JP2021073187A

JP2021073187A - 即効型インスリン組成物

Info

Publication number: JP2021073187A
Application number: JP2020214703A
Authority: JP
Inventors: パトリックエイカーズ，ミッチェル; Patrick Akers Michael; マジュンダ，ラナジョイ; Majumdar Ranajoy; エイ．グエン，チ; A Nguyen Chi; デイ．パボラ，チャッド; D Paavola Chad; クマルサリン，ビエンダー; Kumar Sarin Virender; エリザベスシュルテ，ナネッテ; Elizabeth Schulte Nanette
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2014-12-16
Filing date: 2020-12-24
Publication date: 2021-05-13
Anticipated expiration: 2035-12-09
Also published as: ES2911207T3; PL3233108T3; JP7093669B2; MD3233108T2; PT3233108T; JP7159277B2; HRP20220692T1; JP2023011641A; MA41188A; LT3233108T; WO2016100042A1; US11872266B2; TW201630622A; US20190231851A1; EP3233108B1; US11123406B2; EP3233108A1; US20220072105A1; US9993555B2; DK3233108T3

Abstract

【課題】既存のインスリン類似体製品の市販製剤よりも速い薬物動態及び／または薬物力学の作用を有するヒトインスリンまたはインスリン類似体の組成物を提供する。【解決手段】医薬組成物であって、（ａ）インスリンと（ｂ）約１０〜約３０ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、（ｃ）約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、（ｄ）約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウムと、（ｅ）約１０〜約６０ｍＭの濃度での総塩化物と（ｆ）約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖの濃度での界面活性剤と（ｇ）保存剤とを含む。【選択図】なし

Description

本発明は、食後血糖変動に対抗する糖尿病の治療で使用するための及び高血糖の急性期
治療のためのインスリン医薬組成物である。組成物には、場合によっては塩化ナトリウム
、亜鉛及び任意で塩化マグネシウム及び／または界面活性剤の添加を含む、ヒトのインス
リンまたはインスリン類似体、及び特定の濃度のクエン酸塩、塩化物が含まれる。組成物
は、既存の市販インスリン組成物よりも注射部位からのインスリンの素早い取り込みを有
する。組成物は、食事時のインスリン活性またはインスリンを必要とする場合の高血糖の
急性期治療を提供するのに有用である。

食後血糖のレベルを制御するにはインスリンの時間／作用プロファイルが重要である。
健常な人では、膵臓は吸収された食物に応答してスパイク状のインスリンを分泌し、それ
は数分以内に血中インスリンレベルの上昇を生じる。１型糖尿病の人及び２型糖尿病の特
定の人では、インスリンが投与されなければならない。しかしながら、投与されたインス
リンはゆっくりと血液に入る。インスリンの不適切な放出及び食事の開始時での遅すぎる
効果の発現は食事中または食事直後の高血糖をもたらす。作用の長すぎる持続時間及び食
事間の過剰なインスリンは食後低血糖の原因となる。

インスリン製品の時間／作用を減らす以前の取り組みがあった。そのような製品を開発
する初期の取り組みには、インスリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））、インス
リンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））、及びインスリングルリジン（ＡＰＩＤ
ＲＡ（登録商標））のような新規の「即効型」インスリン類似体の開発が含まれた。イン
スリンリスプロ及びインスリンアスパルトは、ヒトのインスリンにおけるアミノ酸鎖の配
列からのアミノ酸配列の変化を介して即効作用を達成している。インスリングルリジンも
ヒトのインスリンにおけるアミノ酸鎖の配列での変化を含むが、亜鉛も欠き、安定してい
る６量体を形成しない。即効型インスリン類似体は１９９０年代及び２０００年代初頭に
利用可能になった。しかしながら、いわゆる即効型インスリン類似体であっても、注射後
５０〜９０分までインスリンの最大レベルには達しない。これは、正常に機能している膵
臓によって放出されるインスリンよりも遅く、炭水化物の吸収プロファイルと一致すると
は限らない。

探索されている即効作用を達成するもう１つの手段は、インスリンと併用して提供され
るとインスリンの時間作用プロファイルを改善する成分または賦形剤の使用である。

たとえば、ＵＳ２０１３／０２３１２８１は単独で、またはポリアニオン性化合物との
併用で、インスリンと特定のオリゴ糖とを含む水性組成物を開示している。ポリアニオン
性化合物は、デキストランメチルカルボン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、
ＰＡＡ（ポリアクリル酸）、アルギネート、ヒアルロン酸、グルクロン酸に基づくまたは
ガラクツロン酸及びその塩に基づくポリマーから成る群から選択されるアニオン性ポリマ
ー、またはクエン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸、ア
ジピン酸、シュウ酸、トリホスホネート、ポリホスホネート及びそれらの塩から成る群か
ら選択されるアニオン性化合物である。一実施形態では、ポリアニオン性化合物はクエン
酸ナトリウムである。ポリアニオン性化合物は、オリゴ糖単独またはポリアニオン性化合
物単独が時間作用に対して効果を有さない場合でさえ、オリゴ糖含有組成物の性能を改善
すると言われている。クエン酸塩を含有するが、オリゴ糖を欠く組成物についてのインス
リンの時間作用の成績は開示されていない。

加えて、ＵＳ２０１２／０１７８６７５及びＵＳ２０１４／０１１３８５６は、たとえ
ば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような亜鉛キレート剤と、たとえば、クエン
酸またはクエン酸ナトリウムのような「溶解／安定化」剤として記載されるものとの組み
合わせでインスリンを含有する組成物を開示している。ＵＳ２０１４／０１１３８５６は
、そのような組成物の初期の臨床試験が注射部位での不快感を示したことを述べ、マグネ
シウム含有化合物の添加を介して注射部位の寛容性を高めると主張している。そのような
マグネシウム化合物には、無機塩、たとえば、水酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、
塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、ピロリン酸マグネシウム、
硫酸マグネシウム７水和物及び酸化マグネシウム；及び有機塩、たとえば、マグネシウム
ＥＤＴＡ、乳酸マグネシウム、アスパラギン酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、炭酸マ
グネシウム、クエン酸マグネシウム、及びグルコン酸マグネシウムが挙げられる。ＵＳ２
０１２／０１７８６７５及びＵＳ２０１４／０１１３８５６は、クエン酸またはクエン酸
塩を含有するが、ＥＤＴＡを含有しない組成物についてのインスリンの時間作用の成績を
開示しなかった。しかしながら、それら出願の指定代理人による２０１２年のポスターは
、クエン酸塩を含有するが、ＥＤＴＡを含有しないインスリンリスプロ組成物の時間作用
プロファイルを様々な濃度のＥＤＴＡ及びクエン酸塩を含有する組成物と比較し、そのポ
スターは、「製剤におけるクエン酸塩単独は［インスリンリスプロ］の吸収プロファイル
を改善するには不十分であり」、「ＥＤＴＡによる亜鉛のキレート（あまり安定ではない
インスリン類似体６量体の分解を加速する）とクエン酸塩（表面電荷を覆い隠し、再凝集
を阻む）の双方が、吸収の皮下速度を高める閾値濃度を上回って必要とされる」と述べて
いる。ｈｔｔｐ：／／ｆｉｌｅｓ．ｓｈａｒｅｈｏｌｄｅｒ．ｃｏｍ／ｄｏｗｎｌｏａｄ
ｓ／ＢＩＯＤ／３３１５７０５５１６ｘ０ｘ６０２９１２／３Ｃ９５５８８６−６ＡＡ４
−４Ｄ６６−ＢＤ３３−３ＦＦＢ４Ｃ９０６Ｂ２５／ＥＡＳＤ＿Ｐｏｓｔｅｒ＿Ｓｅｐｔ
ｅｍｂｅｒ＿２０１２＿ＦＩＮＡＬ．ｐｄｆで入手可能であるＲｏｄｅｒｉｋｅＰｏｈ
ｌら， “ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＵｌｔｒａ−Ｒａｐｉｄ−ＡｃｔｉｎｇＰ
ｒａｎｄｉａｌＩｎｓｕｌｉｎＡｎａｌｏｇｓＲｅｑｕｉｒｅｓＣｈｅｌａｔｉ
ｏｎｏｆＺｉｎｃＩｏｎｓａｎｄＣｈａｒｇｅＭａｓｋｉｎｇｔｏＩｎ
ｃｒｅａｓｅｔｈｅＲａｔｅｏｆＳｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓＡｂｓｏｒｐｔｉ
ｏｎ”。

ＵＳ２０１５／００６５４２３は、ペプチドと血管拡張剤（たとえば、ニトログリセリ
ン）と、任意で「電荷マスキング剤」と記載されるもの、たとえば、クエン酸塩、ジケト
ピペラジン、ジケトピペラジン誘導体、ＥＤＴＡ、ジアルギニンピペラジン、ジアルギニ
ンピペラジン塩、ジアルギニンピペラジン異性体、ジアルギニンピペラジンエステル及び
それらの任意の組み合わせを含む組成物を記載している。クエン酸塩を含有するが、血管
拡張剤を欠いている組成物は開示されていない。

従来技術はまとめて、本発明に含まれる賦形剤を伴った超即効型インスリン製剤及びそ
の特定の濃度を教示していない。

上述の取り組みにもかかわらず、食事時での使用が意図され、注射部位からの血中への
インスリンのさらに迅速な取り込み；既存のインスリン製品よりも早い作用の発現；及び
保存の間での化学的な及び物理的な安定性を有するインスリン組成物に対するニーズが残
っている。本発明は、これらのニーズを満たす組成物を提供しようとする。

本発明者らは驚くべきことに、特定濃度のクエン酸塩を含有する組成物が、既存の市販
のインスリン組成物よりもインスリンの血中への迅速な取り込み及び／または作用の発現
を有することを見いだしている。時間作用の改善を排除することなく、たとえば、亜鉛、
塩化ナトリウム、及び任意で塩化マグネシウム及び／または界面活性剤のような、特定濃
度の安定剤を組成物に含めることによって特定の条件下で組成物の化学的な及び物理的な
安定性が維持される。

従って、本発明は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンと、約１５〜
約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．２〜約０．８ｍＭの濃度での亜鉛と、保存剤
とを含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、医薬組成物はさらに約５ｍＭまで
の濃度での塩化マグネシウムをさらに含む。

別の実施形態では、本発明は一般に、インスリンと特定濃度のクエン酸塩と安定剤とを
含む組成物を提供する。

特定の実施形態では、本発明は、インスリンと、約１０〜約３０ｍＭの濃度でのクエン
酸塩と、約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウ
ムと、約１０〜約６０ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖの濃
度での界面活性剤と、保存剤とを含む医薬組成物を提供する。

