JP4807358B2 - 圧力差気泡移動制御方法、並びにその方法を用いたガス交換装置、導電率測定装置、全有機体炭素測定装置、反応装置及び細胞培養装置 - Google Patents
圧力差気泡移動制御方法、並びにその方法を用いたガス交換装置、導電率測定装置、全有機体炭素測定装置、反応装置及び細胞培養装置 Download PDFInfo
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液体試料中から気泡を取り除く一手段としてガス交換膜が用いられる。ガス交換膜としてはガス透過膜と、メンブレンフィルタがある。
ガス透過膜は、概略的には図6(A)に符号31として示されるような断面構造をもち、素材における分子と分子の隙間がランダムな方向に存在し、その隙間をガス成分が透過する。ガス透過膜ではガスの透過速度は遅いが、液体が膜を通じて漏れることはない。
気泡の移動は脱気と混入の両方又は一方を含む。
気泡の移動制御の第2の形態は、第2流路の圧力を第1流路よりも高くすることにより第2流体中の気泡を第1流体に移動させて脱気することである。
一方の流路の圧力を他方の流路の圧力よりも高くする方法として、一方の流路の下流に抵抗管などの流路抵抗部品を接続する方法を挙げることができる。
ガス交換部の一形態は、膜を貫通した多数の孔が形成されたメンブレンフィルタ又はガス透過膜で仕切られたものを挙げることができる。
流路の下流に流路抵抗部品を接続して圧力を高める方法は簡便である上、圧力の調整も容易である。流路抵抗部品の一例は抵抗管である。
ガス交換部はメンブレンフィルタ又はガス透過膜を用いて実現することもできるが、メンブレンフィルタと疎水性材料のガス透過層とからなるものや、液体が移動せずに液体に含まれるガス成分の移動だけができる複数の溝で両流路間を結ぶものを使用すれば、ガス透過膜よりも透過速度を速くし、メンブレンフィルタよりも高い送液圧力を可能にすることができる。
ガス交換装置を第1基板と第2基板とを積層したものとすれば、装置が小型になるだけでなく、流路を接続する部材が不要になるので、そのような部材からの異物の侵入を抑えることができる。
全有機体炭素測定装置の二酸化炭素分離部及び検出部として本発明の導電率測定装置を使用すれば、気泡の影響を抑えて精度よく測定のできる全有機体炭素測定装置とすることができる。
細胞培養装置に本発明のガス交換装置を使用すれば、気泡の影響を受けることなしに第2流体の二酸化炭素と酸素の濃度を調整することができ、細胞培養液を最適な状態に保つことができる。
図1A〜図1Bは本発明で種々の装置のガス交換装置として用いられるガス交換チップの一実施例を示しており、図1Aは流路の配置を示す平面図、図1Bは図1AのX−X’線位置での断面図である。
基板11,12は特に限定されるものではないが、例えば石英ガラス基板などのガラス基板である。第1基板11の片面には、1000μm以下の幅と深さを持つ第1流路1が形成され、流路1の両端には液体又は気体からなる第1流体を導入したり排出したりする貫通孔6,7が形成されている。第2基板12の片面にも1000μm以下の幅と深さをもつ第2流路2が形成され、流路2の両端にも液体からなる第2液体を導入したり排出したりする貫通孔8,9が形成されている。一例として、流路1,2の幅を1mm、深さを100μmとした。
基板11では貫通孔6を入口、貫通孔7を排出口とし、基板12では貫通孔8を入口、貫通孔9を排出口とする。
流路1に二酸化炭素を含んだ試料水を流し、流路2に測定水として脱イオン水として純水を流す。試料水と純水を同じ流量で流す。両流路1,2間には流路抵抗の違いによって送液圧力差が生じる。
図2Aは第1流路1に第1流体として二酸化炭素を含んだ試料水(気泡10を含む)を流し、第2流路2に第2液体として純水(気泡を含まない)を流した場合である。流路2の送液圧力が流路1よりも高くなっているため、流路1の試料水中の気泡10は流路2の測定水に混入することなく、流路1の試料水中の二酸化炭素がガス交換部5を経て流路2の純水に移動する。
