CN104829714A - 特异性地阻滞肿瘤抗原的生物活性的抗体 - Google Patents

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Abstract

描述了特异性地结合KAAG1的新的单克隆抗体。在有些实施方案中，所述抗体阻滞KAAG1的生物活性，且可用于某些癌症的组合物中，更具体地，所述癌症是具有KAAG1的细胞表面表达增加的癌症，诸如卵巢癌、肾癌、肺癌、结直肠癌、乳腺癌、脑癌和前列腺癌以及黑素瘤。本发明也涉及表达单克隆抗体和抗原结合片段(诸如人源化的和嵌合的抗体)的细胞。另外，还公开了使用所述抗体和片段检测和治疗癌症的方法。

Description

特异性地阻滞肿瘤抗原的生物活性的抗体
【技术领域】
本发明涉及特异性地结合KAAG1的单克隆抗体及其抗原结合片段和它们用于治疗某些疾病的用途，所述用途包括诊断、预防和治疗与卵巢癌有关的恶性肿瘤。本发明也涉及这些抗体用于诊断、预防和治疗不同的其它癌症类型的用途。
【背景技术】
在妇科恶性肿瘤中，卵巢癌占美国妇女中最高的肿瘤相关死亡率(Jemal等人,2005)。它是美国妇女癌症相关死亡的第四大主要原因(Menon等人,2005)。美国癌症学会(American Cancer Society)估计在2005年共有22,220个新病例，并将16,210例死亡归因于该疾病(Bonome等人,2005)。在过去的30年中，统计数字保持大致相同——大多数出现卵巢癌的妇女将死于该疾病(Chambers和Vanderhyden,2006)。该疾病具有1:70终生危险，且死亡率>60％(Chambers和Vanderhyden,2006)。高死亡率是由于难以早期检测卵巢癌，此时恶性肿瘤已经扩散至卵巢以外。实际上，>80％的患者被诊断为晚期疾病(III期或IV期)(Bonome等人,2005)。这些患者具有不良预后，这反映为<45％的5-年存活率，尽管80％至90％在最初对化疗有反应(Berek等人,2000)。与早些年的20％5-年存活率相比，该增加的成功至少部分地是由于最佳消胀(debulk)肿瘤组织的能力(当肿瘤组织被限制在卵巢中的时候)，这是卵巢癌的重要预后因子(Bristow R.E.,2000；Brown等人,2004)。在诊断出早期疾病(I期)的患者中，5-年存活率范围>90(Chambers和Vanderhyden,2006)。
卵巢癌包含不同的肿瘤组，它们源自卵巢的表面上皮或表面包裹体。它们分成血清的、粘蛋白的、子宫内膜样的、透明细胞和布伦纳(过渡)类型，对应女性生殖道器官的不同上皮类型(Shih和Kurman, 2005)。在它们中，血清肿瘤占诊断出的卵巢癌病例的～60％。每个组织学子类进一步分成3组：良性的、中间的(交界肿瘤或低恶性潜力(LMP))和恶性的，这反映了它们的临床行为(Seidman等人,2002)。LMP占诊断出的血清肿瘤的10％至15％，且是一个难题，因为它们表现出非典型核结构和转移行为，然而它们的侵入性比高阶血清肿瘤明显更低。具有LMP肿瘤的患者的5-年存活率是95％，不同于晚期高阶疾病在相同时段中的<45％存活率(Berek等人,2000)。
现在，卵巢癌的诊断部分地通过患者医学史的常规分析和通过进行体检、超声检查和x-射线检查和血液学筛查来完成。已经为血清生物标志物的早期血液检测报道了2个替代策略。一个方案是，通过质谱法分析血清样品，以找到不明身份的蛋白或蛋白片段，它们检测癌症的有无(Mor等人,2005；Kozak等人,2003)。但是，该策略是昂贵的，且不能广泛地得到。或者，使用抗体微阵列、ELISA或其它类似方案，检测血清中是否存在已知的蛋白/肽。称作CA-125(癌抗原-125)的蛋白生物标志物的血清检验长期以来被广泛地视作卵巢癌的标记物。但是，尽管卵巢癌细胞可能生成过量这样的蛋白分子，一些其它的癌症具有高水平的CA-125，所述癌症包括输卵管癌或子宫内膜癌(子宫的衬里的癌)、60％的胰腺癌患者和20％-25％的其它恶性肿瘤患者。CA-125检验仅返回约50％的I期卵巢癌患者的真实阳性结果，且具有80％的机会返回II、III和IV期卵巢癌患者的真实阳性结果。另外20％的卵巢癌患者没有表现出CA-125浓度的任何增加。另外，升高的CA-125检验可能指示与癌症无关的其它良性活性，诸如月经、妊娠或子宫内膜异位症。结果，该检验对于仍然可治疗的早期疾病的检测而言具有非常有限的临床用途，表现出<10％的阳性预测值(PPV)。即使给CA-125附加超声筛查，PPV仅提高至约20％(Kozak等人,2003)。因而，该检验不是有效的筛查检验。
尽管具有提高的该疾病的病原学知识、侵入性细胞减数手术和现代组合化疗，死亡率仅有微小变化。差结果已经归因于：(1)缺少用于早期疾病检查的适当筛选检验，以及在该阶段仅微弱的症状显现— —经常只有在进展至晚期后才能做出诊断，在此时癌症的腹膜扩散会限制有效的治疗，和(2)经常出现对标准化疗策略的耐受性，这限制了患者的5-年存活率的提高。卵巢癌的初期化疗方案包括卡波铂(伯尔定)和紫杉醇(泰素)的组合。数年的临床试验已经证实该组合在有效手术后是最有效的(在约80％的具有新诊断出的卵巢癌的妇女中减小肿瘤体积，且40％至50％具有完全消退)，但是继续研究来寻找提高它的方法。最近的化疗剂腹部输注来靶向难以达到的细胞与静脉内递送的组合已经增加了有效性。但是，严重的副作用经常导致不完全的疗程。一些其它的化疗剂包括多柔比星、顺铂、环磷酰胺、博来霉素、依托泊苷、长春碱、盐酸拓扑替康、异环磷酰胺、5-氟尿嘧啶和美法仑。更近地，临床试验已经证实，与全身性静脉内化疗相比，顺铂的腹膜内施用会提供生存优势(Cannistra和McGuire,2007)。接受化疗的具有早期疾病的妇女的优良存活率会为开发提高卵巢癌检测的策略的研究工作提供坚固的理论。此外，新的卵巢癌有关的生物标志物的发现，会导致用于卵巢癌的将来治疗的、具有最小副作用的更有效的治疗策略的发展。
尽管在卵巢癌的理解和治疗方面存在这些最近的进步，化疗的应用总是伴有严重的不良反应，这限制了它们的应用。结果，对更特异性的策略(诸如组合抗原组织特异性和单克隆抗体的选择性)的需要，会允许显著减少脱靶相关的(off-target-associated)副作用。单克隆抗体用于治疗卵巢癌的应用正在开始出现，具有日益增多的数目的进行中的临床试验(Oei等人,2008；Nicodemus和berek,2005)。这些试验中的大多数已经检查了与放射性同位素(诸如钇-90)缀合的单克隆抗体的应用，或靶向在其它癌症类型中已经鉴别出的肿瘤抗原的抗体的应用。一个这样的实例是贝伐单抗的应用，它靶向血管内皮生长因子(Burger,2007)。存在非常少的卵巢癌特异性的抗原，它们目前处于作为单克隆抗体的治疗靶标的研究中。一些实例包括称作B7-H4的蛋白(Simon等人,2006)和更近的叶酸受体-α(Ebel等人,2007)的应用，后者最近已经进入II期临床试验。
最初从源自组织相容性白细胞抗原-B7肾癌细胞系的cDNA文库克隆出肾相关抗原1(KAAG1)，作为呈递给细胞毒性T淋巴细胞的抗原肽(Van den Eynde等人,1999；Genebank登记号Q9UBP8)。发现含有KAAG1的基因座编码2个基因，它们在两个方向转录到相反链上。发现有义链编码这样的转录物，其编码称作DCDC2的蛋白。这些作者的表达研究发现，KAAG1反义转录物是肿瘤特异性的，且在正常组织中表现出非常少的表达，而DCDC2有义转录物普遍表达(Van den Eynde等人,1999)。KAAG1转录物在癌症、尤其是卵巢癌、肾癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌和黑素瘤中的表达，公开在公布的专利申请号PCT/CA2007/001134中。Van den Eynde等人也观察了在肾癌、结直肠癌、黑素瘤、肉瘤、白血病、脑肿瘤、甲状腺肿瘤、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、膀胱肿瘤、肺癌和头和颈肿瘤中的RNA表达。最近，通过连锁不平衡研究得到的有力遗传证据发现，VMP/DCDC2/KAAG1基因座与诵读困难有关(Schumacher等人,2006；Cope等人,2005)。这些报告之一指向DCDC2标志物作为诵读困难患者的原因，因为该蛋白在皮质神经元迁移中的功能与经常表现出异常神经元迁移和成熟的这些患者的症状相一致(Schumacher等人,2006)。
【发明内容】
本发明涉及KAAG1在肿瘤细胞中的表达。本发明也涉及特异性的抗-KAAG1抗体和抗原结合片段以及可用于治疗、检测和诊断癌症的试剂盒。所述抗体和抗原结合片段可以更具体地用于治疗、检测和诊断其中肿瘤细胞表达KAAG1的癌症，诸如卵巢癌、皮肤癌、肾癌、结直肠癌、肉瘤、白血病、脑癌、甲状腺癌、乳腺癌、前列腺癌、食道癌、膀胱癌、肺癌以及头和颈癌。
本发明在其一个方面提供了分离的或基本上纯化的抗体或抗原结合片段，它们能特异性地结合肾相关抗原1(在SEQ ID NO.:2中定义的KAAG1)或KAAG1变体。
更具体地，且根据本发明的一个实施方案，所述抗体或抗原结合 片段可以结合位于KAAG1的氨基酸30和氨基酸84之间的结构域。
根据本发明的另一个实施方案，所述抗体或抗原结合片段能结合包含在KAAG1的氨基酸1-35内的表位。
根据本发明的再一个实施方案，所述抗体或抗原结合片段能结合包含在KAAG1的氨基酸36-60内的表位。
根据本发明的再一个实施方案，所述抗体或抗原结合片段能结合包含在KAAG1的氨基酸61-84内的表位。
本发明的抗体或抗原结合片段尤其能特异性地结合分泌型KAAG1,即，其中已经切掉信号肽的KAAG1形式。
本发明的抗体或抗原结合片段尤其能结合KAAG1的胞外区域。 
这样，本发明包括诊断和/或治疗抗体或抗原结合片段，其具有对分泌型KAAG1或KAAG1的胞外区域的特异性。本发明也包括具有与本发明抗体相同的表位特异性的抗体或抗原结合片段。通过测定它是否结合本文所述抗体结合的表位，和/或通过与已知结合所述表位的抗体或抗原结合片段进行竞争试验，可以鉴别候选抗体。
因此，本发明的另一个方面提供了分离的抗体或抗原结合片段，其能与本文所述的抗体或抗原结合片段竞争。
本发明的分离的抗体或抗原结合片段包括能诱导表达KAAG1的肿瘤细胞或表达KAAG1变体的肿瘤细胞的杀死(消除、破坏、裂解)(例如，以ADCC-依赖性的方式)的那些。
本发明的分离的抗体或抗原结合片段也包括特征在于它们的减少表达KAAG1的肿瘤细胞的扩散的能力的那些，以及特征在于它们的减少或损害表达KAAG1的肿瘤的形成的能力的那些。
当KAAG1在表达KAAG1的肿瘤细胞的表面处表达时，所述抗体或抗原结合片段可能是特别有效的，且可以具体地用于靶向特征在于不依赖于锚着生长的表达KAAG1的肿瘤细胞。
本发明涉及具有本文所述特征的单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体(分离的)以及抗原结合片段。还一起包括这样的抗体或抗原结合片段，其包括单克隆抗体、嵌合抗体、人源化 抗体或人抗体之间的轻链和/或重链的置换。
本发明的抗体或抗原结合片段因而可以包含人恒定区的氨基酸和/或人抗体的框架氨基酸。
术语“抗体”是指完整抗体、单克隆抗体或多克隆抗体。术语“抗体”也包括多特异性的抗体，诸如双特异性的抗体。人抗体通常由2个轻链和2个重链组成，每个链包括可变区和恒定区。轻链可变区包含3个侧接框架区的CDR，在本文中鉴定为CDRL1、CDRL2和CDRL3。重链可变区含3个侧接框架区的CDR，在本文中鉴定为CDRH1、CDRH2和CDRH3。
本文使用的术语“抗原结合片段”是指抗体的一个或多个片段，所述片段保留结合抗原(例如，KAAG1、分泌型KAAG1或其变体)的能力。已经证实，抗体的抗原结合功能可以由完整抗体的片段来执行。在术语抗体的“抗原结合片段”中包括的结合片段的实例包括：(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包含2个通过铰链区中的二硫键连接起来的Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)Fv片段，其由抗体的一条臂的VL和VH结构域组成；(v)dAb片段(Ward等人,(1989)Nature 341:544-546)，其由VH结构域组成；和(vi)分离的互补性决定区(CDR),例如，VH CDR3。此外，尽管Fv片段的2个结构域VL和VH由分开的基因编码，使用重组方法，可以通过合成连接物连接它们，所述合成连接物使它们成为单个多肽链，在这个单个多肽链中VL和VH区配对，以形成单价分子(称作单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人(1988)Science 242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。这样的单链抗体也意图包括在术语抗体的“抗原结合片段”内。此外，抗原结合片段包括结合-结构域免疫球蛋白融合蛋白，其包含：(i)与免疫球蛋白铰链区多肽融合的结合结构域多肽(诸如重链可变区、轻链可变区或通过连接肽与轻链可变区融合的重链可变区)，(ii)与铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区，和(iii)与CH2恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。通过用丝 氨酸残基替换一个或多个半胱氨酸残基，可以修饰铰链区，以防止二聚化。在US 2003/0118592和US 2003/0133939中进一步公开了这样的结合-结构域免疫球蛋白融合蛋白。使用本领域技术人员已知的常规技术，得到这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式筛选所述片段的效用。
典型的抗原结合位点包含通过轻链免疫球蛋白和重链免疫球蛋白的配对形成的可变区。抗体可变区的结构是非常一致的，且表现出非常类似的结构。这些可变区通常包含相对同源的框架区(FR)，它们中间夹杂3个称作互补性决定区(CDR)的高变区。抗原结合片段的总结合活性经常由CDR的序列决定。FR经常在CDR的适当三维定位和排列中起作用，以实现最佳的抗原结合。
本发明的抗体和/或抗原结合片段可能源自，例如，小鼠、大鼠或任意其它哺乳动物，或其它来源，诸如通过重组DNA技术。
从在下文中提供的非限制性详述，可以明白本发明的其它范围、适用性和优点。但是，应当理解，尽管指示本发明的示例性实施方案，该详述仅作为实施例给出，并参考附图。
【附图说明】
图1A显示了使用半定量RT-PCR反应进行的表达概况分析，用于测量源自超过20个卵巢肿瘤、良性(低恶性潜力)肿瘤、卵巢癌细胞系和30个正常组织的RNA样品中的KAAG1mRNA表达水平。对照图显示GAPDH表达，GAPDH即用于对比每个RT-PCR反应中的原料量的管家基因。
图1B显示的半定量RT-PCR实验证实了KAAG1mRNA在卵巢癌细胞系中表达，尤其是源自腹水的那些。
图1C显示的简图解释了卵巢癌细胞系形成称作球状体的3D结构的能力。左图显示了在无血清培养基中培养的细胞，而5％血清刺激球状体结构的形成。
图1D显示的半定量RT-PCR实验证实了在卵巢癌细胞系的球状 体形成过程中高度诱导KAAG1mRNA。
图2A显示的简图解释了创伤或抓伤试验，即基于细胞的试验，它是细胞系经预定时间段迁移进裸露区中的能力的测量。携带KAAG1shRNA的TOV-21G细胞表现出填充裸露区的能力下降。
图2B显示了产克隆试验(也称作集落存活试验)的图解。它测量稀释的细胞经几天时段的存活。携带KAAG1shRNA的TOV-21G细胞表现出存活减少。
图3A显示了用考马斯蓝染色的聚丙烯酰胺凝胶，且含有在瞬时转染的293E细胞中产生的、纯化的Fc-KAAG1融合蛋白的样品(10μg)。
图3B显示了含有单个单克隆抗体的96-孔平板之一的ELISA结果，所述单克隆抗体选自含有抗-KAAG1Fab的Omniclonal文库#3。结果表明，48个(用灰色突出显示)Fab非常有效地与KAAG1相互作用。用粗体数字指示的孔含有示例性的单克隆3D3、3G10和3C4。
图4A显示了用考马斯蓝染色的聚丙烯酰胺凝胶，且含有下述样品(10μg)：纯化的Fc-KAAG1融合蛋白(泳道1)，跨氨基酸1-60的KAAG1的截短突变体(泳道2)，和跨氨基酸1-35的KAAG1的另一个截短突变体(泳道3)，它们在瞬时转染的293E细胞中产生。所有蛋白都是Fc融合蛋白。
图4B的线路图解释了KAAG1的截短突变体，产生它用于表位作图研究。
图4C显示的图描述了来自ELISA分析的结果，其对应被Omniclonal文库#3中包含的抗-KAAG1抗体结合的表位。结果表明，大多数单克隆与KAAG1的中央区相互作用，且某些抗体结合KAAG1的氨基端或羧基端。
图5显示的线路图解释了将小鼠Fab转化成IgG1小鼠-人嵌合的mAb所涉及的步骤。
图6显示的图对比了小鼠抗-KAAG1Fab和对应的IgG1嵌合的单克隆抗体对示例性的抗体3D3、3G10和3C4的结合。结果表明， 当转移至完整人IgG1支架时，维持了Fab可变区的相对结合。
图7显示了在有嵌合的IgG1抗-KAAG1单克隆抗体存在下使用TOV-21G和OV-90卵巢癌细胞系的球状体形成实验的描述。松散填充的结构更少侵入性的癌细胞系的指征。结果显示了用示例性的抗-KAAG1抗体3D3、3G10或3C4处理的球状体。
图8A显示了含有从卵巢瘤患者得到的大约70个活组织检查样品的组织微阵列的扫描。用3D3抗-KAAG1抗体印迹样品，并证实，绝大多数卵巢肿瘤表达非常高水平的KAAG1抗原。
图8B是来自组织微阵列实验的更高放大率图片。箭头显示KAAG1在血清卵巢肿瘤细胞的上皮层的顶端表面处的膜定位。
图8C解释了其它免疫组织化学研究，它们证实，KAAG1在所有卵巢癌类型中高度表达。显示的组织型是血清的、粘蛋白的和子宫内膜样的。
图9A、9B和9C总结了使用ClustalW2程序得到的选择的CDRL1、CDRL2或CDRL3序列的比对结果；其中“*”表示该列中的残基在所有比对的序列中是相同的，“:”表示已经观察到保守置换，且“.”表示观察到半-保守置换。使用ClustalW程序(Larkin M.A.,等人,(2007)ClustalW和ClustalX版本2.Bioinformatics 200723(21):2947-2948)，产生共有的CDR。
图10A、10B和10C总结了使用ClustalW2程序得到的选择的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列的比对结果；其中“*”表示该列中的残基在所有比对的序列中是相同的，“:”表示已经观察到保守置换，且“.”表示观察到半-保守置换。使用ClustalW程序(Larkin M.A.,等人,(2007)ClustalW和ClustalX版本2.Bioinformatics 200723(21):2947-2948)，产生共有的CDR。
图11表示每个产生的轻链可变区和在SEQ ID NO:16、20、24或105中鉴别出的代表性的轻链可变区之间的序列对比。使用本文指出的Blast2测序程序，已经测定了序列同一性百分比和序列相似性百分比。
图12表示每个产生的重链可变区和在SEQ ID NO:18、22、26或132中鉴别出的代表性的重链可变区之间的序列对比。使用本文指出的Blast2测序程序，已经测定了序列同一性百分比和序列相似性百分比。
图13，靶向KAAG1的IgG1抗体在体外可以有效地介导ADCC活性。用3D3温育PBMNC(AllCells,LLC,Emoryville,CA)30min，并以1:25的比例，与OVCAR-3或WIL2-S细胞相混合。在37℃温育细胞4h，并通过测量培养基中的LDH水平测定细胞裂解。如下计算细胞的细胞毒性：％细胞毒性＝(实验值–自发的效应值–自发的靶物值)x 100/(最大靶物值–自发的靶物值)。
图14，抗-KAAG1mAb阻止TOV-112D卵巢肿瘤的体内扩散。以200μL的体积，将1x 106个细胞植入SCID小鼠的腹腔。2天后，以25mg/kg qwk的剂量，用PBS或在PBS中稀释的抗体处理。通过腹部触诊检测到肿瘤后，尽可能快地处死小鼠。用肉眼对肿瘤数目评分(B)，且将在图A中的数据表示为肿瘤平均数/小鼠±SE。
图15显示了使用抗-KAAG1抗体在从鳞状细胞癌和黑素瘤分离出的几个切片的人皮肤肿瘤组织微阵列(Pantomics Inc.,Richmond,CA)上进行的免疫组织化学。
图16解释了在有或没有嵌合的3D3抗体存在下的黑素瘤细胞系(A375和SK-MEL5)和肾细胞癌细胞系(A498和786-O)的球状体形成。
图17A显示的图解释了递增浓度的3C4、3D3和3G10抗体向在不渗透细胞的条件下固定的细胞系(OV-90、TOV-21G和SKOV-3)的结合。
图17B的图解释了使用3D3抗体在SKOV-3细胞系上进行的流式细胞术的结果。
图18A的图解释了3D3抗体模型的结构。
图18B的图解释了3C4抗体模型的结构。
图19A的图解释了与嵌合的3D3抗体向重组KAAG1的结合相 比，递增浓度的人源化的3D3抗体的结合。
图19B的表总结了人源化的3D3抗体、嵌合的3D3抗体以及杂交抗体(包括嵌合或人源化抗体的轻链和重链的置换)的动力学参数。
图19C解释了在人源化的3D3抗体、嵌合的3D3抗体存在下，或在缓冲液或对照IgG存在下，SKOV-3卵巢癌细胞的球状体形成。
图20A表示单克隆3D3轻链可变区(SEQ ID NO.:16)和人源化的3D3轻链可变区(SEQ ID NO.:178)的序列比对。人源化的3D3轻链可变区与单克隆3D3轻链可变区具有86％同一性(94％序列相似性)，且它们的3个CDR是100％(用粗体表示)。
图20B表示单克隆3D3重链可变区(SEQ ID NO.:18)和人源化的3D3重链可变区(SEQ ID NO.:179)的序列比对。人源化的3D3重链可变区与单克隆3D3重链可变区具有82％同一性(91％序列相似性)，且它们的3个CDR是100％(用粗体表示)。
图21A表示单克隆3C4轻链可变区(SEQ ID NO.:24)和人源化的3C4轻链可变区(SEQ ID NO.:182)的序列比对。人源化的3C4轻链可变区与单克隆3C4轻链可变区具有85％同一性(93％序列相似性)，且它们的3个CDR是100％(用粗体表示)。
图21B表示单克隆3C4重链可变区(SEQ ID NO.:26)和人源化的3C4重链可变区(SEQ ID NO.:183)的序列比对。人源化的3C4重链可变区与单克隆3C4重链可变区具有86％同一性(93％序列相似性)，且它们的3个CDR是100％(用粗体表示)。
【具体实施方式】
【KAAG1在癌细胞中的表达和生物活性】
本发明涉及靶向在不同的癌症类型、尤其是卵巢癌中发现的肿瘤的抗体的应用。为了把抗体引向肿瘤，必须鉴别在癌细胞的细胞表面处表达的肿瘤特异性抗原。有几种技术可用于鉴别肿瘤特异性抗原，且在公布的专利申请号PCT/CA2007/001134中，描述了用于鉴别卵巢肿瘤中的KAAG1的方法，即称作基于减法转录的mRNA扩增 (Subtractive Transcription-based Amplification of mRNA)(STAR)的创新发现平台。
卵巢癌STAR文库的分析，产生了许多编码分泌型和细胞表面蛋白的基因。它们中的一个称作AB-0447，含有编码84个氨基酸的多肽的开放读码框，所述多肽与SEQ ID NO.:2相对应，由具有SEQ ID NO.:1所示的核苷酸序列的885个碱基对的cDNA编码。对可公开得到的数据库的检索揭示，AB-0447核苷酸序列与称作KAAG1的基因的核苷酸序列相同。生物信息学分析预测为膜-锚定的蛋白，它的功能结构域呈现给胞外隔室。KAAG1最初克隆自肾癌文库，作为细胞表面抗原，即证实它的膜定位的结果。另外，我们的研究证实，该蛋白在它的氨基端被加工，该结果与在氨基酸30和34处或二者之间的功能信号肽的切割相一致。此外，全长cDNA的瞬时表达导致培养基中切割的KAAG1的检测。该最后一个发现指示，当在高水平表达时，该膜-锚定的蛋白可以从细胞脱落。相反，KAAG1的氨基-截短突变体的表达导致蛋白的细胞内保留。目前没有关于它的功能的公开报道，且以前没有记载本发明公开的KAAG1在卵巢癌中过表达。
因此，我们已经研究了KAAG1是否可以用于基于抗体的诊断和治疗。
已经建立了几个基于卵巢癌细胞的模型，诸如TOV-21G、TOV-112D、OV-90和其它模型，它们是本领域技术人员所熟知的。这些细胞是源自具有卵巢肿瘤或腹水液的患者的人卵巢癌细胞系集合的一部分。这些细胞系已经经历彻底分析，包括在微阵列上的全基因表达模式，使得它们成为优良的基于细胞的人卵巢癌模型。生长性质、基因表达模式和对化疗药的应答表明，这些细胞系是体内卵巢瘤行为的恰当代表(等人,2007)。从这些卵巢癌细胞系分离的总RNA的RT-PCR分析表明，KAAG1转录物在源自原发肿瘤的细胞系中弱表达。相反，源自腹水液的细胞系含有高水平的KAAG1表达。在来自腹水液的细胞中增加的KAAG1表达暗示，细胞的环境会影响KAAG1基因的调节。腹水细胞与晚期疾病有关，且该表达模式暗示， KAAG1水平的增加与不依赖于锚着生长有关。根据该后一种暗示，发现KAAG1表达在源自原发肿瘤的细胞系中显著增加(当在3D培养中将这些细胞培养成球状体时)。这些球状体已经被充分表征，且被发现在体内表现出许多与肿瘤有关的性质(Cody等人,2008)。因而，发现KAAG1的表达在模仿进行性肿瘤的模型中显著增加，尤其是在卵巢癌发展过程中。
证实了卵巢癌细胞中的KAAG1表达受到调节，在基于细胞的试验中检查了该基因在卵巢癌细胞行为中的功能。为此，使用RNA干扰(RNAi)来敲低(knock down)内源KAAG1基因在卵巢癌细胞系中的表达，且发现，KAAG1表达的减少导致细胞迁移的显著减少，这通过标准的细胞能动性试验测得，且被创伤愈合(或抓伤)试验证实。这类试验测量细胞填充汇合单层中的裸露区的速率。KAAG1表达的减少导致卵巢癌细胞系存活的减少，这通过产克隆试验(诸如集落存活试验)测得。本领域技术人员可以使用其它方法来评价癌细胞行为(尤其是卵巢癌细胞)对KAAG1的需求。
基于KAAG1在大部分卵巢肿瘤中的表达、它在正常组织中的有限表达、表达水平和恶性增加之间的一致性以及推定的KAAG1在卵巢癌细胞系行为中的生物学作用，选择KAAG1作为治疗靶标，用于开发检测、预防和治疗卵巢癌的抗体。KAAG1在除了卵巢癌以外的癌症中的表达，也引导申请人评价用于其它癌症适应症的治疗或诊断抗体。
因此，提供了多种抗-KAAG1抗体及其抗原结合片段，诸如单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合和人源化抗体(包括人源化的单克隆抗体)、抗体片段、单链抗体、结构域抗体和具有抗原结合区的多肽，它们可用于靶向KAAG1。
【作为抗原的KAAG1和源自KAAG1的表位】
