PL177400B1 - Kompleks do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych i sposób wytwarzania kompleksów do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych - Google Patents

Kompleks do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych i sposób wytwarzania kompleksów do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych

Info

Publication number
PL177400B1
PL177400B1 PL94311740A PL31174094A PL177400B1 PL 177400 B1 PL177400 B1 PL 177400B1 PL 94311740 A PL94311740 A PL 94311740A PL 31174094 A PL31174094 A PL 31174094A PL 177400 B1 PL177400 B1 PL 177400B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
complex
polymer
complex according
lys
pyridylthio
Prior art date
Application number
PL94311740A
Other languages
English (en)
Other versions
PL311740A1 (en
Inventor
Gregory J. Russell-Jones
Steven W. Westwood
Alison R. Gould
Bernard V. Mcinerney
Original Assignee
Biotech Australia Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biotech Australia Pty Ltd filed Critical Biotech Australia Pty Ltd
Publication of PL311740A1 publication Critical patent/PL311740A1/xx
Publication of PL177400B1 publication Critical patent/PL177400B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polymerisation Methods In General (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Ink Jet Recording Methods And Recording Media Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
  • Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Dental Preparations (AREA)

Abstract

1. Kompleks do doustnego dostarczania leków peptydowych lub bialkowych o wzo- rze ogólnym (V-Q)n -P-(Q'-A)m w którym V oznacza nosnik, który bedzie wiazal sie z naturalnym czynnikiem we- wnetrznym (IF), wybrany sposród witaminy B1 2 (VB1 2 ) i jej analogów; n oznacza molowy stopien podstawienia kompleksu przez V i stanowi liczbe od 1,0 do 10; P oznacza farmaceutycznie dopuszczalny polimer; A oznacza substancje farmaceutycznie czynna, która stanowi biologicznie czynny polipeptyd lub bialko lub jego czesc; m oznacza molowy stopien podstawienia kompleksu przez A i stanowi liczbe wiek- sza niz 1,0 do 1000; Q i Q' niezaleznie oznaczaja wiazania kowalencyjne lub zwiazek stanowiacy odstep- nik wiazacy V, P i A poprzez wiazania kowalencyjne. 31. Sposób wytwarzania kompleksu do doustnego dostarczania leków peptydowych lub bialkowych, o wzorze ogólnym (V-Q)n -P-(Q'-A)m w którym V oznacza nosnik, który bedzie wiazal sie z naturalnym czynnikiem we- wnetrznym (IF), wybrany sposród witaminy B1 2 i jej analogów; n oznacza molowy stopien podstawienia kompleksu przez V i stanowi liczbe.............. PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest kompleks do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych i sposób wytwarzania takiego kompleksu.
Wynalazek dotyczy doustnego dostarczania peptydowych i proteinowych środków farmaceutycznych z użyciem układu wychwytu witaminy B12 (VB]2).
Dotychczas z niewielkim powodzeniem podawano drogą doustną peptydy takie jak LHRH (hormon uwalniający hormon luteinizujący) i jego analogi lub białka takie jak czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów (GCSF), erytropoetyna (EPO) i insulina oraz środki do leczenia chorób ogólnoustrojowych. Na ogół, ilość białka, która byłaby potrzebna do skutecznego podawania doustnego była 200 do 2000 razy wyższa niż dawka wymagana przy podawaniu pozajelitowym, co sprawia, że podawanie tych środków tą drogą jest bardzo kosztowne. Istnieją dwa zasadnicze powody braku powodzenia. Po pierwsze, środowisko jelitowe ma wysoki stopień aktywności proteolitycznej, która szybko degraduje większość peptydów. Po drugie, podczas gdy mechanizmy wychwytu pojedynczych aminokwasów i dipeptydów są dobrze określone, nie jest znany ogólny mechanizm transportowania polipeptydów przez błonę nabłonka śluzówki do krwiobiegu. Błona ta służy jako bariera zapobiegająca wychwytowi wielu obcych białek spotykanych w tym środowisku. Zatem, chociaż peptyd można zmodyfikować tak aby był odporny na enzymatyczne działanie w jelitach, ma to małe znaczenie, jeżeli peptyd nie może potem przekroczyć bariery śluzówki i wejść do ogólnoustrojowego krwiobiegu.
Najnowsza praca twórcy niniejszego wynalazku, która jest opisana w zgłoszeniu patentowym PCT/AU86/00299 (WO89/O2251) dostarcza sposobu przekraczania bariery śluzówki. Sposób ten wykorzystuje mechanizm wychwytu witaminy B,i (VB,i), w którym Bierze udział naturalny czynnik wewnętrzny (IF). VB,ijest naturalną cząsteczką występującą w pokarmach, która jest aktywnie wychwytywana z jelit. Najpierw wiąże się z czynnikiem' wewnętrznym (IF) w górnej części jelita cienkiego. Kompleks [VB,i-IF] przechodzi w dół jelita 'cienkiego i wiąże się z receptorem IF umieszczonym na powierzchni nabłonka jelita. Następnie cały kompleks [VB,i-lF] jest internalizowany przez endocytozę z udziałem receptora i w jakiś czas później VBn pojawia się w sUrowicy.
W zgłoszeniu PCT/AU86/00299 (WO87/02252) opisane są sposoby modyfikacji chemicznej VBi, polegającej na wprowadzeniu odpowiednich grup funkcyjnych, poprzez które VB,i łączy się z różnymi lekami i peptydowymi/białkowymi środkami farmaceutycznymi. Gdy kompleks [VB,i-środek farmaceutyczny] jest podawany doustnie, możliwe jest wykorzystanie naturalnego układu wychwytu VB,i z udziałem IF, do dostarczenia środka krwiobiegu.
Jednym istotnym ograniczeniem dla takiego ogólnego mechanizmu wychwytu VB,i jest niska dawka środka farmaceutycznego, która może być dostarczana pacjentowi z pokarmem. Dawka jest wprost proporcjonalna do ilości VB,i, która może być przyjęta w pokarmie. W przypadku myszy i szczurów można dostarczyć tylko 20-40 pmoli środka farmaceutycznego na dawkę, natomiast u ludzi ilość ta może wynosić około 2 nmol. Taki poziom wychwytu jest wprawdzie wystarczający aby dostarczyć farmaceutycznie czynną dawkę niektórych substancji, takich jak agoniści LHRH, kalcytonina i EPO, nie jest jednak wystarczający aby dostarczyć białka takie jak GCSF i insulina w ilościach na tyle dużych, aby można było uzyskać efekt farmakologiczny. Byłoby zatem pożądane zwiększenie pojemności wychwytu układu transportującego VB,i co najmniej 10-krotnie'.
Proponowano stosowanie polimerów do podawania substancji czynnych. Znane są polimery z wiszącymi grupami bocznymi związanymi z łańcuchem głównym poprzez odstępniki zawierające aromatyczne wiązania diazowe. Wiele z tych polimerów stosuje się do uwalniania wiszących grup bocznych po rozszczepieniu wiązania diazowego przez azoreduktazy uwalniane w okrężnicy przez bakterie. Okazało się jednak, że polimery te nie są odpowiednie do dostarczania leków ogólnoustrojowych po podaniu doustnym, ponieważ kompeksy polimerlek nie są absorbowane z jelita w stanie nienaruszonym, ale lek z nich jest dostarczany do okrężnicy po rozszczepieniu wiązania diazowego przez enzymy w okrężnicy. Małe ilości uwolnionego leku mogą ewentualnie dostać się do krwiobiegu, ale są to ilości o małym znaczeniu praktycznym.
177 400
Proponowano także polimery, z którymi można skoniugować leki cytotoksyczne. Polimery te są celowane na komórki rakowe dzięki użyciu specyficznych przeciwciał lub reszt cukrowych. Gdy lek-polimer osiągnie docelową tkankę, kompleks ulega endocytozie przez docelową komórkę i uwalniana jest grupa wisząca poprzez działanie enzymów lizosomalnych lub przez rozszczepienie wiązań disulfidowych wiążących lek przez wewnątrzkomórkowy glutanion. Przy doustnym podawaniu takich kompleksów nie otrzymano jednak znaczącego wychwytu kompleksu lek-polimer ze światła jelita do krwiobiegu.
Kompleks według wynalazku, który stanowi koniugat VBl2-polimer-lek, odpowiedni do doustnego dostarczania leków peptydowych i białkowych wykorzystuje się do wychwytu wyżej opisany układ transportu VB12 i ma tę dodatkową zaletę, że poprzez ten mechanizm może być dostarczona zwiększona ilość środka farmaceutycznego.
Kompleks ma wzór ogólny (V-Q)n -P-(Q'-A)m w którym V oznacza nośnik, który będzie wiązał się z naturalnym czynnikiem wewnętrznym (IF), wybrany spośród witaminy Bi i jej analogów;
n oznacza molowy stopień podstawienia kompleksu przez V i stanowi liczbę od 2,0 do 2 0;
P oznacza farmaceutycznie dopuszczalny polimer;
A oznacza substancję farmaceutycznie czynną, którą stanowi biologicznie czynny polipeptyd lub białko lub jego część;
m oznacza molowy stopień podstawienia kompleksu przez A i stanowi liczbę większą niż 2,0 do 1000;
Q i Q' niezależnie oznaczają wiązania kowalencyjne lub związek stanowiący odstępnik („spacer”) wiążący V, P i A poprzez wiązania kowalencyjne.
Opis korzystnych wykonań wynalazku
Polimer P, zgodnie z wynalazkiem, może być dowolnym polimerem farmaceutycznie dopuszczalnym. Polimer jest zdolny do połączenia się z co najmniej jedną cząsteczką nośnika i co najmniej jedną, ale korzystnie z wieloma, cząsteczkami substancji czynnej.
