JP2022540319A - 四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 - Google Patents
四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022540319A JP2022540319A JP2021574257A JP2021574257A JP2022540319A JP 2022540319 A JP2022540319 A JP 2022540319A JP 2021574257 A JP2021574257 A JP 2021574257A JP 2021574257 A JP2021574257 A JP 2021574257A JP 2022540319 A JP2022540319 A JP 2022540319A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- light chain
- seq
- heavy chain
- nos
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 60
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 52
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 111
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 110
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 110
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 87
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 76
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 69
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 60
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 43
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 40
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 36
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 26
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 claims description 26
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 26
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 26
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 24
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 24
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 23
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 22
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 claims description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 22
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 22
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 17
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 14
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 14
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 claims description 14
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims description 10
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 8
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims description 8
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 8
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 8
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 238000005304 joining Methods 0.000 claims description 8
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 7
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 5
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 3
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 3
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 230000009452 underexpressoin Effects 0.000 claims description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims 3
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims 2
- 208000017572 squamous cell neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 162
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 114
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 114
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 80
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 73
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 66
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 65
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 40
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 38
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 29
- 102000048362 human PDCD1 Human genes 0.000 description 27
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 27
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 27
- 238000013368 capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate analysis Methods 0.000 description 25
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 23
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 19
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 19
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 18
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 18
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 18
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 16
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 16
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 16
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 15
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 14
- 102100020873 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 13
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 230000008859 change Effects 0.000 description 12
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 12
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 12
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 12
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 102000003979 Mineralocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 10
- 108090000375 Mineralocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 10
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 101000998947 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-46 Proteins 0.000 description 8
- 102100036888 Immunoglobulin heavy variable 1-46 Human genes 0.000 description 8
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 229940055760 yervoy Drugs 0.000 description 8
- 101001047629 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-30 Proteins 0.000 description 7
- 102100022952 Immunoglobulin kappa variable 2-30 Human genes 0.000 description 7
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 7
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 7
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 6
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 6
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 5
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 5
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 5
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 5
- 241000209094 Oryza Species 0.000 description 5
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 125000003295 alanine group Chemical class N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 5
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 5
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 5
