JP3259431B2 - 免疫比濁分析方法 - Google Patents
免疫比濁分析方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は医療機関等で使用される
生化学自動分析装置に適用可能な比濁法による抗原抗体
反応成分の定量方法に関するものである。
生化学自動分析装置に適用可能な比濁法による抗原抗体
反応成分の定量方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】抗原抗体反応では規定の測定範囲を越え
て抗原が過剰に加えられた状態ではその吸光度は真の値
よりも低い値となる。そのような抗原過剰域をプロゾー
ン領域と称している。測定された抗原抗体反応がプロゾ
ーン領域か否かを判定する方法としては次のような幾つ
かの方法が知られている。 （ａ）抗体試薬又は試料を再添加する方法。 （ｂ）複数の測定値から濁度（見かけの吸光度）の比又
は濃度の比をとる方法。 （ｃ）複数個の測定値から反応速度の比をとる方法。 （ｄ）複数個の測定値から最大反応速度、最大反応速度
に達するまでの反応時間及び抗原濃度の三次元検量線を
用いる方法。 （ｅ）２波長測定を行ない、その吸光度比より判定する
方法。 これらの方法は、例えば日本臨床検査自動化学会会誌第
１５巻第６号第６７５〜６８７ページ（１９９０年）、
同誌第１４巻第３号第１７１〜１７６ページ（１９８９
年）などに記載されている。
て抗原が過剰に加えられた状態ではその吸光度は真の値
よりも低い値となる。そのような抗原過剰域をプロゾー
ン領域と称している。測定された抗原抗体反応がプロゾ
ーン領域か否かを判定する方法としては次のような幾つ
かの方法が知られている。 （ａ）抗体試薬又は試料を再添加する方法。 （ｂ）複数の測定値から濁度（見かけの吸光度）の比又
は濃度の比をとる方法。 （ｃ）複数個の測定値から反応速度の比をとる方法。 （ｄ）複数個の測定値から最大反応速度、最大反応速度
に達するまでの反応時間及び抗原濃度の三次元検量線を
用いる方法。 （ｅ）２波長測定を行ない、その吸光度比より判定する
方法。 これらの方法は、例えば日本臨床検査自動化学会会誌第
１５巻第６号第６７５〜６８７ページ（１９９０年）、
同誌第１４巻第３号第１７１〜１７６ページ（１９８９
年）などに記載されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】抗原抗体反応が十分進
行した後の吸光度などの光学的測定値Ａ2を用いて抗原
抗体反応成分の濃度との関係を示す検量線を作成する
と、プロゾーン領域においては検量線が下方へ曲がる。
そのため、プロゾーン領域ではその検量線を用いて成分
を定量することは困難である。測定結果がプロゾーン領
域のものとなった場合には、試料を希釈したり試料採取
量を減少させるなどの方法により再検査をする必要が生
じ、高価な試薬や時間に無駄が生じる。
行した後の吸光度などの光学的測定値Ａ2を用いて抗原
抗体反応成分の濃度との関係を示す検量線を作成する
と、プロゾーン領域においては検量線が下方へ曲がる。
そのため、プロゾーン領域ではその検量線を用いて成分
を定量することは困難である。測定結果がプロゾーン領
域のものとなった場合には、試料を希釈したり試料採取
量を減少させるなどの方法により再検査をする必要が生
じ、高価な試薬や時間に無駄が生じる。
【０００４】もし、光学的測定値Ａ2と濃度との関係の
検量線を用いようとすれば、検量線の関数が複雑なた
め、複数種類の高価な標準試料が必要になる。そこで本
発明は再検査を必要とせず、しかも複雑な関数の検量線
を用いることなく、プロゾーン領域の試料であっても容
易に定量できるようにすることを目的とするものであ
る。
検量線を用いようとすれば、検量線の関数が複雑なた
め、複数種類の高価な標準試料が必要になる。そこで本
発明は再検査を必要とせず、しかも複雑な関数の検量線
を用いることなく、プロゾーン領域の試料であっても容
易に定量できるようにすることを目的とするものであ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の免疫比濁分析方
法では、標準試料について抗原抗体反応の初期段階の第
１の時刻での光学的測定値Ａ1と抗原抗体反応が十分進
行した後の第２の時刻での光学的測定値Ａ2を含み、標
準試料の抗原抗体反応成分に対して単調関数となる修正
値ｆ（Ａ1，Ａ2）を定め、その修正値ｆ（Ａ1，Ａ2）と
抗原抗体反応成分との関係を示す検量線を求め、未知試
料について測定した抗原抗体反応の初期段階の第１の時
刻での光学的測定値Ａ1と抗原抗体反応が十分進行した
後の第２の時刻での光学的測定値Ａ2から修正値ｆ
（Ａ1，Ａ2）を算出し、前記検量線を用いて未知試料の
抗原抗体反応成分の定量を行なう。
法では、標準試料について抗原抗体反応の初期段階の第
１の時刻での光学的測定値Ａ1と抗原抗体反応が十分進
行した後の第２の時刻での光学的測定値Ａ2を含み、標
準試料の抗原抗体反応成分に対して単調関数となる修正
値ｆ（Ａ1，Ａ2）を定め、その修正値ｆ（Ａ1，Ａ2）と
抗原抗体反応成分との関係を示す検量線を求め、未知試
料について測定した抗原抗体反応の初期段階の第１の時
刻での光学的測定値Ａ1と抗原抗体反応が十分進行した
後の第２の時刻での光学的測定値Ａ2から修正値ｆ
（Ａ1，Ａ2）を算出し、前記検量線を用いて未知試料の
抗原抗体反応成分の定量を行なう。
【０００６】非プロゾーン領域からプロゾーン領域に渡
って検量線が単調関数となるように修正した測定値ｆ
（Ａ1，Ａ2）の一態様は、濃度の異なる複数種類の標準
試料について抗原抗体反応の初期段階の第１の時刻での
吸光度測定値Ａ1と、反応が十分進行した後の第２の時
刻での吸光度測定値Ａ2を測定し、Ａ2をＡ1で除し、そ
の値をＡ2に乗じたものである。すなわち、修正値ｆ
（Ａ1，Ａ2）は Ａ2（Ａ2／Ａ1）又はＡ2（Ａ2／Ａ1）2 （１） である。この修正値と各標準試料濃度とから検量線を作
成する。未知試料について測定されたＡ1，Ａ2からＡ2
（Ａ2／Ａ1）又はＡ2（Ａ2／Ａ1）2を算出し、その算出
された値を検量線にあてはめて定量する。
って検量線が単調関数となるように修正した測定値ｆ
（Ａ1，Ａ2）の一態様は、濃度の異なる複数種類の標準
試料について抗原抗体反応の初期段階の第１の時刻での
吸光度測定値Ａ1と、反応が十分進行した後の第２の時
刻での吸光度測定値Ａ2を測定し、Ａ2をＡ1で除し、そ
の値をＡ2に乗じたものである。すなわち、修正値ｆ
（Ａ1，Ａ2）は Ａ2（Ａ2／Ａ1）又はＡ2（Ａ2／Ａ1）2 （１） である。この修正値と各標準試料濃度とから検量線を作
成する。未知試料について測定されたＡ1，Ａ2からＡ2
（Ａ2／Ａ1）又はＡ2（Ａ2／Ａ1）2を算出し、その算出
された値を検量線にあてはめて定量する。
【０００７】他の態様においては、プロゾーン現象が起
こっていない濃度域の標準試料についてＡ1とＡ2との関
係を示す回帰式 Ｙａｃ＝ａ・Ａ2＋ｂ （２） を例えば最小二乗法により算出し、その回帰式に測定値
Ａ2を代入して得られる仮想値Ｙａｃを用い、修正値ｆ
（Ａ1，Ａ2）として Ａ2〔１／｛１−（Ｙａｃ−Ａ1）／Ｙａｃ｝〕又は Ａ2〔１／｛１−（Ｙａｃ−Ａ1）／Ｙａｃ｝〕2 （３） を用いる。この修正値と各標準試料濃度とから検量線を
作成する。未知試料について測定されたＡ1，Ａ2から上
記（３）式の修正値を算出し、その算出された値を検量
線にあてはめて定量する。
こっていない濃度域の標準試料についてＡ1とＡ2との関
係を示す回帰式 Ｙａｃ＝ａ・Ａ2＋ｂ （２） を例えば最小二乗法により算出し、その回帰式に測定値
Ａ2を代入して得られる仮想値Ｙａｃを用い、修正値ｆ
（Ａ1，Ａ2）として Ａ2〔１／｛１−（Ｙａｃ−Ａ1）／Ｙａｃ｝〕又は Ａ2〔１／｛１−（Ｙａｃ−Ａ1）／Ｙａｃ｝〕2 （３） を用いる。この修正値と各標準試料濃度とから検量線を
作成する。未知試料について測定されたＡ1，Ａ2から上
記（３）式の修正値を算出し、その算出された値を検量
線にあてはめて定量する。
【０００８】
【作用】プロゾーン濃度域では第２の時刻の吸光度Ａ2
は直近の低濃度域の吸光度よりも低い値となるが、この
濃度液では（Ａ2／Ａ1）≧１となるので、Ａ2に（Ａ2／
Ａ1）の１乗または２乗を掛けることによって、この修
正値を用いると検量線上には極値は存在しなくなり、単
調関数となる。
は直近の低濃度域の吸光度よりも低い値となるが、この
濃度液では（Ａ2／Ａ1）≧１となるので、Ａ2に（Ａ2／
Ａ1）の１乗または２乗を掛けることによって、この修
正値を用いると検量線上には極値は存在しなくなり、単
調関数となる。
【０００９】第２の態様の修正測定値についても、プロ
ゾーン濃度域では１／｛１−（Ｙａｃ−Ａ1）／Ｙａ
ｃ｝≧１となるので、Ａ2にこの修正値を掛けることに
よって検量線は単調関数となる。回帰式Ｙａｃ＝ａ・Ａ
2＋ｂでｂ＝０となるときは、第１の修正測定値（１）
と第２の修正測定値（３）の結果が一致する。ｂ＝０と
なるか否かは、第１の時刻と第２の時刻の選び方や、測
定波長の選び方によって変わる。
ゾーン濃度域では１／｛１−（Ｙａｃ−Ａ1）／Ｙａ
ｃ｝≧１となるので、Ａ2にこの修正値を掛けることに
よって検量線は単調関数となる。回帰式Ｙａｃ＝ａ・Ａ
2＋ｂでｂ＝０となるときは、第１の修正測定値（１）
と第２の修正測定値（３）の結果が一致する。ｂ＝０と
なるか否かは、第１の時刻と第２の時刻の選び方や、測
定波長の選び方によって変わる。
【００１０】
【実施例】図１にＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）を標準試
料とし、試薬として日水製薬（株）の試薬を用いた場合
の反応タイムコースを示す。測定波長が３４０ｎｍであ
る。 このような測定データに基づいて反応開始１分後
と１５分後の各波長における吸光度を示したものが図２
である。図２の結果によれば、低濃度領域（４０／１０
０以下）ではほぼ直線性があるのに対し、希釈率４０／
１００より高濃度側では直線からずれて吸光度が低下し
ており、高濃度領域はプロゾーン領域（抗原過剰域）で
あることがわかる。また、測定波長７５０ｎｍについて
も類似のタイムコースが見られ、希釈率５０／１００よ
り高濃度域ではプロゾーン現象が見られる。
料とし、試薬として日水製薬（株）の試薬を用いた場合
の反応タイムコースを示す。測定波長が３４０ｎｍであ
る。 このような測定データに基づいて反応開始１分後
と１５分後の各波長における吸光度を示したものが図２
である。図２の結果によれば、低濃度領域（４０／１０
０以下）ではほぼ直線性があるのに対し、希釈率４０／
１００より高濃度側では直線からずれて吸光度が低下し
ており、高濃度領域はプロゾーン領域（抗原過剰域）で
あることがわかる。また、測定波長７５０ｎｍについて
も類似のタイムコースが見られ、希釈率５０／１００よ
り高濃度域ではプロゾーン現象が見られる。
【００１１】測定波長３４０ｎｍについての図１の測定
データに基づいて、反応初期にあたる開始から１分後、
２分後、３分後、５分後の吸光度測定値と１５分後の吸
光度測定値との関係を図示したのが図３である。図３か
ら初期の段階の各測定値と１５分後の測定値との間には
低濃度領域で直線関係が見られる。それらの直線関係か
ら回帰式 Ｙａｃ＝ａ・Ａ2＋ｂ を算出すると、それ
ぞれ次に示されるような回帰式が得られる。 １分後： Ｙａｃ（１）＝０．９０８５・Ａ2−６３ ２分後： Ｙａｃ（２）＝０．９４３５・Ａ2−５２ ３分後： Ｙａｃ（３）＝０．９７７１・Ａ2−３５ ５分後： Ｙａｃ（５）＝０．９９１９・Ａ2−２２
データに基づいて、反応初期にあたる開始から１分後、
２分後、３分後、５分後の吸光度測定値と１５分後の吸
光度測定値との関係を図示したのが図３である。図３か
ら初期の段階の各測定値と１５分後の測定値との間には
低濃度領域で直線関係が見られる。それらの直線関係か
ら回帰式 Ｙａｃ＝ａ・Ａ2＋ｂ を算出すると、それ
ぞれ次に示されるような回帰式が得られる。 １分後： Ｙａｃ（１）＝０．９０８５・Ａ2−６３ ２分後： Ｙａｃ（２）＝０．９４３５・Ａ2−５２ ３分後： Ｙａｃ（３）＝０．９７７１・Ａ2−３５ ５分後： Ｙａｃ（５）＝０．９９１９・Ａ2−２２
【００１２】図３中に０を基準として垂直方向の矢印で
示される大きさは、上記の回帰式のＡ2に１５分後の吸
光度測定値Ａ2を代入して求めた仮想値Ｙａｃである。
また、図３中には回帰直線と実測値Ａｓとの差ΔＡも垂
直方向の矢印で示されている。図３を図２と合わせて見
ると、Ａｓが回帰直線から下方に落ち込む濃度（希釈率
５０／１００より高濃度側）ではいずれの測定時刻のデ
ータでも仮想値との差が生じており、濃度が高くなるに
つれてその差ΔＡも拡大している。
示される大きさは、上記の回帰式のＡ2に１５分後の吸
光度測定値Ａ2を代入して求めた仮想値Ｙａｃである。
また、図３中には回帰直線と実測値Ａｓとの差ΔＡも垂
直方向の矢印で示されている。図３を図２と合わせて見
ると、Ａｓが回帰直線から下方に落ち込む濃度（希釈率
５０／１００より高濃度側）ではいずれの測定時刻のデ
ータでも仮想値との差が生じており、濃度が高くなるに
つれてその差ΔＡも拡大している。
【００１３】図３に示したデータと同一の反応液につい
て２波長測定した結果を図４に示す。１波長測定（図
３）と全く同じ傾向を示している。この場合、回帰式は
異なる波長の組合わせでも同一の値を示しており、ほぼ
原点を通り、回帰式のｂはほぼ０である。
て２波長測定した結果を図４に示す。１波長測定（図
３）と全く同じ傾向を示している。この場合、回帰式は
異なる波長の組合わせでも同一の値を示しており、ほぼ
原点を通り、回帰式のｂはほぼ０である。
【００１４】表１に図３で示したＩｇＧ反応における仮
想吸光度Ｙａｃ、初期吸光度差ΔＡ（＝仮想吸光度Ｙａ
ｃ−実測値Ａ1）及び乖離率ｄを示す。 であり、ΔＡ≦２０はΔＡ＝０とした。
想吸光度Ｙａｃ、初期吸光度差ΔＡ（＝仮想吸光度Ｙａ
ｃ−実測値Ａ1）及び乖離率ｄを示す。 であり、ΔＡ≦２０はΔＡ＝０とした。
【００１５】
【表１】 表２に反応開始から１５分後の吸光度Ａ15（表１ではＡ
2(１５）と表している）を本発明の修正関数により修正
した値を示す。
2(１５）と表している）を本発明の修正関数により修正
した値を示す。
【００１６】
【表２】 図５は表２に示されたＩｇＧの反応１５分後の修正吸光
度を希釈系列に対して表したものである。いずれの修正
吸光度も希釈系列に対して単調増加関数となっている。
１５分後の吸光度Ａ15を修正せずに希釈系列に対して表
すとプロゾーン領域では減少し、単調関数とはならな
い。
度を希釈系列に対して表したものである。いずれの修正
吸光度も希釈系列に対して単調増加関数となっている。
１５分後の吸光度Ａ15を修正せずに希釈系列に対して表
すとプロゾーン領域では減少し、単調関数とはならな
い。
【００１７】本発明が適用される具体的な自動分析装置
の一例を図６に示す。図６で、血清などの検体は検体容
器に入れられ、複数本の検体容器が配置された検体ラッ
ク２がベルトコンベア式の搬送路４に沿って移動させら
れる。搬送路４は図で左から右方向に検体ラック２を移
送する往路４ａと、逆に右から左方向へ検体ラックを移
送する復路４ｂとからなっている。図で往路４ａの左端
部分には検体ラック２を往路４ａに送り出す検体ラック
供給部６が設けられており、復路４ｂの左端部分には測
定終了後の検体ラック２を収納する収納部８が設けられ
ている。図で搬送路４の右端部分には往路４ａを送られ
てきた検体ラック２を一次収容し、分析終了後に検体ラ
ックを復路４ｂに送り出すラック待機部１０が設けられ
ている。検体ラック２は往路４ａを移送中に分析ユニッ
ト２６ａ，２６ｂの検体分注位置で停止させられ、分析
ユニット２６ａ，２６ｂの反応管に分注される。復路４
ｂでは往路４ａで分注されて測定された検体の測定結果
に従って、再検査の必要のある検体が再分注される。
の一例を図６に示す。図６で、血清などの検体は検体容
器に入れられ、複数本の検体容器が配置された検体ラッ
ク２がベルトコンベア式の搬送路４に沿って移動させら
れる。搬送路４は図で左から右方向に検体ラック２を移
送する往路４ａと、逆に右から左方向へ検体ラックを移
送する復路４ｂとからなっている。図で往路４ａの左端
部分には検体ラック２を往路４ａに送り出す検体ラック
供給部６が設けられており、復路４ｂの左端部分には測
定終了後の検体ラック２を収納する収納部８が設けられ
ている。図で搬送路４の右端部分には往路４ａを送られ
てきた検体ラック２を一次収容し、分析終了後に検体ラ
ックを復路４ｂに送り出すラック待機部１０が設けられ
ている。検体ラック２は往路４ａを移送中に分析ユニッ
ト２６ａ，２６ｂの検体分注位置で停止させられ、分析
ユニット２６ａ，２６ｂの反応管に分注される。復路４
ｂでは往路４ａで分注されて測定された検体の測定結果
に従って、再検査の必要のある検体が再分注される。
【００１８】搬送路４に沿って２台の分析ユニット１２
ａと１２ｂが配置されている。いずれも同じ構造をして
いる。各分析ユニットにはキュベットを兼ねる反応容器
１５が配置された反応ディスク１４が搬送路４の近くに
配置されており、搬送路４ａ，４ｂには反応ディスク１
４の近傍の検体分注位置で検体ラック２を停止させる停
止装置（図示略）が設けられている。搬送路４ａ又は４
ｂ上に停止させられた検体ラック２から検体を反応容器
１５に分注するために、ノズルを備えたピペッタ１６が
配置されている。各分析ユニット１２ａ，１２ｂには反
応容器１５に試薬を分注するために２台のターンテーブ
ル式試薬庫１８ａ，１８ｂが配置されており、各試薬庫
１８ａ，１８ｂには試薬を反応容器１５に分注するディ
スペンサ２０ａ，２０ｂが設けられている。反応ディス
ク１４で分析終了後の反応容器を洗浄するために洗浄機
構２２が設けられている。反応ディスク１４には検体と
試薬が入れられた反応容器１５の反応を測定するため
に、光学式分析部が設けられているが図示は省略されて
いる。
ａと１２ｂが配置されている。いずれも同じ構造をして
いる。各分析ユニットにはキュベットを兼ねる反応容器
１５が配置された反応ディスク１４が搬送路４の近くに
配置されており、搬送路４ａ，４ｂには反応ディスク１
４の近傍の検体分注位置で検体ラック２を停止させる停
止装置（図示略）が設けられている。搬送路４ａ又は４
ｂ上に停止させられた検体ラック２から検体を反応容器
１５に分注するために、ノズルを備えたピペッタ１６が
配置されている。各分析ユニット１２ａ，１２ｂには反
応容器１５に試薬を分注するために２台のターンテーブ
ル式試薬庫１８ａ，１８ｂが配置されており、各試薬庫
１８ａ，１８ｂには試薬を反応容器１５に分注するディ
スペンサ２０ａ，２０ｂが設けられている。反応ディス
ク１４で分析終了後の反応容器を洗浄するために洗浄機
構２２が設けられている。反応ディスク１４には検体と
試薬が入れられた反応容器１５の反応を測定するため
に、光学式分析部が設けられているが図示は省略されて
いる。
【００１９】検体ラック供給部６と収納部８にはインタ
ーフェースとＣＰＵ２４が設けられており、各分析ユニ
ット１２ａと１２ｂにもそれぞれインターフェースとＣ
ＰＵ２６ａ，２６ｂが設けられており、待機部１０にも
インターフェースとＣＰＵ２８が設けられている。それ
らのＣＰＵ２４，２６ａ，２６ｂ，２８はメインＣＰＵ
３０と接続されている。メインＣＰＵ３０にはさらにＣ
ＲＴ３２、キーボード３４及びプリンタ３６が接続され
ている。
ーフェースとＣＰＵ２４が設けられており、各分析ユニ
ット１２ａと１２ｂにもそれぞれインターフェースとＣ
ＰＵ２６ａ，２６ｂが設けられており、待機部１０にも
インターフェースとＣＰＵ２８が設けられている。それ
らのＣＰＵ２４，２６ａ，２６ｂ，２８はメインＣＰＵ
３０と接続されている。メインＣＰＵ３０にはさらにＣ
ＲＴ３２、キーボード３４及びプリンタ３６が接続され
ている。
【００２０】図６の自動分析装置の動作について説明す
る。各項目の測定に必要な試薬は分析ユニットの試薬庫
１８ａ，１８ｂにセットされる。検体ラック２を供給部
６に並べ、キーボード３４から動作を開始させると、反
応容器１５は洗浄機構２２で洗浄水により洗浄される。
洗浄をすませた反応容器１５には水が入れられて測定波
長によるセルブランク測定がなされる。セルブランク測
定後、水切りをすませた空の反応容器１５が検体分注位
置に移動したとき、検体ラック２が搬送路の往路４ａを
送られてきて、検体分注位置で停止させられ、まず最初
に分析する測定項目のためにピペッタ１６によって検体
が測定項目ごとに定められた検体量だけ反応容器１５に
分注される。検体分注後のピペッタ１６のノズルは図に
は現れていない洗浄ポットに移動してノズルの内外が純
水により洗浄される。その後、順次次の同一検体の次の
項目又は次の別の検体の分注が他の反応容器１５に行な
われる。
る。各項目の測定に必要な試薬は分析ユニットの試薬庫
１８ａ，１８ｂにセットされる。検体ラック２を供給部
６に並べ、キーボード３４から動作を開始させると、反
応容器１５は洗浄機構２２で洗浄水により洗浄される。
洗浄をすませた反応容器１５には水が入れられて測定波
長によるセルブランク測定がなされる。セルブランク測
定後、水切りをすませた空の反応容器１５が検体分注位
置に移動したとき、検体ラック２が搬送路の往路４ａを
送られてきて、検体分注位置で停止させられ、まず最初
に分析する測定項目のためにピペッタ１６によって検体
が測定項目ごとに定められた検体量だけ反応容器１５に
分注される。検体分注後のピペッタ１６のノズルは図に
は現れていない洗浄ポットに移動してノズルの内外が純
水により洗浄される。その後、順次次の同一検体の次の
項目又は次の別の検体の分注が他の反応容器１５に行な
われる。
【００２１】反応ディスク１４で検体の分注された反応
容器１５が試薬分注位置へ移動してくると、ディスペン
サ２０ａ又は２０ｂによって所定の試薬が所定量吸引さ
れて反応容器１５に分注される。分注後、ディスペンサ
２０ａ，２０ｂのプローブは図には現われていない洗浄
位置に移動してプローブの内外が純水で洗浄される。そ
の後、ディスペンサ２０ａ，２０ｂは次の試薬の分注動
作に移る。
容器１５が試薬分注位置へ移動してくると、ディスペン
サ２０ａ又は２０ｂによって所定の試薬が所定量吸引さ
れて反応容器１５に分注される。分注後、ディスペンサ
２０ａ，２０ｂのプローブは図には現われていない洗浄
位置に移動してプローブの内外が純水で洗浄される。そ
の後、ディスペンサ２０ａ，２０ｂは次の試薬の分注動
作に移る。
【００２２】検体ラック２は往路を進んで待機部１０で
待機し、検体の分析結果を待って復路４ｂへ送り出さ
れ、収納部８へ収納される。復路４ｂを移動中に、再検
査の必要のある検体は検体分注位置で停止させられて再
び検体分注が行なわれる。反応ディスク１４では検体と
試薬が混ぜられた反応液の吸光度が測定部により測定さ
れる。分析の終了した反応容器１５は洗浄位置で反応液
が吸引されて排出され、水洗され、セルブランク測定の
後、反応容器内の水切りが行なわれて新たな検体の反応
容器として準備される。
待機し、検体の分析結果を待って復路４ｂへ送り出さ
れ、収納部８へ収納される。復路４ｂを移動中に、再検
査の必要のある検体は検体分注位置で停止させられて再
び検体分注が行なわれる。反応ディスク１４では検体と
試薬が混ぜられた反応液の吸光度が測定部により測定さ
れる。分析の終了した反応容器１５は洗浄位置で反応液
が吸引されて排出され、水洗され、セルブランク測定の
後、反応容器内の水切りが行なわれて新たな検体の反応
容器として準備される。
【００２３】図６のように往路と複路のベルトライン試
料搬送システムを有する自動分析装置に本発明を適用す
れば、往路での測定でプロゾーン現象が起こっていると
判定されたときや、往路で試薬分注ミスが生じた場合な
どに複路で再検査を自動的に行なうといった対応を素早
く行なうことができるようになる。
料搬送システムを有する自動分析装置に本発明を適用す
れば、往路での測定でプロゾーン現象が起こっていると
判定されたときや、往路で試薬分注ミスが生じた場合な
どに複路で再検査を自動的に行なうといった対応を素早
く行なうことができるようになる。
【００２４】他の方法としては、非プロゾーン濃度範囲
の１種類の標準試料及び試薬ブランク液について抗原抗
体反応の初期段階の第１の時刻での光学的測定値Ａ1と
抗原抗体反応が十分進行した後の第２の時刻での光学的
測定値Ａ2を測定し、第２の時刻での光学的測定値Ａ2か
ら検量線を作成し、試料反応液については標準試料及び
試薬ブランク液の第１の時刻での光学的測定値Ａ1と第
２の時刻での光学的測定値Ａ2との関係から算出した回
帰式 Ｙａｃ＝ａ・Ａ2＋ｂ に試料反応液の第２の時刻の測定値を代入して得られる
仮想値Ｙａｃと第１の時刻での光学的測定値Ａ1との乖
離度を求め、その乖離度により試料反応液の第２の時刻
での光学的測定値Ａ2を修正し、この修正測定値を前記
検量線にあてはめて未知試料中の抗原抗体反応成分を定
量することもできる。測定システムは異なるが、抗原抗
体反応によって生成した懸濁液の散乱光を測定しても、
本発明と同様の測定結果を得ることができる。
の１種類の標準試料及び試薬ブランク液について抗原抗
体反応の初期段階の第１の時刻での光学的測定値Ａ1と
抗原抗体反応が十分進行した後の第２の時刻での光学的
測定値Ａ2を測定し、第２の時刻での光学的測定値Ａ2か
ら検量線を作成し、試料反応液については標準試料及び
試薬ブランク液の第１の時刻での光学的測定値Ａ1と第
２の時刻での光学的測定値Ａ2との関係から算出した回
帰式 Ｙａｃ＝ａ・Ａ2＋ｂ に試料反応液の第２の時刻の測定値を代入して得られる
仮想値Ｙａｃと第１の時刻での光学的測定値Ａ1との乖
離度を求め、その乖離度により試料反応液の第２の時刻
での光学的測定値Ａ2を修正し、この修正測定値を前記
検量線にあてはめて未知試料中の抗原抗体反応成分を定
量することもできる。測定システムは異なるが、抗原抗
体反応によって生成した懸濁液の散乱光を測定しても、
本発明と同様の測定結果を得ることができる。
【００２５】
【発明の効果】本発明では吸光度測定値を修正してプロ
ゾーン領域においても検量線が単調関数となるようにし
たので、測定可能な濃度範囲が拡大し、プロゾーン現象
による再検査を減少させることができる。検量線が直線
に近づくことによって検量線作成のための標準試料数を
減少させることができる。これらの結果により高価な試
薬の無駄がなくなる。そして複雑な検量線関数を使用す
る必要がなくなり、関数の選択に悩まなくてもよくな
る。また、高価な試薬や時間の無駄をなくすことができ
る。検量線を単調関数として表すことができるため、高
濃度液での測定精度がよくなる。これに対し従来では検
量線が上に凸状に曲がるため高濃度域では感度が下がる
問題があった。
ゾーン領域においても検量線が単調関数となるようにし
たので、測定可能な濃度範囲が拡大し、プロゾーン現象
による再検査を減少させることができる。検量線が直線
に近づくことによって検量線作成のための標準試料数を
減少させることができる。これらの結果により高価な試
薬の無駄がなくなる。そして複雑な検量線関数を使用す
る必要がなくなり、関数の選択に悩まなくてもよくな
る。また、高価な試薬や時間の無駄をなくすことができ
る。検量線を単調関数として表すことができるため、高
濃度液での測定精度がよくなる。これに対し従来では検
量線が上に凸状に曲がるため高濃度域では感度が下がる
問題があった。
【図１】ＩｇＧ標準試料の反応タイムコースを示す図で
ある。
ある。
【図２】ＩｇＧ標準試料についての反応開始１分後と１
５分後の各波長における吸光度を示す図である。
５分後の各波長における吸光度を示す図である。
【図３】ＩｇＧ標準試料の測定データに基づいて、反応
開始から１分後、２分後、３分後、５分後の吸光度と１
５分後の吸光度との関係と回帰直線を示す図である。
開始から１分後、２分後、３分後、５分後の吸光度と１
５分後の吸光度との関係と回帰直線を示す図である。
【図４】ＩｇＧ標準試料について２波長測定した結果と
回帰直線を示す図である。
回帰直線を示す図である。
【図５】ＩｇＧ標準試料についての修正された吸光度と
元の吸光度の検量線を示す図である。
元の吸光度の検量線を示す図である。
【図６】本発明が適用される自動分析装置の一例を示す
図である。
図である。
Claims (3)
- 【請求項１】 標準試料について抗原抗体反応の初期段
階の第１の時刻での光学的測定値Ａ1と抗原抗体反応が
十分進行した後の第２の時刻での光学的測定値Ａ2を含
み、標準試料の抗原抗体反応成分に対して単調関数とな
る修正値ｆ（Ａ1，Ａ2）を定め、その修正値ｆ（Ａ1，
Ａ2）と抗原抗体反応成分との関係を示す検量線を求
め、 未知試料について測定した抗原抗体反応の初期段階の第
１の時刻での光学的測定値Ａ1と抗原抗体反応が十分進
行した後の第２の時刻での光学的測定値Ａ2から修正値
ｆ（Ａ1，Ａ2）を算出し、前記検量線を用いて未知試料
の抗原抗体反応成分の定量を行なうことを特徴とする免
疫比濁分析方法。 - 【請求項２】 前記修正値ｆ（Ａ1，Ａ2）は Ａ2（Ａ2／Ａ1）又はＡ2（Ａ2／Ａ1）2 である請求項１に記載の免疫比濁分析方法。
- 【請求項３】 プロゾーン現象が起こっていない濃度域
の標準試料についてＡ1とＡ2との関係を示す回帰式 Ｙａｃ＝ａ・Ａ2＋ｂ を算出し、その回帰式に測定値Ａ2を代入して得られる
仮想値Ｙａｃを用い、前記修正値ｆ（Ａ1，Ａ2）として Ａ2〔１／｛１−（Ｙａｃ−Ａ1）／Ｙａｃ｝〕又は Ａ2〔１／｛１−（Ｙａｃ−Ａ1）／Ｙａｃ｝〕2 を用いる請求項１に記載の免疫比濁分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09866893A JP3259431B2 (ja) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | 免疫比濁分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09866893A JP3259431B2 (ja) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | 免疫比濁分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06289026A JPH06289026A (ja) | 1994-10-18 |
| JP3259431B2 true JP3259431B2 (ja) | 2002-02-25 |
Family
ID=14225899
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP09866893A Expired - Fee Related JP3259431B2 (ja) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | 免疫比濁分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3259431B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX2020002450A (es) * | 2017-09-08 | 2020-07-20 | Alfresa Pharma Corp | Dispositivo de analisis y metodo de analisis. |
-
1993
- 1993-03-31 JP JP09866893A patent/JP3259431B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06289026A (ja) | 1994-10-18 |
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