JP4731094B2 - 抗ｉｌ−１２抗体、組成物、方法および使用 - Google Patents

抗ｉｌ−１２抗体、組成物、方法および使用 Download PDF

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Description

【０００１】
発明の背景
発明の分野
この出願は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている各々２０００年８月７日提出の米国暫定出願第６０／２２３，３５８号および２０００年９月２９日提出の同第６０／２３６，８２７号に一部分基づいており、そしてこれに対する優先権を請求する。
【０００２】
本発明は、少なくとも１つのインターロイキン１２（ＩＬ−１２）タンパク質もしくはそのフラグメントに対して特異的な、特定の部分もしくは改変体を含む抗体ならびにそのような抗ＩＬ−１２抗体をコードしている核酸、相補的核酸、ベクター、宿主細胞、および治療製剤、投与および用具（ｄｅｖｉｃｅ）を含む、それらの作成および使用方法に関する。
【０００３】
関連技術
インターロイキン１２（ＩＬ−１２）は、ジスルフィド結合されている３０と４０ｋＤのグリコシル化ポリペプチド鎖からなるヘテロ二量体のサイトカインである。サイトカインは、樹状細胞、単球、マクロファージ、Ｂ細胞、ランゲルハンス細胞および角化細胞ならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む抗原提示細胞によって合成され、そして分泌される。ＩＬ−１２は、種々の生物学的プロセスを媒介し、そしてＮＫ細胞刺激因子（ＮＫＳＦ）、Ｔ細胞刺激因子、細胞障害Ｔリンパ球成熟因子およびＥＢＶ−形質転換されたＢ細胞系因子（Ｃｕｒｆｓ，Ｊ．Ｈ．Ａ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１０：７４２−７８０（１９９７））として言及されてきた。
【０００４】
インターロイキン１２は、細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の細胞質膜に発現されたＩＬ−１２受容体に結合し、それによって生物学的プロセスを変える（例えば、開始、阻止する）ことができる。例えば、ＩＬ−１２受容体へのＩＬ−１２の結合は、前活性化されたＴ細胞およびＮＫ細胞の増殖を刺激し、細胞障害性のＴ細胞（ＣＴＬ）、ＮＫ細胞およびＬＡＫ（リンホカイン活性化キラー）細胞の細胞溶解活性を増進し、Ｔ細胞およびＮＫ細胞によるγインターフェロン（ＩＦＮγ）の生産を誘導し、そしてＩＦＮγおよびＩＬ−２を生産するＴｈ１細胞へのナイーブＴｈ０細胞(naive Th０ cell)の分化を誘導する（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，Ｇ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１３：２５１−２７６（１９９５））。特に、ＩＬ−１２は、細胞溶解細胞（例えばＮＫ、ＣＴＬ）の生成および細胞性免疫応答（例えば、Ｔｈ１細胞媒介の免疫応答）を設定するのに絶対に必要である。かくして、ＩＬ−１２は、予防免疫（例えば、感染症の根絶）と病理学的免疫応答（例えば、自己免疫）の両方の生成および調節において絶対的に重要である（Ｈｅｎｄｚａｋ，Ｊ．Ａ．ａｎｄ Ｂｒｕｎｄａ，Ｍ．Ｊ．，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，７２：６１９−６３７（１９９５））。したがって、免疫応答（例えば、予防もしくは病原性）は、例えば抗体を用いて、イン・ビボでＩＬ−１２の生物学的活性を操作することによって増進、抑制もしくは予防することができる。
【０００５】
非ヒト哺乳類の、キメラ、ポリクローナル（例えば抗血清）および／またはモノクローナル抗体（Ｍａｂｓ）およびフラグメント（例えば、そのタンパク質分解的消化または融合タンパク質産物）は、ある場合に、ある種の疾病を治療する試みのために研究されつつある可能性のある治療薬剤である。しかしながら、そのような抗体もしくはフラグメントは、ヒトに投与された場合、免疫応答を誘引することがある。そのような免疫応答は、血液循環からの、抗体もしくはフラグメントの免疫複合体に媒介されるクリアランスをもたらし、そして治療のための反復投与を不適当にさせ、それによって患者に対する治療の恩恵を低下させ、そして抗体もしくはフラグメントの再投与を制限する。例えば、非ヒト部分を含んでなる抗体もしくはフラグメントの反復投与は、血清病および／またはアナフィラキシーをもたらすことがある。これらおよび他の問題を回避するために、多数のアプローチが、当該技術分野で周知であるような、キメラ化およびヒト化を含むそのような抗体およびその部分の免疫原性を低下されるために取られてきた。しかしながら、これらおよび他のアプローチは、なお、若干の免疫原性、低親和性、低活性を有するか、または細胞培養、スケールアップ、生産および／または低収量における問題を有する抗体もしくはフラグメントをもたらす。かくして、抗体もしくはフラグメントは、治療タンパク質としての製造もしくは使用のために理想的に適しているとは言えない。
【０００６】
したがって、１つ以上のこれらの問題を克服する抗ＩＬ−１２抗体もしくはフラグメント、ならびにそれらの既知の抗体もしくはフラグメントを超える改良を提供するニーズが存在する。
【０００７】
発明の概要
本発明は、単離したヒト、霊長類、齧歯類、哺乳類、キメラ、ヒト化および／またはＣＤＲ移植した、抗ＩＬ−１２抗体、免疫グロブリン、切断産物および他の特定部分およびその改変体、ならびに抗ＩＬ−１２抗体組成物、エンコーディングもしくは相補的核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、用具、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、および当該技術分野において既知であるものと組み合わせて、本明細書に記述され、そして可能にされるような、それらの作成および使用方法を提供する。
【０００８】
また本発明は、本明細書に記述されるような少なくとも１つの単離した抗ＩＬ−１２抗体を提供する。本発明による抗体は、本発明の抗体中に組み入れることができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分、例えば限定されるものではないが、少なくとも１つの、重鎖もしくは軽鎖の相補性決定部位（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変部、重鎖もしくは軽鎖定常部、枠組み構造領域、またはそれらのいずれかの部分を含有する分子を含有しているすべてのタンパク質もしくはペプチドを含む。本発明の抗体は、すべての哺乳類、例えば限定されるものではないが、ヒト、マウス、ウサギ、ラット、齧歯類、霊長類、またはそのすべての組み合わせおよび類するものを包含するかまたはそれに由来してもよい。
【０００９】
本発明は、１つの態様では、少なくとも１つの特定配列、ドメイン、部分もしくはその改変体を含んでなる少なくとも１つのＩＬ−１２抗イディオタイプ抗体をコードしているポリヌクレオチドを含有するか、これに相補的か、またはハイブリダイズする単離した核酸分子を提供する。さらに、本発明は、該ＩＬ−１２抗イディオタイプ抗体エンコーディング核酸分子を含んでなる組み換えベクター、そのような核酸および／または組み換えベクターを含有する宿主細胞、ならびにそのような抗イディオタイプ抗体核酸、ベクターおよび／または宿主細胞の作成および／または使用方法を提供する。
【００１０】
また本発明は、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体が検出可能なそして／または回収可能な量において発現される条件下で、本明細書に記述されるような宿主細胞を培養することを含む、宿主細胞において、少なくとも１つのＩＬ−１２抗体、またはＩＬ−１２抗イディオタイプ抗体を発現するための少なくとも１つの方法を提供する。
【００１１】
また本発明は、（ａ）単離した抗ＩＬ−１２抗体エンコーディング核酸および／または本発明に記述されるような抗体；および（ｂ）適当なキャリヤーもしくは希釈剤を含んでなる少なくとも１つの組成物を提供する。キャリヤーもしくは希釈剤は、場合によっては、既知のキャリヤーもしくは希釈剤による、製薬的に許容しうるものであってもよい。さらに、組成物は、場合によっては、少なくとも１つのさらなる化合物、タンパク質もしくは組成物を含んでもよい。
【００１２】
さらに、本発明は、本明細書に記述されるように、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者における少なくとも１つのＩＬ−１２関連症状を緩和もしくは治療するために、そして／または関連症状の前、その後、またはその間に、治療的有効量を投与するための、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体法もしくは組成物を提供する。
【００１３】
また本発明は、本発明にしたがって、治療的もしくは予防的有効量の少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の送達の少なくとも１つの組成物、用具および／または方法を提供する。
【００１４】
さらに、本発明は、本明細書に記述されるように、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者における少なくとも１つのＩＬ−１２関連症状を、そして／または関連症状の前、その後、またはその間に、診断するための、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体法もしくは組成物を提供する。
【００１５】
また本発明は、本発明にしたがって、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の診断のための少なくとも１つの組成物、用具および／または送達方法を提供する。
【００１６】
発明の記述
本発明は、単離された、組み換えおよび／または合成の、抗ＩＬ−１２ヒト、霊長類、齧歯類、哺乳類の、キメラ、ヒト化またはＣＤＲ移植した、抗体、およびそれに対するＩＬ−１２抗イディオタイプ抗体、ならびに少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体もしくは抗イディオタイプ抗体をコードしている少なくとも１つのポリヌクレオチドを含んでなる組成物およびエンコーディング核酸分子を提供する。さらに、本発明は、限定するものではないが、診断および治療組成物、方法および用具を含む、そのような核酸および抗体および抗イディオタイプ抗体の作成および使用方法を包含する。
【００１７】
本明細書で使用されるように、「抗インターロイキン１２抗体」、「抗ＩＬ−１２抗体」、「抗ＩＬ−１２抗体部分」もしくは「抗ＩＬ−１２抗体フラグメント」および／または「抗ＩＬ−１２抗体改変体」および類するものは、本発明の抗体中に組み入れることができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分、例えば限定されるものではないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定部位（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変部、重鎖もしくは軽鎖定常部、枠組み構造領域、またはそれらのいずれかの部分を含有する分子、または少なくとも１つのＩＬ−１２受容体もしくは結合タンパク質の一部分を含有しているすべてのタンパク質もしくはペプチドを含む。そのような抗体は、場合によってはさらに特異的リガンドに影響を与え、例えば限定するものではないが、その場合、そのような抗体は、イン・ビトロ、イン・サイチューおよび／またはイン・ビボで、少なくとも１つのＩＬ−１２の活性もしくは結合、またはＩＬ−１２受容体の活性もしくは結合を、調節、低下、増大、拮抗、作用、軽減、緩和、阻止、抑制、除去および／または妨害する。非限定的な例として、本発明の適当な抗ＩＬ−１２抗体、特定部分もしくは改変体は、少なくとも１つのＩＬ−１２、またはその特定部分、改変体もしくはドメインを結合することができる。また、適当な抗ＩＬ−１２抗体、特定部分もしくは改変体は、場合によっては、少なくとも１つのＩＬ−１２活性もしくは機能、例えば限定するものではないが、ＲＮＡ、ＤＮＡもしくはタンパク質合成、ＩＬ−１２放出、ＩＬ−１２受容体シグナリング、膜ＩＬ−１２切断、ＩＬ−１２活性、ＩＬ−１２産生および／または合成に影響を与えることができる。用語「抗体」は、さらに、一本鎖の抗体およびそのフラグメントを含む、抗体模倣物を含むか、または抗体またはその特定フラグメントもしくは部分の構造および／または機能を模倣する抗体の部分を含有する、抗体、消化フラグメント、特定部分およびその改変体を包含することを意図する。機能性フラグメントは、哺乳類ＩＬ−１２に結合する抗原結合性フラグメントを含む。例えば、限定するものではないがＦａｂ（例えばパパイン消化による）、Ｆａｂ’（例えばペプシン消化および部分還元による）およびＦ（ａｂ’）2（例えばペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えばプラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えばペプシンもしくはプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えばペプシン消化、部分還元および再集合による）、ＦｖもしくはｓｃＦｖ’（例えば分子生物学技術による）フラグメントを含む、ＩＬ−１２またはその部分に結合できる抗体フラグメントは本発明によって包含される（参照、例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，前出）。
【００１８】
そのようなフラグメントは、当該技術分野において既知であり、そして／または本明細書に記述されるような、酵素的切断、合成または組み換え技術によって生産することができる。また抗体は、１つ以上の停止コドンが天然の停止部位の上流に導入された抗体遺伝子を用いて種々の端を切り取った形態において生産できる。例えば、Ｆ（ａｂ’）2重鎖部分をコードしている組み合わせ遺伝子は、重鎖のＣＨ1ドメインおよび／またはヒンジ部をコードしているＤＮＡ配列を含むように消化することができる。抗体の種々の部分は、慣用の技術によって化学的に一緒に結合できるか、または遺伝子工学技術を用いて隣接するタンパク質として生産することができる。
【００１９】
本明細書で使用されるように、用語「ヒト抗体」は、実質的に、タンパク質のどの部分（例えば、ＣＤＲ、枠組み構造、ＣL、ＣHドメイン（例えばＣH１，ＣH２，ＣH３）、ヒンジ、（ＶL，ＶH）も、わずかな配列の変化もしくは改変のみを含んで、実質的にヒトにおいて非免疫原性である抗体を指す。同様に、霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジーなど）、齧歯類（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスターなど）および他の哺乳類を指名された抗体は、そのような種、亜属、属、亜科、科に特異的な抗体を指す。さらに、キメラ抗体は、上記のすべての組み合わせを含む。そのような変化もしくは改変は、場合によっては、そして好ましくは、非改変抗体に較べてヒトもしくは他の種における免疫原性を保持しているか、または低下している。かくして、ヒト抗体は、キメラもしくはヒト化抗体とは異なっている。ヒト抗体が、機能的に再配列したヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖および／または軽鎖）遺伝子を発現可能である非ヒト動物または原核もしくは真核細胞によって生産できることが指摘される。さらに、ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、それは、本来のヒト抗体には見いだされないリンカーペプチドを含有することができる。例えば、Ｆｖは、リンカーペプチド、例えば２〜約８個のグリシンもしくは他のアミノ酸残基を含有でき、これが重鎖の可変部と軽鎖の可変部を結合している。そのようなリンカーペプチドはヒト起源をもつと考えられる。
【００２０】
また、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナルの、好ましくはヒトもしくはヒト化抗体である、二重特異的、異種特異的、異種複合または類似抗体が使用することができる。本場合には、結合特異性の１つは、少なくとも１つのＩＬ−１２タンパク質に対してであり、他方は、いずれか他の抗原に対してである。二重特異的抗体の作成方法は当該技術分野において既知である。慣用的には、二重特異的抗体の組み換え生産は、２種の重鎖が異なる特異性を有する２種の免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの同時発現に基づいている（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の任意の取り合わせのために、これらのハイブリドーマ（クヮドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａ））は、１０種の異なる抗体分子の潜在的な混合物を生じ、これのただ１つが正しい二重特異的構造を有する。アフィニティークロマトグラフィー段階によって通常行われる正しい分子の精製は、むしろ扱い難く、そして生産物収量は低い。類似の操作が、例えば、ＷＯ９３／０８８２９、米国特許第６２１０６６８号、同第６１９３９６７号、同第６１３２９９２号、同第６１０６８３３号、同第６０６０２８５号、同第６０３７４５３号、同第６０１０９０２号、同第５９８９５３０号、同第５９５９０８４号、同第５９５９０８３号、同第５９３２４４８号、同第５８３３９８５号、同第５８２１３３３号、同第５８０７７０６号、同第５６４３７５９号、同第５６０１８１９号、同第５５８２９９６号、同第５４９６５４９号、同第４６７６９８０号、ＷＯ９１／００３６０、欧州特許第０３０８９号、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）、Ｓｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０（１９８６）において開示されており、各々は引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００２１】
本発明の方法および組成物において有用な抗ＩＬ−１２抗体（またＩＬ−１２抗体と呼ばれる）は、場合によっては、ＩＬ−１２への高い親和性の結合および場合によっては、そして好ましくは低い毒性を有することを特徴とすることができる。特に、本発明の抗体、特定フラグメントもしくは改変体は、個々の成分、例えば可変部、定常部および枠組み構造が、個々に、そして／または集合的に、場合によっては、そして好ましくは、低い免疫原性を保持している場合には、本発明において有用である。本発明において使用できる抗体は、場合によっては、症候の相当な緩和と、低いおよび／または許容できる毒性とともに、長期間患者を治療する能力を特徴とする。低いまたは許容できる免疫原性および／または高い親和性、ならびに他の適当な性質は、達成される治療結果に貢献できる。「低い免疫原性」は、治療される患者の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満において有意なＨＡＨＡ、ＨＡＣＡもしくはＨＡＭＡ応答を起こすこと、そして／または治療される患者において低いタイターを起こすこと（二重抗原酵素イムノアッセイで測定される約３００未満、好ましくは約１００未満）（例えば、引用によって本明細書に完全に組み入れられているＥｌｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）、参照）として本明細書で定義される。
【００２２】
利用
本発明の単離した核酸は、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体もしくはその特定の改変体の生産のために使用することができ、これらは、限定されるものではないが、少なくとも１つの免疫障害もしくは疾患、心臓血管障害もしくは疾患、感染性、悪性および／または神経学的障害もしくは疾患、または他の既知もしくは特定のＩＬ−１２関連症状から選ばれる、少なくとも１つのＩＬ−１２症状の発生を診断、モニター、調整、治療、緩和、予防するか、その症候を軽減するように、細胞、組織、臓器もしくは動物（哺乳類およびヒトを含む）において測定するか、または影響を与えるために使用できる。
【００２３】
そのような方法は、症候、効果またはメカニズムにおいてそのような調整、治療、緩和、予防もしくは軽減を必要とする細胞、組織、臓器、動物もしくは患者に、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を含んでなる組成物または製薬組成物の有効量を投与することを含む。有効量は、本明細書に記述されるか、または関連技術において既知であるような既知の方法を用いて実施および決定されるように、１回（例えば丸剤）、複数回もしくは連続投与当たり約０．００１〜５００ｍｇ／ｋｇの量、または１回、複数回もしくは連続投与当たり血清濃度約０．０１〜５０００μｇ／ｍｌ血清濃度を達成する量、またはその中のすべての有効範囲もしくは値を含んでもよい。
【００２４】
引用
本明細書で引用されるすべての出版物もしくは特許は、それらが、本発明の時点における技術の状態および／または本発明の記述および可能性を提供することを示すように、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。出版物は、すべての科学的もしくは特許出版物、またはすべての記録された電子もしくは印刷フォーマットを含むすべての媒体フォーマットにおいて利用できるすべての他の情報を指す。次の引用文献は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ、ＮＹ（１９９７−２００１）。
【００２５】
本発明の抗体
本発明の少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体は、場合によっては、当該技術分野において周知であるように、細胞系、混合細胞系、不死化細胞または不死化細胞のクローン集団によって生産することができる。参照、例えば、各々引用によって本明細書に完全に組み入れられている、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ、ＮＹ（１９９７−２００１）。
【００２６】
ヒトＩＬ−１２タンパク質もしくはそのフラグメントに対して特異的であるヒト抗体は、適当な免疫原性抗原、例えば単離された、そして／またはＩＬ−１２タンパク質もしくはそのフラグメント（合成分子、例えば合成ペプチドを含む）に対して惹起することができる。他の特定のまたは一般の哺乳類抗体も同様に惹起できる。免疫原性抗原の調製およびモノクローナル抗体生産は、すべての適当な技術を用いて行うことができる。
【００２７】
１つのアプローチでは、ハイブリドーマは、適当な不死の細胞系（例えば、骨髄腫細胞系、例えば限定されるものではないが、Ｓｐ２／０，Ｓｐ２／０−ＡＧ１４，ＮＳＯ，ＮＳ１，ＮＳ２，ＡＥ−１，Ｌ．５，＞２４３，Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３，Ｓｐ２ＳＡ３，Ｓｐ２ＭＡＩ，Ｓｐ２ＳＳ１，Ｓｐ２ＳＡ５，Ｕ９３７，ＭＬＡ１４４，ＡＣＴＩＶ，ＭＯＬＴ４，ＤＡ−１，ＪＵＲＫＡＴ，ＷＥＨＩ，Ｋ−５６２，ＣＯＳ，ＲＡＪＩ，ＮＩＨ３Ｔ３，ＨＬ−６０，ＭＬＡ１４４，ＮＡＭＡＩＷＡ，ＮＥＵＲＯ２Ａまたは類するもの、またはヘテロミローマス（ｈｅｔｅｒｏｍｙｌｏｍａｓ）、その融合生成物、またはそれらに由来するすべての細胞もしくは融合細胞、または当該技術分野において既知のすべての他の適当な細胞系、参照、例えば、ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ，ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ．などを、抗体産生細胞、例えば限定されるものではないが、単離もしくはクローン化した脾臓、末梢血、リンパ液、扁桃腺、または他の免疫もしくはＢ細胞を含む細胞、あるいは組み換えもしくは内因性の、ウイルス、細菌、藻類、原核生物、両生類、昆虫類、爬虫類、魚類、哺乳類、齧歯類、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ヒツジ、霊長類、真核生物の、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ，ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡもしくはＲＮＡ、葉緑体ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、一本鎖、二本鎖もしくは三本鎖の、ハイブリッドの、および類するものまたはそれらの組み合わせ物のようないずれか内因性もしくは異種の核酸として、重鎖もしくは軽鎖定常もしくは可変もしくは枠組み構造もしくはＣＤＲ配列を発現するすべての他の細胞と、融合することによって生産される。参照、例えば引用によって本明細書に完全に組み入れられているＡｕｓｕｂｅｌ、前出、およびＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，前出，ｃｈａｐｔｅｒ２。
【００２８】
また、抗体産生細胞は、関心のある抗原により免疫化したヒトもしくは他の適当な動物の末梢血、または好ましくは脾臓もしくはリンパ節から得ることができる。また、あらゆる他の適当な宿主細胞は、抗体、特定のフラグメントもしくはその改変体をコードしている異種もしくは内因性核酸を発現するために使用できる。融合細胞（ハイブリドーマ）または組み換え細胞は、選ばれた培養条件または他の適当な既知の方法を用いて単離でき、そして限界希釈法もしくはセルソーティングまたは他の既知の方法によってクローン化できる。所望の特異性を有する抗体を産生する細胞は、適当なアッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）によって選択することができる。
【００２９】
限定されるものではないが、ペプチドもしくはタンパク質ライブラリー、例えば限定されるものではないがバクテリオファージ、リボソーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、または類するもの、ディスプレーライブラリーから組み換え抗体を選択する方法を含む、必要な特異性の抗体を生産または単離する他の適当な方法が使用できる；例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ，Ｍａｒｔｉｎｓｒｅｉｄ／Ｐｌａｎｅｇｇ，ＤＥ；Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ，ＵＫ；ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ．Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ；Ｄｙａｘ Ｃｏｒｐ．，Ｅｎｚｏｎ，Ａｆｆｙｍａｘ／Ｂｉｏｓｉｔｅ；Ｘｏｍａ Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ；Ｉｘｓｙｓから利用できる。参照、例えば、欧州特許第３６８，６８４号、ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４，ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５；ＰＣＴ／ＧＢ９２／００２２４０，ＰＣＴ／ＧＢ９２／００８８３；ＰＣＴ／ＧＢ９３／００６０５；ＵＳ ０８／３５０２６０（５／１２／９４）；ＰＣＴ／ＧＢ９４／０１４２２；ＰＣＴ／ＧＢ９４／０２６６２；ＰＣＴ／ＧＢ９７／０１８３５；（ＣＡＴ／ＭＲＣ）；ＷＯ９０／１４４４３；ＷＯ９０／１４４２４；ＷＯ９０／１４４３０；ＰＣＴ／ＵＳ９４／１２３４；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９６／０７７５４；（Ｓｃｒｉｐｐｓ）；欧州特許第６１４９８９号（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）；ＷＯ９５／１６０２７（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ）；ＷＯ８８／０６６３０；ＷＯ９０／３８０９（Ｄｙａｘ）；米国特許第４，７０４，６９２号（Ｅｎｚｏｎ）；ＰＣＴ／ＵＳ９１／０２９８９（Ａｆｆｙｍａｘ）：ＷＯ８９／０６２８３；欧州特許第３７１ ９９８号；同第５５０ ４００号（Ｘｏｍａ）；同第２２９ ０４６号；ＰＣＴ／ＵＳ９１／０７１４９（Ｉｘｓｙｓ）；または推計学的に生成したペプチドもしくはタンパク質−米国特許第５７２３３２３号、同第５７６３１９２号、同第５８１４４７６号、同第５８１７４８３号、同第５８２４５１４号、同第５９７６８６２号、ＷＯ８６／０５８０３，欧州特許第５９０ ６８９号（Ｉｘｓｙｓ，現在Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ（ＡＭＥ）、各々引用によって本明細書に完全に組み入れられている）、またはトランスジェニック動物の免疫化によるもの（例えば、ＳＣＩＤマウス、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：９０１−９０７（１９９７）；Ｓａｎｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９５−１１８（１９９６）；Ｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：１５４−１６１（１９９８）、各々引用ならびに関連特許および出願によって完全に組み入れられている）、これらは、当該技術分野において既知であるように、そして／または本明細書に記述されているように、ヒト抗体のレパートリーを生産することができる。そのような技術は、限定されるものではないが、リボソームディスプレー（Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：４９３７−４９４２（Ｍａｙ １９９７）；Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：１４１３０−１４１３５（Ｎｏｖ．１９９８））；単細胞抗体生産技術（例えば、選択リンパ球抗体法（「ＳＬＡＭ」）（米国特許第５，６２７，０５２号、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８８７−８９２（１９８７）；Ｂａｂｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：７８４３−７８４８（１９９６））；Ｊｏｎａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｖｏｌ．５，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，ｅｄ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｂ．Ｖ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ（１９８８））。
