ES2911207T3 - Composiciones de insulina de acción rápida - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende: a. una insulina, en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL; b. citrato, en una concentración de aproximadamente 15 a aproximadamente 35 mM; c. cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 0,8 mM; y d. un conservante; y en la que la composición no incluye EDTA ni ningún oligosacárido.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones de insulina de acción rápida

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica de insulina para su uso en el tratamiento de la diabetes con el fin de contrarrestar las excursiones postprandiales de glucosa en sangre y para el tratamiento agudo de la hiperglucemia. La composición incluye insulina humana o un análogo de la insulina, y concentraciones específicas de citrato, en algunos casos que incluyen la adición de cloruro de sodio, cinc y, opcionalmente, cloruro de magnesio y/o tensioactivos. La composición tiene una absorción más rápida de la insulina en los puntos de inyección que las composiciones comerciales de insulina existentes. La composición es útil para proporcionar actividad de insulina a la hora de la comida o un tratamiento agudo para la hiperglucemia cuando se necesita insulina.

El perfil de acción temporal de la insulina es importante para el control de los niveles de glucosa en sangre posprandiales. En las personas sanas, el páncreas segrega un pico de insulina en respuesta a los alimentos absorbidos, lo que provoca un aumento de los niveles de insulina en la sangre en varios minutos. En los individuos con diabetes de tipo 1 y en ciertos individuos con diabetes de tipo 2, se debe administrar insulina. Sin embargo, la insulina administrada entra en la sangre lentamente. Una liberación inadecuada de insulina y un inicio demasiado lento al principio de la comida conducen a una hiperglucemia durante o inmediatamente después de la comida. Una duración de acción demasiado larga y un exceso de insulina entre las comidas provocan una hipoglucemia postprandial.

Se han llevado a cabo esfuerzos previos para reducir el tiempo de acción de los productos de insulina. Los primeros esfuerzos para desarrollar estos productos incluyeron el desarrollo de nuevos análogos de insulina de “acción rápida”, como la insulina lispro (^h U^mALOG®), la insulina aspart (NOVOLOG®) y la insulina glulisina (APIDRA®). La insulina lispro y la insulina aspart consiguen una acción rápida gracias a los cambios en las secuencias de aminoácidos de las cadenas de aminoácidos de la insulina humana. La insulina glulisina también incluye cambios en las secuencias de las cadenas de aminoácidos de la insulina humana, y también carece de cinc y no forma hexámeros estabilizadores. Los análogos de la insulina de acción rápida empezaron a estar disponibles en la década de 1990 y principios de la de 2000. Sin embargo, incluso con los denominados análogos de insulina de acción rápida, el nivel máximo de insulina no se alcanza hasta 50 a 90 minutos después de la inyección. Esto es más lento que la insulina que libera un páncreas que funciona normalmente y no siempre coincide con los perfiles de absorción de los carbohidratos.

Otra vía para lograr una acción rápida que se ha explorado es el uso de ingredientes o excipientes que mejoran el perfil de tiempo de acción de la insulina cuando se proporciona en combinación con ésta.

Por ejemplo, el documento US2013/0231281 desvela composiciones acuosas que comprenden una insulina y determinados oligosacáridos, solos o en combinación con un compuesto polianiónico. El compuesto polianiónico es un polímero aniónico seleccionado del grupo que consiste en ácido dextrano-metilcarboxílico, ácido poliglutámico, ácido poliaspártico, PAA (ácido poliacrílico), alginato, ácido hialurónico polímeros a base de ácido glucurónico o a base de ácido galacturónico y sus sales, o es un compuesto aniónico seleccionado del grupo que consiste en ácido cítrico, ácido aspártico, ácido glutámico, ácido málico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido adípico, ácido oxálico, trifosfato, polifosfato y sus sales. En una realización, el compuesto polianiónico es citrato de sodio. Se dice que los compuestos polianiónicos mejoran el rendimiento de las composiciones que contienen oligosacáridos incluso cuando el oligosacárido por sí solo o el compuesto polianiónico por sí solo no tiene efecto en la acción del tiempo. No se desvelan resultados de la acción del tiempo de la insulina para las composiciones que contienen citrato pero que carecen de un oligosacárido.

Además, los documentos US2012/0178675 y US2014/0113856 desvelan composiciones que contienen insulina en combinación con un quelante de cinc como el ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y lo que se describe como agentes de “disolución/estabilización”, tal como el ácido cítrico o el citrato de sodio. El documento US2014/0113856 afirma que los primeros ensayos clínicos sobre dichas composiciones mostraron molestias en el lugar de la inyección, y pretende aumentar la tolerabilidad del lugar de la inyección por medio de la adición de un compuesto que contiene magnesio. Dichos compuestos de magnesio incluyen sales inorgánicas, tal como el hidróxido de magnesio, el sulfato de magnesio, el cloruro de magnesio, el bromuro de magnesio, el yoduro de magnesio, el pirofosfato de magnesio, el sulfato de magnesio heptahidratado y el óxido de magnesio; y sales orgánicas, tal como el EDTA de magnesio, el lactato de magnesio, el aspartato de magnesio, el acetato de magnesio, el carbonato de magnesio, el citrato de magnesio y el gluconato de magnesio. Los documentos US2012/0178675 y US2014/0113856 no desvelaron los resultados de la acción del tiempo de la insulina para las composiciones que contienen ácido cítrico o citrato pero que no contienen EDTA. Sin embargo, un póster de 2012 del cesionario de esas solicitudes comparó el perfil de acción temporal de una composición de insulina lispro que contenía citrato y no EDTA con composiciones que contenían concentraciones variables de EDTA y citrato, y ese póster afirma que “[el citrato] por sí solo en la formulación es insuficiente para mejorar el perfil de absorción [de la insulina lispro];” y que “[l]a quelación del cinc con EDTA (para acelerar el desensamblaje del hexámero análogo de la insulina menos estable) y el citrato (para enmascarar la carga superficial y evitar la reagregación) son necesarios por encima de un umbral de concentración para mejorar la tasa de absorción subcutánea.” Roderike Pohl, et al., “Development of Ultra-Rapid-Acting Prandial Insulin Analogs Requires Chelation of Zinc lons and Charge Masking to Increase the Rate of Subcutaneous Absorption", disponible en http://files.shareholder.com/downloads/BIOD/3315705516x0x602912/3C955886-6AA4-4D66-BD33-3FFB4C906B25/EASD_Poster_September_2012_FINAL.pdf.

El documento US2015/0065423 describe composiciones que comprenden un péptido y un agente vasodilatador (por ejemplo, nitroglicerina) y, opcionalmente, lo que se describe como “agentes de enmascaramiento de carga”, tal como citrato, una diketopiperazina, un derivado de la diketopiperazina, EDTA, di-arginina piperazina, una sal de diarginina piperazina, un isómero de di-arginina piperazina, un éster de di-arginina piperazina y cualquier combinación de los mismos. No se han desvelado composiciones que contengan citrato pero que carezcan de un agente vasodilatador. La técnica anterior no enseña colectivamente una formulación de insulina ultrarrápida con los excipientes y las concentraciones específicas de los mismos incluidos en la presente invención.

A pesar de los esfuerzos descritos anteriormente, sigue existiendo la necesidad de composiciones de insulina, destinadas a ser utilizadas durante las comidas, que tengan una absorción más rápida de la insulina en la sangre desde el lugar de la inyección; un inicio de acción más rápido que los productos de insulina existentes; y una estabilidad química y física durante el almacenamiento. La presente invención pretende proporcionar composiciones que satisfagan estas necesidades.

Los presentes inventores han descubierto sorprendentemente que las composiciones que contienen ciertas concentraciones de citrato tienen una absorción más rápida de la insulina en la sangre y/o un inicio de acción más rápido que las composiciones de insulina existentes en el mercado. La estabilidad química y física de las composiciones en determinadas condiciones se mantiene, sin eliminar las mejoras en la acción del tiempo, por medio de la inclusión en las composiciones de determinadas concentraciones de agentes estabilizadores, tal como el cinc, el cloruro de sodio y, opcionalmente, el cloruro de magnesio y/o el tensioactivo.

En consecuencia, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden insulina en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL, citrato en una concentración de aproximadamente 15 a aproximadamente 35 mM, cinc en una concentración de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 0,8 mM, y un conservante; y en las que la composición no incluye EDTA ni ningún oligosacárido. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas además comprenden cloruro de magnesio en una concentración de hasta aproximadamente 5 mM.

En otra realización, la presente invención proporciona generalmente composiciones que comprenden una insulina y concentraciones específicas de citrato y agentes estabilizadores.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 mM; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 3 a aproximadamente 8 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0.3 a aproximadamente 0,8 mM; cloruro total, en una concentración de aproximadamente 20 a aproximadamente 25 mM; poloxámero 188, en una concentración de aproximadamente 0,06 a aproximadamente 0,09% p/v; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 2,8 a aproximadamente 3,5 mg/mL; y en la que el pH de la composición es de aproximadamente 7.0 a 7,8.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 mM; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 3 a aproximadamente 8 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0.3 a aproximadamente 0,8 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 mM; poloxámero 188, en una concentración de aproximadamente 0,06 a aproximadamente 0,09% p/v; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 2,8 a aproximadamente 3,5 mg/mL; y en el que el pH de la composición es de aproximadamente 7.0 a 7,8.

Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica de la presente invención para su uso en terapia. Más particularmente, la presente invención proporciona una composición farmacéutica de la presente invención para su uso en el tratamiento de la diabetes.

