ES2633989T3 - Formulación líquida estable de amg 416 (velcalcetida) - Google Patents

Abstract

Una formulación farmacéutica que comprende AMG 416 en solución acuosa, donde la formulación tiene un pH de 2,0 a 5,0.

Description

DESCRIPCION

Formulation liquida estable de amg 416 (velcalcetida)

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de EE.UU. n° 61/840.618, presentada el 28 de junio de 2013, cuyos contenidos se incorporan a la presente memoria como referencia en su totalidad.

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CAMPO DE LA INVENCION

La presente divulgation se refiere a una formulation liquida que comprende un peptido agonista del receptor sensor de calcio, particularmente a una formulation tal que permanece estable despues de almacenamiento durante un 15 periodo prolongado. La divulgation esta tambien dirigida a procedimientos de preparation y uso de la formulation.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

Se han descrito una variedad de compuestos que tienen actividad para rebajar los niveles de hormona paratiroidea. 20 Vease la publication internacional n° WO 2011/014707. En una realization, el compuesto puede representarse como sigue:

H-L-Cys-OH S—S

Ac-D-Cys-D-Ala-D-Arg-D-Arg-D-Arg-D-Ala-D-Arg-NH2

La cadena principal tiene 7 aminoacidos, todos en configuration D, y el residuo de cistefna de cadena lateral esta en configuration L. El extremo amino esta acetilado y el extremo carboxilo esta amidado. Este compuesto ("AMG-416") tiene utilidad para el tratamiento de hiperparatiroidismo secundario (SHPT) en pacientes de hemodialisis. Puede administrarse una formulation liquida que comprende AMG-416 a un sujeto por via intravenosa. La sal clorhidrato de AMG-416 puede representarse como sigue:

H-L-Cys-OH S—S

Ac-D-Cys-D-Ala-D-Arg-D-Arg-D-Arg-D-Ala-D-Arg-NH2 • x(HCl)

Los peptidos terapeuticos plantean una serie de retos con respecto a su formulation. Los peptidos en general, y particularmente aquellos que contienen un enlace disulfuro, tienen tfpicamente solo una estabilidad moderada o 35 mala en solution acuosa. Los peptidos tienden a la hidrolisis del enlace amida tanto a alto como a bajo pH. Los enlaces disulfuro pueden ser inestables incluso en condiciones bastante suaves (cercanas a pH neutro). Ademas, los peptidos que contienen disulfuro que no son cfclicos tienden particularmente a la formation de dfmero. Por consiguiente, los peptidos terapeuticos se proporcionan a menudo en forma liofilizada, como polvo seco o torta, para reconstitution posterior. Una formulation liofilizada de un peptido terapeutico tiene la ventaja de proporcionar 40 estabilidad durante largos periodos de tiempo, pero es menos conveniente de usar ya que requiere la adicion de uno o mas diluyentes y existe el riesgo potencial de errores debido al uso de un tipo o cantidad inapropiados de diluyente, asf como riesgo de contamination. Ademas, el proceso de liofilizacion lleva tiempo y es costoso.

Por consiguiente, existe la necesidad de una formulation liquida acuosa que comprenda un peptido agonista del 45 receptor sensor de calcio, tal como AMG 416. Serfa deseable que la formulation liquida permaneciera estable durante un periodo de tiempo relevante en condiciones de almacenamiento adecuadas y que fuera adecuada para administration por via intravenosa u otras parenterales.

RESUMEN DE LA INVENCION

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Se proporciona una formulacion liquida que comprende un agonista peptfdico del receptor sensor de calcio, tal como AMG-416.

En una realizacion, la formulacion tiene un pH de aproximadamente 2,0 a aproximadamente 5,0. En otra realizacion, 5 la formulacion tiene un pH de 2,5 a 4,5. En otra realizacion, la formulacion tiene un pH de 2,5 a 4,0. En otra realizacion, la formulacion tiene un pH de 3,0 a 3,5. En otra realizacion, la formulacion tiene un pH de 3,0 a 4,0. En otra realizacion, la formulacion tiene un pH de 2,8 a 3,8.

En otra realizacion, el pH de la formulacion se mantiene mediante un tampon farmaceuticamente aceptable. Tales 10 tampones incluyen, sin limitacion, tampones succinato, tampones acetato, tampones citrato y tampones fosfato. En otra realizacion, el tampon es tampon succinato. El pH de la formulacion puede ajustarse segun sea necesario con un acido o base tal como HCl o NaOH.

En otra realizacion, esta presente el peptido agonista del receptor sensor de calcio a una concentracion de 0,1 mg/ml 15 a 20 mg/ml. En otra realizacion, esta presente el peptido a una concentracion de 1 mg/ml a 15 mg/ml. En otra realizacion, esta presente el peptido a una concentracion de 2,5 mg/ml a 10 mg/ml. En otra realizacion, esta presente el peptido a una concentracion de aproximadamente 1 mg/ml, aproximadamente 5 mg/ml o aproximadamente 10 mg/ml.

20 En otra realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de aproximadamente 0,1 g/ml a aproximadamente 20 mg/ml. En una realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 15 mg/ml. En otra realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de aproximadamente 2,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml. En otra realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de aproximadamente 1 mg/ml, aproximadamente 2,5 mg/ml, aproximadamente 5 mg/ml o aproximadamente 10 mg/ml. 25

En otra realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de 0,1 mg/ml a 20 mg/ml. En una realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de 1 mg/ml a 15 mg/ml. En otra realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de 2,5 mg/ml a 10 mg/ml. En otra realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de 1 mg/ml a 5 mg/ml. En otra realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de 5 mg/ml a 10 mg/ml. En otra 30 realizacion, esta presente AMG 416 a una concentracion de 0,5 a 1,5 mg/ml, 2,0 a 3,0 mg/ml, 4,5 a 5,5 mg/ml o 9,5 a aproximadamente 10,5 mg/ml.

En otra realizacion, la formulacion comprende ademas un modificador de la tonicidad farmaceuticamente aceptable o una mezcla de modificadores de la tonicidad farmaceuticamente aceptables. En otra realizacion, esta presente el 35 modificador de la tonicidad (o mezcla de modificadores de la tonicidad) a una concentracion suficiente para que la formulacion sea aproximadamente isotonica con fluidos corporales (p.ej., sangre humana). En otro aspecto, el modificador de la tonicidad es NaCl.

En otra realizacion, la formulacion comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un peptido agonista del 40 receptor sensor de calcio. En una realizacion preferida, la formulacion comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de AMG 416.

En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a 2-8 °C durante hasta 2 anos. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a 2-8 45 °C durante hasta 3 anos. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a 2-8 °C durante hasta 4 anos.

En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 8 % de degradacion cuando se almacena a 2-8 °C durante hasta 2 anos. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 8 % de degradacion cuando se almacena a 2-8 50 °C durante hasta 3 anos. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 8 % de degradacion cuando se almacena a 2-8 °C durante hasta 4 anos.

En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a temperatura ambiente durante 3 meses. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se 55 almacena a temperatura ambiente durante hasta 6 meses. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a temperatura ambiente durante hasta 1 ano.

En otra realizacion, se proporciona una formulacion que comprende de 0,5 mg/ml a 20 mg/ml de un peptido agonista del receptor sensor de calcio (p.ej., AMG 416) en solucion acuosa, un tampon succinato que mantiene la formulacion 60 a un pH de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 3,5 y una concentracion suficiente de cloruro de sodio para

que la formulacion sea aproximadamente isotonica con la sangre humana.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

5 La Figura 1 es una serie de graficos que representan la pureza (%) en funcion del tiempo (dfas) para soluciones de AMG 416 en solucion salina tamponada con succinato (pH 4,5) a temperatura ambiente (TA). La Figura 1A muestra la estabilidad de soluciones de AMG 416 que tienen concentraciones de 200, 66, 20, 6,7, 2,2 y 0,67 mg/ml de AMG 416. En la Figura 1B, se aumenta la escala para ilustrar mas claramente el patron de degradacion a concentraciones de 20 mg/ml e inferiores.

10 La Figura 2 es un grafico que representa la pureza (%) en funcion del tiempo (dfas) para soluciones de AMG 416 en solucion salina tamponada con succinato (pH 4,5) a 40 °C que tienen concentraciones en el intervalo de 20, 6,7, 2,2 y 0,67 mg/ml de AMG 416.

La Figura 3 es una serie de graficos que representan la pureza (%) en funcion del tiempo (dfas) para soluciones de AMG 416 en solucion salina tamponada con succinato (pH 2, 3, 4, 5 y 6) a 40 °C. En la Figura 3A, la concentracion 15 de AMG 416 es de 10 mg/ml y en la Figura 3B la concentracion de AMG 416 es de 2,5 mg/ml.

La Figura 4 es una serie de graficos que representan la pureza (%) a los 28 dfas en funcion del pH para soluciones de AMG 416 en solucion salina tamponada con succinato a 2-8 °C, TA y 40 °C. En la Figura 4A, la concentracion de AMG 416 es de 10 mg/ml y en la Figura 4B la concentracion de AMG 416 es de 2,5 mg/ml.

La Figura 5 es una serie de cromatogramas de HPLC. La senal de HPLC en la Figura 5A es para una solucion de 20 AMG 416 (5 mg/ml, pH 2,25) almacenada durante 27 dfas a 40 °C (87,8 % de pureza) En la Figura 5B, se aumenta la escala para ilustrar mas claramente los picos.

La Figura 6 es una serie de cromatogramas de HPLC. La senal de HPLC en la Figura 6A es para una solucion de AMG 416 (5 mg/ml, pH 3,5) almacenada durante 27 dfas a 40 °C (91, 7 % de pureza). En la Figura 6B, se aumenta la escala para ilustrar mas claramente los picos.

25 La Figura 7 es un grafico que representa la pureza (%) en funcion del tiempo (dfas) para una serie de soluciones de AMG 416 (5 mg/ml) en solucion salina tamponada con succinato (pH 2,25, 2,5, 3,0 y 3,5) a 2-8 °C.

La Figura 8 es un grafico que representa la pureza (%) en funcion del tiempo (dfas) para una serie de soluciones de AMG 416 (5 mg/ml) en solucion salina tamponada con succinato (pH 2,25, 2,5, 3,0 y 3,5) a TA.

La Figura 9 es un grafico que representa la pureza (%) en funcion del tiempo (dfas) para una serie de soluciones de 30 AMG 416 (5 mg/ml) en solucion salina tamponada con succinato (pH 2,25, 2,5, 3,0 y 3,5) a 40 °C.

La Figura 10 es una serie de graficos que representan el producto de degradacion (%) en funcion del tiempo (dfas) para una serie de soluciones de AMG 416 (5 mg/ml) en solucion salina tamponada con succinato (pH 2,25, 2,5, 3,0 y

3.5) . Se muestra el curso temporal de la desamidacion C-terminal a 2-8 °C (Figura 10A), TA (Figura 10B) y a 40 °C (Figura 10C). Observese que la escala del eje y es diferente en cada grafico.

35 La Figura 11 es una serie de graficos que representan el producto de degradacion (%) en funcion del tiempo (dfas) para una serie de soluciones de AMG 416 (5 mg/ml) en solucion salina tamponada con succinato (pH 2,25, 2,5, 3,0 y

3.5) . Se muestra el curso temporal de la formacion de homodfmero a 2-8 °C (Figura 11A), TA (Figura 11B) y a 40 °C (Figura 11C). Observese que la escala del eje y de la Figura 11C es diferente de la de las Figuras 11A y 11B.

