EA030220B1 - Устойчивая жидкая композиция, содержащая amg-416 (этелкалцетид) - Google Patents

Abstract

В изобретении представлена жидкая композиция, содержащая пептидный агонист кальций-чувствительного рецептора, а также способ изготовления и использование данной композиции.

Description

изобретение относится к жидкой композиции, содержащей пептидный агонист кальцийчувствительного рецептора, в частности к такой композиции, которая остается устойчивой после хранения в течение продолжительного периода. Настоящее изобретение также относится к способам изготовления и к использованию данной композиции.

Уровень техники, к которой относится изобретение

Были описаны разнообразные соединения, которые своим действием снижают уровни гормона паращитовидной железы (см. публикацию международной патентной заявки № νΟ 2011/014707). Согласно одному варианту осуществления такое соединение может быть представлено следующей формулой:

Н-ь-Суз-ОН

I

8—8

I

Ас-1)-Суз-1)-А1а-[>А1'§-1>-Агц-|:1-Аг8-1.>-А.1а-1>-Аг§-ХГН;

В основной цепи содержатся семь аминокислот, все из которых имеют Ό-конфигурацию, а цистеиновый остаток в боковой цепи имеет Ь-конфигурацию. Концевая аминогруппа является ацетилированной, а концевая карбоксильная группа является амидированной. Это соединение, называемое "АМО416", используется для лечения вторичного гиперпаратиреоза (8НРТ) у пациентов, подвергаемых гемодиализу. Жидкая композиция, содержащая АМО-416, может вводиться пациенту внутривенно. Гидрохлоридная соль АМО-416 может быть представлена следующей формулой:

Н-ь-Суз-ОН

I

8—8

Лсо-Суз-о-АВ-п-Агд-о-Ацг-о-Агд-о-Ак-О-Агд-КТТ · х(НС1)

Используемые в терапии пептиды создают множество проблем в отношении своего состава. Пептиды в целом, в частности пептиды, в которых содержится дисульфидная связь, как правило, проявляют лишь умеренную или низкую устойчивость в водном растворе. Пептиды проявляют склонность к гидролизу амидной связи в условиях как высоких, так и низких значений рН. Дисульфидные связи могут оказаться неустойчивыми даже в весьма умеренных условиях (при рН вблизи нейтрального уровня). Кроме того, содержащие дисульфидные связи пептиды, которые не являются циклическими, проявляют особую склонность к образованию димеров. Соответственно используемые в терапии пептиды часто присутствуют в лиофилизированной форме, представляющей собой сухой порошок или лиофилизат, предназначенный для последующего восстановления.

Лиофилизированная композиция, содержащая используемый в терапии пептид, имеет преимущество обеспечения устойчивости в течение продолжительных периодов времени, но является менее удобной для использования, поскольку для нее требуется добавление одного или нескольких разбавителей, и существует потенциальный риск ошибок вследствие использования разбавителя неподходящего типа или в неправильном количестве, а также риск загрязнения. Кроме того, процесс лиофилизации является продолжительным и дорогостоящим.

Соответственно требуется водная жидкая композиция, содержащая пептидный агонист кальцийчувствительного рецептора, такой как АМО 416. Была бы желательной жидкая композиция, которая остается устойчивой в течение заданного периода времени при хранении в соответствующих условиях и является подходящей для введения внутривенным или другим парентеральным путем.

Сущность изобретения

Предлагается жидкая композиция, содержащая пептидный агонист кальций-чувствительного рецептора, такой как АМО 416.

Согласно одному варианту осуществления композиция имеет рН на уровне от приблизительно 2,0 до приблизительно 5,0. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет рН от 2,5 до 4,5. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет рН от 2,5 до 4,0. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет рН от 3,0 до 3,5. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет рН от 3,0 до 4,0. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет рН от 2,8 до 3,8.

Согласно еще одному варианту осуществления рН композиции поддерживает фармацевтически приемлемый буферный раствор. Такие буферные растворы представляют собой, без ограничения, сукцинатные буферные растворы, ацетатные буферные растворы, цитратные буферные растворы и фосфатные буферные растворы. Согласно еще одному варианту осуществления буферный раствор представляет собой сукцинатный буферный раствор. Уровень рН композиции можно регулировать по мере необходимо- 1 030220

сти, используя кислоту или основание, такие как НС1 или ΝαΟΗ.

Согласно еще одному варианту осуществления пептидный агонист кальций-чувствительного рецептора присутствует в концентрации от 0,1 до 20 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления пептид присутствует в концентрации от 1 до 15 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления пептид присутствует в концентрации от 2,5 до 10 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления пептид присутствует в концентрации от приблизительно 1 мг/мл, приблизительно 5 мг/мл или приблизительно 10 мг/мл.

Согласно еще одному варианту осуществления ЛМС 416 присутствует в концентрации от приблизительно 0,1 до приблизительно 20 мг/мл. Согласно одному варианту осуществления ЛМС 416 присутствует в концентрации от приблизительно 1 до приблизительно 15 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления АМС 416 присутствует в концентрации от приблизительно 2,5 до приблизительно 10 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления АМС 416 присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 1 мг/мл, приблизительно 2,5 мг/мл, приблизительно 5 мг/мл или приблизительно 10 мг/мл.

Согласно еще одному варианту осуществления АМС 416 присутствует в концентрации от 0,1 до 20 мг/мл. Согласно одному варианту осуществления АМС 416 присутствует в концентрации от 1 до 15 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления АМС 416 присутствует в концентрации от 2,5 до 10 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления АМС 416 присутствует в концентрации от 1 до 5 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления АМС 416 присутствует в концентрации от 5 до 10 мг/мл. Согласно еще одному варианту осуществления АМС 416 присутствует в концентрации от 0,5 до 1,5 мг/мл, от 2,0 до 3,0 мг/мл, от 4,5 до 5,5 мг/мл или от 9,5 до приблизительно 10,5 мг/мл.

Согласно еще одному варианту осуществления композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый регулятор тоничности или смесь фармацевтически приемлемых регуляторов тоничности. Согласно еще одному варианту осуществления регулятор тоничности (или смесь регуляторов тоничности) присутствует в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической по отношению к текучим средам организма (например, по отношению к крови человека). Согласно еще одному аспекту регулятор тоничности представляет собой №С1.

Согласно еще одному варианту осуществления композиция содержит терапевтически эффективное количество пептидного агониста кальций-чувствительного рецептора. Согласно предпочтительному варианту осуществления композиция содержит терапевтически эффективное количество АМС 416.

Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при температуре от 2 до 8°С в течение вплоть до 2 лет. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при температуре от 2 до 8°С в течение вплоть до 3 лет. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при температуре от 2 до 8°С в течение вплоть до 4 лет.

Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет менее чем 8% степень разложения, когда она хранится при температуре от 2 до 8°С в течение вплоть до 2 лет. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет менее чем 8% степень разложения, когда она хранится при температуре от 2 до 8°С в течение вплоть до 3 лет. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет менее чем 8% степень разложения, когда она хранится при температуре от 2 до 8°С в течение вплоть до 4 лет.

Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при комнатной температуре в течение 3 месяцев. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при комнатной температуре в течение вплоть до 6 месяцев. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при комнатной температуре в течение вплоть до одного года.

Согласно еще одному варианту осуществления предлагается композиция, содержащая от 0,5 до 20 мг/мл пептидного агониста кальций-чувствительного рецептора (например, АМС 416) в водном растворе, сукцинатный буферный раствор, который поддерживает композицию при рН на уровне, составляющем от приблизительно 3,0 до приблизительно 3,5, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической по отношению к крови человека.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет ряд графиков, на которых проиллюстрирована чистота (%) как функция времени (числа суток) для растворов АМС 416 в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 4,5) при комнатной температуре (КТ) . Фиг. 1А представляет устойчивость растворов АМС 416, имеющих концентрации 200, 66, 20, 6,7, 2,2 и 0,67 мг/мл АМС 416. На фиг. 1В масштаб увеличен, чтобы более четко проиллюстрировать картину разложения при концентрациях 2 0 мг/мл и ниже.

Фиг. 2 представляет график, на котором проиллюстрирована чистота (%) как функция времени (числа суток) для растворов АМС 416 в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 4,5)

- 2 030220

при 40°С, у которых концентрации составляют 20, 6,7, 2,2 и 0,67 мг/мл ΆΜΟ 416.

Фиг. 3 представляет ряд графиков, на которых проиллюстрирована чистота (%) как функция времени (числа суток) для растворов ΛΜΟ 416 в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 2, 3, 4, 5 и 6) при 40°С. На фиг. ЗА концентрация ΑΜΟ 416 составляет 10 мг/мл, и на фиг. 3В концентрация ΑΜΟ 416 составляет 2,5 мг/мл.

Фиг. 4 представляет ряд графиков, на которых проиллюстрирована чистота (%) через 28 суток как функция рН для растворов ΑΜΟ 416 в забуференном сукцинатом физиологическом растворе при температуре от 2 до 8°С, при комнатной температуре и при 40°С. На фиг. 4А концентрация ΑΜΟ 416 составляет 10 мг/мл, и на фиг. 4В концентрация ΑΜΟ 416 составляет 2,5 мг/мл.

Фиг. 5 представляет ряд хроматограмм НРЬС. Хроматограмма на фиг. 5А характеризует раствор ΑΜΟ 416 (5 мг/мл, рН 2,25) после хранения в течение 27 суток при 40°С (чистота 87,8%). На фиг. 5В масштаб увеличен, чтобы более четко иллюстрировать пики.

Фиг. 6 представляет ряд хроматограмм НРЬС. Хроматограмма на фиг. 6А характеризует раствор ΑΜΟ 416 (5 мг/мл, рН 3,5) после хранения в течение 27 суток при 40°С (91,7% чистота). На фиг. 6В масштаб увеличен, чтобы более четко иллюстрировать пики.

Фиг. 7 представляет график, на котором проиллюстрирована чистота (%) как функция времени (числа суток) для ряда растворов ΑΜΟ 416 (5 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 2,25, 2,5, 3,0 и 3,5) при температуре от 2 до 8°С.

Фиг. 8 представляет график, на котором проиллюстрирована чистота (%) как функция времени (числа суток) для ряда растворов ΑΜΟ 416 (5 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 2,25, 2,5, 3,0 и 3,5) при комнатной температуре.

Фиг. 9 представляет график, на котором проиллюстрирована чистота (%) как функция времени (числа суток) для ряда растворов ΑΜΟ 416 (5 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 2,25, 2,5, 3,0 и 3,5) при 40°С.

Фиг. 10 представляет ряд графиков, на которых проиллюстрирована степень разложения (%) как функция времени (числа суток) для ряда растворов ΑΜΟ 416 (5 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 2,25, 2,5, 3,0 и 3,5). Деамидирование карбоксильной концевой группы с течением времени представлено при температуре от 2 до 8°С (фиг. 10А), при комнатной температуре (фиг. 10В) и при 40°С (фиг. 10С) . Следует отметить, что все графики имеют различные масштабы по оси у.

Фиг. 11 представляет ряд графиков, на которых проиллюстрирована степень разложения (%) как функция времени (числа суток) для ряда растворов ΑΜΟ 416 (5 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе ((рН 2,25, 2,5, 3,0 и 3,5). Образование гомодимера с течением времени представлено при температуре от 2 до 8°С (фиг. 11А), КТ (фиг. 11В) и при 40°С (фиг. 11С). Следует отметить, что масштаб по оси у на фиг. 11С отличается от масштаба на фиг. 11А и 11В.

