JP6505076B2 - Hcv抗原−抗体組み合わせアッセイおよびこれに使用するための方法および組成物 - Google Patents
Hcv抗原−抗体組み合わせアッセイおよびこれに使用するための方法および組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6505076B2 JP6505076B2 JP2016500145A JP2016500145A JP6505076B2 JP 6505076 B2 JP6505076 B2 JP 6505076B2 JP 2016500145 A JP2016500145 A JP 2016500145A JP 2016500145 A JP2016500145 A JP 2016500145A JP 6505076 B2 JP6505076 B2 JP 6505076B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hcv
- antigen
- antibody
- capture
- test sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5767—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis non-A, non-B hepatitis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
- G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
- G01N2333/186—Hepatitis C; Hepatitis NANB
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本出願は、2013年3月14日に出願された米国仮特許出願第61/785,124号および2013年3月15日に出願された米国仮特許出願第61/788,136号の優先権の利益を主張するPCT出願として出願される。上述の出願の完全な内容が、全体的に本明細書に参照により組み込まれる。
(a)以下の試薬:
(i)ビオチンに結合することができる固相、
(ii)試験サンプル中に存在するHCV抗原を捕捉するためのビオチン化された抗−HCV抗体、
(iii)試験サンプル中の抗−HCV抗体を捕捉するためのビオチン化されたHCV抗原、および
(iv)(iii)のビオチン化されたHCV抗原によって捕捉される抗−HCV抗体に結合するための検出可能に標識されたHCV抗原
を同時に提供することと、
(b)
(i)(a)の(ii)のビオチン化された抗−HCV抗体が、ビオチンを介して固相に結合し、試験サンプル中に存在するHCV抗原に特異的に結合し、固相の上に捕捉された抗−HCV抗体−HCV抗原複合体を生成し、
(ii)(a)の(iii)のビオチン化された抗原が、ビオチンを介して固相に結合し、試験サンプル中に存在する抗−HCV抗体に特異的に結合し、固相の上に捕捉されたHCV抗原−抗−HCV抗体複合体を生成し、(a)の(iv)の検出可能に標識されたHCV抗原が、固相の上に捕捉されたHCV抗原−抗−HCV抗体複合体中の抗−HCV抗体に特異的に結合する、反応混合物を生成する条件下で工程(a)の試薬をインキュベートすることと、
(c)固相に結合した捕捉された抗体および捕捉されたHCV抗原を含む固相を、未反応の試験サンプルおよび試薬から、単離することと、
(d)単離された固相と、(b)の(ii)の抗−HCV抗体−HCV抗原複合体中に捕捉されたHCV抗原に結合する検出可能に標識された複合抗体とを接触させることと、
(e)検出可能な標識部分から発生したシグナルが引き金となると、シグナルを検出することと
を含み、シグナルの存在は、試験サンプル中のHCVの存在を示す、イムノアッセイを記述する。
(a)
(v)工程(a)の(iii)のHCV抗原とは別個である、試験サンプル中の抗−HCV抗体を捕捉するための第2のビオチン化されたHCV抗原、および
(vi)(v)のビオチン化されたHCV抗原によって捕捉された抗−HCV抗体に結合するための検出可能に標識されたHCV抗原
を提供することと、
(b)(iii)(a)の(v)のビオチン化された抗原が、ビオチンを介して固相に結合し、試験サンプル中に存在する抗−HCV抗体に特異的に結合し、固相の上に捕捉されたHCV抗原−抗−HCV抗体複合体を生成し、(a)の(vi)の検出可能に標識されたHCV抗原が、固相の上に捕捉されたHCV抗原−抗−HCV抗体複合体中の抗−HCV抗体に特異的に結合することと
をさらに含んでいてもよい。
(a)
(vii)工程1の(a)の(iii)または工程2の(a)の(v)のHCV抗原とは別個である、試験サンプル中の抗−HCV抗体を捕捉するための第3の(または複数のさらなる)ビオチン化されたHCV抗原、および
(viii)(vii)のビオチン化されたHCV抗原によって捕捉された抗−HCV抗体に結合するための検出可能に標識されたHCV抗原
を提供することと、
(b)(iv)(a)の(vii)のビオチン化された抗原が、ビオチンを介して固相に結合し、試験サンプル中に存在する抗−HCV抗体に特異的に結合し、固相の上に捕捉されたHCV抗原−抗−HCV抗体複合体を生成し、(a)の(viii)の検出可能に標識されたHCV抗原が、固相の上に捕捉されたHCV抗原−抗−HCV抗体複合体中の抗−HCV抗体に特異的に結合することと
によって、第3のHCV抗原または複数のさらなるHCV抗原も検出してもよい。
(a)第1のHCVタンパク質のペプチド配列を含む第1の捕捉抗原、
(b)第1のHCVタンパク質のペプチド配列を含み、さらに、検出可能な標識を含む、第1の検出抗原、
(c)第2のHCVタンパク質に由来する抗原性配列を含む第2の捕捉抗原、
(d)第2のHCVタンパク質に由来する抗原性配列を含み、検出可能な標識をさらに含む、第2の検出抗原、
(e)第3のHCVタンパク質に由来する抗原性配列を含む第3の捕捉抗原、
(f)第3のHCVタンパク質に由来する抗原性配列を含み、検出可能な標識をさらに含む、第3の検出抗原、
(g)第1の捕捉抗体、
(h)検出可能な標識を含む複合抗体
を含み、
捕捉抗体および複合抗体は、試験サンプルに由来する第4のHCVタンパク質に特異的に結合し、組み合わせアッセイは、
(i)
(a)試験サンプル中に存在する第1の捕捉抗原および検出抗原および第1の抗−HCV抗体のサンドイッチ複合体の生成、
(b)試験サンプル中に存在する第2のHCVタンパク質に対し、第2の捕捉抗原および第2の検出抗原および抗−HCV抗体のサンドイッチ複合体の生成、
(c)試験サンプル中に存在する第3のHCVタンパク質に対し、第3の捕捉抗原および第3の検出抗原および抗−HCV抗体のサンドイッチ複合体の生成、および
(d)サンプル中に存在する捕捉抗体、複合抗体およびHCV抗原の複合体の生成
を可能とする条件で、試験サンプルと、捕捉抗原、検出抗原、捕捉抗体および複合抗体とを接触させることと、
(ii)複合体の生成の結果として、検出可能な標識から発生するシグナルを測定し、これによって、サンプル中に存在するHCV抗原およびHCV抗体を同時に検出することと
によって行われる、イムノアッセイを記載する。
(a)ビオチンが結合する固相を提供することと、
(b)固相と、
(i)ビオチン化された第1の捕捉抗原、ビオチン化された第2の捕捉抗原、ビオチン化された第3の捕捉抗原および第4のHCV抗原に特異的なビオチン化された抗体、および
(ii)検出可能に標識された第1、第2、第3の検出抗原
を含む混合物とを、
(1)それぞれ第1、第2および第3のビオチン化された抗原と独立して免疫反応性であり、これらによって捕捉される試験サンプル中の抗体と、ビオチン化された抗体と免疫反応性であるサンプル中のHCVタンパク質との間に生成する免疫複合体、および
(2)捕捉抗体およびそれぞれの第1、第2および第3の検出可能に標識された抗原との間に生成する免疫複合体
のために十分な条件および時間で接触させることと、
(c)未反応の試験サンプルおよび試薬から、接続した検出可能に標識された捕捉された抗体および捕捉された第4のHCV抗原を含む固相を単離することと、
(d)単離された固相と、捕捉された第4のHCV抗原に結合する検出可能に標識された複合抗体とを接触させることと、
(e)検出可能な標識部分から発生したシグナルが引き金となると、シグナルを検出することと
を含み、シグナルの存在は、試験サンプル中のHCVの存在を示す、イムノアッセイも記載される。
(a)ビオチンが結合する固相を提供することと、
(b)固相と、
(i)ビオチン化された第1の捕捉抗原、ビオチン化された第2の捕捉抗原、ビオチン化された第3の捕捉抗原、および
(ii)検出可能に標識された第1、第2および第3の検出抗原
を含む混合物とを、
(1)それぞれ第1、第2および第3のビオチン化された抗原と独立して免疫反応性であり、これらによって捕捉される試験サンプル中の抗体との間に生成する免疫複合体、および
(2)捕捉抗体およびそれぞれの第1、第2および第3の検出可能に標識された抗原との間に生成する免疫複合体
のために十分な条件および時間で接触させることと、
(c)未反応の試験サンプルおよび試薬から、接続した検出可能に標識された捕捉された抗体を含む固相を単離することと、
(d)検出可能な標識部分から発生したシグナルが引き金となると、シグナルを検出することと
を含み、シグナルの存在は、試験サンプル中のHCVの存在を示す、イムノアッセイも想定される。再び、このようなイムノアッセイでは、第1、第2および第3のHCVタンパク質が、独立して、コア抗原、E1、E2、NS2、NS3、NS4およびNS5からなる群から選択される。ある特定の例示的なアッセイでは、第1の抗原は、HCVコア抗原であり;第2の抗原は、NS3抗原であり;第3の抗原は、NS4抗原である。さらに具体的には、捕捉コア抗原は、必要ではないが、アミノ酸34および48およびアミノ酸115から121の欠失を含む抗原であってもよい。NS3抗原は、NS3から誘導される任意のNS3抗原であってもよい。特定の実施形態では、NS3抗原は、ヘリカーゼのそれぞれのドメインI、IIおよびIIIを含むNS3ヘリカーゼ配列を含む組み換えHCV NS3抗原であり、抗原は、C33抗原と比較した場合、血清由来のHCV抗体に対する免疫反応性が高まっている。
検出抗原が検出可能に標識されている、第1のHCVタンパク質に対する第1の抗−HCV抗体を検出するための捕捉抗原および検出抗原の第1の対、
検出抗原が検出可能に標識されている、第2のHCVタンパク質に対する第2の抗−HCV抗体を検出するための捕捉抗原および検出抗原の第2の対、
検出抗原が検出可能に標識されている、第3のHCVタンパク質に対する第3の抗−HCV抗体を検出するための捕捉抗原および検出抗原の第3の対、
複合抗体が検出可能に標識されている、第4のHCVタンパク質を検出するための捕捉抗体および複合抗体の第1の対
を含む、キットを含む。
本発明は、試験サンプル中のHCVを検出するための試薬を提供する。好ましくは、この検出は、試験サンプル中のHCV抗原および抗−HCV抗体を両方とも同時に検出することによって達成される。明細書全体で、特定の用語が頻繁に使用され、このため、以下の章は、これらの用語のさらなる定義を与える。「抗体」(Ab)および「複数の抗体」(Abs)という用語は、モノクローナル抗体(mAb(単数形)またはmAbs(複数形))、ポリクローナル抗体(pAbs(複数形))、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体(完全または部分的にヒト化されたもの;ヒト抗体の改変された可変領域を含み、可変領域の一部が、非ヒト配列の対応する配列によって置換されており、改変された可変領域が、ヒト抗体の定常領域の少なくとも一部に連結しているポリペプチド)、非霊長類(例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウスなど)または非ヒト霊長類(例えば、サル、チンパンジーなど)を含む動物抗体(例えば、限定されないが、鳥(例えば、アヒルまたはガチョウ)、サメ、クジラおよび哺乳動物、組み換え抗体、キメラ抗体(cAb;別の宿主種に由来する抗体定常領域の少なくとも一部に連結した、ある宿主種に由来する抗体の重鎖および軽鎖可変領域のすべてまたは一部を含むポリペプチド)、一本鎖抗体、一本鎖ドメイン抗体、Fabフラグメント、F(ab’)フラグメント、Fab’−SHフラグメント、F(ab’)2フラグメント、Fdフラグメント、Fvフラグメント、一本鎖Fvフラグメント(「scFv」)、ジスルフィド結合したFvフラグメント(「sdFv」)、dAbフラグメント、ダイアボディ、単離された相補性決定領域(CDR)および抗−イディオタイプ(「抗−Id」)抗体、二官能または二重ドメイン抗体(例えば、二重可変ドメイン抗体、またはDVD−IgG)、ならびに上述のいずれかの機能的に活性なエピトープ結合フラグメント(または抗原的に反応性のフラグメント)を指す。特に、抗体としては、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な(または抗原的に反応性の)フラグメント、つまり、本明細書で(n)にさらに記載されるような検体結合部位を含む分子および本明細書で(ac)にさらに記載されるような改変体が挙げられる。免疫グロブリン分子は、任意の型(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2)、またはサブクラスであってもよい。バイオディスプレイを用いて調製されたコンビナトリー抗体ライブラリのスクリーニングを介し、アフィニティが増加または向上した抗体(即ち、KD、kdまたはka)は、「親和性が成熟した抗体」と呼ばれる。単純化するために、検体に対する抗体は、多くは、本明細書には「抗−検体抗体」または単に「検体抗体」と呼ばれる(例えば、抗−HCV抗体またはHCV抗体)。
本明細書に記載される場合、本発明は、アッセイされる試験サンプルのHCVの感受性が高く、選択的な検出を有利に与えるために、1つのアッセイにおけるHCV抗原の組み合わせの検出を記載する。特定の好ましい実施形態では、組み合わせアッセイは、さらに、抗−HCV抗体の存在を検出する。さらに具体的には、HCV抗原は、典型的にはHCVアッセイで観察される任意の抗原であってもよい。このような抗原としては、限定されないが、コア抗原、E1、E2、NS2、NS3、NS4およびNS5、または、コア抗原、E1、E2、NS2、NS3、NS4およびNS5の任意のいずれかの別個の独立した部分である。このような抗原を検出するためのイムノアッセイは、個々に、当業者にとって商業的に入手可能であり、このような市販のアッセイで使用される任意の抗原は、本発明のイムノアッセイで捕捉抗原または検出抗原として容易に使用されてもよい。例えば、HCV NS3タンパク質およびこの変異体は、主に、2つの主要なタンパク質部分を含む必要があり、第1の部分は、P26664(Genbank、本明細書では、配列番号2として再現される;Choo et al.,PNAS 1991)として番号が付けられている、C33(Chironによって元々記載されている。)として、または「9NB49H」として知られているHCVポリタンパク質のアミノ酸1192から1457に対応する。NS3タンパク質の第2の部分は、NS3ヘリカーゼまたは「NS3h」としても知られるアミノ酸1192から1657に対応する。これら2つのタンパク質のすべてまたは一部を含む抗原は、試験サンプル中の抗−HCV抗体の検出に簡単に使用することができる。例えば、C33は、HCVのNS3タンパク質から誘導されるよく知られた抗原であり、本発明の組み合わせイムノアッセイでNS3抗体を検出するための捕捉抗原または検出抗原として本明細書で簡単に使用されるだろう。