申请人已经意外地发现，KAAG1在几个肿瘤类型中表达，且还在患者的血液和腹水液中发现。该抗原因而可以用于在体内靶向表达该抗原的肿瘤细胞，且在检测试验的开发中，用于在体外或在体内测 量肿瘤相关抗原。在血液中循环的KAAG1抗原缺少信号肽。
本发明因此提供了KAAG1抗原，其可用于产生对KAAG1的循环形式特异性的和/或对肿瘤表达的KAAG1特异性的抗体。所述KAAG1抗原(即，表位)可以包含KAAG1的至少10个氨基酸(且至多84个氨基酸)的片段，且可以特别地结合KAAG1的胞外区域。 
一种示例性抗原是完整的KAAG1蛋白，或与SEQ ID NO.:2或其片段具有至少80％序列同一性的变体形式。
源自KAAG1的另一种示例性抗原是KAAG1的分泌形式或循环形式，其缺少KAAG1的信号肽或胞外区域。该抗原可以更具体地缺少KAAG1的氨基酸1-25、1-26、1-27、1-28、1-29、1-30、1-31、1-32、1-33、1-34、1-35或1-36。
本文所述的抗原或表位可以与载体相融合，所述载体诸如钥孔血蓝蛋白(KHL)、牛血清白蛋白(BSA)、卵白蛋白(OVA)或其它，以便产生抗体和抗原结合片段。
本发明也提供了表位，其包含在SEQ ID NO.:2的氨基酸1-35内、SEQ ID NO.:2的氨基酸36-60内或SEQ ID NO.:2的氨基酸61-84内，以产生本文所述的抗体和抗原结合片段。本发明另外提供了一种组合物，其用于产生针对KAAG1的分泌形式或循环形式或KAAG1的胞外区域的抗体，所述组合物可以包含在SEQ ID NO.:2的氨基酸30-84中含有的KAAG1的表位和载体。所述表位可以具体地包含KAAG1的至少10个氨基酸。
组合物的示例性实施方案是这样的药物组合物，其用于产生针对KAAG1的分泌形式或循环形式或KAAG1的胞外区域的抗体。所述药物组合物可以包含在SEQ ID NO.:2的氨基酸30-84中含有的KAAG1的表位和药学上可接受的载体。
在再一个方面，本发明提供了用于产生针对KAAG1的分泌形式或循环形式的抗体的方法。所述方法可以包括，施用多肽，所述多肽包含在SEQ ID NO.:2的氨基酸30-84中含有的KAAG1的表位，其中所述表位缺少KAAG1信号肽。
或者，所述方法可以包括，施用包含信号肽的表位，并选择仅结合所述蛋白的分泌形式或胞外区域的抗体。
在另一个方面，本发明提供了在SEQ ID NO.:2的氨基酸30-84中含有的KAAG1的表位用于产生抗体的应用，所述抗体针对KAAG1的分泌形式或循环形式。
【结合KAAG1的抗体和抗原结合片段】
关于对目标抗原的特异性，最初从Fab文库分离抗体。表现出最大特征的抗体的轻链可变域或重链可变域的氨基酸序列的对比，允许我们取得在CDR内和在可变区内的共有序列。在SEQ ID NO:74-90中提供了CDR的共有序列。
本文所述的可变区可以与希望物种的恒定区融合，由此允许希望物种的效应细胞识别抗体。所述恒定区可以源自，例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型。与可变区在框架内克隆或合成恒定区，是在本领域技术人员知识范围内，且可以通过例如重组DNA技术来实现。
在本发明的某些实施方案中，结合KAAG1的抗体可以属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型。本发明的更具体的实施方案涉及IgG1亚型的抗体。所述抗体可以是IgG1亚型的人源化抗体，其在介导抗体依赖性的细胞毒性(ADCC)、补体介导的细胞毒性(CMC)中是有生物活性的，或与免疫复合物有关。典型的ADCC包含天然杀伤(NK)细胞的活化，且依赖于NK细胞表面上的Fc受体对抗体包被的细胞的识别。Fc受体识别抗体的Fc结构域(诸如存在于IgG1上)，其结合靶细胞、尤其是表达抗原(诸如KAAG1)的癌细胞的表面。结合IgG的Fc受体后，NK细胞释放细胞因子和细胞毒性颗粒，它们进入靶细胞，并通过触发细胞凋亡来促进细胞死亡。
在某些情况下，具有与抗体3D3基本上相同的轻链和重链可变区的抗-KAAG1抗体会与KAAG1的氨基酸36–60(包括端值)区间的表位相互作用。在其它情况下，具有与抗体3G10基本上相同的轻链和重链可变区的抗-KAAG1抗体会与KAAG1的氨基酸61–84(包括端值)区间的表位相互作用。在另一个情况下，具有与抗体3C4基本 上相同的轻链和重链可变区的抗-KAAG1抗体会与KAAG1的氨基酸1–35(包括端值)区间的表位相互作用。
本发明描述了结合KAAG1的抗体集合。在某些实施方案中，所述抗体可以选自：多克隆抗体、单克隆抗体(诸如嵌合或人源化抗体)、抗体片段(诸如抗原结合片段、单链抗体、结构域抗体)和具有抗原结合区的多肽。
在本发明的一个方面，本发明的分离的抗体或抗原结合片段能诱导表达KAAG1的肿瘤细胞或表达KAAG1变体的肿瘤细胞的杀死(消除、破坏、裂解)(例如，以ADCC-依赖性的方式)。
在本发明的另一个方面，本发明的分离的抗体或抗原结合片段的具体特征在于，它的减少表达KAAG1的肿瘤细胞的扩散的能力。
在本发明的另一个方面，本发明的分离的抗体或抗原结合片段的特征在于，它的减少或损害表达KAAG1的肿瘤的形成的能力。
根据本发明的一个实施方案，当KAAG1在表达KAAG1的肿瘤细胞的表面处表达时，所述抗体或抗原结合片段可以是更特别有效的。
也根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可以具体用于靶向特征在于不依赖于锚着生长的表达KAAG1的肿瘤细胞。
在另一个方面，本发明涉及用于治疗癌症的分离的抗体或抗原结合片段，所述癌症包含表达KAAG1的肿瘤细胞。
在再一个方面,本发明涉及用于检测癌症的分离的抗体或抗原结合片段，所述癌症包含表达KAAG1的肿瘤细胞。
在本发明的一个示例性实施方案中，所述分离的抗体或抗原结合片段可以包含恒定区的氨基酸，所述恒定区可以源自例如人抗体。
在本发明的另一个示例性实施方案中，所述分离的抗体或抗原结合片段可以包含人抗体的框架氨基酸。
不限于本文呈现的示例性实施方案，申请人制备了可用于本文所述目的的具体抗体和抗原结合片段。
本发明因此在一个示例性实施方案中提供了分离的抗体或抗原结合片段，其包含轻链可变域，所述轻链可变域具有：
(a)CDRL1序列，其选自SEQ ID NO.:74和SEQ ID NO.:75；
(b)CDRL2序列，其选自SEQ ID NO.:76、SEQ ID NO.:77和SEQ ID NO.:78，或；
(c)CDRL3序列，其选自SEQ ID NO.:79、SEQ ID NO.:80和SEQ ID NO.:81。
所述分离的抗体或抗原结合片段还可以包含重链可变域，所述重链可变域具有：
(a)CDRH1序列，其包含SEQ ID NO.:82；
(b)CDRH2序列，其选自SEQ ID NO.:83、SEQ ID NO.:84、SEQ ID NO.:85、SEQ ID NO.:86和SEQ ID NO.:87，或；
(c)CDRH3序列，其选自SEQ ID NO.:88、SEQ ID NO.:89和SEQ ID NO.:90。
在一个示例性实施方案中，所述抗体或抗原结合片段可以包含轻链可变区的任意单个CDR或者CDR1、CDR2和/或CDR3的组合。可以更具体地选择CDR3。组合可以包括，例如，CDRL1和CDRL3；CDRL1和CDRL2；CDRL2和CDRL3，和；CDRL1、CDRL2和CDRL3。
在另一个示例性实施方案,所述抗体或抗原结合片段可以包含重链可变区的任意单个CDR或者CDR1、CDR2和/或CDR3的组合。可以更具体地选择CDR3。组合可以包括，例如，CDRH1和CDRH3；CDRH1和CDRH2；CDRH2和CDRH3，和；CDRH1、CDRH2和CDRH3。
根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可以包含CDRL1、CDRL2或CDRL3中的至少2个CDR。
也根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可以包含一个CDRL1、一个CDRL2和一个CDRL3。
进一步根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可以包含:
(a)CDRL1、CDRL2或CDRL3中的至少2个CDR，和；
(b)CDRH1、一个CDRH2或一个CDRH3中的至少2个CDR。
所述抗体或抗原结合片段可以更优选地包含一个CDRL1、一个CDRL2和一个CDRL3。
所述抗体或抗原结合片段还可以更优选地包含一个CDRH1、一个CDRH2和一个CDRH3。
本发明的其它示例性实施方案涉及分离的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变域，所述重链可变域具有：
(a)CDRH1序列，其包含SEQ ID NO.:82；
(b)CDRH2序列，其选自SEQ ID NO.:83、SEQ ID NO.:84、SEQ ID NO.:85、SEQ ID NO.:86和SEQ ID NO.:87，或；
(c)CDRH3序列，其选自SEQ ID NO.:88、SEQ ID NO.:89和SEQ ID NO.:90。
根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可以包含一个CDRH1、一个CDRH2或一个CDRH3。
根据本发明，所述抗体或抗原结合片段还可以包含一个CDRH1、一个CDRH2和一个CDRH3。
当仅可以得到一个轻链可变域或重链可变域时，使用本领域已知的方法(Portolano等人The Journal of Immunology(1993)150:880-887,Clarkson等人,Nature(1991)352:624-628)，通过筛选互补可变域的文库，可以重建抗体或抗原结合片段。
本发明也包括包含可变链的多肽或抗体，所述可变链具有在至少一个本文所述的CDR中的至少一个保守氨基酸置换(相对于最初的CDR)。
本发明也包括包含可变链的多肽或抗体，所述可变链在至少2个CDR中具有至少一个保守氨基酸置换(相对于最初的CDR)。
本发明也包括包含可变链的多肽或抗体，所述可变链在所述3个CDR中具有至少一个保守氨基酸置换(相对于最初的CDR)。
本发明也包括包含可变链的多肽或抗体，所述可变链在至少一个CDR中具有至少2个保守氨基酸置换(相对于最初的CDR)。
本发明也包括包含可变链的多肽或抗体，所述可变链在至少2个 CDR中具有至少2个保守氨基酸置换(相对于最初的CDR)。
本发明也包括包含可变链的多肽或抗体，所述可变链在所述3个CDR中具有至少2个保守氨基酸置换(相对于最初的CDR)。
在另一个方面，本发明涉及多肽、抗体或抗原结合片段，其包含(在单个多肽链上或在分开的多肽链上)本文所述抗体或抗原结合片段之一的轻链可变域的至少一个互补性决定区和重链可变域的至少一个互补性决定区。
本发明在其另一个方面涉及抗-KAAG1抗体，其可以包含(在单个多肽链上或在分开的多肽链上)本文所述的抗体或抗原结合片段的所有6个互补性决定区(CDR)。
本发明的抗体或抗原结合片段可以另外包含额外的氨基酸，所述额外的氨基酸侧接CDR的氨基和/或羧基区域。那些额外的氨基酸可以如表A或表B所示，或可以包括例如保守氨基酸置换。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRL1序列，该序列包含下式或由其组成:
X1aSSX2aSLLX3aX4aX5aX6aX7aX8aX9aX10aLX11a(SEQ ID NO.:74) 
其中X1a可以是碱性氨基酸；
其中X2a可以是碱性氨基酸；
其中X3a可以是H、Y或N；
其中X4a可以是S、T、N或R；
其中X5a可以不存在，或是S或N；
其中X6a可以是D、F或N；
其中X7a可以是G或Q；
其中X8a可以是K、L或N；
其中X9a可以是T或N；
其中X10a可以是芳族氨基酸，且；
其中X11a可以是A、N、E或Y。
在本发明的一个示例性实施方案中，X1a可以是K或R。
在本发明的另一个实施方案中，X2a可以是Q或K。
在本发明的再一个实施方案中，X3a可以是N或H。
在本发明的另一个实施方案中，X10a可以是Y或F。
本发明的更具体的实施方案包括SEQ ID NO.:74的CDRL1，其中:X1a是K；X2a是Q；X3a是N；X3a是H；X4a是S；X4a是T；X5a是S；X5a不存在；X6a是N；X7a是Q；X7a是G；X8a是K；X9a是N；X9a是T；X10a是Y；或X11a是A。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRL1序列，该序列包含下式或由其组成:
KASQDX1bX2bX3bX4bX5bX6b(SEQ ID NO.:75) 
其中X1b可以是疏水氨基酸；
其中X2b可以是G或H；
其中X3b可以是T、N或R；
其中X4b可以是F、Y或A；
其中X5b可以是疏水氨基酸，且；
其中X6b可以是N或A。
在本发明的一个示例性实施方案中，X1b可以是V或I。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X5b可以是V或L。
本发明的更具体的实施方案包括SEQ ID NO.:75的CDRL1，其中X1b是I；X2b是H；X3b是T；X3b是N；X4b是Y；X4b是F；X5b是L或X6b是N。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRL2序列，该序列包含下式或由其组成:
FX1cSTX2cX3cS(SEQ ID NO.:76) 
其中X1c是A或G；
其中X2c是R或T，和；
其中X3c是E、K或A。
在本发明的一个示例性实施方案中，X1c可以是A，且X2c可以是T。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X1c可以是A，且X2c可以 是R。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:76的CDRL2，其中X1c是A；X2c是R或X3c是E。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRL2序列，该序列包含下式或由其组成:
X1dVSX2dX3dX4dS(SEQ ID NO.:77) 
其中X1d可以是L或K；
其中X2d可以是碱性氨基酸；
其中X3d可以是L或R，和；
其中X4d可以是D或F。
在本发明的一个示例性实施方案中，X2d可以是K或N。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:77的CDRL2，其中X1d是L；X2d是K；X3d是L或X4d是D。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRL2序列，该序列包含下式或由其组成:
X1eANRLVX2e(SEQ ID NO.:78)
其中X1e可以是碱性氨基酸，且；
其中X2e可以是D或A。
在本发明的一个示例性实施方案中，X1e可以是R或H。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:78的CDRL2，其中X1e是R或X2e是D。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRL3序列，该序列包含下式或由其组成:
X1fQX2fX3fX4fX5fPLT(SEQ ID NO.:79) 
其中X1f可以是Q或L；
其中X2f可以是芳族氨基酸；
其中X3f可以是D、F或Y；
其中X4f可以是E、A、N或S，和；
其中X5f可以是I、F或T。
在本发明的一个示例性实施方案中，X2f可以是Y或H。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X3f可以是Y或D。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X5f可以是I或T。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:79的CDRL3，其中X1f是Q；X2f是H；X3f是D；X3f是Y；X4f是S；X4f是E；X4f是A；X5f是T，或X5f是I。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRL3序列，该序列包含下式或由其组成:
QQHX1gX2gX3gPLT(SEQ ID NO.:80) 
其中X1g可以是芳族氨基酸；
其中X2g可以是N或S，和；
其中X3g可以是I或T。
在本发明的一个示例性实施方案中，X1g可以是F或Y。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:80的CDRL3，其中X2g是S或X3g是T。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRL3序列，该序列包含下式或由其组成:
X1hQGX2hHX3hPX4hT(SEQ ID NO.:81) 
其中X1h可以是芳族氨基酸；
其中X2h可以是中性的亲水氨基酸；
其中X3h可以是F或V，和；
其中X4h可以是R或L。
在本发明的一个示例性实施方案中，X1h可以是W或F。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X2h可以是S或T。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:81的CDRL3，其中X1h是W；X2h是T；X3h是F，或X4h是R。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH1序列，该序列包含下式或由其组成:
GYX1iFX2iX3iYX4iX5iH(SEQ ID NO.:82) 
其中X1i可以是T、I或K；
其中X2i可以是中性的亲水氨基酸；
其中X3i可以是酸性氨基酸；
其中X4i可以是E、N或D，和；
其中X5i可以是疏水氨基酸。
在本发明的一个示例性实施方案中，X2i可以是T或S。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X3i可以是D或E。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X4i可以是N或E。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X5i可以是M、I或v。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:82的CDRH1，其中X2i是T；X3i是D；X4i是E；X5i是I或X5i是M。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH2序列，该序列包含下式或由其组成:
X1jX2jDPX3jTGX4jTX5j(SEQ ID NO.:83) 
其中X1j可以是V或G；
其中X2j可以是疏水氨基酸；
其中X3j可以是A、G或E；
其中X4j可以是R、G、D、A、S、N或V，且；
其中X5j可以是疏水氨基酸。
在本发明的一个示例性实施方案中，X2j可以是I或L。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X5j可以是A或V。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:83的CDRH2，其中X1j是V；X2j是I；X3j是E；X4j是D或X5j是A。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH2序列，该序列包含下式或由其组成:
VX1kDPX2kTGX3kTA(SEQ ID NO.:84) 
其中X1k可以是疏水氨基酸；
其中X2k可以是A、E或G；
其中X3k可以是R、G、A、S、N V或D。
在本发明的一个示例性实施方案中，X1k可以是L或I。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:84的CDRH2，其中X1k是I；X2k是E，或X3k是D。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH2序列，该序列包含下式或由其组成:
YIX1lX2lX3lGX4lX5lX6l(SEQ ID NO.:85) 
其中X1l可以是S或N；
其中X2l可以是芳族氨基酸；
其中X3l可以是D、E或N；
其中X4l可以是D或H；
其中X5l可以是Y、S或N；
其中X6l可以是D、E或N。
在本发明的一个示例性实施方案中，X3l可以是D或N。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X6l可以是D或N。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:85的CDRH2，其中X2l是F或Y，X3l是N，X4l是D或X6l是N。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH2序列，该序列包含下式或由其组成:
X1mINPYNX2mVTE(SEQ ID NO.:86) 
其中X1m可以是N或Y，且；
其中X2m可以是E、D或N。
在本发明的一个示例性实施方案中，X2m可以是D或N。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:86的CDRH2，其中X1m是N或X2m是D。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH2序列，该序列包含下式或由其组成:
DINPX1nYGX2nX3nT(SEQ ID NO.:87) 
其中X1n可以是N或Y，
其中X2n可以是G或T，和；
其中X3n可以是I或T。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH3序列，该序列包含下式或由其组成:
MX1oX2oX3oDY(SEQ ID NO.:88) 
其中X1o可以是G或S；
其中X2o可以是Y或H，且；
其中X3o可以是A或S。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:88的CDRH3，其中X1o是G；X2o是Y或X3o是S。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH3序列，该序列包含下式或由其组成:
IX1pYAX2pDY(SEQ ID NO.:89)
其中X1p可以是G或S，和；
其中X2p可以不存在，或是M。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:89的CDRH3，其中X1p是S或X2p是M。
根据本发明，所述抗体可以包含CDRH3序列，该序列包含下式或由其组成:
AX1qX2qGLRX3q(SEQ ID NO.:90) 
其中X1q可以是R或W；
其中X2q可以是芳族氨基酸，且；
其中X3q可以是碱性氨基酸。
在本发明的一个示例性实施方案中，X2q可以是W或F。
在本发明的另一个示例性实施方案中，X3q可以是Q或N。
本发明的其它具体实施方案包括SEQ ID NO.:90的CDRH3，其中X1q是R；X2q是W或X3q是N。
本文所述的重链和/或轻链的框架区可以源自表A和B所示框架区中的一个或多个。所述抗体或抗原结合片段因而可以包含本文所述CDR中的一个或多个(例如，选自SEQ ID NO.:74-90的具体的CDR 或共有的CDR)和源自表A和B所示那些中的框架区。在表A和B中，预期的CDR用粗体显示，而框架区则不然。
表2描述了与抗-KAAG1抗体的具体实例的完整轻链和重链免疫球蛋白相对应的核苷酸和氨基酸的序列。
表2–结合KAAG1的轻链和重链免疫球蛋白的完整序列
可结合KAAG1的抗体或抗原结合片段可以包含在表2中列出的任意一个L链和任意一个H链免疫球蛋白。在某些实施方案中，抗体3D3的轻链可以与3D3的重链或3G10的重链相组合，以形成具有KAAG1结合活性的完整抗体。在本发明的一个示例性实施方案中，3D3L链可以与3D3H链相组合，3G10L链可以与3G10H链相组合，或3C4L链可以与3C4H链相组合。另外，抗体或抗原结合片段的一些实例可以由来自表2列出的抗体列表的2个L链和任意2个H链的任意组合组成。
抗体3D3的轻和重免疫球蛋白链的完整核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3和5所示，抗体3D3的轻和重免疫球蛋白链的对应氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4和6所示。因而，在一个示例性实施方案中，结合KAAG1的抗体可以包含在SEQ ID NO.:4中所示的轻链氨基酸和在SEQ ID NO.:6中所示的重链氨基酸序列的组合。在另一个实施方案中，所述抗体可以包含2个相同的包含SEQ ID NO.:4的3D3轻链和2个相同的包含SEQ ID NO.:6的3D3重链。
抗体3G10的轻和重免疫球蛋白链的完整核苷酸序列分别如SEQ ID NO:7和9所示，抗体3G10的轻和重免疫球蛋白链的对应氨基酸序列分别如SEQ ID NO:8和10所示。因而，在一个示例性实施方案中，结合KAAG1的抗体可以包含在SEQ ID NO.:8中所示的轻链氨 基酸和在SEQ ID NO.:10中所示的重链氨基酸序列的组合。在另一个实施方案中，所述抗体可以包含2个相同的包含SEQ ID NO.:8的3G10轻链和2个相同的包含SEQ ID NO.:10的3G10重链。
抗体3C4的轻和重免疫球蛋白链的完整核苷酸序列分别如SEQ ID NO:11和13所示，抗体3C4的轻和重免疫球蛋白链的对应氨基酸序列分别如SEQ ID NO:12和14所示。因而，在一个示例性实施方案中，结合KAAG1的抗体可以包含在SEQ ID NO.:12中所示的轻链氨基酸和在SEQ ID NO.:14中所示的重链氨基酸序列的组合。在另一个实施方案中，所述抗体可以包含2个相同的包含SEQ ID NO.:12的3C4轻链和2个相同的包含SEQ ID NO.:14的3C4重链。
还提供了由轻和/或重免疫球蛋白链的组合形成的其它抗-KAAG1抗体或抗原结合片段的变体，它们可以各自独立地与在表2中列出的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在某些实施方案中，所述抗体变体可以包含至少一个轻链和一个重链。在其它情况下，所述抗体变体可以包含2个相同的轻链和2个相同的重链。根据本发明，变化的区域可以位于恒定区或可变区。也根据本发明，变化的区域可以位于框架区。