Фиг. 12 представляет ряд графиков, на которых проиллюстрирована чистота (%) как функция рН (от 2,8 до 3,8), концентрации ΑΜΟ 416 (от 4 до 6 мг/мл) и ЫаС1 (от 0,7 до 1,0%) для ряда растворов в забуференном сукцинатом физиологическом растворе после хранения при температуре от 2 до 8°С (фиг. 12А), 25°С (фиг. 12В) и 40°С (фиг. 12С).

Фиг. 13 представляет ряд графиков, на которых проиллюстрирована чистота (%) как функция времени (месяцев) для ряда растворов ΑΜΟ 416 (3,4 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 2,5, 3,0, 3,5) после хранения при температуре от 2 до 8°С (фиг. 13А), 25°С (фиг. 13В) и 40°С (фиг. 13С).

Подробное описание изобретения

Заголовки разделов используются в настоящем документе исключительно для организационных целей и не должны истолковываться как ограничивающие описываемый предмет.

Если другие условия не определены в настоящем документе, научные и технические термины, используемые в связи с настоящей заявкой, имеют значения, которые легко понимают обычные специалисты в данной области техники. Кроме того, если другие условия не требуются согласно контексту, термины в единственном числе означают также множественное число, а термины во множественном числе означают также единственное число.

Как правило, номенклатура и методики, используемые в связи с молекулярной биологией и химией белков и описанные в настоящем документе, являются хорошо известными и обычно используются в технике. Методы и технологии настоящей заявки, как правило, осуществляются согласно традиционным способам, которые являются хорошо известным в технике и описываются в разнообразных общих и более конкретных источниках, которые цитируются и обсуждаются в тексте настоящего описания, если не определяются другие условия (см., например, книги Ьа5/1о "Разработка лекарственных средств на основе пептидов: способы и методики", издательство Нитапа Рте88 (20 08 г.); Вепойоп "Химия синтеза пептидов", издательство СКС Рте88 (20 05 г.) ; Απδπ^Ι и др. "Современные методики в молекулярной биологии", издательство Отеепе РиЬйзЫпд Л55ОС1а1е5 (1992 г.), которые включаются в настоящий документ посредством ссылки для любой цели. Методики очистки осуществляются согласно условиям производителя, которые обычно применяются в технике или описываются в настоящем документе. Термины, ис- 3 030220

пользуемые в данной связи, а также лабораторные процедуры и методики аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, которые описываются в настоящем документе, являются хорошо известными и обычно используются в технике. Для химических синтезов, химических анализов, изготовления фармацевтических препаратов и композиций, а также их введения и лечения пациентов могут быть использованы стандартные методики.

Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными методами, протоколами, реагентами и другими условиями, которые описываются в настоящем документе и которые могут изменяться. Терминология, используемая в настоящем документе, предназначается только для цели описания конкретных вариантов осуществления, но не предназначается для ограничения объема настоящего изобретения, которое определяется исключительно формулой изобретения.

При использовании в настоящем документе термин "приблизительно" в контексте данного количества или интервала означает количество или интервал в пределах 20%, предпочтительно в пределах 10% и предпочтительнее в пределах 5% относительно данного количества или интервала.

I. Общие определения.

Согласно традиции при использовании в настоящем документе неопределенные артикли "а" и "ап" означают "один или несколько", если не определяются другие условия.

Термин "ЛМО 416" означает соединение, которое имеет химическое наименование Ν-ацетил-Ицистеинил-П-аланил-П-аргинил-П-аргинил-П-аргинил-П-аланил-О-аргинамид-дисульфид-Ь-цистеин и которое может быть представлено следующей формулой:

Н-ь-Суз-ОН

I

8—8

I

Ас 0-Суз--0-А1а-0-Агц-0-Ату-0-Аг^-П-А1а-0-Агц-КН2

Термины "гидрохлорид ЛМО 416" и "ЛМО 416 НС1" являются взаимозаменяемыми и означают соединение, которое имеет химическое наименование Ν-ацетил-П-цистеинил-П-аланил-П-аргинил-Оаргинил-П-аргинил-П-аланил-О-аргинамид-дисульфид-Ь-цистеин гидрохлорид и которое может быть представлено следующей формулой:

П ь-Суд ОН I

8—8

I

Ас-о-Суз-о-А1а-о-Аг8-о-Аг8-0-Аг8-Ц-А1а-0-Аг8-ХН2 · хНС1

При использовании в настоящем документе термины "аминокислота" и "аминокислотный остаток" являются взаимозаменяемыми и при использовании для описания пептида или полипептида означают как встречающиеся в природе, так и синтетические аминокислоты, а также аналоги аминокислот, миметики аминокислот и не встречающиеся в природе аминокислоты, которые являются химически аналогичными по отношению к встречающимся в природе аминокислотам.

Термин "излечение" означает любые признаки успеха в лечении или улучшение состояния в случае травмы, патологии или болезни, включая любые объективные или субъективные параметры, такие как снижение уровня боли, ремиссия, уменьшение признаков или симптомов, которые делают травму, патологию или болезнь более переносимой для пациента, уменьшают скорость деградации или ухудшения состояния, делают конечную точку ухудшения менее истощающей; улучшают физическое или психологическое состояние пациента. Излечение или ослабление признаков или симптомов может быть основано на объективных или субъективных параметрах, включая результаты медицинского обследования, например лечение §НРТ посредством снижения повышенных уровней гормона паращитовидной железы (РТН).

Термины "терапевтически эффективная доза" и "терапевтически эффективное количество", которые используются в настоящем документе, означают количество, вызывающее в системе тканей животного или человека биологическую или медицинскую реакцию, которую желает получить исследователь, врач или другой клиницист и которая включает устранение или ослабление признаков или симптомов заболевания или расстройства, подлежащего лечению, например количество АМО 416, которое вызывает желательное снижение повышенного уровня РТН.

Термин "комнатная температура", который используется в настоящем документе, означает температуру, составляющую приблизительно 25°С. Термин "хранение в холодильнике", который используются в настоящем документе, означает хранение при температуре от 2 до 8°С.

Термины "пептид", "полипептид" и "белок" являются взаимозаменяемыми и означают полимер, который составляют аминокислоты, как правило, соединенные друг с другом посредством пептидных или дисульфидных связей. Данные термины также распространяются на аминокислотные полимеры, в которых один или несколько аминокислотных остатков представляют собой аналоги или миметики соответствующих встречающихся в природе аминокислот, а также на встречающиеся в природе аминокислотные полимеры. Данные термины могут также распространяться на аминокислотные полимеры, которые

- 4 030220

являются модифицированными, например, посредством введения углеводных остатков для образования гликопротеинов или посредством фосфорилирования. Пептиды, полипептиды и белки можно изготавливать, осуществляя жидкофазный синтез или твердофазный синтез или используя генетически модифицированные или рекомбинантные клетки.

"Вариант" пептида или полипептида содержит аминокислотную последовательность, причем в данной аминокислотной последовательности один или несколько аминокислотных остатков вводятся, удаляются и/или замещаются по сравнению с другой полипептидной последовательностью. Варианты включают белки слияния.

"Производное" пептида или полипептида представляет собой пептид или полипептид, который подвергается химической модификации некоторым способом, отличным от вариантов введения, удаления или замещения, например посредством соединения с другим химическим фрагментом. Такая модификация может включать ковалентное присоединение группы к концевым аминогруппам и/или карбоксильным группам пептида или полипептида, например ацетилирование концевой аминогруппы и/или амидирование концевой карбоксильной группы пептида или полипептида.

Термин "аминокислота" имеет свое обычное значение, принятое в технике. Полные и сокращенные наименования 20 встречающихся в природе аминокислот соответствуют традиционному применению (см. книгу "Иммунология - синтез", второе издание, редакторы Е.8. Со1иЬ и Ό.Κ. Сгееи, издательство 8шаиег ЛхюааЮх. Сандерленд (штат Массачусетс, США), 1991 г., которая включается в настоящий документ посредством ссылки для любой цели. Стереоизомеры (например, Ό-аминокислоты) 19 традиционных аминокислот (исключая глицин), не встречающиеся в природе аминокислоты, такие как [альфа],[альфа]-двухзамещенные аминокислоты, Ν-алкиламинокислоты и другие нетрадиционные аминокислоты, могут также представлять собой подходящие компоненты для полипептидов и на них распространяется термин "аминокислота". Примерные нетрадиционные аминокислоты представляют собой гомоцистеин, орнитин, 4-гидроксипролин, [гамма]-карбоксиглутамат, [эпсилон]^ХХ-триметиллизин, [эпсилон]^-ацетиллизин, О-фосфосерин, Ν-ацетилсерин, Ν-формилметионин, 3-метилгистидин, 5гидроксилизин, [сигма]-^метиларгинин и другие аналогичные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В формулах полипептидов, которые используются в настоящем документе, концевая аминогруппа находится слева, а концевая карбоксильная группа находится справа согласно стандартному написанию и применению.

Терминами "испытуемый" или "пациент", которые используются в настоящем документе, может обозначаться любое млекопитающее. Согласно типичному варианту осуществления испытуемый или пациент является человеком.

Термин "буферный раствор", который используются в настоящем документе, означает композицию, причем в данной композиции содержится слабая кислота и ее сопряженное основание (как правило, соль сопряженного основания), слабое основание и его сопряженная кислота или их смеси. Специалисты в данной области техники могут легко определить разнообразные буферные растворы, которые могут составлять композиции, используемые согласно настоящему изобретению. Типичные буферные растворы содержат, но не ограничиваются этим, фармацевтически приемлемые слабые кислоты, слабые основания или их смеси. Примерные фармацевтически приемлемые буферные растворы содержат ацетат (например, ацетат натрия) или сукцинат (например, сукцинат натрия).

Выражение "слабая кислота" означает химическую кислоту, которая не полностью ионизируется в водном растворе; то есть если кислоту представляет общая формула НА, то в водном растворе образуются ионы А^-, но все же остается в значительном количестве недиссоциированная кислота НА. Константа кислотной диссоциации (Ка) слабой кислоты составляет от 1,8х10^-16 до 55,5.

Выражение "слабое основание" означает химическое основание, которое не полностью протонируется в водном растворе; то есть если основание представляет общая формула В, то в водном растворе образуются ионы ВН+, но все же остается в значительном количестве непротонированное основание В. Константа кислотной диссоциации (Ка) соответствующей сопряженной слабой кислоты ВН+ составляет от 1,8х10^-16 до 55,5.

Выражение "сопряженное кислота" означает кислый компонент НХ+ из пары двух соединений (НХ+, X), которые превращаются друг в друга посредством приобретения или потери протона.

Выражение "сопряженное основание" означает основной компонент X^- из пары двух соединений (НХ, X^-), которые превращаются друг в друга посредством приобретения или потери протона.

Выражение "соль сопряженного основания" означает ионную соль, содержащую сопряженное основание X^- и положительно заряженный противоион.

Выражение "буферная система" означает смесь, в которой содержатся по меньшей мере два буферных вещества.

Термин "достаточное количество" означает количество, добавление которого является достаточным для достижения желательной функции, например для доведения раствора до желательного объема (т.е. 100%).

Выражение "регулятор тоничности" означает фармацевтически приемлемое инертное вещество, ко- 5 030220

торое можно добавлять в композицию, чтобы регулировать тоничность композиции.

Регуляторы тоничности, которые являются подходящими для настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются этим, хлорид натрия, хлорид калия, маннит, глицерин и другие фармацевтически приемлемые регуляторы тоничности.

