JPH05508634A - レセプター特異的トキシン結合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 レセプター特異的トキシン結合体 本発明は、トキシンと、標的細胞の表面のし七ブタ−に対する結合活性を備えた くタンパク質性）分子とを含むターゲツティングトキシン分子（ｔａｒｇｅｔｅ ｄ　ｔｏｘｉｎ　ｇｅｏｌｅｃｕｌｅ）に関する。

特定のグループの細胞に対して特異的なレセプターにターゲツティングトキシン 分子を向ければ、これらの細胞を特異的に除去することができる。

このようなターゲツティングトキシン分子は腫瘍治療で有用であり、その場合の 細胞表面のレセプターは腫瘍細胞に対して特異的であるか、又は少なくともその 腫瘍細胞によって優先的に発現される。

ターゲツティングトキシン分子は同種移植拒絶反応及び／又は自己免疫疾患の予 防に使用することもできる。これらの予防の目的は、同種移植拒絶反応又は自己 免疫応答を引き起こす細胞（リンパ球）を抑圧（抑制）することにある。

リンパ球を抑圧する初期の試みでは、患者のリンパ球集団全体に対する抗血清が 使用された。この種の抗血清は、患者が一時的に免疫不能になるという事実にも かかわらず、例えば腎臓移植で有用であることが判明した（１．２）。

その後の試みでは、例えばＴヘルパー細胞のような特定並集団に対する抗血清が 使用された。この種の抗血清もヒト及び動物の自己免疫疾患及び同種径′植拒絶 反応に対処する上で極めて有用であることが判明した（３．４．５．６）、しか しながらこの場合も、リンパ球面集団全体が抑圧されるため、患者が一時的に部 分的免疫不能を起こす、従って、高価な防護措置がやはり必要とされる。

抗血清を使用する方法の第２の欠点は、抗血清が通常は動物に由来することにあ る。これらの抗血清は場合によっては患者による免疫応答を引き起こすため、こ の種の抗血清を使用する場合は投与回数を極めて少なくしなければならない。

従って、特異性がより高く且つ抗原性がより低い方法が依然として望まれている 。

特定のサブセットの細胞を選択的に抑圧又は除去するための適当な方法の１つは 、トキシン又は場合によっては放射性核種と、前記サブセットの細胞の表面のレ セプターに対して結合特異性を示す〈通常は）タンパク質性の物質との結合体を 、細胞表面への前記タンパク質性物質の結合を利用して、前記細胞サブセットに 向けることからなる。

リガンドは通常タンパク質性のものであるが、特定のサブセットの細胞に対して 特異性を示す他の化合物も本発明の範囲内に含まれる。

レセプターへのトキシンのターゲツティングの方法は２つ知られている。そのう ちの１つは、レセプターに対する（モノクローナル）抗体又はそのフラグメント を使用することからなる。

もう１つの方法は、トキシンに結合できる、レセプターに対する又はその機能フ ラグメントもしくは誘導体に対する天然リガンド（あるいはアゴニストもしくは アンタゴニスト）又はその機能性フラグメントもしくは誘導体を使用することか らなる。リガンドと同様の機能を果たす物質を使用してもよい、従って、本明細 書中のリガンドという用語は、タンパク質性又は他のＭ顕のフラグメント、誘導 体又は類似機能物質をも意味する。

前述の抑圧又は除去方法に特に適した細胞サブセットは、望ましくない免疫応答 を有する患者の活性化Ｔｉ１ｌ胞セ・ントである。

周知のようにＴ細胞は、（自己）免疫反応につながる活性化プロセス中に多数の インターロイキン−２レセプターを発現する。これらのレセプターは、これらの 細胞によっても産生され得るインターロイキン−２（ＩＬ−２）に結合する（Δ ｕｔｏｅｒｉｎｅ剰激）、その結果、細胞が増殖し始める。

ＩＬ−２レセプターへのトキシンのターゲツティング方法も２つ存在する。即ち 、Ｉ　Ｌ−２又はそのフラグメントもしくは誘導体を使用する方法、並びにＩＬ −２レセプターに対する抗体を使用する方法である。

モノクローナル抗体又はそのフラグメントを使用する方法は文ＩＦ（７，８，９ ，１０，１１）に記述されており、その効果はｉｎ　ｖｉｔｒｏでも、動物にお いてｉｎ　ｖｉｖｏでも、ヒト悪性腫瘍及び関節リューマチについて立証されて いる。

