JP3127611B2 - 抗原抗体反応におけるプロゾーン判定方法及び分析方法 - Google Patents
抗原抗体反応におけるプロゾーン判定方法及び分析方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗原抗体反応において試
料が適正な条件下で測定されたものか、プロゾーン状態
でのものかを判定する方法と、その判定結果に基づき再
検査の要否や再検査時の測定条件を決定する分析方法に
関するものである。
料が適正な条件下で測定されたものか、プロゾーン状態
でのものかを判定する方法と、その判定結果に基づき再
検査の要否や再検査時の測定条件を決定する分析方法に
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】抗原抗体反応では規定の測定範囲を越え
て抗原が過剰に加えられた状態ではその吸光度は存在す
る抗原量から期待される値よりも低い値となる。そのよ
うな抗原過剰域をプロゾーン領域と称している。測定さ
れた抗原抗体反応がプロゾーン領域か否かを判定する方
法としては次のような幾つかの方法が知られている。 （ａ）抗体試薬又は試料を再添加する方法。 （ｂ）複数の測定値から濁度（見かけの吸光度）の比又
は濃度の比をとる方法。 （ｃ）複数個の測定値から反応速度の比をとる方法。 （ｄ）複数個の測定値から最大反応速度、最大反応速度
に達するまでの反応時間及び抗原濃度の三次元検量線を
用いる方法。 （ｅ）２波長測定を行ない、その吸光度比より判定する
方法。 これらの方法は、例えば日本臨床検査自動化学会会誌第
１５巻第６号第６７５〜６８７ページ（１９９０年）、
同誌第１４巻第３号第１７１〜１７６ページ（１９８９
年）などに記載されている。
て抗原が過剰に加えられた状態ではその吸光度は存在す
る抗原量から期待される値よりも低い値となる。そのよ
うな抗原過剰域をプロゾーン領域と称している。測定さ
れた抗原抗体反応がプロゾーン領域か否かを判定する方
法としては次のような幾つかの方法が知られている。 （ａ）抗体試薬又は試料を再添加する方法。 （ｂ）複数の測定値から濁度（見かけの吸光度）の比又
は濃度の比をとる方法。 （ｃ）複数個の測定値から反応速度の比をとる方法。 （ｄ）複数個の測定値から最大反応速度、最大反応速度
に達するまでの反応時間及び抗原濃度の三次元検量線を
用いる方法。 （ｅ）２波長測定を行ない、その吸光度比より判定する
方法。 これらの方法は、例えば日本臨床検査自動化学会会誌第
１５巻第６号第６７５〜６８７ページ（１９９０年）、
同誌第１４巻第３号第１７１〜１７６ページ（１９８９
年）などに記載されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上記の方法のうち、
（ａ）では全ての試料について再検査を行なうことにな
り、一般臨床生化学項目に比べて１桁〜２桁高い高価な
試薬を無駄に使用することになり、コスト高になる。
（ｂ）〜（ｅ）の方法では、吸光度比、反応速度比又は
三次元検量線を検体分析に先立って測定しておく必要が
ある。そのためにはプロゾーン現象を引き起こす高濃度
試料を準備しておかなければならない。しかし、そのよ
うな高濃度試料は一般には入手が困難である。また、こ
れらの事前の準備は試薬ロットが変わる度に行なわなけ
ればならず、コスト的にも時間的にも非常な負担とな
る。本発明は高価な試薬の無駄使いを防ぎ、容易にプロ
ゾーン判定を行なうことのできる方法を提供することを
目的とするものである。本発明はまた、そのようなプロ
ゾーン判定方法を用いて再検査の要否、及び再検査時の
測定条件を決定する分析方法を提供することを目的とす
るものである。
（ａ）では全ての試料について再検査を行なうことにな
り、一般臨床生化学項目に比べて１桁〜２桁高い高価な
試薬を無駄に使用することになり、コスト高になる。
（ｂ）〜（ｅ）の方法では、吸光度比、反応速度比又は
三次元検量線を検体分析に先立って測定しておく必要が
ある。そのためにはプロゾーン現象を引き起こす高濃度
試料を準備しておかなければならない。しかし、そのよ
うな高濃度試料は一般には入手が困難である。また、こ
れらの事前の準備は試薬ロットが変わる度に行なわなけ
ればならず、コスト的にも時間的にも非常な負担とな
る。本発明は高価な試薬の無駄使いを防ぎ、容易にプロ
ゾーン判定を行なうことのできる方法を提供することを
目的とするものである。本発明はまた、そのようなプロ
ゾーン判定方法を用いて再検査の要否、及び再検査時の
測定条件を決定する分析方法を提供することを目的とす
るものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明のプロゾーン判定
方法では、濃度の異なる複数種類の標準試料について抗
原抗体反応の初期段階の第１の時刻及び反応が十分に進
行した後の第２の時刻で２種類の波長光を抗原抗体反応
液に照射してその透過光の測定値比を求め、それらの測
定値比のうちプロゾーン現象が起こっていない濃度域の
両時刻間の測定値比の関係を示す回帰式を算出し、試料
反応液について前記第１の時刻及び第２の時刻で前記の
２種類の波長光による測定を行ない、その測定値比と前
記回帰式から算出される仮想値とのずれからその測定値
がプロゾーン現象の起こっていない適正な抗原抗体反応
下で行なわれたか否かを判定する。第２の時刻は濃度算
出のための測定時刻であってもよく、又は他の時刻であ
ってもよい。
方法では、濃度の異なる複数種類の標準試料について抗
原抗体反応の初期段階の第１の時刻及び反応が十分に進