Además, la presente invención proporciona un artículo de fabricación que comprende una composición farmacéutica de la presente invención. En particular, la presente invención proporciona un artículo de fabricación que comprende una composición farmacéutica de la presente invención en la que el artículo de fabricación es un vial de uso múltiple. En particular, la presente invención proporciona un artículo de fabricación que comprende una composición farmacéutica de la presente invención en la que el artículo de fabricación es un inyector de pluma reutilizable. En particular, la presente invención proporciona un artículo de fabricación que comprende una composición farmacéutica de la presente invención en la que el artículo de fabricación es un dispositivo de bomba para la terapia de infusión continua de insulina subcutánea.

En una realización, la insulina se selecciona del grupo que consiste en la insulina humana, o una variante estructural de acción rápida, mutante o análoga de la insulina humana, tal como la insulina lispro, la insulina aspart o la insulina glulisina. En una realización preferida, la insulina es una insulina lispro.

En una realización, el conservante se selecciona del grupo que consiste en fenol y meta-cresol. Preferentemente, el conservante es metacresol. En una realización, la concentración de metacresol es de aproximadamente 2,5 mg/mL a aproximadamente 3,8 mg/mL. Preferentemente, la concentración de metacresol es de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En una realización, la composición además comprende un agente tonificante. En una realización, el agente tonificante es glicerol. En ciertas realizaciones, la concentración de glicerol es de aproximadamente 1 a aproximadamente 16 mg/mL.

En una realización, la composición además comprende un tampón. En ciertas realizaciones, el tampón es fosfato de sodio.

En ciertas realizaciones, la composición además comprende un agente estabilizador adicional. En ciertas realizaciones, la composición además comprende un tensioactivo.

En una realización, el pH de la composición es de aproximadamente 7,0 a aproximadamente 7,8. En ciertas realizaciones preferidas, el pH de la composición es de aproximadamente 7,3 a aproximadamente 7,5. En ciertas realizaciones preferidas, el pH de la composición es de aproximadamente 7,4.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica proporciona una captación de insulina en la sangre y/o un inicio de acción que es al menos un 10%, al menos un 20%, al menos un 30%, al menos un 40%, o al menos un 50% más rápido que para las composiciones de análogos de insulina de acción rápida que no contienen citrato, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos relevantes para el tiempo de acción, tal como: tiempo hasta la concentración máxima de insulina (Tmáx.); tiempo para alcanzar la mitad de la concentración máxima de insulina (A Tmáx. temprano); tiempo para alcanzar la mitad de la concentración máxima de insulina durante la fase de declive de la curva de concentración sobre el tiempo (A Tmáx. tardío); tiempo entre A Tmáx. temprano y tardío (dispersión de Tmáx.); porcentaje de la dosis total de insulina absorbida en diferentes momentos basado en el área fraccional bajo la curva de concentración de insulina (por ejemplo, AUC^{0-30m in}, AUC^{0-60m in}, AUC^{0- i 20m in}, AUC^{0- i 80m in}); tiempo para alcanzar la mitad de la concentración total de insulina (T50); tiempo para alcanzar la tasa máxima de infusión de glucosa (GIRmáx.), tiempo para alcanzar la mitad de la tasa máxima de infusión de glucosa (A GIRmáx. temprano); tiempo para alcanzar la mitad de la tasa de infusión de glucosa máxima durante la fase descendente de la curva de concentración sobre el tiempo (A GIRmáx. tardío); porcentaje de glucosa total infundida en diferentes momentos basados en el área fraccional bajo la curva GIR (por ejemplo, GIR^{0-30m in}, GIR^{0 -60m in}, GIR^{0 -120m in}, GIR^{0 -180m in}).

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica proporciona una captación de insulina en la sangre y/o un inicio de acción que es entre un 10% y un 50% más rápido que para las composiciones de análogos de insulina de acción rápida que no contienen citrato, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos relevantes para el tiempo de acción, tales como los descritos anteriormente.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir el almacenamiento de al menos 24 meses a 2 a 8 °C. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir hasta 28 días de uso a temperaturas de hasta 30 °C para viales o cartuchos en inyectores de pluma reutilizables. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir el almacenamiento de al menos 36 meses a 2 a 8 °C. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir hasta 32 días de uso a temperaturas de hasta 30 °C para viales o cartuchos en inyectores de pluma reutilizables. En ciertas realizaciones, la composición es estable para permitir su uso en un dispositivo de bomba para la terapia de infusión subcutánea continua de insulina hasta 7 días.

En una realización, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 15 mM; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y glicerol, en una concentración de aproximadamente 7,6 mg/mL.

En otra realización, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 25 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 15 mM; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y glicerol, en una concentración de aproximadamente 4,5 mg/mL.

En otra realización, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 35 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 23 mM; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En otra realización, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 25 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 25 mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL.

En otra realización, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 15 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 15 mM; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y glicerol, en una concentración de aproximadamente 7.6 mg/mL; y en la que la composición farmacéutica proporciona una absorción de insulina en la sangre y/o un inicio de acción que es entre el 10% y el 20%, entre el 20% y el 30%, entre el 30% y el 40% o entre el 40% y el 50% más rápido que para las composiciones de análogos de insulina de acción rápida que no contienen citrato, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos relevantes para el tiempo de acción, tales como los descritos anteriormente.

En otra realización, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 25 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 15 mM; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; metacresol, en una concentración de aproximadamente 3,15 mg/mL; y glicerol, en una concentración de aproximadamente 4.5 mg/mL; y en la que la composición farmacéutica proporciona una absorción de insulina en la sangre y/o un inicio de acción que es entre un 10% y un 50% más rápido que el de las composiciones de análogos de insulina de acción rápida que no contienen citrato, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos relevantes para el tiempo de acción, tales como los descritos anteriormente.

En otra realización, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 35 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 23 mM; cloruro de magnesio, en una concentración de aproximadamente 5 mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3.15 mg/mL; y en la que la composición farmacéutica proporciona una captación de insulina en la sangre y/o un inicio de acción que es entre un 10% y un 50% más rápido que para las composiciones de análogos de insulina de acción rápida que no contienen citrato, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos relevantes para el tiempo de acción, tales como los descritos anteriormente.

En otra realización, la composición farmacéutica comprende insulina lispro, en una concentración de aproximadamente 100 IU/mL; citrato, en una concentración de aproximadamente 25 mM; cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 mM; cloruro de sodio, en una concentración de aproximadamente 25 mM; y metacresol, en una concentración de aproximadamente 3.15 mg/mL; y en la que la composición farmacéutica proporciona una absorción de insulina en la sangre y/o un inicio de acción que es entre un 10% y un 50% más rápido que el de las composiciones de análogos de insulina de acción rápida que no contienen citrato, cuando se mide por uno o más parámetros farmacocinéticos o farmacodinámicos relevantes para el tiempo de acción, tales como los descritos anteriormente.

Cuando se usa en la presente memoria, el término “composición” se refiere a una combinación de insulina y los otros ingredientes o excipientes en la que la insulina y los otros ingredientes o excipientes se combinan en una sola formulación combinada.

Cuando se usa en la presente memoria, “insulina” significa insulina humana o una variante estructural de acción rápida, mutante o análoga de la insulina humana que tiene la actividad funcional pero un inicio de acción más rápido que la insulina humana. Algunos análogos de acción rápida de la insulina humana son la insulina lispro, la insulina aspart y la insulina glulisina. La insulina para productos comerciales se puede producir por medio de procedimientos de ADN recombinante o por síntesis química. Los procedimientos recombinantes son bien conocidos y se prefieren. Una molécula de insulina humana (Núm. de CAS 11061-68-0) está formada por dos cadenas de aminoácidos, A y B, cuyas secuencias son bien conocidas.

La cadena A de la insulina humana tiene la siguiente secuencia de aminoácidos:

Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Asn (SEC. ID Núm.: 1).

La cadena B de la insulina humana tiene la siguiente secuencia de aminoácidos:

Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr (SEC. ID Núm.: 2).

Las cadenas están unidas por dos enlaces disulfuro: CysA7-CysB7 y CysA20-CysB19, La cadena A tiene un enlace disulfuro intracadena en CysA6-CysA11. La insulina humana tiene la fórmula empírica C257H383N65O77S6 y un peso molecular de 5808.

La insulina lispro, la sustancia farmacológica de HUMALOG®, es idéntica a la insulina humana en cuanto a su secuencia primaria de aminoácidos, excepto por una inversión de la secuencia natural de prolina-lisina en la cadena B en las posiciones 28 y 29 (insulina humana 28B-L-lisina-29B-L-prolina). Insulina lispro (Núm. de CAS 133107-64-9) ha demostrado ser equipotente a la insulina humana sobre una base molar, pero su efecto tras la inyección subcutánea es más rápido y de menor duración que el de la insulina humana soluble inyectada. HUMALOG® contiene m-cresol como conservante y agente estabilizador, un modificador de la tonicidad (glicerol), un agente amortiguador (fosfato sódico dibásico), un estabilizador (óxido de cinc) y un ajuste del pH para el vehículo.

Una molécula de insulina lispro está formada por la cadena A de la insulina humana (SEC. ID Núm. 1) reticulada con la cadena B de la insulina lispro, cuya secuencia de aminoácidos viene dada por la SEC. ID Núm. 3, a continuación: Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Lys Pro Thr (SEC. ID Núm.: 3).

La fórmula química de la insulina lispro es C257H383N65O77S6 y su peso molecular es aproximadamente 5808. Una unidad de insulina lispro equivale a 0,0347 mg de insulina lispro.

Insulina aspart (Núm. de CAS 116094-23-6), la sustancia farmacológica de NOVOLOG®, es otro análogo de la insulina de inicio rápido. Su estructura consiste en la cadena A de la insulina humana (SEC. ID Núm. 1) y una cadena B en la que la Pro en B28 se sustituye por Asp (insulina humana Pro-B28-Asp), como se refleja en la siguiente secuencia de aminoácidos:

Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Asp Lys Thr (SEC. ID Núm.: 4).

