KR102231957B1

KR102231957B1 - 에텔칼세타이드(amg 416)의 안정한 액체 제형

Info

Publication number: KR102231957B1
Application number: KR1020167002370A
Authority: KR
Inventors: 데릭 맥클린; 췬 인
Original assignee: 암젠 인코포레이티드
Priority date: 2013-06-28
Filing date: 2014-06-27
Publication date: 2021-03-25
Also published as: SG11201510647TA; EP3246017A1; PL3013318T3; CA2916222A1; PE20160549A1; MA38724A1; CN105764487A; US20160220486A1; US9820938B2; JP6027708B2; ZA201600238B; EP3878433A1; CL2015003738A1; AP2015008936A0; US20180080452A1; IL243210A0; MA38724B1; US11162500B2; PE20210413A1; ES2633989T3

Abstract

칼슘 감지 수용체(AMG 416으로도 알려져 있는 에텔칼세타이드)의 펩티드 작용제, 버퍼 및 긴장성 변형제를 포함하는 액체 제형 및 상기 제형의 제조 및 이용 방법이 제공된다.

Description

에텔칼세타이드(AMG 416)의 안정한 액체 제형{STABLE LIQUID FORMULATION OF ETELCALCETIDE(AMG 416)}

본 발명은 그 전체 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 2013년 6월 28일자로 출원된 미국 가출원 제61/840,618호에 대한 우선권을 주장한다.

본 발명은 칼슘 감지(sensing) 수용체의 펩티드 작용제(agonist)를 포함하는 액체 제형에 관한 것으로서, 특히 연장된 기간 동안의 보관 후에도 안정하게 남아 있는 제형에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 제형의 제조 및 이용 방법에 관한 것이다.

부갑상선 호르몬 레벨을 낮추기 위한 활성을 갖는 다양한 화합물이 개시되어 있다. 국제 공개 제WO2011/014707호 참조. 한 구현예에서, 상기 화합물은 다음으로 표시될 수 있다:

주쇄는 모두 D-배치(configuration)인 7개의 아미노산을 가지며, 측쇄인 시스테인 잔기는 L-배치이다. 아미노 말단은 아세틸화되고, 카르복실 말단은 아미드화된다. 상기 화합물("AMG-416")은 혈액투석 환자에서 속발성 부갑상선기능항진증(secondary hyperparathyroidism, SHPT)의 치료용으로 유용성을 갖는다. AMG-416을 포함하는 액체 제형은 정맥내로 개체에 투여될 수 있다. AMG-416의 염산염은 다음으로 표시될 수 있다:

치료 펩티드는 그 제형에 관하여 다수의 도전과제(challenge)를 제기한다. 일반적으로, 펩티드, 특히 디설파이드(disulfide) 결합을 함유하는 것들은 전형적으로 수용액에서 보통이거나 불량한 안정성만을 갖는다. 펩티드는 높거나 낮은 pH 모두에서 아미드 결합 가수분해가 되기 쉽다. 디설파이드 결합은 (중성 pH에 가까운) 상당히 온화한 조건 하에서 조차도 불안정할 수 있다. 또한, 고리형이 아닌 디설파이드 결합을 함유하는 펩티드는 특히 다이머(dimer)를 형성하기 쉽다. 따라서, 치료 펩티드는 종종 나중에 재구성하기 위하여 건조 분말 또는 케이크(cake)와 같은 동결건조된 형태로 제공된다. 치료 펩티드의 동결건조된 제형은 오랜 기간 동안 안정성을 제공한다는 이점을 갖지만, 하나 이상의 희석제의 첨가를 필요로 하고, 희석제의 유형과 양을 부적절하게 사용함으로 인한 잠재적인 실수의 위험성이 있을 뿐만 아니라, 오염의 위험성이 있다는 점에서 사용하기에는 덜 편리하다. 또한, 동결건조 공정은 시간 소모적이고 고가이다.

따라서, AMG 416과 같은 칼슘 감지 수용체의 펩티드 작용제를 포함하는 수성 액체 제형에 대한 필요성이 있다. 상기 액체 제형이 적합한 보관 조건 하에서 적절한 기간에 걸쳐 안정하게 남아 있고 정맥내 또는 다른 비경구 경로에 의해 투여되기에 적합하다면 바람직할 것이다.

AMG 416과 같은 칼슘 감지 수용체의 펩티드 작용제를 포함하는 액체 제형이 제공된다.

한 구현예에서, 상기 제형은 약 2.0 내지 약 5.0의 pH를 갖는다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 2.5 내지 4.5의 pH를 갖는다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 2.5 내지 4.0의 pH를 갖는다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 3.0 내지 3.5의 pH를 갖는다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 3.0 내지 4.0의 pH를 갖는다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 2.8 내지 3.8의 pH를 갖는다.

다른 구현예에서, 상기 제형의 pH는 약학적으로 허용가능한 버퍼에 의해 유지된다. 이러한 버퍼는 숙시네이트 버퍼, 아세테이트 버퍼, 시트레이트 버퍼 및 포스페이트 버퍼를 제한없이 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 버퍼는 숙시네이트 버퍼이다. 상기 제형의 pH는 필요시 HCl 또는 NaOH와 같은 산 또는 염기로 조정될 수 있다.

다른 구현예에서, 상기 칼슘 감지 수용체의 펩티드 작용제는 0.1 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, 상기 펩티드는 1 ㎎/㎖ 내지 15 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, 상기 펩티드는 2.5 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, 상기 펩티드는 약 1 ㎎/㎖, 약 5 ㎎/㎖ 또는 약 10 ㎎/㎖의 농도로 존재한다.

다른 구현예에서, AMG 416은 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 20 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 한 구현예에서, AMG 416은 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 15 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, AMG 416은 약 2.5 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, AMG 416은 약 1 ㎎/㎖, 약 2.5 ㎎/㎖, 약 5 ㎎/㎖ 또는 약 10 ㎎/㎖의 농도로 존재한다.

다른 구현예에서, AMG 416은 0.1 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 한 구현예에서, AMG 416은 1 ㎎/㎖ 내지 15 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, AMG 416은 2.5 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, AMG 416은 1 ㎎/㎖ 내지 5 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, AMG 416은 5 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 농도로 존재한다. 다른 구현예에서, AMG 416은 0.5 내지 1.5 ㎎/㎖, 2.0 내지 3.0 ㎎/㎖, 4.5 내지 5.5 ㎎/㎖ 또는 9.5 내지 약 10.5 ㎎/㎖의 농도로 존재한다.

다른 구현예에서, 상기 제형은 약학적으로 허용가능한 긴장성 변형제(tonicity modifier) 또는 약학적으로 허용가능한 긴장성 변형제들의 혼합물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 긴장성 변형제(또는 긴장성 변형제들의 혼합물)는 상기 제형이 체액(예컨대, 인간 혈액)과 대략 등장이 되기에 충분한 농도로 존재한다. 다른 측면에서, 상기 긴장성 변형제는 NaCl이다.

다른 구현예에서, 상기 제형은 치료학적 유효량의 칼슘 감지 수용체의 펩티드 작용제를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 상기 제형은 치료학적 유효량의 AMG 416을 포함한다.

다른 구현예에서, 상기 제형은 2-8℃에서 보관될 때 2년까지 10% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 2-8℃에서 보관될 때 3년까지 10% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 2-8℃에서 보관될 때 4년까지 10% 이하로 분해된다.

다른 구현예에서, 상기 제형은 2-8℃에서 보관될 때 2년까지 8% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 2-8℃에서 보관될 때 3년까지 8% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 2-8℃에서 보관될 때 4년까지 8% 이하로 분해된다.

다른 구현예에서, 상기 제형은 실온에서 보관될 때 3개월 동안 10% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 실온에서 보관될 때 6개월까지 10% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 실온에서 보관될 때 1년까지 10% 이하로 분해된다.

다른 구현예에서, 수용액 내에 0.5 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 칼슘 감지 수용체(예컨대, AMG 416)의 펩티드 작용제, 약 3.0 내지 3.5의 pH로 제형을 유지하는 숙시네이트 버퍼, 및 제형이 인간 혈액과 대략 등장이 되기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함하는 제형이 제공된다.

