JP4147234B2 - 吐出用液体、吐出方法、カートリッジ及び吐出装置 - Google Patents
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Description
近年、蛋白質、特に酵素や生理活性を持つ有用な蛋白質等は遺伝子組換えの技術等により量産可能になってきており、蛋白質の新たな医薬としての探索や利用、応用の分野に蛋白質の液滴化は有効な手段と成り得る。中でも、微小液滴によって患者に数多くの薬剤を投与する手段は近年その重要性を増してきている。特に蛋白質、ペプチドその他の生体物質の肺からの投与において重要となっている。肺はその肺胞表面積が50〜140m2と広大であり、吸収障壁である上皮は0.1μmと薄く、加えて酵素活性も消化管と比べて小さいため、インスリンに代表される高分子ペプチド系薬物の注射に代わる投与ルートとして注目されてきた。
前記グアニジウム基を有する化合物が、下記一般式(1)および(2)で表される化合物ならびにN,N’−ジメチルビグアナイド、さらにそれらの塩類からなる群より選ばれる化合物である吐出用液体である。
R 4 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基である。]
R 6 は水素原子であり、
R 7 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基であり、
R 8 は水素原子であり、
R 9 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアシル基である。]
また、本発明は、蛋白質及びペプチドから選択される少なくとも1種を含み、サーマルインクジェット方式により吐出する吐出用液体を作製するための、グアジニウム基を有する化合物の使用であって、
前記グアニジウム基を有する化合物が、下記一般式(1)および(2)で表される化合物ならびにN,N’−ジメチルビグアナイド、さらにそれらの塩類からなる群より選ばれる化合物である、グアニジウム基を有する化合物の使用である。
R 4 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基である。]
R 6 は水素原子であり、
R 7 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基であり、
R 8 は水素原子であり、
R 9 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアシル基である。]
ことも可能である。
(サーマルインクジェット方式による蛋白質溶液の液滴化)
吐出用液体の作製手順は、予め適切な濃度のアルブミンをPBSバッファーに溶解させ、さらに攪拌しながらグアニジウム基を有する化合物を加えた後、各物質の濃度を所望の濃度になるようPBSバッファーを用いて定容を行った。
(各種蛋白質への効果と添加物の濃度)
続いて、グアニジウム基を有する化合物としてアルギニンを選択し、各種蛋白質にある濃度にて添加した。これら吐出用液体を実施例1と同様の吐出実験により評価を行った。なお本実施例で検討した処方、及び結果を下記表2に列挙した。
(実施例32)
(薬理活性の確認)
実施例10で示した組成において、吐出前後の薬理活性について検討を行った。実験は、1日間絶食させたウィスターラット(雄性、8週齢、体重約250g)に、ネンブタール麻酔を施した後、尾静脈より採血し、この状態をベースラインとした。その後、実施例10の組成の溶液をサーマルインクジェット方式で吐出して回収し、1.6U/kgとなるよう皮下投与し、投与後15、30.60,120分後に尾静脈より採血を行った。採血した血液を遠心分離し、得られた血清について血糖値の測定を行った(1群6匹)。サーマルインクジェット方式で吐出していない添加物なしのインスリン溶液について同様に対照実験を行い、比較例とした。サーマルインクジェット方式で吐出した実施例10溶液投与群について、血糖値の変化より薬理活性の変化の有無を検討した。その結果を図7に示す。
(実施例33)
(吐出の効率)
1.0mg/mLの濃度でインスリンを含む溶液について、サーマルインクジェット方式で吐出を行い、添加物を加えた場合と加えない場合の吐出量の評価とその再現性を確認した。
(グアニジウム基を有する化合物と界面活性剤による相乗効果)
蛋白質にグアニジウム基を有する化合物を添加した溶液に、さらに界面活性剤を加え、吐出用液体を調製した。これら吐出用液体を実施例1と同様の吐出実験により評価を行った。なお本実施例で検討した処方、及び結果を下記表3に列挙した。
(インクジェットプリンターを用いた抗体チップの作製及びセンシング)
