BRPI0416779B1 - formulação farmacêutica líquida para a liberação prolongada de princípio(s) ativo(s), processo para a preparação desta formulação, e processo para a preparação de um pó derivado desta formulação - Google Patents

Abstract

"formulações farmacêuticas para a liberação prolongada de princípio(s) ativo(s), assim como suas aplicações especialmente terapêuticas". a presente invenção diz respeito a novas formulações farmacêuticas à base de suspensões coloidais aquosas estáveis e fluidas para a liberação prolongada de princípio (s) ativo(s), em particular protéico(s), assim como as aplicações, especialmente terapêuticas, dessas formulações. o objetivo da invenção é propor uma formulação farmacêutica fluida para a liberação prolongada de princípio(s) ativo(s), permitindo, após injeção por via parenteral, aumentar significativamente a duração de liberação in vivo de uma proteína terapêutica, diminuindo o pico de concentração plasmática da proteína ativa, e que seja, ademais, estável na conservação e, além disso, biocompatível, biodegradável não-tóxica, não-imunogênica e bem tolerada localmente. a formulação de acordo com a invenção é uma suspensão coloidal aquosa de baixa viscosidade, de partículas submicrônicas de polímero po biodegradável, hidrossolúvel e portador de agrupamentos hidrofóbicos (gh), tais partículas sendo associadas de forma não covalente a pelo menos um princípio ativo (pa) e formando um depósito gelificado no local de injeção, esta gelificação sendo provocada por uma proteína presente no meio fisiológico.

Description

"FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA LÍQUIDA PARA A LIBERAÇÃO PROLONGADA DE PRINCÍPIO(S) ATIVO(S), PROCESSO PARA A

PREPARAÇÃO DESTA FORMULAÇÃO, E PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO

Dl UM PÓ DERIVADO DESTA FORMULAÇÃO" A presente invenção diz respeito a novas formulações farmacêuticas à base de suspensões coloídais aquosas estáveis e fluidas para a liberação prolongada de princípio{s) ativo (s), em particular protéico(s) e peptidico<s) , assim como as aplicações, especialmente terapêuticas, dessas formulações.

Essas formulações farmacêuticas ativas dizem respeito tanto à terapêutica humana quanto à veterinária.

No campo da liberação prolongada dos princípios ativos farmacêuticos, especialmente de proteínas terapêuticas, existe uma necessidade, em muitos casos, de se reproduzir na melhor das hipóteses no paciente uma concentração plasmátíca de proteína ou de peptídeo próxima do valor observado no sujeito saudável.

Este objetivo colide com a curta duração de vida das proteínas no plasma, que leva a injetar, de forma repetida, a proteína terapêutica. A concentração plasmátíca de proteína terapêutica apresenta, assim, um perfil "em dentes de serra" caracterizado por picos elevados de concentração e mínimos de concentração muito baixos. Os picos de concentração, muito superiores à concentração basal no sujeito saudável, têm efeitos nocivos muito marcados devido à toxicidade elevada das proteínas terapêuticas, tais como a interleucina IL2. Por outro lado, os mínimos de concentração são inferiores à concentração necessária para se ter um efeito terapêutico, o que provoca uma má cobertura terapêutica do paciente e efeitos secundários graves a longo prazo.

Além disso, para reproduzir no paciente uma concentração plasmática de proteína terapêutica próxima do valor ideal para o tratamento do paciente, importa que a formulação farmacêutica considerada permita liberar a proteína terapêutica em uma duração prolongada, de forma a limitar as variações de concentração plasmática no curso do tempo.

Ademais, esta formulação ativa deve, de preferência, satisfazer ao caderno de especificações seguinte, já conhecido do versado na técnica: 1- liberação prolongada de uma proteína terapêutica ativa e não desnaturada, por exemplo, humana ou sintética, de sorte que a concentração plasmática seja mantida no nível terapêutico, 2- forma liquida suficientemente fluida para ser facilmente injetável e esterilizável por filtração em filtros cujo tamanho dos poros é inferior ou igual a 0,2 mícrons, 3- forma líquida estável, 4- biocompatibilidade e biodegradabilidade, 5- não toxicidade, 6- não imunogenicídade, 7- excelente tolerância local.

Para tentar alcançar estes objetivos, várias abordagens já foram propostas na técnica anterior.

Na primeira abordagem, a proteína terapêutica nativa é modificada por enxerto covalente de uma ou várias cadeias de polímero ou, ainda, por enxerto covalente de uma proteína, tal como a albumina sérica humana (HSA). A proteína assim modificada tem uma afinidade inferior para seus receptores e seu tempo de meia-vida na circulação geral aumenta consideravelmente. A amplitude da variação de concentração entre os picos e as depressões de concentração plasmática de proteína é, assim, consideravelmente reduzida. Assim, a sociedade Schering Plough comercializa I sob o nome VIRAFÉRON® PEG um interferon alfa 2b modificado quimicamente por enxerto de uma cadeia de polietileno glicol de massa 12kD. Esta modificação química se traduz por um aumento do tempo de meia-vida no paciente de 6,8 a 33 horas. Esta medida de modificação química da proteína terapêutica apresenta, de modo geral, dois inconvenientes principais. Em primeiro lugar, a modificação irreversível da proteína, que, não sendo mais uma proteína humana, pode conduzir, a longo prazo, a problemas de toxicidade e de imunogenicidade. 0 segundo inconveniente provém da perda parcial de bioatividade da proteína terapêutica modificada.

Em uma segunda abordagem, foi proposto aumentar a duração de ação graças a formulações comportando pelo menos um polímero e um princípio ativo, líquidos à temperatura e atmosfera ambientes, injetáveis e se tornando mais viscosos após injeção, por exemplo, sob o efeito de uma mudança de pH e/ou de temperatura. ■ Em conexão com este registro, a patente US-B-6 143 314 divulga uma solução orgânica polimérica de liberação controlada de PA, formando um implante sólido após injeção. Esta solução compreende: (A) 10 a 80% em peso de um polímero termoplástico de base, biocompatível, biodegradável e insolúvel na água ou nos fluidos fisiológicos (por exemplo, PoliLáctico e/ou PoliGlicólico); (B) um solvente orgânico, tal como a N- MetilPirrolidona se dispersando'nos fluidos fisiológicos; (C) um princípio ativo (PA); (D) e, enfim, 1 a 50% em peso de um agente de liberação controlada constituído por um copolímero em bloco do tipo PoliLácticoGlicólico/PoliEtilenoGlicol.

Após injeção, (B) se dispersa ou se dissipa nos fluidos fisiológicos. (A) forma um implante encapsulante (C) que não é ligado de forma covalente nem a (A) nem a (D) e que se libera, então, lentamente in vivo. 0 principal inconveniente desta técnica é o de utilizar um solvente orgânico (B), potencialmente desnaturante para o PA (C) (por exemplo, proteínas terapêuticas) e tóxico para o paciente. Ademais, a hidrólise in vivo do polímero (A) gera um ácido que pode conduzir a problemas de- tolerância local.

Os pedidos PCT WO-A-99/18142 & WO-A-OO/18821 dizem respeito a soluções aquosas de polímeros que contêm um PA sob a forma dissolvida ou coloidal, que são administráveis em animais de sangue quente, especialmente por injeção e que formam um depósito de PA (por exemplo, insulina) gelificado in vivo, visto que a temperatura fisiológica é superior à sua temperatura de gelificação. 0 gel assim formado libera o PA de forma prolongada. Estes polímeros biodegradáveis particulares são triblocos ABA ou BAB com A = poliláctico-coglicólico (PLAGA) ou poliláctico (PLA) e B = PoliEtilenoGlicol. As temperaturas de transformação líquido => gel destes polímeros triblocos são, por exemplo, de 36, 34, 30 e 26°C. A exemplo dos polímeros (A) de acordo com US-B-6 143 314, a hidrólise desses polímeros triblocos ABA ou BAB in vivo conduz a ácidos que podem não ser corretamente tolerados localmente. O pedido PCT WO-A-98/11874 descreve formulações farmacêuticas compreendendo um princípio ativo lipofílico, um polímero gelificante (Gelrite® = goma gelana desacetilada ou hidroxi etil celulose) e um surfactante. A interação polímero/surfactante e, eventualmente, em se tratando do polímero Gelrite®, a única presença de eletrólitos, tais como íons CA++ em concentração fisiológica, conduz à formação de um gel constituído por um agregado polímero/surfactante, o qual se liga de forma não covalente ao princípio ativo lipofílico. Esta formulação é destinada a uma administração local em um órgão alvo (olho, por exemplo). A associação agregado/principio ativo que se forma in situ permite a liberação lenta do princípio ativo no órgão alvo.

Uma terceira abordagem realizada para tentar prolongar a duração de ação de uma proteína, conservando, ao mesmo tempo, sua bioatividade consistia em utilizar uma proteína terapêutica não desnaturada e em incorporá-la em microesferas ou implantes à base de polímeros biocompatíveis. Esta abordagem é especialmente ilustrada pela patente US-B-6 500 448 e pelo pedido US-A-2003/0133980 que descrevem uma composição de liberação prolongada de hormônio de crescimento humano (hGH), na qual a proteína hormonal, previamente estabilizada por complexação com um metal, é, em seguida, dispersada em uma matriz polimérica biocompatível. O polímero biocompatível é, por exemplo, um poli(lactídeo), um poli(glicolídeo) ou um copolímero poli(lactídeo-co-glicolídeo). A composição se apresenta, por exemplo, sob a forma de uma suspensão de microesferas em uma solução de carboximetilcelulose de sódio. Esta abordagem apresenta vários inconvenientes: em primeiro lugar, no curso do processo de fabricação das microesferas, a proteína é colocada em contato com solventes orgânicos potencialmente desnaturantes. Além disso, as microesferas são de um tamanho elevado (1 a 1000 mícrons), o que constitui uma limitação em termos de injeção e de esterilização facilitadas em filtros. Enfim, problemas de tolerância local podem ocorrer quando da hidrólise in situ do polímero.