Polimer P może być polimerem ulęgającym degradacji biologicznej, takim jak polimer węglowodanowy lub polimer e aminokwasowy ulegający takiej biodegradacji. Polimer może też być polimerem nie ulegającym biodegradacji i w takim przypadku korzystnie zawiera ulęgające degradacji biologicznej boczne łańcuchy, które pozwalają na kowalencyjne wiązanie z substancją czynną.
Polimery odpowiednie na podstawienia za pomocą VB,i i modyfikacji obejmują poli[N-(2-hydroksypropylo)-metakrylamid], dekstran, siarczan chondroitanu, rozpuszczalne w wodzie poliuretany w wytworzone przez kowalencyjne wiązanie glikolu polietylenowego (PEG) z lizyną, polikwas glutaminowy, poli(hydroksypropylo-glutaminę) i polipeptydy o rozgałęzionych łańcuchach utworzone przez podwójną modyfikację grup α - i ε-aminowych lizyny podczas syntezy peptydów. Takie polimery mogą mieć wiele końców aminowych, z którymi można koniugować większą ilość środków farmaceutycznych lub leków, które mają być dostarczone. Polimery mogą być także wytworzone z wielu cząsteczek cysteiny, które dostarczają wolnych grup tiolowych lub z wielu cząsteczek glutaminianu lub asparaginianu, które dostarczają wolnych grup karboksylowych do koniugacji z użyciem odpowiednich karbodiimidów. Podobnie polimer może zawierać wiele reszt histydynowych lub tyrozynowych do koniugacji. Gdy polimer jest rozgałęzionym polipeptydem może być jeszcze dalej modyfikowany aby wprowadzić grupy funkcyjne do sprzęgania z substancją czynną.
Przykładami odpowiednich polimerów są polisacharydy, w tym dekstran, insulina, celuloza, skrobia i ich pochodne; siarczan chondroitanu, poli[N-(2-hydroksypropylo)metakrylamid] i ich pochodne, kopolimer styrenu i bezwodnika maleinowego, kopolimer eteru diwinylowego i bezwodnika maleinowego, polilizyna, polikwas glutaminowy, poli((hydroksypropyloglutamina), polikwas mlekowy, rozpuszczalne w wodzie poliuretany wytworzone przez kowalencyjne wiązanie PEG z lizyną lub innymi aminokwasami i polipeptydy o rozgałęzionym łańcuchu.
Jeżeli polimer jest rozgałęzionym polipeptydem, może korzystnie mieć wzór ogólny o sekwencji:
177 400 (R516-Lysg-R48-Lys4-R34-Lys2-R22-Lys)n-R'-COOH, w którym n stanowi liczbę 1 do 17, R1 oznacza dowolną sekwencję od 6 do 6θ aminokwasów, R2, R3, R4 i R5, każdy niezależnie, oznacza dowolną sekwencję od 0 do 6 aminokwasów, pod warunkiem, że nie wszystkie R2, R3, R4 i R5 oznaczają sekwencję 0 aminokwasów, a polimer może kończyć się w dowolnej pozycji wewnątrz nawiasów. Niektóre przykłady polimerów o tym wzorze ogólnym obejmują polipeptydy o sekwencji (Gly4-Lys2-Ser2-Lys)5-Ala-COOH i (Gly,i-Lys8-Lys4-His4-Glu4-Lys2Lys)-Gly5-Cys-COOH. Końcowe grupy aminowe mogą być jeszcze w razie potrzeby modyfikowane chemicznie aby umożliwić wiązanie z substancjami czynnymi.
Nośnik V pochodzi od witaminy B' (VB,i) lub jej analogu, który będzie wiązał się z naturalnym czynnikiem wewnętrznym (iF). Nośnik może być także modyfikowany chemicznie, aby umożliwić wiązanie z polimerem.
Odpowiednie analogi VB,i, które przygotowuje się przed koniugacją z polimerem, obejmują dowolny wariant lub pochodną VB,i (cyjanokobalaminy), które wykazują aktywność wiązania z czynnikiem wewnętrznym. Korzystne analogi VBn obejmują także akwokobalaminę, adenozylokobalaminę, metylokobalaminę, hydroksykobalaminę, karbanalid cyjanokobalaminy i 5-metoksybenzylocyjanokobalaminę [(5-MeO)CN-Cbl] oraz ich analogi desdimetylowe, monoetyloamidowe i metyloamidowe. Inne analogi obejmują alkilokobalaminy, w których łańcuch alkilowy jest związany z pierścieniem korinowym przez bezpośrednie wiązanie kowalencyjne CoC. Inne analogi obejmują chlorokobalaminę, sulfitokobalaminę, nitrokobalaminę, tiocyjanianokobalaminę, pochodne benzimidazolocyjanokobalaminy, takie jak 5,6-dichlorobenzimidazolowa, 5-hydroksybenzimidazolowa, trimetylobenzimidazolowa oraz adenozylocyjanokobalaminę [(Ade)CN-Cbl], lakton kobalaminy, laktam kobalaminy i anilidową i etyloamidową pochodną VB,i oraz pochodne kwasów mono- i dikarboksylowych VB,i lub jej analogów.'
Korzystne pochodne VB,i obejmują także pochodne kwasów mono-, di i trikarboksylowych lub pochodne propionamidowe VB,'. Nośniki mogą także obejmować analogi VB,i, w których kobalt jest zastąpiony cynkiem lub niklem. Pierścień korinowy VB,i lub jej analogów może być podstawiony dowolnym podstawnikiem, który nie wpływa na wiązanie się z IF i takie pochodne VB,i lub jej analogi są częścią wynalazku. Inne pochodne VB,i lub jej analogi, które zawierają grupę funkcyjną zdolną do reagowania ze związkiem-odstępnikiem, także stanowią część wynalazku. Inne pochodne i analogi witaminy B,i są omówione w pracy Z. Schneidera i A. Stroińskiego, Comprehensive B' (Walter De Gruyter; Berlin, NY, 6987).
Farmaceutycznie czynną substancję A stanowi biologicznie czynny polipeptyd lub białko lub jego część. Np. może to być hormon, czynnik wzrostu, interleukina, cytokiny, limfokiny lub substancje podobne. Korzystne substancje czynne obejmują GCSF, EpO, LHRH, interferon lub biologicznie czynne ich analogi, części lub pochodne tych substancji, kalcytoninę, hormon uwalniający tyreotropinę (TRH), wazopresynę, oksytocynę, insulinę, hormon wzrostu, somatostatynę, czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów (GMCSF), czynnik wzrostu komórek pnia (SCGF), CGRP lub ich biologicznie czynne analogi lub pochodne powyższych substancji.
Przykłady typowych substancji dostarczanych zgodnie z wynalazkiem obejmują substancje czynne, takie jak hormony i bioaktywne peptydy (oraz ich analogi i pochodne), takie jak LhrH, wazopresyna, oksytocyna, insulina, interferon, somatotropina, somatostatyna, erytropoetyna, czynniki stymulujące kolonizację (GCSF, GMCSF, CSF-czynnik pobudzający wzrost kolonii), surowicza gonadotropina ciężarnej klaczy (PMSG), HCG, inhibina, inhibitor aktywatora plazminogenu typu 2 (PAI-2).
Dalsze przykłady substancji czynnych obejmują polipeptydy takie jak insulina, somatostatyna, pochodne somatostatyny (patenty USA nr nr 4 087 390,4 093 573,4 100 117 i 4 253 398), hormony wzrostu, prolaktyna, hormony adrenokortykotropowe (ACTH), hormon melanotropowy (MSH), hormon uwalniający hormony tarczycy (TRH), jego sole i pochodne (patenty USA nr nr 3 957 247 i 4 600 152), hormon tyreotropowy (TSH), hormon luteinizujący (LH), folikulostymulina (FSH), wazopresyna, pochodne wazopresyny [desmopresyna (Folia Endocrinologica Japonica 54, nr 5, str. 676-691 (1978)], oksytocyna, kalcytonina, parathormon, glukagon, gastryna, sekretyna, pankreozymina, cholecystokinina, angiotensyna, laktogen
177 400 z łożyska ludzkiego, ludzka gonadotropina kosmówkowa (HCG), enkefalina, pochodne enkefaliny [patent USA nr 4 277 394, publikacja europejskiego zgłoszenia patentowego nr 315 67], endorfina, kiotorfina, interferony (α,β,γ), interleukiny (I, II i III), tuftsyna, tymopoetyna, tymozyna, tymostymulina, czynnik humoralny grasicy (TFH), surowiczy czynnik grasicy (FTS) i jego pochodne (patent USA nr 4 229 438) i inne czynniki grasicy [Medicine in Progress, 125, nr 10, str. 835-843 (1983)], czynnik martwicy nowotworu (TNF), czynnik stymulujący kolonizację (CSF), motylina, dinorfina, bombezyna, neurotensyna, ceruleina, bradykinina, urokinaza, asparaginaza, kalikreina, analog i antagonista substancji P, czynnik wzrostu nerwu, czynniki krzepnięcia krwi VIII i IX, chlorek lizozymu, polimiksyna B, kolistyna, gramicydyna, bacytracyna, peptydy stymulujące syntezę białek (patent brytyjski nr 8232082), czynnik hamujący czynność żołądka (GIP), czynnik wazoaktywny jelitowy (VIP), płytkowo-pochodny czynnik wzrostowy (PDGF), czynnik hormonu wzrostu (GRF, somatokrynina), białko morfogeniczne kości (BMP), epidermalny czynnik wzrostu (EGF) itd.
Jeżeli substancją czynną jest np. GCSF, może on być związany z polimerem za pomocą związku odstępnika zawierającego wiązanie disulfidowe. W tym przypadku wiązanie disulfidowe może być utworzone z ukrytą grupą tiolową cysteiny w pozycji 17 w łańcuchu polipeptydowym GCSF.
