JPH0565231A - エリスロポエチンの持続性製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】持続性のエリスロポエチン含有医薬用組成物を
提供する。 【構成】エリスロポエチンおよびヒアルロン酸もしくは
その非毒性塩を含有する組成物。 【効果】エリスロポエチン体液中濃度が薬理効果発現濃
度範囲内に持続的にコントロールされる製剤であるた
め、週１回程度の投与でヘマトクリット値を維持するこ
とができる。また、粘度が低いため細い注射針でも投与
可能であるため患者に与える苦痛が小さいものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、エリスロポエチンの持
続性製剤として有用な医薬用組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】エリスロポエチンは骨髄中の赤芽球系前
駆細胞に作用して、赤血球への分化と増殖を促す作用を
有することが知られているが、従来は人尿から抽出、精
製するなどの方法によってしか入手することができず、
臨床への本格的な適応には障害が大きかった。近年、遺
伝子組換え技術の急速な発達により、ヒト由来の天然エ
リスロポエチンと基本的に差異の無いエリスロポエチン
が量産できるようになり、エリスロポエチンの産生低下
が主因と考えられる腎性貧血患者の貧血症状の改善に極
めて顕著な効果をあげつつあり、更にその臨床適応範囲
の拡大が期待されている。現在、臨床では静脈内にエリ
スロポエチンを投与する方法がとられている。投与後の
排泄は比較的速いために週に２〜３回の投与が要求され
る。又、ヘモグロビン濃度、及びヘマトクリット値は徐
々に上昇することが望ましく、急激な上昇は高血圧など
の副作用が懸念されるため、静脈内投与のように投与直
後に高い血液中濃度が得られる場合には副作用が心配さ
れる。そこでこれまで、このような生理活性ペプチドの
投与法に関する問題点を解決するためにいくつかの発明
がなされてきた。

【０００３】ペプチド性医薬品の持続性製剤の目的はペ
プチドの体液中濃度を持続的に一定有効濃度以上に保つ
ことであるが、その薬理効果の発現機序により、ａ) 薬
理効果が体液中有効濃度にあまり依存せず、かつ過剰な
薬理効果が生体にとって問題とならないものと、ｂ) 体
液中有効濃度に依存して薬理効果が現れ、かつ急激な薬
理効果の発現や過剰な薬理効果の発現が生体にとって有
害であるために定期的に薬用量の調整を必要とするもの
がある。エリスロポエチンはその顕著な薬理効果のため
に必要以上の増血による血圧の上昇を防ぐ必要があるの
で頻繁（例えば、一週間に１回程度）に薬理効果の判定
と薬用量の調節が要求される、ｂ) タイプのペプチド性
医薬品である。一方でエリスロポエチンは、その活性が
３次構造に依存するので、その製剤の製造過程におい
て、ペプチドの立体構造に影響を与える可能性があるよ
うな製剤処方は避ける必要がある。このためエリスロポ
エチンの活性を維持し、なおかつ薬理効果の判定の頻度
（例えば、１週間に１度程度）にあわせた持続性製剤の
開発が成功すれば、現在の週３回程度の投与回数が減
り、それによる患者のメリットは大きいものと思われ
る。このメリットは腎性貧血の患者だけではなく、外科
手術などにおいて自己血輸血を行なう場合に投与回数と
投与量を減らすことが可能になるメリットも大きい。
又、投与直後の急激な薬物濃度上昇もなるべく抑制する
ことにより、薬理効果の急激な発現による過剰反応を抑
制することが可能になる。

【０００４】一方、ヒアルロン酸は、天然に存在する酸
性ムコ多糖の一つであり、関節機能改善剤あるいは眼科
手術補助剤として医療用医薬品としても利用されてい
る。ヒアルロン酸の水溶液は高い粘ちょう性を有し、他
物質を混合した時に一般的に拡散速度を遅延させること
が知られている。特開昭６２−１２９２２６号公報に
は、ヒアルロン酸，そのナトリウム塩，ハイランを含む
ヒアルロナンの溶液から主にその溶液の粘性により、溶
解あるいは分散された薬理活性物質が持続的に放出され
ることが開示されている。さらに、カチオン基を含む薬
剤ではカルボキシル基を有するヒアルロナンとこの薬剤
との間でイオン交換が起こり得、この交換が、システム
からの薬剤の拡散を一層遅くする。たとえば、トリチウ
ムでラベルされたセロトニンをヒアルロン酸の０.１％
水溶液に溶解、混合し、透析チューブ（分子量１０,０
００以下の物質を通過させる。）に入れ、蒸留水に対し
て透析させたところ、透析チューブからのトリチウムラ
ベルされたセロトニンの放出速度はヒアルロン酸が存在
することによりヒアルロン酸非存在化の対照に比べてほ
ぼ１／１０に減少していたことが記載されている。

【０００５】特開平１−２８７０４１号公報にはこの性
質を利用して、ヒアルロン酸もしくはその製剤上許容し
うる塩を含む徐放性製剤の技術が開示されているが、生
理活性ペプチドとしてはインスリン、結晶性インスリン
亜鉛、非晶性インスリン亜鉛、グルカゴンが特に本技術
に特に適したものとして例示されている。しかし、その
例をみると、ヒアルロン酸濃度が１％になるようにヒア
ルロン酸（分子量１４０万、極限粘度）を中性ブタイン
スリン注射剤に添加したものを、正常雄性家兎に皮下投
与することにより、インスリン単独投与群に比較して明
らかな血糖値低下の持続が見られ、少なくとも投与後１
２時間目まではその血糖値低下がみられるものの、２４
時間目にはその効果が見られなくなっている。グルカゴ
ンについても同様な例が示されているが、血糖値上昇は
投与後８時間目までしか見られない。特開平２−２１３
号公報には同様にヒアルロン酸及びその非毒性塩を含有
する生理活性ペプチドの持続性製剤の技術が開示されて
いる。その例をみると、ヒアルロン酸ナトリウムの濃度
を５％としたカルシトニン、又はエルカトニン持続性製
剤を雄性ラットに皮下投与したものでは、投与後の血液
中カルシウム濃度の低下が最低１２時間持続しており、
又、同様にヒアルロン酸ナトリウム濃度５％としたヒト
成長ホルモン持続性製剤を雄性ラットに投与したもので
は、投与後の血液中ヒト成長ホルモン濃度は最低１２時
間持続していたことが示されている。これらはいずれ
も、比較例のヒアルロン酸ナトリウムが存在しない場合
に比べて明らかな持続時間の延長が見られた。しかしな
がら、上記のいずれの公知技術においてもエリスロポエ
チンとヒアルロン酸との組合せについての記載はなく、
又その併用を示唆する記載もない。