도 1은 실온(RT)에서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 4.5) 내의 AMG 416 용액에 대해 순도(%)를 시간(일)의 함수로서 나타낸 일련의 그래프이다. 도 1a는 200, 66, 20, 6.7, 2.2 및 0.67 ㎎/㎖ 농도의 AMG 416을 갖는 AMG 416 용액의 안정성을 보여준다. 도 1b에서, 20 ㎎/㎖ 이하의 농도에서의 분해 패턴을 보다 분명하게 나타내기 위해 축척이 확대된다.
도 2는 40℃에서 20, 6.7, 2.2 및 0.67 ㎎/㎖ 범위의 농도로 AMG 416을 갖는 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 4.5) 내의 AMG 416 용액에 대해 순도(%)를 시간(일)의 함수로서 나타낸 그래프이다.
도 3은 40℃에서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 2, 3, 4, 5 및 6) 내의 AMG 416 용액에 대해 순도(%)를 시간(일)의 함수로서 나타낸 일련의 그래프이다. 도 3a에서, AMG 416의 농도는 10 ㎎/㎖이고, 도 3b에서 AMG 416의 농도는 2.5 ㎎/㎖이다.
도 4는 2-8℃, 실온 및 40℃에서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수 내의 AMG 416 용액에 대해 28일에 순도(%)를 pH의 함수로서 나타낸 일련의 그래프이다. 도 4a에서, AMG 416의 농도는 10 ㎎/㎖이고, 도 4b에서 AMG 416의 농도는 2.5 ㎎/㎖이다.
도 5는 일련의 HPLC 크로마토그램이다. 도 5a에서 HPLC 트레이스(trace)는 40℃에서 27일 동안 보관된 AMG 416 용액(5 ㎎/㎖, pH 2.25)에 대한 것이다(87.8% 순도). 도 5b에서, 피크를 보다 분명하게 나타내기 위해 축척이 확대된다.
도 6은 일련의 HPLC 크로마토그램이다. 도 6a에서 HPLC 트레이스는 40℃에서 27일 동안 보관된 AMG 416 용액(5 ㎎/㎖, pH 3.5)에 대한 것이다(91.7% 순도). 도 6b에서, 피크를 보다 분명하게 나타내기 위해 축척이 확대된다.
도 7은 2-8℃에서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 2.25, 2.5, 3.0 및 3.5) 내의 일련의 AMG 416 용액(5 ㎎/㎖)에 대해 순도(%)를 시간(일)의 함수로서 나타낸 그래프이다.
도 8은 실온에서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 2.25, 2.5, 3.0 및 3.5) 내의 일련의 AMG 416 용액(5 ㎎/㎖)에 대해 순도(%)를 시간(일)의 함수로서 나타낸 그래프이다.
도 9는 40℃에서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 2.25, 2.5, 3.0 및 3.5) 내의 일련의 AMG 416 용액(5 ㎎/㎖)에 대해 순도(%)를 시간(일)의 함수로서 나타낸 그래프이다.
도 10은 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 2.25, 2.5, 3.0 및 3.5) 내의 일련의 AMG 416 용액(5 ㎎/㎖)에 대해 분해물(degradant)(%)을 시간(일)의 함수로서 나타낸 일련의 그래프이다. C-말단 탈아민화의 시간-경과(time-course)는 2-8℃(도 10a), 실온(도 10b) 및 40℃(도 10c)에서 나타나 있다. y 축의 축척은 각 그래프에서 상이함을 유의해야 한다.
도 11은 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 2.25, 2.5, 3.0 및 3.5) 내의 일련의 AMG 416 용액(5 ㎎/㎖)에 대해 분해물(%)을 시간(일)의 함수로서 나타낸 일련의 그래프이다. 호모다이머 형성의 시간-경과는 2-8℃(도 11a), 실온(도 11b) 및 40℃(도 11c)에서 나타나 있다. 도 11c의 y 축의 축척은 도 11a 및 도 11b의 경우와 상이함을 유의해야 한다.
도 12는 2-8℃(도 12a), 실온(도 12b) 및 40℃(도 11c)에서 보관된 숙시네이트-버퍼화 생리식염수 내의 일련의 용액에 대해 순도(%)를 pH(2.8-3.8), AMG 416 농도(4-6 ㎎/㎖) 및 NaCl(0.7-1.0%)의 함수로서 나타낸 일련의 그래프이다.
도 13은 2-8℃(도 13a), 실온(도 13b) 및 40℃(도 13c)에서 보관된 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 2.5, 3.0, 3.5) 내의 일련의 AMG 416 용액(3.4 ㎎/㎖)에 대해 순도(%)를 시간(월)의 함수로서 나타낸 일련의 그래프이다.

본 명세서에서 사용된 섹션의 제목은 조직화의 목적을 위한 것일 뿐으로서, 개시된 주제를 제한하는 것으로 이해되어서는 안된다.

본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학적 및 기술적 용어들은 본 기술분야의 통상의 기술자에 의해 보통 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단일형 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수형 용어는 단일형을 포함할 것이다.

일반적으로, 본 명세서에서 개시된 분자 생물학 및 단백질 화학과 관련되어 사용된 명명법 및 기술들은 본 기술분야에 잘 알려져 있거나 보통 사용되는 것들이다. 본 발명의 방법 및 기술은 달리 나타내지 않는 한 다양한 일반적인 및 본 명세서에 걸쳐서 인용 및 논의된 보다 구체적인 참고문헌에 개시된 것과 같은 본 기술분야에 잘 알려진 종래의 방법에 따라 일반적으로 수행된다. 예컨대, 임의의 목적을 위해 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 하기 문헌들 참조: Laszlo, Peptide-Based Drug Design: Methods and Protocols, Humana Press (2008); Benoiton, Chemistry of Peptide Synthesis, CRC Press (2005); Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992). 정제 기술은 본 기술분야에서 보통 달성되거나 본 명세서에서 개시된 것과 같이 제조사의 명세서에 따라 수행된다. 본 명세서에서 기술된 분석 화학, 합성 유기 화학 및 의학 및 약학 화학과 관련되어 사용된 명명법 및 실험실 절차 및 기술들은 본 기술분야에 잘 알려져 있거나 보통 사용되는 것들이다. 표준 기술이 화학적 합성, 화학적 분석, 약학적 제조물, 제형 및 운반, 및 환자의 치료를 위해 사용될 수 있다.

본 명세서에서 개시된 내용은 본 명세서에 기재된 특정한 방법론, 프로토콜 및 시약 등으로 한정하기 위한 것이 아님이 이해되어야 하며, 이들은 변할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어는 특정한 구현예를 설명하기 위한 목적일 뿐으로서, 청구항에 의해서만 유일하게 정의되는 해당 개시된 내용의 범위를 한정하기 위한 의도는 아니다.

본 명세서에서 사용된 것과 같이, 주어진 값 또는 범위의 문맥에서의 "약"이란 용어는 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 바람직하게는 10% 이내, 보다 바람직하게는 5% 이내인 값 또는 범위를 나타낸다.

Ⅰ. 일반적인 정의

관례에 따라, 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "한" 및 "하나"는 달리 구체적으로 나타내지 않는 한 "하나 이상"을 의미한다.

"AMG 416"(에텔칼세타이드로도 불리며, 종래에는 벨칼세타이드로 알려져 있음)이란 용어는 L-시스테인을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드의 화학명을 갖는 화합물을 나타내고, 다음과 같이 나타낼 수 있다:

"AMG 416 염산" 또는 "AMG 416 HCl"이란 용어는 상호교환가능하며, L-시스테인 염산을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드의 화학명을 갖는 화합물을 나타내며, 다음과 같이 나타낼 수 있다:

본 명세서에서 사용된 것과 같이, "아미노산" 및 "잔기"란 용어는 펩티드 또는 폴리펩티드의 문맥에서 사용될 때 상호교환가능하며, 모두 자연적으로 발생하는 아미노산 및 합성 아미노산뿐만 아니라 아미노산 유사체, 아미노산 모방체 및 자연적으로 발생하는 아미노산과 화학적으로 유사한 비-자연적으로 발생하는 아미노산을 나타낸다.

"치료하는"이란 용어는 징후 또는 증상의 경감; 차도; 약화시키거나, 또는 상처, 병리 또는 증상이 환자에게 보다 견딜만하게 만들거나; 악화 또는 감소의 속도를 늦추거나; 악화의 최종점이 덜 약화되게 하거나; 환자의 육체적 및 정신적 안녕(well-being)을 개선하는 것과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터를 포함하는 상처, 병리 및 증상의 치료 또는 개선에서의 성공의 임의의 표시(indicia)를 나타낸다. 징후 또는 증상의 치료 또는 개선은, 예를 들면, 상승된 레벨의 부갑상선 호르몬(PTH)의 감소에 의한 SHPT의 치료와 같은 물리적 검사의 결과를 포함하는 객관적 또는 주관적 파라미터에 기초할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 것과 같이, "치료학적 유효 용량(dose)" 및 "치료학적 유효량"이란 용어는 치료되는 질환 또는 질병의 징후 또는 증상의 완화 또는 개선을 포함하는 연구자, 내과의사 또는 다른 임상의에 의해 추구되는 조직 시스템, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 일으키는 양, 예를 들면, 상승된 PTH 레벨의 원하는 감소를 일으키는 AMG 416의 양을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 것과 같은 "실온"이란 용어는 약 25℃의 온도를 나타낸다. 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "냉장 조건" 하의 보관은 2-8℃의 온도에서의 보관을 나타낸다.

"펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"이란 용어는 상호교환가능하며, 전형적으로 펩티드 또는 디설파이드 결합을 통해 함께 결합된 아미노산의 폴리머를 나타낸다. 상기 용어는 또한 하나 이상의 아미노산 잔기가 대응하는 자연적으로 발생하는 아미노산의 유사체 또는 모방체인 아미노산 폴리머뿐만 아니라 자연적으로 발생하는 아미노산 폴리머에도 적용된다. 상기 용어는 또한 예컨대 탄수화물 잔기의 첨가에 의해 당단백질을 형성하거나 인산화된 것과 같이 변형된 아미노산 폴리머를 포괄할 수 있다. 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질은 액체상 합성 또는 고체상 합성에 의해, 또는 유전적으로 가공된 또는 재조합 세포에 의해 생산될 수 있다.

펩티드 또는 폴리펩티드의 "변이체"는 하나 이상의 아미노산 잔기가 다른 폴리펩티드 서열에 대해 상대적으로 아미노산 서열 내로 삽입되거나, 결실되거나, 및/또는 치환된 아미노산 서열을 포함한다. 변이체는 융합 단백질을 포함한다.

