JP3445283B2 - ヒアルロン酸の微細粒子中に封入された薬物の徐放性組成物 - Google Patents
ヒアルロン酸の微細粒子中に封入された薬物の徐放性組成物Info
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Description
発明の分野
本発明は、ヒアルロン酸またはその塩の固体微細粒子
中に封入されたタンパク質またはペプチド薬物の徐放性
組成物およびそれを含む注射剤形に関する。 発明の背景 タンパク質またはペプチド薬物は経口投与すると吸収
が遅いため、通常注射によって投与される。一回の注射
投与による薬物の体内における活性維持期間が短いた
め、長期間の治療が必要な場合にはこれらの薬物を繰返
して継続的に注射投与しなければならない。たとえば、
脳下垂体欠乏性矮小症の小児を治療するためには、組換
えヒト成長ホルモンを６ヶ月以上毎日注射しなければな
らない。したがって、このような連日投与の不便を解消
できる徐放性剤形の開発が要求されている。 ヒト成長ホルモンのようなタンパク質またはペプチド
薬物の徐放性剤形は、体内で徐々に加水分解する生分解
性高分子マトリックス物質の微細粒子中に薬物を封入す
ることによって製造される。このような観点から、徐放
性薬剤用に適合な生分解性高分子の開発研究が活発に行
われ、その結果、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ
（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ−オルト−エステ
ルおよびポリアンヒドリド（polyanhydride）のような
生分解性ポリエステルが上記の用途に効果的であること
が明らかになった（M.Chasin ＆ R.Langer,et al.,Biod
egradable Polymers as Drug Delivery System,Marcel
Dekker,（1990）;J.Heller,Adv.Drug Del.Rev.,10,163
（1993）。 また、ゼラチン、コラーゲン、キトサン、カルボキシ
メチルセルロース、アルギネートおよびヒアルロン酸の
ような天然高分子物質を用いる徐放性薬剤の開発研究も
進まれている。一般に、これらの天然高分子は、水の存
在の下でゲルを形成し、このような高粘度で非常に低い
薬物拡散速度を有するゲル型のマトリックスが徐放性薬
物組成物の製造に用いられる。 たとえば、米国特許出願第5,416,017号は、0.01ない
し３％のヒアルロン酸を含むゲルを用いたエリスロポエ
チン（erythropoietin）の徐放性注射剤を開示してお
り、日本特開平１−287041号は、１％のヒアルロン酸で
製造されたゲルを用いたインスリンの徐放性注射剤を記
述しており、また日本特開平２−00213号は、５％のヒ
アルロン酸を含むゲルを用いたカルシトニン、エルカノ
ニンまたはヒト成長ホルモンの徐放性剤形を記述してい
る。同様に、メイヤーらは0.5ないし４％のヒアルロン
酸を含むゲルを用いた顆粒球コロニー刺激因子の徐放性
剤形を報告した（James Meyer,et al.,J.Controlled Re
l.,35,67（1995））。 しかし、数％濃度のヒアルロン酸を含むゲルは107セ
ンチポイズ程度の高い粘度を有するため、このような剤
形を注射投与する場合大きい口径の注射針を用いなけれ
ばならない。さらに、人体に投与されたゲルは体液によ
って希釈されることによって薬物の保留性を容易に失う
ので、薬物の放出が１日以上持続しない。たとえば、日
本特開平1287041号は、１％のヒアルロン酸を含むイン
スリンの徐放性注射剤をウサギに注射した場合、グルコ
ースの血中濃度を低下させる治療効果が24時間以上持続
しないことを記述している。また、顆粒球コロニー刺激
因子を含有する２％のヒアルロン酸剤形（James Meyer,
et al.,J.Controlled Rel.,35,67（1995））またはイン
ターフェロン−αおよび血漿タンパク質を含有する1.5
％のヒアルロン酸剤形（米国特許第5,416,017号）を実
験動物に投与した場合、血中薬物濃度が24時間以内に初
期濃度の1/10以下に急激に落ちることを報告した。すな
わち、ヒアルロン酸ゲルの徐放性薬剤は薬物の放出が24
時間以上持続しないという短所を有する。 天然ヒアルロン酸またはその無機塩は水にのみ溶解す
る。一方、ヒアルロン酸−ベンジルエステルHYAFFTMは
水に溶けないが、ジメチルスルホキシドのような有機溶
媒に溶ける。前記疎水性ヒアルロン酸誘導体およびこれ
に薬物の固体微細粒子を封入した薬物組成物は通常のエ
マルジョン溶媒抽出法で製造される（N.S.Nightlinger,
et al.,proceed.Intern.Symp.Control.Rel.Bioact.Mate
r.,22nd,Paper No.3205（1995）;L.Ilum,et al.,J.Cont
rolled Rel.,29,133（1994））。この方法を簡単に説明
すると、タンパク質薬物粒子をヒアルロン酸−ベンジル
エステルのジメチルスルホキシド溶液に分散し、得られ
た分散液をミネラル油に加えてエマルジョンを形成させ
る。このエマルジョンに酢酸エチルのような有機溶媒を
加えてジメチルスルホキシドを抽出して薬物およびヒア
ルロン酸−ベンジルエステルで構成された微細粒子を得
る。 しかし、前記方法は、タンパク質薬物が有機溶媒また
は疎水性ヒアルロン酸ベンジルエステルと接触すること
によって変性するという問題を有する。実際に、完全に
エステル化されたヒアルロン酸誘導体を用いて製造した
顆粒球コロニー刺激因子の微細粒子剤形は、初めの数日
間顆粒球コロニー刺激因子含有量の25％が放出されるの
みで、その後17日間は全然放出されないと報告された
（N.S.Nightlinger,et al.,proceed.Intern.Symp.Contr
ol.Rel.Bioact.Mater.,22nd,Paper No.3205（199
5））。この場合、タンパク質薬物の大部分が損失され
たが、ヒアルロン酸−ベンジルエステルおよび／または
有機溶媒との相互作用によって変性された可能性が高
い。 発明の要約 したがって、本発明の目的は、タンパク質またはペプ
チド薬物の改善された徐放性剤形を提供することであ
る。 本発明の他の目的は、ヒアルロン酸またはこれらの無
機塩の微細粒子および前記微細粒子中に封入されたタン
パク質またはペプチド薬物を含む徐放性薬物組成物を提
供することであり、ここで、前記微細粒子の平均粒径は
0.1ないし40μｍ範囲である。 図面の簡単な説明 本発明の前記および他の目的および特色は、下記の図
面を伴う本発明の説明によって明らかになる。 図１は、ヒト成長ホルモン（hGH）の体外溶出量の経
時変化を示し、 図2Aおよび2Bは、本発明のhGHを含む徐放性組成物の
薬物安定性を逆相高性能液体クロマトグラフィー（RP−
HPLC）を用いて観察した結果であり（a:本発明の剤形か
ら溶出されたhGH;およびb:hGH水溶液の対照群）、 図3Aおよび3Bは、本発明のhGHを含む徐放性組成物の
薬物安定性をサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）を
用いて観察した結果であり（A:本発明の剤形から溶出さ
れたhGH;およびB:hGH水溶液の対照群）、 図４は、ヒド成長ホルモンを含む本発明の徐放性剤形
および通常の剤形で処理した矮小ラットの平均体重増加
の経時変化を比べたものであり、 図５は、ヒト成長ホルモンを含む本発明の徐放性剤形
および通常の剤形で処理した矮小ラットの平均体重増加
の経時変化を比べたものであり、 図６は、血中ヒト成長ホルモン濃度の経時変化を示し
たものであり；および 図７は、ヒト成長ホルモンを含む本発明の徐放性剤形
および通常の剤形で処理した矮小ラットの平均体重増加
の経時変化を比べたものである。 発明の詳細な説明 本発明の徐放性組成物は、ヒアルロン酸またはその塩
の固体微細粒子および前記粒子中に封入されたタンパク
質またはペプチド薬物を含む。本発明の組成物は、既存
のヒアルロン酸ゲルを用いた剤形より薬物の放出持続期
間が長く、また取扱いやすい。すなわち、本発明の微細
粒子組成物を用いて製造した注射剤形は低い粘度を有す
るため投与しやすく、生体内で薬物を長期間に亘って一
定な速度で放出する。 また、本発明の組成物は組成物から薬物が100％放出
されるまで薬物が変性しないという長所を有する。 0.1ないし40μｍ、好ましくは１ないし10μｍの平均
粒径を有する本発明の微細粒子組成物は、タンパク質ま
たはペプチド薬物およびヒアルロン酸またはその塩を含
む水溶液を噴霧乾燥または凍結乾燥することによって製
造し得る。必要に応じて溶液に安定剤を加え得る。 本発明の固体微細粒子組成物の製造に使用され得る薬
物としては、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブ
タ成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホル
モン放出ペプチド、顆粒球−コロニー刺激因子、顆粒球
マクロファージ−コロニー刺激因子、マクロファージ−
コロニー刺激因子、エリスロポエチン、骨格形態発生タ
ンパク質、インターフェロン、インスリン、アトリオペ
プチン−III、モノクローナル抗体、腫瘍壊死因子（TN
F）、マクロファージ活性化因子、インターロイキン、
腫瘍変性因子、インスリン−類似成長因子、表皮成長因
子、組織プラスミノゲンアクチベーターおよびウロキナ
ーゼなどがある。 本発明の固体微細粒子組成物の製造に使用され得るヒ
アルロン酸の代表的な無機塩には、ナトリウム、カリウ
ム、リチウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウ
ム、亜鉛、銅およびコバルト塩が含まれる。 本発明に使用され得る安定剤としては、炭水化物、タ