特定の実施形態では、本発明は、インスリンと、約１０〜約３０ｍＭの濃度でのクエン
酸塩と、約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウ
ムと、約１〜約５０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖ
の濃度での界面活性剤と、保存剤とを含む医薬組成物を提供する。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約５００ＩＵ／ｍＬの濃度で
のインスリンリスプロと、約１０〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約２〜約９ｍＭ
の濃度でのマグネシウムと、約０．３〜約１．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５〜約３５
ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１
８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組
成物のｐＨは約７．０〜７．８である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約５００ＩＵ／ｍＬの濃度で
のインスリンリスプロと、約１０〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約２〜約９ｍＭ
の濃度でのマグネシウムと、約０．３〜約１．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約２５ｍ
Ｍの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマ
ー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際
、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度で
のインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭ
の濃度での塩化マグネシウムと、約０．３〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約２０〜約
２５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマ
ー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際
、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度で
のインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭ
の濃度での塩化マグネシウムと、約０．３〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約２
０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキ
サマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、そ
の際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度で
のインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭ
の濃度での塩化マグネシウムと、約０．６〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約２０〜約
２５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマ
ー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際
、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度で
のインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭ
の濃度での塩化マグネシウムと、約０．６〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約２
０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキ
サマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、そ
の際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリン
リスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜
鉛と、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物
と、約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度
でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７.４である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリン
リスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜
鉛と、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約１〜約２０ｍＭの濃度での塩化ナトリ
ウムと、約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約３．１５ｍｇ／ｍＬの
濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７.４である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリン
リスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、約５
ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．
０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタク
レゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７.４である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリン
リスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、約５
ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約１〜約２０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約
０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメ
タクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７.４である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリ
ンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭの濃度での
塩化マグネシウムと、約０．８〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約２０〜約２５ｍＭの
濃度での総塩化物と、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と
、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物の
ｐＨは約７．０〜７．８である。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリ
ンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭの濃度での
塩化マグネシウムと、約０．８〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約２０ｍＭの濃
度での塩化ナトリウムと、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８
８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成
物のｐＨは約７．０〜７．８である。

加えて、本発明はまた、それを必要とするヒトに有効用量の本発明の医薬組成物を投与
することを含む糖尿病を治療する方法も提供する。

加えて、本発明は、治療法で使用するための本発明の医薬組成物を提供する。さらに詳
しくは、本発明は、糖尿病の治療で使用するための本発明の医薬組成物を提供する。本発
明はまた、糖尿病の治療のための薬物を製造することにおける本発明の医薬組成物の使用
も提供する。

加えて、本発明は、本発明の医薬組成物を含む製造物品を提供する。特に、本発明は、
製造物品が複数回使用バイアルである本発明の医薬組成物を含む製造物品を提供する。特
に、本発明は、製造物品が再利用できるペン型注入器である本発明の医薬組成物を含む製
造物品を提供する。特に、本発明は、製造物品が連続皮下インスリン注入療法のためのポ
ンプ装置である本発明の医薬組成物を含む製造物品を提供する。

実施形態では、インスリンは、ヒトインスリン、または、たとえば、インスリンリスプ
ロ、インスリンアスパルトもしくはインスリングルリジンのようなヒトインスリンの即効
型構造の変異体、突然変異体もしくは類似体から成る群から選択される。好まれる実施形
態では、インスリンはインスリンリスプロである。

実施形態では、保存剤はフェノール及びメタクレゾールから成る群から選択される。好
ましくは、保存剤はメタクレゾールである。実施形態では、メタクレゾールの濃度は約２
．５ｍｇ／ｍＬ〜約３．８ｍｇ／ｍＬである。好ましくは、メタクレゾールの濃度は３．
１５ｍｇ／ｍＬである。

実施形態では、組成物はさらに等張化剤を含む。実施形態では、等張化剤はグリセロー
ルである。特定の実施形態では、グリセロールの濃度は約１〜約１６ｍｇ／ｍＬである。

実施形態では、組成物はさらに緩衝液を含む。特定の実施形態では、緩衝液はリン酸ナ
トリウムである。

特定の実施形態では、組成物はさらに追加の安定剤を含む。特定の実施形態では、組成
物はさらに界面活性剤を含む。

特定の実施形態では、組成物は、たとえば、ＥＤＴＡのような追加のキレート剤、ニト
ログリセリンのような追加の血管拡張剤、及び／またはオリゴ糖を含まない。

実施形態では、組成物のｐＨは約７．０〜約７．８である。特定の好まれる実施形態で
は、組成物のｐＨは約７．３〜約７．５である。特定の好まれる実施形態では、組成物の
ｐＨは約７．４である。

特定の実施形態では、時間作用に関連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメー
タ、たとえば、インスリンの最高濃度までの時間（Ｔｍａｘ）；インスリンの最高濃度の
半分に達する時間（初期１／２Ｔｍａｘ）；濃度対時間曲線の下降相の間でインスリンの
最高濃度の半分に達する時間（後期１／２Ｔｍａｘ）；初期と後期の１／２Ｔｍａｘの間
の時間（Ｔｍａｘスプレッド）；インスリン濃度曲線のもとでの分画面積に基づく異なる
時間での吸収されたインスリン総用量の比率（たとえば、ＡＵＣ_{０−３０分}、ＡＵＣ_０−
_６０分、ＡＵＣ_{０−１２０分}、ＡＵＣ_{０−１８０分}）；総インスリン濃度の半分に達する
時間（Ｔ５０）；最高グルコース注入速度に達する時間（ＧＩＲｍａｘ）、最高グルコー
ス注入速度の半分に達する時間（初期１／２ＧＩＲｍａｘ）；濃度対時間曲線の下降相の
間で最高グルコース注入速度の半分に達する時間（後期１／２ＧＩＲｍａｘ）；ＧＩＲ曲
線のもとでの分画面積に基づく異なる時間での注入された総グルコースの比率（たとえば
、ＧＩＲ_{０−３０分}、ＧＩＲ_{０−６０分}、ＧＩＲ_{０−１２０分}、ＧＩＲ_{０−１８０分}）に
よって測定されたとき、医薬組成物は、クエン酸塩を含有しない即効型のインスリン類似
体の組成物よりも少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも
４０％、または少なくとも５０％迅速である血中へのインスリンの取り込み及び／または
作用の発現を提供する。

特定の実施形態では、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関
連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸
塩を含有しない即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜５０％の間迅速である
血中へのインスリンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。

特定の実施形態では、医薬組成物は、２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存を可能にす
るほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、再利用できるペン型注入器にお
けるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で２８日までの使用中を可能に
するほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、２〜８℃で少なくとも３６ヵ
月の保存を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、再利用でき
るペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で３２日ま
での使用中を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、組成物は、７日間までの
連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置での使用を可能にするほど安定である。

特定の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプ
ロと、約１５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５ｍＭ
の濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ
／ｍＬの濃度でのメタクレゾールと約７．６ｍｇ／ｍＬの濃度でのグリセロールとを含む
。

別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロ
と、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５ｍＭの
濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／
ｍＬの濃度でのメタクレゾールと約４．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのグリセロールとを含む。

別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロ
と、約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約２３ｍＭの
濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／
ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含む。

別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロ
と、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約２５ｍＭの
濃度での塩化ナトリウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含む。

別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロ
と、約１５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５ｍＭの
濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／
ｍＬの濃度でのメタクレゾールと約７．６ｍｇ／ｍＬの濃度でのグリセロールとを含み、
その際、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関連する１以上の
薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸塩を含有しない
即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜２０％の間、２０％〜３０％の間、３
０％〜４０％の間、または４０％〜５０％の間迅速である血中へのインスリンの取り込み
及び／または作用の発現を提供する。

別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロ
と、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５ｍＭの
濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／
ｍＬの濃度でのメタクレゾールと、約４．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのグリセロールとを含み
、その際、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関連する１以上
の薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸塩を含有しな
い即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜５０％の間迅速である血中へのイン
スリンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。

別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロ
と、約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約２３ｍＭの
濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／
ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、医薬組成物は、上記で記載されている
もののような時間作用に関連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメータによって
測定されたとき、クエン酸塩を含有しない即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０
％〜５０％の間迅速である血中へのインスリンの取り込み及び／または作用の発現を提供
する。

別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロ
と、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約２５ｍＭの
濃度での塩化ナトリウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
その際、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関連する１以上の
薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸塩を含有しない
即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜５０％の間迅速である血中へのインス
リンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。

本明細書で使用されるとき、用語「組成物」は、インスリン及び他の成分または賦形剤
が単一の複合製剤で組み合わせられているインスリン及び他の成分または賦形剤の組み合
わせを指す。

本明細書で使用されるとき、「インスリン」は、ヒトインスリンまたはヒトインスリン
の機能的な活性を有するが、それよりも速い作用の発現を有するヒトインスリンの即効型
構造の変異体、突然変異体または類似体を意味する。ヒトインスリンの特定の即効型類似
体は、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、及びインスリングルリジンである。
市販製品のためのインスリンは組換えＤＮＡ法を用いて、または化学合成によって製造さ
れてもよい。組換え法は周知であり、強く好まれる。ヒトインスリンの分子（ＣＡＳ番号
．１１０６１−６８−０）は２本のアミノ酸鎖Ａ及びＢから成り、その配列は周知である
。

ヒトインスリンＡ鎖はアミノ酸の以下の配列を有する：
ＧｌｙＩｌｅＶａｌＧｌｕＧｌｎＣｙｓＣｙｓＴｈｒＳｅｒＩｌｅＣｙｓＳｅｒＬｅｕＴ
ｙｒＧｌｎＬｅｕＧｌｕＡｓｎＴｙｒＣｙｓＡｓｎ（配列番号１）

ヒトインスリンＢ鎖はアミノ酸の以下の配列を有する：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡ
ｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈ
ｒＰｒｏＬｙｓＴｈｒ（配列番号２）

鎖は２つのジスルフィド結合：ＣｙｓＡ７−ＣｙｓＢ７及びＣｙｓＡ２０−ＣｙｓＢ１
９によって連結されている。Ａ鎖はＣｙｓＡ６−ＣｙｓＡ１１にて鎖内ジスルフィド結合
を有する。ヒトインスリンは実験式Ｃ_２５７Ｈ_３８３Ｎ_６５Ｏ_７７Ｓ_６及び５８０８の分
子量を有する。

ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）における薬剤物質であるインスリンリスプロは、２８位及
び２９位でのＢ鎖上の天然のプロリン−リジンの逆位（２８^Ｂ−Ｌ−リジン−２９^Ｂ−Ｌ
−プロリンヒトインスリン）を除いてその一次アミノ酸配列という点ではヒトインスリ
ンと同一である。インスリンリスプロ（ＣＡＳ番号１３３１０７−６４−９）は、モル基
準でヒトインスリンと等しい効力であることが示されているが、皮下注射後のその効果は
注射された可溶性ヒトインスリンよりも迅速で短い持続時間である。ＨＵＭＡＬＯＧ（登
録商標）は、保存剤としてのｍ−クレゾール、及び安定剤、等張化調整剤（グリセロール
）、緩衝化剤（二塩基リン酸ナトリウム）、安定剤（酸化亜鉛）及びビヒクル用のｐＨ調
整剤を含有する。

インスリンリスプロの分子は、インスリンリスプロＢ鎖と架橋したヒトインスリンＡ鎖
（配列番号１）から成り、インスリンリスプロＢ鎖のアミノ酸配列は以下の配列番号３に
よって与えられる：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡ
ｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈ
ｒＬｙｓＰｒｏＴｈｒ（配列番号３）

インスリンリスプロの化学式はＣ_２５７Ｈ_３８３Ｎ_６５Ｏ_７７Ｓ_６であり、その分子量
はおよそ５８０８である。インスリンリスプロの１単位は０．０３４７ｍｇのインスリン
リスプロと等価である。

ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標）における薬剤物質であるインスリンアスパルト（ＣＡＳ番
号１１６０９４−２３−６）は、別の即効型インスリン類似体である。その構造は、ヒト
インスリンのＡ鎖（配列番号１）と、以下のアミノ酸配列で反映されるようなＢ２８にお
けるＰｒｏがＡｓｐで置き換えられている（Ｐｒｏ−Ｂ２８−Ａｓｐ−ヒトインスリン）
Ｂ鎖とから成る：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡ
ｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈ
ｒＡｓｐＬｙｓＴｈｒ（配列番号４）