De acordo com uma quarta abordagem, foram desenvolvidas formas de liberação prolongada de proteína terapêutica constituídas por suspensões, líquidas e pouco viscosas, de nanopartículas carregadas de proteínas terapêuticas. Estas suspensões permitiram a administração fácil de proteínas terapêuticas nativas.

Uma primeira forma de suspensões de nanopartículas de liberação prolongada é aquela constituída por suspensões de lipossomas, nas quais a proteína terapêutica nativa não modificada é encapsulada. Após a injeção, a proteína é liberada progressivamente dos lipossomas, o que prolonga o tempo de presença da proteína na circulação geral. Assim, por exemplo, Frossen et al descrevem, no artigo Câncer Res. 43 p. 546, 1983, a encapsulação de agentes anti-neoplásticos em lipossomas a fim de aumentar a eficácia terapêutica dos mesmos. A liberação da droga é, entretanto, demasiadamente rápida para se obter uma real liberação prolongada. A sociedade Liposome Company Inc, em sua patente US-B-5 399 331, propõe melhorar o tempo de liberação in vitro da interleucina 2 enxertando-a de forma covalente no lipossoma. Recai-se, então, na amplitude da primeira abordagem "proteína modificada" evocada acima. A fim de atenuar a ausência de estabilidade dos lipossomas, mantendo, ao mesmo tempo, as vantagens de uma formulação de nanopartículas líquida e de baixa viscosidade, a sociedade Flamel Technologies propôs uma outra via, na qual a proteína terapêutica é associada a nanopartículas de um poliaminoácido hidrossolúvel "modificado hidrofóbico", isto é, modificado por enxerto de agrupamentos hidrofóbicos. Este polímero é escolhido, em particular, dentre os poliaminoácidos (poliglutamatos ou poliaspartatos) portadores de enxertos hidrofóbicos.

Uma das vantagens principais destes polímeros modificados hidrofóbicos é a de se auto-agrupar espontaneamente na água para formar nanopartículas.

Uma outra vantagem destes sistemas é que as proteínas ou os peptídeos, em particular as proteínas terapêuticas, se associam espontaneamente às nanopartículas de polímeros modificados hidrofóbicos. Esta associação é não covalente e se efetua sem recorrer a um tensoativo nem a um processo de transformação potencialmente desnaturante. Não se trata de uma encapsulação da proteína em uma microesfera, como divulgado na patente US-B-6 500 448 e no pedido US-A-2003/0133980. De forma totalmente diferente, estas nonopartículas de copoliaminoácidos modificados hidrofóbicos adsorvem espontaneamente as proteínas em solução, sem as modificar quimicamente nem as desnaturar e sem as submeter a etapas de tratamento agressivas do tipo "colocação em emulsão" e "evaporação de solvente". As formulações podem ser estocadas ou armazenadas sob a forma líquida ou liofilizada.

Após a injeção, por exemplo, por via subcutânea, estas suspensões de nanopartículas carregadas de proteínas liberam progressivamente a proteína não desnaturada e bioativa in vivo. Tais associações não covalentes princípio ativo (PA) protéico / poli[Glu] ou polí[Asp] são divulgadas no pedido de patente WO-A-00/30618.

Este pedido descreve especialmente suspensões coloidais de pH 7,4 compreendendo associações de insulina humana com nanopartículas de poliglutamato "modificado hidrofóbico". 0 quadro abaixo considera poliaminoácidos "modificados hidrofóbicos" utilizados e taxas de associação obtidas nos exemplos do WO-A-00/30618.

Essas suspensões coloidais titulam 1,4 mg/ml de insulina e 10 mg/ml de poliaminoácido "modificado hidrofóbico".

Ressalta-se da figura 1 do WO-A-00/30618 que a duração de liberação in vivo da insulina vetorizada pelas suspensões acima referidas é de 12h. Esta duração de liberação ganharia em ser aumentada.

Assim, mesmo se este pedido PCT já represente um progresso considerável, seu conteúdo técnico pode ainda ser otimizado em relação ao caderno de especificações enunciado acima e, sobretudo, em relação ao alongamento da duração de liberação in vivo.

Os pedidos de patente franceses não publicados N03 02 07008 de 07/06/2002, 02 09670 de 30/07/2002, 03 50190 de 28/05/2003 e 01 50641 de 03/10/2003 dizem respeito a novos poliaminoácidos anfifílicos, hidrossolúveis e compreendendo unidades aspárticas e/ou unidades glutâmicas, nas quais pelo menos uma parte dessas unidades são portadoras de enxertos hidrofóbicos. A exemplo dos poliaminoácidos modificados hidrofóbicos divulgados no pedídô WO-A-00/30619, essas novas matérias-primas poliméricas formam espontaneamente em meio líquido aquoso suspensões coloidais de nanopartículas que podem ser utilizadas para a liberação prolongada de PA (insulina). Elas são biocompatíveis, biodegradáveis e as proteínas, em particular as proteínas terapêuticas, se adsorvem espontaneamente nessas nanopartículas sem sofrer modificação química ou de desnaturação.

Esses pedidos visam também a novas composições farmacêuticas, cosméticas, dietéticas ou fitossanitárias à base desses poliaminoácidos.

Os poliaminoácidos "modificados hidrofóbicos" anfifílicos de acordo com o pedido de patente francês N° 02 07008 compreendem unidades aspárticas e/ou unidades glutâmicas, portadoras de enxertos hidrofóbicos comportando pelo menos um motivo ou padrão alfatocoferol, por exemplo: (poliglutamato ou poliaspartato enxertado pelo alfa tocoferol de origem sintética ou natural).

Este pedido não publicado divulga especificamente uma suspensão coloidal que contém nanopartículas formadas por associações polímero/proteína ativa e que é obtida misturando-se 1 mg de um poliglutamato enxertado pelo alfatocoferol· e 7 mg de insulina em 1 ml de água, com pH 7,0.

Os poliaminoácidos "modificados hidrofóbicos" anfifílicos de acordo com o pedido de patente francês N° 02 09670 compreendem unidades aspárticas e/ou unidades glutâmicas, portadoras de enxertos hidrofóbicos comportando pelo menos um motivo hidrofóbico e ligados às unidades aspárticas e/ou glutâmicas por intermédio de um conector ou acoplamento ("rotule") contendo duas funções amidas e, mais precísamente, através de um "espaçador" do tipo lisina ou ornitina.

Este pedido não publicado divulga especificament uma suspensão coloidal que contém nanoparticulas formada por associações polimero/proteina ativa e que é obtid misturando-se 10 mg de um poliglutamato enxertado com ácid palmítico através de um "espaçador" lisina e 200 UI d insulina (7,4 mg) em 1 ml de água, com pH 7,4.

Os poliaminoácidos "modificados hidrofóbicos anfifilicos de acordo com o pedido de patente francês N° 0 50190 ' compreendem unidades aspárticas e/ou unidade glutâmicas, das quais algumas são portadoras de pelo meno um enxerto ligado a uma unidade aspártica ou glutâmica, po intermédio de um "espaçador" "aminoácido" à base de Leu e/ou ILeu, e/ou Vai, e/ou Phe, um agrupamento hidrofóbic C6-C30 sendo ligado por uma ligação éster ao "espaçador".

Este pedido não publicado divulga especificament uma suspensão coloidal que contém nanoparticulas formada por associações polímefo/proteína ativa e que é obtic misturando-se uma solução aquosa contendo 10 mg de u poliglutamato enxertado com um enxerto -Leu-OC8, -Val-OCl ou -Val-colesterila e 200 UI de insulina (7,4 mg), pc mililitro de água, com pH 7,4. - O pedido de patente francês FR-A-01 50641 divulç homopoliaminoácidos lineares, anfifilicos, aniônicos compreendendo unidades aspárticas ou unidades glutâmicas cujas extremidades são portadoras de agrupamente hidrofóbicos comportando de 8 a 30 átomos de carbono.

Em particular, os homopoliaminoácide telequélicos "modificados hidrofóbicos" são, por exemple um poli[GluONa] de extremidades PheOC18/C18 ou i Poli[GluONa] de extremidades PheOC18/alfa-tocoferol. Est pedido não publicado descreve igualmente uma suspens! coloidal que contém nanoparticulas formadas por associaçõe polimero/proteina ativa e que é obtida misturando-se 10 r de um dos polímeros acima mencionados e 200 131 de insulina (7,4 mg) por mililitro de água, com pH 7,4. A duração de liberação in vivo da insulina "vetorizada" pelas suspensões de acordo com esses pedidos não publicados ganharia em ser aumentada.

Seja como for, toda esta técnica anterior sobre as suspensões coloidais de nanoparticulas de poliaminoácidos modificados hidrofóbicos não revela formulação que permita: ■ (I) aumentar suficientemente a duração de liberação da proteína ativa após injeção por via parenteral, em particular sub-cutânea; (II) e/ou reduzir o pico de concentração plasmática da proteína ativa após injeção da formulação que a contém. ■ Nessas condições, um dos objetivos essenciais da presente invenção é, conseqüentemente, propor uma formulação farmacêutica líquida para a liberação prolongada de princípio (s) ativo(s), remediando as carências da técnica anterior e, em particular, permitindo, após injeção por via parenteral (por exemplo, sub-cutânea), obter uma duração de liberação in vivo prolongada para princípios ativos -PA- (por exemplo, proteínas, peptídeos terapêuticos e pequenas moléculas) não desnaturados, por exemplo, proteínas humanas ou sintéticas.

Um outro objetivo essencial da invenção é o de propor uma formulação farmacêutica líquida de liberação prolongada do PA in vivo que seja suficientemente fluida para ser facilmente injetável e esterilizável por filtração em filtros cujo tamanho dos poros é inferior ou igual a 0,2 mícrons.

Um outro objetivo essencial da invenção é o de propor uma formulação farmacêutica líquida de liberação prolongada do PA in vivo que seja estável na conservação tanto no plano físico-quimico quanto no biológico.