La Figura 12 es una serie de graficos que representan la pureza (%) en funcion del pH (2,8-3,8), la concentracion de 40 AMG 416 (4-6 mg/ml) y NaCl (0,7-1,0 %) para una serie de soluciones en solucion salina tamponada con succinato almacenadas a 2-8 °C (Figura 12A), 25 °C (Figura 12B) y 40 °C (Figura 12C).

La Figura 13 es una serie de graficos que representan la pureza (%) en funcion del tiempo (meses) para una serie de soluciones de AMG 416 (3,4 mg/ml) en solucion salina tamponada con succinato (pH 2,5, 3,0, 3,5) almacenada a 2-8 °C (Figura 13A), 25 °C (Figura 13B) y 40 °C (Figura 13C).

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DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

Los encabezados de seccion usados en la presente memoria son solo con fines organizativos y no han de considerarse como limitantes de la materia en cuestion descrita.

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A menos que se defina de otro modo en la presente memoria, los terminos cientfficos y tecnicos usados con relacion a la presente solicitud tendran los significados que se entienden comunmente por los especialistas en la materia. Ademas, a menos que se requiera otra cosa por el contexto, los terminos singulares incluiran pluralidades y los terminos plurales incluiran el singular.

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Generalmente, las nomenclaturas usadas con relacion a, y las tecnicas de, biologfa molecular y qufmica de protefnas descritas en la presente memoria son aquellas bien conocidas y usadas comummente en la materia. Los procedimientos y tecnicas de la presente solicitud se efectuan generalmente de acuerdo con procedimientos convencionales bien conocidos en la materia y como se describen en diversas referencias generales y mas 60 especfficas que se citan y discuten a lo largo de la presente memoria descriptiva a menos que se indique otra cosa.

Veanse, p.ej., Laszlo, Peptide-Based Drug Design: Methods and Protocols, Humana Press (2008); Benoiton, Chemistry of Peptide Synthesis, CRC Press (2005); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992), que se incorporan a la presente memoria como referencia con cualquier fin. Las tecnicas de purification se efectuan de acuerdo con las especificaciones del fabricante, como se logra comunmente 5 o como se describe en la presente memoria. Las terminologfas usadas en relation con, y los procedimientos y tecnicas de laboratorio de, qufmica analftica, qufmica organica sintetica y qufmica medica y farmaceutica descritas en la presente memoria son aquellas bien conocidas y usadas comunmente en la materia. Pueden usarse tecnicas estandares para sfntesis qufmicas, analisis qufmicos, preparation farmaceutica, formulation y suministro y tratamiento de pacientes.

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Deberfa entenderse que esta divulgation no esta limitada a la metodologfa, protocolos y reactivos, etc. particulares descritos en la presente memoria, y como tales pueden variar. La terminologfa usada en la presente memoria es con el fin de describir realizaciones particulares solo, y no pretende limitar el alcance de lo divulgado, que se define unicamente por las reivindicaciones.

15 Como se usa en la presente memoria, el termino "aproximadamente" en el contexto de un valor o intervalo dado hace referencia a un valor o intervalo que esta dentro del 20 %, preferiblemente dentro del 10 % y mas preferiblemente dentro del 5 % del valor o intervalo dado.

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I. Definiciones generales

Segun la convention, como se usa en la presente memoria, "un" y "una" significan "uno o mas" a menos que se indique especfficamente otra cosa.

El termino "AMG 416" hace referencia al compuesto que tiene el nombre qufmico: Disulfuro de N-acetil-D-cisteinil-D- alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginamida con L-cistefna, que puede representarse como:

H-L-Cys-OH S—S

Ac-D-Cys-D-Ala-D-Arg-D-Arg-D-Arg-D-Ala-D-Arg-NH2

Los terminos "clorhidrato de AMG 416" o "HCl de AMG 416" son intercambiables y hacen referencia al compuesto que tiene el nombre qufmico: Disulfuro de N-acetil-D-cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D- 30 arginamida con clorhidrato de L-cistefna, que puede representarse como:

H-L-Cys-OH S—S

Ac-D-Cys-D-Ala-D-Arg-D-Arg-D-Arg-D-Ala-D-Arg-NH2 • xHCl

Como se usa en la presente memoria, los terminos "aminoacido" y "residuo" son intercambiables y, cuando se usan 35 en el contexto de un peptido o polipeptido, hacen referencia tanto aminoacidos de origen natural como sintetico, asf como a analogos aminoacfdicos, mimeticos aminoacfdicos y aminoacidos de origen no natural que son qufmicamente similares a los aminoacidos de origen natural.

El termino "tratar" hace referencia a cualquier indicio de exito en el tratamiento o mejora de una lesion, patologfa o 40 afeccion, incluyendo cualquier parametro objetivo o subjetivo tal como mitigation; remision; disminucion de los signos o sfntomas o hacer la lesion, patologfa o afeccion mas tolerable al paciente; retardar la tasa de degeneration o declive; hacer el punto final de degeneracion menos debilitante o mejorar el bienestar ffsico o mental de un paciente. El tratamiento o mejora de los signos o sfntomas puede estar basado en parametros objetivos o subjetivos; incluyendo los resultados de un examen ffsico, por ejemplo el tratamiento de SHPT disminuyendo los niveles 45 elevados de hormona paratiroidea (PTH).

Los terminos "dosis terapeuticamente efectiva" y "cantidad terapeuticamente efectiva", como se usan en la presente memoria, significan una cantidad que desencadena una respuesta biologica o medicinal en un sistema de tejido, animal o ser humano buscada por un investigador, medico u otro facultativo, que incluye el alivio o mejora de los 50 signos de la enfermedad o trastorno que se esta tratando, por ejemplo, una cantidad de AMG 416 que provoca una

reduccion deseada del nivel elevado de PTH.

El termino "temperature ambiente" como se usa en la presente memoria hace referencia a una temperature de aproximadamente 25 °C. El almacenamiento en "condiciones refrigeradas" como se usa en la presente memoria 5 hace referencia a almacenamiento a una temperatura de 2-8 °C.

Los terminos "peptido", "polipeptido" y "protefna" son intercambiables y hacen referencia a un polfmero de aminoacidos, unidos tfpicamente entre si a traves de enlaces peptfdicos o disulfuro. Los terminos se aplican tambien a polfmeros de aminoacidos en que uno o mas residuos aminoacfdicos son un analogo o mimetico de un 10 correspondiente aminoacido de origen natural, asf como a polfmeros de aminoacidos de origen natural. Los terminos pueden abarcar tambien polfmeros de aminoacidos que se han modificado, p.ej.,, mediante la adicion de residuos de carbohidrato para formular glicoprotefnas, o se han fosforilado. Los peptidos, polipeptidos y protefnas pueden producirse mediante una sfntesis en fase lfquida o sfntesis en fase solida o mediante una celula genomanipulada o recombinante.

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Una "variante" de un peptido o polipeptido comprende una secuencia aminoacfdica donde uno o mas residuos aminoacfdicos se insertan, eliminan y/o sustituyen en la secuencia aminoacfdica respecto a otra secuencia polipeptfdica. Las variantes incluyen protefnas de fusion.

20 Un "derivado" de un peptido o polipeptido es un peptido o polipeptido que se ha modificado qufmicamente de alguna manera distinta de las variantes de insercion, delecion o sustitucion, p.ej., mediante conjugacion con otro resto qufmico. Tal modificacion puede incluir la adicion covalente de un grupo a las terminaciones amino y/o carboxi del peptido o polipeptido, p.ej., la acetilacion del extremo amino y/o la amidacion de la terminacion carboxi de un peptido o polipeptido.

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El termino "aminoacido" incluye su significado normal en la materia. Los 20 aminoacidos de origen natural y sus abreviaturas siguen el uso convencional. Vease, Immunology-A Synthesis, 2a edicion, (E. S. Golub and D. R. Green, eds.), Sinauer Associates: Sunderland, Mass. (1991), que se incorpora a la presente memoria como referencia con cualquier fin. Los estereoisomeros, (p.ej., D-aminoacidos) de los 19 aminoacidos convencionales (excepto la glicina), 30 aminoacidos no naturales tales como aminoacidos [alfa], [alfa]-disustituidos, N-alquilaminoacidos y otros aminoacidos no convencionales pueden ser tambien componentes adecuados para polipeptidos y se incluyen en la frase "aminoacido". Los ejemplos de aminoacidos no convencionales incluyen: homocistefna, ornitina, 4- hidroxiprolina, [gamma]-carboxiglutamato, [epsilon]-N,N-N-trimeil-lisina, [epsilon]-N-acetil-lisina, O-fosfoserina, N- acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilhistidina, 5-hidroxilisina, [sigma]-N-metilarginina y otros aminoacidos e 35 iminoacidos similares (p.ej., 4-hidroxiprolina) En la notacion polipeptfdica usada en la presente memoria, la terminacion amino esta a la izquierda y la terminacion carboxilo esta a la derecha, de acuerdo con el uso y convencion estandares.

Un "sujeto" o "paciente" como se usa en la presente memoria puede ser cualquier mamffero. En una realizacion 40 tfpica, el sujeto o paciente es un ser humano.

Un "tampon" como se usa en la presente memoria hace referencia a una composicion, donde la composicion comprende un acido debil y su base conjugada (habitualmente como una sal de base conjugada), una base debil y su acido conjugado o mezclas de los mismos. Los especialistas en la materia reconocerfan facilmente una variedad 45 de tampones que podrfan usarse en las formulaciones usadas en la invencion. Los tampones tfpicos incluyen, pero sin limitacion, acidos debiles o bases debiles farmaceuticamente aceptables o mezclas de los mismos. Los tampones farmaceuticamente ejemplares incluyen acetato (p.ej., acetato de sodio) y succinato (p.ej., succinato de sodio).

La frase "acido debil" es un acido qufmico que no se ioniza completamente en solucion acuosa; es decir, si el acido 50 se representa por la formula general HA, entonces en solucion acuosa se forma A-, pero sigue permaneciendo una cantidad significativa de HA no disociado. La constante de disociacion de acido (Ka) de un acido debil varfa entre 1,8 x 10'16 y 55,5.

La frase "acido debil" es una base qufmica que no se ioniza totalmente en solucion acuosa; es decir, si la base se 55 representaba por la formula general B, entonces en solucion acuosa se forma BH+, pero sigue permaneciendo una cantidad significativa de B no protonado. La constante de disociacion de acido (Ka) del acido debil conjugado resultante BH+ varfa entre 1,8 x 10'16 y 55,5.

La frase "acido conjugado" es el miembro acido, HX+, de un par de dos compuestos (HX+, X) que se transforman 60 entre sf mediante ganancia o perdida de un proton.

La frase "base conjugada" es el miembro basico, X-, de un par de dos compuestos (HX, X-) que se transforman entre si mediante ganancia o perdida de un proton.

5 La frase "sal basica conjugada" es la sal ionica que comprende una base conjugada X- y un contraion cargado positivamente.

La frase "sistema tampon" significa una mezcla que contiene al menos dos tampones.

10 El termino "c.s." significa anadir una cantidad suficiente para conseguir la funcion deseada, p.ej. para llevar la solucion al volumen deseado (es decir, 100 %).

La frase "modificador de la tonicidad" significa una sustancia inerte farmaceuticamente aceptable que puede anadirse a la formulacion para ajustar la tonicidad de la formulacion. Los modificadores de la tonicidad adecuados 15 para esta invencion incluyen, pero sin limitacion, cloruro de sodio, cloruro de potasio, manitol o glicerina y otros modificadores de la tonicidad farmaceuticamente aceptables.