本明細書で全体に記載する場合、組み合わせイムノアッセイは、有利には、試験サンプル中に存在する1つ以上のHCV抗原の存在も決定する。このような実施形態では、試験サンプルからの抗原を捕捉し、次いで、さらなる複合抗体を使用し、捕捉された抗原の存在を検出するために、モノクローナル抗−HCV抗体を使用することが望ましいだろう。この努力で使用され得る多くの市販の抗体が存在する。具体的には、このような抗体は、好ましくは、試験サンプル中のコア抗原の存在を決定する。コア抗原に対するものである抗体は、当業者に知られており、例えば、米国特許公開第20120009196号に記載されるものが挙げられる。これに加え、本発明は、さらに、同時に出願された米国特許出願第61/783,529号、名称「HCV Core Lipid Binding Domain Monoclonal Antibodies」、代理人整理番号03946−26531US01に記載されるモノクローナル抗体の使用を想定し、この抗体は、HCVコア抗原の脂質結合ドメインと特異的に免疫反応性である。さらに特定的には、HCVコア抗原は、HCVのアミノ酸残基134から171である。さらに特定的な実施形態では、抗体は、アミノ酸配列MGYIPLVGAPLGGAARALAHGVRVLEDGVNYATGNLPG(配列番号89)によって作られる少なくとも1つのエピトープに特異的に結合する。さらに具体的な実施形態では、抗体は、HCVコア抗原のアミノ酸141から161、134から154および151から171によって作られるエピトープと免疫反応性である。
特定の実施形態では、上に記載される抗原および抗体は、HCVに感染しているおそれがある試験サンプル中に発見される複数のHCV要素の検出のために設計された組み合わせイムノアッセイにおける免疫診断試薬としての使用が想定される。限定されないが、HCVのNS3領域、HCVのコア抗原、HCVのNS4領域、またはこれらの組み合わせおよびこれらの1つ以上の領域に対して指向する抗−HCV抗体を含め、HCV抗原の検出のために設計された組み合わせイムノアッセイで使用することができるように、免疫診断試薬(抗体または抗原である。)は、上述の抗原ポリペプチドおよび抗体で構成されるだろう(典型的には、組み合わせて)。捕捉のために、免疫診断試薬が含まれる抗原および/または抗体を固体支持体(例えば、微粒子(例えば、磁気粒子)、ビーズ、試験管、マイクロタイタープレート、キュベット、膜、足場となる分子、膜、濾紙、ディスクまたはチップ)でコーティングしてもよい。この観点で、免疫診断試薬が抗原の組み合わせ(例えば、異なるHCVタンパク質または同じHCVタンパク質の異なるフラグメントに指向する。)を含む場合、抗原で同じ固体支持体を一緒にコーティングしてもよく、または別個の固体支持体をコーティングしてもよい。同様に、免疫診断試薬が、試験サンプルから1つ以上の抗原を捕捉するために使用される1つ以上の抗体を含む場合、このような抗体で同じ固体支持体を一緒にコーティングしてもよく、または別個の固体支持体をコーティングしてもよい。
本開示は、試験サンプル中の抗−HCV抗体およびHCV抗原の存在、量または濃度を決定するための組み合わせイムノアッセイ方法を提供する。アッセイが、試験サンプル中のHCV抗体を検出するための1つ以上の抗原および/または1つ以上のHCV抗原を検出するための1つ以上の抗−HCV抗体を使用する限り、当該技術分野で知られている任意の適切なアッセイをこのような方法で使用してもよい。このようなアッセイの例としては、限定されないが、イムノアッセイ、例えば、サンドイッチイムノアッセイ(例えば、放射性同位体検出(放射性イムノアッセイ(RIA))を含む、モノクローナル−ポリクローナルサンドイッチイムノアッセイ)および酵素検出(酵素イムノアッセイ(EIA)または酵素免疫吸着アッセイ(ELISA)(例えば、Quantikine ELISAアッセイ、R&D Systems、ミネアポリス、Minn.))、競争的阻害イムノアッセイ(例えば、順方向および逆方向)、蛍光極性イムノアッセイ(FPIA)、酵素多重イムノアッセイ技術(EMIT)、生物発光共鳴エネルギー移動(BRET)および均一化学発光アッセイなどが挙げられる。
(ii)第1の特定の結合パートナー/第1、第2および第3の抗−HCV抗体、それぞれ/第2の特定の結合パートナー複合体を生成するように、第1、第2および第3の特異的な捕捉結合パートナー/第1、第2および第3の抗−HCV抗体複合体と、抗−HCV抗体(例えば、本明細書に記載されるような抗−IgG抗体および抗−IgM抗体またはポリペプチド)のための少なくとも1つの検出可能に標識された第2の特定の結合パートナーとを接触させることおよび
(iii)(ii)で作られる第1の特定の結合パートナー/抗−HCV抗体/第2の特定の結合パートナー複合体において検出可能な標識によって発生するシグナルを検出または測定することによって、試験サンプル中の抗−HCV抗体の存在、量または濃度を決定すること。
(ii)(ii)で作られる第1の特定の結合パートナー/第2の特定の結合パートナー複合体中の検出可能な標識によって発生するシグナルを検出または測定することによって、試験サンプル中の抗−HCV抗体の存在、量または濃度を決定し、第1の特定の結合パートナー/第2の特定の結合パートナー複合体中の検出可能な標識によって発生するシグナルは、試験サンプル中の抗−HCV抗体の量または濃度に反比例する。免疫診断試薬が含まれる組み換え抗原で微粒子をコーティングしてもよい。この観点で、免疫診断試薬が含まれる抗原で、さらなるHCV抗原と同じ微粒子を一緒にコーティングしてもよい。免疫診断試薬が含まれるポリペプチドで、同じ微粒子に一緒にコーティングする場合(例えば、4%の固形分を含有する微粒子懸濁物(4%重量/体積の微粒子または4グラムの微粒子/100mLの微粒子懸濁物))、好ましくは、ポリペプチドで同じ微粒子に約1:2から約1:6の比率で一緒にコーティングし、ポリペプチドを約1:2の比率で同じ微粒子に一緒にコーティングする場合、本発明の単離された抗原または精製された抗原(例えば、表1に記載されるもの)の濃度は、少なくとも約40μg/mLであり、他の単離されたポリペプチドまたは精製されたポリペプチドの濃度は、少なくとも約80μg/mLである。試験サンプルが患者から得られる場合、この方法は、さらに、患者の治療的/予防的な処置の効力を診断し、予後を判断し、または評価することを含んでいてもよい。この方法が、さらに、患者の治療的/予防的な処置の効力を評価することを含む場合、この方法は、場合により、効力を高めるために必要な場合、患者の治療的/予防的な処置を変えることをさらに含んでいてもよい。この方法は、自動化されたシステムまたは半自動化されたシステムで使用するように調整することができる。
(ii)試験サンプル中の抗−HCV抗体の存在、量または濃度の間接的または直接的な指標として、検出可能な標識によって発生するシグナルを、コントロールまたはキャリブレーター(場合により、それぞれのキャリブレーターが、抗−HCV抗体の濃度という点で他のキャリブレーターと異なる一連のキャリブレーターの一部である。)中の抗−HCV抗体の存在、量または濃度の間接的または直接的な指標として発生したシグナルと比較すること。この方法は、以下の工程を含んでいてもよい。
(ii)第1の特定の結合パートナー/抗−HCV抗体/第2の特定の結合パートナー複合体を生成するように、第1の特異的な捕捉結合パートナー/抗−HCV抗体複合体と、抗−HCV抗体(例えば、抗−IgG抗体および抗−IgM抗体または抗−HCV抗体に結合する標識された抗原)についての少なくとも1つの検出可能に標識された第2の特定の結合パートナーとを接触させること、
(iii)(ii)で作られる第1の特定の結合パートナー/抗−HCV抗体/第2の特定の結合パートナー複合体中、検出可能な標識によって発生するシグナルを検出または測定することによって、試験サンプル中の抗−HCV抗体の存在、量または濃度を決定すること。または、この方法は、以下の工程を含んでいてもよい。
(ii)(ii)で作られる第1の特定の結合パートナー/第2の特定の結合パートナー複合体中の検出可能な標識によって発生するシグナルを検出または測定することによって、試験サンプル中の抗−HCV抗体の存在、量または濃度を決定し、第1の特定の結合パートナー/第2の特定の結合パートナー複合体中の検出可能な標識によって発生するシグナルは、試験サンプル中の抗−HCV抗体の量または濃度に反比例する。免疫診断試薬が含まれるポリペプチドで微粒子をコーティングしてもよい。この観点で、免疫診断試薬が含まれるポリペプチドで、同じ微粒子を一緒にコーティングしてもよい。免疫診断試薬が含まれるポリペプチドで、同じ微粒子に一緒にコーティングする場合(例えば、4%の固形分を含有する微粒子懸濁物(4%重量/体積の微粒子または4グラムの微粒子/100mLの微粒子懸濁物))、好ましくは、ポリペプチドで同じ微粒子に約1:2から約1:6の比率で一緒にコーティングし、ポリペプチドを約1:2の比率で同じ微粒子に一緒にコーティングする場合、組み換えHCV抗原を含む単離されたポリペプチドまたは精製されたポリペプチドの濃度は、少なくとも約40μg/mLであり、他の単離されたポリペプチドまたは精製されたポリペプチドの濃度は、少なくとも約80μg/mLである。試験サンプルが患者から得られる場合、この方法は、さらに、患者の治療的/予防的な処置の効力を診断し、予後を判断し、または評価することを含んでいてもよい。この方法が、さらに、患者の治療的/予防的な処置の効力を評価することを含む場合、この方法は、場合により、効力を高めるために必要な場合、患者の治療的/予防的な処置を変えることをさらに含んでいてもよい。この方法は、自動化されたシステムまたは半自動化されたシステムで使用するように調整することができる。
(b)工程(a)で決定される抗−HCV抗体およびHCV抗原の濃度または量と、所定のレベルとを比較し、工程(a)で決定される抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度または量が、所定のレベルに関して望ましい場合、被検体は、肝炎を有していないか、または肝炎のリスクがないと決定される。しかし、工程(a)で決定される抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度または量が、所定のレベルに関して望ましくない場合、被検体は、肝炎を有しているか、または肝炎のリスクがあると決定される。
(b)被検体からの後期の試験サンプルにおいて、抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度または量を決定すること、および
(c)工程(b)で決定されるような抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度または量と、工程(a)で決定される抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度または量とを比較し、工程(b)で決定される濃度または量が、工程(a)で決定される抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度または量と比較したとき、変化していないか、または望ましくない場合、被検体の疾患は、継続しており、進行しているか、または悪化していると決定される。比較によって、工程(b)で決定されるような抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度または量が、工程(a)で決定される抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度または量と比較したとき、望ましい場合には、被検体の疾患は、継続しておらず、回復しているか、または向上していると決定される。
本明細書に記載されるようなイムノアッセイによって試験サンプル中の抗−HCV抗体および/またはHCV抗原の濃度を決定するキット(またはこの要素)および方法を、例えば、米国特許第5,089,424号および第5,006,309号、および例えば、Abbott Laboratories(Abbott Park、III)によってARCHITECT(R)として市販されているように、種々の自動化されたシステムおよび半自動化されたシステム(固相が微粒子を含むもの)での使用に適合させることができる。
HCV−1のアミノ酸1192から1457(配列番号2)をコードするヌクレオチド配列(配列番号1)は、E.Coli発現のために最適化されたコドンであり、改変したpET32aベクターへとクローン化し、チオレドキシン融合タンパク質をコードする配列が除かれ、メチオニン(M)と置き換わっていた。これに加え、カルボキシ末端のヘキサヒスチジンタグは、固定化された金属アフィニティクロマトグラフィー(IMAC)での精製を容易にするために含まれていた。E.coli BL21(DE3)細胞を、精製されたプラスミドDNAで形質変換し、形質変換体をスクリーニングした。得られたプラスミドは、p9NB49Hと命名し、このプラスミドから発現したタンパク質は、9NB49Hと命名された。
実施例1に記載されるNS3 9NB49Hタンパク質をコードするヌクレオチド配列を、改変されたpET32aプラスミドへとサブクローン化し、オープンリーディングフレームは、アミノ末端ビオチン化タグ(MSGLNDIFEAQKIEWHE)(配列番号91)をコードし、NS3コード配列の上流にGSGSNSM−リンカー配列(配列番号92)、その後、カルボキシル末端ヘキサヒスチジンタグ、その後、ストップコドンを有する。得られるプラスミドは、pNbt−9NB49Hと命名した。Beckett et al.(Protein Science,8(4):921−929,1999)によって記載されるビオチン化タグによって、E.coli BirA遺伝子によってコードされるビオチンリガーゼ酵素を介した部位特異的なビオチン組み込みが可能になる。E.coli BL21(DE3)細胞を、IPTG誘導性プロモーターの制御下、pNbt−9NB49H発現プラスミドおよびビオチンリガーゼを発現する第2のプラスミド(pBirAcm)で同時形質変換した。振とうフラスコ中、最終濃度が0.050mMになるまでビオチンを加えたテリフィックブロス中、37℃でOD600nmが0.50になるまで細胞を成長させ、次いで、1mM IPTGを用いて誘導し、25℃で一晩成長させた。次いで、遠心分離によって細胞を集め、溶解バッファーで再懸濁させ、音波処理によって細胞を破壊した。ある場合には、高レベルの部位特異的なビオチン化をさらに確実にするために、上の溶解した細胞にATPおよびビオチンを加え(最終濃度がそれぞれ3mMおよび0.25mM)、室温で2時間インキュベートした。次いで、組み換えタンパク質を実施例1に記載されるようにIMACによって精製した。
実施例1に記載されるNS3 9NB49Hタンパク質をコードするヌクレオチド配列を、改変されたpET32aベクターへとサブクローン化し、オープンリーディングフレームは、N末端メチオニンをコードし、その後、NS3、その後、GSGSG−リンカー(配列番号93)およびヘキサヒスチジンタグ、その後、GG−リンカーおよびビオチン化タグ(GLNDIFEAQKIEWHE)(配列番号94)、最後にストップコドンを有した。得られるプラスミドは、p9NB49H−Cbtを命名した。タンパク質発現およびビオチン化を実施例1および2に記載するように行った。
以下の表2に記載され、図1に示されるようなHCV NS3ヘリカーゼの種々の領域に融合したp9NB49Hによって発現される同じアミノ末端(即ち、HCVポリタンパク質のアミノ酸1192から1215)を用いることによって組み換えHCV NS3ヘリカーゼ改変体を構築した。このヘリカーゼ構築物をコードするヌクレオチド配列は、実施例1に記載されるようなカルボキシル末端GSGSG−ヘキサヒスチジンタグ(配列番号95)または実施例2に記載されるようなカルボキシル末端GSGSG−ヘキサヒスチジン−GG−ビオチン化タグ(配列番号96)のいずれかを用い、改変したpET32aベクター(マイナスチオレドキシン融合物)へとクローン化した。ビオチン化および精製を行うか、または行わずにタンパク質発現を実施例1および2に記載されるように行った。
NS3組み換えタンパク質(例えば、9NB49HまたはNS3h、またはこれらの改変体)を、10L発酵器で培養したE.coli BL21(DE3)細胞で発現させた。Superbroth(SB)Media(炭素源としてグリセロールを豊富に含む培地)を含む振とうフラスコで成長させた120mLの種培地を使用し、SB培地を含む10L発酵器に接種した。600nmでの光学密度 8−12に達するまで、細胞を37℃で成長させた。イソプロピル β−D−1−チオガラクトピラノシド(IPTG)を最終濃度が1mMになるように加えることによって、タンパク質発現を誘発させた。次いで、培地を25から37℃でさらに4時間成長させた。次いで、発酵器から細胞を集め、次いで、中空繊維膜フィルタを通し、最初の体積10Lから1から2リットルになるまで収穫物を濃縮した。次いで、濃縮した細胞を遠心分離によってペレット化し、上澄みを除去し、タンパク質精製に使用するまで、得られたペレットを−80℃で保存した。