La insulina aspart (insulina humana de ácido aspártico 28B) tiene la fórmula empírica C256H381N65O79S6 y un peso molecular de aproximadamente 5826. Una unidad de insulina aspart corresponde a 6 nmol, lo que corresponde a 0,035 mg de insulina aspart anhidra sin sal.

Insulina glulisina (Núm. de CAS 207748-29-6), la sustancia farmacológica de APIDRA®, es otro análogo de la insulina de inicio rápido. Una molécula de insulina glulisina está formada por la cadena A de la insulina humana (SEC. ID Núm. 1) y una cadena B modificada (Asn-B3-Lys, Lys-B29-Glu) en comparación con la insulina humana, como se refleja en la siguiente secuencia de aminoácidos:

Phe Val Lys Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Glu Thr (SEC. ID Núm.: 5).

La insulina glulisina (ácido 3B-lisina-29B-glutámico-insulina humana) tiene la fórmula empírica C258H384N64O78S6 y un peso molecular de 5823. Una unidad de insulina glulisina corresponde aproximadamente a 0,0349 mg de insulina glulisina.

El siguiente esquema representa las secuencias de aminoácidos y los enlaces disulfuro de la insulina humana y de los análogos de la insulina de acción rápida que están actualmente aprobados para su uso en el tratamiento de las excursiones de la glucosa en sangre durante las comidas

Cadena A de insulina humana

Gly He ValGlu Gln Cys c ) s Thr Ser lie Cy s Ser Leu Tyr Gln Leu Glu Asn

---------------- ^' sp aspart

Lys Pro (lispro)

Las composiciones de la presente invención tienen concentraciones de insulina de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL. Ciertas composiciones comprenden aproximadamente 100 UI/mL. Ciertas composiciones comprenden aproximadamente 200 UI/mL.

Las mejoras en el perfil de acción temporal de los análogos de la insulina arriba referenciados demostradas en la presente invención se consiguen mediante el uso de ciertas concentraciones específicas de citrato y sin necesidad de ningún agente quelante adicional, como los descritos en el documento US2012/0178675 y el documento US2014/0113856 (por ejemplo, EDTA), cualquier agente vasodilatador adicional, como los descritos en el documento US2015/0065423 (por ejemplo, nitroglicerina), o cualquier otro oligosacárido, como los descritos en el documento US2013/0231281.

El ion citrato tiene el nombre químico de 2-hidroxipropano-1,2,3-tricarboxilato, fórmula molecular C6H5O7"3, y peso molecular de 189. El ion citrato está ampliamente distribuido en plantas y animales y es un componente natural de la dieta. Es un metabolito común en el metabolismo oxidativo y un componente importante del hueso. La Administración de Alimentos y Medicamentos de EE.UU. considera que un número de citratos son GRAS (generalmente considerados seguros) para su uso en alimentos, entre ellos los siguientes:

Varios compuestos que contienen citrato también se incluyen como ingredientes en los productos farmacéuticos parenterales de acuerdo con la base de datos de ingredientes inactivos de la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos, que incluyen, por ejemplo, el ácido cítrico, el ácido cítrico monohidratado, el ácido cítrico anhidro, el citrato de sodio, el citrato trisódico anhidro, el citrato trisódico dihidratado. El compuesto de citrato particular utilizado en las composiciones de la presente invención puede ser la forma ácida o varias formas de sal, especialmente las sales alcalinas (por ejemplo, de sodio y potasio) y/o los mono o dihidratos de las mismas. De ellos, se prefiere el citrato de sodio. En algunas realizaciones, la concentración de citrato en las composiciones de la presente invención oscila entre aproximadamente 15 mM y aproximadamente 35 mM. En las realizaciones preferidas, la concentración de citrato oscila entre aproximadamente 15 y aproximadamente 30 mM. En ciertas realizaciones preferidas, la concentración de citrato oscila entre aproximadamente 15 y aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de citrato oscila entre aproximadamente 15 y aproximadamente 20 o entre aproximadamente 20 y aproximadamente 25 mM. Ciertas composiciones tienen concentraciones de citrato de aproximadamente 15, aproximadamente 20, aproximadamente 25, aproximadamente 30 o 35 mM.

Aunque se ha comprobado que la adición de citrato da lugar a mejoras en el tiempo de acción, la adición de citrato también conlleva mayores responsabilidades desde el punto de vista de la estabilidad. Por lo tanto, a fin de tener una estabilidad química y física suficiente para el almacenamiento y uso a largo plazo, las composiciones de la presente invención además comprenden agentes estabilizadores, tales como el cinc, el magnesio, el cloruro y el/los tensioactivos.

Se puede añadir óxido de cinc para proporcionar la estequiometría deseada de iones de cinc. Los hexámeros de insulina tienen 2 sitios de unión de cinc específicos y de alta afinidad. Los iones de cinc incorporados a estos hexámeros se denominan a veces cinc “ligado”. Las formulaciones que contienen cinc disponibles actualmente incluyen entre 2 y 4 iones de cinc por hexámero de insulina. Algunas composiciones comerciales de insulina tienen aproximadamente 2,4 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina (HUMULIN® R U-500), y otras tienen aproximadamente 3,0 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina (HUMALOG®, NOVOLOG®). Las formulaciones de 100 U/mL de insulina lispro (HUMALOG®) e insulina aspart (NOVOLOG®) tienen aproximadamente 3,0 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina, lo que corresponde a una concentración de aproximadamente 0,3 mM. La formulación de 200 U/mL de HUMALOG® disponible actualmente tiene aproximadamente 3,5 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina, lo que corresponde a una concentración de cinc de aproximadamente 0,7 mM. La formulación actual de 100 U/mL de insulina humana comercializada por Eli Lilly and Company (HUMULIN® R) contiene aproximadamente 2,3 iones de cinc por cada seis moléculas de insulina, lo que corresponde a una concentración de cinc de aproximadamente 0,23 mM.

Las composiciones de la presente invención tienen una concentración de cinc suficiente para proporcionar al menos suficientes iones de cinc para que las moléculas de insulina formen hexámeros estabilizadores. Así, las composiciones de la presente invención deben incluir suficiente cinc para proporcionar al menos 2 iones de cinc por hexámero de insulina. Las composiciones de la presente invención tienen una concentración de cinc de aproximadamente 0,3 mM a aproximadamente 0,8 mM. Cuando la concentración de insulina es de 100 UI/mL, la concentración de cinc en ciertas realizaciones de la presente invención es de aproximadamente 0,3 mM (aproximadamente 3,0 iones de Zn/seis moléculas de insulina). Para concentraciones de insulina de aproximadamente 100 U/mL, aproximadamente 200 U/mL, aproximadamente 300 U/mL o aproximadamente 500 U/mL, la concentración mínima de cinc necesaria para proporcionar 2 iones de cinc por hexámero de insulina sería de aproximadamente 0,2 mM, aproximadamente 0,4 mM, aproximadamente 0,6 mM o aproximadamente 1 mM, respectivamente.

La inclusión de un exceso de cinc (es decir, más cinc del que se uniría en los hexámeros de insulina) se puede utilizar para estabilizar aún más las composiciones de la presente invención. Este cinc se denomina a veces cinc “libre” o “no ligado”. En ciertas composiciones de la presente invención, se ha encontrado que la inclusión de un exceso de cinc libre o no unido tiene un efecto estabilizador. Las composiciones que tienen aproximadamente 100 U/mL de insulina lispro y concentraciones de cinc de hasta aproximadamente 1 mM (lo que constituiría aproximadamente 0,2 mM de cinc ligado y aproximadamente 0,8 mM de cinc no ligado o libre) han resultado ser tanto de acción rápida como estables. Sin embargo, la inclusión de demasiado cinc libre o no unido puede atenuar las mejoras en el tiempo de acción. Por ejemplo, una composición que tiene aproximadamente 100 U/mL de insulina lispro con una concentración de cinc de aproximadamente 5 mM (que constituiría aproximadamente 4,8 mM de cinc no ligado) se encontró que no tenía las mejoras en el tiempo de acción visto en las composiciones con concentraciones de cinc más bajas. En ciertas realizaciones, la concentración de cinc es de aproximadamente 0,6, aproximadamente 0,7 o aproximadamente 0,8 mM.

La inclusión de magnesio (Mg+2) en las composiciones de la presente invención también ha resultado tener un efecto estabilizador. Los iones de magnesio se pueden proporcionar de diversas maneras, como por ejemplo por medio de la adición de cloruro de magnesio, cuya fórmula molecular es MgCh y cuyo peso molecular es de 95,211.

Mientras que el magnesio puede tener efectos estabilizadores en ciertas composiciones, las concentraciones que exceden la concentración de citrato resultarán en la precipitación de la insulina. Así, la cantidad máxima de magnesio que se puede incluir está limitada por la cantidad de citrato que se incluye. Por ejemplo, cuando se utiliza MgCl2 como agente estabilizador en las composiciones de la presente invención, la relación molar entre el magnesio y el citrato oscila entre aproximadamente 1:10 y aproximadamente 1:2. Preferentemente, la relación molar entre el cloruro de magnesio y el citrato oscila entre 1:5 y 1:3 aproximadamente. Así, por ejemplo, a fin de conseguir una relación molar de magnesio y citrato de aproximadamente 1:10 a aproximadamente 1:2 en una composición en la que la concentración de citrato está entre aproximadamente 10 y aproximadamente 30 mM, la concentración de magnesio estaría entre aproximadamente 1 y aproximadamente 15 mM. Del mismo modo, a fin de conseguir una relación molar de magnesio y citrato de aproximadamente 1:5 a aproximadamente 1:3 en una composición en la que la concentración de citrato es de 25 mM, la concentración de magnesio oscilaría entre 5 y 8,3 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio oscila entre aproximadamente 1 y 15 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio oscila entre 1 y 5, entre 5 y 10 o entre 10 y 15 mM. La concentración de cloruro de magnesio en ciertas realizaciones de la presente invención oscila entre 1 y aproximadamente 5 mM (~0,48 mg/mL). En ciertas realizaciones, la concentración de magnesio es de aproximadamente 5 mM.