ンパク質、アミノ酸、脂質、脂肪酸、ポリエチレングリ
コール、無機塩および界面活性剤がある。 本発明の微細粒子徐放性組成物は組成物の総量を基準
として１ないし90重量％のタンパク質またはペプチド薬
物を含み、また、選択的に組成物の総量を基準として１
ないし90重量％の安定剤を含み得る。 本発明の徐放性注射剤は、注射剤用媒体に注射剤の総
量を基準として0.01ないし10重量％の本発明の微細粒子
徐放性組成物を分散することによって製造できる。必要
に応じてこれに分散剤または防腐剤をさらに加え得る。
本発明の注射剤に使用され得る一般的な注射剤用媒体と
しては、緩衝水溶液、エタノール、プロピレングリコー
ル、ポリエチレングリコール、植物油、ミネラル油、ス
クアレン、たら肝油、モノ−、ジ−、およびトリ−グリ
セリド、またはこれらの混合物がある。 植物油の例としては、トウモロコシ油、オリーブ油、
大豆油、紅花油、綿実油、落花生油、胡麻油およびこれ
らの混合物がある。 また、本発明の微細粒子徐放性組成物を含むエアロゾ
ル剤を製造し得る。このように製造した本発明のエアロ
ゾル剤は、微細粒子組成物が鼻粘膜や気管支粘膜を通じ
て薬物を調節放出するように適用され得る。 以下、本発明を下記実施例および試験例は本発明を例
示するのみであり、本発明の範囲を制限しない。 実施例1:微細粒子の製造 ヒト成長ホルモン（hGH）2mg/mlを含有する5mMリン酸
塩緩衝溶液（PBS）にツイーン80を0.01重量％の濃度で
加えた。これに、分子量1,000,000のヒアルロン酸ナト
リウムを2mg/mlの濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分
の流速で噴霧乾燥機（Buchi 190）に供給して微細粒子
を製造した。この際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気
の温度は85℃であった。得られた微細粒子の平均粒径は
3.0μｍであった。 実施例2:微細粒子の製造 ヒト成長ホルモン（hGH）1mg/mlを含有する5mM PBSに
ツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子
量2,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを1mg/mlの濃度
で加えた。得られた溶液を2ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して粒子を製造した。この際、噴
霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であった。
得られた微細粒子の平均粒径は2.0μｍであった。 実施例3:微細粒子の製造 ヒト成長ホルモン（hGH）0.1mg/mlを含有する5mM PBS
にツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分
子量2,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを0.9mg/mlの
濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥
機（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は2.0μｍであっ
た。 試験例1:インビトロ放出試験 前記実施例１、２および３で製造した微細粒子を緩衝
溶液（150mM塩化ナトリウム、10mMリン酸塩、0.05％ア
ジ化ナトリウム、pH7.4）にhGHの濃度が1.0mg/mlになる
まで各々懸濁した。得られた分散液をオーブンに入れ、
hGHの放出試験を攪拌機を用いて37℃で行った。一定時
間後、分散液を800xgで10分間遠心分離して全体分散液
の1/10に相当する上澄液を分離した。同一量の緩衝液を
分散液に加えた後さらに37℃で放出試験を続けた。上澄
液におけるhGHの濃度をローリー法および高性能液体ク
ロマトグラフィー（HPLC）で測定してヒト成長ホルモン
の経時放出量を決定した。その結果を図１に示す。 図１は、ヒト成長ホルモン（hGH）のインビトロ経時
溶出量の変化を示す。図１から分かるように、ヒト成長
ホルモンの放出速度はヒアルロン酸の分子量が大きいほ
ど、そしてhGHの含量が少ないほど遅かった。実際に、
実施例３で製造した微細粒子は最も遅い放出速度を示し
た。この結果から薬物の放出期間はヒアルロン酸の分子
量、タンパク質含量などの条件によって調節が可能であ
ることが分かる。また、本発明で製造した微細粒子はイ
ンビトロ放出の際、初期の急激な放出がなく、70％程度
が放出されるまで一定な速度を示すことが分かる。 試験例2:微細粒子中のヒト成長ホルモンの安定性 本発明の微細粒子中のヒト成長ホルモンが微細粒子の
製造に用いた水溶液状のヒト成長ホルモンと同一である
か否かを判断するために、インビトロ放出試験において
微細粒子から放出されたヒト成長ホルモンを逆相高性能
液体クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラ
フィー（SEC）を用いて分析した。 酸化、脱アミド化によるhGHの変性は逆相HPCLによっ
て確認でき、その結果を図2Aおよび2Bに示す。 図2Aおよび2Bは、hGHを含む本発明の徐放性組成物の
薬物安定性を逆相高性能液体クロマトグラフィー（RP−
HPLC）を用いて観察した結果を示し、図2Aは、本発明の
剤形から溶出されたhGHのRP−HPLCプロフィルであり、
図2Bは水溶液hGHコントロールのプロフィールである。 凝集によるhGHの変形はSECで確認でき、その結果を図
3Aおよび3Bに示した。 図3Aおよび3Bは、hGHを含む本発明の徐放性組成物の
薬物安定性をサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）を
用いて観察した結果を示し、図3Aは、本発明の剤形から
溶出されたhGHのSECプロフィールであり、図3Bは水溶液
hGHコントロールのプロフィールである。 図2A、2B、3Aおよび3Bから分かるように、本発明の組
成物から溶出されたヒト成長ホルモンはヒト成長ホルモ
ン水溶液のコントロールと同一であり、hGH単量体の含
量は95％以上であった。この結果からhGHは微細粒子組
成物の製造課程および37℃での溶出課程中において変性
しなかったことが分かる。 試験例3:インビボ溶出試験 低い成長ホルモン分泌の遺伝性を有する矮小ラット
（dwarf rat）を実験動物として用いて本発明の微細粒
子の徐放特性を観察した。 実施例１で製造した徐放性微細粒子をプロピレングリ
コールとエタノールの7:3の比の混合溶液にヒト成長ホ
ルモンの濃度が5mg/mlになるまで分散した。得られた分
散液をヒト成長ホルモンの濃度が0.5mg/mlになるまで緩
衝水溶液（150mM NaCl、リン酸塩10mM、pH7.4）で希釈
した。 103gの平均体重を有する生後７週齢の矮小ラット18匹
を各６匹ずつ３群に分離した。第１群の矮小ラットには
各々前記で製造した微細粒子分散液0.1ml（ヒト成長ホ
ルモン50μｇ）を毎日２週間皮下注射で投与した（実験
群）。第２群の矮小ラットには水溶液状注射剤形として
市販されている公知のユウトロピンＲを同一な条件で投
与した（比較群）。第３群の矮小ラットにはhGHを投与
しなかった（非処理対照群）。ラットの体重変化を測定
するため体重を毎日測定した。 図４は、実験群、比較群および対照群のラットの平均
体重増加の経時変化を比べたものである。 図４から分かるように、実験群のラットは比較群およ
び対照群のラットに比べて２週間の実験期間中遥かに大
きな継続的な体重増加を示した。この結果から本発明の
微細粒子組成物はその徐放特性のため既存の水溶液状剤
形より効力が優れていることが分かる。 試験例4:インビボ溶出試験 実施例２で製造した徐放性微細粒子を綿実油にヒト成
長ホルモンの濃度が1.5mg/mlになるまで分散した。 105gの平均体重を有する生後７週齢の矮小ラット24匹
を各６匹ずつ４群に分離した。第１群の矮小ラットには
各々前記で製造した微細粒子分散液0.1ml（ヒト成長ホ
ルモン150μｇ）を２週間に亘って３日ごとに皮下注射
で投与した（実験群）。第２群の矮小ラットにはユウト
ロピンＲを同一な条件で投与した（比較群）。第３群の
矮小ラットには50μｇのhGHに相当するユウトロピンＲ
を２週間の間毎日投与した（比較群２）。第４群の矮小
ラットにはhGHを投与しなかった（非処理対照群）。ラ
ットの体重変化を測定するため体重を毎日測定した。 図５は、実験群、比較群および対照群のラットの平均
体重増加の経時変化を比べたものである。 図５から分かるように、実験群のラットは比較群およ
び対照群のラットより大きな体重の増加を示した。比較
群１のラットは注射後１日目には相当な体重増加を示し
たが、２日目および３日目には対照群より体重の増加率
が小さかった。実験群と比較群２は継続的な体重増加を
示した。この結果から本発明の微細粒子組成物は少なく
とも３日間持続される徐放性特性を保っていることが分
かる。 試験例5:インビボ溶出試験 実施例２で製造した徐放性微細粒子を綿実油にヒト成
長ホルモンの濃度が1.5mg/mlになるまで分散した。2.5k
gの平均体重を有する８匹のウサギを各４匹ずつ２個の
群に分けた。一つの群のウサギには各々ヒト成長ホルモ
ン3,700μｇを含む微細粒子分散液を注射投与した（実
験群）。他の群のウサギにはhGHを投与しなかった（対
照群）。 投与後、６日間毎日ウサギの血液サンプルを採取し
た。 血液サンプル中のhGHの量をRIA（Radio immuno assa
y）法で定量した。 図６は、血中のヒト成長ホルモン濃度の経時変化を示
す。 図６から分かるように、血中ヒト成長ホルモンの量は