0.1%ナトリウムアジドを防腐剤として含むウシ血清アルブミン(BSA)の30%溶液(300mg/mL)を、商業的な供給源(Proliant Biologicals、Ankeny、IA)から購入した。1ミリリットル(300mg)の30%BSA溶液を2.0mLの0.1M PBS(pH8.0)で希釈し、0.5から3.0mL Slide−A−Lyzer透析カセット(ThermoFisher、Waltham、MA)に移し、0.1M PBS(pH8.0)に対し、2から8℃で一晩透析した(2回交換、600mL/交換)。透析したBSA溶液の濃度は、280nmでのUV吸収に基づき、97.1mg/mLであった。200ミリグラム(2.060mL、3.0umol、1.0mol当量)の97.1mg/mL BSA溶液を、10.181mLの0.1M PBS(pH8.0)を含む褐色ガラスバイアルに加えた。この混合物に、39mg(1.092mL、45umol、15.0mol当量)のSPSP−アクリジニウム活性エステルのDMF[N,N−ジメチルホルムアミド]を加えた。反応バイアルに封をし、350rpmで30分間攪拌することによって溶液を混合し、次いで、室温に一晩置いた(20から26時間)。インキュベーション後、遊離アクリジニウムおよび凝集物を、0.01M PBS/0.1% CHAPS(pH6.3)ランニングバッファーを用いたクロマトグラフィー(Sephacryl HR S−200カラム、GE Healthsciences、PA)によって除去した。モノマーAcr−BSA複合体に対応するフラクションを保存し、UV分光法によって特性決定した(240から600nmをスキャン)。280nmおよび370nmでの吸収値を使用し、タンパク質の濃度を決定し、BSA分子あたりのアクリジニウムの組み込みを計算した。計算されたタンパク質の濃度は、6.779mg/mLであり、平均数は、BSA分子あたり6.2のアクリジニウムであった。
マレイミドで活性化されたAcr−BSAの調製。Acr−BSA(実施例8;13.5ミリグラム、202nmole、1.0mol当量)1.99mLのPBS/0.1%CHAPS(pH6.3)を褐色ガラスバイアルに加え、0.254mLの0.4Mホスフェート/8mM EDTA/1.6% CHAPS(pH7.4)で処理し、反応物のpHを7.4に調節した。均一な溶液に、0.040mL(0.35mg、4.0mole当量)のスクシンイミジル 4−(N マレイミドメチル)−シクロヘキサン−1−カルボキシレート(Sulfo−SMCC、Pierce Chemical Co.、Rockford、III)の新しい0.02M水溶液を加えた。反応バイアルに封をし、溶液を泡立たせることなく20分間攪拌し、次いで、暗室中、室温で60から90分間、静かにインキュベートした。反応混合物を脱塩し、0.1M PBS/0.1% CHAPS/5mM EDTA(pH6.7)であらかじめ平衡状態にしたZebaスピンカラム(Pierce、Rockford、III)にかけることによって、組み込まれていないスルホ−SMCCを除去した。溶出したAcr−BSA−Mal試薬の吸光度を280nmおよび370nmで測定し、タンパク質濃度を概算した。計算されたタンパク質濃度は、6.28mg/mLであった。HCV NS3抗原の接合にAcr−BSA−Malをすぐに使用した。
(LC)マレイミドで活性化されたAcr−BSAの調製。Acr−BSA(実施例8;3.0mg、0.443mL、45nmol、または1.0mol当量)のPBS/0.1% CHAPS(pH6.3)を褐色ガラスバイアルに加え、0.058mlの0.4M ホスフェート/8mM EDTA/1.6% CHAPS(pH7.4)バッファーで処理し、反応物のpHを7.4に調節した。均一な溶液に、0.018mL(0.080mg、180nmole、4.0mol当量)のスクシンイミジル 4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボキシ−(6−アミドカプロエート)(Lon ChainまたはLC−SMCC、Pierce Chemical Co.、Rockford、III)のジメチルスルホキシド(DMSO、Sigma Aldrich、St Louis、MO)の新しい0.01M溶液を加えた。反応バイアルに封をし、溶液を泡立たせることなく20分間攪拌し、次いで、暗室中、室温で60分間、静かにインキュベートした。反応混合物を脱塩し、0.1M PBS/0.1% CHAPS/5mM EDTA(pH6.7)であらかじめ平衡状態にしたZebaスピンカラム(Pierce、Rockford、III)にかけることによって、組み込まれていないLC−SMCCを除去した。溶出したAcr−BSA−Mal試薬の吸光度を280nmおよび370nmで測定し、タンパク質濃度を概算した。計算されたタンパク質濃度は、5.25mg/mLであった。Acr−BSA−(LC)Malを次の接合工程にすぐに使用した。
HCV NS3に由来するタンパク質を、常磁性微粒子および化学発光複合体を利用する自動化された免疫分析機を用い、抗−HCV NS3抗体を検出する能力について試験した(ARCHITECT(R)システム;Abbott Laboratories;「Bulk Reagent Random−Access Analyzer:ARCHITECT i2000」Frank A.Quinn、363から367ページを参照。Immunoassay Handbook、第3版、David Ward編集、Nature Publishing Group、London、UK;米国特許第5,795,784号および米国特許第5,856,194号)。試験されるアッセイフォーマットは、2工程フォーマットまたは1工程フォーマットを含んでいた。アッセイは、一般的に、2工程および1工程の2つのフォーマットを含むものとして記載することができる(「疑似」1工程としても記載される。)。2工程フォーマットでは、ヒトサンプル、アッセイ特異的な希釈剤バッファーおよび組み換え抗原でコーティングされた常磁性微粒子を反応容器内で混合し、ボルテックスで攪拌し、18分間インキュベートし、組み換え抗原に指向する抗体は、微粒子によって捕捉される。このインキュベーションの後、微粒子/免疫複合体は、磁石を用いて反応容器の側面に捕捉され、反応上澄みを除去する。次いで、微粒子を水/洗剤溶液で洗浄する。第2の工程では、微粒子に結合したサンプル由来の抗体は、アクリジニウム−標識された複合体を含むバッファー中の粒子の懸濁物およびインキュベーション(4分間)によって検出される。複合体は、ヒト免疫グロブリンまたはアクリジニウム−標識された組み換え抗原に指向するアクリジニウム−標識された抗体であってもよい。複合体と共にインキュベーションし、その後、第2の洗浄工程、最後に、アクリジニウムの活性化および光出力の同時測定を行い、光出力は、微粒子に結合した複合体の量に比例している。
以下のヒト標本を使用した。
本明細書には、Abbott Laboratoriesで開発されたARCHITECTイムノアッセイプラットフォームでの1回の反応でC型肝炎(HCV)のコア抗原および抗体を検出する方法が記載される。原型となる化学発光イムノアッセイは、血清および血漿中のHCVに対するHCVコア抗原および抗体(抗−HCV)を同時に検出するために開発された。この原型の組み合わせアッセイは、ARCHITECT装置プラットフォームでの2工程(18’/4’)、3瓶のアッセイである。HCVコンボ試験は、HCVに感染した個人の血液中に存在し得るHCVコア抗原の検出に加え、HCVのコア、NS3およびNS4タンパク質に対するヒト抗体を検出する。
HCV感染の検出は、抗体検出のための複数のHCVタンパク質の使用を必要とする(HCVコア、NS3およびある場合には、NS4およびNS5ペプチドまたはタンパク質を含む。)。HCVコア抗原の検出は、HCVコア抗原に結合する抗体の使用を必要とし、このような抗体は、HCVコンボ試験の抗体側で利用されるHCVコアタンパク質に結合してもよい。研究者は、HCVコア抗原を捕捉するために利用されるもの(このアッセイではC−11−7)およびシグナルを発生するために利用されるもの(C11−9/C11−14)の両方について、コア抗原試験で使用される抗体によって標的とされるHCVコア抗原についてのアミノ酸配列を特定している。抗体によって認識されるそれぞれの部位について、この認識部位を含むアミノ酸は、アミノ酸の置換またはアミノ酸の欠失によって改変されていなければならない。
HCVコンボ試験は、3つのモノクローナル抗体(C11−7、C11−14およびC11−9)を利用する。このモノクローナル抗体のうち2つ(C11−7、C11−14)は、Abbottの米国特許「Methods for the simultaneous detection of HCV Antigens and HCV antibodies」にすでに記載されている。2004年4月27日に登録されたShah et al.による米国特許第6,727,092号。しかし、これらの2つのモノクローナル抗体の元々の開示は、2003年9月23日に登録されたAoyagi et al.の米国特許第6,623,921号に引用された。第3のモノクローナル抗体は、刊行物に開示された(Morota et al.,J.Virol.Meth 157:8(2009),Muerhoff et al.によって特許出願第20120009196号で議論されている(公開日2012−01−12)。
HCVコンボアッセイは、ビオチン−標識されたタンパク質(ストレプトアビジン、ニュートラアビジンおよび抗−ビオチン)を捕捉することができる1種類の磁気微粒子を使用する。簡単に言うと、Dynal M270カルボン酸の元々の粒子を、MES−Chapsバッファー、pH5.5(25mM 2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、0.1% 3−[(3−コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]−1−プロパンスルホネート(Chaps))で2回交換して洗浄する。粒子を、0.25mg/mLのEDAC(N−エチル−N’−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩)で、固形分1%で30分間、あらかじめ活性化する。粒子を、MES−Chapsバッファー(pH5.5)を1回交換して洗浄する。ニュートラアビジン/ストレプトアビジン/抗−ビオチンAbストック溶液を、0.40mg/mL、固形分1%で粒子に60分間かけて加える。粒子を、PBS−Chapsバッファー、pH7.2(リン酸緩衝生理食塩水(PBS)、0.1% Chaps)を3回交換して洗浄する。最終的な粒子濃度は、PBS−Chapsバッファー(pH7.2)中、固形分1%である。その後、これらの微粒子を、微粒子希釈剤(20mM MES、pH6.6、0.15M NaCl、5mM EDTA、13.6% スクロース、0.1% Nipasept、0.0005% Quinolone、5mM DTTおよび1.54g/L グルタチオンと、24mM SB3−14(N−テトラデシル−N,N−ジメチル−3−アンモニオ−1−プロパンスルホネート)を含む。)で、固形分が0.075%になるまで希釈する。
合成ペプチドをAnaSpec(Fremont、CA)によって製造した。純度>95%。
これらの合成ペプチドをAna Spec(Fremont CA)によって製造した。純度>95%。
13ミリグラム(2.0mL、0.196umol、1.0mol当量)のAcr−BSA−Malの0.1M PBS/0.1% CHAPS/5mM EDTA(pH6.7)(実施例2から)をポリプロピレン管に加えた。この溶液に、0.100mL(4.02mg、0.784umol、4.0mol当量)のC末端システインNS4ペプチド(AnaSpec、Fremont、CA)のジメチルスルホキシド(DMSO、Sigma Aldrich、St Louis、MO)の新しい41mg/mL溶液を加えた。反応バイアルに封をし、溶液を泡立たせることなく簡単にボルテックスで攪拌し、暗室中、室温で一晩インキュベートした。次に、未精製複合体を0.25MメルカプトエチルアミンHCl(MEA)水溶液で、最終的に1.14mM MEA反応濃度になるまで約30分間処理し、未反応のマレイミド基をクエンチした。複合体を、TosoHaas G3000SWカラム(Tosoh Bioscience LLC.、King of Prussia、PA)で0.01M PBS/0.1% CHAPS(pH6.3)を用い、SECクロマトグラフィーによってすぐに精製した。主要な複合体ピークに対応するフラクションを保存した。複合体の保存物の吸光度を280nmおよび370nmで測定し、これを使用し、補正した280nm吸光値を決定した。複合体を使用中に−20℃で保存した。
6ミリグラム(1.01mL、90nmole、1.0mol当量)のAcr−BSAの0.1M PBS/0.1% CHAPS(pH6.3)(実施例1から)をポリプロピレン管に加えた。この溶液に、0.431mL(4.31mg、22.5umol、250mol当量)の新しい10mg/mLの1−エチル−3−[3−ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド塩酸塩(EDAC)水溶液および0.259mL(2.58mg、22.5umol、250mol当量)の新しい10mg/mLのN−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)水溶液を加えた。混合物を穏やかにボルテックスで攪拌し、次いで、暗室中、室温で10分間、静かに反応させた。この活性化されたAcr−BSA複合体溶液に、4.4mg(0.881mL、0.72umol、8mol当量)の新しい5.0mg/mLのコアペプチド(AnaSpec、Fremont、CA)の0.01M PBS溶液(pH7.2)を加えた。この溶液を穏やかにボルテックスで攪拌し、暗室中、室温で一晩反応させた。SECクロマトグラフィーによって、TosoHaas G3000SWxlカラム(Tosoh Bioscience LLC.、King of Prussia、PA)で、0.01M PBS/0.1% CHAPS(pH6.3)を用いて複合体を精製し、凝集物を除去した。主要な複合体ピークに対応するフラクションを保存した。Acr−BSa−NS4ペプチド複合体の保存物の吸光度を280nmおよび370nmで測定し、これを使用し、補正した280nm吸光値を決定した。複合体を使用中に−20℃で保存した。
13ミリグラム(1.0mL、86.6nmole、1.0mol当量)のC11−7モノクローナル抗体(mAb)の0.01M PBS(pH7.2)の13.1mg/mLの溶液を、0.916mLの0.01M PBS(pH7.2)バッファーの入った褐色ガラスバイアルに加えた。この溶液に、0.144mLの0.133Mホスフェート/0.376M NaCl/7.5% CHAPS(pH8.0)を加え、反応物のpHを7.4から7.5に調節し、混合物を泡立たせることなく5分間攪拌した。この攪拌したC11−7 mAb溶液に、0.350mg(0.100mL、433nmole、5.0mol当量)のChromalinkビオチン(CLB、SoluLink、San Diego、CA)の無水ジメチルホルムアミド(DMF、Sigma Aldrich、St Louis、MO)の5.71mg/mLの溶液を加えた。この混合物を30分間攪拌し、次いで、暗室中、室温で静かに一晩反応させた。未精製複合体混合物は、合格であった。反応混合物を脱塩し、0.01M PBS/0.1% CHAPS(pH7.2)で平衡状態にしたZebaスピンカラム(Pierce、Rockford、III)を通すことによって、組み込まれていないCLBビオチンを除去した。溶出したC11−7 mAb−CLB複合体の吸光度を280nmおよび354nmで測定し、タンパク質濃度を概算し、抗体分子あたりのビオチンの組み込みを計算した。計算されたタンパク質濃度は、4.03mg/mLであり、C11−7 mAb分子あたりのビオチンの平均数は、4.12であった。