Um outro objetivo essencial da invenção é o de propor uma formulação farmacêutica líquida de liberação prolongada do PA in vivo que apresente pelo menos uma das propriedades seguintes: biocompatibilidade, biodegradabilidade, atoxicidade, boa tolerância local.

Um outro objetivo essencial da invenção é o de propor uma formulação farmacêutica para a liberação prolongada lenta de PA in vivo, esta formulação sendo uma suspensão coloidal aquosa de baixa viscosidade compreendendo partículas submicrônicas de polímero PO auto-associadas a pelo menos um PA, o polímero PO sendo um polímero biodegradável, hidrossolúvel e portador de agrupamentos hidrofóbicos.

Um outro objetivo essencial da invenção é o de propor uma formulação farmacêutica de liberação prolongada lenta de PA in vivo, esta formulação sendo uma suspensão coloidal aquosa de baixa viscosidade compreendendo partículas submicrônicas de polímero PO auto-associadas a pelo menos um PA, o polímero PO sendo, por exemplo, um poliaminoácido formado por unidades aspárticas e/ou unidades glutâmicas, pelo menos uma parte dessas unidades sendo portadoras de enxertos comportando pelo menos um agrupamento hidrofóbico (GH), PO sendo, além disso, biodegradável, hidrossolúvel, e anfifílico.

Um outro objetivo essencial da invenção é o de propor produtos derivados e/ou precursores da formulação visada nos objetivos acima enunciados. É, em particular, do mérito da Depositante ter desenvolvido formulações farmacêuticas líquidas aquosas de baixa viscosidade em temperatura fisiológica, que, de forma surpreendente, formam um depósito gelificado in vivo após administração parenteral facilitada no homem ou nos mamíferos de sangue quente, a formação desse depósito não sendo desencadeada por uma mudança de pH, nem de temperatura quando da injeção parenteral, nem pela presença de eletrólito(s) (tais como íons Ca++), em concentração fisiológica e/ou de pelo menos um tensoativo, nem ainda por dispersão de solvente orgânico no meio fisiológico. 0 depósito gelificado assim formado aumenta de forma significativa a duração de liberação do PA in vivo.

Donde se sucede que a invenção diz respeito a uma formulação farmacêutica líquida para a liberação prolongada de princípío(s) atiço(s) -PA-, esta formulação compreendendo uma suspensão coloidal, aquosa, de baixa viscosidade, à base de partículas submicrônicas de polímero (PO) biodegradável, hidrossolúvel e portador de agrupamentos hidrofóbicos (GH), as partículas sendo associadas de forma não covalente a pelo menos um princípio ativo (PA), caracterizada: - pelo fato de que o meio dispersivo da suspensão é essencialmente constituído por água, - pelo fato de que é apta a ser injetada por via parenteral e a formar, em seguida, in vivo, um depósito gelificado, esta formação de depósito gelificado: - sendo, por um lado, pelo menos em parte provocada por pelo menos uma proteína fisiológica presente in vivo, - e permitindo, por outro lado, prolongar e controlar a duração de liberação do PA in vivo, decorridas 24h após a administração, - pelo fato de que é líquida nas condições de injeção, - e pelo fato de que é igualmente líquida na :emperatura e/ou no pH fisiológicos, e/ou em presença: - de eletrólito fisiológico em concentração fisiológica, - e/ou de pelo menos um tensoativo.

Vantajosamente, esta gelificação in vivo não resulta de uma mudança de pH e/ou de temperatura, nem da Dresença de eletrólitos (Ca++, por exemplo) em concentração fisiológica e/ou de pelo menos um tensoativo, nem de uma iispersão in vivo de um ou vários solventes orgânicos sventualmente contidos na formulação injetada.

Sem querer estar ligado pela teoria, pode-se pensar que as proteínas fisiológicas presentes in vivo em soncentrações fisiológicas permitem a agregação das nanopartículas de PO associadas a pelo menos um PA. Uma gelificação desse tipo se opera, por exemplo, em uma ou várias horas, 24h, 48h ou 72h, entre outras.

Em conformidade com uma forma otimizada da invenção, a concentração de [PO] da formulação é fixada em um valor suficientemente elevado para permitir a formação de depósito gelificado in vivo, após injeção parenteral, em presença de pelo menos uma proteína fisiológica.

De acordo com um modo de definição, que não é mais baseado em um comportamento in vivo como acima indicado, mas em um comportamento in vitro, a invenção diz respeito a uma formulação farmacêutica líquida para a liberação prolongada de princípio(s) ativo(s) -PA-, esta formulação: - sendo líquida em atmosfera ambiente, - sendo igualmente líquida na temperatura e/ou no pH fisiológicos e/ou em presença: - de eletrólito fisiológico em concentração fisiológica, - e/ou de pelo menos um tensoativo, - e compreendendo uma suspensão coloidal, aquosa, de baixa viscosidade, à base de partículas submicrônícas de polímero PO biodegradável, hidrossolúvel e portador de agrupamentos hídrofóbicos GH, as partículas sendo associadas de forma não covalente a pelo menos um princípio ativo PA e o meio dispersivo da suspensão sendo essencialmente constituído por água, caracterizada pelo fato de que sua concentração de [PO] é fixada em um valor suficientemente elevado para permitir a formação de depósito gelificado in vitro, após injeção parenteral, em presença de pelo menos uma proteína.

De preferência, a formulação farmacêutica líquida de acordo com a invenção é caracterizada pelo fato de que sua concentração de [PO] é tal que: ■ [PO] > 0,9.Cl, ■ de preferência, 20.Cl ^ [PO] h Cl, ■ e, melhor ainda, 10.Cl ^ [PO] ^ Cl, com Cl representando a concentração de "gelificação induzida" das partículas de PO tal como medida em um teste GI. O depósito gelificado obtido após injeção parenteral da formulação permite uma prolongação vantajosa da duração de liberação do ΡΆ (por exemplo, proteína terapêutica) , assim como uma redução do pico de concentração plasmática. A duração de liberação do PA é especialmente significativamente aumentada em relação àquela das formulações da técnica anterior, em particular aquelas descritas no pedido de patente PCT publicado WO-A-00/30618 e nos pedidos de patente franceses não publicados N° 02 07008, 02 09670, 03 50190 e 01 50641. A prolongação da duração de liberação in vivo induzida pelas formulações de acordo com a invenção é ainda mais apreciável à medida que os PA (por exemplo, proteínas terapêuticas) são sempre plenamente bioativos e não desnaturados.

Em toda a presente exposição, os arranjos supramoleculares de polímero PO associado ou não ao PA serão indiferentemente designados por "partículas submicrônicas" ou "nanopartículas". Isto corresponde a partículas (líquidas ou sólidas) de diâmetro hidrodinâmico médio (medido de acordo com um modo operatório Md definido abaixo nos exemplos), por exemplo, compreendido entre 1 e 500 nm, de preferência entre 5 e 250 nm.

Ademais, é importante notar que essas formulações são líquidas, isto é, apresentam vantajosamente uma viscosidade muito fraca ou baixa, que torna sua injeção fácil. Elas só gelificam in vivo.

De acordo com a invenção, os qualificativos "líquida", "baixa" ou "viscosidade muito fraca" correspondem, vantajosamente, a uma viscosidade dinâmica a 20°C inferior ou igual a 5 Pa.s. A medição de referência para a viscosidade pode ser realizada, por exemplo, a 20°C com o auxílio de um reômetro AR1000 (TA Instruments) equipado de uma geometria cônica-plana (4 cm, 2°C). A viscosidade v é medida para um gradiente de cisalhamento de 10 s_1.

Assim, a viscosidade das formulações de acordo com a invenção pode estar, por exemplo, compreendida entre 1.10~3 e 5 Pa.s, de preferência entre 1.10“3 e 0,8 Pa.s e, mais preferencialmente ainda, entre 1.10“3 e 0,5 Pa.s.

Esta fraca viscosidade torna as formulações da invenção não somente facilmente injetáveis por via parenteral, em particular por via intramuscular ou sub- cutânea, entre outras, mas também esterilizáveis facilmente e a baixo custo por filtração em filtros de esterilização de 0,2 pm de tamanho de poros.

Este estado liquido ou esta fraca viscosidade das formulações da invenção existe tanto a temperaturas de injeção correspondendo a temperaturas ambientes, por exemplo, compreendidas entre 4 e 30°C, quanto à temperatura fisiológica. A formulação de acordo com a invenção é, de preferência, uma suspensão coloidal aquosa de nanoparticulas associadas a um ou vários PA. Isto significa que, em conformidade com a invenção, o meio dispersivo desta suspensão é essencialmente formado por água. Na prática, esta água representa, por exemplo, pelo menos 50% em peso em relação à massa total da formulação.

No sentido da invenção, o termo "proteína" designa tanto uma proteína quanto um peptídeo. Esta proteína ou este peptídeo podendo ser modificado ou não, por exemplo, por enxerto de um ou de vários agrupamentos polioxíetílênicos.

Por "proteínas fisiológicas", entende-se, no sentido da invenção, as proteínas e/ou os peptídeos endógenos dos mamíferos de sangue quente presentes no local de injeção.

Por "temperatura fisiológica", entende-se, no sentido da invenção, a temperatura fisiológica dos mamíferos de sangue quente, a saber, por exemplo, aproximadamente 37-42°C. ' Por "pH fisiológico", entende-se, no sentido da invenção, um pH, por exemplo, compreendido entre 6 e 7,6.

Por "gel", entende-se, no sentido da invenção, um estado semi-sólido no qual se transforma a formulação líquida de acordo com a invenção, e esta espontaneidade pela única presença de proteína(s) fisiológica(s), sem intervenção essencial do pH fisiológico e/ou da temperatura fisiológica e/ou da presença de um eletrólito fisiológico (Ca++, por exemplo) e/ou da dispersão (ou dissipação) in vivo de um solvente orgânico eventualmente presente na formulação injetada.

