BR112021005858A2 - formulações de análogos de peptídeo semelhante a glucagon 2 (glp-2) - Google Patents

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Abstract

FORMULAÇÕES DE ANÁLOGOS DE PEPTÍDEO SEMELHANTE A GLUCAGON 2 (GLP-2). A presente invenção se refere a formulações líquidas de análogos de GLP-2 que tornam os mesmos adequados para armazenamento de longo prazo como líquidos e/ou que tornam os mesmos especialmente adequados para liberação por um dispositivo de liberação de fármaco são descritas. As composições sólidas que compreendem sais de acetato de análogos de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) usadas para fazer as formulações líquidas também são descritas. O desenvolvimento destas formulações líquidas é com base na descoberta de que o acetato presente na formulação que origina a partir dos análogos de GLP-2 tem um efeito na viscosidade da formulação, em que, durante o armazenamento de longo prazo em 2-8 °C dos análogos de GLP-2, a dependência da concentração para formação de oligômero covalente é inversamente dependente da concentração crescente do análogo de GLP-2, e em que os análogos de GLP-2 usados nas formulações não são compatíveis com o tampão de fosfato comumente usado na tecnologia anterior para composições de GLP-2 em pó ou liofilizadas reconstituídas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “FORMULAÇÕES DE ANÁLOGOS DE PEPTÍDEO SEMELHANTE A GLUCAGON-2 (GLP-2)”
CAMPO DA TÉCNICA
[001] A presente invenção se refere a formulações de análogos de peptídeo semelhante a glucagon-2 (GLP-2) e seu uso médico, por exemplo, no tratamento e/ou na prevenção de disfunções relacionadas ao estômago e ao intestino e para melhorar os efeitos colaterais da quimioterapia e da radioterapia. Além do mais, as composições sólidas que compreendem os sais de acetato dos análogos de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) usadas para fazer as formulações líquidas também são descritas.
ANTECEDENTES DA TÉCNICA
[002] O GLP-2 humano é um peptídeo de 33 aminoácidos com a seguinte sequência: Hy-His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-OH. O mesmo é derivado a partir do processamento pós-traducional específico do proglucagon nas células L enteroendócrinas do intestino e em regiões específicas do tronco cerebral. O GLP-2 se liga a um único receptor acoplado à proteína G que pertence à família glucagon secretina classe II.
[003] O GLP-2 foi relatado para induzir significativo crescimento do epitélio mucosal do intestino delgado por meio do estímulo da proliferação de célula-tronco nas criptas, e pela inibição da apoptose nas vilosidades (Drucker et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 7911-7916). O GLP-2 também tem efeitos de crescimento no cólon. Além do mais, o GLP-2 inibe o esvaziamento gástrico e a secreção do ácido gástrico (Wojdemann et al., 1999, J. Clin. Endocrinol. Metab. 84: 2513-2517), intensifica função da barreira intestinal (Benjamin et al., 2000, Gut 47: 112-119), estimula o transporte da hexose intestinal por meio da regulação positiva dos transportadores de glicose (Cheeseman, 1997, Am. J. Physiol. R1965-71), e aumenta o fluxo sanguíneo intestinal (Guan et al., 2003, Gastroenterology, 125: 136-147).
[004] Foi reconhecido na tecnologia que os análogos do receptor de peptídeo semelhante a glucagon-2 têm potencial terapêutico para o tratamento de doenças intestinais. Entretanto, o hGLP-2 nativo, um peptídeo gastrointestinal de 33 aminoácidos, não é útil em um ambiente clínico devido a sua meia-vida muito curta em seres humanos de cerca de 7 minutos para o GLP-2 de comprimento completo [1- 33] e 27 minutos para o GLP-2 truncado [3-33]. Em grande parte, a curta meia-vida é devida à degradação pela enzima dipeptidilpeptidase IV (DPP-IV). Desta maneira, houve tentativas na tecnologia de desenvolver os agonistas do receptor de GLP-2 com melhores características farmacocinéticas, em particular, de melhorar a meia-vida das moléculas de GLP-2. A título de exemplo, os análogos de GLP-2 com substituições foram sugeridos, tais como, por exemplo, os análogos de GLP-2 que contêm substituição de Gly na posição 2 ([hGly2] GLP-2, teduglutide) que aumentam a meia- vida de sete minutos (GLP-2 nativo) até cerca de duas horas. A acilação dos fármacos de peptídeo com cadeias de ácido graxo também se provou benéfica para prolongar a circulação sistêmica, bem como aumentar a estabilidade enzimática sem perturbar a potência biológica. Entretanto, embora estas tentativas tenham melhorado a farmacocinética dos análogos de GLP-2, e os mesmos sejam algumas vezes descritos na tecnologia como "de longa ação", deve ser mantido em mente que isto é em comparação com o hGLP-2 nativo com meias-vidas da ordem de diversas horas, em vez de minutos. Isto, por sua vez, significa que os análogos de GLP-2 ainda precisam ser administrados nos pacientes uma ou mais vezes por dia.
[005] A US 5.789.379 revela os análogos de GLP-2 para administração por injeção. Os análogos foram providos como peptídeos em pó e misturados com salino tamponado com fosfato (PBS) antes da injeção em pH de 7,3-7,4 com uma concentração de GLP-2 de 130 mg/mL. Em algumas instâncias, a composição de GLP-2/PBS foi misturada com gelatina para prover uma liberação lenta formado a partir de uma solução de 130 mg/L de GLP-2 em PBS/15 % gelatina. A US 5.789.379 não revela as formulações líquidas aquosas estáveis dos análogos de GLP-2 e os análogos de GLP-2 são, no geral, reconstituídos a partir de pó antes da injeção.
[006] Em WO 97/39031 e US 6.184.201, o análogo de GLP-2, [Gly2]GLP-2 é revelado. Aqui, a alanina na posição 2 foi substituída com glicina para tornar o peptídeo resistente à clivagem DPP IV. Como com US 5.789.379, o análogo de GLP- 2 foi provido como um peptídeo em pó e misturado com salino, PBS ou 5 % dextrose antes da injeção, opcionalmente, adicionando ácido acético como um intensificador de solubilidade.
[007] WO 02/066511 descreve os análogos de GLP-2 que têm uma meia-vida estendido in vivo e seus usos como medicamentos no tratamento de disfunções gastrointestinais, tais como doenças do intestino inflamatório. Os análogos de GLP-2 foram armazenados em forma liofilizada e reconstituídos para administração em meio, por exemplo, usando salino ou PBS.
[008] WO 01/41779 descreve o uso de h[Gly2]GLP-2 como um pré-tratamento para inibir a apoptose induzida por quimioterapia e promover a sobrevivência celular. O h[Gly2]GLP-2 é liberado por injeção ou infusão subcutânea ou intravenosa depois de reconstituir o análogo em PBS.
[009] WO 2001/049314 é direcionado para as formulações de peptídeos GLP-2 e análogos dos mesmos que exigem estabilidade superior seguinte ao armazenamento e/ou à exposição a temperaturas elevadas. As composições de GLP- 2 compreendem um peptídeo GLP-2 ou um análogo do mesmo, um tampão de fosfato, L-histidina, e manitol.
[010] WO 2006/117565 descreve os análogos de GLP-2 que compreendem uma de mais substituições, se comparados com [hGly2]GLP-2, e que melhoraram a atividade biológica in vivo e/ou melhoraram a estabilidade química, por exemplo, avaliadas em ensaios de estabilidade in vitro. Em particular, são descritos os análogos de GLP-2 que têm substituições em uma ou mais das posições 8, 16, 24 e/ou 28 da sequência GLP-2 tipo selvagem, opcionalmente, em combinação com as substituições adicionais na posição 2 e uma ou mais das posições 3, 5, 7, 10 e 11, e/ou uma deleção de um ou mais dos aminoácidos 31 a 33. Estas substituições também podem ser combinadas com a adição de um N-terminal ou um C-terminal que estabilizam a sequência de peptídeo. A administração diária ou duas vezes ao dia destes análogos de GLP-2 também é descrita. Entre as moléculas reveladas em WO 2006/117565 está glepaglutida (ZP1848) que foi desenhada para ficar estável em formulações líquidas, e é tipicamente administrada por dosagem diária usando uma caneta de injeção.
[011] Permanece um problema nesta área para melhorar a formulação dos análogos de GLP-2, em particular, para prover formulações líquidas estáveis que são capazes de armazenamento de longo prazo sem que níveis indevidos de degradação física ou química da forma monomérica ativa do peptídeo ocorram. Em formulações líquidas dos fármacos de peptídeo, as vias químicas que podem operar incluem a formação de dímeros e oligômeros covalentemente ligados do peptídeo, reduzindo a quantidade da forma monomérica ativa do peptídeo através da formação destes produtos oligoméricos de alto peso molecular covalentemente ligados. A lei de ação das massas significa que é normalmente o caso em que, quanto mais alta a concentração de um fármaco de peptídeo em uma formulação, mais alta a probabilidade da formação de produtos oligoméricos covalentemente ligados.
[012] Também seria um objetivo na área da formulação do análogo de GLP-2 prover as formulações nas quais a viscosidade da formulação é controlada em uma faixa que que torna a mesma adequada para uso em dispositivos de liberação, tais como seringas pré-carregadas, bombas de infusão, injetores vestíveis ou autoinjetores.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[013] Amplamente, a presente invenção é com base em estudos relatados nos exemplos que levaram a surpreendentes descobertas em relação às formulações líquidas de análogos de GLP-2 que tornam as mesmas adequadas para armazenamento de longo prazo como líquidos e/ou que torna as mesmas especialmente adequadas para liberação por um dispositivo de liberação de fármaco.
[014] Em um primeiro estudo, os inventores descobriram que o acetato presente na formulação que origina a partir dos análogos de GLP-2 tem um efeito na viscosidade da formulação. Isto abre a possibilidade de controlar a viscosidade da formulação pela mudança e/ou pelo controle da concentração de acetato. Uma formulação líquida com baixa faixa de viscosidade é clinicamente útil, já que a mesma provê vantagens no desenvolvimento e na manufatura do dispositivo de liberação de fármaco pela potencial redução da ruptura, da falha de dosagem, da imprecisão de dosagem e outras deficiências durante a fabricação do produto do fármaco e/ou o uso pelo paciente. Além do mais, a baixa viscosidade pode permitir uma injeção mais rápida e/ou o uso de agulhas de furo mais estreito (isto é, calibre maior) p que, por sua vez, pode reduzir o desconforto da injeção. Isto abre a possibilidade de prover as formulações do análogo de GLP-2 na forma de um dispositivo de liberação de fármaco, tais como uma seringa pré-carregada, um autoinjetor de dose ajustável, um autoinjetor descartável, um injetor vestível ou uma bomba de infusão, desse modo, provendo aos pacientes uma formulação pronta para uso em um dispositivo mais simples, mais seguro e mais amigável ao paciente. O controle da formulação em relação à viscosidade mais alta pode ser adequado em outros dispositivos de liberação de fármaco.
[015] Em um segundo estudo, os presentes inventores descobriram que, durante o armazenamento de longo prazo em 2-8 °C de ZP1848 (glepaglutida), a formação de oligômeros covalentemente ligados é dependente da concentração. Entretanto, ao contrário da situação usual em que a lei de ação das massas implica que a formação de oligômero covalente aumenta com a concentração crescente de um fármaco de peptídeo, os presentes inventores descobriram que a dependência da concentração para formação do oligômero é inversamente dependente da concentração crescente do análogo de GLP-2. Sem desejar estar ligado a nenhuma teoria em particular, os presentes inventores acreditam que a redução na formação de oligômeros covalentemente ligados à medida que o análogo de concentração de GLP-2 aumenta é um resultado da cauda de lisina do análogo de GLP-2 promover a formação das montagens estruturais autoassociadas do peptídeo nativo que prejudica a formação de oligômeros covalentemente ligados na formulação. Isto significa que as espécies fracamente autoassociadas são capazes de dissociar para liberar o monômero biologicamente ativo depois da administração em um paciente, em vez de causar uma perda de espécies ativas como ocorre quando os oligômeros covalentemente ligados forem formados.
[016] Em um terceiro estudo, os presentes inventores descobriram que os análogos de GLP-2 usados nas formulações da presente invenção não são compatíveis com o tampão de fosfato comumente usado na tecnologia anterior para as composições de GLP-2 em pó ou liofilizadas reconstituídas. Este estudo descobriu que apenas alguns tampões são compatíveis com a formulação destes análogos de GLP-2, de maneira tal que os mesmos fossem adequados para armazenamento de longo prazo em forma líquida.
[017] Desta maneira, em um primeiro aspecto, a presente invenção provê uma formulação farmacêutica líquida estável, a formulação compreendendo um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila; X5 é Ser ou Thr; X11 é Ala ou Ser; R2 é NH2 ou OH; e Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em que a formulação compreende: (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina,
um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4.
[018] Em algumas modalidades, a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados. Alternativamente ou adicionalmente, a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP-2 na formulação é menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2. Alternativamente ou adicionalmente, a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 é inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
[019] Os componentes da formulação e suas quantidades proveem uma formulação com pelo menos 90 % de conteúdo do análogo de GLP-2 e com menos do que 10 % de produtos de degradação química em armazenamento por pelo menos 18 meses em 2-8 ºC.
[020] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê um artigo de fabricação ou um kit que compreendem um contêiner que mantém a formulação farmacêutica estável da presente invenção.
[021] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê um dispositivo de liberação que contém uma formulação líquida que compreende um análogo de GLP- 2 da presente invenção.