- 102000050327 human TNFRSF9 Human genes 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 4
- 101000839781 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-59 Proteins 0.000 description 4
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 4
- 102100028405 Immunoglobulin heavy variable 4-59 Human genes 0.000 description 4
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 3
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 3
- YMXHPSHLTSZXKH-RVBZMBCESA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoate Chemical compound C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O YMXHPSHLTSZXKH-RVBZMBCESA-N 0.000 description 2
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100099884 Homo sapiens CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 101001037141 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-21 Proteins 0.000 description 2
- 101000989065 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 7-4-1 Proteins 0.000 description 2
- 101001138089 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-39 Proteins 0.000 description 2
- 101001047617 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-11 Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102100040217 Immunoglobulin heavy variable 3-21 Human genes 0.000 description 2
- 102100029420 Immunoglobulin heavy variable 7-4-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100020910 Immunoglobulin kappa variable 1-39 Human genes 0.000 description 2
- 102100022955 Immunoglobulin kappa variable 3-11 Human genes 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 102000011117 Transforming Growth Factor beta2 Human genes 0.000 description 2
- 101800000304 Transforming growth factor beta-2 Proteins 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 2
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 102000044459 human CD47 Human genes 0.000 description 2
- 102000043321 human CTLA4 Human genes 0.000 description 2
- 102000051957 human ERBB2 Human genes 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 2
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 238000012492 Biacore method Methods 0.000 description 1
- 229940116741 CD137 agonist Drugs 0.000 description 1
- 208000030808 Clear cell renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 239000012739 FreeStyle 293 Expression medium Substances 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Chemical group OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001090250 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 6-21 Proteins 0.000 description 1
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010062904 Hormone-refractory prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100034806 Immunoglobulin kappa variable 6-21 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220595577 Major vault protein_R24A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220490832 Mannosyl-oligosaccharide glucosidase_Y32F_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 101000686985 Mouse mammary tumor virus (strain C3H) Protein PR73 Proteins 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 1
- 102000004584 Somatomedin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010017622 Somatomedin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- 102000056172 Transforming growth factor beta-3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000097 Transforming growth factor beta-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000016549 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000011190 asparagine deamidation Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 206010073251 clear cell renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- -1 etc. Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Chemical group 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 1
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007056 liver toxicity Effects 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 201000011330 nonpapillary renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004537 potential cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 102220321794 rs1554655875 Human genes 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002100 tumorsuppressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
N末端からC末端にまでVH-B-CH1-ペプチドリンカー-VH-A-CH1-CH2-CH3を含む2つのポリペプチド鎖と、N末端からC末端にまでVL-CLを含む4つの共通軽鎖とを含み、
そのうち、前記VH-Aは第1抗体の重鎖可変領域あり、VH-Bは第2抗体の重鎖可変領域であり、前記CH1は重鎖定常領域の第1構造ドメインであり、前記CH2は重鎖定常領域の第2構造ドメインであり、前記CH3は重鎖定常領域の第3構造ドメインであり、前記第1抗体は第1抗原に特異的に結合し、前記第2抗体は第2抗原に特異的に結合し、
前記VLは軽鎖可変領域であり、前記CLは軽鎖定常領域であり、前記ポリペプチド鎖のVH-A-CH1および前記ポリペプチド鎖のVH-B-CH1はそれぞれ前記共通軽鎖のVL-CLと会合し、前記VH-Aと前記VLは第1抗原結合サイトを形成し、前記VH-Bと前記VLは第2抗原結合サイトを形成する。
第1抗体および第2抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれ入れ替えることで第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせ、及び第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体を取得し、このとき、
a)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できると、第2抗体の軽鎖を共通軽鎖とし、
b)第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できると、第1抗体の軽鎖を共通軽鎖とし、
c)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できず、かつ第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できないと、第1抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで第2抗体の重鎖と第1抗体の変異軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できるようにし、そして第1抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とし、又は
d)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できず、かつ第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できないと、第2抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで第1抗体の重鎖と第2抗体の変異軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できるようにし、そして第2抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とする。
a’)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できると、第2抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで、第1抗原に対する親和性からして第1抗体の重鎖と第2抗体の変異軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体が、第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体を上回るようにし、そして第2抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とし、
b’)第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できると、第1抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで、第2抗原に対する親和性からして第2抗体の重鎖と第1抗体の変異軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体が、第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体を上回るようにし、そして第1抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とする。
