JPH02213A - 生理活性ペプチド持続製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は生理活性ペプチド持続製剤に関する。

（従来の技術） 生理活性ペプチド製剤はその殆どがヒトあるいは動物の
ＳａＷより抽出、精製され、製剤化されろため、その量
に制限があり、それらを必要とする患者に十分供給でき
ず、又、その価格も高価である。これら生理活性ペプチ
ド製剤はその大部分が注射剤であるため、頻回投与を必
要とする患者にとっては極めて繁雑であり、精神肉体的
苦痛など大きな負担となっている。

体内で分泌される生理活性ペプチドは一定濃度とリズム
を持っており、現在の注射製剤では生体のリズムにあっ
た濃度に調節するのは極めて困難であり、又、効果の持
続時間も短い。現在、インシュリン等の生理活性ペプチ
ドにおいて持続注入法が開発されているが、患者はポン
プを体に常時付けておかなければならず、その繁雑さ、
苦痛は否めない。

この様に、生理活性ペプチド製剤においでは、Ｉ？爪な
薬物をできる限り少量で、有効性を発揮させ、且つ、投
与回数も少なく、一定濃度に維持し、長時間効果が持続
しうる製剤が望まれている。

一方、ヒアルロン酸は服の硝子体、関節液、縛帯に高濃
度に含有されているほか、その他の組織中にも瞥遍的に
存在している生体成分である。この物の存在意義として
は組織構造の維持、慨懺的刺激に対する緩衝作用（皮膚
の弾力性、関節における潤滑性）、及び生体における物
質の拡散を制御している等が推１１１１されている。高
分子ヒアルロン酸またはその塩の水溶液は非二ニートン
流体のパターンを示し、流動していない場合には高粘性
物質として挙動する。上記溶液中での化学物質の拡散は
ヒアルロン酸が水に溶解したとき高粘性の媒体として作
用する為、一般に水中と比較し、遅くなることが知られ
ていた（Ｊ　、　ＰＩ＋ｙｓｉｏ１．（１９６１）１５
６、６７〜７４）、Ｌかし、詳細な研究の結果、グルコ
ースのような物質は池の物質とは逆に、ヒアルロン酸溶
液中では、拡散ｊ１１度が数倍速くなることが確認［Ｊ
、　［３ｉｏ１ｏｇｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２
５７．２３゜１４１３４−１４１３５　（１９８２）］
されるに至り、この拡散速度遅延または加速は化合物と
ヒアルロン酸との相互作用によって決定されるのではな
いかと考えられる。

又、ヒアルロン酸を含有する医薬製剤を特徴とする特許
としては特開昭５８−５７：１１９、同６０−５６９２
２、同６０−８４２２５等が知られており、これらはヒ
アルロン酸の上記緩衝作用を医薬製剤に応用したちので
あり、発明内容は点眼剤、生体組織の保護剤である。又
、特開昭６２−１２９２２６にはヒアルロン酸の拡散遅
延性を利用した薬剤放出システムが開示されているが、
生理活性ペプチドについては記載されていない。

（発明が解決しようとする課題） 本発明の目的は持続時間が顕著に１！、長された生理活
性ペプチド製剤を提供することにある。

（ｊＪ題を解決するための手段） 本発明はヒアルロン酸又１よその非毒性塩を有効成分と
して含有し、生理活性ペプチドの効果を持続させること
を特徴とする生理活性ペプチド持続製剤に係る。

本発明者らは生理活性ペプチド製剤の改良を種々研究し
、試みたところ、ある一定の濃度範囲に調節したヒアル
ロン酸が生理活性ペプチドの効果を生理活性ペプチド単
独で投与した場合と比較し、持続時間を顕著に延長する
ことを見出し、本発明を完成するに至った。

本発明で使用するヒアルロン酸及びその非毒性塩として
は分子量２０万〜５００万（粘度法）、好ましくは５０
万〜３００万程度のものであり、非毒性の塩としてはナ
トリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム
、カルシウム等のアルカリ土類金属塩等である。

