KR20210069056A - 글루카곤-유사 펩타이드 2 (glp-2) 유사체의 제형 - Google Patents

글루카곤-유사 펩타이드 2 (glp-2) 유사체의 제형 Download PDF

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Abstract

액체로서의 장기 저장에 적합하게 만들고/만들거나 약물 전달 장치에 의한 전달에 특히 적합하게 만드는 GLP-2 유사체의 액체 제형이 기술된다. 액체 제형을 제조하는데 유용한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 아세테이트 염을 포함하는 고체 조성물이 또한 기술된다. 이러한 액체 제형의 개발은 GLP-2 유사체에서 유래한 제형에 존재하는 아세테이트가 GLP-2 유사체의 2-8 ℃에서 장기간 저장하는 동안 제형의 점도에 영향을 미치고, 공유 올리고머 형성에 대한 농도 의존성은 GLP-2 유사체의 농도 증가에 반비례한다는 발견에 기초하며, 제형에 사용된 GLP-2 유사체는 재구성된 분말 또는 동결 건조된 GLP-2 조성물을 위해 선행 기술에서 일반적으로 사용되는 인산염 완충액과 호환되지 않는다는 발견을 기반으로 한다.

Description

글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형
본 발명은 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형 및 이들의 의학적 용도, 예를 들어 위 및 장 관련 장애의 치료 및/또는 예방 그리고 화학 요법 및 방사선 치료의 부작용 개선에 관한 것이다. 또한, 액체 제형을 제조하는데 유용한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 아세테이트 염을 포함하는 고체 조성물도 기재한다.
인간 GLP-2는 다음과 같은 서열을 가진 33 개 아미노산 펩타이드이다 : Hy-His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn -Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-OH. 상기 펩타이드는 창자의 장내분비 L 세포 및 뇌간의 특정 영역에서 프로글루카곤(proglucagon)의 특정 번역 후 가공(post-translational processing)으로부터 유래된다. GLP-2는 클래스 II 글루카곤 세크레틴(secretin) 패밀리에 속하는 단일 G-단백질 결합 수용체에 결합한다.
GLP-2는 움(crypts)에서 줄기 세포 증식 자극을 통하여 융모의 세포자연사 (apoptosis)를 억제함으로써 소장 점막 상피의 상당한 성장을 유도하는 것으로 보고되었다 (Drucker et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci USA 93 : 7911-7916). GLP-2는 또한 결장(colon)에 성장 효과를 준다. 또한, GLP-2는 위 배출(gastric emptying) 및 위산 분비를 억제하고 (Wojdemann et al., 1999, J. Clin. Endocrinol. Metab. 84 : 2513-2517), 장 장벽 기능을 향상시키며 (Benjamin et al., 2000, Gut 47 : 112-119), 포도당 수송체(glucose transporters)의 상향 조절을 통해 장내 육탄당 수송을 자극하고 (Cheeseman, 1997, Am. J. Physiol. R1965-71) 장내 혈류를 증가시킨다 (Guan et al., 2003, Gastroenterology, 125 : 136- 147).
글루카곤-유사 펩타이드 2 수용체 유사체는 장 질환의 치료에 대한 치료 가능성을 갖는 것은 당업계에 알려져 있다. 그러나 33 개 아미노산의 위장 펩타이드인, 천연 hGLP-2 (native hGLP-2)는 전장(full-length) GLP-2[1-33]의 경우에는 약 7 분 및 절단된 (truncated) GLP-2[3-33]의 경우에는 약 27분의 인간에서의 매우 짧은 반감기 때문에 임상 환경에서 유용하지 않다. 대부분의 경우, 짧은 반감기는 다이펩티딜펩티다아제 IV (dipeptidylpeptidase IV ; DPP-IV) 효소에 의한 분해 때문이다. 따라서, 특히 GLP-2 분자의 반감기를 향상하기 위하여, 더 나은 약동학적 특성을 갖는 GLP-2 수용체 작용제를 개발하려는 시도가 당업계에 있었다. 예를 들어, 반감기를 7 분 (천연 GLP-2)에서 약 2 시간으로 증가시키는, 위치 2에서 Gly 치환을 포함하는 GLP-2 유사체 ([hGly2] GLP-2, 테두글루타이드 (teduglutide))와 같은, 치환을 갖는 GLP-2 유사체가 제안되고 있다. 지방산 사슬을 가진 펩타이드 약물의 아실화 (acylation)는 또한 생물학적 효능을 방해하지 않으면서 효소 안정성을 증가시킬뿐만 아니라, 전신 순환을 연장시키는데 유익한 것으로 입증되었다. 그러나, 이러한 시도는 GLP-2 유사체의 약동학을 개선하고, 때때로 당업계에서 "지속성 (long acting)"으로 기술되지만, 이는 몇 분이 아닌 몇 시간의 반감기를 갖는 천연 hGLP-2와 비교된다는 것을 명심해야 한다. 이는 GLP-2 유사체가 여전히 하루에 한 번 이상 환자에게 투여되어야 함을 의미한다.
US 5,789,379는 주사 투여용 GLP-2 유사체를 개시한다. 유사체를 분말 펩타이드로 제공하고 GLP-2 농도 130 mg/ml로 pH 7.3-7.4에서 주입하기 전에 인산염 완충액 (PBS)과 혼합하였다. 경우에 따라서는, PBS/15 % 젤라틴의 130 mg/l GLP-2의 용액으로 형성된 데포 (depot)를 제공하기 위하여 GLP-2/PBS 조성물을 젤라틴과 혼합하였다. US 5,789,379는 GLP-2 유사체의 안정한 수성 액체 제형을 개시하지 않았으며, GLP-2 유사체는 일반적으로 주사 전에 분말로부터 재구성된다.
WO 97/39031 및 US 6,184,201에는, GLP-2 유사체인 [Gly2] GLP-2가 개시되었다. 상기, DPP IV 절단에 저항성을 갖는 펩타이드로 만들기 위하여 위치 2의 알라닌은 글리신으로 대체되었다. US 5,789,379와 마찬가지로, GLP-2 유사체는 분말 펩타이드로 제공되고, 주입 전에 식염수, PBS 또는 5 % 덱스트로스와 혼합되며, 선택적으로 용해도 향상제로서 아세트산을 첨가하였다.
WO 02/066511은 생체 내에서 연장된 반감기를 갖는 GLP-2 유사체 및 염증성 장 질환 (inflammatory bowel diseases)과 같은 위장 장애 (gastrointestinal disorders)의 치료에서 약제로서의 용도를 개시한다. GLP-2 유사체를 동결 건조된 형태로 저장하고, 배지에서 투여하기 위하여 예를 들어, 식염수 또는 PBS를 사용하여 재구성하였다.
WO 01/41779는 화학 요법으로 유도된 세포자연사 (apoptosis)를 억제하고 세포 생존을 촉진하기 위한 전처리로서의 h[Gly2] GLP-2 용도를 개시하였다. h[Gly2] GLP-2는 PBS로 유사체를 재구성한 후, 피하 또는 정맥 주사 또는 주입 (infusion)에 의해 전달된다.
WO 2001/049314는 저장 및/또는 고온에 노출된 후 우수한 안정성을 나타내는 GLP-2 펩타이드 및 이의 유사체의 제형에 관한 것이다. GLP-2 조성물은 GLP-2 펩타이드 또는 이의 유사체, 인산염 완충액, L-히스티딘 및 만니톨을 포함한다.
WO 2006/117565는 [hGly2] GLP-2와 비교하여 하나 이상의 치환을 포함하며 in vivo 생물학적 활성을 개선 및/또는 예를 들어, in vitro 안정성 분석에서 평가된 화학적 안정성을 개선한 GLP-2 유사체를 개시한다. 특히, 야생형 GLP-2 서열의 위치 8, 16, 24 및/또는 28 중 하나 이상에서 치환을 갖으며, 선택적으로 위치 2 및 위치 3, 5, 7, 10 및 11에서 하나 이상의 추가 치환 및/또는 31 내지 33 아미노산의 하나 이상의 결실을 조합할 수 있는 GLP-2 유사체를 개시하였다. 또한, 상기 치환은 N-말단 또는 C-말단 안정화 펩타이드 서열의 추가와 조합될 수 있다. 또한, 이들 GLP-2 유사체의 하루에 한 번 또는 두 번 투여도 개시하였다. WO 2006/117565에 개시된 분자 중에는 액체 제형에서 안정하도록 설계된 글레파글루타이드 (glepaglutide)(ZP1848)가 있으며, 일반적으로 주입펜 (injection pen)을 사용하여 매일 투여한다.
특히 활성 단량체 형태의 펩타이드의 과도한 수준의 물리적 또는 화학적 분해없이 장기간 보관할 수 있는 안정한 액체 제형을 제공하기 위해 GLP-2 유사체의 제형을 개선하는 것이 이 분야에서 문제로 남아 있다. 펩타이드 약물의 액체 제형에서, 작동할 수 있는 화학적 경로는 펩타이드의 공유 결합된 이량체 및 올리고머의 형성을 포함하며, 이러한 공유 결합된 고분자량 올리고머 생성물의 형성을 통해 펩타이드의 활성 단량체 형태의 양을 감소시킨다. 질량 작용의 법칙은 일반적으로 제형에서 펩타이드 약물의 농도가 높을수록 공유 결합된 올리고머 생성물의 형성 가능성이 높다는 것을 의미한다.
또한, 제형의 점도가 사전-충진된 (pre-filled) 주사기, 주입 펌프, 착용 가능한 (wearable) 주입기 또는 자동-주입기 (auto-injector)와 같은 전달 장치에서 사용하기에 적합한 범위 안에서 조절되어지는, 제형을 제공하는 것이 GLP-2 유사체 제형 분야의 목표이다.
대략적으로, 본 발명은 액체로 장기 저장에 적합 및/또는 특히 약물 전달 장치에 의해 전달하기에 적합하도록 만드는 GLP-2 유사체의 액체 제형과 관련된 놀라운 발견으로 이어지는 실시예에 기반하고 있다.
첫 번째 연구에서, 본 발명자들은 GLP-2 유사체로부터 유래된 제형에 존재하는 아세테이트가 제형의 점도에 영향을 미친다는 것을 발견하였다. 이는 아세테이트 농도를 변경 및/또는 조절함으로써 제형의 점도를 조절할 수 있는 가능성을 열었다. 저점도(low-range viscosity) 액체 제형은 의약품 제조 및/또는 환자 사용 중 파손, 투약 실패, 투약 부정확 및 기타 오작동을 잠재적으로 감소시킴으로써 약물 전달 장치 개발 및 제조에 잇점을 제공하여 임상적으로 유용하다. 또한, 낮은 점도(low viscosity)는 더 빠른 주사 및/또는 더 좁은 내경(bore) (즉, 더 높은 게이지) 바늘의 사용을 허용하여 주사 불편감을 감소시킬 수 있다. 이는 사전 충전 주사기 (a pre-filled syringe), 조절 가능한 용량 자동 주사기 (an adjustable dose auto-injector), 일회용 자동 주사기 (a disposable auto-injector), 웨어러블 주사기 (a wearable injector) 또는 주입 펌프 (an infusion pump)와 같은 약물 전달 장치의 형태로 GLP-2 유사체의 제형을 제공할 수 있는 가능성을 열므로써, 환자에게 더 간단하고 안전하며 환자 친화적인 장치로 즉시 사용 가능한 제형을 제공한다. 더 높은 점도로 제형을 조절하는 것은 다른 약물 전달 장치에 적합할 수 있다.
두 번째 연구에서, 본 발명자들은 2-8 ℃에서 ZP1848 (글레파글루타이드)를장기간 보관하는 동안, 공유 결합된 올리고머의 형성이 농도 의존적이라는 것을 발견하였다. 그러나 질량 작용의 법칙이 펩타이드 약물의 농도가 증가함에 따라 공유 올리고머 형성이 증가한다는 것을 의미하는 일반적인 상황과는 달리, 본 발명자들은 올리고머 형성에 대한 농도 의존성이 GLP-2 유사체의 농도 증가에 반비례한다는 것을 발견하였다. 특정 이론에 얽매이지 않고, 본 발명자들은 GLP-2 유사체 농도가 증가함에 따라 공유 결합된 올리고머의 형성이 감소한 것이, 제형에서 공유 결합 된 올리고머의 형성을 방해하는 천연 펩타이드의 자기-관련 구조적 조립 (self-associated structural assemblies) 형성을 촉진하는 GLP-2 유사체의 라이신 꼬리(lysine tail)의 결과로 여긴다. 이것은 공유 결합된 올리고머가 형성될 때 발생하는 활성 종(active species)의 손실을 야기하기보다는 환자에게 투여된 후 약한 자가-관련 종(weakly self-associated species)이 해리되어 생물학적으로 활성인 단량체를 방출할 수 있음을 의미한다.
세 번째 연구에서, 본 발명자들은 본 발명의 제형에 사용된 GLP-2 유사체가 재구성된 분말 또는 동결 건조된 GLP-2 조성물을 위해 종래 기술에서 일반적으로 사용되는 인산염 완충액과 양립할 수 없다는 것을 발견하였다. 이 연구는 일부 완충액만이 이러한 GLP-2 유사체를 제형화하는데 호환하여 액체 형태의 장기 저장에 적합하다는 것을 발견하였다.
본 발명은 한 측면에서, 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형을 제공한다:
R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이며;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이며; 및
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,
상기 제형은 다음을 포함한다:
(a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체;
(b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
(c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
(d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌.
일부 구체적인 예에서, 상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 함유한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 상기 제형에서 GLP-2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도는 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하이다. 대안적으로 또는 추가적으로, 상기 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성은 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례한다.
상기 제형의 성분 및 그 양은 2-8 ℃에서 최소 18 개월 동안 저장된 후, GLP-2 유사체 함량이 최소 90 %이고, 화학적 분해 산물이 10 % 미만인 제형을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 안정한 약제학적 제형을 보유하는 용기를 포함하는 제조 물품 (article of manufacture) 또는 키트를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 GLP-2 유사체를 포함하는 액체 제형을 포함하는 전달 장치를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 치료에 사용하기 위한 본 발명의 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 인간 환자의 위 및 장 관련 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에 사용하기 위한 본 발명의 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형의 제조방법으로,
R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이며;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이며; 및
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,
상기 제조방법은 (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액; (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및 (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 제형화하는 단계를 포함하고,
상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 함유하는 것을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 제형의 용도를 제공한다:
R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이며;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이며; 및
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,
2-8 ℃에서 저장될 때 24 개월 동안 안정한 액체 약제학적 제형을 제공하기 위하여, 상기 제형은
(a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체;
(b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택된 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
(c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
(d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형의 점도를 조절하는 방법으로,
R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이며;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이며; 및
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,
상기 방법은 (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 또는 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액; (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및 (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 제형화하는 단계를 포함하고,
상기 제형에서 GLP2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하이고, 상기 제형은 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 가지는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 GLP-2 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형에서 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 공유 결합된 올리고머 생성물의 형성을 감소시키는 방법으로,
R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이며;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이며; 및
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,
상기 방법은 (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 또는 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액; (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및 (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 제형화하는 단계를 포함하고,
상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 경우에 따라서, 본 발명의 이러한 측면에서 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성은 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체의 공유 결합된 올리고머 생성물의 형성을 감소시키기 위한 제형의 용도로,
R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이며;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이며; 및
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,
2-8 ℃에서 저장될 때 24 개월 동안 안정한 액체 약제학적 제형이며, 상기 제형은
(a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체;
(b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
(c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
(d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함하고,
상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 함유하는 것을 특징으로 하는 용도를 제공한다. 경우에 따라서, 본 발명의 이러한 측면에서 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성은 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 액체 약제학적 제형의 점도를 조절하기 위한 제형의 용도로,
R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이며;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이며; 및
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,
2-8 ℃에서 저장될 때 24 개월 동안 안정한 액체 약제학적 제형이며, 상기 제형은
(a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체;
(b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
(c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
(d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함하고,
상기 제형에서 GLP2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하이고, 상기 제형은 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 가지는 것을 특징으로 하는 용도를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 화학식을 갖는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 아세테이트 염을 포함하는 고체 조성물을 제공한다:
(H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x (CH3COOH)
여기서, x는 1.0 내지 8.0 임.
또 다른 측면에서, 본 발명은
(a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 제 63 항 내지 제 67 항의 고체 조성물;
(b) 히스티딘 완충액, 메실 레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
(c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
(d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함하는 안정한 수성 약제학적 제형으로,
상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 포함하고, 상기 제형은 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 가지는 제형을 제공한다.
본원에 기술된 본 발명의 모든 측면에서, 완충제는 히스티딘 완충제, 메실레이트 완충제 및 아세테이트 완충액으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본원에 기술된 본 발명의 모든 측면에서, 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier)는 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 구체적인 예에서, 상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 함유한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 상기 제형에서 GLP-2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도는 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하이다. 대안적으로 또는 추가적으로, 상기 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성은 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형으로,
R1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이며;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이며; 및
Z2는 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열에 관한 것이다.
본 발명의 이러한 측면에서, 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 염을 포함하는 제형은 궤양 (ulcers), 소화 장애 (digestion disorders), 흡수 장애 증후군 (malabsorption syndromes), 짧은 장 증후군 (short-gut syndrome), 맹낭 증후군 (cul-de-sac syndrome), 염증성 장질환 (inflammatory bowel disease), 셀리악 스프루 (celiac sprue) (예 : 글루텐 유발 장질환 또는 셀리악 병으로 인한), 열대성 스프루 (tropical sprue), 저감마글로불린혈증 스프루 (hypogammaglobulinemic sprue), 장염 (enteritis), 국소 장염 (크론병) (regional enteritis (Crohn’s disease)), 궤양성 대장염 (ulcerative colitis), 소장 손상 (small intestine damage) 또는 단장 증후군 (short bowel syndrome (SBS)) 같은 위 및 장 관련 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에 사용될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체는 방사선 장염 (radiation enteritis), 감염성 또는 감염 후 장염 (infectious or post-infectious enteritis), 독성 또는 기타 화학 요법제로 인한 소장 손상과 같은 위 및 장 관련 장애의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다. 이 경우, GLP-2 유사체를 사용한 치료는 선택적으로 하나 이상의 항암 요법 (anti-cancer therapy)과 조합될 수 있으며, 따라서 환자에게 하나 이상의 화학 요법제(들) (chemotherapeutic agent(s))를 투여하거나 환자를 방사선 요법 (radiation therapy)으로 치료하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 구체적인 예에서, 상기 화학식의 X5는 Thr 및/또는 X11은 Ala이다. 이러한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 예는 다음을 포함한다:
ZP1848 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (서열 번호 1)
ZP2949 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKK-OH (서열 번호 2);
ZP2711 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKK-OH (서열 번호 3);
ZP2469 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (서열 번호 4);
ZP1857 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2 (서열 번호 5); 또는
ZP2530 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-OH (서열 번호 6).
본 발명의 일부 구체적인 예에서, 상기 화학식의 X5는 Ser 및/또는 X11은 Ser이다. 이러한 글루카곤 유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 예는 다음을 포함한다:
ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (서열 번호 7);
ZP1855 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2 (서열 번호 8); 또는
ZP2242 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (서열 번호 9).
본 발명의 실시예는 첨부된 도면을 참조하여 제한이 아닌 예로서 설명될 것이다. 그러나, 본 발명의 다양한 추가 양태 및 실시예는 본 개시 관점에서 당업자에게 명백할 것이다.
본 명세서에서 사용된 "및/또는"은 서로를 포함하거나 포함하지 않는 두 개의 특정된 특징 또는 구성 요소 각각의 특정 개시로 간주되어야 한다. 예를 들어, "A 및/또는 B"는 각각이 본원에서 개별적으로 제시된 것처럼 (i) A, (ii) B 및 (iii) A 및 B 각각의 특정 개시로서 간주된다.
문맥에서 달리 기재하지 않는 한, 기술한 특징의 설명 및 정의는 본 발명의 임의의 특정 측면 또는 실시예로 제한되지 않으며 설명된 모든 측면 및 실시예에 동일하게 적용된다.
도 1은 ZP1848 펩타이드에서 올리고머의 분리를 보여주는 전형적인 크로마토그램이다.
도 2는 제형의 제조 후 아세테이트 농도의 기능으로서, 점도 (사각형) 및 유체 역학적 반경 (z-평균) (원)의 변화를 나타낸다. 데이터는 아세테이트 11 % 이상에서 점도와 유체 역학적 반경 (z-평균)이 증가하기 시작함을 보여준다.
도 3은 다른 완충액들을 사용하여 0 내지 3 주 동안 40°, 20 mg/mL (시작시 100 %로 정규화됨)에서 안정성 평가를 나타낸다.
도 4는 다른 완충액들을 사용하여 0 내지 3 주 동안 40°, 2 mg/mL (시작시 100 %로 정규화됨)에서의 안정성을 나타낸다.
도 5는 다른 등장화제 (tonicity agent)들을 사용하여 0 내지 3 주 동안 40°, 20 mg/mL (시작시 100 %로 정규화됨)에서 안정성 평가를 나타낸다.
도 6은 다른 등장화제 (tonicity agent)들을 사용하여 0 내지 3 주 동안 40°, 2 mg/mL (시작시 100 %로 정규화됨)에서 안정성 평가를 나타낸다.
도 7은 다른 농도의 ZP1848 아세테이트 염, 다른 염 형태, 다른 등장화제 (tonicity agent) 및 다른 완충액을 사용한 제형 1 내지 5의 순도를 나타낸다.
도 8은 25 ℃에서 13 주 동안 다른 보존제 (preservatives)와 조합된 펩타이드의 안정성을 나타낸다.
도 9는 25 ℃에서 조사된 제형의 HPLC 순도를 나타낸다 (가속 조건).
정의 (Definitions)
달리 명시되지 않는 한, 상기 기재된 설명에서 사용되는 특정 용어에 대해 다음 정의를 갖는다.
상세한 설명 및 청구 범위 전반에 걸쳐, 천연 (natural) 아미노산에 대한 통상적인 한 문자 (one-letter) 및 세 문자 (three-letter) 코드가 사용된다. 본 발명의 펩타이드에서 모든 아미노산 잔기는 바람직하게는 L-배열이지만, D-배열 아미노산도 존재할 수 있다.
본 발명의 바람직한 화합물은 특히 장의 성장을 유발하는데 있어서 적어도 하나의 GLP-2 생물학적 활성을 갖는다. 이것은 예를 들어, (예)WO 2006/117565의 실시예에 기술된 바와 같은 in vivo 분석으로 측정될 수 있으며, 여기서 장 또는 그 일부의 질량은 실험 동물을 GLP-2 유사체로 치료하거나 노출한 후에 결정한다.