【０００６】ところで、これらの技術においては投与さ
れた部位でのヒアルロン酸溶液中での物質の拡散遅延を
利用しており、特開平２−２１３号公報においてヒアル
ロン酸自体の濃度が３〜７％が最も好ましいとされてい
るが、その高粘度のために気泡が混入した場合にその除
去が必要であり、遠心分離又は減圧による脱気が必要に
なってくる。又、その高粘度のために太い注射針を使用
する必要があり、患者に与える苦痛は無視できないもの
がある。特開平１−２８７０４１号公報においては、１
％濃度のヒアルロン酸を用いた例が示されているが、こ
の濃度のヒアルロン酸ナトリウム関節内注射液では１８
〜２０Ｇ程度の太めの注射針の使用が推奨されており、
皮下投与用注射剤として患者に与える苦痛が大きい。さ
らに、特開平３−４７９０号公報には、蛋白質分解酵素
の水溶液に蛋白質様物質および多糖類を添加することを
特徴とする蛋白質分解酵素の安定化法の技術が開示され
ており、保存中特に高温での保存中の酵素を安定化し、
酵素活性の減少を阻止しうることが開示されている。そ
の例をみると、ヒアルロン酸と牛血清アルブミンあるい
はゼラチンを組み合わせてエスペラーゼ（ノボ社製）に
添加した溶液の保存中での酵素活性の減少がヒアルロン
酸単独あるいは蛋白質単独を用いた対照に比較して少な
かったことが示されている。しかしながら、この技術は
医療用医薬品、特にエリスロポエチンが生体に投与され
た後に持続的に放出されたり、薬理効果が持続されたり
することについてはなんら示唆、言及するものではな
い。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】エリスロポエチンの持
続性製剤の製造において、本発明の課題は持続時間を延
長させ、約１週間に１回程度の投与頻度でよく、しかも
投与時の患者の苦痛軽減の可能なものを得ることにあ
る。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の問題
点、課題を解決するために鋭意研究を行なった結果、生
体内で分解することが知られており薬理学的に注射可能
な高分子物質であるヒアルロン酸を、エリスロポエチン
と組合せ、その際、従来用いられている濃度よりも低い
濃度のヒアルロン酸を用いてエリスロポエチンと混合
し、得られる医薬用組成物を注射剤として投与すること
によりエリスロポエチンの薬理活性を損なわず、投与初
期の薬理効果の急激な発現を抑えながら薬理効果を持続
させることが可能になり、又患者の苦痛を軽減できる２
６Ｇ等の細い注射針により容易に投与できることを見出
し本発明を完成するに到った。即ち、本発明は、(１)、
ヒアルロン酸もしくはその非毒性塩とエリスロポエチン
とを含有する医薬用組成物，および(２)、実質的に薬理
活性を示さず体液内に注入しうる水溶性蛋白をさらに含
有する上記(１)項記載の医薬用組成物である。

【０００９】本発明におけるエリスロポエチンは天然物
由来あるいは遺伝子組換えの糖蛋白質性の造血因子であ
るエリスロポエチン、又は糖鎖構造の異なる造血活性を
持つエリスロポエチン、又は糖鎖を含まないエリスロポ
エチン、又はこれらのアミノ酸配列が一部異なるミュー
ティン、又はこれらの誘導体もしくは類縁体またはこれ
らのフラグメントであってエリスロポエチンと同様の活
性を有するものが挙げられる。該天然物由来のエリスロ
ポエチンとしては、ミヤケ ら J. Biol. Chem. 252，55
58−5564（1977）や Recny ら J. Biol. Chem. 262 ，1
7156−17161（1987）に記載されたものが挙げられる。
遺伝子組換えのエリスロポエチンとしては、Jacobs ら
Nature, 313，806−810（1985），Lin ら Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 82, 7580−7585（1985）, Recny ら
J. Biol. Chem. 262, 17156-17161（1987）に記載され
たものが挙げられる。糖鎖の異なったエリスロポエチン
としては、タケウチ ら Proc. Natl. Acad. Sci. USA,8
6, 7819−7822（1989）が挙げられる。糖鎖がほとんど
ないエリスロポエチンとしては、Dordal ら Endocrinol
ogy,116, 2293−2299（1985）が挙げられる。構成アミ
ノ酸がアミジン化やグアニジン化されたエリスロポエチ
ンがサタケ ら Biochem. Biophys. Acta p, 1038, 125
−129（1990）に記載されている。また、例えばミヤタ
ら Agri. Biol．Chem.,52, 1575−1581（1988）の方法
を用いて、エリスロポエチンをポリエチレングリコール
で修飾してもよい。

【００１０】本明細書におけるヒアルロン酸はＮ−アセ
チルグルコサミンとグルクロン酸とからなるムコ多糖の
一種でありこれらの非毒性塩でも良い。非毒性の塩とし
てはナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネ
シウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属塩等の非毒
性金属塩が挙げられる。本製剤で最も好ましい金属塩と
してナトリウムが用いられる。ヒアルロン酸及びその非
毒性塩としては分子量約２０万〜５００万（粘度法）、
好ましくは約５０万〜３００万、さらに好ましくは約７
０万〜２５０万のものである。

【００１１】本発明の持続性製剤はエリスロポエチンと
ヒアルロン酸又はその非毒性塩とを含むが、好ましくは
両者が単位投与物中に存在するようにする。例えば、ア
ンプル又はバイアル中に滅菌水又は滅菌生理食塩水に溶
解又は懸濁して両者が存在するようにする。この場合、
エリスロポエチンの溶液とヒアルロン酸又はその非毒性
塩の溶液を混合して調製しても、またエリスロポエチン
の溶液にヒアルロン酸又はその非毒性塩の粉末を加えて
調製しても、又その逆でも良い。本発明の持続性製剤に
おいてエリスロポエチン、ヒアルロン酸またはその非毒
性塩などの主要成分が混合される時には、エリスロポエ
チンの活性が保持されかつ混合操作中の溶液に気泡がほ
とんど発生しないことが望ましい。該各主要成分は同時
にあるいは適当な順番で容器（例えば瓶あるいはドラム
など。材質はエリスロポエチンの活性を損なわないもの
が選ばれる。）に入れられる。各主要成分の体積の総和
は好ましくは、該容器の容積の多くて４分の３、より好
ましくは多くて５分の３、さらに好ましくは多くて２分
の１、最も好ましくは多くて３分の１である。該容器は
緩和な条件でしんとうされるか、あるいは好ましくは該
容器の長軸を中心として回転混合される。該容器の回転
数は、例えば該容器の容積、各主要成分の体積の総和、
ヒアルロン酸あるいはその非毒性塩の濃度、該容器の雰
囲気の温度などを考慮して決定される。容器の長軸を中
心として回転される場合の好ましい回転数は１０〜１０
００回転／１分間であるが、これに限定されるわけでは
ない。該容器内の雰囲気は滅菌された清浄な空気あるい
は滅菌された清浄な窒素ガスでもよい。該操作により得
られたエリスロポエチンとヒアルロン酸またはその非毒
性塩を含む溶液は小容量のバイアル瓶またはアンプルな
どに移されてさらに凍結乾燥の操作を受けてもよい。本
発明の持続性製剤は、エリスロポエチンとヒアルロン酸
又はその非毒性塩が混在する該凍結乾燥粉末に滅菌水又
は滅菌生理食塩水を加えて調製しても良い。この単位投
与物には従来用いられている添加物例えば pＨ調節剤、
局所麻酔剤、溶解補助剤、等張化剤、吸着防止剤などを
含んでも良い。その好ましい例としては、マンニトー
ル、ソルビトール、食塩、グリシン、酢酸アンモニウ
ム、あるいは実質的に薬理活性を示さず体液内に注入し
うる水溶性蛋白（以下〔水溶性蛋白〕と略称することも
ある。）などが挙げられる。本発明における水溶性蛋白
の薬理活性とは赤血球増殖を引き起こす増血活性と定義
される。