Por "eletrólito fisiológico", entende-se, no sentido da invenção, qualquer elemento eletrólito (por exemplo, íons Ca++) presente nos mamíferos de sangue quente.

Por "concentração fisiológica", entende-se, no sentido da invenção, qualquer concentração fisiológica encontrada nos mamíferos de sangue quente, para o meio fisiológico considerado.

Além disso, as formulações de acordo com a invenção são não tóxicas, bem toleradas localmente e estáveis. É igualmente do mérito dos inventores terem desenvolvido um teste in vitro GI que permite selecionar uma população das formulações preferidas de acordo com a invenção e determinar as concentrações idôneas de PO nas formulações.

Em conformidade com a invenção, o teste GI de medição da concentração de gelificação Cl é um teste de referência que permite definir a concentração crítica Cl, denominada, logo a seguir, concentração de gelificação induzida Cl, que caracteriza cada formulação coloidal de acordo com a invenção. 0 teste GI de determinação da concentração Cl de gelificação induzida é o seguinte: A fim de determinar a concentração Cl, são preparadas formulações coloidais de concentrações variáveis de polímero anfifílico de acordo com a invenção e de concentração constante de proteína terapêutica. Para este fira, são colocadas em solução na água deionizada quantidades crescentes de pó seco do polímero. As soluções são mantidas a 25°C sob agitação magnética durante 16 horas antes de serem misturadas com uma solução concentrada de proteína terapêutica. 0 volume e a concentração desta solução de proteína terapêutica são ajustados a fim de se obter a concentração de proteína procurada pela formulação [por exemplo, 0,3 mg/ml de interferon alfa 2b ou 2,5 mg/ml de interleucina 2 (IL2)].

As formulações coloidais assim preparadas são misturadas a uma solução aquosa de albumina de soro bovino (BSA) concentrada a 30 mg/ml, depois, centrifugadas durante 15 minutos a 3000 t/min. As misturas são deixadas sob agitação suave durante 24h antes de serem recuperadas para serem caracterizadas.

As medições de viscoelasticidade são efetuadas em um reômetro TA Instruments AR 1000, equipado de uma geometria cônica-plana (diâmetro 4 cm e ângulo 1,59). Uma deformação de 0,01 rad, situada no campo de viscoelasticidade linear, é imposta de maneira sinusoidal em uma gama de freqüência compreendida entre 0,1 e 300 rad/s. A temperatura da amostra é mantida constante a 20°C por meio de uma célula Peltier.

Os espectros de freqüência do módulo elástico G' e do módulo viscoso ou de perda, G", permitem definir o tempo de relaxamento característico Tr definido aqui como o inverso da freqüência na qual o módulo elástico G' cruza o módulo viscoso G''. Encontrar-se-á uma exposição detalhada destas questões na obra Ferry, Viscoelastic Properties of Polymers, J.D. Ferry, J. Wiley, NY, 1980 e no artigo de J. REGALADO et al. Macromolecules 1999, 32, 8580. A medição do tempo de relaxamento Tr em função da concentração de polímero da formulação permite definir a concentração Cl na qual este tempo Tr passa 1 segundo. Exemplos de valores da concentração de gelíficação Cl serão dados no exemplo 8 logo a seguir.

Da mesma forma, podem ser definidas as concentrações CO, 1 e CIO para as quais o tempo de relaxamento ultrapassa respectivamente 0,1 s e 10 s. Estas concentrações se classificam na ordem crescente seguinte: C0,1 < Cl < CIO.

Segundo uma variante da formulação de acordo com a invenção: > [PO] > C0,1, > de preferência, [PO] ^ Cl, ^ e, mais preferencialmente ainda, [PO] A CIO.

Segundo uma característica adicional vantajosa: [PO] < 20.Cl.

No sentido da invenção e em toda a presente exposição, os termos "associação" ou "associar" empregados para qualificar as relações entre um ou vários princípios ativos e os polímeros PO (por exemplo, os poliaminoácidos) significam, em particular, que o ou os princípios ativos são ligados ao(s) polímero (s) PO [por exemplo, o (ou os) poliaminoácido(s)] por uma ligação não covalente, por exemplo, por interação eletrostática e/ou hidrofóbica e/ou ligação hidrogênica e/ou repulsão estérica.

Os polímeros PO de acordo com a invenção são polímeros biodegradáveis, hidrossolúveis e portadores de agrupamentos hidrofóbicos GH. Os agrupamentos hidrofóbicos podem ser em número reduzido vis a vis o resto da cadeia e podem se situar lateralmente na cadeia ou intercalados na cadeia, e serem repartidos de forma aleatória (copolímero estatístico) ou repartidos sob a forma de seqüências ou de enxertos (copolímero em blocos ou copolimeros seqüenciados)..

Sem querer se limitar, os polímeros PO modificados hidrofóbicos podem ser escolhidos do grujSo compreendendo os copoliaminoácidos anfifílicos, bs polissacarídeos - de preferência do sub-grupo compreendendo as pululanas e/ou as quitosanas e/ou os mucopolissacarídeos -, as gelatinas ou suas misturas. ' De acordo com um modo preferido de realização da invenção, PO é escolhido dentre os copoliaminoácidos anfifílicos.

No sentido da invenção e em toda a presente exposição, o termo "poliaminoácido" cobre tanto os oligoaminoácidos compreendendo de 2 a 20 unidades "aminoácido" quanto os poliaminoácidos compreendendo mais de 20 unidades "aminoácido".

De preferência, os poliaminoácidos de acordo com a presente invenção são oligômeros ou homopolímeros compreendendo unidades recorrentes ácido glutâmico ou aspártico ou copolimeros compreendendo uma mistura desses dois tipos de unidades "aminoácido". As unidades consideradas nestes polímeros são ácidos aminados tendo a configuração D ou L ou D/L e são ligadas por suas posições alfa ou gama para a unidade glutamato ou glutâmica e alfa ou beta para a unidade aspártica ou aspartato.

As unidades "aminoácido" preferidas da cadeia de poliaminoácido principal são aquelas tendo a configuração L e uma ligação do tipo alfa.

De acordo com um modo ainda mais preferido de realização da invenção, o polímero PO é um poliaminoácido formado por unidades aspárticas e/ou unidades glutâmicas, pelo menos uma parte dessas unidades sendo portadoras de enxertos comportando pelo menos um agrupamento hidrofóbico GH. Estes poliaminoácidos são especialmente do tipo daqueles descritos no pedido de patente PCT WO-A-00/30618.

De acordo com uma primeira possibilidade, o (ou os) PO da formulação é definido pela fórmula geral (I) seguinte: na qual: ■ R1 representa um H, uma alquila linear C2 a CIO ou ramificada C3 a CIO, benzila, uma unidade ácida amino terminal ou -R4-[GH] ; ■ R2 representa um H, um grupo acila linear C2 a CIO ou ramificado C3 a CIO, um piroglutamato ou R4-[GH]; ■ R3 é um H ou uma entidade catiônica, de preferência selecionada do grupo compreendendo: - os cátions metálicos vantajosamente escolhidos do sub-grupo compreendendo: sódio, potássio, cálcio, magnésio, ' - os cátions orgânicos vantajosamente escolhidos do sub-grupo compreendendo: • os cátions à base de amina, • os cátions à base de oligoamina, • · os cátions à base de poliamina (polietilenoimina sendo particularmente preferida), • os cátions à base de aminoácido(s) vantajosamente escolhidos da classe compreendendo os cátions à base de lisina ou de arginina, - ou os poliaminoácidos catiônicos vantajosamente escolhidos do sub-grupo compreendendo a polilisina ou a oligolisina, ■ R'1 representa uma ligação direta ou um "espaçador" à base de 1 a 4 unidades aminoácido; 1·. ■ A representa independentemente um radical -CHg-(unidade aspártica) ou -CH2-CH2- (unidade glutâmica); ■ n/(n+m) é definido como a taxa de enxerto molar e seu valor é suficientemente baixo para que ο PO colocado em solução na água com pH 7 e a 25°C forme uma suspensão coloidal de partículas submicrônicas de PO, de preferência n/ (n+m) está compreendicio entre 1 a 25% molar e, melhor ainda, entre 1 e 15% molar; ■ n+m é definido como o grau de polimerização e varia de 10 a 1000, de preferência entre 50 e 300; ■ GH representa um agrupamento hidrofóbico. ' De acordo com uma segunda possibilidade, o (ou os) PO da formulação responde a uma das fórmulas gerais (II), (III) e (IV) seguintes: nas quais: ■ GH representa um agrupamento hidrofóbico; ■ R30 é um agrupamento alquila linear C2 a C6; ■ R3, é um H ou uma entidade catiônica, de preferência selecionada do grupo compreendendo: - os cátions metálicos vantajosamente escolhidos do sub-grupo compreendendo: o sódio, o potássio, o cálcio, o magnésio, - os cátions orgânicos vantajosamente escolhidos do sub-grupo compreendendo: • os cátions à base de amina, • os cátions à base de oligoamina, • os cátions à base de poliamina (a polietilenoimina sendo particularmente preferida), • os cátions à base de ácido (s) aminado(s) vantajosamente escolhidos da classe compreendendo os cátions à base de lisina ou de arginina, - ou os poliaminoácidos catiônicos vantajosamente escolhidos do sub-grupo compreendendo a polilisina ou a oligolisina, ■ R50 é um agrupamento alquila, dialcoxi ou diamina C2 a C6; ■ R‘l representa uma ligação direta ou um "espaçador" à base de 1 a 4 unidades aminoácido; ■ A representa independentemente um radical -CH2-(unidade aspártica) ou -CH2-CH2- (unidade glutâmica); ■ n'+m' ou n'' é definido como o grau de polimerização e varia de'10 a 1000, de preferência entre 50 e 300.

Vantajosamente, os n agrupamentos GH do PO representam, cada um, independentemente uns dos outros, um radical monovalente de fórmula seguinte: na qual: ■ R5 representa uma metila(alanina), isopropila (valina), isobutila (leucina), secbutila (isoleucina), benzila (fenilalanina); ■ R6 representa um radical hidrofóbico comportando de 6 a 30 átomos de carbono; ■ 1 varia de 0 a 6.