Gdy substancją czynnąjest analog LHRH, może to być ANTIDE lub analog ANTIDE. ANTIDE jest liniowym dekapeptydem zawierającym kilka nie występujących naturalnie aminokwasów i/lub D-aminokwasów obok trzech reszt L-aminokwasów. Jego N-koniec jest acetylowany a C-koniec amidowany. ANTIDE ma następującą sekwencję:
(N(Ac)-D-Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys(Nic), D-Lys(Nic), Leu, Lys(iPr), Pro, D-Ala-NH2 [Nal(2) oznacza 3-(2-naftylo)alaninę; Phe(p-Cl) oznacza 3-(4-chlorofenylo)alaninę; Pal(3) oznacza 3-(3-pirydylo)alaninę; Lys(Nic) oznacza N-nikotynoilolizynę; Lys-(iPr) oznacza N-izopropylolizynę],
W ANTIDE-Ι w pozycji 6 występuje reszta D-Lys, a nie D-Lys(Nic); w ANTIDE-2 w pozycji 5 występuje reszta Lys, a nie Lys(Nic); a w ANTIDE-3 w pozycji 8 występuje reszta Lys, a nie Lys(iPr).
Gdy substancją czynną jest analog LHRH, może to być histrelina, D-Lys6-LHRH, D-Lys6-LHRH-etyloamid lub analogi tych substancji.
Związki odstępniki Q i Q' występują ewentualnie. Gdy nie występują, wówczas nośnik V i/lub substancja czynna A są związane z polimerem P przez bezpośrednie wiązanie kowalencyjne. Odstępniki wprowadza się albo aby poprawić powinowactwo czynnika wewnętrznego kompleksu VB,i albo aby ominąć problemy w sprzęganiu nośnika, V i/lub substancji czynnej A, wynikające z niekorzystnych interakcji sterycznych między V /lub A z polimerem P lub aby zwiększyć bioaktywność A w kompleksie.
Związki odstępniki mogą także działać jako środki wiążące będąc dwufunkcyjnymi związkami z wybranymi grupami funkcyjnymi na każdym końcu, które przereagowują z odpowiednimi grupami funkcyjnymi, znajdującymi się w polimerze oraz w cząsteczce nośnika VB,i i/lub w substancjach farmaceutycznie czynnych.
Związek odstępnik Q i/lub Q' korzystnie zawiera ewentualnie podstawioną nasyconą lub nienasyconą, rozgałęzioną lub liniową grupę Ci-C50alkilenową, cykloalkilenową lub aromatyczną, ewentualnie z jednym lub więcej atomami węgla w łańcuchu zastąpionymi przez N, 0 lub S i w której ewentualnie podstawniki są wybrane spośród grupy karbonylowej, karboksylowej, hydroksylowej, aminowej i tiolowej.
Odstępniki nadające się do koniugacji środka farmaceutycznego (A) lub nośnika (V) z matrycą polimerową (P) obejmują suberynian disukcynimidylu (DSS), suberynian bis(sulfosukcynimidyl) (bSS), bis(sukcynimidylobursztynian) glikolu etylenowego (EGS), bis (sulfosukcynimidylobursztynian) glikolu etylenowego (Sulfo-EGS), kwas paminofenylooctowy, ditio-bis(sukcynimidylopropionian) (DSP), 3,3'ditiobis(sulfosukcynimidylopropionian) (DTSSP), winian disukcynimidylu (DST), winian disulfosukcynimidylu (sulfo-DST), bis[2-(sukcynimidoksykarbonyloksy)-etyleno]sulfon (BSOCOES), bis[2-(sulfosukcynimidoksykarbonyloksy)-etyleno]sulfon (Sulfo-BSOCOES), dichlorowodorek adypimi177 400 danu dimetylu (DMA), dichlorowodorek pimelimidanu dimetylu (DMP), dichlorowodorek suberimidanu dimetylu (DMS).
We wzorze kompleksu n, który oznacza średni molowy stopień substytucji V w kompleksie, wynosi od 1,0 do 10. Korzystnie, n jest w zakresie 1,0-1,2. Idealnie, polimer jest związany z 1 cząsteczką nośnika V, ale ponieważ polimer ma nieokreśloną ściśle wielkość i/lub strukturę, liczba n oznacza średnią statystyczną. We wzorze kompleksu „m”, które oznacza średni molowy stopień substytucji A w kompleksie, stanowi liczbę od co najmniej 1,0 do 1000. W celu wzmocnienia (amplifkacji) wychwytu substancji czynnej m powinno być możliwie największe, idealnie powinno być w zakresie od 10 do 100. „m” także stanowi statystyczną średnią i z polimerem będą się wiązały liczby czynnych cząsteczek (A), z uwagi na odmiany struktury polimerycznej P.
Wynalazek dotyczy kompleksu, który zawiera więcej niż jedną cząsteczkę substancji czynnej związaną z polimerem, który jest związany z co najmniej jedną cząsteczką nośnika, którą jest cząsteczka VB12 lub jej analogu, w którym to kompleksie zdolność nośnika do ulegania reakcjom wiążącym niezbędnym do wychwytu i transportu VB,i u kręgowców i aktywność substancji czynnej są zasadniczo utrzymane po koniugacji, lub po biologicznym uwolnieniu substancji czynnej z polimeru. Wynalazek obejmuje tez sposób wytwarzania kompleksu o wzorze ogólnym:
(V-Q)n-P-(Q'-A)m, w którym V, Q, P, Q', A, n i m mają znaczenie jak określone uprzednio, który polega na tym, że:
a) poddaje się reakcji A z P i wytwarza się kompleks przejściowy, który następnie poddaje się reakcji z V;
b) poddaje się reakcji V z P i wytwarza się kompleks przejściowy, który następnie poddaje się reakcji z A;
c) przeprowadza się proces jak a) lub b), w którym stosuje się jeden lub więcej z V, P lub A zmodyfikowanych przed sprzęganiem z innymi reagentami, tak aby zawierały co najmniej jedną grupę funkcyjną zdolną do tworzenia wiązania chemicznego lub
d) poddaje się reakcji jeden lub dwa V, P lub A z Q i/lub Q' przed sprzęganiem z innymi reagentami.
Ogólnie, sposób może obejmować jeden lub więcej następujących etapów:
a) reakcję substancji czynnej z polimerem i wytworzenie wymienionego kompleksu;
b) chemiczną modyfikację substancji czynnej w celu wprowadzenia co najmniej jednej grupy funkcyjnej zdolnej do tworzenia wiązania chemicznego i reakcję substancji czynnej i polimeru z wytworzeniem kompleksu;
c) chemiczną modyfikację nośnika w celu wprowadzenia co najmniej jednej grupy funkcyjnej zdolnej do tworzenia wiązania chemicznego i reakcję nośnika i polimeru z wytworzeniem kompleksu;
d) chemiczną modyfikację substancji czynnej i polimeru w celu wprowadzenia grup funkcyjnych zdolnych do tworzenia wiązania chemicznego i reakcję substancji czynnej i polimeru z wytworzeniem kompleksu;
e) reakcję substancji czynnej z co najmniej jednym środkiem sieciującym i reakcję substancji czynnej z polimerem z wytworzeniem kompleksu;
f) reakcję nośnika z co najmniej jednym środkiem sieciującym i reakcję polimeru i nośnika z wytworzeniem kompleksu;
g) reakcję substancji czynnej i polimeru z co najmniej jednym środkiem sieciującym i reakcję substancji czynnej i polimeru z wytworzeniem kompleksu.
h) reakcję substancji czynnej bezpośrednio z polimerycznym podłożem i wytworzenie produktu przejściowego zawierającego wiele cząsteczek substancji czynnej związanych z polimerem i następnie sprzęganie produktu przejściowego polimer-substancja czynna z jedną lub więcej cząsteczką nośnika;
i) sprzęganie co najmniej jednej cząsteczki nośnika bezpośrednio z podłożem polimerycznym i wytworzenie produktu przejściowego zawierającego co najmniej jedną cząsteczkę nośnika związaną z polimerem i następnie reakcję substancji czynnej z produktem przejściowym polimer-nośnik z wieloma cząsteczkami substancji czynnej.
177 400
Wytworzony produkt przejściowy polimer-substancja czynna zawiera jedną lub więcej cząsteczek substancji czynnej i nadaje się do sprzęgania z nośnikiem dając kompleks zdolny do zwiększonego dostarczania substancji czynnej.
W jednym wykonaniu wynalazku wiązanie łączące środek farmaceutyczny lub nośnik z polimerem jest wiązaniem disulfidowym. W innym wykonaniu jest to wiązanie estrowe, a w jeszcze innych wiązanie y-glutamylo-e-lizyna. Może to być także wiązanie diazowe. W korzystnym wykonaniu kompleks obejmuje wiele cząsteczek GCSF związanych wiązaniem disulfidowym przez reakcję z (ditiopirydylo-propionamido)dodecyloaminową pochodną polimeru. W innym korzystnym wykonaniu kompleks obejmuje wiele cząsteczek GCSF związanych wiązaniem disulfidowym z pochodną (ditiopirydylo-propionamido)dodecylosuberyloheksylową polimeru.
Stwierdzono, że można zsyntetyzować trzy analogi ANTIDE (antagonista LHRH), które są odpowiednie do koniugacji z matrycą polimerową mianowicie:
N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys(Nic), D-Lys, Leu, Lys(iPr), Pro, D-AlaNH2 (D-Lys6ANTIDE lub ANTIDE-2);
N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys, D-Lys(Nic), Leu, Lys(iPr), Pro, D-AlaNH2 (Lys5-ANTIDE lub ANTIDE-2); i
N-Ac-D-Nal(2), D-Phe(pCl), D-Pal(3), Ser, Lys(Nic), D-Lys(Nic), Leu, Lys, Pro, D-Ala-NH2 (Lys8-ANTIDE lub ANTIDE-3).