【００１２】上記水溶性蛋白の例としては、水，生理食
塩水または緩衝液に溶解するものが挙げられ、その具体
例としてはたとえばヒト血清アルブミン，ヒト血清グロ
ブリン，コラーゲン，ゼラチンなどが挙げられる。上記
pＨ調整剤としては、たとえばグリシン，酢酸アンモニ
ア，クエン酸，塩酸，水酸化ナトリウムなどが挙げられ
る。上記局所麻酔剤としては、たとえばクロロブタノー
ル，塩酸キシロカインなどが挙げられる。上記溶解補助
剤としては、たとえばグリセロール，ポリエチレングリ
コール４００などが挙げられる。上記等張化剤として
は、たとえばマンニトール，ソルビトール，塩化ナトリ
ウムなどが挙げられる。上記吸着防止剤としては、たと
えばポリオキシエチレン・ソルビタン・モノオレエート
（Tween ８０）などが挙げられる。

【００１３】本発明の医薬用組成物におけるヒアルロン
酸又はヒアルロン酸ナトリウムの最終濃度は１％（ｗ／
ｖ）未満が粘度として適当であり各種操作、投与の容易
さの点で好ましい。更に好ましくは約０.０２〜１％
（ｗ／ｖ）未満、さらに好ましくは約０.１〜１％(ｗ／
ｖ)であり、最も好ましくは約０.１〜０.８％（ｗ／
ｖ）である。本発明の医薬用組成物に含まれるエリスロ
ポエチンの配合割合は薬用量に応じて変化するものであ
り一概には規定できない。本発明のエリスロポエチン持
続性製剤の成人における薬用量は貧血の重篤度に応じて
変化するが、好ましくは１回投与あたり約１００国際単
位〜６００００国際単位であり、より好ましくは約１０
００国際単位〜１００００国際単位であり、さらに好ま
しくは約１０００国際単位〜６０００国際単位である。
皮下には一般に多量の薬液の注入が可能であるが、確実
に注入できる最小量と患者に苦痛を与えない範囲での最
大量でエリスロポエチンとヒアルロン酸の重量比が決定
される。エリスロポエチンの比活性にも依存するが、エ
リスロポエチンとヒアルロン酸またはその非毒性塩の重
量比は約０.０００１：１〜１０：１、好ましくは約０.
００２：１〜５：１、より好ましくは約０.０００２：
１〜１：１、さらに好ましくは約０.０００２：１〜０.
１：１である。

【００１４】本発明の組成物において、さらに水溶性蛋
白を含有する場合の該水溶性蛋白の含有量としては、１
回投与の製剤あたり、好ましくは０.０５mg〜５０mg，
さらに０.５mg〜２０mgが好ましく、０.７５mg〜１０mg
が最も好ましい範囲として例示される。水溶性蛋白とヒ
アルロン酸またはその非毒性塩との重量比は、約０.０
０１：１〜１００：１、さらに好ましくは約０．０１：
１〜１０：１、最も好ましくは約０.１：１〜１０：１
である。

【００１５】本医薬組成物溶液の pＨは注射剤として許
容される範囲内で、エリスロポエチンの活性に影響を与
えず、また溶液の粘度を大幅に変化させたり、沈殿物な
どを形成させない pＨが用いられる。好ましくはpＨ約
４〜８、さらに好ましくはpＨ約５〜８、最も好ましく
はpＨ約６〜８である。本発明の組成物は、水溶液にし
たとき、その粘度が約５００センチポイズ(cp)以下とな
るように調整するのが好ましく、約５０〜４００cpの範
囲に調整するのがさらに好ましい。該粘度は、ヒアルロ
ン酸の分子量および濃度、水溶性蛋白の濃度、エリスロ
ポエチンの濃度、および等張化剤の濃度などによって影
響されるので、目的とする水溶性組成物に応じて、上記
の粘度となるような条件を選択すればよい。本明細書に
おける粘度はＥ型粘度計（東京計器製）を用い、コーン
ＬＤを使用して温度２５℃で測定した粘度をいう。

【００１６】本発明の医薬用組成物は好ましくは、エリ
スロポエチンとヒアルロン酸あるいはそれの非毒性塩が
滅菌蒸留水あるいは滅菌生理食塩水に溶解あるいは分散
された液剤として供給される。該液剤は水溶性蛋白のよ
うな添加物を含み得る。該液剤は通常の冷蔵温度、好ま
しくは約２℃〜約８℃の温度範囲で保存される。さら
に、本発明の医薬組成物はエリスロポエチンとヒアルロ
ン酸またはその非毒性塩の溶液あるいは分散された液剤
を凍結乾燥することにより得られる凍結乾燥製剤として
供給されるのが好ましい。該凍結乾燥製剤はまた、凍結
乾燥において通常用いられるマンニトールなどの賦形剤
および水溶性蛋白のような添加物も含み得る。該凍結乾
燥製剤は通常約−２０℃〜約４０℃、好ましくは約−５
℃〜約３０℃、そしてさらに好ましくは約２℃〜約３０
℃の温度範囲で保存される。該凍結乾燥製剤は薬剤学的
に許容しうる注射用溶剤、例えば注射用蒸留水、注射用
生理食塩水に懸濁あるいは溶解して使用する。本持続製
剤の投与方法としては、非経口的投与法、即ち注射によ
る投与が行われ、特に皮下注射による投与が行なわれ
る。しかしながら、用途によっては他の注射ルート、例
えば筋肉内投与、更には血管内投与も行われる。本持続
性製剤の粘度は比較的低く、２５Ｇあるいは２６Ｇの注
射針を用いてアンプルあるいはバイアルから注射器内に
本持続性製剤を吸引することが可能である。吸引時に生
じる気泡は短時間静置することにより、容易に除去可能
である。