De acordo com uma característica excepcional da invenção, todos ou parte dos agrupamentos hidrofóbicos R5 dos PO são escolhidos de forma independente, do grupo de radicais comportando: ■ um alcoxi linear ou ramificado comportando de 6 a 30 átomos de carbono e podendo comportar pelo menos um heteroátomo (de preferência, O e/ou N e/ou S) e/ou pelo menos uma insaturação, ■ um alcoxi comportando de 6 a 30 átomos de carbono e tendo um ou vários carbociclos anelados e contendo eventualmente pelo menos uma insaturação e/ou pelo menos um heteroátomo (de preferência, 0 e/ou N e/ou S), ■ uma alcoxiarila ou uma ariloxialquila de 7 a 30 átomos de carbono e podendo comportar pelo menos uma insaturação e/ou pelo menos um heteroátomo (de preferência, 0 e/ou N e/ou S).

Na prática, e sem que isso seja limitativo, o radical hidrofóbico R6 do enxerto do PO é proveniente de um precursor alcoólico escolhido do grupo compreendendo: o octanol, o dodecanol, o tetradecanol, o hexadecanol, o octadecanol, o oleilalcool, o tocoferol ou o colesterol.

De acordo com uma primeira forma de realização da invenção, as cadeias principais dos poliam.inoácidos são homopolímeros de alfa-L-glutamato ou de alfa-L-glutâmico.

De acordo com uma segunda forma de realização da invenção, as cadeias principais dos poliaminoácidos são homopolímeros de alfa-L-aspartato ou de alfa-L-aspártico.

De acordo com uma terceira forma de realização da invenção, as cadeias principais dos. poliaminoácidos são copolímeros de alfa-L-aspartato/alfa-L-glutamato ou de alfa-L-aspártico/alfa-L-glutâmico.

Vantajosamente, a distribuição das unidades aspárticas e/ou glutâmicas da cadeia de poliaminoácido principal do PO é tal que o polímero assim constituído é ou aleatório, ou do tipo bloco, ou do tipo multibloco.

De acordo com um outro modo de definição, o PO utilizado ou colocado na formulação de acordo com a invenção tem uma massa .molar que se situa entre 2000 e 100000 g/mole e, de preferência, entre 5000 e 40000 g/mole.

De acordo com uma variante, o PO da formulação de acordo com a invenção é portador de pelo menos um enxerto do tipo polialquileno-glicol ligado a uma unidade glutamato e/ou aspartato,, Vantajosamente, este enxerto do tipo polialquileno-glicol é da fórmula (V) seguinte: na qual: - R'4 representa uma ligação direta ou um "espaçador" à base de 1 a 4 unidades aminoácido; - X é um heteroátomo escolhido do grupo comportando o oxigênio, o azoto ou um enxofre; Ί fi - R e R representam independentemente um H, uma alquila linear Cl a C4; - n"' varia de 10 a 1000, de preferência de 50 a 300.

Na prática, o polialquilenoglicol é, por exemplo, um polietileno glicol. É desejável, em conformidade com a invenção, que a porcentagem molar de enxerto do polialquileno glicol varie de 1 a 30%.

Os poliaminoácidos PO são, além disso, extremamente vantajosos, visto que, a uma taxa de enxerto ajustável, eles se dispersam na água com pH 7,4 (por exemplo, com um tampão fosfato) para dar suspensões coloidais.

Ademais, os princípios ativos PA, tais como proteínas, peptídeos ou pequenas moléculas, podem se associar espontaneamente a nanopartículas compreendendo esses poliaminoácidos PO.

Convém compreender que os PO à base de poliaminoácidos contêm funções carboxílicas que são ou neutras (forma COOH) ou ionizadas (ânion COO”), de acordo com o pH e a composição. Por esta razão, a solubilidade em uma fase aquosa é diretamente função da taxa de COOH livres dos PO (não enxertado pelo motivo hídrofóbico) e do pH. Em solução aquosa, o contra-cátion pode ser um cátion metálico, tal como o sódio, o cálcio ou o magnésio, ou um cátion orgânico, tal como a trietanolamina, o tris(hidroximetil)-aminometano ou uma poliamina, tal como a polietilenoimina.

Os PO do tipo poliaminoácidos suscetíveis de serem utilizados na formulação da invenção são, por exemplo, obtidos por métodos conhecidos do versado na técnica. Os poliaminoácidos estatísticos podem ser obtidos por enxerto do enxerto hidrofôbico, previamente funcionalizado pelo "espaçador", diretamente no polímero por uma reação clássica de acoplamento. Os PO poliamínoácidos em blocos ou multiblocos podem ser obtidos por polimerização seqüencial dos anidridos de N-carboxi-aminoácidos (NCA) correspondentes.

Prepara-se, por exemplo, um poliaminoácido, homopoliglutamato, homopoliaspartato ou um copolímero glutamato/aspartato, em bloco, multibloco ou aleatório de acordo com métodos clássicos.

Para a obtenção de poliaminoácido do tipo alfa, a técnica mais freqüente é baseada na polimerização de anidridos de N-carboxi-aminoácidos (NCA), descrita, por exemplo, no artigo "Biopolymers", 1976, 15, 1869 e na obra de H.R. Kricheldorf "alpha-Aminoacid-N-carboxy Anhydrides and related Heterocycles" Springer Verlag (1987). Os derivados de NCA são, de preferência, derivados NCA-O-Me, NCA-O-Et ou NCA-O-Bz (Me=Metil, Et=Etila e Bz=Benzila). Os polímeros são, em seguida, hidrolisados em condições apropriadas para se obter o polímero sob sua forma ácida. Esses métodos são inspirados na descrição dada na patente FR-A-2 801 226 da depositante. Um certo número de polímeros utilizáveis de acordo com a invenção, por exemplo, do tipo poli(alfa-L-aspártico), poli(alfa-L-glutâmico), poli(alfa-D-glutâmico) e poli(gama-L-glutâmico) de massas variáveis estão disponíveis comercialmente. O poliaspártico do tipo alfa-beta é obtido por condensação do ácido aspártico (para se obter uma polísuccinimida) seguida de uma hidrólise básica (conforme Tomida e al. Polymer 1997, 38, 4733-36). 0 acoplamento do enxerto com uma função ácida do polímero é realizado facilmente por reação do poliaminoácido em presença de uma carbodiimída como agente de acoplamento e, opcionalmente, um catalisador, tal como a 4-dímetilamínopiridina e em um solvente apropriado, tal como a dimetilformamida (DMF), a N-metil pirrolidona (NMP) ou a dimetilsulfoxida (DMSO). A carbodíimida é, por exemplo, a diciclohexilcarbodiimida ou a diisopropilcarbodiimida. A taxa de enxerto é controlada quimicamente pela estequiometria dos constituintes e reativos ou pelo tempo de reação. Os enxertos hidrofóbícos funcionalizados por um "espaçador" são obtidos por acoplamento peptídico clássico ou por condensação direta por catálise ácida. Essas técnicas são bem conhecidas do versado na técnica. , ' Para a síntese de copolímero em bloco ou multibloco, utilizam-se derivados NCA previamente sintetizados com o enxerto hidrofóbico. Por exemplo, o derivado NCA-hidrofóbico é copolimerizado com o NCA-0-Benzil, depois, são removidos ou retirados, por hidrólise, seletivamente, os agrupamentos benzílicos. A síntese de poliaminoácidos PO conduz, preferencialmente, a suspensões aquosas de nanopartículas de PO.

Tais suspensões podem ser transformadas em pós de nanopartículas de PO por secagem, de maneira apropriada e conhecida do versado na técnica, como por exemplo: aquecimento (estufa...), colocação sob vácuo, utilização de dessecantes, liofilização, atomização.

Essas nanopartículas de PO, em suspensão ou no estado pulverulento, formam uma matéria-prima para a preparação das formulações de acordo com a invenção.

Para este propósito, pode ser precisado que as formulações de acordo com a invenção resultam da associação não covalente de nanopartículas à base de pelo menos um PO e de pelo menos um PA, em um meio líquido aquoso.

Para a preparação, ο PO e/ou o PA pode estar sob a forma sólida (de preferência pó) e/ou sob a forma liquida (de preferência, suspensão aquosa coloidal). A associação PA/PO significa, no sentido da presente exposição, que o (ou os) PA é(são) associado (s) ao(s) polímero (s) PO [por exemplo, um ou vários poliaminoácido(s)] por uma ou várias ligações que não uma (ou várias) ligação(ões) química(s) covalente(s).

As técnicas de associação de um ou de vários PA aos PO de acordo com a invenção são descritas especialmente no pedido de patente WO-A-00/30618. Elas consistem em incorporar pelo menos um PA no meio líquido contendo nanoparticulas de PO, de maneira a se obter uma suspensão coloidal de nanoparticulas carregadas de ou associadas a um ou vários princípio(s) ativo(s). A invenção tem, então, igualmente por objeto um processo de preparação da formulação acima mencionada.

De acordo com um primeiro modo preferido de realização, este processo é caracterizado pelo fato de que consiste essencialmente:, ♦ em inserir uma suspensão coloidal de nanoparticulas de pelo menos um PO, ♦ em misturar esta suspensão coloidal de nanoparticulas de PO com pelo menos um PA, de preferência em solução aquosa, ♦ em acrescentar, eventualmente, pelo menos um excipiente, ♦ se necessário, em ajustar o pH e/ou a osmolaridade e, ♦ eventualmente, em filtrar a suspensão assim obtida.

Vantajosamente, o (ou os) PA(s) está sob a forma de suspensão ou de solução aquosa para a mistura com a solução coloidal de nanopartículas de PO.