蒸留水で調製した1.068mLの過ヨウ素酸ナトリウム(Sigma Chemical Co.、St.Louis、MO)の100mg/mL溶液を、117.48mgのデキストラン(150,000MW GPC Grade、Pharmacosmos、Holbaek、Denmark)を2.1mLの蒸留水に溶解し、暗室中、攪拌しつつ、23℃の水浴で120分間インキュベートすることによって調製したデキストラン溶液に加えた。120分が終了したら、150mM HEPBS(Sigma Chemical、St.Louis、MO)バッファー(pH8.9)で平衡化した55mg/mLのBSA(Proliant Biologicals、Boone、IA)溶液6.408mLを、酸化したデキストラン溶液に加え、暗室中、23℃でさらに120分間反応を続けた。インキュベーション終了時に、1.06gのボラン−ジメチルアミン複合体(97%、Sigma−Aldrich、St.Louis、MO)を、暗室中、23℃で60分かけてデキストラン−BSA溶液に加え、その後、1.34mLの0.65M トリス−HCl(Sigma Chemical Co.、St.Louis、MO))(pH7.5)バッファーを23℃で16から20時間かけて加えた。PBS中、2.6mL/分で平衡化したHiPrep Sephacryl S300 26/60カラム(GE Healthcare、Uppsala、Sweden)を用い、得られた溶液を精製した。未精製デキストラン−BSAをカラムに入れ、280nmで吸光度を監視しつつ、2.6mL/分で操作した。2.6mLのフラクションを集め、空のフラクションを保存した。次いで、Amicon Ultra−15遠心分離濃縮機(50,000 MWCO、EMD Millipore Corporation、Billerica、MA)を用い、この保存されたフラクションを10mL未満になるまで濃縮した。この濃縮したデキストラン−BSAを、ナトリウムアジドおよびCHAPS(Sigma Chemical Co.、St.Louis、MO)の溶液で、最終濃度が0.1%ナトリウムアジドおよび0.5%CHAPSになるまで増加させた。この溶液に、45℃のオーブンで7日間熱によるストレスを加え、さらなるHiPrep Sephacryl S400カラム精製の前に2から8℃で保存した。HiPrep Sephacryl S400 26/60カラム(GE Healthcare、Uppsala、Sweden)を、2.6mL/分の流速でPBSを用いて平衡化し、熱によるストレスが加えられたデキストラン−BSAをカラムに入れた。高分子量の凝集物および低分子量の分解生成物を除去するために、フラクションを保存した。
リン酸ナトリウム、150mM NaCl、1mM EDTA(Sigma Chemical Co.、St.Louis、MO)、0.2% CHAPS(Sigma Chemical Co.、St.Louis、MO)を含む接合バッファー(pH7.4)中、6mgの精製され、熱によるストレスを与えられたデキストラン−BSA溶液(上述)を1.62mgのアクリジニウムSPSP(9−[[[[4−[4−オキソ−4−(2,3,4,5,6−ペンタフルオロフェノキシ)ブチル]フェニル]スルホニル](3−スルホプロピル)アミノ]カルボニル]−10−(3−スルホプロピル)と反応させた。暗室中、室温で反応を一晩進めた。一晩の反応が終了したら、2.7mgのスルホスクシンイミジル−4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボキシレート(sSMCC、Thermo−Fisher Scientific、Rockford、IL)を、SPSP−デキストラン−BSA溶液に加え、暗室中、室温で60分間インキュベーションを続けた。ゲル濾過によって、リン酸ナトリウム、NaCl、1mM EDTA、0.5% CHAPSを含むバッファー(pH6.0)で平衡化したカラムを用い、未反応のSPSPおよびsSMCCを除去した。最終的な溶液を、Amicon Ultra−4遠心分離濃縮機(30,000 MWCO)を用い、10mg/mLより大きくなるまで濃縮し、280nmおよび370nmでの吸光度を決定した。
HCVコンボフォーマット中でコア抗原を検出することができるようにするために、コアカプシドタンパク質の曝露が必要である。この曝露は、外側の環の瓶(瓶1)または中側の環の瓶(瓶2)のいずれかに存在する洗剤の使用を必要とし、この洗剤は、非イオン性の分類であってもよく、および/またはアミンを含むアルキル鎖基を含んでいてもよい(Aoyagi et al.,G01N 33/576、WO00/07023、2000年2月10日)。
実施例11に記載されるコンボフォーマット(および本明細書に記載されるコンボアッセイのすべての捕捉試薬)を用い、表6のデータは、抗−NS3の検出(パネルB)およびHCVコンボアッセイフォーマット中のコア抗原の検出における双性イオン性洗剤スルホベタイン(SB3)のさまざまな炭化水素鎖長の効果を示す。反応物中に洗剤が存在しない場合、パネルBの検出は、高い(S/N=39.6)が、コア抗原の検出は、低い(S/N=3.8)。炭化水素鎖の長さが8(SB3−8)を反応に使用する場合、パネルBおよびコア抗原の検出は、両方とも低い。炭化水素鎖の長さが増えるにつれて(特に12または14)、コア抗原の反応性は高まる。しかし、鎖長が16の場合、コア抗原の検出およびパネルBの反応性が両方とも低下し、パネルBの検出と、コア抗原の検出との適切なバランスを与えるための最適な炭化水素鎖の長さは、12から14のようであることを示唆している。
表9は、選択したセロコンバージョンパネルに対するHCVコンボアッセイの性能を示し、コア抗原検出に使用される洗剤は、外側の環(瓶1)に配置されるか、または中側の環(瓶2)に配置される。検出される出血の合計数が19/23であるとされ、性能はほぼ同じまま維持されている。
上述のように、コア抗原の検出に必要な洗剤は、同等の性能を有する外側の環の瓶(瓶1)または中側の環の瓶(瓶2)のいずれかに配置されていてもよい。しかし、62日間の安定性試験は、NS3標本(パネルB)のrluの保持において、洗剤が、外側の環の瓶に保持されている場合には約67%の低下を示し、一方、洗剤が中側の環の瓶に移動した場合には、rlu保持率の明らかな低下はなかった(表10)。
合計で9のセロコンバージョンパネルPHV−907、PHV−909、PHV−912、PHV−913、PHV−914、PHV−919(SeraCareから市販されている。)およびBCP 6214、BCP 6229およびBCP 9044(ZeptoMetrixから市販されている。)を、抗−HCVのみのアッセイ(Abbott ARCHITECT LN6C37)およびHCVコンボアッセイ(上述)によって試験した。結果は、S/CO(サンプル/カットオフ)の観点で表され、S/COが1.0以上だと反応性であると考えられる。表11に示されるように、HCVコンボアッセイは、これらのパネルにおいて、抗体のみのアッセイによって検出されるより速く、感染の証拠を検出する(6C37)。以下に示される(表12)のは、最初の一連の出血に対してRNAポジティブであったセロコンバージョンパネルについて、日数単位での平均的なウインドウピリオドの減少である。HCVコンボアッセイは、抗体のみのアッセイよりも平均で約18.4日速い検出を示し、RNAによって検出されるのとほぼ同等の検出を示した。一連の集合(PHV−919)中にRNAポジティブになった上に示される単一のセロコンバージョンパネルは、RNAと同時にHCVコンボアッセイによる検出を示し、抗体のみのアッセイによる検出より3日速い。
表12 HCVコンボアッセイによるウインドウピリオドの減少。1回目の出血で検出されたHCV RNAを含むHCVセロコンバージョンパネルのHCV AgまたはAbの検出までの時間(日数)。
表13は、任意のフォーマットによって検出されたセロコンバージョン出血の最も高い数が、(潜在的な21の出血の中で)検出される出血の合計数が17であるキャプチャオンザフライHCVコンボアッセイフォーマットによることを示す。6C37抗体のみのアッセイは、11の出血を検出し、一方、Murex HCVコンボ(MiDAS Report、Health Protection Agency−Centre for Infections、Report PER06007、February、2007)は、9の出血を検出した。表14は、表13に示される両方のセロコンバージョンパネルについてのS/CO情報を示す。さらに、表14では、S/CO値は、パネルBについて示される(抗−NS3のみのサンプル)。キャプチャオンザフライフォーマットは、より丈夫であり、S/COが6.19であるのに対し、6C37ではS/COが3から4であり、HCVコンボのためのキャプチャオンザフライフォーマットは、HCVセロコンバージョンパネルの検出に最も適したアッセイフォーマットであることを示している。
HCVに感染した個人からのセロコンバージョンパネルに由来する個人血清サンプルの中で抗体を検出する能力について、NS3組み換え抗原9NB49H(Acr−BSA−9NB49Hおよび9NB49H−Cbt)およびNS3h(NS3h−CbtおよびAcr−BSA−NS3h)を、HCV Ag/Abコンボフォーマットで試験した。結果は、S/CO(サンプル/カットオフ)の観点で表され、S/CO≧1.0のサンプルは、反応性であると考えられ、S/CO<1.0のサンプルは、非反応性であると考えられる。NS3hを用いたアッセイは、大きなセロコンバージョン感度が得られ、即ち、9NB49HおよびMurex HCV Ag/Abコンボを用いたアッセイと比較して、最も高いS/CO値で最も反応性の出血が検出された。
Claims (10)
- 試験サンプル中のHCV抗原およびHCV抗体を合わせて検出する方法であって、
(a)以下の試薬:
(i)ビオチンに結合することができる固相であって、該固相は、該固相に結合する、ビオチン化された抗−HCV抗体及び第1のビオチン化されたHCV抗原を含み、
第1のビオチン化されたHCV抗原は、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105及び配列番号106から選択されるアミノ酸配列を含む、固相、及び
(ii)第1のビオチン化されたHCV抗原によって捕捉された抗−HCV抗体に結合する、第1の検出可能に標識されたHCV抗原、
を同時に提供することと、
(b)
(i)ビオチン化された抗−HCV抗体が、試験サンプル中に存在するHCV抗原に特異的に結合し、前記固相の上に捕捉された、ビオチン化された抗−HCV抗体−HCV抗原複合体を生成し、
(ii)第1のビオチン化されたHCV抗原が、前記試験サンプル中に存在する抗−HCV抗体に特異的に結合し、前記固相の上に捕捉された第1のビオチン化されたHCV抗原−抗−HCV抗体複合体を生成し、及び
(iii)第1の検出可能に標識されたHCV抗原が、前記固相の上に捕捉された第1のビオチン化されたHCV抗原−抗−HCV抗体複合体の抗−HCV抗体に特異的に結合する、
条件下で工程(a)の該試薬をインキュベートすることと、
(c)捕捉された抗−HCV抗体および捕捉されたHCV抗原を含む固相を、未反応の試験サンプルおよび試薬から、単離することと、
(d)該単離された固相と、抗−HCV抗体−HCV抗原複合体中のHCV抗原に結合する検出可能に標識された複合抗体とを接触させることと、
(e)
(i)検出可能に標識された複合抗体から発生した第1のシグナルであって、第1のシグナルの存在が試験サンプル中のHCV抗原の存在を示す、第1のシグナル及び
(ii)第1の検出可能に標識されたHCV抗原から発生した第2のシグナルであって、第2のシグナルの存在が試験サンプル中の抗−HCV抗体の存在を示す、第2のシグナル、を検出すること、
を含む方法。 - 工程(a)がさらに、
(iii)第1のビオチン化されたHCV抗原とは別個である、固相に結合した第2のビオチン化されたHCV抗原であり、試験サンプル中に存在する第2の抗−HCV抗体に結合する、第2のビオチン化されたHCV抗原及び
(iv)第2の抗−HCV抗体に結合するための第2の検出可能に標識されたHCV抗原、
を提供することを含み、
工程(b)がさらに、
(iv)第2のビオチン化されたHCV抗原が、前記固相に結合し、前記試験サンプル中に存在する第2の抗−HCV抗体に特異的に結合し、前記固相の上に捕捉された第2のビオチン化されたHCV抗原−第2の抗−HCV抗体複合体を生成し、及び
(v)第2の検出可能に標識されたHCV抗原が、前記固相の上に捕捉された第2のビオチン化されたHCV抗原−第2の抗−HCV抗体複合体中の第2の抗−HCV抗体に特異的に結合することを含み、及び
工程(e)がさらに、
第2の検出可能に標識されたHCV抗原から発生した第3のシグナルであって、第3のシグナルの存在が、試験サンプル中の第2の抗−HCV抗体の存在を示す、第3のシグナル、を検出すること、
を含む、請求項1に記載の方法。 - 工程(a)が、さらに、
(v)第1及び第2のビオチン化されたHCV抗原とは別個である、固相に結合する第3のビオチン化されたHCV抗原であり、試験サンプル中に存在する第3の抗−HCV抗体に結合する、第3のビオチン化されたHCV抗原及び
(vi)第3の抗−HCV抗体に結合するための第3の検出可能に標識されたHCV抗原、
を提供すること含み、
工程(b)がさらに、
(vi)第3のビオチン化されたHCV抗原が、前記固相に結合し、前記試験サンプル中に存在する第3の抗−HCV抗体に特異的に結合し、前記固相の上に捕捉された第3のビオチン化されたHCV抗原−第3の抗−HCV抗体複合体を生成し、及び
(vii)第3の検出可能に標識されたHCV抗原が、前記固相の上に捕捉された第3のビオチン化されたHCV抗原−第3の抗−HCV抗体複合体中の第3の抗−HCV抗体に特異的に結合することを含み、及び
工程(e)がさらに、
第3の検出可能に標識されたHCV抗原から発生した第4のシグナルを検出することを含み、第4のシグナルの存在が、試験サンプル中の第3の抗−HCV抗体の存在を示す、第4のシグナルの検出、
を含む、請求項2に記載の方法。 - 試験サンプル中のHCV抗原およびHCV抗体を両方とも同時に検出するための方法であって、前記方法は、
(i)試験サンプルを、
(a)配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105又は配列番号106から選択されるアミノ酸配列を含む第1の捕捉抗原、及び
第1のHCVタンパク質のペプチド配列と、第1の検出可能な標識を含む、第1の検出抗原、
(b)第1のHCVタンパク質と異なる第2のHCVタンパク質のペプチド配列を含む第2の捕捉抗原、及び
第2のHCVタンパク質のペプチド配列と、第2の検出可能な標識を含む、第2の検出抗原、
(c)第1及び第2のHCVタンパク質と異なる第3のHCVタンパク質のペプチド配列を含む第3の捕捉抗原、及び
第3のHCVタンパク質のペプチド配列と、第3の検出可能な標識を含む、第3の検出抗原、
(d)第1の捕捉抗体、及び第4の検出可能な標識を含む複合抗体
と接触させ、
ここで、第1の捕捉抗体及び複合抗体は、試験サンプル中の第1、第2及び第3のHCVタンパク質と異なる第4のHCVタンパク質に特異的に結合し、それにより、
(1)前記試験サンプル中に存在する前記第1の捕捉抗原、第1の検出抗原および第1の抗−HCV抗体を含む、第1のサンドイッチ複合体が生成され、
(2)前記試験サンプル中に存在する前記第2の捕捉抗原、第2の検出抗原および第2の抗−HCV抗体を含む、第2のサンドイッチ複合体が生成され、
(3)前記試験サンプル中に存在する前記第3の捕捉抗原、第3の検出抗原および第3の抗−HCV抗体を含む、第3のサンドイッチ複合体が生成され、及び
(4)前記試験サンプル中に存在する前記捕捉抗体、前記複合抗体および第4のHCV抗原を含む、サンドイッチ複合体が生成され、及び
(ii)前記第1、第2、第3及び第4のサンドイッチ複合体の生成の結果として、前記第1、第2、第3及び第4の検出可能な標識から発生する第1、第2、第3及び第4のシグナルを測定し、
これによって、前記試験サンプル中に存在する第1、第2及び第3の抗−HCV抗体および第4のHCV抗原を同時に検出する方法。 - (i)第1、第2、第3および第4のHCVタンパク質は、それぞれ、コア抗原、E1、E2、NS2、NS3、NS4、NS5及びその部分から選択され、
(ii)第1の捕捉抗体は、2又は3個の異なる抗体を含み、及び/又は
(iii)捕捉抗原及び捕捉抗体は、固相に固定される、
請求項4に記載の方法。 - 第1の検出抗原が、寄託番号M62321でGenBankに寄託されたアミノ酸配列からの、アミノ酸34、48および115から121の欠失を含むコアペプチドである、請求項4に記載の方法。