投与後４日間０ないし11ng/mlの範囲で維持され、５日
以降にはしだいに減少した。この結果から本発明の微細
粒子組成物は４日間一定な放出速度を有し、その以降は
放出速度がしだいに減少する特性があることが分かる。
この結果は、hGHのインビトロ放出速度がhGHの70％が放
出されるまで放出速度が一定であるという試験例１の結
果と一致した。これとは対照的に、対照群の血中ヒト成
長ホルモンの濃度はRIA法の感知濃度以下（1ng/ml）の
無視できる範囲にあった。 実施例4:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 ウシ成長ホルモン（bST）2mg/mlを含有する5mM PBSに
ツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子
量1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2mg/mlの濃度
で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は3.0μｍであっ
た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたbSTの安
定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたbSTをサイズ排除クロマトグラフィー法で
定量および定性分析を行った。その結果、bSTは72時間
の間85％以上が溶出され、bSTの変性は起こらなかっ
た。 実施例5:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 ブタ成長ホルモン（pST）2mg/mlを含有する5mM PBSに
ツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子
量1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2mg/mlの濃度
で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は3.0μｍであっ
た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたpSTの安
定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたpSTをサイズ排除クロマトグラフィー法で
定量および定性分析を行った。その結果、pSTは72時間
の間90％以上が溶出され、pSTの変性は起こらなかっ
た。 実施例6:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（granuloc
yte macrophage−colony stimulating factor,GM−CS
F）0.4mg/mlを含有する5mM PBSにツイーン80を0.01重量
％の濃度で加えた。これに、分子量1,000,000のヒアル
ロン酸ナトリウムを1.6mg/mlの濃度で加えた。得られた
溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機（Buchi 190）に供給
して微細粒子を製造した。この際、噴霧乾燥機に流入さ
れる乾燥空気の温度は85℃であった。得られた微細粒子
の平均粒径は3.0μｍであった。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたGM−CSF
の安定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたGM−CSFをサイズ排除クロマトグラフィー
法で定量および定性分析を行った。その結果、GM−CSF
は72時間の間92％以上が溶出され、GM−CSFの変性は起
こらなかった。 実施例7:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 エリトロポエチン（erythropoietin,EPO）1000IU/ml
および血漿アルブミン0.5mg/mlを含有する5mM PBSにツ
イーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子量
1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2.5mg/mlの濃度
で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は3.5μｍであっ
た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたEPOの安
定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたEPOをサイズ排除クロマトグラフィー法で
定量および定性分析を行った。その結果、EPOは72時間
の間70％以上が溶出され、EPOの変性は起こらなかっ
た。 実施例8:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 インターフェロン−アルファ（Interferon−α）2 x
105IU/mlおよび血漿アルブミン0.2mg/mlを含有する5mM
PBSにツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これ
に、分子量1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2.5mg
/mlの濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴
霧乾燥機（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造し
た。この際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は
105℃であった。得られた微細粒子の平均粒径は3.5μｍ
であった。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたインター
フェロン−αの安定性を試験例２の方法に従って調べ
た。 放出されたインターフェロン−αをサイズ排除クロマ
トグラフィー法で定量および定性分析を行った。その結
果、インターフェロン−αは72時間の間90％以上が溶出
され、インターフェロン−αの変性は起こらなかった。 実施例9:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 インターフェロン−ガンマ（Interferon−γ）2 x 10
5IU/ml、グリシン0.2mg/mlおよび血漿アルブミン0.2mg/
mlを含有する5mM PBSにツイーン80を0.01重量％の濃度
で加えた。これに、分子量1,000,000のヒアルロン酸ナ
トリウムを2.5mg/mlの濃度で加えた。得られた溶液を3m
l/分の流速で噴霧乾燥機（Buchi 190）に供給して微細
粒子を製造した。この際、噴霧乾燥機に流入される乾燥
空気の温度は105℃であった。得られた微細粒子の平均
粒径は3.5μｍであった。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたインター
フェロン−γの安定性を試験例２の方法に従って調べ
た。 放出されたインターフェロン−γをサイズ排除クロマ
トグラフィー法で定量および定性分析を行った。その結
果、インターフェロン−γは72時間の間85％以上が溶出
され、インターフェロン−γの変性は起こらなかった。 実施例10:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 インスリン20IU/mlを含有する5mM PBSにツイーン80を
0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子量1,000,000
のヒアルロン酸ナトリウムを2mg/mlの濃度で加えた。得
られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機（Buchi 190）
に供給して微細粒子を製造した。この際、噴霧乾燥機に
流入される乾燥空気の温度は85℃であった。得られた微
細粒子の平均粒径は3.0μｍであった。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたインスリ
ンの安定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたインスリンをサイズ排除クロマトグラフィ
ー法で定量および定性分析を行った。その結果、インス
リンは72時間の間95％以上が溶出され、インスリンの変
性は起こらなかった。 実施例11:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 インスリン−類似成長因子2mg/mlを含有する5mM PBS
のツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分
子量1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2mg/mlの濃
度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は3.0μｍであっ
た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたインスリ
ン−類似成長因子の安定性を試験例２の方法に従って調
べた。 放出されたインスリン−類似成長因子をサイズ排除ク
ロマトグラフィー法で定量および定性分析を行った。そ
の結果、インスリン−類似成長因子は72時間の間90％以