La inclusión de ciertas concentraciones de iones de cloruro (Cl-) en las composiciones de la presente invención también ha resultado tener un efecto estabilizador. Los iones de cloruro se pueden proporcionar de varias maneras, que incluyen el uso de MgCh para proporcionar magnesio, como se ha descrito anteriormente, o por medio de la adición de cloruro de sodio. Las composiciones de ciertas realizaciones de la presente invención comprenden cloruro de sodio. La fórmula molecular del cloruro de sodio es NaCl y su peso molecular es 58,44. El cloruro de sodio se utiliza en algunas formulaciones actualmente disponibles de análogos de insulina de acción rápida, tales como APIDRA® (insulina glulisina), que comprende 5 mg/mL de cloruro de sodio, NOVOLOG® (insulina aspart), que comprende 0,58 mg/mL de cloruro de sodio.

Aunque se ha comprobado que la adición de ciertas cantidades de cloruro, por ejemplo, por medio de la inclusión en la composición de excipientes que contienen cloruro, como MgCh o NaCl, tiene un efecto estabilizador, si el contenido total de cloruro de la composición es demasiado alto, la insulina en la composición puede cristalizar a bajas temperaturas. Por lo tanto, hay que tener en cuenta el contenido total de cloruro de la composición.

A fin de determinar el contenido total de cloruro de una composición, hay que tener en cuenta no sólo los iones de cloruro que se pueden añadir a la composición por medio de la adición de cloruro de magnesio y/o cloruro de sodio como agentes estabilizadores, sino también por medio de la adición de otros componentes, por ejemplo, con el ingrediente farmacéutico activo (API) a granel de la insulina, por medio de la adición de pequeñas cantidades de HCl que pueden ser necesarias para ajustar el pH, y/o en relación con el suministro de Zn, que se puede añadir en forma de solución preparada por medio de la solubilización de óxido de cinc (ZnO) con HCl.

En ciertas realizaciones, el cloruro de sodio se utiliza para proporcionar la cantidad de cloruro adicional necesaria para alcanzar la concentración de cloruro objetivo o el intervalo de concentración - es decir, la cantidad de cloruro de sodio que se debe añadir se determina por medio de la resta de la concentración de cloruro objetivo la cantidad de cloruro proporcionada a través de la adición de otros componentes, tal como a través de la adición de API de insulina, cloruro de magnesio y/o cualquier HCl que pueda ser necesario para los ajustes de pH y/o la solubilización del óxido de cinc. Por ejemplo, si la concentración de cloruro objetivo en una formulación es de aproximadamente 20 mM, y 15 mM de cloruro se proporcionan a través de una combinación del API de insulina a granel, el cloruro de magnesio y el HCl utilizado para los ajustes de pH, se deben añadir 5 mM de cloruro de sodio. Los expertos en la técnica entenderán que la cantidad de cloruro de sodio que se debe añadir en dichas formulaciones se puede determinar por medio de: (1) el cálculo prospectivo de la cantidad de cloruro adicional que se necesitará en base al contenido teórico de cloruro añadido a través de otras fuentes; o (2) la preparación de una formulación de todos los excipientes excepto el cloruro de sodio, la medición del contenido de cloruro de esa formulación y el cálculo de la diferencia entre esa cantidad y la concentración de cloruro objetivo o el intervalo de concentración. El contenido de cloruro de una formulación acuosa se puede medir mediante el uso de una variedad de técnicas conocidas, tales como por ejemplo, procedimientos de titulación o de electrodos selectivos de iones.

Además, los problemas de cristalización a baja temperatura asociados con concentraciones de cloruro relativamente altas también se han encontrado sensibles a las concentraciones de citrato. Así, las composiciones de la presente invención que tienen concentraciones de citrato en el extremo inferior del intervalo previsto en la presente memoria pueden ser más tolerantes a concentraciones de cloruro relativamente más altas que las composiciones que tienen concentraciones de citrato en el extremo superior del intervalo previsto en la presente memoria. Por ejemplo, se ha observado que la adición de concentraciones de cloruro de sodio tan altas como 50 a 75 mM a formulaciones que contienen 25 mM de citrato conduce a problemas de cristalización a baja temperatura, pero tales problemas no se observan de forma consistente ni cuando se añade 50 mM de cloruro de sodio a una formulación de 15 mM de citrato ni cuando se añade 25 mM de cloruro de sodio a una formulación de 25 mM de citrato.

En aras de la claridad, cuando se utilizan en la presente memoria, los términos “cloruro” o “cloruro total” se refieren a la cantidad total de iones de cloruro en una composición proporcionada en relación con la adición de cualquier componente, por ejemplo, la(s) fuente(s) de iones de cloruro en una composición que se declara que comprende 25 mM de cloruro o cloruro total incluye cualquier cloruro proporcionado a través de la adición de MgCh, NaCl y/o cualquier HCl necesario para los ajustes de pH o la solubilización de ZnO. Por otro lado, los términos “cloruro de magnesio”, “MgCh”, “cloruro de sodio” y “NaCl” se refieren a la cantidad de estas sales particulares que se añaden a una composición. Así, en una composición que se describe como compuesta por 5 mM de cloruro de magnesio y 10 mM de cloruro de sodio, por ejemplo, la concentración de cloruro, o cloruro total, incluye la cantidad combinada de iones de cloruro proporcionada por el cloruro de magnesio, el cloruro de sodio y cualquier otra fuente, tal como el HCl.

En ciertas realizaciones de la presente invención, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 10 y aproximadamente 60 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 15 y aproximadamente 35 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro oscila entre aproximadamente 20 y aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración total de cloruro es de aproximadamente 20 mM, aproximadamente 21 mM, aproximadamente 22 mM, aproximadamente 23 mM, aproximadamente 24 mM o aproximadamente 25 mM.

En ciertas realizaciones de la presente invención, la composición comprende cloruro de sodio en una concentración que va de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de cloruro de sodio es de aproximadamente 1 a aproximadamente 25 mM. En ciertas realizaciones, la concentración de cloruro de sodio oscila entre 1 y 20 mM aproximadamente. La concentración de cloruro de sodio en ciertas realizaciones de la presente invención oscila entre aproximadamente 15 mM (~0,88 mg/mL) y aproximadamente 25 mM (~2,0 mg/mL). En ciertas realizaciones, la concentración de cloruro de sodio es de aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 7, aproximadamente 8, aproximadamente 9, aproximadamente 10, aproximadamente 11, aproximadamente 12, aproximadamente 13, aproximadamente 14, aproximadamente 15, aproximadamente 16, aproximadamente 17, aproximadamente 18, aproximadamente 19 o aproximadamente 20 mM.

Si es necesario para lograr una estabilidad química y física suficiente, la composición además puede comprender uno o más agentes estabilizadores adicionales. Entre los agentes estabilizadores ejemplares se encuentran los tensioactivos. Sorprendentemente se ha descubierto que las combinaciones de tensioactivos y magnesio como agentes estabilizadores pueden tener efectos estabilizadores superiores a los aditivos o sinérgicos en las composiciones de la presente invención.

Los ejemplos de tensioactivos desvelados para su uso en composiciones farmacéuticas parenterales incluyen polisorbatos, tales como el polisorbato 20 (TWEEN® 20), polietilenglicoles tales como PEG 400, PEG 3000, TRITON™ X-100, polietilenglicoles tales como el polioxietileno (23) lauril éter (Núm. de CAS: 9002-92-0comercializado con el nombre comercial BRIJ®), ácidos grasos alcoxilados, tales como MYRJ™, polipropilenglicoles, copolímeros en bloque como el poloxámero 188 (Núm. CAS 9003-11-6, comercializado con el nombre comercial de P^lURONIC® F-68) y poloxámero 407 (PLURONIC® F127), ésteres alquílicos de sorbitán (por ejemplo, SPAN®), aceite de ricino polietoxilado (por ejemplo, KOLLIPHOR®, CREMOPhOr®) y trehalosa y sus derivados, tales como el éster de laurato de trehalosa. En ciertas realizaciones, el tensioactivo se selecciona del grupo que consiste en polioxietileno (23) lauril éter, poloxámero 188 y éster de laurato de trehalosa. Un tensioactivo preferido es el poloxámero 188. En ciertas realizaciones, la concentración de tensioactivo, tales como el poloxámero 188, oscila entre aproximadamente 0,001 y aproximadamente 2% p/v, entre aproximadamente 0,001 y aproximadamente 0,2% p/v, entre aproximadamente 0,03 y aproximadamente 0,12% p/v, o entre aproximadamente 0,06 y aproximadamente 0,09% p/v. En ciertas realizaciones, la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,06, aproximadamente 0,07, aproximadamente 0,08 o aproximadamente 0,09% p/v.

Además, las composiciones de la presente invención incluyen uno o más conservantes, que proporcionan propiedades antimicrobianas y pueden proporcionar además beneficios de estabilidad. Las composiciones son estériles cuando se producen por primera vez, sin embargo, cuando la composición se suministra en un vial o cartucho de uso múltiple, se suele añadir un compuesto conservante antimicrobiano o una mezcla de compuestos que sea compatible con los demás componentes de la formulación con la suficiente fuerza para cumplir los requisitos reglamentarios y de farmacopea en materia de conservantes antimicrobianos. Véase Monografías de la Farmacopea de los Estados Unidos. Insulina lispro inyectable. USP29-NF24; Monografías de la Farmacopea Británica 2008 Volumen III: Insulin aspart injection; U.S. Pharmacopeia Monographs. Insulin assays; and U.S. Pharmacopeia general chapters. USP29-NF24. Rockville, MD: Convención Farmacopea de los Estados Unidos; 2005. Antimicrobial effectiveness testing; págs. 2499 a 2500. Los conservantes preferidos son los ácidos arílicos y los compuestos fenólicos, o las mezclas de dichos compuestos.