본 발명의 일부 측면에서, GLP-2 유사체를 포함하는 액체 제형은 제형에서 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 이하의 아세테이트, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 10 % 이하의 아세테이트, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 9 % 이하의 아세테이트, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 8 % 이하의 아세테이트, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 7 % 이하의 아세테이트, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 아세테이트 6 % 이하, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 5 % 이하의 아세테이트, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 4 % 이하의 아세테이트, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 3 % 이하의 아세테이트, 더욱 바람직하게는 GLP-2 유사체 mg 당 2 % 이하의 아세테이트 농도를 갖는다. 동결 건조된 원료 의약품(drug substance)의 아세테이트 농도는 최종 크로마토그래피 단계에서 사용되는 이동상 (mobile phase)에서 아세트산의 농도를 조정하여 제어할 수 있다. 이로 인해 아세테이트 함량이 11 % 미만인 원료 의약품이 생성된다. 따라서, 예를 들어 20 mg/mL의 GLP-2 유사체를 갖는 제형의 경우, 총 아세테이트 농도는 37mM 이하 일 것이다. 참고로 10 % 총 아세테이트 농도는 34mM, 9 % 는 30mM, 8 % 는 27mM, 7 % 는 24mM 및 6 % 는 20 nM과 같다. 총 아세테이트 농도는 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 HPLC를 사용하여 결정될 수 있다.
하기 실시예에서, 본 발명의 액체 제형의 점도는 총 아세테이트 농도에 의존하는 것으로 나타났다. 바람직하게는, 제형은 25 ℃에서 측정시 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 갖는다. 편리하게는, microVISC ™를 사용하여 점도를 측정할 수 있다. 동시에, 유체 역학적 반경은 동적 광산란 (Dynamic Light Scattering), DLS, Platereader (Wyatt DynaPro II)를 사용하여 측정할 수 있다. 6 % 아세테이트를 함유하는 GLP-2 유사체의 원료 의약품(drug substance; DS)을 갖도록 샘플을 준비하고, 7.8 내지 15 % 아세테이트를 함유하는 DS를 모방하기 위해 아세테이트를 첨가 하였다. 6.7 내지 15 %의 다양한 아세테이트 농도 갖는 제조 제형으로부터의 데이터는 하기 도 2에 나타냈다. 총 아세테이트 농도를 조절하는 효과는 예를 들어, 보다 쉽게 주입될 수 있는 점성이 적은 제형을 제공하기 위해 총 아세테이트 농도를 rkathtlzladmfhTJ, 본 발명의 제형의 주입성을 조절할 수 있다는 것이다.
본 발명에 따른 액체 제형은 바람직하게는 등삼투압 (isosmotic) 액체 제형이다. "등삼투압 (isosmotic)"은 본 발명의 제형이 체액과 동일하거나 유사한 삼투압을 갖는 것을 의미한다. 바람직하게는, 본 발명의 제형은 삼투압계 (osmometer)로 측정했을 때 약 300 ± 60 mOsm의 삼투압을 갖는다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명은 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성이 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례함을 입증한다. 실시예에 나타난 바와 같이, 공유 결합된 올리고머의 양은 크기 배제 크로마토그래피를 사용 및 단량체 GLP-2 유사체 및 올리고머에 대한 피크 아래의 면적을 각각 결정하여 측정 할 수 있다. 이는 0.5 mL/min의 유속으로 선형 구배를 제공하는 Dionex Ultimate3000 HPLC 시스템을 사용하여 수행 할 수 있다. 이동상은 45 % 아세토니트릴 (acetonitrile) 및 55 % Milli-Q 물 (Milli-Q water)에서 0.1 % TFA로 구성되었다. 215 nm의 파장이 검출에 사용되었다. 이것은 본 발명의 제형이 일반적으로 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL의 농도, 더욱 바람직하게는 약 15 mg/mL 내지 약 25 mg/mL의 농도, 및 가장 바람직하게는 약 20 mg/mL의 농도로 GLP-2 유사체를 함유한다는 것을 의미한다. 본 발명의 일부 측면에서, 바람직하게는 18개월 저장 후, GLP-2 유사체의 농도는 제형이 공유 결합된 올리고머 생성물 형태의 GLP-2 유사체를 10 % 이하, 더욱 바람직하게는 5 % 이하, 더욱 바람직하게는 4 % 이하, 더욱 바람직하게는 3 % 이하, 더욱 바람직하게는 2 % 이하를 함유하도록 선택되는 것이 바람직하다. 예로서, 공유 결합된 올리고머 생성물의 양은 2 % 내지 5 % 범위, 덩욱 바람직하게는 2 % 내지 4 % 범위, 가장 바람직하게는 2 % 내지 3 % 범위일 수있다.
일부 경우에는, 본 발명의 제형은 1 일 1 회 또는 2 회 투여 요법으로 사용될 수 있다. 일부 경우에는, 본 발명의 제형은 주 1 회 또는 2 회 투여 요법으로 사용될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 GLP-2 유사체의 투약 요법은 2 일, 2.5 일, 3 일, 3.5 일, 4 일, 5 일, 6 일, 7 일, 8 일, 9 일, 10 일, 11 일 또는 12 일의 시간별로 구분된 복수 또는 투여량 방침 (course of dose)을 구성할 수 있다. 바람직한 구체적인 예에서, 용량은 3 일, 3.5 일, 4 일, 5 일, 6 일, 7 일 또는 8 일에 의해 시간적으로 분리된다. 바람직한 구체적인 예에서, 용량은 3 일, 3.5 일, 4 일 또는 7 일에 의해 시간적으로 분리된다. 당업계에서 인정되는 바와 같이, 투여 사이의 시간은 각각의 모든 투여가 정확히 동일한 시간에 의해 분리되지 않도록 어느 정도 변경될 수 있다. 이것은 종종 의사의 재량에 따라 지시된다. 따라서, 용량은 임상적으로 허용되는 시간 범위, 예를 들어 약 2 일 내지 약 10 일, 또는 약 3 또는 4 일 내지 약 7 또는 8 일로 시간에 따라 분리될 수 있다.
본 발명의 제형은 GLP-2 유사체의 안정한 액체 약제학적 제형이다. "안정한"제형은 그 안의 펩타이드가 저장시 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 본질적으로 유지하는 것이다. 바람직하게는, 제형은 물리적 및 화학적 안정성뿐만 아니라 저장시 생물학적 활성을 본질적으로 유지한다. 저장 기간은 일반적으로 제형의 의도된 저장 기간을 기준으로 선택된다. 본 발명의 제형은 안정한 액체 제형, 예를 들어, 안정한 수성 액체 제형을 제공한다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 당업계에서 이용 가능하며, 예를 들어, Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) 및 Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10 : 29-90 (1993)에서 검토되고 있다. 본 발명에서 "안정한" 제형은 적어도 18 개월 동안 2-8 ℃에서 저장된 후, GLP-2 유사체의 적어도 80 %, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 더욱 바람직하게는 적어도 95 %, 더욱 바람직하게는 적어도 96 %, 더 바람직하게는 적어도 97 %, 더 바람직하게는 적어도 98 %, 가장 바람직하게는 적어도 99 %가 제형에서 활성인 제형을 포함한다.
예를 들어, 안정성은 선택된 기간동안 선택된 온도, 예를 들어 제형이 시험되는 기간을 감소시키기 위해 상승된 온도를 사용하여 측정될 수 있다. 일반적으로 2 내지 8 ℃의 온도에서 보관하는 것은 정상적인 냉장 상태에서 보관하는 것을 의미한다. 특정 실시 양태에서, 제형은 이러한 조건 하에서 적어도 12 개월, 더욱 바람직하게는 적어도 18 개월, 더욱 바람직하게는 적어도 24 개월 동안 안정하다. 안정성은 응집체 형성 평가 (예: 크기 배제 크로마토그래피 사용, 탁도 측정 및/또는 육안 검사); 양이온 교환 크로마토그래피, 이미지 모세관 등전 초점 (image capillary isoelectric focusing ; icIEF) 또는 모세관 영역 전기 영동 (capillary zone electrophoresis)을 사용하여 전하 이질성 (charge heterogeneity)을 평가함으로써; 아미노-말단 또는 카르복시-말단 서열 분석; 질량 분석법; 감소된 항체와 온전한 항체를 비교하기 위한 SDS-PAGE 분석; 펩타이드지도 (예: 트립틱(tryptic) 또는 LYS-C) 분석; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능 평가; 등을 포함하여 다양한 방법으로 정성적 및/또는 정량적으로 평가할 수 있다. 불안정성은 응집, 탈아미드화 (deamidation)(예: Asn 탈아미드화), 산화 (oxidation)(예: Met 산화), 이성질화 (isomerization)(예: Asp 이성질화), 클리핑 (clipping)/ 가수분해 (hydrolysis)/ 단편화 (fragmentation)(예: 힌지 영역 단편화), 숙신이미드 형성 (succinimide formation), 짝을 이루지 않는 시스테인(들) (unpaired cysteine(s)), N- 말단 연장 (N-terminal extension), C- 말단 처리 (C-terminal processing), 글리코실화 차이 (glycosylation differences)등 이들 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
예컨대, 색상 및/또는 투명도의 육안 검사 (visual examination ) 또는 UV 광산란 (UV light scattering), 동적 광산란 (dynamic light scattering), 원형 이색성 (circular dichroism) 또는 크기 배제 크로마토 그래피에 의해 측정되는 응집, 침전 및/또는 변성 (denaturation)의 징후가 없는 (또는 아주 적은 징후) 경우, 펩타이드는 약제학적 제형에서 "물리적 안정성을 유지"하고, 여전히 그것의 생물학적 활성을 유지하는 것으로 간주한다.
주어진 시간에서의 화학적 안정성이 펩타이드가 아래에 정의된 바와 같이 생물학적 활성을 여전히 유지하는 것으로 간주되는 경우, 펩타이드는 약제학적 제형에서 "화학적 안정성을 유지"한다. 화학적 안정성은 화학적으로 변경된 형태의 펩타이드를 검출하고 정량화하여 평가할 수 있다. 화학적 변경은 예를 들어, HPLC 또는 크기 배제 크로마토그래피, SDS-PAGE 및/또는 질량 분석법을 사용하여 평가할 수 있는 이성 질화 (isomerization), 산화 (oxidation), 크기 변경 (size modification)(예: 클리핑 (clipping))을 포함할 수 있다. 다른 유형의 화학적 변경에는 예를 들어, HPLC 또는 이온-교환 크로마토그래피 또는 icIEF에 의해 평가될 수 있는 전하 변경 n (charge alteration n) (예: 탈아미드화의 결과로 발생)이 포함된다.
GLP-2 유사체
본 발명의 제형에 존재하는 GLP-2 유사체는 천연 GLP-2와 비교하여 상기 정의 된 바와 같은 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 반전 또는 첨가를 갖는다. 이 정의에는 GLP-2 모방체 (mimetics) 및/또는 GLP-2 작용제 (agonists)라는 동의어 용어도 포함된다. 또한, 본 발명의 유사체는 아미노산 측기, α-탄소 원자, 말단 아미노기 또는 말단 카르복실산기 중 하나 이상의 화학적 변형을 추가로 가질 수 있다. 화학적 변형은 화학적 모이어티 추가, 새로운 결합 생성 및 화학적 모이어 티 제거를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 아미노산 측기에서의 변형은 제한없이, 라이신 ε-아미노기의 아실화, 아르기닌, 히스티딘 또는 라이신의 N-알킬화, 글루타민 또는 아스파르트 카르복실산기 (glutamic or aspartic carboxylic acid groups)의 알킬화 및 글루타민 또는 아스파라긴의 탈아미드화를 포함한다. 말단 아미노의 변형은 제한 없이, 데스-아미노 (des-amino), N-저급 알킬 (N-lower alkyl), N-디-저급 알킬 (N-di-lower alkyl) 및 N-아실 (N-acyl) 변형을 포함한다. 말단 카르복시기의 변형은 아미드, 저급 알킬 아미드, 디알킬 아미드 및 저급 알킬 에스테르 변형을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는 본원에서 저급 알킬은 C1-C4 알킬이다. 또한, 하나 이상의 측기 또는 말단기는 보통 숙련된 펩타이드 화학자에게 알려진 보호기에 의해 보호될 수 있다. 아미노산의 α-탄소는 모노-또는 디-메틸화 될 수 있다.
일부 측면에서, 본 발명의 액체 제형은 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체를 사용한다 :
R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile- Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
여기서 :
R1은 수소, C1-4 알킬 (예: 메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
X5는 Ser 또는 Thr이고;
X11은 Ala 또는 Ser이고;
R2는 NH2 또는 OH이고; 과
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열이며;
또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체.
본 발명의 일부 구체적인 예에서, 상기 화학식에서, X5는 Thr 및/또는 X11은 Ala이다. 이러한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 예는 다음을 포함한다:
ZP1848 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (서열 번호: 1)
ZP2949 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKK-OH (서열 번호: 2);
ZP2711 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKK-OH (서열 번호: 3);
ZP2469 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (서열 번호: 4);
ZP1857 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2 (서열 번호: 5); 또는
ZP2530 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITD-OH (서열 번호: 6).
본 발명의 구체적인 예에서, 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체는 ZP1848 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (서열 번호: 1)이다.
본 발명의 일부 구체적인 예에서, 상기 화학식에서 X5는 Ser 및/또는 X11은 Ser이다. 이러한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 예는 다음과 같다.
ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (서열 번호: 7);