本发明也包括这样的抗体，其具有包含表A所示可变区之一的轻链和包含表B所示可变区之一的重链。所述轻链和重链可以包含恒定结构域。本发明也包括表2、表A和表B的轻链和重链的组合。
本发明也提供了含有轻链和重链可变区的抗体或抗原结合片段。另外，某些实施方案包括这些轻链和重链可变区的抗原结合片段、变体和衍生物。
本发明的其它示例性实施方案包括分离的抗体或抗原结合片段，其能特异性地结合SEQ ID NO.:2、SEQ ID NO.:2的胞外部分、或SEQ ID NO.:2的分泌形式或其变体，所述抗体包含:
(a)在SEQ ID NO.:16中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:18中定义的重链可变域，
(b)在SEQ ID NO.:20中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:22 中定义的重链可变域；
(c)在SEQ ID NO.:24中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:26中定义的重链可变域；
(d)在SEQ ID NO.:105中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:132中定义的重链可变域，
(e)在SEQ ID NO.:106中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:133中定义的重链可变域，
(f)在SEQ ID NO.:107中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:134中定义的重链可变域，
(g)在SEQ ID NO.:108中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:154中定义的重链可变域，
(h)在SEQ ID NO.:109中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:153中定义的重链可变域，
(i)在SEQ ID NO.:110中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:135中定义的重链可变域，
(j)在SEQ ID NO.:111中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:136中定义的重链可变域，
(k)在SEQ ID NO.:112中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:149中定义的重链可变域，
(l)在SEQ ID NO.:113中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:137中定义的重链可变域，
(m)在SEQ ID NO.:114中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:140中定义的重链可变域，
(n)在SEQ ID NO.:115中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:141中定义的重链可变域，
(o)在SEQ ID NO.:116中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:142中定义的重链可变域，
(p)在SEQ ID NO.:117中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:139中定义的重链可变域，
(q)在SEQ ID NO.:119中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:143中定义的重链可变域，
(r)在SEQ ID NO.:120中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:152中定义的重链可变域，
(s)在SEQ ID NO.:121中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:146中定义的重链可变域，
(t)在SEQ ID NO.:122中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:138中定义的重链可变域，
(u)在SEQ ID NO.:123中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:150中定义的重链可变域，
(v)在SEQ ID NO.:124中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:144中定义的重链可变域，
(w)在SEQ ID NO.:126中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:145中定义的重链可变域，
(x)在SEQ ID NO.:127中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:157中定义的重链可变域，
(y)在SEQ ID NO.:128中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:155中定义的重链可变域，
(z)在SEQ ID NO.:129中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:156中定义的重链可变域，或；
(aa)在SEQ ID NO.:130中定义的轻链可变域和在SEQ ID NO.:151中定义的重链可变域。
在本文中应当理解，上面提供的具体组合的轻链可变区可以变化为任意其它轻链可变区。类似地，上面提供的具体组合的重链可变区可以变化为任意其它重链可变区。
在表3中公开了在这些轻链和重链可变区中存在的序列的具体实例。
表3–结合KAAG1的轻链和重链可变区的序列
因此，结合KAAG1的抗体和抗原结合片段可以包含相同命名的抗体的或任意组合的一个轻可变区和一个重可变区。例如，在一个示例性实施方案中，抗-KAAG1抗体或片段可以包含3D3轻链可变区(SEQ ID NO.:16)和3D3重链可变区(SEQ ID NO.:18)。在一个替代实施方案中，抗-KAAG1抗体或片段可以包含3D3轻链可变区(SEQ ID NO.:16)和3G10重链可变区(SEQ ID NO.:22)。在另一个实施方案中，所述抗-KAAG1抗体可以包含2个相同的轻链可变区和2个相同的重链区。在另一个实施方案中，所述抗-KAAG1抗体可以包含2个不同的轻链可变区和2个不同的重链区。
还提供了由轻和/或重链可变区的组合形成的其它抗-KAAG1抗体的变体，它们各自与在表3中列出的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。本领域技术人员还认识到，所述抗-KAAG1抗体变体可以包括在表3中列出的轻链和/或重链可变区的氨基酸序列中的保守氨基酸变化、氨基酸置换、缺失或添加。
根据本发明，变化的区域可以位于可变区的框架区。表4–轻链和重链CDR的序列
抗体命名 链类型 CDR SEQ ID NO.: 氨基酸序列
3D3 轻链(L) CDR l1 27 KSSQSLLNSNFQKNFLA
3D3 轻链 CDR l2 28 FASTRES
3D3 轻链 CDR l3 29 QQHYSTPLT
3D3 重链(H) CDR h1 30 GYIFTDYEIH
3D3 重链 CDR h2 31 VIDPETGNTA
 
抗体命名 链类型 CDR SEQ ID NO.: 氨基酸序列
3D3 重链 CDR h3 32 MGYSDY
3G10 轻链 CDR l1 33 RSSQSLLHSNGNTYLE
3G10 轻链 CDR l2 34 KVSNRFS
3G10 轻链 CDR l3 35 FQGSHVPLT
3G10 重链 CDR h1 36 GYTFTDNYMN
3G10 重链 CDR h2 37 DINPYYGTTT
3G10 重链 CDR h3 38 ARDDWFDY
3C4 轻链 CDR l1 39 KASQDIHNFLN
3C4 轻链 CDR l2 40 RANRLVD
3C4 轻链 CDR l3 41 LQYDEIPLT
3C4 重链 CDR h1 42 GFSITSGYGWH
3C4 重链 CDR h2 43 YINYDGHND
3C4 重链 CDR h3 44 ASSYDGLFAY
3z1A02 轻链 CDR l1 158 KSSQSLLHSDGKTYLN
3z1A02 轻链 CDR l2 159 LVSKLDS
3z1A02 轻链 CDR l3 160 WQGTHFPRT
3z1A02 重链 CDR h1 161 GYTFTD YNMH
3z1A02 重链 CDR h2 162 YINPYNDVTE
3z1A02 重链 CDR h3 163 AWFGL RQ
3z1E10 轻链 CDR l1 164 RSSKSLLHSNGN TYLY
3z1E10 轻链 CDR l2 165 RMSNLAS
3z1E10 轻链 CDR l3 166 MQHLEYPYT
3z1E10 重链 CDR h1 167 GDTFTD YYMN
3z1E10 重链 CDR h2 168 DINPNYGGIT
3z1E10 重链 CDR h3 169 QAYYRNS DY
3z1G12L 轻链 CDR l1 170 KASQDVGTAVA
3z1G12L 轻链 CDR l2 171 WTSTRHT
3z1G12L 轻链 CDR l3 172 QQHYSIPLT
3z1G12H 重链 CDR h1 173 GYIFTDYEIH
3z1G12H 重链 CDR h2 174 VIDPETGNTA
3z1G12H 重链 CDR h3 175 MGYSDY
在本发明的某些实施方案中，所述抗-KAAG1抗体或抗原结合片段可以包含表4所示的CDR序列，或与表4的CDR序列具有实质的序列同一性。在一个示例性实施方案中，所述3D3抗-KAAG1抗体可以包含含有分别由SEQ ID NO:27、28和29编码的CDR1、2和3的轻链可变区和/或含有分别由SEQ ID NO:30、31和32编码的CDR1、2和3的重链可变区。在其它实施方案中，所述CDR3区可以足以提供抗原结合。这样，本发明包括包含CDR3l、或CDR3h或者CDR3l和CDR3h二者的多肽。
另外，所述抗-KAAG1抗体或抗原结合片段可以包括在表4中列出的CDR的任意组合。例如，所述抗体或抗原结合片段可以包括轻链CDR3和重链CDR3。应当理解，在抗-KAAG1抗体或抗原结合片段中含有的CDR可以是与在表4中列出的CDR序列具有80％、85％、90％或95％序列同一性的变体CDR。本领域技术人员还认识到，所述变体可以包括在表4中列出的CDR序列的保守氨基酸变化、氨基酸置换、缺失或添加。
本发明的其它示例性实施方案包括分离的抗体或抗原结合片段，其能特异性地结合SEQ ID NO.:2、SEQ ID NO.:2的胞外部分、或SEQ ID NO.:2的分泌形式或其变体，所述抗体包含:
(a)在SEQ ID NO.:16中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:18中定义的重链可变域的3CDR，
(b)在SEQ ID NO.:20中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:22中定义的重链可变域的3CDR；
(c)在SEQ ID NO.:24中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:26中定义的重链可变域的3CDR；
(d)在SEQ ID NO.:105中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:132中定义的重链可变域的3CDR，
(e)在SEQ ID NO.:106中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:133中定义的重链可变域的3CDR，
(f)在SEQ ID NO.:107中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:134中定义的重链可变域的3CDR，
(g)在SEQ ID NO.:108中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:154中定义的重链可变域的3CDR，
(h)在SEQ ID NO.:109中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:153中定义的重链可变域的3CDR，
(i)在SEQ ID NO.:110中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:135中定义的重链可变域的3CDR，
(j)在SEQ ID NO.:111中定义的轻链可变域的3CDR和/或在 SEQ ID NO.:136中定义的重链可变域的3CDR，
(k)在SEQ ID NO.:112中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:149中定义的重链可变域的3CDR，
(l)在SEQ ID NO.:113中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:137中定义的重链可变域的3CDR，
(m)在SEQ ID NO.:114中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:140中定义的重链可变域的3CDR，
(n)在SEQ ID NO.:115中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:141中定义的重链可变域的3CDR，
(o)在SEQ ID NO.:116中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:142中定义的重链可变域的3CDR，
(p)在SEQ ID NO.:117中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:139中定义的重链可变域的3CDR，
(q)在SEQ ID NO.:119中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:143中定义的重链可变域的3CDR，
(r)在SEQ ID NO.:120中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:152中定义的重链可变域的3CDR，
(s)在SEQ ID NO.:121中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:146中定义的重链可变域的3CDR，
(t)在SEQ ID NO.:122中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:138中定义的重链可变域的3CDR，
(u)在SEQ ID NO.:123中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:150中定义的重链可变域的3CDR，
(v)在SEQ ID NO.:124中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:144中定义的重链可变域的3CDR，
(w)在SEQ ID NO.:126中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:145中定义的重链可变域的3CDR，
(x)在SEQ ID NO.:127中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:157中定义的重链可变域的3CDR，
(y)在SEQ ID NO.:128中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:155中定义的重链可变域的3CDR，
(z)在SEQ ID NO.:129中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:156中定义的重链可变域的3CDR，或；
(aa)在SEQ ID NO.:130中定义的轻链可变域的3CDR和/或在SEQ ID NO.:151中定义的重链可变域的3CDR。
另外，上面提供的具体组合的轻链可变区可以变化为本文所述的任意其它轻链可变区。类似地，上面提供的具体组合的重链可变区可以变化为本文所述的任意其它重链可变区。
【变体抗体和抗原结合片段】
本发明也包括本文所述的抗体或抗原结合片段的变体。包括的变体抗体或抗原结合片段是具有在氨基酸序列中的变化的那些。例如，包括的变体抗体或抗原结合片段是具有至少一个变体CDR(2、3、4、5或6个变体CDR或甚至12个变体CDR)、变体轻链可变域、变体重链可变域、变体轻链和/或变体重链的那些。本发明包括的变体抗体或抗原结合片段是相对于起始抗体或抗原结合片段具有例如类似的或提高的结合亲和力的那些。
本文使用的术语“变体”适用于本文所述的任意序列，且包括例如变体CDR(CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和/或CDRH3)、变体轻链可变域、变体重链可变域、变体轻链、变体重链、变体抗体、变体抗原结合片段和KAAG1变体。
本发明包括的变体抗体或抗原结合片段是可以包含插入、缺失或氨基酸置换(保守的或非保守的)的那些。这些变体可以在它的氨基酸序列中去除至少一个氨基酸残基且在该位置插入不同的残基。
置换诱变最感兴趣的位点包括高变区(CDR)，但是也预见到在在框架区中或甚至在恒定区中的修饰。通过将来自下面列出的组(组1-6)之一的氨基酸(属于CDR、可变链、抗体等)交换为相同组中的另一个氨基酸，可以做出保守置换。
在表1A的“优选置换”标题下，显示了保守置换的其它示例性实 施方案。如果这样的置换导致不希望的性质，则可以引入更重要的变化并筛选产物，所述更重要的变化为在表1A中命名的“示例性置换”或如下面关于氨基酸类别进一步所述的。
本领域已知，变体可以通过置换诱变产生，且保留本发明的多肽的生物活性。这些变体在氨基酸序列中去除至少一个氨基酸残基且在该位置插入不同的残基。例如，置换诱变的一个感兴趣的位点可以包括这样的位点，其中从不同物种得到的特定残基是相同的。在表1A中显示了鉴别为“保守置换”的置换实例。如果这样的置换导致不希望的变化，则引入其它类型的置换并筛选产物，所述其它类型的置换为在表1A中命名的“示例性置换”或如本文关于氨基酸类别进一步所述的。
通过选择它们的下述作用明显不同的置换，实现功能或免疫学同一性的重要修饰：维持(a)置换区域中多肽主链的结构，例如，作为折叠或螺旋构象；(b)在靶部位的分子的电荷或疏水性；或(c)侧链的体积。基于共同的侧链性质，将天然存在的残基分成组：
(组1)疏水的:正亮氨酸、蛋氨酸(Met)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)
(组2)中性的亲水的:半胱氨酸(Cys)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)
(组3)酸性的:门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)
(组4)碱性的:天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、组氨酸(His)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)
(组5)影响链方向的残基:甘氨酸(Gly)、脯氨酸(Pro)；和
(组6)芳族的:色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)
非保守置换会实现这些类别之一中的成员替换为另一个成员。
表1A.氨基酸置换
起始残基 示例性置换 保守置换
Ala(A) Val、Leu、Ile Val
Arg(R) Lys、Gln、Asn Lys
Asn(N) Gln、His、Lys、Arg、Asp Gln
Asp(D) Glu、Asn Glu
Cys(C) Ser、Ala Ser
Gln(Q) Asn；Glu Asn
 
起始残基 示例性置换 保守置换
Glu(E) Asp、Gln Asp
Gly(G) Ala Ala
His(H) Asn、Gln、Lys、Arg、 Arg
Ile(I) Leu、Val、Met、Ala、Phe、正亮氨酸 Leu
Leu(L) 正亮氨酸、Ile、Val、Met、Ala、Phe Ile
Lys(K) Arg、Gln、Asn Arg
Met(M) Leu、Phe、Ile Leu
Phe(F) Leu、Val、Ile、Ala、Tyr Tyr
Pro(P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Ser Ser
Trp(W) Tyr、Phe Tyr
Tyr(Y) Trp、Phe、Thr、Ser Phe
Val(V) Ile、Leu、Met、Phe、Ala、正亮氨酸 Leu
变体抗体或抗原结合片段的氨基酸序列中的变化可以包括氨基酸添加、缺失、插入、置换等，一个或多个氨基酸的主链或侧链的一个或多个修饰，或基团或另一个分子向一个或多个氨基酸(侧链或主链)的添加。
相对于起始抗体或抗原结合片段氨基酸序列，变体抗体或抗原结合片段可以在它的氨基酸序列中具有实质序列相似性和/或序列同一性。2个序列之间的相似性程度是基于同一性(相同的氨基酸)百分比和保守置换百分比。
通常，本文已经使用Blast2测序程序(Tatiana A.Tatusova,Thomas L.Madden(1999),“Blast 2sequences-a new tool for comparing protein and nucleotide sequences”,FEMS Microbiol Lett.174:247-250)测定了可变链之间的相似性和同一性程度，使用缺省设置，即，blastp程序,BLOSUM62矩阵(开放间隙11和延伸间隙罚分1；gapx减少50,预期10.0,字大小3)和活化的过滤器。
同一性百分比因此是相对于起始肽相同的氨基酸和可以占据相同或类似位置的氨基酸的指征。
相似性百分比是相对于起始肽在相同或类似位置相同的氨基酸和经过保守氨基酸置换替换的那些氨基酸的指征。
本发明的变体因此包括与起始序列或起始序列的一部分具有至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、 88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的那些。
变体的示例性实施方案是与本文所述序列具有至少81％序列同一性和与起始序列或起始序列的一部分具有81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的那些。
变体的其它示例性实施方案是与本文所述序列具有至少82％序列同一性和与起始序列或起始序列的一部分具有82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的那些。
变体的其它示例性实施方案是与本文所述序列具有至少85％序列同一性和与起始序列或起始序列的一部分具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的那些。
变体的其它示例性实施方案是与本文所述序列具有至少90％序列同一性和与起始序列或起始序列的一部分具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的那些。
变体的其它示例性实施方案是与本文所述序列具有至少95％序列同一性和与起始序列或起始序列的一部分具有95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的那些。
变体的其它示例性实施方案是与本文所述序列具有至少97％序列同一性和与起始序列或起始序列的一部分具有97％、98％、99％或100％序列相似性的那些。
为了简洁目的，申请人在本文中提供了表1B，它解释了本发明包括的单个变体的示例性实施方案，且包含指定的序列同一性百分比和序列相似性百分比。每个“X”应当理解为限定给定的变体。
本发明包括与本文所述序列具有至少80％同一性的CDR、轻链可变域、重链可变域、轻链、重链、抗体和/或抗原结合片段。
本发明的抗体或抗原结合片段的示例性实施方案是包含轻链可变域的那些，所述轻链可变域包含选自下述的序列：与SEQ ID NO.:16具有至少70％、75％、80％同一性的序列，与SEQ ID NO.:20具有至少70％、75％、80％同一性的序列，与SEQ ID NO.:24具有至少70％、75％、80％同一性的序列，与SEQ ID NO.:105具有至少70％、75％、80％同一性的序列，与SEQ ID NO.:109具有至少70％、75％、80％同一性的序列和与SEQ ID NO.:126具有至少70％、75％、80％同一性的序列。
这些轻链可变域可以包含与SEQ ID NO.:27具有至少80％同一性的CDRL1序列，与SEQ ID NO.:28具有至少80％同一性的CDRL2序列，和与SEQ ID NO.:29具有至少80％同一性的CDRL3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:27具有至少90％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:27具有100％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含与SEQ ID NO.:28具有至少90％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:28具有100％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:29具有至少90％同一性的CDRL3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:29具有100％同一性的CDRL3序列。