II. Варианты осуществления.

Настоящее изобретение относится к жидким композициям, содержащим пептидный агонист кальций-чувствительного рецептора, причем данная композиция имеет рН на уровне от приблизительно 2,0 до приблизительно 5,0. Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение относится к жидкой композиции, содержащей ЛМС 416, причем данная композиция имеет рН на уровне от приблизительно 2,0 до приблизительно 5,0. ЛМС 416, и ее изготовление описано в публикации международной патентной заявки № νθ 2011/014707. Например, АМС 416 можно изготавливать посредством твердофазного синтеза, используя соответствующие защищенные 9-флуоренилметоксикарбонилом (РМОС) Ό-аминокислоты. После отсоединения от полимера материал можно обрабатывать, используя ВОС-Ь-Су8(КРу§)-ОН и образуя дисульфидную связь. Группа ВОС (Ν-трет-бутоксикарбонил) может затем удаляться трифторуксусной кислотой (ТРА), и получаемый в результате продукт очищается методом обращенно-фазовой жидкостной хроматографии высокого давления (НРЬС) и выделяется в форме трифторацетатной соли в процессе лиофилизации. Трифторацетатная соль может превращаться в фармацевтически приемлемую соль посредством осуществления последующего процесса солевого обмена. Такие процедуры являются хорошо известными в технике и включают, например, процесс ионного обмена, после которого необязательно осуществляется очистка полученного в результате продукта (например, посредством обращенно-фазовой жидкостной хроматографии или обратного осмоса).

Композиции, которые представлены в настоящем документе, описываются, главным образом, в отношении используемого в терапии пептида АМС 416 в качестве активного ингредиента. Однако как может легко понять специалист в данной области техники, настоящее изобретение также распространяется на варианты и производные АМС 416.

Например, согласно одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-О-цистеинил-О -аланил-0 -аргинил-0 -аргинил-0 -аргинил-0 -аланил-0 -аргинамиддисульфид-О-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-О-цистеинил-О-аланил-О-аргинил-О-аргинил-О-аргинил-О-аланил-Оаргинамид-дисульфид-Ы-ацетил-О-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-О-цистеинил-О-аланил-О-аргинил-О-аргинил-Оаргинил-Э-аланил-О-аргинамид-дисульфид-Шацетил-Ь-цистеин.

Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-Р-цистеинил-Р-аланил-Р-аргинил-Р-аргинил-Р-аргинил-Р-аланил-Ь-аргинамиддисульфид-О-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-Р-цистеинил-Р-аланил-Р-аргинил-Р-аргинил-Р-аргинил-Р-аланил-Раргинамид-дисульфид-Ь-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-Р-цистеинил-Р-аланил-Р-аргинил-Р-аргинил-Р-аргинил-Ьаланил-Р-аргинаьшд-дисульфид-Ы-ацетил-О-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-Р-цистеинил-Р-аланил-Р-аргинил-Ьаргинил-Р-аргинил-Р-аланил-Р-аргинамид-дисульфид-Н-ацетил-Ь-цистеин.

Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-0 -цистеинил-0 -аргинил-0 -аргинил-0 -аланил-0 -аргинил-0 -аланил-0 -аргинамиддисульфид-О-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-О-цистеинил-О-аргинил-О-аргинил-О-аланил-О-аргинил-О-аланил-Оаргинаьшд-дисульфид-Ь-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-О-цистеинил-О-аргинил-О-аргинил-О-аланил-О-аргинил-Оаланил-О-аргинамид-дисульфид-К-ацетил-О-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-О-цистеинил-О-аргинил-О-аргинил-Оаланил-^-аргинил-^-аланил-^-аргинаьшд-дисульфид-N-ацетил-^-цистеин.

Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-Р-цистеинил-Р-аргинил-Р-аргинил-Р-аланил-Р-аргинил-Р-аланил-Р-аргинамиддисульфид-О-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-Р-цистеинил-Р-аргинил-Р-аргинил-Р-аланил-Р-аргинил-Р-аланил-Раргинамид-дисульфид-Ь-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-Р-цистеинил-Р-аргинил-Р-аргинил-Р-аланил-Р-аргинил-Раланил-^-аргинамид-дисульфид-N-ацетил-^-цистеин. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также может использоваться Ν-ацетил-Р-цистеинил-Р-аргинил-Р-аргинил-Раланил-^-аргинил-^-аланил-^-аргинамид-дисульфид-N-ацетил-^-цистеин.

Согласно еще одному варианту осуществления в описанных композициях также могут использоваться одно или несколько из соединений, которые представляют табл. 1-10 публикации международной патентной заявки № νθ 2011/014707. Согласно еще одному варианту осуществления в описанных ком- 6 030220

позициях также могут использоваться одно или несколько из соединений, описанных в публикации международной патентной заявки № \УО 2011/014707.

Согласно некоторым вариантам осуществления композиция содержит терапевтически эффективное количество активного ингредиента (например, ЛМО 416). Согласно любому данному варианту осуществления настоящего изобретения терапевтически эффективное количество активного ингредиента в композиции будет зависеть от объема композиции, вводимого данному пациенту, а также от возраста и массы пациента и природы заболевания или расстройства, подлежащего лечению. В зависимости от дозированной формы в некоторых случаях терапевтически эффективное количество может быть введено пациенту посредством однократного введения, хотя в других случаях может потребоваться многократное введение.

Жидкая композиция согласно настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию, подходящую для введения внутривенным, внутриартериальным, внутримышечным и подкожным способами. Согласно предпочтительному варианту осуществления жидкая композиция является подходящей для введения внутривенным или другим парентеральным способом. Предпочтительно жидкая композиция представляет собой стерильный водный раствор. Как правило, растворитель представляет собой предназначенную для инъекций воду или смесь воды и одного или нескольких других смешивающихся с водой растворителей, таких как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и этанол. Использование стерильной деионизированной воды в качестве растворителя является предпочтительным. Однако можно использовать и другие растворители, которые являются подходящими и традиционными в изготовлении фармацевтических препаратов.

Как правило, композиция содержит от приблизительно 0,1 до приблизительно 100 мг/мл активного ингредиента (например, АМО 416), от приблизительно 0,1 до приблизительно 20 мг/мл активного ингредиента, от приблизительно 0,5 до приблизительно 15 мг/мл активного ингредиента, от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/мл активного ингредиента или от приблизительно 2 до приблизительно 5 мг/мл активного ингредиента. Согласно некоторым вариантам осуществления композиция содержит приблизительно 1 мг/мл активного ингредиента, приблизительно 2 мг/мл активного ингредиента, приблизительно

2,5 мг/мл активного ингредиента, приблизительно 5 мг/мл активного ингредиента, приблизительно 10 мг/мл активного ингредиента или приблизительно 20 мг/мл активного ингредиента. Согласно еще одному варианту осуществления композиция содержит от 0,1 до 100 мг/мл активного ингредиента, от 0,1 до 20 мг/мл активного ингредиента, от 0,5 до 15 мг/мл активного ингредиента, или от 1 до 10 мг/мл активного ингредиента, или 2 до 5 мг/мл активного ингредиента. Согласно предпочтительному варианту осуществления композиция содержит от 1 до 10 мг/мл активного ингредиента. Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления композиция содержит от 2 до 5 мг/мл активного ингредиента.

Композиция, как правило, имеет рН на уровне от приблизительно 2,0 до приблизительно 5,0, от приблизительно 2,5 до приблизительно 4,5, от приблизительно 2,5 до приблизительно 4,0, от приблизительно 3,0 до приблизительно 3,5 или от приблизительно 3,0 до приблизительно 3,6. Согласно некоторым вариантам осуществления композиция имеет рН на уровне приблизительно 2, 2,5, 3,0, 3,3, 3,5 или 4,0. Согласно некоторым вариантам осуществления композиция имеет рН от 2,0 до 5,0, от 2,5 до 4,5, от 2,5 до приблизительно 4,0, от 3,0 до 3,5 или от 3,0 до 3,6.

Как описано более подробно в примерах, устойчивость АМО 416 зависит от рН раствора. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что два основных пути разложения включают деамидирование карбоксильной концевой группы и образование гомодимера. Кроме того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что период времени разложения по этим путям является функцией рН (см. пример 6). При низком уровне рН преобладает разложение посредством деамидирования карбоксильной концевой группы (см. фиг. 10) , в то время как при высоком уровне рН преобладает разложение посредством образования гомодимера (см. фиг. 11). Таким образом, два основных пути разложения имеют противоположные соотношения между уровнем рН и степенью разложения. Эти противоположные соотношения определяют параметры устойчивости во всем интервале значений рН, в котором интервал, составляющий приблизительно от 3,0 до 3,5, представляет собой интервал максимальной устойчивости растворов АМО 416.

Как правило, композиция содержит физиологически приемлемый буферный реагент, который поддерживает значение рН композиции в пределах желательного интервала. Согласно одному варианту осуществления буферный раствор поддерживает рН на уровне от приблизительно 2,0 до приблизительно 5,0, от приблизительно 2,5 до приблизительно 4,5, от приблизительно 2,5 до приблизительно 4,0, от приблизительно 3,0 до приблизительно 3,5 или 3,0 до приблизительно 3,6. Согласно некоторым вариантам осуществления буферный раствор поддерживает рН на уровне приблизительно 2, приблизительно 2,5, е приблизительно 3,0, приблизительно 3,3, приблизительно 3,5 или приблизительно 4,0. Согласно некоторым вариантам осуществления буферный раствор поддерживает рН от 2,0 до 5,0, от 2,5 до 4,5, от 2,5 до приблизительно 4,0, от 3,0 до 3,5 или от 3,0 до 3,6.

Любой буферный раствор, который является способным поддерживать рН композиции на любом уровне рН или в пределах любого интервал рН, которые описаны выше, является подходящим для использования в композициях согласно настоящему изобретению при том условии, что он не реагирует с

- 7 030220

другими компонентами композиции, не вызывает образования видимых осадков и не приводит иным путем к химической дестабилизации активного ингредиента. Буферный раствор, используемый в композиции согласно настоящему изобретению, как правило, содержит компонент, выбранный из группы, которую составляют сукцинат, цитрат, малат, этилендиаминтетраацетат, гистидин, ацетат, адипат, аконитат, аскорбат, бензоат, карбонат, бикарбонат, малеат, глутамат, лактат, фосфат и тартрат или смесь этих буферных реагентов. Согласно предпочтительному варианту осуществления буферный раствор содержит сукцинат, например сукцинат натрия.

Концентрация буферного раствора выбирается таким образом, что обеспечивается стабилизация рН, а также достаточная буферная емкость. Согласно одному варианту осуществления буферный реагент присутствует в композиции в концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 100 ммоль/л, от приблизительно 0,75 до приблизительно 50 ммоль/л, от приблизительно 1 до приблизительно 20 ммоль/л или от приблизительно 10 до приблизительно 20 ммоль/л. Согласно другим вариантам осуществления буферный реагент присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 5 ммоль/л, приблизительно 10 ммоль/л, приблизительно 15 ммоль/л или приблизительно 20 ммоль/л. Согласно другим вариантам осуществления буферный реагент присутствует в композиции в концентрации от 0,5 до 100 ммоль/л, от 0,75 до 50 ммоль/л, от 1 до 20 ммоль/л или от 10 до 20 ммоль/л. Согласно предпочтительному варианту осуществления буферный реагент присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 10 ммоль/л. Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления буферный реагент представляет собой сукцинат, присутствующий в концентрации, составляющей приблизительно 10 ммоль/л.