ZP1855 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITD-NH2 (서열 번호: 8); 또는
ZP2242 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDK-OH (서열 번호: 9).
본 발명의 한 실시 양태에서, 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체는 ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (서열 번호: 7)이다.
본 발명의 펩타이드 (원료 의약품)는 또한 염 또는 다른 유도체의 형태로 제공될 수 있음을 이해해야 한다. 염은 산부가염 (acid addition salts) 및 염기성염 (basic salts)과 같은 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다. 산부가염 (acid addition salts)의 예로는 염산 염, 시트레이트 염, 염화물 염 및 아세테이트 염이 있다. 바람직하게는, 염은 아세테이트이다. 일반적으로, 염은 염화물 염 (chloride salt)이 아닌 것이 바람직하다. 염기성 염의 예로는 양이온이 알칼리 금속 (예: 나트륨 및 칼륨), 알칼리 토금속 (alkaline earth metals) (예: 칼슘) 및 암모늄 이온 +N (R3)3(R4) (여기서 R3 및 R4는 독립적으로 임의로 치환된 C1-6-알킬, 임의로 치환된 C2-6-알케닐, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴을 나타냄)에서 선택되는 염을 포함하며, 약제학적으로 허용되는 염의 다른 예는 "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17th edition, Ed. Alfonso R. Gennaro (Ed), Mark Publishing Company, Easton, PA, U.S.A., 1985 및 최신판, 그리고 제약기술백과 사전에 설명되어 있다.
바람직한 구체적인 예에서, 본 발명의 GLP-2 유사체의 아세테이트 염은 ZP1848-아세테이트, ZP2949-아세테이트, ZP2711-아세테이트, ZP2469-아세테이트, ZP1857-아세테이트, ZP2530-아세테이트, ZP1846-아세테이트, ZP1855-아세테이트 및 ZP2242-아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 맥락에서, 용어 "ZP1848-아세테이트"는 ZP1848 분자가 아세테이트 염 형태임을 지칭한다. GLP-2 유사체의 아세테이트 염은 화학식 (GLP-2 유사체), x(CH3COOH)로 표시될 수 있으며, 여기서 x는 1.0 내지 8.0, 즉 x는 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0 또는 8.0이다. GLP-2 유사체의 아세테이트 염의 모든 구성에서, x가 반드시 정수가 아니도록 다른 수의 아세테이트 분자를 가진 분자가 있을 수 있다. 경우에 따라, x는 4.0 내지 8.0, x는 6.0 내지 8.0 또는 x는 4.0 내지 6.5이다. 어떤 경우에는 x는 4.0 내지 6.0, x는 2.0 내지 7.0, x는 3.0 내지 6.0, x는 4.0 내지 6.0 또는 x는 4.0 내지 8.0이다.
바람직한 구체적인 예에서, GLP-2 유사체는 ZP1848-아세테이트 또는
H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 아세테이트 (서열 번호: 1) 또는 (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x(CH3COOH) 여기서 x는 1.0 내지 8.0이다.
따라서, 또 다른 측면에서, 본 발명은 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 아세테이트 염을 포함하는 고체 조성물을 제공한다. 고체 조성물은 본 발명의 액체 제형을 제조하는데 사용되는 부형제와 함께 제형화하는데 유용하다. 한 실시 양태에서, 본 발명은 하기 화학식을 갖는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 아세테이트 염을 포함하는 고체 조성물을 제공한다:
(H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x (CH3COOH) 여기서 x는 1.0 내지 8.0이다.
GLP-2 유사체 당 8.0 아세테이트 분자의 상한은 아세테이트 함량이 11 % 미만인 아세테이트 함량과 동일하며 25 ℃에서 측정한 0.8 내지 2.0 mPa/sec 사이의 점도를 갖도록 제형화할 수 있다.
GLP-2 유사체의 각 분자와 관련된 아세테이트 분자의 수 범위는 제형의 이 구성요소에 대한 분자량 범위를 정의한다. 예를 들어, ZP1848의 아세테이트 염의 경우, GLP-2 유사체의 각 분자와 관련된 아세테이트 분자의 수 범위는 ZP1848-아세테이트의 분자량 범위를 정의한다. 예를 들어, ZP1848의 각 분자와 동등한 1 아세테이트는 분자량 = 4316 + 60 = 4376 Da를 제공한다. 따라서, ZP1848로 아세테이트 당량을 증가시키기 위한 분자량은 다음과 같다 : 1 아세테이트 당량 = 4376 Da; 2 아세테이트 당량 = 4436 Da; 3 아세테이트 당량 = 4496 Da; 4 아세테이트 당량 = 4556 Da; 5 아세테이트 당량 = 4616 Da; 6 아세테이트 당량 = 4676 Da; 7 아세테이트 당량 = 4736 Da 및 8 아세테이트 당량 = 4796 Da. 이것은 결국 다음과 같이 분자량 범위를 정의한다: 1 내지 8 아세테이트 당량 = 4376 Da 내지 4796 Da; 4 내지 8 아세테이트 당량 = 4556 Da 내지 4796 Da 및 6 내지 8 아세테이트 당량 = 4676 Da 내지 4796 Da.
본 발명의 GLP-2 유사체의 다른 유도체는 Mn2+ 및 Zn2+와 같은 금속 이온, 생체 내 가수분해성 에스테르와 같은 에스테르, 유리산 또는 염기, 수화물, 전구 약물 또는 지질과의 배위 착염 (coordination complex)을 포함한다. 에스테르는 당 업계에 잘 알려진 기술을 사용하여, 화합물에 존재하는 하이드록실 또는 카복실산 그룹과 적절한 카복실산 또는 알코올 반응 파트너 사이에서 형성될 수 있다. 화합물의 전구 약물로서 유도체는 in vivo 또는 in vitro에서 모 화합물 (parent compounds) 중 하나로 전환될 수 있다. 전형적으로, 화합물의 생물학적 활성 중 적어도 하나는 화합물의 전구 약물 형태에서 감소될 것이고, 화합물 또는 그것의 대사 산물을 방출하기 위해 전구 약물의 전환에 의해 활성화될 수 있다. 전구 약물의 예는 활성 화합물을 in situ 방출을 제거하거나 in vivo에서 약물의 제거를 억제하는 역할을 할 수 있는 보호기의 사용을 포함한다.
Z1 및 Z2는 독립적으로 존재 및/또는 부재하거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위, 즉 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 Lys 잔기의 펩타이드 서열이다. Lys 잔기는 D- 또는 L- 구성일 수 있지만 L-구성일 수 있다. 특히 바람직한 서열 Z는 4 개, 5 개 또는 6 개의 연속적인 라이신 잔기, 특히 6 개의 연속적인 라이신 잔기의 서열이다. 예시적인 서열 Z는 WO 01/04156에 제시되어있다. 특정 구체적인 예에서, Z1은 부재한다. 이러한 경우, Z2는 존재하거나 부재할 수 있다.
GLP-2 유사체의 제형
GLP-2 유사체의 제형은 즉시 사용 가능한 제형이다. 본원에서 사용된 용어 "즉시 사용 (ready-to-use)"은 지정된 투여 경로로 사용하기 전에, 지정된 양의 희석액, 예를 들어 주사용 물 또는 기타 적절한 희석액으로 구성 또는 희석할 필요가 없는 제형을 지칭한다.
본원에 기술된 바와 같이, 본 발명의 GLP-2 유사체의 액체 제형은 완충액, 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 및 최종 제형의 pH를 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함한다. 통상적인 제약 관행에 따르면, 본 발명의 제형은 멸균되고/되거나 환원제가 없다. 일부 경우에, 본 발명의 액체 제형은 수성, 액체 제형이다. 일부 경우에, 본 발명의 액체 제제는 비-수성, 액체 제형이다.
본원에서 사용된 용어 "완충액"은 약제학적 제형의 pH를 안정화시키는 약제학적으로 허용되는 부형제를 의미한다. 적합한 완충액은 당업계에 잘 알려져 있으며 문헌에서 찾을 수 있다. 실시예의 스크리닝 실험은 본 발명의 제형이 바람직하게는 GLP-2 유사체가 용해되고 펩타이드 약(drug)이 점성이 생기거나, 혼탁해지거나, 침전되지 않는 안정적인 제형을 제공하는 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액 중에서 선택된 완충액을 포함한다는 것을 보여준다. 바람직한 구체적인 예에서, 완충액은 예를 들어 히스티딘 완충액(예컨대, L-히스티딘)이다. 일반적으로, 완충액은 약 5 mM 내지 약 50 mM의 농도, 더욱 바람직하게는 약 5 mM 내지 약 25 mM의 농도, 가장 바람직하게는 약 15 mM의 농도로 존재할 것이다. 본 출원에서의 실험에 기초하여, 바람직하게는 완충액은 인산염 완충액, 시트레이트 완충액, 시트레이트/트리스 완충액 및/또는 숙시 네이트 완충액은 아니다.
본원에서 사용된 용어 "장성 변형제 (tonicity modifier)"는 제형의 장성을 조절하는데 사용되는 약제학적으로 허용되는 장성 작용제 (tonicity agent)를 지칭한다. 본 발명의 제형은 바람직하게는 등삼투성 (isosmotic), 즉 인간 혈청과 실질적으로 동일한 삼투압을 갖는다. 제형에 사용되는 장성 변형제는 바람직하게는 비-이온성 장성 변형제이고, 바람직하게는 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군에서 선택된다. 바람직한 비-이온성 장성 변형제는 만니톨, 예를 들어. D-만니톨이다. 장성 변형제의 농도는 제형의 다른 성분의 농도에 따라 달라지며, 특히 제형이 등삼투성 (isosmotic)이 되도록 의도된 경우에 그러하다. 전형적으로, 비-이온성 장성 변형제는 약 90 mM 내지 약 360 mM의 농도, 더욱 바람직하게는 약 150 mM 내지 약 250 mM의 농도, 가장 바람직하게는 약 230 mM의 농도로 사용될 것이다.
일반적으로, 본 발명의 액체 제형의 성분 및 양은 pH가 약 6.6 내지 약 7.4, 더욱 바람직하게는 pH가 약 6.8 내지 약 7.2, 가장 바람직하게는 약 7.0 인 제형을 제공하도록 선택된다. 아르기닌은 원하는 pH 범위 내에 있도록 pH를 조정하기 위해 적당량 (quantum sufficit: q.s.)을 첨가 할 수 있다. 실시예에 제시된 실험에서, pH 조정은 염산 또는 수산화 나트륨을 사용하지 않는 것이 바람직하다.
한 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택된 약 5 mM 내지 약 50 mM의 농도로 존재하는 완충액, 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군에서 선택된 약 90 mM 내지 약 360 mM 농도의 비-이온성 장성 변형제, 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 제공하기에 충분한 양의 아르기닌으로 구성된다.
다른 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 20 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충액, 약 230 mM 농도의 만니톨 및 약 7.0의 pH를 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 20 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충제, 약 230 mM 농도의 만니톨을 포함하고 pH는 약 7.0이다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 20 mg/mL 농도의 ZP1848-아세테이트 또는 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 아세테이트 (서열 번호: 1), 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고, 약 230 mM 농도의 만니톨 및 약 7.0의 pH를 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 20 mg/mL 농도의 ZP1848-아세테이트 또는 H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 아세테이트 (서열 번호: 1), 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고, 약 230 mM 농도의 만니톨을 포함하고 pH는 약 7.0이다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 20 mg/mL 농도의 (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2),x(CH3COOH) 여기서 x는 1.0 내지 8.0인 화학식을 갖는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 아세테이트 염, 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충액, 약 230 mM 농도의 만니톨을 포함하고 pH는 약 7.0이며, 1 일 1 ~ 2 회의 투여 요법이다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 20 mg/mL 농도의 (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2),x(CH3COOH) 여기서 x는 1.0 내지 8.0인 화학식을 갖는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 아세테이트 염, 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충액, 약 230 mM 농도의 만니톨을 포함하고 pH는 약 7.0이며, 1 주 1 ~ 2 회의 투여 요법이다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 20 mg/mL 농도의 ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (서열 번호: 7), 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고, 약 230 mM 농도의 만니톨 및 약 7.0의 pH를 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 액체 제형은 약 20 mg/mL 농도의 ZP1846 H-HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2 (서열 번호: 7), 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고, 약 230 mM 농도의 만니톨을 포함하고 pH는 약 7.0이다.
일부 경우에, 본 발명의 액체 제형은 보존제 (preservative)를 추가로 포함한다. 경우에 따라 보존제는 염화 벤잘코늄 (benzalkonium chloride), 클로로 부탄올 (chloro butanol), 메틸 파라벤 (methyl paraben) 및 소르빈산 칼륨 (potassium sorbate)으로 이루어진 군에서 선택된 하나이다. 일반적으로 보존제는 최종 제형 부피의 약 0.1 % 내지 약 1 %의 농도로 존재한다.
또 다른 실시 양태에서, 액체 제형은 수성 액체 제형, 다양한 친수성 또는 소수성 용매 중의 액체 제형, 에멀젼 및 액체 현탁액으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직한 구체적인 예에서, 액체 제형은 수성 액체 제형이다.