【００３０】
また、非ヒトもしくはヒト抗体を構築またはヒト化する方法が使用でき、そして当該技術分野において周知である。一般に、ヒト化または構築した抗体は、非ヒト、例えば限定されるものではないが、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類もしくは他の哺乳類である起源からの１種以上のアミノ酸残基を有する。これらのヒトアミノ酸残基は、しばしば、「インポート（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と呼ばれ、これらは、典型的には、既知のヒト配列の「インポート」可変、定常もしくは他のドメインから取られる。既知のヒトＩｇ配列は、下記に開示されていて、各々引用によって本明細書に完全に組み入れられている：
ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ：ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／〜ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ：ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉ−
ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；
ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｍｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；
ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；
ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／〜ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／〜ｈｃｌ／；
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ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／〜ｙａｓｕｈｉｔｏ／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；
ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／〜ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔ１．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／〜ｒｅｋ／ＡＥＰＳｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；
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ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；
ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ_ｐｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ;ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌ．Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３），そのようなインポート配列は、当該技術分野において周知であるように、免疫原性を減少させるか、または結合性、親和性、オン・レート（ｏｎ−ｒａｔｅ）、オフ・レート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）、結合活性、特異性、半減期またはすべての他の適当な特性を減少、増進もしくは改変するために使用できる。一般に、非ヒトもしくはヒトＣＤＲ配列の一部もしくは全部は、可変および定常部の非ヒト配列がヒトもしくは他のアミノ酸と置換される間にも維持される。また、抗体は、場合によっては、抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的性質の保持とともにヒト化できる。この目的を達成するために、ヒト化抗体は、場合によっては、親の配列およびヒト化配列の三次元モデルを用いる、親の配列および種々の概念上のヒト化生成物の解析方法によって作成することができる。三次元の免疫グロブリンモデルは、通常は、当業者にとって利用可能であり、そして周知である。選ばれた候補免疫グロブリン配列の予想される三次元立体配置構造を描き、そして表示するコンピュータープログラムが利用できる。これらの表示の検査は、候補の免疫グロブリン配列の機能性における残基の可能な役割の解析、すなわち候補免疫グロブリンのその抗原への結合能に影響する残基の解析を可能にする。この点において、ＦＲ残基は、所望の抗体特性、例えば標的抗原に対して増強した親和性が達成されるように、共通およびインポート配列から選択および組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を与える上で直接に、そしてもっとも本質的に必要である。本発明の抗体のヒト化もしくは構築は、限定されるものではないが、下記のようなすべての既知の方法を用いて行うことができる：Ｗｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８），Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３９；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７），Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８９（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）、米国特許第５７２３３２３号、同第５９７６８６２号、同第５８２４５１４号、同第５８１７４８３号、同第５８１４４７６号、同第５７６３１９２号、同第５７２３３２３号、同第５７６６８８６号、同第５７１４３５２号、同第６２０４４２３号、同第６１８０３７０号、同第５６９３７６２号、同第５５３０１０１号、同第５５８５０８９号、同第５２２５５３９号、同第４８１６５６７号、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０，ＵＳ９６／１８９７８，ＵＳ９１／０９６３０，ＵＳ９１／０５９３９，ＵＳ９４／０１２３４，ＧＢ８９／０１３３４，ＧＢ９１／０１１３４，ＧＢ９２／０１７５５，ＷＯ９０／１４４４３，ＷＯ９０／１４４２４，ＷＯ９０／１４４３０，欧州特許第２２９２４６号、各々、そこに引用される引用を含む、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００３１】
また、抗ＩＬ−１２抗体は、場合によっては、本明細書に記述され、そして当該技術分野において既知であるように、ヒト抗体のレパートリーを作成することが可能なトランスジェニック動物（例えばマウス、ラット、ハムスター、非ヒト霊長類など）の免疫化によって生成することができる。ヒト抗ＩＬ−１２抗体を産生する細胞は、本明細書に記述されるような適当な方法を用いて、そのような動物から単離され、そして不死化することができる。
【００３２】
ヒト抗原に結合するヒト抗体のレパートリーを作成できるトランスジェニックマウスは、既知の方法によって作成できる（例えば、限定されるものではないが、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．による米国特許第５，７７０，４２８号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５４５，８０６号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６２５，８２５号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，７８９，６５０号；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．ＷＯ９８／５０４３３，Ｊｅｔ ａｌ．ＷＯ９８／２４８９３、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．ＷＯ９８／２４８８４，Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．ＷＯ９７／１３８５２、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．ＷＯ９４／２５５８５，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ ｅｔ ａｌ．ＷＯ９６／３４０９６，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ ｅｔ ａｌ．欧州特許出願公開第０４６３ １５１号，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ ｅｔ ａｌ．欧州特許出願公開第０７１０ ７１９号，Ｓｕｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．米国特許第５，５４５，８０７号，Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．ＷＯ９０／０４０３６，Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．欧州特許出願公開第０４３８ ４７４号，Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．欧州特許出願公開第０８１４ ２５９号，Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．ドイツ特許出願公開第２ ２７４ ４４０号，Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）５７９−５９１（１９９４）、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３−２１（１９９４），Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６（１９９７），Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅｒｃｈ ２０（２３）：６２８７−６２９５（１９９２），Ｔａｕｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０（８）３７２０−３７２４（１９９３）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３（１）：６５−９３（１９９５）およびＦｉｓｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４（７）：８４５−８５１（１９９６）、これらは各々引用によって本明細書に完全に組み入れられている）。一般に、これらのマウスは、機能的に再配列されるか、または機能的再配列を受け入れることができる少なくとも１つのヒト免疫グロブリン座からのＤＮＡを含んでなる少なくとも１つのトランスジーンを含有する。そのようなマウスにおける内因性の免疫グロブリン座は、内因性遺伝子によってコードされる抗体を産生する動物の能力を除去するために破壊もしくは欠失することができる。
【００３３】
類似のタンパク質もしくはフラグメントへの特異的結合について抗体をスクリーニングすることは、慣用的には、ペプチドディスプレイライブラリーを用いて達成できる。この方法は、所望の機能もしくは構造を有する個々のメンバーについてのペプチドの大集団のスクリーニングを伴う。ペプチドディスプレイライブラリーの抗体スクリーニングは、当該技術分野においてよく知られている。ディスプレイされたペプチド配列は、長さ３〜５０００以上のアミノ酸、たびたび５〜１００アミノ酸長、そしてしばしば約８〜２５アミノ酸長である。ペプチドライブラリーを作成する直接化学合成法に加えて、いくつかの組み換えＤＮＡ法が記述されている。１つのタイプは、バクテリオファージもしくは細胞の表面におけるペプチド配列のディスプレイを必要とする。各バクテリオファージもしくは細胞は、特定のディスプレイされたペプチド配列をコードしているヌクレオチド配列を含有する。そのような方法は、ＰＣＴ特許公開９１／１７２７１，９１／１８９８０，９１／１９８１８および９３／０８２７８に記述されている。ペプチドのライブラリーを作成する他のシステムは、両イン・ビトロの化学合成および組み換え法の態様を有する。参照、ＰＣＴ特許公開９２／０５２５８，９２／１４８４３，および９６／１９２５６。参照、また米国特許第５，６５８，７５４号；および同第５，６４３，７６８号。ペプチドディスプレイライブラリー、ベクターおよびスクリーニングキットは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）およびＣａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ）のような販売元からの市販品を入手できる。参照、例えば、Ｅｎｚｏｎに譲渡された米国特許第４７０４６９２号、同第４９３９６６６号、同第４９４６７７８号、同第５２６０２０３号、同第５４５５０３０号、同第５５１８８８９号、同第５５３４６２１号、同第５６５６７３０号、同第５７６３７３３号、同第５７６７２６０号、同第５８５６４５６号；Ｄｙａｘに譲渡された同第５２２３４０９号、同第５４０３４８４号、同第５５７１６９８号、同第５８３７５００号、Ａｆｆｙｍａｘに譲渡された同第５４２７９０８号、同第５５８０７１７号；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓに譲渡された同第５８８５７９３号；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈに譲渡された同第５７５０３７３号；Ｘｏｍａに譲渡された同第５６１８９２０号、同第５５９５８９８号、同第５５７６１９５号、同第５６９８４３５号、同第５６９３４９３号、同第５６９８４１７号、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，前出；Ａｎｓｕｂｅｌ，前出；またはＳａｍｂｒｏｏｋ，前出、上記特許および出版物の各々は引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００３４】
また、本発明の抗体は、そのような抗体を乳中に生産するトランスジェニック動物もしくは哺乳類、例えばヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどを提供するために、少なくとも１種の抗ＩＬ−１２抗体エンコーディング核酸を用いて作成することができる。そのような動物は既知の方法を用いて提供することができる。参照、例えば限定されるものではないが、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，８４９，９９２号、同第５，９９４，６１６号、同第５，５６５，３６２号、同第５，３０４，４８９号など、これらの各々は引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００３５】
本発明の抗体は、さらに、そのような抗体、特定の部分もしくは改変体を植物の部分もしくはそれから培養された細胞において生産するトランスジェニック植物および培養植物細胞（例えば限定されるものではないがタバコおよびトウモロコシ）を提供するために少なくとも１種の抗ＩＬ−１２抗体エンコーディング核酸を用いて作成することができる。非限定的な例として、例えば、誘導プロモーターを使用して、組み換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコ葉が成功裏に使用されて、大量の組み換えタンパク質を提供した。参照、例えば、Ｃｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８（１９９９）および本明細書に引用される引用文献。また、トランスジェニックトウモロコシは、他の組み換え系において生産されるか、または天然の起源から精製されるタンパク質に等しい生物活性を有する、商業生産レベルにおける哺乳類タンパク質を発現するために使用された。参照、例えば、Ｈｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４７（１９９９）および本明細書に引用される引用文献。また、抗体は、タバコ種子およびポテト塊茎を含む、抗体フラグメント、例えば一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含有するトランスジェニック植物種子から、大量に生産された。参照、例えば、Ｃｏｎｒａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９（１９９８）および本明細書に引用される引用文献。かくして、また本発明の抗体は、既知の方法にしたがってトランスジェニック植物を用いて生産することができる。また参照、例えば、Ｆｉｃｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔ．１９９９），Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５）；Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５）；Ｗｈｉｔｅｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４）およびおよび本明細書に引用される引用文献。また参照、一般に、限定されるものではないが、抗体の植物発現に関するもの。上記文献の各々は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００３６】
本発明の抗体は、広範囲の親和性（ＫD）によりヒトＩＬ−１２に結合できる。好適な実施態様では、本発明の少なくとも１つのヒトｍＡｂは、場合によっては、高い親和性によりヒトＩＬ−１２に結合することができる。例えば、ヒトｍＡｂは、約１０-7Ｍに等しいか、それ未満、例えば限定されるものではないが０．１−９．９（またはそこでのすべての範囲もしくは値）Ｘ１０-7，１０-8，１０-9，１０-10，１０-11，１０-12，１０-13もしくはそこでのすべての範囲もしくは値のＫDによりヒトＩＬ−１２に結合できる。
【００３７】
抗原に対する抗体の親和性もしくは結合力は、すべての適当な方法を用いて実験的に決定できる。（参照、例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．，”Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，”Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）；およびそこに記述される方法）。特定の抗体−抗原相互作用の測定された親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ）下で測定された場合には変わることがある。かくして、親和性および他の抗原結合パラメーター（例えば、ＫD，Ｋa，Ｋd）の測定は、好ましくは、抗体および抗原の標準溶液、および標準バッファー、例えば本明細書に記述されるバッファーを用いて行われる。
【００３８】
核酸分子
本明細書で提供される情報、例えば、配列番号：１，２，３，４，５，６，７，８の少なくとも１つの隣接するアミノ酸の少なくとも７０−１００％においてコードしているヌクレオチド配列、特定のフラグメント、改変体もしくはその共通配列、またはこれらの配列の少なくとも１つを含んでなる寄託ベクターを使用して、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体をコードしている本発明の核酸分子は、本明細書に記述されるか、または当該技術分野において既知である方法を用いて得ることができる。
【００３９】
本発明の核酸分子は、ＲＮＡの形態、例えばｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡもしくはすべての他の形態において、あるいは限定されるものではないが、クローニングによって得られるかまたは合成的に生産されるか、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ、またはそれらの組み合わせ物を含むＤＮＡの形態において存在することができる。ＤＮＡは、三本鎖、二本鎖もしくは一本鎖、またはそのすべての組み合わせ物であってもよい。ＤＮＡもしくはＲＮＡの少なくとも１本の鎖のいずれの部分も、またセンス鎖として知られるコーディング鎖であってもよく、またはそれは、またアンチセンス鎖と呼ばれる非コーディング鎖であってもよい。
【００４０】
本発明の単離された核酸分子は、場合によっては１つ以上のイントロンを有するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、例えば限定されるものではないが、少なくとも１つの重鎖（例えば配列番号：１−３）もしくは軽鎖（例えば配列番号：４−６）のＣＤＲ１，ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３のような、少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも１つの特定部分を含んでなる核酸分子；抗ＩＬ−１２抗体もしくは可変部のコーディング配列（例えば配列番号：７，８）を含んでなる核酸分子；および上記核酸分子とは実質的に異なるが、遺伝コードの退化により、本明細書に記述されそして当該技術分野において既知である少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体をなおコードしているヌクレオチド配列を含有する核酸分子：を包含する。もちろん、遺伝コードは当該技術分野において周知である。かくして、本発明の特異的抗ＩＬ−１２抗体をコードしているそのような退化した核酸改変体を生成することは、当業者にとっては日常的に行われる。参照、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，前出、そしてそのような核酸改変体は本発明に包含される。本発明の単離された核酸分子の非限定の例は、それぞれ、ＨＣＣＤＲ１，ＨＣＣＤＲ２，ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１，ＬＣＣＤＲ２，ＬＣＣＤＲ３、ＨＣ可変部およびＬＣ可変部をコードしている核酸の非限定の例に対応する、配列番号：１０−１５を含む。
【００４１】
その他の態様では、本発明は、命名されたクローン名 およびＡＴＣＣ寄託番号 として、それぞれ に寄託されたプラスミド中に含有される核酸によってコードされているようなアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１２抗体をコードしている単離核酸分子を提供する。
【００４２】
本明細書において指示されるように、抗ＩＬ−１２抗体をコードしている核酸を含有する本発明の核酸分子は、限定されるものではないが、それ自体で抗体フラグメントのアミノ酸配列をコードしている核酸；完全な抗体もしくはその一部分のコーディング配列：抗体、フラグメントもしくは部分、ならびに前記さらなるコーディング配列、例えば少なくとも１つのイントロンを含んでも含まなくても、限定されるものではないが、非コーディング５’および３’配列、例えば、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル（例えば−ｍＲＮＡのリボソーム結合と安定化）を含む、転写、ｍＲＮＡプロセッシングにおいて役割を演じる転写されるが、翻訳されない配列を含む、さらなる非コーディング配列とともに、少なくとも１つのシグナルリーダーもしくは融合ペプチドのコーディング配列のようなさらなる配列のコーディング配列；さらなるアミノ酸配列、例えばさらなる機能を提供するアミノ酸配列をコードしているさらなるコーディング配列を包含してもよい。かくして、抗体をコードしている配列は、マーカー配列、例えば抗体フラグメントもしくは部分を含有する融合抗体の精製を容易にするペプチドをコードしている配列、に融合されてもよい。
【００４３】
本明細書に記述されるようなポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドに対して選択的ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された核酸を提供する。かくして、本実施態様のポリヌクレオチドは、そのようなポリヌクレオチドを含んでなる核酸を単離、検出および／または定量するために使用することができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、寄託ライブラリー中の部分的または全長クローンを、同定、単離または増幅するために使用されてもよい。ある実施態様では、ポリヌクレオチドは、ヒトもしくは哺乳類の核酸ライブラリーから単離されたゲノムもしくはｃＤＮＡ配列であるか、またはライブラリーからのｃＤＮＡに相補的である。
【００４４】
好ましくは、ｃＤＮＡライブラリーは、少なくとも８０％の全長配列、好ましくは少なくとも８５％もしくは９０％の全長配列、より好ましくは少なくとも９５％の全長配列を含有する。ｃＤＮＡライブラリーは、希有配列の表現を増強するために標準化されてもよい。低度もしくは中等度ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は、典型的には、絶対的なものではないが、相補的配列に較べて低下した配列同一性を有する配列とともに用いられる。中等度および高度ストリンジェンシーの条件は、場合によっては、より大きい同一性の配列のために使用されてもよい。低いストリンジェンシー条件は、約７０％の同一性を有する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能にし、そしてオーソロガスもしくはパラロガス配列を同定するために使用できる。
【００４５】
場合によっては、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記述されるポリヌクレオチドによってコードされている抗体の少なくとも一部分をコードしてもよい。本発明のポリヌクレオチドは、本発明の抗体をコードしているポリヌクレオチドへの選択的ハイブリダイゼーションのために使用できる核酸配列を含む。参照、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，前出；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，前出、各々、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００４６】
核酸の構築
本発明の単離された核酸は、当該技術分野で周知のように、（ａ）組み換え法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、またはそれらの組み合わせを用いて作成することができる。
【００４７】
核酸は、便利には、本発明のポリヌクレオチドに付加された配列を含有する。例えば、１つ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含有するマルチクローニング部位が、ポリヌクレオチドの単離を助けるために核酸中に挿入できる。また、翻訳可能な配列が、翻訳された本発明のポリヌクレオチドの単離を助けるために挿入されてもよい。例えば、ヘキサ−ヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製する便利な手段を提供する。本発明の核酸−コーディング配列を除く−は、場合によっては、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／または発現のための、ベクター、アダプターもしくはリンカーであってもよい。
【００４８】