펩티드 또는 폴리펩티드의 "유도체"는 예컨대 다른 화학적 모이어티(moiety)에 대한 접합(conjugation)을 통해 삽입, 결실 또는 치환 변이체와는 구별되는 어떤 방식으로 화학적으로 변형된 펩티드 또는 폴리펩티드이다. 이러한 변형은, 예컨대 펩티드 또는 폴리펩티드의 아미노 말단의 아세틸화 및/또는 카르복시 말단의 아미드화와 같은 펩티드 또는 폴리펩티드의 아미노 및/또는 카르복시 말단의 기의 공유결합성 삽입을 포함할 수 있다.

"아미노산"이란 용어는 본 기술분야에서의 그의 보통의 의미를 포함한다. 20가지 자연적으로 발생하는 아미노산 및 그의 약자들은 통상의 용법을 따른다. 임의의 목적을 위해 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 Immunology - A Synthesis, 2nd Edition, (E.S. Golub and D.R. Green, eds.), Sinauer Associates: Sunderland, Mass. (1991) 참조. 19가지 종래 아미노산(글리신 제외)의 입체이성질체(예컨대, D-아미노산), [알파]-, [알파]-이치환된(disubstituted) 아미노산과 같은 비-자연형 아미노산, N-알킬 아미노산, 및 다른 비-종래의 아미노산이 또한 폴리펩티드용으로 적합한 구성성분일 수 있으며, "아미노산"이란 구(phrase) 내에 포함된다. 비-종래의 아미노산의 예는 호모시스테인, 오르니틴, 4-히드록시프롤린, [감마]-카르복시글루타메이트, [입실론]-N,N,N-트리메틸라이신, [입실론]-N-아세틸라이신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-히드록시라이신, [시그마]-N-메틸아르기닌 및 다른 유사한 아미노산 및 이미노산(예컨대, 4-히드록시프롤린)을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 폴리펩티드 표기법에서, 표준 용법 및 관례에 따라 아미노 말단은 왼쪽이고 카르복실 말단은 오른쪽이다.

본 명세서에서 사용된 것과 같은 "개체" 또는 "환자"는 임의의 포유동물일 수 있다. 전형적인 구현예에서, 상기 개체 및 환자는 인간이다.

본 명세서에서 사용된 것과 같은 "버퍼"는 조성물을 나타내며, 상기 조성물은 약산 및 그의 짝염기(보통은 짝염기 염임), 약염기 및 그의 짝산, 또는 그의 혼합물을 포함한다. 본 기술분야의 기술자는 본 발명에서 사용되는 제형에서 사용될 수 있는 다양한 버퍼를 즉시 인식할 것이다. 전형적인 버퍼는 약학적으로 허용가능한 약산, 약염기, 또는 그의 혼합물을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 예시적인 약학적으로 허용가능한 버퍼는 아세테이트(예컨대, 나트륨 아세테이트), 숙시네이트(예컨대, 나트륨 숙시네이트)를 포함한다.

"약산"이란 구는 수용액에서 완전히 이온화하지 않는 화학 산이다; 즉, 상기 산이 일반식 HA로 표시된다면, 수용액에서 A-가 형성되지만, 상당한 양의 해리되지 않은 HA가 여전히 남아있다. 약산의 산 해리 상수(K _a )는 1.8×10^-16 및 55.5 사이에서 변한다.

"약염기"란 구는 수용액에서 완전히 이온화하지 않는 화학 산이다; 즉, 상기 염기가 일반식 B로 표시된다면, 수용액에서 BH+가 형성되지만, 상당한 양의 양성자화되지 않은 B가 여전히 남아있다. 결과물인 짝약산 BH+의 산 해리 상수(K _a )는 1.8×10^-16 및 55.5 사이에서 변한다.

"짝산"이란 구는 양성자를 얻거나 잃음으로써 서로 전환되는 2개의 화합물 쌍(HX+, X)의 산 멤버인 HX+이다.

"짝염기"란 구는 양성자를 얻거나 잃음으로써 서로 전환되는 2개의 화합물 쌍(HX, X-)의 염기 멤버인 X-이다.

"짝염기염"이란 구는 짝염기인 X- 및 양전하성 카운터이온을 포함하는 이온성 염이다.

"버퍼 시스템"이란 구는 적어도 2가지 버퍼를 함유하는 혼합물을 의미한다.

"q.s."란 용어는 원하는 기능을 달성하기에, 예컨대 용액이 원하는 부피(즉, 100%)가 되기에 충분한 양을 첨가하는 것을 의미한다.

"긴장성 변형제"란 구는 제형의 긴장성을 조정하기 위해 제형에 첨가될 수 있는 약학적으로 허용가능한 불활성 물질을 의미한다. 본 발명에 대해 적합한 긴장성 변형제는 염화나트륨, 염화칼륨, 만니톨 또는 글리세린 및 다른 약학적으로 허용가능한 긴장성 변형제를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

Ⅱ. 구현예

본 발명은 칼슘 감지 수용체의 펩티드 작용제를 포함하는 액체 제형에 관한 것으로서, 상기 제형은 약 2.0 내지 약 5.0의 pH를 갖는다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 AMG 416을 포함하는 액체 제형에 관한 것으로서, 상기 제형은 약 2.0 내지 약 5.0의 pH를 갖는다. AMG 416 및 그의 제조물은 국제 특허 공개 제WO2011/014707호에 개시되어 있다. 예를 들면, AMG 416은 대응하는 Fmoc-보호된 D-아미노산으로부터 고체상 합성에 의해 조립될 수 있다. 수지로부터 절단된 후, 상기 물질은 Boc-L-Cys(NPyS)-OH로 처리되어 디설파이드 결합을 형성할 수 있다. 이후, 상기 Boc 기는 트리플루오로아세트산(TFA)으로 제거될 수 있으며, 결과물인 생성물은 역상 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 정제되고 동결건조에 의해 TFA 염의 형태로 단리된다. 상기 TFA 염은 후속하는 염 교환 절차를 수행함으로써 약학적으로 허용가능한 염으로 변환될 수 있다. 이러한 절차는 본 기술분야에 잘 알려져 있으며, 예컨대 이온 교환 기술을 포함하고, 선택적으로는 (예를 들면, 역상 액체 크로마토그래피 또는 역삼투에 의한) 결과물인 생성물의 정제가 뒤따른다.

본 명세서에 개시된 제형은 1차적으로 활성 성분으로서 치료 펩티드인 AMG 416에 관해 개시된다. 그러나, 숙련된 기술자가 인식하는 것과 같이, 본 발명은 또한 AMG 416의 변이체 및 유도체로 확장된다.

예를 들면, 한 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 D-시스테인을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 N-아세틸-D-시스테인을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 N-아세틸-L-시스테인을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다.

다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 D-시스테인을 갖는 N-아세틸-L-시스테이닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 L-시스테인을 갖는 N-아세틸-L-시스테이닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 N-아세틸-D-시스테인을 갖는 N-아세틸-L-시스테이닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 N-아세틸-L-시스테인을 갖는 N-아세틸-L-시스테이닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다.

다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 D-시스테인을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 L-시스테인을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 N-아세틸-D-시스테인을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 N-아세틸-L-시스테인을 갖는 N-아세틸-D-시스테이닐-D-아르기닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르기닐-D-알라닐-D-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다.

다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 D-시스테인을 갖는 N-아세틸-L-시스테이닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 L-시스테인을 갖는 N-아세틸-L-시스테이닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 N-아세틸-D-시스테인을 갖는 N-아세틸-L-시스테이닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 N-아세틸-L-시스테인을 갖는 N-아세틸-L-시스테이닐-L-아르기닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르긴아미드 디설파이드와 함께 사용될 수 있다.

다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 국제 특허 공개 제WO2011/014707호의 표 1, 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9 및/또는 표 10에 제공된 하나 이상의 화합물과 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 개시된 제형은 또한 국제 특허 공개 제WO2011/014707호에 개시된 하나 이상의 화합물과 함께 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 제형은 치료학적 유효량의 활성 성분(예컨대, AMG 416)을 함유한다. 본 발명의 제형의 임의의 주어진 구현예에서의 상기 활성 성분의 치료학적 유효량은 주어진 개체에 운반되는 제형의 부피뿐만 아니라 개체의 연령 및 체중, 치료되는 병 또는 질병의 본성에 의존할 것이다. 제형에 따라, 어떤 경우에는 치료학적 유효량이 1회 투여로 환자에게 제공될 수 있지만, 다른 경우에는 복수의 투여가 필요할 수 있다.

본 발명의 액체 제형은 정맥내, 동맥내, 근육내 및 피하로 투여하기에 적합한 약학적 조성물이다. 바람직한 구현예에서, 상기 액체 제형은 정맥내 또는 다른 비경구 경로로 투여하기에 적합하다. 바람직하게는, 상기 액체 제형은 멸균된 수용액이다. 전형적으로, 상기 용매는 주사가능한 등급의 물 또는 물과 하나 이상의 다른 수-혼합성 용매(들), 예컨대 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 에탄올의 혼합물이다. 용매로서 멸균된 탈이온수를 사용하는 것이 바람직하다. 그러나, 약학적 제조물용으로 적합한 종래의 다른 용매들도 도입될 수 있다.