上が溶出され、インスリン−類似成長因子の変性は起こ
らなかった。 比較例1:ゲル剤形の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 hGH 2.3mg/mlを含有する5mM PBSに分子量2,000,000の
ヒアルロン酸ナトリウムを20mg/mlの濃度で加えてhGHを
含有する２％ヒアルロン酸塩ゲル剤形を得た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造したゲル剤形を試験例１の方法に従って
試験した。その結果、１時間以内にhGH100％が放出され
た。この結果からゲル剤形は、水によって容易に希釈さ
れるため本発明の微細粒子より短い時間内に薬物を放出
することが分かる。 比較例2:ゲル剤形の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 hGH 1.5mg/mlを含有する5mM PBSに分子量2,000,000の
ヒアルロン酸ナトリウムを20mg/mlの濃度で加えてhGHを
含有する非流動性ゲル剤形を得た。 得られたゲル剤形1mlを綿実油2mlに分散し、均質化し
てエマルジョンを形成した。 （段階２）インビトロ溶出試験 95gの平均体重を有する生後７週齢の矮小ラット24匹
を各６匹ずつ４群に分離した。一つの群には段階１で製
造したエマルジョン0.3ml（150μｇのhGH）を皮下注射
によって投与した（第１群）。 エマルジョン剤形の効果を他の剤形と比べるために、
他の二つの群のラットには、各々実施例２で製造した徐
放性微細粒子をヒト成長ホルモンの濃度が150μｇにな
るまで綿実油に分散した分散剤を投与し（第２群）；ヒ
ト成長ホルモン150μｇに相当するユウトロピンＲを投
与した（第３群）。残りの群のラットにはヒト成長ホル
モン剤形を投与しなかった（対照群）。投与後ラットの
体重増加の変化を６日間観察した。 図７は、ヒト成長ホルモンを含む本発明の徐放性剤形
および通常の剤形で処理した矮小ラットの平均体重増加
の経時変化を比べたものである。結果としては、ヒアル
ロン酸ゲル剤形で処理した矮小ラットの体重増加の経時
変化はユウトロピンＲと類似であった。ヒアルロン酸ゲ
ル剤形で処理した矮小ラットの体重は投与２日または３
日後減少し、以降は無投与対照群ラットの体重と類似で
あった。しかし、本発明の剤形で処理した群のラットは
他の群に比べて６日間150％の体重増加を示した。 比較例3:ナトリウム−カルボキシメチルセルロースを用
いた微細粒子剤形の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子剤形の製造 hGH 2.0mg/mlを含有する5mM PBSにツイーン80を0.01
重量％の濃度で加えた。これに、ナトリウム−カルボキ
シメチルセルロース（Na−CMC、中粘度級）を1.8mg/ml
の濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾
燥機（Buchi 190）に供給した。この際、噴霧乾燥機へ
流入される乾燥空気の温度は85℃であり、得られた微細
粒子の平均粒子は3.0μｍである。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子剤形を試験例１と同様な方
法でインビトロ溶出試験を行って、その結果を表１に示
す。
中に封入されたタンパク質またはペプチド薬物の徐放性
組成物およびそれを含む注射剤形に関する。 発明の背景 タンパク質またはペプチド薬物は経口投与すると吸収
が遅いため、通常注射によって投与される。一回の注射
投与による薬物の体内における活性維持期間が短いた
め、長期間の治療が必要な場合にはこれらの薬物を繰返
して継続的に注射投与しなければならない。たとえば、
脳下垂体欠乏性矮小症の小児を治療するためには、組換
えヒト成長ホルモンを６ヶ月以上毎日注射しなければな
らない。したがって、このような連日投与の不便を解消
できる徐放性剤形の開発が要求されている。 ヒト成長ホルモンのようなタンパク質またはペプチド
薬物の徐放性剤形は、体内で徐々に加水分解する生分解
性高分子マトリックス物質の微細粒子中に薬物を封入す
ることによって製造される。このような観点から、徐放
性薬剤用に適合な生分解性高分子の開発研究が活発に行
われ、その結果、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ
（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ−オルト−エステ
ルおよびポリアンヒドリド（polyanhydride）のような
生分解性ポリエステルが上記の用途に効果的であること
が明らかになった（M.Chasin ＆ R.Langer,et al.,Biod
egradable Polymers as Drug Delivery System,Marcel
Dekker,（1990）;J.Heller,Adv.Drug Del.Rev.,10,163
（1993）。 また、ゼラチン、コラーゲン、キトサン、カルボキシ
メチルセルロース、アルギネートおよびヒアルロン酸の
ような天然高分子物質を用いる徐放性薬剤の開発研究も
進まれている。一般に、これらの天然高分子は、水の存
在の下でゲルを形成し、このような高粘度で非常に低い
薬物拡散速度を有するゲル型のマトリックスが徐放性薬
物組成物の製造に用いられる。 たとえば、米国特許出願第5,416,017号は、0.01ない
し３％のヒアルロン酸を含むゲルを用いたエリスロポエ
チン（erythropoietin）の徐放性注射剤を開示してお
り、日本特開平１−287041号は、１％のヒアルロン酸で
製造されたゲルを用いたインスリンの徐放性注射剤を記
述しており、また日本特開平２−00213号は、５％のヒ
アルロン酸を含むゲルを用いたカルシトニン、エルカノ
ニンまたはヒト成長ホルモンの徐放性剤形を記述してい
る。同様に、メイヤーらは0.5ないし４％のヒアルロン
酸を含むゲルを用いた顆粒球コロニー刺激因子の徐放性
剤形を報告した（James Meyer,et al.,J.Controlled Re
l.,35,67（1995））。 しかし、数％濃度のヒアルロン酸を含むゲルは107セ
ンチポイズ程度の高い粘度を有するため、このような剤
形を注射投与する場合大きい口径の注射針を用いなけれ
ばならない。さらに、人体に投与されたゲルは体液によ
って希釈されることによって薬物の保留性を容易に失う
ので、薬物の放出が１日以上持続しない。たとえば、日
本特開平1287041号は、１％のヒアルロン酸を含むイン
スリンの徐放性注射剤をウサギに注射した場合、グルコ
ースの血中濃度を低下させる治療効果が24時間以上持続
しないことを記述している。また、顆粒球コロニー刺激
因子を含有する２％のヒアルロン酸剤形（James Meyer,
et al.,J.Controlled Rel.,35,67（1995））またはイン
ターフェロン−αおよび血漿タンパク質を含有する1.5
％のヒアルロン酸剤形（米国特許第5,416,017号）を実
験動物に投与した場合、血中薬物濃度が24時間以内に初
期濃度の1/10以下に急激に落ちることを報告した。すな
わち、ヒアルロン酸ゲルの徐放性薬剤は薬物の放出が24
時間以上持続しないという短所を有する。 天然ヒアルロン酸またはその無機塩は水にのみ溶解す
る。一方、ヒアルロン酸−ベンジルエステルHYAFFTMは
水に溶けないが、ジメチルスルホキシドのような有機溶
媒に溶ける。前記疎水性ヒアルロン酸誘導体およびこれ
に薬物の固体微細粒子を封入した薬物組成物は通常のエ
マルジョン溶媒抽出法で製造される（N.S.Nightlinger,
et al.,proceed.Intern.Symp.Control.Rel.Bioact.Mate
r.,22nd,Paper No.3205（1995）;L.Ilum,et al.,J.Cont
rolled Rel.,29,133（1994））。この方法を簡単に説明
すると、タンパク質薬物粒子をヒアルロン酸−ベンジル
エステルのジメチルスルホキシド溶液に分散し、得られ
た分散液をミネラル油に加えてエマルジョンを形成させ
る。このエマルジョンに酢酸エチルのような有機溶媒を
加えてジメチルスルホキシドを抽出して薬物およびヒア
ルロン酸−ベンジルエステルで構成された微細粒子を得
る。 しかし、前記方法は、タンパク質薬物が有機溶媒また
は疎水性ヒアルロン酸ベンジルエステルと接触すること
によって変性するという問題を有する。実際に、完全に
エステル化されたヒアルロン酸誘導体を用いて製造した
顆粒球コロニー刺激因子の微細粒子剤形は、初めの数日
間顆粒球コロニー刺激因子含有量の25％が放出されるの
みで、その後17日間は全然放出されないと報告された
（N.S.Nightlinger,et al.,proceed.Intern.Symp.Contr
ol.Rel.Bioact.Mater.,22nd,Paper No.3205（199
5））。この場合、タンパク質薬物の大部分が損失され
たが、ヒアルロン酸−ベンジルエステルおよび／または
有機溶媒との相互作用によって変性された可能性が高
い。 発明の要約 したがって、本発明の目的は、タンパク質またはペプ
チド薬物の改善された徐放性剤形を提供することであ
る。 本発明の他の目的は、ヒアルロン酸またはこれらの無
機塩の微細粒子および前記微細粒子中に封入されたタン
パク質またはペプチド薬物を含む徐放性薬物組成物を提
供することであり、ここで、前記微細粒子の平均粒径は
0.1ないし40μｍ範囲である。 図面の簡単な説明 本発明の前記および他の目的および特色は、下記の図
面を伴う本発明の説明によって明らかになる。 図１は、ヒト成長ホルモン（hGH）の体外溶出量の経
時変化を示し、 図2Aおよび2Bは、本発明のhGHを含む徐放性組成物の
薬物安定性を逆相高性能液体クロマトグラフィー（RP−