第2抗原に特異的に結合する第2抗体の重鎖可変領域VH-Bと、重鎖定常領域の第1構造ドメインCH1をつなぐステップI、
ペプチドリンカーを介して、ステップIで得られた連結物を、第1抗原特異的に結合する第1抗体の重鎖可変領域VH-AにつなぐステップII、
ステップIIで得られた連結物と、重鎖定常領域CH1-CH2-CH3とを繋いでポリペプチド鎖を形成するステップIII、および
ステップIIIで得られたポリペプチド鎖および共通軽鎖VL-CLを、それぞれ発現ベクターに導入し、得られた発現ベクターを組み合せて発現することにより目的とする四価二重特異性抗体を取得するステップIVを含む。
(表1)
配列番号 配列の名称
1 Bevacizumab(601)の重鎖可変領域のアミノ酸配列
2 Bevacizumab(601)の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
3 マウス由来20号抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列
4 マウス由来20号抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
5 マウス由来20号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR1のアミノ酸配列
6 マウス由来20号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR2のアミノ酸配列
7 マウス由来20号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR3のアミノ酸配列
8 マウス由来20号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR1のアミノ酸配列
9 マウス由来20号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR2のアミノ酸配列
10 マウス由来20号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR3のアミノ酸配列
11 20-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
12 20-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
13 601-LC-V94Lのアミノ酸配列
14 601-LC-V94Lのヌクレオチド配列
15 601-LC-V94Lの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
16 20-Fab-601-IgG4のアミノ酸配列
17 20-Fab-601-IgG4のヌクレオチド配列
18 601-Fab-20-IgG4のアミノ酸配列
19 601-Fab-20-IgG4のヌクレオチド配列
20 Y0313-1の重鎖可変領域のアミノ酸配列
21 20-Fab-0313-IgG4のアミノ酸配列
22 20-Fab-0313-IgG4のヌクレオチド配列
23 マウス由来1D11号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR1のアミノ酸配列
24 マウス由来1D11号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR2のアミノ酸配列
25 マウス由来1D11号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR3のアミノ酸配列
26 マウス由来1D11号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR1のアミノ酸配列
27 マウス由来1D11号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR2のアミノ酸配列
28 マウス由来1D11号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR3のアミノ酸配列
29 1D11-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
30 1D11-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
31 mAb127の重鎖可変領域のアミノ酸配列
32 mAb127の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
33 マウス由来14号抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列
34 マウス由来14号抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
35 マウス由来14号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR1のアミノ酸配列
36 マウス由来14号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR2のアミノ酸配列
37 マウス由来14号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR3のアミノ酸配列
38 マウス由来14号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR1のアミノ酸配列
39 マウス由来14号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR2のアミノ酸配列
40 マウス由来14号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR3のアミノ酸配列
41 14-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
42 14-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
43 14-Hu-LCのアミノ酸配列
44 14-Hu-LCのヌクレオチド配列
45 14-Fab-1D11-IgG4のアミノ酸配列
46 14-Fab-1D11-IgG4のヌクレオチド配列
47 1D11-Fab-14-IgG4のアミノ酸配列
48 1D11-Fab-14-IgG4のヌクレオチド配列
49 14-Fab-127-IgG4のアミノ酸配列
50 14-Fab-127-IgG4のヌクレオチド配列
51 127-Fab-14-IgG4のアミノ酸配列
52 127-Fab-14-IgG4のヌクレオチド配列
53 19H6-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
54 19H6-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
55 Anti-CD47Bの重鎖相補性決定領域H-CDR1のアミノ酸配列
56 Anti-CD47Bの重鎖相補性決定領域H-CDR2のアミノ酸配列
57 Anti-CD47Bの重鎖相補性決定領域H-CDR3のアミノ酸配列
58 Anti-CD47Bの軽鎖相補性決定領域L-CDR1のアミノ酸配列
59 Anti-CD47Bの軽鎖相補性決定領域L-CDR2のアミノ酸配列
60 Anti-CD47Bの軽鎖相補性決定領域L-CDR3のアミノ酸配列
61 Anti-CD47B-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
62 Anti-CD47B-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
63 19H6-Hu-LCのアミノ酸配列
64 19H6-Hu-LCのヌクレオチド配列
65 CD47B-Fab-19H6-IgG1のアミノ酸配列
66 CD47B-Fab-19H6-IgG1のヌクレオチド配列
67 19H6-Fab-CD47B-IgG1のアミノ酸配列
68 19H6-Fab-CD47B-IgG1のヌクレオチド配列
69 マウス由来94号抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列
70 マウス由来94号抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
71 マウス由来94号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR1のアミノ酸配列
72 マウス由来94号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR2のアミノ酸配列
73 マウス由来94号抗体の重鎖相補性決定領域H-CDR3のアミノ酸配列
74 マウス由来94号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR1のアミノ酸配列
75 マウス由来94号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR2のアミノ酸配列
76 マウス由来94号抗体の軽鎖相補性決定領域L-CDR3のアミノ酸配列
77 94-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
78 94-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
79 94-Fab-19H6-IgG1-LALA のアミノ酸配列
80 94-Fab-19H6-IgG1-LALA のヌクレオチド配列
82 19H6-Fab-94-IgG1-LALAのヌクレオチド配列
83 mAb1-25-Hu(609)の重鎖可変領域のアミノ酸配列
84 mAb1-25-Hu(609)の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
85 Anti-CD137の重鎖相補性決定領域H-CDR1のアミノ酸配列
86 Anti-CD137の重鎖相補性決定領域H-CDR2のアミノ酸配列
87 Anti-CD137の重鎖相補性決定領域H-CDR3のアミノ酸配列
88 Anti-CD137の軽鎖相補性決定領域L-CDR1のアミノ酸配列
89 Anti-CD137の軽鎖相補性決定領域L-CDR2のアミノ酸配列
90 Anti-CD137の軽鎖相補性決定領域L-CDR3のアミノ酸配列
91 Anti-CD137-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
92 Anti-CD137-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
93 Anti-CD137-Hu-LCのアミノ酸配列
94 Anti-CD137-Hu-LCのヌクレオチド配列
95 609-Fab-137-IgG4のアミノ酸配列
96 609-Fab-137-IgG4のヌクレオチド配列
97 137-Fab-609-IgG4のアミノ酸配列
98 137-Fab-609-IgG4のヌクレオチド配列
99 Anti-CD40の重鎖相補性決定領域H-CDR1のアミノ酸配列
100 Anti-CD40の重鎖相補性決定領域H-CDR2のアミノ酸配列
101 Anti-CD40の重鎖相補性決定領域H-CDR3のアミノ酸配列
102 Anti-CD40の軽鎖相補性決定領域L-CDR1のアミノ酸配列
103 Anti-CD40の軽鎖相補性決定領域L-CDR2のアミノ酸配列
104 Anti-CD40の軽鎖相補性決定領域L-CDR3のアミノ酸配列
105 Anti-CD40-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
106 Anti-CD40-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
107 Anti-CD40-Hu-LCのアミノ酸配列
108 Anti-CD40-Hu-LCのヌクレオチド配列
109 609-Fab-40-IgG4のアミノ酸配列
110 609-Fab-40-IgG4のヌクレオチド配列
111 40-Fab-609-IgG4のアミノ酸配列
112 40-Fab-609-IgG4のヌクレオチド配列
113 Cetuximabの重鎖可変領域のアミノ酸配列
114 Cetuximabの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
115 Trastuzumabの重鎖可変領域のアミノ酸配列
116 Trastuzumabの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
117 Pertuzumabの重鎖可変領域のアミノ酸配列
118 Pertuzumabの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
119 10D1(Ipilimumab)の重鎖可変領域のアミノ酸配列
120 10D1(Ipilimumab)の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
121 5E7-Huの重鎖可変領域のアミノ酸配列
122 5E7-Huの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
123 Cetuximab-LCのアミノ酸配列
124 Cetuximab-LCのヌクレオチド配列
125 Pertuzumab-LCのアミノ酸配列
126 Pertuzumab-LCのヌクレオチド配列
127 Ipilimumab-LCのアミノ酸配列
128 Ipilimumab-LCのヌクレオチド配列
129 5E7-Hu-LCのアミノ酸配列
130 5E7-Hu-LCのヌクレオチド配列
