JP3076856B2 - 細菌によるアルギン酸の分解法 - Google Patents
細菌によるアルギン酸の分解法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細菌によるアルギン酸
の分解法に関する。
の分解法に関する。
【０００２】
【従来技術とその課題】アルギン酸は、コンブ、ワカ
メ、ヒジキ等の褐藻類に２０〜５０％（乾物換算）含ま
れる主要な構成多糖であり、Ｄ−マンヌロン酸とＬ−グ
ルロン酸とからなる、ヘテロポリマー又はブロックポリ
マーであるとされている。栄養学的にも食物繊維として
の機能があり、アルギン酸のカリウム塩は、Ｋ−Ｎａイ
オン交換能を有し、体内のＮａを排泄する作用があると
言われている。斯かる特性を有するアルギン酸を食品に
適用できれば、食品の生理的機能を高め得ることは明ら
かである。しかるに、アルギン酸は水に溶解すると高粘
性を示すため、一般の食品に適用することは極めて困難
である。細菌が産生するアルギン酸リアーゼにより、ア
ルギン酸を低分子化すれば、アルギン酸水溶液の粘度を
低下させ得ることが予想できる。
メ、ヒジキ等の褐藻類に２０〜５０％（乾物換算）含ま
れる主要な構成多糖であり、Ｄ−マンヌロン酸とＬ−グ
ルロン酸とからなる、ヘテロポリマー又はブロックポリ
マーであるとされている。栄養学的にも食物繊維として
の機能があり、アルギン酸のカリウム塩は、Ｋ−Ｎａイ
オン交換能を有し、体内のＮａを排泄する作用があると
言われている。斯かる特性を有するアルギン酸を食品に
適用できれば、食品の生理的機能を高め得ることは明ら
かである。しかるに、アルギン酸は水に溶解すると高粘
性を示すため、一般の食品に適用することは極めて困難
である。細菌が産生するアルギン酸リアーゼにより、ア
ルギン酸を低分子化すれば、アルギン酸水溶液の粘度を
低下させ得ることが予想できる。
【０００３】従来、アルギン酸リアーゼは、細菌、褐
藻、貝等に存在し、細菌ではシュードモナス属、ビブリ
オ属又はクレブシェラ属に属する細菌がアルギン酸リア
ーゼを産生することが知られている。しかしながら、こ
れら細菌ではアルギン酸リアーゼ産生能が非常に低いた
め、工業的規模でアルギン酸を低分子化するのに充分な
量のアルギン酸リアーゼを得るには多大なコストが必要
となる。従って、細菌が産生するアルギン酸リアーゼに
よりアルギン酸を低分子化させることも、工業的には不
可能である。
藻、貝等に存在し、細菌ではシュードモナス属、ビブリ
オ属又はクレブシェラ属に属する細菌がアルギン酸リア
ーゼを産生することが知られている。しかしながら、こ
れら細菌ではアルギン酸リアーゼ産生能が非常に低いた
め、工業的規模でアルギン酸を低分子化するのに充分な
量のアルギン酸リアーゼを得るには多大なコストが必要
となる。従って、細菌が産生するアルギン酸リアーゼに
よりアルギン酸を低分子化させることも、工業的には不
可能である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記従来
技術の課題を解決すべく、日本各地の土壌、水、海水等
からサンプルを採取し、アルギン酸分解能を有する微生
物の検索を行なった結果、アルギン酸リアーゼ産生能が
極めて高い細菌を２種発見した。而してこれらの細菌菌
体から非常に高い収量でアルギン酸リアーゼを得ること
ができ、工業的規模でアルギン酸を低分子化できること
を見い出した。本発明は、斯かる知見に基づき完成され
たものである。
技術の課題を解決すべく、日本各地の土壌、水、海水等
からサンプルを採取し、アルギン酸分解能を有する微生
物の検索を行なった結果、アルギン酸リアーゼ産生能が
極めて高い細菌を２種発見した。而してこれらの細菌菌
体から非常に高い収量でアルギン酸リアーゼを得ること
ができ、工業的規模でアルギン酸を低分子化できること
を見い出した。本発明は、斯かる知見に基づき完成され
たものである。
【０００５】即ち、本発明は、アルギン酸分解能を有す
るフラボバクテリウム属細菌を、アルギン酸に作用させ
てアルギン酸を分解することを特徴とするアルギン酸の
分解法に係る。
るフラボバクテリウム属細菌を、アルギン酸に作用させ
てアルギン酸を分解することを特徴とするアルギン酸の
分解法に係る。
【０００６】本明細書において、アルギン酸には、アル
ギン酸の塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアル
カリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカ
リ土類金属塩や、アルギン酸のプロピレングリコール誘
導体やアセチル誘導体等も包含される。
ギン酸の塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアル
カリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカ
リ土類金属塩や、アルギン酸のプロピレングリコール誘
導体やアセチル誘導体等も包含される。
【０００７】本発明の方法で用いられるフラボバクテリ
ウム属細菌としては、例えばフラボバクテリウム・スピ
ーシーズＯＴＣ−６（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｓｐ．ＯＴＣ−６）、フラボバクテリウム・スピーシー
ズＯＴＣ−７（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．
ＯＴＣ−７）等が挙げられる。
ウム属細菌としては、例えばフラボバクテリウム・スピ
ーシーズＯＴＣ−６（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｓｐ．ＯＴＣ−６）、フラボバクテリウム・スピーシー
ズＯＴＣ−７（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．
ＯＴＣ−７）等が挙げられる。
【０００８】フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−６は、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて
いる（微工研寄第１２１５９号）。該菌の菌学的性質を
以下に挙げる。
−６は、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて
いる（微工研寄第１２１５９号）。該菌の菌学的性質を
以下に挙げる。
【０００９】（ａ）形態； （１）細胞の形及び大きさ：桿菌、（０．３〜０．６）
×（１．０〜１．２）μｍ （２）運動性の有無：無し （３）鞭毛の有無：無し （４）芽胞の有無：無し （５）グラム染色性：陰性。
×（１．０〜１．２）μｍ （２）運動性の有無：無し （３）鞭毛の有無：無し （４）芽胞の有無：無し （５）グラム染色性：陰性。
【００１０】（ｂ）各培地における生育状態； （１）肉汁寒天平板培養：３０℃、２４時間培養で、直
径１〜２ｍｍの円形コロニー、コロニーは硬く白色 （２）標準寒天平板培養：３０℃、２４時間培養で、直
径１〜２ｍｍの円形コロニー、コロニーは硬く淡黄色 （３）リトマスミルク培養：３０℃の培養で凝固せず、
色調は青紫色で変化なし。
径１〜２ｍｍの円形コロニー、コロニーは硬く白色 （２）標準寒天平板培養：３０℃、２４時間培養で、直
径１〜２ｍｍの円形コロニー、コロニーは硬く淡黄色 （３）リトマスミルク培養：３０℃の培養で凝固せず、
色調は青紫色で変化なし。
【００１１】（ｃ）生理学的性質； （１）カタラーゼ：陽性 （２）オキシダーゼ：陽性 （３）ウレアーゼ：陰性 （４）フォスファターゼ：陰性 （５）ＯＦテスト：陰性 （６）ＶＰテスト：陰性 （７）インドールの生成：陰性 （８）硫化水素の生成：陰性 （９）糖類からの酸の生成： 陽性…グルコース、陰性…アラビノース、セロビオー
ス、ラクトース、マンニトール、ラフィノース、スクロ
ース、キシロース、グリセロール、フルクトース、マル
トース、ラムノース （１０）デンプンの加水分解：陰性 （１１）ゼラチンの加水分解：陰性 （１２）エスクリンの加水分解：陰性 （１３）硝酸塩の還元：陽性 （１４）生育のｐＨ：５．０〜８．５ （１５）至適生育温度：２８〜３４℃ （１６）生育の食塩濃度：０〜１％。
ス、ラクトース、マンニトール、ラフィノース、スクロ
ース、キシロース、グリセロール、フルクトース、マル
トース、ラムノース （１０）デンプンの加水分解：陰性 （１１）ゼラチンの加水分解：陰性 （１２）エスクリンの加水分解：陰性 （１３）硝酸塩の還元：陽性 （１４）生育のｐＨ：５．０〜８．５ （１５）至適生育温度：２８〜３４℃ （１６）生育の食塩濃度：０〜１％。
【００１２】（ｄ）ＤＮＡのＧＣ含量：６３％。
【００１３】以上の結果をもとに、フラボバクテリウム
・スピーシーズＯＴＣ−６を、バージーズ・マニュアル
・オブ・システマチック・バクテオリロジーで検索する
と、どの属にも該当せず、またバージーズ・マニュアル
・オブ・ディターミネイティブ・バクテオロジー第８版
で検索すると、フラボバクテリウムに属すると思われる
が、一致する種はなく、フラボバクテリウム類縁の種と
考えられる。
・スピーシーズＯＴＣ−６を、バージーズ・マニュアル
・オブ・システマチック・バクテオリロジーで検索する
と、どの属にも該当せず、またバージーズ・マニュアル
・オブ・ディターミネイティブ・バクテオロジー第８版
で検索すると、フラボバクテリウムに属すると思われる
が、一致する種はなく、フラボバクテリウム類縁の種と
考えられる。
【００１４】フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−７は、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて
いる（微工研寄第１２１６０号）。該菌の菌学的性質を
以下に挙げる。
−７は、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて
いる（微工研寄第１２１６０号）。該菌の菌学的性質を
以下に挙げる。
【００１５】（ａ）形態； （１）細胞の形及び大きさ：桿菌、（０．６〜０．８）
×（１．０〜１．８）μｍ （２）運動性の有無：無し （３）鞭毛の有無：無し （４）芽胞の有無：無し （５）グラム染色性：陰性。
×（１．０〜１．８）μｍ （２）運動性の有無：無し （３）鞭毛の有無：無し （４）芽胞の有無：無し （５）グラム染色性：陰性。
【００１６】（ｂ）各培地における生育状態； （１）肉汁寒天平板培養：３０℃、２４時間培養で、直
径１〜２ｍｍの円形コロニー、コロニーは白色 （２）標準寒天平板培養：３０℃、２４時間培養で、直
径１〜２ｍｍの円形コロニー、コロニーは淡黄色 （３）リトマスミルク培養：３０℃の培養で凝固せず、
色調は青紫色で変化なし。
径１〜２ｍｍの円形コロニー、コロニーは白色 （２）標準寒天平板培養：３０℃、２４時間培養で、直
径１〜２ｍｍの円形コロニー、コロニーは淡黄色 （３）リトマスミルク培養：３０℃の培養で凝固せず、
色調は青紫色で変化なし。
【００１７】（ｃ）生理学的性質； （１）カタラーゼ：陽性 （２）オキシダーゼ：陽性 （３）ウレアーゼ：陰性 （４）フォスファターゼ：陰性 （５）ＯＦテスト：陰性 （６）ＶＰテスト：陰性 （７）インドールの生成：陰性 （８）硫化水素の生成：陰性 （９）糖類からの酸の生成： 陽性…グルコース、陰性…アラビノース、セロビオー
ス、ラクトース、マンニトール、ラフィノース、スクロ
ース、キシロース、グリセロール、フルクトース、マル
トース、ラムノース （１０）デンプンの加水分解：陰性 （１１）ゼラチンの加水分解：陰性 （１２）エスクリンの加水分解：陰性 （１３）硝酸塩の還元：陽性 （１４）生育のｐＨ：５．０〜８．５ （１５）至適生育温度：２８〜３４℃ （１６）生育の食塩濃度：０〜１％。
ス、ラクトース、マンニトール、ラフィノース、スクロ
ース、キシロース、グリセロール、フルクトース、マル
トース、ラムノース （１０）デンプンの加水分解：陰性 （１１）ゼラチンの加水分解：陰性 （１２）エスクリンの加水分解：陰性 （１３）硝酸塩の還元：陽性 （１４）生育のｐＨ：５．０〜８．５ （１５）至適生育温度：２８〜３４℃ （１６）生育の食塩濃度：０〜１％。
【００１８】（ｄ）ＤＮＡのＧＣ含量：６３％。
【００１９】以上の結果をもとに、フラボバクテリウム
・スピーシーズＯＴＣ−７を、バージーズ・マニュアル
・オブ・システマチック・バクテオリロジーで検索する
と、どの属にも該当せず、またバージーズ・マニュアル
・オブ・ディターミネイティブ・バクテオリロジー第８
版で検索すると、フラボバクテリウムに属すると思われ
るが、一致する種はなく、フラボバクテリウム類縁の種
と考えられる。
・スピーシーズＯＴＣ−７を、バージーズ・マニュアル
・オブ・システマチック・バクテオリロジーで検索する
と、どの属にも該当せず、またバージーズ・マニュアル
・オブ・ディターミネイティブ・バクテオリロジー第８
版で検索すると、フラボバクテリウムに属すると思われ
るが、一致する種はなく、フラボバクテリウム類縁の種
と考えられる。
【００２０】フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−６とフラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ−７と
を比べると、フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−７の菌体が少し大きい。また、フラボバクテリウム・
スピーシーズＯＴＣ−６は、液体の培地で振盪培養する
と、菌体が凝集する。
−６とフラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ−７と
を比べると、フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−７の菌体が少し大きい。また、フラボバクテリウム・
スピーシーズＯＴＣ−６は、液体の培地で振盪培養する
と、菌体が凝集する。
【００２１】上記フラボバクテリウム属細菌の培養は、
通常の細菌の培養と同様に行なうことができ、液体培地
中にて通気攪拌下に行なうのが望ましい。
通常の細菌の培養と同様に行なうことができ、液体培地
中にて通気攪拌下に行なうのが望ましい。
【００２２】培養に用いられる培地は、アルギン酸類を
必須成分とする。アルギン酸類としては、例えばアルギ
ン酸、その塩、エステル等を挙げることができる。アル
ギン酸の添加量は、特に制限されるものではないが、通
常培地全量に対して０．１〜２重量％程度とするのがよ
い。更に、本発明で用いられる培地には、アルギン酸類
以外に、細菌の培養に用いられている通常の炭素源、窒
素源、無機塩類等が含有されていてもよい。ここで炭素
源としては、例えばグルコース等が、窒素源としては、
例えばペプトン、肉エキス、コーンスチープリカー、酵
母エキス等の有機窒素化合物や硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウム等の無機窒素化合物等が、また無機塩類と
しては、例えばリン酸一カリウム、リン酸二カリウム、
硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム等がそれぞれ挙げら
れる。
必須成分とする。アルギン酸類としては、例えばアルギ
ン酸、その塩、エステル等を挙げることができる。アル
ギン酸の添加量は、特に制限されるものではないが、通
常培地全量に対して０．１〜２重量％程度とするのがよ
い。更に、本発明で用いられる培地には、アルギン酸類
以外に、細菌の培養に用いられている通常の炭素源、窒
素源、無機塩類等が含有されていてもよい。ここで炭素
源としては、例えばグルコース等が、窒素源としては、
例えばペプトン、肉エキス、コーンスチープリカー、酵
母エキス等の有機窒素化合物や硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウム等の無機窒素化合物等が、また無機塩類と
しては、例えばリン酸一カリウム、リン酸二カリウム、
硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム等がそれぞれ挙げら
れる。
【００２３】培養は、２５〜３５℃程度の温度条件下及
び５．５〜８．０程度のｐＨ条件下にて行なわれ、通常
２４〜４８時間程度で終了する。得られる培養物を従来
公知の手段に従って精製することにより、アルギン酸リ
アーゼを採取することができる。例えば、遠心分離にて
培養物から菌体を分取し、これを超音波破砕機、加圧ミ
ル等で破砕し、粗酵素を抽出した後、ＤＥＡＥ−セルロ
ース、セファデックスＧ−１５０、ヒドロキシルアパタ
イト等を用いたカラムクロマトグラフィー等により精製
すればよい。
び５．５〜８．０程度のｐＨ条件下にて行なわれ、通常
２４〜４８時間程度で終了する。得られる培養物を従来
公知の手段に従って精製することにより、アルギン酸リ
アーゼを採取することができる。例えば、遠心分離にて
培養物から菌体を分取し、これを超音波破砕機、加圧ミ
ル等で破砕し、粗酵素を抽出した後、ＤＥＡＥ−セルロ
ース、セファデックスＧ−１５０、ヒドロキシルアパタ
イト等を用いたカラムクロマトグラフィー等により精製
すればよい。
【００２４】斯くしてフラボバクテリウム・スピーシー
ズＯＴＣ−６及びフラボバクテリウム・スピーシーズＯ
ＴＣ−７から、それぞれ３種類の酵素が得られる。その
うち代表的なフラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−６から得られた酵素２種（Ａ１−Ｉ及びＡ１−ＩＩ−
１）とフラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ−７か
ら得られた酵素１種（Ａ２−Ｉ）は、下記の理化学的性
質を有している。
ズＯＴＣ−６及びフラボバクテリウム・スピーシーズＯ
ＴＣ−７から、それぞれ３種類の酵素が得られる。その
うち代表的なフラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−６から得られた酵素２種（Ａ１−Ｉ及びＡ１−ＩＩ−
１）とフラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ−７か
ら得られた酵素１種（Ａ２−Ｉ）は、下記の理化学的性
質を有している。
【００２５】（１）作用：アルギン酸類を非還元末端の
Ｃ4 −Ｃ5 間に二重結合を有する糖に分解し、最終的に
４−デオキシ−５−ケトウロン酸に分解する。
Ｃ4 −Ｃ5 間に二重結合を有する糖に分解し、最終的に
４−デオキシ−５−ケトウロン酸に分解する。
【００２６】（２）基質特異性：アルギン酸類、即ちア
ルギン酸及びその塩やエステルに作用する。詳細を下記
表１に示す。
ルギン酸及びその塩やエステルに作用する。詳細を下記
表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】（３）至適ｐＨ：３種酵素の至適ｐＨは、
それぞれ８．０である。
それぞれ８．０である。
【００２９】（４）安定ｐＨ：３種酵素の安定ｐＨは、
それぞれ７．０〜８．０である。
それぞれ７．０〜８．０である。
【００３０】（５）至適温度：３種酵素の至適温度は、
それぞれ７０℃である。
それぞれ７０℃である。
【００３１】（６）金属イオン及び阻止剤の影響：詳細
を下記表２に示す。
を下記表２に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】（７）分子量：３種のアルギン酸リアーゼ
を、それぞれ１２．５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電
気泳動にかけ、染色液（エタノール４５％、酢酸１０
％、水４５％、コマジーブリリアントブルーＲ−２５０
０．２５％）中にて、３７℃で３時間振盪し、脱色液
（エタノール２５％、酢酸７％）で数回脱色した後、分
子量を決定した。この結果、３種とも分子量６万の蛋白
であることが判明した。
を、それぞれ１２．５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電
気泳動にかけ、染色液（エタノール４５％、酢酸１０
％、水４５％、コマジーブリリアントブルーＲ−２５０
０．２５％）中にて、３７℃で３時間振盪し、脱色液
（エタノール２５％、酢酸７％）で数回脱色した後、分
子量を決定した。この結果、３種とも分子量６万の蛋白
であることが判明した。
【００３４】以上の結果から、上記菌により得られる酵
素がアルギン酸リアーゼであることが確認された。
素がアルギン酸リアーゼであることが確認された。
【００３５】本発明において、上記菌の菌体又は菌体か
ら抽出精製した酵素及びそれらの固定化物等によるアル
ギン酸類の分解は、通常の方法に従って行なわれる。例
えばアルギン酸類の水溶液に酵素を添加すればよい。前
記水溶液中のアルギン酸類の濃度は特に制限されない
が、通常０．１〜５重量％程度とすればよい。菌体又は
酵素の添加量も、特に制限されるものではない。反応温
度は、アルギン酸リアーゼが作用し得る温度であればよ
く、通常２０〜８０℃程度である。
ら抽出精製した酵素及びそれらの固定化物等によるアル
ギン酸類の分解は、通常の方法に従って行なわれる。例
えばアルギン酸類の水溶液に酵素を添加すればよい。前
記水溶液中のアルギン酸類の濃度は特に制限されない
が、通常０．１〜５重量％程度とすればよい。菌体又は
酵素の添加量も、特に制限されるものではない。反応温
度は、アルギン酸リアーゼが作用し得る温度であればよ
く、通常２０〜８０℃程度である。
【００３６】
【発明の効果】本発明で用いられるフラボバクテリウム
属細菌は、アルギン酸リアーゼ産生能が極めて高く、従
って本発明の方法によれば、工業的規模でアルギン酸を
低分子化することができる。
属細菌は、アルギン酸リアーゼ産生能が極めて高く、従
って本発明の方法によれば、工業的規模でアルギン酸を
低分子化することができる。
【００３７】
【実施例】以下に実施例を掲げて本発明をより一層明ら
かにする。尚、以下に単に「％」とあるのは「重量％」
を意味する。
かにする。尚、以下に単に「％」とあるのは「重量％」
を意味する。
【００３８】
【実施例１】フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−６を、オートクレーブで滅菌した液体培地（アルギン
酸ナトリウム１．５０％、（ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 ０．１
０％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．０５％、ＫＨ2 ＰＯ
4 ０．１０％、Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・１２Ｈ2 Ｏ ０．４
０％及び酵母エキス０．０５％を含む、ｐＨ７．２）１
０ｌに接種し、３０℃で２４時間振盪培養した。得られ
た培養液を遠心分離し、菌体７３ｇを得た。これを１０
ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）６０ｍｌに懸濁
し、９ＫＨｚ、１７０ｗ、１０分の超音波破砕処理を施
した後、遠心分離（２５０００ｇ、３０分）した。菌体
抽出液１２０ｍｌを、ＤＥＡＥ−セルロース（商標名、
和光純薬（株）製）カラム（４ｃｍ×４５ｃｍ、グラジ
エント：０．５Ｍ ＮａＣｌ）で精製した。該活性画分
２５０ｍｌをヒドロキシルアパタイト（商標名：東洋曹
達（株）製）カラム（４ｃｍ×２５ｃｍ、グラジエン
ト：５００ｍＭ リン酸カリウム緩衝液）で精製し、活
性画分７０ｍｌを得た。これを、ＱＡＥ−セファデック
ス Ａ−２５カラム（２．５ｃｍ×３５ｃｍ、グラジエ
ント：０．５Ｍ ＮａＣｌ）で酵素Ａ１−Ｉ及び酵素Ａ
１−ＩＩに分画した。酵素Ａ１−ＩＩは、更にセファデ
ックス−Ｇ−１５０（商標名：ファルマシア製）カラム
（１．５ｃｍ×９０ｃｍ）で、酵素Ａ１−ＩＩ−１及び
酵素Ａ１−ＩＩ−２に分画し、合計３種類の酵素液を得
た。
−６を、オートクレーブで滅菌した液体培地（アルギン
酸ナトリウム１．５０％、（ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 ０．１
０％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．０５％、ＫＨ2 ＰＯ
4 ０．１０％、Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・１２Ｈ2 Ｏ ０．４
０％及び酵母エキス０．０５％を含む、ｐＨ７．２）１
０ｌに接種し、３０℃で２４時間振盪培養した。得られ
た培養液を遠心分離し、菌体７３ｇを得た。これを１０
ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）６０ｍｌに懸濁
し、９ＫＨｚ、１７０ｗ、１０分の超音波破砕処理を施
した後、遠心分離（２５０００ｇ、３０分）した。菌体
抽出液１２０ｍｌを、ＤＥＡＥ−セルロース（商標名、
和光純薬（株）製）カラム（４ｃｍ×４５ｃｍ、グラジ
エント：０．５Ｍ ＮａＣｌ）で精製した。該活性画分
２５０ｍｌをヒドロキシルアパタイト（商標名：東洋曹
達（株）製）カラム（４ｃｍ×２５ｃｍ、グラジエン
ト：５００ｍＭ リン酸カリウム緩衝液）で精製し、活
性画分７０ｍｌを得た。これを、ＱＡＥ−セファデック
ス Ａ−２５カラム（２．５ｃｍ×３５ｃｍ、グラジエ
ント：０．５Ｍ ＮａＣｌ）で酵素Ａ１−Ｉ及び酵素Ａ
１−ＩＩに分画した。酵素Ａ１−ＩＩは、更にセファデ
ックス−Ｇ−１５０（商標名：ファルマシア製）カラム
（１．５ｃｍ×９０ｃｍ）で、酵素Ａ１−ＩＩ−１及び
酵素Ａ１−ＩＩ−２に分画し、合計３種類の酵素液を得
た。
【００３９】
【実施例２】アルギン酸ナトリウムの２．０％水溶液
に、フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ−７から
得られたアルギン酸粗酵素液（タンパク濃度８．０ｍｇ
／ｍｌ）を０．５％添加し、５０℃で酵素反応させ、前
記水溶液の粘度の経時変化を調べた。結果を図１に示
す。図１において、Ａはアルギン酸リアーゼを加えない
場合、Ｂはアルギン酸リアーゼを０．５％添加した場合
を示す。
に、フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ−７から
得られたアルギン酸粗酵素液（タンパク濃度８．０ｍｇ
／ｍｌ）を０．５％添加し、５０℃で酵素反応させ、前
記水溶液の粘度の経時変化を調べた。結果を図１に示
す。図１において、Ａはアルギン酸リアーゼを加えない
場合、Ｂはアルギン酸リアーゼを０．５％添加した場合
を示す。
【００４０】図１から、酵素添加後１５分でアルギン酸
ナトリウム水溶液の粘度が１／３に低下し、約１時間で
１／７の粘度になることがわかる。
ナトリウム水溶液の粘度が１／３に低下し、約１時間で
１／７の粘度になることがわかる。
【図１】アルギン酸ナトリウム水溶液にアルギン酸リア
ーゼを添加した場合及び添加しない場合の、該水溶液の
粘度の経時変化を示すグラフである。
ーゼを添加した場合及び添加しない場合の、該水溶液の
粘度の経時変化を示すグラフである。
Ａ：アルギン酸リアーゼを添加した場合 Ｂ：アルギン酸リアーゼを添加しない場合
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:20） (72)発明者 岡山 謙一 徳島県徳島市川内町加賀須野463番地 大塚化学株式会社食品研究所内 (72)発明者 山口 寿子 大阪府吹田市豊津町32−27 (72)発明者 村田 幸作 京都府京都市山科区北花山中道町848 (72)発明者 木村 光 京都府京都市下京区若宮通り六条上ル81 (56)参考文献 特開 昭59−143597（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−141090（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 19/00 - 19/64 C08B 37/04 C12N 1/00 - 1/38 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−６を、アルギン酸に作用させてアルギン酸を分解する
ことを特徴とするアルギン酸の分解法。 - 【請求項２】フラボバクテリウム・スピーシーズＯＴＣ
−７を、アルギン酸に作用させてアルギン酸を分解する
ことを特徴とするアルギン酸の分解法。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16489991A JP3076856B2 (ja) | 1991-07-05 | 1991-07-05 | 細菌によるアルギン酸の分解法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16489991A JP3076856B2 (ja) | 1991-07-05 | 1991-07-05 | 細菌によるアルギン酸の分解法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0515387A JPH0515387A (ja) | 1993-01-26 |
| JP3076856B2 true JP3076856B2 (ja) | 2000-08-14 |
Family
ID=15801984
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16489991A Expired - Fee Related JP3076856B2 (ja) | 1991-07-05 | 1991-07-05 | 細菌によるアルギン酸の分解法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3076856B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009149734A (ja) * | 2007-12-19 | 2009-07-09 | Kao Corp | 低分子量アルギン酸又はその誘導体の製造方法 |
| JP6025018B2 (ja) * | 2011-03-24 | 2016-11-16 | 国立大学法人北海道大学 | 新規のアルギン酸資化菌、その細菌が産生するアルギン酸を分解する酵素を含む菌抽出液、それらを用いてオリゴ糖、不飽和単糖、ないしα−ケト酸を製造する方法 |
| EP2754710A4 (en) | 2011-09-09 | 2015-04-01 | Kaneka Corp | ALGAE CULTURE METHOD AND METHOD FOR MANUFACTURING ALGINIC ACID CONTAINING COMPOSITION |
| CN110656054A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-01-07 | 杭州师范大学 | 一种胞外分泌褐藻胶裂解酶的重组里氏木霉菌及其应用 |
-
1991
- 1991-07-05 JP JP16489991A patent/JP3076856B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0515387A (ja) | 1993-01-26 |
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