[022] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê uma formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) da presente invenção para uso em terapia.
[023] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê uma formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) da presente invenção para uso em um método para o tratamento e/ou a prevenção de uma disfunção relacionada ao estômago e ao intestino em um paciente humano.
[024] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê um processo para produzir uma formulação farmacêutica líquida estável que compreende um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em que o processo compreende formular (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, (b) com um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) com um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose, o modificador de tonicidade não iônico estando presente em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) com arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4;
em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados.
[025] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê o uso de uma formulação que compreende um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP- 2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; para prover uma formulação farmacêutica líquida que fica estável por 24 meses quando armazenada em 2-8 ºC, em que a formulação compreende: (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4.
[026] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê um método para modular a viscosidade de uma formulação farmacêutica líquida estável que compreende um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em que o método compreende formular (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, (b) com um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris ou um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) com um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose, o modificador de tonicidade não iônico estando presente em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) com arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP2 na formulação é menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2 e em que a formulação tem uma viscosidade mais alta do que 0,8 e mais baixa do que ou igual a 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
[027] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê um método para reduzir a formação de produtos oligoméricos covalentemente ligados de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) em uma formulação farmacêutica líquida estável que compreende um análogo de GLP-2 representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em que o método compreende formular (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, (b) com um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris ou um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) com um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose, o modificador de tonicidade não iônico estando presente em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) com arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados. Em alguns casos, neste aspecto da presente invenção, a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 é inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
[028] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê o uso de uma formulação para reduzir a formação de produtos oligoméricos covalentemente ligados de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em uma formulação farmacêutica líquida que fica estável por 24 meses quando armazenada em 2-8 ºC, em que a formulação compreende: (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados. Em alguns casos, neste aspecto da presente invenção, a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 é inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
[029] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê o uso de uma formulação para modular a viscosidade de uma formulação farmacêutica líquida que compreende um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em uma formulação farmacêutica líquida que fica estável por 24 meses quando armazenada em 2-8 ºC, em que a formulação compreende: (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP2 na formulação é menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2 e a formulação tem uma viscosidade entre 0,8 e 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
[030] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê uma composição sólida que compreende um sal de acetato de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) que tem a fórmula: (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH3COOH) em que x é 1,0 até 8,0.
[031] Em um aspecto adicional, a presente invenção provê uma formulação farmacêutica aquosa estável, a formulação compreendendo (a) a composição sólida da presente invenção em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados e em que a formulação tem uma viscosidade entre 0,8 e 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
[032] Em todos os aspectos da invenção aqui descrita, o tampão pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato e um tampão de acetato.
[033] Em todos os aspectos da invenção aqui descrita, o modificador de tonicidade não iônico pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol e sorbitol.
[034] Em algumas modalidades, a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados. Alternativamente ou adicionalmente, a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP-2 na formulação é menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2. Alternativamente ou adicionalmente, a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 é inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
[035] Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a uma formulação farmacêutica líquida estável, a formulação compreendendo um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila; X5 é Ser ou Thr;
X11 é Ala ou Ser; R2 é NH2 ou OH; e Z2 é uma sequência de peptídeo de 6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo.
[036] Neste aspecto da presente invenção, as formulações que compreendem o análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), ou os sais das mesmas, podem ser usados para o tratamento e/ou a prevenção de disfunções relacionadas ao estômago e ao intestino, tais como úlceras, disfunções da digestão, síndromes da má absorção, síndrome do intestino curto, síndrome fundo de saco, doença do intestino inflamatório, esprú celíaco (por exemplo, que surge a partir de enteropatia induzida por glúten ou doença celíaca), esprú tropical, esprú hipogamaglobulinêmico, enterite, enterite regional (doença de Crohn), colite ulcerativa, dano do intestino delgado ou síndrome do intestino curto (SBS). Alternativamente ou adicionalmente, o análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) pode ser usado para o tratamento e/ou a prevenção das disfunções relacionadas ao estômago e ao intestino, tais como enterite de radiação, enterite infecciosa ou pós-infecciosa, ou dano do intestino delgado, devido a agentes tóxicos ou outros agentes quimioterapêuticos. Neste caso, o tratamento com o análogo de GLP-2 pode ser opcionalmente combinado com uma ou mais terapias anticâncer, e pode, portanto, compreender administrar um ou mais agente(s) quimioterapêutico(s) ao paciente ou tratar o paciente com radioterapia.
[037] Em algumas modalidades da presente invenção, na fórmula exposta, X5 é Thr e/ou X11 é Ala. Os exemplos destes análogos de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) incluem: ZP1848 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 1); ZP2949 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKK-OH (SEQ ID NO: 2); ZP2711 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKK-OH (SEQ ID NO: 3);
ZP2469 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO: 4); ZP1857 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2 (SEQ ID NO: 5); ou ZP2530 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-OH (SEQ ID NO: 6).
[038] Em algumas modalidades da presente invenção, na fórmula exposta, X5 é Ser e/ou X11 é Ser. Os exemplos destes análogos de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) incluem: ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 7); ZP1855 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2 (SEQ ID NO: 8); ou ZP2242 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO: 9).
[039] As modalidades da presente invenção serão agora descritas a título de exemplo e não de limitação em relação aos desenhos anexos. Entretanto, vários aspectos e modalidades adicionais da presente invenção ficarão aparentes aos versados na técnica em vista da presente revelação.
[040] O termo “e/ou”, quando aqui usado, deve ser tomado como revelação específica de cada um dos dois recursos ou componentes especificados com ou sem o outro. Por exemplo “A e/ou B” deve ser tomado como revelação específica de cada de (i) A, (ii) B e (iii) A e B, exatamente como se cada um fosse aqui individualmente estabelecido.
[041] A menos que o contexto indique de outra forma, as descrições e as definições dos recursos estabelecidos anteriormente não são limitadas a nenhum aspecto ou modalidade em particular da invenção e se aplicam igualmente a todos os aspectos e modalidades que são descritos.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[042] A figura 1 mostra um típico cromatograma que mostra a separação dos oligômeros do peptídeo ZP1848.
[043] A figura 2 mostra como a viscosidade (quadrados) e raio hidrodinâmico (média z) (círculos) variaram em função da concentração de acetato depois da manufatura da formulação. Os dados mostram que, acima de 11 % de acetato, a viscosidade e o raio hidrodinâmico (média z) começam a aumentar.
[044] A figura 3 mostra a avaliação da estabilidade em 20 mg/mL (normalizada em 100 % no início) usando diferentes tampões em 40 ° por 0 até 3 semanas.
[045] A figura 4 mostra a avaliação da estabilidade em 2 mg/m (normalizada em 100 % no início) usando diferentes tampões em 40 ° por 0 até 3 semanas.
[046] A figura 5 mostra a avaliação da estabilidade em 20 mg/mL (normalizada em 100 % no início) usando diferentes agentes de tonicidade em 40 ° por 0 até 3 semanas.
[047] A figura 6 mostra a avaliação da estabilidade em 2 mg/mL (normalizada em 100 % no início) usando diferentes agentes de tonicidade em 40 ° por 0 até 3 semanas.
[048] A figura 7 mostra a pureza das Formulações 1 até 5 usando diferentes concentrações de sal de acetato de ZP1848, forma de sal diferente, agente de tonicidade diferente e tampão diferente.
[049] A figura 8 mostra a estabilidade do peptídeo em combinação com conservantes diferentes em 25 °C por 13 semanas.
[050] A figura 9 mostra a pureza de HPLC das formulações investigadas em 25 °C (condições aceleradas).
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO DEFINIÇÕES
[051] A menos que especificado de outra forma, as seguintes definições são providas para termos específicos, que são usados na descrição escrita exposta.
[052] Por toda a descrição e as reivindicações, os códigos de uma letra e de três letras convencionais para aminoácidos naturais são usados. Todos os resíduos de aminoácido nos peptídeos da invenção são, preferivelmente, da configuração L.
Entretanto, os aminoácidos de configuração D também podem estar presentes.
[053] Os compostos preferidos da presente invenção têm pelo menos uma atividade biológica de GLP-2, em particular, ao causar o crescimento do intestino. Isto pode ser avaliado em ensaios in vivo, por exemplo, da forma descrita nos exemplos de (por exemplo) WO 2006/117565, em que a massa do intestino, ou uma parte da mesma, é determinada depois que um animal testado foi tratado ou exposto a um análogo de GLP-2.
[054] Em alguns aspectos da presente invenção, as formulações líquidas que compreendem um análogo de GLP-2 têm uma concentração total de acetato na formulação menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, e mais preferivelmente menor do que ou igual a 10 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, mais preferivelmente menor do que ou igual a 9 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, mais preferivelmente menor do que ou igual a 8 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, mais preferivelmente menor do que ou igual a 7 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, mais preferivelmente menor do que ou igual a 6 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, mais preferivelmente menor do que ou igual a 5 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, mais preferivelmente menor do que ou igual a 4 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, mais preferivelmente menor do que ou igual a 3 % de acetato por mg do análogo de GLP-2, e mais preferivelmente menor do que ou igual a 2 % de acetato por mg do análogo de GLP-
2. A concentração de acetato na substância do fármaco liofilizada pode ser controlada pelo ajuste da concentração de ácido acético na fase móvel usado durante a etapa cromatográfica final. Isto irá resultar em uma substância do fármaco com um conteúdo de acetato abaixo de 11 %. Assim, por exemplo, para uma formulação que tem 20 mg/mL do análogo de GLP-2, a concentração total de acetato será menor do que ou igual a 37 mM. A título de referência, concentração total de acetato de 10 % equipara a 34 mM, 9 % a 30 mM, 8 % a 27mM, 7 % a 24 mM e 6 % a 20nM. A concentração total de acetato pode ser determinada usando os métodos conhecidos na tecnologia, por exemplo, HPLC.
[055] Nos exemplos a seguir, a viscosidade das formulações líquidas da presente invenção mostra-se como dependente da concentração total de acetato. Preferivelmente, as formulações têm uma viscosidade entre 0,8 e 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC. Convenientemente, a viscosidade pode ser medida pelo uso de microVISC™. Em paralelo, o raio hidrodinâmico pode ser medido usando um Leitor de placas de Espalhamento de Luz Dinâmico, DLS, (Wyatt DynaPro II). As amostras foram preparadas tendo uma substância do fármaco (DS) do análogo de GLP-2 que contém 6 % de acetato e para imitar DS que tem 7,8-15 % de acetato, então, o acetato foi adicionado. Os dados da manufatura das formulações que variaram a concentração de acetato de 6,7-15 % são mostrados a seguir na figura 2. O efeito de controle da concentração total de acetato é que a injetabilidade das formulações da presente invenção pode ser modulada, por exemplo, pela redução da concentração total de acetato para prover uma formulação menos viscosa que pode ser mais facilmente injetada.
[056] As formulações líquidas de acordo com a presente invenção são, preferivelmente, uma formulação líquida isosmótica. "Isosmótico" significa que as formulações da presente invenção têm a mesma ou uma similar pressão osmótica com os fluidos corporais. Preferivelmente, as formulações da presente invenção têm uma osmolalidade de cerca de 300 ± 60 mOsm medida por um osmômetro.
[057] Adicionalmente ou alternativamente, a presente invenção demonstra que a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 é inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação. Da forma mostrada nos exemplos, esta quantidade de oligômeros covalentemente ligados pode ser determinada usando cromatografia por exclusão de tamanho e determinando a área sob os picos para análogo de GLP-2 monomérico e oligômeros, respectivamente. Isto pode ser feito usando um sistema Dionex Ultimate3000 HPLC, proporcionando um gradiente linear, em uma vazão de 0,5 mL/min que foi usado para a análise. A fase móvel consistiu em 0,1 % TFA em 45 % acetonitrila e 55 % água Milli-Q. Um comprimento de onda de 215 nm foi usado para detecção. Isto significa que as formulações da presente invenção, no geral, contêm o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, mais preferivelmente, em uma concentração de cerca de 15 mg/mL até cerca de 25 mg/mL, e o mais preferivelmente, em uma concentração de cerca de 20 mg/mL. Em alguns aspectos da presente invenção, é preferido que a concentração do análogo de GLP-2 seja selecionada de forma que a formulação contenha 10 % ou menos, mais preferivelmente 5 % ou menos, mais preferivelmente 4 % ou menos, mais preferivelmente 3 % ou menos, e mais preferivelmente 2 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados, preferivelmente depois de 18 meses de armazenamento. A título de ilustração, a quantidade do produto oligomérico covalentemente ligado pode ficar na faixa entre 2 % e 5 %, mais preferivelmente na faixa entre 2 % e 4 %, e o mais preferivelmente na faixa entre 2 % e 3 %.
[058] Em alguns casos, a formulação da presente invenção pode ser usada em um regime de dosagem de uma vez ou duas vezes ao dia. Em alguns casos, a formulação da presente invenção pode ser usada em um regime de dosagem de uma vez ou duas vezes por semana. Alternativamente ou adicionalmente, o regime de dosagem dos análogos de GLP-2 da presente invenção pode compreender uma pluralidade ou curso de doses separadas no tempo por 2 dias, 2,5 dias, 3 dias, 3,5 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 8 dias, 9 dias, 10 dias, 11 dias ou 12 dias. Em uma modalidade preferida, as doses são separadas no tempo por 3 dias, 3,5 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias ou 8 dias. Em uma modalidade preferida, as doses são separadas no tempo por 3 dias, 3,5 dias, 4 dias ou 7 dias. Como será percebido na tecnologia, o tempo entre as doses pode ser variado em alguma extensão, de forma que todas e quaisquer doses não sejam separadas precisamente pelo mesmo tempo. Isto será frequentemente direcionado sob discricionariedade do médico. Assim, as doses podem ser separadas no tempo por uma faixa clinicamente aceitável de tempos, por exemplo, de cerca de 2 dias até cerca de 10 dias, ou de cerca de 3 ou 4 dias até cerca de 7 ou 8 dias.