131 609-Fab-Cetuximab-IgG4のアミノ酸配列
132 609-Fab-Cetuximab-IgG4のヌクレオチド配列
133 609-Fab-Pertuzumab-IgG4のアミノ酸配列
134 609-Fab-Pertuzumab-IgG4のヌクレオチド配列
135 609-Fab-Ipilimumab-IgG1のアミノ酸配列
136 609-Fab-Ipilimumab-IgG1のヌクレオチド配列
137 Ipilimumab-Fab-609-IgG1のアミノ酸配列
138 Ipilimumab-Fab-609-IgG1のヌクレオチド配列
139 609-Fab-Ipilimumab-IgG4のアミノ酸配列
140 609-Fab-Ipilimumab-IgG4のヌクレオチド配列
141 Ipilimumab-Fab-609-IgG4のアミノ酸配列
142 Ipilimumab-Fab-609-IgG4のヌクレオチド配列
143 609-Fab-5E7-IgG4のアミノ酸配列
144 609-Fab-5E7-IgG4のヌクレオチド配列
145 5E7-Fab-609-IgG4のアミノ酸配列
146 5E7-Fab-609-IgG4のヌクレオチド配列
147 IgG1重鎖定常領域のアミノ酸配列
148 IgG4(S228P)重鎖定常領域のアミノ酸配列
149 κ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
150 リンカー(GGGGSGGGGSGGGGS)
151 重鎖の第4フレームワーク領域(WGQGTLVTVSS)
152 軽鎖の第4フレームワーク領域(FGQGTKVEIK)
153 軽鎖の第4フレームワーク領域(FGGGTKVELK)
1.1)配列
ベバシズマブ(Bevacizumab、以下では「601」とも称する)抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域配列(配列番号1および配列番号2)は、文献資料(Magdelaine-Beuzelin C,Kaas Q,Wehbi V,et al.,Structure-function relationships of the variable domains of monoclonal antibodies approved for cancer treatment[J].Critical reviews in oncology/hematology,2007,64(3):210-225)に記載のものであった。上海生工バイオテック社に委託して上記可変領域をコードするDNAを合成し、601の重鎖可変領域(601-VH領域)および軽鎖可変領域(601-VL領域)を、それぞれヒトIgG1の重鎖定常領域(配列番号147)およびヒトKappaの軽鎖定常領域(配列番号149)と繋ぐことで601抗体の重鎖全長遺伝子および軽鎖全長遺伝子を構築し、それぞれ601-HCおよび601-LCと名づけた。
20-Huの軽鎖可変領域及び601の軽鎖可変領域について、BLASTを利用してアミノ酸配列に対して対比解析を行った結果、両者の間で完全に一致したアミノ酸が89%(Identities)を占め、物理化学特性が類似したアミノ酸が94%(Positives)を占めることが確認できた。
20-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して601の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖遺伝子を作製して20-Fab-601-IgG4(配列番号16および配列番号17)と名づけた。同様に、601の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して20-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖遺伝子を作製して601-Fab-20-IgG4(配列番号18および配列番号19)と名づけた。
図に3A示すように、20-Hu-HC+601-LC-V94L、20-Fab-601-IgG4-V94L及び601-Fab-20-IgG4-V94Lは、PD1-Hisに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.3314nM、0.4768nM及び1.772nMであった。図3Bに示すように、601-HC+601-LC-V94L、20-Fab-601-IgG4-V94L及び601-Fab-20-IgG4-V94Lは、VEGF165-Hisに効果的に結合し、EC50が0.01872nM、0.05859nM及び0.03886nMであった。また、20-Fab-601-IgG4-V94L及び601-Fab-20-IgG4-V94Lは、PD-1およびVEGF両者に結合することができ、二重特異性抗体であることが実証された。
上記抗体とPD-1またはVEGFの親和力については、GE healthcare社製のBiacore 8K装置を用いて測定した。具体的には、Biacore 8K装置において、Protein-A/Gが固定されたチップで各抗体を捕捉し、そして組換えタンパク質PD1-His又はVEGF165-Hisを注入して結合・解離グラフを取得し、チップ再生には6Mのグアニジン塩酸塩溶液を用いた。得られたデータをBiacore 8K装置専用の解析ソフトで解析し、結果を下記表2に纏めて示す。
1.6.1)HPLC-SEC
図4Aは、モノクローナル抗体601-HC+601-LC-V94LのHPLC-SECスペクトルであり、スペクトルにおいてピーク1およびピーク2の両ピークが特に目立ち、各ピークの占有割合がそれぞれ0.7%および99.3%であった。そのうちピーク1は、保持時間が主要ピークに当たるピーク2に比べて短く、凝集体によるものと考えられる。スペクトルからは、分解断片(切断断片)や組織化が不完全な分子を表わすピークが確認できなかった。図4Bは、20-Fab-601-IgG4-V94LのHPLC-SECスペクトルであり、スペクトルにおいてピーク1およびピーク2の両ピークが特に目立ち、各ピークの占有割合がそれぞれ0.7%、99.3%であった。そのうちピーク1は、保持時間が主要ピークに当たるピーク2に比べて短く、凝集体によるものと考えられる。スペクトルからは、分解断片(切断断片)や組織化が不完全な分子を表わすピークが確認できなかった。
図5A~図5Bは、601-HC+601-LC-V94L及び20-Fab-601-IgG4-V94LのHPLC-IECスペクトルであり、かかる主要ピークの占有割合がそれぞれ79.31%、80.64%であり、帯電特性からして20-Fab-601-IgG4-V94Lが601-HC+601-LC-V94Lと同等であることが確認できた。
図6A~図6Bは、それぞれ601-HC+601-LC-V94LのNR-CE-SDSスペクトルおよびR-CE-SDSスペクトルであり、NR-CE-SDSスペクトルにおいて、主要ピークに当たるピーク9の占有割合が97.90%であった。R-CE-SDSスペクトルにおいて、2つの主要ピークとしてピーク6(軽鎖に対応するピーク)及びピーク12(重鎖に対応するピーク)の占有割合がそれぞれ30.92%、65.27%であり、両ピークの面積比が1:2.1であった。図6C~図6Dは、それぞれ20-Fab-601-IgG4-V94LのNR-CE-SDSスペクトルおよびR-CE-SDSスペクトルであり、NR-CE-SDSスペクトルにおいて、主要ピークであるピーク13の占有割合が96.74%であった。R-CE-SDSスペクトルにおいて、2つの主要ピークとしてピーク3(軽鎖に対応するピーク)およびピーク12(重鎖に対応するピーク)の占有割合がそれぞれ38.42%、59.74%であり、両ピークの面積比が2:3.1であった。601-HC+601-LC-V94L及び20-Fab-601-IgG4-V94Lは、主要ピークの占有割合がNR-CE-SDSスペクトルにおいて特に近接した数値を示し、軽鎖と重鎖のピーク面積比がR-CE-SDSスペクトルにおいてが所期通りの数値を示した。
図7A~図7Bは、それぞれ601-HC+601-LC-V94L及び20-Fab-601-IgG4-V94LのDSCスペクトルである。そのうち、601-HC+601-LC-V94LのTmOnsetおよびTmがそれぞれ66.46℃、75.37℃であり、20-Fab-601-IgG4-V94LのTmOnsetおよびTmがそれぞれ65.92℃、74.28℃であった。この結果から、20-Fab-601-IgG4-V94Lは、601-HC+601-LC-V94Lに非常に近似した熱安定性を有することが実証された。
1.7.1)二重特異性抗体の作製
米国特許出願公開公報US20020032315A1において、発明者らは、ファージディスプレイ技術を利用してベバシズマブの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を改良することにより、親和力および中和活性がより優れた重鎖可変領域のアミノ酸配列Y0313-1(US20020032315A1に記載の配列番号114、本発明では配列番号20で表されるアミノ酸配列)を得た。
ヒト臍帯静脈内皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)は、AllCells Biotech社から購入し、臍帯静脈内皮細胞の完全培地(物品番号及び仕様規格H-004/500mL、AllCells Biotech社製)を用いてHUVEC細胞を継代培養した。HUVEC細胞が対数増殖期に増殖すると、パンクレアチンで消化し細胞を遊離させ、遠心、回収して細胞を完全培地で再懸濁した。そして、細胞を密度が8000個細胞/ウェルとなるように96ウェルの細胞培養プレートに播種し、24時間後に96ウェルプレート内の完全培地を基本培地(物品番号及び仕様規格H-004B/500mL、AllCells Biotech社製)に置き換え、このとき、基本培地量は1ウェル当たり150μLであった。400ng/mLの組換えVEGF165(物品番号VE5-H4210、Acrobiosystems社製)を含む基本培地を用いて抗体を段階的に希釈することで濃度勾配を形成し、VEGF165と抗体の混合溶液を1ウェル当たり50μLの量で96ウェルプレートに加え、37℃、5%のCO2インキュベーターにおいて3日間インキュベートした。3日後、各ウェルにCCK-8(Dojindo)溶液を20μL加え、インキュベーターにおいて引続き4時間インキュベートした。プレートリーダーでOD450値を読み出し、得られたデータをGraphPad Prism6で処理して解析グラフを作成し、IC50を算出した。
図9A~図9Bに示すように、20-Humanized(すなわち20-Hu)、20-Hu-HC+601-LC-V94L及び20-Fab-0313-IgG4-V94Lは、何れもMLRのIL-2およびIFN-γ分泌を効果的に刺激することができ、MLRのIL-2分泌を刺激するときのEC50がそれぞれ0.2571nM、0.3703nM及び0.7554nMであり、MLRのIFN-γ分泌を刺激するときのEC50がそれぞれ0.1426nM、0.247nM及び1.036nMであった。
VEGF165(物品番号VE5-H4210、Acrobiosystems社製)でマイクロプレートを被覆し、1%のウシ血清アルブミンを含むPBSTで測定用抗体を段階的に希釈して濃度勾配を形成し、上記マイクロプレートに入れて室温、約30分間インキュベートした後、プレートをPBSTで3回洗い流した。ビオチン化のヒトPD-1細胞外領域ドメイン(物品番号10377-H08H-B、Sino Biological社製)を200 ng/mLに希釈してからマイクロプレートに加え、室温、約30分間インキュベートした後、PBSTでプレートを3回洗い流した。HRP標識ストレプトアビジン(物品番号554066、BD Biosciences社製)を1000倍希釈してマイクロプレートに加え、室温、約30分間インキュベートした後、PBSTでプレートを3回洗い流した。TMB着色液(100μL/ウェル)を加え、室温で1~5分間インキュベートした後、停止液(50μL/ウェル)を加えて着色反応を停止した。プレートリーダーでOD450値を読み出し、得られたデータをGraphPad Prism6で処理して解析グラフを作成し、EC50を算出した。
SDラット(Sprague-Dawleyラット、浙江維通利華実験動物会社製)を用いて二重特異性抗体の薬物動態学を検討した。各組にラット4匹ずつ配分し、ラットの平均体重が約200gであり、ラットに尾静脈注射(I.V.)にて1mgの抗体を投与し、投与後の指定時点で眼窩から採血し、血液が自然凝固するまで待ってから遠心して血清を回収した
ヒト末梢血単核球(PBMC)を用いてNSGマウスでヒト化免疫系を再構築し、さらに、該マウスを用いてヒト肺がん株NCI-H460の皮下移植腫瘍モデルを作製した。該マウス腫瘍モデルは、ヒトPD-1を発現するT細胞およびヒトVEGFを発現するヒト腫瘍細胞を兼ね備え、PD-1及びVEGFを標的とする二重特異性抗体の体内における抗腫瘍活性を評価することができる。具体的には、以下の通りにして実験を行った。体外で培養したヒト非小細胞肺がんNCI-H460細胞株(ATCC(登録商標)HTB-177TM)を回収し、細胞懸濁液を濃度が1×108個細胞/mLとなるように調整した後、Matrigel(BD Biosciences社製、物品番号356234)と1:1の体積比で混ぜ合わせた。また、購入したPBMC細胞(Allcells Biotech社製、物品番号PB005-C)を復活させ、PBSで再懸濁し、PBMC懸濁液を濃度が1×107個細胞/mLとなるように調整した。上述の腫瘍細胞懸濁液とPBMC懸濁液を1:1の体積比で混ぜ合わせ、混合液200μLを取って無菌条件下でM-NSGマウス(上海南方モデル生物研究センターにより入手)の背中右側皮下に接種した。接種後、即時に接種済みのマウスを体重に従ってランダムで幾つかの組に分け、各組にそれぞれ10匹のマウスを配分した。マウスへの投与は、それぞれ対照組に生理食塩水、Avastin組にVEGF陽性対照物抗体であるAvastin(ロシュ製薬製)10mg/kg、Opdivo組にPD-1陽性対照物抗体であるOpdivo(ブリストル・マイヤーズスクイブ社製)10mg/kg、20-Fab-0313-IgG4-V94L組に16mg/kgの20-Fab-0313-IgG4-V94Lを注射することにより行われた。二重特異性抗体とモノクローナル抗体は分子量が異なるため、本実験では抗体を物質量に換算し、各抗体を同じ物質量で投与した。そして、上述の投与計画に従って週2回の頻度で合計10回投与し、腫瘍体積については毎週2回測定した。最後に、各組の腫瘍生長状況を時系列に従って整理し、図12に示すような生長グラフを作成した。
