RU2139732C1 - Амплификация системы поглощения витамина b12 при помощи полимеров - Google Patents

Амплификация системы поглощения витамина b12 при помощи полимеров Download PDF

Info

Publication number
RU2139732C1
RU2139732C1 RU95122664A RU95122664A RU2139732C1 RU 2139732 C1 RU2139732 C1 RU 2139732C1 RU 95122664 A RU95122664 A RU 95122664A RU 95122664 A RU95122664 A RU 95122664A RU 2139732 C1 RU2139732 C1 RU 2139732C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
complex
polymer
lys
bis
pyridyldithio
Prior art date
Application number
RU95122664A
Other languages
English (en)
Other versions
RU95122664A (ru
Inventor
Джон Расселл-Джонс Грегори
Уилльям Вествуд Стивен
Рат Гоулд Алисон
Винсент МакАйнерни Бернард
Original Assignee
Биотек Аустралиа Пти, Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Биотек Аустралиа Пти, Лимитед filed Critical Биотек Аустралиа Пти, Лимитед
Publication of RU95122664A publication Critical patent/RU95122664A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2139732C1 publication Critical patent/RU2139732C1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent

Abstract

Изобретение касается пероральной доставки пептидных и белковых фармацевтических средств с применением системы поглощения витамина В12(VB12), причем доставка усиливается при помощи полимеров. Более конкретно, изобретение касается комплекса, имеющего формулу (У - Q)n - Р - (Q' - А)m, где У представляет собой носитель, который будет связываться с природным внутренним фактором (IF), выбранный из витамина В12 или его аналога, n-обозначает коэффициент молярного замещения У в комплексе и представляет собой число от 1,0 до приблизительно 10; Р представляет собой фармацевтически приемлемый полимер; А представляет собой фармацевтически активное вещество; m обозначает коэффициент молярного замещения А в комплексе и представляет собой число от более 1,0 до приблизительно 1000. Q и Q' независимо один от другого представляют собой ковалентную связь или спейсерное соединение, соединяющее У, Р и А ковалентными связями. Изобретения обеспечивают пероральную доставку пептидных и белковых лекарственных средств. 2с. и 36 з.п.ф-лы.