II. Realizaciones

20 La presente divulgacion se refiere a formulaciones lfquidas que comprenden un peptido agonista del receptor sensor de calcio, donde la formulacion tiene un pH de aproximadamente 2,0 a aproximadamente 5,0. En una realizacion preferida, la presente divulgacion se refiere a una formulacion lfquida que comprende AMG 416, donde la formulacion tiene un pH de aproximadamente 2,0 a aproximadamente 5,0. Se describen AMG 416 y su preparacion en la pat. internacional n° de publicacion WO 2011/014707. Por ejemplo, AMG 416 puede ensamblarse mediante 25 sfntesis en fase solida a partir de los correspondientes D-aminoacidos protegidos con Fmoc. Despues de la escision de la resina, el material puede tratarse con Boc-L-Cys(NPyS)-OH para formar el enlace disulfuro. El grupo Boc puede retirarse entonces con acido trifluoroacetico (TFA), purificarse el producto resultante por cromatograffa lfquida a alta presion en fase inversa (HPLC) y aislarse en forma de sal de TFA por liofilizacion. La sal de TFA puede convertirse entonces en una sal farmaceuticamente aceptable llevando a cabo un procedimiento de intercambio 30 salino posterior. Tales procedimientos son bien conocidos en la materia e incluyen, p.ej., una tecnica de intercambio ionico, seguida opcionalmente de purificacion del producto resultante (por ejemplo, por cromatograffa lfquida en fase inversa u osmosis inversa).

Las formulaciones divulgadas en la presente memoria se describen principalmente en terminos del peptido 35 terapeutico, AMG 416, como ingrediente activo. Sin embargo, como apreciara facilmente el especialista en la materia, la presente divulgacion se extiende tambien a variantes y derivados de AMG 416.

Por ejemplo, en una realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-D- cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginamida con D-cistefna. En otra realizacion, la formulacion 40 divulgada puede usarse tambien con disulfuro de W-acetil-D-cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D- arginamida con W-acetil-D-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-D-cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginamida con W-acetil-L-cistefna.

En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-L-cisteinil-L- 45 alanil-L-arginil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginamida con D-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-L-cisteinil-L-alanil-L-arginil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L- arginamida con L-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-L-cisteinil-L-alanil-L-arginil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginamida con W-acetil-D-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-L-cisteinil-L-alanil-L- 50 arginil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginamida con W-acetil-L-cistefna.

En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-D-cisteinil-D- arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginil-D-alanil-D-arginamida con D-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-D-cisteinil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginil-D-alanil- 55 D-arginamida con L-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-D-cisteinil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginil-D-alanil-D-arginamida con W-acetil-D-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-D-cisteinil-D-arginil-D- arginil-D-alanil-D-arginil-D-alanil-D-arginamida con W-acetil-L-cistefna.

60 En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-L-cisteinil-L-

arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginil-L-alanil-L-arginamida con D-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-L-cisteinil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginil-L-alanil-L- arginamida con L-cistefna. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-L-cisteinil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginil-L-alanil-L-arginamida con W-acetil-D-cistefna. En otra 5 realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con: Disulfuro de W-acetil-L-cisteinil-L-arginil-L- arginil-L-alanil-L-arginil-L-alanil-L-arginamida con W-acetil-L-cistefna.

En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con uno o mas de los compuestos proporcionados en la Tabla 1, Tabla 2, Tabla 3, Tabla 4, Tabla 5, Tabla 6, Tabla 7, Tabla 8, Tabla 9 y/o Tabla 10 de 10 la pat. internacional n° de publicacion WO 2011/014707. En otra realizacion, las formulaciones divulgadas pueden usarse tambien con uno o mas de los compuestos descritos en la pat. internacional n° de publicacion WO 2011/014707.

En algunas realizaciones, la formulacion contiene una cantidad terapeuticamente efectiva del ingrediente activo(p.e/., 15 AMG 416). Una cantidad terapeuticamente efectiva del ingrediente activo en cualquier realizacion dada de la formulacion de la presente divulgacion dependera del volumen de la formulacion para suministrar a un sujeto dado, asf como de la edad y el peso del sujeto, y de la naturaleza de la dolencia o trastorno que se este tratando. Dependiendo de la forma de dosificacion, en algunos casos puede proporcionarse una cantidad terapeuticamente efectiva al paciente en una administracion, mientras que en otros casos puede requerirse una pluralidad de 20 administraciones.

La formulacion lfquida de la presente divulgacion es una composicion farmaceutica adecuada para administracion intravenosa, intraarterial, intramuscular y subcutanea. En una realizacion preferida, la formulacion lfquida es adecuada para administracion por via intravenosa u otras parenterales. Preferiblemente, la formulacion lfquida es 25 una solucion esteril acuosa. Tfpicamente, el disolvente es agua de grado inyectable o una mezcla de agua y uno o mas de otros disolventes miscibles con agua, tales como propilenglicol, polietilenglicol, y etanol. Se prefiere el uso de agua esteril desionizada como disolvente. Sin embargo, pueden emplearse otros disolventes que sean adecuados y convencionales para preparaciones farmaceuticas.

30 La formulacion contiene tfpicamente de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 100 mg/ml del ingrediente activo (p.ej., AMG 416), de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml del ingrediente activo, de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 15 mg/ml del ingrediente activo, de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml del ingrediente activo o de aproximadamente 2 mg/ml a aproximadamente 5 mg/ml del ingrediente activo. En algunas realizaciones, la formulacion contiene aproximadamente 1 mg/ml del ingrediente 35 activo, aproximadamente 2 mg/ml del ingrediente activo, aproximadametne 2,5 mg/ml del ingrediente activo, aproximadamente 5 mg/ml del ingrediente activo, aproximadamente 10 mg/ml del ingrediente activo o aproximadamente 20 mg/ml del ingrediente activo. En otra realizacion, la formulacion contiene de 0,1 mg/ml a 100 mg/ml del ingrediente activo, de 0,1 mg/ml a 20 mg/ml del ingrediente activo, de 0,5 mg/ml a 15 mg/ml del ingrediente activo, de 1 mg/ml a 10 mg/ml del ingrediente activo o de 2 mg/ml a 5 mg/ml del ingrediente activo. En 40 una realizacion preferida, la formulacion contiene de 1 mg/ml a 10 mg/ml del ingrediente activo. En otra realizacion preferida, la formulacion contiene de 2 mg/ml a 5 mg/ml del ingrediente activo.

La formulacion tiene tfpicamente un pH de aproximadamente 2,0 a aproximadamente 5,0, un pH de aproximadamente 2,5 a aproximadamente 4,5, un pH de aproximadamente 2,5 a aproximadamente 4,0, un pH de 45 aproximadamente 3,0 a aproximadamente 3,5 o un pH de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 3,6. En algunas realizaciones, la formulacion tiene un pH de aproximadamente 2, un pH de aproximadamente 2,5, un pH de aproximadamente 3,0, un pH de aproximadamente 3,3, un pH de aproximadamente 3,5 o un pH de aproximadamente 4,0. En algunas realizaciones, la formulacion tiene un pH de 2,0 a 5,0, un pH de 2,5 a 4,5, un pH de 2,5 a aproximadamente 4,0, un pH de 3,0 a 3,5 o un pH de 3,0 a 3,6.

50

Como se describe mas completamente en los ejemplos, la estabilidad de AMG 416 depende del pH de la solucion. Los presentes inventores han encontrado que los dos productos de degradacion principales son el resultado de la desamidacion C-terminal y la formacion de homodfmero. Ademas, los presentes inventores han encotrando que el curso temporal de degradacion por estas rutas es funcion del pH. V'easeel Ejemplo 6. A bajo pH, predomina la 55 degradacion por desamidacion C-terminal (veasela Figura 10), mientras que a pH superior predomina la degradacion por formacion de homodfmero (vease la Figura 11). Por tanto, la formacion de los dos productos de degradacion principales tienen la relacion opuesta entre pH y extension de la degradacion. Estas tendencias opuestas son la base de los datos de estabilidad global en el intervalo de valores de pH y apoyan la identificacion de aproximadamente pH 3,0 a 3,5 como el pH de estabilidad maxima de las soluciones de AMG 416.

Tfpicamente, la formulacion contiene un agente de tamponacion fisiologicamente aceptable que mantiene el pH de la formulacion en el intervalo deseado. En una formulacion, el tampon mantiene un pH de aproximadamente 2,0 a aproximadamente 5,0, un pH de aproximadamente 2,5 a aproximadamente 4,5, un pH de aproximadamente 2,5 a aproximadamente 4,0, un pH de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 3,5 o un pH de aproximadamente 3,0 a 5 aproximadamente 3,6. En algunas realizaciones, el tampon mantiene un pH de aproximadamente 2, un pH de aproximadamente 2,5, un pH de aproximadamente 3,0, un pH de aproximadamente 3,3, un pH de aproximadamente

3.5 o un pH de aproximadamente 4,0. En algunas realizaciones, el tampon mantiene un pH de 2,0 a 5,0, un pH de

2.5 a 4,5, un pH de 2,5 a aproximadamente 4,0, un pH de 3,0 a 3,5 o un pH de 3,0 a 3,6.

10 Cualquier tampon que sea capaz de mantener el pH de la formulacion a cualquier pH o dentro de cualquier intervalo de pH proporcionado anteriormente es adecuado para uso en las formulaciones de la presente divulgacion, a condicion de que no reaccione con otros componentes de la formulacion, cause la formacion de precipitados visibles o cause de otro modo que el ingrediente activo se desestabilice qufmicamente. El tampon usado en la presente formulacion comprende tfpicamente un componente seleccionado del grupo consistente en succinato, citrato, malato, 15 edetato, histidina, acetato, adipato, aconitato, ascorbato, benzoato, carbonato, bicarbonato, maleato, glutamato, lactato, fosfato y tartrato o una mezcla de estos tampones. En una realizacion preferida, el tampon comprende succinato, p.ej., succinato de sodio.

La concentracion del tampon se selecciona de modo que proporcione una estabilizacion del pH asf como suficiente 20 capacidad de tamponacion. En una realizacion, esta presente el tampon en la formulacion a una concentracion de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 100 mmol/l, de aproximadamente 0,75 a aproximadamente 50 mmol/l, de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 mmol/l o de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 mmol/l. En otras realizaciones, esta presente el tampon a aproximadamente 5 mmol/l, a aproximadamente 10 mmol/l, a aproximadamente 15 mmol/l o aproximadamente 20 mmol/l. En otras realizaciones, esta presente el tampon en la 25 formulacion a una concentracion de 0,5 a 100 mmol/l, de 0,75 a 50 mmol/l, de 1 a 20 mmol/l o de 10 a 20 mmol/l. En una realizacion preferida, esta presente el tampon a aproximadamente 10 mmol/l. En otra realizacion preferida, el tampon es succinato presente a aproximadamente 10 mmol/l.