インスリンアスパルト（２８^Ｂアスパラギン酸−ヒトインスリン）は実験式Ｃ_２５６Ｈ
_３８１Ｎ_６５Ｏ_７９Ｓ_６及び約５８２６の分子量を有する。インスリンアスパルトの１単
位は、０．０３５ｍｇの塩を含まない無水インスリンアスパルトに相当する６ナノモルに
相当する。

ＡＰＩＤＲＡ（登録商標）における薬剤物質であるインスリングルリジン（ＣＡＳ番号
２０７７４８−２９−６）はさらに別の即効型インスリン類似体である。インスリングル
リジンの分子は、ヒトインスリンＡ鎖（配列番号１）と、以下のアミノ酸配列で反映され
るようなヒトインスリンと比べて修飾されたＢ鎖（Ａｓｎ−Ｂ３−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｂ２
９−Ｇｌｕ）とから成る：
ＰｈｅＶａｌＬｙｓＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡ
ｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈ
ｒＰｒｏＧｌｕＴｈｒ（配列番号５）

インスリングルリジン（３^Ｂ−リジン−２９^Ｂ−グルタミン酸−ヒトインスリン）は実
験式Ｃ_２５８Ｈ_３８４Ｎ_６４Ｏ_７８Ｓ_６及び５８２３の分子量を有する。インスリングル
リジンの１単位は０．０３４９ｍｇのインスリングルリジンに近似して相当する。

以下のスキームは、血糖の食事時変動を治療することにおける使用について現在認可さ
れているヒトインスリン及び即効型インスリン類似体のアミノ酸配列及びジスルフィド結
合を示す。
ヒトインスリンＡ鎖

特定の実施形態では、本発明の組成物は約１００〜約５００ＩＵ／ｍＬのインスリンの
濃度を有する。特定の実施形態では、本発明の組成物は約１００〜約３００ＩＵ／ｍＬの
インスリンの濃度を有する。特定の実施形態では、本発明の組成物は約１００〜約２００
ＩＵ／ｍＬのインスリンの濃度を有する。特定の組成物は約１００ＩＵ／ｍＬを含む。特
定の組成物は約２００ＩＵ／ｍＬを含む。

本発明で実証された上記で参照されたインスリン類似体の時間作用プロファイルにおけ
る改善は、特定の特別な濃度のクエン酸塩の使用を介して、ＵＳ２０１２／０１７８６７
５及びＵＳ２０１４／０１１３８５６にて記載されたもの（たとえば、ＥＤＴＡ）のよう
な追加のキレート剤、ＵＳ２０１５／００６５４２３にて記載されたもの（たとえば、ニ
トログリセリン）のような追加の血管拡張剤、またはＵＳ２０１３／０２３１２８１にて
記載されたもののような他のオリゴ糖を必要とすることなく達成される。

クエン酸イオンは、化学名２−ヒドロキシプロパン−１,２,３−トリカルボキシレート
、分子式Ｃ_６Ｈ_５Ｏ_７ ^−３、及び１８９の分子量を有する。クエン酸イオンは植物及び動
物に広く分布し、食事の天然に存在する成分である。それは、酸化的代謝の一般的な代謝
産物であり、骨の重要な成分である。多数のクエン酸塩は、以下を含めて、食物での使用
について米国食品医薬品局によってＧＲＡＳ（安全であると一般に見なされる）となって
いる。

たとえば、クエン酸、クエン酸一水和物、無水クエン酸、クエン酸ナトリウム、無水ク
エン酸三ナトリウム、クエン酸三ナトリウム２水和物を含む種々のクエン酸含有化合物も
米国食品医薬品局の不活性成分データベースに従って非経口薬剤製品における成分として
も含められる。本発明の組成物で使用される特定のクエン酸化合物は酸性形態または種々
の塩形態、特にそのアルカリ（たとえば、ナトリウム及びカリウム）塩及び／またはその
一水和物または二水和物であってもよい。当然、クエン酸ナトリウムが好まれる。一部の
実施形態では、本発明の組成物におけるクエン酸塩の濃度は約１０から約３５ｍＭまたは
約１５ｍＭから約３５ｍＭに及ぶ。好まれる実施形態では、クエン酸塩の濃度は約１０か
ら約３０ｍＭまたは約１５ｍＭから約３０ｍＭに及ぶ。特定の好まれる実施形態では、ク
エン酸塩の濃度は約１５から約２５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、クエン酸塩の濃度
は約１５から約２５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、クエン酸塩の濃度は約１５から約
２０ｍＭまたは約２０ｍＭから約２５ｍＭに及ぶ。特定の組成物は約１５、約２０、約２
５、約３０または約３５ｍＭのクエン酸塩濃度を有する。

クエン酸塩の添加は時間作用における改善を生じることが見いだされているけれども、
クエン酸塩の添加はまた安定性の見地からのさらに大きな不利益ももたらす。従って、長
期間の保存及び使用のために十分な化学的且つ物理的な安定性を有するために、本発明の
組成物はさらに、たとえば、亜鉛、マグネシウム、塩化物及び界面活性剤のような安定化
剤を含み、含有する。

酸化亜鉛を加えて所望の化学量論の亜鉛イオンを提供してもよい。インスリン６量体は
２つの特異的で高親和性の亜鉛結合部位を有する。そのような６量体に組み込まれた亜鉛
イオンは「結合された」亜鉛と呼ばれることがある。現在利用できる亜鉛含有の製剤には
インスリンの６量体当たり約２〜４の間の亜鉛イオンが含まれる。一部の市販のインスリ
ン組成物はインスリンの６つの分子（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）ＲＵ−５００）当たり
亜鉛の約２．４のイオンを有し、一部はインスリンの６つの分子（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録
商標）、ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））当たり亜鉛の約３．０のイオンを有する。インス
リンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））及びインスリンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯ
Ｇ（登録商標））の１００Ｕ／ｍＬ製剤はインスリンの６つの分子当たり亜鉛の約３．０
のイオンを有し、それは約０．３ｍＭの濃度に一致する。ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）の
現在利用できる２００Ｕ／ｍＬ製剤はインスリンの６つの分子当たり亜鉛の約３．５のイ
オンを有し、それは約０．７ｍＭの亜鉛濃度に一致する。ＥｌｉＬｉｌｌｙａｎｄ
Ｃｏｍｐａｎｙ（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｒ）によって販売されているヒトインスリ
ンの現在利用できる１００Ｕ／ｍＬ製剤はインスリンの６つの分子当たり亜鉛の約２．３
のイオンを含有し、それは約０．２３ｍＭの亜鉛濃度に一致する。

本発明の組成物は、インスリン分子が安定している６量体を形成するのに少なくとも十
分な亜鉛イオンを供給するのに十分な亜鉛濃度を有する。従って、本発明の組成物は、イ
ンスリンの６量体当たり亜鉛の少なくとも２イオンを提供するのに十分な亜鉛を含まなけ
ればならない。本発明の特定の実施形態の組成物は、約０．２ｍＭ〜約０．８ｍＭの亜鉛
濃度を有する。インスリン濃度が１００ＩＵ／ｍＬである場合、本発明の特定の実施形態
の亜鉛濃度は約０．３ｍＭである（約３．０のＺｎ／６つのインスリン分子）。たとえば
、約１００Ｕ／ｍＬ、約２００Ｕ／ｍＬ、約３００Ｕ／ｍＬ、または約５００Ｕ／ｍＬの
インスリン濃度を有する本発明の特定の実施形態では、インスリン６量体当たり亜鉛の２
イオンを提供するのに必要な最少の亜鉛濃度はそれぞれ、約０．２ｍＭ、約０．４ｍＭ、
約０．６ｍＭ、約１ｍＭということになる。

過剰な亜鉛の包含−すなわち、インスリン６量体で結合されるのよりも多い亜鉛を用い
て本発明の組成物をさらに安定させてもよい。そのような亜鉛は「遊離の」または「未結
合の」亜鉛と呼ばれることがある。本発明の特定の組成物では、過剰な遊離のまたは未結
合の亜鉛の包含は安定化効果を有することが見いだされている。約１００Ｕ／ｍＬのイン
スリンリスプロと約１ｍＭまでの亜鉛濃度を有する組成物は、―約０．２ｍＭの結合亜鉛
と約０．８ｍＭの未結合または遊離の亜鉛を構成することになるが―即効であり且つ安定
であることが見いだされている。しかしながら、多すぎる遊離のまたは未結合の亜鉛の包
含は時間作用における改善を減衰させ得る。たとえば、約１００Ｕ／ｍＬのインスリンリ
スプロと約５ｍＭの亜鉛濃度を有する組成物は、―約４．８ｍＭの未結合の亜鉛を構成す
ることになるが―さらに低い亜鉛濃度の組成物で見られる時間作用における改善を有さな
いことが見いだされた。本発明の特定の実施形態では、亜鉛の濃度は、約０．２から約２
ｍＭ、約０．４から約１ｍＭ、または約０．６から約０．９ｍＭに及ぶ。特定の実施形態
では、亜鉛の濃度は、約０．６、約０．７、約０．８または約０．９ｍＭである。

本発明の組成物におけるマグネシウム（Ｍｇ^＋２）の包含も安定化効果を有することが
見いだされている。マグネシウムイオンは、種々の方法にて、たとえば、ＭｇＣｌ_２の分
子式及び９５．２１１の分子量を有する塩化マグネシウムの添加を介して提供されてもよ
い。

マグネシウムは特定の組成物にて安定化効果を有してもよい一方で、クエン酸塩の濃度
を超える濃度はインスリンの沈殿を生じるであろう。従って、含められてもよいマグネシ
ウムの最大量は、含まれるクエン酸塩の量によって限定される。たとえば、本発明の組成
物における安定剤としてＭｇＣｌ_２が使用される場合、マグネシウムのクエン酸塩に対す
るモル比は約１：１０から約１：２に及ぶ。好ましくは、塩化マグネシウムのクエン酸塩
に対するモル比は約１：５から約１：３に及ぶ。従って、たとえば、クエン酸塩濃度が約
１０〜約３０ｍＭの間である組成物にて約１：１０〜約１：２のマグネシウムのクエン酸
塩に対するモル比を達成するために、マグネシウムの濃度は約１〜約１５ｍＭの間である
。同様に、クエン酸塩濃度が２５ｍＭである組成物にて約１：５〜約１：３のマグネシウ
ムのクエン酸塩に対するモル比を達成するために、マグネシウムの濃度は５から８．３ｍ
Ｍに及ぶ。特定の実施形態では、マグネシウムの濃度は約１から約１５ｍＭに及ぶ。特定
の実施形態では、マグネシウムの濃度は約１から約５ｍＭ、約５から約１０ｍＭ、または
約１０から約１５ｍＭに及ぶ。本発明の特定の実施形態における塩化マグネシウムの濃度
は１から約５ｍＭ（約０．４８ｍｇ／ｍＬ）に及ぶ。特定の実施形態では、マグネシウム
の濃度は約５ｍＭである。

