄ−結合部位及びｅ−結合部位から成る群から独立して選択される結合部位を経由して結合する請求の範囲第６３項に記載の方法。６５．該第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子の少なくとも１つが、ビタミンＢ₁₂誘導体である請求の範囲第６３項に記載の方法。６６．該第１及び第２のビタミンＢ₁₂分子が、少なくとも１種のリンカーにより結合される請求の範囲第６５項に記載の方法。６７．該リンカーが、少なくとも４原子の長さである請求の範囲第６６項に記載の方法。６８．該リンカーが、１０原子ないし５５原子の長さである請求の範囲第６７項に記載の方法。６９．該リンカーが、３５原子ないし４５原子の長さである請求の範囲第６８項に記載の方法。７０．該リンカーが、少なくとも１種のアミノ基を有する請求の範囲第６６項に記載のダイマー。７１．該リンカーが、スルフヒドリル及びカルボキシルからなる群から選択される基をさらに有する請求の範囲第７０項に記載のダイマー。７２．該リンカーが、ジアミノアルキル、ジアミノアルキルアリール、ジアミノヘテロアルキル、ジアミノヘテロアルキルアリール及びジアミノアルカンからなる群から選択される請求の範囲第７０項に記載のダイマー。７３．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_xＮＨ−（ここでｘは、２〜２０）からなる群から選択される請求の範囲第７０項に記載のダイマー。７４．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_yＣＯ−（ここでｙは、３〜１２）からなる群から選択される請求の範囲第７０項に記載のダイマー。７５．該リンカーが、三官能性である請求の範囲第６６項に記載のダイマー。７６．該三官能性リンカーの反応部位が、ビオチン分子に結合する請求の範囲第７５項に記載の方法。７７．該ビタミンＢ₁₂受容体調節が、腫瘍性疾患を治療するために十分なものである請求の範囲第３９項に記載の方法。７８．該腫瘍性疾患が、白血病、肉腫、骨髄腫、癌、神経腫、黒色腫、肺、肝臓、胸、脳、結腸、頚、前立腺の癌、ホジキン病、及び非ホジキンリンパ腫から成る群から選択される請求の範囲第７７項に記載の方法。７９．細胞表面受容体に関連する生物学的反応を制御するための方法であって、生物学的反応が制御されるように、有効量の受容体変調剤を温血動物に投与することを有する方法。８０．ビオチン分子に結合したビタミンＢ₁₂分子を有するビタミン₁₂誘導体。８１．該ビタミンＢ₁₂分子が、シアノコバラミンである請求の範囲第８０項に記載のビタミン₁₂誘導体。８２．該ビタミンＢ₁₂分子が、リンカーにより該ビオチン分子に結合する請求の範囲第８０項に記載のビタミン₁₂誘導体。８３．該リンカーが、少なくとも４原子の長さである請求の範囲第８２項に記載のビタミン₁₂誘導体。８４．該リンカーが、６原子ないし２０原子の長さである請求の範囲第８３項に記載のビタミン₁₂誘導体。８５．該リンカーが、１２原子の長さである請求の範囲第８４項に記載のビタミン₁₂誘導体。８６．該リンカーが、少なくとも１種のアミノ基を有する請求の範囲第８２項に記載のビタミン₁₂誘導体。８７．該リンカーが、スルフヒドリル及びカルボキシルからなる群から選択される基をさらに有する請求の範囲第８６項に記載のビタミン₁₂誘導体。８８．該リンカーが、ジアミノアルキル、ジアミノアルキルアリール、ジアミノヘテロアルキル、ジアミノヘテロアルキルアリール及びジアミノアルカンからなる群から選択される請求の範囲第８６項に記載のビタミン₁₂誘導体。８９．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_xＮＨ−（ここでｘは、２〜２０）からなる群から選択される請求の範囲第８６項に記載のビタミン₁₂誘導体。９０．