Desde el punto de vista de la compatibilidad de la formulacion lfquida con la administracion intravenosa, serfa 30 deseable que el pH de la formacion lfquida fuera lo mas cercano posible al pH fisiologico. Las formulaciones lfquidas que tienen un pH que es lejano al pH fisiologico o que estan fuertemente tamponadas pueden causar dolor o incomodidad en la administracion. Como se ha discutido, las formulaciones de AMG 416 a pH fisiologico o mayor no permanecerfan estables durante un periodo prolongado de tiempo. Por lo tanto, en una realizacion preferida, la formulacion lfquida de la presente divulgacion se tampona debilmente de modo que la cantidad inyectada se 35 neutralice rapidamente por los fluidos fisiologicos del cuerpo del sujeto. Es sorprendente que se mantenga una buena estabilidad y buen control del pH con la baja concentracion de tampon. En una realizacion preferida, se usa la sal HCl de AMG 416 en la preparacion de la formulacion lfquida para minimizar la capacidad tamponadora. Debido a que el HCl es un acido fuerte, no actua como tampon. Esto proporciona una ventaja frente al uso de un acido mas debil tal como un acido acetico. Usar la sal acetato de AMG 416, por ejemplo, proporcionarfa por sf misma cierta 40 capacidad tamponadora y permitirfa menos flexibilidad para fijar la capacidad tamponadora de la formulacion y puede dar como resultado una formulacion que es mas resistente a la neutralizacion en el cuerpo y por lo tanto peor tolerada. Debido a que AMG 416 es un peptido policationico, el efecto se potenciarfa en comparacion con la mayorfa de peptidos que tienen un caracter mas neutro.

45 Es generalmente deseable que una formulacion que se administra por via intravenosa o parenteral sea isotonica con los fluidos corporales. En algunas realizaciones, la formulacion de la presente divulgacion contiene un modificador de la tonicidad fisiologicamente aceptable. Los modificadores de la tonicidad utiles en la presente divulgacion pueden incluir cloruro de sodio, manitol, sacarosa, dextrosa, sorbitol, cloruro de potasio o mezclas de los mismos. En una realizacion preferida, el tonificante es cloruro de sodio.

50

Cuando esta presente un agente tonificante, esta preferiblemente presente en una cantidad suficiente para hacer la formulacion lfquida aproximadamente isotnica con los fluidos corporales (es decir, aproximadamente 270 a aproximadamente 300 mOsm/l) y adecuada para inyeccion parenteral a un mamffero, tal como un sujeto humano, en tejidos dermicos, subcutaneos o intramusculares o IV. La isotonicidad puede medirse, por ejemplo, usando un 55 osmometro de presion de vapor o de tipo congelacion de hielo. Dependiendo de las concentraciones de los demas componentes en la formulacion, el cloruro de sodio esta presente en la formulacion a una concentracion de aproximadamente 7,0 a aproximadamente 10 mg/ml, de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 9,5 mg/ml o de aproximadamente 8,0 a aproximadamente 9,0 mg/ml. En una realizacion, esta presente cloruro de sodio en la formulacion a una concentracion de aproximadamente 8,5 mg/ml. En otras realizaciones, esta presente cloruro de 60 sodio en la formulacion a una concentracion de 7,0 a 10 mg/ml, de 7,5 a 9,5 mg/ml o de 8,0 a 9,0 mg/ml.

Las formulaciones de la presente divulgacion pueden incluir otros vehfculos, excipientes o adyuvantes farmaceuticos convencionales. Por ejemplo, las formulaciones de la presente invencion pueden incluir agentes estabilizantes (p.ej., EDTA y/o tiosulfato de sodio) o conservantes (p.ej., alcohol bencflico). Ademas, las formulaciones de la presente 5 divulgacion pueden incluir agentes medicinales y/o farmaceuticos adicionales. Por ejemplo, en procedimientos de tratamiento de SHPT en pacientes de hemodialisis con CKD-MBD, puede coadministrarse AMG 416 con uno o mas agentes activos en osteodistrofia renal, tal como terapia de vitamina D (p.ej., paricalcitol), que es un tratamiento establecido para SHPT.

10 En una realizacion, la formulacion tiene menos de un 5 % de degradacion cuando se almacena a aproximadamente 2-8 °C durante 1 ano. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 5 % de degradacion cuando se almacena a temperatura ambiente durante hasta 1 ano. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a aproximadamente 2-8 °C durante 1 anos. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a temperatura ambiente durante 1 ano. En otra 15 realizacion, la formulacion tiene menos de un 5 % de degradacion cuando se almacena a aproximadamente 2-8 °C durante 2 anos. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 5 % de degradacion cuando se almacena a temperatura ambiente durante 2 anos. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a aproximadamente 2-8 °C durante 2 anos. En otra realizacion, la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion cuando se almacena a temperatura ambiente durante 2 anos.

20

En una realizacion, la formulacion lfquida comprende de 0,1 mg/ml a 20 mg/ml del peptido terapeutico, un tampon que mantiene la formulacion a un pH de 2,0 a 5,0 y suficiente concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica. En otra realizacion, la formulacion lfquida comprende de 1 mg/ml a 15 mg/ml del peptido terapeutico, un tampon que mantiene la formulacion a un pH de 2,5 a 4,5 y suficiente 25 concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica. En otra realizacion, la formulacion lfquida comprende de 2,5 mg/ml a 10 mg/ml del peptido terapeutico, un tampon que mantiene la formulacion a un pH de 2,5 a 4,0 y suficiente concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica. En otra realizacion, la formulacion lfquida comprende de 2,5 mg/ml a 5 mg/ml del peptido terapeutico, un tampon que mantiene la formulacion a un pH de 2,5 a 3,5 y suficiente 30 concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica. En otra realizacion, la formulacion lfquida comprende de 2 mg/ml a 20 mg/ml del peptido terapeutico en solucion acuosa, un tampon succinato que mantiene la formulacion a un pH de aproximadamente 3,0 a 3,5 y suficiente concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica.

35 En una realizacion, la formulacion lfquida comprende de 0,1 mg/ml a 20 mg/ml de AMG 416, un tampon que mantiene la formulacion a un pH de 2,0 a 5,0 y suficiente concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica. En otra realizacion, la formulacion lfquida comprende de 1 mg/ml a 15 mg/ml de AMG 416, un tampon que mantiene la formulacion a un pH de 2,5 a 4,5 y suficiente concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica. En otra realizacion, la formulacion 40 lfquida comprende de 2,5 mg/ml a 10 mg/ml de AMG 416, un tampon que mantiene la formulacion a un pH de 2,5 a 4,0 y suficiente concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica. En otra realizacion, la formulacion lfquida comprende de 2,5 mg/ml a 5 mg/ml de AMG 416, un tampon que mantiene la formulacion a un pH de 2,5 a 3,5 y suficiente concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica. En otra realizacion, la formulacion lfquida comprende de 2 mg/ml a 20 mg/ml de AMG 45 416, un tampon succinato que mantiene la formulacion a un pH de aproximadamente 3,0 a 3,5 y suficiente concentracion de cloruro de sodio para proporcionar una formulacion aproximadamente isotonica.

En una realizacion preferida, las formulaciones de la presente divulgacion se preparan colocando una cantidad de tampon calculada para generar el pH deseado en un recipiente adecuado y disolviendolo con agua para inyecciones 50 (WFI), anadiendo una cantidad de material (p.ej., la sal clorhidrato de AMG 416) suficiente para conseguir la concentracion deseada del ingrediente activo (p.ej., AMG 416), anadiendo una cantidad de modificador de la tonicidad (o mezcla de modificaciones de la tonicidad) calculada para volver la formulacion resultante isotonica con los fluidos corporales y anadiendo la cantidad de WFI necesaria para llevar el volumen total a la concentracion deseada. Despues de mezclar los ingredientes, se ajusta el pH a aproximadamente 3,0 a aproximadamente 3,5 y se 55 mezclan de nuevo los componentes.

Si se requiere un ajuste para conseguir el intervalo de pH deseado, el valor de pH puede ajustarse mediante soluciones adecuadas; con soluciones acidas si se indica una reduccion del valor de pH y con soluciones alcalinas si se indica un aumento del valor de pH. Son ejemplos no limitantes de soluciones acidas adecuadas, p.ej., acido 60 clorhfdrico, acido fosforico, acido cftrico e hidrogenofosfato de sodio o potasio. Son ejemplos no limitantes de

soluciones alcalinas adecuadas hidroxidos alcalinos y alcalinoterreos, carbonatos alcalinos, acetatos alcalinos, citratos alcalinos e hidrogenofosfatos dialcalinos, p.ej., hidroxido de sodio, acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato de sodio, hidrogenofosfato de disodio o dipotasio o amoniaco.

5 El procedimiento se lleva a cabo tfpicamente a una temperatura de aproximadamente 2-8 °C a aproximadamente 50 °C y a presion atmosferica. La formulacion resultante puede transferirse entonces a envases de dosificacion unitaria o multidosificacion (tales como botellas, viales, ampollas o jeringuillas prellenadas) para almacenamiento antes del uso.

10 Las formulaciones pueden prepararse y administrarse como se describe anteriormente. Como alternativa, las formulaciones pueden administrarse despues de disolver, dispersar, etc. la formulacion (preparada como se describe anteriormente) en un vehfculo tal como, por ejemplo, un fluido de infusion o en la sangre/fluido devuelto al paciente durante hemodialisis (p.ej., durante el retrolavado).

15 La preparacion de formulaciones lfquidas de acuerdo con la presente divulgacion es conocida, o sera evidente para los especialistas en la materia, por ejemplo vease Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 17a edicion, 1985.

EJEMPLOS

20

Los siguientes ejemplos, incluyendo los experimentos realizados y los resultados conseguidos, se proporcionan solo con fines ilustrativos y no han de considerarse como limitantes del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

EJEMPLO 1

25

Solubilidad de AMG 416 en solucion salina tamponada con succinato

En este estudio, se investigo la solubilidad de AMG 416 en solucion salina tamponada con succinato. Se disolvio HCl de AMG 416 (103 mg de polvo, 80 mg de peptido) en 200 pl de solucion salina tamponada con succinato (succinato 30 25 mM, 0,9 % de solucion salina, pH 4,5). Despues de una breve agitacion con vortex, se obtuvo una solucion transparente con una concentracion nominal de 400 mg/ml. Debido que no se determino la expansion del volumen de solucion, la solubilidad de AMG 416 puede afirmarse conservadoramente como de al menos 200 g/ml. Aunque no se determino la solubilidad maxima en este experimento, AMG 416 es soluble en solucion salina tamponada con succinato a pH 4,5 hasta concentraciones de al menos 200 mg/ml.

35

EJEMPLO 2

Estudio de estabilidad dependiente de la concentracion

40 En este estudio, se investigo la estabilidad de AMG 416 en un intervalo de concentraciones en solucion salina tamponada con succinato (pH 4,5). Se diluyo adicionalmente la solucion de AMG 416 200 mg/ml del Ejemplo 1, supra, con 200 pl de solucion salina tamponada con succinato (pH 4,5) a una concentracion nominal de 200 mg/ml, que se diluyo en serie con solucion salina tamponada con succinato (pH 4,5) a 66, 20, 6,7, 2,2 y 0,67 mg/ml. Se mantuvieron las muestras a temperatura ambiente (es decir, aproximadamente 25 °C) y se analizaron las alfcuotas 45 por HPLC a intervalos de hasta 29 dfas. Se incubo una segunda serie de muestras de AMG 416 que cubren el intervalo de concentracion de 20 a 0,67 mg/ml a 40 °C y se analizaron de la misma manera.

Se proporciona la pureza en el punto temporal de 29 dfas para muestras a temperatura ambiente y a 40 °C en las Tablas 1 y 2, respectivamente. Los resultados proporcionan un perfil de estabilidad de AMG 416 en funcion de la 50 concentracion y la temperatura.