[059] As formulações da presente invenção são formulações farmacêuticas líquidas estáveis de análogos de GLP-2. Uma formulação "estável" é aquela na qual o peptídeo na mesma retém essencialmente sua estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica mediante o armazenamento. Preferivelmente, a formulação retém essencialmente sua estabilidade física e química, bem como sua atividade biológica, mediante o armazenamento. O período de armazenamento, no geral, é selecionado com base no prazo de validade pretendido da formulação. As formulações da presente invenção são providas como formulações líquidas estáveis, por exemplo, formulações líquidas aquosas estáveis. Várias técnicas analíticas para medir a estabilidade da proteína estão disponíveis na tecnologia e são revisadas em Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) e Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), por exemplo. Na presente invenção, as formulações "estáveis" incluem as formulações nas quais pelo menos 80 %, mais preferivelmente pelo menos 90 %, mais preferivelmente pelo menos 95 %, mais preferivelmente pelo menos 96 %, mais preferivelmente pelo menos 97 %, mais preferivelmente pelo menos 98 %, e o mais preferivelmente pelo menos 99 % do análogo de GLP-2 fica ativo na formulação depois que a mesma foi armazenada em 2-8 °C por pelo menos 18 meses.
[060] A estabilidade pode ser medida em uma temperatura selecionada para um período de tempo selecionado, por exemplo, usando temperatura elevada para reduzir o período durante o qual uma formulação é testada. No geral, o armazenamento em uma temperatura entre 2 e 8 °C denota o armazenamento sob condições refrigeradas normais. Em certas modalidades, a formulação fica estável sob tais condições por pelo menos 12 meses, mais preferivelmente, pelo menos 18 meses, mais preferivelmente pelo menos 24 meses. A estabilidade pode ser avaliada qualitativamente e/ou quantitativamente em uma variedade de diferentes maneiras, incluindo a avaliação da formação de agregados (por exemplo, usando cromatografia por exclusão de tamanho, pela medição da turvação, e/ou por inspeção visual); pela avaliação da heterogeneidade da carga usando cromatografia de troca catiônica,
imagem por focalização isoelétrica capilar (icIEF) ou eletroforese de zona capilar; análise de sequência amino-terminal ou carbóxi-terminal; análise espectrométrica de massa; análise SDS-PAGE para comparar anticorpo reduzido e intacto; análise de mapa de peptídeo (por exemplo, tríptico ou LYS-C); avaliação da atividade biológica ou função de ligação a antígeno do anticorpo; etc. A instabilidade pode envolver qualquer um ou mais de: agregação, desamidação (por exemplo, desamidação de Asn), oxidação (por exemplo, oxidação de Met), isomerização (por exemplo, isomerização de Asp), recorte/hidrólise/fragmentação (por exemplo, fragmentação da região de dobradiça), formação de succinimida, cisteína(s) não pareada(s), extensão do N-terminal, processamento do C-terminal, diferenças de glicosilação, etc.
[061] Um peptídeo "retém sua estabilidade física" em uma formulação farmacêutica se o mesmo mostra nenhum sinal (ou muito pouco sinal) de agregação, precipitação e/ou desnaturação mediante, por exemplo, o exame visual de cor e/ou clareza, ou da forma medida por espalhamento de luz UV, Espalhamento de Luz Dinâmico, dicroísmo circular ou por cromatografia por exclusão de tamanho, e é considerado por ainda reter sua atividade biológica.
[062] Um peptídeo "retém sua estabilidade química" em uma formulação farmacêutica se a estabilidade química em um dado tempo for de maneira tal que o peptídeo seja considerado por ainda reter sua atividade biológica, da forma definida a seguir. A estabilidade química pode ser avaliada pela detecção e quantificação das formas quimicamente alteradas do peptídeo. A alteração química pode envolver isomerização, oxidação, modificação de tamanho (por exemplo, recorte), que podem ser avaliadas usando HPLC ou cromatografia por exclusão de tamanho, SDS-PAGE e/ou espectrometria de massa, por exemplo. Outros tipos de alteração química incluem alteração de carga n (por exemplo, que ocorre em decorrência da desamidação) que pode ser avaliada por HPLC ou cromatografia de troca iônica ou icIEF, por exemplo. ANÁLOGOS DE GLP-2
[063] Os análogos de GLP-2 presentes nas formulações da presente invenção têm um ou mais substituições, deleções, inversões ou adições de aminoácido, se comparados com GLP-2 nativo e da forma definida anteriormente. Esta definição também inclui os termos sinônimos miméticos de GLP-2 e/ou agonistas de GLP-2. Adicionalmente, o análogo da presente invenção pode ter adicionalmente modificação química de um ou mais de seus grupos laterais de aminoácido, átomos de α-carbono, grupo amino terminal, ou grupo ácido carboxílico terminal. Uma modificação química inclui, mas sem limitações, adição de frações químicas, criação de novas ligações e remoção de frações químicas. As modificações nos grupos laterais de aminoácido incluem, sem limitações, acilação de grupos ε-amino lisina, N-alquilação de arginina, histidina, ou lisina, alquilação de grupos ácido glutâmico ou aspártico carboxílico, e desamidação de glutamina ou asparagina. As modificações do amino terminal incluem, sem limitação, as modificações des-amino, alquila N-inferior, alquila N-di- inferior e N-acila. As modificações do grupo carbóxi terminal incluem, sem limitação, as modificações de amido, alquil amido inferior, dialquil amido e alquil éster inferior. Preferivelmente, aqui, alquila inferior é alquila C1-C4. Além do mais, um ou mais grupos laterais ou grupos terminais podem ser protegidos por grupos protetores conhecidos pelos versados na técnica em química de peptídeos. O α-carbono de um aminoácido pode ser monometilado ou dimetilado.
[064] Em alguns aspectos, as formulações líquidas da presente invenção empregam um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila; X5 é Ser ou Thr; X11 é Ala ou Ser; R2 é NH2 ou OH; e
Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo.
[065] Em algumas modalidades da presente invenção, na fórmula exposta, X5 é Thr e/ou X11 é Ala. Os exemplos destes análogos de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) incluem: ZP1848 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 1) ZP2949 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKK-OH (SEQ ID NO: 2); ZP2711 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKK-OH (SEQ ID NO: 3); ZP2469 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID NO: 4); ZP1857 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2 (SEQ ID NO: 5); ou ZP2530 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-OH (SEQ ID NO: 6).
[066] Em uma modalidade da presente invenção, o análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) é ZP1848 H- HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 1).
[067] Em algumas modalidades da presente invenção, na fórmula exposta, X5 é Ser e/ou X11 é Ser. Os exemplos destes análogos de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) incluem: ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 7); ZP1855 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2 (SEQ ID NO: 8); ou ZP2242 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (SEQ ID
NO: 9).
[068] Em uma modalidade da presente invenção, o análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) é ZP1846 H- HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 7).
[069] Deve-se entender que os peptídeos (substância do fármaco) da invenção também podem ser providos na forma de um sal ou outro derivado. Os sais incluem sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como sais com adição de ácido e sais básicos. Os exemplos de sais com adição de ácido incluem sais de cloridrato, sais de citrato, sais de cloreto e sais de acetato. Preferivelmente, o sal é acetato. No geral, é preferido que o sal não seja um sal de cloreto. Os exemplos de sais básicos incluem os sais em que o cátion é selecionado a partir de metais alcalinos, tais como sódio e potássio, metais alcalinoterrosos, tal como cálcio, e íons de amônio +N (R3) 3(R4), em que R3 e R4 designam independentemente alquila C1-6 opcionalmente substituída, alquenila C2- 6 opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída. Outros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são descritos em “Remington’s Pharmaceutical Sciences”,17th edition. Ed. Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, U.S.A., 1985 e edições mais recentes, e na Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology.
[070] Em modalidades preferidas, o sal de acetato de um análogo de GLP-2 da invenção é selecionado a partir do grupo que consiste em ZP1848-acetato, ZP2949- acetato, ZP2711-acetato, ZP2469-acetato, ZP1857-acetato, ZP2530-acetato, ZP1846-acetato, ZP1855-acetato e ZP2242-acetato. No presente contexto, o termo “ZP1848-acetato” se refere à molécula ZP1848 ser na forma de um sal de acetato. Os sais de acetato de análogos de GLP-2 podem ser representados pela fórmula (análogo de GLP-2), x(CH3COOH) em que x é 1,0 até 8,0, isto é, em que x é 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0 ou 8,0. Em qualquer composição dos sais de acetato dos análogos de GLP-2, pode haver moléculas com um número diferente de moléculas de acetato, de forma que x não seja, necessariamente, um número inteiro. Em alguns casos, x é de 4,0 até 8,0, x é de 6,0 a 8.0, ou x é de 4,0 a 6,5. Em alguns casos, x é de 4,0 até 6,0, x é de 2,0 até 7,0, x é de 3,0 até 6,0, x é de 4,0 até 6,0 ou x é de 4,0 até 8,0.
[071] Em uma modalidade preferida, o análogo de GLP-2 é ZP1848-acetato ou H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 acetato (SEQ ID NO: 1) ou (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH3COOH) em que x é 1,0 até 8,0.
[072] Desta maneira, em um aspecto adicional, a presente invenção provê composições sólidas que compreendem um sal de acetato de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2). As composições sólidas são usadas para formulação com os excipientes usados para fazer as formulações líquidas da presente invenção. Em uma modalidade, a presente invenção provê uma composição sólida que compreende um sal de acetato de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) que tem a fórmula: (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH3COOH) em que x é 1,0 até 8,0.
[073] Um limite superior de 8,0 moléculas de acetato por análogo de GLP-2 equipara a um conteúdo de acetato de menos do que 11 % de acetato e pode ser formulado para ter uma viscosidade entre 0,8 e 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
[074] A faixa do número de moléculas de acetato associadas com cada molécula dos análogos de GLP-2 define uma faixa do peso molecular para este componente da formulação. Por exemplo, para os sais de acetato de ZP1848, a faixa do número de moléculas de acetato associadas com cada molécula dos análogos de GLP-2 define uma faixa do peso molecular do ZP1848-acetato. A título de exemplo, 1 equivalente de acetato com cada molécula de ZP1848 provê um peso molecular = 4.316 + 60 =
4.376 Da. Desta maneira, os pesos moleculares para aumentar os equivalentes de acetato com ZP1848 são como segue: 1 equivalente de acetato = 4.376 Da; 2 equivalentes de acetato = 4.436 Da; 3 equivalentes de acetato = 4.496 Da; 4 equivalentes de acetato =4.556 Da; 5 equivalentes de acetato = 4.616 Da; 6 equivalentes de acetato = 4.676 Da; 7 equivalentes de acetato = 4.736 Da e 8 equivalentes de acetato = 4.796 Da. Isto, por sua vez, define as faixas de peso molecular como segue: 1-8 equivalentes de acetato = 4.376 Da - 4.796 Da; 4-8 equivalentes de acetato = 4.556 Da - 4.796 Da e 6-8 equivalentes de acetato = 4.676 Da - 4.796 Da.
[075] Outros derivados dos análogos de GLP-2 da invenção incluem os complexos de coordenação com íons de metal, tais como Mn 2+ e Zn2+, ésteres, tais como ésteres hidrolisáveis in vivo, ácidos ou bases livres, hidratos, pró-fármacos ou lipídeos. Os ésteres podem ser formados entre os grupos hidroxila ou ácido carboxílico presentes no composto e um apropriado parceiro de reação de ácido carboxílico ou álcool, usando técnicas bem conhecidas na tecnologia. Os derivados, como pró-fármacos dos compostos, são conversíveis in vivo ou in vitro em um dos compostos pais. Tipicamente, pelo menos uma das atividades biológicas do composto será reduzida na forma de pró-fármaco do composto, e pode ser ativada pela conversão do pró-fármaco para liberar o composto ou um metabólito do mesmo. Os exemplos de pró-fármacos incluem o uso de grupos de proteção que podem ser removidos in situ liberando o composto ativo ou servem para inibir a liberação do fármaco in vivo.
[076] Z1 e Z2 estão independentemente presentes e/ou ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys, isto é, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 resíduos de Lys. Os resíduos de Lys podem ter configuração tanto D quanto L, mas têm uma configuração L. As sequências Z particularmente preferidas são as sequências de quatro, cinco ou seis resíduos de lisina consecutivos, e, particularmente, seis resíduos de lisina consecutivos. As sequências Z exemplares são mostradas em WO 01/04156. Em certas modalidades, Z1 está ausente. Em tais casos, Z2 pode estar tanto presente quanto ausente. FORMULAÇÕES DOS ANÁLOGOS DE GLP-2
[077] A formulação dos análogos de GLP-2 é uma formulação pronta para uso. O termo "pronto para uso", da forma aqui usada, se refere a uma formulação que não exige a constituição ou a diluição com uma quando prescrita do diluente, por exemplo,
água para injeção ou outro diluente adequado, antes do uso pela rota de administração designada.
[078] Da forma aqui descrita, as formulações líquidas dos análogos de GLP-2 da presente invenção incluem um tampão, um modificador de tonicidade não iônico e arginina em quantidade suficiente para prover o pH da formulação final. De acordo com a prática farmacêutica normal, as formulações da presente invenção são estéreis e/ou livres de agente de redução. Em alguns casos, as formulações líquidas da presente invenção são formulações líquidas aquosas. Em alguns casos, as formulações líquidas da presente invenção são formulações líquidas não aquosas.