상기 제형은 전형적으로 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 100 ㎎/㎖의 활성 성분(예컨대, AMG 416), 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 20 ㎎/㎖의 활성 성분, 약 0.5 ㎎/㎖ 내지 약 15 ㎎/㎖의 활성 성분, 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖의 활성 성분, 또는 약 2 ㎎/㎖ 내지 약 5 ㎎/㎖의 활성 성분을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 약 1 ㎎/㎖의 활성 성분, 약 2 ㎎/㎖의 활성 성분, 약 2.5 ㎎/㎖의 활성 성분, 약 5 ㎎/㎖의 활성 성분, 약 10 ㎎/㎖의 활성 성분 또는 약 20 ㎎/㎖의 활성 성분을 함유한다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 0.1 ㎎/㎖ 내지 100 ㎎/㎖의 활성 성분, 0.1 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 활성 성분, 0.5 ㎎/㎖ 내지 15 ㎎/㎖의 활성 성분, 또는 1 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 활성 성분, 또는 2 ㎎/㎖ 내지 5 ㎎/㎖의 활성 성분을 함유한다. 바람직한 구현예에서, 상기 제형은 1 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 활성 성분을 함유한다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 제형은 2 ㎎/㎖ 내지 5 ㎎/㎖의 활성 성분을 함유한다.

상기 제형은 전형적으로 약 2.0 내지 약 5.0의 pH, 약 2.5 내지 약 4.5의 pH, 약 2.5 내지 약 4.0의 pH, 약 3.0 내지 약 3.5의 pH 또는 약 3.0 내지 약 3.6의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 약 2의 pH, 약 2.5의 pH, 약 3.0의 pH, 약 3.3의 pH, 약 3.5의 pH 또는 약 4.0의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 2.0 내지 5.0의 pH, 2.5 내지 4.5의 pH, 2.5 내지 약 4.0의 pH, 3.0 내지 3.5의 pH 또는 3.0 내지 3.6의 pH를 갖는다.

실시예에서 보다 완전히 개시한 것과 같이, AMG 416의 안정성은 용액의 pH에 의존한다. 본 발명자들은 2가지 주된 분해물이 C-말단 디아민화 및 호모다이머 형성의 결과임을 발견하였다. 또한, 본 발명자들은 상기 경로에 의한 분해의 시간 경과가 pH의 함수임을 발견하였다. 실시예 6 참조. 낮은 pH에서는 C-말단 디아민화에 의한 분해가 우세하지만(도 10 참조), 더 높은 pH에서는 호모다이머 형성에 의한 분해가 우세하다(도 11 참조). 따라서, 상기 2가지 주된 분해물의 형성은 pH 및 분해의 정도 사이에 반대의 상관관계를 갖는다. 상기 반대되는 경향은 pH 값의 범위에 걸친 전체적인 안정성 데이터의 기저를 이루며, AMG 416 용액의 최대 안정성 pH로서 약 pH 3.0 내지 3.5를 확인한 것을 뒷받침한다.

전형적으로, 상기 제형은 제형의 pH를 원하는 범위로 유지하는 생리학적으로 허용가능한 버퍼화제를 함유한다. 한 구현예에서, 상기 버퍼는 약 2.0 내지 약 5.0의 pH, 약 2.5 내지 약 4.5의 pH, 약 2.5 내지 약 4.0의 pH, 약 3.0 내지 약 3.5의 pH 또는 약 3.0 내지 약 3.6의 pH를 유지한다. 일부 구현예에서, 상기 버퍼는 약 2의 pH, 약 2.5의 pH, 약 3.0의 pH, 약 3.3의 pH, 약 3.5의 pH 또는 약 4.0의 pH를 유지한다. 일부 구현예에서, 상기 버퍼는 2.0 내지 5.0의 pH, 2.5 내지 4.5의 pH, 2.5 내지 약 4.0의 pH, 3.0 내지 3.5의 pH 또는 3.0 내지 3.6의 pH를 유지한다.

상기 제형의 다른 구성성분들과 반응하지 않고, 가시적인 침전물을 형성하지 않으며, 또는 활성 성분이 화학적으로 불안정하게 되도록 달리 초래하지 않는 한, 상기 제형의 pH를 임의의 pH 또는 상기 제공된 임의의 pH 범위로 유지할 수 있는 임의의 버퍼가 본 발명의 제형에서 사용하기에 적합하다. 본 발명의 제형에서 사용되는 버퍼는 전형적으로 숙시네이트, 시트레이트, 말레이트, 에덴테이트, 히스티딘, 아세테이트, 아디페이트, 아코니테이트, 아스코르베이트, 벤조에이트, 카보네이트, 비카보네이트, 말레에이트, 글루타메이트, 락테이트, 포스페이트 및 타르타레이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 구성성분 또는 상기 버퍼들의 혼합물을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 상기 버퍼는 숙시네이트, 예컨대 나트륨 숙시네이트를 포함한다.

상기 버퍼의 농도는 pH 안정화 뿐만 아니라 충분한 버퍼화 용량이 제공되도록 선택된다. 한 구현예에서, 상기 버퍼는 약 0.5 내지 약 100 m㏖/L, 약 0.75 내지 약 50 m㏖/L, 약 1 내지 약 20 m㏖/L, 또는 약 10 내지 약 20 m㏖/L의 농도로 제형 내에 존재한다. 다른 구현예에서, 상기 버퍼는 약 5 m㏖/L, 약 10 m㏖/L, 약 15 m㏖/L 또는 약 20 m㏖/L로 존재한다. 다른 구현예에서, 상기 버퍼는 0.5 내지 100 m㏖/L, 0.75 내지 50 m㏖/L, 1 내지 20 m㏖/L, 또는 10 내지 20 m㏖/L의 농도로 제형 내에 존재한다. 바람직한 구현예에서, 상기 버퍼는 약 10 m㏖/L로 존재한다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 버퍼는 약 10 m㏖/L로 존재하는 숙시네이트이다.

정맥내 투여와 액체 제형의 호환성의 관점으로부터, 상기 액체 제형의 pH가 생리학적 pH와 가능한 가까운 것이 바람직할 것이다. 생리학적 pH와 멀거나 강하게 버퍼화된 pH를 갖는 액체 제형은 투여시 통증이나 불편함을 초래할 수 있다. 논의된 것과 같이, 생리학적 pH 또는 그 이상에서의 AMG 416의 액체 제형은 장기간에 걸쳐 안정하게 남아있지 않을 것이다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명의 액체 제형은 주사되는 양이 개체의 신체의 생리학적 유체에 의해 신속하게 중화되도록 약하게 버퍼화된다. 낮은 버퍼 농도에서 pH의 양호한 안정성 및 양호한 조절이 유지된다는 것은 놀라운 일이다. 바람직한 구현예에서, AMG 416의 HCl 염이 버퍼화 용량을 최소화하기 위한 액체 제형의 제조에 사용된다. HCl은 강산이기 때문에 버퍼로서 작용하지 않는다. 이것은 아세트산과 같은 더 약한 산을 사용하는 것보다 이점을 제공한다. 예를 들면, AMG 416의 아세테이트 염을 사용하는 것 자체는 일부 버퍼화 용량을 제공하고 제형의 버퍼화 용량을 설정하기 위한 유연성을 덜 허용할 것이며, 신체 내에서 중성화에 보다 저항성이고 따라서 내성이 보다 덜한 제형이 될 수 있다. AMG 416은 폴리양이온성 펩티드이기 때문에, 그 효과는 보다 중성인 특성을 갖는 대부분의 펩티드와 비교하여 향상될 것이다.

일반적으로 정맥내 또는 신체의 유체와 등장인 다른 비경구 경로에 의해 제형이 투여되는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 본 발명의 제형은 생리학적으로 허용가능한 긴장성 변형제를 함유한다. 본 발명에서 유용한 긴장성 변형제는 염화나트륨, 만니톨, 수크로오스, 덱스트로오스, 솔비톨, 염화칼륨, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 상기 긴장성 변형제는 염화나트륨이다.

긴장성 제제가 존재할 때, 상기 액체 제형이 대략 신체 유체(즉, 약 270 내지 약 300 mOsm/L)와 등장이 되기에 충분하고 진피, 피하 또는 근육내 조직 또는 IV로 인간 개체와 같은 포유동물에 비경구 주사하기에 적합한 양으로 존재하는 것이 바람직하다. 등장성은, 예를 들면, 증기압 또는 얼음-냉각형 삼투압계를 이용함으로써 측정될 수 있다. 상기 제형 내의 다른 구성성분의 농도에 의존하여, 염화나트륨은 약 7.0 내지 약 10 ㎎/㎖, 약 7.5 내지 약 9.5 ㎎/㎖, 또는 약 8.0 내지 약 9.0 ㎎/㎖의 농도로 상기 제형 내에 존재한다. 한 구현예에서, 염화나트륨은 약 8.5 ㎎/㎖의 농도로 상기 제형 내에 존재한다. 다른 구현예에서, 염화나트륨은 7.0 내지 10 ㎎/㎖, 7.5 내지 9.5 ㎎/㎖, 또는 8.0 내지 9.0 ㎎/㎖의 농도로 상기 제형 내에 존재한다.

본 발명의 제형은 다른 종래의 약학적 담체, 부형제 또는 어주번트(adjuvant)를 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 제형은 안정화제(예컨대, EDTA 및/또는 나트륨 티오설페이트) 또는 보존제(예컨대, 벤질 알코올)를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 제형은 추가적인 약용 및/또는 약학적 제제를 포함할 수 있다. 예를 들면, CKD-MBD를 갖는 혈액투석 환자에서 SHPT를 치료하는 방법에서, AMG 416은 신장 골이영양증에서 SHPT에 대한 확립된 치료인 비타민 D 치료(예컨대, 파리칼시톨)와 같은 하나 이상의 활성 제제와 함께 동시투여될 수 있다.