예를 들어, 본 발명의 액체 제형은 GLP-2 유사체, 완충액, 비이온성 장성 변형제 및 선택적으로 보존제의 원액을 물에 혼합하고, 선택적으로 생성된 용액을 희석하고, 목표 pH로 조정함으로써 제조될 수 있다. 편리하게는, 완충액 및 비이온성 장성 변형제의 용액을 먼저 혼합하여 각 부형제의 원하는 농도를 제공할 수 있다. 그 다음 GLP-2 유사체의 용액을 첨가할 수 있으며, 필요한 경우, 예컨대 아세트산/0.5 M L-아르기닌을 사용하여 pH를 조정한다. 물을 최종 부피까지 추가한다.
바람직하게는, 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체는 환자에게 비경구로, 바람직하게는 주사에 의해, 가장 전형적으로는 피하 주사, 근육내 주사, 정맥 주사 또는 복강내 주사에 의해 투여된다. 피하 주사로 투여하는 것이 바람직하다. 주사는 의사, 간호사 또는 기타 의료 전문가에 의해 수행되거나 환자가 자가-투여 (self-administer)할 수 있다. 본원에서 제시된 바와 같이, 일부 측면에서, 본 발명의 제형은 미리 충전된 주사기, 주입 펜 또는 다른 주입기 장치에 제형의 로딩을 용이하게 하는 점도를 갖는다. 이것은 예를 들어 다회용량 바이알 (multi-use vial)에서 측정할 필요가 없이, 환자에게 투여되는 제형의 용량을 미리 결정하는 이점을 가질 수 있다. 따라서, 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 GLP-2 유사체의 수성 안정한 약제학적 제형과 같은 안정제를 담는 용기 또는 본 발명에 따른 GLP-2 유사체를 포함하는 사전-충진된 주사기 (pre-filled syringe) 또는 주입기 장치 (injector device) 또는 주입기 펜 (injector pen)을 포함하는 제조 물품 또는 키트를 제공한다.
질병 (Medical Conditions)
본 발명의 GLP-2 유사체 제형은 유효량의 GLP-2 유사체 또는 본원에 기재된 바와 같은 이의 염을 투여함으로써 식도 상부 위장관을 포함하는 위장 장애를 앓고 있는 개체를 예방 또는 치료하기 위한 약제로서 유용하다. 위 및 장 관련 장애는 모든 병인의 궤양 (예: 소화성 궤양 (peptic ulcers), 약물 유발 궤양, 감염 또는 기타 병원체와 관련된 궤양), 소화 장애 (digestion disorders), 흡수 장애 증후군 (malabsorption syndromes), 단장 증후군 (short bowel syndrome), 맹낭 증후군 (cul-de-sac syndrome), 염증성 장질환 (inflammatory bowel disease), 셀리악 스프루 (celiac sprue) (예: 글루텐 유발 장질환 또는 셀리악 병으로 인한), 열대성 스프루 (tropical sprue), 저감마글로불린혈증 스프루 (hypogammaglobulinemic sprue), 장염 (enteritis), 궤양성 대장염 (ulcerative colitis), 소장 손상 (small intestine damage), 및 화학 요법으로 인한 설사/점막염 (chemotherapy induced diarrhoea/mucositis; CID)을 포함한다.
상기 언급된 바와 같이, 일반적으로 소장 질량 증가 및 그에 따른 정상적인 소장 점막 구조 및 기능의 유지 및/또는 유지로부터 이익을 얻을 수 있는 개체는 본 GLP-2 유사체를 이용한 치료의 후보이다. GLP-2 유사체로 치료할 수 있는 특정 상태는 열에 의한 알파-글리아딘 (alpha-gliadin)에 대한 독성 반응으로 발생 및 글루텐성 장질환 또는 셀리악병의 결과일 수 있고, 소장 융포(villae)의 현저한 손실이 특징인 셀리악 스프루 (celiac sprue); 감염의 결과이며, 융표의 부분적 평면화가 특징인 열대성 스프루 (tropical sprue); 공통 가변성 면역 결핍 (common variable immunodeficiency)또는 저감마글로불린혈증 (hypogammaglobulinemia) 환자에서 일반적으로 관찰되며, 융모 높이의 현저한 감소가 특징인 저감마글로불린혈증 스프루(hypogammaglobulinemic sprue)을 포함하는 다양한 형태의 스프루를 포함한다. GLP-2 유사체 치료의 치료 효능은 융모 형태를 조사하기 위한 장 생검 (enteric biopsy), 영양 흡수의 생화학적 평가, 환자 체중 증가 또는 이러한 상태와 관련된 증상의 개선에 의해 모니터링 될 수 있다.
본 발명의 GLP-2 유사체로 치료할 수 있거나, GLP-2 유사체가 치료 및/또는 예방적으로 유용할 수있는 또 다른 특정 상태는 짧은 장 증후군 (short-gut syndrome) 또는 simply short gut으로도 알려져 있는 단장 증후군 (short bowel syndrome; SBS)이며, 이는 외과적 절제술 (surgical resection), 선천적 결함, 또는 질병관련 장의 흡수 손실로 인해 발생되며, 이 환자는 기존의 식이 요법에서 체액, 전해질 및 영양 균형을 유지할 수 없다. 절제 후 2년 동안 일반적으로 발생하는 적응에도 불구하고, SBS 환자들은 식이 섭취와 유체 손실이 감소한다.
본 발명의 GLP-2 유사체로 치료할 수 있거나 GLP-2 유사체가 예방적으로 유용할 수 있는 다른 병태는 상기 언급된 방사선 장염 (radiation enteritis), 감염성 또는 감염 후 장염 (infectious or post-infectious enteritis), 및 암화학요법 또는 독성 제제로 인한 소장 손상을 추가로 포함한다.
GLP-2 유사체는 또한 악액질 (cachexia) 및 식욕 부진 (anorexia)과 같은 영양 실조의 치료에 사용될 수 있다.
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본 발명의 특정 구체적인 예는 장 손상 및 기능 장애의 예방 및/또는 치료를 위해 본 펩타이드를 사용하는 것에 관한 것이다. 이러한 손상 및 기능 장애는 암 화학 요법 치료의 잘 알려진 부작용이다. 화학 요법 투여는 점막염 (mucositis), 설사 (diarrhoea), 세균 전위 (bacterial translocation), 흡수 장애 (malabsorption), 복부 경련 (abdominal cramping), 위장 출혈 (gastrointestinal bleeding) 및 구토 (vomiting)와 같은 위장계 (gastronintestinal system)와 관련된 원치 않는 부작용과 자주 연관된다. 이러한 부작용은 장 상피의 구조적 및 기능적 손상의 임상적 결과이며, 이로 인해 화학 요법의 용량과 빈도를 감소시키는 것이 종종 필요하다.
본 발명의 GLP-2 펩타이드 유사체의 투여는 장 선와 (intestinal crypts)에서 영양 효과를 향상시키고 화학요법 후 손상된 장 상피를 대체할 새로운 세포를 신속하게 제공할 수 있다. 본 발명의 펩타이드를 투여함으로써 달성되는 최종 목표는 화학 요법 치료를 받는 환자의 위장 손상과 관련된 사망률을 감소시키면서 암 치료를위한 가장 최적의 화학요법을 수행하는 것이다. 본 발명에 따라 방사선 치료를 받고 있는 환자에게 예방 또는 치료가 동시에 제공될 수 있다.
소장 점막의 줄기세포는 그들의 빠른 증식 속도로 인해 화학요법의 세포 독성 효과에 특히 민감하다 (Keefe et al., Gut 2000; 47: 632-7). 소장 점막에 대한 화학요법-유도 손상은 임상적으로 종종 위장 점막염으로 지칭되며 소장의 흡수성 및 장벽 손상을 특징으로 한다. 예를 들어, 광범위하게 사용되는 화학요법제인 5-FU, 이리노테칸 (irinotecan) 및 메토트렉세이트 (methothrexate)는 설치류 소장에서 융모 위축 (villus atrophy ) 및 선와 저형성 (crypt hypoplasia)으로 이어지는 세포사멸(apoptosis)을 증가시켰다 (Keefe et al., Gut 47 : 632-7, 2000; Gibson et al., J Gastroenterol Hepatol. Sep; 18 (9) : 1095-1100, 2003; Tamaki et al., J Int Med Res. 31 (1) : 6-16, 2003). 인간에게 화학요법제 투여 후 24 시간에 장 선와에서 세포사멸(apoptosis)을 증가시키고, 이어서 3 일 후에 융모 면적(villus area), 선와 길이(crypt length), 선와당 유사 분열 수(mitotic count per crypt) 및 장 세포 높이(enterocyte height)를 감소시키는 것으로 나타났다 (Keefe et al., Gut 2000; 47: 632-7). 이에 따라, 소장 내의 구조적 변화는 장 기능 장애 및 일부의 경우 설사로 직접 이어진다.
암 화학요법 후 위장 점막염은 점차적으로 해소되지만 일단 확립되면 본질적으로 치료할 수 없는 증가하는 문제이다. 일반적으로 사용되는 암세포 증식 약물 인 5-FU와 이리노테칸으로 수행한 연구에 따르면 이러한 약물을 이용한 효과적인 화학요법은 소장의 구조적 무결성과 기능에 주로 영향을 미치는 반면, 결장은 덜 민감하고 주로 점액 형성에 반응한다(Gibson et al., J Gastroenterol Hepatol. Sep;18(9):1095-1100, 2003; Tamaki et al., J Int Med Res. 31(1):6-16, 2003).
GLP-2 유사체를 포함하는 본 발명의 제형은 위장 손상및 화학요법제의 부작용의 예방 및/또는 치료 에 유용할 수 있다. 이의 잠재적으로 중요한 치료적 적용은 다음과 같이 현재 사용되는 화학요법제에 적용될 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다: 5-FU, Altretamine, Bleomycin, Busulfan, Capecitabine, Carboplatin, Carmustine, Chlorambucil, Cisplatin, Cladribine, Crisantaspase, Cyclophosphamide, Cytarabine, Dacarbazine, Dactinomycin, Daunorubicin, Docetaxel, Doxorubicin, Epirubicin, Etoposide, Fludarabine, Fluorouracil, Gemcitabine, Hydroxycarbamide, Idarubicin, Ifosfamide, Irinotecan, Liposomal doxorubicin, Leucovorin, Lomustine, Melphalan, Mercaptopurine, Mesna, Methotrexate, Mitomycin, Mitoxantrone, Oxaliplatin, Paclitaxel, Pemetrexed, Pentostatin, Procarbazine, Raltitrexed, Streptozocin, Tegafur-uracil, Temozolomide, Thiotepa, Tioguanine/Thioguanine, Topotecan, Treosulfan, Vinblastine, Vincristine, Vindesine, Vinorelbine, Bleomycin, Busulfan, Capecitabine, Carboplatin, Carmustine, Chlorambucil, Cisplatin, Cladribine, Crisantaspase, Cyclophosphamide, Cytarabine, Dacarbazine, Dactinomycin, Daunorubicin, Docetaxel, Doxorubicin, Epirubicin, Etoposide, Fludarabine, Fluorouracil, Gemcitabine, Hydroxycarbamide, Idarubicin, Ifosfamide, Irinotecan, Liposomal doxorubicin, Leucovorin, Lomustine, Melphalan, Mercaptopurine, Methotrexate, Mitomycin, Mitoxantrone, Oxaliplatin, Paclitaxel, Pemetrexed, Pentostatin, Procarbazine, Raltitrexed, Streptozocin, Tegafur-uracil, Temozolomide, Thiotepa, Tioguanine/Thioguanine, Topotecan, Treosulfan, Vinblastine, Vincristine, Vindesine, 및 Vinorelbine.
제형의 전달
일부 측면에서, 본 발명은 비경구 투여를 위해 의도되고 예를 들어, 바이알 (vial), 사전-충진된 주사기 (pre-filled syringe), 주입 펌프 (infusion pumps), 착용 가능한 주입기 (wearable injector), 일회용 자동-주입기 (disposable auto-injectors), 또는 조절 가능한 용량 자동-주입기 (adjustable dose auto-injector)에 사용하기 적합한 GLP-2 유사체의 즉시 사용 가능 (ready-to-use )한 제형에 관한 것이다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 바람직한 측면을 설명하기 위해 제공되며 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 본원에 기술된 용량용법 (dosage regimen)에 따라 투여되는 GLP-2 유사체는 WO 2006/117565에 기술된 고체상 펩타이드 합성과 같은 방법에 따라 제조될 수 있으며, 그 내용은 그 전문이 본원에 참고로 명백하게 포함된다.
실시예 1. ZP1848-아세테이트 및 유사한 GLP-2 유사체의 합성
ZP1848-아세테이트 펩타이드는 표준 커플링 조건과 함께 Fmoc 고체상 펩타이드 합성 (SPPS) 접근법을 사용하여 합성하였다. 합성이 완료된 후, 펩타이드 서열을 탈보호하고 고체 지지체로부터 절단하고, 조펩타이드 (crude peptide)를 분취 역상 HPLC (preparative reversed-phase HPLC)를 사용하여 정제하였다. 최종 크로마토그래피 단계 동안 적절한 농도의 아세트산과 후속 동결 건조를 사용하여 이동상을 적용함으로써 펩타이드를 원하는 아세테이트 염 형태로 전환시켰다. 생성된 원료 의약품은 아세테이트 함량이 11 % 미만이거나 아세테이트 8 당량 미만이었다: 배치 1 (아세테이트 6 %, 아세테이트 4.6 당량), 배치 2 (아세테이트 7 %, 아세테이트 5.4 당량) 및 배치 3 (아세테이트 6 %, 아세테이트 4.6 당량). 이 합성 및 정제 프로토콜은 본 발명의 제형에 사용되는 다른 GLP-2 유사체를 만들기 위해 적용될 수 있다.
실시예 2. GLP-2 유사체 ZP1848-아세테이트의 약제학적 제형에서 공유 결합된 올리고머의 형성 조사
재료 및 방법
공유 결합된 올리고머의 검출을 위해, 0.5 mL/min의 유속에서 선형 구배를 제공하는 Dionex Ultimate3000 HPLC 시스템을 분석에 사용하였다. 이동상은 45 % 아세토니트릴과 55 % Milli-Q 물에서 0.1 % TFA로 구성되었다. 215 nm의 파장이 검출에 사용되었다. 주입량은 펩타이드 4 ㎍ 이었다. 공유적으로 형성된 펩타이드의 분리에 사용된 컬럼은 입자 크기가 4 μm이고 치수 (dimension)가 300 * 4.6 mm 인 TSKgel SuperSW2000 (TSK BioScience)이었다. 전체 실행 시간은 25 분이었다. 펩타이드 모노머의 화학적 안정성 평가를 위해 산성 이동상 및 아세토니트릴 구배를 갖는 C18 컬럼이 사용되었다.
물 (Milli-Q)에 만니톨 (700 mM), L-히스티딘 (200 mM) 및 ZP1848 펩타이드 (아세테이트 염; 60 mg/mL)의 저장 용액 (stock solution)을 준비하였다. 만니톨 및 히스티딘 용액을 230 mM 만니톨 및 15 mM 히스티딘을 제공하기에 적합한 양으로 혼합하였다. 각각 0.2, 2 및 20 mg/mL의 최종 농도로 펩타이드 저장 용액을 첨가하였다. 물은 최종 부피의 90 %까지 첨가하였다. 필요한 경우, 1 M 아세트산/0.5 M L-아르기닌을 사용하여 pH를 pH 7로 조정하였다. 물을 최종 부피까지 추가하였다.
결과 및 논의
액체 제형에서 펩타이드 또는 단백질 약물의 농도를 증가시키면 공유 반응의 더 높은 확률로 이어지는 질량 작용 효과 (mass action effect)의 결과로 이량체, 삼량체 및 고차 올리고머의 농도가 증가한다는 것이 당업계에 알려져 있다 (van Maarschalkerweerd et al. al., Intrinsically Disord. Proteins. 2015; 3(1) :e1071302). 따라서, 공유 고분자량 분해 산물 (covalent high molecular weight degradation products (cHMWDP); cHMWDP)의 형성은 원료 의약품 농도의 함수로 증가하고 제형에서 이용 가능한 생물학적 활성 단량체 펩타이드의 양을 줄이는 효과가 있다. 따라서 이는 GLP-2 유사체 ZP1848-아세테이트의 제형에서 조사되었다.