行した後の第２の時刻で２種類の波長光を抗原抗体反応
液に照射してその透過光の測定値比を求め、それらの測
定値比のうちプロゾーン現象が起こっていない濃度域の
両時刻間の測定値比の関係を示す回帰式を算出し、試料
反応液について前記第１の時刻及び第２の時刻で前記の
２種類の波長光による測定を行ない、その測定値比と前
記回帰式から算出される仮想値とのずれからその測定値
がプロゾーン現象の起こっていない適正な抗原抗体反応
下で行なわれたか否かを判定する。第２の時刻は濃度算
出のための測定時刻であってもよく、又は他の時刻であ
ってもよい。
【０００５】本発明の分析方法では、上記の方法でプロ
ゾーン現象が起こっているか否かを判定し、プロゾーン
現象が起こっていると判定した場合には再検査を行なう
ようにする。再検査においては試料反応液についての第
２の時刻での測定値比を前記回帰式に代入して得た第１
の時刻での仮想値と、その試料反応液についての第１の
時刻での測定値比とのずれの大きさに応じて再検査に好
適な試料量と試薬量との比を決定する。
ゾーン現象が起こっているか否かを判定し、プロゾーン
現象が起こっていると判定した場合には再検査を行なう
ようにする。再検査においては試料反応液についての第
２の時刻での測定値比を前記回帰式に代入して得た第１
の時刻での仮想値と、その試料反応液についての第１の
時刻での測定値比とのずれの大きさに応じて再検査に好
適な試料量と試薬量との比を決定する。
【０００６】
【作用】本発明は免疫比濁分析法（turbidimetric Immu
noassay; TIA）に適用することができる。免疫比濁分析
法では［抗原−抗体］複合体が生成して、次第に大きな
凝集塊を形成していくと考えられており、微小粒子の生
成と粒子どおしの凝集による粒子の肥大化、粒子数の減
少が同時進行で進んでいく。紫外〜可視域の波長では、
この凝集塊の粒子径が０.１〜１μｍのものについて測
定可能である。測定法としては濁度を測定するので、散
乱光の強度や透過光の減衰量を測定することになる。透
過光の減衰量は通常の分光光度計で吸光度として測定す
ることができるので、臨床用の自動分析装置をそのまま
適用することができる。散乱光の強度を測定するにして
も透過光の減衰量を測定するにしても、どちらも濁り粒
子の散乱を測定していることに変わりはない。
noassay; TIA）に適用することができる。免疫比濁分析
法では［抗原−抗体］複合体が生成して、次第に大きな
凝集塊を形成していくと考えられており、微小粒子の生
成と粒子どおしの凝集による粒子の肥大化、粒子数の減
少が同時進行で進んでいく。紫外〜可視域の波長では、
この凝集塊の粒子径が０.１〜１μｍのものについて測
定可能である。測定法としては濁度を測定するので、散
乱光の強度や透過光の減衰量を測定することになる。透
過光の減衰量は通常の分光光度計で吸光度として測定す
ることができるので、臨床用の自動分析装置をそのまま
適用することができる。散乱光の強度を測定するにして
も透過光の減衰量を測定するにしても、どちらも濁り粒
子の散乱を測定していることに変わりはない。
【０００７】粒子径が０.１〜１μｍのものの吸光度測
定に関しては、Ｍｉｅの理論がある。それによれば、見
掛けの吸光度Ａは、 Ａ＝−logＩo／Ｉo ＝０.４３４３ＮＲ と表わされる。ここで、Ｉtは透過光強度、Ｉoは照射光
強度、Ｎは単位体積中の粒子数、Ｒは粒子１個による濁
度である。また、粒子１個による濁度Ｒと散乱係数Ｋ及
び粒子径ｄの間には Ｋ＝４Ｒ／πｄ2 の関係があるので、見掛けの吸光度Ａは、 Ａ＝０.４３４３ＮＲ ＝０.３４１Ｎｄ2Ｋ と変形することができる。したがって、波長λ1におけ
る見掛けの吸光度Ａλ1と波長λ2における見掛けの吸光
度Ａλ2との比を求めると、 Ａλ1／Ａλ2＝Ｒλ1／Ｒλ2 ＝Ｋλ1／Ｋλ2 となり、数Ｎの因子が消去されて、波長λ1とλ2におけ
る散乱係数の比（Ｋλ1／Ｋλ2）が得られる。この結果
は粒子径に関する情報を反映したものとなる。
定に関しては、Ｍｉｅの理論がある。それによれば、見
掛けの吸光度Ａは、 Ａ＝−logＩo／Ｉo ＝０.４３４３ＮＲ と表わされる。ここで、Ｉtは透過光強度、Ｉoは照射光
強度、Ｎは単位体積中の粒子数、Ｒは粒子１個による濁
度である。また、粒子１個による濁度Ｒと散乱係数Ｋ及
び粒子径ｄの間には Ｋ＝４Ｒ／πｄ2 の関係があるので、見掛けの吸光度Ａは、 Ａ＝０.４３４３ＮＲ ＝０.３４１Ｎｄ2Ｋ と変形することができる。したがって、波長λ1におけ
る見掛けの吸光度Ａλ1と波長λ2における見掛けの吸光
度Ａλ2との比を求めると、 Ａλ1／Ａλ2＝Ｒλ1／Ｒλ2 ＝Ｋλ1／Ｋλ2 となり、数Ｎの因子が消去されて、波長λ1とλ2におけ
る散乱係数の比（Ｋλ1／Ｋλ2）が得られる。この結果
は粒子径に関する情報を反映したものとなる。
【０００８】本発明では反応初期（第１の時刻）と反応
が十分に進行した時点（第２の時点）での２波長の吸光
度比を求めることにより、粒子の生成→粒子の肥大化
（同時に粒子数の減少）の過程をモニタすることにな
り、一波長測定又は二波長での吸光度差などの測定とは
次元の異なる尺度で抗原−抗体反応でのプロゾーン域を
判定することができる。
が十分に進行した時点（第２の時点）での２波長の吸光
度比を求めることにより、粒子の生成→粒子の肥大化
（同時に粒子数の減少）の過程をモニタすることにな
り、一波長測定又は二波長での吸光度差などの測定とは
次元の異なる尺度で抗原−抗体反応でのプロゾーン域を
判定することができる。
【０００９】本発明のプロゾーン判定方法では、検量線