Description

Данное изобретение касается пероральной доставки пептидных и белковых фармацевтических средств при помощи системы поглощения витамина B12 (VB12). Более конкретно, изобретение касается амплификации системы поглощения при помощи полимеров.
Пероральный путь введения пептидов, таких как LHRH и его аналоги, или белков, таких как колониестимулирующий фактор гранулоцитов (GCSF), эритропоэтин (EPO) и инсулин, в качестве фармацевтических средств в лечении системных (относящихся ко всему организму) состояний в прошлом был малоуспешным. В общих чертах, количество пептида, необходимое для успешного введения, в 100 - 1000 раз превышало дозу, необходимую для парентерального введения, что делало введение этих агентов пероральным способом непозволительно дорогим. Существуют две основные причины отсутствия успеха. Во-первых, кишечная среда обладает высокой степенью протеолитической активности, которая быстро разрушает большинство пептидов. Во-вторых, в то время как имеется хорошо установленные механизмы поглощения для отдельных аминокислот и дипептидов, нет общего механизма для полипептидов, которые должны транспортироваться через эпителий слизистой оболочки в кровообращение. Скорее эта мембрана предназначена служить общим барьером, препятствующим поглощению многочисленных чужеродных белков, встречающихся в этой среде. Поэтому, хотя пептид может быть модифицирован, чтобы противостоять ферментативной преграде, встречаемой им в кишечнике, такая модификация малополезна, если пептид не может впоследствии пересечь барьер слизистой оболочки и войти в кровообращение.
Однако недавняя работа автора данного изобретения, описанная в патентной заявке PCT/AU 86/00299 (WO 87/02251), обеспечила способ преодоления барьера слизистой оболочки. Этот способ использует преимущества опосредованного природным внутренним фактором (1F) механизма поглощения витамина B12 (VB12). B12 является природно встречающейся пригодной для употребления в пищу молекулой, которая активно поглощается из кишечника. Во время этого процесса она сначала связывается с внутренним фактором (1F) в верхней части тонкой кишки. Комплекс [VB12-1F] спускается в нижнюю часть тонкой кишки и связывается с рецептором 1F, расположенном на поверхности подвздошного эпителия. Затем весь комплекс [VB12-1F-рецептор] интериализуется посредством опосредованного рецептором эндоцитоза и спустя некоторое время VB12 появляется в сыворотке.
Заявка PCT/AU 86/00299 (WO 87/02251) описывает способы химической модификации VB12 для обеспечения подходящих функциональных групп для конъюгирования VB12 с различными лекарственными средствами и пептидными/белковыми фармацевтическими средствами. При пероральном введении комплекса [VB-фармацевтическое средство] можно использовать опосредованную природным 1F систему поглощения VB12 для доставки фармацевтического средства в кровообращение.
Одним из основных ограничений этого общего механизма поглощения VB12 является то, что доза фармацевтического препарата, которая может доставляться с пищей реципиенту, является низкой. Эта доза прямо пропорциональна количеству VB12, которое может поглощаться при одном кормлении. Поэтому в случае мышей и крыс можно доставить только приблизительно 20 - 40 нМолей фармацевтического препарата на дозу, тогда как для человека количество фармацевтического препарата, которое может быть доставлено, составляет приблизительно 1 нМоль. Хотя этот уровень поглощения достаточен для доставки фармацевтически активных доз некоторых веществ, таких как антагонисты LHRH, кальцитонин и EPO, он недостаточен для доставки белков, таких как GCSF и инсулин, в количествах, достаточно больших для обеспечения фармакологического эффекта. Поэтому желательно усилить (амплифицировать) способность поглощения системы транспорта VB12 по меньшей мере в 10 раз.
Для введения активных агентов были предложены полимеры. Известны полимеры с боковыми группами, соединенными со скелетом через спейсеры, содержащие ароматические диазосвязи. Многие из этих полимеров были получены специально для высвобождения боковых групп после расщепления диазосвязи азоредуктазами, выделяемыми бактериями в толстой кишке. Однако оказалось, что эти полимеры непригодны для доставки лекарственных средств всему организму после перорального введения, т.к. комплексы полимера с лекарственным средством не адсорбируются в интактном виде из кишечного тракта, а скорее доставляют их лекарственное средство к толстой кишке после расщепления диазо-связи ферментами толстой кишки. Небольшие количества высвобождающегося лекарственного средства могут в конечном счете достичь кровообращения, но это количество, достигающее кровотока, как было обнаружено, дает мало практической пользы.
Были также предложены полимеры, с которыми конъюгированы различные цитотоксические лекарственные средства. Эти полимеры направлялись к раковым клеткам при помощи специфических антител или сахарных частей молекул. При достижении комплексом лекарственное средство-полимер ткани-мишени комплекс подвергается эндоцитозу клеткой-мишенью и присоединенное лекарственное средство высвобождается под действием лизосомных ферментов или путем отщепления связанного дисульфидной связью лекарственного средства внутриклеточным глутатионом. Однако пероральная доставка таких комплексов не приводила к значительному поглощению комплекса лекарственного средства с полимером из просвета кишечника в кровообращение.
Краткое изложение сущности изобретения
Целью данного изобретения является описание новой серии конъюгатов лекарственное средство/фармацевтический препарат-полимер, с которыми были конъюгированы молекула VB12 или ее аналог или производное. Эти конъюгаты VB12 - полимер-лекарственное средство пригодны для пероральной доставки, т.к. они могут использовать упомянутую выше систему транспорта VB12 для поглощения и имеют дополнительное преимущество увеличения количества фармацевтического агента, которое может быть доставлено через механизм поглощения VB12.
Комплекс имеет общую формулу
(V - Q)n - P - (Q' - A)m
в которой V представляет собой носитель, который будет связываться с природным внутренним фактором (1F), выбранный из витамина B или его аналога;
n обозначает коэффициент молярного замещения V в комплексе и представляет собой число от 1,0 до приблизительно 10;
P представляет собой фармацевтически приемлемый полимер;
A представляет собой фармацевтически активное вещество;
m обозначает коэффициент молярного замещения A в комплексе и представляет собой число от более 1,0 до приблизительно 1000.
Q и Q' независимо один от другого обозначают ковалентную связь или спейсерное соединение, связывающее V, P и A ковалентными связями.
Описание предпочтительных вариантов
Полимер P данного изобретения может быть любым фармацевтически приемлемым полимером. Этот полимер способен присоединяться по меньшей мере к одной молекуле носителя и по меньшей мере к одной, но предпочтительно ко множеству молекул активных веществ.
Полимер P может быть биодеградируемым полимером, таким как биодеградируемый углеводный полимер или полимер аминокислот. Или он может быть не деградируемым биологически полимером и в этом случае он предпочтительно имеет присоединенные биодеградируемые боковые цепи, делающие возможной ковалентную связь с активным веществом.
Подходящими полимерами для замещения витамином VB12 и модификации в соответствии с данным изобретением являются поли[N-(2-гидроксипропил)-метакриламид] , декстран, хондроитансульфат, водорастворимые полиуретаны, образованные ковалентным соединением PEG с лизином, поли(глутаминовая кислота), поли(гидроксипропил-глутамин) и полипептиды с разветвленной цепью, образованные двойной модификацией α и ε -групп лизина во время синтеза пептида. Такие полимеры могут иметь множество аминоконцов, с которыми могут быть конъюгированы многочисленные фармацевтические препараты или лекарственные средства. Эти полимеры могут быть также образованы с множественными цистеинами для обеспечения свободных тиолов или множественными глутаматами, или аспартатами для обеспечения свободных карбоксилов для конъюгирования с применением подходящих карбодиимидов. Полимер может также содержать множественные гистидины или тирозины для конъюгирования. Если полимер является полипептидом с разветвленной цепью, он может быть модифицирован дополнительно для обеспечения множества функциональных групп для соединения с активным веществом.
Некоторыми примерами подходящих полимеров являются полисахариды, в том числе декстран, инулин, целлюлоза, крахмал и их производные; хондроитансульфат, поли[N-(2-гидроксипропил)-метакриламид] и их производные, сополимер стирола и малеинового ангидрида, сополимер дивинилового эфира и малеинового ангидрида, полилизин, поли(глутаминовая кислота), поли(гидроксипропилглутамин), поли(молочная кислота), водорастворимые полиуретаны, образованные ковалентным соединением PEG с лизином или другими аминокислотами и полипептидами с разветвленной цепью.
Если полимер является полипептидом с разветвленной цепью, то он может в одной из предпочтительных форм иметь общую последовательность:
(R 5 16 -Lys8-R 4 8 -Lys4-R 3 4 -Lys2-R 2 2 -Lys)n-R1-COOH,
где n обозначает 1 - 17, R1 обозначает любую последовательность из 1 - 10 аминокислот, R2, R3, R4 и R5, каждый независимо, представляет собой любую последовательность из 0 - 6 аминокислот, при условии, что не все R2, R3, R4 и R5 представляют собой последовательность из 0 аминокислот, и где полимер может заканчиваться при любом положении внутри скобок. Некоторые примеры полимеров, имеющих эту общую формулу, представляют собой полипептиды с последовательностью (Gly4-Lys2-Ser2-Lys)5-Ala-COOH и (Gly16-Lis8-Lys4-His4-Glu4- Lys2-Lys)-Gly5-Cys-COOH, например. Концевые аминогруппы на концевых аминокислотах могут быть дополнительно химически модифицированы, если желательно, для связывания с активными веществами.
Носитель V получают из витамина B12 (VB12) или аналога витамина B12, который будет связываться с природным внутренним фактором (1F). Носитель может быть также химически модифицирован для связывания с полимером.