上面列出的轻链可变域可以包含与SEQ ID NO.:33具有至少80％同一性的CDRL1序列，与SEQ ID NO.:34具有至少80％同一性的CDRL2序列，和与SEQ ID NO.:35具有至少80％同一性的CDRL3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:33具有至少90％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:33具有100％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:34具有至少90％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:34具有100％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:35具有至少90％同一性的CDRL3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:35具有100％同一性的CDRL3序列。
上面列出的轻链可变域可以包含与SEQ ID NO.:39具有至少80％同一性的CDRL1序列，与SEQ ID NO.:40具有至少80％同一性的CDRL2序列，和与SEQ ID NO.:41具有至少80％同一性的CDRL3 序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:39具有至少90％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:39具有100％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:40具有至少90％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:40具有100％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:41具有至少90％同一性的CDRL3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:41具有100％同一性的CDRL3序列。
上面列出的轻链可变域可以包含与SEQ ID NO.:158具有至少80％同一性的CDRL1序列，与SEQ ID NO.:159具有至少80％同一性的CDRL2序列，和与SEQ ID NO.:160具有至少80％同一性的CDRL3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:158具有至少90％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:158具有100％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:159具有至少90％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:159具有100％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:160具有至少90％同一性的CDRL3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:160具有100％同一性的CDRL3序列。
上面列出的轻链可变域可以包含与SEQ ID NO.:164具有至少80％同一性的CDRL1序列，与SEQ ID NO.:165具有至少80％同一性的CDRL2序列，和与SEQ ID NO.:166具有至少80％同一性的CDRL3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:164具有至少90％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:164具有100％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:165具有至少90％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:165具有100％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:166具有至少90％同一性的CDRL3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:166具有100％同一性的CDRL3序列。
上面列出的轻链可变域可以包含与SEQ ID NO.:170具有至少80％同一性的CDRL1序列，与SEQ ID NO.:171具有至少80％同一性的CDRL2序列，和与SEQ ID NO.:172具有至少80％同一性的CDRL3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:170具有至少90％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:170具有100％同一性的CDRL1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:171具有至少90％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:171具有100％同一性的CDRL2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以 包含可以与SEQ ID NO.:172具有至少90％同一性的CDRL3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:172具有100％同一性的CDRL3序列。
变体抗体轻链可变区的一个示例性实施方案包括这样的轻链可变区，其具有与SEQ ID NO.:16的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:16的框架区的至多22个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。在SEQ ID NO.:178中提供了SEQ ID NO.:16变体。
变体抗体轻链可变区的一个示例性实施方案包括这样的轻链可变区，其具有与SEQ ID NO.:20的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:20的框架区的至多22个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。
变体抗体轻链可变区的一个示例性实施方案包括这样的轻链可变区，其具有与SEQ ID NO.:24的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:24的框架区的至多21个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。在SEQ ID NO.:182中提供了SEQ ID NO.:24变体。
变体抗体轻链可变区的一个示例性实施方案包括这样的轻链可变区，其具有与SEQ ID NO.:105的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:105的框架区的至多22个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。
变体抗体轻链可变区的一个示例性实施方案包括这样的轻链可变区，其具有与SEQ ID NO.:109的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:109的框架区的至多22个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。
变体抗体轻链可变区的一个示例性实施方案包括这样的轻链可变区，其具有与SEQ ID NO.:126的CDR氨基酸序列具有100％同一性 的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:126的框架区的至多21个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。
在某些情况下，所述变体抗体轻链可变区可以包含氨基酸缺失或添加(与氨基酸置换相组合，或不组合)。经常可以耐受1、2、3、4或5个氨基酸缺失或添加。
在一个示例性实施方案中，所述抗体或抗原结合片段可以包含重链可变域，所述重链可变域包含选自下述的序列：与SEQ ID NO.:18具有至少80％同一性的序列，与SEQ ID NO.:22具有至少70％、75％、80％同一性的序列，与SEQ ID NO.:26具有至少70％、75％、80％同一性的序列，与SEQ ID NO.:132具有至少70％、75％、80％同一性的序列，与SEQ ID NO.:145具有至少70％、75％、80％同一性的序列和与SEQ ID NO.:153具有至少70％、75％、80％同一性的序列。
这些重链可变域可以包含与SEQ ID NO.:30具有至少80％同一性的CDRH1序列，与SEQ ID NO.:31具有至少80％同一性的CDRH2序列，和与SEQ ID NO.:32具有至少80％同一性的CDRH3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:30具有至少90％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:30具有100％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:31具有至少90％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:31具有100％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:32具有至少90％同一性的CDRH3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:32具有100％同一性的CDRH3序列。
上面列出的重链可变域可以包含与SEQ ID NO.:36具有至少80％ 同一性的CDRH1序列，与SEQ ID NO.:37具有至少80％同一性的CDRH2序列，和与SEQ ID NO.:38具有至少80％同一性的CDRH3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:36具有至少90％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:36具有100％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:37具有至少90％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:37具有100％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:38具有至少90％同一性的CDRH3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:38具有100％同一性的CDRH3序列。
上面列出的重链可变域可以包含与SEQ ID NO.:42具有至少80％同一性的CDRH1序列，与SEQ ID NO.:43具有至少80％同一性的CDRH2序列，和与SEQ ID NO.:44具有至少80％同一性的CDRH3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:42具有至少90％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:42具有100％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:43具有至少90％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:43具有100％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:44具有至少90％同一性的CDRH3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:44具有100％同一性的CDRH3序列。
上面列出的重链可变域可以包含与SEQ ID NO.:161具有至少80％同一性的CDRH1序列，与SEQ ID NO.:162具有至少80％同一性的CDRH2序列，和与SEQ ID NO.:163具有至少80％同一性的CDRH3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:161具有至少90％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:161具有100％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:162具有至少90％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:162具有100％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:163具有至少90％同一性的CDRH3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:163具有100％同一性的CDRH3序列。
上面列出的重链可变域可以包含与SEQ ID NO.:167具有至少80％同一性的CDRH1序列，与SEQ ID NO.:168具有至少80％同一性的CDRH2序列，和与SEQ ID NO.:169具有至少80％同一性的CDRH3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:166具有至少90％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:166具有100％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:168具有至少90％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以 包含可以与SEQ ID NO.:168具有100％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:169具有至少90％同一性的CDRH3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:169具有100％同一性的CDRH3序列。
上面列出的重链可变域可以包含与SEQ ID NO.:173具有至少80％同一性的CDRH1序列，与SEQ ID NO.:174具有至少80％同一性的CDRH2序列，和与SEQ ID NO.:175具有至少80％同一性的CDRH3序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:173具有至少90％同一性的CDRH1序列。
在本发明的一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:173具有100％同一性的CDRH1序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:174具有至少90％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:174具有100％同一性的CDRH2序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:175具有至少90％同一性的CDRH3序列。
在本发明的另一个示例性实施方案中，本文提供的任意抗体可以包含可以与SEQ ID NO.:175具有100％同一性的CDRH3序列。
变体抗体重链可变区的一个示例性实施方案包括这样的重链可变区，其具有与SEQ ID NO.:18的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:18的框架区的至多22个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。在SEQ ID NO.:179中提供了SEQ ID NO.:18变体。
变体抗体重链可变区的一个示例性实施方案包括这样的重链可变区，其具有与SEQ ID NO.:22的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:22的框 架区的至多23个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。
变体抗体重链可变区的一个示例性实施方案包括这样的重链可变区，其具有与SEQ ID NO.:26的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:26的框架区的至多23个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。在SEQ ID NO.:183中提供了SEQ ID NO.:26变体。
变体抗体重链可变区的一个示例性实施方案包括这样的重链可变区，其具有与SEQ ID NO.:132的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:132的框架区的至多23个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。
变体抗体重链可变区的一个示例性实施方案包括这样的重链可变区，其具有与SEQ ID NO.:153的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:153的框架区的至多23个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。
变体抗体重链可变区的一个示例性实施方案包括这样的重链可变区，其具有与SEQ ID NO.:145的CDR氨基酸序列具有100％同一性的CDR氨基酸序列，且在它的框架区内具有相对于SEQ ID NO.:145的框架区的至多22个氨基酸修饰(例如，保守的或非保守的氨基酸置换)。
在某些情况下，所述变体抗体重链可变区可以包含氨基酸缺失或添加(与氨基酸置换相组合，或不组合)。经常可以耐受1、2、3、4或5个氨基酸缺失或添加。
【在细胞中产生抗体】
通过本领域技术人员熟悉的多种方法，诸如杂交瘤方法或通过重组DNA方法，可以制备本文公开的抗-KAAG1抗体。
在本发明的一个示例性实施方案中，通过常规的杂交瘤技术，可以产生所述抗-KAAG1抗体，其中用抗原免疫小鼠，分离脾细胞，并 与缺少HGPRT表达的骨髓瘤细胞融合，并通过含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶(HAT)的培养基选择杂交细胞。
在本发明的另一个示例性实施方案中，通过重组DNA方法，可以产生所述抗-KAAG1抗体。
为了表达抗-KAAG1抗体，可以将能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列或任意其它序列插入表达载体，即，含有插入的编码序列在一个特定宿主中的转录和翻译控制的元件的载体。这些元件可以包括调节序列，诸如增强子、组成型和诱导型启动子以及5'和3'非翻译区。本领域技术人员众所周知的方法可以用于构建这样的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。
本领域技术人员已知的多种表达载体/宿主细胞系统可以用于表达源自能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列的多肽或RNA。它们包括、但不限于：微生物，诸如用重组噬菌体、质粒或粘粒DNA表达载体转化的细菌；用酵母表达载体转化的酵母；用杆状病毒载体感染的昆虫细胞系统；用病毒或细菌表达载体转化的植物细胞系统；或动物细胞系统。为了在哺乳动物系统中长期产生重组蛋白，可以实现在细胞系中的稳定表达。例如，使用可能含有病毒复制起点和/或内源表达元件和在相同或不同载体上的选择性或可见标志物基因的表达载体，可以将能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列转化进细胞系中。本发明不受采用的载体或宿主细胞的限制。在本发明的某些实施方案中，所述能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列可以各自连接进单独的表达载体中，并分别表达每条链。在另一个实施方案中，可以将能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的轻链和重链连接进单个表达载体中，并同时表达。
或者，分别使用体外转录系统或偶联的体外转录/翻译系统，可以从包含能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列的载体表达RNA和/或多肽。
一般而言，通过本领域技术人员已知的多种规程，可以鉴别出含有能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列和/或表达由能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列编码的多肽或其一部分的宿主细胞。这些规程包括、但不限于：DNA/DNA或DNA/RNA杂交、PCR扩增和蛋白生物测定或免疫测定技术，包括基于膜、溶液或芯片的检测和/或定量核酸或氨基酸序列的技术。使用特定的多克隆或单克隆抗体来检测和测量多肽表达的免疫学方法是本领域已知的。这样的技术的实例包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和荧光活化的细胞筛选(FACS)。本领域技术人员可以容易地使这些方法适应本发明。
因而可以在从细胞培养物转录对应的RNA(mRNA、siRNA、shRNA等)和/或表达多肽的条件下，培养包含能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列的宿主细胞。由细胞产生的多肽可以是分泌型，或可以保留在细胞内，这取决于使用的序列和/或载体。在一个示例性实施方案中，可以将含有能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列的表达载体设计成含有信号序列，该信号序列指导多肽穿过原核或真核细胞膜的分泌。
由于遗传密码的固有简并性，可以产生和使用编码相同的、基本上相同的或功能上等效的氨基酸序列的其它DNA序列，例如，以表达由能编码任意一个本文所述的轻和重免疫球蛋白链的核苷酸序列编码的多肽。使用本领域普遍已知的方法，可以工程化本发明的核苷酸序列，以便为了多种目的而改变核苷酸序列，包括、但不限于，克隆的修饰、加工和/或基因产物的表达。通过随机片段化和基因片段和合成寡核苷酸的PCR重新装配进行的DNA改组，可以用于工程化核苷酸序列。例如，寡核苷酸-介导的定点诱变可以用于导入突变，所述突变建立新的限制位点、改变糖基化模式、改变密码子偏好、产生剪接变体等。
另外，可以选择宿主细胞菌株的下述能力：调节插入的序列的表达，或以希望的方式加工表达的多肽。多肽的这些修饰包括、但不限 于：乙酰基化、羧基化、糖基化、磷酰化、脂化和酰基化。在一个示例性实施方案中，可能希望含有特定糖基化结构或模式的抗-KAAG1抗体。切割多肽的“前原(prepro)”形式的翻译后加工，也可以用于指定蛋白靶向、折叠和/或活性。具有特定的细胞机制和翻译后活性的特征机制的不同宿主细胞(例如，CHO、HeLa、MDCK、HEK293和W138)可在商业上和从美国典型培养物保藏中心(ATCC)得到，且可以选择，以确保表达的多肽的正确修饰和加工。
本领域技术人员会容易地理解，可以将天然的、修饰的或重组的核酸序列连接到异源序列上，导致含有异源多肽部分的融合多肽在任意前述宿主系统中的翻译。使用可商业得到的亲和基质，这样的异源多肽部分可以促进融合多肽的纯化。这样的部分包括、但不限于：谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白、硫氧还蛋白、钙调蛋白结合肽、6-His(His)、FLAG、c-myc、血凝素(HA)和抗体表位诸如单克隆抗体表位。
在再一个方面，本发明涉及多核苷酸，其可以包含编码融合蛋白的核苷酸序列。所述融合蛋白可以包含与本文所述的多肽(例如，完整轻链、完整重链、可变区、CDR等)融合的融合配偶体(例如，HA、Fc等)。
本领域技术人员还会容易地认识到，使用本领域众所周知的化学或酶方法，可以全部或部分地合成所述核酸和多肽序列。例如，使用不同的固相技术，可以进行肽合成，且可以使用诸如ABI 431A肽合成仪(PE Biosystems)等装置使合成自动化。如果需要，在合成过程中可以改变氨基酸序列，和/或与来自其它蛋白的序列相组合，以生产变体蛋白。
【抗体缀合物】
可以给本发明的抗体或抗原结合片段缀合可检测部分(即，用于检测或诊断目的)或治疗部分(用于治疗目的)。
“可检测部分”是通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、化学和/或其他物理方法可检测的部分。使用本领域众所周知的方法，可以 将可检测部分直接地和/或间接地(例如通过连接物，例如，但不限于，DOTA或NHS连接)偶联至本发明的抗体及其抗原结合片段上。可以使用多种可检测部分，其选择依赖于需要的灵敏度、缀合的容易性、稳定性要求和可利用的装置。合适的可检测部分包括、但不限于，荧光标记、放射性标记(例如，不限于，125I、In111、Tc99、I131，且包括用于PET扫描仪的发射正电子的同位素等)、核磁共振活性标记、发光标签、化学发光标签、生色团标签、酶标记(例如但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、量子点和/或纳米粒子。可检测部分可以造成和/或生成可检测的信号，由此允许检测来自可检测部分的信号。