付加される配列は、ポリヌクレオチドの単離を助けるため、または細胞中へのポリヌクレオチドの導入を改良するために、クローニングおよび／または発現においてそれらの機能を最適化すべく、そのようなクローニングおよび／または発現配列に付加することができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は、当該技術分野においては周知である。（参照、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，前出；またはＳａｍｂｒｏｏｋ，前出）
核酸を構築する組み換え法
本発明の単離した核酸組成物、例えばＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはそのすべての組み合わせ物は、当業者には既知のあらゆる数のクローニング法を用いて生物起源から得ることができる。ある実施態様では、本発明のポリヌクレオチドにストリンジェント条件下で選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブが、ｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡライブラリー中の所望の配列を同定するために使用される。ＲＮＡの単離、およびｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は、当業者には周知である。（参照、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，前出；またはＳａｍｂｒｏｏｋ，前出）
核酸スクリーニングおよび単離方法
ｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーは、本明細書に開示されるような本発明のポリヌクレオチドの配列に基づくプローブを用いてスクリーニングすることができる。プローブは、ゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡ配列にハイブリダイズさせて同じか異なる生物体中の相同遺伝子を単離するために使用できる。当業者は、ハイブリダイゼーションの種々の度合いのストリンジェンシーがアッセイにおいて使用でき；そしてハイブリダイゼーションまたは洗浄媒質のいずれかがストリンジェントでもよいことを理解できる。ハイブリダイゼーションの条件がよりストリンジェントになるにつれて、生じる二重らせん形成のためには、プローブと標的間の相補性の程度がより大きくならねばならない。ストリンジェンシーの程度は、温度、イオン強度、ｐＨ、およびホルムアミドのような部分変性溶媒の存在の１つ以上によって調節することができる。例えば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、便利には、例えば、範囲０％〜５０％内のホルムアミド濃度の操作を介して反応物溶液の極性を変化させることによって変えられる。検出しうる結合に必要な相補性（配列同一性）の程度は、ハイブリダイゼーション媒質および／または洗浄媒質のストリンジェンシーにより変えられる。相補性の程度は、場合によっては、１００％、または７０−１００％、またはそこでのすべての範囲もしくは値であってもよい。しかしながら、プローブおよびプライマーにおける小さい配列改変は、ハイブリダイゼーションおよび／または洗浄媒質のストリンジェンシーを低下させることによって補償できることを理解すべきである。
【００４９】
ＲＮＡもしくはＤＮＡの増幅方法は、当該技術分野において周知であり、そして本明細書に示される教示およびガイダンスに基づいて、過度の実験なしに本発明にしたがって使用できる。
【００５０】
ＤＮＡもしくはＲＮＡ増幅の既知の方法は、限定されるものではないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および関連増幅操作を含み（参照、例えば、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８００，１５９号、同第４，９６５，１８８号；Ｔａｂｏｒ ｅｔ ａｌ．に対する同第４，７９５，６９９号および同第４，９２１，７９４号；Ｉｎｎｉｓに対する同第５，１４２，０３３号；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．に対する同第５，１２２，４６４号；Ｉｎｎｉｓに対する同第５，０９１，３１０；Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．に対する同第５，０６６，５８４号；Ｇｅｌｆａｎｄ ｅｔ ａｌ．に対する同第４，８８９，８１８号；Ｓｉｌｖｅｒに対する同第４，９９４，３７０号；Ｂｉｓｗａｓに対する同第４，７６６，０６７号；Ｒｉｎｇｏｌｄに対する同第４，６５６，１３４号）、および二本鎖ＤＮＡ合成のための鋳型としての標的配列に対してアンチセンスＲＮＡを使用するＲＮＡ媒介増幅（商標名ＮＡＳＢＡをもつ、Ｍａｌｅｋに対する米国特許第５，１３０，２３８号）を含み、これらの引用文献の全内容は引用によって本明細書に組み入れられている。（参照、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，前出；またはＳａｍｂｒｏｏｋ，前出）
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、ゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡライブラリーから直接に、本発明のポリヌクレオチドおよび関連遺伝子の配列を増幅するために使用できる。ＰＣＲおよび他のイン・ビトロ増幅法は、また、例えば、核酸の配列決定または他の目的のために、発現されるタンパク質をコードしている核酸配列をクローン化するため、サンプル中の所望のｍＲＮＡの存在を検出するプローブとして使用する核酸を作成するために有用である。イン・ビトロの増幅法をとおして習熟者を指導するのに十分な技術の例は、Ｂｅｒｇｅｒ，前出、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，前出およびＡｕｓｕｂｅｌ，前出、ならびにＭｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，６８３，２０２号（１９８７）；およびＩｎｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）において見いだされる。ゲノムＰＣＲ増幅のための市販のキットが当該技術分野において知られている。参照。例えば、Ａｄｖａｎｔａｇｅ−ＧＣ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）。さらに、例えば、Ｔ４遺伝子３２タンパク質（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）が長いＰＣＲ産物の収量を改善するために使用できる。
【００５１】
核酸を構築するための合成法
また、本発明の単離した核酸は、既知の方法による直接化学合成によって作成できる（参照、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，前出）。化学合成は、一般に、一本鎖オリゴヌクレオチドを生成し、これが相補的配列とのハイブリダイゼーションによるか、または鋳型として一本鎖を使用するＤＮＡポリメラーゼによる重合によって、二本鎖ＤＮＡに変換することができる。当業者は、ＤＮＡの化学合成が約１００以上の塩基の配列に限定されるので、より長い配列は比較的短い配列の連結によって得られることを認識できる。
【００５２】
組み換え発現カセット
本発明は、さらに、本発明の核酸を含んでなる組み換え発現カセットを提供する。本発明の核酸配列、例えば本発明の抗体をコードしているｃＤＮＡもしくはゲノム配列は、少なくとも１つの所望される宿主細胞中に導入できる組み換え発現カセットを構築するために使用できる。組み換え発現カセットは、典型的には、意図する宿主細胞においてポリヌクレオチドの転写を指示する転写開始調節配列に操作可能に結合された本発明のポリヌクレオチドを含有する。両異種および非異種（すなわち内因性）のプロモーターが、本発明の核酸の発現を導くために用いることができる。
【００５３】
ある実施態様では、プロモーター、エンハンサーもしくは他の要素として働く単離した核酸は、本発明のポリヌクレオチドの非異種形態の適当な位置（上流、下流もしくはイントロン中）に導入されて本発明のポリヌクレオチドの発現を上下に調節することができる。例えば、内因性プロモーターは突然変異、欠失および／または置換によってイン・ビボもしくはイン・ビトロで変えることができる。
【００５４】
ベクターおよび宿主細胞
また本発明は、本発明の単離した核酸を含んでいるベクター、組み換えベクターにより遺伝的に操作される宿主細胞、および当該技術分野において周知である組み換え技術による少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の生産に関する。参照、例えば、各々、引用によって本明細書に完全に組み入れられているＳａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，前出：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，前出。
【００５５】
ポリヌクレオチドは、場合によっては、宿主における増殖のために選択できるマーカーを含有するベクターに結合されてもよい。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈殿物のような沈殿物中か、または負荷された脂質との複合体中に導入される。ベクターがウイルスである場合、それは、適当なパッケージング細胞系を用いてイン・ビトロでパッケージングされ、次いで宿主細胞中に形質導入できる。
【００５６】
ＤＮＡインサートは、適当なプロモーターに操作可能に結合されなければならない。発現構築物は、さらに、転写、開始、終止のための部位、および転写領域中に、翻訳のためのリボソーム結合部位を含有する。構築物によって発現された成熟転写物のコーディング部分は、好ましくは、最初には翻訳開始コドンおよび哺乳類もしくは真核細胞発現に好適なＵＡＡおよびＵＡＧをもつ、翻訳されるべきｍＲＮＡの末端に適当に位置する終止コドン（例えば、ＵＡＡ，ＵＧＡもしくはＵＡＧ）を含む。
【００５７】
発現ベクターは、好ましいが場合によっては、少なくとも１つの選択可能なマーカーを含んでもよい。そのようなマーカーは、例えば、限定されるものではないが、真核細胞培養のためのメトトレキセート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ，米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６５５号、同第４，９５６，２８８号、同第５，１４９，６３６号、同第５，１７９，０１７号）、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ミコフェノール酸もしくはグルタミンシンテターゼ（ＧＳ，米国特許第５，１２２，４６４号、同第５，７７０，３５９号、同第５，８２７，７３９号）抵抗遺伝子、およびＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）および他の細菌または原核生物における培養のためのテトラサイクリンもしくはアンピシリン抵抗遺伝子を含む（上記特許は引用によって本明細書に完全に組み入れられている）。上記宿主細胞のための適当な培養基および条件は当該技術分野において既知である。適当なベクターは熟達技術者には容易に明白になる。宿主細胞中へのベクター構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介のトランスフェクション、陽イオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染もしくは他の既知の方法によって実施できる。そのような方法は、当該技術分野において記述されている、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，前出、Ｃｈａｐｔｅｒｓ１−４および１６−１８；Ａｕｓｕｂｅｌ，前出、Ｃｈａｐｔｅｒｓ１，９，１３，１５，１６．
本発明の少なくとも１つの抗体は、融合タンパク質のような改変形態において発現され、そして分泌シグナルのみならず、また付加される異種の機能領域を含んでもよい。例えば、付加されるアミノ酸、特に電荷をもつアミノ酸の領域は、精製中、またはその後の取り扱いおよび貯蔵中、宿主細胞における安定性および持続性を改良するために抗体のＮ末端に付加されてもよい。また、ペプチド部分が精製を容易にするために本発明の抗体に付加されてもよい。そのような領域は、抗体もしくはその少なくとも１つのフラグメントの最終調製前に除去することができる。そのような方法は多くの標準実験室マニュアル、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，前出、Ｃｈａｐｔｅｒｓ１７．２９−１７．４２および１８．１−１８．７４；Ａｕｓｕｂｅｌ，前出、Ｃｈａｐｔｅｒｓ１６，１７および１８に記述されている。当業者は、本発明のタンパク質をコードしている核酸の発現のために利用できる種々の発現系における知識を有する。
【００５８】
あるいはまた、本発明の核酸は、本発明の抗体をコードしている内因性ＤＮＡを含有する宿主細胞において働かせる（操作によって）ことによって宿主細胞において発現することができる。そのような方法は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている米国特許第５，５８０，７３４号、同第５，６４１，６７０号、同第５，７３３，７４６号および同第５，７３３，７６１号において記述されるように、当該技術分野においては周知である。
【００５９】
抗体、特定部分もしくはその改変体の生産のために有用な細胞培養の実例は哺乳類細胞である。哺乳類細胞系は、しばしば、細胞のモノレアーの形態で存在するが、また、哺乳類細胞懸濁液またはバイオリアクターも使用できる。インタクトのグリコシル化タンパク質を発現できる多数の適当な宿主細胞系が、当該技術分野において開発されており、そしてＣＯＳ−１（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５０），ＣＯＳ−７（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６５１），ＨＥＫ２９３，ＢＨＫ２１（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ−１０），ＣＨＯ（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６１０）およびＢＳＣ−１（例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ−２６）細胞系、Ｃｏｓ−７細胞，ＣＨＯ細胞，ｈｅｐＧ２細胞，Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３，ＳＰ２／０−Ａｇ１４，２９３細胞，ＨｅＬａ細胞などを含む、これらは、例えばＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）から容易に入手できる。好適な宿主細胞は、骨髄腫およびリンパ腫のようなリンパ様起源の細胞を含む。特に好適な宿主細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１８５１）である。特に好適な実施態様では、組み換え細胞はＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３もしくはＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞である。
【００６０】
これらの細胞のための発現ベクターは、１つ以上の次の発現制御配列、例えば限定されるものではないが、複製起点；プロモーター（例えば、後期もしくは初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（米国特許第５，１６８，０６２号；同第５，３８５，８３９号）、ＨＳＫｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホグリセレートキナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１αプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号）、少なくとも１つヒト免疫グロブリンプロモーター）；エンハンサー、および／またはプロセッシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えばＳＶ４０ラージＴＡｇポリＡ付加部位）、および転写ターミネーター配列、を含む。参照、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，前出；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，前出。本発明の核酸もしくはタンパク質の生産のために有用な他の細胞は既知であり、そして／または例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｌｏｇｕｅ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）または他の既知もしくは市販起源から入手できる。
【００６１】
真核宿主細胞が用いられる場合、ポリアデニル化もしくは転写ターミネーター配列は、典型的には、ベクター中に組み込まれる。ターミネーター配列の例は、ウシ成長ホルモン遺伝子からのポリアデニル化配列である。転写物の正確なスプライシングのための配列もまた含まれてもよい。スプライシング配列の例はＳＶ４０からのＶＰ１イントロンである（Ｓｐｒａｇｕｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１（１９８３））。さらに、宿主細胞における複製を制御する遺伝子配列が、当該技術分野において知られているように、ベクター中に組み込まれてもよい。
【００６２】
抗体の精製
抗ＩＬ−１２抗体は、限定されるものではないが、タンパク質Ａ精製、硫酸アンモニウムもしくはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンもしくは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む、周知の方法によって組み換え細胞培養物から回収および精製することができる。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もまた精製のために使用できる。参照、例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ，（１９９７−２００１）、例えばＣｈａｐｔｅｒｓ １，４，６，８，９，１０、各々、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００６３】
本発明の抗体は、天然に精製される生産物、化学合成工程の生成物、および例えば、酵母、高等植物、昆虫および哺乳類細胞を含む真核生物宿主から組み換え技術によって生産された生産物を包含する。組み換え生産工程において使用される宿主により、本発明の抗体はグリコシル化されるか、またはグリコシル化されないが、グリコシル化されるのが好適である。そのような方法は、多くの標準実験室マニュアル、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，前出、Ｓｅｃｔｉｏｎｓ１７．３７−１７．４２；Ａｕｓｕｂｅｌ，前出、Ｃｈａｐｔｅｒｓ １０，１２，１３，１６，１８および２０、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，前出，Ｃｈａｐｔｅｒｓ １２−１４に記述されており、すべては、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００６４】
抗ＩＬ−１２抗体
本発明の単離された抗体は、本明細書においてより完全に議論されている本発明のポリヌクレオチドのいすれか１つによってコードされている抗体、またはすべての単離されるか調製された抗体を含む。好ましくは、ヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントはヒトＩＬ−１２を結合し、それによってタンパク質の少なくとも１つの生物活性を部分的もしくは実質的に中和する。少なくとも１つのＩＬ−１２タンパク質もしくはフラグメントの少なくとも１つの生物活性を部分的もしくは好ましくは実質的に中和する抗体、または特定部分もしくはその改変体は、タンパク質もしくはフラグメントを結合し、それによって、ＩＬ−１２受容体へのＩＬ−１２の結合を介してか、または他のＩＬ−１２依存性もしくは介在メカニズムを介して媒介される活性を抑制する。本明細書で使用されるように、用語「中和抗体」は、ＩＬ−１２に依存する活性を、アッセイに応じて約２０−１２０％、好ましくは少なくとも約１０，２０，３０，４０，５０，５５，６０，６５，７０，７５，８０，８５，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９，１００％またはそれ以上抑制できる抗体を指す。ＩＬ−１２に依存する活性を抑制する抗ＩＬ−１２抗体の能力は、好ましくは、本明細書に記述され、そして／または当該技術分野において既知のように、少なくとも１つの適当なＩＬ−１２タンパク質もしくは受容体アッセイによって調査される。本発明のヒト抗体は、いずれかのクラス（ＩｇＧ，ＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＥ，ＩｇＤなど）またはイソタイプに属し、そしてκもしくはλ軽鎖を含有してもよい。１つの実施態様では、ヒト抗体は、例えば、少なくとも１つのイソタイプ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４におけるＩｇＧ重鎖もしくは特定フラグメントを含有する。このタイプの抗体は、本明細書に記述され、そして／または当該技術分野において既知のように、少なくとも１つのヒト軽鎖（例えば、ＩｇＧ，ＩｇＡおよびＩｇＭ（例えば、γ１，γ２，γ３，γ４）トランスジーンを含んでなるトランスジェニックマウスもしくは他のトランスジェニック非ヒト哺乳類を用いることによって調製することができる。その他の実施態様では、抗ヒトＩＬ−１２ヒト抗体は、ＩｇＧ１重鎖およびＩｇＧ１軽鎖を含有する。
【００６５】
本発明の少なくとも１つの抗体は、少なくとも１つのＩＬ−１２タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分またはそれらのすべての組み合わせ物に特異的な少なくとも１つの特定のエピトープを結合する。少なくとも１つのエピトープは、該タンパク質の少なくとも１つの部分を含有する少なくとも１つの抗体結合領域を含有することができ、このエピトープは、好ましくは、該タンパク質の少なくとも１つの細胞外、可溶性、親水性の、外部もしくは細胞質部分を含んでなる。少なくとも１つの特定エピトープは、配列番号：９の、少なくとも１−３アミノ酸から隣接するアミノ酸の全特定部分までの、少なくとも１つのアミノ酸配列のすべての組み合わせ物を含有する。
【００６６】
一般に、本発明のヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの重鎖可変部の少なくとも１つのヒト相補性決定部位（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）もしくは改変体および少なくとも１つの軽鎖可変部の少なくとも１つのヒト相補性決定部位（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）もしくは改変体を含有する抗原結合領域を含有する。非限定の例として、抗体または抗原結合部分もしくは改変体は、配列番号：３のアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ３および／または配列番号：６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含有してもよい。特別な実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、対応するＣＤＲ１，２および／または３のアミノ酸配列（例えば、配列番号：１，２および／または３）を有する少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ１，ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３）の少なくとも一部分を含有する抗原結合領域を有してもよい。その他の特別な実施態様では、抗体または抗原結合部分もしくは改変体は、対応するＣＤＲ１，２および／または３のアミノ酸配列（例えば、配列番号：４，５および／または６）を有する少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ１，ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３）の少なくとも一部分を含有する抗原結合領域を有してもよい。好適な実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントの３種の重鎖ＣＤＲおよび３種の軽鎖ＣＤＲは、ｍＡｂ １２Ｂ７５，Ｃ３４０、または本明細書に記述されるすべての他のものの少なくとも１つの対応するＣＤＲのアミノ酸配列を有する。そのような抗体は、慣用の技術を用いて抗体の種々の部分（例えば、ＣＤＲ、枠組み構造）を一緒に化学的に結合することによって、組み換えＤＮＡ工学の慣用の技術用いて抗体をコードしている（１つ以上の）核酸分子を調製し、そして発現させることによって、またはすべての他の適当な方法によって作成することができる。
【００６７】
抗ＩＬ−１２抗体は、一定のアミノ酸配列を有する重鎖もしくは軽鎖可変部の少なくとも１つを含有する。例えば、好適な実施態様では、抗ＩＬ−１２抗体は、場合によっては、配列番号：７のアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖可変部および／または場合によっては、配列番号：８のアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖可変部の少なくとも１つを含有する。ヒトＩＬ−１２に結合し、そして一定の重鎖もしくは軽鎖可変部を含有する抗体は、適当な方法、例えば、当該技術分野において既知であり、そして／または本明細書に記述されるように、ファージディスプレー（Ｋａｔｓｕｂｅ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，１（５）：８６３−８６８（１９９８））またはトランスジェニック動物を用いる方法を使用して作成することができる。例えば、機能的に再配置されたヒト免疫グロブリン重鎖トランスジーンおよび機能的再配置を受けることができるヒト免疫グロブリン軽鎖座からのＤＮＡを含有するトランスジーンを含んでなる、トランスジェニックマウスは、ヒトＩＬ−１２またはそのフラグメントにより免疫化されて抗体の産生を惹起することができる。所望ならば、抗体産生細胞が単離され、そしてハイブリドーマもしくは他の不死化された抗体産生細胞が、本明細書に記述され、そして／または当該技術分野において既知のように、作成することができる。あるいはまた、抗体、特定部分もしくは改変体は、適当な宿主細胞においてコーディング核酸もしくはその部分を用いて発現することができる。
【００６８】
また本発明は、本明細書に記述されるアミノ酸配列と実質的に同じである配列においてアミノ酸を含んでなる抗体、抗原結合フラグメント、免疫グロブリン鎖およびＣＤＲに関する。好ましくは、そのような抗体もしくは抗原結合フラグメントおよびそのような鎖もしくはＣＤＲを含んでなる抗体は、高い親和性（例えば、約１０-9Ｍ未満またはそれに等しいＫD）によりヒトＩＬ−１２を結合することができる。本明細書に記述される配列と実質的に同じであるアミノ酸配列は、同類アミノ酸置換、ならびにアミノ酸欠失および／または挿入を含んでなる配列を含む。同類アミノ酸置換は、第１のアミノ酸の性質に類似する化学的および／または物理的性質（例えば。電荷、構造、極性、疎水性、親水性）を有する第２のアミノ酸による第１のアミノ酸の置換を指す。同類置換は、次のグループ内の１つのアミノ酸のその他による置換を含む：リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ，Ｒ，Ｈ，ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ），プロリン（Ｐ），フェニルアラニン（Ｆ），トリプトファン（Ｗ），メチオニン（Ｍ），システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ，ＷおよびＹ；Ｃ，ＳおよびＴ。
【００６９】
アミノ酸コード
本発明の抗ＩＬ−１２抗体を形成するアミノ酸は、しばしば短縮される。アミノ酸の指定は、当該技術分野においてよく理解されているように、その単一の文字コード、その３文字コード、名称、または３ヌクレオチドコドンによってアミノ酸を指名することによって示すことができる（参照、Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｅｌｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４）：
【００７０】
【表１】
Figure 0004731094
【００７１】
本発明の抗ＩＬ−１２抗体は、本明細書で特定するように、いずれの自然の変異もしくはヒトの操作からの１つ以上のアミノ酸置換、欠失もしくは付加を含んでもよい。
【００７２】
もちろん、当業者は、前記のものを含む多くのファクターに応じて、多数のアミノ酸置換を作成できる。一般的に言えば、すべての与えられた抗ＩＬ−１２Ｉｇ由来のタンパク質、フラグメントもしくは改変体についてのアミノ酸置換、挿入もしくは欠失の数は、本明細書で特定するように、４０，３０，２０，１９，１８，１７，１６，１５，１４，１３，１２，１１，１０，９，８，７，６，５，４，３，２，１以下、例えば１〜３０またはすべてのその中の範囲もしくは値ではない。