モノクローナル抗体による方法は、患者が（通常はネズミ由来の）抗体に対し免 疫応答を引き起こすという既述の欠点を有する。その結果、応答低下、＠作及び アナフィラキシ−ショックが生じ得る（１２）。

トキシンに結合した天然リガンドによるＩＬ−２レセプターへのターゲツティン グは最近になって報告された（１３）。

ｉｎ　ｖｉｖｏ及びｉｎ　ｖｉｔｒｏの研究では、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓエキ ソトキシン結合体を投与することによって抗原活性化回路を除去できることが明 らかになった。また、ＩＬ−２−トキシンが高親和性ＩＬ−２レセプターにのみ 結合することも明らかにされた。

しかしながら、Ｐｓｅｕｄｏｓ＋ｏｎｍｓエキソトキシンは分子量の大きいトキ シンであり、外来起源の抗体及び／又は抗原と同様に、患者において免疫応答を 引き起こす。

本発明は、このような免疫応答を誘起しないトキシンを提供する。

本発明は、標的細胞の細胞表面のレセプターに対するリガンド又はその機能性フ ラグメントもしくは誘導体と、分子量１５００Ｄ以下のトキシンとを含むターゲ ツティングトキシン分子を提供する。

選択したリガンドがＩＬ−２レセプターに対する結合活性を有する場合、本発明 のターゲツティングトキシン分子は特に、一般的には自己免疫疾患、特定的には 関節リューマチの治療に有効である。

また、本発明のターゲツティングトキシン分子は、造血細胞白血病を発現するＩ Ｌ−２の除去、又は移植患者もしくは外来起源抗体での治療を受ける患者におけ る特異的耐性の誘発に使用し得る。

本発明のターゲツティングトキシン分子の抗原性を更に低下させるためには、選 択したレセプターに特異的なリガンドのフラグメントを使用し得る。

これらのフラグメントは、リガンド又はその機能性誘導体のレセプター結合ドメ イン（のアミノ酸配列）を含むのが好ましい。

Ｉ　Ｌ−２の場合は、レセプター結合ドメインが、ＩＬ−２の３３〜５６及び１ １〜２０アミノ酸配列を含むフラグメント内に存在すると思われる。

前記第１のフラグメントはＩＬ−２レセプターの９５５鎖に結合すると思われ、 前記第２のフラグメントはｐ７５鎖に結合すると思われる。これらのフラグメン トの別の利点は１時間のかかる遺伝子工学及び／又は精製を用いずに合成し得る ことにある。

結合体を細胞表面レセプターに即ターゲツティングする代わりに、プレターゲツ ティング法（ｐｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｓｃｈｅｍｅ）を選択することもでき 、その方が好ましいこともある。

プレターゲツティング法では実際に、本発明の結合体によって認識され得る「ア ドレス」部位（レセプター）を標的分子上に形成する。

これは通常、標的を認識する部分と本発明の結合体によって認識され得る部分と を含む第１の結合体を投与することにより達成される。

プレターゲツティング法は、第１のターゲツティング部分が局在（Ｉｏｃａｌｉ ｚａｔｉｏｎ）する時に毒性化合物が存在しないため、特に第１のターゲツティ ング部分の特異性が余り大きくない場合に、非標的組織に対する損傷が軽減され 得るという利点を有する。

勿論、トキシン分子をターゲツティングし得るレセプターはその他にも色々考え られる。興味深いレセプターは例えば、リンホカインレセプター、全てのＴ細胞 レセプター、アセチルコリンレセプター、上皮成長因子レセプター、黄体形成ホ ルモンレセプター、腫瘍壊死因子αレセプター、形質転換成長因子６レセ１ター 、生殖ホルモンレセプター（例えばｈＣＧレセプター）等である。