該リンカーが、−ＮＨ（ＣＨ₂）_yＣＯ−（ここでｙは、３〜１２）からなる群から選択される請求の範囲第８７項に記載のビタミン₁₂誘導体。９１．該リンカーが、該ビタミンＢ₁₂上のｂ−結合部位、ｄ−結合部位及びｅ− 結合部位からなる群から選択される結合部位を経由して、該経路変更部分に結合する請求の範囲第８２項に記載のビタミン₁₂誘導体。９２．該リンカーが、該ビタミンＢ₁₂分子上のｄ−結合部位及びｅ−結合部位から成る群から選択される結合部位を経由して結合する請求の範囲第９１項に記載のビタミン₁₂誘導体。９３．該リンカーが、該ビタミンＢ₁₂分子上のリボース結合部位に結合する請求の範囲第８２項に記載のビタミン₁₂誘導体。９４．該リンカーが、三官能性リンカーである請求の範囲第８２項に記載の受容体調節剤。９５．該ビオチンが、経路変更部分にさらに結合する請求の範囲第８０項に記載のビタミン₁₂誘導体。９６．該ビオチンが、ビオチン結合タンパクにより該経路変更部分に結合する請求の範囲第９５項に記載のビタミン₁₂誘導体。９７．該ビオチン結合タンパクが、アビジン及びストレプトアビジンから成る群から選択される請求の範囲第９６項に記載のビタミン₁₂誘導体。９８．トランスコバラミンＩＩに結合した、請求の範囲第８０項ないし９７項のいずれか１項のビタミン₁₂誘導体を有する複合体。９９．請求の範囲第８０項ないし９７項のいずれか１項のビタミン₁₂誘導体を用いて、試料中のトランスコバラミンの存在又は量を測定するためのキット。１００．請求の範囲第８０項ないし第９７項のいずれか１項のビタミン₁₂誘導体と、好適な薬学的担体又は希釈剤とを有する薬学的組成物。１０１．経路変更部分に結合したターゲッティング部分を有する受容体変調剤。１０２．該経路変更部分が、リソソーム向性部分、細胞内ポリマー化部分、ペプチド区分け配列、条件膜結合ペプチド、及び二価又は多価受容体架橋部分から成る群から選択される請求の範囲第１０１項に記載の受容体調節剤。１０３．該ターゲティング部分が、タンパク、ペプチド、及び非タンパク分子から成る群から選択される請求の範囲第１０１項に記載の受容体調節剤。１０４．該受容体調節剤が、調節剤／受容体複合体を向性変更することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第１０１項に記載の受容体調節剤。１０５．該受容体調節剤が、１又はそれ以上の細胞表面受容体を架橋することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第１０１項に記載の受容体調節剤。１０６．該受容体調節剤が、細胞膜内において細胞表面受容体をアンカーすることにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第１０１項に記載の受容体調節剤。１０７．該受容体調節剤が、受容体をエンドソーム内に保持することにより、受容体輸送経路に影響を与える請求の範囲第１０１項に記載の受容体調節剤。１０８．該リソソーム向性部分が、ゲンタマイシン、シソミシン、ネチルミシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ネオマイシン、パロモマイシン、リポスタマイシンブチロシン、及びストレプトマイシンから成る群から選択される請求の範囲第１０２項に記載の受容体調節剤。１０９．該細胞内ポリマー化部分が、ジペプチドエステル及びロイシンジッパーから成る群から選択される請求の範囲第１０２項に記載の受容体調節剤。１１０．該ペプチド区分け配列が、小胞体保持ペプチド、ゴルジ保持ペプチド、リソソーム保持ペプチド、細胞特異的保持ペプチド及びクラスリン結合ペプチドから成る群から選択される請求の範囲第１０２項に記載の受容体調節剤。１１１．該条件膜結合ペプチドが、電荷グルタメート、アスパルテート及びヒスチジンから成る群から選択される請求の範囲第１０２項に記載の受容体調節剤。