JP4912894B2 - プロテオーム技術を使用した癌タンパク質バイオマーカーの同定 - Google Patents

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２００４年２月１９日に出願された、米国特許仮出願第６０／５４５，５８１号、および２００４年２月２０日に出願された、米国特許仮出願第６０／５４５，９００号の利益を主張する。参照される出願の両方の教示は、本明細書中で参考として援用される。

（資金拠出）
本発明は、合衆国エネルギー省により受けた、助成金番号ＤＥ−ＦＧ０２−ＥＲ６３４６２の下の政府の支援によってなされた。本発明において、連邦政府は特定の権利を有する。

（発明の背景）
上皮性卵巣癌（ＥＯＣ）は米国において女性の癌関連死亡の第４番目の主要原因であり、婦人科癌死亡の主要原因である。ＥＯＣは、ほとんどない初期症状、高齢での提示および低い生存率により特徴付けられる。今年、約２５，０００人の女性が新しく卵巣癌の診断を下され、１３，５００人がこの病気で死亡するだろう。卵巣癌の治療の主要な制限は、ｉ）初期の検出腫瘍マーカーの欠如、ｉｉ）化学療法剤に対する耐性、およびｉｉｉ）明らかな初期の前兆徴候の欠如である。高い死亡率は、約７０％の患者が高齢で診断されているために、初期疾患の検出不能に関連する。初期（ステージＩまたはＩＩ）疾患と診断された患者において、５年生存率は腫瘍の分化の程度に依存して、６０〜９０％の範囲にある。遺伝性癌の臨床上の提示は高リスク集団と同様であるが、このグループの卵巣癌の開始は一般集団よりも１０〜１５年早く起こる傾向がある（６０代よりもむしろ４０代前半）。ＥＯＣの管理に対する最も期待できるアプローチの１つは早期発見である。通常用いられる試験でＣＡ１２５は、不確かな生物学的挙動と、初期段階の疾病の検出のために非常に限定された臨床応用とを有する、一群の細胞表面糖タンパク質を同定する。単一マーカーとして、ＣＡ１２５はステージＩで１０％未満の予測値を有する。超音波スクリーニングをＣＡ１２５測定に加えても、ポジティブな予測値をわずかに約２０％向上させるのみである。卵巣癌に対する特定のマーカーの欠如はスクリーニングおよび初期検出の臨床目的を達成することを困難にしている。

初期段階または進行段階のいずれかの卵巣癌を診断するために用いることのできる市販の試験は現在存在しない。よって、初期段階または進行段階の卵巣癌を診断するために用いることのできる試験の発見が要求されている。

本発明は、被験体の癌を診断するか、または癌の診断を助ける方法を包含し、この方法は、被験体からのサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現をそれぞれの１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含；ここで、この１つ以上のバイオマーカーが、６Ｃｋｉｎｅ、ＡＣＥ、ＢＤＮＦ、ＣＡ１２５、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、Ｅｏｔ２、ＥｒｂＢ１、フォリスタチン、ＨＣＣ４、ＨＶＥＭ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＬ−１７、ＩＬ−１ｓｒＩＩ、ＩＬ−２ｓＲａ、レプチン、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、ＭＩＦ、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ３ｂ、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ７、ＭＰＩＦ−１、ＯＰＮ、ＰＡＲＣ、ＰＤＧＦ Ｒｂ、プロラクチン、プロテインＣ、ＴＧＦ−ｂ ＲＩＩＩ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦ−ａ、ＶＡＰ−１、ＶＥＧＦ Ｒ２およびＶＥＧＦ Ｒ３からなる群から選択され；そしてそれぞれの１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較してサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

一実施形態において、所定のスタンダードが、（ａ）健康な被験体中のバイオマーカーの発現レベル、または（ｂ）同じ被験体からの非癌性組織中のバイオマーカーの発現レベルに対応する。

一実施形態において、本方法は、さらに、２つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、癌の診断がスコアに基づく分類方法に基づく。一実施形態において、ｍ個の異なるバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、各バイオマーカーが０または１のスコアが割り当てられ、バイオマーカーの発現が所定のスタンダードのバイオマーカーの発現と有意差がない場合、バイオマーカーには０のスコアが割り当てられ、バイオマーカーの発現が所定のスタンダードのバイオマーカーの発現と有意差がある場合、バイオマーカーには１のスコアが割り当てられ；被験体にはｍ個の異なるマーカーの割り当てられたスコアの合計に対応する総合スコアが割り当てられ；所与の閾値（ｔ）を用いて癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

別の実施形態において、本方法は２つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程であって、ここで癌の診断は、２つ以上のバイオマーカーの発現プロフィールをバイオマーカーの所定のスタンダードプロフィールと比較することにより行なわれ、プロフィールの差異が癌を診断するか、または癌の診断を助ける工程を含む。一実施形態において、所定のスタンダードプロフィールが、癌被験体の２つ以上のバイオマーカーの発現を健康な被験体中の２つ以上のバイオマーカーの発現に対して、機械学習技術（ｍａｃｈｉｎｅ ｌｅａｒｎｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を用いて比較することにより決定される。一実施形態において、所定のスタンダードプロフィールが、癌被験体と健康な被験体の２つ以上のバイオマーカーの発現を、サポートベクターマシン、Ｋ−近傍分類法（Ｋ−ｎｅａｒｅｓｔ ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ）、または分類樹分析を用いて比較することにより決定される。

一実施形態において、本方法は、卵巣癌の診断のためのものであり、本方法は、さらに、表２に同定されない卵巣癌に対するさらなるバイオマーカーを検出する工程を含む。一実施形態において、卵巣癌に対するさらなるバイオマーカーは、ヒト角質層キモトリプシン酵素（ＨＳＣＣＥ）、カリクレイン４、カリクレイン５、カリクレイン６（プロテアーゼＭ）、カリクレイン８、カリクレイン９、カリクレイン１０、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、ＣＡ１９−９、ＯＶＸ１、リゾホスファチド酸（ＬＰＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、プロスタシン、ＣＡ５４−６１、ＣＡ７２、ＨＭＦＧ２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＬＳＡ、Ｍ−ＣＳＦ、ＮＢ７０Ｋ、ＰＬＡＰ、ＴＡＧ７２、ＴＮＦ、ＴＰＡ、ＵＧＴＦ、ＷＡＰ４ジスルフィドコアドメイン２（ＨＥ４）、マトリックスメタロプロテアーゼ２、テトラネクチン、インヒビン、メソセリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｙｎ）、ＭＵＣ１、ＶＥＧＦ、ＣＬＤＮ３、ＮＯＴＣＨ３、Ｅ２Ｆ転写因子３（Ｅ２Ｆ３）、ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＲＡＣＧＡＰ１）、血液学的神経学的発現１（ｈｅｍｏｔｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ １）（ＨＮ１）、アポリポタンパク質Ａ１、ラミニン、クローディン３、クローディン４、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（ＴＲＯＰ−１／Ｅｐ−ＣＡＭ）、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＲＯＰ−２）、ラジニン（ｌａｄｉｎｉｎ）１、Ｓ１００Ａ２、ＳＥＲＰＩＮ２（ＰＡＩ−２）、ＣＤ２４、リポカリン２、マトリプターゼ（ＴＡＤＧ−１５）、ストラチフィン（ｓｔｒａｔｉｆｉｎ）、トランスフォーミング増殖因子−βレセプターＩＩＩ、血小板由来増殖因子レセプターα、ＳＥＭＡＣＡＰ３、ｒａｓ相同遺伝子ファミリーメンバーＩ（ＡＲＨＩ）、トロンボスポンジン２、障害２／卵巣癌中の差次的的発現２（ｄｉｓａｂｌｅｄ−２／ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ２）（Ｄａｂ２／ＤＯＣ２）およびハプトグロビン−αサブユニットからなる群より選択され得る。別の実施形態において、卵巣癌のさらなるバイオマーカーは、トランスサイレチンの切断形またはＺｈａｎｇら（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４（１６）：５８８２−９０（２００４））により同定されたインター−α−トリプシンインヒビター重鎖Ｈ４の切断フラグメントである。一実施形態において、卵巣癌のさらなるバイオマーカーはＣＡ１２５である。

癌を診断するか、または癌の診断を助ける上記の方法は、いかなる癌または腫瘍の診断またはその診断を助けるために適用され得る。一実施形態において、本方法は乳癌の診断のためのものある。一実施形態において、本方法は結腸癌の診断のためのものである。別の実施形態において、本方法は子宮頚癌の診断のためのものである。

本発明は、被験体からのサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現をそれぞれの１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含む、被験体の癌を診断するか、または癌の診断を助けるための方法も包含し、１つ以上のバイオマーカーが、プロラクチン、ＭＩＦ、ＯＰＮ、ＩＧＦ−ＩＩ、Ｅ−セレクチン、レプチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ｓＲａからなる群から選択され；それぞれの１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較したサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

本発明はまた、被験体からのサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現をそれぞれの１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含む、被験体の癌を診断するか、または癌の診断を助けるための方法を包含し、一つ以上のバイオマーカーが、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群より選択され；それぞれの１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較したサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

本発明は、被験体の癌を診断するか、または癌の診断を助けるための方法において、被験体からのサンプル中のレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩの４種類のバイオマーカーの発現を各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み；１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較したサンプル中の２つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける方法も含む。

本発明は、被験体の卵巣癌を診断するか、または卵巣癌の診断を助けるための方法において、被験体からのサンプル中のレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩの４種類のバイオマーカーの発現を各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み；１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較したサンプル中の２つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける方法も含む。

本発明は、被験体の乳癌を診断するか、または乳癌の診断を助けるための方法において、被験体からのサンプル中のレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩの４種類のバイオマーカーの発現を各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み；各１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較したサンプル中の２つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける方法も含む。

本発明は、被験体の結腸癌を診断するか、または結腸癌の診断を助ける方法において、被験体からのサンプル中のレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩの４種類のバイオマーカーの発現を各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み；各１つ以上のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較したサンプル中の２つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける方法も含む。

一実施形態において、上記の方法は、プロラクチンおよび／またはＯＰＮの発現をバイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み、バイオマーカーの所定のスタンダードと比較したバイオマーカーの発現の増加が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

一実施形態において、上記の方法は、レプチンおよび／またはＩＧＦ−ＩＩの発現をバイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み、バイオマーカーの所定のスタンダードと比較したバイオマーカーの発現の減少が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

一実施形態において、癌を診断するか、または癌の診断を助ける上記の方法は、２つ以上のバイオマーカーの発現を検出する工程を含む。一実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、プロラクチン、ＭＩＦ、ＯＰＮ、ＩＧＦ−ＩＩ、Ｅ−セレクチン、レプチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ｓＲａからなる群から選択される。一実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。一実施形態において、少なくとも２つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

一実施形態において、癌を診断するか、または癌の診断を助ける上記の方法は、３つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、３つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。一実施形態において、３つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

一実施形態において、癌を診断するか、または癌の診断を助ける上記の方法は、４つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、４つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩを含む。一実施形態において、４つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

一実施形態において、バイオマーカーの発現は、１つ以上のバイオマーカーを検出する試薬を用いて検出または測定される。一実施形態において、試薬は、一つ以上のバイオマーカーに特異的な抗体またはそのフラグメントである。一実施形態において、試薬は検出可能な物質により直接的または間接的に標識される。別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーの発現は質量分析を用いて検出される。別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーの発現は、１つ以上のバイオマーカーをコードする遺伝子のｍＲＮＡ転写レベルを測定することにより検出される。

別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーの発現は、（ａ）１つ以上のバイオマーカーにより調節されるポリペプチドの発現を検出するか、（ｂ）バイオマーカーを調節するポリペプチドの発現を検出するか、または（ｃ）バイオマーカーの代謝産物の発現を検出することにより検出される。

一実施形態において、上記の方法に用いられるサンプルは体液サンプルである。一実施形態において、体液サンプルは血液または血清である。

本発明は、被験体の癌の進行をモニタリングするための方法も含む。一実施形態において、本発明は、被験体からのサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現を、その後の時点で該被験体から得られたサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現と比較する工程を含む、被験体の癌の進行をモニタリングする方法において、１つ以上のバイオマーカーが、６Ｃｋｉｎｅ、ＡＣＥ、ＢＤＮＦ、ＣＡ１２５、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、Ｅｏｔ２、ＥｒｂＢ１、フォリスタチン、ＨＣＣ４、ＨＶＥＭ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＬ−１７、ＩＬ−１ｓｒＩＩ、ＩＬ−２ｓＲａ、レプチン、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、ＭＩＦ、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ３ｂ、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ７、ＭＰＩＦ−１、ＯＰＮ、ＰＡＲＣ、ＰＤＧＦ Ｒｂ、プロラクチン、プロテインＣ、ＴＧＦ−ｂ ＲＩＩＩ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦ−ａ、ＶＡＰ−１、ＶＥＧＦ Ｒ２およびＶＥＧＦ Ｒ３からなる群から選択され；１つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が被験体の癌の進行を診断するか、癌進行の診断を助ける方法を含む。一実施形態において、１つ以上のバイオマーカーは、プロラクチン、ＭＩＦ、ＯＰＮ、ＩＧＦ−ＩＩ、Ｅ−セレクチン、レプチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ｓＲａからなる群から選択される。一実施形態において、１つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

一実施形態において、癌の進行をモニタリングする上記の方法は、２つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、プロラクチン、ＭＩＦ、ＯＰＮ、ＩＧＦ−ＩＩ、Ｅ−セレクチン、レプチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ｓＲａからなる群から選択される。別の実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

一実施形態において、癌の進行をモニタリングする上記の方法は、３つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、癌の進行をモニタリングする上記の方法は、４つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、癌の進行をモニタリングする上記の方法は、４つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、ここで４つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩを含む。別の実施形態において、癌の進行をモニタリングする上記の方法は、４つのバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、ここで４つのバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩである。

本発明は、癌に対する処置の有効性をモニタリングするための方法も含む。一実施形態において、本発明は、処置の少なくとも一部を提供する前に被験体からのサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現を、被験体が少なくとも一部の処置を受けた後に被験体から得られたサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現と比較する工程を含む、癌に対する処置の有効性をモニタリングするための方法を包含し、ここで１つ以上のバイオマーカーが、６Ｃｋｉｎｅ、ＡＣＥ、ＢＤＮＦ、ＣＡ１２５、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、Ｅｏｔ２、ＥｒｂＢ１、フォリスタチン、ＨＣＣ４、ＨＶＥＭ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＬ−１７、ＩＬ−１ｓｒＩＩ、ＩＬ−２ｓＲａ、レプチン、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、ＭＩＦ、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ３ｂ、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ７、ＭＰＩＦ−１、ＯＰＮ、ＰＡＲＣ、ＰＤＧＦ Ｒｂ、プロラクチン、プロテインＣ、ＴＧＦ−ｂ ＲＩＩＩ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦ−ａ、ＶＡＰ−１、ＶＥＧＦ Ｒ２およびＶＥＧＦ Ｒ３からなる群から選択され；１つ以上のバイオマーカーの発現の差が、処置の有効性を診断するか、またはその診断を助ける。一実施形態において、１つ以上のバイオマーカーは、プロラクチン、ＭＩＦ、ＯＰＮ、ＩＧＦ−ＩＩ、Ｅ−セレクチン、レプチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ｓＲａからなる群から選択される。一実施形態において、１つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