【００１７】本発明の組成物を溶液として、あるいは凍
結乾燥品を薬剤学的に許容される注射用溶剤で溶解、希
釈し温血動物に投与すると、主薬であるエリスロポエチ
ンの作用は２４時間以上に亘り持続する。本持続性製剤
は溶液状態での投与が可能であるため薬用量の調節が容
易であり、又持続時間が約１日から１週間程度であるた
め薬理効果の判定を行いながら投与することもできる。
さらに、本発明のエリスロポエチン持続性製剤は適度に
粘性を持つ液剤であるため振動などの物理的な撹乱に対
して抵抗性が出ることにより、針付き注射筒に予め本発
明のエリスロポエチン持続性製剤を充填してあるプレフ
ィルドシリンジ（Prefilled Syringe）で患者に処方さ
れ、患者による自己投与が可能になる。

【００１８】

【実施例】以下に本発明の実施例を示す。 実施例１ (１) (a)エリスロポエチン（エポエチンベータ）３００
０国際単位、マンニトール２５mg、ヒト血清アルブミン
１mgを含むエポジン注３０００（中外製薬）に生理食塩
水２mlを加えて溶解しエリスロポエチン注射液とした。 (b) 上記で製造したエリスロポエチン注射液１.８ml
（エリスロポエチン２７００国際単位を含む）にヒアル
ロン酸ナトリウム（平均分子量１４７万ダルトン）の２
％（ｗ／ｖ）の生理食塩水溶液０.６mlを加えてエリス
ロポエチン持続性製剤を作製した（ヒアルロン酸の最終
濃度：０.５％（ｗ／ｖ））。 (２) (a)エリスロポエチン（エポエチンベータ）３００
０国際単位、マンニトール２５mg、ヒト血清アルブミン
１mgを含むエポジン注３０００（中外製薬）に注射用蒸
留水２mlを加えて溶解しエリスロポエチン注射液とし
た。 (b) ここで製造したエリスロポエチン注射液１.８ml
（エリスロポエチン２７００国際単位を含む）にヒアル
ロン酸ナトリウム（平均分子量１４７万ダルトン）の２
％（ｗ／ｖ）水溶液０．６mlを加えてエリスロポエチン
持続性製剤を作製した（ヒアルロン酸の最終濃度：０.
５％（ｗ／ｖ））。

【００１９】実施例２ ヒトエリスロポエチン（エポエチンベータ）３０００国
際単位、マンニトール２５ミリグラム、ヒト血清アルブ
ミン１ミリグラムを含むヒトエリスロポエチン製剤（エ
ポジン注３０００：中外製薬製）７バイアルに１バイア
ルあたり１ミリリットルの２５mＭ トリス酢酸バッフ
ァー（pＨ ７.０）を加えて溶解する。この溶液７ミリ
リットルをウルトロクロムＧＴｉ ＨＰＬＣシステム
（ファルマシア社）に接続した弱アニオン交換カラム
（Ｍab カラム：ジェーティーベーカー社）にスーパー
ループ（ファルマシア社）を用いて導入し２５mＭ ト
リス酢酸バッファー（pＨ ７.０）から２Ｍ 酢酸ナト
リウムバッファー（pＨ ６.０）への直線グラディエン
トで溶出させた（流速は０.８ミリリットル／分。２８
０nmの波長で検出）。溶出液はスーパーラック（ファル
マシア社）を用いて１.６ミリリットルづつ採取した。
〔図３〕にクロマトグラムを示す。試験管番号８から１
１を１本の試験管にまとめた後、ヒトエリスロポエチン
の含量をＥＬＩＳＡ法（ＥＰＯ−ＥＬＩＳＡ：ベーリン
ガーマンハイム社）で決定した。また、〔図３〕から明
らかなように、血清アルブミン由来のピークはエリスロ
ポエチン分画の両脇の太い２本のピークであり、エリス
ロポエチンとほぼ完全に分離されていることがわかる。
このようにして得られたヒトエリスロポエチン溶液０.
７ミリリットル（２６.９マイクログラム含有）にヒト
血清アルブミンを２０％（ｗ／ｖ）含有するアルブミン
ニチヤク（日本製薬）を４マイクロリットル添加しさら
に注射用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）を
加え全量を２.１ミリリットルにした。また、この溶液
にヒアルロン酸ナトリウム塩（平均分子量１４７万ダル
トン：ジェンザイム社）１０.５ミリグラムを加えた。
粘度 ２９７cp.

【００２０】実施例３ 実施例２で得られたヒトエリスロポエチン（エポエチン
ベータ）溶液０.７ミリリットル（２６.９マイクログラ
ム含有）をガラス製バイアル瓶（容量約５ミリリット
ル）に入れ、注射用生理食塩水０.７ミリリットル(扶桑
薬品）を加えた。さらにヒアルロン酸ナトリウム（平均
分子量１４７万ダルトン：ジェンザイム社）を１.５％
（ｗ／ｖ）になるように注射用生理食塩水（扶桑薬品）
に溶解した溶液０.７ミリリットルをこれに加えた。こ
れらの溶液が入ったガラス製バイアル瓶（容量約５ミリ
リットル）を密閉し、スリーワンモーター（ヘイドン社
製）にとりつけた容量２００ミリリットルのナス型フラ
スコ内で長軸を中心として約１時間回転混合（２０〜１
００回転／分）させることにより気泡の混入がほとんど
無い持続性製剤の投与液を作製した。

【００２１】実施例４ 実施例２で得られたヒトエリスロポエチン（エポエチン
ベータ）溶液０.７ミリリットル（２６.９マイクログラ
ム含有）をガラス製バイアル瓶（容量約５ミリリット
ル）に入れ、ヒト血清アルブミンを２０％（ｗ／ｖ）含
有するアルブミンニチヤク（日本製薬）を４マイクロリ
ットルと注射用生理食塩水０.７ミリリットル(扶桑薬
品）を加えた。さらに、ヒアルロン酸ナトリウム（平均
分子量１４７万ダルトン：ジェンザイム社）を１.５％
（ｗ／ｖ）になるように注射用生理食塩水（扶桑薬品）
に溶解した溶液０.７ミリリットルを加えた。これらの
溶液が入ったガラス製バイアル瓶（容量約５ミリリット
ル）を密閉し、スリーワンモーター（ヘイドン社製）に
とりつけた容量２００ミリリットルのナス型フラスコ内
で長軸を中心として約１時間回転混合（２０〜１００回
転／分）させることにより気泡の混入がほとんど無い持
続性製剤の投与液を作製した。