С точки зрения совместимости жидкой композиции с внутривенным введением оказывается желательным, что значение рН жидкой композиции должно быть максимально близким, насколько это возможно, к физиологическому уровню рН. Жидкие композиции, которые имеют значение рН, далекое от физиологического уровня рН, или которые являются сильно забуференными, могут вызывать боль или неприятное ощущение в процессе введения. Как обсуждается выше, жидкие композиции ЛМС 416, имеющие рН на физиологическом или более высоком уровне, не сохраняют устойчивость в течение продолжительного периода времени. Таким образом, согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения жидкая композиция является слабо забуференной, и в результате этого вводимое количество быстро нейтрализуется физиологическими текучими средами организма пациента. Оказывается неожиданным, что хорошая устойчивость и хорошее регулирование рН сохраняется при низкой концентрации буферного раствора. Согласно предпочтительному варианту осуществления гидрохлоридная соль ЛМС 416 используется в изготовлении жидкой композиции, чтобы сократить до минимума буферную емкость. Поскольку НС1 представляет собой сильную кислоту, она не действует как буферный раствор. Это представляет собой преимущество по сравнению с использованием кислоты, имеющей меньшую силу, такой как уксусная кислота. Использование ацетатной соли АМС 416, например, само по себе обеспечивает некоторую буферную емкость и допускает меньшую гибкость для установления буферной емкости композиции, и в результате этого может получиться композиция, которая является более устойчивой к нейтрализации в среде организма и, таким образом, переносимой в меньшей степени. Поскольку АМС 416 представляет собой поликатионный пептид, данный эффект оказывается усиленным по сравнению с большинством пептидов, которые имеют более нейтральную природу.

Как правило, для композиции, которая вводится внутривенным или другим парентеральным путем, оказывается желательным, чтобы она была изотонической по отношению к текучим средам организма. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения композиция содержит физиологически приемлемый регулятор тоничности. Регуляторы тоничности, которые являются пригодными для использования согласно настоящему изобретению, могут представлять собой хлорид натрия, маннит, сахарозу, декстрозу, сорбит, хлорид калия или их смеси. Согласно предпочтительному варианту осуществления регулятор тоничности представляет собой хлорид натрия.

Когда присутствует регулятор тоничности, он предпочтительно присутствует в достаточном количестве, чтобы сделать жидкую композицию приблизительно изотонической по отношению к текучим средам организма (т.е. имеющей тоничность, составляющую от приблизительно 270 до приблизительно 300 мОсм/л) и подходящей для парентерального введения млекопитающему, такому как человек в качестве пациента, включая введение в кожные, подкожные или внутримышечные ткани и внутривенное введение. Изотоничность можно измерять, например, используя осмометр на основе давления пара или замораживания льда. В зависимости от концентраций других компонентов, содержащихся в композиции, хлорид натрия присутствует в композиции в концентрации, составляющей от приблизительно 7,0 до приблизительно 10 мг/мл, от приблизительно 7,5 до приблизительно 9,5 мг/мл или от приблизительно 8,0 до приблизительно 9,0 мг/мл. Согласно одному варианту осуществления хлорид натрия присутствует в композиции в концентрации, составляющей приблизительно 8,5 мг/мл. Согласно другим вариантам осуществления хлорид натрия присутствует в композиции в концентрации, составляющей от 7,0 до 10 мг/мл, от 7,5 до 9,5 мг/мл или от 8,0 до 9,0 мг/мл.

Согласно настоящему изобретению в композициях могут содержаться другие традиционные фармацевтические носители, наполнители или вспомогательные вещества. Например, согласно настоящему

- 8 030220

изобретению в композициях могут содержаться стабилизирующие вещества, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ΕΌΤΆ) и/или тиосульфат натрия, или консерванты, такие как бензиловый спирт. Кроме того, согласно настоящему изобретению в композициях могут содержаться дополнительные лекарственные и/или фармацевтические средства. Например, в способах лечения 8ΗΡΤ подвергаемых гемодиализу пациентов, имеющих хроническое почечное заболевание в сочетании с расстройством минерального состава костей (СКО-ΜΒΌ), можно вводить ΆΜΟ 416 совместно с одним или несколькими веществами, проявляющими активность в лечении нефрогенной остеодистрофии, такими как вещества, используемые в терапии витамином Ό (например, селективный активатор рецепторов витамина Ό парикальцитол), что обеспечивает предусмотренное лечение 8ΗΡΤ.

Согласно одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 5%, когда она хранится при температуре, составляющей приблизительно от 2 до 8°С, в течение одного года. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 5%, когда она хранится при комнатной температуре в течение одного года. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при температуре, составляющей приблизительно от 2 до 8°С, в течение одного года. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при комнатной температуре в течение одного года. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 5%, когда она хранится при температуре, составляющей приблизительно от 2 до 8°С, в течение 2 лет. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 5%, когда она хранится при комнатной температуре в течение 2 лет. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при температуре, составляющей приблизительно от 2 до 8°С, в течение 2 лет. Согласно еще одному варианту осуществления композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при комнатной температуре в течение 2 лет.

Согласно одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от 0,1 до 20 мг/мл используемого в терапии пептида, буферный раствор, который поддерживает композицию при рН от 2,0 до 5,0, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической. Согласно еще одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от 1 до 15 мг/мл используемого в терапии пептида, буферный раствор, который поддерживает композицию при рН от 2,5 до 4,5, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической. Согласно еще одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от 2,5 до 10 мг/мл используемого в терапии пептида, буферный раствор, который поддерживает композицию при рН от 2,5 до 4,0, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической. Согласно еще одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от 2,5 до 5 мг/мл используемого в терапии пептида, буферный раствор, который поддерживает композицию при рН от 2,5 до 3,5, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической. Согласно еще одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от 2 до 20 мг/мл используемого в терапии пептида в водном растворе, сукцинатный буферный раствор, который поддерживает композицию при рН на уровне, составляющем приблизительно от 3,0 до 3,5, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической.

Согласно одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от 0,1 до 20 мг/мл ΆΜΟ 416, буферный раствор, который поддерживает композицию при рН от 2,0 до 5,0, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической. Согласно еще одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от 1 до 15 мг/мл ΆΜΟ 416, буферный раствор, который поддерживает композицию при рН от 2,5 до 4,5, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической. Согласно еще одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от

2,5 до 10 мг/мл ΆΜΟ 416, буферный раствор, который поддерживает композицию при рН от 2,5 до 4,0, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической. Согласно еще одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от

2,5 до 5 мг/мл ΆΜΟ 416, буферный раствор, который поддерживает композицию при рН от 2,5 до 3,5, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической. Согласно еще одному варианту осуществления предлагается жидкая композиция, которая содержит от 2 до 20 мг/мл ΆΜΟ 416 в водном растворе, сукцинатный буферный раствор, который поддерживает композицию при рН на уровне, составляющем приблизительно от 3,0 до 3,5, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию приблизительно изотонической.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящему изобретению композиции изготавливают, помещая в подходящий сосуд буферный реагент в вычисленном количестве для создания желательного уровня рН и растворяя его в воде для инъекций (^Е1), добавляя в достаточном количестве

- 9 030220

материал (например, гидрохлоридную соль ЛМС 416), чтобы обеспечить желательную концентрацию активного ингредиента (например, ЛМС 416), добавляя регулятор тоничности (или смесь регуляторов тоничности) в вычисленном количестве, чтобы получаемая в результате композиция была изотонической по отношению к текучим средам организма, и добавляя такое количество воды для инъекций, которое требуется, чтобы в суммарном объеме получилась желательная концентрация. После этого ингредиенты перемешиваются, рН устанавливается на уровне от приблизительно 3,0 до приблизительно 3,5, и компоненты снова перемешиваются.

Если требуется регулирование для достижения рН в желательном интервале, уровень рН можно регулировать, используя подходящие растворы, в том числе кислые растворы, если требуется уменьшение значения рН, и щелочные растворы, если требуется увеличение значения рН. Неограничительные примеры подходящих кислых растворов представляют собой, в том числе, хлористоводородную кислоту, фосфорную кислоту, лимонную кислоту и дигидрофосфат натрия или калия. Неограничительные примеры подходящих щелочных растворов представляют собой, в том числе, гидроксиды щелочных металлов и щелочно-земельных металлов, карбонаты щелочных металлов, ацетаты щелочных металлов, цитраты щелочных металлов и гидрофосфаты щелочных металлов, например гидроксид натрия, ацетат натрия, карбонат натрия, цитрат натрия, гидрофосфат натрия или калия или аммиак.

Данная процедура осуществляется, как правило, при температуре, составляющей от приблизительно 2-8°С до приблизительно 50°С, и при атмосферном давлении. Получаемую в результате композицию можно затем переносить в предназначенные для одной дозы или нескольких доз контейнеры (такие как бутылочки, флаконы, ампулы или предварительно наполненные шприцы) для хранения перед использованием.

Композиции можно изготавливать и вводить, как описано выше. В качестве альтернативы композицию можно вводить после того, как композиция растворяется, диспергируется или иным способом смешивается с носителем, таким как, например, жидкость для инфузий или кровь/текучая среда, возвращаемая пациенту в процессе гемодиализа (например, в процессе возврата после обработки).

Изготовление жидких композиций согласно настоящему изобретению является известным или должно быть очевидным для специалистов в данной области техники (см., например, "Фармацевтические науки Ремингтона" (РсттДоп). издательство Маек РиЫЫипд Сотрапу (Истон, штат Пенсильвания, США), 17 издание, 1985 г.).

Примеры

Следующие примеры, включающие проведенные эксперименты и полученные результаты, приводятся исключительно для иллюстративных целей и не должны истолковываться как ограничивающие объем прилагаемой формулы изобретения.

Пример 1. Растворимость АМС 416 в забуференном сукцинатом физиологическом растворе.

В данном исследовании была исследована растворимость АМС 416 в забуференном сукцинатом физиологическом растворе. АМС 416 НС1 (103 мг порошка, 80 мг пептида) растворяли в 200 мкл забуференного сукцинатом натрия физиологическом растворе (25 мМ сукцината, 0,9% хлорида натрия, рН 4,5). После кратковременного интенсивного перемешивания получали прозрачный раствор с номинальной концентрацией 400 мг/мл. Поскольку увеличение объема раствора не было обнаружено, растворимость АМС 416 можно заведомо считать составляющей по меньшей мере 200 мг/мл. Хотя в данном эксперименте не была определена максимальная растворимость, АМС 416 растворяется в забуференном сукцинатом физиологическом растворе при рН 4,5 в концентрации, составляющей по меньшей мере 200 мг/мл.

Пример 2. Исследование устойчивости в зависимости от концентрации.

В данном исследовании была исследована устойчивость АМС 416 в интервале концентраций в забуференном сукцинатом физиологическом растворе (рН 4,5). Приготовленный в описанном выше примере 1 раствор, содержащий 200 мг/мл АМС 416, дополнительно разбавляли, используя 200 мкл забуференного сукцинатом физиологического раствора (рН 4,5), до номинальной концентрации 200 мг/мл, а затем последовательно разбавляли, используя забуференный сукцинатом физиологический раствор (рН 4,5), до 66, 20, 6,7, 2,2 и 0,67 мг/мл. Образцы выдерживали при комнатной температуре (составляющей приблизительно 25 °С), и аликвоты анализировали методом НРЬС через определенные интервалы в течение 29 суток. Второй ряд образцов АМС 416, имеющих концентрации в интервале от 20 до 0, 67 мг/мл, инкубировали при 40°С и анализировали таким же образом.

Чистота образцов после окончания 29-суточного периода выдерживания при комнатной температуре и 40°С представлена в табл. 1 и 2 соответственно. Эти результаты показывают профиль устойчивости АМС 416 как функцию концентрации и температуры.