一実施形態において、癌に対する処置の有効性をモニタリングする上記の方法は、２つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、２つ以上のバイオマーカーはプロラクチン、ＭＩＦ、ＯＰＮ、ＩＧＦ−ＩＩ、Ｅ−セレクチン、レプチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ｓＲａからなる群から選択される。別の実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

一実施形態において、癌に対する処置の有効性をモニタリングする上記の方法は、３つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、癌に対する処置の有効性をモニタリングする上記の方法は、４つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、癌に対する処置の有効性をモニタリングする上記の方法は、４つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、ここで４つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩを含む。別の実施形態において、癌に対する処置の有効性をモニタリングする上記の方法は、ここで４つのバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、４つのバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩである。

本発明はまた、癌を診断するか、または癌の診断を助けるためのキットおよび癌をモニタリングするためのキットも含む。一実施形態において、上記キットは、（ｉ）サンプルを受け入れるための容器；（ｉｉ）６Ｃｋｉｎｅ、ＡＣＥ、ＢＤＮＦ、ＣＡ１２５、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、Ｅｏｔ２、ＥｒｂＢ１、フォリスタチン、ＨＣＣ４、ＨＶＥＭ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＬ−１７、ＩＬ−１ｓｒＩＩ、ＩＬ−２ｓＲａ、レプチン、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、ＭＩＦ、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ３ｂ、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ７、ＭＰＩＦ−１、ＯＰＮ、ＰＡＲＣ、ＰＤＧＦ Ｒｂ、プロラクチン、プロテインＣ、ＴＧＦ−ｂ ＲＩＩＩ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦ−ａ、ＶＡＰ−１、ＶＥＧＦ Ｒ２およびＶＥＧＦ Ｒ３からなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーを検出するための１つ以上の試薬；および（ｉｉｉ）参照サンプルを含む。一実施形態において、上記キットは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩの検出のための１つ以上の試薬を含む。

本発明はまた、癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングする方法も含む。一実施形態において、本発明は、（ｉ）６Ｃｋｉｎｅ、ＡＣＥ、ＢＤＮＦ、ＣＡ１２５、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、Ｅｏｔ２、ＥｒｂＢ１、フォリスタチン、ＨＣＣ４、ＨＶＥＭ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＬ−１７、ＩＬ−１ｓｒＩＩ、ＩＬ−２ｓＲａ、レプチン、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、ＭＩＦ、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ３ｂ、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ７、ＭＰＩＦ−１、ＯＰＮ、ＰＡＲＣ、ＰＤＧＦ Ｒｂ、プロラクチン、プロテインＣ、ＴＧＦ−ｂ ＲＩＩＩ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦ−ａ、ＶＡＰ−１、ＶＥＧＦ Ｒ２およびＶＥＧＦ Ｒ３からなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーの発現を調節する候補化合物を同定する工程；および（ｉｉ）そのような候補化合物が癌を処置するために効果的かどうかを決定する工程を含む、癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングする方法を含む。一実施形態において、本方法は、プロラクチン、ＭＩＦ、ＯＰＮ、ＩＧＦ−ＩＩ、Ｅ−セレクチン、レプチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ｓＲａからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーの発現を調節する候補化合物を同定する工程を含む。一実施形態において、本方法は、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーの発現を調節する候補化合物を同定する工程を含む。

本発明はまた、ビジネスを行なう方法も含む。一実施形態において、ビジネスを行なう方法は、（ｉ）サンプルを得る工程；（ｉｉ）サンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現を検出する工程であって、ここで１つ以上のバイオマーカーは、６Ｃｋｉｎｅ、ＡＣＥ、ＢＤＮＦ、ＣＡ１２５、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、Ｅｏｔ２、ＥｒｂＢ１、フォリスタチン、ＨＣＣ４、ＨＶＥＭ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＬ−１７、ＩＬ−１ｓｒＩＩ、ＩＬ−２ｓＲａ、レプチン、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、ＭＩＦ、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ３ｂ、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ７、ＭＰＩＦ−１、ＯＰＮ、ＰＡＲＣ、ＰＤＧＦ Ｒｂ、プロラクチン、プロテインＣ、ＴＧＦ−ｂ ＲＩＩＩ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦ−ａ、ＶＡＰ−１、ＶＥＧＦ Ｒ２およびＶＥＧＦ Ｒ３からなる群から選択される、工程；および（ｉｉｉ）そのような検出の結果を報告する工程を含む。一実施形態において、１つ以上のバイオマーカーは、プロラクチン、ＭＩＦ、ＯＰＮ、ＩＧＦ−ＩＩ、Ｅ−セレクチン、レプチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ｓＲａからなる群から選択される。別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群より選択される。

一実施形態において、本発明は、（ｉ）サンプルを得る工程；（ｉｉ）サンプル中の４つのバイオマーカーの発現を検出する工程であって、ここで４つのバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩである、工程；および（ｉｉｉ）そのような検出の結果を報告する工程、を含むビジネスを行なう方法を含む。

本発明はまた、候補癌バイオマーカーをスクリーニングする方法も含む。一実施形態において、本発明は、（ｉ）癌に潜在的に関連する一群のバイオマーカーを同定する工程；（ｉｉ）工程（ｉ）で同定されたバイオマーカーの発現のレベルを癌被験体の第１集団と健康な被験体とにおいて比較する工程；（ｉｉｉ）癌被験体の第１集団において発現の有意差を示すバイオマーカーを選択する工程；（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）で同定されたバイオマーカーの発現のレベルを癌被験体の第２集団と健康な被験体とにおいて比較する工程；および（ｖ）癌被験体の第２集団において発現の有意差を示すバイオマーカーを選択する工程を含み、工程（ｖ）で同定されたバイオマーカーが候補癌バイオマーカーである、候補癌バイオマーカーをスクリーニングする方法を含む。一実施形態において、癌被験体の第１集団は、新しく診断された癌を有し、癌被験体の第２集団は再発癌を有する。一実施形態において、癌被験体の第１集団は再発癌を有し、癌被験体の第２集団は新しく診断された癌を有する。別の実施形態において、癌被験体の第１集団は後期癌を有し、癌被験体の第２集団は初期癌を有する。別の実施形態において、癌患者の第１集団は初期癌を有し、癌被験体の第２集団は後期癌を有する。別の実施形態において、本方法は、さらに、（ｖｉ）工程（ｖ）で同定されたバイオマーカーの発現のレベルを癌被験体の第３集団と健康な被験体とにおいて比較する工程であって、ここでバイオマーカーの発現は異なるアッセイフォーマットを使用することによって検出される、工程；および（ｖｉｉ）癌被験体の第３集団の発現とは有意に異なる発現を示すバイオマーカーを選択する工程であって、工程（ｖｉｉ）で同定されたバイオマーカーが癌に対する候補バイオマーカーである工程、を含む。一実施形態において、本方法は、さらに、工程（ｖ）または（ｖｉｉ）で同定されたバイオマーカーが盲検試験で癌被験体と健康被験体とを区別できたかどうかを決定する工程を包含する。

本発明は、（ｉ）癌バイオマーカーを同定する工程；（ｉｉ）工程（ｉ）で同定されたバイオマーカーを調節するか、またはそれにより調節されるポリペプチドを選択する工程；および（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で同定されたポリペプチドの発現を癌被験体および健康な被験体において測定する工程を含み、癌被験体と健康な被験体とで異なって発現されるポリペプチドが候補癌バイオマーカーである、候補癌バイオマーカーをスクリーニングする方法も含む。

（発明の詳細な説明）
（Ｉ．概説）
癌被験体（初期（ステージＩ〜ＩＩ）疾患と診断された被験体を含む）と健康な被験体との間を区別するために使用され得る方法が、本明細書中に開示される。この方法は、癌被験体と健康な被験体との間の区別に特によく適合されるバイオマーカーの同定に基づく。これらのバイオマーカーは、各工程の異なる被験体由来のサンプルを用いる幾つかの異なるスクリーニング工程と、異なる技術による検証とを含む本明細書中に記載の独自で新規なスクリーニング方法を使用して同定された。本明細書中に開示されるバイオマーカーは、癌の診断、予後診断およびモニタリングにおいて使用され得る。

１つの特定の実施形態において、本明細書中に開示される本発明は、癌被験体と健康な被験体との間（特に、卵巣癌被験体と健康な被験体との間）を区別する４種類のバイオマーカー（レプチン、プロラクチン、ＯＲＮおよびＩＧＦ ＩＩ）に基づく新しい試験をいう。一実施形態において、これらの４種類のバイオマーカーは、卵巣癌の診断、予後診断およびモニタリングのための血液試験において使用され得る。

本明細書中で同定されるこれらのバイオマーカーは、さらなる公知のバイオマーカーと組み合わせて使用され得る。例えば、卵巣癌の公知のバイオマーカーはＣＡ１２５である。本明細書中で同定されるバイオマーカーと組み合わせてＣＡ１２５を使用することは、卵巣癌の初期検出のための新規なアプローチを提示し、この使用は、卵巣癌の進行の高い危険性のある無症候性の女性において前悪性変化または初期卵巣癌を正確に検出する能力を顕著に向上し得る。さらに、本出願で同定されるバイオマーカーは、他の診断技術と組み合わせて使用され得る。例えば、卵巣癌の診断のために、本出願で同定されるバイオマーカーが、卵巣癌を診断するための膣内診、超音波またはＭＲＩと組み合わせて使用され得る。

「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」との冠詞は、本明細書においてその冠詞の文法的な対象の１つまたは１つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を言及するために使用される。

「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」との用語は、本明細書において「〜を含んでいるが、これらに限定されない」との語句を意味するために使用され、この語句と交互交換可能に使用される。

「または」との用語は、文脈が明らかに別のことを示さない限り、本明細書において「および／または」との語句を意味するために使用され、この語句と交互交換可能に使用される。

「例えば（ｓｕｃｈ ａｓ）」との用語は、本明細書において「例えば、これらに限定されないが」との用語を意味するために使用され、この語句と交互交換可能に使用される。

（ＩＩ．診断方法）
一実施形態において、本発明は被験体の癌を診断するか、もしくは癌の診断を助ける方法に関する。一実施形態において、本方法は、被験体由来のサンプルにおける表２に同定されるバイオマーカーからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの発現を、１つ以上の各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み、１つ以上の各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較した場合の上記サンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現の有意差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。一実施形態において、１つ以上のバイオマーカーは、表３に同定されるバイオマーカーからなる群より選択される。別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

バイオマーカーがプロラクチンおよび／またはＯＰＮである場合、バイオマーカーの所定のスタンダードと比較した場合のバイオマーカーの発現の増加は、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。バイオマーカーがレプチンおよび／またはＩＧＦ−ＩＩである場合、バイオマーカーの所定のスタンダードと比較した場合のバイオマーカーの発現の減少は、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。本明細書中で使用される場合、発現の増加または減少は、遺伝子発現産物のレベルが高くなるか低くなるという事実、または遺伝子発現産物の活性が増強されるか、または低下されるという事実をいう。

上記の方法は、任意の癌または腫瘍を診断するために使用され得る。一実施形態において、上記癌は卵巣癌である。別の実施形態において、上記癌は乳癌である。別の実施形態において、上記癌は結腸癌である。別の実施形態において、上記癌は前立腺癌である。別の実施形態において、上記癌は子宮頚癌である。

本明細書中で使用される場合、「バイオマーカー」との用語は、癌を単独で、もしくは複数のポリペプチドとの組合せとして診断するか、または癌の診断もしくは予後診断を助けるため；癌の進行のモニタリングするため；そして／または癌処置の有効性をモニタリングするために使用され得る１つ以上のポリペプチドをいう。本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド」との用語は、アミノ酸のポリマーを言及し、特定の長さは言及しない。従って、ペプチド、オリゴペプチドおよびタンパク質は、ポリペプチドの定義に含まれる。

本明細書中で使用される場合、「レプチン」との用語はレプチンの全てのホモログ、天然に存在する対立遺伝子多型、イソ型および前駆体を含む。レプチンは、ＨＧＮＣ：６５５３、ＯＢ、ＯＢＳ、肥満またはネズミ肥満ホモログとしても公知である。一実施形態において、レプチンは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００２２１のアミノ酸配列を含む。

本明細書中で使用される場合、「プロラクチン」との用語は、プロラクチンの全てのホモログ、天然に存在する対立遺伝子多型、イソ型および前駆体を含む。プロラクチンは、ＰＲＬまたはＨＧＮＣ：９４４５としても公知である。一実施形態において、プロラクチンは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００９３９のアミノ酸配列を含む。

本明細書中で使用される場合、「ＯＰＮ」との用語は、ＯＰＮの全てのホモログ、天然に存在する対立遺伝子多型、イソ型および前駆体を含む。ＯＰＮは、ＨＧＮＣ：１１２５５、ＢＮＳＰ、ＢＳＰＩ、ＥＴＡ−１、分泌リンタンパク質−１またはオステオポンチンとしても公知である。一実施形態において、ＯＰＮは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００５７３のアミノ酸配列を含む。

本明細書中で使用される場合、「ＩＧＦ−ＩＩ」との用語は、ＩＧＦ−ＩＩの全てのホモログ、天然に存在する対立遺伝子多型、イソ型および前駆体を含む。ＩＧＦ−ＩＩは、ＨＧＮＣ：５４６６、インシュリン様増殖因子２、インシュリン様増殖因子ＩＩまたはソマトメジンＡとしても公知である。一実施形態において、ＩＧＦ−ＩＩは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００６０３のアミノ酸配列を含む。

本明細書中で使用される場合、「被験体」または「患者」という用語は、全ての温血動物を含む。一実施形態において、上記被験体はヒトである。一実施形態において、上記被験体は癌を進行させる高い危険性を有する被験体である。

一実施形態において、本方法が卵巣癌に関する場合、被験体は、卵巣癌を有すると疑われるか、または有することが既知であるか、あるいは卵巣癌を進行させる高い危険性のある雌（例えば女性）である。例えば、卵巣癌の家族性病歴を有する卵巣癌被験体について、変異癌遺伝子を有すると同定された被験体、および少なくとも約５０歳の被験体は、卵巣癌を進行させる高い危険性がある。

本明細書中で使用される場合、「サンプル」との用語は、被験体から得られた材料をいう。サンプルは、全ての体液（例えば、全血、血漿、血清、唾液、接眼レンズ液（ｏｃｕｌａｒ ｌｅｎｓ ｆｌｕｉｄ）、汗、尿、乳など）、組織または抽出物、細胞などを含む任意の生物学的供給源に由来するものであり得る。卵巣関連体液の例としては、血液（例えば、全血、血液血清、血小板を除去した血液など）、リンパ液、腹水、婦人科液（例えば、卵巣、ファローピウスおよび子宮の分泌物、月経、膣洗浄液、卵巣細胞サンプルをリンスするために用いられた液体など）、嚢胞液、尿および腹膜のリンスにより収集された流体（例えば、腹腔鏡検査法中に使用され収集された流体またはヒト患者の腹膜腔に注入され、そこから引き出された流体）が挙げられる。

「発現」との用語は、本明細書において、ポリペプチドがＤＮＡから産生されるプロセスを意味するために使用される。このプロセスは、遺伝子のｍＲＮＡへの転写およびこのｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳に関する。それが使用される文脈に従って、「発現」は、ＲＮＡ、タンパク質またはその両方の産生をいうことが可能である。