- 前記第4のHCVタンパク質が、コア抗原である、請求項4に記載の方法。
- (i)第1の検出抗原は、寄託番号M62321でGenBankに寄託されたアミノ酸配列からの、アミノ酸34、48および115から121の欠失を含む、アクリジン化されたコアペプチドであり、
(ii)第2の捕捉抗原は、ビオチン化されたNS3組換え抗原であり、前記第2の検出抗原は、アクリジン化されたNS3組換え抗原であり、
(iii)第3の捕捉抗原は、ビオチン化されたNS4ペプチドであり、前記第3の検出抗原は、アクリジン化されたNS4ペプチドであり、
(iv)捕捉抗体は、ビオチン化されたC11−7モノクローナル抗体であり、及び/又は
(v)検出複合抗体は、C11−9抗体又はC11−14抗体を含む、
請求項4に記載の方法。 - 試験サンプル中のHCV抗原および抗体を同時に検出するためのキットであって、
(a)捕捉抗原と、第1のHCVタンパク質に対する第1の抗−HCV抗体を検出するための検出可能に標識されている検出抗原の第1の対であって、捕捉抗原は、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105又は配列番号106から選択されるアミノ酸配列を含む、第1の対、
(b)捕捉抗原と、第1のHCVタンパク質と異なる第2のHCVタンパク質に対する第2の抗−HCV抗体を検出するための検出可能に標識されている検出抗原の、第2の対、
(c)捕捉抗原と、第1及び第2のHCVタンパク質と異なる第3のHCVタンパク質に対する第3の抗−HCV抗体を検出するための検出可能に標識されている検出抗原の、第3の対、及び
(d)捕捉抗体と、第1、第2及び第3のHCVタンパク質と異なる第4のHCVタンパク質を検出するための検出可能に標識されている複合抗体の、第4の対、
を含むキット。 - 前記捕捉抗原および前記捕捉抗体は、固体支持体に結合する、請求項9に記載のキット。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361785124P | 2013-03-14 | 2013-03-14 | |
US61/785,124 | 2013-03-14 | ||
US201361788136P | 2013-03-15 | 2013-03-15 | |
US61/788,136 | 2013-03-15 | ||
PCT/US2013/077504 WO2014158272A1 (en) | 2013-03-14 | 2013-12-23 | Hcv antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016516989A JP2016516989A (ja) | 2016-06-09 |
JP6505076B2 true JP6505076B2 (ja) | 2019-04-24 |
Family
ID=51528694
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016500145A Active JP6505076B2 (ja) | 2013-03-14 | 2013-12-23 | Hcv抗原−抗体組み合わせアッセイおよびこれに使用するための方法および組成物 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9194873B2 (ja) |
EP (1) | EP2968526A4 (ja) |
JP (1) | JP6505076B2 (ja) |
CN (1) | CN105228649B (ja) |
BR (1) | BR112015023239A8 (ja) |
CA (1) | CA2906421C (ja) |
MX (1) | MX362075B (ja) |
WO (1) | WO2014158272A1 (ja) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SI2783216T1 (sl) | 2011-11-21 | 2019-01-31 | Abaxis, Inc. | Imunološki preskusi ojačanja signala |
CA2906421C (en) | 2013-03-14 | 2022-08-16 | George J. Dawson | Hcv antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein |
US9371374B2 (en) | 2013-03-14 | 2016-06-21 | Abbott Laboratories | HCV core lipid binding domain monoclonal antibodies |
CN105209616A (zh) | 2013-03-14 | 2015-12-30 | 雅培制药有限公司 | 用于改进的抗体检测的hcv ns3重组抗原及其突变体 |
TWI691716B (zh) | 2014-08-13 | 2020-04-21 | 美商艾巴希斯公司 | 電漿特異性結合搭配物檢定中之信號放大 |
EP3213083B1 (en) | 2014-10-29 | 2020-08-19 | Abbott Laboratories | Subject anti-hcv antibody detection assays employing ns3 capture peptides |
US20180292408A1 (en) * | 2015-04-20 | 2018-10-11 | Qoolabs, Inc. | Camelid single-domain hcv antibodies and methods of use |
WO2017024163A1 (en) | 2015-08-04 | 2017-02-09 | Abaxis, Inc. | Signal amplification in solution-based plasmonic specific-binding partner assays |
CN109562113A (zh) | 2016-05-10 | 2019-04-02 | C4医药公司 | 用于靶蛋白降解的螺环降解决定子体 |
CN109562107A (zh) | 2016-05-10 | 2019-04-02 | C4医药公司 | 用于靶蛋白降解的杂环降解决定子体 |
EP3455218A4 (en) | 2016-05-10 | 2019-12-18 | C4 Therapeutics, Inc. | C3 CARBON-BASED GLUTARIMIDE DEGRONIMERS FOR TARGET PROTEIN REDUCTION |
CN106124777A (zh) * | 2016-07-05 | 2016-11-16 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 吖啶标记结合物及其制备方法、化学发光试剂盒 |
CN106053443A (zh) * | 2016-07-05 | 2016-10-26 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 吖啶标记结合物及其制备方法、化学发光试剂盒 |
CN108700584B (zh) * | 2017-01-20 | 2021-11-30 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 标记复合物及其制备方法、试剂盒、应用和检测系统 |
IL295118A (en) | 2017-01-30 | 2022-09-01 | Zoetis Services Llc | Solution-based specific plasmon binding assays and metallic nanostructures |
CN111521779B (zh) * | 2019-02-01 | 2024-02-23 | 科美诊断技术股份有限公司 | 一种丙型肝炎病毒抗原抗体联检方法、试剂盒 |
CN110261616B (zh) * | 2019-04-30 | 2021-07-20 | 广东菲鹏生物有限公司 | 一种丙型肝炎病毒检测试剂盒 |
GB202006306D0 (en) * | 2020-04-29 | 2020-06-10 | Lumiradx Tech Ltd | Antibody/antigen detection |
WO2021231391A1 (en) * | 2020-05-12 | 2021-11-18 | Beckman Coulter, Inc. | Laboratory-based assessment of covid infection |
CN112341527B (zh) * | 2020-09-16 | 2021-08-31 | 菲鹏生物股份有限公司 | Hcv重组抗原及应用 |
CN112964873B (zh) * | 2021-02-22 | 2022-09-30 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 基于夹心法的SARS-CoV-2检测试剂盒 |
CN117890589A (zh) * | 2022-10-08 | 2024-04-16 | 菲鹏生物股份有限公司 | 一种多表位HCV core抗体组合及检测试剂盒 |
Family Cites Families (190)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4425437A (en) | 1979-11-05 | 1984-01-10 | Genentech, Inc. | Microbial polypeptide expression vehicle |
US4431739A (en) | 1979-11-05 | 1984-02-14 | Genentech, Inc. | Transformant bacterial culture capable of expressing heterologous protein |
US4338397A (en) | 1980-04-11 | 1982-07-06 | President And Fellows Of Harvard College | Mature protein synthesis |
US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
US4383817A (en) | 1982-02-11 | 1983-05-17 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Spinneret plate |
EP0092918B1 (en) | 1982-04-22 | 1988-10-19 | Imperial Chemical Industries Plc | Continuous release formulations |
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5807715A (en) | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
CA1341482C (en) | 1984-10-31 | 2005-05-10 | Paul A. Luciw | Process for preparing fragments of aids-associated retroviruses |
US5128326A (en) | 1984-12-06 | 1992-07-07 | Biomatrix, Inc. | Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same |
US6492107B1 (en) | 1986-11-20 | 2002-12-10 | Stuart Kauffman | Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique |
DE3590766C2 (ja) | 1985-03-30 | 1991-01-10 | Marc Genf/Geneve Ch Ballivet | |
US5618920A (en) | 1985-11-01 | 1997-04-08 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
DE3600905A1 (de) | 1986-01-15 | 1987-07-16 | Ant Nachrichtentech | Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
ATE111083T1 (de) | 1986-10-22 | 1994-09-15 | Abbott Lab | Chemilumineszierende acridinium- und phenantridiniumsalze. |
WO1988007089A1 (en) | 1987-03-18 | 1988-09-22 | Medical Research Council | Altered antibodies |
US5258498A (en) | 1987-05-21 | 1993-11-02 | Creative Biomolecules, Inc. | Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins |
US4880078A (en) | 1987-06-29 | 1989-11-14 | Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha | Exhaust muffler |
US5350671A (en) | 1987-11-18 | 1994-09-27 | Chiron Corporation | HCV immunoassays employing C domain antigens |
US5006309A (en) | 1988-04-22 | 1991-04-09 | Abbott Laboratories | Immunoassay device with liquid transfer between wells by washing |
US5089424A (en) | 1988-06-14 | 1992-02-18 | Abbott Laboratories | Method and apparatus for heterogeneous chemiluminescence assay |
WO1990001443A1 (de) | 1988-08-08 | 1990-02-22 | Iffiu Michael A | Klappbares sesselrad mit stromlinienförmiger, in drei geteilter und faltbarer verkleidung |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5241070A (en) | 1988-09-26 | 1993-08-31 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters and uses thereof |
SE462454B (sv) | 1988-11-10 | 1990-06-25 | Pharmacia Ab | Maetyta foer anvaendning i biosensorer |
WO1990005144A1 (en) | 1988-11-11 | 1990-05-17 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
GB8826530D0 (en) | 1988-11-12 | 1988-12-14 | Ped Capacitors Ltd | Electrical capacitors |
US5063081A (en) | 1988-11-14 | 1991-11-05 | I-Stat Corporation | Method of manufacturing a plurality of uniform microfabricated sensing devices having an immobilized ligand receptor |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