【００７３】
機能のために必須である本発明の抗ＩＬ−１２抗体中のアミノ酸は、当該技術分野において既知の方法、例えば部位特異的変異誘発もしくはアラニンスキャニング変異誘発によって同定することができる（例えば、Ａｕｓｂｅｌ，前出，Ｃｈａｐｔｅｒｓ８，１５，；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））。後者の操作は、分子中の残渣毎に単一のアラニン変異を導入する。得られる変異分子は、次に、生物学的活性、例えば限定されるものではないが、少なくとも１つのＩＬ−１２中和活性について試験される。また、抗体結合のために決定的である部位は、構造解析、例えば結晶化、核磁気共鳴もしくはフォトアフィニティーラベリングによって同定することもできる（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ Ｖｏｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９９２））。
【００７４】
本発明の抗ＩＬ−１２抗体は、限定されるものではないが、配列番号：１，２，３，４，５，６の少なくとも１つの隣接するアミノ酸の５〜全部から選ばれる少なくとも１つの部分、配列または組み合わせ物を含んでもよい。
【００７５】
本発明のＩＬ−１２抗体もしくは特定部分もしくは改変体は、限定されるものではないが、少なくとも３−５個の配列番号：１の隣接するアミノ酸、５−１７個の配列番号：２の隣接するアミノ酸、５−１０個の配列番号：３の隣接するアミノ酸、５−１１個の配列番号：４の隣接するアミノ酸、５−７個の配列番号：５の隣接するアミノ酸、５−９個の配列番号：６の隣接するアミノ酸；配列番号：７のＬｅｕ２１，Ｌｙｓ７６，Ｍｅｔ８３，Ｓｅｒ８５から選ばれる少なくとも１つの部分、配列もしくは組み合わせ物を含んでもよい。
【００７６】
さらに、抗ＩＬ−１２抗体は、場合によっては、配列番号：１，２，３，４，５，６，７もしくは８の少なくとも１つの５，１７，１０，１１，７，９，１１９もしくは１０８個の隣接するアミノ酸の７０−１００％の少なくとも１つのポリペプチドを含有してもよい。
【００７７】
１つの実施態様では、免疫グロブリンまたはその部分（例えば可変部、ＣＤＲ）アミノ酸配列は、配列番号：７，８の少なくとも１つの対応する鎖のアミノ酸配列に対して約７０−１００％同一性（例えば、７０，７１，７２，７３，７４，７５，７６，７７，７８，７９，８０，８１，８２，８３，８４，８５，８６，８７，８８，８９，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９，１００またはその中のすべての範囲もしくは値）を有する。例えば、軽鎖可変部のアミノ酸配列は、配列番号：８の配列と比較することができるし、また重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号：３と比較することができる。好ましくは、７０−１００％アミノ酸同一性（すなわち、９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９，１００またはその中のすべての範囲もしくは値）は、当該技術分野において既知である適当なコンピューターアルゴリズムを用いて決定される。
【００７８】
典型的な重鎖および軽鎖可変部配列は、配列番号：７と８において提供される。本発明の抗体、またはその特定改変体は、本発明の抗体からの隣接するアミノ酸残基のいかなる数をも含有でき、この場合、その数は、抗ＩＬ−１２抗体における隣接する残基数の１０−１００％からなる整数群から選ばれる。場合によっては、この隣接するアミノ酸のサブシーケンス（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ）は、長さにおいて少なくとも約１０，２０，３０，４０，５０，６０，７０，８０，９０，１００，１１０，１２０，１３０，１４０，１５０，１６０，１７０，１８０，１９０，２００，２１０，２２０，２３０，２４０，２５０個もしくはそれ以上のアミノ酸、またはその中のすべての範囲もしくは値である。さらに、そのようなサブシーケンスの数は、１〜２０からなる群、例えば少なくとも２，３，４もしくは５から選ばれるすべての整数であってもよい。
【００７９】
当業者が評価できるように、本発明は、本発明の少なくとも１つの生物学的に活性な抗体を含む。生物学的に活性な抗体は、本来の（非合成の）、内因性のまたは関連のおよび既知の抗体の活性の少なくとも２０％，３０％もしくは４０％、好ましくは少なくとも５０％，６０％もしくは７０％、そしてもっとも好ましくは少なくとも８０％，９０％もしくは９５％−１０００％の比活性を有する。酵素活性および基質特異性の測定値をアッセイおよび定量する方法は当業者にとって周知である。
【００８０】
その他の態様では、本発明は、有機部分の共有結合によって改変される、本明細書で記述されるようなヒト抗体および抗原結合フラグメントに関する。そのような改変は、改良された薬物動態的性質（例えば、増大されたイン・ビボの血清半減期）をもつ抗体もしくは抗原結合フラグメントを作成することができる。有機部分は、直鎖もしくは分枝親水性重合基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であってもよい。特別な実施態様では、親水性重合基は、分子量約８００〜約１２０，０００ダルトンを有し、そしてポリアルカングリコール（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマーもしくはポリビニルピロリドンであってもよく、そして脂肪酸もしくは脂肪酸エステル基は、約８〜約４０個の炭素原子を含んでもよい。
【００８１】
本発明の改変された抗体および抗原結合フラグメントは、抗体に直接または間接に共有結合される１つ以上の有機部分を含有することができる。本発明の抗体もしくは抗原結合フラグメントに結合される各有機部分は、独立して、親水性重合基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であってもよい。本明細書に使用されるような、用語「脂肪酸」は、モノカルボン酸およびジカルボン酸を包含する。本明細書で使用されるような用語「親水性重合基」は、オクタン中よりも水中に可溶である有機ポリマーを指す。例えば、ポリリジンはオクタン中よりも水中に可溶である。かくして、ポリリジンの共有結合によって改変された抗体は本発明によって包含される。本発明の抗体を改変するために適当な親水性ポリマーは、直鎖でも分枝でもよく、そして例えば、ポリアルカングリコール（例えばＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧなど）、炭水化物（例えばデキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖など）、親水性アミノ酸のポリマー（例えば、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリアスパラギン酸など）、ポリアルカンオキシド（例えばポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシドなど）およびポリビニルピロリドンを含む。好ましくは、本発明の抗体を改変する親水性ポリマーは、別々の分子実体として分子量約８００〜約１５０，０００ダルトンを有する。例えば、ＰＥＧ5000およびＰＥＧ20，000（下付の文字はダルトンでのポリマーの平均分子量である）が使用できる。親水性ポリマー基は、１〜約６個のアルキル、脂肪酸もしくは脂肪酸エステル基により置換できる。脂肪酸もしくは脂肪酸エステル基により置換される親水性ポリマーは、適当な方法を用いて生成することができる。例えば、アミン基を含んでなるポリマーは、脂肪酸もしくは脂肪酸エステルのカルボキシレ−トに結合でき、そして脂肪酸もしくは脂肪酸エステルにおける活性化したカルボキシレ−ト（例えば、Ｎ，Ｎ，−カルボニルジイミダゾールにより活性化される）がポリマー上のヒドロキシル基に結合することができる。
【００８２】
本発明の抗体を改変するために適当な脂肪酸もしくは脂肪酸エステルは、飽和されても、または１つ以上の不飽和単位を有してもよい。本発明の抗体を改変するために適当である脂肪酸は、例えば、ｎ−ドデカノアート（Ｃ13，ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ14，ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ18，ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ20，アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ23，ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエート（Ｃ30）、ｎ−テトラアコンタノエート（Ｃ40）、シス−Δ９−オクタデカノエート（Ｃ18，オレエート）、全シス−Δ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ20，アラキドネート）、オクタン二酸。テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸などを含む。適当な脂肪酸エステルは、直鎖もしくは分枝低級アルキル基を含有するジカルボン酸のモノエステルを含む。低級アルキル基は、１〜約１２、好ましくは１〜約６個の炭素原子を含有してもよい。
【００８３】
改変したヒト抗体および抗原結合フラグメントは、適当な方法を用いて、例えば１種以上の改変剤（ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）と反応させることによって作成することができる。本明細書で使用される用語「改変剤」は、活性化基を含む適当な有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「活性化基」は、適当な条件下で、第２の化学基と反応でき、それによって改変剤と第２の化学基の間に共有結合を形成できる化学部分もしくは官能基である。例えば、アミン反応性活性化基は、求電子性基、例えばトシレート、メシレート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミヂルエステル（ＮＨＳ）などを含む。チオールと反応できる活性化基は、例えば、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５−チオ−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などを含む。アルデヒド官能基は、アミン−もしくはヒドラジド−含有分子に結合することができ、そしてアジド基は、三価亜リン酸基と反応してホスホロアミデートもしくはホスホロイミド結合を形成できる。分子中に活性化基を導入する適当な方法は、当該技術分野において既知である（参照、例えばＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ ｇｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６））。活性化基は、有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接に、またはリンカー部分、例えば、１つ以上の炭素原子が酸素、窒素もしくは硫黄のようなヘテロ原子によって置換されてもよい二価のＣ1−Ｃ12基をとおして結合することができる。適当なリンカー部分は、例えば、テトラエチレングリコール、−（ＣＨ2）3−，−ＮＨ−（ＣＨ2）6−ＮＨ−，−（ＣＨ2）3−ＮＨ−および−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ−ＮＨ−を含む。リンカー部分を含有する改変剤は、例えば、モノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えばモノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）を１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）と反応させて遊離アミノと脂肪酸カルボキシレートとの間にアミド結合を形成させることによって生成できる。Ｂｏｃ保護基は、前記その他のカルボキシレートに結合できる第１級アミンを露出させるためにトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）との処理によって生成物から除去できるか、または無水マレイン酸と反応させ、そして得られる生成物を環化して脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生成できる。（参照、例えば、Ｔｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，ＷＯ９２／１６２２１、この全ては引用によって本明細書に組み入れられている。）
本発明の改変抗体は、ヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントを改変剤と反応させることによって作成できる。例えば、有機部分は、アミン反応性改変剤、例えばＰＥＧのＮＨＳエステルを用いることによって非部位特異的方式で抗体に結合させることができる。また、改変ヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントは、抗体もしくは抗原結合フラグメントのジスルフィド結合（例えば、鎖内のジスルフィド結合）を還元することによって作成されてもよい。還元された抗体もしくは抗原結合フラグメントは、次に、チオール反応性改変剤と反応して本発明の改変抗体を生成する。本発明の抗体の特異的部位に結合される有機部分を含んでなる改変ヒト抗体および抗原結合フラグメントは、適当な方法、例えば逆タンパク質分解（Ｆｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３（１９９２）；Ｗｅｒｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７（１９９４）；Ｋｕｍａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７）；Ｉｔｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１）：５６−６８（１９９６）；Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６−４６３（１９９７））、およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ ｇｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６）に記述される方法を用いて作成されてもよい。
【００８４】
抗ＩＬ−１２Ｉｇ誘導タンパク質組成物に対する抗イディオタイプ抗体
モノクローナルまたはキメラ抗ＩＬ−１２抗体に加えて、本発明は、また、そのような本発明の抗体に特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体に対向される。抗Ｉｄ抗体は、一般にその他の抗体の抗原結合領域に関わる独特な決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、Ｉｄ抗体の起源と同じ種および遺伝子型の動物（例えばマウス株）を、抗体またはそのＣＤＲ含有領域により免疫化することによって作成できる。免疫化した動物は、免疫化抗体のイディオタイプ決定基を認識し、そして応答でき、そして抗Ｉｄ抗体を産生する。また、抗Ｉｄ抗体は、まだその他の動物において免疫応答を惹起する「免疫原」として使用されてもよく、そしていわゆる抗−抗Ｉｄ抗体を産生する。
【００８５】
抗ＩＬ−１２Ｉｇ由来タンパク質組成物
また本発明は、天然に存在しない組成物、混合物もしくは形態において提供される、本明細書に記述され、そして／または当該技術分野において既知であるように、それの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つまたはそれ以上の抗ＩＬ−１２抗体を含んでなる少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物を提供する。そのような組成物は、配列番号：１，２，３，４，５，６，７もしくは８の隣接するアミノ酸の７０−１００％からなる群から選ばれる抗ＩＬ−１２抗体アミノ酸配列、またはその特定フラグメント、ドメインもしくは改変体の、少なくとも１つもしくは２つの全長、Ｃ−および／またはＮ末端の欠落した改変体、ドメイン、フラグメントもしくは特定改変体を含んでなる天然に存在しない組成物を含有する。好適な抗ＩＬ−１２由来タンパク質、フラグメントもしくは改変体組成物は、配列番号：１，２，３，４，５，６の７０−１００％の抗ＩＬ−１２抗体配列、またはその特定フラグメント、ドメインもしくは改変体の、少なくとも１つのＣＤＲ含有部分としての少なくとも１つもしくは２つの全長、フラグメント。ドメインもしくは改変体を含む。さらなる好適な組成物は、配列番号：１，２，３，４，５，６の７０−１００％、または特定フラグメント、ドメインもしくはその改変体の、少なくとも１つの４０−９９％を含有する。そのような組成物のパーセンテージは、当該技術分野において既知であり、そして／または本明細書に記述されるように、重量、容量、濃度、質量モル濃度、または液体もしくは乾物溶液、混合液、懸濁液、乳濁液もしくはコロイドとしての質量モル濃度による。
【００８６】
さらに、本発明の抗ＩＬ−１２抗体組成物は、そのような緩和、処置もしくは治療の必要な細胞、組織、臓器、動物もしくは患者に対する少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を含んでなるすべての適当な、そして有効な量の組成物もしくは製薬組成物の少なくとも１つを含有し、場合によってはさらに、少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば、限定されるものではないが、ＴＮＦ抗体フラグメント、ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、その融合タンパク質、または小分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ性（例えば、メトトレキセート、アウラノフィン、アウロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、チオマレイン酸金ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサルジン）、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局部麻酔薬、神経筋遮断薬、抗微生物剤（例えば、アミノグリコシド、抗カビ剤、抗寄生虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム、セファロスポリン、フルオルキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルフォンアミド、テトラサイクリン、その他の抗微生物剤）、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養剤、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、鎮吐薬、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝血薬、エリトロポイエチン（例えば、エポエチンα）、フィルグラスチン（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、ノイポゲン）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、ロイキン）、免疫感作薬、免疫グロブリン、免疫抑制剤（例えば、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋麻酔薬、アルキル化剤、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性医薬品、抗うつ薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経興奮薬、刺激薬、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼα（プルモザイム）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選ばれる少なくとも１つを含有することができる。そのようなサイトカインの非限定例は、限定されるものではないが、ＩＬ−１〜ＩＬ−２３のいずれをも含む。適当な用量は当該技術分野において周知である。参照、例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２００）；ＰＤＲ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ２０００，Ｄｅｌｕｘｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００）、これらの各々は引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００８７】
また、そのような抗がんもしくは抗感染薬は、本発明の少なくとも１つの抗体と組み合わされ、結合され、同時製剤化または同時投与される毒素分子を含む。毒素は、場合によっては、病変細胞もしくは組織を選択的に殺傷するために働くことができる。病変細胞は、がんもしくは他の細胞であってもよい。そのような毒素は、限定されるものではないが、例えば、リシン、ジフテリア毒素、蛇毒または細菌毒素の少なくとも１つから選ばれる、毒素の少なくとも１つの機能的細胞毒性ドメインを含んでなる、精製もしくは組み換え毒素もしくは毒素フラグメントであってもよい。また、用語毒素は、死をもたらすことがある毒素ショックを含む、ヒトおよび他の哺乳類においてあらゆる病状を惹起するかもしれないすべての天然に存在する、変異または組み換えの細菌もしくはウイルスによって生産されるエンドトキシンおよびエキソトキシンの両方を含む。そのような毒素は、限定されるものではないが、エンテロトキシン生成Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）熱不安定性エンテロトキシン（ＬＴ）、熱安定性エンテロトキシン（ＳＴ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）細胞毒、エアロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）エンテロトキシン、毒素ショック症候群トキシン−１（ＴＳＳＴ−１）、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、Ｂ（ＳＥＢ）もしくはＣ（ＳＥＣ）、連鎖球菌エンテロトキシンなどを含んでもよい。そのような細菌は、限定されるものではないが、エンテロトキシン生成Ｅ．コリ（ＥＴＥＣ）、腸出血性Ｅ．コリ（例えば、血清型０１５７：Ｈ７の菌株）の種、スタフィロコッカス種（例えば、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・ピオゲネス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ））、シゲラ種（例えば、シゲラ・ディゼンテリア（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、シゲラ・フレキセネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ボイディイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ）およびシゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ））、サルモネラ種（例えば、サルモネラ・ティフィ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）、サルモネラ・コレラ−スイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａ−ｓｕｉｓ）、サルモネラ・エンテリチヂス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ））、クロストリジウム種（例えば、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム・ジフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム・ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、カンフロバクター種（例えば、カンフロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、カンフロバクター・フェタス（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓ））、ヘリオバクター種（例えば、ヘリオバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ））、エアロモナス種（例えば、エアロモナス・ソブリア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ）、エアロモナス・ヒドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、エアロモナス・カビアエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ））、プレイソモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｉｓｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ），イエルジナ・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、ビブリオ種（例えば、ビブリオ・コレラエ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ビブリオ・パラヘモリチカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、クレブジーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、シュードモナス・エルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、および連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）の菌株を含む。参照、例えば、Ｓｔｅｉｎ，ｅｄ．，ＩＮＴＥＲＮＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ，３ｒｄ ｅｄ．，ｐｐ１−１３，Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｂｏｓｔｏｎ，（１９９０）；Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２ｄ．Ｅｄ．，ｐｐ２３９−２５４，Ｐｌｅｎｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９１）；Ｍａｎｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｔａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，３ｄ．Ｅｄ．，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０）；Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ，ｅｄｓ．，ＴＨｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｎｕａｌ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，１９９２；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７６：１２１−１３４（１９９１）；Ｍａｒｒａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：７０５−７１１（１９９０）、これらの引用文献の内容は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【００８８】
さらに、本発明の抗ＩＬ−１２抗体化合物、組成物もしくは組み合わせ物は、すべての適当な補助剤、例えば限定されるものではないが、希釈剤、結合剤、安定剤、バッファー、塩類、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなどの少なくとも１つを含有してもよい。製薬的に許容しうる補助剤が好適である。そのような無菌溶液の非限定例および製造方法は、当該技術分野、例えば限定されるものではないが、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）１９９０において周知である。当該技術分野において周知であり、また本明細書に記述されるように、抗ＩＬ−１２抗体、フラグメントもしくは改変組成物の投与方式、溶解度および／または安定性に適している製薬的に許容しうるキャリヤーは、日常的に選択することができる。