本発明のバイオマーカーの発現は、転写される分子またはその対応するタンパク質の発現を検出するための多様な周知の方法によって、評価され得る。そのような方法の非限定的な例としては、分泌タンパク質を検出するための免疫学的方法、タンパク質精製法、タンパク質の機能または活性のアッセイ、核酸ハイブリダイゼーション法、核酸逆転写法および核酸増幅法が挙げられる。好ましい実施形態において、マーカー遺伝子の発現は、マーカー遺伝子に対応するタンパク質（例えば、マーカー遺伝子に対応するオープンリーディングフレームによりコードされるタンパク質またはその正常な翻訳後改変の全てまたは一部を受けたタンパク質）に特異的に結合する抗体（例えば、放射標識、発色団標識、フルオロフォア標識または酵素標識された抗体）、抗体誘導体（例えば、基質に結合された抗体またはタンパク質−リガンド対｛例えば、ビオチン−ストレプトアビジン｝のタンパク質またはリガンドと結合された抗体）、または抗体フラグメント（例えば、単鎖抗体、単離された抗体超可変ドメインなど）を使用して評価される。別の好ましい実施形態において、マーカー遺伝子の発現は、患者サンプル中の細胞からｍＲＮＡ／ｃＤＮＡ（すなわち、転写されたポリヌクレオチド）を調製し、そのｍＲＮＡ／ｃＤＮＡを、マーカー遺伝子を含むポリヌクレオチドの相補体である参照ポリヌクレオチドおよびそのフラグメントとハイブリダイズさせることによって評価される。ｃＤＮＡは、参照ポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーション前に多様なポリメラーゼ連鎖反応法のいずれかを使用して、必要に応じて増幅され得るが、増幅しないのが好ましい。

本明細書中で使用される場合、バイオマーカーの「所定のスタンダード」とは、健康な被験体のバイオマーカーの発現のレベルまたは同じ被験体からの非癌性組織中のバイオマーカーの発現レベルをいう。所定のバイオマーカーの所定の標準的な発現レベルは、慣習の実験のみを用いて、予想されるおよび／または回顧的な統計学的研究によって確立され得る。所定の標準発現レベルは、周知の方法を用いて当業者により決定され得る。

「健康な被験体」との用語は、癌と診断されていないか、または分析されている種類の癌と診断されていない被験体をいう。従って、例えば、卵巣癌を診断する方法において、「健康な被験体」は、癌を有さないか、もしくは卵巣癌を有さない被験体をいう。

本明細書中で使用される場合、「有意差」との用語は、十分に当業者の知識の範囲にあり、各特定のバイオマーカーに関して実験的に決定される。例えば、健康な被験体と比較した場合の癌を有する被験体中のバイオマーカーの発現の有意差は、統計学的に有意である任意の発現の差である。

一実施形態において、本方法は、２つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、癌の診断は、スコアに基づく分類方法に基づく。一実施形態において、スコアに基づく分類システムは、二進法に基づく。一実施形態において、スコアに基づく分類システムは、ｍ個の異なるバイオマーカーの発現を決定する工程を含み、各バイオマーカーは、０または１のスコアが割り当てられ、バイオマーカーの発現が所定のスタンダードのバイオマーカーの発現と有意差がない場合、バイオマーカーには０のスコアが割り当てられ、そしてバイオマーカーの発現が所定のスタンダードのバイオマーカーの発現と有意差がある場合、バイオマーカーは１のスコアが割り当てられ；被験体は、ｍ個の異なるマーカーの割り当てられたスコアの合計に対応する総合スコアが割り当てられ；所定の閾値（ｔ）が、癌を診断するか、または癌の診断を助けるために使用される。

一実施形態において、スコアに基づく分類システムは、４つの異なるバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、各バイオマーカーは、０または１のスコアが割り当てられ、バイオマーカーの発現が所定のスタンダードのバイオマーカーの発現と有意差がない場合、バイオマーカーには０のスコアが割り当てられ、そしてバイオマーカーの発現が所定のスタンダードのバイオマーカーの発現と有意差がある場合、バイオマーカーには１のスコアが割り当てられ；被験体には４つの異なるマーカーから割り当てられたスコアの合計に対応する総合スコアが割り当てられ；２以上のスコアが、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。一実施形態において、４つのバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩである。

一実施形態において、本方法は、２つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含み、癌の診断は、２つ以上のバイオマーカーの発現プロフィールをバイオマーカーの所定のスタンダードプロフィールと比較することにより行なわれ、そしてプロフィールの差が、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。本明細書中で使用される場合、「発現プロフィール」は、所定のサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現のレベルの表示である。

一実施形態において、所定のスタンダードプロフィールは、機械学習技術を用いて、癌被験体の２つ以上のバイオマーカーの発現を健康な被験体中の２つ以上のバイオマーカーの発現と比較することにより決定される。一実施形態において、所定のスタンダードプロフィールは、サポートベクターマシン、Ｋ−近傍分類法、または分類樹分析を用いて、癌被験体中と健康な被験体中の２つ以上のバイオマーカーの発現を比較することにより決定される。

一実施形態において、本方法は、サンプル中に表２に同定されていないさらなる公知のバイオマーカーを検出する工程、およびさらなる公知のバイオマーカーの発現を、さらなる公知のバイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含む。癌のさらなるバイオマーカーは、刊行された文献を参照することで当業者により同定され得る。一実施形態において、癌は卵巣癌であり、卵巣癌のさらなるバイオマーカーは、ヒト角質層キモトリプシン酵素（ＨＳＣＣＥ）、カリクレイン４、カリクレイン５、カリクレイン６（プロテアーゼＭ）、カリクレイン８、カリクレイン９、カリクレイン１０、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、ＣＡ１９−９、ＯＶＸ１、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、プロスタシン、ＣＡ５４−６１、ＣＡ７２、ＨＭＦＧ２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＬＳＡ、Ｍ−ＣＳＦ、ＮＢ７０Ｋ、ＰＬＡＰ、ＴＡＧ７２、ＴＮＦ、ＴＰＡ、ＵＧＴＦ、ＷＡＰ４ジスルフィドコアドメイン２（ＨＥ４）、マトリックスメタロプロテアーゼ２、テトラネクチン、インヒビン、メソセリン、ＭＵＣ１、ＶＥＧＦ、ＣＬＤＮ３、ＮＯＴＣＨ３、Ｅ２Ｆ転写因子３（Ｅ２Ｆ３）、ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＲＡＣＧＡＰ１）、血液学的神経学的発現１（ＨＮ１）、アポリポタンパク質Ａ１、ラミニン、クローディン３、クローディン４、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（ＴＲＯＰ−１／Ｅｐ−ＣＡＭ）、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＲＯＰ−２）、ラジニン１、Ｓ１００Ａ２、ＳＥＲＰＩＮ２（ＰＡＩ−２）、ＣＤ２４、リポカリン２、マトリプターゼ（ＴＡＤＧ−１５）、ストラチフィン、トランスフォーミング増殖因子−βレセプターＩＩＩ、血小板由来増殖因子レセプターα、ＳＥＭＡＣＡＰ３、ｒａｓ相同遺伝子ファミリーメンバーＩ（ＡＲＨＩ）、トロンボスポンジン２、障害２／卵巣癌中で差次的発現２（Ｄａｂ２／ＤＯＣ２）およびハプトグロビン−αサブユニットからなる群より選択される。別の実施形態において、卵巣癌のさらなるバイオマーカーは、トランスサイレチンの切断形またはＺｈａｎｇら（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４（１６）：５８８２−９０（２００４））により同定されたインター−α−トリプシンインヒビター重鎖Ｈ４の切断フラグメントである。好ましい実施形態において、卵巣癌のさらなるバイオマーカーはＣＡ１２５である。

一実施形態において、本発明は、被験体の癌を診断するか、または癌の診断を助ける方法をいい、この方法は、被験体からのサンプル中に表２に同定されるバイオマーカーからなる群より選択される２つ以上のバイオマーカーの発現を各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み、各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較した場合のサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現の有意差は、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。一実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、表３に同定されるバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。一実施形態において、少なくとも２つバイオマーカーの発現の有意差は、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

一実施形態において、本発明は、被験体の癌を診断するか、または癌の診断を助けるための方法を含み、この方法は、被験体由来のサンプル中に表２に同定されるバイオマーカーからなる群から選択される３つ以上のバイオマーカーの発現を各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み、各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較した場合のサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現の有意差は、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。一実施形態において、３つ以上のバイオマーカーは、表３に同定されるバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、３つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。一実施形態において、少なくとも２つまたは少なくとも２つ以上のバイオマーカーの発現の有意差は癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

一実施形態において、本発明は、被験体の癌を診断するか、または癌の診断を助けるための方法に関し、この方法は、被験体からのサンプル中に表２に同定されるバイオマーカーからなる群から選択される４つ以上のバイオマーカーの発現を各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較する工程を含み、各バイオマーカーの所定のスタンダードと比較した場合のサンプル中の１つ以上のバイオマーカーの発現の有意差は、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。一実施形態において、４つ以上のバイオマーカーは、表３に同定されるバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、４つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。一実施形態において、少なくとも２つまたは少なくとも２つ以上のバイオマーカーの発現の有意差は、癌を診断するか、または癌の診断を助ける。

１つ以上のバイオマーカーの発現は、当業者に公知の任意の方法によって検出され得る。一実施形態において、１つ以上のバイオマーカーの発現は、１つ以上のバイオマーカーを検出する試薬を使用して検出され得る。上記試薬は、１つ以上のバイオマーカーを特異的に検出する任意の試薬であり得る。上記試薬は、バイオマーカーに特異的な抗体（天然または合成）またはそのフラグメント、バイオマーカーを特異的に検出し得るペプチド、核酸または任意の他の試薬であり得る。本明細書中で使用される場合、「抗体」との用語は、例えば、組合せ変異誘発およびファージディスプレイにより作製されたキメラ抗体または合成抗体を含む。「抗体」との用語は、抗体の擬似物（ｍｉｍｅｔｉｃ）またはペプチド擬似物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）を含む。ペプチド擬似物は、ペプチドおよびタンパク質に基づくか、またはそれらに由来する化合物である。本発明のペプチド擬似物は、代表的には、非天然アミノ酸、立体配座抑制（ｒｅｓｔｒａｉｎｔ）、等比体積置換などを用いて、公知のペプチド配列の構造的改変により得られ得る。被験体のペプチド擬似物は、ペプチドと非ペプチド合成構造物との間に構造的な空間の連続体を構成する；したがって、ペプチド類似物は、ファルマコフォア（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ）を描写するのに有用であり得、ペプチドを親ペプチドの活性を有する非ペプチド化合物へと翻訳することを助けるのに有用であり得る。説明の目的のために、抗体のペプチドアナログは、例えばベンゾジアゼピン（例えば、Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇ．Ｒ．Ｍａｒｓｈａｌｌ（編），ＥＳＣＯＭ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１９８８を参照のこと）、置換γラクタム環（Ｇａｒｖｅｙら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇ．Ｒ．Ｍａｒｃｈａｌｌ（編），ＥＳＣＯＭ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１９８８，ｐ１２３）、Ｃ−７擬似物（Ｈｕｆｆｍａｎら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇ．Ｒ．Ｍａｒｓｈａｌｌ（編），ＥＳＣＯＭ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１９８８，ｐ．１０５）、ケト−メチレン擬似ペプチド（Ｅｗｅｎｓｏｎら（１９８６）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２９：２９５；およびＥｗｅｎｓｏｎら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ（第９回のＡｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍの予稿集）Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ，１９８５）、β−ターンジペプチドコア（Ｎａｇａｉら（１９８５）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２６：６４７；およびＳａｔｏら（１９８６）Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ １：１２３１）、β−アミノアルコール（Ｇｏｒｄｏｎ ら（１９８５）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １２６：４１９；およびＤａｎｎら（１９８６）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １３４：７１）、ジアミノケトン（Ｎａｔａｒａｊａｎら（１９８４）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １２４：１４１）およびメチレンアミノ改変（Ｒｏａｒｋら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇ．Ｒ．Ｍａｒｓｈａｌｌ（編），ＥＳＣＯＭ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１９８８，ｐ．１３４）を使用して作製され得る。また、一般的に、Ｓｅｓｓｉｏｎ ＩＩＩ：Ａｎａｌｙｔｉｃ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ，ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇ．Ｒ．Ｍａｒｓｈａｌｌ（編），ＥＳＣＯＭ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１９８８）も参照のこと。

別の実施形態において、試薬は、検出可能な物質で直接的または間接的に標識される。例えば、検出可能な物質は、例えば、放射性同位元素、蛍光化合物、酵素および酵素補因子からなる群から選択され得る。抗体を標識する方法は、当該分野で周知である。

本明細書中で使用される場合、「検出する（ｄｅｔｅｃｔ）」、「検出された（ｄｅｔｅｃｔｅｄ）」または「検出している（ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ）」との用語は、測定する（ｍｅａｓｕｒｅ）、測定される（ｍｅａｓｕｒｅｄ）、または測定している（ｍｅａｓｕｒｉｎｇ）、を含む。

上記の方法は、任意のサンプルを使用して実施され得る。一実施形態において、サンプルは体液サンプルである。一実施形態において、体液サンプルは血液または血清である。

別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーの発現は、質量分析を使用して検出される。

さらに別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーの発現は、１つ以上のバイオマーカーをコードする遺伝子のｍＲＮＡ転写レベルを測定することにより検出される。

さらに別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーの発現は、ＥＬＩＳＡ、ＲＣＡイムノアッセイ、化学発光、薄膜光学バイオセンサー、プロトン共鳴技術、タンパク質マイクロアレイアッセイまたは当該分野で公知の任意の他の検出方法により検出され得る。

一実施形態において、１つ以上のバイオマーカーの発現は、（ａ）１つ以上のバイオマーカーにより調節されるポリペプチドの発現を検出すること；（ｂ）バイオマーカーを調節するポリペプチドの発現を検出すること；または（ｃ）バイオマーカーの代謝産物の発現を検出することによって検出される。当業者は、慣習の実験のみを用いて、バイオマーカーを調節するか、またはバイオマーカーにより調節されるポリペプチド、およびバイオマーカーの代謝産物を同定することが可能である。

癌を診断するか、または癌の診断を助ける上記の方法は、結果の正当性を立証する（すなわち、被験体が癌を有するかどうかをより最終的に決定する）他の方法に組み合わせて使用され得る。一実施形態において、上記癌は卵巣癌であり、上記の方法は、身体検査、超音波検査、Ｘ線検査、ＭＲＩ検査、開腹術および／または血液学的試験を含む。患者の卵巣癌を示し得る血液学的試験は、卵巣癌のさらなるバイオマーカーの血清レベルの分析をさらに含む。

（ＩＩＩ．モニタリングの方法）
一実施形態において、本発明は、被験体からのサンプルにおける表２に規定されるバイオマーカーからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの発現を、その後の時点で該被験体から得られたサンプルにおける上記１つ以上のバイオマーカーの発現と比較する工程を含む、被験体の癌の進行をモニタリングする方法において、上記１つ以上のバイオマーカーの発現の差が被験体の癌の進行を示す方法を含む。一実施形態において、上記１つ以上のバイオマーカーは表３に規定されたバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