Las composiciones de la presente invención de este modo incluyen uno o más conservantes. Las concentraciones efectivas se pueden determinar fácilmente mediante el uso de los procedimientos mencionados anteriormente. Entre los conservantes utilizados habitualmente en los productos de insulina se encuentra el fenol (Núm. de CAS 108-95-2fórmula molecular C6H5OH, peso molecular 94,11), y el m-cresol (Núm. de CAS 108-39-4fórmula molecular C7H8O, peso molecular 108,14). Las composiciones comerciales actuales, por ejemplo, contienen 3,15 mg/mL de m-cresol (HUMALOG® y APID^rA®), 1,72 mg/mL de m-cresol y 1,50 mg/mL de fenol (NOVOLOG®), y 2,5 mg/mL de m-cresol (HUMULIN® R U-500). Las composiciones de la presente invención incluyen uno o más conservantes. En una realización, el conservante se selecciona del grupo que consiste en fenol y metacresol y sus mezclas. Preferentemente, el conservante es el metacresol. En ciertas realizaciones la concentración de metacresol es de aproximadamente 2,5 mg/mL a aproximadamente 3,8 mg/mL. Preferentemente, la concentración de metacresol es de aproximadamente 3,15 mg/mL.

Es deseable igualar aproximadamente la tonicidad (es decir, la osmolalidad) de los fluidos corporales en el lugar de la inyección lo más cerca posible cuando se administran las composiciones porque las soluciones que no son aproximadamente isotónicas con los fluidos corporales pueden producir una dolorosa sensación de escozor cuando se administran. Por lo tanto, es deseable que las composiciones sean aproximadamente isotónicas con los fluidos corporales en los lugares de inyección. Si la osmolalidad de una composición en ausencia de un agente de tonicidad es suficientemente menor que la osmolalidad del tejido (para la sangre, aproximadamente 300 mOsmol/kg; el requisito de la Farmacopea Europea para la osmolalidad es > 240 mOsmol/kg), entonces se debe añadir generalmente un agente de tonicidad para elevar la tonicidad de la composición a aproximadamente 300 mOsmol/kg. Los agentes tonificantes típicos son el glicerol (glicerina) y el cloruro de sodio. Si se requiere la adición de un agente de tonicidad, se prefiere el glicerol. La cantidad de agente tonificante que hay que añadir se determina fácilmente por medio de técnicas estándar. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, David B. Troy y Paul Beringer, eds., Lippincott Williams & Wilkins, 2006, págs. 257 a 259 Remington: Essentials of Pharmaceutics, Linda Ed Felton, Pharmaceutical Press, 2013, págs. 277 a 300. En ciertas realizaciones la concentración de glicerol es de aproximadamente 1 a aproximadamente 16 mg/mL.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable en condiciones de almacenamiento y uso. Cuando se utiliza en la presente memoria, el término “estable” se refiere tanto a la estabilidad química como a la física, como se indica, por ejemplo, por una pérdida de potencia de la insulina de menos del 5%, la formación de A-21 desamido de no más del 1,5%, el desarrollo de sustancias diferentes de la insulina y A-21 desamido (denominadas colectivamente otras sustancias relacionadas (ORS)) de no más del 4%, la formación de alto peso molecular (HMW) de menos del 1,5%, y el mantenimiento de una solución clara e incolora sin precipitados. Dichas propiedades pueden medirse por medio de técnicas conocidas, que incluyen, por ejemplo, las resumidas en los estudios descritos a continuación. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir el almacenamiento de al menos 24 meses a 2 a 8 °C. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir hasta 28 días de uso a temperaturas de hasta 30 °C para viales o cartuchos en inyectores de pluma reutilizables. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir el almacenamiento de al menos 36 meses a 2 a 8 °C. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica es estable para permitir hasta 32 días de uso a temperaturas de hasta 30 °C para viales o cartuchos en inyectores de pluma reutilizables. En ciertas realizaciones, la composición es estable para permitir su uso en un dispositivo de bomba para la terapia de infusión subcutánea continua de insulina hasta 7 días.

El citrato, que como se ha indicado anteriormente se añade para contribuir a mejorar la acción del tiempo, es conocido por tener también propiedades amortiguadoras a ciertos niveles de pH, pero si se desea se puede incluir un compuesto amortiguador adicional. Los ejemplos de estos compuestos amortiguadores son los tampones de fosfato, tales como el fosfato sódico dibásico, o el acetato de sodio y el tris(hidroximetil)aminometano (TRIS). Se prefieren los tampones de fosfato o TRIS. El pH de las composiciones comerciales de insulina suele estar en el intervalo de 7,2 a 7,6, con 7,4 ± 0,1 como pH objetivo común. El pH de las composiciones de la presente invención es típicamente de 7,0 a 7,8 y se ajusta mediante el uso de ácidos y bases fisiológicamente apropiados, típicamente ácido clorhídrico 10% e hidróxido de sodio 10%. Preferentemente, el pH es de aproximadamente 7,4.

La vía de administración de las composiciones de la presente invención será típicamente por inyección subcutánea autoadministrada, por ejemplo, mediante el uso de una jeringa o un dispositivo de pluma, o por terapia de infusión subcutánea continua de insulina con un dispositivo de bomba de insulina, aunque también se pueden utilizar las vías intravenosa, intradérmica o intraperitoneal. Preferentemente, la vía de administración es la inyección subcutánea autoadministrada. La dosis de agente activo inyectado será determinada por el paciente en consulta con su médico.

Otras realizaciones de la presente invención son las que se describen a continuación:

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la insulina se selecciona del grupo que consiste en insulina humana, insulina lispro, insulina aspart o insulina glulisina.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la insulina es insulina lispro.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de insulina es de aproximadamente 100 U/mL.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de citrato es de aproximadamente 15 a aproximadamente 30 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de citrato es de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de citrato es de aproximadamente 15 a aproximadamente 20 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de citrato es de aproximadamente 20 a aproximadamente 25 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la relación molar entre el magnesio y el citrato es de aproximadamente 1:10 a aproximadamente 1:2.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la relación molar entre el magnesio y el citrato es de aproximadamente 1:5 a aproximadamente 1:3.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de magnesio es de aproximadamente 1 a aproximadamente 15 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de magnesio es de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de magnesio es de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de magnesio es de aproximadamente 10 a aproximadamente 15 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de magnesio es de aproximadamente 3 a aproximadamente 8 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de magnesio se proporciona por medio de la inclusión de cloruro de magnesio.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración total de cloruro es de aproximadamente 10 a aproximadamente 60 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración total de cloruro es de aproximadamente 15 a aproximadamente 35 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración total de cloruro es de aproximadamente 15 a aproximadamente 30 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración total de cloruro es de aproximadamente 20 a aproximadamente 25 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente en la que composición comprende cloruro de sodio en una concentración que oscila entre aproximadamente 1 aproximadamente 50 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que composición comprende cloruro de sodio en una concentración que oscila entre aproximadamente 1 aproximadamente 25 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que composición comprende cloruro de sodio en una concentración que oscila entre aproximadamente 1 aproximadamente 20 mM.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la concentración de tensioactivo es de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 0,2% p/v.

La composición farmacéutica de cualquiera de las formas de realización descritas anteriormente, en la que el tensioactivo es poloxámero 188.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente en la que la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,003 a aproximadamente 0,2% p/v.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente en la que la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,03 a aproximadamente 0,12% p/v.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente en la que la concentración de poloxámero 188 es de aproximadamente 0,06 a aproximadamente 0,09% p/v.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente en la que el conservante se selecciona del grupo que consiste en fenol y metacresol.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente en la que el conservante es metacresol.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente en la que la concentración de metacresol es de aproximadamente 2,5 a aproximadamente 3,8 mg/mL.

La composición farmacéutica de cualquiera de las formas de realización descritas anteriormente, además comprende un agente tonificante.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, que comprende glicerol como agente tonificante.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, que comprende glicerol como agente tonificante en una concentración de aproximadamente 1 a aproximadamente 16 mg/mL.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, además comprende un tampón adicional.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que el pH de la composición es de aproximadamente 7,0 a aproximadamente 7,8.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición proporciona una absorción de insulina en la sangre que es al menos un 20% más rápida que la de las composiciones que contienen la misma insulina pero que no contienen citrato.

La composición farmacéutica de cualquiera de las formas de realización descritas anteriormente, en la que la composición proporciona un inicio de acción que es al menos un 20% más rápido que el de las composiciones que contienen la misma insulina pero que no contienen citrato.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición proporciona una absorción de insulina en la sangre que es al menos un 30% más rápida que la de las composiciones que contienen la misma insulina pero que no contienen citrato.

La composición farmacéutica de cualquiera de las formas de realización descritas anteriormente, en la que la composición proporciona un inicio de acción que es al menos un 30% más rápido que el de las composiciones que contienen la misma insulina pero que no contienen citrato.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición es estable para permitir el almacenamiento de al menos 24 meses a 2 a 8 °C.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición es estable para permitir hasta 28 días de uso a temperaturas de hasta 30 °C para viales o cartuchos en inyectores de pluma reutilizables.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición es estable para permitir el almacenamiento de al menos 36 meses a 2 a 8 °C.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición es estable para permitir hasta 32 días de uso a temperaturas de hasta 30 °C para viales o cartuchos en inyectores de pluma reutilizables.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición es estable para permitir su uso en un dispositivo de bomba para la terapia de infusión subcutánea continua de insulina durante un máximo de 7 días.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición no incluye ningún agente quelante adicional.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición no incluye EDTA, ácido etilenglicol tetraacético (EGTA), ácido algínico, ácido alfa lipoico, ácido dimercaptosuccínico (DMSA) o ácido 1,2-diaminociclohexanetetraacético (CDTA).