HPLC）を用いて観察した結果であり（a:本発明の剤形か
ら溶出されたhGH;およびb:hGH水溶液の対照群）、 図3Aおよび3Bは、本発明のhGHを含む徐放性組成物の
薬物安定性をサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）を
用いて観察した結果であり（A:本発明の剤形から溶出さ
れたhGH;およびB:hGH水溶液の対照群）、 図４は、ヒド成長ホルモンを含む本発明の徐放性剤形
および通常の剤形で処理した矮小ラットの平均体重増加
の経時変化を比べたものであり、 図５は、ヒト成長ホルモンを含む本発明の徐放性剤形
および通常の剤形で処理した矮小ラットの平均体重増加
の経時変化を比べたものであり、 図６は、血中ヒト成長ホルモン濃度の経時変化を示し
たものであり；および 図７は、ヒト成長ホルモンを含む本発明の徐放性剤形
および通常の剤形で処理した矮小ラットの平均体重増加
の経時変化を比べたものである。 発明の詳細な説明 本発明の徐放性組成物は、ヒアルロン酸またはその塩
の固体微細粒子および前記粒子中に封入されたタンパク
質またはペプチド薬物を含む。本発明の組成物は、既存
のヒアルロン酸ゲルを用いた剤形より薬物の放出持続期
間が長く、また取扱いやすい。すなわち、本発明の微細
粒子組成物を用いて製造した注射剤形は低い粘度を有す
るため投与しやすく、生体内で薬物を長期間に亘って一
定な速度で放出する。 また、本発明の組成物は組成物から薬物が100％放出
されるまで薬物が変性しないという長所を有する。 0.1ないし40μｍ、好ましくは１ないし10μｍの平均
粒径を有する本発明の微細粒子組成物は、タンパク質ま
たはペプチド薬物およびヒアルロン酸またはその塩を含
む水溶液を噴霧乾燥または凍結乾燥することによって製
造し得る。必要に応じて溶液に安定剤を加え得る。 本発明の固体微細粒子組成物の製造に使用され得る薬
物としては、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブ
タ成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホル
モン放出ペプチド、顆粒球−コロニー刺激因子、顆粒球
マクロファージ−コロニー刺激因子、マクロファージ−
コロニー刺激因子、エリスロポエチン、骨格形態発生タ
ンパク質、インターフェロン、インスリン、アトリオペ
プチン−III、モノクローナル抗体、腫瘍壊死因子（TN
F）、マクロファージ活性化因子、インターロイキン、
腫瘍変性因子、インスリン−類似成長因子、表皮成長因
子、組織プラスミノゲンアクチベーターおよびウロキナ
ーゼなどがある。 本発明の固体微細粒子組成物の製造に使用され得るヒ
アルロン酸の代表的な無機塩には、ナトリウム、カリウ
ム、リチウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウ
ム、亜鉛、銅およびコバルト塩が含まれる。 本発明に使用され得る安定剤としては、炭水化物、タ
ンパク質、アミノ酸、脂質、脂肪酸、ポリエチレングリ
コール、無機塩および界面活性剤がある。 本発明の微細粒子徐放性組成物は組成物の総量を基準
として１ないし90重量％のタンパク質またはペプチド薬
物を含み、また、選択的に組成物の総量を基準として１
ないし90重量％の安定剤を含み得る。 本発明の徐放性注射剤は、注射剤用媒体に注射剤の総
量を基準として0.01ないし10重量％の本発明の微細粒子
徐放性組成物を分散することによって製造できる。必要
に応じてこれに分散剤または防腐剤をさらに加え得る。
本発明の注射剤に使用され得る一般的な注射剤用媒体と
しては、緩衝水溶液、エタノール、プロピレングリコー
ル、ポリエチレングリコール、植物油、ミネラル油、ス
クアレン、たら肝油、モノ−、ジ−、およびトリ−グリ
セリド、またはこれらの混合物がある。 植物油の例としては、トウモロコシ油、オリーブ油、
大豆油、紅花油、綿実油、落花生油、胡麻油およびこれ
らの混合物がある。 また、本発明の微細粒子徐放性組成物を含むエアロゾ
ル剤を製造し得る。このように製造した本発明のエアロ
ゾル剤は、微細粒子組成物が鼻粘膜や気管支粘膜を通じ
て薬物を調節放出するように適用され得る。 以下、本発明を下記実施例および試験例は本発明を例
示するのみであり、本発明の範囲を制限しない。 実施例1:微細粒子の製造 ヒト成長ホルモン（hGH）2mg/mlを含有する5mMリン酸
塩緩衝溶液（PBS）にツイーン80を0.01重量％の濃度で
加えた。これに、分子量1,000,000のヒアルロン酸ナト
リウムを2mg/mlの濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分
の流速で噴霧乾燥機（Buchi 190）に供給して微細粒子
を製造した。この際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気
の温度は85℃であった。得られた微細粒子の平均粒径は
3.0μｍであった。 実施例2:微細粒子の製造 ヒト成長ホルモン（hGH）1mg/mlを含有する5mM PBSに
ツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子
量2,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを1mg/mlの濃度
で加えた。得られた溶液を2ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して粒子を製造した。この際、噴
霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であった。
得られた微細粒子の平均粒径は2.0μｍであった。 実施例3:微細粒子の製造 ヒト成長ホルモン（hGH）0.1mg/mlを含有する5mM PBS
にツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分
子量2,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを0.9mg/mlの
濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥
機（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は2.0μｍであっ
た。 試験例1:インビトロ放出試験 前記実施例１、２および３で製造した微細粒子を緩衝
溶液（150mM塩化ナトリウム、10mMリン酸塩、0.05％ア
ジ化ナトリウム、pH7.4）にhGHの濃度が1.0mg/mlになる
まで各々懸濁した。得られた分散液をオーブンに入れ、
hGHの放出試験を攪拌機を用いて37℃で行った。一定時
間後、分散液を800xgで10分間遠心分離して全体分散液
の1/10に相当する上澄液を分離した。同一量の緩衝液を
分散液に加えた後さらに37℃で放出試験を続けた。上澄
液におけるhGHの濃度をローリー法および高性能液体ク
ロマトグラフィー（HPLC）で測定してヒト成長ホルモン
の経時放出量を決定した。その結果を図１に示す。 図１は、ヒト成長ホルモン（hGH）のインビトロ経時
溶出量の変化を示す。図１から分かるように、ヒト成長
ホルモンの放出速度はヒアルロン酸の分子量が大きいほ
ど、そしてhGHの含量が少ないほど遅かった。実際に、
実施例３で製造した微細粒子は最も遅い放出速度を示し
た。この結果から薬物の放出期間はヒアルロン酸の分子
量、タンパク質含量などの条件によって調節が可能であ
ることが分かる。また、本発明で製造した微細粒子はイ
ンビトロ放出の際、初期の急激な放出がなく、70％程度
が放出されるまで一定な速度を示すことが分かる。 試験例2:微細粒子中のヒト成長ホルモンの安定性 本発明の微細粒子中のヒト成長ホルモンが微細粒子の
製造に用いた水溶液状のヒト成長ホルモンと同一である
か否かを判断するために、インビトロ放出試験において
微細粒子から放出されたヒト成長ホルモンを逆相高性能
液体クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラ
フィー（SEC）を用いて分析した。 酸化、脱アミド化によるhGHの変性は逆相HPCLによっ
て確認でき、その結果を図2Aおよび2Bに示す。 図2Aおよび2Bは、hGHを含む本発明の徐放性組成物の
薬物安定性を逆相高性能液体クロマトグラフィー（RP−
HPLC）を用いて観察した結果を示し、図2Aは、本発明の
剤形から溶出されたhGHのRP−HPLCプロフィルであり、
図2Bは水溶液hGHコントロールのプロフィールである。 凝集によるhGHの変形はSECで確認でき、その結果を図
3Aおよび3Bに示した。 図3Aおよび3Bは、hGHを含む本発明の徐放性組成物の
薬物安定性をサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）を
用いて観察した結果を示し、図3Aは、本発明の剤形から
溶出されたhGHのSECプロフィールであり、図3Bは水溶液
hGHコントロールのプロフィールである。 図2A、2B、3Aおよび3Bから分かるように、本発明の組
成物から溶出されたヒト成長ホルモンはヒト成長ホルモ
ン水溶液のコントロールと同一であり、hGH単量体の含
量は95％以上であった。この結果からhGHは微細粒子組
成物の製造課程および37℃での溶出課程中において変性
しなかったことが分かる。 試験例3:インビボ溶出試験 低い成長ホルモン分泌の遺伝性を有する矮小ラット
（dwarf rat）を実験動物として用いて本発明の微細粒
子の徐放特性を観察した。 実施例１で製造した徐放性微細粒子をプロピレングリ
コールとエタノールの7:3の比の混合溶液にヒト成長ホ
ルモンの濃度が5mg/mlになるまで分散した。得られた分
散液をヒト成長ホルモンの濃度が0.5mg/mlになるまで緩