2.1)配列
米国特許出願公開公報US5571714Aに、一連のTGF-β(Transforming growth factor beta)モノクローナル抗体が開示され、そのうちマウス由来のモノクローナル抗体1D11.16(以下、「1D11」とも略称する)は、TGF-β1およびTGF-β2両者に効果的に結合することができる。1D11に対応するハイブリドーマは、既に寄託番号ATCC(登録商標)HB-9849TMでアメリカ培養細胞系統保存機関に寄託保存し、また、マウス由来1D11の配列は、米国特許出願公開公報US20180244763A1に記載のものであった。
14-Huの軽鎖可変領域及び1D11-Huの軽鎖可変領域について、BLASTを用いてアミノ酸配列に対して対比解析を行った結果、両者の間で完全に一致したアミノ酸が92%(Identities)を占め、かつ物理化学特性において類似したアミノ酸が94%(Positives)を占めることが確認できた。
14-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して1D11の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖遺伝子を作製し、14-Fab-1D11-IgG4(配列番号45及び配列番号46)と名づけた。同様に、1D11の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して14-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖遺伝子を作製し、1D11-Fab-14-IgG4(配列番号47及び配列番号48)と名づけた。
図15Aに示すように、14-Hu、14-Fab-1D11-IgG4、1D11-Fab-14-IgG4、14-Fab-127-IgG4及び127-Fab-14-IgG4は、何れもPD1-Hisに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.4321nM、0.4367nM、1.996nM、0.3873nM及び3.955nMであった。そのうち1D11-Fab-14-IgG4及び127-Fab-14-IgG4は、14-Fab-1D11-IgG4及び14-Fab-127-IgG4に比べてPD1-Hisに対する相対親和力が低下し、立体障害の影響が低下の原因であると考えられる。図15Bに示すように、1D11-Hu-HC+14-Hu-LC、mAb127-HC+14-Hu-LC、14-Fab-1D11-IgG4、1D11-Fab-14-IgG4、14-Fab-127-IgG4及び127-Fab-14-IgG4は、何れもTGF-β1に結合でき、EC50がそれぞれ1.267nM、0.0803nM、0.6985nM、0.3628nM、0.1525nM及び0.1083nMであった。そのうち、mAb127-HC+14-Hu-LC、14-Fab-127-IgG4及び127-Fab-14-IgG4は、1D11-Hu-HC+14-Hu-LC、14-Fab-1D11-IgG4及び1D11-Fab-14-IgG4に比べ、TGF-β1に対する相対親和力が更に高くなることが確認できた。
図16A~図16Bに示すように、14-Hu及び14-Fab-127-IgG4は、何れもMLRのIL-2及びIFN-γ分泌を効果的に刺激し、MLRのIL-2分泌を刺激するときのEC50がそれぞれ0.1008nM及び0.3185nMであり、MLRのIFN-γ分泌を刺激するときのEC50がそれぞれ0.04716nM及び0.5871nMであった。なお、14-Huに比べ、14-Fab-127-IgG4は、高濃度でMLRのIL-2及びIFN-γ分泌を更に増強できることも実証された。
TGF-β1(物品番号10804-HNAC、Sino Biological社製)を用いてマイクロプレートを被覆し、1%のウシ血清アルブミンを含むPBSTで測定用抗体を段階的に希釈して濃度勾配を形成した後、上記マイクロプレートに加えて室温、約30分間インキュベートした。そして、上述の1.7.4と同様にして評価を行った。
ヒトPD-1トランスジェニックマウス(品種背景:C57BL/6)及びMC38マウス大腸がん細胞株は、上海南方モデル生物研究センターから購入し、該トランスジェニックマウスにおいて、ヒト由来PD-1遺伝子の細胞外領域ドメインを用いてマウスの相同部分を置き換えた。本発明の二重特異性抗体は、該トランスジェニックマウスのPD-1分子を認識すると同時に、マウス内在性のTGF-betaにも結合することができる。具体的には、MC38細胞株を体外培養し、このときの培地としては10%の血清を含むDMEM(血清及び培地は、何れもGibco社製)を用いた。培養したMC38細胞を、ヒトPD-1トランスジェニックマウスに1匹当たり2×106個細胞、皮下注射にて接種した。接種した腫瘍細胞が体積約100mm3にまで生長すると、マウスをランダムで幾つかの組に分け、各組にマウス8匹ずつ配分した。各組のマウスについては、それぞれ対照組に生理食塩水、Keytruda組(2つの投与組)にPD-1陽性対照物抗体であるKeytruda(メルク社製)2mg/kg又は10mg/kg、14-Fab-127-IgG4組(2つの投与組)に3.2mg/kg又は16mg/kgの14-Fab-127-IgG4を注射することにより投与を行った。二重特異性抗体とモノクローナル抗体は分子量が異なるため、本実験では抗体を物質量に換算し、各抗体を同じ物質量で投与した。そして、上述の投与計画に従って週2回の頻度で合計6回投与し、腫瘍体積については毎週2回測定した。最後に、各組の腫瘍生長状況を時系列に従って整理し、図18に示すような生長グラフを作成した
3.1)配列
19H6-Huは、ヒトHER2を標的とするヒト化のモノクローナル抗体であり、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列は、WO2020/025013A1に記載がある。本発明では、上記19H6-Huのヒト化重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれ19H6-Hu-VH及び19H6-Hu-VL(配列番号53及び配列番号54)と標記した。
19H6-Hu軽鎖可変領域について、BLASTを利用してAnti-CD47B-Hu軽鎖可変領域とアミノ酸配列解析を行ったところ、両者の間で完全に一致したアミノ酸が96%(Identities)を占め、物理化学特性において類似したアミノ酸が99%(Positives)を占めることが確認できた。
Anti-CD47B-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して19H6-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG1の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製し、CD47B-Fab-19H6-IgG1(配列番号65及び配列番号66)と名づけた。これと同様に、19H6-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介してAnti-CD47B-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG1の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製し、19H6-Fab-CD47B-IgG1(配列番号67及び配列番号68)と名づけた。
図20Aに示すように、19H6-Hu、CD47B-Fab-19H6-IgG1及び19H6-Fab-CD47B-IgG1は、何れもHER2-ECD-Hisに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.1262nM、0.1057nM及び0.1543nMであり、かつ図20Bに示すように、Anti-CD47B-Hu-HC+19H6-Hu-LC、CD47B-Fab-19H6-IgG1及び19H6-Fab-CD47B-IgG1は、何れもCD47-ECD-Hisに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.06166nM、0.07817nM及び0.1945nMであった。これらの結果から、CD47B-Fab-19H6-IgG1及び19H6-Fab-CD47B-IgG1がHER-2およびCD47両者に効果的に結合することができ、二重特異性抗体であることが確認できた。
4.1)配列
19H6-Huは、上記3.1で述べたように、ヒトHER2を標的とするヒト化のモノクローナル抗体である。また、94号抗体は、本発明者が自ら作製したマウス由来のヒトCD137抗体であり、WO2018/137576A1の明細書実施例1~5に従って作製することができるが、マウスの免疫がヒトCD137の組換えタンパク質で行われ、かつELISA法を利用し、ヒトCD137の組換えタンパク質を用いてハイブリドーマ細胞をスクリーニングする点においてやや異なり、その重鎖可変領域のアミノ酸配列および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号69及び配列番号70で表される。
19H6-Hu軽鎖可変領域及び94-Hu軽鎖可変領域について、BLASTを利用してアミノ酸配列解析を行ったところ、両者の間で完全に一致したアミノ酸が97%(Identities)を占め、物理化学特性において類似したアミノ酸が99%(Positives)を占めることが確認できた。
94-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して19H6-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG1の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して94-Fab-19H6-IgG1と名づけた。これと同様に、19H6-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して94-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG1の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して19H6-Fab-94-IgG1と名づけた。
図22Aに示すように、19H6-Hu、94-Fab-19H6-IgG1-LALA及び19H6-Fab-94-IgG1-LALAは、何れもHER2-ECD-Hisに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.1933nM、0.1579nM及び0.1201nMであった。また、図22Bに示すように、94-Hu-HC+19H6-Hu-LC及び94-Fab-19H6-IgG1-LALAは、何れもCD137-ECD-Fcに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.634nM及び0.2411nMであり、そのうち19H6-Fab-94-IgG1-LALAは、CD137-ECD-Fcに対して結合が弱く、EC50が27.56nMであった。これらの結果から、94-Fab-19H6-IgG1-LALA及び19H6-Fab-94-IgG1-LALAがHER-2及びCD137両者に共に結合することができ、つまり、二重特異性抗体であることが実証された。
5.1)配列
mAb1-25-Hu(以下、「609」とも略称する)は、ヒトPD-1を標的とするヒト化モノクローナル抗体であり、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列は、WO2018/137576A1に開示され、ヒト化の重鎖可変領域および軽鎖可変領域(配列番号83及び配列番号84)を、それぞれヒトIgG4(S228P)の重鎖定常領域(配列番号148)及びKappa軽鎖の定常領域(配列番号149)とつなぐことにより、ヒト化のmAb1-25-Huモノクローナル抗体(609)の重鎖全長遺伝子および軽鎖全長遺伝子が得られた。
609軽鎖可変領域について、BLASTを利用してAnti-CD137-Hu軽鎖可変領域とアミノ酸配列解析を行ったところ、両者の間で完全に一致したアミノ酸が73%(Identities)を占め、物理化学特性において類似したアミノ酸が88%(Positives)を占めることが確認できた。
609の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介してAnti-CD137-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して609-Fab-137-IgG4(配列番号95及び配列番号96)と名づけた。同様に、Anti-CD137-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して609の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して137-Fab-609-IgG4(配列番号97及び配列番号98)と名づけた。