ターゲツティングトキシン分子に適した多くのトキシンは容易に入手できる。

トキシンの選択における重要な基準は抗原性の欠如である、これは、トキシンの 分子量に関連している。適当なトキシンは通常分子量が１５００Ｄ以下であるが 、これは非限定的な数値にすぎない、トキシンは例えば下記の群から選択し得る ニジイン−エン−トキシン（ｄｉｙｎ−ｅｎｅ−ｔｏｘｉｎｓ）、例えばカリケ アマイシン（ｃａｌ　１ｃｈｅａ＠１ｃｉｎ）、ニスベラマイシン（ｅｓｐｅｒ ａｍｙｃｉｎ）及びシネマイシン（ｄｙｎｅ＋＊１ｃｉｎ）Ａ、トリコテセン類 １例えばベルカリン（ｖｅｒｒｕｃａｒｉｎ）Ａ、デオキシベル力ロール（ｄｅ ｏｘｙｖｅｒｒｕｅｉｒｏｌ）、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａ及びジアセトキ シスシルペノール（ｄｉａｅｅｔｏｘｙｓｃｉｒｐｅｎｏｌ）及びマイコトキシ ン（ｍｙｃｏｔｏｘｉｎ）、特に好ましいのはカリケアマイシン及びベルカリン Ａである。勿論、放射性核種を細胞毒性部分として使用することもできる。

本発明のトキシン及び（タンパク質性）分子は任意の適当な方法で互いに結合し 得る。（タンパク質性）分子もトキシンも、これらの物質がそれぞれの活性を実 質的に損なうことなく結合し得る反応基を導入するのに十分な反応基を有する。

あるいは、トキシンとターゲツティング部分との間の結合は結合体の局在又はイ ンターナリゼーション時に破壊され得る。

結合は直接的に、又は結合分子及び／又はスペーサを介して実施し得る。

本発明は、本発明のターゲツティングトキシン分子を含む医薬組成物にも関する 。

本発明の化合物の明白な投与方法は関節的投与又は非経口投与であり、その場合 はターゲツティングトキシン分子を適当な注射用ビヒクル中に溶解又は乳化して 使用する。

勿論、本発明の組成物は前記ビヒクル以外に他の一般的な添加剤を含み得る。

本発明の結合体の治療用量は結合体の分子量によって異なる。この用量は、全身 投与の場合で注射当たり１０μｇ〜５００ｍｇにし得る０局所投与の場合は更に 少なくてよい。

以下に実施例を挙げて、本発明をより詳細に説明する。

火蓋」 １　、　１　、ＶｅｒｒｕｃａｒｉｎＡ　２°−スクシネート（１）Ｖｅｒｒｕ ｃａｒｉｎＡ　（２００ｍ　ｇ、０．４ｍｍｏ　１　）をＤＭＦ＜２．５ｍ１） に溶解した溶液に、無水琥珀酸（８５ｍ　ｇ、０．８ｍｍｏ　１　）と４−ジメ チルアミノピリジン（４，８ｍｇ、０．０４ｍｍｏ　１）とを続けて加えた。混 合物を５０℃で１６時間撹拌した６反応混合物をＣＨ２Ｃ１２（ジクロロメタン ＞（８ｍｌ）で希釈し、５％クエン酸水溶液（２％８ｍｌ）及び水（８ｍ　ｌ　 ）で洗浄した。有機層を分離し、減圧下で蒸発させて溶媒を除去し、未精製物１ を得た。シリカを使用するクロマトグラフィー（溶離剤：Ｃ）ｌ　２　Ｃ１２／ 　ＣＨｘ○Ｈ＝９８／２）でＶｅｒｒｕｅａｒｉｎＡ　−２′−スクシネートを 精製して、１を得た（１４８ｍｇ、６１．５％）、ＴＬＣのＲｒ　（Ａ　＞は０ ．３５であった。

１．２．　Ｎ−スクシンイミジル−ＶｅｒｒｕｃａｒｉｎＡ　２　’−スクシネ ート（２Ｌ） ＶｅｒｒｕｃａｒｉｎＡ　２°−スクシネート（１４８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ ）をＣ’Ｈ２ＣＩ　２　（ジクロロメタン）（２ｍｌ）に溶解した冷（０℃）溶 液に、ＥＤＣＩ（Ｎ−ｘチル、Ｎ’　−３−ジメチルアミンプロピルカルボジイ ミド）＜５６．３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ＞とＨＯＮＳｕ（Ｎ−ヒドロキシスク シンイミド）（３３，８ｍｇ、０゜２９ｍｍｏｌ）とを続けて加えた０反応混合 物を０℃で１５分間撹拌し、次いで室温で２時間保持した０反応混合物を５％ク エン酸水溶液（４ｍｌ）、水（４ｍｌ）及びＮａＣｌ飽和水溶液（４ｍｌ＞で続 けて洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮して、２を１８８ｍｇ（１００ ％）得た。