一実施形態において、本方法は２つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。別の実施形態において、本方法は３つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。別の実施形態において、本方法は４つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、本方法は４つ以上のバイオマーカーの発現を比較すること工程を含み、この４つ以上のバイオマーカーとしては、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩが挙げられる。さらに別の実施形態において、本方法はレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩの４つのバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。

一実施形態において、本方法は被験体が癌の処置を受けた後に癌の進行をモニタリングするために用いられる。

本発明はまた、処置の少なくとも一部を提供する前に、被験体からのサンプルにおける表３に規定されたバイオマーカーからなる群から選択された１つ以上のバイオマーカーの発現を、被験体が少なくとも一部の処置を受けた後に、この被験体から得られたサンプルにおける上記１つ以上のバイオマーカーの発現と比較する工程を含む、癌に対する処置の有効性をモニタリングする方法において、上記１つ以上のバイオマーカーの発現の差が処置の有効性を示す方法を含む。

一実施形態において、この１つ以上のバイオマーカーは表３に規定されたバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、この１つ以上のバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

一実施形態において、本方法は２つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。別の実施形態において、本方法は３つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。別の実施形態において、本方法は４つ以上のバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。一実施形態において、本方法は４つ以上のバイオマーカーの発現を比較すること工程を含み、４つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩを含む。さらに別の実施形態において、本方法はレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩの４つのバイオマーカーの発現を比較する工程を含む。

本明細書中で用いられる「処置」との用語は、化学療法、免疫療法、遺伝子療法、放射線療法および組織の外科切除を含むが、これらに限定されない、卵巣癌を処置するためのいかなる治療であってもよい。本明細書中で用いられる「処置の一部」とは、癌を処置するために用いられる化合物の投与等の癌の処置の一部または化学療法等の処置の一部をいう。

癌をモニタリングする上記の方法はいかなる癌や腫瘍にも適用可能である。一実施形態において、本方法は卵巣癌をモニタリングするためのものである。一実施形態において、本方法は乳癌をモニタリングするためのものである。一実施形態において、本方法は結腸癌をモニタリングするためのものである。別の実施形態において、本方法は子宮頚癌をモニタリングするためのものである。

（ＩＶ．キット）
本発明は、癌を診断するか、または癌の診断を助けるため、または癌のモニタリングをするためのキットも包含する。キットは任意の癌を診断またはモニタリングするために用いることができる。一実施形態において、キットは卵巣癌の診断またはモニタリングのためのものである。一実施形態において、キットは乳癌の診断またはモニタリングのためのものである。一実施形態において、キットは結腸癌の診断またはモニタリングのためのものである。一実施形態において、キットは子宮頚癌の診断またはモニタリングのためのものである。

一実施形態において、本キットは、（ｉ）サンプルを受け取るための容器；（ｉｉ）表２に規定されたバイオマーカーからなる群から選択された１つ以上のバイオマーカーを検出するための１つ以上の試薬；および（ｉｉｉ）参照サンプルを含む。一実施形態において、本キットは表３に規定されたバイオマーカーからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーを検出するための１つ以上の試薬を含む。一実施形態において、本キットは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーを検出するための１つ以上の試薬を含む。

一実施形態において、本キットは２つ以上のバイオマーカーを検出するための試薬を含む。一実施形態において、この２つ以上のバイオマーカーは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

別の実施形態において、キットは３つ以上のバイオマーカーを検出するための試薬を含む。

一実施形態において、本キットは４つ以上のバイオマーカーを検出する試薬を含む。一実施形態において、４つ以上のバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩを含む。

試薬は、生物学的サンプル中の本発明のマーカー遺伝子に対応するポリペプチドまたはポリペプチドをコードするｍＲＮＡを検出することが可能な標識化合物または因子、およびサンプル中のポリペプチドまたはｍＲＮＡの量を決定する手段（例えば、該ポリペプチドに結合する抗体または該ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡに結合するオリゴヌクレオチドプローブ）であり得る。本発明のマーカー遺伝子に対応するポリペプチドに結合する適当な試薬としては、抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント等が挙げられる。核酸（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡ、スプライシングされたｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ等）に結合する適当な試薬としては、相補核酸が挙げられる。

抗体ベースのキットについて、キットは、例えば、（１）本発明のマーカー遺伝子に対応するポリペプチドに結合する第１抗体（例えば、固体支持体に結合させたもの）および任意に（２）ポリペプチドか第１抗体のいずれかに結合し、検出可能な標識と結合体化させた第２の異なる抗体を含むことができる。

オリゴヌクレオチドベースのキットについて、キットは、例えば、（１）本発明のマーカー遺伝子に対応するポリペプチドをコードする核酸配列にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドであって、例えば検出可能に標識されたオリゴヌクレオチド、または（２）本発明のマーカー遺伝子に対応する核酸分子を増幅するのに有用な一対のプライマーを含み得る。

参照サンプルは試験されているサンプルから得られた結果を比較するために用いられる。

このキットは、緩衝剤、防腐剤、またはタンパク質安定剤等の他の成分を含み得る。キットはさらに検出可能な標識を検出するために必要な成分（例えば酵素または基質）をさらに含み得る。

キットの各成分は個々の容器に入れることができ、多様な容器のすべてが、キットを用いて実施されるアッセイの結果を解釈するための使用説明書とともに単一パッケージ内に収められ得る。

（Ｖ．スクリーニング法）
本発明は、癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングするための方法も含む。一実施形態において、本発明は、（ｉ）表２に規定されるバイオマーカーからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの発現を調節する候補化合物を同定する工程；および（ｉｉ）そのような候補化合物が癌を処置するために効果的かどうかを決定する工程を含む、癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングする方法を含む。一実施形態において、この１つ以上のバイオマーカーは表３に規定されたバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、この１つ以上のバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

一実施形態において、本発明は、（ｉ）表２に規定されるバイオマーカーからなる群から選択される２つ以上のバイオマーカーの発現を調節する候補化合物を同定する工程；および（ｉｉ）そのような候補化合物が癌を処置するために効果的かどうかを決定する工程を含む、癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングする方法を含む。一実施形態において、この２つ以上のバイオマーカーは表３に規定されたバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、この２つ以上のバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

本発明は、癌を治療するために有用な候補化合物をスクリーニングするための方法も含む。一実施形態において、本発明は、（ｉ）表２に規定されるバイオマーカーからなる群から選択される３つ以上のバイオマーカーの発現を調節する候補化合物を同定する工程；および（ｉｉ）そのような候補化合物が癌を処置するために効果的かどうかを決定する工程を含む、癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングする方法も含む。一実施形態において、この３つ以上のバイオマーカーは表３に規定されたバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、この３つ以上のバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

本発明は、癌を治療するために有用な候補化合物をスクリーニングするための方法も含む。一実施形態において、本発明は、（ｉ）表２に同定されるバイオマーカーからなる群から選択される４つ以上のバイオマーカーの発現を調節する候補化合物を同定する工程；および（ｉｉ）そのような候補化合物が癌を治療するために効果的かどうかを決定する工程を含む、癌を治療するために有用な候補化合物をスクリーニングする方法も含む。一実施形態において、この４つ以上のバイオマーカーは表３に同定されたバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、この４つ以上のバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

本明細書中に用いられる「化合物」との用語は、疾患、病気、状態または身体機能の不全を治療または予防するために用いることのできる任意の化学物質、調合薬、薬物等をいう。化合物は公知の治療化合物および潜在的な治療化合物の両方を含む。化合物は本発明のスクリーニング方法を用いるスクリーニングにより治療的であると決定され得る。試験化合物の例としては、ペプチド、ポリペプチド、合成有機分子、天然の有機分子、核酸分子およびそれらの組合せが挙げられる、これらに限定されない。

上記のスクリーニング方法は、癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングするために用いられ得る。一実施形態において、本方法は、卵巣癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングするためのものである。別の実施形態において、本方法は、乳癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングするためのものである。別の実施形態において、本方法は、結腸癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングするためのものである。別の実施形態において、本方法は、子宮頚癌を処置するために有用な候補化合物をスクリーニングするためのものである。

（ＶＩ．ビジネス方法）
本発明は、（ｉ）サンプルを得る工程；（ｉｉ）サンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーの発現を検出する工程であって、ここで１つ以上のバイオマーカーが表２に規定されたバイオマーカーからなる群から選択される、工程；および（ｉｉｉ）そのような検出の結果を報告する工程を含むビジネスを行なう方法をさらに含む。一実施形態において、この１つ以上のバイオマーカーは表３に規定されたバイオマーカーからなる群から選択される。別の実施形態において、１つ以上のバイオマーカーはレプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩからなる群から選択される。

本発明は、（ｉ）サンプルを得る工程；（ｉｉ）レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩの発現を検出する工程；および（ｉｉｉ）そのような検出の結果を報告する工程を含む、ビジネスを行なう方法をさらに含む。

（ＶＩＩ．一般的なスクリーニング方法）
本発明は、（ｉ）癌に潜在的に関連する一群のバイオマーカー（例えば、癌遺伝子、腫瘍抑制遺伝子、増殖因子様遺伝子、プロテアーゼ様遺伝子およびタンパク質キナーゼ様遺伝子）を同定する工程；（ｉｉ）工程（ｉ）で同定されたバイオマーカーの発現のレベルを癌被験体の第１集団と健康な被験体とにおいて比較する工程；（ｉｉｉ）癌被験体の第１集団において発現の有意差を示すバイオマーカーを選択する工程；（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）で同定されたバイオマーカーの発現のレベルを癌被験体の第２集団と健康な被験体とにおいて比較する工程；および（ｖ）癌被験体の第２集団において発現の有意差を示すバイオマーカーを選択する工程を含み、工程（ｖ）で同定されたバイオマーカーが候補癌バイオマーカーである、候補癌バイオマーカーをスクリーニングする方法も含む。癌被験体の第１の集団と癌被験体の第２の集団は、これら２つの集団が異なる限り２つのいずれの癌の集団であってよい。一実施形態において、癌被験体の第１集団は新しく癌と診断された被験体を含み、癌被験体の第２集団は再発性の癌を有する被験体を含む。別の実施形態において、癌被験体の第１集団は後期癌を有する被験体を含み、癌被験体の第２集団は初期癌を有する被験体を含むか、または癌患者の第１集団は初期癌を有する被験体を含み、癌被験体の第２集団は後期癌を有する被験体を含む。

当業者は潜在的に癌に関連するバイオマーカーを同定し得る。そのようなバイオマーカーは、癌遺伝子、腫瘍抑制遺伝子、増殖因子様遺伝子、プロテアーゼ様遺伝子およびタンパク質キナーゼ様遺伝子からなる群から選択され得る。

一実施形態において、本方法はさらに（ｖｉ）工程（ｖ）で同定されたバイオマーカーの発現のレベルを癌被験体の第３集団と健康な被験体とにおいて比較し、バイオマーカーの発現を異なるアッセイフォーマットを用いて検出する工程；および（ｖｉ）癌被験体の第３集団の発現とは有意に異なる発現を示すバイオマーカーを選択する工程を含み、工程（ｖｉｉ）で同定されたバイオマーカーが癌に対する候補バイオマーカーである。よって、例えば、一実施形態において、バイオマーカーの発現は、高性能アッセイを用いて最初に検出され、次に、問題のタンパク質に特異的なアッセイを用いて検出される。例えば、一実施形態において、バイオマーカーの発現は最初にＲＣＡマイクロアレイイムノアッセイを用いて検出され、次にＥＬＩＳＡアッセイにより検出される。癌被験体の第３集団は癌被験体の第１および第２集団と同じでも異なってもよい。

一実施形態において、本方法はさらに工程（ｖ）または（ｖｉｉ）で同定されたバイオマーカーが、盲検試験で癌被験体と健康被験体とを区別できたかどうかを決定する工程を含む。盲検試験の結果は周知の統計学的な方法を用いて分析することができる。

このバイオマーカーの発現は当該分野で公知の任意の方法を用いて比較され得る。一実施形態において、バイオマーカーの発現は、タンパク質アレイ、質量分析、ゲル電気泳動またはイムノアッセイを用いて検出される。一実施形態において、バイオマーカーの発現はＲＣＡマイクロアレイイムノアッセイを用いて検出される。別の実施形態において、バイオマーカーの発現はＥＬＩＳＡを用いて検出される。これらの方法は当該分野で周知である。

本発明は、さらに、（ｉ）癌バイオマーカーを同定する工程；（ｉｉ）工程（ｉ）で同定されたバイオマーカーを調節するか、または調節されるポリペプチドを選択する工程；および（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で同定されたポリペプチドの発現を癌被験体と健康な被験体において測定する工程を含み、癌被験体と健康被験体とで差次的に発現するポリペプチドが候補癌バイオマーカーである、候補癌バイオマーカーをスクリーニングする方法も含む。

上記のスクリーニング方法は任意の癌の候補バイオマーカーをスクリーニングするために用いられ得る。一実施形態において、本方法は、卵巣癌の候補バイオマーカーをスクリーニングするためのものである。別の実施形態において、本方法は、乳癌の候補バイオマーカーをスクリーニングするためのものである。別の実施形態において、本方法は、結腸癌の候補バイオマーカーをスクリーニングするためのものである。別の実施形態において、本方法は、子宮頚癌の候補バイオマーカーをスクリーニングするためのものである。

（実施例１：卵巣癌のバイオマーカーの同定）
図１は、卵巣癌を有する被験体と健康な被験体とを区別するために用いることのできる卵巣癌のバイオマーカーを同定するために用いられる新規なスクリーニングアッセイの概略である。図１に示されるように、スクリーニング法のフェーズＩの間、卵巣癌を有する被験体と健康被験体との間で差次的に発現するタンパク質を同定するために、ＲＣＡイムノアッセイマイクロアレイにより４６血清サンプル（１８サンプルを卵巣減を有する被験体から得、２８サンプルを健康で年齢を適合させたコントロールから得た）中の１６９タンパク質の発現レベルを測定した。

この１６９個のタンパク質の集団から、健康な被験体と卵巣癌を有する被験体とで差次的に（分散検定（ＡＮＯＶＡ）の分析に基づき０．０５未満のｐ値）発現する３５タンパク質を同定した。このデータを表２に規定する。

表２に規定されたタンパク質（または分析物）は、表１に記載されるタンパク質のフルネームを参照し、および公刊文献を参照して同定することのできる他の名称によっても知られる。表２に規定されたタンパク質の他の名称を同定する１つの方法は、ＧｅｎＢａｎｋ等の多様なＮＣＢＩデータベースを参照することによる。

これらの３５個のタンパク質を、再発卵巣癌を有する被験体から得られた４０個の血清サンプルによるさらなる特性付けのために選択した。３５個のタンパク質のこの集団からの１０種類のバイオマーカーが、再発卵巣癌を有する被験体と健康な被験体との間でタンパク質発現の最も大きい差を示した。これらの１０種類のバイオマーカーを表３に規定する。