- 10 030220

Таблица 1

Устойчивость ЛМС 416 в забуференном сукцинатом (25 мМ) физиологическом растворе (рН 4,5) при комнатной температуре

	Чистота в зависимости от времени (число суток)
Концентрация (мг/мл)	0	1	2	5	13	29
200	99, 8	99, б	98,4	96, 4	89, 0	63, 8
66	99, 6	99, 4	99, 0	98, 1	97,7	91,5
20	99, е	99, 7	99, 7	99, б	99, 3	98, 9

6, 7	99, 4	99, 6	99, 5	99, 5	99, 3	98,9
2,2	99, 3	99,2	99, 3	99, 4	99, 3	99, 1
0, 67	99, 4	99, 5	99, 5	99, 7	99, 5	99, 3

Таблица 2

Устойчивость ЛМС 416 в забуференном сукцинатом (25 мМ) физиологическом растворе (рН 4,5) при 40°С

	Чистота в зависимости от времени (число суток)
Концентрация (мг/мл)	0	1	2	5	13	29
20	99, б	99,1	98, 1	Нет данных	90,5	72, 9
б, 7	99, 4	99,1	98, 7	Нет данных	95,2	90, 0
2,2	99, 3	99, 3	99, 0	98, 4	97,0	94, 3
0, 67	99, 4	99, 4	99, 3	99, 0	97,2	94,4

Разложение АМС 416 с течением времени как функция концентрации при комнатной температуре представлено на фиг. 1А. На фиг. 1В масштаб увеличен, чтобы более четко иллюстрировать картину разложения при концентрациях лекарственного средства, составляющих 20 мг/мл и менее. Разложение АМС 416 с течением времени как функция концентрации при 40°С представлено на фиг. 2. Эти данные показывают, что устойчивость раствора АМС 416 зависит от концентрации в исследуемом интервале от 0, 67 до 200 мг/мл. Кроме того, эти данные показывают, что устойчивость раствора АМС 416 зависит от температуры инкубации.

Табл. 3 представляет прогнозируемую степень разложения для растворов, содержащих АМС 416 в различных концентрациях, при комнатной температуре на основании степени разложения после хранения в течение 29 суток при комнатной температуре в забуференном сукцинатом физиологическом растворе среде (8В§), имеющем рН 4,5. Данные для выдерживания при комнатной температуре в течение 29 суток из табл. 1 экстраполировали на заданный период времени в предположении линейной кинетики разложения. Данные для комнатной температуры экстраполировали до 5°С. Считали, что разность, составляющая 20°С, эквивалентна четырехкратному уменьшению скорости разложения. Экстраполяцию осуществляли, используя простое приложение уравнения Аррениуса (Аггйешик), согласно которому повышение температуры на 10°С обеспечивает двукратное увеличение скорости реакции, если предполагается одинаковый механизм реакции, а также энергия активации каждой соответствующей реакции, составляющая приблизительно 50 кДж/моль.

Затененные значения представляют собой концентрации/условия хранения, при которых степень разложения составляет менее чем 10%, что может быть предпочтительным для жидкой композиции.

Таблица 3

Прогнозируемая устойчивость растворов АМС 416

	Прогнозируемая степень разложения
Концентрация (мг/мл)	2 года при комнатной температуре	1 год при комнатной температуре	2 года при 5°С	1 год при 5°С
66	>100	>100	50, 1	25, 0
20	20, 9	10, 4	5, 2	2, б
6/ 7	13, 9	7, 0	3, 5	1/7
2,2	5, 2	2, б	1, з	0,7
0, 67	2, 7	1/4	0/ 7	0,3

Сравнение данных, представленных в табл. 1 и 2, обеспечивает оценку повышения температуры в качестве средства, позволяющего прогнозировать долгосрочную устойчивость растворов АМС 416. Данные для концентраций от 0,67 до 20 мг/мл, представленные ниже в табл. 4, показывают ускорение разложения при 40°С, которое выражено сильнее по сравнению с прогнозом на основании уравнения Арре- 11 030220

ниуса при допущениях, описанных выше. Это свидетельствует, что на основании данных ускоренного разложения прогнозируется более высокая степень разложения, чем наблюдается при фактической температуре хранения.

Таблица 4

Температурная и концентрационная зависимость разложения ЛМО 416 в растворе при рН 4,5

Концентрация (мг/мл)	Разложение в течение 29 суток при комнатной температуре (%)	Разложение в течение 29 суток при 4 0*С	Кратность ускорения разложения при нагревании от комнатной температуры до 40°С	Прогнозируемая кратность ускорения разложения
20	0, 9	26, 7	29, 7	4
6,7	0,5	9,4	13,8	4
2, 2	0, 2	5,0	25,0	4
0, 67	0,1	5,0	50,0	4

Пример 3. Устойчивость жидких композиций ЛМО 416 в интервале значений рН.

В данном исследовании устойчивость жидких композиций, содержащих АМО 416 в концентрации 10 мг/мл, определяли в интервале значений рН в забуференном сукцинатом физиологическом растворе. АМО 416 НС1 (257 мг порошок) растворяли в 20 мл забуференного сукцинатом физиологического раствора (рН 4,5), и получали концентрацию пептида 10,0 мг/мл (в пересчете на содержание пептида в порошке). Раствор разделяли на пять равных порций по 4 мл, которые доводили до рН 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно, используя ЫаОН и НС1 по мере необходимости. По три аликвоты по 1 мл раствора отбирали из каждой порции и инкубировали при температуре от 2 до 8°С, при комнатной температуре (приблизительно 25°С) и при 40°С соответственно. Оставшийся 1 мл раствора из каждой порции разбавляли до 4 мл, используя забуференный сукцинатом физиологический раствор (рН 4,5), получая концентрацию пептида 2,5 мг/мл, устанавливали рН и инкубировали таким же образом. Образцы отбирали согласно методике и разбавляли деионизированной водой до 1,0 мг/мл для анализа методом НРЬС.

Значения чистоты всех исследованных образцов после выдерживания в течение 28 суток представлены в табл. 5 (примечание: исходное значение чистоты в данном исследовании составляло 99,3%). Результаты представляют собой профиль устойчивости как функцию рН, температуры и концентрации.

Таблица 5

Чистота для растворов АМО 416 после 28-суточного периода

	10 мг/мл	2,5 мг / мл
2-8°С	Комнатная температура	4 0°С	2-8°С	Комнатная температура	40°С
рН 2	99, 1	98,7	94,0	98, 9	98, 7	89, 8
рН 3	99, 4	99, 1	98,2	99, 1	99, 0	97,2
рН 4	99, 4	98, 6	85, 0	99, 2	98, 9	92,2
рН 5	99, 0	93, 8	64,4	98, 9	96, 1	73, 0
рН б	96, 9	71, 8	53, б	97, 0	80, 0	52, 9

Разложение АМО 416 с течением времени как функция рН представлено на фиг. 3. В обоих случаях, где концентрация растворов составляла 10 мг/мл (фиг. 3А) и 2,5 мг/мл (фиг. 3В), минимальное разложение наблюдается при рН 3. Для обоих растворов разложение при рН 6 происходит с максимальной скоростью, и чистота составляет 50% после 29-суточного периода. Анализ методом НРЬС показывает, что основной продукт разложения при рН 2 отличается от продукта, наблюдаемого при уровне рН, составляющем более чем 3. При меньшем значении рН разложение осуществляется преимущественно посредством деамидирования в процессе гидролиза, а при большем значении рН разложение осуществляется преимущественно посредством образования гомодимера.

Профиль устойчивости как функция рН после 28-суточного периода представлен на фиг. 4. Снова можно видеть, что при обеих концентрациях, составляющих 10 мг/мл (фиг. 4А) и 2,5 мг/мл (фиг. 4В) , в данной серии экспериментов значение рН для минимального разложения составляет приблизительно 3,0. Кроме того, уменьшение чистоты зависит от температуры при всех уровнях рН, причем минимальное разложение наблюдалось в образцах, которые инкубировали при температуре от 2 до 8°С, и максимальное разложение наблюдалось в образцах, которые инкубировали при 40°С.

На основании степени разложения после 28-суточного периода вычисляли прогнозируемую степень разложения, как описано выше. Прогнозы для раствора 10 мг/мл раствор представлены в табл. 6, и про- 12 030220

гнозы для раствора 2,5 мг/мл представлены в табл. 7. Затененные значения показывают условия, в которых наблюдается степень разложения, составляющая менее чем 10%, и которые могут быть предпочтительными для жидкой композиции. Условия, в которых образец после 28-суточного периода демонстрировал несколько более высокую чистоту, чем исходный образец, представлены как 0,0% для всех экстраполяций.

Эти экстраполяции показывают степень разложения, составляющую менее чем 10% после 2 лет при комнатной температуре для в растворов 2,5 или 10 мг/мл при рН 3. Как правило, на основании данных для более высокой температуры прогнозируется более высокая степень разложения после 2 лет, чем на основании данных для меньшей температуры. Таким образом, для исследований раствора 10 мг/мл (табл. 6), хотя при рН 3 прогнозируется степень разложения, составляющая менее чем 10% при всех уровнях температуры, на основании данных для температуры от 2 до 8°С прогнозируется меньшая степень разложения, чем для более высоких температур, и, по существу, при температуре от 2 до 8°С данные при рН 4 также подтверждают степень разложения, составляющую менее чем 10%. Аналогичным образом, для раствора 2,5 мг/мл, имеющего рН в интервале от 2 до 4, прогнозируется степень разложения, составляющая менее чем 10% после хранения в течение 2 лет при комнатной температуре, посредством экстраполяции данных для температуры от 2 до 8°С.

Таблица 6

Прогнозы устойчивости растворов, содержащих 10 мг/мл АМС 416, на основании степени разложения после 28-суточного периода

2-8°С	На блюдаема я степень разложения после 28суточного периода (М	Вычисленная степень разложения
через 360 суток !%)	через 1 год при комнатной температуре Ш	через 2 года при 5°С (%)	через 2 года при комнатной температуре
рН=2	3	3,8	15,4	7,7	30,7
рН=3	-0,2	0,0	0, 0	0, 0	0, 0
рН=4	-0,1	0,0	0, 0	0, 0	0, 0
рН=5	0,3	3,5	13,8	6,9	27, 6
рН-б	1,9	23,9	95,7	47,3	>100

Комнатная температура	Наблюдаемая степень разложения после 28суточного периода (%)	Вычисленная степень разложения
через 360 суток (% >	через 1 год при комнатной температуре Ш	через 2 года при 5сС (% >	через 2 года при комнатной температуре (%>
рК-2	0, 6	3,1	8, 1	4,0	16,1
рН=3	0,2	2, 6	2, 6	1,3	5,1
рНМ	0,7	3, 6	8, 6	4,3	17,1
рН=5	5,6	71, 4	71,4	35,7	>100
рН=б	26, 9	>100	>100	>100	>100
40°С	Наблюдаемая степень разложения после 28суточного периода (%)	Вычисленная степень разложения
через 360 суток (%)	через 1 год при комнатной температуре т	через 2 года при 5°С (%)	через 2 года при комнатной температуре (%)
рН=2	5,3	63,4	17,1	8,6	34,2
рН=3	1,1	14,1	3,5	1,8	7, 0
рН=4	14,3	>100	45,8	22,9	91,7
рН=5	34,9	>100	>100	55,9	>100
рН=6	45, 1	>100	>100	72,2	>100

- 13 030220

Прогнозы устойчивости растворов, содержащих 2,5 мг/мл АМС! 416, на основании степени разложения после 28-суточного периода