衝水溶液（150mM NaCl、リン酸塩10mM、pH7.4）で希釈
した。 103gの平均体重を有する生後７週齢の矮小ラット18匹
を各６匹ずつ３群に分離した。第１群の矮小ラットには
各々前記で製造した微細粒子分散液0.1ml（ヒト成長ホ
ルモン50μｇ）を毎日２週間皮下注射で投与した（実験
群）。第２群の矮小ラットには水溶液状注射剤形として
市販されている公知のユウトロピンＲを同一な条件で投
与した（比較群）。第３群の矮小ラットにはhGHを投与
しなかった（非処理対照群）。ラットの体重変化を測定
するため体重を毎日測定した。 図４は、実験群、比較群および対照群のラットの平均
体重増加の経時変化を比べたものである。 図４から分かるように、実験群のラットは比較群およ
び対照群のラットに比べて２週間の実験期間中遥かに大
きな継続的な体重増加を示した。この結果から本発明の
微細粒子組成物はその徐放特性のため既存の水溶液状剤
形より効力が優れていることが分かる。 試験例4:インビボ溶出試験 実施例２で製造した徐放性微細粒子を綿実油にヒト成
長ホルモンの濃度が1.5mg/mlになるまで分散した。 105gの平均体重を有する生後７週齢の矮小ラット24匹
を各６匹ずつ４群に分離した。第１群の矮小ラットには
各々前記で製造した微細粒子分散液0.1ml（ヒト成長ホ
ルモン150μｇ）を２週間に亘って３日ごとに皮下注射
で投与した（実験群）。第２群の矮小ラットにはユウト
ロピンＲを同一な条件で投与した（比較群）。第３群の
矮小ラットには50μｇのhGHに相当するユウトロピンＲ
を２週間の間毎日投与した（比較群２）。第４群の矮小
ラットにはhGHを投与しなかった（非処理対照群）。ラ
ットの体重変化を測定するため体重を毎日測定した。 図５は、実験群、比較群および対照群のラットの平均
体重増加の経時変化を比べたものである。 図５から分かるように、実験群のラットは比較群およ
び対照群のラットより大きな体重の増加を示した。比較
群１のラットは注射後１日目には相当な体重増加を示し
たが、２日目および３日目には対照群より体重の増加率
が小さかった。実験群と比較群２は継続的な体重増加を
示した。この結果から本発明の微細粒子組成物は少なく
とも３日間持続される徐放性特性を保っていることが分
かる。 試験例5:インビボ溶出試験 実施例２で製造した徐放性微細粒子を綿実油にヒト成
長ホルモンの濃度が1.5mg/mlになるまで分散した。2.5k
gの平均体重を有する８匹のウサギを各４匹ずつ２個の
群に分けた。一つの群のウサギには各々ヒト成長ホルモ
ン3,700μｇを含む微細粒子分散液を注射投与した（実
験群）。他の群のウサギにはhGHを投与しなかった（対
照群）。 投与後、６日間毎日ウサギの血液サンプルを採取し
た。 血液サンプル中のhGHの量をRIA（Radio immuno assa
y）法で定量した。 図６は、血中のヒト成長ホルモン濃度の経時変化を示
す。 図６から分かるように、血中ヒト成長ホルモンの量は
投与後４日間０ないし11ng/mlの範囲で維持され、５日
以降にはしだいに減少した。この結果から本発明の微細
粒子組成物は４日間一定な放出速度を有し、その以降は
放出速度がしだいに減少する特性があることが分かる。
この結果は、hGHのインビトロ放出速度がhGHの70％が放
出されるまで放出速度が一定であるという試験例１の結
果と一致した。これとは対照的に、対照群の血中ヒト成
長ホルモンの濃度はRIA法の感知濃度以下（1ng/ml）の
無視できる範囲にあった。 実施例4:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 ウシ成長ホルモン（bST）2mg/mlを含有する5mM PBSに
ツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子
量1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2mg/mlの濃度
で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は3.0μｍであっ
た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたbSTの安
定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたbSTをサイズ排除クロマトグラフィー法で
定量および定性分析を行った。その結果、bSTは72時間
の間85％以上が溶出され、bSTの変性は起こらなかっ
た。 実施例5:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 ブタ成長ホルモン（pST）2mg/mlを含有する5mM PBSに
ツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子
量1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2mg/mlの濃度
で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は3.0μｍであっ
た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたpSTの安
定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたpSTをサイズ排除クロマトグラフィー法で
定量および定性分析を行った。その結果、pSTは72時間
の間90％以上が溶出され、pSTの変性は起こらなかっ
た。 実施例6:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（granuloc
yte macrophage−colony stimulating factor,GM−CS
F）0.4mg/mlを含有する5mM PBSにツイーン80を0.01重量
％の濃度で加えた。これに、分子量1,000,000のヒアル
ロン酸ナトリウムを1.6mg/mlの濃度で加えた。得られた
溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機（Buchi 190）に供給
して微細粒子を製造した。この際、噴霧乾燥機に流入さ
れる乾燥空気の温度は85℃であった。得られた微細粒子
の平均粒径は3.0μｍであった。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたGM−CSF
の安定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたGM−CSFをサイズ排除クロマトグラフィー
法で定量および定性分析を行った。その結果、GM−CSF
は72時間の間92％以上が溶出され、GM−CSFの変性は起
こらなかった。 実施例7:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 エリトロポエチン（erythropoietin,EPO）1000IU/ml
および血漿アルブミン0.5mg/mlを含有する5mM PBSにツ
イーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子量
1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2.5mg/mlの濃度
で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は3.5μｍであっ
た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたEPOの安
定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたEPOをサイズ排除クロマトグラフィー法で
定量および定性分析を行った。その結果、EPOは72時間
の間70％以上が溶出され、EPOの変性は起こらなかっ
た。 実施例8:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 インターフェロン−アルファ（Interferon−α）2 x
105IU/mlおよび血漿アルブミン0.2mg/mlを含有する5mM
PBSにツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これ
に、分子量1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2.5mg
/mlの濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴
霧乾燥機（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造し
た。この際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は
105℃であった。得られた微細粒子の平均粒径は3.5μｍ
であった。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたインター
フェロン−αの安定性を試験例２の方法に従って調べ
た。 放出されたインターフェロン−αをサイズ排除クロマ
トグラフィー法で定量および定性分析を行った。その結
果、インターフェロン−αは72時間の間90％以上が溶出
され、インターフェロン−αの変性は起こらなかった。 実施例9:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 インターフェロン−ガンマ（Interferon−γ）2 x 10
5IU/ml、グリシン0.2mg/mlおよび血漿アルブミン0.2mg/
mlを含有する5mM PBSにツイーン80を0.01重量％の濃度
で加えた。これに、分子量1,000,000のヒアルロン酸ナ