本発明の組成物における塩化物イオン（Ｃｌ⁻）の特定の濃度の包含も安定化効果を有
することが見いだされている。塩化物イオンは、上述のようにマグネシウムを提供するた
めのＭｇＣｌ_２の使用を介して、または塩化ナトリウムの添加を介してを含む種々の方法
で提供されてもよい。本発明の特定の実施形態の組成物は塩化ナトリウムを含む。塩化ナ
トリウムの分子式はＮａＣｌであり、その分子量は５８．４４である。塩化ナトリウムは
、たとえば、５ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを含むＡＰＩＤＲＡ（登録商標）（インスリ
ングルリジン）、０．５８ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを含むＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標
）（インスリンアスパルト）のような即効型インスリン類似体の一部の現在利用できる製
剤にて使用されている。

たとえば、ＭｇＣｌ_２またはＮａＣｌのような塩化物含有賦形剤の組成物における包含
を介した特定量の塩化物の添加は安定化効果を有することが見いだされている一方で、組
成物の総塩化物含量が高すぎると、組成物におけるインスリンが低温で結晶化し得る。従
って、組成物の総塩化物含量が考慮に入れられなければならない。

組成物の総塩化物含量を決定するために、安定剤として塩化マグネシウム及び／または
塩化ナトリウムの添加を介して添加され得る塩化物イオンだけでなく、インスリンのバル
ク医薬品有効成分（ＡＰＩ）を伴った、ｐＨ調整に必要であってもよい少量のＨＣｌの添
加を介した、及び／またはＨＣｌによる酸化亜鉛（ＺｎＯ）の可溶化により調製される溶
液の形態で添加されてもよいＺｎの提供と合わせた他の成分の添加を介した塩化物イオン
も考慮に入れなければならない。

特定の実施形態では、塩化ナトリウムを用いて目標の塩化物の濃度または濃度範囲に達
するのに必要とされる追加の塩化物の量を提供する―すなわち、添加される塩化ナトリウ
ムの量は、目標の塩化物濃度から、たとえば、インスリンＡＰＩの添加を介した、ｐＨ調
整及び／または酸化亜鉛の安定化に必要であってもよい塩化マグネシウム及び／またはＨ
Ｃｌの添加を介した、他の成分の添加を介して提供される塩化物の量を差し引くことによ
って決定される。たとえば、製剤における目標の塩化物濃度が約２０ｍＭであり、１５ｍ
Ｍの塩化物がバルクインスリンＡＰＩ、塩化マグネシウム及びｐＨ調整に使用されるＨＣ
ｌの組み合わせを介して提供されるならば、５ｍＭの塩化ナトリウムを添加しなければな
らない。当業者は、そのような製剤に添加される塩化ナトリウムの量は、（１）他の供給
源を介して加えられる理論的な塩化物含量に基づいて必要とされるであろう追加の塩化物
の量を予め算出すること、または（２）塩化ナトリウムを除く賦形剤すべての製剤を調製
し、その製剤の塩化物含量を測定し、その量と目標とする塩化物の濃度または濃度範囲と
の間の差異を計算することによって決定されてもよいことを理解するであろう。水性製剤
の塩化物含量は、たとえば、滴定またはイオン選択性電極法のような種々の既知の技法を
用いて測定されてもよい。

加えて、相対的に高い塩化物濃度に関連する低温結晶化の課題はクエン酸塩濃度に敏感
であることが見いだされている。従って、本明細書で提供される範囲の下端でのクエン酸
塩濃度を有する本発明の組成物は、本明細書で提供される範囲の上端でのクエン酸塩濃度
を有する組成物よりも相対的に高い塩化物濃度に寛容であってもよい。たとえば、２５ｍ
Ｍのクエン酸塩を含有する製剤への５０〜７５ｍＭもの高い塩化ナトリウム濃度の添加は
、低温結晶化の課題をもたらすことが観察されているが、そのような課題は、５０ｍＭの
塩化ナトリウムを１５ｍＭのクエン酸塩製剤に加える場合または２５ｍＭの塩化ナトリウ
ムを２５ｍＭのクエン酸塩製剤に加える場合では、一貫して観察されるわけではない。

明瞭さの目的で、本明細書で使用されるとき、用語「塩化物」または「総塩化物」は、
任意の成分の添加に関連して、たとえば、２５ｍＭの塩化物を含むと述べられている組成
物における塩化物イオンの供給源、またはｐＨ調整もしくはＺｎＯの可溶化に必要とされ
るＭｇＣｌ_２、ＮａＣｌ及び／またはＨＣｌの添加を介して提供される塩化物に含まれる
総塩化物に関連して提供される組成物における塩化物イオンの総量を指す。一方、用語「
塩化マグネシウム」、｛ＭｇＣｌ_２」、「塩化ナトリウム」及び「ＮａＣｌ」は、組成物
に添加されるこれら特定の塩の量を指す。従って、５ｍＭの塩化マグネシウムと１０ｍＭ
の塩化ナトリウムとを含むとして記載されている組成物では、たとえば、塩化物または総
塩化物の濃度には、塩化マグネシウム、塩化ナトリウム及び、たとえば、ＨＣｌのような
他の供給源によって提供される塩化物イオンの合わせた量が含まれる。

本発明の特定の実施形態では、総塩化物の濃度は約１０から約６０ｍＭに及ぶ。特定の
実施形態では、総塩化物の濃度は約１５から約３５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、総
塩化物の濃度は約２０から約２５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、総塩化物の濃度は約
２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭまたは約２５ｍＭである。

本発明の特定の実施形態では、組成物は約１から約５０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウ
ム含む。特定の実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は約１〜約２５ｍＭである。特定の
実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は約１から約２０ｍＭに及ぶ。本発明の特定の実施
形態における塩化ナトリウムの濃度は約１５ｍＭ（約０．８８ｍｇ／ｍＬ）から約２５ｍ
Ｍ（約２．０ｍｇ／ｍＬ）に及ぶ。特定の実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は、約１
、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３
、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９または約２０ｍＭである。

必要に応じて十分な化学的且つ物理的な安定性を達成するために、組成物はさらに１以
上の追加の安定剤を含んでもよい。例となる安定剤には界面活性剤が挙げられる。驚くべ
きことに、安定剤としての界面活性剤とマグネシウムの組み合わせは本発明の組成物にお
いて相加または相乗を上回る安定化効果を有し得ることが発見されている。

非経口用医薬組成物での使用のために開示される界面活性剤の例には、ポリソルベート
２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）のようなポリソルベート、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３
０００、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００のようなポリエチレングリコール、ポリエチレ
ン（２３）ラウリルエーテル（ＣＡＳ番号：９００２−９２−０、商品名ＢＲＩＪ（登録
商標）のもとで販売）のようなポリエチレングリコール、たとえば、ＭＹＲＪ（商標）の
ようなアルコキシル化脂肪酸、ポリプロピレングリコール、ブロックコポリマー、たとえ
ば、ポロキサマー１８８（ＣＡＳ番号９００３−１１−６、商品名ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登
録商標）Ｆ−６８のもとで販売）及びポロキサマー４０７（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標
）Ｆ１２７）、ソルビタンアルキルエステル（たとえば、ＳＰＡＮ（登録商標））、ポリ
エトキシ化ヒマシ油（たとえば、ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ
（登録商標））ならびにトレハロース及びその誘導体、たとえば、ラウリン酸トレハロー
スエステルが挙げられる。特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２
３）ラウリルエーテル、ポロキサマー１８８及びラウリン酸トレハロースエステルから成
る群から選択される。好まれる界面活性剤はポロキサマー１８８である。特定の実施形態
では、たとえば、ポロキサマー１８８のような界面活性剤の濃度は、約０．００１から約
２％ｗ／ｖ、約０．００１から約０．２％ｗ／ｖ、約０．０３から約０．１２％ｗ／ｖ、
または約０．０６から約０．０９％ｗ／ｖに及ぶ。特定の実施形態では、ポロキサマー１
８８の濃度は約０．０６、約０．０７、約０．０８または約０．０９％ｗ／ｖである。

加えて、本発明の組成物は１以上の保存剤を含み、それは抗菌特性を提供するが、さら
に安定性の利益を提供してもよい。組成物は最初に製造されたとき無菌であるが、複数回
使用のバイアルまたはカートリッジで組成物が提供される場合、製剤の他の成分と相溶性
である抗菌保存剤化合物または化合物の混合物が通常、規制上及び薬局方上の抗菌保存剤
の要件を満たすのに十分な強さで加えられる。Ｕ．Ｓ．ＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａＭｏ
ｎｏｇｒａｐｈｓ．Ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｓｐｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．ＵＳＰ２９−
ＮＦ２４；ＢｒｉｔｉｓｈＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａＭｏｎｏｇｒａｐｈｓ２００
８ＶｏｌｕｍｅＩＩＩ：Ｉｎｓｕｌｉｎａｓｐａｒｔｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；Ｕ．
Ｓ．ＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａＭｏｎｏｇｒａｐｈｓ．Ｉｎｓｕｌｉｎａｓｓａｙｓ
；及びＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｇｅｎｅｒａｌｃｈａｐｔｅｒｓ．ＵＳＰ
２９−ＮＦ２４．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ：Ｕ．Ｓ．ＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌＣ
ｏｎｖｅｎｔｉｏｎ；２００５．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅ
ｓｓｔｅｓｔｉｎｇ；ｐｐ．２４９９-２５００を参照のこと。好まれる保存剤はアリ
ール酸及びフェノール化合物、またはそのような化合物の混合物である。

従って、本発明の組成物は１以上の保存剤を含む。上記で参照された方法を用いて有効
な濃度を容易に突き止めることができる。インスリン製品で一般に使用される保存剤には
、フェノール（ＣＡＳ番号１０８−９５−２、分子式Ｃ_６Ｈ_５ＯＨ、分子量９４．１１，
）、及びｍ−クレゾール（ＣＡＳ番号１０８−３９−４、分子式Ｃ_７Ｈ_８Ｏ、分子量１０
８．１４）が挙げられる。現在の市販の組成物は、たとえば、３．１５ｍｇ／ｍＬのｍ−
クレゾール（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）及びＡＰＩＤＲＡ（登録商標））、１．７２ｍ
ｇ／ｍＬのｍ−クレゾール及び１．５０ｍｇ／ｍＬのフェノール（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録
商標））、ならびに２．５ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｒ
Ｕ−５００）を含有する。本発明の組成物は１以上の保存剤を含む。実施形態では、保存
剤はフェノール及びメタクレゾール及びそれらの混合物から成る群から選択される。好ま
しくは、保存剤はメタクレゾールである。特定の実施形態では、メタクレゾールの濃度は
約２．５ｍｇ／ｍＬ〜約３．８ｍｇ／ｍＬである。好ましくは、メタクレゾールの濃度は
約３．１５ｍｇ／ｍＬである。

体液とほぼ等張ではない溶液は投与された際、痛く刺すような感覚を生じ得るので、組
成物を投与する際、注射部位での体液の等張性（すなわち、浸透圧）に出来るだけ近くほ
ぼ一致することが望ましい。従って、組成物は注射の部位での体液とほぼ等張であること
が望ましい。等張化剤の非存在下で組成物の浸透圧が組織の浸透圧（血液については３０
０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ；浸透圧についての欧州薬局方の要件は＞２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋ
ｇである）よりも十分に低ければ、そのときは、等張化剤を一般に加えて組成物の等張性
を約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで上げるべきである。典型的な等張化剤はグリセロール
（グリセリン）及び塩化ナトリウムである。等張化剤の添加が必要とされるのであれば、
グリセロールが好まれる。添加される等張化剤の量は標準の技法を用いて容易に決定され
る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｙ，ＤａｖｉｄＢ．ＴｒｏｙａｎｄＰａｕｌＢｅｒｉｎｇｅｒ，
ｅｄｓ．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６，
ｐｐ．２５７−２５９；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＥｓｓｅｎｔｉａｌｓｏｆＰｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃｓ，ＬｉｎｄａＥｄＦｅｌｔｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｐｒｅｓｓ，２０１３，ｐｐ．２７７−３００。特定の実施形態では、グリセロールの濃
度は約１〜約１６ｍｇ／ｍＬである。