本則で特に好ましいのはナトリウム塩である。

ヒアルロン酸及びその塩の製造方法については特開昭５
８−３７００１、同５８−５７３１９号公報に記載され
ている。本発明で使用されるヒアルロン酸は医薬用、例
えば、皮下ないし、生体組織中に注入しても支障をきた
さない程度に精製されたものであれば良い、配合する生
理活性ペプチドとしては、生体中、微量で種々の生理活
性を示す分子量が約１０００〜１００万のものであり、
その代表としてはペプチドホルモンが挙げられる。生理
活性ペプチドとしては副腎皮質刺激ホルモン、甲状腺刺
激ホルモン、成長ホルモン、卵胞刺激ホルモン、ツマＦ
メジン、成長ホルモン放出因子、上皮成長因子（ＥＧＦ
）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ソマトスタチン、ブａ
ラクチン、バソプレシン、バソトンン、メソトシン、イ
ソトシン、オキシトシン、副甲状腺ホルモン、カルシト
ニン、インシュリン、グルカゴン、レニン、アンギオテ
ンシン（１，ＬＩＩＩ）、ｔｔストリン、セクレチン、
パンクレオザイミン、エンテロがストロン、パロチン等
のペプチドホルモン、カリクレイン、インターフェロン
（ＩＦＮ）、インターロイキン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ
）、メタロチオネイン、スーパーオキシドジスムターゼ
、コロニー形成刺激因子、組織プラスミノーゲン活性化
因子（Ｔ　Ｐ　Ａ　）等のその他のペプチド、及び、ａ
１〜２ｓｕｕｘ−ＤＳｅｒ自−ＩＬｅｕ’−Ｖａｌ”−
ＡＣＴＨ（ＩＩＩ腎皮質刺激ホルモン）、αｌ−２ＳＮ
Ｈ２−Ｄ　Ｓ　ｅｒ′−Ｉ　　Ｌｅｕ４−　Ｌｙｓ”−
Ｌｙｓ”−Ｖａｌ”−Ａ　ＣＴ　ｔｌ、エルカトニン、
β−す７チルーアゾーポリスチレンーインシユリン、ポ
リ−Ｎ−ビニルピロリドン−インシュリン、トリ７セチ
ルインシユリン、ＡＩｔ　ｎ２ｓ−アジポイル−インシ
ュリン、Ａ２．−リノルーインシュリン等のそれら誘導
体が使用できる。上記生理活性ペプチドは通常、哺乳動
物（ヒト、サル、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウサギ、クジラ
等）、魚Ｍ（カツオ、サケ等）、鳥類にワトリ等）等か
Ｃ）抽出精製した天然白米、半合成及び遺伝子組み替え
を含む、合成のものであっても良い。生理活性ペプチド
の配合割合としては該ペプチドの投与を必要とする患者
により、−概には決定できないが、通常、従来、臨床上
の一回分の投与量で良い。具体的には、例えば成長ホル
モン１〜５国際車位、卵胞刺激ホルモン５０〜１００国
際車位、パンプレシフ１０〜３０単位、オキシトシン１
〜５単位、カルシトニン４０〜２００単位、エルカトー
ン１０〜５０単位、インシュリン２０〜ｌＯＯ単位、グ
ルカゴン１〜３　Ｕ　Ｓ　Ｐ単位、ガストリン０．１〜
０．５ｗ／、セクレチン３０〜１００セクレチン単位、
パロチン１〜５１１１ｇ、カリクレイン２０〜５０１９
１　位、インターフェロンβ１００〜５００万単位を一
製剤当り含有しているのが好ましい、ヒフルロン酸及び
その非毒性塩の配合割合は０．１〜１０％が好ましい。