Подходящими аналогами VB12 для дериватизации перед конъюгированием с полимером являются любой вариант или производное VB12 (цианокобаламина), которые обладают связывающей активностью в отношении внутреннего фактора. Предпочтительными аналогами VB12 являются также аквокобаламин, аденозилкобаламин, метилкобаламин, гидроксикобаламин, цианокобаламин, карбаналид и 5-метоксибензилцианокобаламин [(5-Meo)CN-Cbl] , а также дездиметил-, моноэтиламидные и метиламидные аналоги всех перечисленных выше соединений. Другие аналоги включают в себя все алкилкобаламины, в которых алкильная цепь соединена с ядром коррина прямой CoC ковалентной связью. Другие аналоги включают в себя хлоркобаламин, сульфитокобаламин, нитрокобаламин, тиоцианатокобаламин, производные бензимидазолцианокобаламина, такие как 5,6-дихлорбензимидазол, 5-гидркосибензимидазол, триметилбензимидазол, а также аденозилцианокобаламин [(Ade)CN-Cbl] , лактон кобаламина, лактам кобаламина и анилидные, этиламидные производные VB12 и производные VB12 с монокарбоновой и дикарбоновой кислотой или их аналоги.
Предпочтительные производные VB12 также включают производные моно-, ди- и трикарбоновых кислот или пропионамидные производные VB12. Носители могут также включать аналоги VB12, в которых кобальт заменен цинком или никелем. Корриновое кольцо VB12 или его аналогов может быть замещено любым заместителем, который не влияет на его связывание с 1F, и такие производные VB12 или его аналоги являются частью этого изобретения. Другие производные VB12 или его аналоги, имеющие функциональную группу, способную реагировать со спейсерным соединением, также являются частью этого изобретения. Другие производные и аналоги витамина B12 обсуждаются в Schneider, Z, и Stroinski, A.: Comprehensive B12; (Walter De Gruyter; NY; 1987), включенной здесь в виде ссылки.
Фармацевтически активное вещество A представляет собой любое подходящее фармацевтическое вещество, в частности биологически активный полипептид или часть этого пептида. Например, оно может быть гормоном, фактором роста, интерлейкином, цитокинами, лимфокинами или подобными веществами. Некоторые предпочтительные активные вещества представляют собой GCSF, EPO, LHRH, интерферон или биологически активные аналоги, части или производные этих веществ, кальцитонин, TRH, вазопрессин, окситоцин, инсулин, гормон роста, соматостатин, GM-CSF, SCGF (фактор роста стволовых клеток), CGRP или биологически активные аналоги, части или производные этих веществ.
Примеры типичных веществ для доставки согласно изобретению включают активные вещества, такие как гормоны и биоактивные пептиды (и их аналоги и производные), такие как LHRH, вазопрессин, окситоцин, инсулин, тестостерон, интерферон, соматостатин, эритропоэтин, колониестимулирующпе факторы (GCSF, GM-CSF, CSF), PMSG, HCG, ингибин, Pa1-2; терапевтические агенты, такие как неомицин, салбутамол, пириметамин, пенициллин G, метициллин, карбенициллин, петидин, ксилазин, кетамин HCl, мефенезин, GABA, железо-декстран, нуклеотидные аналоги или рибозим.
Дальнейшие примеры активных веществ включают полипептиды, такие как инсулин, саматостатин, производные соматостатина (U. S. Pat. NN 4 087 390, 4 093 575, 4 100 117 и 4 253 398), гормоны роста, пролактин, адренокортикотропный гормон (ACTH), меланоциты стимулирующий гормон (MSH), гормон высвобождения тиреоидного гормона (TRH), его соли и их производные (U.S. Pat. NN 3 957 247 и 4 100 152), тиреотропный гормон (TSH), лютеинизирующий гормон (LH), фолликулостимулирующий гормон (FSH), вазопрессин, производные вазопрессина [десмопрессин [Folia Endocrinologica Japonica 54, N 5, p. 676 - 691 (1978)] ], окситоцин, кальцитонин, паратиреоидный гормон, глюкагон, гастрин, секретин, панкреозимин, холецистокинин-ангиотензин, лактоген плаценты человека, хорионический гонадотропин человека (HCG), энкефалин, производные энкефалина [U. S. Pat. N 4 277 394, EP заявка Публикация N 31567], эндорфин, киоторфин, интерфероны (α,β,γ), интерлейкины (I, II и III), туфтсин, тимопоэтин, тимозин, тимостимулин, гуморальный фактор вилочковой железы (TFH), сывороточный фактор вилочковой железы (FTS) и его производные (U.S. Pat. N 4 229 438) и другие факторы вилочковой железы [Medicin in Progress 125, N 10, p. 835 - 843 (1983)], фактор некроза опухолей (TNF), колониестимулирующий фактор (CSF), мотилин, динорфин, бомбезин, нейротензин, церулеин, брадикинин, урокиназа, аспарагиназа, калликреин, аналог и антагонист вещества P, фактор роста нервов, факторы свертывания крови VIII и IX, хлорид лизозима, полимиксин B, колистин, грамицидин, бацитрацин, стимулирующие пептиды белкового синтеза (British patent N 8232082), желудочный ингибиторный полипептид (GIP), вазоактивный кишечный полипептид (VIP), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), фактор гормона роста (GRF, соматокринин), костный морфогенетический белок (BMP), эпидермальный фактор роста (EGF) и т.д.
Примеры противоопухолевых агентов включают гидрохлорид блеомицина, метотрексат, актиномицин D, митомицин C, сульфат винбластина, сульфат винкристина, гидрохлорид даунорубицина, адриамицин, неокарциностатин, цитозинарабинозид, фторурацил, тетрагидрофурил-5-фторурацил, крестин, пицибанил, лентинан, левамизол, бестатин, азимексон, глицирризин, поли 1:C, поли A:U и поли 1:CLC.
Примеры антибиотиков включают гентамицин, дибекацин, канендомицин, ливидомицин, тобрамицин, амикацин, фрадиомицин, сизомицин, гидрохлорид тетрациклина, гидрохлорид окситетрациклина, политетрациклин, гидрохлорид доксициклина, ампициллин, пиперациллин, тикарциллин, цефалотин, цефалоридин, цефотиам, цефсулодин, цефменоксим, цефметазол, цефазолин, цефотаксим, цефоперазон, цефтизоксим, моксолактам, латамоксеф, тиенамицин, сульфазецин и азтреонам.
Вышеупомянутые жаропонижающие, аналгезирующие и противовоспалительные лекарственные средства включают, например, салицилат натрия, сульпурин, флуфенамат натрия, диклофенак натрия, индаметацин натрия, гидрохлорид морфина, гидрохлорид петидина, тартрат леворфанола и оксиморфон. Примерами противокашлевых и отхаркивающих средств являются гидрохлорид эфедрина, гидрохлорид метилэфедрина, гидрохлорид носкапина, фосфат кодеина, фосфат дигидрокодеина, гидрохлорид аллокламида, гидрохлорид хлофедианола, гидрохлорид пикоперидамина, клоперастин, гидрохлорид протокилола, гидрохлорид изопротеренола, сульфат салбутамола и сульфат тербуталина. Примерами седативных средств являются гидрохлорид хлорпромазина, прохлорперазин, трифторперазин, сульфат атропина и метилбромид скополамина. Миорелаксанты включают в себя, среди прочих, метансульфонат придинола, хлорид тубокурарина и бромид панкурония. Средства против эпилепсии, например, включают фенитоин натрия, этосуксимид, ацетазоламид натрия и гидрохлорид хлордиазепоксида. Примеры противоязвенных лекарственных средств включают метоклопрамид и моногидрохлорид L-гистидина. Примерами антидепрессантов являются имипрамин, кломипрамин, ноксиптилин и сульфатфенелзина. Антиаллергические лекарственные средства включают, среди прочих, гидрохлорид дифенгидрамина, малеат хлорфенирамина, гидрохлорид трипеленамина, гидрохлорид метдилазина, гидрохлорид клемизола, гидрохлорид дифенилпиралина и гидрохлорид метоксифенамина. Кардиотонические средства включают, среди прочих, транс-п-оксокамфору, теофиллол, аминофиллин и гидрохлорид этилефрина. Средства против аритмии включают в себя, например, гидрохлорид пропанолола, гидрохлорид алпренолола, гидрохлорид буфетолола и гидрохлорид оксипренолола. Сосудорасширяющие средства, среди прочих, включают гидрохлорид оксифедрина, гидрохлорид дитиазема, гидрохлорид толазолина, гексобендин и сульфат баметана. Гопотензивные диуретические средства включают, среди прочих, бромид гексометония, пентолиниум, гидрохлорид мекамламина, гидрохлорид экаразина и гидрохлорид клонидина. Примеры антидиабетических средств включают глимидин натрия, гидрохлорид фенформина, гидрохлорид буформина и метформин. Противосвертывающие средства включают, среди прочих, гепарин натрия и цитрат натрия.
Кровоостанавливающие агенты включают, среди прочих, тромбопластин, тромбин, менадион-бисульфит натрия, ацетоменафтон, ε -аминокапроновую кислоту, транэкзамовую кислоту, карбазохром-сульфонат натрия и адренохром-моноаминогуанидинметансульфонат. К противотуберкулезным средствам относятся изиниазид, этамбутол и п-аминосалицилат натрия. Примерами гормональных лекарственных средств являются сукцинат преднизолона, преднизолон-фосфат натрия, дексаметазон-сульфат натрия, бетаметазонфосфат натрия, фосфат гексестрола, ацетат гексестрола и метимазол. Антинаркотическими средствами являются, среди прочих, тартрат леваллорфана, гидрохлорид налорфина и гидрохлорид налоксона.
Если активное вещество представляет собой GCSF, оно может быть соединено с полимером при помощи спейсерного соединения, содержащего дисульфидную связь. В этом случае дисульфидная связь может быть образована со скрытой тиоловой группой цистеина при положении 17 в полипептидной цепи GCSF.
Если активное вещество представляет собой аналог LHRH, оно может быть ANTIDE или аналогом ANTIDE. ANTIDE представляет собой линейный декапептид, содержащий ряд неприродных и/или D-аминокислот в дополнение к трем L-аминокислотным остаткам. Его N-конец ацетилирован, а C-конец амидирован. ANTIDE имеет следующую последовательность:
N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys(Nic), D-Lys(Nic), Leu, Lys(iPr), Pro, D-Ala-NH2
[Nal(2) обозначает 3-(2-нафтил)аланин: Phe(p-Cl) обозначает 3-(4-хлорфенил)аланин; Pal(3) обозначает 3-(3-пиридил)аланин; Lys(Nic) обозначает N-никотиноиллизин; Lys-(iPr) обозначает N-изопропиллизин].
Для ANTIDE-1 остаток 6 является D-Lys, а не D-Lys(Nic); для ANTIDE-2 остаток 5 является Lys, а не Lys(Nic) и для ANTIDE-3 остаток 8 является Lys, а не Lys(iPr).
Если активное вещество представляет собой аналог LHRH, оно может быть гистреллином, D-Lis6-LHRH, D-Lys6-LHRH-этиламидом или аналогом этих веществ.
Спейсерные соединения Q и Q' являются необязательными. Когда они отсутствуют, носитель V и/или активное вещество A соединены с полимером P прямой ковалентной связью. Спейсерные соединения вводят для улучшения аффинности внутреннего фактора в отношении VB12-комплекса или для преодоления проблем в связывании носителя, V и/или активного вещества A, возникающих вследствие неблагоприятных стерических взаимодействий между V и/или A. с полимером P или для увеличения биоактивности A в комплексе. Спейсерные соединения могут также действовать в качестве связывающих агентов, будучи бифункциональными соединениями с выбранными функциональными группами на каждом конце, пригодными для реакции с подходящими функциональными группами, расположенными на полимере, а также молекуле-носителе VB и/или на фармацевтически активных веществах.