한 구현예에서, 상기 제형은 약 2-8℃에서 1년 동안 보관될 때 5% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 실온에서 1년 동안 보관될 때 5% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 약 2-8℃에서 1년 동안 보관될 때 10% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 실온에서 1년 동안 보관될 때 10% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 약 2-8℃에서 2년 동안 보관될 때 5% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 실온에서 2년 동안 보관될 때 5% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 약 2-8℃에서 2년 동안 보관될 때 10% 이하로 분해된다. 다른 구현예에서, 상기 제형은 실온에서 2년 동안 보관될 때 10% 이하로 분해된다.

한 구현예에서, 상기 액체 제형은 0.1 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 치료 펩티드, 상기 제형을 2.0 내지 5.0의 pH로 유지하는 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 액체 제형은 1 ㎎/㎖ 내지 15 ㎎/㎖의 치료 펩티드, 상기 제형을 2.5 내지 4.5의 pH로 유지하는 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 액체 제형은 2.5 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 치료 펩티드, 상기 제형을 2.5 내지 4.0의 pH로 유지하는 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 액체 제형은 2.5 ㎎/㎖ 내지 5 ㎎/㎖의 치료 펩티드, 상기 제형을 2.5 내지 3.5의 pH로 유지하는 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 액체 제형은 수용액 내의 2 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 치료 펩티드, 상기 제형을 약 3.0 내지 3.5의 pH로 유지하는 숙시네이트 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다.

한 구현예에서, 상기 액체 제형은 0.1 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 AMG 416, 상기 제형을 2.0 내지 5.0의 pH로 유지하는 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 액체 제형은 1 ㎎/㎖ 내지 15 ㎎/㎖의 AMG 416, 상기 제형을 2.5 내지 4.5의 pH로 유지하는 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 액체 제형은 2.5 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 AMG 416, 상기 제형을 2.5 내지 4.0의 pH로 유지하는 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 액체 제형은 2.5 ㎎/㎖ 내지 5 ㎎/㎖의 AMG 416, 상기 제형을 2.5 내지 3.5의 pH로 유지하는 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 액체 제형은 수용액 내의 2 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 AMG 416, 상기 제형을 약 3.0 내지 3.5의 pH로 유지하는 숙시네이트 버퍼, 및 상기 제형이 대략 등장으로 제공되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 본 발명의 제형은 원하는 pH를 생성하도록 계산된 양의 버퍼를 적합한 용기에 두고, 이것을 주사용 물(WFI, water for injection)에 용해시키는 단계, 원하는 농도의 활성 성분(예컨대, AMG 416)을 달성하기에 충분한 양의 물질(예컨대, AMG 416의 염산염)을 첨가하는 단계, 결과물인 제형이 신체 유체와 등장이 되도록 계산된 양의 긴장성 변형제(또는 긴장성 변형제들의 혼합물)를 첨가하는 단계, 및 총 부피가 원하는 농도가 되도록 하기에 필요한 양의 WFI를 첨가하는 단계에 의해 제조된다. 상기 성분들이 혼합된 후, pH는 약 3.0 내지 약 3.5로 조정되고, 구성성분들이 다시 혼합된다.

원하는 pH 범위를 달성하기 위해 조정이 필요하다면, 상기 pH 값은 적합한 용액에 의해, 즉 pH 값의 감소가 필요하다면 산성 용액을 이용하고, pH 값의 증가가 필요하다면 알칼리성 용액을 이용하여 조정될 수 있다. 적합한 산성 용액의 비제한적인 예는, 예컨대 염산, 인산, 시트르산 및 인산수소나트륨 또는 칼륨이다. 적합한 알칼리성 용액의 비제한적인 예는 알칼리 및 알칼리 토 수산화물, 알칼리 카보네이트, 알칼리 아세테이트, 알칼리 시트레이트 및 디알칼리 인산수소, 예컨대 수산화나트륨, 나트륨 아세테이트, 나트륨 카보네이트, 나트륨 시트레이트, 인산수소 2나트륨 또는 2칼륨, 또는 암모니아이다.

상기 절차는 전형적으로 약 2-8℃ 내지 약 50℃의 온도 및 대기압에서 수행된다. 이후, 결과물인 제형은 사용 전에 보관을 위하여 단위 복용량 또는 다중-복용량 용기(예컨대, 병, 바이알, 앰풀 또는 사전충전된 주사기)로 전달된다.

상기 제형은 전술한 것과 같이 제조 및 투여될 수 있다. 다른 한편으로, 상기 제형은, 예를 들면, 수액 유체와 같은 담체 내에 또는 혈액투석 동안에(예컨대, 린스-백(rinse-back) 동안에) 환자에게 되돌려지는 혈액/유체 내에 (전술한 것과 같이 제조된) 제형을 용해, 분산, 등을 한 후에 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 액체 제형의 제조는 알려져 있거나, 본 기술분야의 기술자에게 자명할 것이며, 예를 들면 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 17th edition, 1985)을 참조.

실시예

수행된 실험 및 달성된 결과를 포함하는 다음의 실시예는 설명의 목적으로만 제공되며, 첨부된 청구항의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안된다.

실시예 1

숙시네이트 버퍼화 생리식염수에서의 AMG 416의 용해도

본 연구에서, 숙시네이트-버퍼화 생리식염수에서의 AMG 416의 용해도를 조사하였다. AMG 416 HCl(103 ㎎ 분말, 80 ㎎ 펩티드)을 200 ㎕의 나트륨 숙시네이트 버퍼화 생리식염수(25 mM 숙시네이트, 0.9% 생리식염수, pH 4.5)에 용해시켰다. 잠시 볼텍스(vortex)한 후, 400 ㎎/㎖의 명목 농도(nominal concentration)를 갖는 투명한 용액을 얻었다. 용액 부피의 팽창은 결정되지 않았기 때문에, AMG 416의 용해도는 보수적으로 적어도 200 ㎎/㎖인 것으로 말할 수 있다. 본 실험에서 최대 용해도는 결정되지 않았지만, AMG 416은 적어도 200 ㎎/㎖의 농도까지 pH 4.5의 숙시네이트 버퍼화 생리식염수에 용해가능하다.

실시예 2

농도 의존성 용해도 연구

본 연구에서, 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 4.5)에서의 농도 범위에 대한 AMG 416의 용해도를 조사하였다. 전술한 실시예 1의 200 ㎎/㎖의 AMG 416의 용액을 200 ㎕의 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 4.5)를 이용하여 200 ㎎/㎖의 명목 농도로 추가로 희석하였고, 이것을 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(pH 4.5)를 이용하여 66, 20, 6.7, 2.2 및 0.67 ㎎/㎖로 연속적으로 희석하였다. 샘플을 실온(즉, 약 25℃)에서 유지하였고, 분취량(aliquot)을 29일까지 간격을 두고 HPLC에 의해 분석하였다. 20 내지 0.67 ㎎/㎖의 농도 범위를 아우르는 2번째 시리즈의 AMG 416을 40℃에서 인큐베이션하였고, 동일한 방식으로 분석하였다.

실온 및 40℃에서 샘플에 대한 29일 시점에서의 순도는 각각 표 1 및 표 2에 제공된다. 그 결과는 AMG 416의 안정성 프로필(profile)을 농도 및 시간의 함수로서 제공한다.

실온에서 농도의 함수로서의 AMG 416 분해의 시간 경과는 도 1a에 나타나 있다. 도 1b에서, 20 ㎎/㎖ 이하의 약물 농도에서의 분해 패턴을 보다 명확하게 나타내기 위해 축척이 확대된다. 40℃에서 농도의 함수로서의 AMG 416 분해의 시간 경과는 도 2에 나타나 있다. 상기 데이터는 AMG 416 용액 안정성이 0.67 ㎎/㎖ 내지 200 ㎎/㎖의 연구 범위에서의 농도와 관련있음을 보여준다. 상기 데이터는 또한 AMG 416 용액 안정성이 인큐베이션의 온도와 관련있음을 보여준다.

표 3은 29일, pH 4.5 SBS에서의 실온 보관에서의 분해 정도에 기초하여 실온에서 다양한 농도의 AMG 416의 용액에 대한 분해의 정도를 예측한 것을 보여준다. 표 1로부터의 실온 29일 데이터는 선형 분해 동역학을 가정함으로써 정해진 기간에 대해 외삽하였다. 실온 데이터는 5℃에 대해 외삽하였다. 4배 낮은 분해 속도에 상응하는 20℃의 차이가 가정되었다. 아레니우스(Arrhenium) 방정식을 단순히 적용함으로써 외삽을 수행하였고, 이때 동일한 반응 메커니즘과 각각의 해당 반응에 대한 활성화 에너지가 50 kJ/㏖ 근방인 것을 가정하면 10℃의 온도 상승은 반응 속도의 2배 증가를 제공한다.

음영인 값은 액체 제형용으로 바람직할 수 있는 10% 이하의 분해를 갖는 농도/보관 조건을 나타낸다.

표 1 및 표 2에 나타낸 데이터를 비교하면 AMG 416 용액의 장기간 안정성을 예측하기 위한 도구로서 온도 증가의 평가를 허용한다. 0.67 내지 20 ㎎/㎖로부터의 데이터가 아래의 표 4에 제공되며, (위에서 개시된 가정을 이용하여) 아레니우스에 의해 예측되는 것보다 현저하게 더 높은 40℃에서 분해의 가속화를 보여준다. 이것은 가속화된 안정성 데이터가 실제 보관 온도에서 관찰되는 것보다 더 큰 분해 정도를 예측할 것임을 제시한다.