図9に本実施例のモデル図を示す。Human IL2モノクローナル抗体、Human IL4モノクローナル抗体及びHuman IL6モノクローナル抗体をそれぞれ0.1〜500μg/mLの濃度でPBSを用いて調製した。ここにL−アルギニンを1%(w/w)となるように添加して吐出用液体とした。この液体をインクジェットプリンター(商品名PIXUS950i;キヤノン(株)社製)のヘッドに充填し、Poly−L−Lysinコートスライドガラス上に吐出した。
次に、チップと被検出物質であるリコンビナントIL2、IL4、IL6それぞれ1μg/mLを1.0%L−アルギニン(w/w)、0.5%Tween20(w/w)、0.1%BSA(w/w)とともにPBSで調製した。この液体をインクジェットプリンター(商品名PIXUS950i;キヤノン(株)社製)のヘッドに充填し、先ほどの基板上に同じパターンで吐出した。吐出後、基板上にカバーガラスをかけ、4℃で反応させた。反応後よく洗浄し、乾燥させた。
2 液流路
3 ヘッド
4 液滴
5 基板
6 駆動コントローラ
10 筐体
11 タンク
12 液流路
13 ヘッド部
14 配線
15 電気接続部
16 アクセスカバー
17 空気取り入れ口
18 マウスピース
19 電源ボタン
20 吸入器本体
21 ヘッドカートリッジユニット
30 基板
31 マスキング剤
32 被検物質と特異的な反応をする物質、蛋白質、ペプチド等
33 被検物質
34 被検物質と特異的な物質
35 標識
Claims (9)
- 蛋白質及びペプチドから選択された少なくとも1種と、グアニジウム基を有する化合物と、水を主体とする液媒体と、を含有することを特徴とし、サーマルインクジェット方式により吐出させるための吐出用液体であって、
前記グアニジウム基を有する化合物が、下記一般式(1)および(2)で表される化合物ならびにN,N’−ジメチルビグアナイド、さらにそれらの塩類からなる群より選ばれる化合物である吐出用液体。
R 4 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基である。]
R 6 は水素原子であり、
R 7 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基であり、
R 8 は水素原子であり、
R 9 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアシル基である。] - 前記グアニジウム基を有する化合物が、前記一般式(2)で表される化合物であって、R 6 は水素原子であり、R 7 は水素原子、メチル基またはエチル基であり、R 9 は水素原子、ホルミル基またはアセチル基である化合物である、請求項1に記載の吐出用液体。
- 前記グアニジウム基を有する化合物が、アルギニン、アルギニンメチルエステル、アルギニンエチルエステル、Nα−ホルミルアルギニン、Nα−アセチルアルギニン、2−アミノ−4−グアニジノ−ブタン酸、ホモアルギニン、グアニジンおよびN−エチルグアニジン、ならびにこれらの塩類からなる群より選ばれる一種又は二種以上の化合物である請求項1に記載の吐出用液体。
- 界面活性剤を更に含有する請求項1記載の吐出用液体。
- 前記界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである請求項4に記載の吐出用液体。
- 請求項1〜5のいずれかに記載の吐出用液体が収納されるタンクと、サーマルインクジェットヘッドと、を有することを特徴とする液体吐出用のカートリッジ。
- 請求項6に記載のカートリッジと、該カートリッジの有するサーマルインクジェットヘッドの液体吐出部から吐出される液体を利用者の吸入部位へ誘導するための噴射口と、を有することを特徴とする液体吸入用装置。
- 蛋白質及びペプチドから選択される少なくとも1種を含み、サーマルインクジェット方式により吐出する吐出用液体を作製するための、グアジニウム基を有する化合物の使用であって、
前記グアニジウム基を有する化合物が、下記一般式(1)および(2)で表される化合物ならびにN,N’−ジメチルビグアナイド、さらにそれらの塩類からなる群より選ばれる化合物である、グアニジウム基を有する化合物の使用。
R 4 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基である。]
R 6 は水素原子であり、
R 7 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基であり、
R 8 は水素原子であり、
R 9 は水素原子または炭素数1〜6の直鎖もしくは分岐鎖のアシル基である。] - 界面活性剤を共添加することを特徴とする請求項8に記載の化合物の使用。
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