作成用標準試料反応液について第１の時刻での２波長の
測定値（通常は吸光度を使用する）比Ｖｓｒと第２の時
刻での２波長の測定値比Ｖｅｒを得、非プロゾーン域濃
度の標準試料反応液についての「Ｖｓｒ対Ｖｅｒ」の関
係から回帰直線 Ｙｒｃ＝ａ・Ｘｒｅ＋ｂ を例えば最小自乗法により求める。検体反応液について
の第１の時刻での２波長の測定値比Ｖｓｒｓと第２の時
刻での２波長の測定値比Ｖｅｒｓのうち、第２の時刻で
の測定値比Ｖｅｒｓを回帰式のＸｒｅに代入してＹｒｃ
を求め、これと第１の時刻での測定値比Ｖｓｒｓとの比
較を行なう。このとき、例えば Ｙｒｃ−α＞Ｖｓｒｓ となればプロゾーン現象が起こっていると判定する。こ
こでαはＶｓｒｓに対する許容値である。Ｙｒｃが広範
囲な値をとる場合は、Ｙｒｃ・α（例えばα＝０．９
５）として、Ｙｒｃに対する比率で判定してもよい。こ
の許容値を越えてＶｓｒｓが低くなれば、プロゾーン現
象が起こっていると判定され、仮想値と測定値比とのず
れの大きさを例えば（Ｙｒｃ−Ｖｓｒｓ）／Ｙｒｃとし
て算出し、その値に応じて予め定めた再検査条件（検体
量：試薬量比）で再検査し、再検査結果に基づいてその
条件での濃度を算出する。 Ｙｒｃ−α≦Ｖｓｒｓ＜Ｙｒｃ−α であれば、予め作成した検量線に従って定量する。
作成用標準試料反応液について第１の時刻での２波長の
測定値（通常は吸光度を使用する）比Ｖｓｒと第２の時
刻での２波長の測定値比Ｖｅｒを得、非プロゾーン域濃
度の標準試料反応液についての「Ｖｓｒ対Ｖｅｒ」の関
係から回帰直線 Ｙｒｃ＝ａ・Ｘｒｅ＋ｂ を例えば最小自乗法により求める。検体反応液について
の第１の時刻での２波長の測定値比Ｖｓｒｓと第２の時
刻での２波長の測定値比Ｖｅｒｓのうち、第２の時刻で
の測定値比Ｖｅｒｓを回帰式のＸｒｅに代入してＹｒｃ
を求め、これと第１の時刻での測定値比Ｖｓｒｓとの比
較を行なう。このとき、例えば Ｙｒｃ−α＞Ｖｓｒｓ となればプロゾーン現象が起こっていると判定する。こ
こでαはＶｓｒｓに対する許容値である。Ｙｒｃが広範
囲な値をとる場合は、Ｙｒｃ・α（例えばα＝０．９
５）として、Ｙｒｃに対する比率で判定してもよい。こ
の許容値を越えてＶｓｒｓが低くなれば、プロゾーン現
象が起こっていると判定され、仮想値と測定値比とのず
れの大きさを例えば（Ｙｒｃ−Ｖｓｒｓ）／Ｙｒｃとし
て算出し、その値に応じて予め定めた再検査条件（検体
量：試薬量比）で再検査し、再検査結果に基づいてその
条件での濃度を算出する。 Ｙｒｃ−α≦Ｖｓｒｓ＜Ｙｒｃ−α であれば、予め作成した検量線に従って定量する。
【００１０】
【実施例】図１にＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）を標準試
料とし、試薬として日水製薬（株）の試薬を用いた場合
の、希釈系列と最終測定時刻における２波長（７００ｎ
ｍ，９００ｎｍ）での吸光度差との関係を示す。図１の
結果によれば、低濃度領域（希釈率４０／１００以下）
では測定値は濃度に対応して増加しているのに対し、希
釈率４０／１００より高濃度側ではこの関係が成立せず
に吸光度が低下しており、希釈率４０／１００より高濃
度の領域はプロゾーン領域（抗原過剰域）となってい
る。
料とし、試薬として日水製薬（株）の試薬を用いた場合
の、希釈系列と最終測定時刻における２波長（７００ｎ
ｍ，９００ｎｍ）での吸光度差との関係を示す。図１の
結果によれば、低濃度領域（希釈率４０／１００以下）
では測定値は濃度に対応して増加しているのに対し、希
釈率４０／１００より高濃度側ではこの関係が成立せず
に吸光度が低下しており、希釈率４０／１００より高濃
度の領域はプロゾーン領域（抗原過剰域）となってい
る。
【００１１】図２に同測定についての第１の時刻での２
波長での吸光度比Ｖｓｒと第２の時刻での２波長での吸
光度比Ｖｅｒとの相関関係を示す。ここで、 Ｖｓｒ＝Ａｓ900／Ａｓ700 Ｖｅｒ＝Ａｅ900／Ａｅ700 であり、Ａｓ700，Ａｓ900は抗原抗体反応開始から６〜
４２秒の範囲におけるそれぞれ７００ｎｍ，９００ｎｍ
での平均吸光度であり、Ａｅ700，Ａｅ900は抗原抗体反
応開始から５分後におけるそれぞれ７００ｎｍ，９００
ｎｍでの平均吸光度である。
波長での吸光度比Ｖｓｒと第２の時刻での２波長での吸
光度比Ｖｅｒとの相関関係を示す。ここで、 Ｖｓｒ＝Ａｓ900／Ａｓ700 Ｖｅｒ＝Ａｅ900／Ａｅ700 であり、Ａｓ700，Ａｓ900は抗原抗体反応開始から６〜
４２秒の範囲におけるそれぞれ７００ｎｍ，９００ｎｍ
での平均吸光度であり、Ａｅ700，Ａｅ900は抗原抗体反
応開始から５分後におけるそれぞれ７００ｎｍ，９００
ｎｍでの平均吸光度である。
【００１２】図２では、低濃度領域（３／１０〜３０／
１００）においては、第１の時刻での２波長での吸光度
比Ｖｓｒと第２の時刻での２波長での吸光度比Ｖｅｒと
の間には直線関係が見られる。図中の数値は希釈率を表
わす。それらの直線関係から回帰式Ｙｒｃ＝ａ・Ｘｒｅ
＋ｂを算出すると、次の回帰式が得られる。 Ｙｒｃ＝１.２１５Ｘｒｅ−０.１６６２ ｒ＝０.９６５３ Ｎ＝９（３／１０〜３０／１００） この回帰式と第１の時刻での２波長での吸光度比Ｖｓｒ
とから、ずれ量（ΔＶｒ）と、ずれ率｛（ΔＶｒ／Ｙｒ
ｃ）×１００｝を算出し、その結果を表１に示す。ΔＶ
ｒ＝Ｙｒｃ−Ｖｓｒであり、ずれ率のデータでアンダー
ラインを付してあるのはプロゾーン領域の試料であるこ
とを示している。
１００）においては、第１の時刻での２波長での吸光度
比Ｖｓｒと第２の時刻での２波長での吸光度比Ｖｅｒと