[079] O termo "tampão", da forma aqui usada, denota um excipiente farmaceuticamente aceitável que estabiliza o pH de uma formulação farmacêutica. Os tampões adequados são bem conhecidos na tecnologia e podem ser encontrados na literatura. Os experimentos de triagem nos exemplos mostram que as formulações da presente invenção, preferivelmente, incluem um tampão selecionado a partir de um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, já que estes tampões proveram formulações estáveis nas quais os análogos de GLP-2 dissolveram e não ficaram viscosos, turvos ou precipitaram o fármaco de peptídeo. Em modalidades preferidas, o tampão é um tampão de histidina, por exemplo, L-histidina. No geral, o tampão estará presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM, mais preferivelmente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 25 mM, e o mais preferivelmente em uma concentração de cerca de 15 mM. Com base nos experimentos do presente pedido, preferivelmente, o tampão não é um tampão de fosfato, um tampão de citrato, um tampão de citrato/Tris e/ou um tampão de succinato.
[080] O termo "modificador de tonicidade", da forma aqui usada, denota os agentes de tonicidade farmaceuticamente aceitáveis que são usados para modular a tonicidade da formulação. As formulações da presente invenção são preferivelmente isosmóticas, isto é, as mesmas têm uma pressão osmótica que é substancialmente igual ao soro sanguíneo humano. Os modificadores de tonicidade usados nas formulações são, preferivelmente, modificadores de tonicidade não iônicos e são preferivelmente selecionados a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose. Um modificador de tonicidade não iônico preferido é manitol, por exemplo, D-manitol. A concentração do modificador de tonicidade será dependente da concentração de outros componentes da formulação, especialmente, quando se pretender que a formulação seja isosmótica. Tipicamente, o modificador de tonicidade não iônico será empregado em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM, mais preferivelmente em uma concentração de cerca de 150 mM até cerca de 250 mM, e o mais preferivelmente em uma concentração de cerca de 230 mM.
[081] No geral, os componentes e as quantidades das formulações líquidas da presente invenção são escolhidos para prover uma formulação com um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4, mais preferivelmente um pH de cerca de 6,8 até cerca de 7,2, e o mais preferivelmente um pH de cerca de 7,0. A arginina pode ser adicionada quantum sufficit (em quantidade suficiente) para ajustar o pH de forma que o mesmo fique em uma faixa de pH desejada. A partir dos experimentos mostrados nos exemplos, é preferido que o ajuste de pH não seja feito usando ácido hidroclórico ou hidróxido de sódio.
[082] Em uma modalidade, as formulações líquidas da presente invenção consistem no análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM, um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM, arginina em quantidade suficiente para prover um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4.
[083] Em uma modalidade, as formulações líquidas da presente invenção consistem no análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato e um tampão de acetato, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM, um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol e sorbitol em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM, arginina em quantidade suficiente para prover um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4.
[084] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, o tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, o manitol em uma concentração de cerca de 230 mM e a arginina em quantidade suficiente para prover um pH de cerca de 7,0.
[085] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, o tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, o manitol em uma concentração de cerca de 230 mM e o pH é cerca de 7,0.
[086] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem ZP1848-acetato ou H- HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 acetato (SEQ ID NO: 1) em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, manitol em uma concentração de cerca de 230 mM, e arginina em quantidade suficiente para prover um pH de cerca de 7,0.
[087] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem ZP1848-acetato ou H- HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 acetato (SEQ ID NO: 1) em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, manitol em uma concentração de cerca de 230 mM e o pH é cerca de 7,0.
[088] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem um sal de acetato de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) que tem a fórmula: (H- HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH3COOH), em que x é 1,0 até 8,0, em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, manitol em uma concentração de cerca de 230 mM e o pH é cerca de 7,0.
[089] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem um sal de acetato de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) que tem a fórmula: (H- HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH3COOH), em que x é 1,0 até 8,0, em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, manitol em uma concentração de cerca de 230 mM e o pH é cerca de 7,0, em um regime de dosagem de uma vez ou duas vezes ao dia.
[090] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem um sal de acetato de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) que tem a fórmula: (H- HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH3COOH), em que x é 1,0 até 8,0, em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, manitol em uma concentração de cerca de 230 mM e o pH é cerca de 7,0, em um regime de dosagem de uma vez ou duas vezes por semana.
[091] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem ZP1846 H- HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 7); em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, manitol em uma concentração de cerca de 230 mM, e arginina em quantidade suficiente para prover um pH de cerca de 7,0.
[092] Em uma modalidade adicional, as formulações líquidas da presente invenção compreendem ZP1846 H- HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (SEQ ID NO: 7); em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, manitol em uma concentração de cerca de 230 mM e o pH é cerca de 7,0.
[093] Em alguns casos, as formulações líquidas da presente invenção compreendem adicionalmente um conservante. Em alguns casos, o conservante é um selecionado a partir do grupo que consiste em cloreto de benzalcônio, clorobutanol, metil parabeno e sorbato de potássio. No geral, o conservante está presente em uma concentração de cerca de 0,1 % até cerca de 1 % do volume da formulação final.
[094] Em uma modalidade adicional, a formulação líquida é selecionada a partir do grupo que consiste em uma formulação líquida aquosa, uma formulação líquida em vários solventes hidrofílicos ou hidrofóbicos, uma emulsão e uma suspensão líquida. Em uma modalidade preferida, a formulação líquida é uma formulação líquida aquosa.
[095] A título de exemplo, as formulações líquidas da presente invenção podem ser preparadas pela mistura de soluções em estoque do análogo de GLP-2, do tampão, do modificador de tonicidade não iônico e, opcionalmente, do conservante em água, opcionalmente, diluindo a solução resultante e ajustando no pH alvo. Convenientemente, as soluções do tampão e do modificador de tonicidade não iônico podem, primeiro, ser misturadas para prover uma concentração desejada de cada excipiente. A solução do análogo de GLP-2 pode, então, ser adicionada e, se necessário, o pH ajustado, por exemplo, usando ácido acético/0,5 M L-arginina. A água foi adicionada no volume final.
[096] Preferivelmente, o análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) é administrado nos pacientes parenteralmente, preferivelmente por injeção, mais tipicamente por injeção subcutânea, injeção intramuscular, injeção intravenoso ou injeção intraperitoneal. A administração por injeção subcutânea é preferida. A injeção pode ser realizada por um médico, uma enfermeira ou outro profissional da saúde, ou pode ser autoadministrada pelo paciente. Da forma aqui estabelecida, em alguns aspectos, as formulações da presente invenção têm uma viscosidade que facilita o carregamento da formulação no interior de uma seringa pré-carregada, uma caneta de injeção ou outro dispositivo injetor. Isto pode ter a vantagem de pré-determinar a dose da formulação administrada ao paciente, por exemplo, sem a necessidade de medição a partir de uma ampola multiuso. Desta maneira, em outros aspectos, a presente invenção provê um artigo de fabricação ou um kit que compreendem um contêiner que mantém estável, tal como, por exemplo, uma formulação farmacêutica aquosa estável do análogo de GLP-2 de acordo com a presente invenção ou uma seringa pré-carregada ou um dispositivo injetor ou uma caneta injetora que contêm uma formulação líquida aquosa que compreende o análogo de GLP-2 de acordo com a presente invenção.
CONDIÇÕES MÉDICAS
[097] As formulações do análogo de GLP-2 da presente invenção são usadas como um agente farmacêutico para prevenir ou tratar um indivíduo que sofre de disfunções gastrointestinais, incluindo o trato gastrointestinal superior do esôfago pela administração de uma quantidade efetiva de um análogo de GLP-2, ou um sal do mesmo, da forma aqui descrita. As disfunções relacionadas ao estômago e ao intestino incluem úlceras de qualquer etiologia (por exemplo, úlceras pépticas, úlceras induzidas por fármaco, úlceras relacionadas a infecções ou outros patógenos), disfunções da digestão, síndromes da má absorção, síndrome do intestino curto, síndrome fundo de saco, doença do intestino inflamatório, esprú celíaco (por exemplo, que surge a partir de enteropatia induzida por glúten ou doença celíaca), esprú tropical, esprú hipogamaglobulinêmico, enterite, colite ulcerativa, dano do intestino delgado, e diarreia/mucosite induzidas por quimioterapia (CID).
[098] Da forma supramencionada, no geral, os indivíduos que irão se beneficiar da maior massa do intestino delgado e consequente e/ou manutenção da estrutura e função mucosais normais do intestino delgado são candidatos para o tratamento com os presentes análogos de GLP-2. As condições em particular que podem ser tratadas com o análogo de GLP-2 incluem as várias formas de esprú, incluindo esprú celíaco que resulta de uma reação tóxica a alfa-gliadina a partir do calor e pode ser um resultado de enteropatia induzida por glúten ou doença celíaca, e é marcado por uma significativa perda de vilosidade do intestino delgado; esprú tropical que resulta a partir da infecção e é marcado pelo nivelamento parcial do vilosidade; esprú hipogamaglobulinêmico que é observado comumente em pacientes com imunodeficiência variável comum ou hipogamaglobulinemia e é marcado pela significativa diminuição na altura da vilosidade. A eficácia terapêutica do tratamento com análogo de GLP-2 pode ser monitorada por biópsia entérica para examinar a morfologia da vilosidade, pela avaliação bioquímica da absorção do nutriente, pelo ganho de peso do paciente ou pela melhoria dos sintomas associados com estas condições.
[099] Uma outra condição em particular que pode ser tratada com os análogos de GLP-2 da invenção, ou para a qual os análogos de GLP-2 podem ser usados terapeuticamente e/ou profilaticamente é síndrome curto das entranhas (SBS), também conhecido as síndrome do intestino curto ou simplesmente intestino curto, que resulta da perda de absorção associada a resecção cirúrgica, a defeito ou doença congênitos no intestino, em que os pacientes ficam subsequentemente incapazes de manter equilíbrios de fluidos, eletrólitos e nutrientes em uma dieta convencional. Apesar de uma adaptação que ocorre, no geral, nos dois anos depois da resecção, os pacientes de SBS têm reduzida captação nutricional e perda de fluido.
[0100] Outras condições que podem ser tratadas com os análogos de GLP-2 da invenção, ou para as quais os análogos de GLP-2 podem ser usados profilaticamente, incluem, além dos supramencionados, enterite de radiação, enterite infecciosa ou pós- infecciosa, e dano do intestino delgado devido a agentes quimioterapêuticos contra o câncer ou tóxicos.
[0101] Os análogos de GLP-2 também podem ser usados para o tratamento de desnutrição, por exemplo, caquexia e anorexia.
[0102] Uma modalidade em particular da invenção é relacionada ao uso dos presentes peptídeos para a prevenção e/ou o tratamento de dano e disfunção intestinais. Tais dano e disfunção são um bem conhecido efeito colateral do tratamento de quimioterapia contra o câncer. A administração da quimioterapia é frequentemente associada com indesejados efeitos colaterais relacionados ao sistema gastrointestinal, tais como mucosite, diarreia, translocação bacteriana, má absorção, cólica abdominal, sangramento gastrointestinal e vômito. Estes efeitos colaterais são consequências clínicas do dano estrutural e funcional do epitélio intestinal e, frequentemente, tornam necessário diminuir a dose e a frequência da quimioterapia.
[0103] A administração dos presentes análogos de peptídeo GLP-2 pode intensificar o efeito trófico nas criptas intestinais e rapidamente provê novas células para substituir o epitélio intestinal danificado seguinte à quimioterapia. O objetivo final alcançado pela administração dos presentes peptídeos é reduzir a morbidez relacionada ao dano gastrointestinal dos pacientes que passam pelo tratamento de quimioterapia, ao mesmo tempo em que cria o regime de quimioterapia mais ideal para o tratamento do câncer. O tratamento profilático ou terapêutico concomitante pode ser provido de acordo com a presente invenção aos pacientes que passam por ou prestes a passar por radioterapia.
[0104] As células-tronco da mucosa do intestino delgado são particularmente suscetíveis aos efeitos citotóxicos da quimioterapia devido à sua rápida taxa de proliferação (Keefe et al., Gut, 47: 632-7, 2000). O dano induzido por quimioterapia à mucosa do intestino delgado é, frequentemente, clinicamente referido como mucosite gastrointestinal e é caracterizado por deficiências de absorção e de barreira do intestino delgado. Por exemplo, mostrou-se que os amplamente usados agentes quimioterapêuticos, 5-FU, irinotecano e metotrexato aumentam a apoptose que leva à atrofia da vilosidade e à hipoplasia da cripta no intestino delgado de roedores (Keefe et al., Gut 47: 632-7, 2000; Gibson et al., J Gastroenterol. Hepatol. Sep;18(9):1095- 1100, 2003; Tamaki et al., J. Int. Med. Res. 31(1):6-16, 2003). Mostrou-se que os agentes quimioterapêuticos aumentam a apoptose nas criptas intestinais em 24 horas depois da administração e, subsequentemente, diminuem a área da vilosidade, o comprimento da cripta, contagem mitótica por cripta, e altura do enterócito três dias depois da quimioterapia em seres humanos (Keefe et al., Gut, 47: 632-7, 2000). Assim, as mudanças estruturais no intestino delgado levam diretamente à disfunção intestinal e, em alguns casos, à diarreia.