【００８９】
本組成物において有用な製薬賦形剤および添加物は、限定されるものではないが、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質および炭水化物（例えば、単糖類、二、三、四およびオリゴ糖類を含む糖類；誘導糖、例えばアルヂトール、アルドン酸、エステル化糖など；および多糖類または糖ポリマー）を含み、これらは、単独に、または単独もしくは組み合わせて含有する組み合わせて物中に１−９９．９９重量％または容量％存在してもよい。代表的なタンパク質賦形剤は、血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組み換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどを含む。代表的なアミノ酸／抗体成分、これらはまた緩衝能力において機能できるが、これらは、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテーム、などを含む。１つの好適なアミノ酸はグリシンである。
【００９０】
本発明における使用に適当な炭水化物賦形剤は、例えば、単糖類、例えばフルクトース、マルトース、がラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなど；二糖類、例えばラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなど；多糖類、例えばラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、澱粉など；およびアルジトール、例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどを含む。本発明における使用のために好適な炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロースおよびラフィノースである。
【００９１】
また、抗ＩＬ−１２抗体組成物は、バッファーまたはｐＨ調整剤を含んでもよく；典型的なバッファーは有機酸もしくは塩基から調製される塩である。代表的なバッファーは、有機酸塩、例えばクエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸もしくはフタル酸；トリス、トロメタミン塩酸もしくはリン酸バッファーを含む。本組成物における使用のための好適なバッファーは、クエン酸塩のような有機酸塩である。
【００９２】
さらに、本発明の抗ＩＬ−１２抗体組成物は、高分子賦形剤／添加物、例えばポリビニルピロリドン、フィコール（重合糖）、デキストレート（例えば、シクロデキストリン、例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、芳香剤、抗微生物剤、甘味剤、抗酸化剤、界面活性剤（例えば、ポリソルベート、例えば「ＴＷＥＥＮ２０」および「ＴＷＥＥＮ８０」）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）およびキレート剤（例えばＥＤＴＡ）を含んでもよい。
【００９３】
本発明による抗ＩＬ−１２抗体、部分もしくは改変体組成物における使用のために適当なこれらおよびさらなる既知の製薬賦形剤および／または添加物は、当該技術分野、例えば、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）およびｔｈｅ ”Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，５２ｔｈ ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ（１９９８）において列挙されているように既知であり、これらの開示は引用によって本明細書に完全に組み入れられている。好適なキャリヤーもしくは賦形材料は炭水化物（例えば、糖類およびアルジトール）およびバッファー（例えばクエン酸塩）もしくは高分子剤である。
【００９４】
製剤
先に指摘したように、本発明は、安定な製剤を提供するが、これは、製薬的に許容しうる製剤中に少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を含んでなる、好ましくは、食塩水もしくは選ばれた塩を含むリン酸バッファー、ならびに医薬もしくは獣医薬用途のために適当な保存剤ならびに多用途保存製剤を含有する保存溶液および製剤である。保存製剤は、水性希釈剤中、少なくとも１つの既知であるか、または場合によっては、少なくとも１つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば６水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物から選ばれる保存剤を含有する。当該技術分野において既知であるように、０．００１−５％またはその中のすべての範囲もしくは値、例えば限定されるものではないが、０．００１，０．００３，０．００５，０．００９，０．０１，０．０２．０．０３，０．０５，０．０９，０．１，０．２，０．３，０．４，０．５，０．６，０．７，０．８，０．９，１．０，１．１，１．２，１．３，１．４，１．５，１．６，１．７，１．８，１．９，２．０，２．１，２．２，２．３，２．４，２．５，２．６，２．７，２．８，２．９，３．０，３．１，３．２，３．３，３．４，３．５，３．６，３．７，３．８，３．９，４．０，４．３，４．５，４．６，４．７，４．８，４．９またはその中のすべての範囲もしくは値のような、いかなる適当な濃度または混合液も使用することができる。非限定の例は、保存剤無添加、０．１−２％ｍ−クレゾール（例えば、０．２，０．３，０．４，０．５，０．９，１．０％）、０．１−３％ベンジルアルコール（例えば、０．５，０．９，１．１，１．５，１．９，２．０，２．５％）、０．００１−０．５％チメロサール（例えば、０．００５，０．０１）、０．００１−２．０％フェノール（例えば、０．０５，０．２５，０．２８，０．５，０．９，１．０％）、０．０００５−１．０％アルキルパラベン（例えば、０．０００７５，０．０００９，０．００１，０．００２，０．００５，０．００７５，０．００９，０．０１，０．０２，０．０５，０．０７５，０．０９，０．１，０．２，０．３，０．５，０．７５，０．９，１．０％）などを含む。
【００９５】
先に指摘したように、本発明は、包装材および場合によっては希釈剤中に、前記バッファーおよび／または保存剤とともに少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の溶液を含んでなる少なくとも１つのバイアルを含んでなる、製品を提供するが、この場合、該包装材は、そのような溶液が、期間１，２，３，４，５，６，９，１２，１８，２０，２４，３０，３６，４０，４８，５４，６０，６６，７２時間またはそれ以上にわたって維持できることを示すラベルを含有する。さらに、本発明は、包装材、凍結乾燥した少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を含有する第１のバイアル、および前記バッファーもしくは保存剤の水性希釈剤を含有する第２のバイアルを含んでなる製品を含むが、この場合、該包装材は、水性希釈剤中に少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を戻して、期間２４時間またはそれ以上にわたって維持できる溶液を形成するよう患者に指示するラベルを含有する。
【００９６】
本発明により使用される少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体は、本明細書に記述されているかまたは当該技術分野において既知であるように、哺乳類細胞もしくはトランスジェニック調製物からを含む、組み換え手段によって作成されてもよく、または他の生物起源から精製されてもよい。
【００９７】
本発明の生産物における少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の範囲は、湿潤／乾燥系であれば、濃度約１．０μｇ／ｍｌ〜約１０００ｍｇ／ｍｌを再構成により得る量を含むが、より低いおよびより高い濃度が操作可能であり、そして意図する送達媒体に依存し、例えば、液状製剤は、経皮パッチ、肺、経粘膜、または浸透もしくはミクロポンプ法とは異なる。
【００９８】
好ましくは、水性希釈剤は、場合によってはさらに、製薬的に許容しうる保存剤を含む。好適な保存剤は、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物からなる群から選ばれる保存剤を含む。製剤において使用される保存剤の濃度は、抗微生物効果を得るのに十分な濃度である。そのような濃度は選ばれる保存剤に依存し、そして当業者によって容易に決定される。
【００９９】
他の賦形剤、例えば、等張剤、バッファー、抗酸化剤、保存増強剤は、場合によってはそして好ましくは、希釈剤に添加することができる。等張剤、例えばグリセリンは、通常、既知濃度において使用される。生理学的に許容しうるバッファーは、好ましくは、改良されたｐＨ調節を与えるために添加される。製剤は、広範囲のｐＨ、例えば約ｐＨ４〜約ｐＨ１０、そして好適な範囲ｐＨ５〜ｐＨ９、もっとも好適な範囲約６．０〜約８．０にわたることができる。好ましくは、本発明の製剤は、ｐＨ約６．８〜約７．８を有する。好適なバッファーは、リン酸バッファー、もっとも好ましくは、リン酸ナトリウム、特にはリン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）を含む。
【０１００】
他の添加物、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８（ポリオキシエチレン ポリオキシプロピレン。ブロックコポリマー）およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）または非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート２０もしくは８０またはポロキサマー１８４もしくは１８８、ＰｌｕｒｏｎｉｃRｐｏｌｙｌｓ、他のブロックコポリマーのような製薬的に許容しうる可溶化剤、およびＥＤＴＡおよびＥＧＴＡのようなキレーターが、場合によっては凝集を低下させるために製剤または組成物に添加されてもよい。これらの添加物は、ポンプもしくはプラスチック容器が製剤を投与するために使用される場合には、特に有用である。製薬的に許容しうる界面活性剤の存在は、タンパク質の凝集する傾向を軽減する。
【０１０１】
本発明の製剤は、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体およびフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物からなる群から選ばれる保存剤を、水性希釈剤中で混合することを含む工程によって作成することができる。少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体および保存剤を水性希釈剤中で混合することは、慣用の溶解および混合操作を用いて実施される。適当な製剤を作成するために、例えば、バッファー溶液中測定された量の少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体が、所望の濃度においてタンパク質および保存剤を与えるのに十分な量において、バッファー溶液中で所望の保存剤と合わされる。この方法の変法は、当業者によって理解できるであろう。例えば、さらなる添加物が使用されても、成分が添加される順序、製剤が作成される温度およびｐＨは、使用される投与の濃度および手段について最適化できるすべてのファクターである。
【０１０２】
特許請求される製剤は、澄明溶液として、あるいは水性希釈剤中、水、保存剤および／または賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）、好ましくはリン酸バッファーおよび／または生理食塩水および選ばれた塩を含有する第２のバイアルを用いて再構成される凍結乾燥した少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体のバイアルを含んでなる２本のバイアルとして患者に提供することができる。単一の溶液バイアルでも、また再構成を要する２本のバイアルであっても、いずれも複数回反復使用することができ、そして１回もしくは複数回の患者の治療周期のために満足させることができ、かくして、現在得られるよりも一層便利な治療処方を提供できる。
【０１０３】
本特許請求される製品は、２４時間近く、またはそれ以上の期間にわたって投与のために有用である。したがって、本特許請求される製品は、患者に対して有意な恩恵を与える。本発明の製剤は、場合によっては、温度約２〜約４０℃において安全に貯蔵でき、そして長期間タンパク質の生物学的活性を保持できるので、溶液が期間６，１２，１８，２４，３６，４８，７２もしくは９６時間またはそれ以上にわたって維持でき、そして／または使用できることを示す包装ラベルを可能にする。
【０１０４】
本発明における少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の溶液は、水性希釈剤中で少なくとも１つの抗体を混合することを含む方法によって作成できる。混合は、慣用の溶解および混合操作を用いて実施される。適当な希釈剤を作成するために、例えば、水もしくはバッファー中測定量の少なくとも１つの抗体が、所望の濃度においてタンパク質および場合によっては保存剤もしくはバッファーを与えるのに十分な量において合わされる。この方法の変法は、当業者によって理解できるであろう。例えば、さらなる添加物が使用されても、成分が添加される順序、製剤が作成される温度およびｐＨは、使用される投与の濃度および手段について最適化できるすべてのファクターである。
【０１０５】
特許請求される製品は、澄明溶液として、あるいは水性希釈剤を含有する第２のバイアルを用いて再構成される凍結乾燥した少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体のバイアルを含む２本のバイアルとして、患者に提供することができる。単一の溶液バイアルでも、または再構成を要する２本のバイアルであっても、いずれも複数回反復使用することができ、そして１回もしくは複数回の患者の治療周期のために満足させることができ、かくして、現在得られるよりも一層便利な治療処方を提供できる。
【０１０６】
特許請求される製品は、澄明溶液として、あるいは水性希釈剤を含有する第２のバイアルを用いて再構成される凍結乾燥した少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体のバイアルを含む２本のバイアルとして、薬局、診療所、または他のそのような団体および施設に対して提供することによって、患者に直接提供することができる。この場合の澄明溶液は、サイズが１リットルまでであっても、またはそれより大きくてもよく、大きな容器に提供し、これから少なくとも１つの抗体溶液のより少量部分が、より小さいバイアルに移すために１回もしくは複数回取り出され、そして薬局もしくは診療所によって使用者および／または患者に提供される。
【０１０７】
これらの単一バイアル系を含有する認知された用具は、溶液を送達するためのこれらのペンインジェクター用具、例えば、ＢＤ Ｐｅｎｓ，ＢＤ ＡｕｔｏｊｅｃｔｏｒR、ＨｕｍａｊｅｃｔR，ＮｏｖｏＰｅｎR ，Ｂ−ＤR Ｐｅｎ，ＡｕｔｏＰｅｎR，およびＯｐｔｉＰｅｎR，ＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎＰｅｎR，ＨｕｍａｔｒｏＰｅｎR，Ｒｅｃｏ−ＰｅｎR，Ｒｏｆｅｒｏｎ ＢｉｏｊｅｃｔｏｒR，ｉｊｅｃR，Ｊ−ｔｉｐ Ｎｅｅｄｌｅ−Ｆｒｅｅ ＩｎｊｅｃｔｏｒR，ＩｎｔｒａｊｅｃｔR，Ｍｅｄｉ−ｊｅｃｔRを含み、例えばＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｅｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ｗｗｗ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ）、Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ（Ｂｕｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，ｗｗｗ．ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ；Ｂｉｏｊｅｃｔ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，Ｏｒｅｇｏｎ（ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｃｔ．ｃｏｍ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗｅｓｔｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ（Ｐｅｔｅｒｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＫ，ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ−ｍｅｄｉｃａｌ．ｃｏｍ），Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ Ｃｏｒｐ（Ｍｉｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ｗｗｗ．ｍｅｄｉｊｅｃｔ．ｃｏｍ）によって作成されるかまたは開発されている。２本のバイアル系を含有する認知された用具は、再構成溶液を送達するためにカートリッジ中の凍結乾燥薬物を再構成するためのこれらのペンインジェクター系、例えばＨｕｍａｔｒｏＰｅｎRを含む。
【０１０８】
ここに特許請求される製品は包装材を含む。包装材は、規制当局によって要求される情報に加えて、製品が使用できる条件を提供する。本発明の包装材は、２本のバイアル、湿潤／乾燥、製品について、水性希釈剤中に少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を戻して溶液を形成し、そして期間２−２４時間またはそれ以上にわたって溶液を使用するよう患者への指示を提供する。単一のバイアル、溶液製品では、ラベルは、そのような溶液が期間２−２４時間またはそれ以上にわたって使用できることを示す。本特許請求される製品は、ヒト製薬製品用途のために有用である。
【０１０９】
本発明の製剤は、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体および選ばれたバッファー、好ましくは生理食塩水もしくは選ばれた塩を含有するリン酸バッファーを混合することを含む方法によって作成される。水性希釈剤中に少なくとも１つの抗体およびバッファーを混合することは、慣用の溶解および混合操作を用いて実施される。適当な製剤を作成するために、例えば、水もしくはバッファー中測定された量の少なくとも１つの抗体が、所望の濃度においてタンパク質およびバッファーを与えるのに十分な量において、水中で所望の緩衝剤とともに合わされる。この方法の変法は、当業者によって理解できるであろう。例えば、さらなる添加物が使用されても、成分が添加される順序、製剤が作成される温度およびｐＨは、使用される投与の濃度および手段について最適化できるすべてのファクターである。
【０１１０】
特許請求される安定なまたは保存される製剤は、澄明溶液として、あるいは水性希釈剤中に保存剤もしくはバッファーおよび賦形剤を含有する第２のバイアルを用いて再構成される凍結乾燥した少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体のバイアルを含む２本のバイアルとして、患者に提供することができる。単一溶液であっても再構成を要する２本のバイアルであっても、いずれも複数回反復使用することができ、そして１回もしくは複数回の患者の治療周期のために満足させることができ、かくして、現在得られるよりも一層便利な治療処方を提供できる。
【０１１１】
本明細書に記述される安定なまたは保存される製剤、または溶液のいずれかにおける少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体は、当該技術分野において周知であるような、ＳＣもしくはＩＭ注射；経皮、肺、経粘膜、移植、浸透ポンプ、カートリッジ、ミクロポンプ、または当業者によって評価される他の手段を含む、種々の送達方法を介して本発明により患者に投与することができる。
【０１１２】
治療適用
また、本発明は、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者における、下記の疾病を含む少なくとも１つの免疫関連疾患を緩和もしくは治療する方法を提供する：限定されるものではないが、少なくとも１つの、リウマチ様関節炎、若年性リウマチ様関節炎、全身性初期若年性リウマチ様関節炎、乾癬関節炎、強直性脊椎炎、胃潰瘍、血清陰性関節症、骨関節炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、全真性紅斑性狼瘡、抗リン脂質症候群、虹彩毛様体炎／葡萄膜炎／視神経炎、自然発生性肺繊維症、全身性脈管炎／ヴェグナー肉芽腫症、類肉腫症、睾丸炎／精管切断再生法、アレルギー性／アトピー性疾患、喘息、アトピー性鼻炎、湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、感覚過敏性肺炎、移植、臓器移植拒絶、移植片対宿主拒絶、全身性炎症性応答症候群、敗血症症候群、グラム陽性敗血症、グラム陰性敗血症、培養陰性敗血症、真菌敗血症、好中球減少症熱、尿性敗血症、髄膜炎菌血症、外傷／出血、火傷、電離線曝露、急性膵炎、成人呼吸困難症候群、類リウマチ関節炎、アルコール誘導性肝炎、慢性炎症病、類肉腫症、クローン氏病、鎌状赤血球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピー疾患、感覚過敏反応、アレルギー性鼻炎、枯草熱、多年性鼻炎、結膜炎、子宮内膜症、喘息、蕁麻疹、全身性アナフィラキシー、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小板減少症、すべての臓器もしくは組織の移植拒絶、腎移植拒絶、心臓移植拒絶、肝移植拒絶、膵臓移植拒絶、肺移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、皮膚同種移植拒絶、軟骨移植拒絶、骨移植拒絶、小腸移植拒絶、胎児胸腺移植拒絶、副甲状腺移植拒絶、すべての臓器もしくは組織の異種移植拒絶、同種移植拒絶、抗受容体感覚過敏反応、グレーブス病、レイノー病、Ｂ型インシュリン耐性糖尿病、喘息、重症性筋無力症、抗体媒介細胞障害、ＩＩＩ型感覚過敏反応、全身性紅斑性狼瘡、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経病、オルガノメガリー、内分泌病、モノクローナルガンモパシー、および皮膚交換症候群）、多発神経病、オルガノメガリー、内分泌病、モノクローナルガンモパシー、皮膚交換症候群、抗リン脂質症候群、天疱瘡、強皮症、混合結合組織疾患、自然発生性アジソン病、真性糖尿病、慢性活性肝炎、原発胆汁性肝硬変、白斑、脈管炎、ＭＩ心臓切開後症候群、ＩＶ型感覚過敏、接触性皮膚炎、感覚過敏性肺炎、同種移植拒絶、細胞内生物による肉芽種、薬物敏感性、代謝性／自然発生性疾患、ウィルソン病、血色素症、α−１−アンチトリプシン欠損、糖尿性網膜症、ハシモト甲状腺炎、骨粗鬆症、視床下部−下垂体−副腎軸評価、原発胆汁性肝硬変、甲状腺炎、脳脊髄炎、悪液質、嚢胞性繊維症、新生児慢性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、家族性食血細胞性リンパ組織球症、皮膚科学症状、乾癬、脱毛症、ネフローゼ症候群、ネフローゼ、糸球体性ネフローゼ、急性腎不全、血液透析、尿毒症、毒性、子癇前症、ｏｋｔ３療法、抗ｃｄ３療法、サイトカイン療法、化学療法、放射線療法（例えば、限定されるものではないが、無力症、尿毒症、悪液質などを含む）、慢性サリチル酸中毒および類するもの。参照、例えば、ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｎｕａｌ，１２ｔｈ−１７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎｓ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ（１９７２，１９７７，１９８２，１９８７，１９９２，１９９９），Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．（１９９８，２０００）、各々、引用によって完全に組み入れられている。
【０１１３】
また、本発明は、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者における下記の疾病を含む少なくとも１つの心臓血管病を緩和もしくは治療する方法を提供する：限定されるものではないが、
同時に、および／または後に、少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば、限定されるものではないが、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、その融合タンパク質、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬、（例えば、メトトレキセート、アウラノフィン、アウロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、チオマレイン酸金ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサルジン）、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局部麻酔薬、神経筋遮断薬、抗微生物剤（例えば、アミノグリコシド、抗カビ剤、抗寄生虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム、セファロスポリン、フルオルキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルフォンアミド、テトラサイクリン、その他の抗微生物剤）、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養剤、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、鎮吐薬、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝血薬、エリトロポイエチン（例えば、エポエチンα）、フィルグラスチン（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、ノイポゲン）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、ロイキン）、免疫感作薬、免疫グロブリン、免疫抑制剤（例えば、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋麻酔薬、アルキル化剤、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性医薬品、抗うつ薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経興奮薬、刺激薬、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼα（プルモザイム）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選ばれる少なくとも１つを
適当な用量は当該技術分野において周知である。参照、例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２００）；ＰＤＲ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ２０００，Ｄｅｌｕｘｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００）、これらの文献の各々は引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【０１１４】
本発明の組成物、組み合わせ療法、同時投与、用具および／または方法のために適当なＴＮＦアンタゴニスト（さらに本発明の少なくとも１つの抗体、特定部分およびその改変体を含有する）は、限定されるものではないが、抗ＴＮＦ抗体、その抗原結合フラグメント、およびＴＮＦに特異的に結合する受容体分子；ＴＮＦ合成、ＴＮＦ放出もしくは標的細胞へのその作用を妨害および／または抑制する化合物、例えばサリドマイド、テニダップ、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ペントキシフィリンおよびロリプラム）、Ａ２ｂアデノシン受容体アゴニストおよびＡ２ｂアデノシン受容体エンハンサー；ＴＮＦ受容体シグナリングを妨害および／または抑制する化合物、例えば、分裂促進因子活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼ阻害剤；膜ＴＮＦ切断を遮断および／または抑制する化合物、例えば金属プロテイナーゼ阻害剤；ＴＮＦ活性を遮断および／または抑制する化合物、例えばアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えばカプトプリル）；およびＴＮＦ生産および／または合成を遮断および／または抑制する化合物、例えばＭＡＰキナーゼ阻害剤を含む。
【０１１５】