도 1에서 ZP1848-아세테이트 단량체에서 올리고머를 분리하는 일반적인 크로마토그램을 나타내었다. ZP1848-아세테이트의 올리고머는 ZP1848-아세테이트 단량체로부터 잘 분리되며 모두 하나의 피크로 통합된다. 피크의 면적 백분율을 사용하여 올리고머, 특히 공유 결합된 이량체 및 삼량체의 양을 정량화하였다.
동일한 제형에서 0.2, 2 및 20 mg/mL ZP1848을 포함하는 제형은 2-8 ℃에서 24 개월 저장 후 분석하였다. 이것은 주로 이량체 (두 개의 공유 결합된 ZP1848-아세테이트 분자)의 형성이나, 어느 정도는 삼량체 (LC-MS로 확인)도 있다. 0.2 mg/mL를 포함하는 제형은 2.6 % 올리고머를 갖고, 2 mg/mL는 1.91 %를, 20.0 m/ mL는 1.35 %를 갖는다. 올리고머양의 초기값은 0.1 % 미만이었다.
24 개월 후 2-8 ℃, 장기 안정성에서 공유 결합된 올리고머의 형성
의약품 농도, ZP1848-아세테이트 공유 결합된 올리고머
0.2 mg/mL 2.60 %
2 mg/mL 1.91 %
20 mg/mL 1.35 %
ZP1848-아세테이트 (글레파글루타이드)를 2-8 ℃에서 장기간 보관하는 동안, 놀랍게도 공유 결합된 올리고머의 형성은 농도 의존적이지만, 일반적인 예상과는 반대로, 올리고머 형성에 대한 농도 의존성은 GLP-2 유사체의 농도 증가에 역의존적이라는 것이 발견되었다. 특정 이론에 얽매이지 않고, 본 발명자들은 약물 농도가 증가함에 따라 공유 결합된 올리고머의 형성이 감소하는 것이 GLP-2 유사체 분자가 공유 결합되기 보다는 서로 약하게 결합된 고차종 (higher order species) 형성으로 이어지는 GLP-2 유사체의 라이신 테일의 경쟁 반응을 촉진한 결과라고 생각한다. 이것은 공유 결합된 올리고머가 형성될 때 발생하는 것처럼, 이러한 약하게 결합된 종은 활성 종의 손실을 일으키기 보다는, 해리되어 생물학적 활성 단량체를 방출할 수 있음을 의미한다.
실시예 3: GLP-2 유사체 ZP1848 아세테이트의 제형에 대한 완충제 선별
ZP1848-아세테이트 (4 mg/mL) 제형의 안정성에 대한 다양한 완충 염의 효과를 조사하기 위한 연구를 수행하였다. 제형의 총 완충액 농도는 20mM이었다.
재료 및 방법
하기 표 2에 열거된 완충액을 준비하였다. 완충액의 pH를 1 M HCl/1 M NaOH로 조정하였다. ZP1848 펩타이드 (아세테이트 염)를 최종 샘플 부피의 80 %에서 관련 완충액에 용해시켜 최종 제형에서 4 mg/mL를 제공하였다. 필요한 경우, pH를 200 mM 아세트산 또는 100mM L-아르기닌을 사용하여 원하는 제형 pH로 조정하였다. 완충액을 최종 부피까지 추가하였다. 각 제형을 안정성 테스트를 위해 적절한 바이알 (1 mL/바이알)에 채웠다.
결과 및 논의
외관상 (Visual appearance) 시트레이트 완충액, 시트레이트/트리스 완충액 또는 석시네이트 완충액을 포함하는 모든 제형이 점성 및/또는 탁한 것으로 나타났 (표 2 참조). 아세테이트 완충액 (20 mM, pH 5), 메실레이트 완충액 (20 mM, pH 6), 히스티딘 완충액 (15 mM, pH 7) 및 히스티딘-아르기닌 (15 + 5 mM, pH 7)은 투명하고 비-점성적이어서 육안 검사 (visual inspection)를 통과한 제형을 생산하였다.
다양한 완충제의 효과를 선별하기 위한 제형
제형 pH 완충제 완충제 농도(mM) 육안 검사
투명 및 비-점성?
1 4.0 Citrate-TRIS 20 No
2 5.0 Citrate-TRIS 20 No
3 6.0 Citrate-TRIS 20 No
4 7.0 Citrate-TRIS 20 No
5 8.0 Citrate-TRIS 20 No
6 5.0 Succinate 20 No
7 5.0 Acetate 20 Yes
8 5.0 Histidine 20 Yes
9 6.0 Succinate 20 No
10 6.0 Mesylate 20 Yes
11 6.0 Histidine 20 Yes
12 7.0 Citrate 20 No
13 7.0 TRIS 20 Yes
14 7.0 Histidine + Arginine 15 + 5 Yes
실시예 4: 인산염 (Phosphate) 완충제의 GLP-2 유사체 ZP1848-아세테이트와의 비호환성
재료 및 방법
물 (Milli-Q)에 만니톨 (700 mM), 인산염 완충액 (200 mM) 및 중 ZP1848-아세테이트 펩타이드 (60.2 mg/mL)의 저장 용액을 준비하였다. 저장 용액을 적절한 양으로 혼합하여 하기 표 3에 나타낸 제형을 제공하였다. 물은 최종 부피의 90 %까지 추가하였다. 필요한 경우, pH는 1 M 아세트산/0.5 M L-아르기닌을 사용하여 원하는 제형 pH로 조정하였다. 물을 최종 부피까지 추가하였다. 샘플 용기는 실온에서 24 시간 후에 투명도와 점도에 대해 육안으로 검사하였다.
인산염 완충액의 효과를 테스트하기 위한 제형
ZP1848 농도 [mg/mL] pH 인산염(Phosphate)
[mM] 		만니톨(Mannitol)
[mM] 		육안 검사
투명 및 비-점성?
0 mg/mL 7.0 20 230 Yes
20 mg/mL 6.5 20 230 No
20 mg/mL 7.0 20 230 No
20 mg/mL 7.0 50 230 No
20 mg/mL 7.5 20 230 No
결과 및 논의
육안 검사는 20-50 mM 인산염 완충액을 함유하는 pH 6.5-7.5에서 20 mg/mL의 ZP1848-아세테이트의 제형이 실온에서 24 시간 후에 탁하고/거나 매우 점성이 있음을 보여 주었다. 따라서 인산염 완충액은 이러한 제형에서 ZP1848-아세테이트와 호환할 수 없는 것으로 결론냈다.
실시예 5: GLP-2 유사체 ZP1848-아세테이트 제형의 점도에 대한 아세테이트 함량의 영향
ZP1848-아세테이트 제형의 점도에 대한 아세테이트 함량의 영향을 결정하기 위해 연구를 수행하였다.
재료 및 방법
6 % 아세테이트를 함유하는 GLP-2 유사체 ZP1848-아세테이트의 원료 의약품 (DS)을 사용하여 샘플을 준비하였다. 7.8-15 % 아세테이트 범위에서 증가된 아세테이트 함량의 효과를 조사하기 위해 아세테이트를 첨가하였다 (표 4 참조).
Milli-Q 물에 만니톨 (700 mM), 아세트산 (1000 mM), 히스티딘 (200 mM) 및 ZP1848-아세테이트 펩타이드 (60 mg/ml)의 저장 용액을 준비하였다. 저장 용액을 적절한 양으로 혼합하여 하기 표 4에 나타낸 제형을 제공하였다. 물은 최종 부피의 90 %까지 추가하였다. 필요한 경우, pH를 250 mM 아르기닌을 사용하여 원하는 제형 pH로 조정하였다. 물을 최종 부피까지 추가하였다. 각 제형을 안정성 테스트를 위해 적절한 바이알에 채웠다.
투명도와 점도를 위해 바이알을 육안으로 검사하였다. 점도는 microVISC ™ 점도계를 사용하여 측정하였다. 유체 역학적 반경 (hydrodynamic radius)은 Wyatt DynaPro II DLS (Dynamic Light Scattering) Platereader를 사용하여 측정하였다. 플레이트에 적재(load) 된 샘플 크기는 170 μl였다.
pH 7에서 다양한 아세테이트 농도를 갖는 20 mg/ml의 ZP1848-아세테이트를 포함하는 제형
제형 # 만니톨
(Mannitol) [mM] 		히스티딘
(Histidine) [mM] 		아세테이트
(Acetate) % 		아세테이트
(Acetate) [mM]
1 230 15 6 20.3
2 230 15 7 23.7
3 230 15 8 27.1
4 230 15 9 30.5
5 230 15 10 33.9
6 230 15 11 37.3
7 230 15 12 40.7
8 230 15 13 44.0
9 230 15 14 47.4
10 230 15 15 50.8
결과 및 논의
다양한 아세테이트 농도를 갖는 제형의 점도 및 유체 역학적 반경은 도 2에 나타냈다. 결과는 ZP1848-아세테이트 제형의 점도가 더 높은 아세테이트 농도에서 비-선형 방식으로 예기치 않게 증가한다는 것을 보여준다. 따라서 제형의 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트보다 작거나 같으면 저/불변 수준으로 제어하는 것이 유리하며, 이는 약물 전달 장치의 형태로 GLP-2 유사체의 제형을 제공할 가능성을 열어준다.
실시예 6: 2 및 20 mg/mL에서 GLP-2 유사체 ZP1848-아세테이트 제형의 안정성에 대한 완충염의 효과
ZP1848-아세테이트 (2 및 20 mg/mL) 제형의 안정성에 대한 다양한 완충염의 효과를 조사하기위한 연구를 수행하였다. 모든 완충액은 15 mM 농도였다.
재료 및 방법
물(Milli-Q)에 만니톨 (700 mM), L-히스티딘 (200 mM), 글리신 (400 mM), 라이신 (200 mM), TRIS (200 mM), Bis-TRIS (200 mM), MOPS (100 mM), 석신산 (succinic acid ) (200 mM), MES (2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid) (200 mM), 메실레이트 (200 mM), 인산염 (200 mM) 및 ZP1848 펩타이드 (아세테이트 염; 약 50 mg/ml)의 저장 용액을 준비하였다. 부형제 용액을 적절한 양으로 혼합하여 하기 표 5 및 표 6에 나타낸 제형을 제공하였다. 모든 제형은 230 mM 만니톨 및 15 mM의 완충제를 함유하였다. 펩타이드 저장 용액을 첨가하였다. 물은 최종 부피의 90 %까지 추가하였다. 필요한 경우 1M 아세트산/0.5M L-아르기닌을 사용하여 pH를 pH 7로 조정하였다. 물을 최종 부피까지 추가하엿다. 제형을 바이알에 채우고 40 ℃에 두고 안정성 연구를 하였다.
결과 및 논의
관찰된 결과에 따르면, 15 mM 농도의 완충제 히스티딘, 글리신, 라이신, TRIS, Bis-TRIS, MOPS, 메실레이트 및 MES는 2 mg/mL 및 20 mg/mL 펩타이드의 ZP1848-아세테이트 제형 및 pH 7에서 사용할 수 있었다.
다양한 완충액으로 제조된 제형의 안정성
제형 펩타이드
함량 		완충제 육안 검사
투명 및 비-점성?
0 주(weeks) 3 주 (weeks)
(40 ℃)
1 20 Histidine Yes Yes
2 20 Glycine Yes Yes
3 20 Lysine No Yes
4 20 TRIS Yes Yes
5 20 Bis-TRIS Yes Yes
6 2 Histidine Yes Yes
7 2 Glycine Yes Yes
8 2 Lysine Yes Yes
9 2 TRIS Yes Yes
10 2 Bis-TRIS Yes Yes
11 20 MOPS Yes Yes
12 20 Succinic acid No No
13 20 MES Yes Yes
14 20 Mesylate Yes Yes
15 20 Phosphate No No
16 2 MOPS Yes Yes
17 2 Succinic acid Yes No
18 2 MES Yes Yes
19 2 Mesylate Yes Yes
20 2 Phosphate Yes No
다양한 완충제를 사용한 제형에서의 공유 결합된 올리고머의 형성
제형 펩타이드
함량 		완충제 DLS
(Z-평균, nm)
0 주(weeks) 3 주 (weeks)
(40 ℃)
1 20 Histidine 1.6 1.7
2 20 Glycine 1.7 1.8
3 20 Lysine 41.9 4.4
4 20 TRIS 35.2 4.3
5 20 Bis-TRIS 1.7 1.7
6 2 Histidine 2.7 3.1
7 2 Glycine 2.4 3.6
8 2 Lysine 3.9 4
9 2 TRIS 3.8 4.1
10 2 Bis-TRIS 4.7 4.1
11 20 MOPS 2.3 2.5
12 20 Succinic acid 27.4 192.5
13 20 MES 2.3 3.2
14 20 Mesylate 25.5 4
15 20 Phosphate 21.1 244.5
16 2 MOPS 3.3 70.1
17 2 Succinic acid 82.5 259.3
18 2 MES 3.8 3.9
19 2 Mesylate 3.7 4.1
20 2 Phosphate 333.9 214.5
공유 결합된 올리고머의 형성을 다양한 완충액에 대해 평가하였다 (표 6). 20 mg/mL에서 석신산 (succinic acid)은 1 주 후에 겔을 형성하였고, 2 주 및 3 주의 안정성에서는 평가할 수 없었다. 2 mg/mL, 동일한 완충액은 공유 결합된 올리고머의 형성이 상당히 더 높았다 (2.1 %). 전체적인 경향은 2 mg/mL 제형이 40 ℃에서 3 주 동안 가속 저장 한 후 20 mg/mL에 비해 공유 결합된 올리고머의 형성이 더 높았다는 것이다.
인산염 완충액 및 석시네이트 완충액은 이들 제형에서 2 및 20 mg/mL의 ZP1848-아세테이트와 호환될 수 없었다.
펩타이드 단량체 안정성은 40 ℃에서 3 주 동안의 안정성에 대한 HPLC 순도를 측정하여 평가하였다. 결과는 도 3 및 표 7에 제시하였다. 앞에서 설명한 겔 형성으로 인해, 20 mg/mL에서는 첫번째 평가 시점 (first time-points)에 대해 석신산 (succinic acid)을 평가할 수 있었다. 2 mg/mL의 경우, 3 주 동안의 결과를 얻을 수 있었다. 평가한 완충액 간에 사소하고 유의하지 않은 차이만 찾을 수 있었다. 따라서, 완충액의 선택은 펩타이드 단량체의 안정성에 영향을 미치지 않는 것 같다.
0 ~ 3 주 동안 40 °에서 다양한 완충액을 사용하여 공유 결합된 올리고머의 형성
시간/주 (Time/weeks),40 ℃
제형 완충 제제 0 1 2 3 %/wk
1 20 mg/mL Histidine 0.14 0.40 0.55 0.69 0.18
2 Glycine 0.15 0.39 0.53 0.64 0.16
3 Lysine 0.15 0.38 0.51 0.64 0.16
4 TRIS 0.10 0.38 0.51 0.63 0.17
5 Bis-Tris 0.15 0.42 0.58 0.72 0.19
11 MOPS 0.14 0.38 0.49 0.59 0.15
12 Succinic Acid 0.14 0.40 측정불가　
13 MES 0.14 0.37 0.49 0.61 0.15
14 Mesylate 0.14 0.40 0.53 0.65 0.17
15 Phosphate 측정불가
6 2 mg/mL Histidine 0.16 0.54 0.75 1.0 0.26
7 Glycine 0.16 0.49 0.69 0.79 0.21
8 Lysine 0.15 0.57 0.76 0.94 0.26
9 TRIS 0.15 0.52 0.71 0.84 0.23
10 Bis-Tris 0.19 0.81 1.19 1.5 0.43
16 MOPS 0.15 0.53 0.71 0.82 0.22
17 Succinic Acid 0.21 0.72 1.4 2.1 0.63
18 MES 0.16 0.57 0.75 0.88 0.23
19 Mesylate 0.16 0.60 0.82 1.0 0.26
20 Phosphate 측정불가
실시예 7: 2 및 20 mg/mL에서 GLP-2 유사체 ZP1848-아세테이트의 제형의 안정성에 대한 장성 조절제의 효과
ZP1848-아세테이트 (2 및 20 mg/mL) 제형의 안정성에 대한 다양한 장성 조절제의 효과를 조사하기 위한 연구를 수행하였다.
재료 및 방법
물 (Milli-Q)에 L-히스티딘 (200 mM), 수크로스 (730 mM), 글리세롤 (977 mM), D-소르비톨 (801 mM), D-(+) 트레할로스 탈수화물 (500 mM), D-만니톨 (700 mM) 및 ZP1848-아세테이트 펩타이드 (아세테이트 염; 약 50 mg/ml)의 저장 용액을 준비하였다. 부형제 용액을 적절한 양으로 혼합하여 하기 표 8에 나타낸 제형을 제공하였다. 모든 제형은 15 mM 히스티딘을 함유하였다. 필요에 따라 펩타이드 저장 용액을 첨가하여 표 8에 나타낸 펩타이드 함량을 얻었다. 물을 최종 부피의 90 %까지 추가하였다. 필요한 경우 1M 아세트산/0.5M L-아르기닌을 사용하여 pH를 pH 7로 조정하였다. 물을 최종 부피까지 추가하엿다. 각 제형을 바이알에 채우고 40 ℃에 두고 안정성 연구를 하였다. 샘플 용기의 투명도와 점도를 시각적으로 검사하고 DLS (Dynamic Light Scattering) 분석을 통해 유체 역학적 반경을 분석하였다.
결과 및 논의