【００２２】実施例５ エリスロポエチン（エポエチンベータ）３０００国際単
位、マンニトール２５ミリグラム、ヒト血清アルブミン
１ミリグラムを含むエポジン注３０００（中外製薬）に
注射用生理食塩水２ミリリットルを加えて溶解しエリス
ロポエチン注射液とした。このうち１.５ミリリットル
をガラス製バイアル瓶（容量約５ミリリットル）に入
れ、ヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量１４７万：ジ
ェンザイム社）の２％（ｗ／ｖ）生理食塩水溶液０．５
ミリリットルを加えた。これらの溶液が入ったガラス製
バイアル瓶（容量約５ミリリットル）を密閉し、スリー
ワンモーター（ヘイドン社製）にとりつけた容量２００
ミリリットルのナス型フラスコ内で長軸を中心として約
１時間回転混合（２０〜１００回転／分）させることに
より気泡の混入がほとんど無い持続性製剤の投与液を作
製した。本操作を繰り返すことにより必要量の持続性製
剤の投与液を作製した。

【００２３】実施例６ エリスロポエチン（エポエチンベータ）３０００国際単
位、マンニトール２５ミリグラム、ヒト血清アルブミン
１ミリグラムを含むエポジン注３０００（中外製薬）に
注射用生理食塩水２ミリリットルを加えて溶解しエリス
ロポエチン注射液とした。このうち１.７ミリリットル
をガラス製バイアル瓶（容量約５ミリリットル）に入
れ、ヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量１４７万：ジ
ェンザイム社）の２％（ｗ／ｖ）生理食塩水溶液０.１
９ミリリットルを加えた。これらの溶液が入ったガラス
製バイアル瓶（容量約５ミリリットル）を密閉し、スリ
ーワンモーター（ヘイドン社製）にとりつけた容量２０
０ミリリットルのナス型フラスコ内で長軸を中心として
約１時間回転混合（２０〜１００回転／分）させること
により気泡の混入がほとんど無い持続性製剤の投与液を
作製した。

【００２４】実施例７ エリスロポエチン（エポエチンアルファ）３０００国際
単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラムを含むヒトエリ
スロポエチン製剤であるエスポー注射液３０００（麒麟
麦酒）の１.３ミリリットルをガラス製バイアル瓶（容
量約５ミリリットル）に入れ、ヒアルロン酸ナトリウム
製剤であるアルツ（平均分子量約８０万〜９０万：生化
学工業）の１.３ミリリットルを加えた。これらの溶液
が入ったガラス製バイアル瓶（容量約５ミリリットル）
を密閉し、スリーワンモーター（ヘイドン社製）にとり
つけた容量２００ミリリットルのナス型フラスコ内で長
軸を中心として約１時間回転混合（２０〜１００回転／
分）させることにより気泡の混入がほとんど無い持続性
製剤の投与液を作製した。

【００２５】実施例８ エリスロポエチン（エポエチンアルファ）３０００国際
単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラムを含むヒトエリ
スロポエチン製剤であるエスポー注射液３０００（麒麟
麦酒）の１.４ミリリットルをガラス製バイアル瓶（容
量約５ミリリットル）に入れ、ヒアルロン酸ナトリウム
（平均分子量約５０万）の１.５％（ｗ／ｖ）生理食塩
水溶液０.７ミリリットルを加えた。これらの溶液が入
ったガラス製バイアル瓶（容量約５ミリリットル）を密
閉し、スリーワンモーター（ヘイドン社製）にとりつけ
た容量２００ミリリットルのナス型フラスコ内で長軸を
中心として約１時間回転混合（２０〜１００回転／分）
させることにより気泡の混入がほとんど無い持続性製剤
の投与液を作製した。

【００２６】実施例９ エリスロポエチン（エポエチンアルファ）３０００国際
単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラムを含むヒトエリ
スロポエチン製剤であるエスポー注射液３０００（麒麟
麦酒）の１.４ミリリットルをガラス製バイアル瓶（容
量約５ミリリットル）に入れ、ヒアルロン酸ナトリウム
（平均分子量約１４７万：ジェンザイム社製）の１.５
％（ｗ／ｖ）生理食塩水溶液０.７ミリリットルを加え
た。これらの溶液が入ったガラス製バイアル瓶（容量約
５ミリリットル）を密閉し、スリーワンモーター（ヘイ
ドン社製）にとりつけた容量２００ミリリットルのナス
型フラスコ内で長軸を中心として約１時間回転混合（２
０〜１００回転／分）させることにより気泡の混入がほ
とんど無い持続性製剤の投与液を作製した。

【００２７】実施例１０ エリスロポエチン（エポエチンアルファ）３０００国際
単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラムを含むヒトエリ
スロポエチン製剤であるエスポー注射液３０００（麒麟
麦酒）の１.４ミリリットルをガラス製バイアル瓶（容
量約５ミリリットル）に入れ、ヒアルロン酸ナトリウム
（平均分子量約２３０万：ジェンザイム社製）の０.９
％（ｗ／ｖ）生理食塩水溶液０.７ミリリットルを加え
た。これらの溶液が入ったガラス製バイアル瓶（容量約
５ミリリットル）を密閉し、スリーワンモーター（ヘイ
ドン社製）にとりつけた容量２００ミリリットルのナス
型フラスコ内で長軸を中心として約２時間回転混合（２
０〜１００回転／分）させることにより気泡の混入がほ
とんど無い持続性製剤の投与液を作製した。

【００２８】実施例１１ エリスロポエチン（エポエチンアルファ）３０００国際
単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラムを含むヒトエリ
スロポエチン製剤であるエスポー注射液３０００（麒麟
麦酒）の１.３ミリリットルをガラス製バイアル瓶（容
量約５ミリリットル）に入れ、ヒアルロン酸ナトリウム
（平均分子量約１４７万：ジェンザイム社製）の１.５
％（ｗ／ｖ）生理食塩水溶液１.３ミリリットルを加え
た。これらの溶液が入ったガラス製バイアル瓶（容量約
５ミリリットル）を密閉し、スリーワンモーター（ヘイ
ドン社製）にとりつけた容量２００ミリリットルのナス
型フラスコ内で長軸を中心として約２時間回転混合（２
０〜１００回転／分）させることにより気泡の混入がほ
とんど無い持続性製剤の投与液を作製した。