本明細書で使用されるように、「腫瘍壊死因子抗体」、「ＴＮＦ抗体」、「ＴＮＦ抗体」、もしくはフラグメントおよび類するものは、イン・ビトロ、イン・サイチューおよび／または好ましくはイン・ビボでＴＮＦ活性を低下、遮断、抑制、撤廃もしくは干渉する。例えば、本発明の適当なＴＮＦヒト抗体は、ＴＮＦαを結合することができ、そして抗ＴＮＦ抗体、その抗原結合フラグメント、およびＴＮＦαに特異的に結合するその特定変異体もしくはドメインを含む。また、適当なＴＮＦ抗体もしくはフラグメントは、ＴＮＦ ＲＮＡ、ＤＮＡもしくはタンパク質合成、ＴＮＦ放出、ＴＮＦ受容体シグナリング、膜ＴＮＦ切断、ＴＮＦ活性、ＴＮＦ生産および／または合成を低下、遮断、撤廃、干渉、妨害および／または抑制することができる。
【０１１６】
キメラ抗体ｃＡ２は、Ａ２と呼ばれるマウス抗ヒトＴＮＦα ＩｇＧ１抗体を中和する高親和性の抗原結合可変部、およびヒトＩｇＧ１，κ免疫グロブリンの定常部からなる。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、同種異系抗体エフェクター機能を改良し、循環する血清半減期を増大し、そして抗体の免疫原性を低下させる。キメラ抗体ｃＡ２の結合活性およびエピトープ特異性は、マウス抗体Ａ２の可変部から得られる。特別の実施態様では、マウス抗体Ａ２の可変部をコードしている核酸の好適な起源はＡ２ハイブリドーマ細胞系である。
【０１１７】
キメラＡ２（ｃＡ２）は、両天然および組み換えヒトＴＮＦαの細胞障害効果を用量依存様式で中和する。キメラ抗体ｃＡ２および組み換えヒトＴＮＦαの結合アッセイから、キメラ抗体ｃＡ２の親和性定数は、１．０４ｘ１０10Ｍ-1であると計算される。競合阻害によるモノクローナル抗体特異性および親和性を決定する好適な方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ． ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９９２−２０００）；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４：７２−７９（１９８３）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７−２０００）；およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９２：５８９−６０１（１９８３）、これらの文献は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【０１１８】
特別の実施態様では、マウスモノクローナル抗体Ａ２は、ｃ１３４Ａと呼ばれる細胞系によって生産される。キメラ抗体ｃＡ２は、ｃ１６８Ａと呼ばれる細胞系によって生産される。
【０１１９】
本発明において使用できるモノクローナル抗ＴＮＦ抗体のさらなる例は、当該技術分野において記述されている（参照、例えば、米国特許第５，２３１，０２４号；Ｍｏｅｌｌｅｒ、Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ２（３）：１６２−１６９（１９９０）；米国特許出願第０７／９４３，８５２号（１９９２年９月１１日提出）；Ｒａｔｈｊｅｎ ｅｔ ａｌ．，国際特許公開ＷＯ９１／０２０７８（１９９１年２月２１日提出）；Ｒｕｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＰＯ特許公開第０ ２１８ ８６８号（１９８７年４月２２日提出）；Ｙｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，ＥＰＯ特許公開第０ ２８８ ０８８号（１９８８年１０月２６日提出）；Ｌｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１３７：８４７８５４（１９８６）；Ｍｅａｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：３０５−３１１（１９８７）；Ｆｅｎｄｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：３５９−３６９（１９８７）；Ｂｒｉｎｇｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ６：４８９−５０７（１９８７）；およびＨｉｒａｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．９６：５７−６２（１９８７）、これらの参考文献は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている）。
【０１２０】
ＴＮＦ受容体分子
本発明において有用な好適なＴＮＦ受容体分子は、高親和性によりＴＮＦを結合し（参照、例えば、Ｆｅｌｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，国際特許公開ＷＯ９２／０７０７６（１９９２年４月３０日公開）；Ｓｃｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６１：３６１−３７０（１９９０）；およびＬｏｅｔｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６１：３５１−３５９（１９９０）、これらの参考文献は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている）、そして場合によっては低い免疫原性を保持する受容体分子である。特に、５５ｋＤａ（ｐ５５ＴＮＦ−Ｒ）および７５ｋＤａ（ｐ７５ＴＮＦ−Ｒ）ＴＮＦ細胞表面受容体は本発明において有用である。受容体もしくはその機能性部分の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含有するこれらの受容体の末端切断型（参照、例えば、Ｃｏｒｃｏｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２３：８３１−８４０（１９９４））もまた本発明において有用である。ＥＣＤを含有するＴＮＦ受容体の末端切断型は、３０ｋＤａおよび４０ｋＤａＴＮＦ抑制性結合タンパク質として尿および血清中に検出されている（Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１５３１−１５３６（１９９０））。ＴＮＦ受容体多量体分子およびＴＮＦイムノレセプター融合分子、およびその誘導体およびフラグメントもしくは部分は、本発明の方法および組成物において有用であるＴＮＦ受容体分子のさらなる例である。本発明において使用できるＴＮＦ受容体分子は、症候の優れた緩和と低い毒性について良好である、長期間の患者の治療能力を特徴とする。低い免疫原性および／または高親和性、ならびに他の未特定の性質が、達成される治療成績に貢献できる。
【０１２１】
本発明において有用なＴＮＦ受容体多量体分子は、１つ以上のポリペプチドリンカーもしくは他の非ペプチドリンカー、例えポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介して結合される２つ以上のＴＮＦ受容体のＥＣＤの全部もしくは機能性部分を含有する。さらに、多量体分子は、多量体分子の発現を指示する分泌タンパク質のシグナルペプチドを含有することができる。これらの多量体分子およびそれらの生産方法は、米国特許第０８／４３７，５３３号（１９９５年５月９日提出）に記述されており、この内容は、引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【０１２２】
本発明の方法および組成物において有用なＴＮＦイムノレセプター融合分子は、１つ以上の免疫グロブリン分子の少なくとも１つの部分および１つ以上のＴＮＦ受容体の全部もしくは機能性部分を含有する。これらのイムノレセプター融合分子は、単量体、またはヘテロもしくはホモ多量体として集合できる。また、イムノレセプター融合分子は一価もしくは多価であってもよい。そのようなＴＮＦイムノレセプター融合分子の例は、ＴＮＦレセプター／ＩｇＧ融合タンパク質である。ＴＮＦイムノレセプター融合分子およびその生産方法は、当該技術分野において記述されている（Ｌｅｓｓｌａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２８８３−２８８６（１９９１）；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１）；Ｐｅｐｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３−１４８９（１９９１）；Ｋｏｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２１５−２１９（１９９４）；Ｂｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ６（６）：６１６−６２３（１９９４）；Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２０４０−２０４８（１９９４）；Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，４４７，８５１号および米国特許出願第０８／４４２，１３３号（１９９５年５月１６日提出）、これらの参考文献の各々は引用によって本明細書に完全に組み入れられている）。また、イムノレセプター融合分子の生産方法は、Ｃａｐｏｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，１１６，９６４号；Ｃａｐｏｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，２２５，５３８号；およびＣａｐｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５２５−５３１（１９８９）において見いだされ、これらの参考文献は引用によって本明細書に完全に組み入れられている
ＴＮＦ受容体分子の機能的等価物、誘導体、フラグメントもしくは領域は、ＴＮＦ受容体分子の部分、またはＴＮＦ受容体分子をコードしているＴＮＦ受容体分子塩基配列の部分を指し、これらは、本発明において使用できる機能的に類似のＴＮＦ受容体分子にとって十分なサイズおよび配列を有する（例えば、高親和性によりＴＮＦを結合し、そして低い免疫原性を有する）。また、ＴＮＦ受容体分子の機能的等価物は、本発明において使用できるＴＮＦ受容体分子に機能的に類似する改変ＴＮＦ受容体分子を含む（例えば、高親和性によりＴＮＦを結合し、そして低い免疫原性を有する）。例えば、ＴＮＦ受容体分子の機能的等価物は、「サイレント」コドンまたは１つ以上のアミノ酸置換、欠失もしくは付加を含有できる（例えば、１つのアミノ酸のその他のアミノ酸への置換；または同じか異なる疎水性アミノ酸をコードする１つのコドンの、疎水性アミノ酸をコードするその他のコドンへの置換）。参照、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７−２０００）．
サイトカインはすべての既知サイトカインを含む。参照、例えば、ｗｗｗ．ｃｏｐｅｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｃｏｍ．サイトカインアンタゴニストは、限定されるものではないが、すべての抗体、フラグメントもしくは模倣物、すべての可溶性受容体、フラグメントもしくは模倣物、すべての低分子アンタゴニスト、またはすべてのその組み合わせ物を含む。
【０１２３】
治療適用
本発明のすべての方法は、そのような緩和、処置もしくは治療を必要とする細胞、組織、臓器、動物もしくは患者に対して少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を含んでなる組成物もしくは製薬組成物の有効量を投与することを含む、ＩＬ−１２媒介疾患を治療する方法を含んでもよい。そのような方法は、場合によってはさらに、そのような免疫疾患を治療するための同時投与または組み合わせ療法を含んでもよく、この場合、該少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体、特定部分もしくはその改変体の投与は、さらに、少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば、限定されるものではないが、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、その融合タンパク質、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬、（例えば、メトトレキセート、アウラノフィン、アウロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、チオマレイン酸金ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサルジン）、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局部麻酔薬、神経筋遮断薬、抗微生物剤（例えば、アミノグリコシド、抗カビ剤、抗寄生虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム、セファロスポリン、フルオルキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルフォンアミド、テトラサイクリン、その他の抗微生物剤）、抗乾癬薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養剤、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、鎮吐薬、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝血薬、エリトロポイエチン（例えば、エポエチンα）、フィルグラスチン（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、ノイポゲン）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、ロイキン）、免疫感作薬、免疫グロブリン、免疫抑制剤（例えば、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋麻酔薬、アルキル化剤、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性医薬品、抗うつ薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交感神経興奮薬、刺激薬、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼα（プルモザイム）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選ばれる少なくとも１つを、前に、同時に、および／または後に、投与することを含む。
【０１２４】
典型的には、病的状態の処置は、組成物中に含有される特定の活性に応じて、平均して、１用量について患者の１ｋｇ当たり少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を範囲少なくとも約０．０１〜５００ｍｇ、そして好ましくは、１回もしくは複数回投与について患者の１ｋｇ当たり少なくとも約０．１〜１００ｍｇ抗体を合計する、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物の有効量もしくは用量を投与することによって実施される。あるいはまた、有効な血清濃度は、１回もしくは複数回投与について血清濃度０．１−５０００μｇ／ｍｌを含んでもよい。適当な用量は、医師には既知であり、そしてもちろん、特定の疾病状況、投与される組成物の比活性および治療を受けている特定の患者に依存するであろう。ある例では、所望の治療量を達成するためには、反復投与を与えることが必要かも知れない、すなわち、個々の投与が所望の１日の用量もしくは効果が達成されるまで繰り返される場合の、特定の追跡もしくは計量される用量の反復個別投与。
【０１２５】
好適な用量は、場合によっては、０．１，０．２，０．３，０．４，０．５，０．６，０．７，０．８，０．９，１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，３１，３２，３３，３４，３５，３６，３７，３８，３９，４０，４１，４２，４３，４４，４５，４６，４７，４８，４９，５０，５１，５２，５３，５４，５５，５６，５７，５８，５９，６０，６１，６２，６３，６４，６５，６６，６７，６８，６９，７０，７１，７２，７３，７４，７５，７６，７７，７８，７９，８０，８１，８２，８３，８４，８５，８６，８７，８８，８９，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９および／または１００−５００ｍｇ／ｋｇ／投与、またはそのすべての範囲、値もしくは分数を含んでもよく、あるいは１回もしくは複数回投与について血清濃度０．１，０．５，０．９，１．０，１．１，１．２，１．５，１．９，２．０，２．５，２．９，３．０，３．５，３．９，４．０，４．５，４．９，５．０，５．５，５．９，６．０，６．５，６．９，７．０，７．５，７．９，８．０，８．５，８．９，９．０，９．５，９．９，１０，１０．５，１０．９，１１，１１．５，１１．９，１２．０，１２．５，１２．９，１３．０，１３．５，１３．９，１４．０，１４．５，１４．９，１５，１５．５，１５．９，１６，１６．５，１６．９，１７，１７．５，１７．９，１８，１８．５，１８．９，１９，１９．５，１９．９，２０，２０．５，２０．９，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，３５，４０，４５，５０，５５，６０，６５，７０，７５，８０，８５，９０，９６，１００，２００，３００，４００，５００，６００，７００，８００，９００，１０００，１５００，２０００，２５００，３０００，３５００，４０００，４５００，および／または５０００μｇ／ｍｌ、またはそのすべての範囲、値もしくは分数を含んでもよい。
【０１２６】
あるいはまた、投与される用量は、既知のファクター、例えば、特定の薬剤の薬物動力学特性、およびその投与様式と経路；レシピエントの健康および体重；症候の性質および程度、同時に行われている治療の種類、治療頻度、および所望の効果に応じて変えることができる。通常は、有効成分の用量は、体重１ｋｇ当たり約０．１〜１００ｍｇである。普通には、１投与についてまたは徐放形態において１ｋｇ当たり０．１〜５０、好ましくは０．１〜１０ｍｇが所望の成績を得るのに有効である。
【０１２７】
非限定的例として、ヒトもしくは動物の治療は、本発明の少なくとも１つの抗体０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．５，０．９，１．０，１．１，１．５，２，３．４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，４０，４５，５０，６０，７０，８０，９０もしくは１００ｍｇ／ｋｇ／１日の、１回もしくは周期用量として、１，２，３．４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，３１，３２，３３，３４，３５，３６，３７，３８，３９，もしくは４０日目の少なくとも１日において、あるいは、その代わりにまたは追加的に、１，２，３．４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，３１，３２，３３，３４，３５，３６，３７，３８，３９，４０，４１，４２，４３，４４，４５，４６，４７，４８，４９，５０，５１，もしくは５２週目の少なくとも１週において、あるいは、その代わりにまたは追加的に、１，２，３．４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，もしくは２０年目の少なくとも１年に、あるいはそのすべての組み合わせにおいて、単回、注入もしくは反復用量を用いて提供することができる。
【０１２８】
内部投与のために適当な用量形態（組成物）は、一般に、１単位もしくは１容器当たり有効成分約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇを含有する。これらの製薬組成物では、有効成分は、通常、組成物の総重量に基づいて約０．５−９９．９９９重量％の量において存在することができる。
【０１２９】
非経口投与では、抗体は、溶液、懸濁液、乳濁液または組み合わせの凍結乾燥粉末として製剤化されるか、または製薬的に許容しうる非経口用媒質とともに、別々に提供されてもよい。そのような媒質の例は、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストローズ溶液および１−１０％ヒト血清アルブミンである。リポソームおよび非水性媒質、例えば不揮発油もまた使用できる。媒質または凍結乾燥粉末は、等張性（例えば塩化ナトリウム、マンニトール）および化学的安定性（例えばバッファーおよび保存剤）を維持する添加物を含有してもよい。製剤は、既知または適当な技術によって無菌化される。
【０１３０】
適当な製薬キャリヤーは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌ，ａ ｓｔａｎｄａｒｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔｅｘｔ ｉｎ ｔｈｉｓ ｆｉｅｌｄの最新版において記述されている。
【０１３１】
その他の投与
多くの既知の、そして開発された方式が、本発明による少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の製薬的に有効な量を投与するために、本発明にしたがって使用することができる。肺投与が次の記述において使用されるが、他の投与方式が適当な成績を有して本発明にしたがって使用できる。
【０１３２】
本発明のＩＬ−１２抗体は、吸入または本明細書に記述されるかもしくは当該技術分野において既知の他の方式によって、投与に適当なすべての種々の用具および方法を用いて、溶液、乳濁液、コロイドもしくは懸濁液として、または乾燥粉末としてキャリヤーにおいて送達することができる。
【０１３３】
非経口製剤および投与
非経口投与のための製剤は、共通の賦形剤として無菌水もしくは生理食塩水、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレンなどを含有できる。注射のための水性もしくは油性懸濁剤は、既知の方法にしたがって、適当な乳化剤もしくは湿潤剤および懸濁化剤を用いることによって調製することができる。注射のための薬剤は、無毒の、非経口投与可能な希釈剤、例えば水溶液または溶媒中の無菌の注射可能な溶液もしくは懸濁液であってもよい。使用できる媒質もしくは溶媒として、水、リンゲル液、等張生理食塩水などが可能である；通常の溶媒もしくは懸濁用溶媒として、無菌の不揮発性油が使用できる。これらの目的のために、いかなる種類の不揮発性油および脂肪酸も使用でき、これらは、天然もしくは合成もしくは半合成の脂肪油もしくは脂肪酸；天然もしくは合成もしくは半合成のモノ−もしくはジ−もしくはトリグリセリドを含む。非経口投与は当該技術分野において既知であり、そして限定されるものではないが、慣用の注射手段、米国特許第５，８５１，１９８号に記述されるようなガス圧無針注射用具および米国特許第５，８３９，４４６号に記述されるような比較的大きいパーフォレーター用具を含み、これらの特許は引用によって本明細書に完全に組み入れられている。
【０１３４】
その他の送達
さらに、本発明は、非経口的、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腹腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸内、子宮内、膀胱内、丸薬、膣、肛門、頬、舌下、鼻内もしくは経皮手段による、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の投与に関する。少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物は、特に液剤もしくは懸濁剤の形態において非経口（皮下、筋肉内もしくは静脈内）またはすべての他の投与での使用のために；特に半固形形態、例えば限定されるものではないが、クリーム剤および坐剤において膣もしくは肛門投与の使用のために；例えば限定されるものではないが、錠剤もしくはカプセル剤の形態において頬もしくは舌下投与のために；または鼻内的、例えば限定されるものではないが、散剤、鼻滴下剤もしくはエアゾル剤またはある種の薬剤の形態のために；または経皮的、例えば限定されるものではないが、ゲル剤、軟膏剤、ローション剤、懸濁剤、または皮膚構造を改変したり、経皮パッチにおける薬物濃度増加するための化学的促進剤、例えばジメチルスルホキシドを含有する（Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ”Ｄｒｕｇ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ”；Ｄ．Ｓ．，Ｅｄｓ．，ｐｐ５９−９０（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９４，これは引用によって本明細書に完全に組み入れられている）か、または皮膚へのタンパク質およびペプチドを含有する製剤の適用を可能にする酸化剤を含有する（ＷＯ９８／５３８４７）、パッチ送達システム、または一過性移送経路、例えばエレクトロポレーションを作成するため、または皮膚をとおして荷電薬物の移動、例えばイオントホレシスを増加するための電場の適用、または超音波の適用、例えばソノホレシス（米国特許第４，３０９，９８９号および同第４，７６７，４０２号）（上記出版物および特許は引用によって本明細書に完全に組み入れられている）のための使用のために作成することができる。
【０１３５】
肺／鼻投与
肺投与では、好ましくは、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物は、肺もしくは洞の末端気道に到達するために有効な粒径において送達される。本発明によれば、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体は、吸入による治療剤の投与のために当該技術分野において既知のすべての種々の吸入もしくは鼻用具によって送達できる。患者の洞空洞もしくは肺胞中にエアゾル化した製剤を蓄積することが可能なこれらの用具は、定量式用量吸入器、ネブライザー、乾燥粉末生成器、噴霧器などを含む。抗体の肺もしくは鼻投与を導くのに適当な他の用具は、また当該技術分野において既知である。すべてのそのような用具は、エアゾルにおいて抗体の分配のための投与に適当な製剤を使用できる。そのようなエアゾル剤は、溶液（水性および非水性の両方）または固形粒子のいずれからなってもよい。定量式用量吸入器、例えばＶｅｎｔｏｌｉｎR定量式用量吸入器は、典型的には、噴射ガスを使用し、そして呼吸の間の作動を必要とする（参照、例えば、ＷＯ９４／１６９７０，ＷＯ９８／３５８８８）。乾燥粉末吸入器、例えばＴｕｒｂｕｈａｌｅｒTM（Ａｓｔｒａ）、ＲｏｔａｈａｌｅｒR（Ｇｌａｘｏ）、ＤｉｓｋｕｓR（Ｇｌａｘｏ）、ＳｐｉｒｏｓTM吸入器（Ｄｕｒａ）、Ｉｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒｐｅｕｔｉｃｓにより市販される用量、およびＳｐｉｎｈａｌｅｒR粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ）は、混合粉末の胸の作動を使用する（米国特許第４６６８２１８号Ａｓｔｒａ、欧州特許第２３７５０７号Ａｓｔｒａ、ＷＯ９７／２５０８６Ｇｌａｘｏ、ＷＯ９４／２２３７６Ｄｕｒａ、米国特許第５４５８１３５号Ｉｎｈａｌｅ、ＷＯ９４／０６４９８Ｆｉｓｏｎｓ、これらは引用により本明細書に完全に組み入れられている。ネブライザー、例えばＡＥＲｘTMＡｒａｄｉｇｍ、ＵｌｔｒａｖｅｎｔRネブライザー（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）およびＡｃｏｒｎＩＩRネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（米国特許第５４０４８７１号Ａｒａｄｉｇｍ、ＷＯ９７／２２３７６）（上記引用文献は引用によって本明細書に完全に組み入れられている）は、液剤からエアゾルを作成するのに対して、定量式用量吸入器、乾燥粉末吸入器などは小粒子エアゾルを生成する。これらの特別な市販される吸入用具の例は、本発明の実施に適当な特別な用具の提示を意図し、そして本発明の範囲を限定することを意図しない。好ましくは、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を含んでなる組成物は、乾燥粉末吸入器もしくは噴霧器によって送達される。本発明の少なくとも１つの抗体を投与するための吸入用具のいくつかの望ましい特徴が存在する。例えば、吸入用具による送達は、有利には、信頼性があり、再現性があり、そして正確である。吸入用具は、場合によっては、良好な呼吸性のために、例えば約１０μｍ未満、好ましくは約１−５μｍの小さい乾燥粒子を送達してもよい。
【０１３６】
噴霧剤としてのＩＬ−１２抗体組成物の投与
ＩＬ−１２抗体組成物タンパク質を含有する噴霧剤は、圧力下のノズルをとおして少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の懸濁液もしくは溶液を噴出させることによって作成できる。ノズルサイズおよび配置、適用圧力、および液体フィード速度は、所望の出力および粒径を達成するように選択することができる。エレクトロスプレーは、例えば、毛管もしくはノズルフィードと結合させて電場によって作成できる。有利には、噴霧器によって送達される少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物タンパク質の粒子は、粒径約１０μｍ未満、好ましくは範囲約１μｍ〜約５μｍ、もっとも好ましくは約２μｍ〜約３μｍを有する。
【０１３７】