０．１％未満の配合割合では効率的な持続効果が得られ
ず、１０％を越える配合割合では皮下に注射することが
困難になること、注射後の組織中におけろヒフルロン酸
の残存に問題が生じる可能性のあることを考慮する必要
がある。０．１〜１０％の範囲においては、配合割合に
応じ、持続効果も延長する。更に、好ましい配合割合は
３〜７％程度である。

本持続製剤の投与方法として、最も好ましいのは非経口
的投与である６通常、生理活性ペプチドの投与方法とし
では注射であり、特に、皮下注射による投与が行われる
。又、本発明の持続製剤は高い粘度を有しており、医師
または患者がアンプルから注射器を使用ｔ１、本持続製
剤を吸引し、使用することも可能であるが、好ましくは
、本製剤の製造の際、注射器内に本持続製剤を無菌状態
で注入し、製品化したものを使用する。注射剤の調製は
公知の注射剤の調製法に準じて行うことができるが、ヒ
アルロン酸溶液の高粘性のため、液剤の中に入る気泡の
混入・を避けることが重要である。

気泡を除去する方法Ｅしては、溶解もしくは懸濁した溶
液をアンプル又は注射器に注入し、脱気する。脱気方法
としては遠心分離（３０００ｒｐｍ、　１５分程度）、
又は減圧による方法が使用できろ０、本発明の持続製剤
には通常本分野で使■される種々の添加剤を添加しうる
。添加剤としては一局所麻酔剤、ｐＨ調節剤、抗酸化剤
、溶解補助剤、等張化剤等がその代表的なものである。

（実　施　例） 以下に本発明の実施例を示す。

実施例１　カルシトニン皮下注射製剤のｌｌ造ブタカル
シトニン（Ａｒｏｍｏｕｒ　　Ｐｌ＋ａｒｍａｃｅｕＬ
ｉｃａｌＣｏａｐａｎｙ　　Ｌ　ｔｄ、製）８ＭＲＣ単
位を１ｅａｌの生理食塩水に溶解し、ヒフルロン酸ナト
リウムを加える。充分溶解した後、アンプルに注入し、
気泡を脱気するため遠心分離（３０００ｒｐｍＩｔｓ分
）操作を行い、封管し、カルシトニン皮下注射剤とする
。

ブタカルシトニン　　　　８ＭＲＣ単位ヒアルロン酸ナ
トリウム　　　　　５０鵬ｇ実施例２ 実施例１と同様に下記配合割合でインシュリン皮下注射
剤を９１遺した。

ブタインシュリン ヒアルロン酸ナトリウム 埋 −７ンブル当り ５単位 ５０１１１ｇ １鵠！ 実施例３ 実施例１と同様に下記配合割合でヒト成長ホルモン皮下
注射剤を製造した。

ヒト成長ホルモン　　　　　　　１単位ヒアルロン酸ナ
トリウム　　　　　５０ＩＩＩｇ埋 一アンプル当り　　　　　　　　　　ＩＩＩＩｌ実施例
４ 実施例１と同様に下記配合割合でエルカトニン皮下注射
剤を製造した。

エルカトニン　　　　　　　　　８単位ヒアルロン酸ナ
トリウム　　　　　５０ＩＩ１ｇ埋 一アンプル当Ｑ　　　　　　　　　　　１１６１大施例
５ ７ンブルを注射前に代え、実施例１と同様に下記配合割
合でインシュリン皮下注射剤注入した注射前を製造した
。

ブタインシュリン　　　　　　　５単位ヒアルロン酸ナ
トリウム　　　　　３０ｍｇベンノルアルコール　　　
　　　　１０１＃Ｉ？注 注射的当り　　　　　　　　　　　１ｍｌ天施例６ アンプルを注射前に代え、実施例１と同様に下記配合割
合でヒト成長ホルモン皮下注射剤を製造した。