特定の実施形態では、医薬組成物は保存及び使用の条件下では安定である。本明細書で
使用されるとき、用語「安定な」は、たとえば、５％未満のインスリン効能の喪失、１．
５％以下のＡ−２１デスアミドの形成、４％以下のインスリン及びＡ−２１デスアミド以
外の物質（まとめて他の関連物質（ＯＲＳ）と呼ばれる）の発生、１．５％未満の高分子
量（ＨＭＷ）形成、及び沈殿のない透明で無色の溶液の維持によって示されるような化学
的及び物理的双方の安定性を指す。そのような特性は、たとえば、以下で記載される試験
にて要約されるものを含む既知の技法によって測定されてもよい。特定の実施形態では、
医薬組成物は２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存を可能にするほど安定である。特定の
実施形態では、医薬組成物は、再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカー
トリッジ用に３０℃までの温度で２８日までの使用中を可能にするほど安定である。特定
の実施形態では、医薬組成物は、２〜８℃で少なくとも３６ヵ月の保存を可能にするほど
安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、再利用できるペン型注入器におけるバ
イアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で３２日までの使用中を可能にするほ
ど安定である。特定の実施形態では、組成物は、７日間まで連続皮下インスリン注入療法
のためのポンプ装置での使用を可能にするほど安定である。

上記で言及されたように、時間作用における改善に寄与するために添加されるクエン酸
塩は、特定のｐＨレベルで緩衝特性を有することも知られているが、所望であれば、追加
の緩衝化合物を含めてもよい。そのような緩衝化合物の例は、たとえば、二塩基リン酸ナ
トリウムのようなリン酸緩衝液、または酢酸ナトリウム及びトリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン（ＴＲＩＳ）である。リン酸塩またはＴＲＩＳの緩衝液が好まれる。市販の
インスリン組成物のｐＨは普通７．２〜７．６の範囲であり、一般的な目標ｐＨとしては
７．４±０．１である。本発明の組成物のｐＨは通常７．０〜７．８であり、それは、生
理的に適当な酸及び塩基、通常、塩酸１０％及び水酸化ナトリウム１０％を用いて調整さ
れる。好ましくは、ｐＨは約７．４である。

本発明の組成物の投与の経路は、静脈内、皮内または腹腔内の経路も使用されてもよい
けれども、通常、たとえば、注射器またはペン型用具による自己投与される皮下注射によ
る、または、インスリンポンプ装置による連続皮下インスリン注入療法によるであろう。
好ましくは、投与の経路は自己投与される皮下注射による。注射される活性剤の用量は患
者の主治医と相談して患者によって決定されるであろう。

本発明の追加の実施形態には以下で記載されるものが含まれる。
インスリン、クエン酸塩、亜鉛、マグネシウム、塩化物、界面活性剤及び保存剤を含む医
薬組成物。

インスリンがヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルトまたはイン
スリングルリジンから成る群から選択される、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

インスリンがインスリンリスプロである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

インスリン濃度が約１００〜５００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬
組成物。

インスリン濃度が約１００〜３００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬
組成物。

インスリン濃度が約１００〜２００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬
組成物。

インスリン濃度が約１００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
インスリン濃度が約１００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

クエン酸塩の濃度が約１０〜約３５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

クエン酸塩の濃度が約１０〜約３０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

クエン酸塩の濃度が約１５〜約３５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

クエン酸塩の濃度が約１５〜約３０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

クエン酸塩の濃度が約１５〜約２５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

クエン酸塩の濃度が約１５〜約２０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

クエン酸塩の濃度が約２０〜約２５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

亜鉛の濃度が約０．２〜約２ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

亜鉛の濃度が約０．３〜約１ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

亜鉛の濃度が約０．４〜約１ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

亜鉛の濃度が約０．６〜約０．９ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物
。

マグネシウムのクエン酸塩に対するモル比が約１：１０〜約１：２である、上述の実施
形態のいずれかの医薬組成物。

マグネシウムのクエン酸塩に対するモル比が約１：５〜約１：３である、上述の実施形
態のいずれかの医薬組成物。

マグネシウムの濃度が約１〜約１５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

マグネシウムの濃度が約１〜約５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物
。

マグネシウムの濃度が約５〜約１０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成
物。

マグネシウムの濃度が約１０〜約１５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組
成物。

マグネシウムの濃度が約３〜約８ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物
。

マグネシウムの濃度が塩化マグネシウムの包含を介して提供される、上述の実施形態の
いずれかの医薬組成物。

総塩化物の濃度が約１０〜約６０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物
。

総塩化物の濃度が約１５〜約３５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物
。

総塩化物の濃度が約１５〜約３０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物
。

総塩化物の濃度が約２０〜約２５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物
。

組成物が約１から約５０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む、上述の実施形態のい
ずれかの医薬組成物。

組成物が約１から約２５ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む、上述の実施形態のい
ずれかの医薬組成物。

組成物が約１から約２０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む、上述の実施形態のい
ずれかの医薬組成物。

界面活性剤の濃度が約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖである、上述の実施形態のいずれ
かの医薬組成物。

界面活性剤がポロキサマー１８８である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

ポロキサマー１８８の濃度が約０．００３〜約０．２％ｗ／ｖである、上述の実施形態
のいずれかの医薬組成物。

ポロキサマー１８８の濃度が約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖである、上述の実施形態
のいずれかの医薬組成物。

ポロキサマー１８８の濃度が約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖである、上述の実施形態
のいずれかの医薬組成物。

保存剤がフェノール及びメタクレゾールから成る群から選択される、上述の実施形態の
いずれかの医薬組成物。

保存剤がメタクレゾールである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

メタクレゾールの濃度が約２．５〜約３．８ｍｇ／ｍＬである、上述の実施形態のいず
れかの医薬組成物。

さらに等張化剤を含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

等張化剤としてグリセロールを含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

約１〜約１６ｍｇ／ｍＬの濃度で等張化剤としてグリセロールを含む、上述の実施形態
のいずれかの医薬組成物。

さらに追加の緩衝液を含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物のｐＨが約７．０〜約７．８である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なく
とも２０％迅速である血中へのインスリンの取り込みを提供する、上述の実施形態のいず
れかの医薬組成物。

組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なく
とも２０％迅速である作用の発現を提供する、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なく
とも３０％迅速である血中へのインスリンの取り込みを提供する、上述の実施形態のいず
れかの医薬組成物。

組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なく
とも３０％迅速である作用の発現を提供する、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物が２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存を可能にするほど安定である、上述の実
施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物が再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃
までの温度で２８日までの使用中を可能にするほど安定である、上述の実施形態のいずれ
かの医薬組成物。

組成物が２〜８℃で少なくとも３６ヵ月の保存を可能にするほど安定である、上述の実
施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物が再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃
までの温度で３２日までの使用中を可能にするほど安定である、上述の実施形態のいずれ
かの医薬組成物。

組成物が７日間までの連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置での使用を可能
にするほど安定である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物が追加のキレート剤を含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物がＥＤＴＡを含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物が、ＥＤＴＡ、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、アルギン酸、アルファ
リポ酸、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、または１，２−ジアミノシクロヘキサン四
酢酸（ＣＤＴＡ）を含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物がどんな血管拡張剤も含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

組成物がどんなニトログリセリンも含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物
。

組成物が、アデノシン、内皮由来過分極因子、ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥＳ）
阻害剤、カリウムチャンネル開口薬、プロスタサイクリン、フォルスコリン、ニトログリ
セリン、酸化窒素形成剤、亜硝酸アミル、またはニトロプルシドを含まない、上述の実施
形態のいずれかの医薬組成物。

組成物がどんなオリゴ糖も含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

それを必要とするヒトに有効用量の上述の実施形態のいずれかの医薬組成物を投与する
ことを含む、糖尿病を治療する方法。

治療法で使用するための上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

糖尿病の治療で使用するための上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。

糖尿病の治療のための薬物の製造において使用するための上述の実施形態のいずれかの
医薬組成物。

上述の実施形態のいずれかの医薬組成物のいずれか１つを含む複数回使用バイアル。

上述の実施形態のいずれかの医薬組成物のいずれか１つを含む再使用できるペン型注入
器。

上述の実施形態のいずれかの医薬組成物のいずれか１つを含む連続皮下インスリン注入
療法のためのポンプ装置。

本発明は以下の実施例によってさらに説明されるが、それらは限定として解釈されるべ
きではない。

薬物動態試験及び薬物力学試験
３５ｍＭのクエン酸塩と０．３ｍＭの亜鉛と５ｍＭのＭｇＣｌ_２と２３ｍＭのＮａＣｌと
共に製剤化されたインスリンリスプロ
以前固定した血管アクセスポートを持つ糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オス
のユカタンミニブタをスタッフ及び獣医の監督のもとで使用した。糖尿病の動物は個別に
飼育し、新鮮な水を自由摂取させる。１日２回の標準餌の食餌を与え、１日２回の適当な
維持基準及び食餌時のインスリンを与えて糖尿病状態を管理する。

試験物品（以下の表における組成物Ａ）を製剤化し、試験場所に送ったが、Ｈｕｍａｌ
ｏｇ（登録商標）インスリン対照は試験場所でのその場の市販のバイアルだった。
表１

試験の前日、動物には１日の分配量の半分の餌を与え、朝の維持投与で０．２Ｕ／ｋｇ
のＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）Ｍｉｘ７５／２５インスリンを投与した。試験動物すべて
を一晩絶食させ、試験日での薬剤投与に先立って夕方のインスリンまたは餌を与えなかっ
た。

試験の朝、拘束するために動物すべてをスリングに入れ、血管アクセスポート（採血の
ために設けた）にアクセスし、開存性をチェックした。動物を無作為に処理群に入れた。
これはｎ＝１３での完全なクロスオーバー計画だった。１匹の動物が組成物Ａ処理群に参
加しなかったので、その処理群ではｎ＝１２だった。

２回のベースライン血液試料（−３０分と−２０分）を採取した後、動物を檻に戻し、
約３００ｇを食べさせた。完全な餌の消費の提示の２０分後、Ｔｅｒｕｍｏインスリン注
射器（１／２”の針で０．３または０．５ｍＬ）によって試験物品を動物の脇腹の皮下に
注射した（０分）。残りの採血期間全体を通して試験動物はすべて清潔で新鮮な水にアク
セスさせた。

以下の時点：−３０、−２０（次いで直ちに餌を与えた）、０（投与直前）、皮下投与
後５、１０、１５、３０、４５、６０、７５、９０、１０５、１２０、１５０、１８０、
２４０及び３６０分にて各動物から連続血液試料（各２．０ｍＬ）を採取した。

血液試料（抗凝固剤：なし［血清］）を少なくとも３０分間、しかし、２時間を超えず
に常温で維持して凝固させた。次いで遠心分離によって血清を分離し、２つのアリコート
に分け、ほぼ−７０℃で凍結保存した。