실시예 3

pH 범위에 대한 AMG 416의 액체 제형의 안정성

본 연구에서, 10 ㎎/㎖의 농도에서 AMG 416의 액체 제형의 안정성을 숙시네이트-버퍼화 생리식염수에서 pH 범위에 대해 결정하였다. AMG 416 HCl(257 ㎎ 분말)을 20 ㎖의 pH 4.5 숙시네이트 버퍼화 생리식염수에 용해시켜 10.0 ㎎/㎖ 펩티드 농도를 제공하였다(분말의 펩티드 함량에 대해 조정함). 상기 용액을 4 ㎖ 부분으로 균등하게 나누고, 필요시 NaOH 및 HCl을 이용하여 각각 pH 2, 3, 4, 5 및 6으로 조정하였다. 3개의 1 ㎖ 용액을 각각의 부분으로부터 분취하였고, 각각 2-8℃, 실온(약 25℃) 및 40℃에서 인큐베이션하였다. 각 분취물에서 남아있는 1 ㎖ 용액을 pH 4.5 숙시네이트 버퍼화 생리식염수를 이용하여 pH 조정된 4 ㎖의 2.5 ㎎/㎖ 펩티드 농도로 희석하였고, 동일한 방식으로 인큐베이션하였다. 샘플을 스케줄에 따라 회수(retrieve)하였고, HPLC 분석을 위하여 탈이온수로 1.0 ㎎/㎖로 희석하였다.

테스트된 모든 샘플에 대한 28일 시점에서의 순도는 표 5에 제공된다(주: 본 연구의 경우 출발 순도 값은 99.3% 였다). 그 결과는 pH, 온도 및 농도의 함수로서 안정성 프로필을 제공한다.

pH의 함수로서 AMG 416 분해의 시간 경과는 도 3에 나타나 있다. 10 ㎎/㎖(도 3a) 및 2.5 ㎎/㎖(도 3b) 용액 모두에서, pH 3에서 최소 분해가 관찰된다. 양쪽 용액 모두에서, pH 6에서의 분해는 가장 빨리 진행되고, 29일 시점까지 순도가 50%에 도달하였다. HPLC 분석은 pH 2에서의 주된 분해물이 pH 3 이상에서 관찰된 것과 상이함을 보여주었다. 더 낮은 pH에서 분해는 가수분해에 의한 탈아민화가 우세하고, 더 높은 pH에서 분해는 호모다이머의 형성이 우세하다.

28일 시점에서의 pH의 함수로서 안정성 프로필은 도 4에 나타나 있다. 본 실험 세트에서 가장 적은 분해의 pH는 대략 3.0이라는 것은 10 ㎎/㎖(도 4a) 및 2.5 ㎎/㎖(도 4b) 모두에서 다시 볼 수 있다. 또한, 순도에서의 감소는 모든 pH 레벨에서 온도와 연관되며, 가장 적은 분해는 2-8℃에서 인큐베이션된 샘플에서 관찰되고, 가장 많은 분해는 40℃에서 인큐베이션된 샘플에서 관찰된다.

28일에서의 분해의 정도에 기초하여, 분해 정도의 예측이 전술한 것과 같이 계산되었다. 10 ㎎/㎖ 용액에 대한 예측은 표 6에 제공되고, 2.5 ㎎/㎖에 대한 예측은 표 7에 제공된다. 음영인 값은 액체 제형용으로 바람직할 수 있는 110% 이하의 분해를 보여주는 조건을 나타낸다. 28일에 샘플이 처음 데이터보다 약간 더 높은 순도를 보이는 조건은 모든 예측에 대해서 0.0%로 제공되었다.

상기 외삽은 pH 3에서 2.5 또는 10 ㎎/㎖ 용액에 대해 실온에서 2년 후에 10% 이하의 분해를 제시한다. 일반적으로, 더 높은 온도 데이터는 더 낮은 온도 데이터보다 2년에서 더 큰 분해를 예측한다. 따라서, 10 ㎎/㎖ 연구(표 6)의 경우, 모든 온도 데이터로부터 pH 3이 10% 분해 이하일 것으로 예측되지만, 2-8℃ 데이터는 더 높은 온도보다 분해의 정도가 더 낮을 것으로 예측하고, 실제로 2-8℃에서 pH 4 데이터는 또한 10% 분해 이하를 지지한다. 유사하게, 2.5 ㎎/㎖에서, 2-4의 pH 범위는 2-8℃ 데이터로부터 외삽될 때 실온에서 2년에 걸쳐 10% 분해 이하를 갖는 것으로 예측된다.

표 8은 상기 표 4와 유사한 방식으로 상기 데이터에 대한 온도 가속화 효과를 제공한다. 이것은 다시 온도 상승은 아레니우스 원칙을 단순히 적용한 것에 기초한 외삽에 의해 예측되는 것보다 더 큰 분해 가속화를 제공하는 경향이 있음을 나타낸다.

각각의 pH 값에서, 각각의 3가지 실험에 대한 분해 데이터를 다른 2가지 온도로부터의 데이터와 비교하여 관찰된 가속화를 계산한다. 예측된 가속화는 전술한 것과 같은 아레니우스 원칙의 단순한 적용에 의한 것이다. 아래에 개시한 것과 같이, HPLC 분석은 약 3 이하의 pH에서의 우세한 분해 메커니즘이 약 3 이상의 pH에서 관찰된 것과 상이함을 보여준다.

실시예 4

안정성에 대한 긴장성화 부형제의 효과

본 연구에서, 액체 제형 내에서 AMG 416의 안정성에 대한 다양한 약학적 부형제의 효과를 결정하였다. 2× 등장 농도에서 10 ㎎/㎖의 AMG 416 용액 및 만니톨, 글리신, 아르기닌, NaCl 및 Na₂SO₄의 스톡(stock) 용액을 준비하였다. AMG 416 용액 및 5가지 부형제 용액 및 탈이온수의 pH를 HCl/NaOH를 이용하여 각각 pH 3.5로 조정하였다. 500 ㎕ 분취량의 각각의 5가지 용액을 유리 바이알에 넣었고, 500 ㎕의 AMG 416 용액을 동일한 바이알에 넣은 후 잘 혼합하였다. 이것을 3중으로 수행하여 각각 5 ㎎/㎖의 AMG 416 및 등장 농도의 부형제(또는 탈이온수)를 함유하는 18개의 샘플 바이알을 제공하였다. 이것을 pH 4.5로 조정한 용액의 세트로 반복하여 추가로 18개의 샘플 바이알을 제공하였다. 상기 샘플을 인큐베이션하였고, 해당 시점에서의 HPLC 분석을 위해 제거하였다.

56일 시점에서의 안정성 데이터는 표 9에 나타나 있다. 안정성 거동의 범위를 부형제의 함수로서 관찰하였다. 테스트된 대부분의 조건 하에서, NaCl 제형은 가장 적은 양의 분해를 보였다. 예외는 pH 3.5 및 4.5에서의 2-8℃ 데이터였다. 비록 아르기닌이 40℃ 샘플과 실온(약 25℃)의 pH 4.5 샘플에서 해로운 것으로 보이고, 나트륨 설페이트가 실온 및 40℃의 pH 4.5 샘플에서 해로운 것으로 보였지만, 다른 부형제의 경우에는 더 많은 변동성이 관찰되었다.

표 10은 상기 데이터를 실온 보관에서 2년까지로 외삽하며, 더 높은 온도에서의 보관은 일반적으로 아레니우스 원리를 단순히 적용함으로써 예상되는 것보다 더 빠른 분해를 예측한다는 점에서 상기에서 논의된 것과 유사한 경향이 보였다.

상기 데이터는 염화나트륨이 AMG 416 용액 제형을 위한 적합한 긴장성 변형제일 수 있음을 보여준다.

실시예 5

상이한 버퍼에서의 용액 안정성

본 연구에서, AMG 416의 액체 제형의 안정성을 4가지 상이한 버퍼에서 9일에 걸쳐서 평가하였다. 버퍼화 생리식염수 용액을 나트륨 염 형태의 아세테이트, 시트레이트, 락테이트 및 숙시네이트의 4가지 상이한 음이온성 버퍼에 대해 25 mM 농도, pH 4.5에서 준비하였다. AMG 416 HCl(분말)을 각각의 버퍼화 용액 내에 용해시켜 2.5 ㎎/㎖ 용액을 제공하였고, pH를 HCl/NaOH를 이용하여 4.5로 조정하였다. 상기 용액을 pH 4.5 버퍼를 이용하여 1.0 ㎎/㎖ 및 0.25 ㎎/㎖로 추가로 희석하였다. 각각의 결과물 용액을 2개의 유리 HPLC 바이알로 나누었으며, 하나는 2-8℃에 보관하고 하나는 실온(약 25℃)에 보관하였다. 0, 4 및 9일에 HPLC 분석을 수행하여 효능(potency) 및 순도를 결정하였다.

9일에 시트레이트 샘플의 경우 기준선(baseline) 변동으로 보일 수 있는 몇 개의 작은 피크가 나타난 것을 제외하고는 모든 시점에서 대부분의 샘플에서의 AMG 416의 순도는 100%였다. 테스트된 모든 버퍼에서, AMG 416은 9일의 연구 동안에 양호한 안정성을 보였다.