ヒト成長ホルモン　　　　　　１．５単位ヒアルロン酸
ナトリウム　　　　　３０ＩＩＩｇ−注射筒当り （薬理試験結果） １、持続作用（インシュリン） １鴎Ｉ 下記配合割合にて皮下注射剤を調製し、実験に使用した
。

比較例１ ヒアルロン酸すＦリウム　　　　　５０輪ｇ注射　　埋
　　木 全　　　　量　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１−１第１表 比較例２ ブタインシュリン 注　　　　埋 全　　　量 ５単位 １　論１ １８時間絶食した８週給の雄性ウィスター系ラット背部
皮下に、１　＋ａｌ／　ｋＨの投与量で実施例２、及１
上記注射液を投与した。一定時間毎に、約０．４＋ａＮ
ずつ採血し、インスロテツクモチダ〔持田製薬（株）９
Ｉ〕のキットを用いて血中インシュリン濃度を酵素免疫
測定方法（ホルモンと臨床、２６巻。

２８３頁、　１９７８年）で測定した。又、別を二同様
な実験条件下、血糖も測定した。第１表にその結果を示
す。

比較例１においで、血中インシュリン濃度に対して、ヒ
アルロン酸ナトリウムは影響を与えていない。比較例２
においでは投与直後に大きなインシュリン血中濃度が出
現したが、４時間目には消失している。これはインシュ
リンを皮下投与した場合、通常ｍ察される現象であり、
一過性のビーりの出現後、血中インシュリンの持続が見
られない。これに対して、実施例２の注射剤は比較例２
で観察された投与直後の高濃度の血中インシュリンのピ
ークが消失したがわりに投与後、１０時間にわたり、血
中インシュリン濃度が適当な濃度で持続している。ヒア
ルロン酸を配合しない場合（比較例２）と比較して約２
．５倍の持続時間の延長が確認された。

２、持続、増強作用（カルシトニン） 下記配合割合にて皮下注射剤を調製し、実験に使用、し
た。

比較例３ ブタカルシトニン　　　　８ＭＲＣ単位−（和光純薬（
株）９１〕のキットを用いて血中カルシウム濃度をオル
トクレゾール７タレインコンブレキソン法（アナリテイ
力ル　バイオケミストリ、１８＠、　５２１頁、１９６
７年）で測定した。第２表にその結果を示す。

第２表 １８時間絶食した８週齢の雄性ウィスター系ラット背部
皮下に、１　ｍｌ／　ｋＨの投与量で実施例１、比較例
２、及び上記注射液を投与した。一定時間毎に、約０．
４曽ｌずつ採血し、カルシウムテストワコカルシトニン
はカルシウム代謂の恒常性に関与し、３２個のアミノ酸
からなる生理活性ペプチドである。

比較例１において、血中カルシウム濃度に対して、ヒア
ルロン酸ナトリウムは影響を与えていない、比較例３に
おいては投与直後にカルシトニンが血中カルシウム濃度
低下作用を示したが、低下作用も小さく、効果の持続時
間も短い、実施例１は血中カルシツム濃度低下作用も大
きく、効果持続時間も長い。このようにカルシトニンと
ヒアルロン酸ナシリウムを混合した本発明製剤はカルン
トニン単独投与と比較し、持続時間の延長を示した。

次に、本発明皮下注射剤のカルシトニンの効果増強作用
を確認するため下記手順で実験を行った。

持続時間の延長実験と同様な操作で、ブタカルシトニン
を０．１，２，４．８及び１２Ｍ　ＲＣ単位を含む皮下
注射液を調製し、ラットに投与した。

カルシトニンの投与により減少した血中カルシウム濃度
を測定し、各カルシトニン投与量について減少血中濃度
曲線上面積を求めた。第１図にその結果を示す。

第１図からは次のように読取れる０例えば１０ｍｇ・ｈ
ｒ／ｄｉ’の減少血中カルシウム濃度曲線下面積を得る
ためには、ブタカルシトニン単独投与ではブタカルシト
ニン５．６Ｍ　ＲＣ単位／ｋｇが必要であるのに対し、
ヒアルロン酸併用投与の場合、１．４ＭＲＣ単位／ｋｇ
であり、必要なブタカルシトニンは単独投与に比較し、
約１／４の量で充分である。