血清グルコース濃度は、自動ＡＵ４８０臨床検査分析器（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔ
ｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｂｒｅａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて測定した。ＰＫ用のアリコ
ートは翌日配送サービスによってドライアイス上でＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅＣｏｒ
ｐ．，Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ，ＭＯに送り、詳細な試料伝票を含めた。

血清グルコースのデータは指定されない限り、平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして以
下の表２に示す。
表２

異なる時点で異なる製剤のもとで血清グルコースの変化を統計的に比較するために、微
分解析を利用した。各時点での血中グルコースの変化は現時点での一次微分係数（瞬間方
向変化）を特徴とする。次数１０までの多項式を各個動物の時間経過データに当て嵌める
。Ｂａｙｅｓｉａｎ情報基準（ＢＩＣ）を用いて多項式の最適な次数を選択する。各時点
での変化の比率をその時点での適合させた多項式曲線の微分係数として算出する。いった
ん微分係数が得られると、ＡＮＯＶＡモデルを当て嵌めて各時間での異なる製剤を比較す
る。動物ごとの変動はＡＮＯＶＡモデルで説明される。対比を構築して異なる製剤を比較
し、Ｒパッケージ「ｍｕｌｔｃｏｍｐ」を用いてｐ値を調整する。時間０の後に動物に投
与するので、時間０は解析に含まれない。１５０分を超える時点については、微分係数を
堅実に推定するのに十分な時点はないので、これらの時点は統計的解析から除外される。

組成物ＡはＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）に比べて、投与後５、１０及び１５分で有意に
（ｐ≦０．０１）速い血清グルコースの低下を生じた。

総インスリンＲＩＡを用いて、組成物Ａ処理群及びＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）処理群
について血清ＰＫ試料のインスリンレベルを測定した。アッセイについての定量の下限及
び上限はそれぞれ２０ｐＭ及び５０００ｐＭである。定量の下限を下回る値は２０ｐＭで
あると見なされる。ＰｈｏｅｎｉｘＷｉｎＮｏｎｌｉｎｖ６．３を用いて非コンパー
トメント薬物動態解析を行う。
表３

略記：Ｔｍａｘ＝最大濃度までの時間、Ｃｍａｘ＝最大濃度、ＡＵＣＩＮＦ＝０から無限
までの曲線下面積、ＣＬ／Ｆ＝クリアランス／生体利用効率
Ｔｍａｘの平均値及び中央値はＨｕｍａｌｏｇよりも組成物Ａにおいてそれぞれ５５％及
び７２％速い。

２５〜３５ｍＭのクエン酸塩と０．２８５ｍＭの亜鉛と５ｍＭのＭｇＣｌ_２と１５〜２３
ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたインスリンリスプロ

一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミ
ニブタにて、種々の濃度のクエン酸塩及び亜鉛、塩化マグネシウム及び塩化ナトリウムを
含む組成物の試験を行う。

試験物品（以下の表における組成物Ａ’及びＢ）を製剤化し、試験場所に送り、Ｈｕｍ
ａｌｏｇ（登録商標）インスリン対照は試験場所でのその場の市販のバイアルである。
表４

試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する２１匹のブタの完全クロスオーバー
計画として設計する（ｎ＝２１）。１匹の動物が＜２００ｍｇ／ｄｌのベースライン血糖
のためにＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）処理群から除外され、１匹の動物が非特許ポートの
ためにＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）処理群から除外されるので、その処理群ではｎ＝１９
である。１匹の動物が注射時の用量の報告ミスのために組成物Ａ’処理群から除外される
ので、その処理群ではｎ＝２０である。１匹の動物が＜２００ｍｇ／ｄｌのベースライン
血糖のために組成物Ｂ処理群から除外されるので、その処理群ではｎ＝２０である。

血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして以下の表５にて提示さ
れる。
表５

異なる時点で異なる製剤のもとで血清グルコースの変化を統計的に比較するために、一
般に上述の手順に従って、微分解析を利用した。組成物Ａ’及びＢはそれぞれ、Ｈｕｍａ
ｌｏｇ（登録商標）に比べて投与後５、１０及び１５分で血清グルコースにて有意に（ｐ
≦０．０１）速い低下を生じた。

血清インスリン濃度及びＰＫパラメータを生成し、上述のように一般に解析し、ＰＫの
結果を以下の表６にて提供する。
表６

中央値Ｔｍａｘは、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）よりも組成物Ａ’及びＢにおいて３３％
及び６７％速く、平均値ＴｍａｘはＨｕｍａｌｏｇよりも組成物Ｂにて４８％速い。

１５ｍＭのクエン酸塩と０．２８５ｍＭの亜鉛と５ｍＭのＭｇＣｌ_２と１５ｍＭのＮａＣ
ｌと共に製剤化されたインスリンリスプロ

一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミ
ニブタにて、クエン酸塩、亜鉛、塩化マグネシウム及び塩化ナトリウムを含む組成物で試
験を行う。組成物Ｃを製剤化し、試験場所に送り、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照は市
販のバイアルである。
表７

試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する１３匹のブタの完全クロスオーバー
計画として設計する（ｎ＝１３）。１匹の動物が＜２００ｍｇ／ｄｌのベースライン血糖
のために組成物Ｃ処理群から除外され、１匹の動物が注射時の用量の報告ミスのために組
成物Ｃ処理群から除外されるので、結果的にその処理群ではｎ＝１１である。

血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして以下の表８にて提示す
る。

表８

組成物ＣはＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照のプロファイルに比べてグルコースのプロ
ファイルでシフトを生じた。

血清インスリン濃度及びＰＫパラメータを生成し、上述のように一般に解析し、ＰＫの
結果を以下の表９にて提供する。
表９

Ｔｍａｘの平均値及び中央値はそれぞれ、Ｈｕｍａｌｏｇよりも組成物Ｃにて２８％及び
２５％速い。

２５ｍＭのクエン酸塩と０．２８５ｍＭの亜鉛と２５ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化され
たインスリンリスプロ

一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミ
ニブタにて、２５ｍＭのクエン酸塩、亜鉛、及び塩化ナトリウムを含む組成物で試験を行
う。

試験物品（以下の表における組成物Ｄ）を製剤化し、試験場所に送り、Ｈｕｍａｌｏｇ
（登録商標）インスリン対照は試験場所でのその場の市販のバイアルだった。
表１０

この試験は、同じ用量でのＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）と比較される３つの用量（０．
１、０．２及び０．４単位／ｋｇ）の組成物Ｄから成る。試験は、ブタすべてを処理すべ
てにおいて検討する２１匹のブタの完全クロスオーバー計画として設計する（ｎ＝２１）
。０．４単位／ｋｇの用量については、２匹の動物を組成物Ｄ処理群から除外した（１匹
は病気のために及び１匹はポート非特許性のために）ので、その処理群ではｎ＝１９だっ
た。１匹の動物がＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）０．４単位／ｋｇ処理群から除外された（
ポート非特許性のために）ので、その処理群ではｎ＝２０だった。他の用量すべては各群
でｎ＝２１だった。

血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして表１１にて提示する。
表１１

異なる時点で異なる製剤のもとで血清グルコースの変化を統計的に比較するために、一
般に上述の手順に従って、微分解析を利用した。それぞれ同じ用量でのＨｕｍａｌｏｇ（
登録商標）に対して比較すると、組成物Ｄの３つの用量（０．１、０．２及び０．４Ｕ／
ｋｇ）はすべて５、１０及び１５分の時点での血糖レベルで有意に（ｐ≦０．０１）速い
低下を生じる。

薬物動態解析については、オンラインの無作為化ツールを用いて１１匹のブタを無作為
に選択した。これらのブタについての血清ＰＫ試料のためのインスリンレベルを、総イン
スリンＲＩＡを用いて測定する。アッセイについての定量の下限及び上限はそれぞれ２０
ｐＭ及び５０００ｐＭである。定量の下限を下回る値は２０ｐＭであると見なされる。Ｐ
ｈｏｅｎｉｘＷｉｎＮｏｎｌｉｎｖ６．３を用いて非コンパートメント薬物動態解析
を行う。
表１２

中央値Ｔｍａｘの値は、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）による同じ用量に比べて０．１Ｕ／
ｋｇ、０．２Ｕ／ｋｇ及び０．４Ｕ／ｋｇの組成物Ｄ群にて６７％、５０％及び４０％速
い。平均値Ｔｍａｘの値は、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）による同じ用量に比べて０．１
Ｕ／ｋｇ及び０．４Ｕ／ｋｇの組成物Ｄ群にて２０％及び３５％速かった。総曝露及びＣ
ｍａｘは、０．２Ｕ／ｋｇ及び０．４Ｕ／ｋｇの用量にてＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）よ
りも組成物Ｄで大きいと思われる。

２５ｍＭのクエン酸塩と５ｍＭのＭｇＣｌ_２と共に製剤化されたヒトインスリン、イン
スリンアスパルト及びインスリングルリジン

一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミ
ニブタにて、３種の異なるインスリン、２５ｍＭのクエン酸塩及び塩化マグネシウムを含
む組成物で試験を行う。

ＨＵＭＵＬＩＮ−Ｒ（登録商標）、ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標）及びＡＰＩＤＲＡ（登
録商標）の市販のバイアルに十分なクエン酸塩と塩化マグネシウムとを加え、２５ｍＭの
クエン酸塩と５ｍＭの塩化マグネシウムの濃度に達することによって試験物品（以下の表
における組成物Ｅ、Ｆ及びＧ）を製剤化する。
表１３

試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する完全クロスオーバー計画として設計
する（ｎ＝２０）。１匹の動物が＜２００ｍｇ／ｄｌのベースライン血糖のために組成物
Ｆ処理群から除外されるので、結果的にその群ではｎ＝１９である。血清グルコースのデ
ータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして表１４にて提示する。

表１４

インスリンアスパルト及びヒトインスリンのクエン酸塩含有製剤はそれぞれ、Ｎｏｖｏ
ｌｏｇ（登録商標）及びＨｕｍｕｌｉｎ−Ｒ（登録商標）の対照に比べてグルコースのプ
ロファイルにてシフトを生じる。インスリングルリジンのクエン酸塩含有製剤は、Ａｐｉ
ｄｒａ（登録商標）対照に比べて投与の後、最初のおよそ９０分間であまり顕著ではない
シフトを生じる。

種々の濃度のクエン酸塩とＭｇＣｌ_２と亜鉛と界面活性剤とＮａＣｌと共に製剤化された
インスリンリスプロ

一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミ
ニブタにて、種々の濃度のクエン酸塩、塩化マグネシウム、亜鉛、界面活性剤及び／また
は塩化ナトリウムを含む組成物で試験を行う。

以下の表における試験組成物Ｈ及びＪはバルクインスリンリスプロの医薬品有効成分（
ＡＰＩ）から調製され、以下の表における試験物品Ｉ及びＫはＨｕｍａｌｏｇ（登録商標
）製剤のバイアルにクエン酸塩と示した安定剤とを加えることによって調製され、それら
を試験場所に送付し、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）インスリン対照は試験場所でのその場
の市販のバイアルである。
表１５

試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する完全クロスオーバー計画として設計
する（ｎ＝１９）。１匹の動物が、ポート障害または動物の状態のために組成物Ｉ、Ｊ及
びＫの処理群のそれぞれから除外されるので、結果的にそれらの処理群ではｎ＝１８であ
る。血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして表１６にて提示する
。

表１６

クエン酸塩含有の製剤はＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照に比べてグルコースのプロフ
ァイルにてシフトを生じる。

Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）及び組成物Ｈ、Ｊ及びＫについての血清インスリン濃度及
びＰＫパラメータを生成し、上述のように一般に解析し、ＰＫの結果を以下の表１７にて
提供する。
表１７

結果は、組成物Ｈ、Ｊ及びＫがＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）よりも速いＰＫの作用発現
を有することを示している。

安定性試験
種々の濃度のクエン酸塩と塩化ナトリウムと塩化マグネシウムと共に製剤化されたインス
リンリスプロ

加速保存可能期間安定性試験を行って、種々の濃度のクエン酸塩、塩化ナトリウム、及
び任意で塩化マグネシウムと同時製剤化された場合のインスリンリスプロの安定性を評価
する。以下の表で述べられる組成を有する安定性試料は、以下の表で示される他の賦形剤
と共にインスリンリスプロの医薬品有効成分を製剤化することによって（組成物Ｌ、Ｍ及
びＮ）、またはＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）製剤のバイアルにクエン酸塩と塩化ナトリウ
ムとを加えることによって（組成物Ｏ）調製される。
表１８

０．２２ミクロンのＰＶＤＦ膜（Ｃａｔ番号ＳＬＧＶ０１３ＳＬ，Ｍｉｌｌｅｘ，Ｍｉ
ｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて溶液を濾過し、上にネジ蓋の付いた（Ｃａｔ番号Ｃ４０１５−
６７Ａ，ＮａｔｉｏｎａｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉ
ｃ，Ｉｎｃ）ガラス製のバイアル（Ｃａｔ番号ＮＣ４０１５−１，ＮａｔｉｏｎａｌＳ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．）に分配し、それ
ぞれ２〜８℃及び３０℃でインキュベートする。３０℃のインキュベート温度から分析の
ために開始時、８、１６、２７、３６、４４、５４及び６６日の時点で試料を取り出した
。５℃のインキュベート温度から分析のために開始時、２７、３６、４４、５４及び６６
日の時点で試料を取り出す。

サイズ排除高速液体クロマトグラフィ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）解析を行って、タンパク質
の有効性を評価し、２７６ｎｍでＵＶ検出器を用いて安定性の時点での各組成物における
高分子量種を定量する。２５分の流れ時間にわたって定組成溶出の移動相（０．１％ＴＦ
Ａ、５０％ＡＣＮ）にて１．０ｍＬ／分の流速でＳｅｐａｘＺｅｎｉｘ−ＣＳＥＣ−
８０、７．８×３００ｍｍの３μｍ粒子のカラム（ｃａｔａｌｏｇ番号２３３０８０−７
８３０）を用いて室温にて各試料（１０μＬ）を分離する。インスリン濃度は、インスリ
ンリスプロの基準面積とインスリンのピーク面積を比較し、逆相ＨＰＬＣにより決定され
た純度について調整することによって算出される。ＩＵ／ｍＬで報告された結果を以下で
示す。
表１９

表２０

クエン酸塩含有の試料及びＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照試料のインスリンの損失は
４℃及び３０℃で６６日目まで試料すべてについて５％未満である。

高分子量の比率（％ＨＭＷ）は主ピークに先立って溶出するピークすべての総面積％を
積分することによって算出される。結果（％ＨＭＷ）を以下の表で示す。
表２１

表２２

ＨＭＷの形成は、クエン酸塩含有の試料及びＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照試料のす
べてについて４℃及び３０℃で６６日目まで１％未満である。

逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）解析を行って、２１４ｎｍでのＵＶ
検出器を用いて安定性の時点で各組成物におけるタンパク質の純度を評価する。移動相Ａ
（５０ｍＭの硫酸塩、ｐＨ２．３＋２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ））及び移動相Ｂ（５
０ｍＭの硫酸塩、ｐＨ２．３＋５０％アセトニトリル（ｖ／ｖ））による０．６ｍＬ／分
の流速でのＷａｔｅｒｓＢｉｏＳｕｉｔｅＣ１８ＰＡ−Ｂ、３．５μｍ、２．１×
１５０ｍｍのＨＰＬＣカラム（Ｐａｒｔ番号１８６００２４３５）、または匹敵するカラ
ムを用いることによって各試料（５μＬ）を４０℃にて分離する。０、３、１５、２１、
２６、２７、２７．５及び３５．０分での移動相Ｂの勾配はそれぞれ、２１、２５、２５
、３０、８０、８０、２１及び２１％である。主ピークとＡ−２１デスアミドの外側にあ
る試料の比率は、１００パーセントから主ピークの比率とＡ−２１デスアミドの比率を差
し引くことによって決定される。まとめて、これらのピークは他の関連物質（ＯＲＳ）と
見なされる。結果（主ピークとＡ−２１デスアミドの外側の％）を以下で示す。
表２３

表２４

クエン酸塩含有の試料及びＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照試料のすべてについてのＯ
ＲＳは４℃にて６６日間で１．５％未満であり、３０℃にて６６日間で３．０％未満であ
る。
２５ｍＭのクエン酸塩と０．３ｍＭの亜鉛と５ｍＭのＭｇＣｌ_２と０．０９％のポロキサ
マーと種々の濃度の塩化物と共に製剤化されたインスリンリスプロの物理的安定性

バルク無菌操作用の水にて２００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロ／ｍＬと３２ｍｇのグ
リセリン／ｍＬと６．３０ｍｇのメタクレゾール／ｍＬと０．６ｍＭの亜鉛を含むリスプ
ロの濃縮ストック製剤を調製する。製剤は塩酸でｐＨ調整を行い、インスリンリスプロを
溶解し、次いで水酸化ナトリウムで７．４５のｐＨに合わせる。

次いで、インスリンリスプロ濃縮液をクエン酸ナトリウム緩衝液、塩化マグネシウム６
水和物粉末、ポロキサマー１８８溶液、及び顆粒状塩化ナトリウムで希釈し、バルク無菌
操作用の適量の水で、２３．２ｍＭ（組成物Ｐ）または１７．７ｍＭ（組成物Ｑ）の総塩
化物を伴った２５ｍＭのクエン酸塩、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．０９％のポロキサマー１
８８、１００単位／ｍＬのリスプロ、１６ｍｇ／ｍＬのグリセリン、３．１５ｍｇ／ｍＬ
メタクレゾール、及び０．３ｍＭの亜鉛の組成物にすることによって試験製剤を調製する
。

製剤を無菌濾過し、次いで容積測定して１０ｍＬのガラス製バイアルに移し、７ｍＬ満
たし、栓をしてクリンプシールする。

１３日間で、加速安定性試験（３０℃、１分当たり７５回のストロークで振盪（ｓｐｍ
））のバイアルは２、４、８及び１３日目での目視検査を受ける。沈殿のない透明で無色
の溶液を含有するバイアルを「合格」としてスコア化されたと見なす一方で、粒子状物質
を含有するまたは透明ではない及び／または変色している溶液含有するバイアルを「不合
格」として記録する。データは表２５にて以下で提供する。
表２５

マグネシウムを伴って及び伴わずに２５ｍＭのクエン酸塩と０．３ｍＭの亜鉛と０．０
９％のポロキサマーと２３ｍＭの総塩化物と共に製剤化されたインスリンリスプロの物理
的な安定性

次いで、インスリンリスプロ濃縮液をクエン酸ナトリウム緩衝液、ポロキサマー１８８
溶液、顆粒状塩化ナトリウム、任意で塩化マグネシウム６水和物粉末で希釈し、バルク無
菌操作用の適量の水で、２５ｍＭのクエン酸塩、０．０９％のポロキサマー１８８、１０
０単位／ｍＬのリスプロ、１６ｍｇ／ｍＬのグリセリン、３．１５ｍｇ／ｍＬメタクレゾ
ール、０．３ｍＭの亜鉛、２３ｍＭの総塩化物及び０ｍＭ（組成物Ｒ）または５ｍＭ（組
成物Ｓ）のＭｇＣｌ_２の組成物にすることによって試験製剤を調製する。

一般に上述の方法に続いて定期的な目視検査を伴う１３日間の加速安定性試験にバイア
ルを供する。データは表２６にて以下で提供する。
表２６

結果は、マグネシウムが組成物Ｒに比べて組成物Ｓの安定性を改善したことを支持して
いる。
２５ｍＭのクエン酸塩と５ｍＭのＭｇＣｌ_２と２０ｍＭの塩化物と０．６ｍＭの亜鉛と０
．０９％のポロキサマーと共に製剤化されたインスリンリスプロの物理的な安定性

１００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロ、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、２０ｍＭの塩化物、０．
６ｍＭの亜鉛、０．０９％ｗ／ｖのポロキサマー１８８、５ｍｇ／ｍＬのグリセリン、及
び３．１５ｍｇ／ｍＬメタクレゾール含む製剤（組成物Ｔ）で６９日間の加速保存可能期
間試験を行う。

ＨＣｌの添加によりｐＨを下げることによってグリセリン、メタクレゾール、リスプロ
及び酸化亜鉛をバルク無菌操作用の水に溶解することによりバルク濃縮製剤を調製する。
ＮａＯＨでｐＨを７．４〜７．５に合わせた後、組成物Ｔの最終的な目標賦形剤濃度を達
成するための適当な濃度のクエン酸塩と追加の安定剤の溶液を加える。この溶液は、バル
ク無菌操作用の水におけるクエン酸ナトリウム緩衝液と塩化亜鉛と塩化マグネシウム６水
和物とポロキサマー１８８とで構成される。必要に応じてｐＨを７．４〜７．５に合わせ
た後、塩化ナトリウム溶液を加えて目標の総塩化物濃度を達成する。次いでバルク無菌操
作用の水によって製剤を適量の容積に合わせる。

製剤を無菌濾過し、次いで容積測定して１０ｍＬのガラス製バイアルに移し、１０．３
ｍＬ満たし、栓をしてクリンプシールする。バイアルを静止且つ直立にて３０℃で保存し
、３６日目と６９日目に一般に上述の方法に従って目視検査する。各時点で検査したバイ
アルはすべて合格する（３６日目でｎ＝３、６９日目でｎ＝５）。これらの結果は、組成
物Ｔが加速保存可能期間試験にて沈殿がなく透明で且つ無色のままであることを支持して
いる。

種々の濃度のクエン酸塩とマグネシウムと塩化物と亜鉛と界面活性剤とグリセリンとＴ
ＲＩＳと共に製剤化されたインスリンリスプロ

以下の７種の製剤の物理的な安定性を使用試験における３２日間の模擬患者で調べる。
表２７

ＨＣｌの添加によりｐＨを下げることによってバルク無菌操作用の水に適当量のグリセ
リン、メタクレゾール、リスプロ、酸化亜鉛及び任意でＴＲＩＳを溶解することにより濃
縮リスプロストック溶液を調製する。２つの濃縮溶液の組成は以下とおりである：（１）
２００Ｕ／ｍＬのリスプロ、１２ｍＭの総塩化物、１０ｍｇ／ｍＬのグリセリン、６．３
ｍｇ／ｍＬのメタクレゾール、０．６ｍＭの総亜鉛、及び（２）２００Ｕ／ｍＬのリスプ
ロ、５１ｍＭの総塩化物、２．６ｍｇ／ｍＬのグリセリン、６．３ｍｇ／ｍＬのメタクレ
ゾール、０．６ｍＭの総亜鉛、８０ｍＭのＴＲＩＳ。次いでＮａＯＨまたはＨＣｌによっ
て溶液を７．４〜７．５のｐＨに合わせ、バルク無菌操作用の水によって容積を合わせる
。