CA2016841C (en) | 1989-05-16 | 1999-09-21 | William D. Huse | A method for producing polymers having a preselected activity |
AU652539B2 (en) | 1989-05-16 | 1994-09-01 | Medical Research Council | Co-expression of heteromeric receptors |
CA2016842A1 (en) | 1989-05-16 | 1990-11-16 | Richard A. Lerner | Method for tapping the immunological repertoire |
US5399346A (en) | 1989-06-14 | 1995-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Gene therapy |
AU6430190A (en) | 1989-10-10 | 1991-05-16 | Pitman-Moore, Inc. | Sustained release composition for macromolecular proteins |
EP0550436A1 (en) | 1989-11-06 | 1993-07-14 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Protein microspheres and methods of using them |
GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
FR2656431B1 (fr) | 1989-12-22 | 1994-06-10 | Essilor Int | Procede et solution pour decontaminer une lentille souple, en particulier du type hydrophile. |
US5780225A (en) | 1990-01-12 | 1998-07-14 | Stratagene | Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules |
EP1690935A3 (en) | 1990-01-12 | 2008-07-30 | Abgenix, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6194140B1 (en) | 1990-04-04 | 2001-02-27 | Chiron Corporation | HCV NS3 protein fragments having helicase activity and improved solubility |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
DK0585287T3 (da) | 1990-07-10 | 2000-04-17 | Cambridge Antibody Tech | Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer |
EP0542810A1 (en) | 1990-08-02 | 1993-05-26 | B.R. Centre Limited | Methods for the production of proteins with a desired function |
CA2048302A1 (en) | 1990-08-15 | 1992-02-16 | Victoria P. Meucci | Solubilization reagent for biological test samples |
US5135875A (en) | 1990-08-15 | 1992-08-04 | Abbott Laboratories | Protein precipitation reagent |
AU8505191A (en) | 1990-08-24 | 1992-03-17 | Ixsys, Inc. | Methods of synthesizing oligonucleotides with random codons |
US6172189B1 (en) | 1990-08-24 | 2001-01-09 | Abbott Laboratories | Hepatitis C assay utilizing recombinant antigens |
US5698426A (en) | 1990-09-28 | 1997-12-16 | Ixsys, Incorporated | Surface expression libraries of heteromeric receptors |
US5753430A (en) | 1990-11-07 | 1998-05-19 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies to hepatitis C virus and method for using same |
ATE164395T1 (de) | 1990-12-03 | 1998-04-15 | Genentech Inc | Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften |
ATE177782T1 (de) | 1990-12-20 | 1999-04-15 | Ixsys Inc | Optimierung von bindenden proteinen |
JP4146512B2 (ja) | 1991-03-01 | 2008-09-10 | ダイアックス コープ. | 小型タンパク質 |
CA2108147C (en) | 1991-04-10 | 2009-01-06 | Angray Kang | Heterodimeric receptor libraries using phagemids |
DE69232706T2 (de) | 1991-05-01 | 2002-11-28 | Jackson H M Found Military Med | Verfahren zur behandlung infektiöser respiratorischer erkrankungen |
DE69233482T2 (de) | 1991-05-17 | 2006-01-12 | Merck & Co., Inc. | Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen |
CA2069530A1 (en) | 1991-06-03 | 1992-12-04 | Cass J. Grandone | Reagent pack for immunoassays |
AU2238292A (en) | 1991-06-14 | 1993-01-12 | Xoma Corporation | Microbially-produced antibody fragments and their conjugates |
UA40572C2 (uk) | 1991-06-24 | 2001-08-15 | Чірон Корпорейшн | Поліпептид, що містить укорочену послідовність вірусу гепатиту с, ізольований епітоп, реагент для імуноаналізу на вірус гепатиту с (варіанти), спосіб виявлення наявності антитіл (варіанти) |
DE4122599C2 (de) | 1991-07-08 | 1993-11-11 | Deutsches Krebsforsch | Phagemid zum Screenen von Antikörpern |
EP0605522B1 (en) | 1991-09-23 | 1999-06-23 | Medical Research Council | Methods for the production of humanized antibodies |
US5565332A (en) | 1991-09-23 | 1996-10-15 | Medical Research Council | Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach |
WO1993011236A1 (en) | 1991-12-02 | 1993-06-10 | Medical Research Council | Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage |
US5766886A (en) | 1991-12-13 | 1998-06-16 | Xoma Corporation | Modified antibody variable domains |
US5714350A (en) | 1992-03-09 | 1998-02-03 | Protein Design Labs, Inc. | Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region |
US5912015A (en) | 1992-03-12 | 1999-06-15 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Modulated release from biocompatible polymers |
US5733743A (en) | 1992-03-24 | 1998-03-31 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
CA2131727A1 (en) | 1992-03-30 | 1993-10-14 | Diana E. Clarisse | Reagents and methods for the detection and quantification of thyroxine in fluid samples |
US5352803A (en) | 1992-03-30 | 1994-10-04 | Abbott Laboratories | 5(6)-methyl substituted fluorescein derivatives |
US5912120A (en) | 1992-04-09 | 1999-06-15 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services, | Cloning, expression and diagnosis of human cytochrome P450 2C19: the principal determinant of s-mephenytoin metabolism |
UA39944C2 (uk) | 1992-07-07 | 2001-07-16 | Чірон Корпорейшн | Спосіб визначення ранньої сероконверсії у ссавця-хазяїна до вірусу гепатиту с і набір для використання в способі |
WO1994002602A1 (en) | 1992-07-24 | 1994-02-03 | Cell Genesys, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
US5639641A (en) | 1992-09-09 | 1997-06-17 | Immunogen Inc. | Resurfacing of rodent antibodies |
US5934272A (en) | 1993-01-29 | 1999-08-10 | Aradigm Corporation | Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug |
WO1994018219A1 (en) | 1993-02-02 | 1994-08-18 | The Scripps Research Institute | Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains |
WO1995012677A2 (en) | 1993-11-04 | 1995-05-11 | Innogenetics N.V. | Immunodominant human t-cell epitopes of hepatitis c virus |
US5565352A (en) | 1993-11-24 | 1996-10-15 | Arch Development Corporation | Deubiquitinating enzyme: compositions and methods |
EP0733070A1 (en) | 1993-12-08 | 1996-09-25 | Genzyme Corporation | Process for generating specific antibodies |
DK0744958T3 (da) | 1994-01-31 | 2003-10-20 | Univ Boston | Polyklonale antistofbiblioteker |
US5516637A (en) | 1994-06-10 | 1996-05-14 | Dade International Inc. | Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage |
DE4428705A1 (de) | 1994-08-12 | 1996-02-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Rekombinantes Antigen aus der NS3-Region des Hepatitis C Virus |
EP0805678B1 (en) | 1995-01-05 | 2003-10-29 | THE BOARD OF REGENTS acting for and on behalf of THE UNIVERSITY OF MICHIGAN | Surface-modified nanoparticles and method of making and using same |
US6130364A (en) | 1995-03-29 | 2000-10-10 | Abgenix, Inc. | Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination |
US6091001A (en) | 1995-03-29 | 2000-07-18 | Abgenix, Inc. | Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination |
US5641870A (en) | 1995-04-20 | 1997-06-24 | Genentech, Inc. | Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification |
US6019968A (en) | 1995-04-14 | 2000-02-01 | Inhale Therapeutic Systems, Inc. | Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use |
US5705330A (en) | 1995-04-14 | 1998-01-06 | Abbott Laboratories | Chemiluminescent immunoassay for antibody detection |
KR100479146B1 (ko) | 1995-04-21 | 2005-05-16 | 셀 제네시스, 인코포레이티드 | 큰게놈dna결실유발법 |