在本发明的另一个示例性实施方案中，可以用治疗部分(例如，药物、细胞毒性部分)偶联(修饰)所述抗体或其抗原结合片段。
在一个示例性实施方案中，所述抗-KAAG1抗体和抗原结合片段可以包含化疗剂或细胞毒性剂。例如，可以将所述抗体和抗原结合片段缀合到化疗剂或细胞毒性剂上。这样的化疗剂或细胞毒性剂包括、但不限于：钇-90、钪-47、铼-186、碘-131、碘-125、以及本领域技术人员公知的许多其它试剂(例如，镥(例如，Lu177),铋(例如，Bi213),铜(例如，Cu67))。在其它情况下，在本领域技术人员已知的其它试剂中，化疗剂或细胞毒性剂可以包含5-氟尿嘧啶、多柔比星、依立替康、紫杉烷类、假单胞菌属内毒素、蓖麻毒素和其它毒素。
或者，为了实现本发明的方法，且如本领域已知的，本发明的抗体或抗原结合片段(缀合的或未缀合的)可以与第二分子(例如，第二抗体等)组合使用，所述第二分子能特异性地结合本发明的抗体或抗原结合片段，且可以携带希望的可检测的、诊断的或治疗的部分。
【抗体的药物组合物和它们的应用】
本发明也包括抗-KAAG1抗体(缀合的或未缀合的)的药物组合物。所述药物组合物可以包含抗-KAAG1抗体或抗原结合片段，且还可以含有药学上可接受的载体。
本发明的其它方面涉及组合物，其可以包含本文所述的抗体或抗原结合片段和载体。
本发明也涉及药物组合物，其可以包含本文所述的抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载体。
本发明的其它方面涉及本文所述的分离的抗体或抗原结合片段在卵巢癌的治疗或诊断中的应用。
除了活性成分以外，药物组合物可以含有药学上可接受的载体，所述载体包括水、PBS、盐溶液、明胶、油类、醇类和其它赋形剂和促进将活性化合物加工成药学上可以使用的制备物的辅料。在其它情况下，这类制备物可经过灭菌。
本文使用的“药物组合物”是指治疗有效量的所述试剂以及药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或载体。本文使用的“治疗有效量”是指为给定病症和给药方案提供治疗效果的量。这些组合物是液体或被冻干，要不然是干燥的制剂，且包含各种缓冲内容物(例如Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)的稀释剂，pH和离子强度，用于防止吸附至表面上的诸如白蛋白或明胶等添加剂，去污剂(例如吐温20、吐温80、Pluronic F68、胆汁酸盐)。增溶剂(例如甘油、聚乙烯甘油)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠)、防腐剂(例如硫柳汞、苯甲醇、对羟基苯甲酸酯)、增量剂或张度调节剂(例如乳糖、甘露醇)、诸如聚乙二醇等聚合物与蛋白的共价连接、与金属离子的络合，或将材料掺入到聚合化合物(例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝胶等)的特定制备物之中或之上，或掺入到脂质体、微乳剂、胶束、单层或多层囊泡、红细胞血影或原生质球之上。这类组合物将影响物理状态、溶解度、稳定性、体内释放速率以及体内清除速率。控释或持续释放的组合物包括在亲脂贮库(例如，脂肪酸、蜡、油)中的制剂。本发明还包括聚合物(例如泊洛沙姆或poloxamine)包被的颗粒组合物。本发明组合物的其它实施方案掺入颗粒形式的保护性涂层、蛋白酶抑制剂或渗透增强剂，用于多种给药途径，包括胃肠外、肺、鼻、口、阴道、直肠途径。在一个实施方案中，药物组合物经胃肠外、癌旁(paracancerally)、经粘膜、透皮、肌内、静脉内、真皮内、皮下、腹膜内、心室内、颅内和肿瘤内施用。
此外，本文使用的“药学上可接受的载体”或“药用载体”是本领域已知的，包括但不限于0.01-0.1M或0.05M磷酸盐缓冲液或0.8％盐水。另外，这些药学上可接受的载体可以是水溶液或非水溶液、悬浮液和乳液。非水溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油以及可注射有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。胃肠外溶媒包括氯化钠溶液、林格(Ringer)氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸化林格油或不挥发油。静脉内溶媒包括液体和营养补充物、电解质补充物(例如基于林格氏葡萄糖的那些补充物)等。还可存在防腐剂和其它添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、整理剂(collating agent)、惰性气体等。
对于任意的化合物，最初可以在细胞培养试验中或在动物模型(诸如小鼠、大鼠、兔子、狗或猪)中估计治疗有效剂量。也可以使用动物模型来测定浓度范围和给药途径。这样的信息然后可以用于确定在人类中有用的剂量和给药途径。这些技术是本领域技术人员众所周知的，且治疗有效剂量是指改善症状或病症的活性成分的量。通过在细胞培养物中或使用实验动物的标准药学规程，可以测定治疗效能和毒性，诸如通过计算和对比ED50(在50％群体中治疗上有效的剂量)和LD50(对50％群体致死的剂量)统计。任一种上文所述的治疗组合物可以应用于需要这种治疗的任意受试者，包括、但不限于，哺乳动物诸如狗、猫、牛、马、兔、猴和人。
在本发明中使用的药物组合物可以通过任意数目的途径来施用，包括、但不限于，经口的、静脉内的、肌肉内的、动脉内的、髓内的、鞘内的、心室内的、透皮的、皮下的、腹膜内的、鼻内的、肠内的、局部的、舌下的或直肠的方式。
用于本公开内容目的的术语“治疗”是指治疗性处理和预防性或阻止性措施，其中目的是阻止或减慢(减轻)靶向的病理学病症或障碍。需要治疗的对象包括已经具有障碍的对象、以及易于具有障碍的对象或其中有待阻止障碍的对象。
其中的抗-KAAG1抗体和抗原结合片段可以在不同癌症类型的治 疗中具有治疗用途，所述癌症类型诸如卵巢癌、肾癌、结肠癌、肺癌、黑素瘤等。在一个示例性实施方案中，所述抗体和片段在卵巢癌中具有治疗用途。在某些情况下，所述抗-KAAG1抗体和片段可以与表达KAAG1的癌细胞相互作用，并通过介导ADCC来诱导免疫反应。在其它情况下，所述抗-KAAG1抗体和片段可以阻断KAAG1与它的蛋白配偶体的相互作用。
其中的抗-KAAG1抗体和抗原结合片段可以在不同卵巢癌类型的治疗中具有治疗用途。几种不同的细胞类型可能引起不同的卵巢癌组织型。卵巢癌的最常见形式包括在卵巢或输卵管的上皮细胞层中发生的肿瘤。这样的上皮卵巢癌包括血清肿瘤、子宫内膜样肿瘤、粘蛋白肿瘤、透明细胞肿瘤和交界肿瘤。在其它实施方案中，其中的抗-KAAG1抗体和抗原结合片段可以在其它卵巢癌类型(诸如种系和性索卵巢癌)的治疗中具有用途。
在某些情况下，其中的抗-KAAG1抗体和抗原结合片段可以与用于相同病症的其它治疗组合地同时施用。这样，所述抗体可以与抗有丝分裂剂(例如紫杉烷类)、基于铂的试剂(例如顺铂)、DNA损伤剂(例如多柔比星)和本领域技术人员已知的其它抗癌疗法一起施用。在其它情况下，其中的抗-KAAG1抗体和抗原结合片段可以与其它治疗抗体一起施用。这些包括、但不限于：靶向EGFR、CD-20和Her2的抗体。
本发明在其另一个方面涉及抑制表达KAAG1的细胞的生长的方法，所述方法可以包括，使所述细胞接触有效量的本文所述的抗体或抗原结合片段。
本发明也包括在哺乳动物中治疗癌症或抑制表达KAAG1的细胞的生长的方法，所述方法可以包括，给有需要的哺乳动物施用本文所述的抗体或抗原结合片段。
在其它方面，本发明提供了使用本发明的抗体或抗原结合片段的治疗方法、诊断方法和检测方法，以及这些抗体或抗原结合片段在生产用于这些目的的药物组合物或药物中的应用。
本发明包括的治疗方法包括，将本文所述的抗体或抗原结合片段施用给有需要的哺乳动物，尤其是具有或易于具有癌症的患者。
本发明在其它方面也提供了减少肿瘤扩散、肿瘤侵入、肿瘤形成或用于诱导肿瘤裂解的方法，所述方法可以包括，将分离的抗体或抗原结合片段施用给有需要的哺乳动物。
本发明因此涉及本文所述的分离的抗体在治疗癌症、减少肿瘤扩散、肿瘤侵入、肿瘤形成或诱导表达KAAG1的肿瘤细胞的肿瘤裂解(或用于这些目的的药物组合物的生产)中的应用。
所述抗体或抗原结合片段可以更具体地适用于恶性肿瘤，所述恶性肿瘤包括，例如，具有转移能力的恶性肿瘤，和/或特征在于不依赖于锚着生长的肿瘤细胞。本发明的抗体或抗原结合片段也可以用于癌症的诊断中。通过将本发明的抗体或抗原结合片段施用给具有或易于具有癌症的哺乳动物，可以在体内进行癌症的诊断。通过使从哺乳动物得到的样品接触所述抗体或抗原结合片段，并测定是否存在表达KAAG1的细胞(肿瘤细胞)，也可以离体进行诊断。
本发明也包括在哺乳动物中检测癌症或检测表达KAAG1的细胞的方法，所述方法可以包括，将本文所述的抗体或抗原结合片段施用给有需要的哺乳动物。
本发明在其另一个方面涉及用于检测表达KAAG1的细胞的方法，所述方法可以包括，使所述细胞接触本文所述的抗体或抗原结合片段，并检测由抗体和表达KAAG1的细胞形成的复合物。在检测方法中使用的抗体或抗原结合片段的示例性实施方案是能结合KAAG1的胞外区域的那些。
在检测方法中使用的抗体或抗原结合片段的其它示例性实施方案是结合在肿瘤细胞表面处表达的KAAG1的那些。
可以从本文所述的治疗、检测或诊断方法获益的患者是下述患者，其具有或疑似具有卵巢癌(例如，血清的、子宫内膜样的、透明细胞的或粘蛋白的)、皮肤癌(例如，黑素瘤、鳞状细胞癌)、肾癌(例如，乳突细胞癌、透明细胞癌)、结直肠癌(cancer)(例如，结直肠癌 (carcinomas))、肉瘤、白血病、脑肿瘤、甲状腺肿瘤、乳腺癌(cancer)(例如，乳腺癌(carcinomas))、前列腺癌(cancer)(例如，前列腺癌(carcinomas))、食道肿瘤、膀胱肿瘤、肺肿瘤(例如，肺癌)或头和颈肿瘤，且特别在所述癌症被表征为恶性时，和/或在表达KAAG1的细胞的特征在于不依赖于锚着生长时。
本发明特别包括这样的患者，其具有或疑似具有卵巢癌(例如，血清的、子宫内膜样的、透明细胞的或粘蛋白的)、皮肤癌(例如，黑素瘤、鳞状细胞癌)或肾癌(例如，乳突细胞癌)，且特别在所述癌症被表征为恶性时，和/或在表达KAAG1的细胞的特征在于不依赖于锚着生长时。
本发明的另一个方面涉及用于检测下述物质的方法：KAAG1(SEQ ID NO.:2)、与SEQ ID NO.:2具有至少80％序列同一性的KAAG1变体或者KAAG1或KAAG1变体的循环形式的分泌形式，所述方法可以包括，使表达KAAG1或KAAG1变体的细胞或者包含或疑似包含KAAG1或KAAG1变体的样品(活组织检查、血清、血浆、尿等)接触本文所述的抗体或抗原结合片段，并测量结合。所述样品可以源自可能具有癌症(例如，卵巢癌)或可能疑似具有癌症(例如，卵巢癌)的哺乳动物(例如，人)。所述样品可以是从哺乳动物得到的组织样品或细胞培养上清液。
根据本发明，所述样品可以是从哺乳动物得到的血清样品、血浆样品、血液样品或腹水液。本文所述的抗体或抗原结合片段可以有利地检测KAAG1的分泌形式或循环形式(在血液中循环)。
所述方法可以包括，定量由结合到KAAG1或KAAG1变体上的所述抗体或抗原结合片段形成的复合物。
抗体与抗原的结合会造成抗原的预期分子量的增加。因此，在所述抗体或抗原结合片段特异性地结合抗原后，发生物理变化。
使用例如电泳和随后的蛋白印迹和凝胶或印迹的染色、质谱法、与计算机等仪器偶联的HPLC，可以检测这样的变化。能计算分子量迁移的仪器是本领域已知的，包括例如PhosphorimagerTM。
当所述抗体包含例如可检测标记时，通过所述标记发射的荧光、所述标记的辐射发射、标记的酶活性(提供了它的底物等)，可以检测抗原-抗体复合物。
通过本领域已知的多种方法，可以检测和/或测量抗体或抗原结合片段和抗原之间的结合。使用能检测可检测标记发射的信号(辐射发射、荧光、颜色变化等)的仪器，可以监测抗体或抗原结合片段和抗原之间的结合。这样的仪器会提供指示发生结合的数据，且也可以提供关于结合抗原的抗体的量的指征。仪器(通常与计算机偶联)还可以能计算背景信号(例如，在没有抗原-抗体结合存在下得到的信号)或背景噪音和在特异性的抗体-抗原结合后得到的信号之间的差异。这样的仪器因而可以为用户提供关于抗原是否已经被检测出的指征和结论。
本发明的其它方面涉及试剂盒，其可以包含一个或多个容器，所述容器含有一种或多种本文所述的抗体或抗原结合片段。
【核酸、载体和细胞】
通常在细胞中制备抗体，所述细胞允许从包含编码轻链和重链的核酸序列的载体表达轻链和重链。
本发明因此包括能编码本文所述的CDR、轻链可变域、重链可变域、轻链、重链中的任一种的核酸。
本发明因此在另一个方面涉及核酸，其编码能特异性地结合KAAG1的抗体的轻链可变域和/或重链可变域。
根据本发明的一个实施方案，所述核酸可以具体地编码能诱导表达KAAG1的肿瘤细胞的杀死(消除、破坏、裂解)的抗体的轻链可变域和/或重链可变域。
根据本发明的另一个实施方案，所述核酸可以具体地编码能减少表达KAAG1的肿瘤细胞的扩散的抗体的轻链可变域和/或重链可变域。
根据本发明的另一个实施方案，所述核酸可以具体地编码能减少或损害表达KAAG1的肿瘤的形成的抗体的轻链可变域和/或重链可变域。
本发明的核酸的示例性实施方案包括编码轻链可变域的核酸，所述轻链可变域包含:
(a)CDRL1序列，其选自SEQ ID NO.:74和SEQ ID NO.:75；
(b)CDRL2序列，其选自SEQ ID NO.:76、SEQ ID NO.:77和SEQ ID NO.:78，或；
(c)CDRL3序列，其选自SEQ ID NO.:79、SEQ ID NO.:80和SEQ ID NO.:81。
根据本发明，所述核酸可以编码轻链可变域，所述轻链可变域可以包含CDRL1、CDRL2或CDRL3中的至少2个CDR。
也根据本发明，所述核酸可以编码轻链可变域，所述轻链可变域可以包含一个CDRL1、一个CDRL2和一个CDRL3。
本发明也涉及编码重链可变域的核酸，所述重链可变域包含:
(a)CDRH1序列，其包含SEQ ID NO.:82；
(b)CDRH2序列，其选自SEQ ID NO.:83、SEQ ID NO.:84、SEQ ID NO.:85、SEQ ID NO.:86和SEQ ID NO.:87，或；
(c)CDRH3序列，其选自SEQ ID NO.:88、SEQ ID NO.:89和SEQ ID NO.:90。
根据本发明，所述核酸可以编码重链可变域，所述重链可变域可以包含CDRH1、CDRH2或CDRH3中的至少2个CDR。
根据本发明，所述核酸可以编码重链可变域，所述重链可变域可以包含一个CDRH1、一个CDRH2和一个CDRH3。
本发明也包括这样的核酸，其编码具有至少一个保守氨基酸置换的抗体变体。
根据本发明，所述核酸可以编码包含至少一个保守氨基酸置换的CDR。
根据本发明，所述核酸可以编码在至少2个CDR中包含至少一个保守氨基酸置换的CDR。
根据本发明，所述核酸可以编码在3个CDR中包含至少一个保守氨基酸置换的CDR。
根据本发明，所述核酸可以编码在至少一个CDR中包含至少2个保守氨基酸置换的CDR。
根据本发明，所述核酸可以编码在至少2个CDR中包含至少2个保守氨基酸置换的CDR。
根据本发明，所述核酸可以编码在3个CDR中包含至少2个保守氨基酸置换的CDR。
本发明的其它方面涉及这样的核酸，其编码与选自下述的序列具有至少70％、75％、80％序列同一性的轻链可变域：SEQ ID NO.:16、SEQ ID NO.:20、SEQ ID NO.:24、SEQ ID NO.:105、SEQ ID NO.:106、SEQ ID NO.:107、SEQ ID NO.:108、SEQ ID NO.:109、SEQ ID NO.:110、SEQ ID NO.:111、SEQ ID NO.:112、SEQ ID NO.:113、SEQ ID NO.:114、SEQ ID NO.:115、SEQ ID NO.:116、SEQ ID NO.:117、SEQ ID NO.:118、SEQ ID NO.:119、SEQ ID NO.:120、SEQ ID NO.:121、SEQ ID NO.:122、SEQ ID NO.:123、SEQ ID NO.:124、SEQ ID NO.:125、SEQ ID NO.:126、SEQ ID NO.:127.SEQ ID NO.:128、SEQ ID NO.:129、SEQ ID NO.:130和SEQ ID NO.:131。
本发明的其它方面涉及这样的核酸，其编码与选自下述的序列具有至少70％、75％、80％序列同一性的重链可变域：SEQ ID NO.:18、SEQ ID NO.:22、SEQ ID NO.:26、SEQ ID NO.:132、SEQ ID NO.:133、SEQ ID NO.:134、SEQ ID NO.:135、SEQ ID NO.:136、SEQ ID NO.:137、SEQ ID NO.:138、SEQ ID NO.:139、SEQ ID NO.:140、SEQ ID NO.:141、SEQ ID NO.:142、SEQ ID NO.:143、SEQ ID NO.:144、SEQ ID NO.:145、SEQ ID NO.:146、SEQ ID NO.:147、SEQ ID NO.:148、SEQ ID NO.:149、SEQ ID NO.:150、SEQ ID NO.:151、SEQ ID NO.:152、SEQ ID NO.:153、SEQ ID NO.:154、SEQ ID NO.:155、SEQ ID NO.:156、SEQ ID NO.:157。本发明的其它方面涉及选自下述的核酸用于损害表达KAAG1的肿瘤细胞的迁移或存活的应用：SEQ ID NO.:1、SEQ ID NO.:1的10至884个核苷酸的片段和前述任一个的补体。这样的核酸的示例性实施方案包含siRNA、反义、核酶等。
在另一个方面，本发明涉及包含本文所述核酸的载体。
根据本发明，所述载体可以是表达载体。
含有插入的编码序列在一个特定宿主中的转录和翻译控制的元件的载体是本领域已知的。这些元件可以包括调节序列，诸如增强子、组成型和诱导型启动子以及5'和3'非翻译区。本领域技术人员众所周知的方法可以用于构建这样的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。
在本发明的另一个方面涉及分离的细胞，其可以包含本文所述的核酸。
所述分离的细胞可以包含在单独的载体上或在同一个载体上的编码轻链可变域的核酸和编码重链可变域的核酸。所述分离的细胞还可以包含在单独的载体上或在同一个载体上的编码轻链的核酸和编码重链的核酸。
根据本发明，所述细胞能表达、装配和/或分泌抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，本发明提供了细胞，其可以包含和/或可以表达本文所述抗体。
根据本发明，所述细胞可以包含编码轻链可变域的核酸和编码重链可变域的核酸。
所述细胞可以能表达、装配和/或分泌抗体或其抗原结合片段。
提供下面的实施例来进一步描述本发明的细节。
【实施例】 
【实施例1】
本实施例描述了卵巢肿瘤和卵巢癌细胞系中的KAAG1基因的表达模式。
进行PCR分析，以验证表达编码KAAG1(在附图中指示为AB-0447)的mRNA的卵巢肿瘤的百分比。结果表明，KAAG1基因在超过85％的来自疾病所有阶段的卵巢肿瘤和100％的晚期肿瘤中表 达。LMP样品中的KAAG1的表达更低或不可检测(参见图1A)。对于每个样品，使用Thermoscript RT(Invitrogen)，使用随机六聚物逆转录1μg扩增的RNA。稀释cDNA，并将1/200的反应物用作每个PCR反应的模板，使用指出的基因-特异性的引物。用于扩增KAAG1mRNA的引物含有在SEQ ID NO:45和46中所示的序列。在96-孔平板中进行PCR反应，并在1％琼脂糖凝胶上电泳25μl反应物的一半。使凝胶显影，并用凝胶记录系统(BioRad)照相。图1A的上图显示了来自6个LMP样品(LMP)和22个卵巢瘤和6个卵巢细胞系(右侧最后6个泳道,OVCa)样品的结果。图1的下图显示了来自30个如指出地测试的正常组织的RNA样品。
在少数正常组织中弱检测出KAAG1表达，而所述mRNA在输卵管和胰腺中是明显的(参见图1A)。通过甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)(一个持家基因)的平行PCR扩增，控制在这些反应中使用的总RNA的量，结果表明，在每个样品中存在等量的原料(参见图1A)。用于扩增GAPDH基因的引物含有在SEQ ID NO:47和48中所示的序列。因而，KAAG1基因的表达满足一个重要的选择标准：它在大量卵巢肿瘤中过表达，且它在大多数正常组织中的表达较低或缺少。这些数据表明，使用针对KAAG1的高亲和力单克隆抗体，可以特异性地靶向卵巢肿瘤。
早期癌症或肿瘤倾向于由处于高分化状态的细胞组成，但是随着肿瘤进展成更攻击性的和侵入性的状态，癌细胞变得逐渐不分化。需要鉴别促成该转变的因素，并利用这些蛋白作为开发治疗剂的靶标。可以得到几个源自原发肿瘤的卵巢癌细胞系，并用作功能研究的优良模型。在这些细胞系中检查了KAAG1的表达。从原发肿瘤建立了4个称作TOV-21G、TOV-112D、TOV-1946和TOV-2223G的细胞系，而OV-90和OV-1946是源自具有晚期卵巢癌的患者的腹水中含有的细胞的细胞系。使用逆转录酶，将来自从原发肿瘤建立的细胞(参见图1B，泳道1，TOV-21G；2，TOV-112D；5，TOV-1946；6，TOV-2223G)和从腹水细胞建立的细胞(泳道3，OV-90；4，OV-1946)的总RNA 转化成cDNA，并用作使用KAAG1-特异性的引物(SEQ ID NO:45和46)的PCR反应的模板。使用来自正常卵巢的总RNA进行反应，作为阴性对照。通过使用GAPDH(SEQ ID NO:47和48)的平行PCR反应，证实使用了等量的原料。在琼脂糖凝胶上电泳PCR反应的样品，并用溴化乙锭显影。如图1B所示，可检出KAAG1，但是在来自原发肿瘤的细胞系中弱表达，且以更高数目的循环进行的PCR反应揭示在这些细胞系中的所有4个中的KAAG1转录物。相反，从腹水液细胞建立的细胞系表现出高水平的KAAG1转录物。在来自腹水液的细胞中增加的表达表明，细胞的环境会影响KAAG1基因的调节。
腹水细胞与晚期疾病有关，且在图1B中公开的表达模式暗示，KAAG1水平的增加与不依赖于锚着生长有关。通过在悬滴中培养细胞，解决了该问题，该条件阻止细胞附着到培养皿上，所述附着是当它们作为单层生长时的情况。这些所谓的三维培养物允许细胞结合，并观察到球状体的形成(参见图1C)。如下培养球状体；在没有(左图，图1C)或含有5％FBS(右图，图1C，+5％血清)的培养基中，孵育TOV-112D、OV-90或TOV-21G细胞(4000，在15μl中)4天。将图像的放大率设定为100x。已经充分表征了这些球状体，且表现出许多在原发肿瘤中发现的性质，包括形态学和功能性质以及通过基于微阵列的表达概况分析测量的分子标签。
从球形体制备物分离出总RNA，并如关于图1A所述，进行RT-PCR。在产生球状体的条件下，如图1C的图例所述，接种TOV-21G、TOV-112D、OV-90细胞。4天后，分离总RNA，并用于进行使用KAAG1-特异性的引物(SEQ ID NO:45和46)的RT-PCR反应。在琼脂糖凝胶上电泳PCR反应。进行平行的反应来扩增GAPDH(SEQ ID NO:47和48)，证实在每个样品中存在等量的原料。在图1D中使用下述首字母缩写：Ce.，以单层生长的细胞；Sph.，以球状体生长的细胞。引人注意地，当TOV-21G和TOV-112D以球状体生长时，KAAG1表达被上调节(参见图1D)。在OV-90细胞的情况下，KAAG1基因的表达水平不变，并保持非常高。据推测，在源自腹水液的细胞 系中获得的表达水平已经达到最大值，如OV-90细胞和OV-1946细胞所例证的(参见图1A)。
这些结果与以前的证实源自腹水液的细胞系中的高表达的数据相关联，并证实，KAAG1的表达受到癌细胞微环境的影响。另外，在球状体中观察到的KAAG1转录的上调节暗示，在恶性卵巢癌中存在高水平的KAAG1。
【实施例2】
本实施例描述了体外结果，其提示KAAG1在卵巢癌细胞的存活中的关键作用。
经证实，卵巢癌细胞中的KAAG1表达受到调节，检查了这些细胞中该基因的功能。为了解决该问题，进行体外试验来测定该蛋白是否在癌细胞增殖、迁移和/或存活中起作用。使用RNAi来敲低内源KAAG1基因在TOV-21G卵巢癌细胞系中的表达。使用本领域技术人员可自由获得的基于网络的软件(例如Qiagen)，设计了2个单独的短发夹RNA(shRNA)序列。这些选择的序列(通常是19-聚体)被包含在2个互补的寡核苷酸中，它们形成shRNA的模板，即19-个核苷酸的有义序列、9-个核苷酸的接头区(环)、19-个核苷酸的反义序列、继之以用于终止RNA聚合酶III的5-6个聚-T段。用于敲低KAAG1的表达的19-聚体的序列如SEQ ID NO:49和50所示。将适当的限制位点插在这些寡核苷酸的末端，以便利插入物的适当定位，使得转录起始点是在hU6启动子下游的精确位置。在所有RNA干扰研究中使用的质粒pSilencer 2.0(SEQ ID NO.:51)购自商业供应商(Ambion,Austin,TX)。构建2个不同的shRNA表达载体，以增加观察到RNAi效应的机会和表型观察的特异性。将TOV-21G细胞接种进6-孔平板中，并在24小时后，用1μg pSil-shRNA载体转染。使用sh.1和sh.2来命名2个不同的靶向KAAG1基因的shRNA序列。选择稳定的转染子5–7天，扩增，并培养至汇合。使用这些稳定转染的含有对KAAG1特异的shRNA的细胞系，进行所有下述的体外基于细胞的试验。
在标准的细胞能动性试验中，测量细胞的迁移或可动性。该抓伤 试验(正如名字所示)测量细胞填充汇合单层中的裸露区的速率。如图2A所示，与对照未处理的细胞相比，含有杂乱的shRNA的TOV-21G细胞在24h后几乎完全填满创伤(对比中左图和左图)。通过对比，表达KAAG1shRNA的TOV-21G细胞的填充裸露区的能力极大地减小。实际上，在有KAAG1shRNA细胞存在下填充裸露区的细胞的数目更接近类似于在时间0h时的细胞数目(对比左图和右图)。
为了检查卵巢癌细胞中KAAG1的减少的表达的更长期效果，充分稀释细胞，并在集落存活试验中培养10天。以50000细胞/孔的密度，将TOV-21G细胞接种进12-孔平板，并在24h后用1μg pSil-shRNA载体转染。使用sh-1和sh-2来命名2个不同的靶向相同基因的shRNA序列。次日，施加含有2μg/ml嘌罗霉素的新鲜培养基，并选择细胞3天。洗涤细胞，并加入不含嘌罗霉素的新鲜培养基，继续生长另外5天。为了使剩余的菌落显影，在PBS中洗涤细胞，固定，并同时在室温在1％结晶紫/10％乙醇的PBS中染色15分钟。在PBS中充分洗涤后，扫描干燥的平板，进行照相分析。观察到癌细胞系的存活的显著减少，一个代表性的实验显示在图2B中。当将shRNA转染进另一个卵巢癌细胞系TOV-112D中时，观察到相同的结果。