噴霧器による使用に適する少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の製剤は、典型的には、水性溶液中に抗体組成物タンパク質を、溶液１ｍｌまたは１ｇ当たり少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物タンパク質の濃度約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇ、またはその中のすべての範囲もしくは値において、例えば、限定するものではないが、．１，．２，．３，．４，．５，．６，．７，．８，．９，１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，４０，４５，５０，６０，７０，８０，９０もしくは１００ｍｇ／ｍｌもしくはｍｇ／ｇにおいて含有する。製剤は、賦形剤、バッファー、等張剤、保存剤、界面活性剤および好ましくは亜鉛のような薬剤を含有してもよい。また、製剤は、抗体組成物タンパク質の安定化のための賦形剤もしくは薬剤、例えばバッファー、還元剤、バルクタンパク質もしくは炭水化物を含んでもよい。抗体組成物タンパク質を製剤化するのに有用なバルクタンパク質は、アルブミン、プロタミンもしくは類するものを含む。抗体組成物タンパク質を製剤化するのに有用な典型的な炭水化物は、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースもしくは類するものを含む。また、抗体組成物タンパク質製剤は、エアゾルを形成する際に溶液の噴霧化によって惹起される抗体組成物タンパク質の界面誘導性凝集を低下させるかまたは防ぐことができる界面活性剤を含有してもよい。種々の慣用の界面活性剤、例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、およびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルが使用できる。量は、一般に、製剤の０．００１〜１４重量％の範囲である。本発明の目的のための特に好適な界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０もしくは類するものである。また、ＩＬ−１２抗体、または特定部分もしくは改変体のようなタンパク質の製剤化のための当該技術分野において既知のさらなる薬剤が製剤中に含有されてもよい。
【０１３８】
ネブライザーによるＩＬ−１２抗体組成物の投与
抗体組成物タンパク質は、ネブライザー、例えばジェットネブライザーもしくは超音波ネブライザーによって投与することができる。典型的には、ジェットネブライザーでは、圧縮空気起源がオリフィスをとおして高速度の空気ジェットを作成するために使用される。気体がノズルを越えて拡散する際に、液体貯蔵器に結合された毛管をとおして抗体組成物タンパク質溶液を引き出す低圧域が生じる。毛管からの液流は、それがチューブを出る際に不安定なフィラメントおよび小滴にせん断され、エアゾルを生成する。配置、流速およびバッフル形式の範囲は、与えられるジェットネブライザーからの所望の性能特性を達成するように用いられる。超音波ネブライザーでは、高周波電気エネルギーが使用されて、圧電気変換器を用いて振動の機械エネルギーを生成する。このエネルギーが、直接か、またはカップリング液をとおして抗体組成物タンパク質に伝達され、抗体組成物タンパク質を含有するエアゾルを生じる。有利には、ネブライザーによって送達される抗体組成物タンパク質の粒子は、粒径約１０μｍ未満、好ましくは範囲約１μｍ〜約５μｍ、もっとも好ましくは約２μｍ〜約３μｍを有する。
【０１３９】
ジェットでも超音波でもネブライザーによる使用に適する少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の製剤は、典型的には、溶液１ｍｌ当たり少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体タンパク質の濃度約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇを含有する。製剤は、賦形剤、バッファー、等張剤、保存剤、界面活性剤および好ましくは亜鉛のような薬剤を含有してもよい。また、製剤は、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物タンパク質の安定化のための賦形剤もしくは薬剤、例えばバッファー、還元剤、バルクタンパク質もしくは炭水化物を含んでもよい。少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物タンパク質を製剤化するのに有用なバルクタンパク質は、アルブミン、プロタミンもしくは類するものを含む。少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を製剤化するのに有用な典型的な炭水化物は、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースもしくは類するものを含む。また、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体製剤は、エアゾルを形成する際に溶液の噴霧化によって惹起される少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の界面誘導性凝集を低下させるかまたは防ぐことができる界面活性剤を含有してもよい。種々の慣用の界面活性剤、例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、およびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルが使用できる。量は、一般に、製剤の０．００１〜４重量％の範囲である。本発明の目的のための特に好適な界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０もしくは類するものである。また、抗体タンパク質のようなタンパク質の製剤化のための当該技術分野において既知のさらなる薬剤が製剤中に含有されてもよい。
【０１４０】
定量式用量吸入器によるＩＬ−１２抗体組成物の投与
定量式用量吸入器（ＭＤＩ）では、噴射剤、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体、およびいずれかの賦形剤もしくは他の添加物が、液化圧縮ガスを含有する混合液として缶中に含有されている。定量バルブの作動が、好ましくは、粒径約１０μｍ未満、好ましくは範囲約１μｍ〜約５μｍ、もっとも好ましくは約２μｍ〜約３μｍの粒子を含有するエアゾルとして混合液を放出する。所望のエアゾル粒径は、ジェット粉砕、スプレードライ、臨界点濃縮などを含む、当業者には既知の種々の方法によって作成される抗体組成物タンパク質の製剤を用いることによって得られる。好適な定量式用量吸入器は、３ＭもしくはＧｌａｘｏによって製造され、そしてハイドロフルオロカーボン噴射剤を用いる吸入器を含む。
【０１４１】
定量式用量吸入器用具による使用のための少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体の製剤は、一般に、例えば界面活性剤を用いて噴射剤中に懸濁された、非水性媒質中の懸濁液として少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を含有する微粉砕末を含有する。噴射剤は、この目的で使用されるすべての慣用の材料、例えばクロロフルオロカーボン、ハイドロクロロフルオロカーボン、ハイドロフルオロカーボン、またはトリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ハイドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ハイドロフルオロアルカン−２２７）などを含む炭化水素であってもよい。好ましくは、噴射剤はハイドロフルオロカーボンである。界面活性剤は、化学的変性などに対して活性薬剤を保護するために、噴射剤中の懸濁液として少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を安定化させるよう選択することができる。適当な界面活性剤は、ソルビタントリオレエート、大豆レシチン、オレイン酸などを含む。ある場合には、溶液エアゾルは、エタノールのような溶媒を用いるのが好適である。また、タンパク質のようなタンパク質製剤のための当該技術分野において既知のさらなる薬剤が製剤中に含まれてもよい。
【０１４２】
当業者は、本発明の方法が本明細書に記述されてない用具による少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体組成物の肺投与によって達成できることを認識できる。
【０１４３】
経口製剤および投与
経口用製剤は、腸壁の浸透性を人為的に増加するためのアジュバント（例えば、レゾルシノールおよび非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテル）の同時投与、ならびに酵素的分解を阻害するための酵素阻害剤（例えば、膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラシロール）の同時投与に頼る。経口投与のための固形用量剤形の活性成分化合物は、スクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、澱粉、寒天、アルギン酸塩、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成もしくは半合成高分子、およびグリセリドを含む、少なくとも１つの添加物とともに混合することができる。また、これらの用量剤形は、他の種類の添加物、例えば、不活性な希釈剤、滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、パラベン、保存剤、例えばソルビン酸、アスコルビン酸、α−トコフェロール、抗酸化剤、例えばシステイン、崩壊剤、結合剤、粘稠剤、緩衝剤、甘味剤、芳香剤、着香剤などを含有してもよい。
【０１４４】
さらに、錠剤および丸剤は、腸溶コーティング製剤に加工されてもよい。経口投与のための液状製剤は、医薬用途のために承認される乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤および液剤を含む。これらの製剤は、該分野において通常使用される不活性な希釈剤、例えば水を含有してもよい。また、リポソームが、インシュリンおよびヘパリンの薬物送達システムとして記述されている（米国特許第４，２３９，７５４号）。より近年では、混合アミノ酸の人口ポリマー（プロテイノイド）のミクロスフェアが医薬を送達するために使用されている（米国特許第４，９２５，６７３号）。さらにまた、米国特許第５，８７９，６８１号および同第５，８７１，７５３号に記述されるキャリヤー化合物は、当該技術分野において既知であるように、生物学的な活性な薬剤を経口的に送達するために使用されている。
【０１４５】
粘膜製剤および投与
粘膜表面をとおしての吸収のために、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体を投与する組成物および方法は、多数のミクロン以下の粒子、粘膜接着性高分子、生物活性ペプチド、および水性連続相を含んでなる乳液を含み、これらは乳濁粒子の粘膜接着を達成することによって粘膜表面をとおしての吸収を促進する（米国特許第５，５１４，６７０号）。本発明の乳剤の適用に適する粘膜表面は、角膜、結膜、頬、舌下、鼻、膣、肺、胃、腸および肛門の投与経路を含む。膣もしくは肛門投与のための製剤、例えば坐剤は、賦形剤、例えばポリアルキレングリコール、ワセリン、ココアバターなどを含有してもよい。鼻内投与のための製剤は、固形であり、そして賦形剤、例えばラクトースを含有してもよく、または鼻滴下剤の水性もしくは油性溶液であってもよい。頬投与では、賦形剤は、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ｐｒｅｇｅｌｉｎａｔｉｎｅｄ澱粉などを含む（米国特許第５，８４９，６９５号）。
【０１４６】
経皮製剤および投与
経皮投与のためには、少なくとも１つの抗ＩＬ−１２抗体は、送達デバイス、例えばリポソームまたはナノ粒子、ミクロ粒子、ミクロカプセルもしくはミクロスフェア（別に言及しなければ一括してミクロ粒子と呼ばれる）中に被包化される。合成ポリマー、例えば、ポリヒドロキシ酸、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸およびそのコポリマー、ポリオルトエステル、ポリアンヒドリドおよびポリホスファゼン、および天然高分子、例えばコラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよび他のタンパク質、アルギン酸塩および他の多糖、およびそれらの組み合わせ物からなるミクロ粒子を含む、多くの適当なデバイスが知られている（米国特許第５，８１４，５９９号）。
【０１４７】
持続性投与および製剤
本発明の化合物を被験者に長期間、例えば１回投与から１週〜１年の間送達することが、時には望ましいことがある。種々の徐放、デポもしくは植込み用量剤形が利用できる。例えば、用量剤形は、体液中で低い溶解度をもつ化合物の製薬的に許容しうる無毒の塩、例えば、（ａ）多塩基酸、例えばリン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノ−もしくはジ−スルホン酸、ポリガラクツロン酸などとの酸付加塩；（ｂ）多価金属陽イオン、例えば亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなど、または例えばＮ，Ｎ’−ジベンジル−エチレンジアミンもしくはエチレンジアミンから形成される有機カチオンとの塩；または（ｃ）（ａ）と（ｂ）の組み合わせ物、例えばタンニン酸亜鉛塩を含有してもよい。さらに、本発明の化合物または好ましくは前記のような比較的難溶な塩は、注射のために適当な、例えばゴマ油とのゲル、例えばモノステアリン酸アルミニウムゲルにおいて製剤化されてもよい。特に好適な塩は、亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パモ酸塩などである。注射のための徐放性デポ剤形のその他の種類は、徐々に崩壊する無毒の、非抗原性ポリマー、例えば米国特許第３，７７３，９１９号に記述されているようなポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマー中に被包化された、分散された化合物もしくは塩を含有できる。化合物または好ましくは前記のような比較的難溶な塩は、また、特に動物において使用するために、コレステロールマトリックスシラスティック（ｓｉｌａｓｔｉｃ）ペレットにおいて製剤化されてもよい。さらなる徐放、デポもしくは植込み製剤、例えば気体もしくは液体リポソームが文献において知られている（米国特許第５，７７０，２２２号および”Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ”，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．，１９７８）。
【０１４８】
一般に、本発明が記述したように、同じことが、次の実施例を参照して一層容易に理解できるが、これは、具体的説明を提供するものであり、限定することを意図しない。
【０１４９】
ベクターｐＣ４は、ＩＬ−１２抗体の発現のために使用される。プラスミドｐＣ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．３７１４６）の誘導体である。プラスミドは、ＳＶ４０初期プロモーターの制御下のマウスＤＨＦＲ遺伝子を含有する。これらのプラスミドでトランスフェクションされるジヒドロ葉酸活性を欠如しているチャイニーズハムスター卵巣もしくは他の細胞は、化学治療剤メトトレキセートを補足した選択培地（例えば、ａｌｐｈａ ｍｉｎｕｓ ＭＥＭ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）において細胞を増殖することによって選択することができる。メトトレキセート（ＭＴＸ）に耐性な細胞におけるＤＨＦＲ遺伝子の増幅は十分に報告されている（参照、例えば、Ｆ．Ｗ．Ａｌｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｊ．Ｌ．Ｈａｍｌｉｎ ａｎｄ Ｃ．Ｍａ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０９７：１０７−１４３（１９９０）；およびＭ．Ｊ．Ｐａｇｅ ａｎｄ Ｍ．Ａ．Ｓｙｄｅｎｈａｍ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１））。ＭＴＸの濃度を増加して増殖した細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増殖の結果として、標的酵素を過剰に生産することによって薬物に対する耐性を発達する。第２の遺伝子がＤＨＦＲ遺伝子に結合される場合、それは、通常、同時に増殖され、そして過剰発現される。このアプローチが増殖した遺伝子の１，０００コピー以上を保持する細胞系を開発するために使用できることは当該技術分野においては周知である。その後、メトトレキセートが取り去られた場合、宿主細胞の１つ以上の染色体中に組み込まれた増幅された遺伝子を含有する細胞系が得られる。
【０１５０】
プラスミドｐＣ４は、関心のある遺伝子を発現するために、ラウス肉腫ウイルスの長末端反復（Ｃｕｌｌｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ． ５：４３８−４４７（１９８５） プラス ヒト・サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の即時型初期遺伝子のエンハンサーから単離されたフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））を含有している。プロモーターの下流には、組み込みを可能にするＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８制限酵素切断部位がある。これらのクローニング部位の後に、プラスミドは、ラットのプレプロインスリン遺伝子の３’イントロンおよびポリアデニル化部位を含有している。また、他の高効率プロモーターも発現のために使用されてもよい、例えば、ヒトｂ−アクチンプロモーター、ＳＶ４０初期もしくは後期プロモーターまたは他のウイルス、例えばＨＩＶおよびＨＴＬＶＩ由来の長末端反復。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および類似の系が、哺乳類細胞において調節方式でＩＬ−１２を発現させるために使用されてもよい（Ｍ．Ｇｏｓｓｅｎ，ａｎｄ Ｈ．Ｂｕｊａｒｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５５４７−５５５１（１９９２））。ｍＲＮＡのポリアデニル化のためには、他のシグナル、例えば、ヒト成長ホルモンまたはグロビン遺伝子由来のシグナルが良好に使用できる。染色体に組み込まれた問題の遺伝子を保持している安定な細胞系は、また、選択可能なマーカー、例えばｇｐｔ、Ｇ４１８もしくはハイグロマイシンによるコ・トランスフェクションにおいて選択されてもよい。最初は１つ以上の選択可能なマーカー、例えばＧ４１８＋メトトレキセートを使用することが有利である。プラスミドｐＣ４は、制限酵素により消化され、次いで、当該技術分野において既知の操作によってウシ・腸ホスファターゼを用いて脱リン酸される。次いで、ベクターが１％アガロースゲルから単離される。
【０１５１】
例えば、既知の方法段階にしたがって、本発明のＩＬ−１２抗体のＨＣおよびＬＣ可変部に対応する配列番号：ＩＮＳＥＲＴ ＭＡＢ ＡＡ配列番号：１およびＩＮＳＥＲＴ ＭＡＢ ＡＡ配列番号：２において示されるように、完全ＩＬ−１２抗体をコードしているＤＮＡ配列が使用される。また、安定なヒト定常部（すなわち、ＨＣおよびＬＣ領域）をコードしている単離された核酸も、この構築物（例えば、ベクターｐ１３５１：ＩＮＳＥＲＴ ＡＴＣＣ ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ ＮＵＭＢＥＲ ＡＮＤ ＡＤＤＩＴＩＯＮＡＬ ＨＣ／ＬＣプラスミドにおいて与えられるように）において使用される。
【０１５２】
単離した可変および定常部エンコーディングＤＮＡおよび脱リン酸したベクターは、次に、Ｔ４ＤＮＡリガーゼにより連結される。次いで、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＨＢ１０１もしくはＸＬ−１Ｂｌｕｅ細胞が形質転換され、そしてプラスミドｐＣ４中に挿入されたフラグメントを含有する細菌が、例えば、制限酵素解析を用いて、同定される。
【０１５３】
活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠如しているチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞がトランスフェクションのために使用される。５ｇの発現プラスミドｐＣ４が、０．５ｇのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏとともにリポフェクチンを用いてコ・トランスフェクションされる。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、有力な選択可能マーカー、Ｇ４１８を含む１群の抗生物質に対する耐性を付与する酵素をコードしているＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含有する。細胞は、Ｇ４１８ １ｇ／ｍｌを補足したａｌｐｈａ ｍｉｎｕｓ ＭＥＭに植えられる。２日後、細胞はトリプシン処理され、そしてメトトレキセート１０，２５もしくは５０ｎｇ／ｍｌ＋Ｇ４１８ １ｇ／ｍｌを補足したａｌｐｈａ ｍｉｎｕｓ ＭＥＭにおけるハイブリドーマクローニングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に植えられる。約１０−１４日後、単一クローンがトリプシン処理され、次いで、種々のメトトレキセート濃度（５０ｎＭ，１００ｎＭ，２００ｎＭ，４００ｎＭ，８００ｎＭ）を用いて、６穴ペトリ皿もしくは１０ｍｌフラスコに植えられる。最高濃度のメトトレキセートにおいて増殖するクローンが、次に、さらに高い濃度のメトトレキセート（１ｍＭ，２ｍＭ，５ｍＭ，１０ｍＭ，２０ｍＭ）を含有する新しい６穴プレートに移植される。濃度１００−２００ｍＭにおいて増殖するクローンが得られるまで、同じ操作が繰り返される。所望の遺伝子産物の発現は、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットによるか、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析される。
【０１５４】
実施例２：
トランスジェニックマウスを用いる、ヒトＩＬ−１２と反応性の高親和性ヒト ＩｇＧモノクローナル抗体の生成
概要
１つ以上のＩＬ−１２媒介疾患の治療のために、ＩＬ−１２の作用を抑制するよう治療的に使用できる高親和性の、完全にヒトのモノクローナル抗体を生成するために、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子を含有するトランスジェニックマウスが使用された。両重鎖および軽鎖についてのヒト可変および定常部抗体トランスジーンを含有する（ＣＢＡ／ＪｘＣ５７／ＢＬ６／Ｊ）Ｆ2ハイブリッドマウスが、ヒト組み換えＩＬ−１２により免疫化される（Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５７９−５９１（１９９３）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：８２６（１９９６）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５−８５１（１９９６））。数種の融合物が、完全にヒトのＩＬ−１２反応性ＩｇＧモノクローナル抗体の１つ以上のパネルを生成した。完全にヒトの抗ＩＬ−１２抗体は、さらに特性決定される。すべてＩｇＧ１である。そのような抗体は、親和性定数約１ｘ１０9〜９ｘ１０12を有することが分かった。これらの完全にヒトのモノクローナル抗体の予期しなかった高親和性は、それらをしてＩＬ−１２関連疾患、疾病もしくは障害における治療適用のための適当な候補にさせる。
【０１５５】
略語
ＢＳＡ − ウシ血清アルブミン
ＣＯ2 − 二酸化炭素
ＤＭＳＯ − ジメチルスルホキシド
ＥＩＡ − 酵素イムノアッセイ
ＦＢＳ − 胎児ウシ血清
Ｈ2Ｏ2 − 過酸化水素
ＨＲＰ − セイヨウワサビ・ペルオキシダーゼ
ＩＤ − 皮膚内
Ｉｇ − 免疫グロブリン
ＩＬ−１２ − インターロイキン−１２
ＩＰ − 腹腔内
ＩＶ − 静脈内
Ｍａｂ − モノクローナル抗体
ＯＤ − 光学濃度
ＯＰＤ − ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩
ＰＥＧ − ポリエチレングリコール
ＰＳＡ − ペニシリン、ストレプトマイシン、アンホテリシン
ＲＴ − 室温
ＳＱ − 皮下
ｖ／ｖ − 容量／容量
ｗ／ｖ − 重量／容量
材料および方法
動物
ヒト抗体を発現できるトランスジェニックマウスは、当該技術分野において既知であり、市販されている（例えば、ＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ；Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ，から、そしてマウスＩｇＭもしくはＩｇでないヒト免疫グロブリンを発現する他のもの）。例えば、そのようなトランスジェニックマウスは、Ｖ（Ｄ）Ｊ結合、重鎖クラススイッチおよび染色体変異を受けてヒト配列免疫グロブリンのレパートリーを生成するヒト配列トランスジーンを含有している（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４））。軽鎖トランスジーンは、例えば、一部は、生殖系列ヒトＶ領域のほぼ半分を含む酵母の人工的染色体クローンから得られる。さらに、重鎖トランスジーンは、両ヒトμおよびヒト１（Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５−８５１（１９９６））および／または３定常部をコードできる。適当な遺伝子型系統由来のマウスは、免疫化および融合プロセスにおいて使用でき、ＩＬ−１２に対する完全にヒトのモノクローナル抗体を生成する。
【０１５６】
免疫化
１回以上の免疫化スケジュールが使用されて、抗ＩＬ−１２ヒトハイブリドーマを生成することができる。最初のいくつかの融合は、次に示す代表的免疫化プロトコールの後に実施できるが、他の類似の既知のプロトコールが使用されてもよい。数頭の１４−２０週齢のメスおよび／または外科的に去勢されたオスのマウスが、最終容量１００−４００μｌ（例えば２００）中に等容量のＴＩＴＥＲＭＡＸもしくは完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバントとともに乳化された組み換えヒトＩＬ−１２の１−１０００μｇによりＩＰおよび／またはＩＤで免疫化される。また、各マウスは、場合によっては、各２ＳＱ部位において生理的食塩水１００μｌ中１−１０μｇを受けてもよい。次いで、マウスは、１−７，５−１２，１０−１８，１７−２５および／または２１−３４日後に、等容量のＴＩＴＥＲＭＡＸもしくは不完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバントとともに乳化されたＩＬ−１２によりＩＰ（１−４００μｇ）およびＳＱ（１−４００μｇｘ２）で免疫化されてもよい。マウスは、１２−２５および２５−４０日後に、抗凝血剤なしに眼窩後穿刺によって採血される。次いで、血液は、ＲＴで１時間凝固させられ、そして血清が回収され、そして既知の方法にしたがってＩＬ−１２ ＥＩＡアッセイを用いて滴定される。反復注射が力価の増加を惹起しない時点で融合が実施される。この時点で、マウスは、１００μｌ生理的食塩水中に希釈されたＩＬ−１２ １−４００μｇの最終ＩＶブースター注射を与えられる。３日後、マウスは、頸部脱臼によって安楽死され、そして脾臓が無菌的に採取され、そして１００Ｕ／ｍｌ ペニシリン、１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシン、および０．２５μｇ／ｍｌ アンホテリシンＢ（ＰＳＡ）を含有する冷リン酸バッファー食塩水（ＰＢＳ）１０ｍｌ中に浸漬される。脾細胞は、ＰＳＡ−ＰＢＳにより無菌的に脾臓を潅流することによって収穫される。細胞は、冷ＰＳＡ−ＰＢＳにおいて１回洗浄され、トリパンブルー染料排除を用いてカウントされ、そして２５ｍＭＨｅｐｅｓを含有するＲＰＭＩ １６４０培地に再懸濁される。
【０１５７】
細胞融合
融合は、当該技術分野において既知である、既知の方法にしたがってマウス骨髄腫細胞対生存脾細胞の１：１〜１：１０比において実施できる。非限定例として、脾細胞および骨髄腫細胞が一緒にペレット化される。次いで、ペレットが、３７℃において５０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ／ＰＢＳ溶液（ＰＥＧ分子量１，４５０、Ｓｉｇｍａ）１ｍｌ中に３０秒かけて徐々に再懸濁される。次いで、融合は、２５ｍＭＨｅｐｅｓを含有するＲＰＭＩ １６４０培地（３７℃）１０．５ｍｌを１分かけて徐々に添加することによって停止される。融合された細胞は５００−１５００ｒｐｍで５分間遠心される。次いで、細胞は、ＨＡＴ培地（２５ｍＭＨｅｐｅｓ、１０％胎児クローンＩ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ），１ｍＭピルビン酸ナトリウム、４ｍＭＬ−グルタミン、１０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、２．５％Ｏｒｉｇｅｎ培養補足剤（Ｆｉｓｈｅｒ）、１０％６５３−順化ＲＰＭＩ １６４０／Ｈｅｐｅｓ培地、５０μＭ２−メルカプトエタノール、１００μＭヒポキサンチン、０．４μＭアミノプテリンおよび１６μＭチミジンを含有するＲＰＭＩ １６４０培地）に再懸濁され、次いで、１５個の９６穴平底組織培養プレートにおいて２００μｌ／ウェルでプレーティングされる。プレートは、次に、５％ＣＯ2および９５％空気を含有する加湿された３７℃培養器中に７−１０日間置かれる。