用いたガス交換チップは図1に示されたものである。ガス交換部5として、平均孔径が0.05μmのPTFE多孔質膜(住友電工ファインポリマー社の製品)を使用した。流路2の排出口9につながる配管には、圧力計と導電率計を接続し、さらにその下流には流路2に背圧を印加するために抵抗管3として内径0.25mmのPTFEチューブを接続した。そのPTFEチューブの長さを750〜1350mmの範囲で変化させることにより流路2の背圧を調整した。流路1にはそのような抵抗管は接続せず、流路2の抵抗管3による流路抵抗による背圧がほぼ両流路1,2間の圧力差となるようにした。
流路1にはバブリングをして大気と平衡に達した水を100μL/分の流量で流し、流路2には純水を100μL/分の流量で流した。
実施例1以外のガス交換装置の実施例として、ガス交換部としてガス透過膜又はメンブレンフィルタを用いた実施例を示す。この実施例においても、以下の実施例においても記載は省略しているが、ガス交換部を介して対向する2つの流路間には圧力差が生じるような手段が設けられている。
メンブレンフィルタを単独でガス交換部として用いる場合、厚さが10μm、孔径が0.2μm、気孔率が5〜20%のポリカーボネート製メンブレンフィルタ(ISOPORE MEMBRANE FILTER:MILLIPORE社の製品)を使用することができる。
実施例1以外のガス交換装置の他の実施例として、メンブレンフィルタ及びその表面に形成されるガス透過層を用いる実施例を示す。
この実施例で、ガス透過層がメンブレンフィルタの両面から形成されているものは、概略的には図6C〜図6Eのいずれか、又はそれらの組み合わされた構造になっている。
図6Cの構造は、疎水性材料からなるガス透過層34がメンブレンフィルタ32の孔33を粗く埋めることにより、孔33を通じて液体が移動することを阻止し、液体に含まれるガス成分はガス透過層34の隙間を通って移動できるようになったものである。
メンブレンフィルタの好ましい例は、膜を貫通している孔が膜に垂直方向に形成されたものであり、ガス透過層の一例はフッ素系堆積薄膜である。メンブレンフィルタの孔が互いに交わっていなければメンブレンフィルタ内部でのガスの拡散が少なく、ガス成分の移動速度がより速くなる。
実施例1以外のガス交換装置のさらに他の実施例として、流路間に複数の溝が形成されたものを用いる実施例を示す。
ガス交換部5として樹脂膜を用いる。その膜厚方向に貫通するように微細な穴が他の穴と互いに交わらないように形成されている。この膜は、例えばポリカーボネート薄膜に面に垂直な方向から中性子を照射して直径1μm以下の多数の穴を開け、それらの穴の少なくとも一部を疎水性化したものである。疎水性化は、例えばCHF3ガスやCF4ガスなどのフッ素化合物ガスを流しながらRIE(反応性イオンエッチング)処理を施したり、エキシマレーザなどの光照射により分解させることにより、穴の内面をフッ素化することにより行なうことができる。この場合、穴の内部までフッ素化することは容易ではないが、液体の浸入を阻止するための疎水性化は穴の入口部分だけであってもよい。
実施例1以外のガス交換装置のさらに他の実施例として、複数の溝が形成されたガス交換チップの実施例を図8A〜図8Bにより示す。図8Aは流路と溝の配置を示す平面図、図8Bは図8AのX−X’線位置での断面図である。
11a,12aはガラス基板、例えば石英ガラス基板である。一方の基板12aの片面には、1000μm以下、好ましくは数百μm以下の幅と深さをもつ第1流路1a,第2流路2aが形成されている。他方の基板11aにはその片面に流路1a,2a間を結ぶ位置に疎水性の表面を有する複数の溝5aが形成され、流路1a,2aの両端に対応する位置には基板11aを貫通して液体や気体の導入や排出に利用する穴6a,7a,8a,9aが形成されている。