３、持続、増強作用（エルカトニン） 下記配合割合にて皮下注射剤を調製し、実験に使用した
。

比較例４ エルカトニン　　　　　　８ＭＲＣ単位１８時間絶食し
た８週齢の雄性ウィスター系ラット背部皮下に、１ｍｌ
／ｋＨの投与量で実施例４、比較例１、及び上記注射液
を投与した。一定時間毎に、約０．４社ずつ採血し、カ
ルシウムテストワコー〔和光純薬（株）製〕のキットを
用いて血中カルシウム濃度をオルトクレゾール７タレイ
ンコンブレキソン法（７ナリテイカル　バイオケミスト
リ、１８巻、５２１頁、　１９６７年）で測定した。ｆ
ｆ１３表にその結果を示す。

第　３　表 エルカトニンはカルシウム代謝の恒常性に閏快するカル
シトニンの分子中に存在するノスルアイド結合をエチレ
ン結合にかえた、カルシトニンの誘導体である。比較例
１において、血中カルシウム濃度に対して、ヒアルロン
酸ナトリウムは影響を与えていない。比較例４において
は投与直後にエルカトニンはカルシトニンに比べ強い血
中カルシウム濃度底下作用を示したが、投与後１０時間
で効果が消失しｔこ。実施例４が示したように、エルカ
トニンとヒアルロン酸ナトリウムを併用投与した場合、
血中カルシウム濃度低下作用は持続している。このよう
に、エルカトニンとヒアルロン酸ナトリウムを混合しｒ
こ本発明製剤は持続時ｔｔｎの延長を示した。

持続時間のＷ、艮実験と同様な操作で、エルカトニンを
０．１，２，４．８及び１２Ｍ　ＲＣ単位を含む皮下注
射液を調製し、ラットに投与した。エルカトニンの投与
により減少した血中カルシウム濃度を測定し、各エルカ
トニン投与量について減少血中濃度曲線上面積を求めた
。第２図にその結果を示す。

第２図からは次のように読取れる。例えばｌＯ＋ｓ）Ｂ
・Ｉ＋ｒ／ｄｊ’の減少血中カルシウム濃度曲線上面積
を得るためには、エルカトニン単独投与ではエルカトニ
ン１，９Ｍ　ＲＣ単位／ｋｇが必要であるのに対し、ヒ
フルロン酸併用投与の場合、１．０Ｍ　ＲＣ単位／ｌａ
ｇであり、必要なエルカトニンは単独投与に比較し、約
１／２の景で充分である。

４、持続作用（ヒト成長ホルモン） 下記配合割合にて皮下注射剤を調製し、実験に使用した
。

比較例５ ヒト成長ホルモン 注 全　　　量 １単位 １Ｉｌ１ １８時間絶食した８週齢の雄性ウィスター系ラット背部
皮下に、１ｍｌ／ｋｇの投与量で実施例３、比較例１、
及び上記注射液を投与した。一定時間毎に、約０．４ｕ
ｆｆｉずつ採血し、血中ヒト成長ホルモン濃度をランオ
イム／７ツセイ法で測定した。第４表にその結果を示す
。

第４表 比較例１において、ヒフルロン酸ナトリ７ム１．ｔヒト
成長ホルモンを血中に出現させなかった。

比較例５においては投与直後に高濃度のヒト成長ホルモ
ンが血中にｍ察されるが、４時間後には血中から消失し
た。これに対し、実施例３のヒアルロン酸ナトリウムを
併用投与した場合は、実１こ１２時間後も血中にヒト成
長ホルモンが存在しており、明らかに、持続型の注射剤
であることを示している。正常成人男子の血清中ヒト成
長ホルモン濃度１土２０±０．４ｎｇ／　１ＩＩｅ　ｃ
ｉｕ持され’ｃいる）ニーいｈれている。現在、ヒト成
長ホルモン剤の供給に制限があるたゐ、できうる限り、
少量で高い効果を得る目的で様々な試みがなされている
。例えば、投与回数を分割（治療学、　９．　（２）、
　２６４．１９８２＞することなどが試みられている。