Opisany powyżej kompleks można stosować w postaci środka farmaceutycznego razem z farmaceutycznie dopuszczalnymi nośnikami lub substancją pomocniczą, które są dobrze znane w technice i opisane np. w Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, wyd. 20). Środek może mieć postać kapsułki, może być w postaci o przedłużonym działaniu w postaci eliksiru, żelu, pasty lub w postaci z powłoką rozpuszczalną w jelitach, lub w innej dowolnej postaci dobrze znanej w technice.
Kompleksy i środki zawierające takie kompleksy można podawać ludziom lub zwierzętom, ewentualnie w połączeniu z jednym lub więcej nośnikami i/lub substancją pomocniczą. W kontekście sposobu leczenia przez terapeutycznie skuteczną ilość kompleksu według wynalazku rozumie się ilość, która leczy dany stan chorobowy. Skuteczna ilość zależy od charakteru leczonej choroby, oceny leczącego lekarza lub weterynarza i innych czynników, takich jak wiek, waga i/lub płeć leczonego osobnika. Np. skuteczna ilość środka farmaceutycznego może zawierać od 2 nanograma do 10 g kompleksu według wynalazku. Korzystnie kompleks według wynalazku nadaje się do stosowania w leczeniu różnych stanów chorobowych, które odpowiadają na podawanie peptydowych środków farmaceutycznych.
Przykład 1. (Synteza multipolimeru lizyny 2 (MLP1)
Multipolimer lizyny MLP1) o wzorze ogólnym: (Gly4-Lys2-Ser2-Lys)5-Ala-COOH zsyntetyzowano w syntezatorze peptydów Applied Biosystems. Bardziej dokładnie można go określić jako (Gly4-Lys2-Ser2-Lys)4(Gly4-Lys2-Ser2-Lys)-Ala-COOH. Wzór (Gly4-Lys2-SEr2Lys)5-Ala-CO0H można przedstawić następująco:
Gly—CONH <cU
Gly—CONH CONH— Ser—CONH
Gly—CONH
Gly-CONH (CHjh ^CONH —Ser—CONHCONH —.
Ala—COOH gdzie przedstawiona jest bardziej dokładnie struktura. Jeżeli istnieje potrzeba, końcowe grupy aminowe w glicynie można dalej modyfikować.
177 400
Przykład 2. (Synteza multipolimeru lizyny 2 (MLP2)
Multipolimer lizyny MLP2) o wzorze ogólnym: (Gly,i-Lysg-Lys4-His4-Glu4-Lys2-Lys)Giy5-Cys-COOH zsyntetyzowano w syntezatorze peptydów Applied Biosystems. Bardziej precyzyjnie strukturę można przedstawić następująco:
His—Głu.
dy—Lys-Lys—Hłs—Glu
GlyGly—Ly Gly—
Lys—Gly- -Cys—COOH
Przykład 3. Wytwarzanie pochodnej adypilohydrazydowej karboksyianu eVB,i (eVBn = izomer witaminy B,i, kwas e-monokarboksylowy).
Pochodną adypilohydrazydową karboksyianu eVB,i wytworzono przez koniugację końcowych grup karboksylowych polimeru przez reakcję z (2-etylo-3-[3-dimetyloaminopropyio]karbodiimidem (EDAC). Stosowane adypilohydrazydowe pochodne można przedstawić następującą (skróconą) strukturą chemiczną:
adypilo-hydrazydo-eVB i (=eVB,i-CONHNHCO(CH2)4CONHNH2).
Reagent ten łatwo wytworzono w jednym etapie z kwasu karboksylowego eVB,i przez dodanie EDAC do mieszaniny kwasu i 20-krotnego nadmiaru adypilohydrazydu, tj.:
równ. adypilohydrazydu eVB,iCO2H -> eVB,iCONHNHCO(CH2)4CONHNH2
EDAC
Przykład 4. Wytwarzanie koniugatów polimer-ANTIDE z użyciem nierozszczepialnych homobifunkcyjnych środków sieciujących.
Poprzednie doświadczenia wykazują, że bezpośrednia koniugacja pomiędzy ANTIDE-2 i ANTlDE-3 i VB,i daje koniugaty o znacznie zmniejszonej bioaktywności w porównaniu z ANTIDE. Duża bliskość VB,i i ANTIDE przy takiej strategii koniugacji przypuszczalnie przeszkadza przestrzennie w wiązaniu się ANTlDE z receptorem LHRH. W celu zmniejszenia efektu sterycznego, który jest widoczny przy bezpośredniej koniugacji, muszą być użyte bifunkcyjne, nie ulegające degradacji biologicznej środki wiążące aby wytworzyć kowalencyjne kompleksy pomiędzy dwoma polimerami i ANTIDE-2 i 3. Na przykład, ANTIDE-1 lub ANTlDE-3 poddawano reakcji z 2,5-molowym nadmiarem suberynianu disukcynimidylu (DSS) przez 20 minut w temperaturze pokojowej (TP). Następnie dodano MLP1 lub MLP2 i reakcję prowadzono przez noc. Skoniugowany produkt oczyszczono metodą chromatografii na Sephadexie G-25 w 10% kwasie octowym, a następnie metodą HPLC z odwróconymi fazami RP-HPLC). Koniugaty polimer-anilido-ANTIDE-l i ANTlDE-3 wytworzono przez reakcję MLP2 lub MLP2 z kwasem p-aminofenylooctowym z użyciem EDAC/NHS (NHS = Nhydroksysukcynimid). Następnie polimer-anilid skoniugowano z ANTIDE-2 i ANTIDE-3 stosując DSS. Skoniugowany produkt oczyszczono metodą chromatografii na G-25 z użyciem 20% kwasu octowego, a następnie metodą RP-HPLC (ciekła chromatografia wysokosprawna z odwróconymi fazami).
177 400 eVB,i związano z kompleksami polimer-ANTIDE przez reakcję adypilo-hydrazydylo”e”VB,i z kompleksem z użyciem EDAC. Produkt reakcji oczyszczono metodą R.P-HPLC.
Przykład 5. Wytwarzanie koniugatów MLP-ANTIDE z użyciem tiolowych rozszczepialnych środków sieciujących.
Wytworzono koniugaty, w których łącznik kowalencyjny zawierał ulegające degradacji biologicznej wiązanie disulfidowe, które ulegnie redukcji in vivo, przypuszczalnie przez glutation w surowicy. Krótko mówiąc, MLP1 lub MLP2 poddano reakcji z 3-(2-pirydylotio)propionianem N-sukcynimidylu (SPDP). Produkt ditiopirydyl-MLP (DTP-MLP) oczyszczono metodą RP-HPLC. Wolny tiol wprowadzono do ANTiDE-1 przez reakcję z SPDP. Następnie grupę ditiopirydylową poddano redukcji merkaptoetanolem i produkt oczyszczono RP-HPLC. Podobnie, wprowadzono wolny tiol do ANTIDE-3 przez reakcję z iminotiolanem. Tiolowany produkt (SH-HN+ ANTIDE-3) oczyszczono metodą RP-HPLC. Wiązanie disulfidowe w koniugatach MLP-ANTIDE-1 i MLP-ANTIDE-2 uzyskano przez reakcję tiolowanej pochodnej ANTIDE z DTP-MLP w 2,5% kwasie octowym przez 24 godziny. Skoniugowany produkt oczyszczono metodą chromatografii na Sephadexie G-25, a następnie metodą RP-HPLC.
Vbi2 związano z kompleksami polimer-ANTIDE przez reakcję adypilo-hydrazydylo”e”VB,i z kompleksem z użyciem EDAC. Produkt reakcji oczyszczono metodą RP-HPLC.
Przykład 6. Wytwarzanie koniugatów VB,i-ANTIDE-lizylo-pioliglutaminian z użyciem tiolowych rozszczepialnych środków sieciujących.
Istnieje potrzeba zwiększenia ilości leku lub jego analogu, którą może wychwycić układ transportujący witaminy VB,i poprzez związanie wielu kopii leku z łańcuchem głównym polimeru, z którym jest skoniugowana jedna lub więcej cząsteczek VB,i. Jeden opisany proces dotyczy wytwarzania takiego kompleksu VB,i-lek-polimer z użyciem iminotiolowanego ANTIDE-1 lub D-Lys6LHRH-etyloamidu (DLEA) (SH-HN+ANTIDE-1/DLEA), tiolowanej pochodnej VB,i i DTP-lizylo-poliglutaminianu (DTP = ditiopirydyna): Drugi opisany proces dotyczy wytwarzania kompleksu VB,i-lek-polime w trzech etapach, przez (1) konwersję polisacharydodekstranu do poli(aminoheksylo)dekstranu, (2) reakcję tego produktu z małą ilością estru sukcynimidylowego VB,i i z dużym nadmiarem SPDP i wytworzenie pochodnej [DTPheksylo]x-dekstran-[heksylo-VB,i]y (w której x >> y) i (3) reakcję tego produktu z tiolowanym peptydem, w tych przykładach z iminotiolowanym ANTIDE-1 lub DLEA, i wytworzenie pochodnej [peptyd-ditioheksylo]z-dekstran-[heksyio-VB,i]y (w której z>y).
a) Wytworzenie DPT-iizyio-poiigiutaminianu
Poligiutaminian (100 mg) (ciężar cząsteczkowy 64 600 -70 000; Sigma) poddano reakcji z EDAC (100 mg) i NHS (5θ mg w acetonie) przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Dodano lizyny (400 mg w 4 ml 1%o NaHCO3) i prowadzono reakcję przez noc. Produkt, tj. lizylo-poliglutaminian (LPG) oczyszczano przez ekstensywną dializę do wody destylowanej (DW), następnie poddano liofilizacji.