の間には直線関係が見られる。図中の数値は希釈率を表
わす。それらの直線関係から回帰式Ｙｒｃ＝ａ・Ｘｒｅ
＋ｂを算出すると、次の回帰式が得られる。 Ｙｒｃ＝１.２１５Ｘｒｅ−０.１６６２ ｒ＝０.９６５３ Ｎ＝９（３／１０〜３０／１００） この回帰式と第１の時刻での２波長での吸光度比Ｖｓｒ
とから、ずれ量（ΔＶｒ）と、ずれ率｛（ΔＶｒ／Ｙｒ
ｃ）×１００｝を算出し、その結果を表１に示す。ΔＶ
ｒ＝Ｙｒｃ−Ｖｓｒであり、ずれ率のデータでアンダー
ラインを付してあるのはプロゾーン領域の試料であるこ
とを示している。
【００１３】
【表１】 ＩｇＧ反応液
【００１４】試料として免疫グロブリンの一種であるＩ
ｇＡについて前述のＩｇＧと同様の測定を行なった結果
を図３と図４に示す。ただし、測定する２波長は６００
ｎｍと９００ｎｍとした。図３と図４でも図１と図２と
同様の傾向を示し、ＩｇＡについてもプロゾーンの検出
が可能であることがわかる。試薬はヤトロンイアトロエ
ースＩｇＡである。図４の直線関係から回帰式Ｙｒｃ＝
ａ・Ｘｒｅ＋ｂを算出すると、次の回帰式が得られる。 Ｙｒｃ＝１.１４４Ｘｒｅ−０.０９９５ ｒ＝０.９８２４ Ｎ＝１３（２／１０〜５０／１００） この回帰式と第１の時刻での２波長での吸光度比Ｖｓｒ
とから、ずれ量（ΔＶｒ）と、ずれ率｛（ΔＶｒ／Ｙｒ
ｃ）×１００｝を算出し、その結果を表２に示す。この
場合もずれ率のデータでアンダーラインを付してあるの
はプロゾーン領域の試料であることを示している。
ｇＡについて前述のＩｇＧと同様の測定を行なった結果
を図３と図４に示す。ただし、測定する２波長は６００
ｎｍと９００ｎｍとした。図３と図４でも図１と図２と
同様の傾向を示し、ＩｇＡについてもプロゾーンの検出
が可能であることがわかる。試薬はヤトロンイアトロエ
ースＩｇＡである。図４の直線関係から回帰式Ｙｒｃ＝
ａ・Ｘｒｅ＋ｂを算出すると、次の回帰式が得られる。 Ｙｒｃ＝１.１４４Ｘｒｅ−０.０９９５ ｒ＝０.９８２４ Ｎ＝１３（２／１０〜５０／１００） この回帰式と第１の時刻での２波長での吸光度比Ｖｓｒ
とから、ずれ量（ΔＶｒ）と、ずれ率｛（ΔＶｒ／Ｙｒ
ｃ）×１００｝を算出し、その結果を表２に示す。この
場合もずれ率のデータでアンダーラインを付してあるの
はプロゾーン領域の試料であることを示している。
【００１５】
【表２】 ＩｇＡ反応液
【００１６】図５にプロゾーン判定方法とその判定結果
に従って再検査条件を決定する分析方法の手順をまとめ
て示す。先ず試薬ブランク測定を行ない、次に濃度の異
なる標準液について２波長で標準液測定を行ない、その
一方の波長の測定値で検量線ｆ(ｘ)を作成する。標準液
についての初期段階の２波長の測定値比と濃度計算用測
定時刻における２波長の測定値比を用いてプロゾーン判
定用の回帰直線を求める。この回帰直線は一次関数の形
で Ｙｒｃ＝ａ・Ｘｒｅ＋ｂ とし、最小自乗法により計算する。
に従って再検査条件を決定する分析方法の手順をまとめ
て示す。先ず試薬ブランク測定を行ない、次に濃度の異
なる標準液について２波長で標準液測定を行ない、その
一方の波長の測定値で検量線ｆ(ｘ)を作成する。標準液
についての初期段階の２波長の測定値比と濃度計算用測
定時刻における２波長の測定値比を用いてプロゾーン判
定用の回帰直線を求める。この回帰直線は一次関数の形
で Ｙｒｃ＝ａ・Ｘｒｅ＋ｂ とし、最小自乗法により計算する。
【００１７】次に、試料を分析する。反応初期の時点で
の２波長の測定値比をＶｓｒｓ、濃度計算時点での測定
値比をＶｅｒｓとする。測定値比Ｖｅｒｓを回帰直線の
Ｘｒｅに代入して初期の段階での仮想値Ｙｒｃを算出す
る。この試料が再検査試料でない場合には、算出された
初期の仮想値Ｙｒｃと実測値Ｖｓｒｓとの比較を行な
う。比較ではＹｒｃ−αとＶｓｒｓとの比較を行なう。
αは許容値である。許容値αは、測定誤差が存在するた
めに、過去の再現精度を参考にして決めておく。また、
Ｙｒｃ・α＞Ｖｓｒｓ（例えばα＝０．９５）として、
プロゾーン判定を行なってもよい。この比較の結果、Ｙ
ｒｃ−α＞Ｖｓｒｓでなければプロゾーン現象は起こっ
ていないと判定し、検量線ｆ(ｘ)に従って濃度Ｃを計算
し出力して分析を終了する。
の２波長の測定値比をＶｓｒｓ、濃度計算時点での測定
値比をＶｅｒｓとする。測定値比Ｖｅｒｓを回帰直線の
Ｘｒｅに代入して初期の段階での仮想値Ｙｒｃを算出す
る。この試料が再検査試料でない場合には、算出された
初期の仮想値Ｙｒｃと実測値Ｖｓｒｓとの比較を行な
う。比較ではＹｒｃ−αとＶｓｒｓとの比較を行なう。
αは許容値である。許容値αは、測定誤差が存在するた
めに、過去の再現精度を参考にして決めておく。また、
Ｙｒｃ・α＞Ｖｓｒｓ（例えばα＝０．９５）として、
プロゾーン判定を行なってもよい。この比較の結果、Ｙ
ｒｃ−α＞Ｖｓｒｓでなければプロゾーン現象は起こっ
ていないと判定し、検量線ｆ(ｘ)に従って濃度Ｃを計算
し出力して分析を終了する。
【００１８】算出された初期の仮想値Ｙｒｃと実測値Ｖ
ｓｒｓとの比較の結果、Ｙｒｃ−α＞Ｖｓｒｓとなれ
ば、プロゾーン現象が起こっていると判定し、仮想値と
実測値とのずれ率を計算する。ずれ率Ｄは Ｄ＝ΔＶｒ×１００／Ｙｒｃ ＝（Ｙｒｃ−Ｖｓｒｓ）×１００／Ｙｒｃ として計算する。そのずれ率が０〜１０％の間にあれば
試料量を１／４に希釈して再検査を行ない、そのずれ率
が１０〜４０％の間にあれば試料量を１／１０に希釈し
て再検査を行なう。希釈率１／１０までは試料の減量及
び試薬の増量により自動的に希釈する機能が備わってい
るものとする。再検査を行う高濃度のプロゾーン検体は