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición no incluye ningún agente vasodilatador.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición no incluye nitroglicerina.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, en la que la composición no incluye adenosina, factor hiperpolarizante derivado del endotelio, un inhibidor de la fosfodiesterasa tipo 5 (PDES), un abridor de canales de potasio, prostaciclina, forskolina, nitroglicerina, un agente formador de óxido nítrico, nitrito de amilo o nitroprusiato.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente en la que la composición no incluye ningún oligosacárido.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente para su uso en terapia. La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente para su uso en el tratamiento de la diabetes.

La composición farmacéutica de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente para su uso en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes.

Un vial multiuso que comprende una de las composiciones farmacéuticas de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente.

Un inyector-bolígrafo reutilizable que comprende una de las composiciones farmacéuticas de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente.

Un dispositivo de bombeo para la terapia de infusión subcutánea continua de insulina que comprende una de las composiciones farmacéuticas de cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente.

La invención se ilustra además con los siguientes ejemplos.

Ejemplos

Estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos

Insulina lispro formulada con 35 mM de citrato, 0,3 mM de cinc, 5 mM de MgCl2 y 23 mM de NaCI

Se utilizaron cerdos miniatura de Yucatán, diabéticos (inducidos por el aloxano), castrados y machos, con puertos de acceso vascular previamente instalados, bajo la supervisión del personal y los veterinarios. Los animales diabéticos se alojan individualmente y tienen acceso a agua fresca en todo momento. Se alimentan con dos comidas al día de una dieta estándar y reciben insulina basal y prandial de mantenimiento adecuada dos veces al día para controlar su condición de diabéticos.

El artículo de prueba (Composición A en la tabla a continuación) fue formulado y enviado al sitio de prueba y el control de insulina Humalog®fue un vial comercial en el sitio de prueba:

Tabla 1.

El día anterior al estudio, los animales fueron alimentados con la mitad de su ración diaria y recibieron 0,2 U/kg de Insulina Humalog® Mix 75/25 en su administración de mantenimiento de la mañana. Todos los animales del estudio pasaron la noche en ayunas y no recibieron la insulina ni la comida de la noche antes de la administración del fármaco el día del estudio.

En la mañana del estudio, todos los animales fueron colocados en arneses para su sujeción y se accedió a sus puertos de acceso vascular (equipados para la toma de muestras de sangre) y se comprobó su permeabilidad. Los animales fueron distribuidos aleatoriamente en grupos de tratamiento. Este fue un diseño cruzado completo con n=13. Un animal no participó en el grupo de tratamiento de la Composición A, lo que arroja un número de 12 para ese grupo de tratamiento.

Después de recolectar dos muestras de sangre de referencia (-30 y -20 min), los animales fueron devueltos a sus corrales y se les alimentó con ~300 g. Veinte minutos después de la presentación de la comida totalmente consumida, los animales fueron inyectados con el artículo de prueba por vía subcutánea en el flanco (0 min) con una jeringa de insulina Terumo (0,3 o 0,5 ml con aguja de 1/2”). Todos los animales del estudio tuvieron acceso a agua limpia y fresca durante el resto del periodo de recolección de sangre.

Se tomaron muestras de sangre seriadas (2,0 mL cada una) de cada animal en los siguientes momentos: -30, -20 (inmediatamente después de la alimentación), 0 (justo antes de la dosis), 5, 10, 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 150, 180, 240 y 360 minutos después de la dosis Sc .

Las muestras de sangre (anticoagulante: ninguno [suero]) se mantuvieron a temperatura ambiente durante al menos 30 minutos pero no más de 2 horas para permitir la coagulación. A continuación, el suero se separó por centrifugación y se dividió en dos alícuotas que se almacenaron congeladas a aproximadamente -70 °C.

Las concentraciones de glucosa en suero se determinaron mediante el uso de un analizador de química clínica AU480 automatizado (Beckman Coulter, Inc., Brea, California). La alícuota para la PK fue enviada a EMD Millipore Corp., St. Charles, MO, en hielo seco por un servicio de envío al día siguiente e incluyó un manifiesto detallado de la muestra.

Los datos de la glucosa sérica se representan en la Tabla 2 a continuación como Media (mg/dL) /- SEM a menos que se especifique lo contrario.

Tabla 2.

Para comparar estadísticamente el cambio de la glucosa sérica bajo diferentes formulaciones en diferentes puntos de tiempo, se utilizó el análisis derivado. El cambio de la glucosa en sangre en cada punto de tiempo se caracteriza por la derivada de primer orden (cambio direccional instantáneo) en el punto de tiempo actual. Se ajustan polinomios de orden 10 a los datos del curso temporal de cada animal. El orden óptimo del polinomio se selecciona mediante el uso del Criterio de Información Bayesiano (BIC). La tasa de cambio en cada punto temporal se calcula como la derivada de la curva polinómica ajustada en ese punto temporal. Una vez obtenidas las derivadas, se ajusta el modelo ANOVA para comparar las diferentes formulaciones en cada momento. La variación entre animales se tiene en cuenta en el modelo ANOVA. Los contrastes se construyen para comparar las diferentes formulaciones y los valores p se ajustan mediante el uso del paquete R “multcomp” Los animales son dosificados después del tiempo 0; por lo tanto, el tiempo 0 no se incluye en el análisis. Para los puntos de tiempo más allá de 150 minutos, no hay suficientes puntos de tiempo para estimar sólidamente la derivada, por lo tanto, estos puntos de tiempo también se excluyen en el análisis estadístico.

La composición A dio lugar a una disminución significativamente^ < 0,01) más rápida de la glucosa sérica a los 5, 10 y 15 minutos después de la dosis en comparación con Humalog®.

Los niveles de insulina para las muestras de suero PK para los grupos de tratamiento de la Composición A y Humalog® se miden mediante el uso de un RIA de insulina total. Los límites inferior y superior de cuantificación para el ensayo son 20 pM y 5000 pM, respectivamente. Los valores por debajo del límite inferior de cuantificación se asumen como 20 pM. Los análisis farmacocinéticos no compartimentales se llevan a cabo con Phoenix WinNonlin v6.3.

Tabla 3.

La media y la mediana de la Tmáx. son un 55% y un 72% más tempranas en la composición A, respectivamente, que con Humalog.

Insulina lispro formulada con 25-35 mM de citrato, 0,285 mM de cinc, 5 mM de MgCl2 y 15-23 mM de NaCl. Se lleva a cabo un estudio de las composiciones que comprenden concentraciones variables de citrato y cinc, cloruro de magnesio y cloruro de sodio en cerdos miniatura de Yucatán diabéticos (inducidos por Alloxan), castrados, siguiendo en general los procedimientos descritos anteriormente.

Los artículos de prueba (Composiciones A' y B en la tabla de abajo) son formulados y enviados al sitio de prueba, y el control de insulina Humalog® es un vial comercial en el sitio de prueba:

Tabla 4.

El estudio está diseñado como un diseño cruzado completo de 21 cerdos para estudiar a todos los cerdos en todos los tratamientos (n=21). Se excluye un animal del grupo de tratamiento con Humalog® por una glucemia basal <200 mg/dl, y se excluye un animal del grupo de tratamiento con Humalog® por un puerto no patentado, por lo que n=19 para ese grupo de tratamiento. Se ha excluido un animal del grupo de tratamiento de la Composición A' por una dosis perdida en el momento de la inyección, por lo que n=20 para ese grupo de tratamiento. Se excluye un animal del grupo de tratamiento de la Composición B por tener una glucemia basal <200 mg/dl, por lo que n=20 para ese grupo de tratamiento.

Los datos de la glucosa sérica se presentan en la Tabla 5 a continuación como media (mg/dL) /- SEM.

Tabla 5.

Para comparar estadísticamente el cambio de la glucosa sérica bajo diferentes formulaciones en diferentes puntos de tiempo, se utilizó el análisis derivado, siguiendo generalmente el procedimiento descrito anteriormente. Las composiciones A' y B dieron lugar cada una a una disminución significativamente^ < 0,01) más rápida de la glucosa sérica a los 5, 10 y 15 minutos después de la dosis en comparación con Humalog®.

Las concentraciones de insulina en suero y los parámetros de PK se generan y analizan generalmente como se ha descrito anteriormente, y los resultados de PK se proporcionan en la tabla 6 a continuación.

Tabla 6.

La mediana de los resultados de Tmáx. es un 33% y un 67% más temprana en las Composiciones A' y B que en Humalog®, y la media de Tmáx. es un 48% más temprana en la Composición B que en Humalog.

Insulina lispro formulada con 15 mM de citrato, 0,285 mM de cinc, 5 mM de MgCl2 y 15 mM de NaCI

Se lleva a cabo un estudio sobre las composiciones que comprenden citrato, cinc, cloruro de magnesio y cloruro de sodio en cerdos miniatura de Yucatán diabéticos (inducidos por Alloxan), castrados, siguiendo en general los procedimientos descritos anteriormente. La composición C fue formulada y enviada al lugar de la prueba, y el control de Humalog® es un vial comercial.

Tabla 7.

El estudio está diseñado como un diseño cruzado completo de 13 cerdos para estudiar a todos los cerdos en todos los tratamientos (n=13). Se excluye un animal del grupo de tratamiento con la Composición C por tener una glucosa sanguínea de referencia <200 mg/dl, y se excluye un animal del grupo de tratamiento con la Composición C por haber informado de una dosis errónea en el momento de la inyección, lo que resulta en n=11 para ese grupo de tratamiento.