図24Aに示すように、609-HC+Anti-CD137-Hu-LC、609-Fab-137-IgG4及び137-Fab-609-IgG4は、何れもPD1-ECD-Hisに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.2067nM、0.2293nM及び1.415nMであった。また、図24Bに示すように、Anti-CD137-Hu、609-Fab-137-IgG4及び137-Fab-609-IgG4は、何れもCD137-ECD-Fcに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.461nM、0.3572nM及び0.2424nMであった。このことから、609-Fab-137-IgG4及び137-Fab-609-IgG4は、PD-1に加えてCD137にも結合することができ、二重特異性抗体であることが確認できた。
6.1)配列
609は、ヒトPD-1を標的とするヒト化モノクローナル抗体であり、詳しくは上述の5.1を参照することができる。MAb2.220(以下、「Anti-CD40」とも称する)は、ヒトCD40を標的とするマウス由来のモノクローナル抗体であり、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、US6312693の明細書に記載の配列番号2及び配列番号1であった。
609軽鎖可変領域について、BLASTを利用してAnti-CD40-Hu軽鎖可変領域とアミノ酸配列解析を行ったところ、両者の間で完全に一致したアミノ酸が90%(Identities)を占め、物理化学特性において類似したアミノ酸が96%(Positives)を占めることが確認できた。
609の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介してAnti-CD40-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して609-Fab-40-IgG4(配列番号109及び配列番号110)と名づけた。同様に、Anti-CD40-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して609の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して40-Fab-609-IgG4(配列番号111及び配列番号112)と名づけた。
図26Aに示すように、609-HC+Anti-CD40-Hu-LC、609-Fab-40-IgG4及び40-Fab-609-IgG4は、何れもPD1-ECD-Hisに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.1387nM、0.1723nM及び1.017nMであり、また、図26Bに示すように、Anti-CD40-Hu、609-Fab-40-IgG4及び40-Fab-609-IgG4は、何れもCD40-ECD-Hisに効果的に結合し、EC50がそれぞれ0.1104nM、0.1047nM及び0.09556nMであった。このことから、609-Fab-40-IgG4及び40-Fab-609-IgG4は、PD-1に加えてCD40にも結合することができ、二重特異性抗体であることが確認できた。
7.1)配列
609は、ヒトPD-1標的とするヒト化のモノクローナル抗体であり、詳しくは上述の5.1を参照することができる。一方、抗体製剤であるセツキシマブ、ベバシズマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブなどの重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列(配列番号1~2、および配列番号113~118)は、文献資料(Magdelaine-Beuzelin C,Kaas Q,Wehbi V,et al.,Structure-function relationships of the variable domains of monoclonal antibodies approved for cancer treatment[J].Critical reviews in oncology/hematology,2007,64(3):210-225)に既に報告されたものであった。また、10D1(以下、「Ipilimumab」とも称する)は、ヒトCTLA-4を標的とするモノクローナル抗体であり、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、US20020086014A1の明細書に記載の配列番号17および配列番号7(本発明では、配列番号119及び配列番号120)であった。
7.2.1)ハイブリッド抗体と抗原の結合親和力の測定
609の重鎖遺伝子と上記抗体の軽鎖遺伝子をそれぞれ組み合わせ、抗体を発現して精製し、得られた抗体をそれぞれ609-HC+Cetuximab-LC、609-HC+Bevacizumab-LC、609-HC+Trastuzumab-LC、609-HC+Pertuzumab-LC、609-HC+Ipilimumab-LC及び609-HC+5E7-Hu-LCと名づけた。
PD-1とPD-L1の相互作用に対する抗体の阻害効果は、以下の通りに評価した。ヒトFcタグ付きのヒトPD-1およびヒトPD-L1の細胞外領域ドメインは、WO2018/137576A1の明細書を参照しながら自ら調製し、これら2つの組換えタンパク質を、それぞれPD1-ECD-hFc及びPD-L1-ECD-hFcと標記した。ビオチン化試薬であるビオチンn-ヒドロキシスクシンイミドエステル(Sigma社製、物品番号/仕様規格H1759-100MG)を、無水DMSOを用いて濃度100mMの母液に調製し、PD-L1-ECD-hFcは、分子量および溶液濃度に基づいて物質量濃度に換算した。PD-L1-ECD-hFc融合タンパク質の溶液を適宜取って、物質量を算出した後、それぞれビオチンn-ヒドロキシスクシンイミドエステルと1:20の割合で均一に混ぜ合わせ、室温、1時間静置して標識を行った。透析を行い、紫外線分光法を利用してタンパク質の濃度を測定した。そして、ヒトPD-1-ECD-hFcを被覆用緩衝液で希釈して濃度が2μg/mLになるようにし、ピペットで吸い取って96ウェルのELISAプレートに1ウェル当たり100μLずつ加え、室温で4時間インキュベートした。PBSTで1回洗い流した後、各ウェルに1%のBSAを含むPBSTを200μL加え、室温で2時間インキュベートすることによりブロッキング処理を行った。プレートを軽く叩いてブロッキング液を取り除き、次の処理に備えて4℃に一時保管した。96ウェルプレートにおいて、ビオチン化のPD-L1-ECD-hFcを1%のBSA(ウシ血清アルブミン)を含むPBST溶液で希釈して濃度が500ng/mLになるようにし、上記希釈済みのビオチン化融合タンパク質を用いてPD-1抗体を段階的に希釈して濃度勾配を形成した。上記希釈済みの抗体とビオチン化融合タンパク質の混合溶液を、上記ヒトPD-1-ECD-hFcを被覆したELISAプレートに加え、室温で1時間インキュベートした。PBSTでプレートを3回洗い流し、1%のBSAを含むPBSTで1:1000の倍率に希釈したHRP標識ストレプトアビジン(BD Biosciences社製)を加えて室温、45分間インキュベートし、PBSTでプレートを3回洗い流した。各ウェルにTMBを基質とする着色液を100μL加え、室温で1~5分間インキュベートした後、停止液を50μL加えて着色反応を停止した。プレートリーダーを用いてOD450値を読み出し、得られた測定データをGraphPad Prism6で処理して解析グラフを作成し、IC50を算出した。
さらに、混合リンパ球反応に対する上記抗体の亢進効果を測定した。図29に示すように、609、609-HC+Cetuximab-LC、609-HC+Bevacizumab-LC、609-HC+Pertuzumab-LC、609-HC+Ipilimumab-LC及び609-HC+5E7-Hu-LCは、何れも混合リンパ球反応亢進させてIL-2分泌を促すことができ、EC50がそれぞれ0.08623nM、0.2510nM、0.1211nM、0.5171nM、0.2040nM及び0.09101nMであった。一方、609-HC+Trastuzumab-LCは、混合リンパ球反応およびIL-2分泌に対して刺激効果を示さなかった。この実験では、同種対照物抗体としてPD-1に結合しないヒトIgG4抗体を用いた。
フローサイトメトリー法を利用し、細胞表面PD-1に対するハイブリッド抗体の結合性能を評価した。PD-1を発現するTF-1細胞株は、以下のように樹立した。具体的には、ヒトPD-1の全長遺伝子配列として、UniProtで登録番号Q15116の配列を用い、該遺伝子配列をレンチウイルス発現ベクターであるpLVX-Puro(Clontech社製)に導入した。Lipofectamine 3000(Thermo Fisher Scientific社製、物品番号L3000001)を用い、レンチウイルス用パッケージングベクター及び目的遺伝子を含むpLVX-PuroをHEK293FT細胞(Thermo Fisher Scientific社製、物品番号R70007)に導入し、48時間インキュベートした。細胞培養液を遠心して上澄み液を回収し、0.45μmのフィルタメンブレンでろ過して細胞残骸を除去した。上記ウイルス粒子を含む上澄み液でTF-1細胞(社製ATCC、物品番号CRL-2003TM)を感染し、48時間後にピューロマイシンで細胞を処理し、スクリーニングによって目的遺伝子を安定に発現する細胞株を選出し、PD-1を安定に発現するTF-1細胞株をTF1-PD1と名づけた。
以上の実験結果から、609の重鎖と別の抗体軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体もPD-1分子に効果的に結合し、かつPD-1とPD-L1の相互作用を阻害し、および混合リンパ球反応や、細胞表面PD-1への結合を亢進できることが実証された。この実験では、アラニンスキャニング技術を利用し、609とPD-1の結合に対する609軽鎖可変領域CDRの作用を評価した。具体的には、609軽鎖CDRにおけるアミノ酸残基をそれぞれアラニン残基に変換し、このときCDR本来固有のアラニン残基については変換せずにそのまま残した。609重鎖を軽鎖変異体とそれぞれ組み合わせ、以上で説明した方法に従って抗体を発現して精製し、さらに、上述のELISA法を利用してPD-1に対する抗体の相対親和力を測定した。測定結果を、下記表3に纏めて示す。表3において、609-HC+609-LC-R24AにおけるR24Aとは、第24位のアルギニン残基をアラニン残基に変換したことを意味し、この実験でもアミノ酸残基の位置は、KABATナンバリングで表示される。
609の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介してCetuximab-IgG1の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して609-Fab-Cetuximab-IgG4(配列番号131及び配列番号132)と名づけた。
609の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介してPertuzumab-IgG1の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して609-Fab-Pertuzumab-IgG4(配列番号133及び配列番号134)と名づけた。
7.5.1)二重特異性抗体の作製
609の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介してIpilimumab-IgG1の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG1の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖遺伝子を作製して609-Fab-Ipilimumab-IgG1(配列番号135及び配列番号136)と名づけた。同様に、Ipilimumab-IgG1の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して609の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG1の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖遺伝子を作製してIpilimumab-Fab-609-IgG1(配列番号137及び配列番号138)と名づけた。
RPMI1640に10%のウシ胎児血清、1%のMEM非必須アミノ酸溶液、1%のピルビン酸ナトリウム、1のHEPES、0.1%の2-メルカプトエタノール、1%のペニシリン-ストレプトマイシン及び1%のGlutaMAXサプリメントを加えRPMI1640完全培地を調製し、これらの試薬は、何れもThermo Fisher Scientific社製であった。該RPMI1640完全培地を用い、新たに分離したPBMC細胞(Allcells Biotech社製、物品番号PB005-C)を洗い流してから再懸濁し、さらに、スーパー抗原として一定量のブドウ球菌腸毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)を加えた。該スーパー抗原は、アミノ酸配列がhttps://www.uniprot.org/uniprot/P01552に登録され、本発明者が大腸菌を使って自ら調製したものであった。96ウェルの丸底細胞培養プレートに、PBMC細胞懸濁液を1ウェル当たり150μLずつ、20万個細胞の量で播種し、さらに、段階的に希釈した抗体を50μL加えて37℃のインキュベーターにおいて4日間インキュベートした。96ウェルプレートから適量の上澄み液を取って、サンドイッチELISA法を利用して標準操作マニュアルに従って上澄み液に含まれるIL-2量を測定することでIL-2の分泌量を検出した。また、この実験で使用するペアリング抗体は、BD Biosciences社製であり、SpectraMax 190プレートリーダーを用いてOD450値を測定し、得られた測定データをGraphPad Prism6で処理して解析グラフを作成し、EC50を算出した。
