JPH0452118B2 - - Google Patents
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- JPH0452118B2 JPH0452118B2 JP58185313A JP18531383A JPH0452118B2 JP H0452118 B2 JPH0452118 B2 JP H0452118B2 JP 58185313 A JP58185313 A JP 58185313A JP 18531383 A JP18531383 A JP 18531383A JP H0452118 B2 JPH0452118 B2 JP H0452118B2
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は発酵法によるアデノシンの製造法に関
する。 従来、発酵法によるアデノシン生産に関して
は、グアニン要求株を用いる方法が知られてい
る。 本発明者らは更にアデノシンの生産性の高い菌
株を得るべく種々検討した結果、バチルス属に属
し、グアニン要求性を有し、８−アザアデニン、
及び又は６−メチルアミノプリンに耐性を有する
変異株が極めて著量のアデノシンを生成すること
を見出した。この知見に基いて本発明を完成し
た。 本発明において用いる微生物の採取は具体的に
は次のように行なつた。まず、Bcaillus Subtilis
の野生株を親株として通常の方法で変異処理を行
ない、菌株の生育にグアニンを要求する菌株を得
た。この菌株を親株として変異処理を行ない、各
種薬剤耐性株を採取した。その結果、８−アザア
デニン及び又は６−メチルアミノプリン耐性を有
する菌株のなかに著量のアデノシンを培養液中に
蓄積する菌株が存在することを見出した。上記手
法により得られた微生物を具体的に例示すれば以
下の菌株がある。 バチルスズブチリスAJ 12048 FERM Ｐ−
1747（グアニン要求、８−アザアデニン耐性） バチルスズブチリスAJ 12049 FERM Ｐ−
1748（グアニン要求、６−メチルアミノプリン耐
性） バチルスズブチリスAJ 12050 FERM Ｐ−
1749（グアニン要求、８−アザアデニン耐性、６
−メチルアミノプリン耐性） 本発明の変異株の各薬剤に対する耐生度を示す
実験結果を以下に示す。 実験例 下記の基本培地に薬剤をそれぞれ第１表に示す
濃度になるように添加した培地を調製し試験管に
３mlづつ分注し殺菌後、各菌株を接種し、34℃、
20時間振とう培養を行つた。 基本培地 グルコース ２ｇ／dl 塩化アンモン 0.5 〃 リン酸第一カリ 0.1 〃 硫酸マグネシユーム 0.04 〃 クエン酸ソーダ 0.05 〃 Ｌ−グルタミン酸 0.1 〃 グアニン 0.01 〃 Fe++，Ma++（各） 2ppm PH（KOH） 7.0 第１表に試験結果を示す。数値は相対生育値で
ある。なお親株として用いたBacillus Subtilisは
薬剤存在下で生育が認められなかつた。
する。 従来、発酵法によるアデノシン生産に関して
は、グアニン要求株を用いる方法が知られてい
る。 本発明者らは更にアデノシンの生産性の高い菌
株を得るべく種々検討した結果、バチルス属に属
し、グアニン要求性を有し、８−アザアデニン、
及び又は６−メチルアミノプリンに耐性を有する
変異株が極めて著量のアデノシンを生成すること
を見出した。この知見に基いて本発明を完成し
た。 本発明において用いる微生物の採取は具体的に
は次のように行なつた。まず、Bcaillus Subtilis
の野生株を親株として通常の方法で変異処理を行
ない、菌株の生育にグアニンを要求する菌株を得
た。この菌株を親株として変異処理を行ない、各
種薬剤耐性株を採取した。その結果、８−アザア
デニン及び又は６−メチルアミノプリン耐性を有
する菌株のなかに著量のアデノシンを培養液中に
蓄積する菌株が存在することを見出した。上記手
法により得られた微生物を具体的に例示すれば以
下の菌株がある。 バチルスズブチリスAJ 12048 FERM Ｐ−
1747（グアニン要求、８−アザアデニン耐性） バチルスズブチリスAJ 12049 FERM Ｐ−
1748（グアニン要求、６−メチルアミノプリン耐
性） バチルスズブチリスAJ 12050 FERM Ｐ−
1749（グアニン要求、８−アザアデニン耐性、６
−メチルアミノプリン耐性） 本発明の変異株の各薬剤に対する耐生度を示す
実験結果を以下に示す。 実験例 下記の基本培地に薬剤をそれぞれ第１表に示す
濃度になるように添加した培地を調製し試験管に
３mlづつ分注し殺菌後、各菌株を接種し、34℃、