[0105] A mucosite gastrointestinal depois da quimioterapia contra o câncer é um problema crescente que é essencialmente intratável uma vez estabelecida, embora a mesma gradualmente diminua. Os estudos conduzidos com os fármacos contra câncer citostáticos comumente usados 5-FU e irinotecano demonstraram que a quimioterapia efetiva com estes fármacos afeta predominantemente a integridade estrutural e a função do intestino delgado, ao mesmo tempo em que o cólon fica menos sensível, e responde principalmente com maior formação de muco (Gibson et al., J. Gastroenterol. Hepatol. Sep;18(9):1095-1100, 2003; Tamaki et al., J Int. Med. Res. 31(1):6-16, 2003).
[0106] As formulações da presente invenção compreendendo análogos de GLP-2 podem ser usadas na prevenção e/ou tratamento de lesão gastrointestinal e efeitos colaterais de agentes quimioterapêuticos. Esta aplicação terapêutica potencialmente importante pode se aplicar aos agentes quimioterapêuticos atualmente usados tais como, mas sem limitação: 5-FU, Altretamina, Bleomicina, Busulfano, Capecitabina, Carboplatina, Carmustina, Clorambucila, Cisplatina, Cladribina, Crisantaspase, Ciclofosfamida, Citarabina, Dacarbazina, Dactinomicina, Daunorubicina, Docetaxel, Doxorubicina, Epirubicina, Etoposídeo, Fludarabina, Fluorouracil, Gencitabina, Hidroxicarbamida, Idarubicina, Ifosfamida, Irinotecano, Doxorubicina lipossomal, Leucovorina, Lomustina, Melfalano, Mercaptopurina, Mesna, Metotrexato, Mitomicina, Mitoxantrona, Oxaliplatina, Paclitaxel, Pemetrexede, Pentostatino, Procarbazina, Raltitrexede, Estreptozocina, Tegafur-uracil, Temozolomida, Tiotepa, Tioguanino/Tioguanina, Topotecano, Treossulfano, Vinblastina, Vincristina, Vindesina, Vinorelbina, Bleomicina, Busulfano, Capecitabina, Carboplatina,
Carmustina, Clorambucil, Cisplatina, Cladribina, Crisantaspase, Ciclofosfamida, Citarabina, Dacarbazina, Dactinomicina, Daunorubicina, Docetaxel, Doxorubicina, Epirubicina, Etoposídeo, Fludarabina, Fluorouracil, Gencitabina, Hidroxicarbamida, Idarubicina, Ifosfamida, Irinotecano, Doxorubicina lipossomal, Leucovorina, Lomustina, Melfalano, Mercaptopurina, Metotrexato, Mitomicina, Mitoxantrona, Oxaliplatina, Paclitaxel, Pemetrexede, Pentostatina, Procarbazina, Raltitrexede, Estreptozocina, Tegafur-uracil, Temozolomida, Tiotepa, Tioguanino/Tioguanina, Topotecano, Treosulfano, Vinblastina, Vincristina, Vindesina e Vinorelbina.
LIBERAÇÃO DAS FORMULAÇÕES
[0107] Em alguns aspectos, a presente invenção se refere a uma formulação pronta para uso de análogos de GLP-2, pretendida para administração parenteral, e adequada para uso em, por exemplo, ampolas, seringas pré-carregadas, bombas de infusão, injetores vestíveis, autoinjetores descartáveis ou autoinjetores de dose ajustável.
EXEMPLOS
[0108] Os exemplos a seguir são providos para ilustrar aspectos preferidos da invenção, e não são pretendidos para limitar o escopo da invenção. Os análogos de GLP-2 administrados de acordo com os regimes de dosagem aqui descritos podem ser feitos de acordo com os métodos, tal como síntese de peptídeo de fase sólida descrita em WO 2006/117565, cujo conteúdo é expressamente incorporado pela referência na sua íntegra. EXEMPLO 1. SÍNTESE DE ZP1848-ACETATO E SIMILAR ANÁLOGOS DE GLP-2
[0109] Peptídeo ZP1848-acetato foi sintetizado usando uma abordagem de síntese de peptídeo de fase sólida (SPPS) Fmoc com condições padrões de acoplamento. Após completar a síntese, a sequência de peptídeo foi desprotegida e clivada a partir do suporte sólido, e o peptídeo bruto foi purificado usando HPLC de fase reversa preparativa. O peptídeo foi convertido na forma de sal desejada aplicando uma fase móvel durante a etapa cromatográfica final, com uma concentração apropriada de ácido acético e subsequente liofilização. O produto da substância do fármaco apresentou um conteúdo de acetato abaixo de 11 % ou abaixo de 8 equivalentes de acetato: lote 1 (6 % de acetato, 4,6 equivalentes de acetato), lote 2 (7 % de acetato, 5,4 equivalentes de acetato) e lote 3 (6 % de acetato, 4,6 equivalentes de acetato). Este protocolo de síntese e purificação pode ser adaptado para preparar outros análogos de GLP-2 usados nas formulações da presente invenção. EXEMPLO 2. INVESTIGAR A FORMAÇÃO DE OLIGÔMEROS
COVALENTEMENTE LIGADOS EM FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS DE ANÁLOGO DE GLP-2 ZP1848-ACETATO
MATERIAIS E MÉTODOS
[0110] Para detecção de oligômeros covalentemente ligados, um sistema Dionex Ultimate3000 HPLC, que fornece um gradiente linear, em uma vazão de 0,5 mL/min, foi usado para a análise. A fase móvel consistiu em TFA 0,1 % em acetonitrila 45 % e água Milli-Q 55 %. Um comprimento de onda de 215 nm foi usado para detecção. A quantidade de injeção foi 4 µg de peptídeo. A coluna usada para a separação dos peptídeos covalentemente formados foi uma TSKgel SuperSW2000 (TSK BioScience), com um tamanho de partícula de 4 µm e dimensões de 300 * 4,6 mm. O tempo de execução total foi 25 minutos. Para avaliação da estabilidade química do peptídeo monômero, uma coluna C18 com uma fase móvel acídica e um gradiente acetonitrila foi usado.
[0111] Soluções em estoque de manitol (700 mM), L-histidina (200 mM) e peptídeo ZP1848 (sal de acetato; 60 mg/mL) em água (Milli-Q) foram preparadas. Soluções de manitol e histidina foram misturadas em quantidades apropriadas para fornecer manitol 230 mM e histidina 15 mM. Solução estoque de peptídeo foi adicionada em uma concentração final de 0,2, 2 e 20 mg/mL, respectivamente. Água foi adicionada até 90 % de final volume. Se necessário, pH seria ajustado em pH 7 usando ácido acético 1 M/L-arginina 0,5 M. Água foi adicionada até o volume final.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0112] É conhecido na tecnologia que aumentar a concentração de fármacos de peptídeo ou proteína em uma formulação líquida aumenta a concentração de dímero, trímeros e oligômeros de ordem superior, como um resultado dos efeitos da ação de massa, levando a uma maior probabilidade de reações covalentes (vide van Maarschalkerweerd et al., Intrinsically Disord. Proteins. 2015; 3(1): e1071302). Assim, a formação de produtos de degradação de alto peso molecular covalentes (cHMWDP) aumenta em função da concentração da substância do fármaco, e apresenta o efeito de reduzir a quantidade de peptídeo monomérico biologicamente ativo disponível na formulação. Isto foi, portanto, investigado em formulações do análogo de GLP-2, ZP1848-acetato.
[0113] Um cromatograma típico na separação dos oligômeros do monômero ZP1848-acetato é mostrado na figura 1. Os oligômeros de ZP1848-acetato são bem separados do monômero ZP1848-acetato e são todos integrados como um pico. A área percentual dos picos foi usada para quantificar a quantidade de oligômeros, em particular dímeros e trímeros covalentemente ligados.
[0114] Formulações contendo 0,2, 2 e 20 mg/mL de ZP1848, na mesma formulação, foram analisadas após 24 meses de armazenamento em 2-8 °C. Isto é, principalmente a formação de dímeros (duas moléculas de ZP1848-acetato covalentemente ligadas), mas também em certa medida alguns trímeros (verificado por LC-MS). A formulação contendo 0,2 mg/mL apresenta 2,6 % de oligômeros, 2 mg/mL apresenta 1,91 % e 20,0 mg/mL apresenta 1,35 %. O valor inicial da quantidade de oligômero foi menos de 0,1 %. Tabela 1: Formação de oligômeros covalentemente ligados em estabilidade a longo prazo a 2-8 °C após 24 meses Concentração do produto do fármaco, Oligômeros covalentemente ZP1848-acetato ligados 0,2 mg/mL 2,60 % 2 mg/mL 1,91 % 20 mg/mL 1,35 %
[0115] Durante armazenamento de longo prazo a 2-8 °C de ZP1848-acetato (glepaglutida), observou-se surpreendentemente que a formação de oligômeros covalentemente ligados é dependente da concentração, mas ao contrário da expectativa geral, a dependência da concentração para formação do oligômero é inversamente dependente da concentração crescente do análogo de GLP-2. Sem desejar estar ligado a nenhuma teoria em particular, os presentes inventores acreditam que a redução na formação de oligômeros covalentemente ligados, à medida que a concentração de fármaco aumenta, é um resultado da cauda de lisina do análogo de GLP-2 que promove uma reação de competição, levando à formação de espécie de ordem superior, em que as moléculas análogas de GLP-2 são fracamente associadas juntas, em vez de serem covalentemente ligadas. Isto significa que estas espécies associadas fracamente são capazes de dissociar para liberar monômero biologicamente ativo, em vez de causar uma perda de espécies ativas, como ocorre quando os oligômeros covalentemente ligados se formam. EXEMPLO 3: TRIAGEM DE TAMPÃO PARA FORMULAÇÕES DE ANÁLOGO DE GLP-2 ZP1848 ACETATO
[0116] Um estudo foi realizado para avaliar os efeitos de sais de tampão diferentes na estabilidade de formulações de ZP1848-acetato (4 mg/mL). A concentração total de tampão nas formulações foi 20 mM.
MATERIAIS E MÉTODOS
[0117] As soluções tampão listadas na tabela 2 a seguir foram preparadas. O pH dos tampões foi ajustado com HCl 1 M/NaOH 1 M. O peptídeo ZP1848 (sal de acetato) foi dissolvido no tampão relevante em 80 % do volume da amostra final para fornecer 4 mg/mL na formulação final. Se necessário, o pH é então ajustado até o pH desejado da formulação usando tanto ácido acético 200 mM quanto L-arginina 100 mM. A solução tampão foi adicionada até o volume final. Cada formulação foi preenchida em ampolas apropriadas (1 mL/ampola) para teste de estabilidade.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0118] A aparência visual mostrou que todas as formulações contendo tampão de citrato, tampão de citrato/Tris ou tampão de succinato estavam viscosas e/ou turvas (vide Tabela 2). Tampão de acetato (20 mM, pH 5), tampão de mesilato (20 mM, pH 6), tampão de histidina (15 mM, pH 7) e histidina-arginina (15+5 mM, pH 7) produziram formulações que passaram pela inspeção visual como sendo claras e não-viscosas.
Tabela 2: Formulações para triar o efeito de diferentes tampões Concentraçã Inspeção visual Formulação pH Tampão o do tampão Clara e não-viscosa? (mM)
1 4,0 Citrato-TRIS 20 Não
2 5,0 Citrato-TRIS 20 Não
3 6,0 Citrato-TRIS 20 Não
4 7,0 Citrato-TRIS 20 Não
5 8,0 Citrato-TRIS 20 Não
6 5,0 Succinato 20 Não
7 5,0 Acetato 20 Sim
8 5,0 Histidina 20 Sim
9 6,0 Succinato 20 Não
10 6,0 Mesilato 20 Sim
11 6,0 Histidina 20 Sim
12 7,0 Citrato 20 Não
13 7,0 TRIS 20 Sim
Histidina + 14 7,0 15 + 5 Sim Arginina
EXEMPLO 4: INCOMPATIBILIDADE DO TAMPÃO DE FOSFATO COM
ANÁLOGO DE GLP-2 ZP1848-ACETATO
MATERIAL E MÉTODOS
[0119] Soluções em estoque de manitol (700 mM), tampão de fosfato (200 mM) e peptídeo ZP1848-acetato (60,2 mg/mL) em água (Milli-Q) foram preparadas. Soluções em estoque foram misturadas em quantidades apropriadas para fornecer as formulações mostradas na tabela 3 abaixo. Água foi adicionada até 90 % de volume final. Se necessário, pH foi então ajustado ao pH desejado da formulação usando ácido acético 1 M/L-arginina 0,5 M. Água foi adicionada até o volume final. Os recipientes da amostra foram inspecionados visualmente em relação à clareza e viscosidade após 24 horas em temperatura ambiente. Tabela 3: Formulações para testar o efeito de tampão de fosfato Concentração pH Fosfato Manitol Inspeção visual de ZP1848 [mM] [mM] Clara e não [mg/mL] viscosa? 0 mg/mL 7,0 20 230 Sim 20 mg/mL 6,5 20 230 Não 20 mg/mL 7,0 20 230 Não 20 mg/mL 7,0 50 230 Não 20 mg/mL 7,5 20 230 Não
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0120] Inspeção visual mostrou que formulações de ZP1848-acetato em 20 mg/mL, em pH 6,5-7,5, contendo tampão de fosfato 20-50 mM estavam turvas e/ou altamente viscosas após 24 horas em temperatura ambiente. Portanto, concluiu-se que tampão de fosfato não é compatível com ZP1848-acetato nestas formulações. EXEMPLO 5: EFEITO DE CONTEÚDO DE ACETATO NA VISCOSIDADE DE FORMULAÇÕES DE ANÁLOGO DE GLP-2 ZP1848-ACETATO
[0121] Foi realizado um estudo para determinar o efeito do conteúdo de acetato na viscosidade da formulação de ZP1848-acetato.