抗体依存性細胞介在性の細胞毒性(ADCC)は、ヒトIgG抗体が抱える普遍的な機能であり、ADCC活性は、抗体のサブタイプに緊密に関連する。PD-1とCTLA-4を標的とするIgG1サブタイプの二重特異性抗体は、PD-1を発現する細胞に対して潜在的な細胞毒性を示す可能性がある。そのため、新たに分離したPBMC細胞(Allcells Biotech社製、物品番号PB005-C)をエフェクター細胞とし、かつPD-1を発現するTF-1細胞を標的細胞としてADCC活性を測定した。
PD-1及びCTLA-4と標的する二重特異性抗体のラット体内における薬物動態学特性は、ELISAプレートを被覆する抗原として、上記7.5.1で調製したPD-1及びCTLA-4を標的とする二重特異性抗体に対応する2つの抗原PD1-ECD-His及びCTLA4-ECD-Fcを用いた以外、上述の1.7.5と同様にして評価を行った。
ヒトPD-1/CTLA-4ダブルトランスジェニックマウス(品種背景:C57BL/6)は、北京Biocytogen社により購入し、MC38マウス大腸がん細胞株は、広州JennioBiotech社により購入した。PD-1/CTLA-4ダブルトランスジェニックマウスにおいて、ヒト由来のPD-1およびCTLA-4遺伝子の細胞外領域部分でマウスの相同性部分を置き換えたため、本発明の二重特異性抗体は、該トランスジェニックマウスのPD-1及びCTLA-4を認識して結合することができる。実験は、以下の通りに行われた。10%の血清を含むDMEM培地を用い、体外においてMC38を培養し、このときの血清及び培地は、何れもGibco社製であった。培養によって増殖したMC38細胞を、ヒトPD-1トランスジェニックマウスに1匹当たり2×106個細胞、皮下注射にて接種した。接種した腫瘍細胞が体積約100mm3にまで生長すると、マウスをランダムで幾つかの組に分け、各組にマウス8匹ずつ配分した。各組のマウスへの投与は、対照組に生理食塩水、609組に10mg/kgのPD-1抗体である609、Yervoy組に10mg/kgのCTLA-4陽性対照物抗体であるYervoy(ブリストル・マイヤーズスクイブ社製)、609+Yervoy組に10mg/kgの609及び10mg/kgのYervoy、609-Fab-Ipilimumab-IgG1組に16mg/kgの609-Fab-Ipilimumab-IgG1をそれぞれ注射することにより行われた。二重特異性抗体とモノクローナル抗体は、分子量が異なるため、本実験では抗体を物質量に換算し、各抗体を同じ物質量で投与した。そして、上述の投与計画に従って週2回の頻度で合計4回投与し、腫瘍体積については毎週2回測定した。最後に、各組の腫瘍生長状況を時系列に従って整理し、図38に示すような生長グラフを作成した。
7.6.1)二重特異性抗体の作製
609の重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して5E7-Huの重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して609-Fab-5E7-IgG4(配列番号143及び配列番号144)と名づけた。同様に、5E7-Huの重鎖可変領域とヒトIgG4のCH1構造ドメインをつなぎ、そして人工リンカーとしてGGGGSGGGGSGGGGSを介して609の重鎖可変領域を付け、最後にヒトIgG4の重鎖定常領域(CH1+CH2+CH3、ヒンジ領域にサイト変異としてS228Pを含む)を付けることにより、2つの重鎖可変領域及び2つのCH1構造ドメインを含む長い重鎖を作製して5E7-Fab-609-IgG4(配列番号145及び配列番号146)と名づけた。
マイクロプレートは、LAG3-ECD-Hisを用いて被覆し、測定用抗体は、1%のウシ血清アルブミンを含むPBSTで段階的に希釈して濃度勾配を形成し、上記被覆済みのマイクロプレートに加えて室温で約30分間インキュベートした。そして、上記1.7.4と同様にして実験を行った。
本実験では、上記7.5.2に記載の方法に従ってPD-1及びLAG-3を標的とする二重特異性抗体の生体活性を評価した。
ヒトPD-1/LAG-3ダブルトランスジェニックマウス(品種背景:C57BL/6)は、北京Biocytogen社により購入し、MC38マウス大腸がん細胞株は、広州JennioBiotech社により購入した。PD-1/LAG-3ダブルトランスジェニックマウスにおいて、ヒト由来のPD-1及びLAG-3遺伝子の細胞外領域部分でマウスの相同性部分を置き換えたため、本発明の二重特異性抗体は、該トランスジェニックマウスのPD-1及びLAG-3を認識して結合することができる。実験は、以下の通りに行われた。10%の血清を含むDMEM培地を用い、体外においてMC38を培養し、このときの血清及び培地は、何れもGibco社製であった。培養によって増殖したMC38細胞を、ヒトPD-1トランスジェニックマウスに1匹当たり2×106個細胞、皮下注射にて接種した。接種した腫瘍細胞が体積約100mm3にまで生長すると、マウスをランダムで幾つかの組に分け、各組にマウス8匹ずつ配分した。各組のマウスへの投与は、対照組に生理食塩水、609組に20mg/kgのPD-1抗体である609、5E7-Hu組に20mg/kgのLAG-3抗体である5E7-Hu、609+5E7-Hu組に20mg/kgの609および20mg/kgの5E7-Hu、および609-Fab-5E7-IgG4組に32mg/kgの609-Fab-5E7-IgG4をそれぞれ注射することにより行われた。二重特異性抗体とモノクローナル抗体は、分子量が異なるため、本実験では抗体を物質量に換算し、各抗体を同じ物質量で投与した。そして、上述の投与計画に従って週2回の頻度で合計4回投与し、腫瘍体積については毎週2回測定した。最後に、各組の腫瘍生長状況を時系列に従って整理し、図42に示すような生長グラフを作成した。
ELISA法による測定は、以下のように行われた。上述の抗原EGFR-ECD-His、VEGF165-His、HER2-ECD-His、LAG3-ECD-His及びCTLA4-ECD-Fcをそれぞれ用い、かつ上述の実験条件下でELISAプレートを被覆し、609の重鎖と他の抗体の軽鎖を組み合せたハイブリッド抗体がこれらの標的を認識できるかどうかを確認した。本実験において、Cetuximab-IgG1、601、Trastuzumab-IgG1、5E7-Hu及びIpilimumab-IgG1などの抗体は、由来が以上で説明した通りであり、各抗原に結合する陽性対照物抗体として用いた。そのうち、Trastuzumab-IgG1は、可変領域が上記7.1で説明した通りであり、定常領域がIpilimumab-IgG1と同じく、他の抗体と同様にして作製したものであった。
図44Aは、609-Fab-Cetuximab-IgG4のHPLC-SECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が99.13%であり、図44Bは、609-Fab-Pertuzumab-IgG4のHPLC-SECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が99.2%であり、図44Cは、609-Fab-Ipilimumab-IgG1のHPLC-SECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が99.3%であり、図44Dは、Ipilimumab-Fab-609-IgG1のHPLC-SECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が99.2%であり、図44Eは、609-Fab-Ipilimumab-IgG4のHPLC-SECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が99.3%であり、図44Fは、Ipilimumab-Fab-609-IgG4のHPLC-SECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が99.1%であり、図44Gは、609-Fab-5E7-IgG4のHPLC-SECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が99.2%であり、かつ図44Hは、5E7-Fab-609-IgG4のHPLC-SECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が99.0%であった。
図45Aは、609-Fab-Ipilimumab-IgG1のHPLC-IECスペクトルであり、主要ピークの占有割合が83.52%であった。この結果から、609-Fab-Ipilimumab-IgG1が良好な電荷異質性を有することが確認できた。
図46A~図46Bは、それぞれ609-Fab-Ipilimumab-IgG1のNR-CE-SDSおよびR-CE-SDSスペクトルであり、NR-CE-SDSスペクトルにおいて、主要ピークに当たるピーク13の占有割合が97.02%であり、R-CE-SDSスペクトルにおいて、2つの主要ピークとしてピーク2(軽鎖に対応するピーク)及びピーク12(長い重鎖に対応するピーク)の占有割合がそれぞれ39.14%、59.13%であり、両ピークの面積比が2:3.0であった。また、609-Fab-Ipilimumab-IgG1の軽鎖と長い重鎖のピーク面積比は、R-CE-SDSスペクトルにおいて所期通りの数値を示した。
Claims (40)
- N末端からC末端にまでVH-B-CH1-ペプチドリンカー-VH-A-CH1-CH2-CH3を含む2つのポリペプチド鎖と、N末端からC末端にまでVL-CLを含む4つの共通軽鎖とを含み、
前記VH-Aは第1抗体の重鎖可変領域あり、前記VH-Bは第2抗体の重鎖可変領域であり、前記CH1は重鎖定常領域の第1構造ドメインであり、前記CH2は重鎖定常領域の第2構造ドメインであり、前記CH3は重鎖定常領域の第3構造ドメインであり、前記第1抗体は第1抗原に特異的に結合し、前記第2抗体は第2抗原に特異的に結合し、
前記VLは軽鎖可変領域であり、前記CLは軽鎖定常領域であり、前記ポリペプチド鎖のVH-A-CH1および前記ポリペプチド鎖のVH-B-CH1は、それぞれ前記共通軽鎖のVL-CLと会合し、前記VH-Aと前記VLは、第1抗原結合サイトを形成し、前記VH-Bと前記VLは、第2抗原結合サイトを形成することを特徴とする、四価二重特異性抗体。 - 前記共通軽鎖は、以下の方法を用いてスクリーニングすることにより得られ、
第1抗体および第2抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれ入れ替えることで、第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせ、及び第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体を取得し、このとき、
a)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できると、第2抗体の軽鎖を共通軽鎖とし、
b)第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できると、第1抗体の軽鎖を共通軽鎖とし、
c)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できず、かつ第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できないと、第1抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで第2抗体の重鎖と第1抗体の変異軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できるようにし、そして第1抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とし、又は
d)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できず、かつ第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できないと、第2抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで第1抗体の重鎖と第2抗体の変異軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できるようにし、そして第2抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とする、請求項1に記載の四価二重特異性抗体。 - 前記共通軽鎖は、以下の方法を用いてスクリーニングすることにより得られ、
第1抗体および第2抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれ入れ替えることで第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせ、及び第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体を取得し、このとき、
a’)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できると、第2抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで、第1抗原に対する親和性からして第1抗体の重鎖と第2抗体の変異軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体が、第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体を上回るようにし、そして第2抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とし、