【００２９】実験例１ 比較製剤１：注射用生理食塩水，２ml 比較製剤２：エリスロポエチン（エポエチンベータ）３
０００国際単位，マンニトール２５mgおよびヒト血清ア
ルブミン１mgを含むエポジン注（中外製薬）の１バイア
ルに、注射用生理食塩水２mlを加えて溶解し、エリスロ
ポエチン注射液とした。 ８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に１３５国際単位／
kg／日の７日分の薬用量で実施例１(１) (b)の製剤およ
び比較製剤２をそれぞれ１週間おきに２回投与した。対
照として比較製剤１の生理食塩水注射液を同様に投与し
た。投与前及び一定時間毎に約０.４mlづつ採血し、ミ
クロヘマトクリット用キャピラリーチューブ（ドラモン
トサイエンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマトク
リット値を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、クボ
タ社製）。〔図１〕および〔図２〕にその結果を示す。
生理食塩水投与群ではヘマトクリット値の上昇はなく、
採血による一時的なヘマトクリット値の低下が見られた
（〔図１〕）。比較製剤２において１回目の投与５日後
にはヘマトクリット値の若干の上昇はみられるが７日目
には再び低下してしまい、また２回目の投与後に急激に
上昇することが観察された（〔図２〕、○）。一方、実
施例１(１) (b)の製剤においては１回目の投与後５日目
から７日目にかけてヘマトクリット値が徐々に上昇し、
その後２回目の投与をはさんでほぼ一定のヘマトクリッ
ト値が実験開始後２週間目まで持続することが観察され
た（〔図２〕、●）。このことはエリスロポエチンの体
液中濃度が薬理効果発現濃度範囲内に持続的にコントロ
ールされていることを示唆している。また。ヘマトクリ
ット値の急激な上昇は望ましくなく、〔図２〕の○印に
おいて示されるような比較製剤２のヘマトクリット値の
挙動は好ましくない。この意味からも実施例１(１) (b)
の製剤がエリスロポエチンの持続性製剤として優れた効
果を発揮していることが示されている。

【００３０】実験例２ 比較製剤３：実施例２のヒトエリスロポエチン溶液０.
７ミリリットル（２６.９マイクログラム含有）に注射
用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬品）を加え全
量を２.１ミリリットルにした。さらに、この溶液にヒ
アルロン酸ナトリウム塩（平均分子量１４７万ダルト
ン：ジェンザイム社）１０.５ミリグラムを加えた。 比較製剤４：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、１.８３マイク
ログラム／kg／日の７日分の薬用量で実施例２の製剤お
よび比較製剤３の注射液を１週間おきに２回投与した。
対照として比較製剤４の生理食塩水注射液を同様に投与
した。投与前および一定時間毎に約０.４ミリリットル
づつ採血し（抗凝固剤としてＥＤＴＡ２Ｎa使用）、ミ
クロヘマトクリット用キャピラリーチューブ（ドラモン
トサイエンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマトク
リット値を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、クボ
タ社製）。〔図４〕にその結果を示す。〔図４〕は比較
製剤３（□）、比較製剤４（○）及び実施例２の製剤
（●）のエリスロポエチン注射液を１週間置きに２回投
与した時のヘマトクリット値の推移を示すグラフであ
る。比較製剤４の生理食塩水投与群ではヘマトクリット
値の上昇は無く、ほとんど一定の値であった。比較製剤
３および実施例２の製剤において１回目の投与後ヘマト
クリット値は両方とも上昇しているが、２回目の投与後
は実施例２の製剤の群のヘマトクリット値の方が比較製
剤３の群のヘマトクリット値に比較して投与後１４日目
まで高い値に維持されていた。このことはエリスロポエ
チンとヒアルロン酸との製剤でも持続効果はみられる
が、この系にさらに血清アルブミンを添加することによ
り同じ量のエリスロポエチン及びヒアルロン酸でより強
い薬理効果が発現することを示している。

【００３１】実験例３ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。比
較製剤５：前記のヒトエリスロポエチン（エポエチンベ
ータ）溶液０.７ミリリットル（２６.９マイクログラム
含有）に注射用生理食塩水１.４ミリリットル（扶桑薬
品）を加え全量を２.１ミリリットルにした。 比較製剤６：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、０.５４９マイ
クログラム／ラット／日の７日分の薬用量で実施例３の
製剤および比較製剤５の注射液をそれぞれ投与した。対
照として比較製剤６の生理食塩水注射液を同様に投与し
た。投与前および一定時間毎に約０.４ミリリットルづ
つ採血し（抗凝固剤としてＥＤＴＡ ２Ｎa使用）、ミ
クロヘマトクリット用キャピラリーチューブ（ドラモン
トサイエンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマトク
リット値を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、クボ
タ社製）。比較製剤６の生理食塩水投与群ではヘマトク
リット値の上昇は無く、ほとんど一定の値であった。
〔図５〕に実施例３の製剤（●）および比較製剤５
（○）の投与後の結果を示す。実施例３の製剤の投与群
においては投与後徐々にヘマトクリット値が上昇し、投
与後５日目にはピークに達した後、７日目には若干の下
降がみられた。比較製剤５の投与群において投与後のヘ
マトクリット値は上昇しているが、その程度は実施例３
の製剤の投与群に比較して弱かった。これらのことはエ
リスロポエチンとヒアルロン酸を組み合わせることによ
りヘマトクリット値の変動を少なくしながらエリスロポ
エチンの効果を持続させうることを示している。

【００３２】実験例４ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。比
較製剤７：エリスロポエチン（エポエチンベータ）３０
００国際単位、マンニトール２５ミリグラム、ヒト血清
アルブミン１ミリグラムを含むエポジン注３０００（中
外製薬）に注射用生理食塩水２ミリリットルを加えて溶
解しエリスロポエチン注射液とした。 比較製剤８：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、１２１.５国際
単位／ラット／日の７日分の薬用量で実施例５の製剤お
よび比較製剤７の注射液を１週間おきに２回投与した。
対照として比較製剤６の生理食塩水注射液を同様に投与
した。投与前および一定時間毎に約０.４ミリリットル
づつ採血し（抗凝固剤としてＥＤＴＡ２Ｎa使用）、ミ
クロヘマトクリット用キャピラリーチューブ（ドラモン
トサイエンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマトク
リット値を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、クボ
タ社製）。比較製剤８の生理食塩水投与群ではヘマトク
リット値の上昇は無く、ほとんど一定の値であった。
〔図６〕に実施例５の製剤（●）および比較製剤７
（○）の投与後のヘマトクリット値の結果を示す。実施
例５の製剤および比較製剤７の投与群において１回目の
投与後ヘマトクリット値は２者とも上昇しているが、比
較製剤７の投与群のほうが上昇は弱かった。一方、２回
目の投与後は実施例５の製剤の投与群のヘマトクリット
値は投与後１４日目までほぼ同じ高い値に維持されてい
たのに比較して、比較製剤７の投与群では再びヘマトク
リット値が大きく上昇していた。これらのことはエリス
ロポエチンとヒアルロン酸を組み合わせることによりエ
リスロポエチンの効果の変動を少なくしながらかつ持続
させうることを示している。