실시예 6

pH 2.25, 2.5, 3.0 및 3.5에서 버퍼화 용액에서의 안정성

본 연구에서, 낮은 pH 조건 하에서의 AMG 416의 액체 제형의 안정성을 조사하였다. 45 ㎖의 실험실 가공된(탈이온화된) 물에 59 ㎎의 숙신산을 용해시키고, 필요시 1 N HCl 및 1 N NaOH를 이용하여 pH를 3.5로 조정함으로써 50 ㎖의 숙시네이트-버퍼화 생리식염수(10 mM, pH 3.5)를 준비하였다. 동일한 방식으로, 10 mM, pH 3.5의 나트륨 아세테이트(56 ㎎/50 ㎖) 버퍼 용액을 준비하였다.

AMG 416 HCl(128 ㎎ 분말)을 20 ㎖의 숙시네이트 버퍼에 용해시켜 5 ㎎/㎖의 AMG 416 용액을 제공하였고, 이를 2개의 동일한 10 ㎖ 부분으로 나누었다. NaCl(90 ㎎)을 한 부분에 첨가하였고, 만니톨(500 ㎎)을 다른 부분에 첨가하였다. 각각의 10 ㎖ 부분을 다시 2개의 동일한 5 ㎖ 부분으로 나누었고, 1 N HCl 및 1 N NaOH를 이용하여 pH를 각각 2.25 및 3.5로 조정하였다. 동일한 방식으로, 락테이트 버퍼를 이용하여 4개의 5 ㎖ 용액을 준비하였다. 1.0 ㎖의 각각의 (8개의) 결과물 용액을 3개의 혈청 샘플 바이알에 넣었다. 또한, NaCl을 함유하는 남아있는 pH 2.25, 숙시네이트-버퍼화 AMG 416 용액을 pH 2.5로 조정하였고, 0.5 ㎖의 분취량을 3개의 혈청 샘플 바이알에 넣었으며, NaCl을 함유하는 남아있는 pH 3.5 숙시네이트 버퍼화 용액을 pH 3.0으로 조정하였고, 0.5 ㎖의 분취량을 3개의 혈청 샘플 바이알에 넣었다. 표 11 참조.

각각의 시점(0, 2, 8, 12 및 24주)에서 모든 30개 샘플을 보관으로부터 회수하였고, 실온(약 25℃)으로 평형시켰으며, RP-HPLC 분석을 위해 100 ㎕의 분취량을 물을 이용하여 0.5 ㎎/㎖으로 희석하였다. 남아있는 샘플을 재밀봉하였고, 이들의 해당 보관 조건으로 되돌렸다.

본 연구에 대한 대표적인 HPLC 데이터는 도 5 및 도 6에 나타나 있다. 도 5에 나타낸 HPLC 트레이스는 40℃에서 67일 동안 보관된 pH 2.25 샘플이다(5 ㎎/㎖, 87.8% 순도). 도 5b는 불순물을 확인하기 위한 상이한 축척을 보여준다. 도 6은 다른 것은 동일한 제형(pH 3.5, 40℃, 5 ㎎/㎖, 67일, 91.7% 순도)에 대해 pH를 3.5로 증가시킨 효과를 보여준다. 도 6b는 불순물을 확인하기 위한 상이한 축척을 보여준다. 이전의 연구와 마찬가지로, pH가 변할 때 분해물 프로필에서의 주목할만한 변화가 보인다.

시간의 함수로서 AMG 416의 순도는 표 12에 제공된다(10 mM 버퍼 농도: L=락테이트; S=숙시네이트. 긴장성 변형제: N=0.9% NaCl; M=5% 만니톨). 사용된 로트(lot)는 0일의 시간에서 3.4%의 다이머를 함유하였음을 주목해야 한다. 샘플 26에 대한 14일 시점은 샘플 준비에서의 오류로 인해 생략되었다.

선택된 데이터의 경향은 도 7 내지 도 9에 그래프 형태로 제공된다.

도 7은 냉장 조건(2-8℃) 하에 pH의 함수로서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수에서의 AMG 416(5 ㎎/㎖)의 용액 안정성을 제공한다. 도 8은 실온에서 보관 후에 pH의 함수로서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수에서의 AMG 416(5 ㎎/㎖)의 용액 안정성을 제공한다. 도 9는 40℃에서 보관 후에 pH의 함수로서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수에서의 AMG 416(5 ㎎/㎖)의 용액 안정성을 제공한다.

가장 늦은 시점에서의 분해 프로필은 표 13에 제공되며, 2개의 주된 분해물(C-말단 탈아민화 및 호모다이머 형성) 출현의 시간 경과는 표 14 및 표 15에 나타나 있다. 도 10 및 도 11은 선택된 제형(pH 조건의 완전한 세트가 이용가능한 제형, 즉 NaCl 및 숙시네이트를 함유하는 제형이며, 락테이트 또는 만니톨을 함유하는 제형은 아님)에 대한 pH의 함수로서 상기 개별 생성물(각각 C-말단 탈아민화 및 호모다이머 형성)에 대한 분해의 시간 경과를 제공한다.

도 10은 더 높은 pH 보다 pH 2.25에서 상기 경로에 의해 현저하게 더 큰 분해로 탈아민화에 대한 명확한 pH 의존성 및 pH와 탈아민화 사이의 직접적인 상관관계를 나타낸다. 이와 대조적으로, 도 11에 제공된 호모다이머 형성은 pH 및 분해의 정도 사이에 반대의 상관관계를 보여준다. 이러한 반대되는 경향은 도 7 내지 도 9에 제공된 전체적인 안정성 데이터의 기저를 이루며, 상기 세트의 실험에서 AMG 416 용액에 대한 최대 안정성은 3.00.5의 pH에서 관찰되었다.

안정성 및 부형제 조성물 사이의 연관성은 덜 명확하다. 버퍼의 선택(숙시네이트 대 락테이트)과 관련하여, 표 12 내지 표 14의 데이터에 대한 검토는 pH 2.25 또는 3.5에서 임의의 주된 분해물과 관련하여 양쪽 버퍼에 대한 우세함의 명확한 패턴을 보이지 않는다. 숙시네이트 버퍼를 이용한 모든 샘플은 시점 0일에서 호모다이머 피크가 더 많이 포함됨으로 인해 대응하는 락테이트-버퍼화 샘플보다 낮은 순도를 보여주었다. 이것에 대한 이유는 불명확하지만, 버퍼의 함수로서 모체(parent) 및 다이머에 대한 상대적인 흡광도에서의 변화를 나타낼 수 있다. 그러나, 전술한 것과 같이, 이후의 인큐베이션은 양쪽 버퍼의 존재시에 본질적으로 동일한 분해 속도를 제공한다. 긴장성 변형제(NaCl 또는 만니톨)의 선택과 관련하여, 염화나트륨은 pH 2.25에서 탈아민화의 속도를 향상시키는 것으로 보인다(표 13, 25℃에서 샘플 9-12, 및 특히 40℃에서 샘플 17-20 참조). 그러나, NaCl은 (만니톨과 비교하여) pH 3.5에서 호모다이머로의 분해를 억제하는 것으로 보인다(표 14, 25℃에서 샘플 13-16 및 특히 40℃에서 샘플 21-24).

(10 mM 버퍼 농도: L=락테이트; S=숙시네이트. 긴장성 변형제: N=0.9% NaCl; M=5% 만니톨). 다이머 %에 대한 값은 출발 값을 뺀 후의 분해물에서의 증가를 반영한다.

(10 mM 버퍼 농도: L=락테이트; S=숙시네이트. 긴장성 변형제: N=0.9% NaCl; M=5% 만니톨).

상기 세트의 실험에서 AMG 416 용액에 대한 최대 안정성은 3.0±0.5의 pH에서 관찰되었다. pH 2.5 및 3.5에서의 총 분해 속도는 유사하지만, 분해물 프로필은 상이하다. pH 2.25에서의 안정성은 더 큰 함량의 탈아민화가 관찰됨으로 인해 더 낮다. 안정성 프로필에 대해 부형제의 일부 효과가 관찰될 수 있지만, pH 3.0에서 제형화될 때, 상기 데이터는 연구된 부형제 시스템 중에서의 전체적인 우세함을 나타내지는 않는다.

(10 mM 버퍼 농도: L=락테이트; S=숙시네이트. 긴장성 변형제: N=0.9% NaCl; M=5% 만니톨). 실험을 위해 사용된 API가 감지가능한 함량의 다이머를 함유하였기 때문에, 분해는 다이머 함량에서의 증가(총 다이머가 아님)로 표현됨을 주목해야 한다.

상기 세트의 실험에서의 AMG 416 용액에 대한 최대 안정성은 3.0±0.5의 pH에서 관찰되었다. pH 2.5 또는 3.5에서 제형화된 용액의 분석은 상이한 분해 프로필을 보여주며, C-말단 아미드 가수분해는 낮은 pH에서 가장 큰 분해물이지만, 호모다이머 형성은 더 높은 pH에서 더 컸다. pH 3.0에서의 액체 제형은 냉장 조건 하에 2년에 걸쳐 2-4%의 총 분해를 예측하였다.