__________________________________Tabla 1________________________________

Estabilidad a TA de AMG 416 en solucion salina tamponada con succinato 25 mM (pH 4,5)

Pureza con el tiempo (dfas)

Concentracion (mg/ml)

0 1 2 5 13 29

200

99,8 99,6 98,4 96,4 89,0 63,8

66

99,6 99,4 99,0 98,1 97,7 91,5

20

99,6 99,7 99,7 99,6 99,3 98,7

6,7

99,4 99,6 99,5 99,5 99,3 98,9

2,2

99,3 99,2 99,3 99,4 99,3 99,1

0,67 | 99,4 | 99,5 | 99,5 | 99,7 | 99,5 | 99,3 |

Tabla 2

Estabilidad a 40 °C de AMG 416 en solucion salina tamponada con succinato 25 mM (pH 4,5)

Pureza con el tiempo (dfas)

Concentracion (mg/ml)

0 1 2 5 13 29

20

99,6 99,1 98,1 n.d. 90,5 72,9

6,7

99,4 99,1 98,7 n.d. 95,2 90,0

2,2

99,3 99,3 99,0 98,4 97,0 94,3

0,67

99,4 99,4 99,3 99,0 97,2 94,4

Se muestra el curso temporal de la degradacion de AMG 416 en funcion de la concentracion a temperature ambiente 5 en la Figura 1A. En la Figura 1B, se aumenta la escala para ilustrar mas claramente el patron de degradacion a concentraciones de farmaco de 20 mg/ml y menores. Se muestra el curso temporal de la degradacion de AMG 416 en funcion de la concentracion a 40 °C en la Figura 2 . Los datos muestran que la estabilidad de la solucion de AMG 416 esta relacionada con la concentracion en el intervalo de estudio de 0,67 mg/ml a 200 mg/ml. Los datos muestran tambien que la estabilidad de la solucion de AMG 416 esta relacionada con la temperatura de incubacion.

10

La Tabla 3 muestra las predicciones de la extension de la degradacion para soluciones de diversas concentraciones de AMG 416 a temperatura ambiente, basadas en la extension de la degradacion a 29 dfas de almacenamiento a temperatura ambiente a pH 4,5 SBS. Se extrapolo el dato de 29 dfas a temperatura ambiente de la Tabla 1 al periodo de tiempo afirmado suponiendo una cinetica de degradacion lineal. Se extrapolo el dato de temperatura

15 ambiente a 5 °C. Se supuso una diferencia de 20 °C, equivalente a una tasa 4 veces menor de degradacion. Se llevaron a cabo las extrapolaciones usando una simple aplicacion de la ecuacion de Arrhenius, donde una subida de 10 °C de temperatura proporciona un aumento de 2 veces de la tasa de reaccion, suponiendo el mismo mecanismo de reaccion y que la energfa de activacion para cada reaccion relevante es de aproximadamente 50 kJ/mol.

20 Los valores sombreados indican condiciones de concentracion/almacenamiento que tienen menos de un 10 % de degradacion, que pueden ser preferibles para una formulacion lfquida.

Tabla 3

Predicciones de estabilidad para soluciones de AMG416

Extension de la degradacion predicha a:

Concentracion (mg/ml)

2 anos aTA 1 ano aTA 2 anos a 5 °C 1 ano a 5 °C

66

>100 >100 50,1 25,0

20

20,9 10,4 wills 2,6

6,7

13,9 7,o 3.5 1.7

2,2

5,2 2,6 1,3 0,7

0,67

2.7 1.4 0.7 0.3

25 La comparacion de los datos mostrados en las Tablas 1 y 2 permite la valoracion del aumento de temperatura como herramienta para predecir la estabilidad a largo plazo de las soluciones de AMG 416. El dato de 0,67 a 20 mg/ml se presenta en la Tabla 4, infra, y muestra la aceleracion de la degradacion a 40 °C, que es notablemente mayor que la predicha por Arrhenius (con las suposiciones descritas, supra). Esto sugiere que los datos de estabilidad acelerada predeciran una mayor extension de la degradacion que la observada a la temperatura de almacenamiento real.

Tabla 4

Dependencia de la temperatura y la concentracion de la degradacion de AMG 416 en solucion a pH 4,5

Concentracion (mg/ml)

Degradacion a los 29 dias, TA (%) Degradacion a los 29 dias, 40 °C (%) Aceleracion TA --> 40 °C (veces) Aceleracion predicha (veces)

20

0,9 26,7 29,7 4

6,7

0,5 9,4 18,8 4

2,2

0,2 5,0 25,0 4

0,67

0,1 5,0 50,0 4

EJEMPLO 3

5 Estabilidad de las formulaciones liquidas de AMG 416 en el intervalo de pH

En este estudio, se determino la estabilidad de las formulaciones liquidas de AMG 416 a una concentracion de 10 mg/ml en un intervalo de pH en solucion salina tamponada con succinato. Se disolvio HCl de AMG 416 (257 mg de polvo) en 20 ml de solucion salina tamponada con succinato a pH 4,5, proporcionando una concentracion de peptido 10 10,0 mg/ml (ajustada para el contenido de peptido del polvo). Se dividio uniformemente la solucion en 5 porciones de 4 ml que se ajustaron a pH 2, 3, 4, 5 y 6, respectivamente, con NaOH y HCl segun fuera necesario. Se tomaron tres soluciones alicuotas de 1 ml de cada porcion y se incubaron a 2-8 °C, temperatura ambiente (aproximadamente 25 °C) y 40 °C, respectivamente. Se diluyo la solucion de 1 ml restante de cada alicuota con solucion salina tamponada con succinato a pH 4,5 hasta 4 ml de concentracion de peptido 2,5 mg/ml, se ajusto el pH y se incubo de la misma 15 manera. Se recuperaron las muestras de acuerdo con el programa y se diluyeron con agua desionizada hasta 1,0 mg/ml para analisis de HPLC.

Se proporciona la pureza en el punto temporal de 28 dias para todas las muestras probadas en la Tabla 5 (nota: el valor de pureza de partida era de 99,3 % para este estudio). Los resultados proporcionan un perfil de estabilidad en 20 funcion de pH, temperatura y concentracion.

Tabla 5

Pureza en el punto temporal de 28 dias para soluciones de AMG 416

10 mg/ml 2,5 mg/ml

2-8 °C

TA 40 °C 2-8 °C TA 40 °C

pH 2

99,1 98,7 94,0 98,9 98,7 89,8

pH 3

99,4 99,1 98,2 99,1 99,0 97,2

pH 4

99,4 98,6 85,0 99,2 98,9 92,2

pH 5

99,0 93,8 64,4 98,9 96,1 73,0

pH 6

96,9 71,8 53,6 97,0 80,0 52,9

Se muestra el curso temporal de la degradacion de AMG 416 en funcion del pH en la Figura 3. En ambas soluciones 25 de 10 mg/ml (Figura 3A) y 2,5 mg/ml (Figura 3B), se observa la menor degradacion a pH 3. En ambas soluciones, la degradacion a pH 6 avanza mas rapidamente, aproximandose la pureza al 50 % el punto temporal del dia 29. El analisis de HPLC mostro que un producto de degradacion principal a pH 2 diferente del observado a pH mayor de 3. A menor pH, la degradacion es predominantemente por desamidacion por hidrolisis, y a un mayor pH, la degradacion es predominantemente la formacion del homodimero.

30

Se muestra el perfil de estabilidad en funcion del pH en el punto temporal de 28 dias en la Figura 4. Puede verse de nuevo tanto a 10 mg/ml (Figura 4A) como a 2,5 mg/ml (Figura 4B) que en este conjunto de experimentos el pH de menor degradacion es aproximadamente 3,0. Ademas, las disminuciones de pureza estan relacionadas con la temperatura a todos los niveles de pH, observandose la menor degradacion en las muestras incubadas a 2-8 °C y 35 observandose la mayor degradacion en las muestras incubadas a 40 °C.

Basandose en la extension de la degradacion a los 28 dias, se calcularon las predicciones de la extension de la degradacion como se describe supra. Se proporcionan las predicciones para la solucion de 10 mg/ml en la Tabla 6 y se proporcionan las predicciones para la de 2,5 mg/ml en la Tabla 7. Los valores sombreados indican condiciones 40 que muestran menos de un 10 % de degradacion, y que pueden preferirse para una formulacion lfquida. Las condiciones donde la muestra a los 28 dias muestra una pureza ligeramente mayor que el dato inicial se presentan como 0,0 % para todas las proyecciones.

Estas extrapolaciones sugieren menos de un 10 % de degradacion despues de 2 anos a temperatura ambiente para las soluciones de 2,5 o 10 mg/ml a pH 3, En general, el dato de mayor temperatura predice una mayor degradacion a los 2 anos que el dato de menor temperatura. Por tanto, para los estudios de 10 mg/ml (Tabla 6), aunque se predice que a pH 3 la degradacion sera menor del 10 % para todos los datos de temperatura, el dato de 2-8 °C predice una menor extension de degradacion que a las temperaturas mayores, y de hecho a 2-8 °C el dato a pH 4 tambien apoya menos de un 10 % de degradacion. De forma similar, a 2,5 mg/ml, se predice que un intervalo de pH de 2-4 tiene menos de un 10 % de degradacion durante 2 anos a TA cuando se extrapola a partir del dato de 2-8 °C.

Tabla 6

Predicciones de estabilidad para soluciones de AMG 416 10 mg/ml basada en la extension de la degradacion a 28 dlas

2-8°C

Degradacion observada a 28 dlas (%) Degradacion calculada

A 360 dias (%)

A 1 ano a TA (%) A 2 anos a 5 °C (%) A 2 anos a TA (%)

pH =2

0,3 3,8 ::: 15.4 7,7 30.7

pH = 3

-0,2 0,0 0,0... 0.0 0,0

pH = 4

-0,1 0,0 0,0 0,0 .... 0,0

pH = 5

0,3 3.5 13.8 6,9 27,6

pH = 6

1,9 23,9 95,7 47,8 >100

TA

Degradacion observada a 28 dias (%) Degradacion caiculada

A 360 dias (%)

A 1 ano a TA (%) A 2 anos a 5 °C (%) A 2 anos a TA (%)

pH = 2

0,6 8,1 8.1 4,0 16.1

pH = 3

0,2 2,6 2.6 1,3 5,1

pH = 4

0,7 8,6 4,3 17,1

pH = 5

5,6 71,4 71,4 35,7 >100

pH =6

26,9 >100 >100 >100 >100

40°C

Degradacion observada a 28 dias (%) Degradacion calculada

A 360 dias (%)

A 1 ano a TA (%) A 2 anos a 5 °C (%) A 2 anos a TA (%)

pH = 2

5,3 68,4 17,1 8,6 34,2

pH = 3

1,1 14,1 : 3.5 : 1.8 7,0 :

pH =4

14,3 >100 45,8 22,9 91,7

pH = 5

34,9 >100 >100 55,9 >100

pH = 6

45,1 >100 >100 72,2 >100

Tabla 7

Prediciones de estabilidad para soluciones de AMG 416 2,5 mg/ml basadas en la extension de la degradacion a los 28 dias.