Таблица 7

2—8°С	Наблюдаемая степень разложения после 28суточного периода (%)	Вычисленная степень разложения
через 1 год при 2-8°С (%)	через 1 год при комнатной температуре (%)	через 2 года при 2-8°С (¾)	через 2 года при комнатной температуре <%)
рН=2	0, 0	0, 0	0,0	0, 0	0, 0
рН=3	0, 0	0, 0	0,0	0,0	0, 0
рН=4	-0,1	0, 0	0,0	0, 0	0, 0
рН=5	0,2	2,9	11,8	5,9	23,5
рН=б	0, 3	10,7	43,0	21, 5	86, 0

Комнатная температура	Наблюдаемая степень разложения после 28суточного периода (%)	Вычисленная степень разложения
через 1 год при 2-8°С >	через 1 год при комнатной температуре О	через 2 года при 2-8°С (%>	через 2 года при комнатной температуре (%)
рН=2	0, 6	7,9	7,9	4,0	15,9
рН=3	0, 0	0,0	0, 0	0,0	0, 0
рН=4	0, 3	3, 6	3, 6	1,8	7,2
рН=5	2,9	37, 7	37,7	18,9	75,5
рН=6	18, 1	231,0	231,0	115, 5	462, 1

40°С	Наблюдаемая степень разложения после 28суточного периода (%)	Вычисленная степень разложения
через 1 год при 2-3°С	через 1 год при комнатной температуре (%)	через 2 года при 2-8°С (¾)	через 2 года при комнатной температуре (¾)
рН=2	9,1	116,5	29,1	14, 6	58,3
рН=3	1,8	22,5	5,6	2,8	11,3
рН=4	6, 9	88,7	22,2	11,1	44,3
рН=5	26,1	333, 6	83,4	41,7	166, 8
рН=6	45,0	575,7	143, 9	72,0	287,8

Табл. 8 представляет эффект температурного ускорения для этих данных аналогично приведенной выше табл. 4. Это снова показывает, что повышение температуры, как правило, обеспечивает большее ускорение разложения, чем ожидается посредством экстраполяции на основании простого применения принципов Аррениуса.

Таблица 8

Температурное ускорение как функция рН

	Разложение после 28 суток в растворе 10 мг/мл	Ускорение: данные для раствора 10 мг/мл
	2-8°С	Комнатная температура	40°С	Комнатная температура/ 2-8°С	Прогноз	40°С/2-8°С	Прогноз	4 0°С/Комнатная температура	Прогноз
рН=2	0/ 2	0, 6	5, 3	3	4	28	16	9	4
рН=3	-0,1	0,2	1,1	>2	4	>10	16	6	4
рН=4	-о, 1	0,7	14,3	>7	4	>100	16	22	4
рН=5	0, 3	5, б	34, 9	19	4	116	16	6	4
рН=6	2, 4	27, 5	45, 7	12	4	19	16	2	4

При каждом значении рН степени разложения для каждой из трех температур сравнивали с результатами для двух других температур, чтобы вычислить наблюдаемое ускорение.

Прогнозируемое ускорение определяется посредством простого применения вышеупомянутых принципов Аррениуса. Как описано ниже, анализ методом НРТС показывает, что преимущественный механизм разложения при значении рН, составляющем менее чем приблизительно 3, отличается от механизма разложения, наблюдаемого при значении рН, составляющем более чем приблизительно 3.

- 14 030220

Пример 4. Воздействие регулирующих тоничность наполнителей на устойчивость.

В данном исследовании определяли воздействие различных фармацевтических наполнителей на устойчивость АМС 416 в жидкой композиция. Изготавливали раствор, содержащий 10 мг/мл АМС 416, и концентрированные растворы, содержащие маннит, глицин, аргинин, ΝαΟ и Иа₂8О₄ в двукратных изотонических концентрациях. Значение рН раствора АМС 416, пяти растворов наполнителей и деионизированной воды отдельно доводили до рН 3,5, используя НС1/№ГОН. Аликвоты 500 мкл каждого из шести растворов помещали в стеклянные флаконы, в эти флаконы добавляли по 500 мкл раствора АМС 416 и тщательно перемешивали. Это осуществляли в трех экземплярах, получая в 18 флаконах образцы, каждый из которых содержал 5 мг/мл АМС 416 и наполнитель в изотонической концентрации (или деионизированную воду). Процедуру повторяли, используя серию растворов, имеющих рН 4,5, получая еще 18 флаконов с образцами. Образцы инкубировали и использовали для анализа методом НРЬС в соответствующие моменты времени.

Данные устойчивости после 56-суточного периода представлены в табл. 9. В зависимости от наполнителя наблюдались различные показатели устойчивости. В большинстве исследуемых условий содержащие Ναί',Ί композиции проявляли минимальную степень разложения. Исключения представляют собой данные для температуры от 2 до 8°С при рН 3,5 и 4,5. Для других наполнителей наблюдалась более значительная изменчивость, хотя аргинин производил отрицательное воздействие на образцы при 40°С и на образец при рН 4,5 и комнатной температуре (приблизительно 25°С), а сульфат натрия производил отрицательное воздействие на образцы при рН 4,5 при комнатной температуре и при 40°С.

Таблица 9

Степень разложения (%) раствора, содержащего 5 мг/мл АМС 416, после 56 суток

Табл. 10 представляет экстраполированные данные для хранения в течение двух лет при комнатной температуре хранение и показывает тенденцию, аналогичную обсуждаемой выше, согласно которой при повышенной температуре хранения, как правило, прогнозируется более высокая скорость разложения, чем ожидается на основании простого применения принципов Аррениуса.

Таблица 10

Прогнозируемая степень разложения (%) раствора, содержащего 5 мг/мл АМС 416, после двухлетнего хранения при комнатной температуре

Температура	2-8°с	Комнатная температура	40°С
рН	3, 5	4,5	3, 5	4,5	3,5	4, 5
Деионизированная вода	1	35	13	47	27	77
Маннит	0	18	7	28	16	75
Глицин	3	31	8	83	55	90
Аргинин	2	27	7	>100	90	>100
КаС1	4	56	4	24	10	58
	2	22	5	>100	31	98

Эти данные показывают, что хлорид натрия может представлять собой подходящий регулятор тоничности для композиций, содержащих раствор АМС 416.

Пример 5. Устойчивость раствора в различных буферных системах.

В данном исследовании устойчивость жидких композиций АМС 416 оценивали для четырех различных буферных растворов в течение 9 суток. Изготавливали забуференные физиологические растворы, имеющие концентрацию 25 мМ и рН 4,5, для четырех различных анионных буферных систем в форме натриевых солей, включая ацетат, цитрат, лактат и сукцинат. Порошок гидрохлорида АМС 416 НС1 растворяли в каждом забуференном растворе, получая концентрацию 2,5 мг/мл, и значение рН раствора устанавливали на уровне 4,5, используя НС1/№ГОН. Растворы дополнительно разбавляли буферным раствором, имеющим рН 4,5, до 1,0 и 0,25 мг/мл. Каждый из полученных в результате растворов разделяли

- 15 030220

на два стеклянных флакона для НРЬС: один после хранения при температуре от 2 до 8°С и один при комнатной температуре (приблизительно 25°С). Анализ методом НРЬС осуществляли через 0, 4 и 9 суток для определения активности и чистоты.

Чистота АМС 416 в большинстве образцов во все моменты времени составляла 100%, за исключением нескольких слабых пиков, которые показывал цитратный образец через 9 суток и которые можно объяснить неустойчивостью базовой линии. Во всех исследованных буферных растворах АМС 416 продемонстрировал хорошую устойчивость в течение девятисуточного исследования.

Пример 6. Устойчивость в буферных растворах при рН 2,25, 2,5 3,0 и 3,5.

В данном исследовании была исследована устойчивость жидкой композиции АМС 416 в среде с низкими значениями рН.

Забуференный сукцинатом физиологический раствор (10 мМ, рН 3,5) изготавливали, растворяя 59 мг янтарной кислоты в 45 мл очищенной в лаборатории (деионизированной) воды, устанавливали рН на уровне 3,5, используя растворы 1н. НС1 и 1н. ΝαΟΗ по мере необходимости, и доводили объем до 50 мл. Таким же способом изготавливали буферный раствор (10 мМ, рН 3,5) лактата натрия (56 мг/50 мл).

Растворяли АМС 416 НС1 (128 мг порошка) в 20 мл сукцинатного буферного раствора, получая раствор, содержащий 5 мг/мл АМС 416, который разделяли на две равные порции по 10 мл. В одну порцию добавляли ΝαΟ (90 мг), а в другую порцию добавляли маннит (500 мг) . Каждую порцию объемом 10 мл снова разделяли на две равные порции по 5 мл, и рН устанавливали на уровне 2,25 и 3,5 соответственно, используя растворы 1н. НС1 и 1н. №ЮН. Таким же способом изготавливали четыре порции растворов по 5 мл, используя лактатный буферный раствор. По 1,0 мл каждого из восьми полученных в результате растворов добавляли в три пенициллиновых флакона с образцами. Кроме того, остаток имеющего рН 2,25 забуференного сукцинатом раствора АМС 416, содержащего №С1, доводили до рН на уровне 2,5, и аликвоты по 0,5 мл добавляли в три пенициллиновых флакона с образцами, а остаток имеющего рН 3,5 забуференного сукцинатном раствора, содержащего №С1, доводили до рН на уровне 3,5 и аликвоты по 0,5 мл добавляли в три пенициллиновых флакона с образцами (см. табл. 11).

В каждый момент времени (0, 2, 8, 12 и 24 недель) все 30 образцы извлекали из хранилища, выдерживали до равновесия при комнатной температуры (приблизительно 25°С) , и аликвоты объемом 100 мкл разбавляли до 0,5 мг/мл водой для анализа методом обращенно-фазовой НРЬС. Остальные образцы повторно герметизировали и возвращали на хранение в соответствующих условиях.

Таблица 11

Описание пронумерованных образцов

рН	2,	25	3	5	2, 5	3, 0
Буферный раствор	Лактатный	Сукцинатный	Лактатный	Сукцинатный	Сукцинатный
Наполнитель	ИаС1	Маннит	ЫаС1	Маннит	ЫаС1	Маннит	ЫаС1	Маннит	ИаС1	ЫаС1
2-е°с	1	2	3	4	5	6	7	8	25	28
Комнатная температура	9	10	11	12	13	14	15	16	26	29
40°С	17	18	19	20	21	22	23	24	27	30

Примерные результаты исследования методом НРЬС представлены на фиг. 5 и 6. Хроматограмма, представленная на фиг. 5, получена для имеющего рН 2,2 5 образца после хранения в течение 67 суток при 40°С (5 мг/мл, чистота 87,8%) . Фиг. 5В представляет хроматограмму в увеличенном масштабе для наблюдения примесей. Фиг. 6 иллюстрирует эффект увеличения рН до 3,5 на примере эквивалентной в остальных отношениях композиции (рН 3,5, 40°С, 5 мг/мл, 67 суток, чистота 91,7%). Фиг. 6В представляет хроматограмму в увеличенном масштабе для наблюдения примесей. Как и в вышеупомянутом исследовании, наблюдается значительное изменение профиля продуктов разложения при изменении рН.

Чистота АМС 416 как функция времени представлена в табл. 12 (концентрация буферного раствора=10 мМ; Ь - лактат; δ - сукцинат; регулятор тоничности: N=0,9% №С1; М=5% маннит). Следует отметить, что используемый образец содержал 3,4% димера в начальный момент времени. Данные для образца 26 после 14 суток хранения исключены вследствие ошибки в изготовлении образца.

Выбранные тенденции данных представлены в графической форме на фиг. 7-9.