Pochodną ditiopirydylową LPG otrzymano przez reakcję kwasu ditiopirydylopropionowego (50 mg) z tetrafluoroboranem O-(N-sukcynimidylo)-N,N,N',N''-tetrametylouroniowym (TSTU) (100 mg) i N-diizopropyłoetyloaminą (DIEA; 100 mg) w dimetyloformamidzie (DMF) w ciągu 1 godziny. Tak wytworzony ester sukcynimidylowy dodano bezpośrednio do 100 mg LPG rozpuszczonego w 4 ml 2% NaHCO3. Reakcję prowadzono przez noc, po czym produkt (DTP-LPG) oczyszczono przez wyczerpującą dializę do DW, po czym zliofiiizowano.
b) Wytwarzanie iminotiolowanego ANTIDE-1
ANTIDE-1 (20 mg) rozpuszczono w 300 μΐ 5% DIEA w DMF zawierających 5 mg EDTA + 5 mg ditiotreitoiu (DTT), który odgazowano pod argonem. Dodano iminotiolanu (20 mg w 50 μΐ DIEA/DMF + 50 μΐ buforu boranowego, 100 mM, pH 8,2) i prowadzono reakcję przez 60 minut, po czym oczyszczono metodą RP-HPLC i liofilizowano.
177 4oo
c) Wytwarzanie iminotiolowanej aminoetyk)-VB,i
AminoetyloeVB,i (20 mg) rozpuszczono w 3θ0 μΐ 5% DIEA w DMF zawierających 5 mg DTT, który odgazowano pod argonem. Dodano iminotiolanu (20 mg w 50 μΐ DIEA/DMF + 50 μΐ buforu boranowego, 100 mM, pH 8,2) i prowadzono reakcję przez 60 minut, po czym oczyszczono metodą RP-HPLC i liofilizowano.
d) Wytwarzanie iminotiolowanej DLEA
DLeA (10 mg) rozpuszczono w 300 μΐ 5% DIEA w DMF zawierających 5 mg EDTA + 5 mg DTT, który odgazowano pod argonem. Dodano iminotiolanu (20 mg w 50 μΐ DIEA/DMF + 50 μΐ buforu boranowego, 100 mM, pH 8,2) i prowadzono reakcję przez 60 minut, po czym oczyszczono metodą RP-HPLC i liofilizowano.
e) Wytwarzanie VB,i-ANTIDE-lizylo-poliglutaminianu.
DTP-LPG rozpuszczono w DW w ilości 20 mg/ml. Iminotiolowaną aminoetylo-VB,i rozpuszczono w DW w ilości 5 mg/ml i dodano do DTP-LPG (1:20 wag./wag.) i pozostawiono do przereagowania na 20 minut w temperaturze pokojowej, po czym podczas mieszania wkroplono iminotiolowany ANTIDE-1 (50 mg/ml w DW). pH mieszaniny reakcyjnej utrzymywano na poziomie 6,5-7,0 za pomocą dodatku Tris-HCl pH 7,0 i octanu sodu pH 5,5. Reakcję prowadzono przez noc, po czym produkt oczyszczono przez dializę i liofilizowano. Skład produktu oznaczono przez analizę aminokwasów i znaleziono 1:5:21, ANTIDE1 :lizyna:glutaminian lub w przybliżeniu 25% wag. ANTIDE.
f) Wytwarzanie VB,i-DLEA-lizylo-poliglutaminianu
DTP-LPG rozpuszczono w DW w ilości 20 mg/ml. Iminotiolowaną aminoetylo-VB,i rozpuszczono w DW w ilości 5 mg/ml i dodano do DTP-LPG (1:20 wag./wag.) i pozostawiono do przereagowania na 20 minut w temperaturze pokojowej, po czym podczas mieszania wkroplono iminotiolowany DLEA-1 (50 mg/ml w DW). pH mieszaniny reakcyjnej utrzymywano na poziomie 6,5-7,0 za pomocą dodatku Tris-HCl pH 7,0 i octanu sodu, pH 5,5. Reakcję prowadzono przez noc, po czym produkt oczyszczono przez dializę i liofilizowano. Skład produktu oznaczono przez analizę aminokwasów i znaleziono 1:3:16, DLEA1 :lizyna:glutaminian lub w przybliżeniu 28% wag. DLEA.
g) Wytwarzanie poli(aminoheksylo)-dekstranu
Roztwór 2 g dekstranu (Dekstran T70, ciężar cząsteczkowy 70 000, Pharmacia) w 20 ml wody destylowanej mieszano w temperaturze pokojowej i dodano roztworu nadjodanu sodu (2,4 g) w wodzie (25 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 godziny i usunięto nadmiar nadjodanu przez dodatek 500 μΐ gliceryny. Mieszaninę reakcyjną dializowano przez 24 godziny w 4°C do 2 x 5 1 wody przefiltrowanej przez filtr Milki Q. Retentat liofilizowano i otrzymano 1,8 g utlenionego dekstranu w postaci białego proszku. Próbkę tego materiału (250 mg) pochłonięto podczas łagodnego ogrzewania w 10 ml buforu octanowego (200 mM, pH 5). Dodano 1,6 -diaminoheksanu (5 ml roztworu 100 mg/ml, pH 7) i mieszano roztwór przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Dodano cyjanoborowodorku sodu (2 x 100 mg) i pozostawiono mieszaninę reakcyjną przez 1 godzinę. W końcu dodano borowodorku sodu (100 mg). Po 5 godzinach reakcji łącznie roztwór przeniesiono do układu dializującego i dializowano w 4°C do 2 x 2 1 wody przefiltrowanej przez Milki Q, retentat zliofilizowano i otrzymano 180 mg poli(aminoheksylo)-dekstranu.
Analiza produktu na zawartość aminy za pomocą próby z TNBS (2,4,6-trinitrobenzenosulfonian) wykazała 14% aminy (= % moli aminy na mol glukozy), co odpowiada w przybliżeniu pięciu wolnym grupom aminowym na łańcuch polimeru.
Gdy powyższą procedurę powtórzono stosując 1 g dekstranu i 2 g nadjodanu sodu w początkowym etapie utleniania, zawartość aminy w końcowym produkcie wynosiła 32%.
Gdy powyższą procedurę powtórzono stosując w drugim etapie 125 mg utlenionego dekstranu i 4 ml roztworu 1,6-diaminoheksanu o stężeniu 100 mg/ml, zawartość aminy w końcowym produkcie wynosiła 24%.
Gdy powyższą procedurę powtórzono stosując w drugim etapie tylko borowodorek sodu, zawartość aminy w końcowym produkcie wynosiła 11%.
177 400
h) Wytwarzanie [DTP-heksyl]x-dekstran-[heksylo-NHCO-VB,i]y
Prep. 1: Próbkę poli(aminoheksylo)-dekstranu (50 mg, zawartość aminy 14%) pochłonięto w 3 ml Buforu boranowego (100 mmoli, pH 8) i dioksanu (1 ml). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej i dodano próbkę estru N-hydroksysukcynimidylowego karboksylanu eVB,i (0,5 mg) w wodzie (100 μΐ). Po 15 minutach dodano roztworu SPDP (9 mg) w 100 μΐ dioksanu. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 60 minut w temperaturze pokojowej i nieprzereagowany SPDP rozłożono dodatkiem 200 μΐ IM roztworu etylenodiaminy. Modyfikowany polimer oddzielono od innych reagentów metodą chromatografii wykluczenia według wymiarów na Sephadexie G-25 stosując jako eluent 5% kwas octowy. Frakcje produktu połączono i liofilizowano i otrzymano 42 mg preparatu VB,i/DTP -modyfikowany dekstran w postaci bladoróżowego proszku.
Prep. 2: Wytworzono polimer bardziej podstawiony VB,i stosując poli(amlnoheksylo)dekstran (20 mg, zawartość aminy 12%), który pochłonięto w 1 ml buforu wodorowęglanowego (loO mmoli, pH 9,5) i dioksanu (100 μΐ). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej i dodano SPDP (2 x 7,5 mg) w 100 μΐ dioksanu. Po 60 minutach dodano w dwóch porcjach estru N-hydroksysukcynimidylowego eVB,i (1 x 0,8 mg, 1 x 1,6 mg) w wodzie (100 μΐ). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 60 minut w temperaturze pokojowej i nieprzereagowany NHS-ester rozłożono za pomocą dodatku kilku kropli roztworu etylenodiaminy. Zmodyfikowany polimer oddzielono od innych reagentów metodą chromatografii wykluczenia według wymiarów na Sephadexie G-25 z elucją 5% kwasem octowym. Frakcje produktu połączono i liofilizowano i otrzymano 13 mg preparatu VB,i/DTP-modyfikowany dekstran w postaci ciemnoczerwonego proszku.
i) Wytwarzanie kompleksu [ANTIDE-1-ditloheksylo]zdekstran-[heksylo-VB,i]y
Roztwór prep. 1: DTP-heksylo]x-dekstran-[heksylo-NHCO-VB,i]ypolimer (l5 mg) pochłonięto w 200 mM/pH 4 Buforu octanowego (3 ml). Dodano krystalicznej Na2EDTA i z roztworu usunięto tlen za pomocą argonu. Dodano roztworu 5 mg Iminotiolowanego ANTIDE-1 w wodzie (100 μΐ) i mieszaninę reakcyjnąmiesz.ano przez 30 minut. Dodano jeszcze 2 x 10 mg tlolowanego peptydu w wodzie (lOo μΐ)' 1 roztwór mieszano przez 16 godzin w temperaturze pokojowej. Polimer skoniugowany, z peptydem oddzielono od innych reagentów metodą chromatografii wykluczenia według' wymiarów na Sephadex1e G-25 z elucją 5% kwasem octowym. Frakcje produktu połączono i ' liofilizowano 1 otrzymano 19,5 mg produktu VBn/DTP-modyfikowany dekstran w postaci bladoróżowego proszku. Określona przez analizę aminokwasów zawartość peptydu w polimerze wynosiła 20% wag., a zawartość VB,i określona przez analizę w nadfiolecie 1 próbę wiązania czynnika' wewnętrznego 1% wag.
j) Wytwarzanie [DLEA- ditioheksylo]zdekstran-[heksylo-VB,i]
Roztwór prep. 2: [DTP-heksylo]x-dekstran-[heksylo-NHCO-VBjiJypolimer (prep. 2, 10 mg) pochłonięto w 200 mM/pH 4 Buforu octanowego (2,5 ml), dodano krystalicznej Na2EDTA.1 ' z roztworu usunięto tlen za pomocą argonu. Dodano roztworu 5 mg Iminotiolowanej DLEA w wodzie (100 μΐ) i mieszano mieszaninę reakcyjną przez 30 minut. Dodano jeszcze 5 ' mg tiolowanego peptydu w wodzie (100 μΐ) 1 roztwór mieszano przez 16 godzin w temperaturze pokojowej. Polimer skoniugowany z peptydem oddzielono od innych reagentów metodą chromatografii wykluczenia według wymiarów na Sephadexie G-25 z elucją 5% kwasem octowym. Frakcje produktu połączono i liofilizowano i otrzymano 5 mg produktu VB,i/DTPmodyfikowany dekstran w postaci różowego proszku. Określona przez analizę aminokwasów zawartość peptydu w polimerze wynosiła 14% wag., a zawartość VB12 określona przez analizę w nadfiolecie 1 próbę wiązania czynnika wewnętrznego 2% wag.