ＴＬＣのＲ，（Ａ）は０．６０であった。

２　、　１　、ＶｅｒｒｕｃａｒｉｎＡ　２　’　−ヘミスクシノイルヒドラジ ド（旦） ２　（６０ｍｇ、０．０８６ｍｍｏ　ｌ　）をテトラヒドロフラン（１ｍｌ）に 溶解した。５当量ヒドラジン水和物を含むメタノールを加え、反応混合物を室温 で１５分間撹拌した０反応混合物をジクロロメタン（４ｍｌ）で希釈し、５％Ｋ Ｈ８Ｏ，水溶液（４ｍｌ）及びＮａＣｌ飽和水溶液（４ｍｌ）で続けて洗浄し、 硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。得られた未精製ヒドラジドをシリカを 使用するクロマトグラフィー（溶離剤：　ＣＨ２Ｃ１２／ＣＨコ０Ｈ＝９５１５ 　）で精製して、旦（３０ｍｇ、５６，８％）を得た。ＴＬＣのＲ２は０．３０ であった。ＴＬＣでのジクロロメタン／メタノール比は９５１５であった。

３．１．　ＶＡ誘導体の分光学的データ（’ＨＮＭＲ）ＮＨ−ｃト’うｓ−に６ −９８！！ ４、手順 ４、Ｉ　ＶＡＯＮＳｕ（１ｍｇ／ｍｌ、ＤＭＦ＞をタンパク質（０，１Ｍリン酸 ナトリウムｐＨ８，５：　ＤＭＦ＝２：１）に１０：　１　（ｍｏｌ／ｍｏｌ） の割合で加えて、結合体を製造した。１０分間インキュベートした後に、結合体 をＰＤＩＯカラム上で精製し、ＰＢＳ緩衝液で平衡化した。タンパク質のインタ ーロイキン−２（、ＩＬ−２）、）ランスフェリン、ｈＣＧ及び上皮成長因子（ ＥＧＦ）についてこの処理を行った。ＶＡＯＮＳｕ　（１ｍｇ／ｍ　１、ＤＭＦ ’）を（０，１Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８，５：ＤＭＦ＝２　：　１の溶液に溶 解した）ペプチドに１：１（ｍｏｌ／ｍｏｌ）の割合で加えて、ペプチド−ＶＡ ＯＮＳｕ結合体を製造した。１０分間インキュベートした後に２０倍の過剰エチ ルアセテート（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を加えて、ペプチド結合体を精製した。遠心分 離した後に、沈澱物をＰＢＳ［新液に溶解した。ｐ２０ペプチド、（ＩＬ−２＞ のインターナライズする部分及びＪ６−ペプチドについてこの処理を行った。Ｖ ｅｒｒｕｅａｒｉｎ−Ａ〜ヒドラランをトランスフェリンの炭水化物基に結合さ せた。１０ｍ　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｉ　Ｏ４をトランスフェリンに加えて炭水化物基を 酸化し、ＰＨ５，５の０．１Ｍ　Ｎａ０Ａｃに溶解した。

１０分後にＮ　ａ　ｚ　Ｓ　Ｏ３を加えて、過剰Ｎ　ａ　Ｉ　Ｏ４を除去した０ 次いでＶ−Ａ−ヒドラジドを加えた（濃度１ｍＭ）。

１時間インキュベートした後に、結合体をＰＤＩＯカラム上で精製し、ＰＢＳＩ Ｉ衝液で平新液した。

４．２　試験 ４．２．１　ヒトＴ細胞クローン（Ｒｅｉｚ　ＩＦ９）を種々のＶｅｒｒｕｃａ ｒｉｎＡ結合体と一緒に、１０％ヒトプール血清、２ｍＭグルタミン、２０μＭ β−メルカプトエタノール及び抗生物質（２００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００ｍ ｇ／ｍｌストレプトマイシン）を補充したＭ５０５培地中で培養した。２時間イ ンキュベートした後、細胞を培地で洗浄することにより結合体を除去した０次い で細胞を、２０Ｕの組換えＩＬ−２の存在下に５％ＣＯ２を含む湿潤雰囲気中で ３７℃で７２時間培養した。３Ｈ−チミジン（０，１μＣｉ／ウエル）を加え、 −晩インキユベートした後に細胞を回収し、Ｐａｃｋａｒｄ　βカウンターを用 いて放射能の取込みをカウントした。