【００３３】実験例５ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。比
較製剤９：エリスロポエチン（エポエチンベータ）３０
００国際単位、マンニトール２５ミリグラム、ヒト血清
アルブミン１ミリグラムを含むエポジン注３０００（中
外製薬）に注射用生理食塩水２ミリリットルを加えて溶
解しエリスロポエチン注射液とした。 比較製剤１０：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、１８国際単位／
ラット／日の７日分の薬用量で実施例５の製剤および比
較製剤９の注射液を１週間おきに２回投与した。対照と
して比較製剤１０の生理食塩水注射液を同様に投与し
た。投与前および一定時間毎に約０.４ミリリットルづ
つ採血し（抗凝固剤としてＥＤＴＡ ２Ｎa使用）、ミ
クロヘマトクリット用キャピラリーチューブ（ドラモン
トサイエンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマトク
リット値を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、クボ
タ社製）。比較製剤１０の生理食塩水投与群ではヘマト
クリット値の上昇は無く、ほとんど一定の値であった。
〔図７〕に実施例５の製剤（●）および比較製剤９
（○）の投与後のヘマトクリット値の結果を示す。実施
例５の製剤および比較製剤９の投与群において１回目の
投与後ヘマトクリット値は２者とも上昇しているが、比
較製剤９の投与群のほうが上昇は弱かった。２回目の投
与後は実施例５の製剤の投与群のヘマトクリット値はさ
らにゆっくりと上昇し、投与後１２日目にピークに達し
た後ゆっくりと下降していた。一方、比較製剤９の投与
群では２回目の投与後のヘマトクリット値は急速に上昇
し、１０日目にピークに達した後、ゆっくりと下降して
いたが、すべての観察点において、実施例５の製剤の投
与群に比較して低かった。これらのことはエリスロポエ
チンとヒアルロン酸とを組み合わせることによりエリス
ロポエチンの効果の変動を少なくしながらかつ持続させ
うることを示している。

【００３４】実験例６ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。 比較製剤１１：エリスロポエチン（エポエチンベータ）
３０００国際単位、マンニトール２５ミリグラム、ヒト
血清アルブミン１ミリグラムを含むエポジン注３０００
（中外製薬）に注射用生理食塩水２ミリリットルを加え
て溶解しエリスロポエチン注射液とした。 比較製剤１２：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ８週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、４０.５国際単
位／ラット／日の７日分の薬用量で実施例６の製剤およ
び比較製剤１１の注射液を１週間おきに２回投与した。
対照として比較製剤１２の生理食塩水注射液を同様に投
与した。投与前および一定時間毎に約０.４ミリリット
ルづつ採血し（抗凝固剤としてＥＤＴＡ２Ｎa使用）、
ミクロヘマトクリット用キャピラリーチューブ（ドラモ
ントサイエンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマト
クリット値を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、ク
ボタ社製）。比較製剤１２の生理食塩水投与群ではヘマ
トクリット値の上昇は無く、ほとんど一定の値であっ
た。〔図８〕に実施例６の製剤（●）および比較製剤１
１（○）を投与後のヘマトクリット値の結果を示す。実
施例６の製剤および比較製剤１１の投与群において１回
目の投与後ヘマトクリット値は２者とも上昇している
が、比較製剤１１の投与群のほうが上昇は弱く投与後７
日目には減少に転じていた。一方、２回目の投与後は実
施例６の製剤の投与群のヘマトクリット値は投与後１２
日目まで徐々に上昇していたのに比較して、比較製剤１
１の投与群では最初ゆるやかに、そして後に急激にヘマ
トクリット値が上昇していた。これらのことはエリスロ
ポエチンとヒアルロン酸とを組み合わせることによりエ
リスロポエチンの効果の変動を少なくしながらかつ持続
させうることを示している。

【００３５】実験例７ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。 比較製剤１３：エリスロポエチン（エポエチンアルフ
ァ）３０００国際単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラ
ムを含むヒトエリスロポエチン製剤であるエスポー注射
液３０００（麒麟麦酒）。 比較製剤１４：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ７週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、４０.５国際単
位／ラット／日の７日分の薬用量で実施例７の製剤およ
び比較製剤１３の注射液を１週間おきに２回投与した。
対照として比較製剤１４の生理食塩水注射液を同様に投
与した。投与前および一定時間毎に約０.４ミリリット
ルづつ採血し（抗凝固剤としてＥＤＴＡ２Ｎa使用）、
ミクロヘマトクリット用キャピラリーチューブ（ドラモ
ントサイエンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマト
クリット値を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、ク
ボタ社製）。比較製剤１４の生理食塩水投与群ではヘマ
トクリット値の上昇は無く、ほとんど一定の値であっ
た。〔図９〕に実施例７の製剤（●）および比較製剤１
３（○）を投与後のヘマトクリット値の結果を示す。実
施例７の製剤および比較製剤１３の投与群において１回
目の投与後ヘマトクリット値は２者とも上昇している
が、比較製剤１３の投与群のほうが上昇の程度は弱かっ
た。一方、２回目の投与後は実施例７の製剤の投与群の
ヘマトクリット値は投与後１４日目まで高い値に維持さ
れていたのに比較して、比較製剤１３の投与群では最初
ゆるやかに、そして後に急激にヘマトクリット値が上昇
していた。これらのことはエリスロポエチンとヒアルロ
ン酸とを組み合わせることによりエリスロポエチンの効
果の変動を少なくしながらかつ持続させうることを示し
ている。

【００３６】実験例８ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。 比較製剤１５：エリスロポエチン（エポエチンアルフ
ァ）３０００国際単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラ
ムを含むヒトエリスロポエチン製剤であるエスポー注射
液３０００（麒麟麦酒）。 比較製剤１６：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ７週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、４０.５国際単
位／ラット／日の７日分の薬用量で実施例９の製剤およ
び比較製剤１５の注射液を１週間おきに２回投与した。
対照として比較製剤１６の生理食塩水注射液を同様に投
与した。投与前および一定時間毎に約０.４ミリリット
ルづつ採血し（抗凝固剤としてＥＤＴＡ2Na使用）、ミ
クロヘマトクリット用キャピラリーチューブ（ドラモン
トサイエンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマトク
リット値を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、クボ
タ社製）。比較製剤１６の生理食塩水投与群ではヘマト
クリット値の上昇は無く、ほとんど一定の値であった。
〔図１０〕に実施例９の製剤（●）および比較製剤１５
（○）を投与後のヘマトクリット値の結果を示す。実施
例９の製剤および比較製剤１５の投与群において１回目
の投与後ヘマトクリット値は両者とも上昇しているが、
比較製剤１５の投与群のほうが上昇は弱かった。２回目
の投与後は実施例９の製剤の投与群のヘマトクリット値
は投与後１２日目まで高い値に維持され、その後徐々に
下降していた。一方、比較製剤１５の２回目の投与後は
引き続きヘマトクリット値が上昇し、１２日目にピーク
に達した後下降していた。これらのことはエリスロポエ
チンとヒアルロン酸とを組み合わせることによりエリス
ロポエチンの効果の変動を少なくしながらかつ持続させ
うることを示している。