溝5aはその長さと幅が数百μm以下、好ましくは幅と高さが10μm以下である。流路1a,2aの一方又は両方に液体を流したとき、溝5aには液体が浸入せず、溝5aを通じてガスが移動する。
流路1aより流路2aの方が圧力が高くなるように抵抗管などを接続しておき、例えば、流路1aに二酸化炭素を含む試料水、流路2aに純水を流すと、二酸化炭素は濃度勾配によって流路1aから溝5aを経て流路2aに移動するが、試料水中に気泡が入っていたとしても、気泡は流路2a側に移動することはない。
実施例1以外のガス交換装置のさらに他の実施例として、複数の溝が形成されたガス交換チップの他の実施例を図9A〜図9Bにより示す。図9Aは流路と溝の配置を示す平面図、図9Bは図9AのX−X’線位置での断面図である。
基板11b,12bはシリコン基板である。基板11bの片面には第1流路1b,第2流路2bと、流路1b,2b間を結ぶ疎水性の表面を有する複数の溝5bが形成されている。他方の基板11b上の流路1b,2bの両端に対応する位置に液体や気体の導入や排出に利用する貫通穴6b,7b,8b,9bが形成されている。
この実施例においても、流路1bより流路2bの方が圧力が高くなるように抵抗管などを接続しておき、例えば、流路1bに二酸化炭素を含む試料水、流路2bに純水を流すと、二酸化炭素は濃度勾配によって流路1bから溝5bを経て流路2bに移動するが、試料水中に気泡が入っていたとしても、気泡は流路2b側に移動することはない。
上記の実施例で示したような本発明のガス交換装置を用いた全有機体炭素測定装置の一実施例を図10に示す。
この全有機体炭素測定装置は、試料水中に最初から溶け込んでいる二酸化炭素を除去するIC(無機態炭素)除去部41、試料水中の有機体炭素を二酸化炭素に変換する有機物酸化分解部44、有機物酸化分解部44で発生した二酸化炭素を測定水としての純水へ抽出する二酸化炭素分離部46、及び二酸化炭素分離部46で抽出した二酸化炭素量を測定するために二酸化炭素分離部46からの純水の導電率を測定する検出部47を備えている。その二酸化炭素分離部46として実施例1に示したガス交換チップを使用する。その2流路型ガス交換チップの第1流路に有機物酸化分解部44からの試料水を流し、第2流路に純水を流し、そのガス交換チップを経た純水を検出部47に導く。
上記の実施例で示したような本発明のガス交換装置を用いた全有機体炭素測定装置の他の例を図11に示す。図11はその全有機体炭素測定装置の概略断面図である。
この全有機体炭素測定装置は、ガス交換装置であるガス交換チップが、上側の有機物酸化部と下方の導電率測定部によって挟まれて一体化している。
酸化用流路19の一端は、貫通穴として設けられた第1流体(試料水)用の供給流路21につながり、他端は基板11cに設けられた貫通穴6cを介して第1流路1cにつながっている。第1流路1cは試料水を排出するために基板11cに設けられた貫通穴7cと、基板14cの貫通穴である排出口22につながっている。
第1流路1cよりも第2流路2cの方が圧力が高くなるように、排出口24と排出口25の下流には抵抗管を接続する。
このように、紫外線入射が可能な透明材質の基板を用いて酸化用流路をさらに積層すれば、有機物酸化部、ガス交換部及び導電率測定部を一体化することができ、装置をさらに小型化できるとともに、二酸化炭素に変換された全有機体炭素を迅速に測定することができる。これにより、測定の精度を上げることができる。
試料水として、例えば、フタル酸水素カリウム水溶液を用いた。
試料水は供給流路21から0.1mL/分程度の流量で、酸化用流路19に供給される。試料中の有機物は紫外線を0.1〜5分間、好ましくは3分間照射されることにより酸化され、二酸化炭素として試料水中に溶存する。
試料水に有機物及び二酸化炭素を全く含まないものを用いてバックグラウンドを測定し、試料水から得られた結果からバックグラウンドを差し引くことで、導電率から二酸化炭素の濃度を定量し、全有機体炭素に換算する。