４．２．２　ＰＡＮＣ細胞をＭ５０５＋１０％ＦＣＳ中で増殖させた。試験用に 、ＰＡＮＣ＃胞をマイクロタイタープレートにおいて培養した（１０００細胞／ ウェル、１００ｕＬ）、０日目、１００μｌのリガンド−トキシン試料を加え、 ５％ＣＯ□を含む湿潤雰囲気中で細胞をインキュベートした。８８目、細胞生存 率を測定するために５０μＩのＭＴＴを加えた。４時間インキュベートした後、 培地を除去し、細胞中に形成された紫色の結晶を７５μｌのＤＭＳＯ中に溶解し た。ＥＬＩＳＡ読取り装置において５４０ｎｍにおける吸収を読み取った。

４．２．３　成熟５ｗ１ｓｓマウス（９〜１３週齢）の精巣からライディッヒ細 胞を単離した。ｌＩ［Ｉ胞は、被膜を剥いだ各精巣をガラス管中に５回吸引し、 懸濁液を３０μｍナイロンメツシュで一過することにより得た。ａ＋胞を、４． ２ｍＭ　ＮａＨＣＯｓ、２０ｍ　ｌ　／　１　ウシ胎児血清及びＩｇ／ＩＢＳＡ を補充しなＭ１９９中に懸濁させ、１００ＡｔＩの細胞懸濁液をマイクロタイタ ープレートの各ウェルに５０μ夏の試験試料と一緒に加えた。プレートを、５％ ＣＯ□−９５％空気の湿潤雰囲気中で３７℃で４時間インキュベートし、ＲＩＡ によるテトスステロン測定まで一２０℃で保管した。

５、結果 ５．１　有効性を示すために、本発明者らは種々のリガンド、即ちＰ２Ｏ（ＩＬ −２レセプターのインターナライズする成分：２７５に対するＩＬ−２の結合部 分（ＡＡ　８−２７））、濃度１．５ＭＭにおいてＴ細胞クローンを活性化する Ｊ−６ペプチド、トランスフェリン、ｈＣＧ及び上皮成長因子と、Ｖｅｒｒｕｃ ａｒｉｎ　Ａとの結合体を製造及び試験した。全ての実験においてＶｅｒｒｕｃ ａｒｉｎ−Ａ−ＯＮＳＵエステルはその毒性を維持しており、従ってＶＡ−誘導 体は依然として細胞中に侵入し且つそれを殺し得ることが示された。■ｅｒｒｕ ｃａｒｉｎ−Ａをタンパク質、例えば抗体と結合すると、結合体はもはや細胞に 侵入することはできず、従って毒性は欠失することが知られている。

Ｔ細胞クローンを使用して種々の実験を行なった０図３において、Ｐ２Ｏ−ＶＡ 結合体は、ＶＡ単独と比べると比較的高い濃度でＴ細胞クローンの増殖を低減さ せ、Ｐ２０自体は有効ではないことから、結合体が特異的な毒性を有することが 判り、また、ＩＬ−２レセプターに対するＰ２Ｏの結合親和性は比較的低いこと も判り、これは、毒性作用のためには比較的高い濃度が要求されることを説明し ている。

特表千５−５０８６３４　（６） 図４は、Ｊ−６−ＶＡ結合体が比較的低い濃度（０，０２〜０．０５μＭ）で細 胞クローンを殺すことを示しており、これは、極めて特異的でしかも有効な死滅 作用を示唆している。極めて高い濃度では、Ｊ−６ペプチド自体は良く知られた ある種の細胞障害作用を引き起こす。

ＰＡＮＣ腫瘍細胞を使用し、以下の結果を得た。

ここでもＶＡ−ＯＮＳＵエステルはＶＡ単独の毒性をそのまま維持している。Ｖ Ａを上皮成長因子（図５）またはトランスフェリン（図６〜７）に結合すると、 ＰＡＮＣ細胞の増殖が特異的に阻害されることが判る。リガンド自体は有効では ない。