Спейсерное соединение Q и/или Q' предпочтительно содержит иногда замещенные насыщенные или ненасыщенные, разветвленные или линейные C1-50-алкилен, циклоалкилен или ароматическую группу, в которых один или несколько углеродов внутри цепи заменены N, O или S, и необязательные заместители выбраны, например, из карбонила, карбоксигруппы, аминогруппы и других групп.
Подходящие удлиненные спейсеры для конъюгирования фармацевтического препарата (A) или носителя (V) с полимерным матриксом (P) включают: дисукцинимидилсуберат (DSS), бис(сульфосукцинимидил)суберат (BSS), этиленгликоль-бис(сукцинимидилкцинат (EGS), этиленгликоль-бис(сульфосукцинимидилсукцинат) (sulfo-EBS), п-аминофенилуксусную кислоту, дитио-бис-(сукцинимидилпропионат) (DSP), 3,3'-дитио-бис-(сульфосукцинимидилпропионат) (DTSSP), дисукцинимидилтартрат (DST), дисульфосукцинимидилтартрат (sulfo-DST), бис-[-2(сукцинимидооксикарбонилокси)-этилен]сульфон (BSOCOES), бис[2-(сульфосукцинимидооксикарбонилокси)-этилен]сульфон (sulfo-ESOCOES), диметиладипимидат•2HCl (DMA), диметилпимелимидат•2HCl (DMP), диметилсуберимидат•2HCl (DMS).
Подходящими сшивающими агентами для использования в получении тиолрасщепляемых биодеградируемых спейсеров или линкеров включают в себя N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), иминотиолан, сульфосукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)-пропионамид] -гексаноат (sulfo-LC-SPDP), сукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)-пропионамидо] -гексаноат (LC-SPDP), сульфосукцинимидил-6-[ α -метил-(2-пиридилдитио)-толуамидо] - гексаноат (sulfo-LC-SMPT), 1,4-ди[3'-(2'-пиридилдитио)пропионамидо] - бутан (DPDPB), 4-сукцинимидилоксикарбонил- α -метил- α -(2- пиридилдитио)-толуол (SMPT), диметил-3,3'-дитиобиспропионимидат•2HCl (DTBP).
В формуле n средний коэффициент молярного замещения V в комплексе является числом от 1,0 до приблизительно 10. Предпочтительно n находится между 1,0 и 1,2. Идеально полимер соединен с одной молекулой-носителем V, но поскольку полимер имеет неопределенный размер и/или неопределенную структуру, число n обозначает статистическую среднюю величину. Также в формуле m средний коэффициент молярного замещения A в комплексе, обозначает число от не менее 1 до приблизительно 1000. Для усиления поглощения активного ингредиента m должно быть как можно большим, идеально между 10 и 100, m представляет собой также статистическую среднюю величину, и различные количества активных молекул (A) будут связываться с полимером вследствие варьирования в структуре полимера P.
Данное изобретение имеет дело с комплексом, содержащим более одного активного вещества, соединенного с полимером, который связан по меньшей мере с одной молекулой-носителем, такой как VB12 или его аналогом. При этом способность подвергаться реакциям связывания, необходимым для поглощения и транспорта VB12 в позвоночном хозяине, и активность активного вещества в основном сохраняется после конъюгирования или после биологического высвобождения активного вещества из полимера. Комплекс, имеющий общую формулу
(V - Q)n - P - (Q' - A)m, где V, Q, P, Q', A, n и m имеют указанные ранее значения, получают одним из следующих способов:
a) реакция A с P с образованием промежуточного комплекса с последующей реакцией промежуточного комплекса с V;
b) реакция V с P с образованием промежуточного комплекса с последующей реакцией промежуточного комплекса с A;
c) способ стадий a) или b), в котором один или несколько V, P или A модифицированы для обеспечения по меньшей мере одной функциональной группы, способной образовать химическую связь, перед соединением с другими реагентами; или
d) реакция одного или двух из V, P или A с Q и/или Q' перед соединением с другими реагентами.
В общих чертах, способ может предусматривать одну из следующих стадий:
a) реакция активного вещества с полимером с образованием комплекса;
b) химическая модификация активного вещества для обеспечения по меньшей мере одной функциональной группы, способной образовать химическую связь, и реакция активного вещества и полимера с образованием комплекса;
c) химическая модификация носителя для обеспечения по меньшей мере одной функциональной группы, способной образовать химическую связь, и реакция активного вещества и полимера с образованием комплекса;
d) химическая модификация активного вещества и полимера для обеспечения функциональных групп, способных образовать химическую связь, и реакция активного вещества и полимера с образованием комплекса;
e) реакция активного вещества по меньшей мере с одним сшивающим агентом и реакция активного вещества с полимером с образованием комплекса;
f) реакция носителя по меньшей мере с одним сшивающим агентом и реакция активного вещества с полимером с образованием комплекса;
g) реакция активного вещества и полимера по меньшей мере с одним сшивающим агентом и реакция активного вещества с полимером с образованием комплекса;
h) реакция активного вещества непосредственно с полимерным носителем с образованием промежуточного соединения, содержащего множество молекул активного вещества, соединенных с полимером, и последующее соединение с промежуточным комплексом полимер-активное вещество молекул одного или нескольких носителей;
i) соединение по меньшей мере одного носителя непосредственно с полимерным носителем с образованием промежуточного продукта, содержащего по меньшей мере одну молекулу носителя, соединенную с полимером, с последующей реакцией промежуточного продукта полимер-носитель со множеством молекул активного вещества.
Данное изобретение обеспечивает также способ модификации полимерного носителя для введения функциональных групп, способных реагировать либо непосредственно с активным веществом, либо с химически модифицированной формой активного вещества. Полученное промежуточное соединение полимер-активное вещество содержит одну или более молекул активного вещества, причем этот промежуточный комплекс пригоден для соединения с носителем с образованием комплекса, способного усиливать доставку активного вещества.
В одном варианте изобретения связь, соединяющая фармацевтическое средство или носитель с полимером, представляет собой дисульфидную связь. В другом варианте изобретения связь, соединяющая фармацевтическое средство или носитель с полимером, представляет собой эфирную связь. Еще в одном варианте изобретения связь, соединяющая фармацевтическое средство или носитель с полимером, представляет собой связь γ -глутамил- ε -лизин. В следующем варианте изобретения связь, соединяющая фармацевтическое средство или носитель с полимером, представляет собой диазосвязь. В предпочтительном варианте изобретения описан комплекс, содержащий множество молекул GCSF, соединенных через дисульфидную связь посредством реакции с (дитио-пиридил-пропионамидо)додециламин - производным полимера. В другом предпочтительном варианте описан комплекс, содержащий множество молекул GCSF, присоединенных через дисульфидную связь к (дитиопиридил-пропионамидо)додецилсуберилгексилпроизводному полимера.
Было обнаружено, что можно синтезировать три аналога ANTIDE (антагониста LHRH), пригодных для конъюгирования с полимерным матриксом, а именно:
N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pC1), D-Pal(3), Ser, Lys(Nic), D-Lys, Leu, Lys(iPr), Pro, D-Ala-NH2 (D-Lys6 ANTIDE или ANTIDE-1; N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pC1), D-Pal(3), Ser, Lys, D-Lys(Nic), Leu, Lys(iPr), Pro, D-Ala-NH2 (Lys5-ANTIDE или ANTIDE-2); и N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pC1), D-Pal(3), Ser, Lys(Nic), Leu, Lys, Pro, D-Ala-NH2 (Lys8 ANTIDE или ANTIDE-3.
Данное изобретение касается также фармацевтической композиции, содержащий описанный выше комплекс вместе с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем, хорошо известными в данной области и описанными, например, в Remigton's Pharmaceutical Sciences (Mark Publishing Company, 10th Edition, включенной здесь в виде ссылки). Эта композици моет быть в форме капсул, таблетки, лекарственной формы с медленным высвобождением активного ингредиента, эликсира, геля, пасты или лекарственной формы с энтеросолюбильным покрытием или любой другой пригодной лекарственной формы, хорошо известной в данной области.
Комплексы и композиции данного изобретения могут вводиться человеку или животному в комбинации с одним или несколькими носителями и/или наполнителями. Способы введения не являются критическими для этого изобретения и включают парентеральное (внутривенное, внутримышечное или внутриорганное введение инъекций), пероральное, трансдермальное, вагинальное, анальное введение или другие пути введения, хорошо известные в этой области. В контексте лечения заболевания терапевтически эффективным количеством комплекса или соединения данного изобретения является такое количество, которое обеспечивает лечение конкретного состояния заболевания. Что входит в состав эффективного количества, будет зависеть от природы заболевания, которое должно быть подвергнуто лечению, от оценки состояния консультирующим врачом или ветеринарным хирургом и от других факторов, таких как возраст, вес и/или пол субъекта. Только в виде примера, эффективное количество содержащей комплекс композиции согласно данному изобретению может составлять от 1 нанограмма до 10 нанограммов комплекса в соответствии с изобретением. Данное изобретение применимо в лечении любого болезненного состояния, отвечающего на введение пептидных фармацевтических препаратов.
Частью данного изобретения является способ лечения заболевания, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества комплекса, описанного выше, предпочтительно в форме фармацевтической композиции.
В следующем аспекте данное изобретение касается использования описанных здесь комплексов для изготовления лекарственных средств для введения их человеку и животным.
Пример 1: Синтез мультилизинового полимера 1 (MLP1)
Мультилизиновый полимер (MLP1) формулы
(Gly4-Lys2-Ser2-Lys)5-Ala COOH
синтезировали на пептидном синтезаторе Applied Biosystems. Более точно он может быть изображен как (Gly4-Lys2-Ser2-Lys)4- (Gly4-Lys2-Ser2-Lys)-Ala-COOH.
Формула (Gly4-Lys2-Ser2-Lys)5-Ala- COOH может быть представлена следующим образом:
Figure 00000001