DE69637481T2 (de) | 1995-04-27 | 2009-04-09 | Amgen Fremont Inc. | Aus immunisierten Xenomäusen stammende menschliche Antikörper gegen IL-8 |
AU2466895A (en) | 1995-04-28 | 1996-11-18 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
WO1997007788A2 (en) | 1995-08-31 | 1997-03-06 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Composition for sustained release of an agent |
US6331431B1 (en) | 1995-11-28 | 2001-12-18 | Ixsys, Inc. | Vacuum device and method for isolating periplasmic fraction from cells |
JP2978435B2 (ja) | 1996-01-24 | 1999-11-15 | チッソ株式会社 | アクリロキシプロピルシランの製造方法 |
BRPI9715219B8 (pt) | 1996-02-09 | 2015-07-07 | Abbvie Biotechnology Ltd | Vetor recombinante de expressão, e célula hospedeira procariótica. |
PT885002E (pt) | 1996-03-04 | 2011-07-14 | Massachusetts Inst Technology | Materiais e métodos para aumento da internalização celular |
US5714352A (en) | 1996-03-20 | 1998-02-03 | Xenotech Incorporated | Directed switch-mediated DNA recombination |
US5985309A (en) | 1996-05-24 | 1999-11-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Preparation of particles for inhalation |
US5855913A (en) | 1997-01-16 | 1999-01-05 | Massachusetts Instite Of Technology | Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery |
US5874064A (en) | 1996-05-24 | 1999-02-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery |
US6699658B1 (en) | 1996-05-31 | 2004-03-02 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
US7285418B2 (en) | 1996-06-25 | 2007-10-23 | Hytest Ltd. | Method and kit for the diagnosis of troponin I |
US5795784A (en) | 1996-09-19 | 1998-08-18 | Abbott Laboratories | Method of performing a process for determining an item of interest in a sample |
US5856194A (en) | 1996-09-19 | 1999-01-05 | Abbott Laboratories | Method for determination of item of interest in a sample |
US5916771A (en) | 1996-10-11 | 1999-06-29 | Abgenix, Inc. | Production of a multimeric protein by cell fusion method |
ATE387495T1 (de) | 1996-12-03 | 2008-03-15 | Amgen Fremont Inc | Vollkommen humane antikörper die egfr binden |
CA2277801C (en) | 1997-01-16 | 2002-10-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Preparation of particles for inhalation |
PT971946E (pt) | 1997-01-21 | 2006-11-30 | Gen Hospital Corp | Selecção de proteínas utilizando fusões arn-proteína |
DK0968291T3 (da) | 1997-02-21 | 2004-06-07 | Genentech Inc | Antistoffragment-polymerkonjugater |
US6235883B1 (en) | 1997-05-05 | 2001-05-22 | Abgenix, Inc. | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
NZ516848A (en) | 1997-06-20 | 2004-03-26 | Ciphergen Biosystems Inc | Retentate chromatography apparatus with applications in biology and medicine |
WO1999006834A2 (en) | 1997-08-04 | 1999-02-11 | Ixsys, Incorporated | Methods for identifying ligand specific binding molecules |
US6183121B1 (en) | 1997-08-14 | 2001-02-06 | Vertex Pharmaceuticals Inc. | Hepatitis C virus helicase crystals and coordinates that define helicase binding pockets |
US6846905B2 (en) | 1997-08-15 | 2005-01-25 | Abbott Laboratories | Antigen constructs useful in the detection and differentiation of antibodies to HIV |
US5989463A (en) | 1997-09-24 | 1999-11-23 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Methods for fabricating polymer-based controlled release devices |
SE512663C2 (sv) | 1997-10-23 | 2000-04-17 | Biogram Ab | Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer |
US6194222B1 (en) | 1998-01-05 | 2001-02-27 | Biosite Diagnostics, Inc. | Methods for monitoring the status of assays and immunoassays |
AU2978899A (en) | 1998-03-03 | 1999-09-20 | Abgenix, Inc. | Cd147 binding molecules as therapeutics |
WO1999051773A1 (en) | 1998-04-03 | 1999-10-14 | Phylos, Inc. | Addressable protein arrays |
US20020029391A1 (en) | 1998-04-15 | 2002-03-07 | Claude Geoffrey Davis | Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling |
WO1999054342A1 (en) | 1998-04-20 | 1999-10-28 | Pablo Umana | Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity |
FR2779526A1 (fr) | 1998-06-09 | 1999-12-10 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Nouveau procede de dosage de la troponine i cardiaque |
GB2339018B (en) * | 1998-06-22 | 2003-07-30 | Ortho Clinical Diagnostics | Specific binding assays using methyl orange |
JP2002518432A (ja) | 1998-06-24 | 2002-06-25 | アドバンスト インハレーション リサーチ,インコーポレイテッド | 吸入器から放出される大多孔性粒子 |
US6406921B1 (en) | 1998-07-14 | 2002-06-18 | Zyomyx, Incorporated | Protein arrays for high-throughput screening |
US6623921B2 (en) * | 1998-07-30 | 2003-09-23 | Advanced Life Science Institute, Inc. | Method for measurement of hepatitis C virus |
WO2000007023A1 (fr) | 1998-07-30 | 2000-02-10 | Advanced Life Science Institute, Inc. | Procede pour la determination de l'hepatite a virus de type c |
CA2341029A1 (en) | 1998-08-17 | 2000-02-24 | Abgenix, Inc. | Generation of modified molecules with increased serum half-lives |
EP2112166B1 (en) | 1998-12-23 | 2018-11-21 | Pfizer Inc. | Human monoclonal antibodies to ctla-4 |
AU3267600A (en) | 1999-03-24 | 2000-10-09 | Lakefield Research Limited | Purification of cobalt solutions containing iron and manganese with oxidation mixture of s02 and oxygen |
AU4025300A (en) | 1999-03-24 | 2000-10-09 | Packard Bioscience Company | Continuous porous matrix arrays |
TR200603997T1 (tr) | 1999-03-25 | 2010-01-21 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Beşeri IL-12'yi bağlayan beşeri antikorlar ve bunları üretmek için yöntemler. |
US6914128B1 (en) | 1999-03-25 | 2005-07-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing |
ES2420835T3 (es) | 1999-04-09 | 2013-08-27 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Procedimiento para controlar la actividad de las moléculas inmunofuncionales |
US20020037868A1 (en) | 1999-04-14 | 2002-03-28 | Institut Pasteur | Method for detecting hepatitis C |
AU6226100A (en) | 1999-07-19 | 2001-04-24 | Epimmune, Inc. | Inducing cellular immune responses to hepatitis c virus using peptide and nucleic acid compositions |
WO2001009609A2 (en) * | 1999-07-28 | 2001-02-08 | Chiron Corporation | Hepatitis c viral antigen immunoassay detection systems |
JP2003516732A (ja) | 1999-11-24 | 2003-05-20 | カイロン コーポレイション | 新規なhcv非構造ポリペプチド |
US6986892B1 (en) | 1999-11-24 | 2006-01-17 | Chiron Corporation | Immunogenic Hepatitis C virus non-structural polypeptides |
US7462354B2 (en) | 1999-12-28 | 2008-12-09 | Pharmexa Inc. | Method and system for optimizing minigenes and peptides encoded thereby |
CA2407956A1 (en) | 2000-05-03 | 2001-11-08 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
EP1350105B1 (en) * | 2000-06-15 | 2007-07-25 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Immunoassays for anti-hcv antibodies |
WO2002000879A2 (en) | 2000-06-28 | 2002-01-03 | Glycofi, Inc. | Methods for producing modified glycoproteins |
US7449308B2 (en) | 2000-06-28 | 2008-11-11 | Glycofi, Inc. | Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes |
EP1345968A2 (en) | 2000-12-28 | 2003-09-24 | Altus Biologics Inc. | Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them |
JP4353793B2 (ja) | 2001-06-26 | 2009-10-28 | アボット・ラボラトリーズ | Hcv抗原とhcv抗体との同時検出のための方法 |
US7101683B2 (en) * | 2001-06-26 | 2006-09-05 | Abbott Laboratories | Methods for the simultaneous detection of HCV antigens and HCV antibodies |