トリウムを2.5mg/mlの濃度で加えた。得られた溶液を3m
l/分の流速で噴霧乾燥機（Buchi 190）に供給して微細
粒子を製造した。この際、噴霧乾燥機に流入される乾燥
空気の温度は105℃であった。得られた微細粒子の平均
粒径は3.5μｍであった。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたインター
フェロン−γの安定性を試験例２の方法に従って調べ
た。 放出されたインターフェロン−γをサイズ排除クロマ
トグラフィー法で定量および定性分析を行った。その結
果、インターフェロン−γは72時間の間85％以上が溶出
され、インターフェロン−γの変性は起こらなかった。 実施例10:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 インスリン20IU/mlを含有する5mM PBSにツイーン80を
0.01重量％の濃度で加えた。これに、分子量1,000,000
のヒアルロン酸ナトリウムを2mg/mlの濃度で加えた。得
られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機（Buchi 190）
に供給して微細粒子を製造した。この際、噴霧乾燥機に
流入される乾燥空気の温度は85℃であった。得られた微
細粒子の平均粒径は3.0μｍであった。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたインスリ
ンの安定性を試験例２の方法に従って調べた。 放出されたインスリンをサイズ排除クロマトグラフィ
ー法で定量および定性分析を行った。その結果、インス
リンは72時間の間95％以上が溶出され、インスリンの変
性は起こらなかった。 実施例11:微細粒子の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 インスリン−類似成長因子2mg/mlを含有する5mM PBS
のツイーン80を0.01重量％の濃度で加えた。これに、分
子量1,000,000のヒアルロン酸ナトリウムを2mg/mlの濃
度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾燥機
（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。この
際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃であ
った。得られた微細粒子の平均粒径は3.0μｍであっ
た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を用いて試験例１の方法に
従ってインビトロ溶出試験を行い、溶出されたインスリ
ン−類似成長因子の安定性を試験例２の方法に従って調
べた。 放出されたインスリン−類似成長因子をサイズ排除ク
ロマトグラフィー法で定量および定性分析を行った。そ
の結果、インスリン−類似成長因子は72時間の間90％以
上が溶出され、インスリン−類似成長因子の変性は起こ
らなかった。 比較例1:ゲル剤形の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 hGH 2.3mg/mlを含有する5mM PBSに分子量2,000,000の
ヒアルロン酸ナトリウムを20mg/mlの濃度で加えてhGHを
含有する２％ヒアルロン酸塩ゲル剤形を得た。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造したゲル剤形を試験例１の方法に従って
試験した。その結果、１時間以内にhGH100％が放出され
た。この結果からゲル剤形は、水によって容易に希釈さ
れるため本発明の微細粒子より短い時間内に薬物を放出
することが分かる。 比較例2:ゲル剤形の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子の製造 hGH 1.5mg/mlを含有する5mM PBSに分子量2,000,000の
ヒアルロン酸ナトリウムを20mg/mlの濃度で加えてhGHを
含有する非流動性ゲル剤形を得た。 得られたゲル剤形1mlを綿実油2mlに分散し、均質化し
てエマルジョンを形成した。 （段階２）インビトロ溶出試験 95gの平均体重を有する生後７週齢の矮小ラット24匹
を各６匹ずつ４群に分離した。一つの群には段階１で製
造したエマルジョン0.3ml（150μｇのhGH）を皮下注射
によって投与した（第１群）。 エマルジョン剤形の効果を他の剤形と比べるために、
他の二つの群のラットには、各々実施例２で製造した徐
放性微細粒子をヒト成長ホルモンの濃度が150μｇにな
るまで綿実油に分散した分散剤を投与し（第２群）；ヒ
ト成長ホルモン150μｇに相当するユウトロピンＲを投
与した（第３群）。残りの群のラットにはヒト成長ホル
モン剤形を投与しなかった（対照群）。投与後ラットの
体重増加の変化を６日間観察した。 図７は、ヒト成長ホルモンを含む本発明の徐放性剤形
および通常の剤形で処理した矮小ラットの平均体重増加
の経時変化を比べたものである。結果としては、ヒアル
ロン酸ゲル剤形で処理した矮小ラットの体重増加の経時
変化はユウトロピンＲと類似であった。ヒアルロン酸ゲ
ル剤形で処理した矮小ラットの体重は投与２日または３
日後減少し、以降は無投与対照群ラットの体重と類似で
あった。しかし、本発明の剤形で処理した群のラットは
他の群に比べて６日間150％の体重増加を示した。 比較例3:ナトリウム−カルボキシメチルセルロースを用
いた微細粒子剤形の製造およびインビトロ溶出試験 （段階１）微細粒子剤形の製造 hGH 2.0mg/mlを含有する5mM PBSにツイーン80を0.01
重量％の濃度で加えた。これに、ナトリウム−カルボキ
シメチルセルロース（Na−CMC、中粘度級）を1.8mg/ml
の濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾
燥機（Buchi 190）に供給した。この際、噴霧乾燥機へ
流入される乾燥空気の温度は85℃であり、得られた微細
粒子の平均粒子は3.0μｍである。 （段階２）インビトロ溶出試験 段階１で製造した微細粒子剤形を試験例１と同様な方
法でインビトロ溶出試験を行って、その結果を表１に示
す。
【表１】
表１から分かるように、段階１で製造した微細粒子剤
形のインビトロ放出の経時変化は本発明の微細粒子の場
合と異なる。すなわち、初期１時間の間30％が放出さ
れ、以降48時間までまた30％程度が放出され、その後は
hGHがほとんど放出されなかった。この結果から、ヒア
ルロン酸より疎水性が強い天然炭水化物系の高分子をマ
トリックス物質として用いる場合には、タンパク質薬物
とマトリックスとの相互作用によって薬物の放出量が不
均衡になり、薬物の変性可能性が非常に高いことが分か
る。 （段階３）インビボ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を綿実油に分散した。得ら
れた分散剤を生後７週齢の矮小ラットに300μｇの量で
投与し、非投与群を対照群として用いた。ラットの体重
増加を７日間観察し、その結果を体重増加の累積値
（ｇ）として下記表２に示す。
形のインビトロ放出の経時変化は本発明の微細粒子の場
合と異なる。すなわち、初期１時間の間30％が放出さ
れ、以降48時間までまた30％程度が放出され、その後は
hGHがほとんど放出されなかった。この結果から、ヒア
ルロン酸より疎水性が強い天然炭水化物系の高分子をマ
トリックス物質として用いる場合には、タンパク質薬物
とマトリックスとの相互作用によって薬物の放出量が不
均衡になり、薬物の変性可能性が非常に高いことが分か
る。 （段階３）インビボ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を綿実油に分散した。得ら
れた分散剤を生後７週齢の矮小ラットに300μｇの量で
投与し、非投与群を対照群として用いた。ラットの体重
増加を７日間観察し、その結果を体重増加の累積値
（ｇ）として下記表２に示す。
【表２】
表２から分かるように、段階１で製造した微細粒子で
処理したラットは比較例２においてのヒアルロン酸ゲル
剤形と類似な体重増加様相を示した。すなわち、初日に
のみ体重の増加を示し、２日目は体重の減少を示した。
また、その以降には対照群より体重増加率がさらに低
く、最後の７日には対照群と類似な体重増加を示した。
この結果からヒアルロン酸と同様にNa−CMCは天然然炭
水化物系重合体であるが、Na−CMC剤形は本発明のヒア
ルロン酸微細粒子より遥かに劣る放出特性および力価を
有することが分かる。 比較例4:ヒアルロン酸−ベンジルエステルを用いた微細
粒子剤形の製造ならびにインビボおよびインビトロ溶出
試験 （段階１）微細粒子剤形の製造 天然ヒアルロン酸およびベンジルアルコールを化学的
に反応させてヒアルロン酸−ベンジルエステルを製造し
た後、hGHを含む微細粒子を下記のように製造した。 hGH 2mg/mlを含む5mM PBSにツイーン80を0.01重量％
の濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾
燥機（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。こ
の際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃で
あった。得られた微細粒子の平均粒径は2.5μｍであ
る。 製造された粒子を６％のヒアルロン酸−ベンジルエス
テルを含有するジメチルスルホキシド（DMSO）に分散し
た後、得られた分散液を界面活性剤、Aracel ATM（ICI,
U.S.A.）を含有するミネラル油に加えた後、混合物を均
質化してマイクロエマルジョンを作った。得られたマイ
クロエマルジョンは、ミネラル油連続相と、その中に分