Эта формула изображает структуру более точно. Если требуется, концевые аминогруппы на глицине могут быть дополнительно химически модифицированы.
Пример 2: Синтез мультилизинового полимера 2 (MLP2)
Мультилизиновый полимер (MLP2) формулы (Gly16-Lys8-Lys4-His4-Glu4- Lys2-Lys))-Gly5-Cys-COOH синтезировали на пептидном синтезаторе Applied Biosystems. Более точно эта структура может быть представлена следующим образом:
Figure 00000002

Пример 3: Получение адипилгидразидпроизводного eVB12-карбоксилата.
Адипилгидразидпроизводное eVB12-карбоксилата получали конъюгированием концевых карбоксигрупп полимера посредством реакции с EDAC. Примененные адипилгидразидпроизводные могут быть представлены следующей (стенографически короткой) химической структурой:
адипилгидразидо-eVB12(=eVB12-CONHNHCO(CH2)4 CJNHNH2)
Этот реагент легко получали в одной стадии из eVB12-карбоксилата путем добавления EDAC к смеси кислоты и 20-кратного избытка адипиогидразида; т.е.:
Figure 00000003

Пример 4: Образование конъюгатов полимер-ANTIDE с применением нерасщепляемых гомобифункциональных сшивающих агентов.
Предварительные эксперименты показали, что прямое конъюгирование между ANTIDE-1 и ANTIDE-3 и VB12 давало конъюгаты со значительно пониженной биоактивностью по сравнению с ANTIDE. Тесная близость VB12 к ANTIDE при использовании этой стратегии конъюгирования, вероятно, стерически мешает связыванию ANTIDE с рецептором LHRH. Для уменьшения этого стерического эффекта, возможно, наблюдаемого при прямом конъюгировании, для образования ковалентных комплексов между двумя полимерами и ANTIDE-1 и 3 следует использовать не деградируемые биологические линкеры. В качестве примера ANTIDE-1 или ANTIDE-3 реагировали с 1,5 молярным избытком дисукцинимидилсубератом (DSS) в течение 10 минут при комнатной температуре (RT). Затем добавляли MLP1 или MLP2 и реакция протекала в течение ночи. Конъюгированный материал очищали хроматографией на Сефадексе G-25 в 10% уксусной кислоте с последующей HPLC с обращенной фазой (RP-HPLC) (ЖХВР с обращенной фазой). Конъюгаты полимер-анилидо- ANTIDE-1 и полимер-анилидо-ANTIDE-3 получали реакцией MLP1 или MLP21 с п-аминофенилуксусной кислотой с применением EDAC/NHS. Комплекс полимер-анилид в свою очередь конъюгировали с ANTIDE-1 и ANTIDE-3 с применением DSS. Конъюгированный материал очищали хроматографией на Сефадексе G-25 в 10% уксусной кислоте с последующей RP-HPLC.
eVB12 соединяли с комплексами полимер-ANTIDE при помощи реакции адипилгидразидил-"e"VB12 с этим комплексом с применением EDAC. Полученный продукт очищали при помощи RP-HPLC.
Пример 5: Получение конъюгатов MLP-ANTIDE с применением тиолрасщепляемых сшивающих агентов.
Получали также конъюгаты, в которых ковалентный линкер содержал биодеградируемую дисульфидную связь, которая могла бы восстанавливаться in vivo, предположительно глутатином в сыворотке. Вкратце, MLP1 или MLP2 реагировали с N-сукцинимидил-3- (2-пиридилдитио)пропионатом (SPDP). Продукт дитиопиридил-MLP (DTP-MLP) очищали RP-HPLC. Свободный тиол вводили на ANTIDE-1 реакцией с SPDP. Затем дитиопиридил восстанавливали меркаптоэтанолом и продукт очищали при помощи RP-HPLC. Подобным образом свободный тиол вводили в ANTIDE-3 реакцией с иминотиоланом. Тиолированный продукт (SH-NH+AMT1DE-3) очищали при помощи RP-HPLC. Образование связанных дисульфидной связью конъюгатов MLP-ANTIDE-1 и MLP-ANTIDE-2 достигалось реакцией тиолированного производного ANTIDE с DTP-MLP в 2,5% уксусной кислоте в течение 24 часов. Конъюгированный материал очищали при помощи хроматографии на Сефадексе G-25 с последующей RP-HPLC.
VB12 соединяли с комплексом полимер-ANTIDE реакцией адипилгидразидил-"e"VB12 с этим комплексом с применением EDAC. Полученный продукт очищали при помощи RP-HPLC.
Пример 6: Образование конъюгатов VB12-ANTIDE-лизил- полиглутаматов при помощи тиолрасщепляемых сшивающих агентов.
Желательным является увеличение количества лекарственного средства или его аналогов, которые могут поглощаться системой транспорта VB12, путем соединения множественных копий этого лекарственного средства с полимерной структурой, с которой конъюгированы одна или несколько молекул VB12. Описан один способ образования такого комплекса VB12-лекарственное средство-полимер с применением иминотиолированного ANTIDE-1 или DLEA(SH-HN+ANTIDE-1/DLEA), тиолированного производного VB12 и DTP-лизил-полиглутамата. Другой способ описан для образования комплекса VB12-лекарственное средство-полимер в трех стадиях, предусматривающих (i) превращение полисахарида декстрана в поли(аминогексил)декстран, (ii) реакцию этого материала с небольшим количеством сукцинимидилового эфира VB12 и большим избытком SPDP с образованием [DTP-гексил] x -декстран-[гексил- VB12]y-производного (где x >> y) и (iii) реакцию этого материала с тиолированным пептидом, в этих примерах с иминотиолированным ANTIDE-1 или DLEA, с образованием [пептид-дитиогексил] z-декстран-[гексил-VB12]y- производного (где Z > y).
a) Образование DTP-лизил-полиглутамата
Проводили реакцию полиглутамата (100 мг) (мол. масса 64600-70000; Sigma) с EDAC (100 мг) и NHS (50 мг в ацетоне) в течение 10 минут при комнатной температуре (RT). Добавляли лизин (400 мг в 4 мл 1% NaHCO3) и давали реакции проходить в течение ночи (O/N). Продукт лизил-полиглутамат (LPG) очищали интенсивным диализом против DW и затем лиофилизировали.
Дитиопиридилпроизводное LPG получали реакцией дитио-пиридил-пропионовой кислоты (50 мг) с O-(N-сукцинимидил)- N,N,N',N'-тетраметилуронийтетрафторборатом (TSTU) (100 мг) и N-этилдиизопропиламином (100 мг; DIEA) в DMF в течение 1 часа. Сукцинимидиловый эфир, полученный таким образом, добавляли непосредственно к 100 мг LPG, растворенным в 4 мл 2% NaHCO3. Реакция проходила в течение ночи, после чего продукт (DTP-LPG) очищали диализом против DW и затем лиофилизировали.
b) Получение иминотиолированного ANTIDE-1
ANTIDE-1 (20 мг) растворяли в 300 мкл 5% D1EA в DMF, содержащих 5 мг EDTA плюс 5 мг DTT, и дегазировали под аргоном. Добавляли иминотиолан (20 мг в 50 мкл DIEA/DMF плюс 50 мкл боратного буфера, 100 мМ pH 8,2) и реакцию проводили в течение 60 минут перед очисткой при помощи RP-HPLC и лиофилизацией.
c) Получение иминотиолированного аминоэтил-VB12
Аминоэтил "e"VB12 (20 мг) растворяли в 300 мкл 5% DIEA в DMF, содержащих 5 мг EDTA и 5 мг DTT, дегазированных под аргоном. Добавляли иминотиолан (20 мг в 50 мкл D1EA/DMF и 50 мкл боратного буфера, 100 мМ pH 8,2) и реакцию проводили в течение 60 минут перед очисткой при помощи RP-HPLC и лиофилизацией.
d) Получение иминотиолированного DLEA
DLEA (10 мг) растворяли в 300 мкл 5% D1MF в DMF, содержащих 5 мкл EDTA и 5 мг DTT, дегазированных под аргоном. Добавляли иминотиолан (20 мг в 50 мкл DIEA/DMF и 50 мкл боратного буфера, 100 мМ pH 8,2) и реакцию проводили в течение 60 минут с последующей очисткой при помощи RP-HPLC и лиофилизацией.
e) Образование VB12-ANTIDE-лизил-полиглутамата