표 8에 나타난 관찰 결과에 따르면, 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스는 2 mg/ml 및 20 mg/mL, 및 pH 7.0에서 ZP1848-아세테이트를 사용한이러한 제형에 사용할 수 있다.
다양한 장성 조절제를 사용하여 제조된 제형
제형
펩타이드
함량
장성 조절제
(Tonicity modifier) 		육안 검사
투명 및 비-점성?
0 주 (weeks) 3 주 (weeks)
(40 ℃)
1 20 Mannitol Yes Yes
2 20 Sucrose Yes Yes
3 20 Glycerol Yes Yes
4 20 Sorbitol Yes Yes
5 20 Trehalose Yes Yes
6 2 Mannitol Yes Yes
7 2 Sucrose Yes Yes
8 2 Glycerol Yes Yes
9 2 Sorbitol Yes Yes
10 2 Trehalose Yes Yes
40 ℃에서 최대 3 주 동안 제형 1 내지 10에 대해 공유 올리고머의 형성을 측정하였다. 그 결과를 표 9에 나타냈다. 10 가지 제형에 대한 공유 올리고머 형성의 차이는 안정성 시험 1 주 후에 이미 확인할 수 있다. 또한, 속도 (기울기)는 테스트 기간 동안 상당히 일관된다. 제형 3 (20 mg/mL - 글리세롤), 7 (2 mg/mL - 수 크로스), 8 (2 mg/mL - 글리세롤), 9 (2 mg/mL - 소르비톨)는 다른 것보다 훨씬 더 높은 공유 결합 올리고머 형성을 갖는다. 만니톨은 공유 결합된 올리고머의 가장 낮은 형성을 나타냈다. 전체적인 경향은 조사된 모든 장성 제제에 대해 20 mg/mL에 비해 2 mg/mL가 공유 결합된 올리고머의 형성이 더 높다는 것이다.
40 ℃에서 0 내지 3 주 동안 제형 1-10의 공유 결합된 올리고머의 형성
　 시간/주 (Time/weeks), 40 ℃
제형 장성 제제 0 1 2 3 %/wk
1 20 mg/mL Mannitol 0.22 0.40 0.57 0.90 0.22
2 Sucrose 0.27 0.50 0.84 1.3 0.34
3 Glycerol 0.6 2.0 2.8 4.0 1.11
4 Sorbitol 0.25 0.60 0.84 1.1 0.28
5 Trehalose 0.26 0.60 0.90 1.3 0.34
6 2 mg/mL Mannitol 0.34 0.70 0.90 1.2 0.28
7 Sucrose 0.37 1.4 2.7 4.3 1.31
8 Glycerol 1.8 12.2 16.4 21.5 6.34
9 Sorbitol 0.51 1.9 2.8 3.8 1.08
10 Trehalose 0.45 1.1 1.9 2.9 0.81
펩타이드 단량체 안정성은 40 ℃에서 3 주 동안의 안정성에 대한 HPLC 순도를 측정하여 평가하였다. 공유 결합된 올리고머와 유사하게, 글리세롤을 사용할 때 화학적 안정성이 좋지 않고 다른 장성 제제와 다르다. 결과는 도 5 및 도 6에 제시하였다.
실시예 8: GLP-2 유사체 ZP1848-아세테이트의 제형에서 pH 조정에 사용된 산 및 염기의 물리적 안정성 영향
재료 및 방법
물에 만니톨, 히스티딘 및 ZP1848-아세테이트 펩타이드의 저장 용액을 준비하였다. 만니톨과 히스티딘의 저장 용액을 물에 첨가하고 혼합하고, 펩타이드 용액을 첨가하여 최종 펩타이드 함량이 10 mg/mL가 되도록 하였다. 물은 최종 부피의 90 %까지 첨가하였다. 250 mM 아르기닌/1M AcOH 또는 1M NaOH/1M HCl을 사용하여 pH를 pH 7로 조정하였다 (표 10 참조). 물을 최종 부피까지 추가하였다. 안정성 테스트를 위해 각 제형을 바이알에 채우고 5 ℃, 25 ℃ 및 40 ℃에 두고 안정성 연구를 하였다. 투명도와 점도를 위해 샘플 용기를 육안으로 검사하였다.
결과 및 논의
표 10에 표시된 결과는 pH 조정을 위한 1M NaOH/1M HCl의 사용이 ZP1848-아세테이트 제형의 물리적 안정성에 악영향을 미친다는 것을 보여준다.
산/염기가 물리적 안정성에 미치는 영향
제형 pH 조정 제제 육안 검사
투명 및 비-점성?
영점 시간
(Time zero)		 40 ℃
4 주(weeks)		 25 ℃
26 주(weeks)		 5 ℃
52 주(weeks)
1 0.25 M L-Arg/1M AcOH Yes Yes Yes Yes
2 1M NaOH / 1M HCl Yes Yes Yes No
(13주에 침전)
실시예 9: GLP-2 유사체 ZP1848 펩타이드의 제형을 위한 ZP1848 펩타이드 아세테이트 염 및 ZP1848 펩타이드 염화물 염의 사용
선택된 ZP1848 제형에서 ZP1848 펩타이드 아세테이트 염 및 ZP1848 펩타이드 하이드로클로라이드(hydrochloride) 염을 사용하여 염의 효과를 조사하기 위한 연구를 수행하였다. 염 유형, 농도, 완충액 및 장성 조절제의 효과는 40 ℃에서 가속 저장 (accelerated storage) 후 조사하였다. ZP1848 펩타이드 나트륨 염의 합성을 시도하였으나 가능하지 않은 것으로 밝혀졌다.
재료 및 방법
Milli-Q 물에 만니톨 (700 mM), 히스티딘 (200 mM), 소르비톨 (700 mM), 메실레이트 (200 mM) 및 ZP1848 펩타이드 용액 (염화물 염; 약 50 mg/mL)의 저장 용액을 준비하였다. 부형제 용액을 적절한 양으로 혼합하여 하기 표 11 및 표 12에 나타낸 제형을 제공하였다. 펩타이드 저장 용액을 첨가하여 원하는 최종 펩타이드 함량을 얻었다. 물은 최종 부피의 90 %까지 추가하였다. 필요한 경우, pH는 1 M 아세트산/0.5 M L-아르기닌을 사용하여 원하는 제형의 pH로 조정하였다. 물을 최종 부피까지 추가하였다. 각 제형을 바이알에 채우고 40 ℃에 두고 안정성 연구를 하였다. 샘플 용기의 투명도와 점도를 시각적으로 검사하고 DLS를 사용하여 유체 역학적 반경을 분석하였다.
결과 및 논의
표 11 및 12에 표시된 결과는 제형 1, 2, 3 및 4의 Z-평균, 점도 및 시각적 외관이 40 ℃에서 3 주 후, 시각적 외관 및 DLS에 의해 평가한 바와 같이 변하지 않은 안정성을 가짐을 보여준다. 제형 5는 Z-평균, 점도 및 시각적 외관에 의해 평가한 바와 같이 시간에 따른 안정성의 변화를 나타냈다.
펩타이드 염 종류의 영향
제형:
펩타이드 염
펩타이드함량
Mannitol Histidine Sorbitol Mesylate 육안 검사
투명 및 비-점성?
0 주 (weeks) 3 주 (weeks)(40℃)
1 ZP1848
아세테이트 염		 20 230 15 - - Yes Yes
2 ZP1848
염화물 염		 20 230 15 - - Yes Yes
3 ZP1848
염화물 염		 2 230 15 - - Yes Yes
4 ZP1848
염화물 염		 20 - 15 230 - Yes Yes
5 ZP1848
염화물 염		 20 230 - - 15 No No
펩타이드 염 종류의 영향
제형
펩타이드 염
펩타이드 함량 Mannitol Histidine Sorbitol Mesylate DLS (Z-평균, nm)
0 주 (weeks) 3 주 (weeks)
(40 ℃)
1 ZP1848
아세테이트 염		 20 230 15 - - 1.5 2.1
2 ZP1848
염화물 염		 20 230 15 - - 2.3 3.3
3 ZP1848
염화물 염		 2 230 15 - - 2.7 2.8
4 ZP1848
염화물 염		 20 - 15 230 - 2.2 3.3
5 ZP1848
염화물 염		 20 230 - - 15 24.1 6.9
제형 1 내지 5의 화학적 안정성을 40 ℃에서 최대 4 주 동안 추적하였다. 수득된 순도는 방출시 100 %로 정규화하였다. 결과는 도 7에 제시하였다. 제형 1, 2, 4 및 5에 대해 펩타이드 단량체 화학적 안정성에서 유의한 차이는 보이지 않았다. 제형 3은 4 주 후에 약간 더 낮지만 허용 가능한 화학적 안정성을 보였으며 이것은 아마도 이 제형의 더 낮은 농도에 의해 야기된 것으로 생각된다.
공유 올리고머의 형성은 40 ℃에서 최대 4 주 동안 제형 1 내지 5에 대해 측정하였다. 그 결과를 표 13에 나타냈다. 5 가지 제형에 대한 공유 올리고머 형성의 차이는 안정성 테스트 1 주 후에도 확인할 수 있었다. 또한, 에 대한 비율 (기울기)은 테스트 기간 동안 상당히 일관된다 (Additionally, the rate (slope) for is fairly consistent throughout the tested period.). 제형 1 (20 mg/mL, ZP1848의 아세테이트 염, 장성 제제로서 히스티딘)은 40 ℃에서 4 주 동안 안정성을 유지한 후 약 1.1 %의 공유 올리고머를 형성한 가장 안정적인 제형이었다. 제형 5 (20 mg/mL, ZP1848의 클로라이드 염, 장성 제제로서 메실레이트)는 40 ℃에서 4 주 동안 안정성을 유지한 후 약 2.1 %의 공유 올리고머 형성을 갖는 두 번째로 가장 안정적인 제형이었다. 세 번째로 가장 안정한 것은 제형 3 (2 mg/mL, ZP1848의 클로라이드 염, 장성 제제로서 히스티딘)이었다. 네 번째로 가장 안정한 것은 제형 2 (20 mg/mL, ZP1848의 염화물 염, 장성 제재로서 히스티딘)이다. 가장 안정하지 않은 제형은 제형 4 (20 mg/mL, ZP1848의 클로라이드 염, 장성 제제로서 소르비톨)이다.
40 ℃ 에서 3 주 후 ZP1848의 아세테이트 염에 대해 만니톨에 비해 소르비톨을 사용할 때 약간 낮은 안정성의 경향이 이전에 나타났다 (만니톨의 경우 0.9 %, 소르비톨의 경우 1.1 %). 실시예 7 참조. 소르비톨과 만니톨 함유 제형의 차이는 20 mg/mL의 염화물 염 과 소르비톨 함유 제형이 약 3.9 %의 공유 올리고머 형성을 갖는 아세테이트 및 클로라이드 염을 비교할 때 더욱 뚜렷하다. 염화 염의 2 mg/mL와 20 mg/mL 제형을 비교할 때, 공유 올리고머의 형성은 40 ℃에서 4 주 후에 2 mg/mL의 경우 2.4 % (주당 0.53 % 증가), 20 mg/mL의 경우 3.3 % (주당 0.75 % 증가)였다. 놀랍게도 이것은 아세테이트 염으로 관찰되는 것이 아니기 때문이다. 20 mg/mL의 아세테이트 염의 경우 40 ℃에서 3 주 후 공유 올리고머의 형성은 0.9 % (주당 0.21 % 증가) 인 반면 2 mg/mL는 1.2 % (주당 0.27 % 증가)였다. 더 낮은 농도의 아세테이트 염에서 공유 결합된 올리고머의 이러한 더 높은 형성은 또한 장기 안정성동안 보이는 것과 일치한다. 그러나 클로라이드 염의 경우 ZP1848 농도가 증가함에 따라 공유 결합된 올리고머가 더 많이 형성되면서 상황이 역전되었다.
40 ℃에서 0-4 주 동안 제형 1-5의 공유 결합된 올리고머의 형성
시간/주 (Time/Weeks), 40 ℃ 비율
0 1 2 3 4 %/wk
제형 1 0.13 0.43 0.67 0.89 1.1 0.24
제형 2 0.22 1.5 2.2 2.8 3.3 0.75
제형 3 0.22 0.99 1.5 1.9 2.4 0.53
제형 4 0.23 1.7 2.5 3.4 3.9 0.91
제형 5 0.22 0.86 1.3 1.6 2.1 0.44
실시예 10: 20 mg/mL에서 GLP-2 유사체 ZP1848 펩타이드의 제형을 위한 ZP1848 펩타이드 아세테이트 염 및 보존제의 사용
ZP1848 펩타이드 아세테이트 염과 일반적으로 사용되는 보존제의 호환성을 조사하기 위한 연구를 수행하였다. 가속화 저장 후 보존제와 온도의 영향을 조사하였다.
재료 및 방법
Milli-Q 물에 만니톨 (700 mM), 히스티딘 (200 mM) 및 ZP1848 펩타이드 용액 (아세테이트 염; 약 50 mg/mL)의 저장 용액을 준비하엿다. 펩타이드의 최종 농도는 20 mg/mL, 만니톨 230 mM, 히스티딘 15 mM이었다. 보존제 용액을 적절한 양으로 혼합하여 하기 표 14에 나타낸 제형을 제공하였다. 펩타이드 저장 용액을 첨가하여 원하는 최종 펩타이드 함량을 얻었다. 물은 최종 부피의 90 %까지 추가하였다. 필요한 경우, pH는 1 M 아세트산/0.5 M L-아르기닌을 사용하여 원하는 제형 pH로 조정하였다. 물을 최종 부피까지 추가하였다. 각 제형은 바이알에 채웠다. 샘플 용기의 투명도와 점도를 시각적으로 검사하고 SEC에 의해 공유 결합된 올리고머에 대해 분석하고 HPLC에 의해 펩타이드 단량체 안정성을 분석하였다.
결과 및 논의
연구 결과는 표 14, 표 15 및 도 8에 나열하였다. 제형은 보존제가 첨가되지 않은 제형 1과 비교하여 보존제의 첨가에 의해 영향을 받지 않는 것으로 보인다.
화학적 안정성은 공유 결합된 올리고머 및 펩타이드 단량체 안정성 (순도)을 측정하여 평가하였다. 제형 4 (소르베이트 칼륨)는 공유 결합된 올리고머의 더 높은 형성을 갖지만 허용 가능한 범위 내에 있다. 다른 모든 제형은 유사한 양의 공유 결합된 올리고머를 갖는다. 25 ℃에서 13 주 후 정규화된 순도는 ZP1848-아세테이트가 약간 낮지만 허용 가능한 순도를 갖는 제형 4와 다시 유사한 안정성을 가짐을 보여준다.
26 주 동안 25 ℃에서 보존제 선별 결과
제형 No: Benzalkonium
chloride 		Methyl paraben Potasium sorbate 육안 검사
투명 및 비-점성?
0 주 (weeks) 26 주 (weeks) (25 ℃)
1 - - - Clear Clear
2 0.02% - - Clear Clear
3 - 0.2% - Clear Clear
4 - - 0.2% Clear Clear
13 주 동안 25 ℃에서 다양한 보존제에 대한 공유 결합된 올리고머 형성
시간/주 (Time/Weeks), 25 ℃ 비율
0 2 4 8 13 %/wk
제형 1 0.12 0.27 0.35 0.47 0.62 0.04
제형 2 0.13 0.26 0.35 0.48 0.59 0.03
제형 3 0.14 0.34 0.49 0.79 1.15 0.08
제형 4 0.14 0.93 1.73 3.46 5.4 0.41
실시예 11: 2 및 20 mg/mL에서 GLP-2 유사체 ZP1848 펩타이드의 제형을 위한 ZP1848 펩타이드 아세테이트 염 및 보존제의 사용
재료 및 방법
Milli-Q 물에 만니톨 (700 mM), 히스티딘 (200 mM) 및 ZP1848 펩타이드 용액 (아세테이트 염; 약 50 mg/mL)의 저장 용액을 준비하였다. 펩타이드의 최종 농도는 20 및 2 mg/mL, 만니톨 230 mM 및 히스티딘 15 mM이었다. 보존제 용액 (m-크레졸 및 페놀)을 적절한 양으로 혼합하여 하기 표 14에 나타낸 제형을 제공하였다. 물은 최종 부피의 90 %까지 추가하였다. 필요한 경우, pH는 1 M 아세트산/0.5 M L-아르기닌을 사용하여 원하는 제형 pH (7.0)로 조정하였다. 물을 최종 부피까지 추가하였다. 각 제형은 바이알에 채웠다. 샘플 용기의 투명도와 점도를 육안으로 검사하고 HPLC로 펩타이드 단량체 안정성을 분석하였다.
결과 및 논의
연구 결과는 아래 표 16에 나열하였다. 모든 제형은 52 주 동안 5 ℃에서 장기 안정성에 대해 테스트하였다. 모든 테스트된 용액은 조사한 기간 동안 투명하고 비-점성이었다.
5 ℃에서 52 주 동안 안정성을 유지한 후 물리적 외관을 테스트한 제형
제형 No: mg/mL m-cresol (mg/mL) Phenol
(mg/mL) 		육안 검사
투명 및 비-점성?
0 주 (weeks) 52 주 (weeks)
(5 ℃)
1 2 0 0 Clear Clear
2 2 3.2 0 Clear Clear
3 2 0 5.5 Clear Clear
HPLC에 의해 25 ℃에서 가속된 안정성 후 ZP1848-아세테이트의 평가는 도 9에 제시하였다. 페놀 함유 제제의 경우 약간 더 낮은 화학적 안정성을 보였으며 m- 크레졸은 보존되지 않은 제제와 유사한 화학적 안정성을 나타내었다. 5 ℃에서의 장기 안정성에서 12 개월의 안정성 후 샘플에 대해 뚜렷한 차이가 보이지 않으며 모든 샘플의 정규화된 ZP1848-아세테이트 순도가 94 % 이상이다 (데이터는 표시되지 않음). 따라서 조사한 모든 제형은 장기 안정성의 최소 52 주 동안 안정적이다.
본 발명이 전술한 실시예와 관련하여 설명되었지만, 본 개시를 수행할 때, 많은 등가 수정 및 변경이 당업자에게 명백할 것이다. 따라서, 제시된 본 발명의 실시예는 예시적인 것으로 이에 한정되지 않는다. 기재된 실시예에 대한 다양한 변경이 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 이루어질 수 있다. 본원에 인용된 모든 문헌은 모든 목적을 위해 그 전체가 참조에 의해 명시적으로 포함된다.
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Claims (71)