本発明製剤は投与したヒト成長ホルモンを一定血中濃度
に長時間持続させることが可能である。

参考例（テｆｆ７−ル） 下記配合割合にて皮下注射剤を調製し、実験に使用した
。

比較例６ テが７−ル ヒアルロン酸ナトリウム 埋 １０１１１ｇ ５０　＋ｎ　ＩＩ 全 量 ｍｌ 比較例７ テｌｆ７−ル １０１目 埋 全　　　量 ｍ１ １８時時間穴した８週齢の雄性ウィスター系ラット背部
皮下に、１　ｍｌ／　ｋＨの投与量で上記注射液を投与
した。一定時間毎に、約０．４＋ｓ＆ずつ採血し、血中
テｆｆ７−ル濃度を液体クロマジグラフイーで測定した
。第５表にその結果を示す。

第５表 テ、ｆ７−ルは化学名が１−（２−テトラハイドロ７リ
ル）−５−フルオロウラシルであり、５−フルオロウラ
シル（Ｓ　　ＦＵ）を放出し、抗腫瘍作用を発揮する抗
悪性ＩＩ！瘍削である。

比較例７に見られるように、テガフール単独投与後の血
中テガフール濃度は６時間後まで比較的高濃度であり、
８時間以降は低濃度が持続した。

比較例６に見られるように、テガフールとヒアルロン酸
を併用投与しても、持続効果は観察さ八ていない。

【図面の簡単な説明】

ｔｔ％１図及び第２図はカルシトニン投与量及びエルカ
トニン投与量と、それぞれの減少血中カルシウム濃度曲
線上面積の関係を示すグラフである。 （以　上） 出　願　人　　大鵬薬品工業株式会社 代　　理　　人　　　弁理士　　１）　村　　　巌第　
　１ 図 第　　２　　図

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒアルロン酸又はその非毒性塩を有効成分として
   含有し、生理活性ペプチドの効果を持続させることを特
   徴とする生理活性ペプチド持続製剤。
2. （２）生理活性ペプチドが副腎皮質刺激ホルモン、甲状
   腺刺激ホルモン、成長ホルモン、卵胞刺激ホルモン、ソ
   マトメジン、成長ホルモン放出因子、上皮成長因子（Ｅ
   ＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ソマトスタチン、
   プロラクチン、バソプレシン、バソトシン、メソトシン
   、イソトシン、オキシトシン、副甲状腺ホルモン、カル
   シトニン、インシュリン、グルカゴン、レニン、アンギ
   オテンシン、ガストリン、セクレチン、パンクレオザイ
   ミン、エンテロガストロン、パロチン、カリクレイン、
   インターフエロン（ＩＦＮ）、インターロイキン、腫瘍
   壊死因子（ＴＮＦ）、メタロチオネイン、スーパーオキ
   シドジスムターゼ、コロニー形成刺激因子、組織プラス
   ミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）又はそれらの誘導体で
   ある請求項１記載の生理活性ペプチド持続製剤。
3. （３）生理活性ペプチドが成長ホルモン、カルシトニン
   、エルカトニン又はインシュリンである請求項１又は２
   記載の生理活性ペプチド持続製剤。
4. （４）ヒアルロン酸又はその非毒性塩の分子量が５０万
   〜３００万である請求項１又は２記載の生理活性ペプチ
   ド持続製剤。
5. （５）注射剤である請求項１又は２記載の生理活性ペプ
   チド持続製剤。