【００３７】実験例９ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。 比較製剤１７：エリスロポエチン（エポエチンアルフ
ァ）３０００国際単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラ
ムを含むヒトエリスロポエチン製剤であるエスポー注射
液３０００（麒麟麦酒）。 比較製剤１８：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ７週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、４０.５国際単
位／ラット／日の７日分の薬用量で実施例１０の製剤お
よび比較製剤１７の注射液を投与した。対照として比較
製剤１８の生理食塩水注射液を同様に投与した。投与前
および一定時間毎に約０.４ミリリットルづつ採血し
（抗凝固剤としてＥＤＴＡ ２Ｎa使用）、ミクロヘマ
トクリット用キャピラリーチューブ（ドラモントサイエ
ンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマトクリット値
を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、クボタ社
製）。比較製剤１８の生理食塩水投与群ではヘマトクリ
ット値の上昇は無く、ほとんど一定の値であった。実施
例１０の製剤および比較製剤１７の投与群において投与
後ヘマトクリット値は両者とも上昇しているが、比較製
剤１７の投与のほうが上昇は弱かった。

【表１】 これらのことはエリスロポエチンとヒアルロン酸とを
組み合わせることによりエリスロポエチンの効果を持続
させうることを示している。

【００３８】実験例１０ 下記配合割合にて注射剤を調製し、実験に使用した。 比較製剤１９：エリスロポエチン（エポエチンアルフ
ァ）３０００国際単位、ヒト血清アルブミン５ミリグラ
ムを含むヒトエリスロポエチン製剤であるエスポー注射
液３０００（麒麟麦酒）。 比較製剤２０：注射用生理食塩水 ２ ミリリットル ７週齢の雄性ＳＤ系ラット背部皮下に、４０.５国際単
位／ラット／日の７日分の薬用量で実施例１１の製剤お
よび比較製剤１９の注射液を投与した。対照として比較
製剤２０の生理食塩水注射液を同様に投与した。投与前
および一定時間毎に約０.４ミリリットルづつ採血し
（抗凝固剤としてＥＤＴＡ ２Ｎa使用）、ミクロヘマ
トクリット用キャピラリーチューブ（ドラモントサイエ
ンティフィック社製）に血液を吸引後ヘマトクリット値
を測定した（ＫＨ１２０Ｍ型遠心分離機、クボタ社
製）。比較製剤２０の生理食塩水投与群ではヘマトクリ
ット値の上昇は無く、ほとんど一定の値であった。実施
例１１の製剤および比較製剤１９の投与後のヘマトクリ
ット値の結果を下に示す。

【表２】 実施例１１の製剤および比較製剤１９の投与群におい
て投与後のヘマトクリット値は両者とも上昇している
が、比較製剤１９の投与群のほうが弱かった。これらの
ことはエリスロポエチンとヒアルロン酸を組み合わせる
ことによりエリスロポエチンの効果を持続させうること
を示している。

【００３９】

【発明の効果】エリスロポエチンにヒアルロン酸もしく
はその非毒性塩を含有せしめることにより、エリスロポ
エチンの体液中濃度が薬理効果を発現する濃度範囲内に
持続的にコントロールされる持続性製剤で、しかもヒア
ルロン酸もしくはその塩が０.０２〜１％（ｗ／ｖ）未
満と低濃度で投与の際に患者に苦痛を与えないエリスロ
ポエチン組成物を提供する。

【図面の簡単な説明】

【図１】実験例１で得られた、生理食塩水（比較製剤
１）を１週間置きに２回投与したときのヘマトクリット
値の時間推移を示すグラフである。

【図２】実験例１で得られた、エリスロポエチン注射液
（比較製剤２）を１週間置きに２回投与したときのヘマ
トクリット値の時間推移（○）、およびエリスロポエチ
ン注射液（実施例１(１) (b)の製剤）を１週間置きに２
回投与したときのヘマトクリット値の時間推移（●）を
示すグラフである。それぞれの図におけるラットは１群
最低４匹を用いており、各図中の点は平均値を、棒線は
標準誤差（Ｓ. Ｅ.）を示している。

【図３】は、実施例２で得られた、弱アニオン交換カラ
ムクロマトグラフィーの結果を示す。

【図４】は、実験例２で得られた、ヘマトクリット値の
時間推移を示す。

【図５】は、実験例３で得られた、ヘマトクリット値の
時間推移を示す。

【図６】は、実験例４で得られた、ヘマトクリット値の
時間推移を示す。

【図７】は、実験例５で得られた、ヘマトクリット値の
時間推移を示す。

【図８】は、実験例６で得られた、ヘマトクリット値の
時間推移を示す。

【図９】は、実験例７で得られた、ヘマトクリット値の
時間推移を示す。

【図１０】は、実験例８で得られた、ヘマトクリット値
の時間推移を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 47/42 Ｊ 7329−4Ｃ Ｃ 7329−4Ｃ

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ヒアルロン酸もしくはその非毒性塩とエリ
   スロポエチンとを含有する医薬用組成物。
2. 【請求項２】実質的に薬理活性を示さず体液内に注入し
   うる水溶性蛋白をさらに含有する請求項１記載の医薬用
   組成物。
3. 【請求項３】注射剤である請求項１または２記載の医薬
   用組成物。
4. 【請求項４】凍結乾燥されたものである請求項１または
   ２記載の医薬用組成物。
5. 【請求項５】溶液状態である請求項１または２記載の医
   薬用組成物。
6. 【請求項６】請求項１または２記載のエリスロポエチン
   がエリスロポエチンの誘導体、もしくは同様の生物活性
   を持つアミノ酸組成の異なる生理活性物質である医薬用
   組成物。
7. 【請求項７】ヒアルロン酸またはその非毒性塩の分子量
   が５０万〜３００万である請求項１または２記載のエリ
   スロポエチン含有医薬用組成物。
8. 【請求項８】ヒアルロン酸またはその非毒性塩の濃度が
   ０.０２％(ｗ／ｖ)〜１％(ｗ／ｖ)未満である請求項１
   または２記載のエリスロポエチン含有医薬用組成物。