Degradacion observada a los 28 dias (%) Degradacion calculada (%)

°?o CM o

1 ano a 2-8 °C 1 ano a TA 2 anos a 28 °C 2 anos a TA

II X Q- CM

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

II X Q- CO

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

pH = 4

-0,1 0,0 0,0 0,0 0,0

pH = 5

0,2 2,9 11,8 5,9 23,5

pH = 6

0,8 10,7 43,0 21,5 86,0

Degradacion observada a los 28 dfas (%) Degradacion calculada (%)

TA

1 ano 1 ano a TA 2 anos a 28 °C 2 anos a TA

II X Q- CM

0,6 7,9 7,9 4,0 15,9

pH = 3

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

II X Q.^

0,3 3,6 3,6 1,8 7,2

pH = 5

2,9 37,7 37,7 18,9 75,5

pH = 6

18,1 231,0 231,0 115,5 462,1

Degradacion observada a los 28 dfas (%) Degradacion calculada (%)

40 °C

1 ano 1 ano a TA 2 anos a 2-8 °C 2 anos a TA

II X Q- CM

9,1 116,5 29,1 14,6 58,3

II X Q- CO

1,8 22,5 5,6 2,8 11,3

II X Q.^

6,9 88,7 22,2 11,1 44,3

pH = 5

26,1 333,6 83,4 41,7 166,8

II X Q_ CD

45,0 575,7 143,9 72,0 287,8

La Tabla 8 presenta el efecto de aceleracion de la temperature para estos datos de modo similar a la Tabla 4, supra. Esto indica de nuevo que la elevacion de temperature tiende a proporcionar una mayor aceleracion de la 5 degradacion que la esperada por la extrapolacion basada en la simple aplicacion del principio de Arrhenius.

Tabla 8

Aceleracion de la temperature en funcion del pH.

Deg. a 28 dfas a 10 mg/ml Aceleracion: Dato de 10 mg/ml

2-8 °C TA 40 °C TA / predicho a 2-8 o JSk O O predicho a 2-8 o JSk O O predicho

pH 2

0,2 0,6 5,3 3 4 28 16 9 4

pH 3

-0,1 0,2 1,1 > 2 4 > 10 16 6 4

pH 4

-0,1 0,7 14,3 > 7 4 > 100 16 22 4

pH 5

0,3 5,6 34,9 19 4 116 16 6 4

pH 6

2,4 27,5 45,7 12 4 19 16 2 4

A cada valor de pH, se compara el dato de degradacion para cada una de las tres temperatures con el dato de las otras dos temperatures para calcular la aceleracion observada. La aceleracion predicha es mediante la simple aplicacion del principio de Arrhenius como se describe anteriormente. Como se describe, infra, el analisis de HPLC muestra que el mecanismo de degradacion predominante a un pH menor de aproximadamente 3 es diferente del 5 observado a un pH mayor de aproximadamente 3.

EJEMPLO 4

Efecto de los excipientes tonificantes sobre la estabilidad

10

En este estudio, se determinaron los efectos de diversos excipientes farmaceuticos sobre la estabilidad de AMG 416 en formulacion lfquida. Se prepararon una solucion de AMG 416 10 mg/ml y soluciones madre de manitol, glicina, arginina, NaCl y Na2SO4 a concentraciones isotonicas x2. Se ajustaron los pH de la solucion de AMG 416 y las 5 soluciones excipientes y agua desionizada separadamente a pH 3,5 usando HCl/NaOH. Se anadieron alfcuotas de 15 500 pl de cada una de las 6 soluciones a viales de vidrio, se anadieron 500 pl de la solucion de AMG 416 a los mismos viales y se mezclaron bien. Se efectuo esto por triplicado para proporcionar 18 viales de muestra, conteniendo cada uno AMG 416 5 mg/ml y una concentracion isotonica del excipiente (o agua desionizada). Se repitio esto con un conjunto de soluciones ajustadas a pH 4,5, proporcionando 18 viales de muestra adicionales. Se incubaron las muestras y se retiraron para analisis de HPLC a puntos temporales relevantes.

20

Se muestra en la Tabla 9 el dato de estabilidad en el punto temporal de 56 dfas. Se observo un intervalo de comportamiento de estabilidad en funcion del excipiente. En la mayorfa de condiciones ensayadas, las formulaciones de NaCl mostraron la menor cantidad de degradacion. Las excepciones son para el dato de 2-8 °C a pH 3,5 y 4,5. Se observo mas variabilidad para otros excipientes, aunque la arginina parecfa ser nociva en las 25 muestras de 40 °C y en la muestra a pH 4,5 a temperatura ambiente (aproximadamente 25 °C), y el sulfato de sodio parecfa ser nocivo en las muestras a pH 4,5 a temperatura ambiente y a 40 °C.

Tabla 9

Extension de la degradacion (%) a los 56 dfas para la solucion de AMG 416 5 mg/ml

Temperatura

2-8 °C TA 40 °C

pH

3,5 4,5 3,5 4,5 3,5 4,5

Agua DI

0,0 0,7 1,0 3,6 8,2 24

Manitol

0,0 0,5 0,5 2,2 4,9 23

Gly

0,0 0,6 0,6 6,4 17 28

Arg

0,0 0,5 0,6 29 28 67

NaCl

0,1 1,1 0,3 1,8 3,0 18

Na2SO4

0,0 0,4 0,4 51 9,4 30

30 La Tabla 10 extrapola el dato a los 2 anos de almacenamiento a temperatura ambiente, y se ve una tendencia similar a la discutida, supra en que el almacenamiento a mayor temperatura predice generalmente una degradacion mas rapida de lo esperado por la simple aplicacion del principio de Arrhenius.

imagen1

El dato muestra que el cloruro de sodio puede ser un modificador de la tonicidad adecuado para las formulaciones de solucion de AMG 416.

EJEMPLO 5

5

Estabilidad de solucion en diferentes tampones

En este estudio, se evaluo la estabilidad de las formulaciones lfquidas de AMG 416 en 4 tampones diferentes durante 9 dfas. Se prepararon soluciones salinas tamponadas a una concentracion de 25 mM y pH 4,5 para 4 10 tampones anionicos diferentes en forma de sal de sodio: acetato, citrato, lactato y succinato. Se disolvio HCl AMG 416 (polvo) en cada solucion tamponada, proporcionando una solucion de 2,5 mg/ml y se ajusto el pH a 4,5 con HCl/NaOH. Se diluyeron adicionalmente las soluciones con tampon a pH 4,5 a 1,0 mg/ml y 0,25 mg/ml. Se dividio cada una de las soluciones resultantes en dos viales de HPLC de vidrio, uno almacenado a 2-8 °C y el otro a temperatura ambiente (aproximadamente 25 °C). Se realizo el analisis de HPLC a los 0, 4 y 9 dfas para la 15 determinacion de la potencia y pureza.

La pureza de AMG 416 en la mayorfa de muestras en todos los puntos temporales era de 100 %, con la excepcion de unos pocos picos pequenos para la muestra de citrato a los 9 dfas, que puede atribuirse a la variacion del valor basal. En todos los tampones ensayados, AMG 4176 mostraba buena estabilidad durante el estudio de 9 dfas.

20

EJEMPLO 6

Estabilidad en soluciones tamponadas a pH 2,25, 2,5, 3,0 y 3,5

25 En este estudio, se investigo la estabilidad de una formulacion lfquida de AMG 416 en condiciones de bajo pH. Se preparo solucion salina tamponada con succinato (10 mM, pH 3,5) disolviendo 59 mg de acido succfnico en 45 ml de agua procesada en laboratorio (desionizada) y se ajusto el pH a 3,5 usando HCl 1 N y NaOH 1 N, como fuera necesario, y c.s. hasta 50 ml. Del mismo modo, se preparo una solucion tampon lactato de sodio 10 mM a pH 3,5 (56 mg/50 ml).

30

Se disolvio HCl de AMG 416 (120 mg de polvo) en 20 ml de tampon succinato, proporcionando una solucion de AMG 416 5 mg/ml que se dividio en dos porciones iguales de 10 ml. Se anadio NaCl (90 mg) a una porcion y se anadio manitol (500 mg) a la otra. Se dividio de nuevo cada porcion de 10 ml en dos porciones iguales de 5 ml y se ajusto el pH a 2,25 y 3,5, respectivamente, con HCl 1 N y NaOH 1 N. Del mismo modo, se prepararon 4 soluciones de 5 ml 35 usando tampon lactato. Se anadio 1,0 ml de cada una de las (8) soluciones resultantes a 3 viales de muestra de suero. Ademas, se ajusto a pH 2,5 la solucion de AMG 416 tamponada con succinato a pH 2,25 que contiene NaCl restante y se anadieron alfcuotas de 0,5 ml a 3 viales de muestra de suero, y se ajusto a pH 3,0 la solucion tamponada con succinato a pH 3,5 con NaCl restante y se anadieron alfcuotas de 0,5 ml a 3 viales de muestra de suero. Vease la Tabla 11.

40

En cada punto temporal (0, 2, 8, 12, y 24 semanas), se recuperaron las 30 muestras del almacenamiento, se equilibraron a temperatura ambiente (aproximadamente 25 °C) y se diluyo una alfcuota de 100 pl a 0,5 mg/ml con agua para el analisis de RP-HPLC. Se resellaron las muestras restantes y se devolvieron a sus condiciones de almacenamiento respectivas.

45

Tabla 11

Descripcion de los numeros de muestra

pH

2,25 3,5 2,5 | 3,0

Tampon

Lactato Succinato Lactato Succinato Succinato

Excipiente

NaCl Man. NaCl Man. NaCl Man. NaCl Man. NaCl NaCl

2-8 °C

1 2 3 4 5 6 7 8 25 28

TA

9 10 11 12 13 14 15 16 26 29

40 °C

17 18 19 20 21 22 23 24 27 30

Se muestran los datos de HPLC representativos para el estudio en las Figura 5 y 6. La senal de HPLC mostrada en la Figura 5 es una muestra a pH 2,25 almacenada durante 67 dfas a 40 °C (5 mg/ml, 87,8 % de pureza). La Figura 50 5B muestra una escala diferente para ver las impurezas. La Figura 6 ilustra el efecto de aumentar el pH a 3,5 para la formulacion por lo demas equivalente (pH 3,5, 40 °C, 5 mg/ml, 67 dfas, 91,7 % de pureza). La Figura 6B muestra una escala diferente para ver las impurezas. Como en el estudio anterior, se ve una diferencia notable en el perfil de producto de degradacion a medida que cambia el pH.

Se presenta la pureza de AMG 416 en funcion del tiempo en la Tabla 12 (concentracion lactato; S= succinato, modificador de la tonicidad: N= NaCl al 0,9 %, M= manitol al 5 %). usado contenfa un 3,4 % de dfmero a tiempo 0. Se omitio el punto temporal de 14 dfas para 5 un error en la preparacion de muestra.