これらの１０個のタンパク質のうち、健康な被験体と新しく卵巣癌と診断された被験体との間のみならず、健康な被験体と再発疾病を有する被験体との間も区別する最大の潜在性を示したタンパク質の一部を、５０人の被験体の小集団（平均年齢６３．４歳のステージＩＩＩ／ＩＶ卵巣癌を有する２５人の癌被験体と平均年齢５７歳の２５人の健康な被験体）に対するサンドイッチ酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて検定した。元のサンプル集合のＥＬＩＳＡ試験に基づくと、ＥＧＦ、ＴＮＦａおよびＩＬ−１７は癌とコントロール血清サンプルとの間に一貫した区別を提供しなかった。ＭＩＦ−１は見込みのあるマーカーであるが、ＥＬＩＳＡキットは、試験を続けるには確実には利用可能ではなかった。図３に示されるように、４種類のタンパク質がＲＣＡマイクロアレイイムノアッセイとＥＬＩＳＡアッセイとの間で完全な相関を示した。これらのサンプルに対して決定された４種類のバイオマーカーの平均濃度を下記の表４に示す。

上記で特異的なＥＬＩＳＡ試験を用いて実験的に決定されたように、レプチンの所定のスタンダードは７〜５０ｎｇ／ｍｌであり；プロラクチンの所定のスタンダードは０〜１０ｐｇ／ｍｌであり；ＯＰＮの所定のスタンダードは０．５〜１９ｐｇ／ｍｌであり；およびＩＧＦ−ＩＩの所定のスタンダードは４５０〜２５００ｎｇ／ｍｌである。当業者はバイオマーカーの所定の標準濃度は多様な因子に依存してアッセイ間で異り得ることを理解するだろう。

最終集団の４種類のバイオマーカー（レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩ）を、１０６人の健康な被験体と１００人のステージＩ〜ＩＶの卵巣癌被験体からのサンプルを含んだ２０６個の血清サンプルを含む盲検試験のアッセイのために選択した。この盲検試験に用いられた被験体の特徴を表５に記載する。これらの４種類のバイオマーカーの発現をＥＬＩＳＡにより決定した。

卵巣癌を有する被験体と健康な被験体とを区別するために、統計的クラスタ分析を実施した。４種類のマーカーのいずれも、従来のバイナリデータセット分析に適合する最小二乗法を用いて正常グループと癌グループを確実に分離することはできなかったが（図４）、４種類のマーカーのペアプロットはこれらグループにおける被験体間の良好な分離を示した（図５）。

４種類のバイオマーカーの組み合わせたデータを、サポートベクターマシン（ＳＶＭ）、Ｋ−近傍分類法（ｋ−ＮＮ）、分類樹解析、およびスコアに基づく分類システムの４種類の異なる分類により分析して、健康な被験体のサンプルと卵巣癌を有する被験体のサンプルを分類した。サポートベクターマシン（ＳＶＭ）、Ｋ−近傍分類法（ｋ−ＮＮ）、分類樹解析、およびスコアに基づく分類システムは階層的クラスタ分析モデルである。

図６は、スコアに基づく分類システムの結果を示す。特に、図６はスクリーニングアッセイの段階に参加した２０６人の被験体に割り当てられたスコアを示す。これらのスコアは下記方法を用いて割り当てた：各マーカーに対して、誤判別の被験体の数を最小化する最善のスプリットポイントを見出した。スプリットポイントはサンプル空間を、１つを健康、もう１つを癌とする２つの空間に分割する。スコア０はその関連する観察が正常な空間に入る場合に被験体に割り当てられ、さもなければ、スコア１が割り当てられる。表６は、上記の４種類のバイオマーカーのそれぞれのスプリットポイントを示す。全体としては、スコアは４種類の異なるマーカーからのこれら割り当てられたスコアの合計として個人に割り当てられる。よって、この例では、そのようなスコアの範囲は［０、４］である。図６は、２よりも大きいか、または２に等しいスコアを有する被験体が癌を有するだろうこと、および１よりも小さいか、または１に等しい被験体が健康であるだろうことを例示する。

表７は、考慮される全ての４分類方法の１０回交差検定（１０−ｆｏｌｄ ｃｒｏｓｓ−ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ）に基づく分類結果を示す。これらの結果は、全ての分類方法が正常グループと癌グループとをよく区別できることを示した。提案されたスコアに基づく分類方法は、近傍法および分類樹解析よりも良好に機能した。スコア付け方法からの結果はＳＶＭの結果に匹敵する。試験の感度は９６％、特異性９７％、ＰＰＶ９７％およびＮＰＶ９６％である。アッセイの「感度」とは、試験が、卵巣癌に罹る個人に陽性の結果をもたらす確率をいう。アッセイの「特異性」とは、試験が、卵巣癌に罹っていない個人に陰性の結果をもたらす確率をいう。アッセイの「陽性予測値」（ＰＰＶ）は、全ての陽性の結果（すなわち、卵巣癌に罹った患者の陽性のアッセイ結果＋卵巣癌に罹っていない患者の陽性のアッセイ結果）に対する真の陽性の結果（すなわち、卵巣癌に罹った患者の陽性のアッセイ結果）の比である。

最後に、上記のスコアに基づく分類システムを用いて、４０個のサンプルのさらなる検証盲検試験を実施した。この方法は、４０被験体のうち３８被験体を、卵巣癌を有するか、または有さないと正確に分類することができた（１個のサンプルは擬陽性に分類され、別の１個のサンプルは擬陰性に分類された）。

表８は、本明細書中に記載されたＥＬＩＳＡアッセイにより決定されたように、上記のスクリーニングアッセイ（フェーズＩＶおよびＶ）に参加したステージＩおよびステージＩＩ卵巣癌を有する被験体中における、本明細書中で同定された４種類のバイオマーカー（レプチン、プロラクチン、ＯＤＮおよびＩＧＦ−ＩＩ）とバイオマーカーＣＡ１２５のレベルを要約する。（太字／イタリック体の患者は本明細書中に記載のスクリーニングアッセイのフェーズＶに参加した。）

（実施例１に使用された材料と方法）
マイクロアレイの製造：マイクロアレイをＳｃｈｗｅｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００２）２０：３５９にしたがって調製した。要約すれば、スライドガラスを清浄し、３−シアノプロピルトリエトキシシランで誘導体化した。スライドにテフロン（登録商標）マスクを付け、スライドを、サブアレイと呼ばれる０．６５ｃｍ直径の１６ウエルまたは環状分析部位へと分割した（図２）。各マイクロアレイスポットのために液滴（約３５０ｐＬ）を分注する、圧電性チップを備えたＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ＳｐｏｔＡｒｒａｙ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ非接触アレイ装置を用いてプリントを行なった。抗体を０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で、定められた位置に適用した。各チップに、アレイ１、２、３、４、５または６のいずれかの一種類のアレイの１６コピーをプリントした（表１を参照）。一組の抗体に各サブアレイに４つ一組のスポットをプリントした。プリント後、光学顕微鏡を用いてチップを検査した。観察された欠けるスポットの割合が５％を超えた場合、そのバッチは不合格で、スライドはすぐに捨てられた。本明細書中に記載の全てのプリント試験について、抗体特徴の１００％およびビオチンキャリブレータの＞９５％がプリントされた。マイクロアッセイチップを、一組の適格な試薬に組み合わせて２つの方法で確認した。第一に、１〜３種類の異なるサイトカインの混合物を高強度シグナルを提供するように調製し、チップ上の１４ウエル（各ウエルは検出抗体の全補体までの異なる混合物で処理されている）に適用し、２つのアレイをブランクコントロールとして用いた。チップを展開し、スキャンし、得られたシグナルを特定のアレイの位置マップと比較した。第二に、公知のサンプルマトリックスを用いた指定アレイのすべての分析物の滴定ＱＣを実施した。正常なヒト血清とヘパリン処理した血漿とをうまくアッセイするか、またはアレイのすべての分析物を表す精製組換えサイトカインでスパイクした。次に、スパイクした混合物を、各非スパイクコントロールサンプルの２サブアレイとともに、９，０００ｐｇ／ｍＬ〜３７ｐｇ／ｍＬのスパイクサイトカイン濃度のスライドのサブアレイに沿って滴定した。データを定量化し、アレイの各分析物に関する滴定曲線を作成して、特徴強度挙動を濃度の関数として調べた。これらをもとに、このデータを用いてアレイ特徴と試薬セットの活性を確認した。

ＲＣＡマイクロアレイイムノアッセイ：アッセイ前に、スライドを密閉容器中で室温での保存から取り出し、調湿したチャンバー（４５〜５５％）中に開放した。スライドをＳｅａｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）でブロックし、調湿チャンバー中で、ＰＢＳで１時間３７℃で１：１に希釈した。ブロッキング溶液の除去後、サンプル適用前に１×ＰＢＳ／０．５％Ｂｒｉｊ３５で２回洗浄した。４コントロールを、全滴定曲線の４アンカーポイントに対応する特徴濃度を有する各サンプルスライドに含ませた。残りの１２サブアレイ上の試験サンプルをアッセイした。次に、２０μＬの処理サンプルを各サブアレイに適用した。ＲＣＡシグナル増幅によりイムノアッセイを実施する基本原則は記載されており（Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００２）２０：３５９−６５）、本発明者らはその研究で用いられたプロトコールから得られたＳＯＰｓを用いている。スライドを、ＬＳ２００スキャナー（ＴＥＣＡＮ）を用いてスキャンした。スキャンされた像を、専売権付きソフトウェアを用いて分析した。マイクロアレイスポットの蛍光強度を各特徴とサンプルに関して分析し、得られる平均強度値を決定した。選択されたサイトカインに関する用量反応曲線を調べて、特徴強度がバックグランドよりも上にあることを確認し、増加する分析物濃度とともに増加する強度を示した。

ＲＣＡマイクロアレイイムノアッセイの被験体集団：ＲＣＡマイクロアレイイムノアッセイに関して、８６被験体からの血清を検定した。８６被験体のうち、２８被験体は健康で、６０．８歳の平均年齢を有し、５８被験体はステージＩＩＩ／ＩＶ卵巣癌を有し、５７．１歳の平均年齢を有した。ステージＩＩＩ／ＩＶ卵巣癌を有する５８人の患者のうち、１８人は新しく診断され、残りの４０人は再発した疾患を有する被験体であった。

盲検試験（ＥＬＩＳＡ）の被験体集団：ＥＬＩＳＡの検討のために、血清サンプルを、卵巣癌を有する１００被験体および１０６人の健康な／病気のない、または危険性の高い被験体（Ｙａｌｅ Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｅａｒｌｙ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎプログラム（ＨＩＣ１０４２５）の一部として）から集めた。正常なグループは健康な／病気のない６６人（アレイ用に送られた２８人の健康なサンプルを含む）および危険性の高いと思われる４０人の女性からなった。１００人の卵巣癌患者のうち、２４人の女性がステージＩ／ＩＩと診断され、７６人の女性がステージＩＩＩ／ＩＶ ＥＯＣと診断された。このグループに入るのは１８個の新しく診断されたＯＶＣＡサンプルである。健康な／病気のないグループの血清は、癌腫の存在に関してベースライン値または「正常範囲」とした。

血清の採取：１０ｍｌの血液を集め、１５００ｒｐｍで１０分間遠心し、血清を、さらに使用するまでＯＢ／ＧＹＮ組織バンクに−８０℃で保存した。血液サンプルの採取、調製および保存は、ＮＣＩ Ｉｎｔｅｒｇｒｏｕｐ Ｓｐｅｃｉｍｅｎ Ｂａｎｋｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより示されたガイドラインを利用して行なった。この研究への参加の同意は有資格者によって得られた。分析前、血清を一旦解凍し、８（２５〜５０μｌ）アリコートを−８０℃で保存して、不必要な凍結と解凍から守った。

ＥＬＩＳＡアッセイ：レプチン、プロラクチンおよびＩＧＦ−ＩＩキットをテキサス州ウエブスターのＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．から購入し、ＯＰＮ（オステオポンチン）はＡｓｓａｙ Ｄｅｓｉｇｎｓ，Ｉｎｃ．（ミシガン州アナーバー）から購入した。アッセイをキットの使用説明書にしたがって実施し、結果は、各アッセイの適当な補正を行ない、４０５ｎＭの二波長に設定されたＳｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ Ｍ２マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、カリフォルニア州サニーベール）を用いて読んだ。３つの分類（サポートベクターマシン（ＳＶＭ）、Ｋ−近傍分類法（ｋ−ＮＮ）および分類樹解析）を使用して結果を分析した（卵巣癌患者から健康な／病気のない被験体を区別した）。

統計的分析：ＳＡＳのＧＬＭ操作を用いて、卵巣癌を有する被験体と健康な被験体との間でＲＣＡマイクロアレイイムノアッセイにより検出されたタンパク質発現の違いの有意性を調べるために分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いた。報告された効果量は、グループ内で標準偏差により標準化した、２グループ間の平均の違いを測定し、サンプルサイズとは独立する：
効果量＝（平均＿グループ１−平均＿グループ２）／標準＿グループ１＿グループ２。

効果量は、特定の変数の予測能力と直接的な関連を有する。表９は効果量（列１）の確率（列２）への変換を示す。表９に示す例は効果量と予測能力との関係を示すことを目的とする。例えば、２グループ間に観察された０．３の効果量では、それらグループを正確に同定する確率は０．５６である。１の効果量では、確率は０．６９まで増加する。

正常な／危険性の高い被験体と卵巣癌患者とを区別するために、患者血清から得られた４種類のタンパク質発現マーカーの統計的クラスタ分析を実施した。一般的な３種類の分類方法（サポートベクターマシン（ＳＶＭ）、Ｋ−近傍分類法（ｋ−ＮＮ）および分類樹解析（Ｈａｓｔｉｅ等、２００１年））を用いた。分類の正確性を評価するために１０回交差検定を用いた。

これらの３分類方法に加えて、さらに生物学的に説明できるスコアに基づく分類方法を用いた。スコアに基づく分類システムは下記のように実施することができる：（ｉ）各マーカーに関して、誤判別の被験体の数を最小化する最善のスプリットポイントを見出す。スプリットポイントはサンプル空間を、１つを正常、もう１つを癌とする２つの空間に分割する。スコア０はその関連する観察が正常な空間に入る場合に被験体に割り当てられ、さもなければ、スコア１が割り当てられる。（ｉｉ）全体としては、スコアはｍ個の異なるマーカーからのこれら割り当てられたスコアの合計として被験体に割り当てられる。したがって、そのようなスコアの範囲は０とｍとの間にある。（ｉｉｉ）所与の閾値（ｔ）を用いて所与の被験体に関する病気の状態を予測する。例えば、ｔと等しいか、またはそれよりも小さい全スコアを有する所与の被験体は正常な状態を有すると予測されるが、ｔよりも高いスコアを有する被験体は病気を有すると診断される。

記載されたスコアに基づく分類システムに関連して記載した「スプリットポイント（ｓｐｌｉｔ ｐｏｉｎｔ）」は下記の通り規定してよい：２つの群に分類されたｎ個のサンプルが存在するとする。各マーカーＸに関して、ｘ＿１、ｘ＿２、…、ｘ＿ｎが観察された測定値であるとする。本発明者らは、（ｎ−１）スプリットポイントｙ＿１、ｙ＿２、…、ｙ＿（ｎ−１）（ここで、ｋ＝１、２、…、ｎ−１なのでｙ＿ｋ＝０．５＊（ｘ＿ｋ＋ｘ＿（ｋ＋１））をスクリーニングする。各スプリットポイントｙ＿ｋに関して、第一および第二グループにおけるｙ＿ｋよりもそれぞれ小さいａ＿１およびａ＿２の観察測定値が存在する；そして第一および第二グループにおけるｙ＿ｋよりもそれぞれ大きいｂ＿１およびｂ＿２の観察測定値が存在する。ｙ＿ｋの左と右側が第一および第二集団にそれぞれ割り当てられる場合、ａ＿２およびｂ＿１の誤判別サンプルが存在する。ｙ＿ｋの左側と右側がそれぞれ第二と第一グループに割り当てられる場合、ａ＿１およびｂ＿２の誤判別サンプルが存在する。本発明者らは誤判別サンプルの数を最小化する割り当てを選択する。