DTP-LPG растворяли при концентрации 20 мг/мл в DW. Иминотиолированный-аминоэтил-VB12 растворяли при концентрации 5 мг/мл в DW и добавляли к DTP-LPG (1: 20 мас./мас.) и реакцию проводили в течение 20 минут при RT с последующим добавлением иминотиолированного ANTIDE-1 (50 мг/мл в DW) по каплям при перемешивании. Реакционную смесь поддерживали при pH 6,5-7,0 путем добавления Трис-HCl pH 7,0 и ацетата Na, pH 5,5. Реакция проходила в течение ночи, после чего продукт очищали диализом и затем лиофизилировали. Состав продукта определяли аминокислотным анализом и обнаружили, что продукт содержал 1:5:21 ANTIDE1:лизин:глутамат, или примерно 25% по весу ANTIDE.
f) Образование VB12-DLEA-лизил-полиглутамата
DTP-LPG растворяли при концентрации 20 мг/мл в DW. Иминотиолизированный-аминоэтил-VB12 растворяли при концентрации 5 мг/мл в DW и добавляли к DTP-LPG (1: 120 м/м) и проводили реакцию в течение 20 минут при RT с последующим добавлением иминотиолированного-DLEA-1 (50 мг/мл bDW) по каплям при перемешивании. Реакционную смесь поддерживали при pH 6,5-7,0 добавлением Трис-PCl pH 7,0 и ацетата Na, pH 5,5. Реакцию проводили в течение ночи, после чего продукт очищали диализом и затем лиофилизировали. Состав продукта определяли аминокислотным анализом и обнаружили, что продукт содержит 1:3:16 DLEA-1:лизин:глутамат или примерно 28% по весу DLEA.
g) Образование поли(аминогексил)-декстрана
Раствор 2 г декстрана (Декстран Т70, мол. масса 70000, Pharmacia) в 20 мл дистиллированной воды перемешивали при комнатной температуре и добавляли раствор периодата натрия (2,4 г) в воде (25 мл). Реакционную смесь перемешивали в течении 4 часов и избыток периодата удаляли добавлением 500 мкл глицерина. Реакционную смесь диализовали в течение 24 часов при 4oC против 2х5 л фильтрованной через MilliQ воды. Ретентат лиофилизировали, получая 1,8 окисленного декстрана в виде белого порошка. Пробу этого материала (250 мг) поглощали мягким нагреванием в 10 мл ацетатного буфера (200 мМ, pH 5). Добавляли 1,6-деаминогексан (5 мл при 100 мг/мл, pH раствора равен 7) и раствор перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Добавляли цианоборгидрид натрия (2•100 мг) и реакционную смесь оставляли стоять в течение 1 часа. Наконец добавляли боргидрид натрия (100 мг). После общего времени реакции 6 часов раствор переносили в диализную трубку и дилизовали при 4oC против 2х2 л MilliQ - фильтровальной воды, ретентат лиофилизировали, получая 180 мг поли(аминогексил)-декстарна.
Анализ аминосодержания продукта при помощи TNBS-анализа дал содержание аминогрупп 14% (= % молей амино на моль глюкозы), что соответствует приблизительно 50 свободных аминогрупп на полимерную цепь.
Если описанную выше процедуру повторяли с применением 1 г декстрана и 2 г периодата натрия в стадии первоначального окисления, то содержание аминогрупп конечного продукта было 32%.
Если описанную выше процедуру повторяли с применением 125 мг окисленного декстрана и 4 мл раствора 1,6-диаминогексана с концентрацией 100 мг/мл во второй стадии, то содержание аминогрупп конечного продукта было 24%.
Если описанную выше процедуру повторяли только с применением боргидрида натрия во второй стадии, то содержание аминогрупп конечного продукта было 11%.
h) Образование [DTP-гексил]x-декстран[гексил-NHCO- VB12]y
Способ 1: Пробу поли(аминогексил)-декстрана (50 мг, 14% содержание аминогрупп) поглощали в 3 мл боратного буфера (100 ммолей, pH 8) и диоксана (1 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре и добавляли пробу N-гидроксисукцинимидилового эфира eVB12-карбоксилата (0,5 мг) в воде (100 мкл). После 15 минут добавляли раствор SPDP (9 мг) в 100 мкл диоксана. Реакционную смесь перемешивали в течение 60 минут при комнатной температуре и непрореагировавший SPDP разрушали добавлением 200 мкл 1М раствора этилендиамина. Модифицированный полимер отделяли от других реагентов гель-фильтрацией на Сефадексе G-25 с элюцией 5% уксусной кислотой. Фракции продукта объединяли и лиофилизировали, получая 42 мг VB12/DTP-модифицированного декстрана в виде бледно-розового порошка.
Способ 2: Полимер, более сильно замещенный VB12, получали с применением поли(аминогексил)-декстрана (20 мг, 12% содержание аминогрупп), который поглощали в 1 мл бикарбонатного буфера (100 ммолей, pH 9,5) и диоксана (100 мкл). Раствор перемешивали при комнатной температуре и добавляли SPDP (2х3,5 мг) в 100 мкг диоксана. После 60 минут добавляли в две аликвоты N-гидроксисукцинимидиловый эфир eVB12-карбоксилата (1х0,8 мг, 1х1,6 мг) в воде (100 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 60 минут при комнатной температуре и непрореагировавший NHS-эфир разрушали добавлением нескольких капель раствора этилендиамина. Модифицированный полимер отделяли от других реагентов гель-фильтрацией на Сефадексе G-25 с элюцией 5% уксусной кислотой. Фракции продукта объединяли и лиофилизировали, получая 13 мг VB12/DTP-модицифированного декстрана в виде темно-красного порошка.
i) Образование [ANTIDE-1-дитиогексил]z-декстран- [гексил-VB12]y
Раствор [DTP-гексил]-декстран[гексил-NHCO- VB12]y-полимера (Способ 1, 15 мг) поглощали в 200 мМ/pH 4 ацетатный буфер (3 мл). Добавляли кристаллы Na2EDTA и раствор освобождали от кислорода при помощи аргона. Добавляли раствор 5 мг иминотиолированного ANTIDE-1 в воде (200 мкл) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут. Добавляли еще 2х10 мг тиолированного пептида в воде (100 мкл) и раствор перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Конъюгированный с пептидом полимер отделяли от других реагентов гель-фильтрацией на Сефадексе-25 с элюцией 5% уксусной кислоторй. Фракции продукта объединли и лиофилизировали, получая 19,5 мг VB12/DTP-модифицированного декстрана в виде бледно-розового порошка. Содержание пептида этого полимера определяли аминокислотным анализом и оно было равно 20% по весу. Содержание VB12, определенное УФ-анализом и при помощи текста связывания с внутренним фактором, было % по весу.
а) Образование [DLEA-дитиогексил]xдекстран-[гексил- VB12]y
Раствор [DTP-гексил]x-декстран-[гексил-NHCO- VB12]y-полимера (Способ 2, 10 мг) поглощали в 200 мМ/pH 4 ацетатный буфер (2,5 мл), добавляли кристалл Na2EDTA и раствор освобождали от кислорода аргоном. Добавляли раствор 5 мг иминотиолированного DLEA в воде (100 мкл) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут. Добавляли еще 5 мг тиолированного пептида в воде (100 мкл) и раствор перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Конъюгированный с пептидом полимер отделяли от других реагентов гель-фильтрацией на Сефадексе-25 с элюцией 5% уксусной кислотой. Фракции продукта объединяли и лиофилизировали, получая 5 мг VB12/DTP-модифицированного декстрана в виде розового порошка. Содержание пептида было 14% по весу согласно аминокислотному анализу, а содержание VB12 было 12% согласно УФ-анализу и тесту связывания внутреннего фактора.