- 16 030220

Таблица 12

Устойчивость раствора, содержащего 5 мг/мл ΆΜΘ 416 при хранении до 67 суток в буферном растворе

	Чистота (%) после хранения (сутки)
Образец	рН	Температура (°с)	Буферный раствор	Регулятор тоничности	0	14	27	49	67
1	2,25	5	ъ	N	96, 8	96, 4	97, 0	95, 7	95, 7
2	2,25	5	ъ	м	96, 8	96, 4	95, 9	96, 0	95, 7
3	2,25	5	5	N	95, б	95,1	95, 1	94, 6	93,8
4	2,25	5	5	м	95, 4	95, 1	95, 4	94,0	94, 0
5	3,5	5	Ь	N	96, 9	96, 6	96, 4	95, 8	96, 2
б	3,5	5	ь	М	96, 8	96, 9	96, 9	96, 0	94,5
7	3,5	5	5	N	95, 3	95, 7	95, 5	95, 0	95, 0
8	3,5	5	5	М	95, 4	95, 2	95, 1	95, 1	94, 4
9	2,25	25	Ь	N	96, 9	96, 4	95,2	94,0	92, 8
10	2,25	25	ь	М	96, 9	96, 6	95, 6	93,2	94, 9
11	2,25	25	5	N	95, 3	94,2	93,9	91,7	90, 6
12	2,25	25	5	М	95, 6	94, 5	94,1	92,5	92, 1
13	3,5	25	Ь	N	96, 6	96, 3	96, 3	94,7	95, 2
14	3,5	25	ь	М	96, 5	96, 2	95, 3	94,8	93, 3
15	3,5	25	5	N	95, 3	95, 1	94,8	93,4	93, 3
16	3,5	25	5	М	95, 8	95, 3	94,7	93,5	93, 6
17	2,25	40	Ъ	N	96, 7	91,9	87, 8	83, 5	79, 4
18	2,25	40	ъ	М	96, 5	93,8	89, 5	86, 6	86, 6
19	2,25	40	5	N	95, 3	89, 9	86, 9	80, 4	76, 3
20	2,25	40	5	М	95, 4	91,8	89, 6	85, 3	82,9
21	3, 5	40	Ъ	N	96, 7	94,3	91,7	89, 5	86,2
22	3, 5	40	Ъ	М	96, б	92,2	85, 9	79, 5	77,3
23	3, 5	40	5	N	95, 3	92,3	89, 3	86, 8	84,2
24	3, 5	40	5	М	95, б	91, б	88,5	84,2	80,3
25	2,5	5	5	N	95, 4	94, 9	95,2	94,8	94, 4
26	2,5	25	5	N	95, 2	Нет данных	94,5	93,2	93, 2
27	2,5	40	5	N	95, 3	92,3	90,3	85, 0	82, 4
28	3,0	5	5	N	95, 4	95, 4	94,9	94,7	94, 9
29	3,0	25	5	N	95, 6	94, 9	95, 0	93,9	94,2
30	3,0	40	5	N	95, 3	92,5	90,0	86, 9	85, 2

Фиг. 7 представляет устойчивость раствора ΆΜΘ 416 (5 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе как функцию рН после хранения в холодильнике (2-8°С).

Фиг. 8 представляет устойчивость раствора ΆΜΘ 416 (5 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе как функция рН после хранения при комнатной температуре.

Фиг. 9 представляет устойчивость раствора ΆΜΘ 416 (5 мг/мл) в забуференном сукцинатом физиологическом растворе как функция рН после хранения при 40°С.

Профиль разложения в последний момент времени представлен в табл. 13, а образование с течением времени двух основных продуктов разложения (деамидирования концевой карбоксильной группы и образование гомодимера) представлено в табл. 14 и 15. Фиг. 10 и 11 представляют разложение с течением времени до этих отдельных продуктов (деамидирование концевой карбоксильной группы и образование гомодимера соответственно) как функцию рН для выбранных композиций (таких композиций, для которых является возможным полный набор условий рН, т.е. композиций, содержащих ЫаС1 и сукцинат, но не лактат или маннит).

Фиг. 10 показывает четкую зависимость от рН для деамидирования, причем разложение по этому пути происходит в значительно большей степени при рН 2,25, чем при более высоком значении рН, и существует прямое соответствие между величиной рН и степенью деамидирования. С другой стороны, образование гомодимера, которое представлено на фиг. 11, демонстрирует противоположное соотношение между величиной рН и степенью разложения. Эти противоположные тенденции определяют общие данные устойчивости, представленные на фиг. 7-9, и максимальная устойчивость для растворов ΆΜΘ 416 в данной серии экспериментов наблюдалась при рН на уровне 3,0±0,5.

Корреляция между устойчивостью и составом наполнителя является менее очевидной. Что касается выбора буферного раствора (сукцинатный или лактатный), данные исследований в табл. 12-14 не демонстрируют какой-либо четкой картины предпочтения выбора того или иного буферного раствора по отношению к какому-либо из основных продуктов разложения при рН 2,25 или 3,5. Все образцы, содержа- 17 030220

щие сукцинатный буферный раствор, демонстрировали менее высокую чистоту в начальный момент времени, чем соответствующие образцы, содержащие лактатный буферный раствор, вследствие большего слияния пика гомодимера. Причина этого не является понятной, но можно отметить изменение относительного поглощения для исходного вещества и димера в зависимости от буферного раствора. Однако, как отмечено выше, последующая инкубация обеспечивает практически одинаковую скорость разложения в присутствии любого буферного раствора. Что касается выбора регулятора тоничности (№С1 или маннит), хлорид натрия, по-видимому, повышает скорость деамидирования при рН 2,25 (см. в табл. 13 образцы 9-12 при 25°С и особенно образцы 17-20 при 40°С). Однако ЫаС1, по-видимому, подавляет (по сравнению с маннитом) разложение до гомодимера при рН 3,5 (см. в табл. 14 образцы 13-16 при 25°С и особенно образцы 21-24 при 40°С).

Таблица 13

Профиль продуктов разложения для раствора АМО 416 (5мг/мл) после 67 суток

Буферный раствор: концентрация 10 мМ; Б - лактат; 8 - сукцинат. Регулятор тоничности: N=0,9% №С1; М=5% маннит. Процентное значение для димера представляет собой увеличение продукта разложения после вычета исходного значения.

- 18 030220

Деамидирование в растворе АМО 416 (5 мг/мл) в зависимости от времени до 67 суток

Таблица 14

	Процентное содержание продукта разложения с течением времени (сутки)
Образец	рН	Температура (°с>	Буферный раствор	Регулятор тоничности	0	14	27	49	67
1	2,25	5	Ь	N	0,1			0, 7	0, 8
2	2,25	5	Ь	М			0,9	0, 8	0, 5
3	2,25	5	3	N			0,4	0, 8	0, 8
4	2,25	5	3	М				0, 3	1, 1
5	3,5	5	ь	N			0,3	0, 4
6	3,5	5	ь	М					1, 2
7	3,5	5	3	N					0, 2
8	3,5	5	3	М					0, 7
9	2,25	25	ь	N			1,3	1, 6	2, 5
10	2,25	25	ь	М			1,2	1, 2	1, 2
11	2,25	25	3	N		1,1	1,4	2, 0	з, 1
12	2,25	25	3	М		о, Ί	1,о	1, 3	1, б
13	3,5	25	ь	N
14	3,5	25	ь	М
15	3,5	25	3	N					0, 2
16	3,5	25	3	М
17	2,25	40	ь	N		3,4	6, 6	10, 2	13, 9
18	2,25	40	ь	М		2,5	4,8	7,0	8, 7
19	2,25	40	5	N		3,9	6, 6	11, 0	14,2
20	2,25	40	3	М		2,3	4,2	6,4	8, 9
21	3,5	40	ь	N			0,9	0, 9	1, 4
22	3,5	40	ь	М			0,5	0, 6	0, 5
23	3,5	40	3	N			1,0	1, о	1, о

24	3,5	40	3	М			0,4	0, 3	1,0
25	2,5	5	3	N					0, 5
26	2,5	25	3	N			0,7	1/ 3	1,5
27	2,5	40	3	N		2,0	3,3	6, 7	8,4
28	3, 0	5	3	N
29	3, 0	25	3	N				0, 3
30	3, 0	40	3	N		1,0		2,2	2,4

Буферный раствор: концентрация 10 мМ; Ь - лактат; δ - сукцинат. Регулятор тоничности: N=0,9% №С1; М=5% маннит.

Максимальная устойчивость для растворов АМО 416 в данной серии экспериментов наблюдалась при рН на уровне 3,0±0,5. Суммарные скорости разложения при рН 2,5 и 3,5 являются близкими, но профили разложения различаются. Устойчивость при рН 2,25 ухудшается вследствие большей наблюдаемой степени деамидирования. Хотя можно наблюдать некоторое воздействие наполнителя на профиль устойчивости, эти данные не демонстрируют общее предпочтение среди исследованных систем наполнителей, когда композиция имеет рН на уровне 3,0.

- 19 030220

Таблица 15

Разложение до гомодимера в растворе ЛМО 416 (5 мг/мл) в зависимости от времени до 67 суток

	Димер (процентное увеличение)
Образец	рН	Температура (°С)	Буферный раствор	Регулятор тоничности	0	14	27	49	67
1	2,25	5	Ь	N	0, 0	0,5	-о, 1	0,5	0, 4
2	2,25	5	Ь	М	0, 0	0,4	0, 0	0,0	0, б
3	2,25	5	3	N	0, 0	0,5	0, 1	0,1	0, 8
4	2,25	5	3	М	0, 0	0,3	0, 0	0,2	0, 1
5	3, 5	5	ь	N	0, 0	0,2	0, 1	0,2	0, 1
6	3, 5	5	ь	М	0, 0	-о, 1	0, 0	0,2	1, б
7	3, 5	5	3	N	0, 0	-0, 4	-0,2	0,0	0, 1
8	3, 5	5	3	М	0, 0	0,2	о, 1	-0, 1	-о, 1
9	2,25	25	ь	N	0, 0	0,5	0, 4	0,5	0, 3
10	2,25	25	ь	М	0, 0	0,3	0, 1	0,5	0, 4
11	2,25	25	3	N	0, 0	-о, 1	0, 0	0,0	0, 4
12	2,25	25	3	М	0, 0	0,5	0, 5	0,2	0, 9
13	3, 5	25	ь	N	0, 0	0,3	0, 3	0,9	1, 4
14	3, 5	25	ь	М	0, 0	0,4	0, 3	1,5	3, 1
15	3, 5	25	3	N	0, 0	0,2	0, 5	1,1	1, 8
16	3, 5	25	3	М	0, 0	0,5	1, о	1,4	2, 1
17	2,25	40	ъ	N	0, 0	0, б	0, 8	0,5	0, 4
18	2,25	40	ъ	М	0, 0	0,0	0, 3	0, 6	1,6
19	2,25	40	3	N	0, 0	0,5	0, 4	0,8	0, 0
20	2,25	40	3	М	0, 0	0, 6	0, 6	1,3	2, 4
21	3, 5	40	ъ	N	0, 0	2,4	3, 7	5, 5	7, 4
22	3, 5	40	ъ	М	0, 0	4, 1	9, 5	15, 0	17, 0
23	3, 5	40	5	N	0, 0	2,8	4, б	б, 3	8, 1
24	3, 5	40	3	М	0, 0	3,7	6, 6	9, 0	11,7
25	2, 5	5	3	N	0, 0	0,4	0, 2	0,0	0, 5
26	2, 5	25	3	N	0, 0		0, 1	0,5	0, 2
27	2, 5	40	3	N	0, 0	0, б	0, б	1,5	1, 1
28	3, 0	5	3	N	0, 0	0,0	0, 5	0,2	0, 2
29	3, 0	25	5	N	0, 0	0, б	0, б	0,9	1, з
30	3, 0	40	3	N	0, 0	1, 6	з, 2	4,8	5, 5

Буферный раствор: концентрация 10 мМ; Ь - лактат; δ - сукцинат. Регулятор тоничности: N=0,9% ЫаС1; М=5% маннит. Следует отметить, что разложение выражается именно как увеличение содержания димера (а не полное содержание димера) , поскольку активный фармацевтический ингредиент (ΑΡΙ), используемый для эксперимента, содержал значительное количество димера.