（考察）
卵巣癌は、血清腫瘍マーカー等の非侵襲性アプローチを利用した疾患のモニタリングと初期検出を魅力のある考えとする腹腔内非可触性の「比較的無症候性」の疾患である。初期検出のために十分な感度のある単純で、信頼性があり、再現可能で迅速なスクリーニング方法が、卵巣癌の進行の高い危険性のある無症候性女性における前癌状態変化や初期段階の卵巣癌の正確な検出能を向上させるために必要とされる。許容できるためには、初期検出のスクリーニング方法は最低９９．６％の特異性を達成しなければならず、それゆえに、単一の分析物試験はそのように特異的ではないと思われるため、組合された試験法の必要性を達成しなければならないことが示唆されてきた。実際、卵巣癌の希少性を鑑みて、バイオマーカースクリーニング試験が分類の唯一の手段として用いられると、非常に低いレベルの擬陽性分類が、潜在的に卵巣癌患者と間違って分類される多数の女性をもたらすだろう。本発明者らは、分析物の組合せに対する最初の血清スクリーニングとそれに続く経膣超音波および乳房撮影または赤外線胸部画像化が十分に低い擬陽性率を提供して、検出可能な骨盤内腫瘤を有する個人に対するその後の腹腔鏡手術の十分な根拠を示し、診断アッセイの結果の正当性を立証しなければならないと主張する。このアプローチは、ＣＡ１２５と経膣超音波の組合せがかなりの割合の臨床前卵巣癌を検出した研究の結果により支持されている（Ｊａｃｏｂｓ，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ３（４）：３５５−３６６（２００４））。

血清バイオマーカーを同定する１つのアプローチは、健康な／危険性の高い被験体と癌被験体とを正確に区別する可能性を持ったバイオマーカーで、さらに初期のステージＩおよびＩＩ卵巣癌を検出する感度も有するバイオマーカーを同定する高性能マイクロアレイ分析による多血清タンパク質のスクリーニング法に基づいたものであった。マイクロアレイ結果に基づいて、見込みのある一部のバイオマーカーをＥＬＩＳＡによるさらなる分析のために選択した。マイクロアレイデータに基づいて選択されたバイオマーカーのうち４種類がＥＬＩＳＡ分析を用いる初期検出と高レベルの感度／特異性に有用であることが確認された。バイオマーカーの利用性の最初の立証は高い特異性と感度が求められる場合に多くの分析を必要としない。アッセイを実施する技術者の管理下にあるＥＬＩＳＡの品質管理がいったん確立されれば、１５〜２０の正常および患者サンプルの分析に基づいてバイオマーカーを削除することができる。感度／特異性、スプリットポイントおよび組合せ方法を決定するために、統計的技術（例えば、ＳＶＭ、ｋ−ＮＮおよび樹（Ｔｒｅｅ））の応用のために多くのサンプルの分析が必要とされる。各バイオマーカーが組合せアッセイに寄与するだろうという寄与を実証した後、各バイオマーカーのスプリットポイントを定め、２つ以上のマーカーの組合せの利用性を統計的に検討する。スプリットポイントを用いて、各バイオマーカーの状態を二元的な結果（正常レベル 対 異常レベル）として割り当てる。異常と分類されたバイオマーカーの数を用いて個人を、癌を有するか、または有さないと定める；この場合、異常な３または４種類のバイオマーカーを有する個人は卵巣癌を有すると分類されるが、異常な２種類以下のバイオマーカーを有する被験体は癌を有さないと分類される。個々の分析物としてのバイオマーカーは十分な感度と特異性を有さないかもしれなく、むしろ、バイオマーカーの組合せが診断試験のために必要であろう。

（実施例２：乳癌および結腸癌を診断するための、卵巣癌患者で同定されたバイオマーカーの使用）
いくつかのサンプルを分析して、上記で同定されたバイオマーカー（レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩ）が他の種類の癌で異なって発現されるかどうかを決定した。表９に示される結果は、上記で同定されたバイオマーカーが、乳癌や結腸癌等の他の種類の癌を診断するために用いることができることを示す。

表１０に示されるように、癌を有する被験体に対応するサンプルは、所定のスタンダードと比較した場合の２種類以上のバイオマーカーの差異発現によって健康な被験体のサンプルから区別できるだろう。表１０において、イタリック体および太字で示された発現レベルは該バイオマーカーの所定のスタンダードの外側の発現レベルに対応する。

参考文献の援用：本明細書中に引用した全ての刊行物は、本出願が関連する分野をさらに十分に説明するために全体にわたって参考として援用される。

等価物：当業者は、単に日常的な実験を用いて、本明細書中に記載の発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するだろうし、確定することができるだろう。そのような等価物は下記の請求の範囲に含まれることが意図される。

図１は、癌を有する被験体と健康な被験体との間を区別し得るバイオマーカーを同定するために使用されるスクリーニングプロセスの概略的な表示である。 図２は、１６個のサブアレイを有するサンプルタンパク質マイクロアレイスライドの概略的な表示である。サブアレイは、スライド上の１６個のウェルまたは環状分析部位を言及する。アレイは、ウェル内にプリントされた抗体含量を言及する。各マイクロアレイスライドは、１つの型のみのアレイを含む。 図３は、２つの異なるアッセイ（ＲＣＡマイクロアレイイムノアッセイおよびＥＬＩＳＡ）を使用した、卵巣癌を有する被験体中および健康な被験体におけるの４種類のタンパク質（レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩ）の発現の差を示す。 図４は、従来の二進法のデータセット分析に適合する最小二乗法を用いて、２０６の被験体における４種類のタンパク質（レプチン（「１」として同定）、プロラクチン（「２」として同定）、ＯＰＮ（「３」として同定）およびＩＧＦ−ＩＩ（「４」として同定））の発現データを分析した結果を示す。健康な被験体のタンパク質レベルは、黒色三角形（左）で示され、卵巣癌を有する被験体のタンパク質レベルは、灰色逆三角形（右）で示される。 図５は、ペアプロット（ｐａｉｒ ｐｌｏｔ）を用いて、２０６の被験体における４種類のタンパク質（レプチン（「１」として同定）、プロラクチン（「２」として同定）、ＯＰＮ（「３」として同定）およびＩＧＦ−ＩＩ（「４」として同定））の発現データを分析した結果を示す。健康な被験体から得られたデータポイントは黒色三角形で示し、卵巣癌を有する被験体から得られたデータポイントは灰色逆三角形で示す。 図６は、本明細書中に記載されるスコアに基づく分類システムに基づいて、健康な１０６の被験体と卵巣癌を有する１００の被験体とを含む２０６の被験体に割り当てられたスコアを示す。２を超えるか、または２と等しいスコアを有する被験体は卵巣癌と診断され得、一方、１未満か、または１と等しいスコアを有する被験体は、卵巣癌がないと診断され得る。健康な被験体から得られたデータポイントは灰色で示し、卵巣癌を有する被験体から得られたデータポイントは黒色で示す。

Claims (59)