全検体数からすると割合が非常に少ないから全体のコス
トからすれば大した上昇にはならない。もしずれ率が４
０％以上で自動的に希釈できない場合は、例えば「試料
を１／５０に希釈して下さい」というような表示を出し
て分析を終了する。
ｓｒｓとの比較の結果、Ｙｒｃ−α＞Ｖｓｒｓとなれ
ば、プロゾーン現象が起こっていると判定し、仮想値と
実測値とのずれ率を計算する。ずれ率Ｄは Ｄ＝ΔＶｒ×１００／Ｙｒｃ ＝（Ｙｒｃ−Ｖｓｒｓ）×１００／Ｙｒｃ として計算する。そのずれ率が０〜１０％の間にあれば
試料量を１／４に希釈して再検査を行ない、そのずれ率
が１０〜４０％の間にあれば試料量を１／１０に希釈し
て再検査を行なう。希釈率１／１０までは試料の減量及
び試薬の増量により自動的に希釈する機能が備わってい
るものとする。再検査を行う高濃度のプロゾーン検体は
全検体数からすると割合が非常に少ないから全体のコス
トからすれば大した上昇にはならない。もしずれ率が４
０％以上で自動的に希釈できない場合は、例えば「試料
を１／５０に希釈して下さい」というような表示を出し
て分析を終了する。
【００１９】測定された試料が再検査試料である場合に
は、検量線に従って濃度を計算した後、再検査での希釈
率が１／４であったか１／１０であったかにより検量線
から求めた濃度を希釈率に従って元の濃度に換算する作
業を行なう。初回の検査での試料量がｖｓ1、再検査で
の試料量がｖｓ2、試薬量は何れもｖｒとし、再検査で
で求められた濃度をＣ1とすると、試料の元の濃度Ｃは Ｃ＝Ｃ1×{ｖｓ1／(ｖｓ1＋ｖｒ)}／{ｖｓ2／(ｖｓ2＋
ｖｒ)} として計算する。濃度Ｃの計算結果を出力し、分析を終
了する。
は、検量線に従って濃度を計算した後、再検査での希釈
率が１／４であったか１／１０であったかにより検量線
から求めた濃度を希釈率に従って元の濃度に換算する作
業を行なう。初回の検査での試料量がｖｓ1、再検査で
の試料量がｖｓ2、試薬量は何れもｖｒとし、再検査で
で求められた濃度をＣ1とすると、試料の元の濃度Ｃは Ｃ＝Ｃ1×{ｖｓ1／(ｖｓ1＋ｖｒ)}／{ｖｓ2／(ｖｓ2＋
ｖｒ)} として計算する。濃度Ｃの計算結果を出力し、分析を終
了する。
【００２０】本発明が適用される具体的な自動分析装置
の一例を図６に示す。図６で、血液などの検体は検体容
器に入れられ、複数本の検体容器が配置された検体ラッ
ク２がベルトコンベア式の搬送路４に沿って移動させら
れる。搬送路４は図で左から右方向に検体ラック２を移
送する往路４ａと、逆に右から左方向へ検体ラックを移
送する復路４ｂとからなっている。図で往路４ａの左端
部分には検体ラック２を往路４ａに送り出す検体ラック
供給部６が設けられており、復路４ｂの左端部分には測
定終了後の検体ラック２を収納する収納部８が設けられ
ている。図で搬送路４の右端部分には往路４ａを送られ
てきた検体ラック２を一次収容し、分析終了後に検体ラ
ックを復路４ｂに送り出すラック待機部１０が設けられ
ている。検体ラック２は往路４ａを移送中に分析ユニッ
ト２６ａ，２６ｂの検体分注位置で停止させられ、分析
ユニット２６ａ，２６ｂの反応管に分注される。復路４
ｂでは往路４ａで分注されて測定された検体の測定結果
に従って、再検査の必要のある検体が再分注される。
の一例を図６に示す。図６で、血液などの検体は検体容
器に入れられ、複数本の検体容器が配置された検体ラッ
ク２がベルトコンベア式の搬送路４に沿って移動させら
れる。搬送路４は図で左から右方向に検体ラック２を移
送する往路４ａと、逆に右から左方向へ検体ラックを移
送する復路４ｂとからなっている。図で往路４ａの左端
部分には検体ラック２を往路４ａに送り出す検体ラック
供給部６が設けられており、復路４ｂの左端部分には測
定終了後の検体ラック２を収納する収納部８が設けられ
ている。図で搬送路４の右端部分には往路４ａを送られ
てきた検体ラック２を一次収容し、分析終了後に検体ラ
ックを復路４ｂに送り出すラック待機部１０が設けられ
ている。検体ラック２は往路４ａを移送中に分析ユニッ
ト２６ａ，２６ｂの検体分注位置で停止させられ、分析
ユニット２６ａ，２６ｂの反応管に分注される。復路４
ｂでは往路４ａで分注されて測定された検体の測定結果
に従って、再検査の必要のある検体が再分注される。
【００２１】搬送路４に沿って２台の分析ユニット１２
ａと１２ｂが配置されている。いずれも同じ構造をして
いる。各分析ユニットにはキュベットを兼ねる反応容器
１５が配置された反応ディスク１４が搬送路４の近くに
配置されており、搬送路４ａ，４ｂには反応ディスク１
４の近傍の検体分注位置で検体ラック２を停止させる停
止装置（図示略）が設けられている。搬送路４ａ又は４
ｂ上に停止させられた検体ラック２から検体を反応容器
１５に分注するために、ノズルを備えたピペッタ１６が
配置されている。各分析ユニット１２ａ，１２ｂには反
応容器１５に試薬を分注するために２台のターンテーブ
ル式試薬庫１８ａ，１８ｂが配置されており、各試薬庫
１８ａ，１８ｂには試薬を反応容器１５に分注するディ
スペンサ２０ａ，２０ｂが設けられている。反応ディス
ク１４で分析終了後の反応容器を洗浄するために洗浄機
構２２が設けられている。反応ディスク１４には検体と
試薬が入れられた反応容器１５の反応を測定するため
に、光学式測定部が設けられているが図示は省略されて
いる。
ａと１２ｂが配置されている。いずれも同じ構造をして
いる。各分析ユニットにはキュベットを兼ねる反応容器
１５が配置された反応ディスク１４が搬送路４の近くに
配置されており、搬送路４ａ，４ｂには反応ディスク１
４の近傍の検体分注位置で検体ラック２を停止させる停