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz.
Cena 4,00 zł.

Claims (35)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Kompleks do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych o wzorze ogólnym (V-Q)n -P-(Q'-A)m w którym V oznacza nośnik, który będzie wiązał się z naturalnym czynnikiem wewnętrznym (IF), wybrany spośród witaminy B,i (VB,i) i jej analogów;
    n oznacza molowy stopień podstawienia kompleksu przez V i stanowi liczbę od 1,0 do 10;
    P oznacza farmaceutycznie dopuszczalny polimer;
    A oznacza substancję farmaceutycznie czynną, którą stanowi biologicznie czynny polipeptyd lub białko lub jego część;
    m oznacza molowy stopień podstawienia kompleksu przez A i stanowi liczbę większą niż 1,0 do 1000;
    Q i Q' niezależnie oznaczają wiązania kowalencyjne lub związek stanowiący odstępnik wiążący V, P i A poprzez wiązania kowalencyjne.
  2. 2. Kompleks według zastrz. 1, w którym co najmniej jeden z Q i Q' oznacza odstępnik zawierający część ulegającą degradacji biologicznej.
  3. 3. Kompleks według zastrz. 2, w którym część ulegająca degradacji biologicznej jest wybrana spośród wiązania disulfidowego, wiązania estrowego, wiązania y-glutamylo-slizynowego lub diazowego.
  4. 4. Kompleks według zastrz. 1, w którym n jest w zakresie od 1,0 do 1,2, a m jest w zakresie od 2 do 200.
  5. 5. Kompleks według zastrz. 1, w którym n jest w zakresie od 1,0 do 1,2, a m jest w zakresie od 10 do 100.
  6. 6. Kompleks według zastrz. 1, w którym P oznacza polimer ulegający degradacji biologicznej.
  7. 7. Kompleks według zastrz. 6, w którym polimer ulegający degradacji biologicznej wybrany jest spośród ulegającego degradacji biologicznej polimeru węglowodanowego lub polimeru aminokwasów.
  8. 8. Kompleks według zastrz. 1, w którym polimer jest polimerem nie ulegającym degradacji biologicznej.
  9. 9. Kompleks według zastrz. 8, w którym polimer nie ulegający degradacji biologicznej zawiera ulegające takiej degradacji boczne łańcuchy, które kowalencyjnie wiążą się z substancją czynną.
  10. 10. Kompleks według zastrz. 1, w którym polimer jest wybrany z grupy obejmującej polisacharydy, w tym dekstran, inulina, celuloza, skrobia i ich pochodne; siarczan chondroitanu, poli[N-(2-hydroksypropylo)metakrylamid] i ich pochodne, kopolimer styrenu i bezwodnika maleinowego, kopolimer eteru diwinylowego i bezwodnika maleinowego, polilizyna, polikwas glutaminowy, poli(hydroksypropyloglutamina), polikwas mlekowy, rozpuszczalne w wodzie poliuretany wytworzone przez kowalencyjne wiązanie glikolu polietylenowego (PEG) z lizyną lub innymi aminokwasami i polipeptydy o rozgałęzionym łańcuchu.
  11. 11. Kompleks według zastrz. 10, w którym polimer jest rozgałęzionym łańcuchem polipeptydowym, ewentualnie zmodyfikowanym przez wprowadzenie wielu grup funkcyjnych służących do sprzęgania substancji czynnej.
  12. 12. Kompleks według zastrz. 11, w którym polimer ma sekwencję:
    (R5ii-Lys8-R4g-Lys4-R34-Lys2-R22-Lys)n-R1-COOH, w której n stanowi liczbę 1 do 17,
    R1 oznacza dowolną sekwencję od 1 do lO aminokwasów, R2, R3, r4 i r5, każdy niezależnie,
    177 400 oznacza dowolną sekwencję od 0 do 6 aminokwasów, pod warunkiem, że nie wszystkie R2, R3, R4 i R5 oznaczają sekwencję 0 aminokwasów, a polimer może kończyć się w dowolnej pozycji wewnątrz nawiasów.
  13. 13. Kompleks według zastrz. 12, w którym polimer ma sekwencję: (Gly4-Lys2-Ser2Lys)5-Ala-COOH.
  14. 14. Kompleks według zastrz. 12, w którym polimer ma sekwencję: (Gly ,6-Lysg-Lys4His4-Glu4-Lys2-Lys)-Gly5-Cys-COOH.
  15. 15. Kompleks według zastrz. 10, w którym jako polimer zawiera poli[N-2-(2hydroksypropylo)-metakrylamid|.
  16. 16. Kompleks według zastrz. 1, w którym związek odstępnik Q i/lub Q' zawiera ewentualnie podstawioną nasyconą lub nienasyconą, rozgałęzioną lub liniową grupę C,C50alkilenową, cykloalkilenową lub aromatyczną ewentualnie z jednym lub więcej atomami węgla w łańcuchu zastąpionymi przez N, O lub S i w której ewentualnie podstawniki są wybrane spośród grupy karbonylowej, karboksylowej, hydroksylowej, aminowej i tiolowej.
  17. 17. Kompleks według zastrz. 16, w którym odstępnik pochodzi od suberynianu disukcynimidylu (DSS), suberynianu bis(sulfosukcynimidyl) (BSS), bis(sukcynimidylobursztynianu) glikolu etylenowego (EGS), bis(sulfosukcynimidylobursztynianu) glikolu etylenowego (Sulfo-EGS), kwasu p-aminofenylooctowego, ditio-bis(sukcynimidylopropionianu) (DSP), winianu disulfosukcynimidylu (sulfo-DST), bis [2-(sukcynimidoksykarbonyloksy)-etyleno]sulfonu (BSOCOES), bis[2(sulfosukcynimidoksykarbonyloksy)-etyleno]sulfonu (Sulfo-BSOCOES), dichlorowodorku adypimidanu dimetylu (DMA), dichlorowodorku pimelimidanu dimetylu (DMP), dichlorowodorku suberimidanu dimetylu (DMS).
  18. 18. Kompleks według zastrz. 16, w którym odstępnik jest odszczepialnym tiolowym związkiem.
  19. 19. Kompleks według zastrz. 18, w którym tiolowy odszczepialny odstępnik pochodzi od 3-(2-pirydylotio)propionianu N-sukcynimidylu (SPDP), iminotiolanu, 6-[3-(2-pirydylotio)propionamido]heksanianu sulfosukcynimidylu (Sulfo-LC-SPDP), 6-[3-(2-pirydylotio)propionamidojheksanianu sukcynimidylu (LC-SPDP), 6-[a-metylo-a-(2-pirydylotio)toluamido]heksanianu sulfosukcynimidylu (Sulfo-LC-SMPT), 1,4-di[3'-(2'-pirydylotio)propionamido]butanu (DPDPB), 4-sukcynimidylooksykarbonylo-a-metylo-a-(2-pirydylotio)toluenu (SMPT), dichlorowodorku 3,3'-ditiobispropionoimidanu dimetylu (DTBP).
  20. 20. Kompleks według zastrz. 1, który jako substancję czynną A zawiera hormon, czynnik wzrostu, interleukinę.
  21. 21. Kompleks według zastrz. 1, który jako substancję czynną A zawiera polipeptyd wybrany spośród LHRH lub interferonu lub jego części lub analogów.
  22. 22. Kompleks według zastrz. 21, który jako analog LHRH zawiera histrelinę lub jej analog. .
  23. 23. Kompleks według zastrz. 21, który jako analog LHRH zawiera D-Lysć-LHRH.
  24. 24. Kompleks według zastrz. 21, który jako analog LHRH zawiera D-Lys6-LHRHetyloamid.
  25. 25. Kompleks według zastrz. 21, który jako analog LHRH zawiera ANTIDE lub analog ANTIDE.
  26. 26. Kompleks według zastrz. 25, który jako analog ANTIDE zawiera D-Lys6-ANTIDE.
  27. 27. Kompleks według zastrz. 25, który jako analog ANTIDE zawiera D-Lysg-ANTIDE.
  28. 28. Kompleks według zastrz. 1 w którym nośnik typu VB,i jest wybrany z grupy obejmującej cyjanokobalaminę, akwokobalaminę, adenozylokobalaminę, metylokobalaminę, hydroksykobalaminę, karbanalid cyjanokobalaminy i 5-metoksybenzylocvjanokobalaminę oraz ich analogi desdimetylowe, monoetyloamidowe i metyloamidowe, oraz koenzym B12, 5'-deoksyadenozylokobalaminę, chlorokobalaminę, sulfitokobalaminę, nitrokobalaminę, tiocyjanianokobalaminę, pochodne benzimidazolocyjanokobalaminy, takie jak 5,6-dichlorobenzimidazolową 5-hydroksybenzimidazolowa, trimetylobenzimidazolowa oraz adenozylocyjanokobalaminę, lakton kobalaminy, laktam kobalaminy i analid, etyloamkkowąi propioinamdo’’wąpoch<odnąVB]i oraz pochodne kwasów mono- i dikarboksylowych VB,, lub jej analogów lub alkilokobalaminy, w których łańcuch alkilowy jest związany z pierścieniem nośnika przez bezpośrednie wiązanie kowalencyjne CoC.