De acordo com um segundo modo de realização, este processo é caracterizado pelo fato de que consiste essencialmente: ♦ em inserir um pó de pelo menos um polímero PO, ♦ em misturar este pó com uma suspensão ou solução aquosa de pelo menos um PA, de preferência em solução aquosa, ♦ em acrescentar, eventualmente, pelo menos um excipiente, ♦ se necessário, em ajustar o pH e/ou a osmolaridade e, . ♦ eventualmente, em filtrar a suspensão assim obtida.

As formulações assim obtidas podem igualmente ser colocadas sob a forma de géis, de pó ou de filme pelos métodos clássicos conhecidos do versado na técnica, tais como a concentração por diafiltração ou evaporação, ,o revestimento, a atomização ou a liofilização, entre outros. Esses métodos podem ser eventualmente combinados.

Donde se sucede um terceiro modo de realização do processo de preparação das formulações líquidas de acordo com a invenção, este terceiro modo consistindo essencialmente: ♦ em inserir um pó proveniente da secagem da formulação líc[uida de acordo com a invenção tal como definida acima, ♦ em misturar este pó com um meio líquido aquoso, de preferência sob agitação, ♦ em acrescentar, eventualmente, pelo menos um excipiente, 4 se necessário, em ajustar 0 pH e/ou a osmolaridade e, ♦ eventualmente, em filtrar a suspensão assim obtida.

Os excipientes suscetíveis de serem acrescentados são, por exemplo, antimicrobianos, tampões, antioxidantes, agentes que permitem ajustar a isotonicidade que são conhecidos do versado na técnica. Poder-se-á, por exemplo, se referir à obra: Injectahle Drug Development, P.K. Gupta et al., Interpharm Press, Denver, Colorado 1999. A filtração eventual da formulação líquida em filtros de porosidade igual, por exemplo, de 0,2 pm, permite esterilizá-la. Ela pode ser assim diretamente injetada em um paciente.

Todos esses exemplos de preparação de formulações líquidas de acordo com a invenção são vantajosamente realizados em atmosfera e à temperatura ambientes (250C, por exemplo).

De acordo com um outro de seus aspectos, a invenção engloba qualquer produto derivado obtido a partir da formulação líquida de acordo com a invenção tal como definida supra e compreendendo partículas submicrônicas, formadas por associações não covalentes PO/PA tais como definidas acima.

Na prática, esses produtos derivados podem especialmente ser constituídos por pós, géis, implantes ou filmes, entre outros.

Ademais, a invenção visa a qualquer precursor da formulação líquida injetável tal como definida supra.

Em se tratando sempre desses produtos derivados, deve ser sublinhado que a invenção diz respeito igualmente a um processo de preparação de um pó derivado da formulação tal como definida supra, esse processo sendo caracterizado pelo fato de que o pó é obtido por secagem da formulação tal como definida acima.

De acordo com a invenção, o PA pode ser uma proteína, uma glicoproteína, uma proteína ligada a uma ou várias cadeias polialquilenoglicol [de preferência, PoliEtilenoGlicol (PEG): "proteína-PEGuilada"], um polissacarídeo, um lipopolissacarídeo, um oligonucleotídeo, um polinucleotídeo ou um peptídeo.

De preferência, o PA é selecionado dentre as hemoglobinas, os citocromos, as albuminas, os interferons, as citocinas, os antígenos, os anticorpos, a eritropoietina, a insulina, os hormônios de crescimento, os fatores VIII e IX, as interleucinas ou suas misturas, os fatores estimulantes da hematopoiese ou suas misturas.

De acordo com uma variante, o princípio ativo suplementar é uma "pequena" molécula orgânica hidrofóbica, hidrofílica ou anfifílica, do tipo daquelas pertencentes à família das antraciclinas, dos taxóides ou das camptotecinas ou do tipo daquelas pertencentes à família dos peptídeos, tais como a leuprolida ou a ciclosporina e suas misturas.

No sentido da presente exposição, uma "pequena" molécula é especialmente uma pequena molécula não protéica.

Segundo uma disposição vantajosa da formulação de acordo com a invenção que diz respeito a todos os PA com exclusão das pequenas moléculas, a fração mássica de princípio ativo PA não associado às nanopartículas de polímero PO é tal que (expressa em % em relação à massa total da formulação): > [PA não associado] ^ 1 > de preferência, [PA não associado] ^ 0,5.

Dentre as qualidades primordiais da formulação de acordo com a invenção figuram seu caráter injetável e sua capacidade de formar um depósito sobre o local de injeção, in vivo, por gelificação ou ainda por agregação das nanoparticulas, em presença de proteínas fisiológicas ou análogas. A formulação de acordo com a invenção pode especialmente ser injetada por via parenteral, sub-cutânea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral ou em um tumor. A formulação de acordo com a invenção pode também ser administrada por via oral, nasal, vaginal, ocular ou bucal.

Vantajosamente, a formulação é destinada à preparação de medicamentos, em particular, para administração parenteral, sub-cutânea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral ou em um tumor, seja por via oral, nasal, vaginal ou ocular.

Ainda que a formulação de acordo com a invenção seja de preferência farmacêutica, isto não exclui, no entanto, as formulações cosméticas, díetéticas ou fitossanitárias compreendendo pelo menos um PO tal como definido acima e pelo menos um princípio ativo correspondente.

De acordo com ainda um outro de seus aspectos, a invenção visa a um processo de preparação de medicamentos, em particular para administração parenteral, sub-cutânea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral ou em um tumor, seja por via oral, nasal, vaginal ou ocular, caracterizado pelo fato de que consiste essencialmente em utilizar pelo menos uma formulação acima definida e/ou qualquer produto derivado e/ou qualquer precursor da referida formulação. A invenção diz respeito igualmente a um método de tratamento terapêutico consistindo essencialmente em administrar a formulação tal como descrita na presente exposição, por via parenteral, sub-cutânea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral ou em um tumor, seja por via oral, nasal, vaginal ou ocular.

De acordo com uma variante particular da invenção, este método de tratamento terapêutico consiste essencialmente em administrar a formulação tal como descrita acima por injeção parenteral, sub-cutânea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral ou em um tumor, de preferência de maneira que ela forme um depósito gelificado/reticulado sobre o local de injeção. A invenção será melhor compreendida e suas vantagens e variantes de realização se sobressairão bem dos exemplos que se seguem e que descrevem a síntese dos PO formados por poliaminoácidos enxertados por um agrupamento hidrofóbico, sua transformação em sistema de liberação prolongada de PA, a saber em formulação de acordo com a invenção (suspensão coloidal aquosa estável) e a demonstração da capacidade de um sistema desse tipo não somente de se associar a uma interleucina, mas sobretudo de gelificar/reticular para liberar de maneira muito prolongada in vivo a proteína terapêutica.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1: Curvas das Concentrações plasmáticas de IFN (picograma/ml) registradas no cão após injeção sub-cutânea · da formulação de IFN (A) de acordo com a invenção (exemplos 9 & 10) : -* curva • e da formulação de IFN (D) padrão fora da invenção (exemplo 10): -> curva em função do tempo T em horas e a uma dose de IFN de 60 pg/kg.

Figura 2: Curvas das Concentrações plasmáticas de IL2 (picograma/ml) registradas no macaco após injeção sub-cutânea • da formulação de IL2 de acordo com a invenção (exemplo 11): -» curva • da formulação de IL2 (F) padrão fora da invenção (exemplo 11): -> curva • e da formulação de IL2 (G) padrão fora da invenção (exemplo 11) : . -► curva em função do tempo T em horas e a uma dose de IL2 de 0,5 mg/kg.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Polímero anfifílico PI Síntese de um poliglutamato enxertado pelo alfa-tocoferol de origem sintética Solubiliza-se 5,5 g de um alfa-L-poliglutamato ■ (de massa equivalente a aproximadamente 10000 Da) em relação a um padrão de polioxietileno e obtido por polimerização de NCAGluOMe seguida de uma hidrólise como descritos no pedido de patente FR-A-2 801 226) em 92 ml de dimetilformamida (DMF) aquecendo a 40°C durante 2 horas. Uma vez solubilizado o polímero, deixa-se restabelecer a temperatura a 25°C e acrescenta-se, sucessivamente, 1,49g de D,L-alfa-tocoferol (> 98% obtido de Fluka®) previamente solubilizado em 6 ml de DMF, 0,09 g de 4-dimetilaminopiridina previamente solubilizado em 6 ml de DMF e 0,57 g de diisopropilcarbodiimida previamente solubilizado em 6 ml de DMF. Após 8 horas a 25°C sob agitação, o meio reacional é versado em 800 ml de água contendo 15% de cloreto de sódio e de ácido clorídrico (pH 2). O polímero precipitado é, em seguida, recuperado por filtração, lavado por ácido clorídrico 0,1 N, depois, por água. O polímero é, em seguida, ressolubilizado em 75 ml de DMF, depois, reprecipitado na água contendo, como precedentemente, sal e ácido com pH 2. Após duas lavagens em água, lava-se várias vezes por éter diisopropílico. 0 polímero é, em seguida, secado na estufa sob vácuo a 40°C. Obtém-se um rendimento da ordem de 85%.

Exemplo 2: Polímeros anfifílicos P2, P3, P4, P5 e P6.