止装置（図示略）が設けられている。搬送路４ａ又は４
ｂ上に停止させられた検体ラック２から検体を反応容器
１５に分注するために、ノズルを備えたピペッタ１６が
配置されている。各分析ユニット１２ａ，１２ｂには反
応容器１５に試薬を分注するために２台のターンテーブ
ル式試薬庫１８ａ，１８ｂが配置されており、各試薬庫
１８ａ，１８ｂには試薬を反応容器１５に分注するディ
スペンサ２０ａ，２０ｂが設けられている。反応ディス
ク１４で分析終了後の反応容器を洗浄するために洗浄機
構２２が設けられている。反応ディスク１４には検体と
試薬が入れられた反応容器１５の反応を測定するため
に、光学式測定部が設けられているが図示は省略されて
いる。
【００２２】検体ラック供給部６と収納部８にはインタ
ーフェースとＣＰＵ２４が設けられており、各分析ユニ
ット１２ａと１２ｂにもそれぞれインターフェースとＣ
ＰＵ２６ａ，２６ｂが設けられており、待機部１０にも
インターフェースとＣＰＵ２８が設けられている。それ
らのＣＰＵ２４，２６ａ，２６ｂ，２８はメインＣＰＵ
３０と接続されている。メインＣＰＵ３０にはさらにＣ
ＲＴ３２、キーボード３４及びプリンタ３６が接続され
ている。
ーフェースとＣＰＵ２４が設けられており、各分析ユニ
ット１２ａと１２ｂにもそれぞれインターフェースとＣ
ＰＵ２６ａ，２６ｂが設けられており、待機部１０にも
インターフェースとＣＰＵ２８が設けられている。それ
らのＣＰＵ２４，２６ａ，２６ｂ，２８はメインＣＰＵ
３０と接続されている。メインＣＰＵ３０にはさらにＣ
ＲＴ３２、キーボード３４及びプリンタ３６が接続され
ている。
【００２３】図６の自動分析装置の動作について説明す
る。各項目の測定に必要な試薬は分析ユニットの試薬庫
１８ａ，１８ｂにセットされる。検体ラック２を供給部
６に並べ、キーボード３４から動作を開始させると、反
応容器１５は洗浄機構２２で洗浄水により洗浄される。
洗浄をすませた反応容器１５には水が入れられて測定波
長によるセルブランク測定がなされる。セルブランク測
定後、水切りをすませた空の反応容器１５が検体分注位
置に移動したとき、検体ラック２が搬送路の往路４ａを
送られてきて、検体分注位置で停止させられ、まず最初
に分析する測定項目のためにピペッタ１６によって検体
が測定項目ごとに定められた検体量だけ反応容器１５に
分注される。検体分注後のピペッタ１６のノズルは図に
は現れていない洗浄ポットに移動してノズルの内外が純
水により洗浄される。その後、順次次の同一検体の次の
項目又は次の別の検体の分注が他の反応容器１５に行な
われる。
る。各項目の測定に必要な試薬は分析ユニットの試薬庫
１８ａ，１８ｂにセットされる。検体ラック２を供給部
６に並べ、キーボード３４から動作を開始させると、反
応容器１５は洗浄機構２２で洗浄水により洗浄される。
洗浄をすませた反応容器１５には水が入れられて測定波
長によるセルブランク測定がなされる。セルブランク測
定後、水切りをすませた空の反応容器１５が検体分注位
置に移動したとき、検体ラック２が搬送路の往路４ａを
送られてきて、検体分注位置で停止させられ、まず最初
に分析する測定項目のためにピペッタ１６によって検体
が測定項目ごとに定められた検体量だけ反応容器１５に
分注される。検体分注後のピペッタ１６のノズルは図に
は現れていない洗浄ポットに移動してノズルの内外が純
水により洗浄される。その後、順次次の同一検体の次の
項目又は次の別の検体の分注が他の反応容器１５に行な
われる。
【００２４】反応ディスク１４で検体の分注された反応
容器１５が試薬分注位置へ移動してくると、ディスペン
サ２０ａ又は２０ｂによって所定の試薬が所定量吸引さ
れて反応容器１５に分注される。分注後、ディスペンサ
２０ａ，２０ｂのプローブは図には現われていない洗浄
位置に移動してプローブの内外が純水で洗浄される。そ
の後、ディスペンサ２０ａ，２０ｂは次の試薬の分注動
作に移る。
容器１５が試薬分注位置へ移動してくると、ディスペン
サ２０ａ又は２０ｂによって所定の試薬が所定量吸引さ
れて反応容器１５に分注される。分注後、ディスペンサ
２０ａ，２０ｂのプローブは図には現われていない洗浄
位置に移動してプローブの内外が純水で洗浄される。そ
の後、ディスペンサ２０ａ，２０ｂは次の試薬の分注動
作に移る。
【００２５】検体ラック２は往路を進んで待機部１０で
待機し、検体の分析結果を待って復路４ｂへ送り出さ
れ、収納部８へ収納される。復路４ｂを移動中に、再検
査の必要のある検体は検体分注位置で停止させられて再
び検体分注が行なわれる。反応ディスク１４では検体と
試薬が混ぜられた反応液の吸光度が光学式測定部により
測定される。分析の終了した反応容器１５は洗浄位置で
反応液が吸引されて排出され、水洗され、セルブランク
測定の後、反応容器内の水切りが行なわれて新たな検体
の反応容器として準備される。図６のように往路と複路
のベルトライン試料搬送システムを有する自動分析装置
に本発明を適用すれば、往路での測定でプロゾーン現象
が起こっていると判定されたとき、複路で再検査を自動
的に行なうといった対応が素早く行なうことができるよ
うになる。
待機し、検体の分析結果を待って復路４ｂへ送り出さ
れ、収納部８へ収納される。復路４ｂを移動中に、再検
査の必要のある検体は検体分注位置で停止させられて再
び検体分注が行なわれる。反応ディスク１４では検体と
試薬が混ぜられた反応液の吸光度が光学式測定部により
測定される。分析の終了した反応容器１５は洗浄位置で
反応液が吸引されて排出され、水洗され、セルブランク
測定の後、反応容器内の水切りが行なわれて新たな検体