Claims (37)

1. Комплекс, имеющий общую формулу
(V - Q)n - P - (Q' - A)m,
в которой V обозначает носитель, который будет связываться с природным внутренним фактором (IF), выбранный из витамина В12 или его аналога;
n обозначает коэффициент молярного замещения V в комплексе и представляет собой число от 1,0 до приблизительно 10;
Р обозначает фармацевтически приемлемый полимер;
А обозначает фармацевтически приемлемое активное вещество;
m обозначает коэффициент молярного замещения А в комплексе и представляет собой число от более 1,0 до приблизительно 1000;
Q и Q' независимо один от другого обозначают ковалентную связь или спейсерное соединение, соединяющее V, Р и А ковалентными связями.
2. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что по меньшей мере один из Q и Q' является спейсерным соединением, содержащим биодеградируемую часть.
3. Комплекс по п.2, отличающийся тем, что биодеградируемая часть выбрана из дисульфидной связи, эфирной связи, связи γ-глутамил - ∈-лизил или диазо-связи.
4. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что n является числом от 1,0 до приблизительно 1,2 и m равен от 2 до 200.
5. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что n обозначает число от 1,0 до приблизительно 1,2 и m обозначает число от 10 до 100.
6. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что Р представляет собой биодеградируемый полимер.
7. Комплекс по п.6, отличающийся тем, что биодеградируемый полимер выбран из биодеградируемого углеводного полимера или полимера аминокислот.
8. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что полимер не является биодеградируемым.
9. Комплекс по п.8, отличающийся тем, что биологически не разрушаемый полимер имеет присоединенные биодеградируемые боковые цепи для ковалентного связывания с активным веществом.
10. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что полимер выбран из полисахаридов, включающих декстран, инулин, целлюлозу, крахмал и их производные; сульфата хондроитана, поли [N-(2-гидроксипропил)-метакриламида] и его производных, сополимера стирола и малеинового ангидрида, сополимера дивинилового эфира и малеинового ангидрида, полилизина, поли(глутаминовой кислоты), поли(гидроксипропилглутамина), поли(молочной кислоты), водорастворимых полиуретанов, образованных ковалентным соединением PEG с лизином или другими аминокислотами; и полипептидов с разветвленной цепью.
11. Комплекс по п.10, отличающийся тем, что полимер является полипептидом с разветвленной цепью, иногда модифицированным для обеспечения множественных функциональных групп для связывания активного вещества.
12. Комплекс по п.11, отличающийся тем, что указанный полимер имеет последовательность:
(R 5 16 -Lys8-R 4 8 -Lys4-R 3 4 -Lys2-R 2 2 -Lys)n-R1-COOH,
где n обозначает 1-17;
R1 обозначает любую последовательность 1-10 аминокислот;
R2, R3, R4 и R5 обозначают (каждый независимо) любую последовательность из 0-6 аминокислот, при условии, что не все R2, R3, R4 и R5 являются последовательностью из 0 аминокислот,
причем этот полимер может заканчиваться при любом положении внутри скобок.
13. Комплекс по п.12, отличающийся тем, что указанный полимер имеет последовательность (Gly4-Lys2-Ser2-Lys)5-Ala-COOH.
14. Комплекс по п.12, отличающийся тем, что указанный полимер имеет последовательность:
(Gly16-Lys8-Lys4-His4-Glu4-Lys2-Lys)-Gly5-Cys-COOH.
15. Комплекс по п. 10, отличающийся тем, что указанный полимер представляет собой поли [N-2(2-гидроксипропил)-метакрил-амид].
16. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что спейсерное соединение Q или Q' содержит иногда замещенные насыщенные или ненасыщенные, разветвленные или линейные C1-50-алкилен, циклоалкилен или ароматическую группу, иногда с одним или несколькими углеродами внутри цепи, замененными N, O или S, и тем, что необязательные заместители выбраны из карбонила, карбокси-, гидрокси-, аминогруппы и других групп.
17. Комплекс по п.16, отличающийся тем, что спейсерное соединение произведено из дисукцинимидилсуберата (DSS), бис(сульфосукцинимидил)суберата (BSS), этиленгликоль-бис-(сукцинимидилсукцината) (EGS), этиленгликоль-бис(сульфосукцинимидилсукцината)(sulfo-EGS), п-аминофенилуксусной кислоты , дитио-бис-(сукцинимидилпропионата) (DSP), 3,3'-дитио -бис(сульфосукцинимидилтартрата (sulfo-DST), бис-[2(сукцинимидооксикарбонилокси)-этилен]сульфона (BSOCOES), бис[2-(сульфосукцинимидооксикарбонилокси)-этилен] сульфона (sulfo-BSOCOES), бис-(сульфосукцинимидооксикарбонилокси)-этилен] сульфона (sulfo BSOCOES), диметиладипимидата •2НСl (DMAA), диметилпимелимидата •НСl (DMP) и диметилсуберимидата •2HCl (DMS).
18. Комплекс по п.16, отличающийся тем, что спейсерное соединение является тио-расщепляемым.
19. Комплекс по п.18, отличающийся тем, что указанный тиол-расщепляемый спейсер произведен из N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионата (SPDP), иминотиолана, сульфосукцинимидил-6-[3-2-(2-пиридилдитио)пропионамидо]-гексаноата (sulfo LC-SPDP), сукцинимидил-6-[3-пиридилдитио/пропионамидо]-гексаноата (LC-SPDP), сульфосукцинимидил-6-[α-метил-α-(2-пиридилдитио)толуамидо] -гексаноата (sulfo-LC-SMPT), 1,4-ди[3'-(2'-пиридилдитио)пропионамидо]-бутана (DPDPB), 4-сукцинимидил-оксикарбонил-α-метил-α-(2-пиридилдитио)-толуола (SMPT), диметил-3,3'-дитио-бис-пропионимидата •2НСl (DTBP).
20. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что указанное активное вещество А представляет собой биологически активный полипептид или его часть.
21. Комплекс по п.20, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой гормон, фактор роста, интерлейкин.
22. Комплекс по п.20, отличающийся тем, что полипептид выбран из LHRH, или интерферона, или их части, или аналога.
23. Комплекс по п. 22, отличающийся тем, что аналогом LHRH является гистреллин или аналог гистреллина.
24. Комплекс по п.22, отличающийся тем, что аналогом LHRH является D-Lys6-LHRH
25. Комплекс по п.22, отличающийся тем, что аналогом LHRH является D-Lys6-LHRH -этиламид.
26. Комплекс по п. 22, отличающийся тем, что аналогом LHRH является ANTJDE или аналог ANTJDE.
27. Комплекс по п.26, отличающийся тем, что аналог ANTJDE является D-Lys6-ANTJDE.
28. Комплекс по п. 26, отличающийся тем, что аналог ANTJDE является Lys8-ANTJDE.
29. Комплекс по п. 1, отличающийся тем, что VB12 - носитель выбран из цианокобаламина, аквокобаламина, аденозилкобаламина, метилкобаламина, гидроксикобаламина, цианокобаламина, карбаналида, 5-метоксилбензилкобаламина и дездиметил-, моноэтиламидных и метиламидных аналогов всех предшествующих аналогов, а также кофермента B12, 5'-дезоксиаденозилкобаламина, хлоркобаламина, сульфитокобаламина, нитрокобаламина, тиоцианатокобаламина, 5,6-дихлорбензимидазола, 5-гидроксибензимидазола, триметилбензимидазола, аденозилцианокобаламина, кобаламинового лактона, лактама кобаламина и аналида, этиламида и пропионамида; производных VB12 монокарбоновых и дикарбоновых кислот или их аналогов; или алкилкобаламинов, в которых цепь алкила соединена с ядром носителя прямой СоС ковалентной связью.
30. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что носитель представляет собой аналог витамина В12, в котором Со заменен Ni или Zn.
31. Комплекс по п.29, отличающийся тем, что носитель представляет собой аналог витамина В12, в котором корриновое кольцо замещено заместителем, не влияющим на связывание с внутренним фактором.
32. Способ получения комплекса, имеющего общую формулу
(V-Q)n-P-(Q'-A)m,
в которой V, Q, P, Q', A, n и m имеют значения, приведенные в п.1,
причем способ выбран из: а) реакция А с Р с образованием промежуточного комплекса с последующей реакцией промежуточного комплекса с V; b) реакция V с Р с образованием промежуточного комплекса с последующей реакцией промежуточного комплекса с А; с) способ стадий а) или b), где один или более V, Р или А модифицированы для обеспечения по меньшей мере одной функциональной группы, способной к образованию химической связи, перед соединением с другими реагирующими веществами, или d) реакция одного или двух из V, Р или А с Q и /или Q' перед соединением с другими реагирующими веществами.
33. Способ по п.32, отличающийся тем, что Q и/или Q' содержит возможно замещенные насыщенные или ненасыщенные, разветвленные или линейные С1-50-алкиленовые, циклоалкиленовые или ароматические группы, возможно с одним или более углеродами внутри цепи , замененными N, O или S, и тем, что необязательные заместители выбраны из карбонила, карбокси-, гидрокси-, аминогрупп и других групп.
34. Способ по п.32, отличающийся тем, что Q' представляет собой расщепляемый сшивающий агент, содержащий дисульфидную связь.
35. Способ по п.32, отличающийся тем, что сшивающие агенты выбраны из дисукцинимидилсуберата (DSS), бис(сульфосукцинимидил)суберата (BSS), этиленгликоль- бис(сукцинимидилсукцината) (EGS), этиленгликоль-бис(сульфосукцинимидилсукцината) (sulfo EGS), п-аминофенилуксусной кислоты, дитио-бис-(сукцинимидил-пропионата) (DSP), 3,3'-дитио-бис-(сульфосукцинимидилпропионата) (DTSSP), дисукцинимидилтартрата (DST), дисульфосукцинимидилтартрата (sulfo - DST), бис-[2-(сукцинимидилоксикарбонилокси) этилен] сульфона (BSOCOES), бис-[2-(сульфосукцинимидооксикарбонилокси)-этилен] сульфона (sulfo - BSOCOES), диметиладипимидата •2HCl (DMA). диметилпимелимидата •2HCl (DMP), диметилсубермидата •2HCl (DMS).
36. Способ по п.32, отличающийся тем, что спейсер выбран из дисукцинимидилсуберата (DSS), бис(сульфосукцинимидил)суберата (BSS), этиленгликоль-бис(сукцинимидилсукцинат) (EGS), этиленгликоль -бис(сульфосукцинимидилсукцината) (sulfo - EGS), п-аминофенилуксусной кислоты, дитио-бис-(сульфосукцинимидилпропионата) (DSP) 3,3'-дитио-бис-(сульфосукцинимидилпропионата) (DTSSP), дисукцинимидилтартрата (DST), дисульфосукцинимидилтартртата (sulfo - DST), бис-[2-(сукцинимидилоксикарбонилокси)-этилен]сульфона (BSOCOES), бис[2-(сульфосукцинимидооксикарбонилокси)-этилен] -сульфона (sulfo - BSOCOES), диметиладипимидата •2НСl (DMA), диметилпимелимидата •2НСl (DMP), диметилсуберимидата •2НСl (DMS).
37. Способ по п.32, отличающийся тем, что спейсер выбран из N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионата (SPDP), иминотиолана, сульфосукцинимидил-6-[3-(2-пиридилтио)пропионамидо] -гексаноата (sulfo - LC SPDP), сукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)пропионамидо] -гексаноата (LC - SPDS), сульфосукцинимидил-6-[α-метил-α-(2-пиридилдитио)толуамидо] -гексаноата (sulfo-LC-SMPT), 1,4-ди[3'-(2'-пиридилдитио)пропионамидо] -бутана (DPDPB), 4-сукцинимидилоксикарбонил-α-метил-α-(2-пиридилдитио)-толуола (SMPT), диметил-3,3'-дитиобиспропионимидата •2НСl (DTBP).
38. Способ по п.32, отличающийся тем, что сшивающие агенты выбраны из N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионата (SPDP) иминотиолана, сульфосукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)пропионамидо] -гексаноата (sulfo-LC-SPDP), сукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)пропионамидо] -гексаноата (LC-SPDP), сульфосукцинимидил-6-[α-метил-α-(2-пиридилдитио)-толуамидо] -гексаноата (sulfo-LC-SMPT), 1,4-ди [3'-(2'-пиридилдитио)пропионамидо]-бутана (DPDPB), 4-сукцинимидилоксикарбонил-α-метил-α-(2-пиридилдитио)-толуола (SMPT), диметил-3,3'-дитио-биспропионимидата •2HCl (DTBP).
RU95122664A 1993-05-24 1994-05-24 Амплификация системы поглощения витамина b12 при помощи полимеров RU2139732C1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/064,892 US5449720A (en) 1993-05-24 1993-05-24 Amplification of the VB12 uptake system using polymers
US08/064,892 1993-05-24
PCT/AU1994/000273 WO1994027641A1 (en) 1993-05-24 1994-05-24 Amplification of the vitamin b12 uptake system using polymers
US08/064.892 1995-05-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU95122664A RU95122664A (ru) 1998-02-10
RU2139732C1 true RU2139732C1 (ru) 1999-10-20