散されたhGHを含有するヒアルロン酸−ベンジルエステ
ル/DMSO溶液の分散相からなる。 得られたマイクロエマルジョンに酢酸エチルを攪拌し
ながら加えた後、DMSOを酢酸エチルで抽出し、ヒアルロ
ン酸−ベンジルエステルが硬化してhGH粒子を含有する
ヒアルロン酸−ベンジルエステル粒子が形成した。得ら
れた最終粒子の大きさは5.5μｍであり、hGHの含量は45
％であった。 （段階２）インビボ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を試験例１と同様な方法で
試験し、その結果を下記表３に示す。
処理したラットは比較例２においてのヒアルロン酸ゲル
剤形と類似な体重増加様相を示した。すなわち、初日に
のみ体重の増加を示し、２日目は体重の減少を示した。
また、その以降には対照群より体重増加率がさらに低
く、最後の７日には対照群と類似な体重増加を示した。
この結果からヒアルロン酸と同様にNa−CMCは天然然炭
水化物系重合体であるが、Na−CMC剤形は本発明のヒア
ルロン酸微細粒子より遥かに劣る放出特性および力価を
有することが分かる。 比較例4:ヒアルロン酸−ベンジルエステルを用いた微細
粒子剤形の製造ならびにインビボおよびインビトロ溶出
試験 （段階１）微細粒子剤形の製造 天然ヒアルロン酸およびベンジルアルコールを化学的
に反応させてヒアルロン酸−ベンジルエステルを製造し
た後、hGHを含む微細粒子を下記のように製造した。 hGH 2mg/mlを含む5mM PBSにツイーン80を0.01重量％
の濃度で加えた。得られた溶液を3ml/分の流速で噴霧乾
燥機（Buchi 190）に供給して微細粒子を製造した。こ
の際、噴霧乾燥機に流入される乾燥空気の温度は85℃で
あった。得られた微細粒子の平均粒径は2.5μｍであ
る。 製造された粒子を６％のヒアルロン酸−ベンジルエス
テルを含有するジメチルスルホキシド（DMSO）に分散し
た後、得られた分散液を界面活性剤、Aracel ATM（ICI,
U.S.A.）を含有するミネラル油に加えた後、混合物を均
質化してマイクロエマルジョンを作った。得られたマイ
クロエマルジョンは、ミネラル油連続相と、その中に分
散されたhGHを含有するヒアルロン酸−ベンジルエステ
ル/DMSO溶液の分散相からなる。 得られたマイクロエマルジョンに酢酸エチルを攪拌し
ながら加えた後、DMSOを酢酸エチルで抽出し、ヒアルロ
ン酸−ベンジルエステルが硬化してhGH粒子を含有する
ヒアルロン酸−ベンジルエステル粒子が形成した。得ら
れた最終粒子の大きさは5.5μｍであり、hGHの含量は45
％であった。 （段階２）インビボ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を試験例１と同様な方法で
試験し、その結果を下記表３に示す。
【表３】
表３から分かるように、天然ヒアルロン酸に疎水性を
与えたヒアルロン酸−ベンジルエステルを用いることに
よって製造した微細粒子剤形からのhGHの放出は初期５
時間以後にはほとんどなかった。このようにhGHが放出
されない理由はタンパク質薬物（hGH）とヒアルロン酸
−ベンジルエステルマトリックスとの相互作用があまり
にも強いからである。 （段階３）インビボ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を綿実油に分散した。得ら
れた分散液を生後７週齢の矮小ラットにhGHの量が300g
になるように投与し、対照群として非投与群を用いた。
ラットの体重増加を７日間観察し、その結果を体重増加
累積値（ｇ）として下記表４に示す。
与えたヒアルロン酸−ベンジルエステルを用いることに
よって製造した微細粒子剤形からのhGHの放出は初期５
時間以後にはほとんどなかった。このようにhGHが放出
されない理由はタンパク質薬物（hGH）とヒアルロン酸
−ベンジルエステルマトリックスとの相互作用があまり
にも強いからである。 （段階３）インビボ溶出試験 段階１で製造した微細粒子を綿実油に分散した。得ら
れた分散液を生後７週齢の矮小ラットにhGHの量が300g
になるように投与し、対照群として非投与群を用いた。
ラットの体重増加を７日間観察し、その結果を体重増加
累積値（ｇ）として下記表４に示す。
【表４】
A:対照群
B:ヒアルロン酸−ベンジルエステル微細粒子剤形群
表４から分かるように、ヒアルロン酸−ベンジルエス
テル粒子剤形は１日以降ほとんど効果がないことが分か
る。 本発明を前記特定実施態様と関連して記述したが、添
付した特許請求範囲によって定義される本発明の範囲内
で、当該分野の熟練者が本発明を多様に変形および変化
させ得ることは勿論である。
テル粒子剤形は１日以降ほとんど効果がないことが分か
る。 本発明を前記特定実施態様と関連して記述したが、添
付した特許請求範囲によって定義される本発明の範囲内
で、当該分野の熟練者が本発明を多様に変形および変化
させ得ることは勿論である。
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フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 38/22 Ａ６１Ｋ 37/24
38/27 37/66 Ｈ
38/28 37/26
(72)発明者 クォン，オー・リョン
大韓民国305―340デジョン、ユソン―
グ、ドリョン―ドン381―42番、エル
ジ・アパートメント７―305
(56)参考文献 特開 平５−186364（ＪＰ，Ａ)
特開 平５−186362（ＪＰ，Ａ)
特開 平５−97694（ＪＰ，Ａ)
特開 平５−65231（ＪＰ，Ａ)
特開 平８−198772（ＪＰ，Ａ)
特開 平９−309843（ＪＰ，Ａ)
特開 昭63−91325（ＪＰ，Ａ)
特開 平４−282322（ＪＰ，Ａ)
特開 平３−215430（ＪＰ，Ａ)
特開 平２−213（ＪＰ，Ａ)
特開 平４−283510（ＪＰ，Ａ)
岡野定輔，新・薬剤学総論（改訂第３
版），株式会社南江堂，1987年，Ｐ.
334−335
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A61K 47/36
A61K 9/08
A61K 9/12
A61K 38/00 - 38/58
ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ)
ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ)
ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ)
Claims (11)
- 【請求項１】ヒアルロン酸またはその無機塩の微細粒子
中に封入された水溶解性タンパク質の薬物を含む徐放性
医薬組成物であって、上記微細粒子がヒアルロン酸また
はその無機塩および上記薬物を水または水性緩衝液に溶
解し、得られた溶液を噴霧乾燥して得られ、上記微細粒
子の平均粒径が0.1ないし40μｍの範囲である医薬組成
物。 - 【請求項２】安定剤をさらに含む、請求項１記載の医薬
組成物。 - 【請求項３】前記平均粒径が１ないし10μｍである、請
求項１記載の医薬組成物。 - 【請求項４】前記薬物が、ヒト成長ホルモン、ウシ成長
ホルモン、ブタ成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモ
ン、顆粒球−コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージ
−コロニー刺激因子、マクロファージ−コロニー刺激因
子、エリスロポエチン、骨格形態発生タンパク質、イン
ターフェロン、インスリン、モノクロナール抗体、腫瘍
壊死因子、マクロファージ活性化因子、インターロイキ
ン、インスリン−類似成長因子、表皮成長因子、組織プ
ラスミノゲンアクチベーターおよびウロキナーゼからな
る群から選ばれる、請求項１記載の医薬組成物。 - 【請求項５】前記ヒアルロン酸の無機塩が、ヒアルロン
酸のナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、ア
ンモニウム、マグネシウム、亜鉛、銅およびコバルトの
塩からなる群から選ばれる、請求項１記載の医薬組成
物。 - 【請求項６】前記安定剤が、多糖類、タンパク質、アミ
ノ酸、脂質、脂肪酸、無機塩、界面活性剤およびこれら
の混合物からなる群から選ばれる、請求項２記載の医薬
組成物。 - 【請求項７】請求項１に記載の医薬組成物を注射剤用媒
体に分散した注射剤。 - 【請求項８】分散剤または防腐剤をさらに含む、請求項
７記載の注射剤。 - 【請求項９】前記注射剤用媒体が、緩衝水溶液、エタノ
ール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル、植物油、ミネラル油、スクアレン、たら肝油、モノ
−、ジ−、およびトリ−グリセリド、およびこれらの混
合物からなる群から選ばれる、請求項７記載の注射剤。 - 【請求項１０】前記植物油が、トウモロコシ油、オリー
ブ油、大豆油、紅花油、綿実油、落花生油、胡麻油、コ
コナツ油、ヒマシ油およびこれらの混合物からなる群か
ら選ばれる、請求項９記載の注射剤。 - 【請求項１１】請求項１に記載の医薬組成物を含むエア
ロゾル製剤。
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| PCT/KR1998/000062 WO1998043664A1 (en) | 1997-04-01 | 1998-03-26 | Sustained-release composition of drugs encapsulated in microparticles of hyaluronic acid |
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