更に別のモデル系において、本発明者らはｈｃＧ−ＶＡ結合体を試験した。４時 間インキュベートすると、予想された通り、ｈＣＧは明らかにマウスライディッ ヒ細胞においてテストステロンの産生を刺激し、その産生量は相対量的６００ｎ ｇ／ｍｌまでに達した。ｈＣＧ−ＶＡ（１ｍｇ／ｍｌ）と−緒にインキュベート すると、マウスライディッヒ細胞におけるテストステロン産生は著しく低下した 。

この試験過程においてｈＣＧ−ＶＡと一緒にインキュベートした結果を図８に示 す。

Ｔ賦へ文献−１明怖濤寸１；う１目くいイ；しへ？・バー豊」シ（猷 １、ＣＯＣ０５ｌ　Ａ、Ｂ、、　ａｔ　ａｌ、；τｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏ ｎ、　Ｖｏｌ、　３２゜ｐ、５３５，１９８Ｌ ２、ａｉｏｒｑ＝ｏ　Ａ、Ｂ、、　ａｔ　ａｌ、；　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　ｐ ｒｏｃ、、　Ｖｏｌ、　１ｓ。

１９８５゜ ４、５ｈｌＺｕｒｕ　Ｊ、Ａ、、ａｔ　ａｌ、；　工ｍｎｕｎａｉｎｔａｒｖａ ｎｔｉｏｎ　ｉｎＡｕｔｏｉｍｏｕｎａ　Ｄｉｓａａｓａｓ、ｗｏｒｋｓｈｏｐ 　ａｂｓｔｒａｃｔ　１５，１９８ｇ。

５、Ｈａｆｌａｒ　Ｄ、Ａ、、　ａｔ　ａｌ−；　Ｊ、工ｍｍｕｎｏ１．．　Ｖ ｏｌ、　１４１゜？、Ｋｉｒｋｍａｎ　Ｒ−Ｌ、、　ａｔ　ａｌ、；　Ｊ、　Ｅ ｘｐ、　Ｍａｄ、、　Ｖｏｌ、１６２゜ｐ＋　３５８−３６２．　１９８５゜ ８、Ｋｅｌｌａｙ　Ｖ、Ｅ、、　ａｔ　ａｌ、；　Ｊ、　Ｉｍｕｎｏｌ、、　Ｖ ｏｌ、　２３Ｂ。

１１、Ｗａｌｄｍａｎｎ　Ｔ、Ａ、；　Ｃ＠ｌｌ工ｍｍｕｎ、、　Ｖｏｌ、　９ ９．　ｐ、　５３−６０．　１９８６゜１２−　Ｋｙｌ＠Ｖ−ｔ　ａｔ　ａｌ、 　；　Ａｊｌｎ−Ｒｈａｔｕｎ、　Ｄｉｓ、、　Ｖｏｌ、　４８ｔ略紐一覧 ＩＬ−２インターロイキン−２ ｐ５５　インターロイキン−２レセプターのサブユニットｐ７５　インターロイ キン−２レセプターのサブユニットＤ　ダルトン ＤＭＦ　ジメチルホルムアミド ＴＬＣ薄層クロマトグラフィー ＮＭＲ核磁気共鳴 ＶＡ　ベルカリン（Ｖｅｒｒｕｃａｒｉｎ）ＡＯＮＳｕ　スクシンイミジルエス テル誘導体ＰＢＳ　リンＭ［衝塩類溶液 ＭＴＴ　３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニル テトラゾリウムプロミド ｈＣＧ　ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ｈｕｍａｎ　Ｃｈｏｒｉｏｎｉｅ　Ｇｏ ｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ）ＲＩＡ　ラジオイムノアッセイ ｒｘａ、１ 浦）ｔ　瞭ノ ＊＃　、ＭＶ９１０２９ ５Ｘノー頑ｊ　（Ｎｊｌ ＰＡＮＣｔｐ’、　列］ｌ書アツＩＺイタ）パフ１Ｉｊ＆４／’＞工ＩＶ（μ間 ンｔｗｏ、ｇ ＰＡＮ０〉誉／！シＬ＊　７−２１イ タ、ベア貴重（ａ硼 ＦＩｏ、７ ＰＡＮ（ｊｔ４Ｆ１１１ア−／ｌイ Ｏ二１：・ζ二１１　ｏ、・二Ｑ−二］　Ｃ・、０’：！　１　０．０１　０． １　１タンＩぐ７Ｘｉ埼配２軛／＋ｓ−＞ｖ　（ｕ、Ｍ）火、倹　：１９１０９ ８ ライザ７ヒ４！４鍵べ利５　ｉ　＋ｃｅ−Ｖへ一４乍褐インキ、べ−ｔａ　′／ ａ？肉（峙２ 要約 この発明は、トキシンと、標的１７！ｉ胞の表面にあるレセプターに対する結合 活性を有するタンパク質性分子とを含むターゲツティングトキシン分子であって 、タンパク質性分子は、リガンドまたはその機能性誘導体もしくはフラグメント であり、トキシンは１５００Ｄ以下の分子量を有するターゲツティングトキシン 分子に係わる。特にリガンドはＩＬ−２、好ましくはその結合ドメインのみであ る。トキシンは任意の小さなトキシン、例えばカリケアマイシン、ベルカリンな どとし得る。この発明のトキシン分子はより迅速に局所薬種し、しかも免疫原性 がより低い。

国際調査報告 国際調査報告

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．トキシンと、標的細胞の表面にあるレセプターに対する結合活性を有するタ ーゲッティング分子とを含むターゲッティングトキシン分子であって、前記ター ゲッティング分子が、前記レセプターに対するリガンドまたはその機能性誘導体 もしくはフラグメントであり、前記トキシンが１５００Ｄ以下の分子量を有する ことを特徴とするターゲッティングトキシン分子。
2. ２．前記ターゲッティング分子がタンパク質性のものであることを特徴とする請 求項１または２に記載のターゲッティングトキシン分子。
3. ３．前記ターゲッティング分子が、リンフォカイン−レセプターに対する結合特 異性を有することを特徴とする請求項１または２に記載のターゲッティングトキ シン分子。
4. ４．前記ターゲッティング分子が、アセチルコリンレセプターに対する結合特異 性を有することを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のターゲッテ ィングトキシン分子。
5. ５．生殖ホルモンレセプターに対する結合特異性を有することを特徴とする請求 項１から３のいずれか一項に記載のターゲッティングトキシン分子。
6. ６．ＴＮＦ−α−レセプターに対する結合特異性を有することを特徴とする請求 項１から３のいずれか一項に記載のターゲッティングトキシン分子。
7. ７．ＴＮＦ−β−レセプターに対する結合特異性を有することを特徴とする請求 項１から３のいずれか一項に記載のターゲッティングトキシン分子。
8. ８．インターロイキン−２−レセプターに対する結合特異性を有することを特徴 とする請求項１から３のいずれか一項に記載のターゲッティングトキシン分子。
9. ９．前記タンパク質性分子が、インターロイキン−２のレセプター結合ドメイン のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項２、３または８に記載のターゲッ ティングトキシン分子。
10. １０．前記タンパク質性分子が、インターロイキン−２のアミノ酸３３〜５６を 含むことを特徴とする請求項９に記載のターゲッティングトキシン分子。
11. １１．前記タンパク質性分子が、インターロイキン−２のアミノ酸１１〜２０を 含むことを特徴とする請求項９に記載のターゲッティングトキシン分子。
12. １２．Ｔ細胞レセプターを認識することを特徴とする請求項１から３のいずれか 一項に記載のターゲッティングトキシン分子。
13. １３．前記トキシンが、カリケアマイシン、エスペラマイシン及びジネマイシン Ａのようなジイン−エン−トキシン類、ベルカリンＡ、デオキシベルカロール、 ロリジンＡ及びジアセトキシシルペノール及びマイコトキシンのようなトリコテ セン類から選択されることを特徴とする請求項１から１２のいずれか一項に記載 のターゲッティングトキシン分子。
14. １４．前記トキシンがカリケアマイシンであることを特徴とする請求項１３に記 載のターゲッティングトキシン分子。
15. １５．前記トキシンがベルカリンＡであることを特徴とする請求項１３に記載の ターゲッティングトキシン分子。
16. １６．請求項１から１５のいずれか一項に記載のターゲッティングトキシン分子 と、投与に適したビヒクルとを含む医薬組成物。