실시예 7

견고성(robustness) 연구

본 연구에서, 다양한 제조 및 분석 조건 하에서의 AMG 416의 액체 제형의 안정성을 조사하였다. 각각 상이한 조합의 pH(2.7, 3.3 또는 3.9), 펩티드 농도(4, 5, 또는 6 ㎎/㎖) 및 염 농도(0.7, 0.85 또는 1.0%)를 갖는 14개의 제형 테스트 군을 준비하였다. 각각의 제형의 오스몰농도(osmolality)를 동일하게(숙시네이트 10 mM) 유지하였다. 표 16 참조.

제형 테스트 군의 각각의 샘플(2.1 ㎖)을 3 ㎖의 Type 1B 유리 바이알(Schott, Germany)로 분배 및 밀봉하였다(고무 스토퍼). 바이알의 세트를 4℃, 25℃ 또는 40℃의 온도에서 3개월 동안 세워서 보관하였다. pH, 오스몰농도, AMG 416 및 분해물의 백분율을 3개월에 걸쳐 평가하였다.

3가지 인자(pH, % 펩티드 및 % NaCl)에 의해 정의된 시간-의존성 반응 표면을 각각의 HPLC 반응에 대해 각각의 온도(JMP® 통계 발견 소프트웨어, SAS)에서 이러한 표면을 데이터에 개해 설명하는 통계적 모델에 일치시킴으로써 평가하였다. 몬테 카를로 시뮬레이션을 사용하여 예측된 HPLC 반응의 분포를 세팅된 포인트(pH=3.3, 펩티드=5% 및 NaCl=8.5%)에서 상기 세팅 포인트 및 무작위 노이즈(noise) 주변의 인자들의 무작위 변동의 함수로서 생성하였다.

시간에 따라 pH 및 오스몰농도에서의 유의미한 변화는 관찰되지 않았다. 4℃ 및 25℃에서, 연구의 전체 길이에 걸쳐서 순도는 92% 또는 그 이상으로 남아있었고, 탈아민화는 4% 또는 그 이하였으며, 호모다이머 형성은 4% 또는 그 이하였다. 40℃에서, 순도, 탈아민화 및 호모다이머 형성은 1개월에 시작하는 것으로 보였다. 그러나, 탈아민화 및 호모다이머 형성은 3.3 근방으로 pH 범위가 좁아질 때 감소하였는데, 이는 pH가 상기 분해물들의 형성에 현저한 영향을 갖는 것을 나타낸다.

상기 데이터에 기초하여, 2.8 내지 3.8의 pH 범위에 걸쳐 순도 프로필의 예측을 제공하는 것이 가능하다. 도 12에 나타낸 것과 같이, 각각의 온도에서의 순도는 pH에 강하게 의존하며, 테스트된 범위 내에서 펩티드 농도 및 NaCl에 덜 의존적이다. 냉장 조건 하에서, pH의 효과는 pH 3.3 이상의 값에서 덜 현저하였지만, 실온(약 25℃)에서, 더 높은 pH 값은 더 빠른 분해와 연관된다. 치료적 용도를 위한 제형은 냉장 조건 하에 장기간의 보관을 위한 대상일 수 있다. 또한, 제조, 포장, 라벨링 및 임상적 이용 동안에 더 높은 온도에 제형을 잠재적으로 노출하는 것에 대한 고려가 있어야 한다. 따라서, 상기 세트의 실험에서, 2.8 내지 3.8(3.3±0.5)의 테스드된 범위에서의 pH 값이 AMG 416 제형에 대해 적합할 것임이 관찰되었다.

실시예 8

pH의 범위에 걸친 AMG 416의 액체 제형의 장기간 안정성

본 연구에서, 3.4 ㎎/㎖의 농도에서 숙시네이트-버퍼화 생리식염수 내에서 pH의 범위에 걸친 AMG 416의 액체 제형의 장기간 안정성을 결정하였다. USP 정제된 물(1,200 ㎖)을 유리 비커 내로 분배하였다. 나트륨 숙시네이트(4.05 g) 및 염화나트륨(13.5 g)을 넣고 교반해 용해시켰다. 필요시 1 N NaOH 및/또는 1 N HCl을 이용하여 pH를 2.5로 조정하였다. AMG 416 HCl(5.5 g 분말 중량)을 첨가하였고, 교반해 용해시켰으며, 정제된 물로 1,500 ㎖로 하여 3.4 ㎎/㎖ 용액(AMG 416)을 제공하였다. 상기 용액을 3개의 부분으로 나누었고, 각각의 부분에 대한 pH를 각각 2.5, 3.0 및 3.5로 조정하였다. 각각의 용액을 0.22 ㎛ PVDF 필터를 통해 별도로 여과하였고, 5 cc 바이알에 2 ㎖을 분배하였다. 중지, 밀봉 및 라벨링된 후, 상기 바이알을 5℃±3, 25℃±2 및 40℃±2에서 표시된 안정성 챔버에 두었다. 샘플을 스케줄에 따라 회수하였고, HPLC 분석을 위해 탈이온수를 이용해 1.0 ㎎/㎖로 희석하였다. 0, 1, 2, 3, 5, 12 및 24개월에서의 순도는 표 17에 제공된다(주: 본 연구에 대한 출발 순도 값은 99.2%였다). 그 결과는 pH 및 온도의 함수로서 3.4 ㎎/㎖의 AMG 416의 액체 제형의 장기간 안정성 프로필을 제공한다.

각각의 pH 레벨에서 AMG 416 액체 제형 순도의 시간 경과는 도 13에 나타나 있다. 모든 온도에서, 가장 큰 순도는 pH 3.5에서 관찰되었고, 가장 큰 분해는 pH 2.5에서 관찰되었다. 또한, 모든 온도에서, pH 3.0 및 pH 3.5에서의 순도는 pH 2.5에서의 순도보다 현저하게 더 컸다. 따라서, 예를 들면, 냉장 샘플의 경우, 24개월에서의 순도는 pH 3.5 및 3.0에서의 용액에 대해 각각 98.3 및 97.7이었지만, pH 2.5에서의 용액에 대해서는 단지 94.8이었다. 또한, 순도의 감소는 모든 pH 레벨에서 온도와 연관이 있는 것으로 보였으며, 2-8℃에서 인큐베이션된 샘플에서 가장 적은 분해가 관찰되었고, 40℃에서 인큐베이션된 샘플에서 가장 큰 분해가 관찰되었다. pH 2.5에서 관찰된 주된 분해물은 탈아민화된 생성물이었고, pH 3.5에서는 호모다이머가 관찰되었다.

상기 데이터는 전술한 제형이 냉장 조건 하에 적어도 2년의 보관기간에 걸쳐 AMG 416의 적절한 안정성을 유지할 수 있음을 확인한다. 관찰된 분해는 모든 경우에 선형이었고, 초기 실험으로부터의 데이터 외삽에 기초한 결론을 지지한다. 상기 데이터로부터, 최적의 pH는 상이한 분해 경로 사이의 균형에 기초하여 3.0 및 3.5 사이에 있다.

본 명세서에서 인용된 모든 문헌, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 문헌 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 인용에 의해 포함된 것임을 나타내는 것처럼 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 전술한 발명은 이해의 명확성을 위한 목적으로 예시 및 실시예의 방식에 의해 일부 상세하게 개시되어 있지만, 첨부된 청구항의 정신 또는 범위를 벗어나지 않으면서 여기에 일부 변화 및 변형이 수행될 수 있음은 본 발명에 개시된 내용에 비추어 본 기술분야의 기술자에게 즉시 자명할 것이다.

Claims

수용액에서 에텔칼세타이드(AMG 416)를 포함하는 약학적 제형으로서, 2.0 내지 5.0의 pH를 갖고, 상기 pH는 약학적으로 허용가능한 버퍼에 의해 유지되는 제형.
청구항 1에 있어서,
상기 제형은 2.5 내지 4.5의 pH를 갖는 제형.
청구항 1에 있어서,
상기 제형은 2.5 내지 4.0의 pH를 갖는 제형.
청구항 1에 있어서,
상기 제형은 3.0 내지 3.5의 pH를 갖는 제형.
삭제
청구항 1에 있어서,
상기 버퍼는 숙시네이트인 제형.
청구항 1에 있어서,
상기 AMG 416은 0.1 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 농도로 상기 제형 내에 존재하는 제형.
청구항 1에 있어서,
상기 AMG 416은 1 ㎎/㎖ 내지 15 ㎎/㎖의 농도로 상기 제형 내에 존재하는 제형.
청구항 1에 있어서,
상기 AMG 416은 2.5 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 농도로 상기 제형 내에 존재하는 제형.
청구항 1에 있어서,
약학적으로 허용가능한 긴장성 변형제를 추가로 포함하는 제형.
청구항 10에 있어서,
상기 긴장성 변형제는 상기 제형이 등장이 되기에 충분한 농도로 상기 제형 내에 존재하는 제형.
청구항 10에 있어서,
상기 긴장성 변형제는 NaCl인 제형.
청구항 1에 있어서,
상기 제형은 2-8℃에서 2년 동안 보관될 때 에텔칼세타이드(AMG 416)가 10% 이하로 분해되는 제형.
청구항 1에 있어서,
상기 제형은 실온에서 2년 동안 보관될 때 에텔칼세타이드(AMG 416)가 10% 이하로 분해되는 제형.
수용액 내에서 2 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖의 에텔칼세타이드(AMG 416), 3.0 내지 3.5의 pH에서 제형을 유지하는 숙시네이트 버퍼, 및 제형이 등장이 되도록 하기에 충분한 농도의 염화나트륨을 포함하는 제형.