試料水に無機体炭素が含まれている場合は、実施例での測定により全炭素が求められる。厳密な有機体炭素を求めるためには、紫外線照射を行って求めた全炭素値と、紫外線を行わないで求めた無機体炭素値の差を求めればよい。
次に本発明の反応装置の一実施例を図12A〜図12Bにより説明する。
図12Aは流路の配置を示す平面図、図12Bは図12AのX−X’線位置での断面図、図12Cは本発明を適用しない場合の動作の概略図、図12Dはこの実施例の動作の概略図を示す。
基板11dには、流路2dの端の位置に対応する排出用の貫通穴9dと、流路2dにつながる流路53,54の端の位置に対応する送液用の貫通穴51,52と、第1流路の送液及び排出用の貫通穴6d,7dが形成されている。
基板11d,12dは例えば石英ガラス基板などのガラス基板である。
流路1dに第1流体として純水を流し、流路2dに反応溶液として流路53から希塩酸、流路54から炭酸水素ナトリウム水溶液を流して流路2dで反応させる。流路2dでの反応溶液が第2流体となる。この反応により流路2dでは二酸化炭素が生成し、反応溶液に溶存しきれない二酸化炭素は気泡として反応溶液中に存在する。
それに対し、本発明により、穴9dにつながる排出流路に抵抗管を接続するなどの方法により、流路1dよりも流路2dの方が圧力が高くなるようにすることにより、図12Dに示すように気泡はガス交換部5を経て流路1d側に脱気され、穴9dの下流に流されていくのが防止される。
次に本発明の細胞培養装置の一実施例を図13A〜図13Bにより説明する。
図13Aは流路の配置を示す平面図、図13Bは図13AのX−X’線位置での断面図、図13Cは本発明を適用しない場合の動作を示す概略図、図13Dはこの実施例の動作を示す概略図である。
基板11eには、流路2eの両端に対応する位置に細胞培養液供給用の貫通穴8eと排出用の貫通穴9eが形成され、流路1eの送液及び排出用の貫通穴6e,7eが形成されている。
基板11e,12eは例えば石英ガラス基板などのガラス基板である。
この実施例では流路1eと流路2eはガス交換部5e介して流路が直交するように形成したが、実施例1で示したように平行であってもよい。
細胞培養室61には細胞63が収容されており、流路2eにより細胞培養液が供給される。この細胞培養装置を35℃に温度調節し、細胞培養液の酸素濃度と二酸化炭素濃度を最適値に保つために、流路1eに酸素が20%、二酸化炭素が5%、残部が窒素となるように調製された混合ガスを流す。
ガス交換部5eでは、流路1eの混合ガスから流路2eの細胞培養液に酸素と二酸化炭素が移動して細胞培養液の酸素濃度と二酸化炭素濃度が維持される。
それに対し、本発明により、穴9eにつながる排出流路に抵抗管を接続するなどの方法により、流路1eよりも流路2eの方が圧力が高くなるようにすることにより、図13Dに示されるように気泡が細胞培養液に混入するのが防止され、細胞培養室61における細胞63と細胞培養液の良好な接触を維持することができる。
2,2a〜2e 第2流路
3 抵抗管
5,5a〜5e ガス交換部
6〜9,6a〜9a,6b〜9b,6c〜9c 貫通穴
10,10d 気泡
11,11a〜11e 第1基板
12,12a〜12e 第2基板
13c 第3基板
14c 第4基板
15 分岐流路
19 酸化用流路
61 細胞培養室
63 細胞
Claims (15)
- 液体からなる第1流体が流される第1流路と、液体からなる第2流体が流される第2流路とを、液体が通過せずにガス成分が移動できるガス交換部を介して配置することと、
前記ガス交換部を挟んで両流路間に圧力差を設けることを含み、
それにより両流路間の気泡の移動を制御する圧力差気泡移動制御方法。 - 前記気泡移動制御は、第2流路の圧力を第1流路の圧力より高くすることにより第1流体から第2流体に気泡が入ることを防止することである請求項1に記載の圧力差気泡移動制御方法。
- 前記気泡移動制御は、第2流路の圧力を第1流路の圧力より高くすることにより第2流体中の気泡を第1流体に移動させて脱気することである請求項1又は2に記載の圧力差気泡移動制御方法。
- 第2流路の下流に流路抵抗部品を接続することにより第2流路の圧力を第1流路の圧力よりも高くする請求項1から3のいずれかに記載の圧力差気泡移動制御方法。
- 第1流路に第1流体として二酸化炭素を含む試料水、第2流路に第2流体として脱イオン水を流して第1流体から第2流体へ二酸化炭素を移動させるとともに、両流体間の気泡の移動を制御する請求項2又は4に記載の圧力差気泡移動制御方法。
- 第1流路に第1流体として二酸化炭素と酸素を含む液体、第2流路に第2流体として細胞培養液を流し、第1流体から第2流体へ二酸化炭素と酸素を移動させるとともに、第1流体中の気泡が第2流体に混入するのを防ぐ請求項2又は4に記載の圧力差気泡移動制御方法。
- ガス交換可能なガス交換部と、
前記ガス交換部と接触する第1流路と、
前記ガス交換部と接触し、前記ガス交換部を介して第1流路と対向する部分をもつ第2流路とを備え、
請求項1から4のいずれかに記載の圧力差気泡移動制御方法により第1流路と第2流路との間の気泡の移動が制御されるガス交換装置。 - 前記ガス交換部は、膜を貫通した多数の孔が形成されたメンブレンフィルタ又はガス透過膜で仕切られたものである請求項7に記載のガス交換装置。
- 前記ガス交換部は、膜を貫通した多数の孔が形成されたメンブレンフィルタと、前記メンブレンフィルタに形成され前記孔を通して液体が移動せずに液体に含まれるガス成分の移動だけができる隙間を形成している疎水性材料からなるガス透過層とからなるものである請求項7に記載のガス交換装置。
- 前記ガス交換部は、両流路間を結ぶ複数の溝が備えられたものであり、前記溝は液体が移動せずに液体に含まれるガス成分の移動だけができるようにその内表面の少なくとも一部の疎水性化とその断面積の大きさの設定がなされているものである請求項7に記載のガス交換装置。
- 第1流路が前記ガス交換部と積層された第1基板により形成され、
第2流路が前記ガス交換部を介して第1基板と積層された第2基板により形成されている請求項7,8又は9に記載のガス交換装置。 - 請求項7から11のいずれかに記載のガス交換装置の第2流路に接続され、第2流路からの液体の導電率を測定するための電極が配置された測定セルを有する第3流路をさらに備え、第2流路に測定水として脱イオン水を流す導電率測定装置。
- 試料水中の有機体炭素を二酸化炭素に変換する有機物酸化分解部、前記有機物酸化分解部で発生した二酸化炭素を脱イオン水からなる測定水へ抽出する二酸化炭素分離部、及び前記二酸化炭素分離部で抽出した二酸化炭素量を測定するために前記二酸化炭素分離部からの測定水の導電率を測定する検出部を備えた全有機体炭素測定装置において、
前記二酸化炭素分離部及び検出部として請求項12に記載の導電率測定装置を使用し、前記有機物酸化分解部からの試料水を第1流路に導く全有機体炭素測定装置。 - 溶液中で化学反応を起こさせる反応部を有する反応流路を備えた反応装置において、
前記反応流路の反応部の下流に請求項7から11のいずれかに記載のガス交換装置を配置し、
前記反応流路を第2流路に接続し、
第2流路の圧力を第1流路の圧力よりも高くすることによって前記反応流路で発生したガスを第1流路に脱気する反応装置。 - 細胞培養室とその細胞培養室に細胞培養液を流す細胞培養液流路とを備えた細胞培養装置において、
前記細胞培養室の上流に請求項7から11のいずれかに記載のガス交換装置を配置し、
前記細胞培養液流路を第2流路に接続して第2流路を経由して細胞培養室へ細胞培養液を流すようにし、第1流路に二酸化炭素と酸素を含む液体を流し、第2流路の圧力を第1流路の圧力よりも高くすることによって第1流路から第2流路の細胞培養液への気泡の移動を抑えながら細胞培養液の酸素と二酸化炭素の濃度を調整する細胞培養装置。
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