Максимальная устойчивость для растворов АМС 416 в данной серии экспериментов наблюдалась при рН на уровне 3,0±0,5. Анализ изготовленных растворов, имеющих рН 2,5 или 3,5, демонстрирует различные профили разложения, причем гидролиз амида концевой карбоксильной группы представляет собой основной продукт разложения при низком значении рН, в то время как образование гомодимера преобладало при более высоком значении рН. Жидкие композиции при рН 3,0 имеют прогнозируемую суммарную степень разложения, составляющую от 2 до 4%, после двухлетнего хранения в холодильнике.

Пример 7. Исследование устойчивости.

В данном исследовании была исследована устойчивость жидкой композиции АМС 416 в разнообразных условиях производства и анализа. Изготавливали 14 групп исследуемых композиций, причем все они имели различные сочетания рН (2,7, 3,3 или 3,9), концентрации пептида (4, 5 или 6 мг/мл) и концентрации соли (0,7, 0,85 или 1,0%) . Все композиции имели одинаковую осмоляльность (сукцинат 10 мМ) (см. табл. 16).

- 20 030220

Таблица 16

Группы исследуемых композиций

Образцы (2,1 мл) каждой группы исследуемых композиций помещали в стеклянные флаконы объемом 3 мл типа 1В от компании 5>с1ю1 (Германия) и герметически закрывали резиновой пробкой. Серии флаконов выдерживали в вертикальном положении в течение трех месяцев при температуре 4°С, 25°С или 40°С. В течение этих трех месяцев измеряли изменения рН, осмоляльности, процентного содержания ΑΜΟ 416 и продуктов разложения.

Поверхность отклика в зависимости от времени, которую определяли три фактора (рН, процентное содержание пептида и процентное содержание ЫаС1), оценивали, подгоняя статистическую модель, которая описывает такую поверхность, к данным для каждого сигнала НРЬС и к каждой температуре (статистическая программа-разведчик ΣΜΓ® от компании δΑδ). Моделирование по методу Монте-Карло (ΜοηΐΌ Саг1о) использовали, чтобы получить распределения прогнозируемых сигналов НРЬС в заданной точке (рН 3,3, пептид=5% и ЫаС1=8,5%) как функцию случайного сочетания факторов вокруг заданной точки и случайного шума.

Никакие значительные изменения рН и осмоляльности в течением времени не были обнаружены. При 4°С и 25°С чистота оставалась на уровне 92% или выше, деамидирование составляло 4% или менее, и образование гомодимера составляло 4% или менее на протяжении всего периода исследования. При 40°С примеси деамидирование и образование гомодимера обнаруживались впервые через один месяц. Однако деамидирование и образование гомодимера уменьшались, когда интервал рН сужался вокруг 3,3, демонстрируя, что рН производит значительное воздействие на образование этих продуктов разложения.

На основании этих данных становится возможным составление прогноза профиля чистоты в интервале значений рН от 2,8 до 3,8. Как представлено на фиг. 12, чистота при каждой температуре в значительной степени зависит от рН и в меньшей степени зависит от концентрации пептида и ЫаС1 в пределах исследуемого интервала. После хранения в холодильнике воздействие рН оказывается менее значительным при значениях рН, превышающих 3,3, но при комнатной температуре (приблизительно 25°С) повышенные значения рН соответствуют увеличению скорости разложения. Композиции для терапевтического применения могут подвергаться долгосрочному хранению в холодильнике. Кроме того, следует также принимать во внимание возможное воздействие повышенных температур на композицию в процессе ее изготовления, упаковки, маркировки и клинического применения. Таким образом, в данной серии экспериментов наблюдалось, что значение рН в исследуемом интервале от 2,8 до 3,8 (3,3±0,5) является подходящим для композиций ΑΜΟ 416.

Пример 8. Долгосрочная устойчивость жидких композиций ΑΜΟ 416 в интервале значений рН.

В данном исследовании долгосрочную устойчивость жидкой композиции, содержащей ΑΜΟ 416 в концентрации 3,4 мг/мл, определяли в интервале рН в забуференном сукцинатом физиологическом растворе. В стеклянный лабораторный стакан помещали 1200 мл очищенной воды согласно фармакопее США (и8Р). Сукцинат натрия (4,05 г) и хлорид натрия (13,5 г) добавляли и перемешивали для растворения. Значение рН устанавливали на уровне 2,5, используя растворы 1н. ЫаОН и/или 1н. НС1 по мере необходимости. Навеску порошка гидрохлорида ΑΜΟ 416 (5,5 г) добавляли и перемешивали для растворения, а затем объем доводили до 1500 мл, добавляя очищенную воду, чтобы получить раствор, содержащий 3,4 мг/мл ΑΜΟ 416. Раствор разделяли на три порции, и соответствующие значения рН для этих порций доводили до уровней 2,5, 3,0 и 3,5. Каждый раствор отдельно фильтровали, используя фильтр на основе поливинилиденфторида (РУОР) с размером ячеек 0,22 мкм, и помещали по 2 мл во флаконы объемом 5 мл. Эти флаконы закрывали пробками, герметизировали и маркировали, а затем помещали в ка- 21 030220

меры для исследования устойчивости при температуре 5°С±3, 25°С±2 и 40°С±2. Образцы отбирали согласно методике и разбавляли деионизированной водой до 1,0 мг/мл для анализа методом НРЬС. Значения чистоты через 0, 1, 2, 3, 5, 12 и 24 месяца представлены в табл. 17 (примечание: начальное значение чистоты для данного исследования составляло 99,2%). Результаты демонстрируют профиль долгосрочной устойчивости жидкой композиции, содержащей 3,4 мг/мл АМО 416, в зависимости от значений рН и температуры.

Таблица 17

Чистота растворов АМО 416 в зависимости от времени в течение 24 месяцев

рН	Температура то	Чистота (%) в зависимости от времени (месяцев)	Разложение через 2 года
0	1	2	3	5	12	24
2, 5	5	99, 2	99, 0	98,3	93,8	98,1	96, 3	94,8	4,4
25	99, 2	96, 9	95,2	93,4	39, 3	80, 9	63,5	30, 7
40	99, 2	83,8	81, 9	75,3	60, 9	39, 1	20,4	78, 3
3	5	99, 2	99,1	99,1	99,2	98,7	98, 3	97,7	1, 5
25	99, 2	93,2	97,5	96,7	95,0	91, 1	84,6	14,6
40	99, 2	93,7	90,2	86,4	78,9	61, 6	39,2	60, 0
3, 5	5	99, 2	99, 2	99,2	99,2	98,3	98,6	98,3	0, 9
25	99, 2	98, 6	98,1	97,6	96,2	93, 4	89,2	10, 0
40	99, 2	94, 6	91,5	88,7	33, 1	67,5	46,1	53, 1

Чистота жидкой композиции АМО 416 с течением времени для каждого уровня рН представлена на фиг. 13. При всех температурах максимальная чистота наблюдалась при рН 3,5, в то время как максимальная степень разложения наблюдалась при рН 2,5. Кроме того, при всех температурах чистота при рН 3,0 и 3,5 была значительно выше, чем чистота при рН 2,5. Таким образом, например, для выдержанных в холодильнике образцов чистота через 24 месяцев составляла 98,3 и 97,7 для растворов при рН 3,5 и 3,0 соответственно, но только 94,8 для раствора при рН 2,5. Кроме того, уменьшение чистоты оказалось зависимым от температуры при всех уровнях рН, причем минимальная степень разложения наблюдалась в образцах, выдержанных при температуре от 2 до 8°С, и максимальная степень разложения наблюдалась в образцах, выдержанных при 40°С. Основной продукт разложения, наблюдаемый при рН 2,5, представлял собой деамидированный продукт, а при рН 3,5 наблюдался гомодимер.

Эти данные подтверждают, что описанные композиции способны сохранять достаточную устойчивость АМО 416 в течение по меньшей мере двухлетнего срока хранения в холодильнике. Наблюдаемая степень разложения является линейной во всех случаях и подтверждает выводы, сделанные на основании экстраполяции данных предшествующих экспериментов. Согласно этим данным оптимальное значение рН находится в интервале от 3,0 до 3,5, обеспечивая баланс между различными механизмами разложения.

Все публикации, патенты и патентные заявки, процитированные в данном описании, включаются в настоящий документ посредством ссылки, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка была бы определенно и особо указана в качестве включенной посредством ссылки. Хотя настоящее изобретение было описано выше с некоторыми подробностями в качестве иллюстрации и примера для целей ясности понимания, для обычных специалистов в данной области техники должно быть вполне очевидным в свете описания настоящего изобретения, что могут быть произведены определенные изменения и модификации без отклонения от идеи и выхода за пределы объема прилагаемой формулы изобретения.

Claims (15)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Фармацевтическая композиция, содержащая АМО 416 в водном растворе, причем АМО 416 имеет следующую структуру:

   I Ι-ι.-Суз-011 I

   8—8

   Ас-О-СуяО-Л1а-Г>Агд-О-Аг£О-Аг£--Г_>-А1аО-Лгд ΝΗ₂ и данная композиция имеет рН от 2,0 до 5,0.
2. 2. Композиция по п.1, причем данная композиция имеет рН от 2,5 до 4,5.
3. 3. Композиция по п.1, причем данная композиция имеет рН от 2,5 до 4,0.
4. 4. Композиция по п.1, причем данная композиция имеет рН от 3,0 до 3,5.
5. 5. Композиция по п.1, причем рН поддерживает фармацевтически приемлемый буферный раствор.
6. 6. Композиция по п.5, причем буферный раствор содержит сукцинат.

   - 22 030220
7. 7. Композиция по п.1, причем АМС 416 присутствует в композиции в концентрации от 0,1 до 20 мг/мл.
8. 8. Композиция по п.1, причем АМС 416 присутствует в композиции в концентрации от 1 до 15 мг/мл.
9. 9. Композиция по п.1, причем АМС 416 присутствует в композиции в концентрации от 2,5 до 10 мг/мл.
10. 10. Композиция по п.1, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый регулятор тоничности.
11. 11. Композиция по п.10, причем регулятор тоничности присутствует в композиции в концентрации, достаточной для того, чтобы сделать композицию изотонической.
12. 12. Композиция по п.10, в которой регулятор тоничности представляет собой ЫаС1.
13. 13. Композиция по п.1, причем данная композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при температуре от 2 до 8°С в течение 2 лет.
14. 14. Композиция по п.1, причем данная композиция имеет степень разложения, составляющую менее чем 10%, когда она хранится при комнатной температуре в течение 2 лет.
15. 15. Композиция для цели снижения повышенных уровней гормона паращитовидной железы у субъекта, содержащая от 2 до 20 мг/мл АМС 416 в водном растворе, сукцинатный буферный раствор, который поддерживает композицию при рН на уровне, составляющем приблизительно от 3,0 до 3,5, и хлорид натрия в достаточной концентрации, чтобы сделать композицию изотонической.