    177 400
  29. 29. Kompleks według zastrz. 1, w którym nośnik stanowi analog witaminy Bi, w którym Co jest zastąpiony przez Ni lub Zn.
  30. 30. Kompleks według zastrz. 28, w którym nośnik stanowi analog witaminy B,i, w którym pierścień korinowy jest podstawiony podstawnikiem, który nie wpływa na wiązanie z czynnikiem wewnętrznym.
  31. 31. Sposób wytwarzania kompleksu do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych, o wzorze ogólnym (V-Q)n -P-(Q'-A)m w którym V oznacza nośnik, który będzie wiązał się z naturalnym czynnikiem wewnętrznym (IF), wybrany spośród witaminy B,i i jej analogów;
    n oznacza molowy stopień podstawienia kompleksu przez V i stanowi liczbę od 1,0 do 10;
    P oznacza farmaceutycznie dopuszczalny polimer;
    A oznacza substancję farmaceutycznie czynną, którą stanowi biologicznie czynny peptyd lub białko lub jego część;
    m oznacza molowy stopień podstawienia kompleksu przez A i stanowi liczbę większą niż 1,0 do 1000;
    Q i Q' niezależnie oznaczają wiązania kowalencyjne lub związek stanowiący odstępnik wiążący V, P i A poprzez wiązania kowalencyjne, znamienny tym, że przeprowadza się:
    a) reakcję A z P z wytworzeniem kompleksu przejściowego i następnie reakcję kompleksu przejściowego z V lub
    b) reakcję V z P z wytworzeniem kompleksu przejściowego i następnie reakcję kompleksu przejściowego z A lub
    c) proces według a) lub b), w którym jeden lub więcej z V, P lub A jest modyfikowanych przed sprzęganiem z innymi reagentami w celu wprowadzenia co najmniej jednej grupy funkcyjnej zdolnej do tworzenia wiązania chemicznego lub
    d) reakcję jednego lub dwóch reagentów spośród V, P lub A z Q i/lub Q', przed sprzęganiem z innymi reagentami.
  32. 32. Sposób według zastrz. 31, znamienny tym, że Q i/lub Q' zawiera ewentualnie podstawioną nasyconą lub nienasyconą, rozgałęzioną lub liniową grupę C,-C50alkilenową, cykloalkilenową lub aromatyczną, ewentualnie z jednym lub więcej atomami węgla w łańcuchu zastąpionymi przez N, O lub S i w której ewentualnie podstawniki są wybrane spośród grupy karbonylowej, karboksylowej, hydroksylowej, aminowej i tiolowej.
  33. 33. Sposób według zastrz. 31, znamienny tym, że odstępnik Q' stanowi odszczepialny środek sieciujący zawierający wiązanie disulfidowe.
  34. 34. Sposób według zastrz. 3l, znamienny tym, że stosuje się odstępnik wybrany spośród suberynianu disukcynimidylu (DSS), suberynianu bis(sulfosukcynimidyl) (BSS), bis(sukcynimidylobursztynianu) glikolu etylenowego (EGS), bis(sulfosukcynimi-dylobursztynianu) glikolu etylenowego (Sulfo-EGS), kwasu p-aminofenylooctowego, ditio-bis(sukcynimidylopropionianu) (DSP), 3,3'-ditiobis(sulfosukcynimidylopropionianu) (DTSSP), winianu disukcynimidylu (DST), winianu disulfosukcynimidylu (sulfo-DST), bis[2-)sukcynimidoksykarbonyloksy)-etyleno] sulfonu (BSOCOES), bis[2-(sulfosukcynimido-ksykarbonyloksy)etylenojsulfonu (Sulfo-BSOCOES), dichlorowodorku adypimidanu dimetylu (DMA), dichlorowodorku pimelimidanu dimetylu (DMP), dichlorowodorku suberimidanu dimetylu (DMS).
  35. 35. Sposób według zastrz. 31, znamienny tym, że stosuje się odstępnik wybrany spośród 3-(2-pirydylotio)propionianu N-sukcynimidylu (SPDP), iminotiolanu, 6-[3-(2-pirydylotio)propionamido]heksanianu sulfosukcynimidylu (Sulfo-LC-SPDP), 6-[3-(2-pirydylotio)propionamido]heksanianu sukcynimidylu (LC-SPDP), 6-[a-metylo-a-(2-pirydylotio)toluamido]heksanianu sulfosukcynimidylu (Sulfo-LC-SMPT), 1,4-di[3'-(2'-pirydylotio)propionamido]butanu (DPDPB), 4-sukcynimidyloksykarbonylo-a-metylo-a-(2-pirydylotio)toluenu (SMPT), dichlorowodorku 3,3'-ditiobispropionoimidanu dimetylu (DTBP).
    177 400
PL94311740A 1993-05-24 1994-05-24 Kompleks do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych i sposób wytwarzania kompleksów do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych PL177400B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/064,892 US5449720A (en) 1993-05-24 1993-05-24 Amplification of the VB12 uptake system using polymers
PCT/AU1994/000273 WO1994027641A1 (en) 1993-05-24 1994-05-24 Amplification of the vitamin b12 uptake system using polymers

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL311740A1 PL311740A1 (en) 1996-03-18
PL177400B1 true PL177400B1 (pl) 1999-11-30

Family

ID=22058913

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL94311740A PL177400B1 (pl) 1993-05-24 1994-05-24 Kompleks do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych i sposób wytwarzania kompleksów do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5449720A (pl)
EP (1) EP0701448B1 (pl)
JP (1) JPH08510261A (pl)
KR (1) KR960702323A (pl)
CN (1) CN1126441A (pl)
AT (1) ATE222123T1 (pl)
AU (1) AU706723B2 (pl)
BR (1) BR9406725A (pl)
CA (1) CA2163226A1 (pl)
CZ (1) CZ308395A3 (pl)
DE (1) DE69431185T2 (pl)
HU (1) HUT75058A (pl)
IL (1) IL109745A (pl)
PL (1) PL177400B1 (pl)
RU (1) RU2139732C1 (pl)
SG (1) SG46223A1 (pl)
WO (1) WO1994027641A1 (pl)
ZA (1) ZA943599B (pl)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807832A (en) * 1987-06-09 1998-09-15 Biotech Australia Pty Limited Oral delivery of biologically active substances bound to vitamin B12
US5548064A (en) * 1993-05-24 1996-08-20 Biotech Australia Pty Limited Vitamin B12 conjugates with EPO, analogues thereof and pharmaceutical compositions
US5574018A (en) * 1994-07-29 1996-11-12 Amgen Inc. Conjugates of vitamin B12 and proteins
AU3461095A (en) * 1994-09-01 1996-03-22 Allied Medical Research Associates Compositions and methods for delivery of polypeptides
DE4433890C2 (de) 1994-09-22 1999-02-18 Deutsches Krebsforsch Konjugat aus einem Wirkstoff und einem nicht als körperfremd angesehenen, nativen Protein
US5739313A (en) * 1995-11-13 1998-04-14 Regents Of The University Of Minnesota Radionuclide labeling of vitamin B12 and coenzymes thereof
CA2243649C (en) * 1996-02-15 2009-08-04 J. Paul Santerre Bioresponsive pharmacologically-active polymers and articles made therefrom
DE19712718C2 (de) * 1997-03-26 1999-09-23 Asta Medica Ag Immobilisierte und aktivitätsstabilisierte Komplexe von LHRH-Antagonisten und Verfahren zu deren Herstellung
AUPO888097A0 (en) * 1997-08-29 1997-09-25 Biotech Australia Pty Limited Cross-linked particles
US20040044080A1 (en) * 1997-10-28 2004-03-04 Place Virgil A. Treatment of dyspareunia with topically administered nitroglycerin formulations
US6919076B1 (en) 1998-01-20 2005-07-19 Pericor Science, Inc. Conjugates of agents and transglutaminase substrate linking molecules
US6096726A (en) * 1998-03-11 2000-08-01 Surface Solutions Laboratories Incorporated Multicomponent complex for use with substrate
US6066673A (en) * 1998-03-12 2000-05-23 The Procter & Gamble Company Enzyme inhibitors
ES2242396T3 (es) * 1998-04-28 2005-11-01 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Conjugados de analogos de peg-lhrh.