Se representan las tendencias de datos seleccionados en forma grafica en las Figuras 7-9.

de tampon 10 mM: L= Observese que el lote la muestra 26 debido a

Tabla 12

Estabilidad de la solucion de AMG 416 a 5 mg/ml a los 67 dfas en solucion tamponada

Pureza (%) en tiempo (dfas

Muestra

pH Temperatura Tampon Tonic. 0 14 27 49 67

1

2,25 5 L N 96,8 96,4 97,0 95,7 95,7

2

2,25 5 L M 96,8 96,4 95,9 96,0 95,7

3

2,25 5 S N 95,6 95,1 95,1 94,6 93,8

4

2,25 5 S M 95,4 95,1 95,4 94,0 94,0

5

3,5 5 L N 96,9 96,6 96,4 95,8 96,2

6

3,5 5 L M 96,8 96,9 96,9 96,0 94,5

7

3,5 5 S N 95,3 95,7 95,5 95,0 95,0

8

3,5 5 S M 95,4 95,2 95,1 95,1 94,4

9

2,25 25 L N 96,9 96,4 95,2 94,0 92,8

10

2,25 25 L M 96,9 96,6 95,6 93,2 94,9

11

2,25 25 S N 95,3 94,2 93,9 91,7 90,6

12

2,25 25 S M 95,6 94,5 94,1 92,5 92,1

13

3,5 25 L N 96,6 96,3 96,3 94,7 95,2

14

3,5 25 L M 96,5 96,2 95,3 94,8 93,3

15

3,5 25 S N 95,3 95,1 94,8 93,4 93,3

16

3,5 25 S M 95,8 95,3 94,7 93,5 93,6

17

2,25 40 L N 96,7 91,9 87,8 83,5 79,4

18

2,25 40 L M 96,5 93,8 89,5 86,6 83,0

19

2,25 40 S N 95,3 89,9 86,9 80,4 76,3

20

2,25 40 S M 95,4 91,8 89,6 85,3 82,9

21

3,5 40 L N 96,7 94,3 91,7 89,5 86,2

22

3,5 40 L M 96,6 92,2 85,9 79,5 77,3

23

3,5 40 S N 95,3 92,3 89,3 86,8 84,2

24

3,5 40 S M 95,6 91,6 88,5 84,2 80,3

25

2,5 5 S N 95,4 94,9 95,2 94,8 94,4

26

2,5 25 S N 95,2 ND 94,5 93,2 93,2

27

2,5 40 S N 95,3 92,3 90,3 85,0 82,4

28

3,0 5 S N 95,4 95,4 94,9 94,7 94,9

29

3,0 25 S N 95,6 94,9 95,0 93,9 94,2

30

3,0 40 S N 95,3 92,5 90,0 86,9 85,2

La Figura 7 proporciona la estabilidad en solucion de AMG 416 (5 mg/ml) en solucion salina tamponada con succinato en funcion del pH en condiciones refrigeradas (2-8 °C) La Figura 8 proporciona la estabilidad en solucion 5 de AMG 416 (5 mg/ml) en solucion salina tamponada con fosfato en funcion del pH despues de almacenamiento a temperatura ambiente. La Figura 9 proporciona la estabilidad en solucion de AMG 416 (5 mg/ml) en solucion salina tamponada con succinato en funcion del pH despues de almacenamiento a 40 °C.

Se presenta el perfil de producto de degradacion en el ultimo punto temporal en la Tabla 13 y se muestra el curso 10 temporal de la aparicion de los dos productos de degradacion principales (desamidacion C-terminal y formacion de homodfmero) en las Tablas 14 y 15. Las Figuras 10 y 11 presentan el curso temporal de degradacion a estos productos individuales (desamidacion C-terminal y formacion de homodfmero, respectivamente) en funcion del pH para formulaciones seleccionadas (aquellas formulaciones para las que estan disponibles un conjunto completo de condiciones de pH, es decir, aquellas que contienen NaCl y succinato, pero no lactato o manitol).

15

La Figura 10 indica una clara dependencia del pH para la desamidacion, con una degradacion significativamente mayor por esta ruta a pH 2,25 que a un pH mayor, y una correspondencia directa entre el pH y la cantidad de desamidacion. En contraposicion, la formacion de homodfmero presentada en la Figura 11 muestra la relacion opuesta entre pH y extension de degradacion. Estas tendencias opuestas son la base del dato de estabilidad global 20 presentado en las Figuras 7-9 y se observo la estabilidad maxima para las soluciones de AMG 416 en este conjunto de experimentos a un pH de 3,0 ± 0,5.

La correlacion entre estabilidad y composicion de excipiente es menos clara. Independientemente de la seleccion de tampon (succinato frente a lactato), la inspeccion de los datos de las Tablas 12-14 no muestra un claro patron de 25 preferencia por cualquier tampon con respecto a cualquiera de los productos de degradacion principales a pH 2,25 o

3,5. Todas las muestras con tampon succinato mostraban una menor pureza a tiempo 0 que la correspondiente a las muestras tamponadas con lactato, debido a la mayor integracion del pico de homodfmero. La razon para esto no esta clara, pero puede indicar un cambio en la absorbancia para compuesto parental y dfmero en funcion del tampon. Sin embargo, como se senala anteriormente, la incubacion posterior proporciona una tasa esencialmente 5 identica de degradacion en presencia de cualquier tampon. Independientemente de la eleccion del modificador de la tonicidad (NaCl o manitol), el cloruro de sodio parece potenciar la tasa de desamidacion a pH 2,25 (vease la Tabla 13, muestras 9-12 a 25 °C, y especialmente las muestras 17-20 a 40 °C). Sin embargo, el NaCl parece suprimir (en comparacion con el manitol) la degradacion hasta homodfmero a pH 3,5 (Tabla 14, muestras 13-16 a 25 °C y especialmente las muestras 21-24 a 40 °C).

10

Tabla 13

Perfil de producto de degradacion para solucion de AMG 416 (5 mg/ml) despues de 67 dfas

| |

Impurezas princi pales (% del area total)

t= 67 dfas

Acido Dfmero Trisulfuro dimerico Desacetilo Trisulfuro

PH

Temperatura Tampon Tonic. 8,1 min 9,3 min 9,5 7,4 min 8,2 min

2,25

5 L N 0,8 0,4

2,25

5 L M 0,5 0,6

2,25

5 S N 0,8 0,8

2,25

5 S M 1,1 0,1

3,5

5 L N 0,1

3,5

5 L M 1,2 1,6

3,5

5 S N 0,2 0,1

3,5

5 S M 0,7 -0,1

2,25

25 L N 2,5 0,3 0,3 0,9

2,25

25 L M 1,2 0,4 0,3

2,25

25 S N 3,1 0,4 0,4

2,25

25 S M 1,6 0,9

3,5

25 L N 1,4

3,5

25 L M 3,1

3,5

25 S N 0,2 1,8

3,5

25 S M 2,1 0,1

2,25

40 L N 13,9 0,4 0,7 2,9

2,25

40 L M 8,7 1,6 0,6 2,0 0,3

2,25

40 S N 14,2 0,0 0,2 3,1

2,25

40 S M 8,9 2,4 0,6 2,5 0,3

3,5

40 L N 1,4 7,4 1,0 0,7

3,5

40 L M 0,5 17,0 0,5 1,0

3,5

40 S N 1,0 8,1 0,6 0,1 0,6

3,5

40 S M 1,0 11,7 0,7 1,3

2,5

5 S N 0,5 0,5

2,5

25 S N 1,5 0,2 0,4

2,5

40 S N 8,4 1,1 0,4 1,9

3,0

5 S N 0,2 0,4

3,0

25 S N 1,3 0,1

3,0

40 S N 2,4 5,5 0,6 0,6 0,5

Concentracion de tampon 10 mM: L= lactato; S= succinato Modificador de la tonicidad: N= NaCl al 0,9 %, M= manitol al 5 %). El valor de % de dfmero refleja el aumento del producto de degradacion despues de restar el valor de 15 partida.

Tabla 14

Desamidacion en solucion de AMG 416 (5 mg/ml) en puntos temporales hasta 67 dfas

% de producto de degradacion con el tiempo (dfas)

Muestra

pH Temperatura Tampon Tonic. 0 14 27 49 67

1

2,25 5 L N 0,1 0,7 0,8

2

2,25 5 L M 0,9 0,8 0,5

3

2,25 5 S N 0,4 0,8 0,8

4

2,25 5 S M 0,3 1,1

5

3,5 5 L N 0,3 0,4

6

3,5 5 L M 1,2

7

3,5 5 S N 0,2

8

3,5 5 S M 0,7

9

2,25 25 L N 1,3 1,6 2,5

10

2,25 25 L M 1,2 1,2 1,2

11

2,25 25 S N 1,1 1,4 2,0 3,1

12

2,25 25 S M 0,7 1,0 1,3 1,6

13

3,5 25 L N

14

3,5 25 L M

15

3,5 25 S N 0,2

16

3,5 25 S M

17

2,25 40 L N 3,4 6,6 10,2 13,9

18

2,25 40 L M 2,5 4,8 7,0 8,7

19

2,25 40 S N 3,9 6,6 11,0 14,2

20

2,25 40 S M 2,3 4,2 6,4 8,9

21

3,5 40 L N 0,9 0,9 1,4

22

3,5 40 L M 0,5 0,6 0,5

23

3,5 40 S N 1,0 1,0 1,0

24

3,5 40 S M 0,4 0,3 1,0

25

2,5 5 S N 0,5

26

2,5 25 S N 0,7 1,3 1,5

27

2,5 40 S N 2,0 3,3 6,7 8,4

28

3,0 5 S N

29

3,0 25 S N 0,3

30

3,0 40 S N 1,0 2,2 2,4

Concentracion de tampon 10 mM: L= lactato; S= succinato Modificador de la tonicidad: N= NaCI al 0,9 %, M= manitol al 5 %).

5

Se observo la estabilidad maxima para soluciones de AMG 416 en este conjunto de experimentos a un pH de 3,0 ± 0,5. La tasa de degradacion total a pH 2,5 y 3,5 es similar, pero el perfil de producto de degradacion es diferente. La estabilidad a pH 2,25 es inferior debido a las mayores cantidades de desamidacion observadas. Aunque puede observarse cierto efecto del excipiente sobre el perfil de estabilidad, el dato no indica una preferencia global entre los 10 sistemas excipientes estudiados, cuando se formulan a pH 3,0.

Tabla 15

Degradacion de AMG 416 a homodfmero en solucion de 5 mg/ml en los puntos temporales hasta 67 dfas

Dfmero (% de aumento)

Muestra

pH Temperatura Tampon Tonic. 0 14 27 49 67

1

2,25 5 L N 0,0 0,5 -0,1 0,5 0,4

2

2,25 5 L M 0,0 0,4 0,0 0,0 0,6

3

2,25 5 S N 0,0 0,5 0,1 0,1 0,8

4

2,25 5 S M 0,0 0,3 0,0 0,2 0,1

5

3,5 5 L N 0,0 0,2 0,1 0,2 0,1

6

3,5 5 L M 0,0 -0,1 0,0 0,2 1,6

7

3,5 5 S N 0,0 -0,4 -0,2 0,0 0,1

8

3,5 5 S M 0,0 0,2 0,1 -0,1 -0,1

9

2,25 25 L N 0,0 0,5 0,4 0,5 0,3

10

2,25 25 L M 0,0 0,3 0,1 0,5 0,4

11

2,25 25 S N 0,0 -0,1 0,0 0,0 0,4

12

2,25 25 S M 0,0 0,5 0,5 0,2 0,9

13

3,5 25 L N 0,0 0,3 0,3 0,9 1,4

14

3,5 25 L M 0,0 0,4 0,3 1,5 3,1

15

3,5 25 S N 0,0 0,2 0,5 1,1 1,8

16

3,5 25 S M 0,0 0,5 1,0 1,4 2,1

17

2,25 40 L N 0,0 0,6 0,8 0,5 0,4

18

2,25 40 L M 0,0 0,0 0,3 0,6 1,6

19

2,25 40 S N 0,0 0,5 0,4 0,8 0,0

20

2,25 40 S M 0,0 0,6 0,6 1,3 2,4

21

3,5 40 L N 0,0 2,4 3,7 5,5 7,4

22

3,5 40 L M 0,0 4,1 9,5 15,0 17,0

23

3,5 40 S N 0,0 2,8 4,6 6,3 8,1

24

3,5 40 S M 0,0 3,7 6,6 9,0 11,7

25

2,5 5 S N 0,0 0,4 0,2 0,0 0,5

26

2,5 25 S N 0,0 0,1 0,5 0,2

27

2,5 40 S N 0,0 0,6 0,6 1,5 1,1

28

3,0 5 S N 0,0 0,0 0,5 0,2 0,2

29

3,0 25 S N 0,0 0,6 0,6 0,9 1,3

30

3,0 40 S N 0,0 1,6 3,2 4,8 5,5

(concentracion de tampon 10 mM: L= lactato; S= succinato Modificador de la tonicidad: N= NaCI al 0,9 %, M= manitol al 5 %). Observese que la degradacion se expresa con un aumento del contenido de dfmero (no dfmero total) ya que el API usado para el experimento contenfa una cantidad apreciable de dfmero.