US20040192898A1 (en) | 2001-08-17 | 2004-09-30 | Jia Audrey Yunhua | Anti-abeta antibodies |
EP2093286B1 (en) | 2001-10-01 | 2013-02-27 | Dyax Corporation | Multi-chain eukaryotic display vectors and uses thereof |
MXPA04003798A (es) | 2001-10-25 | 2004-07-30 | Genentech Inc | Composiciones de glicoproteina. |
US7049060B2 (en) | 2001-11-05 | 2006-05-23 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | HCV anti-core monoclonal antibodies |
US20030108563A1 (en) | 2001-11-07 | 2003-06-12 | Chander Bahl | Reagents for the simultaneous detection of HCV core antigens and antibodies |
US7419821B2 (en) | 2002-03-05 | 2008-09-02 | I-Stat Corporation | Apparatus and methods for analyte measurement and immunoassay |
US7371383B2 (en) | 2002-04-12 | 2008-05-13 | Medimmune, Inc. | Recombinant anti-interleukin-9 antibodies |
FR2839555B1 (fr) * | 2002-05-10 | 2007-07-27 | Bio Rad Pasteur | Procede de detection simultanee d'un antigene et d'un anticorps d'un microorganisme infectieux |
US20040018577A1 (en) | 2002-07-29 | 2004-01-29 | Emerson Campbell John Lewis | Multiple hybrid immunoassay |
US8193318B2 (en) | 2002-08-14 | 2012-06-05 | Macrogenics, Inc. | FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof |
US20040152070A1 (en) * | 2003-02-04 | 2004-08-05 | Shah Dinesh O. | Method of detection of HCV antibodies in combination assay or sole antibody assay |
AU2004252067B2 (en) | 2003-05-09 | 2012-04-12 | Duke University | CD20-specific antibodies and methods of employing same |
EP1646655A2 (en) | 2003-07-09 | 2006-04-19 | Eli Lilly And Company | Tgf-beta1 ligands |
CA2537055A1 (en) | 2003-08-22 | 2005-04-21 | Medimmune, Inc. | Humanization of antibodies |
US7682833B2 (en) | 2003-09-10 | 2010-03-23 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with improved sample closure |
US7723099B2 (en) | 2003-09-10 | 2010-05-25 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with immuno-reference electrode |
KR101352853B1 (ko) | 2004-01-07 | 2014-02-04 | 조마 테크놀로지 리미티드 | M-csf-특이적 단일클론 항체 및 그것의 사용 |
CN104611245A (zh) | 2004-04-15 | 2015-05-13 | 格利科菲公司 | 在低等真核生物中产生半乳糖基化糖蛋白 |
WO2005110474A2 (en) | 2004-05-10 | 2005-11-24 | Macrogenics, Inc. | HUMANIZED FcϜRIIB SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF |
WO2006004910A2 (en) | 2004-06-28 | 2006-01-12 | Transtarget Inc. | Improved bispecific antibodies |
JP4836281B2 (ja) * | 2004-08-27 | 2011-12-14 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス インコーポレイテッド | Hcv非構造タンパク質変異体およびその使用 |
US7612181B2 (en) | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
US7883855B2 (en) | 2006-07-21 | 2011-02-08 | Abbott Laboratories | Immunosuppressant drug extraction reagent for immunoassays |
US8865398B2 (en) * | 2006-09-01 | 2014-10-21 | Abbott Laboratories | Combination hepatitis C virus antigen and antibody detection method |
DK2073842T4 (da) | 2006-09-10 | 2024-01-15 | Glycotope Gmbh | Anvendelse af humane celler af myloid leukæmioprindelse til udtrykkelse af anti-stoffer |
EP2097750A2 (en) * | 2006-10-26 | 2009-09-09 | Abbott Laboratories | Immunoassay of analytes in samples containing endogenous anti-analyte antibodies |
US7858752B2 (en) | 2006-12-05 | 2010-12-28 | Abbott Laboratories | Recombinant antibodies against hepatitis C virus and methods of obtaining and using same |
EP2514766A3 (en) | 2007-03-29 | 2013-06-05 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Antibodies, methods and kits for diagnosing and treating melanoma |
US7906293B2 (en) | 2007-04-09 | 2011-03-15 | Abbott Laboratories | Acridinium phenyl esters useful in the analysis of biological |
EP2014302A1 (en) | 2007-07-12 | 2009-01-14 | Institut Curie | An antibody specific for the Tn antigen for the treatment of cancer |
MX336869B (es) | 2008-11-03 | 2016-02-04 | Alethia Biotherapeutics Inc | Anticuerpos que bloquean espicificamente la actividad biologica de un antigeno de tumor. |
US8030026B2 (en) | 2009-02-24 | 2011-10-04 | Abbott Laboratories | Antibodies to troponin I and methods of use thereof |
WO2010112733A1 (fr) * | 2009-03-30 | 2010-10-07 | bioMérieux | Support solide de détection du vhc |
US20100297607A1 (en) * | 2009-05-20 | 2010-11-25 | Jian Zheng | Reagents For HCV Antigen-Antibody Combination Assays |
WO2011163558A1 (en) * | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Abbott Laboratories | Materials and methods for assay of anti-hepatitis c virus (hcv) antibodies |
WO2012006500A2 (en) | 2010-07-08 | 2012-01-12 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein |
CN105209616A (zh) | 2013-03-14 | 2015-12-30 | 雅培制药有限公司 | 用于改进的抗体检测的hcv ns3重组抗原及其突变体 |
CA2906421C (en) | 2013-03-14 | 2022-08-16 | George J. Dawson | Hcv antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein |
US9371374B2 (en) | 2013-03-14 | 2016-06-21 | Abbott Laboratories | HCV core lipid binding domain monoclonal antibodies |
-
2013
- 2013-12-23 CA CA2906421A patent/CA2906421C/en active Active
- 2013-12-23 BR BR112015023239A patent/BR112015023239A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-12-23 US US14/139,108 patent/US9194873B2/en active Active
- 2013-12-23 CN CN201380076444.7A patent/CN105228649B/zh active Active
- 2013-12-23 EP EP13880371.3A patent/EP2968526A4/en active Pending
- 2013-12-23 MX MX2015012823A patent/MX362075B/es active IP Right Grant
- 2013-12-23 JP JP2016500145A patent/JP6505076B2/ja active Active
- 2013-12-23 WO PCT/US2013/077504 patent/WO2014158272A1/en active Application Filing
-
2015
- 2015-09-11 US US14/851,471 patent/US9841427B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2906421C (en) | 2022-08-16 |
CN105228649B (zh) | 2019-01-18 |
BR112015023239A2 (pt) | 2018-02-06 |
MX2015012823A (es) | 2016-06-10 |
MX362075B (es) | 2019-01-07 |
US20170003290A9 (en) | 2017-01-05 |
WO2014158272A1 (en) | 2014-10-02 |
US9841427B2 (en) | 2017-12-12 |
US20160123983A1 (en) | 2016-05-05 |
CA2906421A1 (en) | 2014-10-02 |
US20140272933A1 (en) | 2014-09-18 |
EP2968526A4 (en) | 2016-11-09 |
JP2016516989A (ja) | 2016-06-09 |
US9194873B2 (en) | 2015-11-24 |
BR112015023239A8 (pt) | 2018-04-17 |
EP2968526A1 (en) | 2016-01-20 |
CN105228649A (zh) | 2016-01-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6505076B2 (ja) | Hcv抗原−抗体組み合わせアッセイおよびこれに使用するための方法および組成物 | |
US20170327803A1 (en) | Hcv ns3 recombinant antigens and mutants thereof for improved antibody detection | |
JP5802595B2 (ja) | 組み合わせc型肝炎ウイルス抗原及び抗体検出法 | |
CN105378099B (zh) | Hcv核心脂质结合结构域单克隆抗体 | |
JP2001215228A (ja) | ウイルスの検出又は測定方法 | |
US11340230B2 (en) | Subject anti-HCV antibody detection assays employing NS3 capture peptides | |
US9551714B2 (en) | Materials and methods for assay of anti-hepatitis C virus (HCV) antibodies | |
JP2006516741A (ja) | コンビネーションアッセイ又は単独抗体アッセイにおけるhcv抗体の改良された検出方法 | |
JP3176570B2 (ja) | Hcvの検出又は測定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161219 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20171027 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180206 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180724 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181023 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190226 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190326 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6505076 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |