JP4896869B2 - 免疫測定法及びその試薬 - Google Patents
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Description
しかし、非特許文献3においては、グルコースオキシダーゼを用いた方法におけるトリニトロトルエンの検出限界は5μg/l(5ng/ml)であったと記載されているとおり、充分な感度が得られないため測定対象が限られるという問題があった。
また、基質として添加するグルコース以外に、被検体に由来するグルコースと遊離FADなど、内因性の基質や補酵素とアポ酵素が反応し、非特異的に過酸化水素が発生して検出試薬と反応してしまう為、ブランクが変化する等の問題もあった。
(1)被検体に目的とする抗原に対する特異的抗体、補酵素で標識した目的とする抗原、アポD−アミノ酸オキシダーゼ、D−アミノ酸及びオキシダーゼ系によって産生する過酸化水素を検出する試薬を同時または順次共存させることを特徴とするアポ酵素の再活性化を用いた目的とする抗原の免疫測定法;
(2)用いるD−アミノ酸の種類を選択することによって、測定感度を調節する(1)記載の免疫測定法;
(3)D−アミノ酸として、Ala、Met、Val、Ile、Phe、Pro、Ser、Thr、Asn、Leu、Tyr、Trp、Asp、Glu、His、及びArgの各D体からなる群より選ばれる1以上のD−アミノ酸を使用する(1)又は(2)記載の免疫測定法を提供するものである。
(4)目的とする抗原に対する特異的抗体、補酵素で標識した目的とする抗原、アポD−アミノ酸オキシダーゼ、D−アミノ酸及びオキシダーゼ系によって産生する過酸化水素を検出する試薬を含有する免疫測定試薬組成物;
(5)用いるD−アミノ酸の種類を選択することによって、測定感度を調節した(4)記載の免疫測定試薬組成物;
(6)D−アミノ酸として、Ala、Met、Val、Ile、Phe、Pro、Ser、Thr、Asn、Leu、Tyr、Trp、Asp、Glu、His、及びArgの各D体からなる群より選ばれる1以上のD−アミノ酸を使用した(4)又は(5)記載の免疫測定試薬組成物を提供するものである。
また、補酵素と抗原との結合部位は、抗体と該抗原の結合反応を阻害しない部位を選択するのが好ましい。
1)アポD−アミノ酸オキダーゼのFADを用いた活性化確認と基質特異性
50mM Tris−HCl(pH8.3)、5mM DA−64(和光純薬工業社製)、5mM D−アミノ酸を含む試薬1、10U/ml アポD−アミノ酸オキシダーゼ(CALZYME社製CATALOG#:176A0025)、5U/ml パーオキシダーゼを含む試薬2及び検体としてFAD水溶液を用い、日立7170形自動分析装置にて、2ポイントエンドモードで検体:7μl、R1:180μl、R2:90μl、測定波長700nmのパラメーターにより検討した。D−アミノ酸をD−バリンとした際の反応タイムコース(図3)及びその検量線(図4)を示す。
1)で、アポ酵素を再構成して酵素活性を確認できたので、次にD−アミノ酸の種類のみを変更して測定を実施した。D−アミノ酸としては、Ala、Met、Val、Ile、Phe、Pro、Ser、Thr、Asn、Leu、Tyr、Trp、Asp、Glu、His、Argの各D体を用いた。D−バリンの場合を100として計算した前記各種D−アミノ酸の反応性%を表1にまとめた。
(テストステロン抗体を用いたテストステロンの測定)
試薬1としては、実施例1試薬中のアミノ酸として、D−バリン、D−チロシン、及びD−プロリンをそれぞれ用い、更に0.115μMのFAD標識テストステロン、及びテストステロンに対する抗体(BiosPacific社製clone number:A53070148P)を1mg/mlを加えた試薬を用いた。試薬2は、実施例1と同一である。測定条件は、日立7170形自動分析装置にて、検体量15μl、試薬分注量(R1)150μl、試薬分注量(R2)75μlに設定し、エンドポイント測定法の2ポイントエンドモードで、測光ポイントを16−34、測定波長700nmとし、測定した。検体をテストステロンとした場合の検量線を図5に示す。図5に示した如く良好な検量線が得られ、D−アミノ酸の種類を変更することで測定法の感度が調整できることが判る。
Claims (8)
- 被検体に、目的とする抗原に対する特異的抗体、補酵素で標識した目的とする抗原、アポD−アミノ酸オキシダーゼ、D−アミノ酸及びオキシダーゼ系によって産生する過酸化水素を検出する試薬を同時または順次共存させることを特徴とするアポ酵素の再活性化を用いた目的とする抗原の免疫測定法。
- 補酵素がフラビンジヌクレオチドである請求項1記載の免疫測定法。
- 用いるD−アミノ酸の種類を選択することによって、測定感度を調節する請求項1又は2記載の免疫測定法。
- D−アミノ酸として、Ala、Met、Val、Ile、Phe、Pro、Ser、Thr、Asn、Leu、Tyr、Trp、Asp、Glu、His、及びArgの各D体からなる群より選ばれる1以上のD−アミノ酸を使用する請求項1〜3のいずれか1項記載の免疫測定法。