20時間振とう培養を行つた。 基本培地 グルコース ２ｇ／dl 塩化アンモン 0.5 〃 リン酸第一カリ 0.1 〃 硫酸マグネシユーム 0.04 〃 クエン酸ソーダ 0.05 〃 Ｌ−グルタミン酸 0.1 〃 グアニン 0.01 〃 Fe++，Ma++（各） 2ppm PH（KOH） 7.0 第１表に試験結果を示す。数値は相対生育値で
ある。なお親株として用いたBacillus Subtilisは
薬剤存在下で生育が認められなかつた。
【表】
このような微生物を培養する培地は、炭素源、
窒素源、無機塩類、グアニンおよび必要ならば更
にその他の微量栄養素を含有する通常の液体培地
である。炭素源としては、グルコース、糖蜜、デ
ンプン加水分解液などの炭水化物、酢酸、プロピ
オン酸、ピルビン酸、クエン酸等の有機酸、エタ
ノール、プロパノールなどのアルコール類、さら
に菌によつては炭化水素などを使用できる。窒素
源としては硫安、硝安、塩安、リン安等のアンモ
ニユーム塩、硝酸塩、尿素、アンモニアガス等の
無機態窒素もしくはカゼイン加水分解物、アミノ
酸等の有機態窒素等が使用できる。また、栄養要
求物質としてのグアニンはグアニン・グアニン鉱
酸塩、グアノシン、グアニル酸、リボ核酸等のい
ずれも使用可能である。また、必要に応じてビタ
ミン類、アミノ酸、核酸塩基などの微量栄養素を
添加すればアデノシンの蓄積量を増すことができ
る場合が多い。また本発明の微生物にアミノ酸等
の要求性を付与すれば更にアデノシンの収量が向
上する場合が多いがその場合にはその要求物質を
添加しなければならない。 培養方法は好気的に条件が良く、また、培養温
度は20ないし40℃の範囲がよい。場合によつては
発酵途中にて発酵温度を若干変更させてもよい。
培養開始時および培養中のPHを5.0ないし9.0の範
囲の最適値に調節して培養するのが望ましい。PH
の調整は無機酸、有機酸あるいはアルカリさらに
尿素、炭酸カルシユーム、アンモニア水、アンモ
ニアガスをなどを使用することができる。かくし
て２〜５日間培養すれば著量のアデノシンが培地
中に蓄積される。 発酵液よりアデノシンを採取するには、例えば
菌体を分離除去し、アニオン交換樹脂、カチオン
交換樹脂等の樹脂処理あるいは濃縮冷却晶析法の
併用等によりアデノシンを単離する。不純物を除
くためには常法の活性炭吸着法および再結法を用
いて精製してもよい。 実施例 第２表のシード培地50mlを張り込んだ500ml容
フラスコに第３表に示す菌株を１白金耳接種し、
34℃にて16時間培養した。 この培養液を、上記主発酵培地20ml張り込んだ
500ml容フラスコに１ml添加し34℃にて72時間培
養した。この培養液中のアデノシンのを液体クロ
マトグラフにて定量したところ第３表に示す量の
アデノシンのが生成蓄積した。 上記の同様の方法によつて得たAJ12050の培養
液10より菌体を遠心分離法で除いた後上清をエ
バポレーターにて２まで濃縮した。この濃縮液
を５℃に放置してアデノシンの結晶を生成させ
た。得られたアデノシンの結晶を水に溶解し、更
に活性炭に吸着せしめ常法により溶出しアデノシ
ン画分を採取し、濃縮冷却晶析することによりア
デノシンの結晶78ｇを得た。
窒素源、無機塩類、グアニンおよび必要ならば更
にその他の微量栄養素を含有する通常の液体培地
である。炭素源としては、グルコース、糖蜜、デ
ンプン加水分解液などの炭水化物、酢酸、プロピ
オン酸、ピルビン酸、クエン酸等の有機酸、エタ
ノール、プロパノールなどのアルコール類、さら
に菌によつては炭化水素などを使用できる。窒素
源としては硫安、硝安、塩安、リン安等のアンモ
ニユーム塩、硝酸塩、尿素、アンモニアガス等の
無機態窒素もしくはカゼイン加水分解物、アミノ
酸等の有機態窒素等が使用できる。また、栄養要
求物質としてのグアニンはグアニン・グアニン鉱
酸塩、グアノシン、グアニル酸、リボ核酸等のい
ずれも使用可能である。また、必要に応じてビタ
ミン類、アミノ酸、核酸塩基などの微量栄養素を
添加すればアデノシンの蓄積量を増すことができ
る場合が多い。また本発明の微生物にアミノ酸等
の要求性を付与すれば更にアデノシンの収量が向
上する場合が多いがその場合にはその要求物質を
添加しなければならない。 培養方法は好気的に条件が良く、また、培養温
度は20ないし40℃の範囲がよい。場合によつては
発酵途中にて発酵温度を若干変更させてもよい。
培養開始時および培養中のPHを5.0ないし9.0の範
囲の最適値に調節して培養するのが望ましい。PH
の調整は無機酸、有機酸あるいはアルカリさらに
尿素、炭酸カルシユーム、アンモニア水、アンモ