MATERIAL E MÉTODOS
[0122] Amostras foram preparadas usando uma substância do fármaco (DS) do análogo de GLP-2 ZP1848-acetato contendo 6 % de acetato. Acetato foi adicionado para investigar os efeitos de conteúdo de acetato aumentado na faixa de 7,8-15 % de acetato (vide Tabela 4).
[0123] Soluções em estoque de manitol (700 mM), ácido acético (1.000 mM), histidina (200 mM) e peptídeo ZP1848-acetato (60 mg/mL) em água Milli-Q foram preparadas. Soluções em estoque foram misturadas em quantidades apropriadas para fornecer as formulações mostradas na tabela 4 abaixo. Água foi adicionada até 90 % de volume final. Se necessário, pH foi então ajustado ao pH desejado da formulação usando arginina 250 mM. Água foi adicionada até o volume final. Cada formulação foi preenchida em ampolas apropriadas para teste de estabilidade.
[0124] Ampolas foram inspecionadas visualmente em relação à clareza e viscosidade. A viscosidade foi avaliada usando um viscosímetro microVISC™. O raio hidrodinâmico foi medido usando um leitor de placas de Espalhamento de Luz Dinâmico (DLS) Wyatt DynaPro II. O tamanho da amostra preenchida nas placas foi 170 μL. Tabela 4: Formulação contendo 20 mg/mL de ZP1848-acetato em pH 7 com diferentes concentrações de acetato Formulação Histidina Manitol [mM] Acetato % Acetato [mM] # [mM] 1 230 15 6 20,3 2 230 15 7 23,7 3 230 15 8 27,1 4 230 15 9 30,5 5 230 15 10 33,9
6 230 15 11 37,3 7 230 15 12 40,7 8 230 15 13 44,0 9 230 15 14 47,4 10 230 15 15 50,8
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0125] A viscosidade e raio hidrodinâmico das formulações com concentração variada de acetato são mostrados na figura 2. Os resultados demonstram que a viscosidade da formulação de ZP1848-acetato aumenta inesperadamente, de uma maneira não linear, em concentração de acetato maior. Portanto, é vantajoso controlar a viscosidade em um nível baixo/não alterado, se a concentração total de acetato na formulação for menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP- 2, uma vez que isto abre a possibilidade de prover as formulações do análogo de GLP- 2 na forma de um dispositivo de liberação de fármaco. EXEMPLO 6: EFEITO DE SAIS DE TAMPÃO NA ESTABILIDADE DE FORMULAÇÕES DE ANÁLOGO DE GLP-2 ZP1848-ACETATO EM 2 E 20 MG/ML
[0126] Um estudo foi realizado para examinar os efeitos de sais de tampão diferentes na estabilidade de formulações de ZP1848-acetato (2 e 20 mg/mL). Todos os tampões estavam na concentração de 15 mM.
MATERIAIS E MÉTODOS
[0127] Soluções em estoque de manitol (700 mM), L-histidina (200 mM), glicina (400 mM), lisina (200 mM), TRIS (200 mM), bis-TRIS (200 mM), MOPS (100 mM), ácido succínico (200 mM), MES ácido (2-(N-morfolino)etanossulfônico) (200 mM), mesilato (200 mM), fosfato (200 mM) e peptídeo ZP1848 (sal de acetato; aproximadamente 50 mg/mL), em água (Milli-Q), foram preparadas. Soluções excipientes foram misturados em quantidades apropriadas para fornecer as formulações mostradas na tabela 5 e tabela 6 a seguir. Todas as formulações continham manitol 230 mM e tampão agente 15 mM. A solução em estoque do peptídeo foi adicionada. Água foi adicionada até 90 % do volume final. Se necessário, pH foi ajustado para pH 7 usando ácido acético 1 M/L-arginina 0,5 M. Água foi adicionada até o volume final. As formulações foram preenchidas em ampolas e colocadas em um estudo de estabilidade a 40 °C.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0128] De acordo com os resultados observados, agentes de tampão histidina, glicina, lisina, TRIS, Bis-TRIS, MOPS, mesilato e MES em concentração 15 mM foram aceitáveis para uso em formulações de ZP1848-acetato em 2 mg/mL e 20 mg/mL de peptídeo e pH 7,0. Tabela 5: Estabilidade de formulações preparadas com diferentes tampões Inspeção visual Formulação Teor de peptídeo Tampão Clara e não viscosa? 0 semanas 3 semanas (40 °C) 1 20 Histidina Sim Sim 2 20 Glicina Sim Sim 3 20 Lisina No Sim 4 20 TRIS Sim Sim 5 20 Bis-TRIS Sim Sim 6 2 Histidina Sim Sim 7 2 Glicina Sim Sim 8 2 Lisina Sim Sim 9 2 TRIS Sim Sim 10 2 Bis-TRIS Sim Sim 11 20 MOPS Sim Sim
Ácido 12 20 No No succínico 13 20 MES Sim Sim 14 20 Mesilato Sim Sim 15 20 Fosfato No No 16 2 MOPS Sim Sim Ácido 17 2 Sim No succínico 18 2 MES Sim Sim 19 2 Mesilato Sim Sim 20 2 Fosfato Sim No Tabela 6: Formação de oligômeros covalentemente ligados em formulações usando diferentes tampões
DLS Formulação Teor de peptídeo Tampão (média z, nm) 0 semanas 3 semanas (40 °C) 1 20 Histidina 1,6 1,7 2 20 Glicina 1,7 1,8 3 20 Lisina 41,9 4,4 4 20 TRIS 35,2 4,3 5 20 Bis-TRIS 1,7 1,7 6 2 Histidina 2,7 3,1 7 2 Glicina 2,4 3,6
8 2 Lisina 3,9 4 9 2 TRIS 3,8 4,1 10 2 Bis-TRIS 4,7 4,1 11 20 MOPS 2,3 2,5 Ácido 12 20 27,4 192,5 succínico 13 20 MES 2,3 3,2 14 20 Mesilato 25,5 4 15 20 Fosfato 21,1 244,5 16 2 MOPS 3,3 70,1 Ácido 17 2 82,5 259,3 succínico 18 2 MES 3,8 3,9 19 2 Mesilato 3,7 4,1 20 2 Fosfato 333,9 214,5
[0129] A formação de oligômeros covalentemente ligados foi avaliada em relação aos diferentes tampões (Tabela 6). Em 20 mg/mL de ácido succínico, formou-se um gel após 1 semana e não pode ser avaliado em 2 e 3 semanas de estabilidade. Em 2 mg/mL, o mesmo tampão apresentou uma formação significativamente maior (2,1 %) de oligômeros covalentemente ligados. A tendência geral é que as formulações de 2 mg/mL apresentam maior formação de oligômeros covalentemente ligados comparadas à 20 mg/mL após 3 semanas de armazenamento acelerado a 40 °C.
[0130] Tampão de fosfato e tampão de succinato não foram compatíveis com ZP1848-acetato em 2 e 20 mg/mL nestas formulações.
[0131] A estabilidade do peptídeo monomérico foi avaliada determinando a pureza de HPLC por 3 semanas de estabilidade a 40 °C.
Os resultados são apresentados na figura 3 e tabela 7. Devido à formação de gel previamente descrita, foi possível avaliar apenas ácido succínico para os primeiros pontos de tempo a 20 mg/mL.
Em relação a 2 mg/mL, os resultados podem ser obtidos para as três semanas testadas.
Apenas diferenças mínimas, não significativas, podem ser detectadas entre os tampões avaliados.
Assim, a escolha do tampão não parece afetar a estabilidade do monômero de peptídeo.
Tabela 7: Formação de oligômeros covalentemente ligados usando diferentes tampões a 40 ° por 0 até 3 semanas Tempo / semanas a 40 °C
Tampão Formulação Agente 0 1 2 3 %/semana
1 Histidina 0,14 0,40 0,55 0,69 0,18
2 Glicina 0,15 0,39 0,53 0,64 0,16
3 Lisina 0,15 0,38 0,51 0,64 0,16
4 TRIS 0,10 0,38 0,51 0,63 0,17
5 Bis-Tris 0,15 0,42 0,58 0,72 0,19
11 MOPS 0,14 0,38 0,49 0,59 0,15
12 Ácido succínico 0,14 0,40 Sem possibilidade de avaliar
13 MES 0,14 0,37 0,49 0,61 0,15 20 mg/mL
14 Mesilato 0,14 0,40 0,53 0,65 0,17
15 Fosfato Sem possibilidade de avaliar
6 Histidina 0,16 0,54 0,75 1,0 0,26 2 mg/mL
7 Glicina 0,16 0,49 0,69 0,79 0,21
8 Lisina 0,15 0,57 0,76 0,94 0,26 9 TRIS 0,15 0,52 0,71 0,84 0,23 10 Bis-Tris 0,19 0,81 1,19 1,5 0,43 16 MOPS 0,15 0,53 0,71 0,82 0,22 17 Ácido succínico 0,21 0,72 1,4 2,1 0,63 18 MES 0,16 0,57 0,75 0,88 0,23 19 Mesilato 0,16 0,60 0,82 1,0 0,26 20 Fosfato Sem possibilidade de avaliar EXEMPLO 7: EFEITO DE MODIFICADORES DE TONICIDADE NA ESTABILIDADE DE FORMULAÇÕES DE ANÁLOGO DE GLP-2 ZP1848-ACETATO EM 2 E 20 MG/ML
[0132] Um estudo foi realizado para avaliar os efeitos de diferentes modificadores de tonicidade na estabilidade de formulações de ZP1848-acetato (2 e 20 mg/mL).
MATERIAIS E MÉTODOS
[0133] Soluções em estoque de L-histidina (200 mM), sacarose (730 mM), glicerol (977 mM), D-sorbitol (801 mM), D-(+) Trealose desidratada (500 mM), D-manitol (700 mM) e peptídeo ZP1848-acetato (sal de acetato; aproximadamente 50 mg/mL) em água (Milli-Q) foram preparadas. Soluções excipiente foram misturadas em quantidades apropriadas para fornecer as formulações mostradas na tabela 8 abaixo. Todas as formulações continham histidina 15 mM. A solução em estoque de peptídeo foi adicionada, quando necessária, para fornecer o teor de peptídeo mostrado na tabela 8. Água foi adicionada até 90 % de volume final. Se necessário, pH foi ajustado para pH 7 usando ácido acético 1 M/L-arginina 0,5 M. Água foi adicionada até o volume final. Cada formulação foi preenchida em ampolas e colocada em estudos de estabilidade a 40 °C. Os recipientes da amostra foram inspecionados visualmente em relação à clareza e viscosidade e analisados por raio hidrodinâmico com análise DLS
(Espalhamento de Luz Dinâmico).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0134] De acordo com os resultados observados mostrados na tabela 8, manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose foram aceitáveis para uso nestas formulações com ZP1848-acetato, em 2 mg/mL e 20 mg/mL e pH 7,0. Tabela 8: Formulações preparadas usando diferentes modificadores de tonicidade Formulação Teor de Modificador de Inspeção visual peptídeo tonicidade Clara e não viscosa? 3 semanas 0 semanas (40 °C) 1 20 Manitol Sim Sim 2 20 Sacarose Sim Sim 3 20 Glicerol Sim Sim 4 20 Sorbitol Sim Sim 5 20 Trealose Sim Sim 6 2 Manitol Sim Sim 7 2 Sacarose Sim Sim 8 2 Glicerol Sim Sim 9 2 Sorbitol Sim Sim 10 2 Trealose Sim Sim
[0135] Formação de oligômeros covalente foi medida pela formulação 1 a 10 por até 3 semanas a 40 °C. Os resultados são mostrados na tabela 9. Diferenças na formação de oligômeros covalentes para as dez formulações pode ser observada já após 1 semana de teste de estabilidade. Adicionalmente, a taxa (inclinação) é razoavelmente consistente em todo o período testado. Formulação 3 (20 mg/mL -
Glicerol), 7 (2 mg/mL - Sacarose), 8 (2 mg/mL -Glicerol), 9 (2 mg/mL - Sorbitol) apresenta uma formação significativamente maior de oligômeros covalentemente ligados do que as outras. Manitol forneceu a menor formação de oligômeros covalentemente ligados. A tendência geral é de que 2 mg/mL apresenta uma maior formação de oligômeros covalentemente ligados, comparado à 20 mg/mL para todos os agentes de tonicidade investigados. Tabela 9: Formação de oligômeros covalentemente ligados de formulação 1-10 a 40 °C por 0 até 3 semanas Tempo / semanas a 40 °C Formulação Agente de tonicidade 0 1 2 3 %/semana 1 Manitol 0,22 0,40 0,57 0,90 0,22 2 Sacarose 0,27 0,50 0,84 1,3 0,34 3 Glicerol 0,6 2,0 2,8 4,0 1,11 20 mg/mL 4 Sorbitol 0,25 0,60 0,84 1,1 0,28 5 Trealose 0,26 0,60 0,90 1,3 0,34 6 Manitol 0,34 0,70 0,90 1,2 0,28 7 Sacarose 0,37 1,4 2,7 4,3 1,31 8 Glicerol 1,8 12,2 16,4 21,5 6,34 9 Sorbitol 0,51 1,9 2,8 3,8 1,08 2 mg/mL 10 Trealose 0,45 1,1 1,9 2,9 0,81
[0136] A estabilidade do peptídeo monomérico foi avaliada determinando a pureza de HPLC por 3 semanas de estabilidade a 40 °C. Similar aos oligômeros covalentemente ligados, a estabilidade química durante o uso de glicerol é fraca e desvia-se dos outros agentes de tonicidade. Os resultados são apresentados na figura
5 e a figura 6. EXEMPLO 8: IMPACTO DA ESTABILIDADE FÍSICA DE ÁCIDOS E
BASES USADOS PARA AJUSTE DE PH EM FORMULAÇÕES DE ANÁLOGO DE GLP-2 ZP1848-ACETATO
MATERIAL E MÉTODOS
[0137] Soluções em estoque de manitol, histidina e peptídeo ZP1848-acetato em água foram preparadas. Soluções em estoque de manitol e histidina foram adicionadas à água e misturadas, e a solução de peptídeo foi adicionada para fornecer um teor de peptídeo final de 10 mg/mL. Água foi adicionada até 90 % de volume final. O pH foi então ajustado para pH 7 usando arginina 250 mM/AcOH 1 M ou NaOH 1 M/HCl 1 M (vide tabela 10). Água foi adicionada até volume final. Cada formulação foi preenchida em ampolas para teste de estabilidade e colocadas em estudos de estabilidade a 5 °C, 25 °C e 40 °C. Os recipientes da amostra foram inspecionados visualmente em relação à clareza e viscosidade.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0138] Os resultados exibidos na tabela 10 mostram que o uso de NaOH 1 M/ HCl 1 M para ajuste de pH apresentam um efeito adverse na estabilidade física da formulação de ZP1848-acetato. Tabela 10: Efeito de ácido/base na estabilidade física Formu Agente de ajuste de Inspeção visual lação pH Clara e não viscosa? Tempo 40 °C 25 °C 5 °C zero 4 26 52 semanas semanas semanas 1 L-Arg 0,25 M/AcOH 1M Sim Sim Sim Sim Não 2 NaOH 1M/HCl 1M Sim Sim Sim (precipitou em 13 semanas) EXEMPLO 9: USO DE SAL DE ACETATO DE PEPTÍDEO ZP1848 E SAL DE CLORETO DE PEPTÍDEO ZP1848 PARA FORMULAÇÕES DE ANÁLOGO DE GLP-2 DE PEPTÍDEO ZP1848
[0139] Um estudo foi realizado para avaliar o efeito de sais usando sal de acetato de peptídeo ZP1848 e sal de cloridrato de peptídeo ZP1848 em formulações selecionadas de ZP1848. Os efeitos do tipo de sal, concentração, tampão e modificadores de tonicidade foram examinados após armazenamento acelerado a 40 °C. A síntese de sal de sódio de peptídeo ZP1848 foi pretendida, mas não foi observada como possível.