因而，总之，与该基因在卵巢癌细胞的迁移和存活中的需要相偶联的分离细胞中KAAG1的受调节的表达，支持KAAG1在卵巢癌细胞中的重要作用。此外，这些实验提示，KAAG1蛋白的拮抗剂(诸如单克隆抗体)会导致侵袭力降低和肿瘤存活减少。
【实施例3】
本实施例提供了关于结合KAAG1的单克隆抗体家族的细节。
使用Biosite噬菌体展示技术，产生结合KAAG1的抗体。该技术的详细描述和产生这些抗体的方法，可以参见美国专利号6,057,098。简而言之，该技术利用展示抗原结合片段(Fab)的噬菌体文库的严格淘选。几轮淘选后，得到称作Omniclonal的文库，该文库富含含有轻链和重链可变区的重组Fab，所述重组Fab以非常高的亲和力和特异性结合KAAG1。从该文库(更精确地命名的Omniclonal  AL0003Z1)中，从大肠杆菌制备96个单个重组单克隆Fab，并测试KAAG1结合。
为了测量每个单个单克隆抗体的相对结合，使用大规模瞬时转染技术(Durocher等人,2002；Durocher,2004)，在293E细胞中产生重组人KAAG1。使用掺入BamHI限制位点的正向引物(SEQ ID NO.:52)和掺入HindIII限制位点的反向引物(SEQ ID NO.:53)，PCR扩增KAAG1cDNA的整个编码区。得到的PCR产物测得276个碱基对，且在用BamHI和HindIII消化后，将片段连接进用相同限制酶类似地消化的表达载体pYD5(SEQ ID NO.:54)。pYD5表达质粒含有人Fc结构域的编码序列(其允许产生融合蛋白)以及编码IgG1信号肽的序列(以允许融合蛋白分泌进培养基中)。对于每毫升细胞，在悬浮培养至1.5–2.0百万细胞/ml的密度的293E细胞中转染1微克表达载体(称作pYD5-0447)。使用的转染试剂是聚乙烯亚胺(PEI),(线性的，MW 25,000，目录号23966Polysciences,Inc.,Warrington,PA)，其以1:3的DNA:PEI比包含在内。细胞继续生长5天，然后收获培养基，用于纯化重组Fc-KAAG1融合蛋白。按照生产商(Sigma-Aldrich Canada Ltd.,Oakville,ON)的指示，使用蛋白-A琼脂糖纯化蛋白。在图3A中显示了一个代表性的聚丙烯酰胺凝胶，它显示了纯化的Fc-KAAG1(指示为Fc-0447)的样品。
单克隆制备物的96-孔总平板在每个孔中含有不同浓度的纯化的抗-KAAG1Fab。通过将Fab稀释至10μg/ml的终浓度，制备第二个储备总平板，从它制备所有后续稀释物，用于ELISA测量。为了实现Fc-KAAG1与单克隆制备物的结合，用NHS-生物素(Pierce,Rockford,IL)生物素化Fc-KAAG1，并以10ng/孔包被抗生蛋白链菌素96-孔平板。将1纳克每种Fab单克隆制备物加入每个孔中，并在室温温育30分钟。在有TMB液体底物(Sigma-Aldrich Canada Ltd.,Oakville,ON)存在下，使用HRP-缀合的小鼠抗-κ轻链抗体，检测结合的抗体，并在微孔滴定板读数器中在450nm进行读数。如图3B所示，共48个(用灰色突出显示)单克隆抗体在该试验中表现出显著的 结合(>0.1任意OD450单位)。故意将抗体稀释至1ng/孔，以突出具有对KAAG1的最大亲和力的那些抗体的结合。作为对照，抗体没有结合生物素化的Fc结构域。这些数据也揭示，抗体的结合随孔不同而异，指示它们表现出不同的对KAAG1的亲和力。
【实施例4】
本实施例描述了表位作图研究，以测定抗体结合KAAG1的哪个区域。
为了进一步描绘单克隆抗体结合的KAAG1区域，表达KAAG1的截短突变体，并用于ELISA中。象全长KAAG1一样，通过PCR扩增截短形式，并连接进BamHI/HindIII消化的pYD5。使用的引物组合了具有SEQ ID NO.:52所示序列的正向寡核苷酸和SEQ ID NO:55和56的引物，以产生Fc-融合的片段，所述片段分别在KAAG1的氨基酸编号60和35处结束。如上面关于全长Fc-KAAG1所述，进行这些突变体的表达，并用蛋白-A琼脂糖纯化。在ELISA中使用的蛋白制备物的一个代表性的凝胶如图4A所示，用于表位绘图的突变蛋白的简图如图4B所示。
结果表明，所述文库包含可以结合每个描绘的KAAG1区域的抗体。具体地，在第一个ELISA中结合KAAG1的48个mAb中，发现9个(孔A2、A12、C2、C4、D1、E10、F1、H3和H8)与KAAG1的前35个氨基酸相互作用，而且发现5个(D12、E8、F5、G10和H5)与KAAG1的最后25个氨基酸相互作用。因而，剩余的34个抗体与在氨基酸36–59区间的KAAG1区域相互作用。这些结果与24个代表性的轻链和重链可变区的序列分析相一致。实际上，这些序列的比对揭示，基于它们各自的CDR的同一性百分比，将抗体归入3个组中。在每个组中含有的抗体都与KAAG1的相同区域相互作用。
因此，基于mAb的相对结合亲和力、有差别的表位相互作用特征和可变域序列的差异，选择来自在实施例3中所述的平板的3个抗体，作为示例性的抗-KAAG1单克隆抗体用于进一步分析。
【实施例5】
本实施例公开了用于将Fab转化成完整IgG1嵌合单克隆抗体的方法。该方法的线路图如图5所示。
除了进行Fab单克隆和KAAG1蛋白之间的相互作用研究的可能性以外，在进行有意义的体外和体内研究来验证抗原的生物学功能方面，Fab的应用受到限制。因而，必须将在Fab中含有的轻链和重链可变区转化成完整抗体支架，以产生小鼠-人嵌合的IgG1。构建了轻和重免疫球蛋白链的表达载体，使得：i)在Fab表达载体上游的最初的细菌信号肽序列被替换为哺乳动物信号肽，和ii)小鼠抗体中的轻链和重链恒定区被人恒定区替换。实现该转化的方法使用本领域技术人员熟知的标准的分子生物学技术。本文描述了该方法的简单概要(参见图5)。
轻链表达载体–修饰一种现有的哺乳动物表达质粒，以适应小鼠轻链可变区，所述质粒称作pTTVH8G(Durocher等人,2002)，是为用于293E瞬时转染系统中而设计。得到的小鼠-人嵌合的轻链含有小鼠可变区，继之以人κ恒定结构域。使用引物OGS1773和OGS1774(分别是SEQ ID NO:57和58)，PCR扩增编码人κ恒定结构域的cDNA序列。人κ恒定区的核苷酸序列和对应氨基酸序列分别如SEQ ID NO:59和60所示。将得到的321个碱基对的PCR产物连接进pTTVH8G，紧邻在人VEGF A(NM_003376)的信号肽序列的下游。该克隆步骤也放置独特的限制性内切核酸酶位点，其允许编码小鼠轻链可变区的cDNA的精确定位。最终的表达质粒(称作pTTVK1)的序列如SEQ ID NO.:61所示。基于在表3中公开的序列，设计对抗体3D3、3G10和3C4的轻链可变区(分别是SEQ ID NO:15、19和23)特异性的PCR引物，它们在它们的5’-末端掺入了与VEGF A信号肽的最后20个碱基对相同的序列。这些引物的序列如SEQ ID NO:62、63和64所示。使用相同的反向引物来扩增所有3个轻链可变区，因为尽头的3’-末端是相同的。该引物(SEQ ID NO.:65)在它的3’-末端掺入了与人κ恒定结构域的前20个碱基对相同的序列。用T4DNA聚合酶的3’–5’外切核酸酶活性，处理PCR片段和消化的pTTVK1，产生 互补末端，它们通过退火连接起来。将退火反应物转化进感受态大肠杆菌，并通过测序证实表达质粒，以确保小鼠轻链可变区被适当地插入pTTVK1表达载体中。本领域技术人员会容易地认识到，用于构建轻链表达质粒的方法适用于在最初的Fab文库中含有的所有抗-KAAG1抗体。
重链表达载体–以与上面关于产生轻链免疫球蛋白所述的pTTVK1类似的方式，设计产生重链免疫球蛋白的表达载体。通过连接编码人恒定CH1区的cDNA序列，修饰质粒pYD11(Durocher等人,2002)，所述质粒含有人IgGK信号肽序列以及IgG1的人Fc结构域的CH2和CH3区域。使用设计成含有独特的限制性内切核酸酶位点的PCR引物OGS1769和OGS1770(SEQ ID NO:66和67)来扩增人IgG1CH1区域，该区域含有SEQ ID NO:68和69所示的核苷酸序列和对应的氨基酸序列。把人CH1的309个碱基对的片段连接到IgGK信号肽序列的紧邻下游后，将修饰的质粒(SEQ ID NO.:70)命名为pYD15。当将选择的重链可变区连接进该载体中时，得到的质粒编码具有人恒定区的完整的IgG1重链免疫球蛋白。基于表3公开的序列，设计对抗体3D3、3G10和3C4的重链可变区(分别是SEQ ID NO:17、21和25)特异性的PCR引物，它们在它们的5’-末端掺入了与IgGK信号肽的最后20个碱基对相同的序列。这些引物的序列如SEQ ID NO:71(3D3和3G10具有相同的5’-末端序列)和72所示。使用相同的反向引物来扩增所有3个重链可变区，因为尽头的3’-末端是相同的。该引物(SEQ ID NO.:73)在它的3’-末端掺入了与人CH1恒定结构域的前20个碱基对相同的序列。用T4DNA聚合酶的3’–5’外切核酸酶活性，处理PCR片段和消化的pYD15，产生互补末端，它们通过退火连接起来。将退火反应物转化进感受态大肠杆菌，并通过测序证实表达质粒，以确保小鼠重链可变区被适当地插入pYD15表达载体中。本领域技术人员会容易地认识到，用于构建重链表达质粒的方法适用于在最初的Fab文库中含有的所有抗-KAAG1抗体。
在293E细胞中表达人IgG1–使用瞬时转染系统(Durocher等 人,2002)，在293E细胞中表达上面制备的编码轻链和重链免疫球蛋白的表达载体。用于共转染轻链和重链表达载体的方法如实施例3所述。优化轻链与重链的比，以便在组织培养基中达到最大的抗体产率，发现是9:1(L:H)。在ELISA中测量嵌合的抗-KAAG1单克隆抗体的结合重组Fc-KAAG1的能力，并与最初的小鼠Fab相对比。所述方法如实施例3所述。如图6所示，3D3和3G10嵌合的IgG1单克隆抗体的结合非常类似于Fab。在3C4的情况下，嵌合体的结合活性轻微小于Fab。尽管如此，该结果表明，来自小鼠Fab的可变域向人IgG1主链中的转位，没有显著影响轻链和重链可变区的赋予KAAG1结合的能力。
【实施例6】
本实施例描述了抗-KAAG1抗体用于阻滞卵巢癌细胞模型中的KAAG1活性的应用。 
实施例2公开的RNAi研究证实，KAAG1在卵巢癌细胞的行为中起重要作用。使用上述的单克隆抗体来测定，通过靶向在细胞表面处的KAAG1，是否可能再现这些结果。在生成球状体的条件下，培养TOV-21G和OV-90细胞，并用10μg/ml 3D3、3G10或3C4抗-KAAG1嵌合的单克隆抗体处理。如图7所示，当保持未处理时(亲代)，或当用抗体稀释缓冲液处理时(对照)，两种细胞系有效地形成球状体。相反，抗-KAAG1抗体的存在导致松散填充的结构，且在某些情况下，所述细胞不能聚集成球状体。这些结果证实了以前的观察结果，并提示，在球状体形成过程中，抗-KAAG1单克隆抗体可以调节KAAG1的活性。由于癌细胞系的球形体形成是肿瘤形成的体外模型，该结果也提示，阻滞KAAG1可以导致体内肿瘤形成减少。
【实施例7】
本实施例描述了抗-KAAG1抗体用于检测卵巢肿瘤中的KAAG1表达的应用。 
作为证实卵巢癌肿瘤中的KAAG1蛋白表达的方法，且为了测定该基因的表达是否与该蛋白的存在相关联，进行了免疫组织化学。得 到组织微阵列，其含有数十个从患者活组织检查生成的卵巢瘤样品。将石蜡-包埋的上皮卵巢瘤样品放在载玻片上，并在50℃固定15min。通过用二甲苯处理2次，进行去石蜡，然后在100％、80％和70％乙醇中连续洗涤各5min，进行脱水。在PBS中洗涤载玻片2次各5min，并用抗原修复(antigen retrieval)溶液(柠檬酸盐-EDTA)处理，以暴露抗原。通过在H2O2的甲醇溶液中温育载玻片，去除内源性过氧化物反应物质，并通过用不含血清的封闭溶液(Dakocytomation)在室温温育20min，进行封闭。加入第一mAb(抗-KAAG13D3)，在室温保持1h。通过用生物素-缀合的小鼠抗-κ、然后用抗生蛋白链菌素-HRP第三抗体温育，检测KAAG1-反应性的抗原。通过用DAB-过氧化氢底物处理载玻片小于5min，揭示阳性染色，随后用苏木精复染色。发现KAAG1蛋白在绝大多数卵巢瘤样品中以非常高的水平表达。一个含有70个肿瘤的代表性阵列如图8A所示。如使用RT-PCR进行的表达概况分析研究所证实的，在超过85％的分析的卵巢瘤样品中存在KAAG1转录物。显然，KAAG1基因的转录和该蛋白在卵巢癌中的存在之间存在良好关联性。在更高的放大率检查了一些样品，以确定哪些细胞表达KAAG1蛋白。如图8B所示，KAAG1在卵巢肿瘤的表面上皮中优势表达。另外，在这些上皮细胞的尖侧观察到高强度(参见图8B中的箭头，放大率:20x)。最后，在源自不同组织型的卵巢瘤样品上，重复免疫组织化学。如以前解释的，可以将上皮卵巢癌分成4个主要组织型:血清的、子宫内膜样的、透明细胞的和粘蛋白的。在所有类型的上皮卵巢癌中、尤其是在血清的和子宫内膜样的组织型中，检测到KAAG1的表达(参见图8C)。
总之，这些免疫组织化学研究解释了使用单克隆抗体检测卵巢癌中的KAAG1的效用。
【实施例8：针对KAAG1的IgG1抗体可以介导ADCC】
抗体依赖性的细胞的细胞毒性(ADCC)是细胞介导的免疫的机理，通过该机理，免疫系统的效应细胞(通常是天然杀伤(NK)细胞)主动裂解已经被特异性抗体结合的靶细胞。通过抗体的恒定Fc结构域和在 NK细胞表面上的高亲和力Fcγ受体，发生NK细胞和抗体之间的相互作用。IgG1具有对Fc受体的最高亲和力，而IgG2mAb表现出非常差的亲和力。为此，将靶向KAAG1的嵌合抗体设计为IgG1。以此方式介导的这类效应功能经常可以导致在它们的细胞表面上表达高水平的抗原的癌细胞的选择性杀死。
从以前公开的方法(其测量在称作WIL2-S的淋巴瘤细胞系存在下抗-CD20利妥昔单抗(rituxan)的ADCC活性(Idusogie等人,(2000)J.Immunol.164,4178-4184))，改成用于测量抗-KAAG1IgG1嵌合抗体的ADCC活性的体外试验。使用人外周血单核细胞(PBMNC)作为NK细胞的来源，其在递增浓度的3D3嵌合的IgG1抗体存在下被活化(参见图13)。以1比25的比例，用活化的PBMNC温育靶细胞。如证实的，在有OVCAR-3和淋巴瘤细胞系存在下，细胞死亡以剂量依赖性的方式增加，通过RT-PCR证实，所述淋巴瘤细胞表达KAAG1(未显示)。作为阳性对照，再现了来自公开的方法的结果，其中在WIL2-S细胞存在下，为利妥昔单抗得到高水平的ADCC。
还用表达相对高水平的KAAG1的其它卵巢癌细胞系，观察了ADCC。这些结果证实，IgG1抗体是对KAAG1特异性的，如3D3所例证的，可以增加在它们的细胞表面上表达抗原的癌细胞的裂解。
【实施例9：针对KAAG1的抗体可以减少卵巢肿瘤的侵入】
发展卵巢癌的患者具有病灶，所述病灶通常从卵巢(或在某些情况下，输卵管)的上皮层中的细胞的失控生长开始。如果在早期检测出，可手术去除这些原发肿瘤，且一线化疗可以导致非常好的应答率和总存活数提高。不幸的是，70％的患者会遭受复发性疾病，导致数百微转移肿瘤遍及腹腔中的扩散。二线疗法可能是有效的，但是经常患者应答较差或肿瘤发展化学抗性。治疗选择受到限制，迫切需要新疗法来克服对细胞毒性药物的抗性。
为了测试抗-KAAG1抗体在体内的效能，使用卵巢癌的动物模型，它是该疾病在人类中的临床表现的最接近的呈现。TOV-112D细胞系属于子宫内膜样起源，且表达KAAG1抗原(通过RT-PCR测得)。 以前的IHC研究证实，子宫内膜样组织型的卵巢肿瘤含有KAAG1的强表达，因而给112D细胞系提供了用于测试抗-KAAG1抗体的适当选择。
TOV-112D细胞系在SCID小鼠腹膜内接种，导致数十微转移肿瘤的植入，所述肿瘤接近类似于在人类中观察到的那些。在检查后，用PBS、抗体稀释物处理的小鼠含有平均25–30个肿瘤/动物(图14A和14B)。在某些情况下，这些小鼠的腹腔中的肿瘤数目非常高，使得肿瘤数目不能容易地测定；从统计分析排除这些小鼠。当用3C4和3D3抗体处理小鼠时，微转移肿瘤的数目急剧减少。另外，每组中存在至少一个用抗-KAAG1处理的动物没有看到肿瘤。在含有更大数目的TOV-112D肿瘤(>50个/动物)的小鼠中进行第二个实验，得到非常类似的结果。此外，在用3C4和3D3抗体处理的组之间存在非常微小的差异。但是，这些体内实验的趋势以及在基于细胞的试验中得到的结果证实，3D3抗体表现出稍微更高的效能。这是由于更可接近的表位，还是由于3D3与3C4相比对抗原的更高的亲和力，仍然有待确认。来自这2个实验的结果证实，靶向卵巢癌细胞表面上的KAAG1，可以导致体内肿瘤扩散的显著减少。
此外，这些发现与在基于细胞的试验中得到的观察完全一致。例如，与作为单层生长的细胞系相比，球状体中KAAG1mRNA的表达增加；在KAAG1shRNA存在下，细胞迁移减少，当用KAAG1抗体处理时，细胞系的形成球状体的能力降低；和最后，抗-KAAG1IgG1增强ADCC活性。总之，所述结果强烈地提示，用抗体靶向KAAG1在复发性卵巢癌中具有巨大治疗潜力。
【实施例10：KAAG1在皮肤肿瘤和肾细胞癌中表达，且是这些适应症的治疗靶标】
进行的mRNA概况分析研究证实，编码KAAG1抗原的转录物在源自黑素瘤样品和肾癌的细胞系中高度表达。在Sooknanan等人,2007中，公开了这些结果。为了证实这些癌症类型中KAAG1基因的转录调节，使用抗-KAAG1抗体在人皮肤肿瘤组织微阵列(Pantomics Inc., Richmond,CA)上进行免疫组织化学，所述微阵列含有几个从鳞状细胞癌和黑素瘤分离出的切片。该阵列的分析证实，在从鳞状细胞癌和黑素瘤分离出的活组织检查中，存在非常强的染色(图15，上图)。这两种类型都属于最常见的皮肤癌形式，且令人感兴趣地，鳞状细胞癌的转移性最高，该事实再次将KAAG1的表达与侵入表型相联系。如以前观察到的，在阵列含有的3个正常皮肤样品上，KAAG1的存在非常微弱或不存在。类似地，在肾癌阵列所含有的许多样品中，检测出KAAG1。大多数的阳性样品主要属于乳突细胞癌类型，且少数透明细胞癌表达KAAG1蛋白。乳突癌占肾癌病例的大约20％。
为了测试KAAG1在这些癌症类型中的功能是否与它在卵巢癌中的作用相同，得到源自黑素瘤和肾细胞癌的细胞系，并在球状体培养试验中进行测试(参见实施例1和6)。对于黑素瘤模型，在5％FBS存在下，在允许它们形成球状体的条件下，培养A375和SK-MEL5细胞这2个恶性黑素瘤细胞系。使用或不使用浓度为5μg/ml的抗-KAAG1嵌合的3D3抗体，温育培养物。如图16所示，在培养物中包含3D3抗体，会阻止黑素瘤细胞系的球状体结构的适当聚集。该结果提示，KAAG1在黑素瘤中起类似作用，正如它在卵巢癌中那样。还测试了源自肾细胞癌的细胞系。A-498细胞系是肾乳突细胞癌细胞系，而786-O是肾透明细胞癌。如图16所示，仅A-498球状体受到3D3抗-KAAG1抗体存在的影响，而786-O细胞系在该试验中不受影响。这些结果与上述免疫组织化学结果类似，并指示球状体形成的抑制依赖于KAAG1在肾癌细胞(主要源自乳突肾癌)表面上的存在。但是，抗-KAAG1抗体可能可以在其它类型的肾透明细胞癌试验中起作用。
总之，这些数据有力地支持了KAAG1在黑素瘤和肾癌中的作用的关键功能，并指示，在这些适应症中用抗体阻滞KAAG1具有治疗潜力。
【实施例11：KAAG1在卵巢癌细胞表面上表达】
来自编码KAAG1的cDNA的基本结构的生物信息学分析、生化 研究和上皮细胞中所述蛋白的免疫组织化学检测的综合结果提示，KAAG1抗原位于细胞表面上。但是，需要更直接的证据来证实KAAG1的确是膜结合蛋白。在一个方案中，将已知表达KAAG1的卵巢癌细胞系涂布在微量滴定平板上，在不渗透细胞的条件下固定，并用递增浓度的抗-KAAG1嵌合抗体温育。充分洗涤细胞后，在改进的基于细胞的ELISA中，使用HRP-缀合的抗-人IgG作为第二抗体，检测结合的抗体(参见图17A)。从这些实验得到的第一个观察结果是，所述抗体可以被细胞特异性地捕获，提示KAAG1存在于细胞表面处。其次，在SKOV-3细胞上的结合的量最强，且TOV-21G细胞表现出最弱的结合。这与RT-PCR数据完全一致，所述数据证实，KAAG1mRNA在这些细胞系中以类似的比例表达(未显示)。另外，3D3抗体生成最强的信号，暗示该抗体靶向的表位在该试验中最可接近。3G10仅能检测表达最高水平的AB-0447的细胞系(SKOV-3细胞，参见图17A的右图)中的KAAG1。使用的第二个方案是流式细胞术。在该情况下，在饱和条件下，用SKOV-3卵巢癌细胞温育小鼠3D3抗-KAAG1抗体，且在充分洗涤后，在流式细胞计中用缀合到FITC上的抗-小鼠IgG检测结合的3D3抗-KAAG1抗体。如图17B所示，在SKOV-3细胞表面处的信号远远高于用阴性对照标记的相同细胞，后者是在与背景读数相同的荧光水平，所述阴性对照是对非哺乳动物不相关蛋白特异性的抗-KLH(钥孔戚血蓝素)抗体。总之，这些结果证实，KAAG1位于细胞表面上。
【实施例12：人源化的抗-KAAG1抗体的使用方法】
基于体外和初步的体内结果，使用本领域技术人员熟知的方法，使用计算机(in silico)建模，选择2个小鼠抗-KAAG1抗体候选物(命名为3D3和3C4)用于人源化。简而言之，基于可得到的小鼠、人源化的和全人可变区(它们表现出高序列同源性和类似的CDR环长度)的晶体结构，对鼠抗体的可变区进行3D建模。CDR是促成抗原结合的氨基酸序列；每条抗体链上存在3个CDR。另外，通过小鼠和人抗体序列之间的标准同源性对比，修饰框架区(即间插在CDR之间的 氨基酸序列)，产生“最拟合的”人序列。这些修饰确保，CDR环的适当定位得到维持(以确保人源化的结构中的最大抗原结合)，以及防止潜在的N-和O-连接的糖基化位点。人源化的(h)3D3和3G4的重链和轻链可变区的序列分别产生96％和94％人源化。每种抗体的3D3和3C4模型的结构分别如图18A和18B所示。如这些结构所示，3D3需要3个罕见氨基酸(图18A，在重链上的Met93和Gly94，和在轻链上的Ser57)的维持，因为它们接近CDR。建模预测，用人等效物替换这些小鼠氨基酸可能损害所述抗体与KAAG1抗原的结合。在3C4的情况下，6个氨基酸被认为是罕见的(图18B,在重链上的Glu1、Gln72和Ser98，和在轻链上的Thr46、Phe49和Ser87)。在两个图中，轻链CDR分别用L1、L2和L3指示CDR1、CDR2和CDR3，而重链CDR分别用H1、H2和H3指示CDR1、CDR2和CDR3。
编码完整的抗-KAAG13D3免疫球蛋白轻链和重链的序列分别如SEQ ID NO.:176和177所示。人源化的3D3轻链的可变区包含在SEQ ID NO.:176的氨基酸21-133之间，且如SEQ ID NO.:178所示。人源化的3D3重链的可变区包含在SEQ ID NO.:177的氨基酸20-132之间，且如SEQ ID NO.:179所示。编码完整的抗-KAAG13C4免疫球蛋白轻链和重链的序列分别如SEQ ID NO.:180和181所示。人源化的3C4轻链的可变区包含在SEQ ID NO.:180的氨基酸21-127之间，且如SEQ ID NO.:182所示。人源化的3C4重链的可变区包含在SEQ ID NO.:181的氨基酸19-136之间，且如SEQ ID NO.:183所示。
在装配表达载体并在转染的哺乳动物细胞中产生h3D3后(参见实施例5)，进行几个试验来证实人源化过程的生物等效性。由于需要具有效应子功能的抗体，将h3D3装配为人IgG1。进行基于ELISA的试验，以直接地对比h3D3和重组KAAG1的能力。用于执行这些实验的方法如实施例3所述，其中使用重组Fc-KAAG1。如图19A所示，h3D3的结合活性与嵌合的3D3相同。
在Biacore仪器中，使用表面等离子体共振(SPR)，进行更精确的测量。使用动力学分析来对比嵌合的3D3和h3D3以及包括轻链和 重链的不同置换的杂交抗体的亲和力(参见图19B)。简而言之，将抗-人Fc固定化在Biacore传感器芯片上，并将嵌合的或h3D3捕获在芯片上。注射不同浓度的单体重组KAAG1，并将数据全部拟合成简单的1:1模型，以确定相互作用的动力学参数。嵌合的3D3的动力学参数如图19B(m3D3)所示。嵌合的3D3的平均KD是2.35x 10-10M。形成对比的是，嵌合的(C)/人源化的(H)所有置换表现出非常类似的动力学参数。与嵌合重链一起表达的嵌合轻链(在图19B中指示为‘CC’)的平均KD是2.71x 10-10M，与嵌合重链一起表达的人源化轻链(在图19B中指示为‘HC’)的平均KD是3.09x 10-10M，与人源化重链一起表达的嵌合轻链(在图19B中指示为‘CH’)的平均KD是5.05x 10-10M，与人源化重链一起表达的人源化轻链(在图19B中指示为‘HH’)的平均KD是4.39x 10-10M。分析指示，3D3的人源化保持最初的小鼠抗体的结合活性。
在球状体培养试验中评价了h3D3的生物学功能(参见实施例6)。在h3D3或非-KAAG1结合同种型对照抗体存在下，在5％FBS存在下，培养SKOV-3卵巢癌细胞。结果(如图19C所示)指示，用缓冲液或非相关的IgG处理不会抑制致密的3-D结构的形成。相反，嵌合的3D3和人源化的3D3阻止球状体形成。一式两份地显示所述结果(左图和右图)。这些结果指示，嵌合的3D3的生物活性在人源化的3D3中得到保持，并提示，h3D3会以相同的方式起作用。
【引用的参考文献】
● Jemal A,Murray T,Ward E,Samuels A,Tiwari RC,Ghafoor A,Feuer EJ和Thun MJ.Cancer statistics,2005.CA Cancer J Clin 2005；55:10-30.
● Menon U,Skates SJ,Lewis S,Rosenthal AN,Rufford B,Sibley K,Macdonald N,Dawnay A,Jeyarajah A,Bast RC Jr,Oram D和Jacobs IJ.Prospective study using the risk of ovarian cancer algorithm to screen for ovarian cancer.J Clin Oncol.2005； 23(31):7919-26. 
● Bonome T,Lee JY,Park DC,Radonovich M,Pise-Masison C,Brady J,Gardner GJ,Hao K,Wong WH,Barrett JC,Lu KH,Sood AK,Gershenson DM,Mok SC和Birrer MJ.Expression profiling of serous low malignancy potential,low grade,and high-grade tumors of the ovary.Cancer Res 2005；65:10602-10612.