の反応容器として準備される。図６のように往路と複路
のベルトライン試料搬送システムを有する自動分析装置
に本発明を適用すれば、往路での測定でプロゾーン現象
が起こっていると判定されたとき、複路で再検査を自動
的に行なうといった対応が素早く行なうことができるよ
うになる。
【００２６】
【発明の効果】本発明では２波長での測定値比を求めて
粒子の生成→粒子の肥大化の過程をモニタすることによ
り、プロゾーン現象が起こっていない濃度域においては
反応初期の２波長での測定値比と反応が十分に進行した
後での２波長での測定値比との間には例えば一次式で表
わされる関係があることを利用し、試料の測定値がその
関係からずれている程度によってプロゾーン域か否かを
判定するようにしたので、ユーザーにおいてはプロゾー
ン現象が発生したか否かを判定する数値、例えば、既に
引用した日本臨床検査自動化学会会誌第１４巻第３号
（１９８９年）の第１７３ページに述べられている判定
値「ＡＧ ＥＸＥＳＳ」や、他の手法での「プロゾーン
チェック値」（濃度の関数）などを設定する必要がな
い。本発明では初期の段階の２波長での吸光度比と十分
な時間が経過した後の２波長での吸光度比の関係（これ
は濃度の関数ではない）を回帰式として記憶する必要が
あるが、これは自動分析装置で較正操作として自動的に
行なうことが可能であり、ユーザーの手を煩わすことは
ない。
粒子の生成→粒子の肥大化の過程をモニタすることによ
り、プロゾーン現象が起こっていない濃度域においては
反応初期の２波長での測定値比と反応が十分に進行した
後での２波長での測定値比との間には例えば一次式で表
わされる関係があることを利用し、試料の測定値がその
関係からずれている程度によってプロゾーン域か否かを
判定するようにしたので、ユーザーにおいてはプロゾー
ン現象が発生したか否かを判定する数値、例えば、既に
引用した日本臨床検査自動化学会会誌第１４巻第３号
（１９８９年）の第１７３ページに述べられている判定
値「ＡＧ ＥＸＥＳＳ」や、他の手法での「プロゾーン
チェック値」（濃度の関数）などを設定する必要がな
い。本発明では初期の段階の２波長での吸光度比と十分
な時間が経過した後の２波長での吸光度比の関係（これ
は濃度の関数ではない）を回帰式として記憶する必要が
あるが、これは自動分析装置で較正操作として自動的に
行なうことが可能であり、ユーザーの手を煩わすことは
ない。
【００２７】検体分析に先立ってプロゾーン判定値を決
定する予備検討の必要がないことから、高価な既知濃度
の試料を購入したり、入手困難な高濃度試料の入手や試
料ロットが変わる毎の煩雑なプロゾーン判定値の決定操
作に悩まされることもない。図６に示したような最も普
及しているシングルマルチ方式の自動分析装置に容易に
適用することができる。プロゾーン現象が起こっている
と判定された場合、再検査条件（試料量／試薬量）比を
仮想値と実測値比とのずれ量から定めることが可能であ
る。
定する予備検討の必要がないことから、高価な既知濃度
の試料を購入したり、入手困難な高濃度試料の入手や試
料ロットが変わる毎の煩雑なプロゾーン判定値の決定操
作に悩まされることもない。図６に示したような最も普
及しているシングルマルチ方式の自動分析装置に容易に
適用することができる。プロゾーン現象が起こっている
と判定された場合、再検査条件（試料量／試薬量）比を
仮想値と実測値比とのずれ量から定めることが可能であ
る。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＩｇＧ標準試料の希釈系列と最終測定時刻にお
ける２波長（７００ｎｍ，９００ｎｍ）での吸光度差と
の関係を示す図である。
ける２波長（７００ｎｍ，９００ｎｍ）での吸光度差と
の関係を示す図である。
【図２】ＩｇＧ標準試料の反応初期の２波長での吸光度
比Ｖｓｒと最終測定時刻の２波長での吸光度比Ｖｅｒと
の相関関係を示す図である。
比Ｖｓｒと最終測定時刻の２波長での吸光度比Ｖｅｒと
の相関関係を示す図である。
【図３】ＩｇＡ標準試料の希釈系列と最終測定時刻にお
ける２波長（６００ｎｍ，９００ｎｍ）での吸光度差と
の関係を示す図である。
ける２波長（６００ｎｍ，９００ｎｍ）での吸光度差と
の関係を示す図である。
【図４】ＩｇＡ標準試料の反応初期の２波長での吸光度
比Ｖｓｒと最終測定時刻の２波長での吸光度比Ｖｅｒと
の相関関係を示す図である。
比Ｖｓｒと最終測定時刻の２波長での吸光度比Ｖｅｒと
の相関関係を示す図である。
【図５】一実施例の動作を示すフローチャート図であ
る。
る。
【図６】本発明が適用される自動分析装置の一例を示す
図である。
図である。
Claims (2)
- 【請求項１】 濃度の異なる複数種類の標準試料につい
て抗原抗体反応の初期段階の第１の時刻及び反応が十分
に進行した後の第２の時刻で２種類の波長光を抗原抗体
反応液に照射してその透過光の測定値比を求め、それら
の測定値比のうちプロゾーン現象が起こっていない濃度
域の両時刻間の測定値比の関係を示す回帰式を算出し、
試料反応液について前記第１の時刻及び第２の時刻で前
記の２種類の波長光による測定を行ない、その測定値比
と前記回帰式から算出される仮想値とのずれからその測
定値がプロゾーン現象の起こっていない適正な抗原抗体
反応下で行なわれたか否かを判定するプロゾーン判定方
法。 - 【請求項２】 濃度の異なる複数種類の標準試料につい
て抗原抗体反応の初期段階の第１の時刻及び反応が十分
に進行した後の第２の時刻で２種類の波長光を抗原抗体
反応液に照射してその透過光の測定値比を求め、それら