MATERIAIS E MÉTODOS
[0140] Soluções em estoque de manitol (700 mM), histidina (200 mM), sorbitol (700 mM), mesilato (200 mM), e solução de peptídeo ZP1848 (sal de cloreto; aproximadamente 50 mg/mL) em água Milli-Q foram preparadas. Soluções de excipiente foram misturadas em quantidades apropriadas para fornecer as formulações mostradas na tabela 11 e tabela 12 abaixo. A solução em estoque de peptídeo foi adicionada para fornecer o teor de peptídeo final desejado. Água foi adicionada até 90 % de volume final. Se necessário, pH foi então ajustado ao pH desejado da formulação usando ácido acético 1 M/L-arginina 0,5 M. Água foi adicionada até o volume final. Cada formulação foi preenchida em ampolas e colocada em estudos de estabilidade a 40 °C. Os recipientes da amostra foram inspecionados visualmente em relação à clareza e viscosidade e analisados por raio hidrodinâmico com DLS.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0141] Os resultados exibidos nas tabelas 11 e 12 mostram que a média Z, viscosidade e a aparência visual das formulações 1, 2, 3 e 4 apresentaram estabilidade não alterada após 3 semanas a 40 °C, da maneira avaliada pela aparência visual e DLS.
A formulação 5 exibiu alterações na estabilidade durante o tempo, da maneira avaliada pela média Z, viscosidade e a aparência visual.
Tabela 11: Efeito de tipo de sal de peptídeo Número Sal de Teor Manit Histidi Sorbit Mesila Inspeção visual da peptíd de ol na ol to Clara e não formulaç eo Peptíd viscosa? ão: eo 3 0 seman seman as (40 as °C) 1 sal de acetat o de 20 230 15 - - Sim Sim ZP184 8 2 sal de cloreto de 20 230 15 - - Sim Sim ZP184 8 3 sal de cloreto de 2 230 15 - - Sim Sim ZP184 8 4 sal de cloreto 20 - 15 230 - Sim Sim de ZP184
5 sal de cloreto de 20 230 - - 15 Não Não ZP184 8 Tabela 12: Efeito de tipo de sal de peptídeo Formula Sal de Teor Manit Histidi Sorbit Mesila DLS (média z, ção peptíd de ol na ol to nm) eo Peptíd 3 eo 0 seman seman as (40 as °C)
sal de acetat 1 o de 20 230 15 - - 1,5 2,1 ZP184 8
2 sal de cloreto de 20 230 15 - - 2,3 3,3 ZP184 8
3 sal de cloreto 2 230 15 - - 2,7 2,8 de ZP184
4 sal de cloreto de 20 - 15 230 - 2,2 3,3 ZP184 8 5 sal de cloreto de 20 230 - - 15 24,1 6,9 ZP184 8
[0142] A estabilidade química das formulações 1 a 5 foi acompanhada por até 4 semanas a 40 °C. A pureza obtida foi normalizada na liberação para 100 %. Os resultados são mostrados n
[0143] A figura . Nenhuma diferença significativa na estabilidade química do monômero de peptídeo foi observada para formulações 1, 2, 4 e 5. Formulação 3 mostrou uma estabilidade química um pouco menor, mas aceitável, após 4 semanas e isso é provavelmente causado pela menor concentração desta formulação.
[0144] A formação de oligômeros covalentes foi medida para as formulações 1 a 5 por até 4 semanas a 40 °C. Os resultados são mostrados na tabela 13. As diferenças na formação de oligômeros covalentes para as cinco formulações podem ser observadas mesmo após 1 semana de teste para estabilidade. Adicionalmente, a taxa (inclinação) é razoavelmente consistente em todo o período testado. Formulação 1 (20 mg/mL, sal de acetato de ZP1848, histidina como agente de tonicidade) foi a formulação mais estável, com formação de aproximadamente 1,1 % de oligômeros covalentes após 4 semana de estabilidade a 40 °C. Formulação 5 (20 mg/mL, sal de cloreto de ZP1848, mesilato como agente de tonicidade) foi a segunda formulação mais estável, com aproximadamente 2,1 % de formação de oligômeros covalentes após 4 semana de estabilidade a 40 °C. A terceira mais estável foi a formulação 3 (2 mg/mL, sal de cloreto de ZP1848, histidina como agente de tonicidade). A quarto mais estável é formulação 2 (20 mg/mL, sal de cloreto de ZP1848, histidina como agente de tonicidade). A formulação menos estável é a formulação 4 (20 mg/mL, sal de cloreto de ZP1848, sorbitol como agente de tonicidade).
[0145] Uma pequena tendência de estabilidade inferior durante o uso de sorbitol comparado ao manitol foi observada previamente para o sal de acetato de ZP1848 após 3 semanas a 40 °C (0,9 % para manitol e 1,1 % para sorbitol), vide exemplo 7. A diferença entre uma formulação contendo sorbitol e manitol é mais evidente ao comparar os sais de acetato e de cloreto, onde a formulação contendo sal de cloreto e sorbitol em 20 mg/mL apresenta aproximadamente 3,9 % de formação de oligômeros covalentes. Ao comparar 2 mg/mL e 20 mg/mL de formulação do sal de cloreto, a formação de oligômeros covalentes foi 2,4 % para 2 mg/mL (aumento de 0,53 % por semana) e 3,3 % para 20 mg/mL (aumento de 0,75 % por semana) após 4 semanas a 40 °C. Isto é surpreendente, uma vez que não é observado para o sal de acetato. Em relação ao sal de acetato a 20 mg/mL, a formação de oligômeros covalentes após 3 semanas a 40 °C foi 0,9 % (aumento de 0,21 % por semana), enquanto que em 2 mg/mL é 1,2 % (aumento de 0,27 % por semana). Esta maior formação de oligômeros covalentemente ligados nas concentrações inferiores do sal de acetato também está de acordo com o que é observado durante estabilidade a longo prazo. Entretanto, em relação ao sal de cloreto, a situação foi revertida com maior formação de oligômeros covalentemente ligados com aumento da concentração de ZP1848. Tabela 13: Formação de oligômeros covalentemente ligados de formulação 1-5 a 40 °C para 0 a 4 semanas Tempo / Semanas a 40 °C Taxa 0 1 2 3 4 %/semana Formulação 1 0,13 0,43 0,67 0,89 1,1 0,24
Formulação 2 0,22 1,5 2,2 2,8 3,3 0,75 Formulação 3 0,22 0,99 1,5 1,9 2,4 0,53 Formulação 4 0,23 1,7 2,5 3,4 3,9 0,91 Formulação 5 0,22 0,86 1,3 1,6 2,1 0,44 EXEMPLO 10: USO DE SAL DE ACETATO DE PEPTÍDEO ZP1848 E CONSERVANTES PARA FORMULAÇÕES DE ANÁLOGO DE GLP-2 DE PEPTÍDEO ZP1848 EM 20 MG/ML
[0146] Um estudo foi realizado para avaliar a compatibilidade de sal de acetato de peptídeo ZP1848 e conservantes comumente usados. Os efeitos de conservante e temperatura foram examinados após armazenamento acelerado.
MATERIAIS E MÉTODOS
[0147] Soluções em estoque de manitol (700 mM), histidina (200 mM) e solução de peptídeo ZP1848 (sal de acetato; aproximadamente 50 mg/mL) em água Milli-Q foram preparadas. A concentração final de peptídeo foi 20 mg/mL, manitol 230 mM, histidina 15 mM. As soluções de conservante foram misturadas em quantidades apropriadas para fornecer as formulações mostradas na tabela 14 abaixo. A solução em estoque de peptídeo foi adicionada para fornecer o conteúdo de peptídeo final desejado. Água foi adicionada até 90 % de volume final. Se necessário, pH foi então ajustado ao pH desejado da formulação usando ácido acético 1 M/L-arginina 0,5 M. Água foi adicionada até o volume final. Cada formulação foi preenchida em ampolas. Os recipientes da amostra foram inspecionados visualmente em relação à clareza e viscosidade e analisados em relação aos oligômeros covalentemente ligados por SEC, e estabilidade de monômero de peptídeo por HPLC.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0148] Os resultados do estudo são listados na tabela 14, tabela 15 e na figura 8. As formulações não foram observadas sendo afetadas pela adição de um conservante, comparadas à formulação 1, onde nenhum conservante é adicionado.
[0149] Estabilidade química foi avaliada por determinação dos oligômeros covalentemente ligados e a estabilidade do monômero de peptídeo (pureza). Formulação 4 (sorbato de potássio) apresentou uma maior formação dos oligômeros covalentemente ligados, mas está na faixa aceitável.
Todas as outras formulações apresentam quantidade similar de oligômeros covalentemente ligados.
A pureza normalizada após 13 semanas a 25 °C mostra que o ZP1848-acetato apresenta a estabilidade similar novamente com a formulação 4, apresentando uma pureza um pouco inferior, mas aceitável.
Tabela 14: Efeito de triagem de conservante a 25 °C por 26 semanas Inspeção visual Clara e não Sorbato Número da Cloreto de Metil viscosa? de formulação: benzalcônio parabeno 26 potássio 0 semanas semanas (25 °C) 1 - - - Clara Clara 2 0,02 % - - Clara Clara 3 - 0,2 % - Clara Clara 4 - - 0,2 % Clara Clara Tabela 15 Formação de oligômeros covalentemente ligados por conservantes diferentes em 25 °C por 13 semanas Tempo / Semanas em 25 °C Taxa 0 2 4 8 13 %/semana Formulação 1 0,12 0,27 0,35 0,47 0,62 0,04 Formulação 2 0,13 0,26 0,35 0,48 0,59 0,03 Formulação 3 0,14 0,34 0,49 0,79 1,15 0,08 Formulação 4 0,14 0,93 1,73 3,46 5,4 0,41 EXEMPLO 11: USO DE SAL DE ACETATO DE PEPTÍDEO ZP1848 E CONSERVANTES PARA FORMULAÇÕES DE ANÁLOGO DE GLP-2 DE
PEPTÍDEO ZP1848 EM 2 E 20 MG/ML
MATERIAIS E MÉTODOS
[0150] Soluções em estoque de manitol (700 mM), histidina (200 mM), e solução de peptídeo ZP1848 (sal de acetato; aproximadamente 50 mg/mL) em água Milli-Q foram preparadas. A concentração final de peptídeo foi 20 e 2 mg/mL, manitol 230 mM, e histidina 15 mM. Soluções conservante (m-cresol e fenol) foram misturadas em quantidades apropriadas para fornecer as formulações mostradas na tabela 14 abaixo. Água foi adicionada até 90 % de volume final. Se necessário, pH foi então ajustado ao pH desejado da formulação (7,0) usando ácido acético 1 M/L-arginina 0,5 M. Água foi adicionada até o volume final. Cada formulação foi preenchida em ampolas. Os recipientes da amostra foram inspecionados visualmente em relação à clareza e viscosidade e analisados em relação à estabilidade de monômero de peptídeo por HPLC.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
[0151] Os resultados do estudo são listados na tabela 16 abaixo. Todas as formulações foram testadas em relação à estabilidade a longo prazo a 5 °C por 52 semanas. Todas as soluções testadas permaneceram claras e não viscosas através do cronograma investigado. Tabela 16: Formulações testadas em relação à aparência física após 52 semanas de estabilidade a 5 °C Inspeção visual Clara e não viscosa? Número da m-cresol fenol mg/mL 52 formulação: (mg/mL) (mg/mL) 0 semanas semanas (5 °C) 1 2 0 0 Clara Clara 2 2 3.2 0 Clara Clara 3 2 0 5,5 Clara Clara
[0152] Avaliação de ZP1848-acetato após estabilidade acelerada a 25 °C por
HPLC é mostrada na figura 9. Uma estabilidade química um pouco inferior é observada em relação à formulação contendo fenol e o m-cresol obteve uma estabilidade química similar à formulação não conservada. Na estabilidade a longo prazo a 5 °C, nenhuma diferença aparente pode ser observada para as amostras após 12 meses de estabilidade, e todas as amostras apresentam uma pureza normalizada de ZP1848-acetato acima de 94 % (dados não mostrados). Portanto, todas as formulações investigadas são estáveis por pelo menos 52 semanas de estabilidade a longo prazo.