Family

ID=22058913

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU95122664A RU2139732C1 (ru) 1993-05-24 1994-05-24 Амплификация системы поглощения витамина b12 при помощи полимеров

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5449720A (ru)
EP (1) EP0701448B1 (ru)
JP (1) JPH08510261A (ru)
KR (1) KR960702323A (ru)
CN (1) CN1126441A (ru)
AT (1) ATE222123T1 (ru)
AU (1) AU706723B2 (ru)
BR (1) BR9406725A (ru)
CA (1) CA2163226A1 (ru)
CZ (1) CZ308395A3 (ru)
DE (1) DE69431185T2 (ru)
HU (1) HUT75058A (ru)
IL (1) IL109745A (ru)
PL (1) PL177400B1 (ru)
RU (1) RU2139732C1 (ru)
SG (1) SG46223A1 (ru)
WO (1) WO1994027641A1 (ru)
ZA (1) ZA943599B (ru)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807832A (en) * 1987-06-09 1998-09-15 Biotech Australia Pty Limited Oral delivery of biologically active substances bound to vitamin B12
US5548064A (en) * 1993-05-24 1996-08-20 Biotech Australia Pty Limited Vitamin B12 conjugates with EPO, analogues thereof and pharmaceutical compositions
US5574018A (en) * 1994-07-29 1996-11-12 Amgen Inc. Conjugates of vitamin B12 and proteins
AU3461095A (en) * 1994-09-01 1996-03-22 Allied Medical Research Associates Compositions and methods for delivery of polypeptides
DE4433890C2 (de) 1994-09-22 1999-02-18 Deutsches Krebsforsch Konjugat aus einem Wirkstoff und einem nicht als körperfremd angesehenen, nativen Protein
US5739313A (en) * 1995-11-13 1998-04-14 Regents Of The University Of Minnesota Radionuclide labeling of vitamin B12 and coenzymes thereof
AU705101B2 (en) * 1996-02-15 1999-05-13 Interface Biologics Inc. Bioresponsive pharmacologically-active polymers and articles made therefrom
DE19712718C2 (de) * 1997-03-26 1999-09-23 Asta Medica Ag Immobilisierte und aktivitätsstabilisierte Komplexe von LHRH-Antagonisten und Verfahren zu deren Herstellung
AUPO888097A0 (en) * 1997-08-29 1997-09-25 Biotech Australia Pty Limited Cross-linked particles
US20040044080A1 (en) * 1997-10-28 2004-03-04 Place Virgil A. Treatment of dyspareunia with topically administered nitroglycerin formulations
US6919076B1 (en) 1998-01-20 2005-07-19 Pericor Science, Inc. Conjugates of agents and transglutaminase substrate linking molecules
US6096726A (en) * 1998-03-11 2000-08-01 Surface Solutions Laboratories Incorporated Multicomponent complex for use with substrate
US6066673A (en) * 1998-03-12 2000-05-23 The Procter & Gamble Company Enzyme inhibitors
AU760381B2 (en) * 1998-04-28 2003-05-15 Laboratoires Serono Sa PEG-LHRH analog conjugates
EP1588717B1 (en) * 1998-04-28 2008-07-02 Laboratoires Serono SA PEG-LHRH analog conjugates
US7953788B2 (en) 2001-09-29 2011-05-31 Siebel Systems, Inc. System and method for queuing data for an application server
AUPP405098A0 (en) * 1998-06-12 1998-07-02 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Novel methods of preparation of vitamin b12 derivatives suitable for conjugation to pharmaceuticals
US6806363B1 (en) * 1999-04-16 2004-10-19 Mayo Foundation For Medical Education & Research Cobalamin conjugates useful as antitumor agents
AUPQ014799A0 (en) * 1999-05-04 1999-05-27 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
US20050220754A1 (en) * 1999-06-02 2005-10-06 Biotech Australia Pty. Ltd. Vitamin directed targeting therapy
AUPQ071299A0 (en) * 1999-06-02 1999-06-24 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Vitamin directed dual targeting therapy
JP2003531105A (ja) 1999-10-15 2003-10-21 メイオウ・フアウンデーシヨン・フオー・メデイカル・エジユケイシヨン・アンド・リサーチ 造影剤および治療薬として有用なコバラミン結合体
US7591995B2 (en) 1999-10-15 2009-09-22 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging and therapeutic agents
KR20020059618A (ko) * 1999-10-15 2002-07-13 메이오 파운데이션 포 메디칼 에쥬케이션 앤드 리써치 이미지화제 및 항종양제로서 유용한 코발라민 콘쥬게이트
JP4659937B2 (ja) * 1999-11-19 2011-03-30 ナノキャリア株式会社 コア−シェル構造のポリイオンコンプレックスミセル
AU2001272935A1 (en) * 2000-05-31 2001-12-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin compounds useful as antibiotic agents and as imaging agents
EP1754712A3 (en) * 2000-10-25 2009-01-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transcobalamin binding conjugates useful for treating abnormal cellular proliferation
EP1334114A2 (en) * 2000-10-25 2003-08-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transcobalamin binding conjugates useful for treating abnormal cellular proliferation
WO2002067995A1 (en) * 2001-02-26 2002-09-06 Council Of Scientific And Industrial Research Carrier systems comprising vitamin b12 - biodegradable micro particulate conju gates for peroral delivery of drugs, peptides/proteins and vaccines
US6752986B2 (en) * 2001-05-24 2004-06-22 The Cleveland Clinic Foundation Composition and methods for affecting metallocorrinoid uptake
AU2002322275A1 (en) * 2001-06-20 2003-01-08 Mayo Foundation For Medical Education And Research Adenosyl-cobalamin fortified compositions
WO2003011226A2 (en) * 2001-08-01 2003-02-13 Smithkline Beecham Corporation Products and drug delivery vehicles
US20060074034A1 (en) * 2001-09-17 2006-04-06 Collins Douglas A Cobalamin mediated delivery of nucleic acids, analogs and derivatives thereof
EP1435973A4 (en) * 2001-09-28 2007-05-02 Mayo Foundation SIMULTANEOUS ADMINISTRATION OF A TRANSPORT PROTEIN WITH CONJUGATED COBALAMINE FOR THE DISTRIBUTION OF MEDICINAL PRODUCTS
KR100440725B1 (ko) * 2002-06-20 2004-07-15 주식회사 그린진 바이오텍 비생물성 스트레스에 대한 단자엽 식물의 내성을증가시키는 방법
CA2516453A1 (en) * 2003-02-20 2004-09-02 The Cleveland Clinic Foundation Composition and methods for inhibiting cell survival
US7232805B2 (en) * 2003-09-10 2007-06-19 Inflabloc Pharmaceuticals, Inc. Cobalamin conjugates for anti-tumor therapy
EP1708989A1 (en) * 2004-01-28 2006-10-11 Bausch & Lomb Incorporated Vinylchloroformate-free synthesis of vinyl and allyl(thio)carbamates
JP5237821B2 (ja) 2005-12-05 2013-07-17 日東電工株式会社 ポリグルタミン酸−アミノ酸結合体および方法
JP5348656B2 (ja) * 2007-01-05 2013-11-20 国立大学法人九州大学 ビタミンｂ１２修飾ハイパーブランチポリマーおよび脱ハロゲン化触媒
US20080181852A1 (en) * 2007-01-29 2008-07-31 Nitto Denko Corporation Multi-functional Drug Carriers
AU2008223431B2 (en) * 2007-03-05 2013-06-13 Syracuse University A conjugate of insulin and vitamin B12 for oral delivery
US20110092416A1 (en) * 2007-03-05 2011-04-21 Robert Patrick Doyle Vitamine B12 - Peptide Conjugates for Oral Delivery
CN101715342A (zh) * 2007-03-19 2010-05-26 因弗拉布洛克制药公司 钴胺素紫杉烷生物结合物
CN101674852A (zh) * 2007-04-10 2010-03-17 日东电工株式会社 多功能聚谷氨酸盐药物载体
US20080279782A1 (en) * 2007-05-09 2008-11-13 Nitto Denko Corporation Polymers conjugated with platinum drugs
KR20100017540A (ko) * 2007-05-09 2010-02-16 닛토덴코 가부시키가이샤 소수성 화합물 및 폴리아미노산 콘쥬게이트를 포함하는 조성물
EP2155253A2 (en) * 2007-05-09 2010-02-24 Nitto Denko Corporation Polyglutamate conjugates and polyglutamate-amino acid conjugates having a plurality of drugs
MX2010009670A (es) * 2008-03-06 2010-09-22 Nitto Denko Corp Conjugados de paclitaxel polimericos y metodos para tratamiento de cancer.
WO2011130716A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Access Pharmaceuticals, Inc. A nanostructures containing vitamin b12 for facilitated delivery of drugs across biological barriers
WO2012030745A1 (en) * 2010-08-30 2012-03-08 Access Pharmaecuticals, Inc MULTIVITAMIN TARGETING OF RNAi THERAPEUTICS
EP2683410A2 (en) 2011-03-08 2014-01-15 Access Pharmaceuticals, Inc. Targeted nanocarrier systems for delivery of actives across biological membranes
WO2015126841A1 (en) 2014-02-18 2015-08-27 Plasmatech Biopharmaceuticals, Inc. Nutritional and therapeutic mucoadhesive formulations
CN108135917B (zh) 2015-09-25 2021-07-09 Zy医疗 基于包含多糖-维生素缀合物的颗粒的药物制剂
CA3032635A1 (en) * 2016-08-01 2018-02-08 Hppe, Llc Biopolymers for fugitive dust control
CZ308830B6 (cs) 2020-07-08 2021-06-23 WELL PACK s.r.o. Řetězový dopravník s dorazovými kolíky pro mycí linky přepravek

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2546474A1 (de) * 1975-10-17 1977-04-21 Murray M D Israel Injizierbares pharmazeutisches thyroxinpraeparat und verfahren zu dessen herstellung
NZ217821A (en) * 1985-10-10 1989-07-27 Biotech Australia Pty Ltd Oral delivery system; complex of active agent and vitamin b12 or analogue thereof
US5166320A (en) * 1987-04-22 1992-11-24 University Of Connecticut Carrier system and method for the introduction of genes into mammalian cells
US4968742A (en) * 1987-11-09 1990-11-06 Miles Inc. Preparation of ligand-polymer conjugate having a controlled number of introduced ligands
GB8824591D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Fractionation process
US5162430A (en) * 1988-11-21 1992-11-10 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
JPH05508398A (ja) * 1990-05-11 1993-11-25 ザ ユニバーシティ オブ コネチカット 細胞毒からの標的保護
IE921050A1 (en) * 1991-04-02 1992-10-07 Biotech Australia Pty Ltd Oral delivery systems for microparticles
US5188094A (en) * 1991-09-30 1993-02-23 Adair Edwin Lloyd Heat sterilizable electronic video endoscope
US5225182A (en) * 1991-10-31 1993-07-06 Sharma Yash P Vectored drug delivery system using a cephaloplastin linking agent and a methed of using the system
US5206219A (en) * 1991-11-25 1993-04-27 Applied Analytical Industries, Inc. Oral compositions of proteinaceous medicaments
US5258453A (en) * 1992-01-21 1993-11-02 University Of Utah Drug delivery system for the simultaneous delivery of drugs activatable by enzymes and light
ES2181691T5 (es) * 1992-06-11 2007-10-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Sistema de distribucion de proteina eritropoyetina.
US5548064A (en) * 1993-05-24 1996-08-20 Biotech Australia Pty Limited Vitamin B12 conjugates with EPO, analogues thereof and pharmaceutical compositions

Also Published As

Publication number Publication date
IL109745A (en) 2000-01-31
KR960702323A (ko) 1996-04-27
DE69431185D1 (de) 2002-09-19
CN1126441A (zh) 1996-07-10
AU706723B2 (en) 1999-06-24
AU6790394A (en) 1994-12-20
CZ308395A3 (en) 1996-04-17
PL311740A1 (en) 1996-03-18
IL109745A0 (en) 1994-08-26
ZA943599B (en) 1995-11-24
EP0701448A1 (en) 1996-03-20
SG46223A1 (en) 1998-02-20
JPH08510261A (ja) 1996-10-29
US5449720A (en) 1995-09-12
CA2163226A1 (en) 1994-12-08
DE69431185T2 (de) 2003-05-08
HU9503343D0 (en) 1996-01-29
PL177400B1 (pl) 1999-11-30
EP0701448B1 (en) 2002-08-14
HUT75058A (en) 1997-03-28
EP0701448A4 (en) 1997-01-02
WO1994027641A1 (en) 1994-12-08
BR9406725A (pt) 1996-02-06
ATE222123T1 (de) 2002-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2139732C1 (ru) Амплификация системы поглощения витамина b12 при помощи полимеров
AU690555B2 (en) Vitamin B-12 mediated oral delivery systems for GCSF and EPO
JP5211109B2 (ja) 膜転位剤および製薬学的有効成分の複合物
Russell-Jones et al. Synthesis of LHRH antagonists suitable for oral administration via the vitamin B12 uptake system.
CA2301799C (en) Novel conjugates of opioids and endogenous carriers
JPH04506664A (ja) 治療用ペプチド
US6500918B2 (en) Conjugate comprising an antinociceptive agent covalently bonded to a blood component
JP2003516366A (ja) 両親媒性ポリマーとこれを含有するポリペプチドコンジュゲート
AU5392699A (en) Conjugates targeted to the interleukin-2 receptors
KR20080072639A (ko) 생리활성 기질-혈액 단백질 복합체 및 이를 이용하는생리활성 기질의 안정화 방법
CN104936613B (zh) 糖链加成连接子、含有糖链加成连接子与生理活性物质的化合物或其盐、以及其制造方法
US5863900A (en) Lhrh antagonists
Alsenz et al. Oral absorption of peptides through the cobalamin (vitamin B12) pathway in the rat intestine
CN113039194A (zh) 具有免疫调节特性的肽
JP4566406B2 (ja) Ｇｉｔ輸送受容体を標的とするレトロ反転ペプチド及び関連する方法
AU706979B2 (en) LHRH antagonists
CA2398395A1 (en) Conjugates targeted to target receptors