- 目的とする抗原に対する特異的抗体、補酵素で標識した目的とする抗原、アポD−アミノ酸オキシダーゼ、D−アミノ酸及びオキシダーゼ系によって産生する過酸化水素を検出する試薬を含有する免疫測定試薬組成物。
- 補酵素がフラビンジヌクレオチドである請求項5記載の免疫測定試薬組成物。
- 用いるD−アミノ酸の種類を選択することによって、測定感度を調節した請求項5又は6記載の免疫測定試薬組成物。
- D−アミノ酸として、Ala、Met、Val、Ile、Phe、Pro、Ser、Thr、Asn、Leu、Tyr、Trp、Asp、Glu、His、及びArgの各D体からなる群より選ばれる1以上のD−アミノ酸を使用した請求項5〜7のいずれか1項記載の免疫測定試薬組成物。
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CN105353116B (zh) * | 2015-11-09 | 2017-07-04 | 国家纳米科学中心 | 一种基于过氧化氢试纸条进行免疫分析的方法及其应用 |
CN114436987B (zh) * | 2022-01-28 | 2024-05-31 | 合肥爱索特克医学检验实验室有限公司 | 一种唑尼沙胺衍生物、均相酶免疫检测试剂及制备方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS552997A (en) * | 1978-06-22 | 1980-01-10 | Miles Lab | Specif combination analysis using prosthetic group as labelling component* reagent and composition for same* test kit* and ligand |
JPS6463682A (en) * | 1987-09-04 | 1989-03-09 | Toshiba Corp | Scroll compressor |
JPH02147862A (ja) * | 1988-11-29 | 1990-06-06 | Nippon Shoji Kk | 抗原の定量方法 |
JPH0970297A (ja) * | 1995-09-04 | 1997-03-18 | Ono Pharmaceut Co Ltd | D−アラニンの定量方法 |
JP2004173519A (ja) * | 2002-11-25 | 2004-06-24 | Azwell Inc | D−アミノ酸オキシダーゼの安定化方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4238565A (en) * | 1978-06-22 | 1980-12-09 | Miles Laboratories, Inc. | Specific binding assay with a prosthetic group as a label component |
CA1183450A (en) | 1980-10-30 | 1985-03-05 | Alfred C. Greenquist | Homogeneous specific binding assay device and method |
JPS6463862A (en) | 1987-09-03 | 1989-03-09 | Toyo Jozo Kk | High sensitivity immunoassay using nad synthetic enzyme |
JPH01280253A (ja) | 1988-01-28 | 1989-11-10 | Konica Corp | 免疫学的多層分析素子及び分析方法 |
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS552997A (en) * | 1978-06-22 | 1980-01-10 | Miles Lab | Specif combination analysis using prosthetic group as labelling component* reagent and composition for same* test kit* and ligand |
JPS6463682A (en) * | 1987-09-04 | 1989-03-09 | Toshiba Corp | Scroll compressor |
JPH02147862A (ja) * | 1988-11-29 | 1990-06-06 | Nippon Shoji Kk | 抗原の定量方法 |
JPH0970297A (ja) * | 1995-09-04 | 1997-03-18 | Ono Pharmaceut Co Ltd | D−アラニンの定量方法 |
JP2004173519A (ja) * | 2002-11-25 | 2004-06-24 | Azwell Inc | D−アミノ酸オキシダーゼの安定化方法 |
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