Esses polímeros são obtidos da mesma forma que para a obtenção do polímero Pl. O quadro 1 abaixo resume as características desses polímeros. Aquelas do polímero Pl são dadas a título de comparação. QUADRO 1 1 Em equivalente polioxietileno. 2 Taxa de enxerto molar estimada pela RMN do próton. 3 de origem sintética Exemplo 3: Preparação de 30 ml de uma formulação de interferon alfa 2b (IFN) à base do polímero P6. (a) Preparação de uma solução coloidal de polímero anfifílico: Introduz-se, em um frasco, 1,5 g de pó liofilizado do poliaminoácido anfifílico P6 do exemplo 1 acima. Este pó é dissolvido em 30 ml de água estéril para injeção. A solução de polímero é mantida 16 horas a 35°C sob agitação magnética. A osmolaridade da solução é ajustada a 275 ± 20 mOsmol com o auxílio de um osmômetro Fiske Mark 3, introduzindo-se a quantidade necessária de uma solução aquosa de NaCl 5,13M (30%p/p). 0 pH é ajustado, se necessário, em pH 7,4 ± 0,2 por acréscimo de uma solução de NaOH IN. A concentração de polímero é ajustada a 45 mg/ml por acréscimo de uma solução aquosa estéril de NaCl 0,15M. A solução de polímero é, em seguida, filtrada em um filtro de tamanho de poro 0,8 e 0,2 mícrons, depois estocada a 4°C. (b) Associação da proteína ao polímero: Em um frasco de vidro, mistura-se, em seguida, 26,65 ml da solução coloidal de polímero P6 precedente e 1,85 ml de solução de IFN (PC GEN; solução concentrada a 2,42 mg/ml), A osmolaridade e o pH são reajustados, se necessário, a 300 + 20 mOsmol e pH 7,4 ± 0,2 por acréscimo de soda 0,1N e cloreto de sódio 0,9% estéril. A solução carregada de proteína é colocada em maturação durante 5h a 25°C na estufa, depois, é em seguida filtrada em 0,8-0,2 mícrons. Obtém-se, assim, 30 ml de uma formulação pronta para ser injetada contendo 0,15 mg/ml de IFN e 40 mg/ml de polímero P6.

Exemplo 4: Preparação de uma formulação de IFN de longa ação de acordo com a presente invenção, à base de um dos polímeros PI a P5. A preparação é efetuada como no exemplo 3, preparando-se, em um primeiro tempo, uma solução coloidal de polímero a 1,25 vezes a concentração final procurada, depois, misturando-se esta solução com uma solução de interferon concentrada a 2,42 mg/ml. 0 volume da solução de proteína é determinado pela escolha da relação da concentração de polímero, na concentração de proteína visada. Como no exemplo 3, os ajustes de concentrações e de pH são realizados por acréscimo de solução de NaCl e de soda.

Exemplo 5: Preparação de uma formulação de Interleucina-2 (IL2) de longa ação de acordo com a presente invenção à base do polímero P3.

Introduz-se, em um frasco, a quantidade de pó liofilizado do polímero anfifílico e de água estéril necessária para se obter uma concentração de polímero igual a X = 1,3 vezes a concentração final procurada na formulação. A dissolução do polímero é prolongada 16 horas sob agitação magnética. A quantidade necessária de IL2 liofilizada (Prospec) é concentrada a X/(X-l) vezes a concentração final procurada. A concentração precisa da solução de IL2 concentrada é determinada por dosagem UV a 280 nm com o auxílio de um espectrofotômetro UV Perkin Elmer Lambda 35.

Esta solução de IL2 é filtrada em 0,8-0,2 pm e estocada a 4°C. Seu pH é ajustado a pH 11 por acréscimo de NaOH 1 M. Nomeia-se Y a relação da concentração de proteína desta solução na concentração desejada na formulação.

Procede-se, em seguida, à mistura, à temperatura ambiente, da solução de proteína e da solução de polímero. Para um volume de polímero, acrescentam-se X-l volumes de solução de proteína. 0 pH e a osmolaridade são ajustados a pH 7,4 ± 0,2 e a 300 ± 20 mOsm.

Assim, para preparar uma formulação de IL2 de longa ação, de acordo com a invenção, à base do polímero P3 contendo 20 mg/ml de polímero P3 e 2,5 mg/ml de IL2, a solução inicial de polímero é concentrada a 26 mg/ml. A solução inicial de IL2 é concentrada a 11 mg/ml. Para um volume de polímero, adicionam-se 0,3 volumes de solução de proteína.

Exemplo 6: Medição do diâmetro hidrodinâmico médio das nanopartículas de diferentes polímeros PO de acordo com a invenção O diâmetro hidrodinâmico médio das partículas de polímero PO de acordo com a invenção é medido de acordo com o Modo operatório Md definido logo a seguir: As soluções de PO são preparadas com concentrações de 1 ou 2 mg/ml em meio NaCl 0,15M e deixadas sob agitação durante 24h. Essas soluções são, em seguida, filtradas em 0,8-0,2 μπι, antes de serem analisadas em difusão dinâmica da luz graças a um aparelho do tipo Brookhaven, funcionando com um feixe de laser de comprimento de onda 488 nm e polarizado verticalmente. 0 diâmetro hidrodinâmico das nanopartículas de polímero PO é calculado a partir da função de autocorrelação do campo elétrico pelo método dos cumulantes, como descrito na obra "Surfactant Science Series" volume 22, Surfactant Solutions, Ed. R. Zana, cap. 3, M. Dekker, 1984.

Obtêm-se os resultados seguintes para os polímeros PO P2 P3 P4 e P6 do exemplo 2: QUADRO 2 Exemplo 7: Associação espontânea de uma proteína às nanopartículas de polímero PO

Uma solução de tampão fosfato a 25 mM é preparada a partir de pó de NaH2P04 (Sigma ref S—0751) e ajustada com a soda IN (SDS ref 3470015) com pH = 7,2.

Uma suspensão coloidal de nanopartículas de polímero PI é preparada por dissolução, durante uma noite, do polímero liofilizado a 5 mg/ml na solução de tampão fosfato precedente.

Uma solução mãe de BSA (Sigma A-2934) é preparada por dissolução, durante duas horas, de proteína a 10 mg/ml no mesmo tampão.

As soluções mães, assim como o tampão, são filtradas em 0,22 μιη.

Misturas são realizadas por acréscimo de volumes predeterminados das duas soluções mães e diluição no tampão fosfato de forma a se ter no final uma gama de amostras tendo uma concentração constante de polímero (0,1 mg/ml) e concentrações crescentes de proteínas (0 a 1,8 mg/ml). ' As amostras são deixadas 5 horas a associar a 25°C, em seguida, elas são analisadas por eletroforese capilar em um método dito frontal onde é possível visualizar separadamente a proteína e o complexo proteína- polímero. Para mais detalhes sobre esta técnica, deve-se consultar o seguinte artigo: Gao JY, Dublin PL, Muhoberac BB, Anal. Chem. 1997, 69, 2945. As análises são realizadas em um aparelho Agilent G16000A munido de um capilar de bolha de silício fundida (tipo G1600-62-232) . A altura da primeira plataforma correspondendo à proteína livre permite determinar a concentração de BSA não associada. A experiência mostra que, para quantidades de proteínas inferiores a 0,1 g de proteína por g de polímero, a proteína é associada às nanopartículas de polímero.

Exemplo 8: Determinação da concentração de gelificação Cl para os polímeros P0 Pl a P4 e P6, O teste GI é aplicado a formulações de IFN e de IL2 associadas aos polímeros Pl a P6 dos exemplos 1 e 2. As concentrações de proteínas dessas formulações são reportadas no quadro abaixo. A medição do tempo de relaxamento das formulações em presença de BSA (concentração 30 mg/ml) é efetuada de acordo com o modo operatório do teste GI. A concentração crítica Cl, para a qual o tempo de relaxamento excede ls é reportada nos quadros 3 e 4 para o IFN e a IL-2 respectivamente: QUADRO 3 Concentração de gelificação induzida para formulações de IFN QUADRO 4 Concentração de gelificação induzida para formulações de IL2 Exemplo 9: Farmacocinética do IFN no cão após injeção sub-cutânea de uma formulação de IFN pertencente, à seleção de acordo com a invenção.

Uma formulação (Δ) de IFN (concentração 0,3 mg/ml) e de polímero anfifílico PI na concentração de 30 mg/ml é preparada de acordo com o modo operatório descrito no exemplo 3.

Esta formulação é injetada por via sub-cutânea em cães Beagles (n=3), na dose de 60 pg/kg. Retiradas de soro são efetuadas nos tempos 1, 5, 11, 24, 36, 48, 72, 96, 120, 144, 168 e 240 horas. A concentração plasmática de IFN é medida nessas retiradas por dosagem ELISA (kit Immunotech IM 3193) .

Obtém-se, assim, um perfil de concentração plasmática médio, tal como representado na figura 1, que coloca claramente em evidência a liberação prolongada de proteína no soro em relação a uma formulação padrão (D) fora da invenção de IFN (concentração 0,3 mg/ml) e de polímero anfifílico P6 na concentração de 40 mg/ml (conforme quadro 5, exemplo 10). Em um plano quantitativo, a prolongação da liberação do IFN pelas formulações de acordo com a invenção é estimada pela medição: (a) do tempo Tmax, mediana do tempo para o qual a concentração plasmática é máxima, (b) do tempo T50, média do tempo no início do qual o ar sob a curva de concentração plasmática atinge 50% de seu valor máximo medido.

No caso desta formulação, os tempos Tmax e T50 tomam os valores: Tmax =48 horas ■ T50 = 54,2 horas Exemplo 10: Farmacocinética do IFN no cão após injeção sub-cutânea de diversas formulações de IFN à base de poliaminoácidos anfifílicos.

As formulações seguintes são preparadas de acordo com o modo operatório descrito no exemplo 3. QUADRO 5 A formulação ssui uma concentração de polímero superior à concentração A po de gelificação Cl medida no exemplo 8. Em outros termos, o tempo de relaxamento, medido no teste GI é superior a 1 segundo. Esta formulação A pertence, então, à seleção de acordo com a invenção. Por outro lado, as formulações B, C e D possuem concentrações inferiores a suas concentrações de gelificação e não pertencera à seleção de acordo com a invenção.

Essas formulações são injetadas na dose 60 pg/kg em cães Beagles. Retiradas de plasma são efetuadas nos tempos 1, 5, 11, 24, 36, 48, 72, 96, 120, 144, 168 e 240 horas. A concentração plasmática de IFN é medida como no exemplo precedente.

Os tempos Tmax e T50 para as formulações A, B, C e D são reportados no quadro 6 abaixo. QUADRO 6 Assim, a formulação A, que pertence à seleção de acordo com a invenção, apresenta uma duração de liberação consideravelmente aumentada em relação às formulações B, C e D, que não pertencem à seleção de acordo com a invenção.