5

Se observo la estabilidad maxima de las soluciones de AMG 416 en este conjunto de experimentos a un pH de 3,0 ± 0,5. El analisis de las soluciones formuladas a pH 2,5 o 3,5 muestra perfiles de degradacion diferentes, siendo la hidrolisis de amida C-terminal el producto de degradacion mayor a pH bajo, mientras que la formacion de homodfmero era mayor a mayor pH. Las formulaciones lfquidas a pH 3,0 tienen una degradacion total predicha de 210 4 % durante 2 anos en condiciones refrigeradas.

EJEMPLO 7

15

20

Estudio de robustez

En este estudio, se investigo la estabilidad de una formulacion lfquida de AMG 416 en una variedad de condiciones de fabricacion y analfticas. Se prepararon 14 grupos de ensayo de formulacion, teniendo cada uno una combinacion diferente de pH (2,7, 3,3 o 3,9), concentracion de peptido (4, 5 o 6 mg/ml) y concentracion salina (0,7, 0,85 o 1,0 %). Se mantuvo igual la osmolalidad de cada formulacion (succinato 10 mM). Vease la Tabla 16.

Tabla 16

Grupos de ensayo de formulacion

Muestra

pH Succinato (mM) Peptido (mg/ml) NaCI (%)

1

3,3 10 5 0,85

2

3,9 10 4 1,0

3

2,7 10 4 0,85

4

3,9 10 6 0,7

5

3,3 10 4 0,7

6

3,9 10 6 1,0

7

3,3 10 5 1,0

8

3,3 10 5 0,85

9

3,9 10 5 0,85

10

3,3 10 6 0,85

11

2,7 10 6 0,85

12

2,7 10 5 1,0

13

2,7 10 5 0,7

| 14 | 3,9 | 10 | 4 | 0,7 |

Se dispensaron muestras (2,1 ml) de cada uno de los grupos de ensayo de formulacion en viales de vidrio de tipo 1B de 3 ml (Schott, Alemania) y se sellaron (tapon de caucho). Se almacenaron conjuntos de viales verticales durante 3 meses a temperatures de 4 °C, 25 °C o 40 °C. Se valoraron los cambios de pH, osmolalidad, AMG 416 porcentual y 5 productos de degradacion durante 3 meses.

Se estimo la superficie de respuesta dependiente del tiempo por los tres factores (pH, % de peptido y % de NaCl) ajustando un modelo estadfstico que describe cada superficie de los datos para cada respuesta de HPLC y a cada temperatura (JMP® statistical discovery software, SAS). Se uso la simulacion de Monte Carlo para generar las 10 distribuciones de las respuestas de HPLC predichas en el punto fijado (pH= 3,3, peptido= 5 % y NaCl= 8,5 %) en funcion de la variacion aleatoria de factores alrededor del punto establecido y el ruido aleatorio.

No se senalo un cambio significativo del pH y la osmolalidad con el tiempo. A 4 °C y 25 °C, la pureza permanecfa en 92 % o mayor, la desamidacion era de 4 % o menor y la formacion de homodfmero era de 4 % o menor durante toda 15 la duracion del estudio. A 40 °C, se vieron pureza, desamidacion y formacion de homodfmero empezando al cabo de 1 mes. Sin embargo, la desamidacion y formacion de homodfmero disminuyeron a medida que el intervalo de pH se estrechaba alrededor de 3,3, indicando que el pH tiene un impacto significativo sobre la formacion de estos productos de degradacion.

20 Basandose en este dato, es posible proporcionar una prediccion del perfil de pureza en un intervalo de pH de 2,8 a 3,8. Como se muestra en la Figura 12, la pureza a cada temperatura depende en gran medida del pH, y es menos dependiente de la concentracion de peptido y NaCl en el intervalo ensayado. En condiciones refrigeradas, el efecto del pH es menos significativo a valores por encima de pH 3,3, pero a temperatura ambiente (aproximadamente 25 °C), los valores de pH mayores estan asociados a una degradacion mas rapida. Las formulaciones para uso 25 terapeutico pueden someterse a almacenamiento a largo plazo en condiciones refrigeradas. Ademas, deberfa tenerse en consideracion tambien la exposicion potencial a temperaturas mayores durante la fabricacion, envasado, etiquetado y uso clfnico. Por tanto, en este conjunto de experimentos, se observo que un valor de pH en el intervalo ensayado de 2,8 a 3,8 (3,3 ± 0,5) serfa adecuado para formulaciones de AMG 416.

30 EJEMPLO 8

Estabilidad a largo plazo de formulaciones ifquidas de AMG 416 en el intervalo de pH

En este estudio, se determino la estabilidad a largo plazo de una formulacion lfquida de AMG 416 a una 35 concentracion de 3,4 mg/ml en un intervalo de pH en solucion salina tamponada con succinato. Se dispenso agua purificada USP (1200 ml) en un vaso de precipitados de vidrio. Se anadieron succinato de sodio (4,05 g) y cloruro de sodio (13,5 g) y se agitaron para disolver. Se ajusto el pH a 2,5 con NaOH 1 N y/o HCl 1 N como se requiera. Se anadio HCl de AMG 416 (5,5 g de peso de polvo), se agito para disolver y c.s. hasta 1500 ml con agua purificada, proporcionando una solucion de 3,4 mg/ml (AMG 416). Se dividio la solucion en tres porciones y se ajusto el pH para 40 cada porcion a 2,5, 3,0 y 3,5, respectivamente. Se filtro cada solucion separadamente a traves de un filtro de PVDF de 0,22 micrometres y se dispensaron 2 ml en viales de 5 cc. Despues de tapar, sellar y etiquetar, se colocaron los viales en camaras de estabilidad designadas a 5 ± 3 °C, 25 ± 2 °C y 40 ± 2 °C. Se recuperaron las muestras de acuerdo con el programa y se diluyeron con agua desionizada hasta 1,0 mg/ml para analisis de HPLC. Se proporciona la pureza a 0, 1, 2, 3, 5, 12 y 24 meses en la Tabla 17 (nota: el valor de pureza de partida era de 99,2 % 45 para este estudio). Los resultados proporcionan un perfil de estabilidad a largo plazo de una formulacion lfquida de 3,4 mg/ml de AMG 416 en funcion de pH y temperatura.

Tabla 17

Pureza en el punto temporal de hasta 24 meses para soluciones de AMG 416.

Pureza (%) con el tiempo (meses) Degradacion a los 2 anos

PH

Temp (°C) 0 1 2 3 5 12 24

2,5

5 99,2 99,0 98,8 98,8 98,1 96,8 94,8 4,4

25

99,2 96,9 95,2 93,4 89,3 80,9 68,5 30,7

40

99,2 88,8 81,9 75,3 60,9 39,1 20,4 78,8

3

5 99,2 99,1 99,1 99,2 98,7 98,3 97,7 1,5

25

99,2 98,2 97,5 96,7 95,0 91,1 84,6 14,6

40

99,2 93,7 90,2 86,4 78,9 61,6 39,2 60,0

3,5

5 99,2 99,2 99,2 99,2 98,8 98,6 98,3 0,9

25

99,2 98,6 98,1 97,6 96,2 93,4 89,2 10,0

40

99,2 94,6 91,5 88,7 83,1 67,5 46,1 53,1

Se muestra el curso temporal de la pureza de la formulacion liquida de AMG 416 a cada nivel de pH en la Figura 13. A todas las temperaturas, se observo la maxima pureza a pH 3,5, mientras que se observo la maxima degradacion a pH 2,5. Ademas, a todas las temperaturas, la pureza a pH 3,0 y 3,5 era significativamente mayor que la pureza a pH 5 2,5. Por tanto, por ejemplo para las muestras refrigeradas, la pureza a los 24 meses era de 98,3 y 97,7 para las soluciones a pH 3,5 y 3,0, respectivamente, pero solo de 94,8 para la solucion a pH 2,5. Ademas, se vio que la disminucion de pureza estaba relacionada con la temperatura a todos los niveles de pH, observandose la minima degradacion en las muestras incubadas a 2-8 °C y observandose la maxima degradacion en las muestras incubadas a 40 °C. El producto de degradacion principal observado a pH 2,5 era el producto desamidado y a pH 3,5 se 10 observaba el homodimero.

Estos datos confirman que las formulaciones descritas son capaces de mantener una estabilidad adecuada de AMG 416 durante al menos una vida util de 2 anos en condiciones refrigeradas. La degradacion observada es lineal en todos los casos y apoya las conclusiones basadas en la extrapolacion de datos de experimentos anteriores. A partir 15 de estos datos, el pH optimo se encuentra entre 3,0 y 3,5, basandose en el equilibrio entre diferentes rutas de degradacion.

Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en esta memoria descriptiva se incorporan a la presente memoria como referencia como si se indicara especifica e individualmente que cada publicacion o solicitud 20 de patente individual se incorpora como referencia. Aunque la invencion anterior se ha descrito con cierto detalle a modo de ilustracion y ejemplo con fines de claridad de comprension, resultara facilmente evidente para los especialistas en la materia a la vista de las ensenanzas de esta invencion que pueden hacerse ciertos cambios y modificaciones de la misma sin apartarse del espiritu o alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una formulacion farmaceutica que comprende AMG 416 en solucion acuosa, donde la formulacion tiene un pH de 2,0 a 5,0.

   5
2. 
   2. La formulacion de la reivindicacion 1, donde la formulacion tiene un pH de 2,5 a 4,5.
3. 
   3. La formulacion de la reivindicacion 1, donde la formulacion tiene un pH de 2,5 a 4,0.

   
   10 4. La formulacion de la reivindicacion 1, donde la formulacion tiene un pH de 3,0 a 3,5.
4. 5. La formulacion de la reivindicacion 1, donde el pH se mantiene por un tampon farmaceuticamente

   aceptable.

   15 6. La formulacion de la reivindicacion 5, donde el tampon es succinato.
5. 7. La formulacion de la reivindicacion 1, donde esta presente AMG 416 en la formulacion a una

   concentracion de 0,1 mg/ml a 20 mg/ml.

   20 8. La formulacion de la reivindicacion 1, donde esta presente AMG 416 en la formulacion a una

   concentracion de 1 mg/ml a 15 mg/ml.
6. 9. La formulacion de la reivindicacion 1, donde esta presente AMG 416 en la formulacion a una concentracion de 2,5 mg/ml a 10 mg/ml.

   25
7. 10. La formulacion de la reivindicacion 1, que comprende ademas un modificador de la tonicidad farmaceuticamente aceptable.
8. 11. La formulacion de la reivindicacion 10, donde esta presente el modificador de la tonicidad en la 30 formulacion a una concentracion suficiente para que la formulacion sea aproximadamente isotonica.
9. 12. La formulacion de la reivindicacion 10, donde el tonificador es NaCl.
10. 13. La formulacion de la reivindicacion 1, donde la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion 35 cuando se almacena a 2-8 °C durante 2 anos.
11. 14. La formulacion de la reivindicacion 1, donde la formulacion tiene menos de un 10 % de degradacion

    cuando se almacena a temperatura ambiente durante 2 anos.

    40 15. Una formulacion que comprende de 2 mg/ml a 20 mg/ml de AMG 416 en solucion acuosa, un tampon

    succinato que mantiene la formulacion a un pH de aproximadamente 3,0 a 3,5 y una concentracion suficiente de cloruro de sodio para que la formulacion sea aproximadamente isotonica.