US7953788B2 (en) 2001-09-29 2011-05-31 Siebel Systems, Inc. System and method for queuing data for an application server
EP1588717B1 (en) * 1998-04-28 2008-07-02 Laboratoires Serono SA PEG-LHRH analog conjugates
AUPP405098A0 (en) * 1998-06-12 1998-07-02 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Novel methods of preparation of vitamin b12 derivatives suitable for conjugation to pharmaceuticals
US6806363B1 (en) 1999-04-16 2004-10-19 Mayo Foundation For Medical Education & Research Cobalamin conjugates useful as antitumor agents
AUPQ014799A0 (en) * 1999-05-04 1999-05-27 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
US20050220754A1 (en) * 1999-06-02 2005-10-06 Biotech Australia Pty. Ltd. Vitamin directed targeting therapy
AUPQ071299A0 (en) * 1999-06-02 1999-06-24 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Vitamin directed dual targeting therapy
US7591995B2 (en) 1999-10-15 2009-09-22 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging and therapeutic agents
WO2001028592A1 (en) * 1999-10-15 2001-04-26 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging agents and as antitumor agents
EP1239887A1 (en) 1999-10-15 2002-09-18 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging and therapeutic agents
JP4659937B2 (ja) * 1999-11-19 2011-03-30 ナノキャリア株式会社 コア−シェル構造のポリイオンコンプレックスミセル
US20020042394A1 (en) * 2000-05-31 2002-04-11 Hogenkamp Henricus P.C. Cobalamin compounds useful as antibiotic agents and as imaging agents
AU2002243438A1 (en) * 2000-10-25 2002-07-24 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transcobalamin binding conjugates useful for treating abnormal cellular proliferation
EP1754712A3 (en) * 2000-10-25 2009-01-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transcobalamin binding conjugates useful for treating abnormal cellular proliferation
WO2002067995A1 (en) * 2001-02-26 2002-09-06 Council Of Scientific And Industrial Research Carrier systems comprising vitamin b12 - biodegradable micro particulate conju gates for peroral delivery of drugs, peptides/proteins and vaccines
US6752986B2 (en) * 2001-05-24 2004-06-22 The Cleveland Clinic Foundation Composition and methods for affecting metallocorrinoid uptake
AU2002322275A1 (en) * 2001-06-20 2003-01-08 Mayo Foundation For Medical Education And Research Adenosyl-cobalamin fortified compositions
US20040208844A1 (en) * 2001-08-01 2004-10-21 Francis Ignatious Products and drug delivery vehicles
US20060074034A1 (en) * 2001-09-17 2006-04-06 Collins Douglas A Cobalamin mediated delivery of nucleic acids, analogs and derivatives thereof
EP1435973A4 (en) * 2001-09-28 2007-05-02 Mayo Foundation SIMULTANEOUS ADMINISTRATION OF A TRANSPORT PROTEIN WITH CONJUGATED COBALAMINE FOR THE DISTRIBUTION OF MEDICINAL PRODUCTS
KR100440725B1 (ko) * 2002-06-20 2004-07-15 주식회사 그린진 바이오텍 비생물성 스트레스에 대한 단자엽 식물의 내성을증가시키는 방법
WO2004073648A2 (en) * 2003-02-20 2004-09-02 The Cleveland Clinic Foundation Composition and methods for inhibiting cell survival
US7232805B2 (en) * 2003-09-10 2007-06-19 Inflabloc Pharmaceuticals, Inc. Cobalamin conjugates for anti-tumor therapy
WO2005073181A1 (en) * 2004-01-28 2005-08-11 Bausch & Lomb Incorporated Vinylchloroformate-free synthesis of vinyl and allyl(thio)carbamates
CN101321806B (zh) * 2005-12-05 2011-01-26 日东电工株式会社 聚谷氨酸盐-氨基酸轭合物及方法
JP5348656B2 (ja) * 2007-01-05 2013-11-20 国立大学法人九州大学 ビタミンｂ１２修飾ハイパーブランチポリマーおよび脱ハロゲン化触媒
US20080181852A1 (en) * 2007-01-29 2008-07-31 Nitto Denko Corporation Multi-functional Drug Carriers
EP2131855A2 (en) * 2007-03-05 2009-12-16 Syracuse University A conjugate of insulin and vitamin b12 for oral delivery
US20110092416A1 (en) * 2007-03-05 2011-04-21 Robert Patrick Doyle Vitamine B12 - Peptide Conjugates for Oral Delivery
US20080233135A1 (en) * 2007-03-19 2008-09-25 Gebhard John R Cobalamin taxane bioconjugates
JP2010526159A (ja) * 2007-04-10 2010-07-29 日東電工株式会社 多機能性ポリグルタミン酸塩薬物担体
CA2683590A1 (en) 2007-05-09 2008-11-20 Nitto Denko Corporation Compositions that include a hydrophobic compound and a polyamino acid conjugate
CN101730549B (zh) * 2007-05-09 2015-12-09 日东电工株式会社 与铂类药物结合的聚合物
EP2155253A2 (en) * 2007-05-09 2010-02-24 Nitto Denko Corporation Polyglutamate conjugates and polyglutamate-amino acid conjugates having a plurality of drugs
WO2009111271A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-11 Nitto Denko Corporation Polymer paclitaxel conjugates and methods for treating cancer
WO2011130716A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Access Pharmaceuticals, Inc. A nanostructures containing vitamin b12 for facilitated delivery of drugs across biological barriers
WO2012030745A1 (en) * 2010-08-30 2012-03-08 Access Pharmaecuticals, Inc MULTIVITAMIN TARGETING OF RNAi THERAPEUTICS
CN103501821A (zh) 2011-03-08 2014-01-08 艾克塞斯制药公司 用于递送活性剂穿过生物膜的靶向纳米载体系统
WO2015126841A1 (en) 2014-02-18 2015-08-27 Plasmatech Biopharmaceuticals, Inc. Nutritional and therapeutic mucoadhesive formulations
US10517961B2 (en) 2015-09-25 2019-12-31 ZY Therapeutics, Inc. Drug formulation based on particulates comprising polysaccharide-vitamin conjugate
PL3491092T3 (pl) * 2016-08-01 2024-01-29 Integrity Bio-Chemicals, Llc Biopolimery do kontroli unoszenia się pyłów
CZ308830B6 (cs) 2020-07-08 2021-06-23 WELL PACK s.r.o. Řetězový dopravník s dorazovými kolíky pro mycí linky přepravek

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2546474A1 (de) * 1975-10-17 1977-04-21 Murray M D Israel Injizierbares pharmazeutisches thyroxinpraeparat und verfahren zu dessen herstellung
NZ217821A (en) * 1985-10-10 1989-07-27 Biotech Australia Pty Ltd Oral delivery system; complex of active agent and vitamin b12 or analogue thereof
US5166320A (en) * 1987-04-22 1992-11-24 University Of Connecticut Carrier system and method for the introduction of genes into mammalian cells
US4968742A (en) * 1987-11-09 1990-11-06 Miles Inc. Preparation of ligand-polymer conjugate having a controlled number of introduced ligands
GB8824591D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Fractionation process
US5162430A (en) * 1988-11-21 1992-11-10 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
CA2082507A1 (en) * 1990-05-11 1991-11-12 George Y. Wu Targeted protection from cytotoxins
WO1992017167A1 (en) * 1991-04-02 1992-10-15 Biotech Australia Pty. Ltd. Oral delivery systems for microparticles
US5188094A (en) * 1991-09-30 1993-02-23 Adair Edwin Lloyd Heat sterilizable electronic video endoscope
US5225182A (en) * 1991-10-31 1993-07-06 Sharma Yash P Vectored drug delivery system using a cephaloplastin linking agent and a methed of using the system
US5206219A (en) * 1991-11-25 1993-04-27 Applied Analytical Industries, Inc. Oral compositions of proteinaceous medicaments
US5258453A (en) * 1992-01-21 1993-11-02 University Of Utah Drug delivery system for the simultaneous delivery of drugs activatable by enzymes and light
WO1993025221A1 (en) * 1992-06-11 1993-12-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Erythropoietin drug delivery system
US5548064A (en) * 1993-05-24 1996-08-20 Biotech Australia Pty Limited Vitamin B12 conjugates with EPO, analogues thereof and pharmaceutical compositions

Also Published As

Publication number Publication date
CZ308395A3 (en) 1996-04-17
JPH08510261A (ja) 1996-10-29
KR960702323A (ko) 1996-04-27
ATE222123T1 (de) 2002-08-15
CA2163226A1 (en) 1994-12-08
PL311740A1 (en) 1996-03-18
ZA943599B (en) 1995-11-24
HU9503343D0 (en) 1996-01-29
CN1126441A (zh) 1996-07-10
EP0701448B1 (en) 2002-08-14
WO1994027641A1 (en) 1994-12-08
HUT75058A (en) 1997-03-28
DE69431185D1 (de) 2002-09-19
AU6790394A (en) 1994-12-20
BR9406725A (pt) 1996-02-06
DE69431185T2 (de) 2003-05-08
US5449720A (en) 1995-09-12
RU2139732C1 (ru) 1999-10-20
EP0701448A4 (en) 1997-01-02
IL109745A0 (en) 1994-08-26
IL109745A (en) 2000-01-31
AU706723B2 (en) 1999-06-24
SG46223A1 (en) 1998-02-20
EP0701448A1 (en) 1996-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL177400B1 (pl) Kompleks do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych i sposób wytwarzania kompleksów do doustnego dostarczania leków peptydowych lub białkowych
AU690555B2 (en) Vitamin B-12 mediated oral delivery systems for GCSF and EPO
Russell-Jones et al. Synthesis of LHRH antagonists suitable for oral administration via the vitamin B12 uptake system.
JP4477881B2 (ja) 治療剤または細胞毒性剤と生物活性ペプチドとの抱合体
US6472507B1 (en) Carrier based drug delivery system
Russell-Jones et al. Vitamin B12 mediated oral delivery systems for granulocyte-colony stimulating factor and erythropoietin
KR101367867B1 (ko) 안정화된 혈액내 전달을 위한 생리활성 기질 전달체, 이를포함하는 복합체 및 이를 이용한 생리활성 기질의 혈액내전달 방법
JPH04506664A (ja) 治療用ペプチド
JP2001524505A (ja) ポリエチレングリコール−ｇｒｆ結合体の部位特異的調製方法
WO2003072754A2 (en) Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
US5863900A (en) Lhrh antagonists
US6664369B1 (en) GnRH analogues with antitumour effects and pharmaceutical compositions thereof
EP0728012B1 (en) NOVEL GnRH ANALOGUES WITH ANTITUMOUR EFFECTS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS THEREOF
AU706979B2 (en) LHRH antagonists
GB2282812A (en) Cytotoxic/receptor ligand conjugates linked via lysine radicals
RU2277930C1 (ru) Векторный полипептид - аналог фрагмента трансформирующего фактора роста альфа (тфральфа), его противоопухолевый конъюгат и фармацевтическая композиция на основе конъюгата
CZ200132A3 (cs) Podávači systém