Exemplo 11: Farmacocinética da interleucina 2 (IL2) no macaco após injeção sub-cutânea de diversas formulações à base de poliaminoácidos anfifilicos.

As formulações seguintes são preparadas de acordo com o modo operatório descrito no exemplo 5. QUADRO 7 As formulações E e F, que possuem uma concentração de polímero superior à concentração de gelificação Cl medida no exemplo 8 pertencem, então, à seleção de acordo com a invenção. Por outro lado, a formulação G possui uma concentração inferior à concentração de gelificação Cl e não pertence à seleção de acordo com a invenção.

Essas formulações são injetadas na dose 0,5 mg/kg em macacos Cynomolgus. Retiradas de plasma são efetuadas nos tempos 1, 5, 11, 24, 36, 48, 72, 96, 120, 144, 168 e 240 horas. A concentração plasmática de IL2 é medida nessas retiradas por dosagem ELISA (kit Immunotech IM 3583).

Os tempos Tmax e T50 para as formulações E, F e G são reportados no quadro 8 abaixo. QUADRO 8 Assim, as formulações E e F, que pertencem à seleção de acordo com a invenção, apresentam uma duração de liberação consideravelmente aumentada em relação à formulação G que não pertence à seleção de acordo com a invenção.

Exemplo 12: Observação da gelificação in vivo das formulações de acordo com a invenção após injeção sub-cutânea. 0 comportamento sub-cutâneo das formulações de acordo com a invenção foi estudado no porco doméstico. Procedeu-se a injeções sob a pele do ventre, a 4 mm de profundidade, de seis porcos domésticos, com 0,3 ml das formulações seguintes: Formulação A: solução aquosa isotônica com pH 7,3 do polímero P6 do exemplo 2 concentrado a 45 mg/ml.

Formulação B: solução aquosa isotônica com pH 7,3 do polímero PI do exemplo 1 concentrado a 20 mg/ml.

Os locais injetados foram retirados ou removidos 72 horas após a administração. O exame histológico revela a presença de um depósito gelificado de polímero para a formulação B. Ele se apresenta sob a forma de faixas uniformemente coloridas. Este fenômeno não é, por outro lado, observado para a formulação A, para a qual o polímero é infiltrado entre as fibras de colágeno.

Pode-se ressaltar que a matriz de polímero B é perfeitamente biodegradável, visto que o tecido é completamente retornado a seu estado normal após 21 dias.

REIVINDICAÇÕES

Claims (16)

1. Formulação farmacêutica líquida para a liberação prolongada de princípio(s) ativo(s) -PA-, a formulação compreendendo uma suspensão coloidal, aquosa, de viscosidade de 1.1CT3 Pa.s a 5 Pa.s, à base de partículas submicrônicas de um poliaminoácido formado por unidades aspárticas e/ou unidades glutâmicas, pelo menos uma parte destas unidades sendo portadoras de um agrupamento hidrofóbico, as partículas sendo associadas de forma não covalente a pelo menos um princípio ativo (PA), caracterizada pelo fato de que: - o agrupamento hidrofóbico é um tocoferol, em que a taxa de enxerto de tocoferol ao poliaminoácido é de 1 a 25% molar; - a massa molar de poliaminoácido está entre 2000 e 100000 g/mol; - o meio dispersivo da suspensão é constituído por água; - o princípio ativo (PA) é escolhido a partir do grupo de uma proteína, uma glicoproteína, uma proteína ligada a uma ou várias cadeias polialquilenoglicol, um polissacarídeo, um lipopolissacarídeo, um oligonucleotídeo, um polinucleotídeo ou um peptídeo; - sua concentração de polímero [PO] é tal que: 0,9. Cl <[PO] < 10. Cl, com Cl representando a concentração de "gelificação induzida" das partículas de PO tal como medida em um teste GI, sendo que o referido teste consiste das seguintes etapas: - dissolver quantidades crescentes de polímero anfifílico [PO] na forma de pó seco em água desionizada, e mantendo-se as soluções obtidas a 25°C por 16 horas, com agitação magnética, - misturar as referidas soluções com uma solução concentrada de principio ativo(s) para obter as concentração(ões) de principio ativo(s) desejadas, - misturar as referidas soluções com uma solução concentrada aquosa de albumina de soro bovino (BSA) contendo 30 mg/ml, e centrifugando por 15 minutos a 3000 rpm, - agitar delicadamente por 24 h, - medir o tempo de relaxação Tr das soluções de polímero [PO] para definir a concentração Cl a qual este tempo Tr é superior a 1 segundo; - esta formulação é apta a ser injetada por via parenteral e a formar, em seguida, in vivo, um depósito gelifiçado, esta formação de depósito gelifiçado: - sendo, por um lado, pelo menos em parte provocada por pelo menos uma proteína fisiológica presente in vivo, - e permitindo, por outro lado, prolongar e controlar a duração de liberação do PA in vivo, decorridas 24 h após a administração, - é líquida nas condições de injeção, - e é igualmente líquida na temperatura e/ou no pH fisiológicos, e/ou em presença: - de eletrólito fisiológico em concentração fisiológica, - e/ou de pelo menos um tensoativo.

2. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o(s) PO(s) é(são) definido(s) pela fórmula geral (I) seguinte: na qual: * R" representa um H, uma alquila linear C2 a CIO ou ramificada C3 a CIO, benzila, uma unidade ácida amino terminal ou -R'"- [GH] ; ■ R1 representa um H, um grupo acila linear C2 a CIO ou ramificado C3 a CIO, um piroglutamato ou -R4-[GH] ; ■ R3 é um H ou um câtion, selecionado entre: - os cátions metálicos selecionados entre: sódio, potássio, cálcio, magnésio, - os cátions orgânicos selecionados entre: * os cátions à base de amina, * os cátions à base de oligoamina, * os cátions à base de poliamina, * os cátions à base de aminoácido(s) selecionados entre os cátions à base de lisina ou de arginina, - ou os políaminoácidos catiônicos selecionados entre a polilisina ou a oligolisina, ■ R·9 representa uma ligação direta ou um "espaçador" à base de 1 a 4 unidades de aminoácido; ■ A representa independentemente um radical -CHj-<unidade aspártica) ou -CH2-CH2- (unidade glutâmica); ■ n/(n+m) é definido como a taxa de enxerto molar e seu valor é suficientemente baixo para que ο PO colocado em solução na água com pH 7 e a 25°C forme uma suspensão coloidal de partículas submicrônicas de PO; ■ n+m varia de 10 a 1000/ de preferência entre 50 e 300; ■ GH representa um tocoferol.

3. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo· fato de que o(s) PO (s) possui (em) uma das fórmulas gerais (II), (III) e (IV) seguintes* nas quais; ■ GH representa um tocoferol; ■ RJÜ é um agrupamento alquíla linear C2 a C6; ■ Ff' é um H ou um cãtíon, selecionado entre: - os cátions metálicos selecionados entre: sódio, potássio, cálcio, magnésio; - os cátions orgânicos selecionados entre: - os cátions à base de amina, - os cátions à base de oligoamina, - os cátions à base de poliamina, - os cátions à base de aminoácido(s) selecionados entre os cátions à base de lisina ou de arginina, - ou os poliaminoácidos catiônicos selecionados entre polilisina ou oligolisina, ■ R50 é um agrupamento alquila, dialcóxi ou diamina C2 a C6; ■ R4 representa uma ligação direta ou um "espaçador" à base de 1 a 4 unidades de aminoácido; ■ A representa independentemente um radical -0¾-(unidade aspártica) ou -CH2-CH2- (unidade glutâmica); ■ n'+m' ou n'' é definido como o grau de polimerização e varia de 10 a 1000.

4. Formulação, de acordo a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o PO é constituído de um homopolímero de alfa-L-glutamato ou de alfa-L-glutâmico.

5. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o PO é constituído de um homopolímero de alfa-L-aspartato ou de alfa-L-aspártico.

6. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o PO é constituído de um copolímero de alfa-L-aspartato/alfa-L-glutamato ou de alfa-L-aspártico/alfa-L-glutâmico.

7. Formulação, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que, no PO, a distribuição das unidades aspárticas e/ou glutâmicas portadoras de um agrupamento hidrofóbico é tal que o polímero assim constituído é ou aleatório, ou do tipo em bloco, ou do tipo multibloco.

8. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a massa molar do PO se situa entre 5000 e 40000 g/mol.

9. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, caracterizada pelo fato de que sua fração mássica de PA não associado às partículas submicrônicas [PA não associado] em % em peso é tal que: o [PA não associado] ^ 1.

10. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou 9, caracterizada pelo fato de que é injetável por via parenteral, sub-cutânea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral ou em um tumor.

11. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizada pelo fato de que é destinada à preparação de medicamentos, em particular para administração parenteral, sub-cutânea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral ou em um tumor, seja por via oral, nasal, vaginal ou ocular.

12. Processo de preparação da formulação conforme qualquer formulação das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que consiste em: - inserir uma suspensão coloidal de nanopartículas de pelo menos um PO, - misturar a suspensão coloidal de nanopartículas de PO com pelo menos um PA, - acrescentar, pelo menos um excipiente.

13. Processo, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o(s) PA(s) está(ão) sob a forma de suspensão ou de solução aquosa para a mistura com a suspensão coloidal de nanopartículas de PO.

14. Processo de preparação da formulação conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que consiste em: - inserir um pó de nanopartículas de pelo menos um PO, - misturar o pó com uma suspensão ou solução aquosa de pelo menos um PA, - acrescentar, pelo menos um excipiente.

15. Processo de preparação da formulação conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que consiste em: - inserir um pó proveniente da secagem da formulação liquida conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 11, - misturar o pó com um meio liquido aquoso, - acrescentar, pelo menos um excipiente.

16. Processo de preparação de um pó derivado da formulação conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o pó é obtido por secagem da formulação conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 11.