● Chambers,A和Vanderhyden,B.Ovarian Cancer Biomarkers in Urine.Clin Cancer Res 2006；12(2):323-327.
● Berek等人Cancer Medicine.5th ed.London:B.C.Decker,Inc.；2000.pp.1687-1720.
● Bristow R.E.Surgical standards in the management of ovarian cancer.Curr Opin Oncol 2000；12:474-480.
● Brown E,Stewart M,Rye T,Al-Nafussi A,Williams AR,Bradburn M,Smyth J和Gabra H.Carcinosarcoma of the ovary:19years of prospective data from a single center.Cancer 2004；100:2148-2153.
● Shih L-M和Kurman RJ.Molecular Pathogenesis of Ovarian Borderline Tumors:New Insights and Old Challenges.Clin Cancer Res2005；11(20):7273-7279.
● Seidman JD,Russell P,Kurman RJ.Surface epithelial tumors of the ovary.In:Kurman RJ,editor.Blaustein’s pathology of the female genital tract.5th ed.New York:Springer-Verlag；2002.pp.791-904.
● Cannistra SA和McGuire WP.Progress in the management of  gynecologic cancer.J.Clin.Oncol.2007；25(20):2865-2866.
● Oei AL,Sweep FC,Thomas CM,Boerman OC,Massuger LF.The use of monoclonal antibodies for the treatment of epithelial ovarian cancer.Int.J.Oncol.2008；32(6):1145-1157.
● Nicodemus CF和Berek JS.Monoclonal antibody therapy of ovarian cancer.Expert Rev.Anticancer Ther.2005；5(1):87-96.
● Burger RA.Experience with bevacizumab in the management of epithelial ovarian cancer.J.Clin.Oncol.2007；25(20):2902-2908.
● Simon I,Zhuo S,Corral L,Diamandis EP,Sarno MJ,Wolfert RL,Kim NW.B7-H4is a novel membrane-bound protein and a candidate serum and tissue biomerker for ovarian cancer.Cancer Res.2006；66(3):1570-1575.
● Ebel W,Routhier EL,Foley B,Jacob S,McDonough JM,Patel RK,Turchin HA,Chao Q,Kline JB,Old LJ,Phillips MD,Nicolaides NC,Sass PM,Grasso L.Preclinical evaluation of MORab-003,a humanized monoclonal antibody antagonizing folate receptor-alpha.Cancer Immun.2007；7:6-13.
● Van den Eynde BJ,Gaugler B,Probst-Kepper M,Michaux L,Devuyst O,Lorge F,Weynants P,Boon T.A new antigen recognized by cytotoxic T lymphocytes on a human kidney tumor results from reverse strand transcription.J.Exp.Med.1999；190(12):1793-1799.
● Sooknanan R,Tremblay GB,Filion M.Polynucleotides and polypeptide sequences involved in cancer.2007；PCT/CA2007/001134.
● Schumacher J,Anthoni H,Dahdouh F,IR,Hillmer AM,Kluck N,Manthey M,Plume E,Warnke A,Remschmidt H,Hülsmann J,Cichon S,Lindgren CM,Propping P,Zucchelli M,Ziegler A,Peyrard-Janvid M,G,MM,Kere J.Strong genetic evidence of DCDC2as a susceptibility gene for dyslexia.Am.J.Hum.Genet.2006；78:52-62.
● Cope N,Harold D,Hill G,Moskvina V,Stevenson J,Holmans P,Owen MJ,O'Donovan MC,Williams J.Strong evidence that KIAA0319on chromosome 6p is a susceptibility gene for developmental dyslexia.Am.J.Hum.Genet.2005；76:581-591.
● Mor G,Visintin I,Lai Y,Zhao H,Schwartz P,Rutherford T,Yue L,Bray-Ward P和Ward DC Serum protein markers for early detection of ovarian cancer.PNAS 2005；102:7677-7682.
● Kozak KR,Amneus MW,Pusey SM,Su F,Luong MN,Luong SA,Reddy ST和Farias-Eisner R.Identification of biomarkers for ovarian cancer using strong anion-exchange ProteinChips:potential use in diagnosis and prognosis.PNAS 2003；100:12343-12348.
● MH,Hudson TJ,Maire G,Squire JA,Arcand SL,Provencher D,Mes-Masson AM,Tonin PN.Global analysis of chromosome X gene expression in primary cultures of normal ovarian surface epithelial cells and epithelial ovarian cancer cell lines.Int.J.Oncol.2007；30(1):5-17.
● Cody NA,Zietarska M,Filali-Mouhim A,Provencher DM, Mes-Masson AM,Tonin PN.Influence of monolayer,spheroid,and tumor growth conditions on chromosome 3gene expression in tumorigenic epithelial ovarian cancer cell lines.BMC Med.Genomics 2008；1(1):34.
● Buechler J,Valkirs G,Gray J.Polyvalent display libraries.2000；U.S.6,057,098.
● Durocher Y,Kamen A,Perret S,Pham PL.Enhanced production of recombinant proteins by transient transfection of suspension-growing mammalian cells.2002；Canadian patent application No.CA 2446185. 
● Durocher Y.Expression vectors for enhanced transient gene expression and mammalian cells expressing them.2004；U.S.patent application No.60/662,392. 
【在说明书中提及的序列】
【SEQ ID NO:1】
GAGGGGCATCAATCACACCGAGAAGTCACAGCCCCTCAACCACTGAGGTGTGGGGGGGTAGGGATCTGCATTTCTTCATATCAACCCCACACTATAGGGCACCTAAATGGGTGGGCGGTGGGGGAGACCGACTCACTTGAGTTTCTTGAAGGCTTCCTGGCCTCCAGCCACGTAATTGCCCCCGCTCTGGATCTGGTCTAGCTTCCGGATTCGGTGGCCAGTCCGCGGGGTGTAGATGTTCCTGACGGCCCCAAAGGGTGCCTGAACGCCGCCGGTCACCTCCTTCAGGAAGACTTCGAAGCTGGACACCTTCTTCTCATGGATGACGACGCGGCGCCCCGCGTAGAAGGGGTCCCCGTTGCGGTACACAAGCACGCTCTTCACGACGGGCTGAGACAGGTGGCTGGACCTG GCGCTGCTGCCGCTCATCTTCCCCGCTGGCCGCCGCCTCAGCTCGCTGCTTCGCGTCGGGAGGCACCTCCGCTGTCCCAGCGGCCTCACCGCACCCAGGGCGCGGGATCGCCTCCTGAAACGAACGAGAAACTGACGAATCCACAGGTGAAAGAGAAGTAACGGCCGTGCGCCTAGGCGTCCACCCAGAGGAGACACTAGGAGCTTGCAGGACTCGGAGTAGACGCTCAAGTTTTTCACCGTGGCGTGCACAGCCAATCAGGACCCGCAGTGCGCGCACCACACCAGGTTCACCTGCTACGGGCAGAATCAAGGTGGACAGCTTCTGAGCAGGAGCCGGAAACGCGCGGGGCCTTCAAACAGGCACGCCTAGTGAGGGCAGGAGAGAGGAGGACGCACACACACACACACACACAAATATGGTGAAACCCAATTTCTTACATCATATCTGTGCTACCCTTTCCAAACAGCCTA 
【SEQ ID NO:2】
MDDDAAPRVEGVPVAVHKHALHDGLRQVAGPGAAAAHLPRWPPPQLAASRREAPPLSQRPHRTQGAGSPPETNEKLTNPQVKEK 
【SEQ ID NO:3】
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【SEQ ID NO:4】
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【SEQ ID NO:5】
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【SEQ ID NO:8】
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【SEQ ID NO:9】
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGTTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGTAAGGCTTCTGGATACACCTTCACTGACAACTACATGAACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTAATCCTTACTATGGTACTACTACCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCCGCACAGCCTACATGGAGCTCCGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGATGACTGGTTTGATTATTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCTGTCTTTCCCCTGGCCCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAATTCACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAA CCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA 
【SEQ ID NO:10】
EIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDNYMNWVKQSHGKSLEWIGDINPYYGTTTYNQKFKGKATLTVDKSSRTAYMELRGLTSEDSAVYYCARDDWFDYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEFTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 
【SEQ ID NO:11】
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【SEQ ID NO:62】
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【SEQ ID NO:63】
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【SEQ ID NO:64】
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGACATCGTTATGTCTCAGTCTCC
【SEQ ID NO:65】
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【SEQ ID NO:66】
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【SEQ ID NO:67】
GTAAGCGAATTCACAAGATTTGGGCTCAACTTTCTTG
【SEQ ID NO:68】
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【SEQ ID NO:69】
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC 
【SEQ ID NO:70】
CTTGAGCCGGCGGATGGTCGAGGTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATTACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAG GAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAAGTTTGCCGCCACCATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACTGGCGGAGACGGAGCTTACGGGCCCATCTGTCTTTCCCCTGGCCCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAATTCACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAATGATCCCCCGACCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAA TTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGCCCCGCCGCCGGACGAACTAAACCTGACTACGGCATCTCTGCCCCTTCTTCGCGGGGCAGTGCATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAGTAGTATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGTTACCCAACGGGAAGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTAAGGAACAGCGATGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCTGCGATCTGGAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGGTTGTTGGTCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTAATAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTCACGATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTAATTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCC CTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCT ACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGTACATTTATATTGGCTCATGTCCAATATGACCGCCATGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGG ACTTTCCAAAATGTCGTAAT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【SEQ ID NO:71】
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【SEQ ID NO:72】
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【SEQ ID NO:73】
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【SEQ ID NO.:91】:CDRL1的示例性实施方案
K-S-S-Q-S-L-L-N/H-S/T-S/N/D-N/G-Q/N/K-K/L-N-Y-L-A
【SEQ ID NO.:92】:CDRL1的示例性实施方案
K-A-S-Q-D-I-H-N/T-Y/F-L-N
【SEQ ID NO93】:CDRL2的示例性实施方案
F-A-S-T-R-E-S
【SEQ ID NO.:94】:CDRL2的示例性实施方案
L-V-S-K-L-D-S
【SEQ ID NO.:95】:CDRL2的示例性实施方案
R-A-N-R-L-V-D
【SEQ ID NO.:96】:CDRL3的示例性实施方案
Q-Q-H-Y-S-T-P-L-T
【SEQ ID NO.:97】:CDRL3的示例性实施方案
W/L-Q-Y/G-D/T-A/E/H-F-P-R-T
【SEQ ID NO.:98】:CDRH11的示例性实施方案
G-Y-T/I-F-T-D/E-Y-E/N-M/I/V-H
【SEQ ID NO.:99】:CDRH1的示例性实施方案
G-F-T/S-I-T-S-G-Y-G-W-H
【SEQ ID NO.:100】:CDRH2的示例性实施方案
V/N/G-I/L-D-P-E/A/G-T/Y-G-X-T-A
【SEQ ID NO.:101】:CDRH2的示例性实施方案
Y-I-N/S-F/Y-N/D-G
【SEQ ID NO.:102】:CDRH3的示例性实施方案
M-G-Y-S/A-D-Y
【SEQ ID NO.:103】:CDRH3的示例性实施方案
A-S-S-Y-D-G-F-L-A-Y
【SEQ ID NO.:104】:CDRH3的示例性实施方案
A-R/W-W/F-G-L-R-Q/N
【SEQ ID NO:158】
KSSQSLLHSDGKTYLN
【SEQ ID NO:159】
LVSKLDS
【SEQ ID NO:160】
WQGTHFPRT
【SEQ ID NO:161】
GYTFTD YNMH
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YINPYNDVTE
【SEQ ID NO:163】
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【SEQ ID NO:165】
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【SEQ ID NO:167】
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WTSTRHT
【SEQ ID NO:172】
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【SEQ ID NO:173】
GYIFTDYEIH
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【SEQ ID NO:176】
MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSNFQKNFLAWYQQKPGQPPKLLIYFASTRESSVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQHYSTPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 
【SEQ ID NO:177】
MDWTWRILFLVAAATGTHAEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTDYEIHWVRQAPGQGLEWMGVIDPETGNTAFNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLTSEDTAVYYCMGYSDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 
【SEQ ID NO:178】
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【SEQ ID NO:179】
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【SEQ ID NO:180】
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【SEQ ID NO:181】
MDWTWRILFLVAAATGTHAEVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSITSGYGWHWIRQHPGKGLEWIGYINYDGHNDYNPSLKSRVTISQDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASSYDGLFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 
【SEQ ID NO:182】
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDIHNFLNWFQQKPGKAPKTLIFRANRLVDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYSCLQYDEIPLTFGQGTKLEIK 
【SEQ ID NO:183】
EVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSITSGYGWHWIRQHPGKGLEWIGYINYDGHNDYNPSLKSRVTISQDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASSYDGLFAYWGQGTLVTVS 

Claims (17)

1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其包含具有与SEQ ID NO:18有至少80％相同的序列的重链可变域和具有与SEQ ID NO:16有至少80％相同的序列的轻链可变域，其中所述抗体或其抗原结合片段能特异性地结合肾相关抗原1(KAAG1)，并且选自下组中:
a.包含在SEQ ID NO.:110中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:135中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
b.包含在SEQ ID NO.:111中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:136中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
c.包含在SEQ ID NO.:112中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:149中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
d.包含在SEQ ID NO.:113中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:137中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
e.包含在SEQ ID NO.:114中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:140中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
f.包含在SEQ ID NO.:115中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:141中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
g.包含在SEQ ID NO.:116中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:142中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
h.包含在SEQ ID NO.:117中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:139中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
i.包含在SEQ ID NO.:119中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:143中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
j.包含在SEQ ID NO.:120中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:152中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
k.包含在SEQ ID NO.:121中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:146中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
l.包含在SEQ ID NO.:122中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:138中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，
m.包含在SEQ ID NO.:118中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:147中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段，和
n.包含在SEQ ID NO.:123中定义的轻链可变域的3个互补决定区和在SEQ ID NO.:150中定义的重链可变域的3个互补决定区的抗体或抗原结合片段。
2.权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段选自下组中:
a.包含在SEQ ID NO.:110中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:135中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
b.包含在SEQ ID NO.:111中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:136中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
c.包含在SEQ ID NO.:112中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:149中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
d.包含在SEQ ID NO.:113中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:137中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
e.包含在SEQ ID NO.:114中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:140中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
f.包含在SEQ ID NO.:115中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:141中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
g.包含在SEQ ID NO.:116中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:142中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
h.包含在SEQ ID NO.:117中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:139中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
i.包含在SEQ ID NO.:119中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:143中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
j.包含在SEQ ID NO.:120中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:152中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
k.包含在SEQ ID NO.:121中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:146中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
l.包含在SEQ ID NO.:122中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:138中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，
m.包含在SEQ ID NO.:118中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:147中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段，和
n.包含在SEQ ID NO.:123中定义的轻链可变域和在SEQ IDNO.:150中定义的重链可变域的的抗体或抗原结合片段。
3.能特异性结合肾相关抗原1(KAAG1)的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.包含具有SEQ ID NO.:36序列的CDRH1、具有SEQ ID NO.:37序列的CDRH2和具有SEQ ID NO.:38序列的CDRH 3的重链可变域，以及包含具有SEQ ID NO.:33序列的CDRL1、具有SEQ ID NO.:34序列的CDRL2和具有SEQ ID NO.:35序列的CDRL3的轻链可变域；
b.包含与SEQ ID NO:22至少80％相同的序列的重链可变域和包含与SEQ ID NO:20至少80％相同的序列的轻链可变域；和
c.包含与SEQ ID NO:10至少80％相同的序列的重链和包含与SEQ ID NO:8至少80％相同的序列的轻链。
4.能特异性结合肾相关抗原1(KAAG1)的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
a.包含具有SEQ ID NO.:42序列的CDRH1、具有SEQ ID NO.:43序列的CDRH2和具有SEQ ID NO.:44序列的CDRH 3的重链可变域，以及包含具有SEQ ID NO.:39序列的CDRL1、具有SEQ ID NO.:40序列的CDRL2和具有SEQ ID NO.:41序列的CDRL3的轻链可变域；
b.包含与SEQ ID NO:26至少80％相同的序列的重链可变域和包含与SEQ ID NO:24至少80％相同的序列的轻链可变域；
c.包含与SEQ ID NO:183至少80％相同的序列的重链可变域和包含与SEQ ID NO:182至少80％相同的序列的轻链可变域；
d.包含与SEQ ID NO:14至少80％相同的序列的重链和包含与SEQ ID NO:12至少80％相同的序列的轻链；和
e.包含与SEQ ID NO:181至少80％相同的序列的重链和包含与SEQ ID NO:180至少80％相同的序列的轻链。
5.一种分离的抗体或抗原结合片段，其中包含：
a.具有如下序列的轻链可变域:DIVMTQSPXSLAVS+G++XT+NCKSSQSLLNSNFQKNFLAWYQQKPGQXPKLLIYFASTRESS+PDRFXGSGSGTDFTLTISS+QAED+AXY+CQQHYSTPLTFGXGTKLE+K,其中+是SEQ ID NO:16内对应氨基酸的保守性取代，并且其中X是在SEQ ID NO.:16或SEQ IDNO.:178中相应位置处存在的氨基酸；
b.具有如下序列的重链可变域:EVQLXQSXAE+X+PGASVX+SCKASGYIFTDYEIHWV+QXPXXGLEW+GVIDPETGNTAFNQKFKG+XT+TADXS+STAYMELSSLTSED+AVYYCMGYSDYWGQGTX+TVSS,其中+是SEQ ID NO:18内对应氨基酸的保守性取代，并且其中X是在SEQ ID NO.:18或SEQ IDNO.:179中相应位置处存在的氨基酸。
6.权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人抗体的恒定区。
7.权利要求1-6中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是：单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或它们的抗原结合片段。
8.权利要求1-7中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段缀合了治疗部分或可检测部分。
9.一种组合物，其包含如权利要求1-8中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段和载体。
10.一种试剂盒，其包含如权利要求1-8中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段。
11.一种核酸，其包含编码权利要求1-7中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段的序列。
12.一种载体，其包含权利要求11的核酸。
13.一种分离的细胞，其包含权利要求11的核酸、权利要求12的载体，或者包含或表达权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
14.权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于检测KAAG1或其KAAG1变体的用途。
15.权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备用于体内检测KAAG1或其KAAG1变体的组合物中的用途。
16.权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备用于检测KAAG1或其KAAG1变体的试剂盒中的用途。
17.权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备组合物中的用途，其中所述组合物用于治疗包含表达KAAG1或其KAAG1变体的细胞的癌症。
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Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120128661A1 (en) * 2006-06-23 2012-05-24 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotide and polypeptide sequences involved in cancer
DK2032701T3 (da) 2006-06-23 2014-02-10 Alethia Biotherapeutics Inc Polynukleotider og polypeptider, der er inddraget i cancer
KR20110084280A (ko) 2008-11-03 2011-07-21 알레시아 바이오쎄라퓨틱스 인코포레이티드 종양 항원의 생물 활성을 특이적으로 차단하는 항체
CA2829960A1 (en) 2011-03-11 2012-09-20 John Rothman Listeria-based adjuvants
KR101993259B1 (ko) 2011-03-31 2019-06-27 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 신장 결합 항원 １에 대한 항체 및 이의 항원 결합 단편
EA201992513A1 (ru) * 2012-01-09 2020-05-31 Адс Терапьютикс Са Способ лечения рака груди
KR102338833B1 (ko) * 2012-02-06 2021-12-13 인히브릭스, 인크. Cd47 항체 및 그 사용 방법
JP2015511602A (ja) 2012-03-12 2015-04-20 アドバクシス， インコーポレイテッド リステリアワクチン処理後のサプレッサー細胞機能抑制
SG11201407106XA (en) * 2012-05-01 2014-11-27 Genentech Inc Anti-pmel17 antibodies and immunoconjugates
EP2888283B1 (en) 2012-08-24 2018-09-19 The Regents of The University of California Antibodies and vaccines for use in treating ror1 cancers and inhibiting metastasis
JP6359031B2 (ja) * 2012-12-21 2018-07-18 メディミューン，エルエルシー 抗ｈ７ｃｒ抗体
JP6505076B2 (ja) 2013-03-14 2019-04-24 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｈｃｖ抗原−抗体組み合わせアッセイおよびこれに使用するための方法および組成物
JP2016512241A (ja) 2013-03-14 2016-04-25 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 改良された抗体検出のためのｈｃｖｎｓ３組換え抗原およびこの突然変異体
MX2015012825A (es) 2013-03-14 2016-06-10 Abbott Lab Anticuerpos monoclonales del dominio de union de lipido del núcleo del virus de la hepatitis c vhc.
WO2015031645A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Washington University Monoclonal antibodies to human 14-3-3 epsilon and human 14-3-3 epsilon sv
WO2015185478A1 (en) * 2014-06-02 2015-12-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-neurotensin long fragment antibodies and uses thereof
ES2904573T3 (es) 2015-03-27 2022-04-05 Univ Southern California Terapia con células T dirigida a LHR para el tratamiento de tumores sólidos
AU2016270474A1 (en) 2015-06-04 2018-01-04 University Of Southern California Lym-1 and Lym-2 targeted CAR cell immunotherapy
US10759859B2 (en) 2016-01-14 2020-09-01 Bps Bioscience, Inc. Anti-PD-1 antibodies and uses thereof
WO2018005519A2 (en) 2016-06-27 2018-01-04 The Regents Of The University Of California Cancer treatment combinations
CN111257482B (zh) * 2018-11-30 2021-11-09 中国科学院大连化学物理研究所 一种细胞内mtdh结合代谢物的鉴定方法
CA3129501A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 University Of Southern California Lym-1 and lym-2 antibody compositions and improved car constructs
CA3140914A1 (en) * 2019-05-24 2020-12-03 Elixiron Immunotherapeutics (hong Kong) Limited Anti-csf1r antibodies, il10 fusion proteins, and uses thereof
WO2024044722A1 (en) * 2022-08-24 2024-02-29 City Of Hope Drip-antibodies and use thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2615858A1 (en) * 2005-07-18 2007-01-25 Epigenomics Ag Compositions and methods for cancer diagnostics comprising pan-cancer markers
WO2007147265A1 (en) * 2006-06-23 2007-12-27 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotides and polypeptide sequences involved in cancer

Family Cites Families (190)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ207394A (en) * 1983-03-08 1987-03-06 Commw Serum Lab Commission Detecting or determining sequence of amino acids
DK365785A (da) 1984-09-17 1986-03-18 Hoffmann La Roche Metalcomplexer
US5075447A (en) 1984-09-17 1991-12-24 Hoffmann-La Roche Inc. Ruthenium complexes useful as carriers for immunologically active materials
US5585279A (en) 1986-01-23 1996-12-17 Davidson; Robert S. Time-resolved luminescence binding assays using a fluorescent transition metal label other than ruthenium
GB8601646D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Davidson R S Binding assay & reagent
US6018030A (en) 1986-11-04 2000-01-25 Protein Polymer Technologies, Inc. Peptides comprising repetitive units of amino acids and DNA sequences encoding the same
MX9203454A (es) 1989-12-28 1992-08-01 Upjohn Co Compuestos anti sida diaromaticos substituidos.