Los datos de la glucosa sérica se presentan en la Tabla 8 a continuación como media (mg/dL) /- SEM.

Tabla 8.

La composición C produjo un cambio en los perfiles de glucosa en comparación con el perfil de control de Humalog®. Las concentraciones de insulina en suero y los parámetros de PK se generan y analizan generalmente como se ha descrito anteriormente, y los resultados de PK se proporcionan en la tabla 9 a continuación.

Tabla 9.

La media y la mediana de la Tmáx son un 28% y un 25% más tempranas en la composición C, respectivamente, que con Humalog.

Insulina lispro formulada con 25 mM de citrato, 0,285 mM de cinc y 25 mM de NaCI

Se lleva a cabo un estudio sobre las composiciones que comprenden 25 mM de citrato, cinc y cloruro de sodio en cerdos miniatura de Yucatán diabéticos (inducidos por Alloxan), castrados, siguiendo en general los procedimientos descritos anteriormente.

El artículo de prueba (Composición D en la tabla de abajo) es formulado y enviado al sitio de prueba, y el control de insulina Humalog® era un vial comercial en el sitio de prueba:

Tabla 10.

Este estudio consiste en tres dosis (0,1, 0,2 y 0,4 Unidades/Kg) de la Composición D en comparación con Humalog® a las mismas dosis. El estudio está diseñado como un diseño cruzado completo de 21 cerdos para estudiar a todos los cerdos en todos los tratamientos (n=21). Para la dosis de 0,4 unidades/kg, se excluyeron dos animales (uno por enfermedad y otro por falta de patencia del puerto) del grupo de tratamiento de la composición D, lo que arroja un número de 19 para ese grupo de tratamiento. Se excluyó un animal del grupo de tratamiento con Humalog® 0,4 U/Kg (por no tener patencia en el puerto), lo que arroja un número de 20 para ese grupo de tratamiento. Todas las demás dosis n=21 para cada tratamiento.

Los datos de la glucosa sérica se presentan en la Tabla 11 como media (mg/dL) /- SEM.

Tabla 11.

Para comparar estadísticamente el cambio de la glucosa sérica bajo diferentes formulaciones en diferentes puntos de tiempo, se utilizó el análisis derivado, siguiendo generalmente el procedimiento descrito anteriormente. Las tres dosis de la composición D (0,1, 0,2 y 0,4 U/kg) dan lugar a una disminución significativamente (p < 0,01) más rápida del nivel de glucosa en sangre en los puntos de tiempo 5, 10 y 15 minutos en comparación con Humalog® a la misma dosis respectiva.

Para el análisis farmacocinético, se eligieron once cerdos al azar mediante el uso de una herramienta de aleatorización en línea. Los niveles de insulina de las muestras de suero PK de esos cerdos se miden por medio de un RIA de insulina total. Los límites inferior y superior de cuantificación para el ensayo son 20 pM y 5000 pM, respectivamente. Los valores por debajo del límite inferior de cuantificación se asumen como 20 pM. Los análisis farmacocinéticos no compartimentales se llevan a cabo con Phoenix WinNonlin v6.3.

Tabla 12.

La mediana de los valores Tmáx. es un 67%, 50% y 40% más temprana en los grupos de 0,1 U/Kg, 0,2 U/Kg y 0,4 U/Kg de la composición D en comparación con esas mismas dosis con Humalog®. Los valores medios de Tmáx. fueron un 20% y un 35% más tempranos en los grupos de 0,1 U/Kg y 0,4 U/Kg de la Composición D en comparación con esas mismas dosis con Humalog®. La exposición total y la Cmáx. parecen mayores para la Composición D que para Humalog® en las dosis de 0,2 U/kg y 0,4 U/kg.

Insulina humana, insulina aspart e insulina glulisina formuladas con 25 mM de citrato y 5 mM de MgCl2 Se lleva a cabo un estudio sobre composiciones que comprenden tres insulinas diferentes, citrato 25 mM y cloruro de magnesio en cerdos miniatura de Yucatán diabéticos (inducidos por Alloxan), castrados, siguiendo en general los procedimientos descritos anteriormente.

El artículo de prueba (Composición E en la tabla siguiente) se formula por medio de la adición de suficiente citrato y cloruro de magnesio a los viales comerciales de HUMULIN-R®, NOVOLOG® y APIDRA® para alcanzar una concentración de 25 mM de citrato y 5 mM de cloruro de magnesio:

Tabla 13.

El estudio está diseñado como un diseño cruzado completo para estudiar a todos los cerdos en todos los tratamientos (n=20). Los datos de la glucosa sérica se presentan en la Tabla 14 como media (mg/dL) /- SEM.

Tabla 14.

La formulación de insulina aspart que contiene citrato produce un cambio en el perfil de glucosa en comparación con el control de Novolog®.

Insulina lispro formulada con diferentes concentraciones de citrato, MgCl2, cinc, tensioactivo y NaCI Se lleva a cabo un estudio sobre las composiciones que comprenden concentraciones variables de citrato, cloruro de magnesio, cinc, tensioactivo y/o cloruro de sodio en cerdos miniatura de Yucatán diabéticos (inducidos por el aloxano) y castrados, siguiendo en general los procedimientos descritos anteriormente.

La composición de prueba J de la tabla siguiente se prepara a partir del ingrediente farmacéutico activo (API) de la insulina lispro a granel, y los artículos de prueba I y K de la tabla siguiente se preparan por medio de la adición de citrato y los agentes estabilizadores indicados a un vial del producto farmacéutico Humalog®, y se envían al lugar de la prueba, y el control de la insulina Humalog® es un vial comercial in situ en el lugar de la prueba.

Tabla 15.

El estudio está diseñado como un diseño cruzado completo para estudiar a todos los cerdos en todos los tratamientos (n=19). Se excluye un animal de cada uno de los grupos de tratamiento de la Composición I, J y K por fallo del puerto o por las condiciones del animal, lo que resulta en n=18 para esos grupos de tratamiento. Los datos de la glucosa sérica se presentan en la Tabla 16 como media (mg/dL) /- SEM.

Tabla 16.

Las formulaciones que contienen citrato producen un cambio en los perfiles de glucosa en comparación con los controles de Humalog®.

Las concentraciones de insulina en suero y los parámetros de PK para Humalog® y las Composiciones J y K se generan y analizan generalmente como se ha descrito anteriormente, y los resultados de PK se proporcionan en la tabla 17 a continuación.

Tabla 17.

Los resultados indican que las composiciones J y K tienen un inicio de PK más rápido que Humalog®.

Estudios de estabilidad

Insulina lispro formulada con concentraciones variables de citrato, cloruro de sodio y cloruro de magnesio.

Se lleva a cabo un estudio de estabilidad de vida útil acelerada para evaluar la estabilidad de la insulina lispro cuando se coformula con varias concentraciones de citrato, cloruro de sodio y, opcionalmente, cloruro de magnesio. Las muestras de estabilidad que tienen las composiciones establecidas en la tabla siguiente se preparan formulando el ingrediente farmacéutico activo insulina lispro con los otros excipientes indicados en la tabla siguiente (Composiciones L, M y N) o por medio de la adición de citrato y cloruro sódico a un vial del producto farmacéutico Humalog® (Composición O).

Tabla 18.

Las soluciones se filtran con una membrana de PVDF de 0,22 micrómetros (Núm. de Cat. SLGV013SL, Millex, Millipore) y se distribuyen en viales de vidrio (Núm. de Cat. NC4015-1, National Scientific, Thermo Scientific Inc.) con tapones de rosca (Núm. de Cat. C4015-67A, National Scientific, Thermo Scientific Inc.), incubados a 2 a 8 °C y 30 °C respectivamente. Se tomaron muestras de la temperatura de incubación de 30 °C para su análisis en los puntos temporales iniciales, 8, 16, 27, 36, 44, 54 y 66 días. Las muestras de la temperatura de incubación de 5 °C se extraen para su análisis en los puntos temporales iniciales, de 27, 36, 44, 54 y 66 días.

Se lleva a cabo un análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento por exclusión de tamaño (SEC-HPLC) para evaluar la potencia de las proteínas y cuantificar las especies de alto peso molecular en cada composición en los puntos de tiempo de estabilidad mediante el uso de un detector UV a 276 nm. Cada muestra (10 j L) se separa a temperatura ambiente mediante el uso de una columna Sepax Zenix-C SEC-80, 7,8 x 300 mm, 3 jm de partículas (Núm. de Cat. 233080-7830) a un caudal de 1,0 mL /minuto con elución isocrática de la fase móvil (0,1% de TFA, 50% de ACN) durante un tiempo de ejecución de 25 minutos. Las concentraciones de insulina se calculan por medio de la comparación del área del pico de insulina con el área de un estándar de insulina lispro y el ajuste de la pureza determinada por HPLC de fase inversa. A continuación se indican los resultados, expresados en UI/mL.

Tabla 19.

Tabla 20.

La pérdida de insulina para las muestras que contienen citrato y las muestras de control de Humalog® es inferior al 5% para todas las muestras hasta los 66 días a 4 °C y 30 °C.

El porcentaje de alto peso molecular (% de HMW) se calcula por medio de la integración del % de área total de todos los picos que eluyen antes del pico principal. Los resultados (% de HMW) figuran en las tablas siguientes.

Tabla 21.

Tabla 22.

La formación de HMW es inferior al 1% para todas las muestras que contienen citrato y las de control de Humalog® hasta 66 días a 4 °C y 30 °C.