の測定値比のうちプロゾーン現象が起こっていない濃度
域の両時刻間の測定値比の関係を示す回帰式を算出し、
試料反応液について前記第１の時刻及び第２の時刻で前
記の２種類の波長光による測定を行ない、試料反応液に
ついての前記第２の時刻での測定値比を前記回帰式に代
入して得た前記第１の時刻での仮想値と、試料反応液に
ついての前記第１の時刻での測定値比とのずれの大きさ
に応じて再検査の要否を判定し、再検査においては前記
ずれの大きさに応じて再検査用の試料量と試薬量との比
を決定する分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04269752A JP3127611B2 (ja) | 1992-09-10 | 1992-09-10 | 抗原抗体反応におけるプロゾーン判定方法及び分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04269752A JP3127611B2 (ja) | 1992-09-10 | 1992-09-10 | 抗原抗体反応におけるプロゾーン判定方法及び分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0694717A JPH0694717A (ja) | 1994-04-08 |
| JP3127611B2 true JP3127611B2 (ja) | 2001-01-29 |
Family
ID=17476666
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04269752A Expired - Fee Related JP3127611B2 (ja) | 1992-09-10 | 1992-09-10 | 抗原抗体反応におけるプロゾーン判定方法及び分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3127611B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05319522A (ja) * | 1992-05-22 | 1993-12-03 | Sugiyasu Kogyo Kk | 立体倉庫用棚構造体 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60117699T2 (de) * | 2000-12-26 | 2006-10-19 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd., Kadoma | Analyseverfahren durch spezifisches binden und vorrichtung, die das verfahren einsetzt |
| EP2657681A1 (en) | 2012-04-26 | 2013-10-30 | Roche Diagnostics GmbH | Improvement of the sensitivity and the dynamic range of photometric assays by generating multiple calibration curves |
| EP2837937A1 (en) | 2013-08-15 | 2015-02-18 | Roche Diagniostics GmbH | Method for the detection of the prozone effect of photometric assays |
| EP3489658A4 (en) * | 2016-07-19 | 2020-02-26 | Hitachi High-Technologies Corporation | AUTOMATIC ANALYSIS DEVICE AND AUTOMATIC ANALYSIS METHOD |
| CN111051887B (zh) * | 2017-09-08 | 2023-12-29 | 爱芙乐赛制药株式会社 | 分析装置和分析方法 |
| CN109030801B (zh) * | 2018-06-02 | 2021-08-20 | 宏葵生物（中国）股份有限公司 | 一种临床样本自动生化分析仪 |
| EP3857203B1 (en) * | 2018-09-28 | 2023-11-08 | Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. | Methods for detecting hook effect(s) associated with anaylte(s) of interest during or resulting from the conductance of diagnostic assay(s) |
-
1992
- 1992-09-10 JP JP04269752A patent/JP3127611B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05319522A (ja) * | 1992-05-22 | 1993-12-03 | Sugiyasu Kogyo Kk | 立体倉庫用棚構造体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0694717A (ja) | 1994-04-08 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |