JP2582806B2 - Ｌ−イソロイシンの製造法 - Google Patents
Ｌ−イソロイシンの製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、酵素法によるＬ−イソロイシンの製造法に
関するものである。
関するものである。
本発明によればＬ−又はDL−α−ヒドロキシ酪酸か
ら、高収量で効率よくＬ−イソロイシンを製造すること
ができる。
ら、高収量で効率よくＬ−イソロイシンを製造すること
ができる。
Ｌ−イソロイシンは必須アミノ酸として、人間および
動物の栄養上重要な役割りをするアミノ酸であり、医
薬、食品、飼料添加剤等としてその需要が近年急激に増
加しつつある。
動物の栄養上重要な役割りをするアミノ酸であり、医
薬、食品、飼料添加剤等としてその需要が近年急激に増
加しつつある。
公知技術 Ｌ−イソロイシンの工業的製造法としては、他のアミ
ノ酸の場合と同様に立体異性体が存在する為、化学合成
法ではＬ体のみの製造は困難であり、主に醗酵法により
生産が行われている。醗酵法としてはDL−α−アミノ酪
酸、スレオニン等のＬ−イソロイシンの前駆物質を使用
する方法（特公昭43−8709号、同40−2880号公報等）、
前駆物質を特に加えない所謂直接醗酵法（特公昭38−70
91号、特開昭49−93586号公報等）がある。一方酵素法
としては、アンモニウムイオンまたはイソロイシン以外
のＬ−若しくはDL−アミノ酸の存在下に、Ｄ−、Ｌ−、
またはDL−α−ケト−β−メチルバレリアン酸からＬ−
イソロイシンを製造する方法（特公昭46−29789号公
報）、アンモニウムイオンまたはイソロイシン以外のＬ
−若しくはDL−アミノ酸の存在下に、Ｄ−イソロイシン
あるいはＤ−アロイソロイシンの単独もしくは混合物、
又はこれらとその光学異性体との適宜混合物に作用させ
てＬ−イソロイシンを製造する方法（特公昭46−29788
号公報）、セラチア（Serratia）属細菌の固定化物を用
いてグルコースとＤ−スレオニンからＬ−イソロイシン
を製造する方法（日本醗酵工学会大会講演要旨集p.47〜
48昭和52年度）等が報告されている。しかしながらこれ
らの方法は、原料費が嵩むとか収率が低い課題を抱えて
いる。
ノ酸の場合と同様に立体異性体が存在する為、化学合成
法ではＬ体のみの製造は困難であり、主に醗酵法により
生産が行われている。醗酵法としてはDL−α−アミノ酪
酸、スレオニン等のＬ−イソロイシンの前駆物質を使用
する方法（特公昭43−8709号、同40−2880号公報等）、
前駆物質を特に加えない所謂直接醗酵法（特公昭38−70
91号、特開昭49−93586号公報等）がある。一方酵素法
としては、アンモニウムイオンまたはイソロイシン以外
のＬ−若しくはDL−アミノ酸の存在下に、Ｄ−、Ｌ−、
またはDL−α−ケト−β−メチルバレリアン酸からＬ−
イソロイシンを製造する方法（特公昭46−29789号公
報）、アンモニウムイオンまたはイソロイシン以外のＬ
−若しくはDL−アミノ酸の存在下に、Ｄ−イソロイシン
あるいはＤ−アロイソロイシンの単独もしくは混合物、
又はこれらとその光学異性体との適宜混合物に作用させ
てＬ−イソロイシンを製造する方法（特公昭46−29788
号公報）、セラチア（Serratia）属細菌の固定化物を用
いてグルコースとＤ−スレオニンからＬ−イソロイシン
を製造する方法（日本醗酵工学会大会講演要旨集p.47〜
48昭和52年度）等が報告されている。しかしながらこれ
らの方法は、原料費が嵩むとか収率が低い課題を抱えて
いる。
発明の要旨 本発明は、ビオチン要求性のブレビバクテリウム（Br
evibacterium）属に属する微生物菌体もしくはその固定
化物の存在下、Ｌ−又はDL−α−ヒドロキシ酪酸又はそ
の塩を、少なくともエタノールを含有する水溶液にて酵
素反応させて該溶液中にＬ−イソロイシンを生成せし
め、これからＬ−イソロイシンを採取することを特徴と
するＬ−イソロイシンの製造法を提供するものである。
evibacterium）属に属する微生物菌体もしくはその固定
化物の存在下、Ｌ−又はDL−α−ヒドロキシ酪酸又はそ
の塩を、少なくともエタノールを含有する水溶液にて酵
素反応させて該溶液中にＬ−イソロイシンを生成せし
め、これからＬ−イソロイシンを採取することを特徴と
するＬ−イソロイシンの製造法を提供するものである。
発明の効果 本発明によれば、工業的に安価に製造されるＬ−又は
DL−ヒドロキシ酪酸又はその塩から、高収量で効率よく
Ｌ−イソロイシンが製造できる。本発明の方法におい
て、酵素反応時の水溶液として好ましく用いられるエタ
ノールを含有する水溶液は、発酵法の場合に用いられる
培地の滅菌等煩雑な操作が必要でないので、生産管理は
容易である。
DL−ヒドロキシ酪酸又はその塩から、高収量で効率よく
Ｌ−イソロイシンが製造できる。本発明の方法におい
て、酵素反応時の水溶液として好ましく用いられるエタ
ノールを含有する水溶液は、発酵法の場合に用いられる
培地の滅菌等煩雑な操作が必要でないので、生産管理は
容易である。
本発明の方法は、従来このような酵素法によるＬ−又
はDL−ヒドロキシ酪酸からのＬ−イソロイシンの生産
は、報告が無く又実施されてもいなく、本発明は新規な
方法である。
はDL−ヒドロキシ酪酸からのＬ−イソロイシンの生産
は、報告が無く又実施されてもいなく、本発明は新規な
方法である。
発明の具体的説明 本発明に使用される微生物は、ビオチン要求性のブレ
ビバクテリウム（Brevibacterium）属に属するものであ
り、好ましくはエタノール資化性のものである。このな
かにはＬ−イソロイシン生産菌が含まれる。本発明に使
用される微生物菌体としては例えば、ブレビバクテリウ
ム・フラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233（FERM
BP−1497）、ブレビバクテリウム・フラバム（Brevib
acterium flavum）MJ−233−AB−41（FERM BP−149
8）、ブレビバクテリウム・フラバム（Brevibacterium
flavum）MJ−233−ABT−11（FERM BP−1500）及びブレ
ビバクテリウム・フラバム（Brevibacterium flavum）M
J−233−ABD−21（FERM BP−1499）等であり、これら
の菌が本発明に好適に用いられる。
ビバクテリウム（Brevibacterium）属に属するものであ
り、好ましくはエタノール資化性のものである。このな
かにはＬ−イソロイシン生産菌が含まれる。本発明に使
用される微生物菌体としては例えば、ブレビバクテリウ
ム・フラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233（FERM
BP−1497）、ブレビバクテリウム・フラバム（Brevib
acterium flavum）MJ−233−AB−41（FERM BP−149
8）、ブレビバクテリウム・フラバム（Brevibacterium
flavum）MJ−233−ABT−11（FERM BP−1500）及びブレ
ビバクテリウム・フラバム（Brevibacterium flavum）M
J−233−ABD−21（FERM BP−1499）等であり、これら
の菌が本発明に好適に用いられる。
なお、上記の（FERM BP−1498）は、（FERM BP−14
97）を親株としてDL−α−アミノ酪酸耐性を積極的に付
与されたエタノール資化性微生物である（特公昭59−28
398号公報３〜４欄参照）。（FERM BP−1500）は、（F
ERM BP−1497）を親株としたＬ−α−アミノ酪酸トラ
ンスアミナーゼ高活性変異株である（特開昭62−51998
号公報参照）。また、（FERM BP−1499）は（FERM BP
−1497）を親株としたＤ−α−アミノ酪酸デアミナーゼ
高活性変異株である（特開昭61−177993号公報参照）。
97）を親株としてDL−α−アミノ酪酸耐性を積極的に付
与されたエタノール資化性微生物である（特公昭59−28
398号公報３〜４欄参照）。（FERM BP−1500）は、（F
ERM BP−1497）を親株としたＬ−α−アミノ酪酸トラ
ンスアミナーゼ高活性変異株である（特開昭62−51998
号公報参照）。また、（FERM BP−1499）は（FERM BP
−1497）を親株としたＤ−α−アミノ酪酸デアミナーゼ
高活性変異株である（特開昭61−177993号公報参照）。
これらの微生物菌体の他にブレビバクテリウム・アン
モニアゲネス（Brevibacterium ammoniagenes）ATCC687
1、同ATCC13745、同ATCC13746、ブレビバクテリウム・
デバリカタム（Brevibacterium divaricatum）ATCC1402
0等を用いることもできる。
モニアゲネス（Brevibacterium ammoniagenes）ATCC687
1、同ATCC13745、同ATCC13746、ブレビバクテリウム・
デバリカタム（Brevibacterium divaricatum）ATCC1402
0等を用いることもできる。
本発明に見いられるビオチン要求性のブレビバクテリ
ウム属に属する微生物菌体は、微生物菌体そのままで用
いることもできるし、又これらを公知の手法で固定化し
た固定化物を使用することもできる。この固定化手法と
しては、菌体をアクリルアミド等の重合性モノマーを用
いたり、アルギン酸塩あるいはカラギーナン等の適当な
担体に固定化させる等がある。
ウム属に属する微生物菌体は、微生物菌体そのままで用
いることもできるし、又これらを公知の手法で固定化し
た固定化物を使用することもできる。この固定化手法と
しては、菌体をアクリルアミド等の重合性モノマーを用
いたり、アルギン酸塩あるいはカラギーナン等の適当な
担体に固定化させる等がある。
本発明の方法に使用される上記のビオチン要求性のブ
レビバクテリウム属に属する微生物菌体の調製に使用す
る培地は、特に限定されるものではなく一般の微生物に
使用されるものでよい。中でも好ましいものは、エタノ
ールを主炭素源とする培地である。
レビバクテリウム属に属する微生物菌体の調製に使用す
る培地は、特に限定されるものではなく一般の微生物に
使用されるものでよい。中でも好ましいものは、エタノ
ールを主炭素源とする培地である。
本発明に使用する微生物菌体の調整に使用する培地の
窒素源としてはアンモニア、硫酸アンモニウム、塩化ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素等を単独若しくは
混合して用いることが出来る。
窒素源としてはアンモニア、硫酸アンモニウム、塩化ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素等を単独若しくは
混合して用いることが出来る。
無機塩としては、リン酸一水素カリウム、リン酸二水
素カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられる。この他
に菌の生育及びＬ−イソロイシン生成に必要であれば、
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリ
カー、カザミノ酸、各種ビタミン等の栄養素を培地に添
加し用いる。
素カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられる。この他
に菌の生育及びＬ−イソロイシン生成に必要であれば、
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリ
カー、カザミノ酸、各種ビタミン等の栄養素を培地に添
加し用いる。
培養は通気撹拌、振盪等の好気的条件下で行い、培養
温度は20〜40℃、好ましくは25〜35℃で行う。培養途中
のpHは５〜10、好ましくは７〜８付近にて行い、培養中
のpHの調整には酸、アルカリを添加して行う。
温度は20〜40℃、好ましくは25〜35℃で行う。培養途中
のpHは５〜10、好ましくは７〜８付近にて行い、培養中
のpHの調整には酸、アルカリを添加して行う。
培養開始時のエタノール濃度は好ましくは１〜５容量
％、更に好ましくは２〜３容量％が適する。培養期間は
２〜９日間、最適期間は４〜７日間である。
％、更に好ましくは２〜３容量％が適する。培養期間は
２〜９日間、最適期間は４〜７日間である。
このようにして得られた培養物から菌体を集めて、水
又は適当な緩衝液で洗浄し、本発明の方法の酵素反応に
使用する。
又は適当な緩衝液で洗浄し、本発明の方法の酵素反応に
使用する。
本発明の方法においては、上記で調製された微生物菌
体（ここには、その固定化物も含まれる）の存在下、Ｌ
−又はDL−α−ヒドロキシ酪酸又はその塩を、少なくと
もエタノールを含有する水溶液にて酵素反応させる。こ
こで該水溶液に添加されるエタノールの濃度は0.5〜4.0
容量％、好ましくは１〜2.0容量％である。
体（ここには、その固定化物も含まれる）の存在下、Ｌ
−又はDL−α−ヒドロキシ酪酸又はその塩を、少なくと
もエタノールを含有する水溶液にて酵素反応させる。こ
こで該水溶液に添加されるエタノールの濃度は0.5〜4.0
容量％、好ましくは１〜2.0容量％である。
Ｌ−又はDL−α−ヒドロキシ酪酸又はその塩の酵素反
応における使用濃度は、一般に0.1〜20％（wt/vol）が
好ましい。
応における使用濃度は、一般に0.1〜20％（wt/vol）が
好ましい。
本発明の方法において、酵素反応に用いる水溶液は、
上記の様にエタノールを含有する水あるいはリン酸又は
トリス塩酸等の緩衝液を用いることもできるが、好まし
くはエタノールを含みこれに更に公知の窒素源及び無機
塩を含有するものが用いられる。これらの窒素源及び無
機塩を反応系に添加するとＬ−イソロイシンの生成量が
向上するので好ましい。これらの窒素源及び無機塩に
は、ビオチンが含まれないことが必要で、ビオチンがこ
れらに含まれていると反応系で微生物の増殖が起り、原
料エタノールが浪費され又、微生物の増殖による副生成
物等の分離・精製等が煩雑になるので好ましくない。
上記の様にエタノールを含有する水あるいはリン酸又は
トリス塩酸等の緩衝液を用いることもできるが、好まし
くはエタノールを含みこれに更に公知の窒素源及び無機
塩を含有するものが用いられる。これらの窒素源及び無
機塩を反応系に添加するとＬ−イソロイシンの生成量が
向上するので好ましい。これらの窒素源及び無機塩に
は、ビオチンが含まれないことが必要で、ビオチンがこ
れらに含まれていると反応系で微生物の増殖が起り、原
料エタノールが浪費され又、微生物の増殖による副生成
物等の分離・精製等が煩雑になるので好ましくない。
本発明に用いられる窒素源としては、アンモニア、塩
化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等の無機窒素源が好ましく例示
でき、また無機塩としては、リン酸一水素カリウム、リ
ン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガ
ン、硫酸鉄等が例示される。これらの無機窒素源、無機
塩は、単独でも２種以上混合して用いることもできる。
化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等の無機窒素源が好ましく例示
でき、また無機塩としては、リン酸一水素カリウム、リ
ン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガ
ン、硫酸鉄等が例示される。これらの無機窒素源、無機
塩は、単独でも２種以上混合して用いることもできる。
これら無機窒素源及び／又は無機塩の水溶液としての
濃度は、通常の微生物菌体の培養に使用される培地と同
程度の範囲でよく、特に限定されない。
濃度は、通常の微生物菌体の培養に使用される培地と同
程度の範囲でよく、特に限定されない。
上述の様に、本発明に使用される酵素反応の水溶液に
は、ビオチン又はビオチンを含む天然物は含有されな
い。ビオチンの含有されないことの明らかな化学構造公
知のアミノ酸、ビタミン、糖類等は添加することはでき
る。
は、ビオチン又はビオチンを含む天然物は含有されな
い。ビオチンの含有されないことの明らかな化学構造公
知のアミノ酸、ビタミン、糖類等は添加することはでき
る。
本発明の方法においては、酵素反応に用いられる前記
の微生物菌体の使用量は、特に限定されるものではない
が、一般に１〜50％（wt/vol）の濃度で使用することが
出来る。
の微生物菌体の使用量は、特に限定されるものではない
が、一般に１〜50％（wt/vol）の濃度で使用することが
出来る。
本発明において、酵素反応は、約20〜約50℃、好まし
くは約30〜約40℃の温度で、通常約10〜約72時間行われ
る。
くは約30〜約40℃の温度で、通常約10〜約72時間行われ
る。
上記酵素反応は、反応に用いられるエタノールを含有
する水溶液中の溶存酸素濃度が0.05ppm以上、8ppm以下
となる様に、反応系中に空気もしくは酸素を、連続又間
歇的に供給して行うのが好ましい。
する水溶液中の溶存酸素濃度が0.05ppm以上、8ppm以下
となる様に、反応系中に空気もしくは酸素を、連続又間
歇的に供給して行うのが好ましい。
上記のような反応方法によつて得られる反応液中に生
成したＬ−イソロイシンの分離・精製は、公知のイオン
交換樹脂処理法あるいは、沈殿法等により行うことがで
きる。
成したＬ−イソロイシンの分離・精製は、公知のイオン
交換樹脂処理法あるいは、沈殿法等により行うことがで
きる。
実施例 以下の実験例において、Ｌ−イソロイシンの定性は、
ペーパークロマトグラフのRf値、電気泳動法の移動度、
微生物定量法による生物活性値により確認した。定量は
ロイコノストツク・メセンテロイデス（Leuconostoc me
senteroides）ATCC8042を用いるマイクロバイオアツセ
イ法と高速液体クロマトグラフイー（島津LC−5A）とを
併用して行つた。また、下記の実験例において％と表し
たのは重量％を意味する。
ペーパークロマトグラフのRf値、電気泳動法の移動度、
微生物定量法による生物活性値により確認した。定量は
ロイコノストツク・メセンテロイデス（Leuconostoc me
senteroides）ATCC8042を用いるマイクロバイオアツセ
イ法と高速液体クロマトグラフイー（島津LC−5A）とを
併用して行つた。また、下記の実験例において％と表し
たのは重量％を意味する。
実施例−１ 培地（尿素0.4％、硫酸アンモニウム1.4％、KH2PO40.
05％、K2HPO40.05％、MgSO4・7H2O0.05％、CaCl2・2H2O
2ppm、FeSO4・7H2O2ppm、MnSO4・４〜6H2O2ppm、ZnSO4
・7H2O2ppm、NaCl2ppm、ビオチン200μg/、チアミン
・HCl100μg/、カザミノ酸0.1％、酵母エキス0.1％）
100mlを500ml容三角フラスコに分注、滅菌（滅菌後pH7.
0）した後ブレビバクテリウム・フラバム（Brevibacter
ium flavum）MJ−233（FERM BP−1497）を植菌し、無
菌的にエタノールを2ml加え、30℃にて２日間振盪培養
を行つた。
05％、K2HPO40.05％、MgSO4・7H2O0.05％、CaCl2・2H2O
2ppm、FeSO4・7H2O2ppm、MnSO4・４〜6H2O2ppm、ZnSO4
・7H2O2ppm、NaCl2ppm、ビオチン200μg/、チアミン
・HCl100μg/、カザミノ酸0.1％、酵母エキス0.1％）
100mlを500ml容三角フラスコに分注、滅菌（滅菌後pH7.
0）した後ブレビバクテリウム・フラバム（Brevibacter
ium flavum）MJ−233（FERM BP−1497）を植菌し、無
菌的にエタノールを2ml加え、30℃にて２日間振盪培養
を行つた。
次に、本培養培地（硫酸アンモニウム2.3％、KH2PO
40.05％、K2HPO40.05％、MgSO4・7H2O0.05％、FeSO4・7
H2O20ppm、MnSO4・nH2O20ppm、ビオチン200μg/、チ
アミン・HCl100μg/、カザミノ酸0.3％、酵母エキス
0.3％）の1000mlを２容通気撹拌槽に仕込み、滅菌（1
20℃、20分間）後、エタノールの20mlと前記前培養物の
20mlを添加して、回転数1000rpm、通気量1vvm、温度33
℃pH7.6にて48時間培養を行つた。
40.05％、K2HPO40.05％、MgSO4・7H2O0.05％、FeSO4・7
H2O20ppm、MnSO4・nH2O20ppm、ビオチン200μg/、チ
アミン・HCl100μg/、カザミノ酸0.3％、酵母エキス
0.3％）の1000mlを２容通気撹拌槽に仕込み、滅菌（1
20℃、20分間）後、エタノールの20mlと前記前培養物の
20mlを添加して、回転数1000rpm、通気量1vvm、温度33
℃pH7.6にて48時間培養を行つた。
尚、エタノールは、培養中培地の温度が２容量％を越
えないように、約１〜２時間ごと断続的に添加した。
えないように、約１〜２時間ごと断続的に添加した。
培養終了後、培養物500mlから遠心分離にて集菌し
た。これを脱塩蒸留水にて２度洗浄して得た菌体を、反
応液〔（NH4）2SO42g/;KH2PO40.5g/;KH2PO40.5g/
;MgSO4・7H2O0.5g/;FeSO4・7H2O20ppm;MnSO44〜6H2
O20ppm;チアミン−塩酸100μg/、DL−α−ヒドロキシ
酪酸10g/（pH7.6）〕の1000mlに懸濁後、該懸濁液を
２容通気撹拌槽に仕込み、エタノール20mlを添加し
て、回転数300rpm、溶存酸素濃度0.1ppm、温度33℃、pH
7.6にて15時間反応を行つた。
た。これを脱塩蒸留水にて２度洗浄して得た菌体を、反
応液〔（NH4）2SO42g/;KH2PO40.5g/;KH2PO40.5g/
;MgSO4・7H2O0.5g/;FeSO4・7H2O20ppm;MnSO44〜6H2
O20ppm;チアミン−塩酸100μg/、DL−α−ヒドロキシ
酪酸10g/（pH7.6）〕の1000mlに懸濁後、該懸濁液を
２容通気撹拌槽に仕込み、エタノール20mlを添加し
て、回転数300rpm、溶存酸素濃度0.1ppm、温度33℃、pH
7.6にて15時間反応を行つた。
反応終了後、遠心分離（4000rpm、15分間、４℃）に
て除菌した上清液中のＬ−イソロイシンを定量した。
て除菌した上清液中のＬ−イソロイシンを定量した。
また、反応終了後の反応液500mlを、強酸性陽イオン
交換樹脂（H+型）のカラムに通してＬ−イソロイシンを
吸着させ、水洗後、0.5Nアンモニア水で溶出させたの
ち、Ｌ−イソロイシン画分を濃縮し、冷エタノールでＬ
−イソロイシンの結晶を析出させ、精製した。結果を第
１表に示した。
交換樹脂（H+型）のカラムに通してＬ−イソロイシンを
吸着させ、水洗後、0.5Nアンモニア水で溶出させたの
ち、Ｌ−イソロイシン画分を濃縮し、冷エタノールでＬ
−イソロイシンの結晶を析出させ、精製した。結果を第
１表に示した。
実施例−２ 実施例−１と同様の条件にてブレビバクテリウム・フ
ラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233−AB−41（FE
RM BP−1498）を培養し、また実施例−１と同様の条件
にて反応させた上清液中のＬ−イソロイシンを定量し
た。また、実施例−１と同様にしてＬ−イソロイシンの
結晶を析出させた。結果は第２表に示した。
ラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233−AB−41（FE
RM BP−1498）を培養し、また実施例−１と同様の条件
にて反応させた上清液中のＬ−イソロイシンを定量し
た。また、実施例−１と同様にしてＬ−イソロイシンの
結晶を析出させた。結果は第２表に示した。
実施例−３ 実施例−１と同様の条件にてブレビバクテリウム・フ
ラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233−ABT−11（F
ERM BP−1500）を培養し、また実施例−１と同様の条
件にて反応させた上清液中のＬ−イソロイシンを定量し
た。また、実施例−１と同様にしてＬ−イソロイシンの
結晶を析出させ、精製した。結果は第３表に示した。
ラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233−ABT−11（F
ERM BP−1500）を培養し、また実施例−１と同様の条
件にて反応させた上清液中のＬ−イソロイシンを定量し
た。また、実施例−１と同様にしてＬ−イソロイシンの
結晶を析出させ、精製した。結果は第３表に示した。
実施例−４ 実施例−１と同様の条件にてブレビバクテリウム・フ
ラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233−ABD−21（F
ERM BP−1499）を培養し、また実施例−１と同様の条
件にて反応させた後上清液中のＬ−イソロイシンを定量
した。また、実施例−１と同様にしてＬ−イソロイシン
の結晶を析出させ、精製した。結果を第４表に示した。
ラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233−ABD−21（F
ERM BP−1499）を培養し、また実施例−１と同様の条
件にて反応させた後上清液中のＬ−イソロイシンを定量
した。また、実施例−１と同様にしてＬ−イソロイシン
の結晶を析出させ、精製した。結果を第４表に示した。
実施例−５ 実施例−１と同様の条件にてブレビバクテリウム・フ
ラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233（FERM BP−
1497）を培養し、培養物100mlから遠心分離にて集菌
後、これを硫酸アンモニウム0.5g、DL−α−ヒドロキシ
酪酸0.5g、エタノール1mlを含む0.1Mリン酸緩衝液（pH
7.6）50mlに懸濁し振盪しながら30℃、48時間反応を行
つた。
ラバム（Brevibacterium flavum）MJ−233（FERM BP−
1497）を培養し、培養物100mlから遠心分離にて集菌
後、これを硫酸アンモニウム0.5g、DL−α−ヒドロキシ
酪酸0.5g、エタノール1mlを含む0.1Mリン酸緩衝液（pH
7.6）50mlに懸濁し振盪しながら30℃、48時間反応を行
つた。
反応終了後、遠心分離にて除菌した上清液中に、Ｌ−
イソロイシンが0.9mg/ml蓄積された。
イソロイシンが0.9mg/ml蓄積された。
上記上清液40mlから、実施例−１と同様の操作にてＬ
−イソロイシンの結晶を析出させたところ、20mgの粗結
晶を得た。
−イソロイシンの結晶を析出させたところ、20mgの粗結
晶を得た。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 奈良 昭一 茨城県稲敷郡阿見町中央８丁目３番１号 三菱油化株式会社中央研究所内 (72)発明者 四方 和通 茨城県稲敷郡阿見町中央８丁目３番１号 三菱油化株式会社中央研究所内 (72)発明者 湯川 英明 茨城県稲敷郡阿見町中央８丁目３番１号 三菱油化株式会社中央研究所内
Claims (2)
- 【請求項１】ビオチン要求性のブレビバクテリウム（Br
evibacterium）属に属する微生物菌体もしくはその固定
化物の存在下、Ｌ−又はDL−α−ヒドロキシ酪酸又はそ
の塩を、少なくともエタノールを含有する水溶液にて酵
素反応させて該溶液中にＬ−イソロイシンを生成せし
め、これからＬ−イソロイシンを採取することを特徴と
するＬ−イソロイシンの製造法。 - 【請求項２】該ブレビバクテリウム（Brevibacterium）
属に属する微生物がエタノール資化性を有するものであ
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26738287A JP2582806B2 (ja) | 1987-10-23 | 1987-10-23 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26738287A JP2582806B2 (ja) | 1987-10-23 | 1987-10-23 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01108992A JPH01108992A (ja) | 1989-04-26 |
| JP2582806B2 true JP2582806B2 (ja) | 1997-02-19 |
Family
ID=17444067
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26738287A Expired - Lifetime JP2582806B2 (ja) | 1987-10-23 | 1987-10-23 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2582806B2 (ja) |
-
1987
- 1987-10-23 JP JP26738287A patent/JP2582806B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01108992A (ja) | 1989-04-26 |
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