Se lleva a cabo un análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa (RP-HPLC) para evaluar la pureza de las proteínas en cada composición en los puntos de tiempo de estabilidad, mediante el uso de un detector UV a 214 nm. Cada muestra (5 j l) se separa a 40 °C mediante el uso de una columna de HPLC Waters BioSuite C18 PA-B, 3,5 jm, 2,1 * 150 mm (pieza Núm. 186002435), o una columna comparable, a un caudal de 0,6 mL/minuto con fase móvil A (sulfato 50mM, pH de 2,3 20% de acetonitrilo (v/v)) y fase móvil B (sulfato 50mM, pH de 2,3 50% de acetonitrilo (v/v)). El gradiente de la fase móvil B a los 0, 3, 15, 21,26, 27, 27,5 y 35,0 min es de 21, 25, 25, 30, 80, 80, 21 y 21%, respectivamente. El porcentaje de la muestra fuera del pico principal y del A-21 desamido se determina por medio de la resta del porcentaje del pico principal y del A-21 desamido del 100%. En conjunto, estos picos se consideran otras sustancias relacionadas (ORS). Los resultados (% fuera del pico principal y A-21 y desamido) se dan a continuación.

Tabla 23.

Tabla 24.

La SRO de todas las muestras que contienen citrato y de las muestras de control de Humalog® es inferior al 1,5% a 4 °C durante 66 días y al 3,0% a 30 °C durante 66 días.

Estabilidad física de la insulina lispro formulada con 25 mM de citrato, 0,3 mM de cinc, 5 mM de MgCl2, 0,09% de poloxámero y diferentes concentraciones de cloruro

Se prepara una formulación madre de concentrado de lispro que comprende 200 U/mL de insulina lispro/mL, 32 mg de glicerina/mL, 6,30 mg de metacresol/mL, 0,6 mM de cinc en agua para operaciones estériles a granel. La formulación se ajusta al pH con ácido clorhídrico para disolver la insulina lispro y luego se ajusta con hidróxido de sodio a un pH de 7,45.

Las formulaciones de prueba se preparan entonces por medio de la dilución del concentrado de insulina lispro con tampón de citrato de sodio, cloruro de magnesio hexahidratado en polvo, solución de poloxámero 188 y cloruro de sodio granulado y q.s. con agua para operaciones estériles a granel hasta una composición de 25 mM de citrato, 5 mM de MgCh, 0,09% de poloxámero 188, 100 unidades/mL de lispro, 16 mg/mL de glicerina, 3,15 mg/mL de Metacresol y 0,3 mM de cinc con 23,2 (composición P) o 17,7 (composición Q) mM de cloruro total.

Las formulaciones se filtran estérilmente y luego se transfieren volumétricamente a viales de vidrio de 10 mL con un llenado de 7 mL, se tapan y se sellan con engarce.

En un estudio de estabilidad acelerada de trece días (30 °C, agitado 75 a golpes por minuto (spm)) los viales se someten a una inspección visual en los días 2, 4, 8 y 13. Los viales que contienen una solución clara e incolora sin precipitados se consideran puntuados como un “aprobado”, mientras que un vial que contiene partículas o una solución que no es clara y/o descolorida se registra como “desaprobado” Los datos se presentan a continuación en la Tabla 25.

Tabla 25.

Estabilidad física de la insulina lispro formulada con 25 mM de citrato, 0,3 mM de cinc, 0,09% de poloxámero y 23 mM de cloruro total con y sin magnesio

Se prepara una formulación madre de concentrado de lispro que comprende 200 U/mL de insulina lispro, 32 mg de glicerina/mL, 6,30 mg de metacresol/mL y 0,6 mM de cinc en agua para operaciones estériles a granel. La formulación se ajusta al pH con ácido clorhídrico para disolver la insulina lispro y luego se ajusta con hidróxido de sodio a un pH de 7,45.

Las formulaciones de prueba se preparan por medio de la dilución del concentrado de lispro con tampón de citrato de sodio, solución de poloxámero 188, cloruro de sodio granulado, opcionalmente, con cloruro de magnesio hexahidratado en polvo, y c.s. con agua para operaciones estériles a granel a composiciones de 25 mM de citrato, 0,09% p/v de poloxámero 188, 100 unidades/mL de lispro, 16 mg/mL de glicerina, 3,15 mg/mL de Metacresol, 0,3 mM de cinc, 23 mM de cloruro total y 0 (Composición R) o 5 (Composición S) mM de MgCh.

Las formulaciones de prueba se filtran estérilmente y luego se transfieren volumétricamente a frascos de vidrio de 10 mL con un relleno de 7 mL, se tapan y se sellan con engarce.

Los viales se someten a un estudio de estabilidad acelerada de trece días con inspecciones visuales periódicas siguiendo generalmente el procedimiento descrito anteriormente. Los datos se presentan a continuación en la Tabla Tabla 26.

Los resultados apoyan que el magnesio mejoró la estabilidad de la Composición S en relación con la Composición R.

Estabilidad física de la insulina lispro formulada con 25 mM de citrato, 5 mM de MgCl2, 20 mM de cloruro, 0,6 mM de cinc, 0,09% de poloxámero

Se lleva a cabo un estudio de vida útil acelerada de 69 días en una formulación que comprende 100 U/mL de insulina lispro, 5 mM de MgCh, 20 mM de cloruro, 0,6 mM de cinc, 0,09% p/v de poloxámero 188, 5 mg/mL de glicerina y 3,15 mg/mL de m-cresol (Composición T).

Se prepara una formulación concentrada a granel por medio de la disolución de la glicerina, el metacresol, el lispro y el óxido de cinc en agua para operaciones estériles a granel, por medio de la adición de HCl para bajar el pH. Después del ajuste del pH a 7,4 - 7,5 con NaOH, se añade una solución de concentración adecuada de citrato y agentes estabilizadores adicionales para alcanzar la concentración final de excipiente objetivo de la Composición T. Esta solución se compone de tampón de citrato de sodio, cloruro de cinc, cloruro de magnesio hexahidratado y poloxámero 188 en agua para operaciones estériles a granel. Después del ajuste del pH a 7,4 - 7,5, si es necesario, se añade una solución de cloruro de sodio para alcanzar la concentración total de cloruro deseada. A continuación, la formulación se diluye con agua para las operaciones de esterilización a granel.

Las formulaciones se filtran estérilmente y luego se transfieren volumétricamente a viales de vidrio de 10 mL con un llenado de 10,3 mL, se tapan y se sellan con engarce. Los viales se almacenan estáticos y en posición vertical a 30 °C y se inspeccionan visualmente, siguiendo en general el procedimiento descrito anteriormente, a los días 36 y 69. Todos los viales inspeccionados en cada punto de tiempo pasan (n=3 para el día 36 y n=5 para el día 69). Estos resultados apoyan que la Composición T permanece clara e incolora sin precipitados en un estudio de vida útil acelerada.

Insulina lispro formulada con concentraciones variables de citrato, magnesio, cloruro, cinc, surfactante, glicerina y TRIS

La estabilidad física de las siguientes siete formulaciones se prueba en un estudio de uso de pacientes simulados durante 32 días:

Tabla 27.

Las soluciones madre de lispro concentrado se preparan por medio de la disolución de cantidades apropiadas de glicerina, metacresol, lispro, óxido de cinc y, opcionalmente, TRIS en agua para operaciones estériles a granel, por medio de la adición de HCl para bajar el pH. Las composiciones de las dos soluciones concentradas son las siguientes: (1) 200 U/mL de lispro, 12 mM de cloruro total, 10 mg/mL de glicerina, 6,3 mg/mL de Metacresol, 0,6 mM de cinc total; y (2) 200 U/mL de lispro, 51 mM de cloruro total, 2,6 mg/mL de glicerina, 6,3 mg/mL de Metacresol, 0,6 mM de cinc total, 80 mM de TRIS. A continuación, las soluciones se ajustan a un pH de 7,4 a 7,5 con NaOH o HCl y se llenan de agua hasta el volumen necesario para las operaciones estériles a granel.

Las composiciones de prueba se preparan por medio de la dilución de las soluciones madre de lispro por medio de la adición secuencial de tampón de citrato de sodio, cinc en solución de HCl, hidróxido de sodio para ajustar el pH, solución de cloruro de magnesio hexahidratado, solución de poloxámero 188 y solución de cloruro de sodio. Las composiciones se filtran de forma estéril y luego se llenan volumétricamente con agua para las operaciones de

Claims (17)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende:

a. una insulina, en una concentración de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 UI/mL;

b. citrato, en una concentración de aproximadamente 15 a aproximadamente 35 mM;

c. cinc, en una concentración de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 0,8 mM; y

d. un conservante; y

en la que la composición no incluye EDTA ni ningún oligosacárido.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que además comprende cloruro de magnesio en una concentración de hasta aproximadamente 5 mM.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la insulina es insulina lispro.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la concentración de citrato es de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 mM.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el conservante se selecciona entre fenol o metacresol.

6. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, en la que el conservante es metacresol.

7. La composición farmacéutica de la reivindicación 6, en la que la concentración de metacresol es de aproximadamente 2,5 a aproximadamente 3,8 mg/mL.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que además comprende un agente de tonicidad.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en la que el agente de tonicidad es glicerol.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el pH de la composición es de aproximadamente 7,0 a aproximadamente 7,8.

11. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que la composición proporciona una captación de insulina en la sangre que es al menos un 20% más rápida que la de las composiciones que contienen la misma insulina pero que no contienen citrato.

12. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para su uso en terapia.

13. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para su uso en el tratamiento de la diabetes.

14. Un artículo de fabricación que comprende cualquiera de las composiciones farmacéuticas de las reivindicaciones 1 a 11.

15. El artículo de fabricación de la reivindicación 14, que es un vial multiuso.

16. El artículo de fabricación de la reivindicación 14 que es un inyector de pluma reutilizable.

17. El artículo de fabricación de la reivindicación 14, que es un dispositivo de bomba para la terapia de infusión subcutánea continua de insulina.