1. 被験体の卵巣癌の診断を助けるための方法であって、該方法は、
   （ａ）被験体からのサンプル中の４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを決定する工程であって、該バイオマーカーのうち４つが、プロラクチン、オステオポンチン（ＯＰＮ）、レプチンおよびインシュリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）である、工程；ならびに
   （ｂ）プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩの該発現レベルを、プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩのそれぞれに対する所定のスタンダードと比較する工程を含み；
   ここで該プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーのそれぞれに対する所定のスタンダードと比較したとき、該サンプル中の該プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーのうちの２つ以上の発現レベルにおける有意差が卵巣癌の診断を助け、そしてここで、該プロラクチンまたはＯＰＮに対する発現レベルにおける有意差は、それぞれプロラクチンまたはＯＰＮに対する該所定のスタンダードと比較したときのプロラクチンまたはＯＰＮの発現レベルにおける増加であり；そして、該レプチンまたはＩＧＦ−ＩＩに対する発現レベルにおける有意差は、それぞれレプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに対する該所定のスタンダードと比較したときのレプチンまたはＩＧＦ−ＩＩの発現レベルにおける減少である、方法。
2. 前記所定のスタンダードが、（ａ）健康な被験体中の前記バイオマーカーの発現レベルまたは（ｂ）同じ被験体からの非癌性組織中の該バイオマーカーの発現レベルに対応する、請求項１に記載の方法。
3. 前記卵巣癌の診断がスコアに基づく分類方法に基づく、請求項１に記載の方法。
4. 前記４つ以上の異なるバイオマーカーの発現レベルを比較する工程を含み；各バイオマーカーが０または１のスコアを割り当てられ、バイオマーカーの発現レベルが所定のスタンダードにおける該バイオマーカーの発現レベルと有意差がない場合、該バイオマーカーには０のスコアが割り当てられ、バイオマーカーの発現が所定のスタンダードにおける該バイオマーカーの発現レベルと有意差がある場合、該バイオマーカーには１のスコアが割り当てられ；前記被験体には該４つ以上マーカーからの割り当てられたスコアの合計に対応する総合スコアが割り当てられ；所与の閾値（ｔ）を用いて、卵巣癌の診断を助ける、請求項３に記載の方法。
5. 前記４つ以上のバイオマーカーに対する所定のスタンダードプロフィールに対して、該４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを比較する工程を含み、該プロフィールの差異が卵巣癌の診断を助ける、請求項１に記載の方法。
6. 前記所定のスタンダードプロフィールが、癌被験体中の前記４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを健康な被験体中の該４つ以上のバイオマーカーの発現レベルと、機械学習技術を用いて比較することにより決定される、請求項５に記載の方法。
7. 前記所定のスタンダードプロフィールが、癌被験体および健康な被験体中の前記４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを、サポートベクターマシン、Ｋ−近傍分類法、または分類樹解析を用いて比較することにより決定される、請求項４に記載の方法。
8. 卵巣癌に対するさらなるバイオマーカーを検出する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
9. 卵巣癌に対する前記さらなるバイオマーカーが、以下：
   ６Ｃｋｉｎｅ、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、Ｅ−セレクチン、上皮成長因子（ＥＧＦ）、エオタキシン−２（Ｅｏｔ−２）、上皮成長因子レセプター１（ＥｒｂＢ１）、フォリスタチン、濾過血液ＣＣケモカイン４（ＨＣＣ４）、ヘルペスウイルスエントリーメディエイター（ＨＶＥＭ）、インシュリン様成長因子結合タンパク質１（ＩＧＦＢＰ−１）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１可溶性レセプターＩＩ（ＩＬ−１ ｓＲＩＩ）、インターロイキン２可溶性レセプターα（ＩＬ−２ ｓＲα）、マクロファージコロニー刺激因子レセプター（Ｍ−ＣＳＦ Ｒ）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症性タンパク質３β（ＭＩＰ３β）、マトリックスメタロプロテアーゼ−８（ＭＭＰ−８）、マトリックスメタロプロテアーゼ７（ＭＭＰ−７）、骨髄系前駆細胞阻害因子１（ＭＰＩＦ−１）、肺活性化調節ケモカイン（ＰＡＲＣ）、血小板由来増殖因子レセプターβ（ＰＤＧＦ Ｒβ）、プロテインＣ、腫瘍壊死因子レセプター１（ＴＮＦ−Ｒ１）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、可溶性血管接着タンパク質−１（ｓＶＡＰ−１）、血管内皮増殖因子レセプター２（ＶＥＧＦ Ｒ２）、ＶＥＧＦレセプター３（ＶＥＧＦ Ｒ３）、ヒト角質層キモトリプシン酵素（ＨＳＣＣＥ）、カリクレイン４、カリクレイン５、カリクレイン６（プロテアーゼＭ）、カリクレイン８、カリクレイン９、カリクレイン１０、癌抗原１２５（ＣＡ１２５）、癌抗原１５−３（ＣＡ１５−３）、癌抗原１９−９（ＣＡ１９−９）、ＯＶＸ１、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、プロスタシン、癌抗原５４−６１（ＣＡ５４−６１）、癌抗原７２（ＣＡ７２）、ＨＭＦＧ２、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、ＬＳＡ、ＮＢ７０Ｋ、ＰＬＡＰ、ＴＡＧ７２、ＴＰＡ、ＵＧＴＦ、ＷＡＰ４ジスルフィドコアドメイン２（ＨＥ４）、マトリックスメタロプロテアーゼ２、テトラネクチン、インヒビン、メソセリン、ＭＵＣ１、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＮＯＴＣＨ３、Ｅ２Ｆ転写因子３（Ｅ２Ｆ３）、ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＲＡＣＧＡＰ１）、血液学的神経学的発現１（ＨＮ１）、アポリポタンパク質Ａ１、ラミニン、クローディン３（ＣＬＤＮ３）、クローディン４、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（ＴＲＯＰ−１／Ｅｐ−ＣＡＭ）、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＲＯＰ−２）、ラジニン１、Ｓ１００Ａ２、ＳＥＲＰＩＮ２（ＰＡＩ−２）、ＣＤ２４、リポカリン２、マトリプターゼ（ＴＡＤＧ−１５）、ストラチフィン、トランスフォーミング増殖因子−βレセプターＩＩＩ（ＴＧＦβ−ＲＩＩＩ）、血小板由来増殖因子レセプターα、ＳＥＭＡＣＡＰ３、ｒａｓ相同遺伝子ファミリーメンバーＩ（ＡＲＨＩ）、トロンボスポンジン２、障害２／卵巣癌中の差次的発現２（Ｄａｂ２／ＤＯＣ２）およびハプトグロビン−αサブユニット
   からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
10. 卵巣癌に対する前記さらなるバイオマーカーがＣＡ１２５である請求項９に記載の方法。
11. 前記４つ以上のバイオマーカーの発現レベルが、該４つ以上のバイオマーカーを検出する試薬を用いて検出される、請求項１に記載の方法。
12. 前記試薬が前記４つ以上のバイオマーカーのうちの１つに特異的な抗体またはそのフラグメントを含む、請求項１１に記載の方法。
13. 前記試薬が検出可能な物質により直接または間接に標識される、請求項１２に記載の方法。
14. 前記４つ以上のバイオマーカーの発現レベルが質量分析を用いて検出される、請求項１に記載の方法。
15. 前記４つ以上のバイオマーカーの発現レベルが、該４つ以上のバイオマーカーをコードする遺伝子のｍＲＮＡ転写レベルを測定することにより検出される、請求項１に記載の方法。
16. 前記サンプルが体液サンプルである、請求項１に記載の方法。
17. 前記体液サンプルが血液または血清である、請求項１６に記載の方法。
18. 前記４つ以上のバイオマーカーの発現レベルが、（ａ）該４つ以上のバイオマーカーにより調節されるポリペプチドの発現レベルを検出するか、（ｂ）該バイオマーカーを調節するポリペプチドの発現レベルを検出するか、または（ｃ）該バイオマーカーの代謝産物の発現レベルを検出することにより検出される、請求項１に記載の方法。
19. 被験体の卵巣癌の進行をモニタリングすることを補助するための方法であって、該方法は；
    （ａ）該被験体からの最初のサンプル中および該被験体からの後のサンプル中の４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを測定する工程であって、該バイオマーカーのうち４つが、プロラクチン、オステオポンチン（ＯＰＮ）、レプチンおよびインシュリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）である、工程；ならびに
    （ｂ）該最初のサンプル中のプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーの発現レベルを、該後のサンプル中のプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーの発現レベルと比較する工程を含み；
    ここで、プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーのうちの２つ以上の発現レベルにおける有意差は、卵巣癌を示し、そして、プロラクチンまたはＯＰＮについての有意差は、それぞれプロラクチンまたはＯＰＮに対する所定のスタンダードと比較したときのプロラクチンまたはＯＰＮの発現レベルにおける増加であり；該レプチンまたはＩＧＦ−ＩＩについての有意差は、それぞれレプチンまたはＩＧＦ−ＩＩに対する所定のスタンダードと比較したときのレプチンまたはＩＧＦ−ＩＩの発現レベルにおける減少であり；そしてここで、該最初のサンプルのものと比較したときの、該後のサンプルにおけるプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーの有意差がある発現レベルの数の増加は、該被験体における卵巣癌の進行を示す、方法。
20. 卵巣癌に対する治療の有効性をモニタリングすることを補助するための方法であって、該方法は、該治療の少なくとも一部を提供する前の被験体からの最初のサンプル中の４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを、該被験体が該治療の少なくとも一部を受けた後に該被験体から得られた後のサンプル中の該４つ以上のバイオマーカーの発現レベルと比較する工程を含み；
    ここで、該バイオマーカーのうち４つが、プロラクチン、オステオポンチン（ＯＰＮ）、レプチンおよびインシュリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）であり；
    ここで、該治療の少なくとも一部を受けた後の該被験体からの該サンプル中のプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩの発現レベルと比較したときの、該治療の少なくとも一部を提供する前の該被験体からの該サンプル中のプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーのうちの２つ以上の発現レベルにおける有意差が卵巣癌の進行を示し、そして、プロラクチンまたはＯＰＮについての有意差は、それぞれプロラクチンまたはＯＰＮに対する所定のスタンダードと比較したときのプロラクチンまたはＯＰＮの発現レベルにおける増加であり；そして、レプチンまたはＩＧＦ−ＩＩについての有意差は、それぞれレプチンまたはＩＧＦ−ＩＩに対する所定のスタンダードと比較したときのレプチンまたはＩＧＦ−ＩＩの発現レベルにおける減少であり；そしてここで、該最初のサンプルにおけるものと比較したときの、該後のサンプルにおけるプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーの有意差がある発現レベルの数の増加は、該被験体における卵巣癌の進行を示し、そして、該最初のサンプルにおけるものと比較したときの、該後のサンプルにおけるプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーの有意差がある発現レベルの数の減少は、該被験体における卵巣癌の治療の有効性を示し、かつ、該治療の有効性をモニタリングすることを助ける、方法。
21. 卵巣癌を診断するためのキットであって、以下：
    （ａ）サンプルを受け取るための容器；
    （ｂ）４つ以上のバイオマーカーを検出するための試薬であって、該４つ以上のマーカーのうち４つは、レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩである、試薬；ならびに
    （ｃ）参照サンプル
    を備える、キット。
22. レプチン、プロラクチン、ＯＰＮおよびＩＧＦ−ＩＩ以外のバイオマーカーを検出するための１つ以上の試薬をさらに備える、請求項２１に記載のキット。
23. 以下：
    ６Ｃｋｉｎｅ、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、Ｅ−セレクチン、上皮成長因子（ＥＧＦ）、エオタキシン−２（Ｅｏｔ−２）、上皮成長因子レセプター１（ＥｒｂＢ１）、フォリスタチン、濾過血液ＣＣケモカイン４（ＨＣＣ４）、ヘルペスウイルスエントリーメディエイター（ＨＶＥＭ）、インシュリン様成長因子結合タンパク質１（ＩＧＦＢＰ−１）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１可溶性レセプターＩＩ（ＩＬ−１ ｓＲＩＩ）、インターロイキン２可溶性レセプターα（ＩＬ−２ ｓＲα）、マクロファージコロニー刺激因子レセプター（Ｍ−ＣＳＦ Ｒ）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症性タンパク質３β（ＭＩＰ３β）、マトリックスメタロプロテアーゼ−８（ＭＭＰ−８）、マトリックスメタロプロテアーゼ７（ＭＭＰ−７）、骨髄系前駆細胞阻害因子１（ＭＰＩＦ−１）、肺活性化調節ケモカイン（ＰＡＲＣ）、血小板由来増殖因子レセプターβ（ＰＤＧＦ Ｒβ）、プロテインＣ、腫瘍壊死因子レセプターＩ（ＴＮＦ−ＲＩ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、可溶性血管接着タンパク質−１（ｓＶＡＰ−１）、血管内皮増殖因子レセプター２（ＶＥＧＦ Ｒ２）、ＶＥＧＦレセプター３（ＶＥＧＦ Ｒ３）、ヒト角質層キモトリプシン酵素（ＨＳＣＣＥ）、カリクレイン４、カリクレイン５、カリクレイン６（プロテアーゼＭ）、カリクレイン８、カリクレイン９、カリクレイン１０、癌抗原１２５（ＣＡ１２５）、癌抗原１５−３（ＣＡ１５−３）、癌抗原１９−９（ＣＡ１９−９）、ＯＶＸ１、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、プロスタシン、癌抗原５４−６１（ＣＡ５４−６１）、癌抗原７２（ＣＡ７２）、ＨＭＦＧ２、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、ＬＳＡ、ＮＢ７０Ｋ、ＰＬＡＰ、ＴＡＧ７２、ＴＰＡ、ＵＧＴＦ、ＷＡＰ４ジスルフィドコアドメイン２（ＨＥ４）、マトリックスメタロプロテアーゼ２、テトラネクチン、インヒビン、メソセリン、ＭＵＣ１、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＮＯＴＣＨ３、Ｅ２Ｆ転写因子３（Ｅ２Ｆ３）、ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＲＡＣＧＡＰ１）、血液学的神経学的発現１（ＨＮ１）、アポリポタンパク質Ａ１、ラミニン、クローディン３（ＣＬＤＮ３）、クローディン４、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（ＴＲＯＰ−１／Ｅｐ−ＣＡＭ）、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＲＯＰ−２）、ラジニン１、Ｓ１００Ａ２、ＳＥＲＰＩＮ２（ＰＡＩ−２）、ＣＤ２４、リポカリン２、マトリプターゼ（ＴＡＤＧ−１５）、ストラチフィン、トランスフォーミング増殖因子−βレセプターＩＩＩ（ＴＧＦ−β−ＲＩＩＩ）、血小板由来増殖因子レセプターα、ＳＥＭＡＣＡＰ３、ｒａｓ相同遺伝子ファミリーメンバーＩ（ＡＲＨＩ）、トロンボスポンジン２、障害２／卵巣癌中の差次的発現２（Ｄａｂ２／ＤＯＣ２）およびハプトグロビン−αサブユニット
    から選択されるバイオマーカーを検出するための１つ以上の試薬をさらに含む、請求項２１に記載のキット。
24. ＭＩＦ、Ｅ−セクレチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ１およびＩＬ−２ｓＲαから選択されるバイオマーカーを検出するための１つ以上の試薬をさらに含む、請求項２１に記載のキット。
25. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに加えた、前記卵巣癌に対するバイオマーカーが、以下：
    ６Ｃｋｉｎｅ、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、Ｅ−セレクチン、上皮成長因子（ＥＧＦ）、エオタキシン−２（Ｅｏｔ−２）、上皮成長因子レセプター１（ＥｒｂＢ１）、フォリスタチン、濾過血液ＣＣケモカイン４（ＨＣＣ４）、ヘルペスウイルスエントリーメディエイター（ＨＶＥＭ）、インシュリン様成長因子結合タンパク質１（ＩＧＦＢＰ−１）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１可溶性レセプターＩＩ（ＩＬ−１ ｓＲＩＩ）、インターロイキン２可溶性レセプターα（ＩＬ−２ ｓＲα）、マクロファージコロニー刺激因子レセプター（Ｍ−ＣＳＦ Ｒ）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症性タンパク質３β（ＭＩＰ３β）、マトリックスメタロプロテアーゼ−８（ＭＭＰ−８）、マトリックスメタロプロテアーゼ７（ＭＭＰ−７）、骨髄系前駆細胞阻害因子１（ＭＰＩＦ−１）、肺活性化調節ケモカイン（ＰＡＲＣ）、血小板由来増殖因子レセプターβ（ＰＤＧＦ Ｒβ）、プロテインＣ、腫瘍壊死因子レセプターＩ（ＴＮＦ−ＲＩ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、可溶性血管接着タンパク質−１（ｓＶＡＰ−１）、血管内皮増殖因子レセプター２（ＶＥＧＦ Ｒ２）、ＶＥＧＦレセプター３（ＶＥＧＦ Ｒ３）、ヒト角質層キモトリプシン酵素（ＨＳＣＣＥ）、カリクレイン４、カリクレイン５、カリクレイン６（プロテアーゼＭ）、カリクレイン８、カリクレイン９、カリクレイン１０、癌抗原１２５（ＣＡ１２５）、癌抗原１５−３（ＣＡ１５−３）、癌抗原１９−９（ＣＡ１９−９）、ＯＶＸ１、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、プロスタシン、癌抗原５４−６１（ＣＡ５４−６１）、癌抗原７２（ＣＡ７２）、ＨＭＦＧ２、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、ＬＳＡ、ＮＢ７０Ｋ、ＰＬＡＰ、ＴＡＧ７２、ＴＰＡ、ＵＧＴＦ、ＷＡＰ４ジスルフィドコアドメイン２（ＨＥ４）、マトリックスメタロプロテアーゼ２、テトラネクチン、インヒビン、メソセリン、ＭＵＣ１、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＮＯＴＣＨ−３、Ｅ２Ｆ転写因子３（Ｅ２Ｆ３）、ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＲＡＣＧＡＰ１）、血液学的神経学的発現１（ＨＮ１）、アポリポタンパク質Ａ１、ラミニン、クローディン３（ＣＬＤＮ３）、クローディン４、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（ＴＲＯＰ−１／Ｅｐ−ＣＡＭ）、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＲＯＰ−２）、ラジニン１、Ｓ１００Ａ２、ＳＥＲＰＩＮ２（ＰＡＩ−２）、ＣＤ２４、リポカリン２、マトリプターゼ（ＴＡＤＧ−１５）、ストラチフィン、トランスフォーミング増殖因子−βレセプターＩＩＩ（ＴＧＦβ−ＲＩＩＩ）、血小板由来増殖因子レセプターα、ＳＥＭＡＣＡＰ３、ｒａｓ相同遺伝子ファミリーメンバーＩ（ＡＲＨＩ）、トロンボスポンジン２、障害２／卵巣癌中の差次的発現２（Ｄａｂ２／ＤＯＣ２）およびハプトグロビン−αサブユニット
    の群から選択される、請求項１９に記載の方法。
26. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＦＧ−ＩＩに加えた卵巣癌に対するバイオマーカーが、ＭＩＦ、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ−１およびＩＬ−２ ｓＲαの群から選択される、請求項９に記載の方法。
27. 前記最初のサンプルおよび前記後のサンプルにおける癌抗原１２５（ＣＡ１２５）の発現を比較する工程をさらに包含する、請求項２０に記載の方法。
28. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに加えた卵巣癌に対するバイオマーカーが、ＭＩＦ、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ１およびＩＬ−２ｓＲαの群から選択される、請求項２０に記載の方法。
29. 癌抗原１２５（ＣＡ１２５）を検出するための１つ以上の試薬をさらに備える、請求項２１に記載のキット。
30. 前記試薬が、前記４つ以上のバイオマーカーのうちの１つに特異的な抗体またはそのフラグメントを含む、請求項２１に記載のキット。
31. 前記抗体またはそのフラグメントが固体支持体に結合される、請求項３０に記載のキット。
32. 前記キットが、検出可能な標識で直接的もしくは間接的に標識された試薬を備える、請求項２１に記載のキット。
33. 前記検出可能な標識を検出するための成分をさらに備える、請求項３２に記載のキット。
34. 前記検出するための成分が酵素または基質である、請求項３３に記載のキット。
35. 前記試薬が、前記４つ以上のバイオマーカーのうちの１つをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡに結合するポリペプチドまたはオリゴヌクレオチドプローブを含む、請求項２１に記載のキット。
36. 前記試薬が、前記４つ以上のバイオマーカーのうちの１つをコードする核酸に対して相補的な核酸を含む、請求項２１に記載のキット。
37. （１）前記４つ以上のバイオマーカーのうちの１つに結合する第１の抗体；そして必要に応じて
    （２）該バイオマーカーまたは該第１の抗体のいずれかに結合する第２の異なる抗体
    をさらに備える、請求項２１に記載のキット。
38. 前記第２の抗体が検出可能な標識に結合体化される、請求項３７に記載のキット。
39. 前記第１の抗体が固体支持体に結合される、請求項３７に記載のキット。
40. 緩衝剤、防腐剤およびタンパク質安定剤から選択される１つ以上の成分をさらに備える、請求項２１に記載のキット。
41. 前記キットの各成分が個別の容器内に封入され、そして、多様な該容器がすべて単一のパッケージ内にある、請求項２１に記載のキット。
42. 前記キットを用いて実施されるアッセイの結果を解釈するための使用説明書をさらに備える、請求項２１に記載のキット。
43. 被験体における卵巣癌の診断を補助する方法であって、該方法は；
    （ａ）被験体からのサンプル中の４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを測定する工程であって、該バイオマーカーのうち４つが、プロラクチン、オステオポンチン（ＯＰＮ）、レプチンおよびインシュリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）である、工程；
    （ｂ）該プロラクチンの発現レベルをプロラクチンのスプリットポイントと比較する工程であって、該被験体に対する該プロラクチンの発現レベルが該プロラクチンのスプリットポイントを下回る場合、健康な組織に対応するスコアに０の値が割り当てられ、該プロラクチンの発現レベルが該プロラクチンのスプリットポイントであるかまたは該プロラクチンのスプリットポイントを上回る場合、癌に対応する１のスコアが割り当てられる、工程；
    （ｃ）該ＯＰＮの発現レベルをＯＰＮのスプリットポイントと比較する工程であって、該被験体に対する該ＯＰＮの発現レベルが該ＯＰＮのスプリットポイントを下回る場合、健康に対応する０のスコアが割り当てられ、該ＯＰＮの発現レベルが該ＯＰＮのスプリットポイントであるかまたは該ＯＰＮのスプリットポイントを上回る場合、癌に対応する１のスコアが割り当てられる、工程；
    （ｄ）該レプチンの発現レベルをレプチンのスプリットポイントと比較する工程であって、該レプチンの発現レベルが該レプチンのスプリットポイントを下回る場合、癌に対応する１のスコアが割り当てられ、該レプチンの発現レベルが該レプチンのスプリットポイントであるかまたは該レプチンのスプリットポイントを上回る場合、健康に対応する０のスコアが割り当てられる、工程；
    （ｅ）該ＩＧＦ−ＩＩの発現レベルをＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントと比較する工程であって、該ＩＧＦ−ＩＩの発現レベルが該ＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントを下回る場合、癌に対応する１のスコアが割り当てられ、該ＩＧＦ−ＩＩの発現レベルが該ＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントであるかまたは該ＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントを上回る場合、健康に対応する０のスコアが割り当てられる、工程；ならびに
    （ｆ）該サンプル中の発現レベルが決定されたプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーに対する、癌に対応するスコアの総数を計算する工程
    を含み、ここで、被験体のスコアの合計が２以上であることは、該卵巣癌の診断を助け、該被験体のスコアの合計が２未満であることは、非癌性の診断を助ける、方法。
44. 癌抗原１２５（ＣＡ１２５）の発現を測定する工程をさらに包含する、請求項４３に記載の方法。
45. 前記方法がさらに、所定のＣＡ１２５スタンダードに対してＣＡ１２５の発現レベルを比較する工程を包含し、該ＣＡ１２５の発現レベルが該所定のＣＡ１２５スタンダードを上回る場合、癌に対応する１のスコアが割り当てられ、該ＣＡ１２５の発現レベルが該所定のＣＡ１２５スタンダードであるかまたは該所定のＣＡ１２５スタンダードを下回る場合、健康に対応する０のスコアが割り当てられる、請求項４４に記載の方法。
46. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに加えた卵巣癌に対するバイオマーカーが、ＭＩＦ、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ１およびＩＬ−２ｓＲαの群から選択される、請求項４３に記載の方法。
47. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに加えた前記卵巣癌に対するバイオマーカーが、以下：
    ６Ｃｋｉｎｅ、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、Ｅ−セレクチン、上皮成長因子（ＥＧＦ）、エオタキシン−２（Ｅｏｔ−２）、上皮成長因子レセプター１（ＥｒｂＢ１）、フォリスタチン、濾過血液ＣＣケモカイン４（ＨＣＣ４）、ヘルペスウイルスエントリーメディエイター（ＨＶＥＭ）、インシュリン様成長因子結合タンパク質１（ＩＧＦＢＰ−１）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１可溶性レセプターＩＩ（ＩＬ−１ ｓＲＩＩ）、インターロイキン２可溶性レセプターα（ＩＬ−２ ｓＲα）、マクロファージコロニー刺激因子レセプター（Ｍ−ＣＳＦ Ｒ）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症性タンパク質３β（ＭＩＰ３β）、マトリックスメタロプロテアーゼ−８（ＭＭＰ−８）、マトリックスメタロプロテアーゼ７（ＭＭＰ−７）、骨髄系前駆細胞阻害因子１（ＭＰＩＦ−１）、肺活性化調節ケモカイン（ＰＡＲＣ）、血小板由来増殖因子レセプターβ（ＰＤＧＦ Ｒβ）、プロテインＣ、腫瘍壊死因子レセプターＩ（ＴＮＦ−ＲＩ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、可溶性血管接着タンパク質−１（ｓＶＡＰ−１）、血管内皮増殖因子レセプター２（ＶＥＧＦ Ｒ２）、ＶＥＧＦレセプター３（ＶＥＧＦ Ｒ３）、ヒト角質層キモトリプシン酵素（ＨＳＣＣＥ）、カリクレイン４、カリクレイン５、カリクレイン６（プロテアーゼＭ）、カリクレイン８、カリクレイン９、カリクレイン１０、癌抗原１２５（ＣＡ１２５）、癌抗原１５−３（ＣＡ１５−３）、癌抗原１９−９（ＣＡ１９−９）、ＯＶＸ１、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、プロスタシン、癌抗原５４−６１（ＣＡ５４−６１）、癌抗原７２（ＣＡ７２）、ＨＭＦＧ２、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、ＬＳＡ、ＮＢ７０Ｋ、ＰＬＡＰ、ＴＡＧ７２、ＴＰＡ、ＵＧＴＦ、ＷＡＰ４ジスルフィドコアドメイン２（ＨＥ４）、マトリックスメタロプロテアーゼ２、テトラネクチン、インヒビン、メソセリン、ＭＵＣ１、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＮＯＴＣＨ３、Ｅ２Ｆ転写因子３（Ｅ２Ｆ３）、ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＲＡＣＧＡＰ１）、血液学的神経学的発現１（ＨＮ１）、アポリポタンパク質Ａ１、ラミニン、クローディン３（ＣＬＤＮ３）、クローディン４、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（ＴＲＯＰ−１／Ｅｐ−ＣＡＭ）、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＲＯＰ−２）、ラジニン１、Ｓ１００Ａ２、ＳＥＲＰＩＮ２（ＰＡＩ−２）、ＣＤ２４、リポカリン２、マトリプターゼ（ＴＡＤＧ−１５）、ストラチフィン、トランスフォーミング増殖因子−βレセプターＩＩＩ（ＴＧＦ−β−ＲＩＩＩ）、血小板由来増殖因子レセプターα、ＳＥＭＡＣＡＰ３、ｒａｓ相同遺伝子ファミリーメンバーＩ（ＡＲＨＩ）、トロンボスポンジン２、障害２／卵巣癌中の差次的発現２（Ｄａｂ２／ＤＯＣ２）およびハプトグロビン−αサブユニット
    の群から選択される、請求項４３に記載の方法。
48. 前記サンプルが体液、細胞または組織サンプルである、請求項４３に記載の方法。
49. 前記体液サンプルが血液または血清である、請求項４８に記載の方法。
50. 前記プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩの所定のスタンダードが、それぞれ、プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントであり、該スプリットポイントの各々が、前記サンプルにおけるそのそれぞれのバイオマーカーについての発現レベルを、健康に対する第１の空間と卵巣癌に対する第２の空間の２つの空間に分割する、請求項４３に記載の方法。
51. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに加えた卵巣癌に対するバイオマーカーが、ＭＩＦ、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ１およびＩＬ−２ｓＲαの群から選択される、請求項４３に記載の方法。
52. 被験体における卵巣癌の進行をモニタリングすることを補助する方法であって、該方法は；
    （ａ）該被験体からの最初のサンプルおよび該被験体からの後のサンプル中の４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを測定する工程であって、該４つ以上のバイオマーカーのうち４つが、プロラクチン、オステオポンチン（ＯＰＮ）、レプチンおよびインシュリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）である、工程；
    （ｂ）各サンプル中の該プロラクチンの発現レベルをプロラクチンのスプリットポイントと比較する工程であって、サンプルに対するプロラクチンの発現レベルが該プロラクチンのスプリットポイントを下回る場合、そのサンプルに対して健康に対応する０のスコアが割り当てられ、サンプルに対するプロラクチンの発現レベルが該プロラクチンのスプリットポイントであるかまたは該プロラクチンのスプリットポイントを上回る場合、そのサンプルに対して癌に対応する１のスコアが割り当てられる、工程；
    （ｃ）サンプル中のＯＰＮの発現レベルをＯＰＮのスプリットポイントと比較する工程であって、いずれかのサンプルに対するＯＰＮの発現レベルが該ＯＰＮのスプリットポイントを下回る場合、そのサンプルに対して健康に対応する０のスコアが割り当てられ、サンプルに対するＯＰＮの発現レベルが該ＯＰＮのスプリットポイントであるかまたは該ＯＰＮのスプリットポイントを上回る場合、そのサンプルに対して癌に対応する１のスコアが割り当てられる、工程；
    （ｄ）サンプル中のレプチンの発現レベルをレプチンのスプリットポイントと比較する工程であって、サンプルに対するレプチンの発現レベルが該レプチンのスプリットポイントを下回る場合、そのサンプルに対して癌に対応する１のスコアが割り当てられ、サンプルに対するレプチンの発現レベルが該レプチンのスプリットポイントであるかまたは該レプチンのスプリットポイントを上回る場合、そのサンプルに対して健康に対応する０のスコアが割り当てられる、工程；
    （ｅ）各サンプル中のＩＧＦ−ＩＩの発現レベルをＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントと比較する工程であって、サンプルに対するＩＧＦ−ＩＩの発現レベルが該ＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントを下回る場合、そのサンプルに対して癌に対応する１のスコアが割り当てられ、サンプルに対するＩＧＦ−ＩＩの発現レベルが該ＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントであるかまたは該ＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントを上回る場合、そのサンプルに対して健康に対応する０のスコアが割り当てられる、工程；
    （ｆ）該サンプル中の発現レベルが決定された、該プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーについて、各サンプルに対する癌に対応するスコアの総数を計算する工程；ならびに
    （ｇ）各サンプルの癌に対応するスコアの総数を比較する工程であって、該被験体における卵巣癌の進行は、癌に対応する該スコアの総数が該後のサンプルにおいて、該最初のサンプルよりも高いかどうかが指標とされる、工程；
    を含む、方法。
53. 前記４つ以上のバイオマーカーが、プロラクチン、ＯＰＮ、レプチン、ＩＧＦ−ＩＩおよび癌抗原１２５（ＣＡ１２５）を含む、請求項５２に記載の方法。
54. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに加えた卵巣癌に対するバイオマーカーが、ＭＩＦ、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ１およびＩＬ−２ｓＲαの群から選択される、請求項５２に記載の方法。
55. 前記プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩの所定のスタンダードが、それぞれ、プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩのスプリットポイントであり、該スプリットポイントの各々が、前記サンプルにおけるそのそれぞれのバイオマーカーについての発現レベルを、健康に対する第１の空間と卵巣癌に対する第２の空間の２つの空間に分割する、請求項５２に記載の方法。
56. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに加えた卵巣癌に対するバイオマーカーが、以下：
    ６Ｃｋｉｎｅ、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、Ｅ−セレクチン、上皮成長因子（ＥＧＦ）、エオタキシン−２（Ｅｏｔ−２）、上皮成長因子レセプター１（ＥｒｂＢ１）、フォリスタチン、濾過血液ＣＣケモカイン４（ＨＣＣ４）、ヘルペスウイルスエントリーメディエイター（ＨＶＥＭ）、インシュリン様成長因子結合タンパク質１（ＩＧＦＢＰ−１）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１可溶性レセプターＩＩ（ＩＬ−１ ｓＲＩＩ）、インターロイキン２可溶性レセプターα（ＩＬ−２ ｓＲα）、マクロファージコロニー刺激因子レセプター（Ｍ−ＣＳＦ Ｒ）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症性タンパク質３β（ＭＩＰ３β）、マトリックスメタロプロテアーゼ−８（ＭＭＰ−８）、マトリックスメタロプロテアーゼ７（ＭＭＰ−７）、骨髄系前駆細胞阻害因子１（ＭＰＩＦ１）、肺活性化調節ケモカイン（ＰＡＲＣ）、血小板由来増殖因子レセプターβ（ＰＤＧＦ Ｒβ）、プロテインＣ、腫瘍壊死因子レセプターＩ（ＴＮＦ−ＲＩ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、可溶性血管接着タンパク質−１（ｓＶＡＰ−１）、血管内皮増殖因子レセプター２（ＶＥＧＦ Ｒ２）、ＶＥＧＦレセプター３（ＶＥＧＦ Ｒ３）、ヒト角質層キモトリプシン酵素（ＨＳＣＣＥ）、カリクレイン４、カリクレイン５、カリクレイン６（プロテアーゼＭ）、カリクレイン８、カリクレイン９、カリクレイン１０、癌抗原１２５（ＣＡ１２５）、癌抗原１５−３（ＣＡ１５−３）、癌抗原１９−９（ＣＡ１９−９）、ＯＶＸ１、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、プロスタシン、癌抗原５４−６１（ＣＡ５４−６１）、癌抗原７２（ＣＡ７２）、ＨＭＦＧ２、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、ＬＳＡ、ＮＢ７０Ｋ、ＰＬＡＰ、ＴＡＧ７２、ＴＰＡ、ＵＧＴＦ、ＷＡＰ４ジスルフィドコアドメイン２（ＨＥ４）、マトリックスメタロプロテアーゼ２、テトラネクチン、インヒビン、メソセリン、ＭＵＣ１、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＮＯＴＣＨ３、Ｅ２Ｆ転写因子３（Ｅ２Ｆ３）、ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＲＡＣＧＡＰ１）、血液学的神経学的発現１（ＨＮ１）、アポリポタンパク質Ａ１、ラミニン、クローディン３（ＣＬＤＮ３）、クローディン４、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１（ＴＲＯＰ−１／Ｅｐ−ＣＡＭ）、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＲＯＰ−２）、ラジニン１、Ｓ１００Ａ２、ＳＥＲＰＩＮ２（ＰＡＩ−２）、ＣＤ２４、リポカリン２、マトリプターゼ（ＴＡＤＧ−１５）、ストラチフィン、トランスフォーミング増殖因子−βレセプターＩＩＩ（ＴＧＦβ−ＲＩＩＩ）、血小板由来増殖因子レセプターα、ＳＥＭＡＣＡＰ３、ｒａｓ相同遺伝子ファミリーメンバーＩ（ＡＲＨＩ）、トロンボスポンジン２、障害２／卵巣癌中の差次的発現２（Ｄａｂ２／ＤＯＣ２）およびハプトグロビン−αサブユニット
    の群から選択される、請求項５２に記載の方法。
57. 前記最初のサンプルおよび前記後のサンプルにおける癌抗原１２５（ＣＡ１２５）の発現を比較する工程をさらに包含する、請求項１９に記載の方法。
58. プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに加えた卵巣癌に対するバイオマーカーが、ＭＩＦ、Ｅ−セレクチン、ＥＧＦ、ＩＬ−１７、ＭＰＩＦ１およびＩＬ−２ｓＲαの群から選択される、請求項１９に記載の方法。
59. 被験体における卵巣癌の進行をモニターすることを助ける方法であって、該方法は：
    該被験体からの最初のサンプルおよび該被験体の後のサンプルにおける４つ以上のバイオマーカーの発現レベルを測定する工程であって、該バイオマーカーのうち４つが、プロラクチン、オステオポンチン（ＯＰＮ）、レプチンおよびインシュリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）である、工程；
    該最初のサンプルにおける該プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩの該発現レベルを、プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩのそれぞれに対する所定のスタンダードと比較し、そして、該後のサンプルにおける該プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩの該発現レベルをプロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩのそれぞれに対する所定のスタンダードと比較する工程；
    を包含し、ここで、該プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーのそれぞれに対する所定のスタンダードと比較したとき、該サンプル中の該プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーのうちの２つ以上の発現レベルにおける有意差が卵巣癌を示し；ここで、プロラクチンまたはＯＰＮに対する有意差は、それぞれプロラクチンまたはＯＰＮに対する該所定のスタンダードと比較したときのプロラクチンまたはＯＰＮの発現レベルにおける増加であり、そしてレプチンまたはＩＧＦ−ＩＩに対する有意差は、それぞれレプチンおよびＩＧＦ−ＩＩに対する該所定のスタンダードと比較したときのレプチンまたはＩＧＦ−ＩＩの発現レベルにおける減少であり；そして該最初のサンプルにおける数と比較したときの、後のサンプルにおける該プロラクチン、ＯＰＮ、レプチンおよびＩＧＦ−ＩＩバイオマーカーの有意差がある発現レベルの数の増加は、該被験体における卵巣癌の進行を示す、方法。

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