IL105325A (en) 1992-04-16 1996-11-14 Minnesota Mining & Mfg Immunogen/vaccine adjuvant composition
WO1996013510A1 (en) 1994-10-28 1996-05-09 Procept, Inc. Ruthenium complexes and their use as immunosuppressive agents
US5708022A (en) 1994-10-28 1998-01-13 Procept, Inc. Method for inhibiting immune response
US5712127A (en) 1996-04-29 1998-01-27 Genescape Inc. Subtractive amplification
US5831003A (en) 1996-06-28 1998-11-03 Bayer Corporation Peptides which bind to prothrombin and thrombin
US6057098A (en) 1997-04-04 2000-05-02 Biosite Diagnostics, Inc. Polyvalent display libraries
EP0991777A1 (en) 1997-06-18 2000-04-12 Ulrich J. Krull Nucleic acid biosensor diagnostics
WO1999031513A1 (en) 1997-12-15 1999-06-24 Lakowicz Joseph R Method and composition for characterizing a sample containing a sample lipid and an assay kit
US6759243B2 (en) 1998-01-20 2004-07-06 Board Of Trustees Of The University Of Illinois High affinity TCR proteins and methods
US6472367B1 (en) 1998-05-05 2002-10-29 Adherex Technologies, Inc. Compounds and methods for modulating OB-cadherin mediated cell adhesion
GB2361237A (en) 1998-05-13 2001-10-17 Diversys Ltd Selection system
AU3900399A (en) 1998-05-13 1999-11-29 Ludwig Institute For Cancer Research Tumor associated antigen encoded by the reverse strand of a new ubiquitously expressed gene
US7037667B1 (en) 1998-06-01 2006-05-02 Agensys, Inc. Tumor antigen useful in diagnosis and therapy of prostate and colon cancer
US7521197B2 (en) 1998-06-05 2009-04-21 Alexis Biotech Limited Method for producing cytotoxic T-cells
US20020106678A1 (en) 1998-06-30 2002-08-08 Robishaw Janet D. cDNA clones encoding human G protein gamma subunits
JP2002519428A (ja) 1998-07-02 2002-07-02 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド プレニル−タンパク質トランスフェラーゼの阻害剤
US6288221B1 (en) 1998-08-20 2001-09-11 Duke University Methods of synthesis of halogen base-modified oligonucleotides and subsequent labeling with a metal-catalyzed reaction
WO2000014515A1 (en) 1998-09-08 2000-03-16 University Of Maryland At Baltimore Low frequency modulation sensors using nanosecond fluorophores
US6806089B1 (en) 1998-09-08 2004-10-19 University Of Maryland, Baltimore Low frequency modulation sensors using nanosecond fluorophores
JP4780834B2 (ja) 1998-10-22 2011-09-28 フィリップ・ビー・ビー・モヘノ 新規なプテリン抗新生物薬
WO2000025788A1 (en) 1998-10-29 2000-05-11 Merck & Co., Inc. Inhibitors of prenyl-protein transferase
CA2367282A1 (en) 1999-03-19 2000-09-28 Simon Fricker Pharmaceutical compositions comprising metal complexes
US6872519B1 (en) 1999-04-27 2005-03-29 Mirus Bio Corporation In vitro process for selecting phage resistant to blood inactivation
US20090087878A9 (en) 1999-05-06 2009-04-02 La Rosa Thomas J Nucleic acid molecules associated with plants
GB9916529D0 (en) 1999-07-14 1999-09-15 Chiron Spa Antigenic peptides
RU2002110295A (ru) 1999-09-17 2003-12-10 Милленниум Фармасьютикалс, Инк. (Us) Ингибиторы фактора Ха
WO2001046209A1 (en) 1999-12-20 2001-06-28 Fluorrx, Inc. Fluorescent probes
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US7585839B2 (en) 2000-02-23 2009-09-08 Zealand Pharma A/S Medical uses of intercellular communication facilitating compounds
US20030215860A1 (en) 2000-02-29 2003-11-20 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18636, 2466, 43238, 1983, 52881, 2398, 45449, 50289, 52872 and 26908 molecules and uses therefor
WO2001070979A2 (en) 2000-03-21 2001-09-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Genes, compositions, kits, and method for identification, assessment, prevention and therapy of ovarian cancer
US6436703B1 (en) 2000-03-31 2002-08-20 Hyseq, Inc. Nucleic acids and polypeptides
US7834146B2 (en) 2000-05-08 2010-11-16 Monsanto Technology Llc Recombinant polypeptides associated with plants
WO2001098468A2 (en) 2000-06-16 2001-12-27 Incyte Genomics, Inc. Proteases
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20050053930A1 (en) 2000-07-18 2005-03-10 David Anderson Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
US6812339B1 (en) 2000-09-08 2004-11-02 Applera Corporation Polymorphisms in known genes associated with human disease, methods of detection and uses thereof
GB0023008D0 (en) 2000-09-20 2000-11-01 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7264810B2 (en) 2001-01-19 2007-09-04 Cytos Biotechnology Ag Molecular antigen array
TWI329129B (en) 2001-02-08 2010-08-21 Wyeth Corp Modified and stabilized gdf propeptides and uses thereof
US6783969B1 (en) 2001-03-05 2004-08-31 Nuvelo, Inc. Cathepsin V-like polypeptides
US7030236B2 (en) 2001-03-09 2006-04-18 Mona Savitri Jhaveri Antisense oligonucleotides tarageting folate receptor alpha, and the use thereof
US20030087250A1 (en) 2001-03-14 2003-05-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
US20030065157A1 (en) 2001-04-04 2003-04-03 Lasek Amy W. Genes expressed in lung cancer
EP1573024A4 (en) 2001-04-10 2007-08-29 Agensys Inc NUCLEIC ACIDS AND SUITABLE PROTEINS SUITABLE FOR THE TREATMENT AND EVIDENCE OF VARIOUS CANCER DISEASES
JP2005527180A (ja) 2001-04-18 2005-09-15 プロテイン デザイン ラブス， インコーポレイテッド 肺がんの診断方法、肺がんの修飾因子の組成及びスクリーニングの方法
CA2446185C (en) 2001-05-07 2013-06-18 National Research Council Of Canada Enhanced production of recombinant proteins by transient transfection of suspension-growing mammalian cells
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
MXPA03011979A (es) 2001-06-18 2005-04-08 Eos Biotechnology Inc Metodos de diagnostico de cancer de ovario composiciones y metodos para rastrear moduladores de cancer de ovario.
US20040053824A1 (en) 2001-06-29 2004-03-18 Tang Y Tom Extracellular matrix and cell adhesion molecules
US20030099974A1 (en) 2001-07-18 2003-05-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
EP1420809B1 (en) 2001-08-31 2011-09-28 BTG International Limited Use of cyclopenta[g]quinazoline derivatives for treating cancer
WO2003020748A1 (en) 2001-08-31 2003-03-13 Btg International Limited Anti-cancer cyclopenta[g]quinazoline compounds
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7622260B2 (en) 2001-09-05 2009-11-24 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Diagnostic and prognostic tests
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
AP2004003052A0 (en) 2001-11-19 2004-06-30 Elan Pharm Inc 3,4-Disubstituted, 3,5-disubstituted and 3,4,5-substituted piperidines and piperazines.
WO2003047526A2 (en) 2001-11-30 2003-06-12 Incyte Genomics, Inc. Cell adhesion and extracellular matrix proteins
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
US7803749B2 (en) 2002-01-09 2010-09-28 Xigen Sa Peptide inhibitors of MKK7 kinase binding to insulin binding proteins
EP1465933B1 (en) 2002-01-16 2007-08-29 Biocompatibles UK Limited Polymer conjugates
DK1478328T3 (da) 2002-01-28 2013-07-22 Keraplast Tech Ltd Bioaktive keratinpeptider
US6962910B2 (en) 2002-02-01 2005-11-08 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Supramolecular complexes as photoactivated DNA cleavage agents
WO2003068054A2 (en) 2002-02-13 2003-08-21 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health Services Identification of ovarian cancer tumor markers and therapeutic targets
DE10206616A1 (de) 2002-02-15 2003-09-04 Qiagen Gmbh Verfahren zur Reduktion der Background-Kontamination nach Markierungsreaktionen
AU2003228267A1 (en) 2002-03-05 2003-09-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods of enhancing immune induction involving mda-7
WO2003087768A2 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
EP1575491A4 (en) 2002-05-20 2006-09-27 Abgenix Inc TREATMENT OF RENAL CARCINOMA USING ANTIBODIES AGAINST THE EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR
AU2003295328A1 (en) 2002-10-02 2004-04-23 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1422242A1 (en) 2002-11-22 2004-05-26 Emory University Plastic and elastic protein copolymers
WO2004076622A2 (en) 2003-02-10 2004-09-10 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Regulation of gene expression by dna interference
WO2004087874A2 (en) 2003-03-28 2004-10-14 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20060229433A1 (en) 2003-05-20 2006-10-12 Cellpep Sa Modified antiviral peptides with increased activity and cell membrane affinity
US20070274947A1 (en) 2003-05-21 2007-11-29 Young Aiping H Antisense Oligonucleotides Directed to Ribonucleotide Reductase R1 and Uses Thereof in the Treatment of Cancer
US20050008649A1 (en) * 2003-06-02 2005-01-13 University Of Miami Chimeric molecules and methods of use
US20060078941A1 (en) 2003-06-09 2006-04-13 Santin Alessandro D Gene expression profiling in primary ovarian serous papillary tumors and normal ovarian epithelium
US20070027075A1 (en) 2003-06-09 2007-02-01 Smithrud David B Compositions and methods for targeted drug delivery
GB0314472D0 (en) 2003-06-20 2003-07-23 Warwick Effect Polymers Ltd Polymer
GB0318096D0 (en) 2003-08-01 2003-09-03 Queen Mary & Westfield College Vaccine
DE10335833A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Curevac Gmbh Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie
US20070178458A1 (en) 2003-09-05 2007-08-02 O'brien Philippa Methods of diagnosis and prognosis of ovarian cancer II
US20050147621A1 (en) 2003-10-10 2005-07-07 Higgins Darren E. Use of bacterial 5' untranslated regions for nucleic acid expression
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
WO2005039504A2 (en) 2003-10-24 2005-05-06 Eisai Co., Ltd. Compounds and methods for treating toll-like receptor 2-related diseases and conditions
US20050153333A1 (en) 2003-12-02 2005-07-14 Sooknanan Roy R. Selective terminal tagging of nucleic acids
EP1550458A1 (en) 2003-12-23 2005-07-06 Vectron Therapeutics AG Synergistic liposomal adjuvants
EP1547581A1 (en) 2003-12-23 2005-06-29 Vectron Therapeutics AG Liposomal vaccine for the treatment of human hematological malignancies
WO2005070456A2 (en) 2004-01-09 2005-08-04 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Diagnosing and treating female reproductive tract or chilhood cancer with pmsa antibodies
US20090169520A1 (en) 2004-01-09 2009-07-02 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Compounds, Pharmaceutical Compositions and Therapeutic Methods of Preventing and Treating Diseases and Disorders Associated With Amyloid Fibril Formation
US7655402B2 (en) 2004-02-06 2010-02-02 Wyeth Llc Diagnoses and therapeutics for cancer
EP2026071B1 (en) 2004-02-19 2013-07-31 Yale University Identification of cancer protein biomarkers using proteomic techniques
KR20070007128A (ko) 2004-03-01 2007-01-12 펩테라 파마슈티컬스 엘티디. 카제인 파생 펩타이드들과 그의 치료적 사용들
JP5017107B2 (ja) 2004-07-06 2012-09-05 ワーウィック イフェクト ポリマーズ リミテッド ポリペプチド等と反応し得る官能基を含むリビングラジカル重合開始剤、それを用いて得られる櫛形ポリマー、それから得られるポリペプチド複合体及び薬剤
US7772271B2 (en) 2004-07-14 2010-08-10 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating hepatitis C
WO2007084413A2 (en) 2004-07-14 2007-07-26 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating hepatitis c
US7553944B2 (en) 2004-07-21 2009-06-30 The University Of Hong Kong Human virus causing respiratory tract infection and uses thereof
US20080280317A1 (en) 2004-08-27 2008-11-13 Northeastern University Comprehensive Characterization Of Complex Proteins At Trace Levels
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
WO2006027202A1 (en) 2004-09-06 2006-03-16 Unite De Recherche En Biotherapie Et Oncologie (Rubio) Generation of multiparent cell hybrids
WO2006029385A2 (en) 2004-09-08 2006-03-16 Chelsea Therapeutics, Inc. Quinazoline derivatives as metabolically inert antifolate compounds.
US8247371B2 (en) 2004-10-14 2012-08-21 Yale University Therapy with Clostridium perfringens enterotoxin to treat ovarian and uterine cancer
US20080176790A1 (en) 2004-10-29 2008-07-24 Defrees Shawn Remodeling and Glycopegylation of Fibroblast Growth Factor (Fgf)
AU2005323062A1 (en) 2005-01-04 2006-07-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Sustained delivery of PDGF using self-assembling peptide nanofibers
EP1847533B1 (en) 2005-01-27 2013-08-14 Asahi Kasei Pharma Corporation Six-membered heterocyclic compound and the use thereof
US7531533B2 (en) 2005-01-27 2009-05-12 Asahi Kasei Pharma Corporation 6-Membered heterocyclic compound and use thereof
CA2597263C (en) 2005-02-14 2017-01-17 Epitopix, Llc Polypeptides from staphylococcus aureus and methods of use
WO2006091734A2 (en) 2005-02-24 2006-08-31 Cemines, Inc. Compositions and methods for classifying biological samples
WO2006096989A2 (en) 2005-03-17 2006-09-21 National Research Council Of Canada Expression vectors containing a truncated epstein barr nuclear antigen 1 lacking the gly-gly-ala domain for enhanced transient gene expression
CN101189229A (zh) 2005-03-17 2008-05-28 哈佛大学校长及研究员协会 阿韦艾利酰胺、斯特伐希丁b和其类似物的合成
FR2885525B1 (fr) 2005-05-13 2009-09-18 Urodelia Sa Medicament notamment anti-cancereux, destine a des traitements par immunotherapie, en particulier autologue
NZ565063A (en) 2005-06-13 2011-04-29 Cleveland Biolabs Inc Methods of protecting against apoptosis using lipopeptides
US9006487B2 (en) 2005-06-15 2015-04-14 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipids and uses thereof
AU2006261845C1 (en) 2005-06-27 2013-05-16 Exelixis Patent Company Llc Imidazole based LXR modulators
WO2007005249A2 (en) 2005-06-29 2007-01-11 Hyperbranch Medical Technology, Inc. Nanoparticles and dendritic-polymer-based hydrogels comprising them
US7494788B2 (en) 2005-07-11 2009-02-24 Molecular Kinetics, Inc. Entropic bristle domain sequences and their use in recombinant protein production
US7820790B2 (en) 2005-07-13 2010-10-26 Amgen Mountain View Inc. IL-6 binding proteins
GB0516058D0 (en) 2005-08-04 2005-09-14 Oxford Genome Sciences Uk Ltd New protein isoforms and uses thereof
GB0517293D0 (en) 2005-08-24 2005-10-05 Cancer Rec Tech Ltd Vectors and uses thereof
EP2228656B1 (en) 2005-09-15 2013-10-23 Alk-Abelló A/S Quantification of allergens
WO2007044885A2 (en) 2005-10-11 2007-04-19 Chemocentryx, Inc. Piperidine derivatives and methods of use
AU2006303037A1 (en) 2005-10-21 2007-04-26 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Chromenones and their use as modulators of metabotropic glutamate receptors
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
EP1954274B8 (en) 2005-11-10 2011-01-12 ChemoCentryx, Inc. Substituted quinolones and methods of use
ATE524068T1 (de) 2005-11-23 2011-09-15 Merck Sharp & Dohme Verfahren zur herstellung eines 2-phenyl-1h- phenantrhoä9,10-düimidazol-derivates
KR101049859B1 (ko) 2007-11-28 2011-07-19 대한민국 Ｎ-말단 ｐＩ 값 조절에 의한 수용성 재조합 단백질 생산방법
CN101395182A (zh) 2006-03-06 2009-03-25 西福根有限公司 用于治疗呼吸道合胞病毒感染的重组多克隆抗体
JP5167155B2 (ja) 2006-03-09 2013-03-21 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム ペプチド結合に基づく多数の細胞株のプロファイリングに関連した組成物および方法
JP5394074B2 (ja) 2006-03-10 2014-01-22 ワーウィック イフェクト ポリマーズ リミテッド ポリマー
WO2007110755A1 (en) 2006-03-27 2007-10-04 Medical Therapies Limited Prophylaxis or treatment of cardiovascular inflammation
US8003607B2 (en) 2006-04-20 2011-08-23 Kringle Pharma Inc. HGF precursor protein variant and active protein thereof
US20090253156A1 (en) 2006-05-05 2009-10-08 Perkinelmer Las, Inc. Mass spectrometry methods for multiplexed quantification of protein kinases and phosphatases
CA2900402C (en) 2006-05-08 2018-01-16 Adaerata, Limited Partnership Pcsk9 polypeptide, ligand to said polypeptide, kits and methods using said ligands
US20120128661A1 (en) 2006-06-23 2012-05-24 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotide and polypeptide sequences involved in cancer
WO2008002267A1 (en) 2006-06-28 2008-01-03 Rgb Technologies Ab A sensor kit and a system for detecting an analyte in a test environment
US8198046B2 (en) 2006-07-11 2012-06-12 Danisco Us Inc. KEX2 cleavage regions of recombinant fusion proteins
US20080242607A1 (en) 2006-07-21 2008-10-02 Neose Technologies, Inc. Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences
WO2008012362A2 (en) 2006-07-27 2008-01-31 Oxford Genome Sciences (Uk) Ltd New protein isoforms and uses thereof
US20100120627A1 (en) 2006-08-02 2010-05-13 Abdelmajid Belouchi Genemap of the human genes associated with psoriasis
EP2057465A4 (en) 2006-08-09 2010-04-21 Homestead Clinical Corp SPECIFIC ORGAN PROTEINS AND METHODS OF USE
EP2066806A2 (fr) 2006-09-07 2009-06-10 Laurence Faure Test pharmaco diagnostique ciblant l'oncologie
WO2008033932A2 (en) 2006-09-13 2008-03-20 The Institutes For Pharmaceutical Discovery, Llc Biarylthiazole carboxylic acid derivatives as protein tyrosine phosphatase-ib inhibitors
US7662820B2 (en) 2006-10-30 2010-02-16 Sanrx Pharmaceuticals, Inc. Dipterinyl calcium pentahydrate (DCP) and therapeutic methods based thereon
DE102006051516A1 (de) 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
US20100150950A1 (en) 2006-12-14 2010-06-17 Medarex, Inc. Human antibodies that bind cd70 and uses thereof
ES2506090T3 (es) 2006-12-28 2014-10-13 Abbvie Inc. Inhibidores de la (ADP-ribosa) polimerasa
CA2675032A1 (en) 2007-01-09 2008-07-17 Cleveland Biolabs, Inc. Methods for increasing and mobilizing hematopoietic stem cells
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
WO2008104803A2 (en) 2007-02-26 2008-09-04 Oxford Genome Sciences (Uk) Limited Proteins
US20080311145A1 (en) 2007-04-04 2008-12-18 Specigen, Inc. Protein cage immunotherapeutics
WO2009009186A2 (en) 2007-04-13 2009-01-15 The Regents Of The University Of California Receptors useful for gas phase chemical sensing
US20080306007A1 (en) 2007-04-30 2008-12-11 Newcastle Innovation Limited Agents for prophylaxis or treatment of neurological related diseases and conditions
WO2008134761A2 (en) 2007-04-30 2008-11-06 Intezyne Technologies, Inc. Modification of biological targeting groups for the treatment of cancer
US8143372B2 (en) 2007-05-21 2012-03-27 Children's Hospital & Research Center Oakland Synthetic regulators of ferritin protein nanocage pores and methods of use thereof
WO2008151146A2 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Digitab, Inc. Peptide arrays and methods of use
US8618121B2 (en) 2007-07-02 2013-12-31 Cancer Research Technology Limited 9H-pyrimido[4,5-B]indoles, 9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3-D]pyridines, and 9H 1,3,6,9 tetraaza-fluorenes as CHK1 kinase function inhibitors
US9018138B2 (en) 2007-08-16 2015-04-28 The Johns Hopkins University Compositions and methods for generating and screening adenoviral libraries
AU2008295248A1 (en) 2007-09-07 2009-03-12 Symphogen A/S Methods for recombinant manufacturing of anti-RSV antibodies
US10611818B2 (en) 2007-09-27 2020-04-07 Agilent Technologies, Inc. MHC multimers in tuberculosis diagnostics, vaccine and therapeutics
GB0719644D0 (en) 2007-10-05 2007-11-14 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
EP2538218A3 (en) 2007-11-05 2013-04-24 Nordic Bioscience A/S Biochemical markers for CVD risk assessment
US20100298368A1 (en) 2007-11-06 2010-11-25 Amira Pharmaceuticals, Inc. Antagonists of pgd2 receptors
EP2071334A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Transmedi SA Compositions and methods of detecting TIABS
US20110165223A1 (en) 2008-01-02 2011-07-07 The Johns Hopkins University Antitumor Immunization by Liposomal Delivery of Vaccine to the Spleen
WO2009114942A1 (en) 2008-03-20 2009-09-24 University Health Network Thymidylate kinase fusions and uses thereof
US8445648B2 (en) 2008-04-30 2013-05-21 University Of Vermont And State Agricultural College Methods and products relating to GSK3β regulation
PT2296629E (pt) 2008-05-09 2014-09-22 Evonik Corp Polímero elastomérico biocompatível e biodegradável
WO2009144230A1 (en) 2008-05-26 2009-12-03 Universität Zürich Protamine/rna nanoparticles for immunostimulation
JP5531370B2 (ja) 2008-07-03 2014-06-25 パンミラ ファーマシューティカルズ，エルエルシー． プロスタグランジンｄ２受容体のアンタゴニスト
US8148088B2 (en) 2008-07-18 2012-04-03 Abgent Regulation of autophagy pathway phosphorylation and uses thereof
WO2010014141A1 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lixte Biotechnology, Inc. Methods for regulating cell mitosis by inhibiting serine/threonine phosphatase
ES2415234T3 (es) 2008-08-08 2013-07-24 Synta Pharmaceuticals Corp. Compuestos de triazol que modulan la actividad Hsp90
US20110171312A1 (en) 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
EP2350118B1 (en) 2008-09-19 2016-03-30 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
KR20110084280A (ko) 2008-11-03 2011-07-21 알레시아 바이오쎄라퓨틱스 인코포레이티드 종양 항원의 생물 활성을 특이적으로 차단하는 항체
ES2543095T3 (es) 2009-07-10 2015-08-14 Innate Pharma Agentes de unión a TLR3
EP2486149B1 (en) 2009-08-06 2015-06-17 John Wayne Cancer Institute Diagnosis of primary and metastatic basal-like breast cancer and other cancer types
WO2011054112A1 (en) 2009-11-03 2011-05-12 Alethia Biotherapeutics Inc. Antibodies that specifically block the biological activity of kidney associated antigen 1
EP2544680B1 (en) 2010-03-11 2015-01-14 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Use of erbb3 inhibitors in the treatment of triple negative breast cancer
KR101993259B1 (ko) 2011-03-31 2019-06-27 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 신장 결합 항원 １에 대한 항체 및 이의 항원 결합 단편
EA201992513A1 (ru) 2012-01-09 2020-05-31 Адс Терапьютикс Са Способ лечения рака груди

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2615858A1 (en) * 2005-07-18 2007-01-25 Epigenomics Ag Compositions and methods for cancer diagnostics comprising pan-cancer markers
WO2007147265A1 (en) * 2006-06-23 2007-12-27 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotides and polypeptide sequences involved in cancer

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
VAN DEN EYNDE ET AL.: "A New Antigen Recognized by Cytolytic T Lymphocytes on a Human Kidney Tumor Results from Reverse Strand Transcription", 《J. EXP. MED.》 *
李祥周: "抗人乳腺癌单克隆抗体BG6在乳腺癌诊断和鉴别诊断中的应用", 《中国肿瘤临床》 *

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