【０１５８】
マウス血清中のヒトＩｇＧ抗ＩＬ−１２抗体の検出
固相ＥＩＡは、ヒトＩＬ−１２に特異的なヒトＩｇＧ抗体についてマウス血清をスクリーニングするために使用できる。簡単に言えば、プレートがＰＢＳ中で一夜２μｇ／ｍｌにおいてＩＬ−１２によりコーティングされる。０．０２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含有する０．１５Ｍ生理食塩水中で洗浄後、ウェルは、ＰＢＳ中１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ２００μｌ／ウェルによりＲＴで１時間ブロックされる。プレートは直ちに使用されるか、または将来の使用のために−２０℃において凍結される。マウス血清希釈液は、ＩＬ−１２コーティングされたプレートにおいてＲＴで１時間５０μｌ／ｍｌにおいてインキュベートされる。プレートは洗浄され、次いで、１％ＢＳＡ−ＰＢＳ中１：３０，０００に希釈された特異的な、ＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ５０μｌ／ｍｌによりＲＴで１時間プローブされる。プレートは再び洗浄され、そしてクエン酸−リン酸基質溶液（０．１Ｍクエン酸および０．２Ｍリン酸ナトリウム、０．０１％Ｈ2Ｏ2およびＯＰＤ１ｍｇ／ｍｌ）１００μｌ／ウェルがＲＴで１５分間添加される。次いで、停止溶液（４Ｎ硫酸）が２５μｌ／ウェルにおいて添加され、そしてＯＤが、自動プレート分光光度計により４９０ｎｍにおいて読み取られる。
【０１５９】
ハイブリドーマ上澄液中の完全にヒトの免疫グロブリンの検出
完全にヒトの免疫グロブリンを分泌する増殖ポジティブなハイブリドーマが適当なＥＩＡを用いて検出できる。簡単に言えば、９６穴ポップ・アウトプレート（ＶＷＲ，６１０７４４）が、炭酸ナトリウムバッファー中ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ １０μｌ／ｍｌにより４℃で一夜コーティングされる。プレートは洗浄され、そして１％ＢＳＡ−ＰＢＳにより３７℃で１時間ブロックされ、そして直ちに使用されるか、または−２０℃で凍結される。未希釈のハイブリドーマ上澄液はプレート上で１時間３７℃でインキュベートされる。プレートは洗浄され、そして１％ＢＳＡ−ＰＢＳ中１：１０，０００に希釈されたＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒトκにより３７℃で１時間プローブされる。次いで、プレートは前記基質溶液とインキュベートされる。
【０１６０】
完全にヒト抗ＩＬ−１２の反応性の決定
前記ハイブリドーマが、適当なＲＩＡもしくは他のアッセイを用いてＩＬ−１２に対する反応性について同時にアッセイされる。例えば、上澄液が前記ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃプレート上でインキュベートされ、洗浄され、次いで、ウェル当たり適当なカウントをもつ放射能標識ＩＬ−１２でＲＴで１時間プローブされる。ウェルはＰＢＳで２回洗浄され、そして結合した放射能標識ＩＬ−１２は適当なカウンターを用いて定量される。
【０１６１】
ヒトＩｇＧ１ 抗ＩＬ−１２分泌性ハイブリドーマは、細胞培養において拡大され、そして限界希釈によって連続的にサブクローン化される。得られるクローン集団が拡大され、そして凍結培地（９５％ＦＢＳ，５％ＤＭＳＯ）において冷凍保存され、そして液体窒素中に貯蔵される。
【０１６２】
イソタイピング
抗体のイソタイプ決定は、比力価についてマウス免疫血清をスクリーニングするために使用されたものと同じ形式でＥＩＡを用いて実施できる。ＩＬ−１２が、前記９６穴プレート上にコーティングされ、そして２μｇ／ｍｌにおける精製抗体が、ＲＴで１時間プレート上でインキュベートされる。プレートは洗浄され、そして１％ＢＳＡ−ＰＢＳ中１：４０００に希釈されたＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ1もしくはＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ3によってＲＴで１時間プローブされる。プレートは再び洗浄され、そして前記基質溶液とインキュベートされる。
【０１６３】
ヒト抗ヒトＩＬ−１２抗体のヒトＩＬ−１２との結合速度論
抗体の結合特性は、例えば、ＩＬ−１２捕捉ＥＩＡおよびＢＩＡｃｏｒｅ技術を用いて適当に調査できる。段階濃度の精製ヒトＩＬ−１２抗体は、前記アッセイにおけるＩＬ−１２ ２μｇ／ｍｌでコーティングされたＥＩＡプレートへの結合について調査される。次いで、ＯＤが相対結合効率を示す半対数プロットとして提示できる。
【０１６４】
定量結合定数は、例えば、次のように、またはいずれか他の既知の適当な方法によって得ることができる。ＢＩＡｃｏｒｅＣＭ−５（カルボキシメチル）チップが、ＢＩＡｃｏｒｅ２０００ユニット中に置かれる。ＨＢＳバッファー（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ，０．１５ＭＮａＣｌ，３ｍＭＥＤＴＡ，０．００５％ｖ／ｖＰ２０界面活性剤、ｐＨ７．４）が、安定したベースラインが得られるまで、チップのフローセル上を５μｌ／分で流される。水２００μｌ中ＥＤＣ（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチル−アミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩）１５ｍｇの溶液（１００μｌ）が、水２００μｌ中ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）２．３ｍｇの溶液１００μｌに添加される。得られる溶液４０μｌがチップ上に注入される。ヒトＩＬ−１２（１０ｍＭ酢酸ナトリウム中１５μｇ／ｍｌ，ｐＨ４．８）溶液６μｌがチップに注入され、約５００ＲＵの増加をもたらす。バッファーがＴＢＳ／Ｃａ／Ｍｇ／ＢＳＡランニングバッファー（２０ＭＴｒｉｓ，０．１５Ｍ塩化ナトリウム，２ｍＭ塩化カルシウム，２ｍＭ酢酸マグネシウム，０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，ＢＳＡ２５μｇ／ｍｌ、ｐＨ７．４）に変えられ、そして一夜チップ上に流されてそれを平衡化し、そしてすべての未反応スクシンイミドエステルを加水分解またはキャップする。
【０１６５】
抗体は、３３．３３，１６．６７，８．３３および４．１７ｎＭにおいてランニングバッファーに溶解される。流速は３０μｌ／分に、そして装置温度は２５℃に調整される。２つのフローセルが速度論試行のために使用され、１つにはＩＬ−１２が固定化され（サンプル）、そして第２は誘導されないフローセルである（ブランク）。各抗体濃度１２０μｌが３０μｌ／分（会合相）、続いて、中断されない３６０秒のバッファー流（解離相）においてフローセルに注入される。チップの表面は、各２Ｍグアニジンチオシアネート３０μｌの２つの連続注入によって再生される（解離されるインターロイキン−１２／抗体複合体）。
【０１６６】
データの解析は、当該技術分野において既知である、ＢＩＡ評価３．０またはＣＬＡＭＰ２．０を用いて実施される。各抗体濃度では、ブランクセンソグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）がサンプルセンソグラムから差し引かれる。グローバルフィットが、両解離（ｋd，ｓｅｃ-1）および会合（ｋa，ｍｏｌ-1ｓｅｃ-1）のために実施され、そして解離定数（ｋD，ｍｏｌ）が計算される（Ｋd／Ｋa）。抗体親和性が、捕捉された抗体のＲＵが＞１００であるように十分に高い場合、抗体のさらなる希釈液が流される。
【０１６７】
結果および検討
抗ヒトＩＬ−１２モノクローナル抗体の生成
数回の融合が遂行され、そして各融合物が、１５プレートに接種され（１４４０ウェル／融合物）、これがヒトＩＬ−１２に特異的な数ダースの抗体を生成する。これらの中で、若干のものは、ヒトおよびマウスＩｇ鎖の組み合わせ物からなることが見いだされる。残りのハイブリドーマは、ヒト重鎖および軽鎖のみからなる抗ヒトＩＬ−１２抗体を分泌する。ヒトハイブリドーマのすべてがＩｇＧ１であることが期待される。
【０１６８】
ヒト抗ヒトＩＬ−１２抗体の結合速度論
ＥＬＩＳＡ解析は、これらのハイブリドーマのほとんどまたは全部が濃度依存様式でＩＬ−１２を結合することを確認する。図１−２は、これらの抗体の相対結合効率の結果を示す。この場合、その同族体抗原（エピトープ）に対する抗体の結合力が測定される。ＥＩＡプレートへ直接ＩＬ−１２を結合させることはタンパク質の変性を惹起し、そして見掛けの結合親和性が未変性タンパク質への結合を反映とはならないことを注意すべきである。５０％結合は濃度範囲を越えて見いだされる。
【０１６９】
定量結合定数は、ヒト抗体のＢＩＡｃｏｒｅ解析を用いて得られ、そしていくつかのヒトモノクローナル抗体が範囲１ｘ１０-9〜７ｘ１０-12のＫDをもつ非常に高い親和性であることが分かる。
【０１７０】
結論
いくつかの融合が、ヒトＩＬ−１２で免疫化されるヒト可変部および定常部抗体トランスジーンを含有するハイブリッドマウス由来の脾細胞を利用して行われる。ＩｇＧ１イソタイプのいくつかの完全にヒトのＩＬ−１２反応性ＩｇＧモノクローナル抗体の１組が生成される。さらに、完全にヒト抗ＩＬ−１２抗体は特性決定される。生成抗体のいくつかは、１ｘ１０9〜７ｘ１０12の親和性定数を有する。これらの完全にヒトモノクローナル抗体の予期せぬ高い親和性は、それらを、ＩＬ−１２依存性疾患、疾病もしくは関連症状における治療適用のために適するものにさせる。
【０１７１】
実施例３：
Ｃ３４０は中和性ヒトモノクローナル抗体である
ＩＬ−１２の生物活性は、種々のＩＬ−１２依存活性のアッセイにおいてＣ３４０によって中和されることが示された。ＩＬ−１２は、ＮＫ細胞およびＴリンパ球によるＩＦＮγ産生を増進するので、ＩＦＮγｍＲＮＡの上方調節に及ぼすＣ３４０抗体の影響およびＩＦＮγタンパク質の産生に及ぼすＣ３４０の影響が試験された（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，Ｇ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，９：１７−２３（１９９７），Ｍｏｒｒｉｓ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５２：１０４７−１０５６（１９９４））。また、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞活性のＩＬ−１２推進誘発を中和するＣ３４０の能力がこれらの研究において研究された（Ｋｕｔｚａ，Ｊ．ａｎｄ Ｍｕｒａｓｋｏ，Ｄ．Ｍ．，Ｍｅｃｈｎｉｓｍｓ ｏｆ Ａｇｅｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，９０：２０９−２２２（１９９６）、Ｓｔｅｒｎ，Ａ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．Ａ．，８７：６８０８−６８１２（１９９０））。最後に、ＴおよびＮＫ細胞におけるＣＤ９５細胞表面発現のＩＬ−１２媒介上方調節に及ぼすＣ３４０の影響が試験された（Ｍｅｄｖｅｄｅｖ，Ａ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，９：３９４−４０４（１９９７））。
【０１７２】
ＩＦＮγｍＲＮＡ転写の抑制
Ｃ３４０がヒトＰＢＬにおいてＩＬ−１２ ＩＬ−２誘導ＩＦＮγ遺伝子転写を抑制するか否かを決定するために、逆転写−ＰＣＲアッセイが行われた。β−アクチン（ｍＲＮＡの完全性および含有量に対する制御）およびＩＦＮγの特異的プライマーが使用されて、刺激されたヒトＰＢＬから得られるｃＤＮＡを増幅した。図３は、Ｃ３４０がＩＬ−１２／ＩＬ−２活性化（２時間）ＰＢＭＣにおいてＩＦＮγｍＲＮＡを下方調節することを示す。
【０１７３】
フローサイトメトリーによって測定された細胞内ＩＦＮγの抑制
種々のシグナルに対する応答において、そして活性化の測定として、Ｔ細胞およびＮＫ細胞はサイトカインを分泌するために誘発される。より具体的には、ＩＬ−２およびＩＬ−１２で処理されたＰＢＬは、刺激後４−８時間内にＩＦＮγの合成を実質的に開始する。この生産は、フローサイトメトリーによってＢｒｅｆｅｌｄｉｎ−Ａ処理ＰＢＬの細胞質において検出できる。図４は、Ｃ３４０ＩＬ−１２がＩＬ−１２と一緒に５時間添加された場合、そのような培養においてＩＦＮγ生産の６０％低下を例証している。
【０１７４】
ＩＬ−１２誘発ＩＦＮγ分泌の抑制
図５は、明らかに、Ｃ３４０の２つの異なるロットが、用量依存様式で末梢血リンパ球によるＩＦＮγの分泌を抑制することを示している。ＩＬ−１２の４００ｐｇがＣ３４０の変化する量とともに前混合され、次いで、ＰＢＬのＩＬ−２刺激された培養物に添加された。ＩＦＮγは１８−２４時間後ＥＩＡによって測定され、顕著に減少したＩＦＮγ量がＣ３４０抗体１？ｇ／ｍｌと同じくらい少量検出された。
【０１７５】
ＩＬ−１２誘発ＬＡＫ細胞の細胞障害性の抑制
Ｒａｊｉ細胞、ＩＬ−１２感受性バーキットリンパ腫由来細胞系は、ＮＫ細胞耐性、ＬＡＫ細胞感受性の細胞系である。Ｒａｊｉ細胞は、３並列で、ヒトモノクローナル抗体Ｃ３４０（５０００ｎｇ／ｍｌもしくは５０ｎｇ／ｍｌ）の存在もしくは不在下で、ＩＬ−１２ ４００ｐｇ／ｍｌおよびＩＬ−２ １０Ｕ／ｍｌにより活性化されたＬＡＫ細胞とともに４時間培養された。図６は、３人の正常、健康なドナーからの結果を示す。エフェクター細胞のＩＬ−１２＋ＩＬ−２活性化は、ＩＬ−２のみで活性化された細胞を超える細胞障害活性の増大をもたらした。Ｃ３４０抗体はこのＩＬ−１２依存性効果を抑制した。抑制の大きさは抗体濃度に関係し、試験された最高濃度では細胞障害をバックグラウンドレベルまで低下させた。
【０１７６】
ＣＤ９５上方調節の抑制
報告では、高度に精製されたＣＤ５６＋ＰＢＬの表面におけるＣＤ９５のＩＬ−１２誘発上方調節が記述されている。図７Ａおよび７Ｂに示されるように、分配型フローサイトメトリー分析は、ＣＤ９５発現が、ＩＬ−１２＋ＩＬ−２による７２時間の処理後、ＣＤ３＋Ｔ細胞およびＣＤ５６＋ＮＫ細胞において有意に上方調節されることを明らかにした。共存する抗ＩＬ−１２処理は、両ＣＤ３＋およびＣＤ５６＋集団においてＣＤ９５発現を抑制した。減少されたＭＦＩインデックス（未刺激対照を超えるパーセント）によって証明されるように、ＣＤ３＋細胞は〜５０％抑制（図７Ａ）され、一方ＣＤ５６＋細胞は〜８５％抑制（図７Ｂ）された。
【０１７７】
実施例４：
遺伝子クローニングおよび特性決定
Ｃ３４０重鎖遺伝子もしくはＣ３４０軽鎖のいずれかを含有するゲノムＤＮＡフラグメントがクローン化され、そして精製された。Ｃ３４０ハイブリドーマ細胞から精製されたゲノムＤＮＡは、Ｓａｕ３Ａ制限酵素により部分消化され、そして１０−４０％スクロース勾配をとおしての遠心分画によってサイズ選別された。サイズ範囲１５−２３ｋｂのＤＮＡフラグメントがバクテリオファージベクター、ＥＭＢＬ３［市販？］中にクローン化され、そしてファージ粒子中にパッケージされた。数回のパッケージング反応が、１００万のバクテリオファージクローンのライブラリーをもたらした。ライブラリーからの約６００，０００クローンが、プローブとしてヒトＩｇＧ１重鎖定常部配列もしくはヒトκ軽鎖定常部配列のいずれかを含有する３２Ｐ標識ゲノムＤＮＡフラグメントを用いて、プラークハイブリダイゼーションによってスクリーニングされた。１３の重鎖および９の軽鎖クローンが検出された。これらの内、３重鎖クローンおよび４軽鎖クローンが、２回のさらなるスクリーニングによって精製された。重鎖クローンの１つおよび軽鎖クローンの２つは、バクテリオファージＤＮＡのＰＣＲ解析によってコーディング配列の５’および３’末端を含有することが示された。重鎖（ＨＣ）クローンＨ４におけるＤＮＡインサートは、サイズ１６ｋｂであり、そして５’フランキングの３．６ｋｂおよび３’フランキング配列の少なくとも２ｋｂを含んだ。軽鎖（ＬＣ）クローンＬＣ１におけるＤＮＡインサートは、サイズ１５ｋｂであり、そして５’フランキングの４．４ｋｂおよび３’フランキング配列の６．０ｋｂを含んだ。完全なインサートは、ＳａｌＩフラグメントとしてバクテリオファージベクターから除去され、そしてｇｐｔ選択マーカー遺伝子を備えたプラスミド発現ベクターｐ１３５１のＸｈｏＩおよびＳａｌＩ部位間にクローン化された。重鎖可変部コーディング配列中に内部ＳａｌＩ部位が存在するので、２つのＳａｌＩフラグメントは、バクテリオファージＨ４からｐ１３５１発現ベクターへ転移されねばなかった。得られる重鎖および軽鎖発現プラスミドは、それぞれｐ１５６０およびｐ１５５８と命名された。ｐ１３５１ベクター配列に較べてこれら２つのプラスミドにおける重鎖および軽鎖遺伝子の配向が、それぞれ制限酵素解析およびＰＣＲを用いて決定された。両方の場合、配向は、Ａｂ遺伝子フラグメントの５’末端がｇｐｔ遺伝子の３’末端に近接しているような配向であった。クローン化遺伝子のコーディング領域の両鎖が配向決定された。プラスミドｐ１５６０およびｐ１５５８の配列が、それぞれ図１１Ａ−１１Ｋおよび図１３Ａ−１３Ｊに提示される。
【０１７８】
実施例５：
組み換え細胞系の作成
重鎖プラスミドｐ１５６０がＰｖｕＩ制限酵素による消化によって線状化され、そして軽鎖プラスミドｐ１５５８がＳａｌＩ制限酵素を用いて線状化された。ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（６５３）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４（ＳＰ２／０）細胞が、エレクトロポレーションによって予め線状化したプラスミドにより別々にトランスフェクションされ、そして細胞が培養され、トランスフェクタントが記述されるようにミコフェノール酸を用いて選択された（Ｋｎｉｇｈｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３０：１４４３（１９９３））。ミコフェノール酸耐性コロニーからの細胞上澄液が、約２週間後、ヒトＩｇＧ（すなわち、組み換えＣ３４０（ｒＣ３４０））についてアッセイされた。このためには、細胞上澄液が、ヒトＩｇＧのＦｃ部分に特異的なヤギ抗体でコーティングされた９６穴ＥＬＩＳＡプレートにおいてインキュベートされた。コーティングされたプレートに結合するヒトＩｇＧは、記述されているように、アルカリホスファターゼ共役ヤギ抗ヒトＩｇＧ（重鎖＋軽鎖）抗体およびアルカリホスファターゼ基質を用いて検出された（Ｋｎｉｇｈｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３０：１４４３（１９９３））。より高い生産性クローンの細胞が、標準培地において２４穴培養皿に移植され、そして拡大された（ＩＭＤＭ，５％ＦＢＳ，２ｍＭグルタミン，ミコフェノール酸選択混合液）。産生された（すなわち、培養後の培地中に分泌された）抗体量が、標準として精製Ｃ３４０ｍＡｂを用いるＥＬＩＳＡによって注意深く定量された。選択されたクローンは、次いで、Ｔ７５フラスコにおいて拡大され、そしてこれらのクローンによるヒトＩｇＧの生産がＥＬＩＳＡによって定量された。これらの値に基づいて、６種の独立した６５３トランスフェクタントと３種の独立したＳＰ２／０トランスフェクタントがサブクローン化され（９６穴プレートにおいて１ウェル当たり平均１細胞を接種することによって）、サブクローンによって生産される抗体量は、個々のサブクローンコロニーからの上澄液をアッセイ（ＥＬＩＳＡ）することによって決定された。３種のサブクローン、６５３トランスフェクタント１９−２０（Ｃ３７９Ｂ）およびＳＰ２／０トランスフェクタント８４−８１（Ｃ３８１Ａ）および２２−５６（Ｃ３８９Ａ）がさらなる分析によって選択された。
【０１７９】
ｒＣ３４０抗原結合のアッセイ
前記選択された細胞をサブクローニングする前に、３種の親系（６５３トランスフェクタントのクローン２とクローン１８およびＳＰ２／０トランスフェクタントクローン１）からの細胞上澄液が、ｒＣ３４０の抗原結合特性を試験するために使用された。３種の細胞上澄液サンプル中のｒＣ３４０の濃度はＥＬＩＳＡによってまず決定された。上澄液サンプルまたは精製されたＣ３４０ポジティブ対照の滴定量が、次に、ヒトＩＬ−１２２μｇ／ｍｌでコーティングされた９６穴プレートにおいてインキュベートされた。次いで、結合したｍＡｂが、アルカリホスファターゼ共役ヤギ抗ヒトＩｇＧ（重鎖＋軽鎖）抗体および適当なアルカリホスファターゼ基質を用いて検出された。図８に示されるように、ｒＣ３４０は、元のＣ３４０ｍＡｂと区別できない様式でヒトＩＬ−１２に特異的に結合した。
【０１８０】
選択された細胞系の特性決定
増殖曲線解析が、Ｃ３７９Ｂ、Ｃ３８１ＡおよびＣ３８９Ａに関して、標準培地またはＳＦＭ−５血清不含培地において初発細胞密度２Ｘ１０５細胞／ｍｌをＴ７５フラスコに接種し、次いで、培養液が終了するまで毎日、細胞数およびｒＣ３４０濃度を追跡することによって実施された。標準培地における培養結果は図９Ａ−９Ｃに示される。Ｃ３７９Ｂ、Ｃ３８１ＡおよびＣ３８９Ａの最高Ｃ３４０ｍＡｂ生産レベルは、それぞれ１３５μｇ／ｍｌ、１５０μｇ／ｍｌおよび１１０μｇ／ｍｌであった。Ｃ３７９Ｂ細胞をＳＦＭ−５培地に適応させる試みは成功しなかった。Ｃ３８１Ａ細胞は、標準培地におけると同様にＳＦＭ−５培地において同量のｒＣ３４０を産生したが、Ｃ３８９Ａ細胞は、標準培地における量の半分しかＳＦＭ−５培地においてｒＣ３４０を産生しなかった。
【０１８１】
３種のサブクローンについて経時的なｒＣ３４０ｍＡｂ生産の安定性が、種々の時間で標準培地またはミコフェノール酸選別なしの標準培地を用いて２４穴皿において細胞を培養することによって調査された。系統Ｃ３７９ＢおよびＣ３８１Ａは、それぞれ３０日間（試験された最高時間）および７５日間にわたって選別の存在または不在下でｒＣ３４０を安定して生産することが観察された。系統Ｃ３８９Ａは不安定であり、そして培養４３日後、研究開始時における抗体量の２０％しか生産しなかった。
【０１８２】
本発明が、前記説明および実施例において特別に記述された以外にも実行することができることは明白である。
【０１８３】
本発明の多数の修飾および改変は、先の教示に照らして可能であり、したがって、添付する請求の範囲内にはいる。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａおよび１Ｂ】 固定化ヒトＩＬ−１２へのヒト抗ＩＬ−１２ｍＡｂの濃度依存性結合を示すグラフである。抗ＩＬ−１２抗体は、１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中で連続的に希釈され、そしてｒｈＩＬ−１２コーティングしたプレートにおいて３７℃で１時間培養された。プレートは、０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、０．１５Ｍ食塩水で２回洗浄され、次いで、セイヨウワサビ・ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識のヤギ抗ヒトＩｇＧκ特異的抗体により室温で１時間プローブされた。プレートは再び洗浄され、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）基質で発色され、そして各ウェルの光学濃度（ＯＤ）が４９０ｎｍにおいて測定された。
【図２】 図ＡおよびＢにおいて左から右への列は、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−１２ｐ４０、マウスＩＬ−１２、および前染色した分子量マーカーを含有する。図２Ａは、すべてのタンパク質からの染色されたバンドを示す。各列における主バンドは、ヒトＩＬ−１２（７５ｋｄ）、ｐ４０ヒトＩＬ−１２（４０ｋｄ）およびマウスＩＬ−１２（７５ｋｄ）である。図２Ｂは、図２Ａに示されたものと同じゲルから調製されたウエスタンブロットを示す。ブロットは、Ｃ３４０、続いてＨＲＰ標識のヤギ抗ヒトＩｇＧと反応され、そして特異的にヒトＩＬ−１２（単量体および多量体）およびヒトＩＬ−１２ｐ４０のみを検出した。ＨＲＰ標識のヤギ抗ヒトＩｇＧと反応した対照ブロット（未提示）は、いかなるバンドも示さなかった。
【図３】 抗ＩＬ−１２抗体Ｃ３４０、８．６．２、イソタイプ対照抗体の有無においてＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−２＋ＩＬ−１２で処理されたヒトＰＢＬ’ｓにおけるＩＦＮγ遺伝子発現の逆転写−ＰＣＲ解析。全ＲＮＡが逆転写され、遺伝子特異的プライマーを用いてＰＣＲによって増幅された。また、ｍＲＮＡの完全性および含量のための対照として使用された各サンプル中のβ−アクチンｍＲＮＡのレベルが定量された。
【図４】 ヒト抗ＩＬ−１２ｍＡｂ（Ｃ３４０）が、ＣＤ３を枯渇した単球＋ＩＬ−２プラスＩＬ−１２で刺激した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるγ−インターフェロン（ＩＦＮγ）の産生を抑制することを示すヒストグラムである。ＰＢＭＣは、対照培地（サイトカイン無添加）、ＩＬ−１２（０．１ｎｇ／ｍｌ）プラスＩＬ−２（５０ＩＵ／ｍｌ）を補足した培地（ＩＬ−１２／ＩＬ−２）、ｍＡｂＣ３４０（１０μｇ／ｍｌ）を含有する対照培地およびｍＡｂＣ３４０（１０μｇ／ｍｌ）を含有するＩＬ−１２／ＩＬ−２培地において５時間培養された。細胞内ＩＦＮγは、ＣＤ３−ＰＥおよびＩＦＮγ−ＦＩＴＣで免疫染色する２種の発色によって測定された。データは１つのドナーについて示されている。
【図５】 ヒト抗ＩＬ−１２ｍＡｂ（Ｃ３４０）の２種の異なるロットを用いて、ＩＬ−２プラスＩＬ−１２で刺激した末梢血リンパ球によるＩＦＮγ分泌の用量依存性抑制を示すグラフである。ヒトＰＢＬ（８ｘ１０６／ｍｌ）が、１０Ｕ／ｍｌＩＬ−２、ＩＬ−２プラス４００ｐｇ／ｍｌＩＬ−１２、またはＩＬ−２プラスＩＬ−１２および指示されるようなｍＡｂＣ３４０とともに２４時間培養された。培養上澄液が除去され、そしてＥＩＡによってＩＦＮγについてアッセイされた。
【図６】 ヒト抗ＩＬ−１２ｍＡｂ（Ｃ３４０）によるＩＬ−１２プラスＩＬ−２誘導のＬＡＫ細胞の細胞障害性の用量依存性抑制を示すヒストグラムである。ＬＡＫエフェクター細胞（ヒトＰＢＬ，８ｘ１０６／ｍｌ）が、ＩＬ−１２（４００ｐｇ／ｍｌ）プラスＩＬ−２（１０Ｕ／ｍｌ）およびｍＡｂＣ３４０（指示されるように５０００ｎｇ／ｍｌまたは５０ｎｇ／ｍｌ）とともに２４時間培養された。ＬＡＫエフェクター細胞は洗浄され、そして５１Ｃｒ標識したＲａｊｉ標識細胞とともに８０：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比において４時間培養され、そしてＲａｊｉ細胞の溶解により培地中に放出された５１Ｃｒ量が測定された。結果は、３種の正常なドナー標準誤差の平均として表された。ＩＬ−１２ポジティブ対照（ＩＬ−１２）は、ＩＬ−１２とともに、そして抗体なしで培養されたエフェクター細胞である。バックグラウンド（ＢＫＧＤ）は、ＩＬ−１２もしくは抗体なしで培養されたエフェクター細胞である。
【図７Ａおよび７Ｂ】 ＣＤ３＋末梢血単核細胞におけるＩＬ−１２プラスＩＬ−２誘導発現が、ヒト抗ＩＬ−１２ｍＡｂ（Ｃ３４０）によって抑制されることを示すヒストグラムである。ＰＢＭＣは、ｍＡｂＣ３４０（１０μｇ／ｍｌ）の存在もしくは不在下で、０．１ｎｇ／ｍｌＩＬ−１２およびＩＬ−２（５０ＩＵ／ｍｌ）の最適以下の用量を含有する培地において７２時間培養された。ＣＤ９５発現は、抗ＣＤ９５−ＦＩＴＣで染色された細胞の流動細胞計測法によって測定された。ゲーティングは、２種の発色分析（ＣＤ３もしくはＣＤ５６−ＰＥ対ＣＤ９５−ＦＩＴＣ）および前方対直角の光散乱を用いて行われた。
【図８】 組み換えヒト抗ヒトＩＬ−１２抗体（ｒＣ３４０）が、精製したｍＡｂＣ３４０と区別できない様式で、固定化したＩＬ−１２に結合することを示すグラフである。３種のｒＣ３４０生産性組み換え細胞系の上澄液中のｒＣ３４０の濃度が定量され、そして上澄液がＥＬＩＳＡにおいてＩＬ−１２結合について評価された。プレートは２μｇ／ｍｌヒトＩＬ−１２でコーティングされ、そして本来のハイブリドーマ（標準）または組み換え細胞系の上澄液から精製したｍＡｂＣ３４０とともに培養された。ＩＬ−１２結合した抗体は、アルカリホスファターゼ共役のヤギ抗ヒトＩｇＧ（重鎖＋軽鎖）を用いて検出された。
【図９Ａ−９Ｃ】 増殖動力学、および３種の独立に得られたｒＣ３４０生産性組み換え細胞サブクローン（図９Ａ，サブクローンＣ３７９Ｂ；図９Ｂ，サブクローンＣ３８１Ａ；図９Ｃ，サブクローンＣ３８９Ａ）によって分泌された抗体量を示すグラフである。組み換え細胞は、標準培地中に初発濃度２ｘ１０5細胞／ｍｌにおいてＴ７５フラスコに植菌された。種々の時間に、細胞は再懸濁され、そして生存細胞数および培地中のｒＣ３４０量（μｇ／ｍｌ）が決定された。
【配列表】
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Claims (4)

  1. 配列番号７に記載されたアミノ酸配列の重鎖可変部（ＶH）及び配列番号８に記載されたアミノ酸配列の軽鎖可変部（ＶL）を含んでなる、単離された抗ＩＬ−１２抗体。
  2. 該抗体が、少なくとも１０-9Ｍ、少なくとも１０-10Ｍ、少なくとも１０-11Ｍもしくは少なくとも１０-12Ｍから選ばれる少なくとも１つの親和性によりＩＬ−１２を結合する、請求項１記載の抗ＩＬ−１２抗体。
  3. 該抗体が、ＩＬ−１２タンパク質の活性を中和する、請求項１記載の抗ＩＬ−１２抗体。
  4. 配列番号７に記載されたアミノ酸配列の重鎖可変部（ＶH）及び配列番号８に記載されたアミノ酸配列の軽鎖可変部（ＶL）を含んでなる単離された抗ＩＬ−１２抗体、および少なくとも１つの製薬的に許容しうるキャリヤーもしくは希釈剤、を含んでなる組成物。
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