  1. 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형으로,

    R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
    여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
    X5는 Ser 또는 Thr이며;
    X11은 Ala 또는 Ser이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며; 및
    Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,

    상기 제형은
    (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체;
    (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
    (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
    (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함하고,

    상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 함유하는 제형.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 제형에서 GLP2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하인 제형.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성은 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례하는 제형.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제형인 제형.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 2-8 ℃에서 저장될 때 적어도 18 개월 동안 안정한 제형.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 갖는 제형.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체가 약 15 mg/mL 내지 약 25 mg/ml의 농도로 제형에 존재하는 제형.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 즉시 사용 가능한 (ready-to-use) 제형인 제형.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체가 약 20 mg/mL의 농도로 제형에 존재하는 제형.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 약 5 mM 내지 약 25 mM의 농도로 제형에 존재하는 제형.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 히스티딘 완충액인 제형.
  12. 제 11 항에 있어서, 상기 히스티딘 완충제가 약 15 mM의 농도로 제형에 존재하는 제형.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier)가 약 150 mM 내지 약 250 mM의 농도로 제형에 존재하는 제형.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비이온성 장성 변형제가 만니톨인 제형.
  15. 제 14 항에 있어서, 상기 만니톨이 약 230 mM의 농도로 제형에 존재하는 제형.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형의 pH가 약 6.8 내지 약 7.2인 제형.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형의 pH가 약 7.0인 제형.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/ml 농도의 GLP-2 유사체, 히스티딘 완충액, 메실레이트 및 아세테이트 완충액으로 이루어진 군으로부터 선택된 약 5 mM 내지 약 50 mM 농도로 존재하는 완충액, 만니톨, 수크로스, 글리세롤 및 소르비톨로 구성된 군에서 선택된 약 90 mM 내지 약 360 mM 농도의 비이온성 장성 변형제, 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 제공하기에 충분한 양의 아르기닌으로 구성되는 제형.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 20 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충제, 약 230 mM 농도의 만니톨, 및 약 7.0의 pH를 제공하기에 충분한 양의 아르기닌으로 구성되는 제형.
  20. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히스티딘 완충제가 L-히스티딘인 제형.
  21. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 만니톨이 D-만니톨인 제형.
  22. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아르기닌산이 L-아르기닌/아세트산인 제형.
  23. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 환원제가 없는 제형.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 6개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월 동안 2-8 ℃에서 안정한 제형.
  25. 제 24 항에 있어서, 상기 제형에서 GLP-2 유사체가 2 내지 8 ℃에서 18 개월 동안 저장된 후 그것의 생물학적 활성을 적어도 약 90 % 유지하는 제형.
  26. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 멸균된 제형.
  27. 제 1 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 주사에 의해 대상체로 투여되는 제형.
  28. 제 27 항에 있어서, 상기 주사가 피하주사인 제형.
  29. 제 1 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체가 아세테이트 염으로 제공되는 제형.
  30. 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체가 ZP1848 또는 ZP1848-아세테이트인 제형.
  31. 제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 20 mg/mL 농도의 ZP1848-아세테이트, 약 15 mM 농도의 히스티딘 완충제, 약 230 mM 농도의 만니톨, 및 약 7.0의 pH를 제공하기에 충분한 양의 아르기닌으로 구성되는 제형.
  32. 제 1 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항의 안정한 약제학적 제형을 보유하는 용기를 포함하는 제조 물품 (article of manufacture) 또는 키트.
  33. 제 1 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항의 GLP-2 유사체를 포함하는 액체 제형을 포함하는 전달 장치.
  34. 제 33 항에 있어서, 상기 전달 장치는 사전-충진된 주사기 (pre-filled syringe), 주입기 장치 (an injector device), 주입기 펜 (an injector pen), 조절 가능한 용량 자동-주입기 (an adjustable dose auto-injector), 일회용 자동-주입기 (a disposable auto-injector), 착용 가능한 주입기 (a wearable injector), 주입 펌프 (infusion pump)인 전달 장치.
  35. 치료에 사용하기 위한, 제 1 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항의 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  36. 인간 환자의 위 및 장 관련 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에 사용하기 위한, 제 1 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항의 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  37. 제 36 항에 있어서, 상기 위 및 장 관련 장애는 궤양 (ulcers), 소화 장애 (digestion disorders), 흡수 장애 증후군 (malabsorption syndromes), 짧은 장 증후군 (short-gut syndrome), 맹낭 증후군 (cul-de-sac syndrome), 염증성 장질환 (inflammatory bowel disease), 셀리악 스프루 (celiac sprue) (예 : 글루텐 유발 장질환 또는 셀리악 병으로 인한), 열대성 스프루 (tropical sprue), 저감마글로불린혈증 스프루 (hypogammaglobulinemic sprue), 장염 (enteritis), 국소 장염 (크론병) (regional enteritis (Crohn’s disease)), 궤양성 대장염 (ulcerative colitis), 소장 손상 (small intestine damage) 또는 단장 증후군 (short bowel syndrome (SBS))인, 치료 및/또는 예방을 위한 방법에 사용하기 위한 제형.
  38. 제 37 항에 있어서, 상기 위 및 장 관련 장애가 단장 증후군 (SBS)인, 치료 및/또는 예방을 위한 방법에 사용하기 위한 제형.
  39. 제 36 항에 있어서, 상기 위 및 장 관련 장애가 방사선 장염 (radiation enteritis), 감염성 또는 감염 후 장염 (infectious or post-infectious enteritis), 독성 또는 기타 화학 요법제로 인한 소장 손상인, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  40. 제 39 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체를 이용한 치료는 하나 이상의 항암 요법과 조합되는, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  41. 제 40 항에 있어서, 상기 항암 요법 치료는 하나 이상의 화학요법제를 환자에게 투여 또는 방사선 요법으로 환자를 치료하는 것을 포함하는, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  42. 제 40 항 또는 제 41 항에 있어서, 상기 제형은 화학 요법 또는 방사선 치료의 부작용 치료 및/또는 예방에 사용되는, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  43. 제 42 항에 있어서, 상기 화학요법 부작용이 화학 요법 치료로 인한 설사, 복부 경련, 구토 또는 장상피의 구조적 기능적 손상인, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  44. 제 40 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 환자는 SBS-장부전 환자인, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  45. 제 40 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 환자는 SBS-장기능부전 (SBS-intestinal insufficiency) 과 SBS-장부전 (SBS-intestinal failure)을 갖는 환자 사이의 경계에 있는 환자인, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  46. 제 35 항 내지 제 45 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 GLP-2 유사체를 환자에게 매주 1회 투여하는 것을 포함하는, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  47. 제 29 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 GLP-2 유사체를 환자에게 매주 2회 투여하는 것을 포함하는, 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 제형.
  48. 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형의 제조방법으로,
    R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
    여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
    X5는 Ser 또는 Thr이며;
    X11은 Ala 또는 Ser이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며; 및
    Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,
    상기 제조방법은 (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액; (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및 (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 제형화하는 단계를 포함하고,

    상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 함유하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  49. 제 48 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성은 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례하는 것인 제조방법.
  50. 제 49 항 또는 제 50 항에 있어서, 상기 제형이 2-8 ℃에서 저장될 때 적어도 18 개월 동안 안정한 것인 제조방법.
  51. 제 48 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형에서 GLP2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하인 것인 제조방법.
  52. 제 48 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 갖는 것인 제조방법.
  53. 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 제형의 용도로,
    R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
    여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
    X5는 Ser 또는 Thr이며;
    X11은 Ala 또는 Ser이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며; 및
    Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,

    2-8 ℃에서 저장될 때 24 개월 동안 안정한 액체 약제학적 제형을 제공하기 위하여, 상기 제형은
    (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체;
    (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택된 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
    (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
    (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함하고,

    상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 함유하는 것을 특징으로 하는 용도.
  54. 제 53 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성이 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례하는 것인 용도.
  55. 제 53 항 또는 제 54 항에 있어서, 상기 제형에서 GLP2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하인 것인 용도.
  56. 제 53 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 갖는 것인 용도.
  57. 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형의 점도를 조절하는 방법으로,
    R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
    여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
    X5는 Ser 또는 Thr이며;
    X11은 Ala 또는 Ser이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며; 및
    Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,

    상기 방법은 (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 또는 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액; (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및 (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 제형화하는 단계를 포함하고,

    상기 제형에서 GLP2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하이고, 상기 제형은 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 하기 화학식으로 표시되는 GLP-2 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 안정한 액체 약제학적 제형에서 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 공유 결합된 올리고머 생성물의 형성을 감소시키는 방법으로,
    R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
    여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
    X5는 Ser 또는 Thr이며;
    X11은 Ala 또는 Ser이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며; 및
    Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,

    상기 방법은 (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체, (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 또는 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액; (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및 (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 제형화하는 단계를 포함하고,

    상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 제 58 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성이 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례하는 것인 방법.
  60. 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체의 공유 결합된 올리고머 생성물의 형성을 감소시키기 위한 제형의 용도로,
    R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
    여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
    X5는 Ser 또는 Thr이며;
    X11은 Ala 또는 Ser이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며; 및
    Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,

    2-8 ℃에서 저장될 때 24 개월 동안 안정한 액체 약제학적 제형이며, 상기 제형은
    (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체;
    (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
    (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
    (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함하고,

    상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 함유하는 것을 특징으로 하는 용도.
  61. 제 60 항에 있어서, 상기 GLP-2 유사체의 공유 결합된 올리고머의 형성이 제형에서 GLP-2 유사체의 농도에 반비례하는 것인 용도.
  62. 하기 화학식으로 표시되는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 포함하는 액체 약제학적 제형의 점도를 조절하기 위한 제형의 용도로,
    R1-Z1-His-Gly-Glu-Gly-X5-Phe-Ser-Ser-Glu-Leu-X11-Thr-Ile-Leu-Asp-Ala-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-IIe-Ala-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Z2-R2
    여기서, R1은 수소, C1-4 알킬 (예:메틸), 아세틸, 포르밀, 벤조일 또는 트리플루오로아세틸이고;
    X5는 Ser 또는 Thr이며;
    X11은 Ala 또는 Ser이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며; 및
    Z1 및 Z2는 독립적으로 존재하지 않거나 Lys의 1-6 개 아미노산 단위의 펩타이드 서열임,

    2-8 ℃에서 저장될 때 24 개월 동안 안정한 액체 약제학적 제형이며, 상기 제형은
    (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 GLP-2 유사체;
    (b) 히스티딘 완충액, 메실레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
    (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
    (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함하고,

    상기 제형에서 GLP2 유사체로부터 발생하는 총 아세테이트 농도가 GLP-2 유사체 mg 당 11 % 아세테이트 이하이고, 상기 제형은 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 가지는 것을 특징으로 하는 용도.
  63. 하기 화학식을 갖는 글루카곤-유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체의 아세테이트 염을 포함하는 고체 조성물 :

    (H-HGEGTFSSELATILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK-NH2), x (CH3COOH)
    여기서, x는 1.0 내지 8.0 임.
  64. 제 63 항에 있어서, 상기 x가 4.0 내지 6.0 인 고체 조성물.
  65. 제 63 항에 있어서, 상기 x가 2.0 내지 7.0 인 고체 조성물.
  66. 제 63 항에 있어서, 상기 x가 3.0 내지 6.0 인 고체 조성물.
  67. 제 63 항에 있어서, 상기 x가 4.0 내지 6.0 인 고체 조성물.
  68. 제 63 항에 있어서, 상기 x가 4.0 내지 8.0 인 고체 조성물.
  69. (a) 약 2 mg/mL 내지 약 30 mg/mL 농도의 제 63 항 내지 제 67 항의 고체 조성물;
    (b) 히스티딘 완충액, 메실 레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 글리신 완충액, 라이신 완충액, TRIS 완충액, Bis-Tris 완충액 및 MOPS 완충액으로 구성된 군에서 선택되는 약 5 mM ~ 약 50 mM 농도의 완충액;
    (c) 만니톨, 수크로스, 글리세롤, 소르비톨 및 트레할로스로 구성된 군으로부터 선택된 비이온성 장성 변형제 (a non-ionic tonicity modifier) 약 90 mM 내지 약 360 mM; 및
    (d) 약 6.6 내지 약 7.4의 pH를 갖는 제형을 제공하기에 충분한 양의 아르기닌을 포함하는 안정한 수성 약제학적 제형으로,

    상기 제형은 공유 결합된 올리고머 생성물의 형태로 5 % 이하의 GLP-2 유사체를 포함하고, 상기 제형은 25 ℃에서 측정된 0.8 내지 2.0 mPa/sec의 점도를 가지는 제형.
  70. 제 68 항에 있어서, 상기 제형이 2-8 ℃에서 저장될 때 적어도 18 개월 동안 안정한 제형.
  71. 제 70 항에 있어서, 상기 제형에서 GLP-2 유사체가 2 내지 8 ℃에서 18 개월 동안 저장된 후 그것의 생물학적 활성을 적어도 약 90 % 유지하는 제형.
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