クエン酸ナトリウム緩衝液、亜鉛のＨＣｌ溶液、ｐＨを合わせるための水酸化ナトリウ
ム、塩化マグネシウム６水和物溶液、ポロキサマー１８８溶液、及び塩化ナトリウム溶液
を順次加えることによりリスプロストック溶液を希釈することによって試験組成物を調製
する。組成物を無菌濾過し、次いで容積測定してバルク無菌操作用の水で適量に容積を合
わせる。組成物を容積測定して１０ｍＬのガラス製バイアルに移し、１０．３ｍＬ満たし
、栓をしてクリンプシールする。

組成物を３０℃で保存し、以下のステップで記載されているような疑似使用中投薬状態
に１日３回供する：インスリン注射器を入手し、８単位の空気を引き入れる；バイアルを
直立の位置におきながら針をバイアルに挿入する；針の先端がインスリン溶液に確実に触
れないようにする；バイアルに空気を注入する；針をバイアルの中で保持しながら、バイ
アルと注射器をひっくり返す；８単位の組成物を引き抜く；注射器に気泡があれば、プラ
ンジャーをゆっくり動かして気泡をバイアルに戻す；最終投与量が８単位であるように注
射器のプランジャーを調整する；注射器を取り出し、バイアルを３０℃のインキュベータ
に戻す。

一般に上述の方法に従って１５、２０、２５、２８及び３２日目に目視検査を行う。デ
ータは表２８にて提供される。
表２８

まとめると、上述の試験は、特定の特別な濃度のクエン酸と、たとえば、亜鉛、マグネ
シウム、塩化物及び界面活性剤のような他の賦形剤とを伴ったインスリンの組成物は作用
のさらに速い発現を有すると共にさらに速いグルコース低下効果を有し、特定の実施形態
では、化学的に且つ物理的に安定であることを実証している。

配列
ヒトのインスリンＡ鎖
ＧｌｙＩｌｅＶａｌＧｌｕＧｌｎＣｙｓＣｙｓＴｈｒＳｅｒＩｌｅＣｙｓＳｅｒＬｅｕＴ
ｙｒＧｌｎＬｅｕＧｌｕＡｓｎＴｙｒＣｙｓＡｓｎ（配列番号１）
ヒトのインスリンＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡ
ｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈ
ｒＰｒｏＬｙｓＴｈｒ（配列番号２）．
インスリンリスプロＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡ
ｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈ
ｒＬｙｓＰｒｏＴｈｒ（配列番号３）
インスリンアスパルトＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡ
ｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈ
ｒＡｓｐＬｙｓＴｈｒ（配列番号４）
インスリングルリジンＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＬｙｓＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡ
ｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈ
ｒＰｒｏＧｌｕＴｈｒ（配列番号５）

配列
ヒトのインスリンＡ鎖
ＧｌｙＩｌｅＶａｌＧｌｕＧｌｎＣｙｓＣｙｓＴｈｒＳｅｒＩｌｅＣｙｓＳｅｒＬｅｕＴｙｒＧｌｎＬｅｕＧｌｕＡｓｎＴｙｒＣｙｓＡｓｎ（配列番号１）
ヒトのインスリンＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＰｒｏＬｙｓＴｈｒ（配列番号２）．
インスリンリスプロＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＬｙｓＰｒｏＴｈｒ（配列番号３）
インスリンアスパルトＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＡｓｐＬｙｓＴｈｒ（配列番号４）
インスリングルリジンＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＬｙｓＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＰｒｏＧｌｕＴｈｒ（配列番号５）

本発明は、以下の態様を含む。
［１］
医薬組成物であって、
（ａ）インスリンと
（ｂ）約１０〜約３０ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｄ）約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウムと、
（ｅ）約１０〜約６０ｍＭの濃度での総塩化物と
（ｆ）約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖの濃度での界面活性剤と
（ｇ）保存剤とを含む、前記医薬組成物。
［２］
前記インスリンがインスリンリスプロである［１］に記載の医薬組成物。
［３］
前記インスリンリスプロの濃度が約１００〜約５００Ｕ／ｍＬである［１］または［２］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４］
前記クエン酸塩の濃度が約１５〜約２５ｍＭである［１］〜［３］のいずれかに記載の医薬組成物。
［５］
前記亜鉛の濃度が約０．３〜約１．１ｍＭである［１］〜［４］のいずれかに記載の医薬組成物。
［６］
前記マグネシウムの濃度が塩化マグネシウムの包含を介して提供される［１］〜［５］のいずれかに記載の医薬組成物。
［７］
前記マグネシウムの濃度が約３〜約８ｍＭである［１］〜［６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［８］
前記塩化物の濃度が約１５〜約３５ｍＭである［１］〜［７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［９］
前記塩化物の濃度が約２０〜約２５ｍＭである［１］〜［８］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１０］
約１から約５０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む［１］〜［９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１１］
約１から約２５ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む［１］〜［１０］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１２］
約１から約２０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む［１］〜［１１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１３］
前記界面活性剤がポロキサマー１８８である［１］〜［１２］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１４］
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．００３〜約０．２％ｗ／ｖである［１３］に記載の医薬組成物。
［１５］
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖである［１４］に記載の医薬組成物。
［１６］
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖである［１５］に記載の医薬組成物。
［１７］
前記保存剤が、フェノール及びメタクレゾール及びそれらの混合物から成る群から選択される［１］〜［１６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１８］
前記保存剤がメタクレゾールである［１］〜［１７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１９］
前記メタクレゾールの濃度が約２．５〜約３．８ｍｇ／ｍＬである［１８］に記載の医薬組成物。
［２０］
さらに等張化剤を含む［１］〜［１９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２１］
前記等張化剤がグリセロールである［２０］に記載の医薬組成物。
［２２］
さらに追加の緩衝液を含む［１］〜［２１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２３］
前記組成物のｐＨが約７．０〜約７．８である［１］〜［２２］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２４］
医薬組成物であって
（ａ）約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
［２５］
医薬組成物であって
（ａ）１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｄ）約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
前記組成物のｐＨが約７．４である、前記医薬組成物。
［２６］
医薬組成物であって
（ａ）２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
（ｈ）前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
［２７］
医薬組成物であって
（ａ）約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンと
（ｂ）約１５〜約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約５ｍＭまでの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．２〜約０．８ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約１５〜約２５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、
（ｆ）界面活性剤と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
（ｈ）前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
［２８］
前記組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なくとも２０％迅速である血中へのインスリンの取り込みを提供する［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２９］
前記組成物が、２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存及び３０℃までの温度で２８日までの使用中を可能にするほど安定である［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３０］
前記組成物がＥＤＴＡを含まない［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３１］
前記組成物がどんな血管拡張剤も含まない［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３２］
前記組成物がどんなオリゴ糖も含まない［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３３］
それを必要とするヒトに有効用量の［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、糖尿病の治療方法。
［３４］
治療法で使用するための［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３５］
糖尿病の治療で使用するための［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３６］
糖尿病の治療のための薬物の製造における［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
［３７］
［１］〜［２７］に記載の医薬組成物のいずれか１つを含む製造物品。
［３８］
複数回使用のバイアルである［３７］に記載の製造物品。
［３９］
再利用できるペン型注入器である［３７］に記載の製造物品。
［４０］
連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である［３７］に記載の製造物品。

Claims

医薬組成物であって、
（ａ）インスリンと
（ｂ）約１０〜約３０ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｄ）約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウムと、
（ｅ）約１０〜約６０ｍＭの濃度での総塩化物と
（ｆ）約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖの濃度での界面活性剤と
（ｇ）保存剤とを含む、前記医薬組成物。
前記インスリンがインスリンリスプロである請求項１に記載の医薬組成物。
前記インスリンリスプロの濃度が約１００〜約５００Ｕ／ｍＬである請求項１または２
のいずれかに記載の医薬組成物。
前記クエン酸塩の濃度が約１５〜約２５ｍＭである請求項１〜３のいずれかに記載の医
薬組成物。
前記亜鉛の濃度が約０．３〜約１．１ｍＭである請求項１〜４のいずれかに記載の医薬
組成物。
前記マグネシウムの濃度が塩化マグネシウムの包含を介して提供される請求項１〜５の
いずれかに記載の医薬組成物。
前記マグネシウムの濃度が約３〜約８ｍＭである請求項１〜６のいずれかに記載の医薬
組成物。
前記塩化物の濃度が約１５〜約３５ｍＭである請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組
成物。
前記塩化物の濃度が約２０〜約２５ｍＭである請求項１〜８のいずれかに記載の医薬組
成物。
約１から約５０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む請求項１〜９のいずれかに記載
の医薬組成物。
約１から約２５ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む請求項１〜１０のいずれかに記
載の医薬組成物。
約１から約２０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む請求項１〜１１のいずれかに記
載の医薬組成物。
前記界面活性剤がポロキサマー１８８である請求項１〜１２のいずれかに記載の医薬組
成物。
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．００３〜約０．２％ｗ／ｖである請求項１３に
記載の医薬組成物。
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖである請求項１４に
記載の医薬組成物。
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖである請求項１５に
記載の医薬組成物。
前記保存剤が、フェノール及びメタクレゾール及びそれらの混合物から成る群から選択
される請求項１〜１６のいずれかに記載の医薬組成物。
前記保存剤がメタクレゾールである請求項１〜１７のいずれかに記載の医薬組成物。
前記メタクレゾールの濃度が約２．５〜約３．８ｍｇ／ｍＬである請求項１８に記載の
医薬組成物。
さらに等張化剤を含む請求項１〜１９のいずれかに記載の医薬組成物。
前記等張化剤がグリセロールである請求項２０に記載の医薬組成物。
さらに追加の緩衝液を含む請求項１〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
前記組成物のｐＨが約７．０〜約７．８である請求項１〜２２のいずれかに記載の医薬
組成物。
医薬組成物であって
（ａ）約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
医薬組成物であって
（ａ）１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｄ）約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
前記組成物のｐＨが約７．４である、前記医薬組成物。
医薬組成物であって
（ａ）２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
（ｈ）前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
医薬組成物であって
（ａ）約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンと
（ｂ）約１５〜約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約５ｍＭまでの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．２〜約０．８ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約１５〜約２５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、
（ｆ）界面活性剤と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
（ｈ）前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
前記組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少
なくとも２０％迅速である血中へのインスリンの取り込みを提供する請求項１〜２７のい
ずれかに記載の医薬組成物。
前記組成物が、２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存及び３０℃までの温度で２８日ま
での使用中を可能にするほど安定である請求項１〜２７のいずれかに記載の医薬組成物。
前記組成物がＥＤＴＡを含まない請求項１〜２７のいずれかに記載の医薬組成物。
前記組成物がどんな血管拡張剤も含まない請求項１〜２７のいずれかに記載の医薬組成
物。
前記組成物がどんなオリゴ糖も含まない請求項１〜２７のいずれかに記載の医薬組成物
。
それを必要とするヒトに有効用量の請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物
を投与することを含む、糖尿病の治療方法。
治療法で使用するための請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
糖尿病の治療で使用するための請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
糖尿病の治療のための薬物の製造における請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬
組成物の使用。
請求項１〜２７に記載の医薬組成物のいずれか１つを含む製造物品。
複数回使用のバイアルである請求項３７に記載の製造物品。
再利用できるペン型注入器である請求項３７に記載の製造物品。
連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である請求項３７に記載の製造物品。