ニアガスをなどを使用することができる。かくし
て２〜５日間培養すれば著量のアデノシンが培地
中に蓄積される。 発酵液よりアデノシンを採取するには、例えば
菌体を分離除去し、アニオン交換樹脂、カチオン
交換樹脂等の樹脂処理あるいは濃縮冷却晶析法の
併用等によりアデノシンを単離する。不純物を除
くためには常法の活性炭吸着法および再結法を用
いて精製してもよい。 実施例 第２表のシード培地50mlを張り込んだ500ml容
フラスコに第３表に示す菌株を１白金耳接種し、
34℃にて16時間培養した。 この培養液を、上記主発酵培地20ml張り込んだ
500ml容フラスコに１ml添加し34℃にて72時間培
養した。この培養液中のアデノシンのを液体クロ
マトグラフにて定量したところ第３表に示す量の
アデノシンのが生成蓄積した。 上記の同様の方法によつて得たAJ12050の培養
液10より菌体を遠心分離法で除いた後上清をエ
バポレーターにて２まで濃縮した。この濃縮液
を５℃に放置してアデノシンの結晶を生成させ
た。得られたアデノシンの結晶を水に溶解し、更
に活性炭に吸着せしめ常法により溶出しアデノシ
ン画分を採取し、濃縮冷却晶析することによりア
デノシンの結晶78ｇを得た。
【表】 第３表 菌 株 アデノシンｇ／
AJ12048 5.2
AJ12049 6.3 AJ12050 11.5
Claims (1)
- １ バチルス属に属し、生育のためにグアニンを
要求し、８−アザアデニン及び６−メチルアミノ
プリンに耐性を有し、アデノシンを生成蓄積する
能力を有する変異株を液体培地中に培養し、生成
蓄積したアデノシンを採取することを特徴とする
発酵法によるアデノシンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18531383A JPS6078593A (ja) | 1983-10-04 | 1983-10-04 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18531383A JPS6078593A (ja) | 1983-10-04 | 1983-10-04 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6078593A JPS6078593A (ja) | 1985-05-04 |
| JPH0452118B2 true JPH0452118B2 (ja) | 1992-08-20 |
Family
ID=16168659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18531383A Granted JPS6078593A (ja) | 1983-10-04 | 1983-10-04 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6078593A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103146786A (zh) * | 2013-03-25 | 2013-06-12 | 天津科技大学 | 一种采用梯度pH顺序控制发酵生产腺苷的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4832348A (ja) * | 1971-08-28 | 1973-04-28 | ||
| JPS5714160A (en) * | 1980-06-27 | 1982-01-25 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | Airconditioner |
-
1983
- 1983-10-04 JP JP18531383A patent/JPS6078593A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4832348A (ja) * | 1971-08-28 | 1973-04-28 | ||
| JPS5714160A (en) * | 1980-06-27 | 1982-01-25 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | Airconditioner |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6078593A (ja) | 1985-05-04 |
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