[0153] Embora a presente invenção tenha sido descrita em conjunto com as modalidades supradescritas, muitas modificações e variações equivalentes serão evidentes para os versados na técnica quando fornecida esta divulgação. Desta maneira, as modalidades da invenção apresentadas são consideradas como ilustrativas e não limitantes. Várias alterações para as modalidades descritas podem ser realizadas sem fugir do espírito e escopo da invenção. Todos os documentos aqui citados são expressamente incorporados pela referência na sua íntegra para todos os propósitos.

Claims (71)

REIVINDICAÇÕES
1. Formulação farmacêutica líquida estável, caracterizada por a formulação compreender um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila; X5 é Ser ou Thr; X11 é Ala ou Ser; R2 é NH2 ou OH; e Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em que a formulação compreende: (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados.
2. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP2 na formulação ser menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2.
3. Formulação, de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, caracterizada por a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 ser inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
4. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada por a formulação ser uma formulação aquosa.
5. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada por a formulação ser estável por pelo menos 18 meses quando armazenada em 2-8 ºC.
6. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação ter uma viscosidade entre 0,8 e 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
7. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o análogo de GLP-2 estar presente na formulação em uma concentração de cerca de 15 mg/mL até cerca de 25 mg/mL.
8. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação ser uma formulação pronta para uso.
9. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o análogo de GLP-2 estar presente na formulação em uma concentração de cerca de 20 mg/mL.
10. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o tampão estar presente na formulação em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 25 mM.
11. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o tampão ser um tampão de histidina.
12. Formulação, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada por o tampão de histidina estar presente na formulação em uma concentração de cerca de 15 mM.
13. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o modificador de tonicidade não iônico estar presente na formulação em uma concentração de cerca de 150 mM até cerca de 250 mM.
14. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o modificador de tonicidade não iônico ser manitol.
15. Formulação, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada por o manitol estar presente na formulação em uma concentração de cerca de 230 mM.
16. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação ter um pH de cerca de 6,8 até cerca de 7,2.
17. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação ter um pH de cerca de 7,0.
18. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação consistir no análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato e um tampão de acetato, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM, um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol e sorbitol em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM, arginina em quantidade suficiente para prover um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4.
19. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação compreender o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, o tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, o manitol em uma concentração de cerca de 230 mM e a arginina em quantidade suficiente para prover um pH de cerca de 7,0.
20. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o tampão de histidina ser L-histidina.
21. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o manitol ser D-manitol.
22. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o ácido arginina ser L-arginina/ácido acético.
23. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação ser livre de agente de redução.
24. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação ser estável em 2-8 °C por pelo menos 6 meses, pelo menos 12 meses, pelo menos 18 meses ou pelo menos 24 meses.
25. Formulação, de acordo com a reivindicação 24, caracterizada por o análogo de GLP-2 na formulação reter pelo menos cerca de 90 % de sua atividade biológica depois de 18 meses de armazenamento em 2-8 °C.
26. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por ser estéril.
27. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação compreender administração em um sujeito por injeção.
28. Formulação, de acordo com a reivindicação 27, caracterizada por a injeção ser uma injeção subcutânea.
29. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o análogo de GLP-2 ser provido como um sal de acetato.
30. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por o análogo de GLP-2 ser ZP1848 ou ZP1848-acetato.
31. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a formulação consistir em ZP1848-acetato em uma concentração de cerca de 20 mg/mL, tampão de histidina em uma concentração de cerca de 15 mM, manitol em uma concentração de cerca de 230 mM, e arginina em quantidade suficiente para prover um pH de cerca de 7,0.
32. Artigo de fabricação ou kit, caracterizados por compreenderem um contêiner que mantém a formulação farmacêutica estável, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 31.
33. Dispositivo de liberação, caracterizado por conter uma formulação líquida que compreende um análogo de GLP-2, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 31.
34. Dispositivo de liberação, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado por o dispositivo de liberação ser seringa pré-carregada, um dispositivo injetor, uma caneta injetora, um autoinjetor de dose ajustável, um autoinjetor descartável, um injetor vestível, uma bomba de infusão.
35. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizada por ser para uso em terapia.
36. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizada por ser para uso em um método para o tratamento e/ou a prevenção de uma disfunção relacionada ao estômago e ao intestino em um paciente humano.
37. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso no método de tratamento e/ou prevenção, de acordo com a reivindicação 36, caracterizada por a disfunção relacionada ao estômago e ao intestino compreender úlceras, disfunções da digestão, síndromes da má absorção, síndrome do intestino curto, síndrome fundo de saco, doença do intestino inflamatório, esprú celíaco (por exemplo, que surge a partir de enteropatia induzida por glúten ou doença celíaca), esprú tropical, esprú hipogamaglobulinêmico, enterite, enterite regional (doença de Crohn), colite ulcerativa, dano do intestino delgado ou síndrome do intestino curto (SBS).
38. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2)
para uso no método de tratamento e/ou prevenção, de acordo com a reivindicação 37, caracterizada por a disfunção relacionada ao estômago e ao intestino ser síndrome do intestino curto.
39. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com a reivindicação 36, caracterizada por a disfunção relacionada ao estômago e ao intestino ser enterite de radiação, enterite infecciosa ou pós-infecciosa, ou dano do intestino delgado devido a agentes tóxicos ou outros agentes quimioterapêuticos.
40. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com a reivindicação 39, caracterizada por o tratamento com o análogo de GLP-2 ser combinado com uma ou mais terapias anticâncer.
41. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com a reivindicação 40, caracterizada por o tratamento da terapia anticâncer compreender administrar um ou mais agente(s) quimioterapêutico(s) no o paciente ou tratar o paciente com radioterapia.
42. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com a reivindicação 40 ou a reivindicação 41, caracterizada por a formulação ser usada no tratamento e/ou na prevenção de um efeito colateral da quimioterapia ou do tratamento por radiação.
43. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com a reivindicação 42, caracterizada por o efeito colateral da quimioterapia ser diarreia, cólica abdominal, vômito ou dano estrutural e funcional do epitélio intestinal resultantes a partir do tratamento de quimioterapia.
44. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 43, caracterizada por o paciente humano ser um paciente que tem falha intestinal SBS.
45. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 44, caracterizada por o paciente humano ser um paciente que está na fronteira entre ser um paciente que tem insuficiência intestinal SBS e falha intestinal SBS.
46. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 45, caracterizada por o método compreender administrar o análogo de GLP-2 ao paciente uma vez por semana.
47. Formulação do análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) para uso em um método para o tratamento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 29 a 43, caracterizada por o método compreender administrar o análogo de GLP-2 ao paciente duas vezes por semana.
48. Processo para produzir uma formulação farmacêutica líquida estável, caracterizado por compreender um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em que o processo compreende formular (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, (b) com um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) com um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose, o modificador de tonicidade não iônico estando presente em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) com arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados.
49. Processo, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado por a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 ser inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
50. Processo, de acordo com a reivindicação 48 ou a reivindicação 49, caracterizado por a formulação ficar estável por pelo menos 18 meses quando armazenada em 2-8 ºC.
51. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 50, caracterizado por a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP2 na formulação ser menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2.
52. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 51, caracterizado por a formulação ter uma viscosidade mais alta do que 0,8 e mais baixa do que ou igual a 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
53. Uso de uma formulação, caracterizado por compreender um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-
Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; para prover uma formulação farmacêutica líquida que fica estável por 24 meses quando armazenada em 2-8 ºC, em que a formulação compreende: (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados.
54. Uso, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado por a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 ser inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
55. Uso, de acordo com a reivindicação 53 ou a reivindicação 54, caracterizado por a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP2 na formulação ser menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2.
56. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 54, caracterizado por a formulação ter uma viscosidade entre 0,8 e 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
57. Método para modular a viscosidade de uma formulação farmacêutica líquida estável que compreende um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; caracterizado por o método compreender formular (a) o análogo de GLP- 2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, (b) com um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris ou um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) com um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose, o modificador de tonicidade não iônico estando presente em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) com arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP2 na formulação é menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2 e em que a formulação tem uma viscosidade mais alta do que 0,8 e mais baixa do que ou igual a 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
58. Método para reduzir a formação de produtos oligoméricos covalentemente ligados de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP- 2) em uma formulação farmacêutica líquida estável que compreende um análogo de GLP-2 representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; caracterizado por o método compreender formular (a) o análogo de GLP- 2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL, (b) com um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris ou um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) com um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose, o modificador de tonicidade não iônico estando presente em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) com arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados.
59. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado por a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 ser inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
60. Uso de uma formulação, caracterizado por reduzir a formação de produtos oligoméricos covalentemente ligados de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo; em uma formulação farmacêutica líquida que fica estável por 24 meses quando armazenada em 2-8 ºC, em que a formulação compreende: (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados.
61. Uso, de acordo com a reivindicação 60, caracterizado por a formação de oligômeros covalentemente ligados do análogo de GLP-2 ser inversamente dependente da concentração do análogo de GLP-2 na formulação.
62. Uso de uma formulação, caracterizado por ser para modular a viscosidade de uma formulação farmacêutica líquida que compreende um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2), em que o análogo de GLP-2 é representado pela fórmula: R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala- Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2 em que: R1 é hidrogênio, alquila C1-4 (por exemplo, metila), acetila, formila, benzoíla ou trifluoroacetila X5 é Ser ou Thr X11 é Ala ou Ser R2 é NH2 ou OH; Z1 e Z2 estão independentemente ausentes ou são uma sequência de peptídeo de 1-6 unidades de aminoácido de Lys; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um derivado do mesmo;
em uma formulação farmacêutica líquida que fica estável por 24 meses quando armazenada em 2-8 ºC, em que a formulação compreende: (a) o análogo de GLP-2 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a concentração total de acetato que surge a partir do análogo de GLP2 na formulação é menor do que ou igual a 11 % de acetato por mg do análogo de GLP-2 e a formulação tem uma viscosidade entre 0,8 e 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
63. Composição sólida, caracterizada por compreender um sal de acetato de um análogo de peptídeo semelhante a glucagon 2 (GLP-2) que tem a fórmula: (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH3COOH), em que x é 1,0 até 8,0.
64. Composição sólida, de acordo com a reivindicação 63, caracterizada por x ser de 4,0 até 6,0.
65. Composição sólida, de acordo com a reivindicação 63, caracterizada por x ser de 2,0 até 7,0.
66. Composição sólida, de acordo com a reivindicação 63, caracterizada por x ser de 3,0 até 6,0.
67. Composição sólida, de acordo com a reivindicação 63, caracterizada por x ser de 4,0 até 6,0.
68. Composição sólida, de acordo com a reivindicação 63, caracterizada por x ser de 4,0 até 8,0.
69. Formulação farmacêutica aquosa estável, caracterizada por a formulação compreender: (a) a composição sólida como definido nas reivindicações 63 até 67 em uma concentração de cerca de 2 mg/mL até cerca de 30 mg/mL; (b) um tampão selecionado a partir do grupo que consiste em um tampão de histidina, um tampão de mesilato, um tampão de acetato, um tampão de glicina, um tampão de lisina, um tampão TRIS, um tampão Bis-Tris e um tampão MOPS, o tampão estando presente em uma concentração de cerca de 5 mM até cerca de 50 mM; (c) um modificador de tonicidade não iônico selecionado a partir do grupo que consiste em manitol, sacarose, glicerol, sorbitol e trealose em uma concentração de cerca de 90 mM até cerca de 360 mM; e (d) arginina em quantidade suficiente para prover uma formulação que tem um pH de cerca de 6,6 até cerca de 7,4; em que a formulação contém 5 % ou menos do análogo de GLP-2 na forma de produtos oligoméricos covalentemente ligados e em que a formulação tem uma viscosidade entre 0,8 e 2,0 mPa/seg medida em 25 ºC.
70. Formulação, de acordo com a reivindicação 68, caracterizada por a formulação ficar estável por pelo menos 18 meses quando armazenada em 2-8 ºC.
71. Formulação, de acordo com a reivindicação 69, caracterizada por o análogo de GLP-2 na formulação reter pelo menos cerca de 90 % de sua atividade biológica depois de 18 meses de armazenamento em 2-8 °C.
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