b’)第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できると、第1抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで、第2抗原に対する親和性からして第2抗体の重鎖と第1抗体の変異軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体が、第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体を上回るようにし、そして第1抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とする、請求項2に記載の四価二重特異性抗体。 - 前記ペプチドリンカーは、人工リンカーであり、かつG、GS、SG、GGS、GSG、SGG、GGG、GGGS、SGGG、GGGGS、GGGGSGS、GGGGSGGS、GGGGSGGGGS、GGGGSGGGGSGGGGS、AKTTPKLEEGEFSEAR、AKTTPKLEEGEFSEARV、AKTTPKLGG、SAKTTPKLGG、SAKTTP、RADAAP、RADAAPTVS、RADAAAAGGPGS、SAKTTPKLEEGEFSEARV、ADAAP、ADAAPTVSIFPP、TVAAP、TVAAPSVFIFPP、QPKAAP、QPKAAPSVTLFPP、AKTTPP、AKTTPPSVTPLAP、AKTTAPSVYPLAP、ASTKGP、ASTKGPSVFPLAP、GENKVEYAPALMALS、GPAKELTPLKEAKVSおよびGHEAAAVMQVQYPASからなる群より選ばれる任意の1種である、請求項1に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記人工リンカーは、GGGGSGGGGSGGGGSである、請求項4に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記ポリペプチド鎖においてN末端近傍のCH1構造ドメインおよびCH1-CH2-CH3は、同じサブタイプ又は異なるサブタイプの重鎖定常領域に由来する、請求項1に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記ポリペプチド鎖においてN末端近傍のCH1構造ドメインおよびCH1-CH2-CH3は、IgG1の重鎖定常領域、IgG2の重鎖定常領域、IgG3の重鎖定常領域およびIgG4の重鎖定常領域からなる群より選ばれる重鎖定常領域に由来する、請求項6に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記ポリペプチド鎖においてN末端近傍のCH1構造ドメインおよびCH1-CH2-CH3は、IgG1又はIgG4の重鎖定常領域に由来する、請求項7に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記IgG4に、サイト変異としてS228Pを含む、請求項7に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記CLは、κ軽鎖の定常領域又はλ軽鎖の定常領域である、請求項1に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記第1抗原および前記第2抗原は、VEGF/PD-1、PD-1/VEGF、TGF-β/PD-1、PD-1/TGF-β、HER2/CD47、CD47/HER2、HER2/CD137、CD137/HER2、PD-1/CD137、CD137/PD-1、PD-1/CD40、CD40/PD-1、PD-1/EGFR、EGFR/PD-1、PD-1/HER2、HER2/PD-1、PD-1/CTLA-4、CTLA-4/PD-1、PD-1/LAG-3、及びLAG-3/PD-1からなる群より選ばれる、請求項1に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記VH-A又は前記VH-Bは、配列番号83で表される配列を有する、請求項1に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記VH-A、前記VH-Bおよび前記VLの配列は、配列番号1、11、15;配列番号11、1、15;配列番号20、11、15;配列番号11、20、15;配列番号29、41、42;配列番号41、29、42;配列番号31、41、42;配列番号41、31、42;配列番号53、61、54;配列番号61、53、54;配列番号53、77、54;配列番号77、53、54;配列番号83、91、92;配列番号91、83、92;配列番号83、105、106;配列番号105、83、106;配列番号83、113、114;配列番号113、83、114;配列番号83、117、118;配列番号117、83、118;配列番号83、119、120;配列番号119、83、120;配列番号83、121、122;及び配列番号121、83、122からなる群より選ばれる、請求項11又は請求項12に記載の四価二重特異性抗体。
- 前記ポリペプチド鎖および前記共通軽鎖の配列は、配列番号16、13;配列番号18、13;配列番号21、13;配列番号45、43;配列番号47、43;配列番号49、43;配列番号51、43;配列番号65、63;配列番号67、63;配列番号79、63;配列番号81、63;配列番号95、93;配列番号97、93;配列番号109、107;配列番号111、107;配列番号131、123;配列番号133、125;配列番号135、127;配列番号137、127;配列番号139、127;配列番号141、127;配列番号143、129;及び配列番号145、129からなる群より選ばれる、請求項13に記載の四価二重特異性抗体。
- 単離されたヌクレオチドであって、
請求項1~14の何れか1項に記載の四価二重特異性抗体をコードすることを特徴とする、ヌクレオチド。 - 前記ヌクレオチドは、前記ポリペプチド鎖および前記共通軽鎖をコードし、
前記ヌクレオチドは、配列番号17、14;配列番号19、14;配列番号22、14;配列番号46、44;配列番号48、44;配列番号50、44;配列番号52、44;配列番号66、64;配列番号68、64;配列番号80、64;配列番号82、64;配列番号96、94;配列番号98、94;配列番号110、108;配列番号112、108;配列番号132、124;配列番号134、126;配列番号136、128;配列番号138、128;配列番号140、128;配列番号142、128;配列番号144、130;及び配列番号146、130からなる群より選ばれる配列を有する、請求項15に記載のヌクレオチド。 - 請求項15又は請求項16に記載のヌクレオチドを含んでなることを特徴とする、発現ベクター。
- 請求項17に記載の発現ベクターを含んでなることを特徴とする、ホスト細胞。
- 請求項1~14の何れか1項に記載の四価二重特異性抗体を製造する方法であって、
発現条件下で請求項18に記載のホスト細胞を培養することにより、前記四価二重特異性抗体を発現するステップaと、
前記ステップaで発現した四価二重特異性抗体を分離、精製するステップbと
を含むことを特徴とする、製造方法。 - 請求項1~14の何れか1項に記載の四価二重特異性抗体、および薬学的に許容可能な担体を含んでなることを特徴とする、薬物組成物。
- 請求項1~14の何れか1項に記載の四価二重特異性抗体又は請求項20に記載の薬物組成物の、がん及び炎症性疾患、自己免疫性疾患および他の疾患を治療するための薬物の製造における用途。
- 前記がんは、メラノーマ、腎臓がん、前立腺がん、膵癌、乳がん、結腸がん、肺がん、食道がん、頭頚部扁平上皮がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、甲状腺がん、膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫および他の腫瘍性悪性疾患からなる群より選ばれ、
前記炎症性疾患、自己免疫性疾患および他の疾患は、眼科、繊維化、喘息、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬およびアトピー性皮膚炎からなる群より選ばれる、請求項21に記載の用途。 - がん及び炎症性疾患、自己免疫性疾患及び他の疾患を治療する方法であって、
請求項1~14の何れか1項に記載の四価二重特異性抗体又は請求項20に記載の薬物組成物を、要治療の被験者に投与することを特徴とする、方法。 - 前記がんは、メラノーマ、腎臓がん、前立腺がん、膵癌、乳がん、結腸がん、肺がん、食道がん、頭頚部扁平上皮がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、甲状腺がん、膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫および他の腫瘍性悪性疾患からなる群より選ばれ、
前記炎症性疾患、自己免疫性疾患および他の疾患は、眼科、繊維化、喘息、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬およびアトピー性皮膚炎からなる群より選ばれる、請求項23に記載の方法。 - 四価二重特異性抗体を作製する方法であって、
第2抗原に特異的に結合する第2抗体の重鎖可変領域VH-Bと、重鎖定常領域の第1構造ドメインCH1をつなぐステップI、
ペプチドリンカーを介して、ステップIで得られた連結物を、第1抗原特異的に結合する第1抗体の重鎖可変領域VH-AにつなぐステップII、
ステップIIで得られた連結物と、重鎖定常領域CH1-CH2-CH3とを繋いでポリペプチド鎖を形成するステップIII、および
ステップIIIで得られたポリペプチド鎖および共通軽鎖VL-CLをコードする遺伝子をそれぞれ発現ベクターに導入し、得られた発現ベクターを組み合せて発現することにより目的とする四価二重特異性抗体を取得するステップIVを含み、
そのうち、前記CH1は重鎖定常領域の第1構造ドメインであり、前記CH2は重鎖定常領域の第2構造ドメインであり、前記CH3は重鎖定常領域の第3構造ドメインであり、前記VLは軽鎖可変領域であり、前記CLは軽鎖定常領域であり、前記VH-A-CH1および前記VH-B-CH1は、それぞれ前記VL-CLと会合し、前記VH-Aは、前記VLと第1抗原結合サイトを形成し、前記VH-Bは、前記VLと第2抗原結合サイトを形成することを特徴とする、作製方法。 - 前記共通軽鎖は、以下の方法を用いてスクリーニングすることにより得られ、
第1抗体および第2抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれ入れ替えることで、第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせ、及び第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体を取得し、このとき、
a)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できると、第2抗体の軽鎖を共通軽鎖とし、
b)第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できると、第1抗体の軽鎖を共通軽鎖とし、
c)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できず、かつ第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できないと、第1抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで第2抗体の重鎖と第1抗体の変異軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できるようにし、そして第1抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とし、又は
d)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できず、かつ第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できないと、第2抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで第1抗体の重鎖と第2抗体の変異軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できるようにし、そして第2抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とする、請求項25に記載の作製方法。 - 前記共通軽鎖は、以下の方法を用いてスクリーニングすることにより得られ、
第1抗体および第2抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれ入れ替えることで第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせ、及び第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体を取得し、このとき、
a’)第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第1抗原に特異的に結合できると、第2抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで、第1抗原に対する親和性からして第1抗体の重鎖と第2抗体の変異軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体が、第1抗体の重鎖と第2抗体の軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体を上回るようにし、そして第2抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とし、
b’)第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖の組み合わせによって形成されたハイブリッド抗体が第2抗原に特異的に結合できると、第1抗体の軽鎖に復帰変異を導入することで、第2抗原に対する親和性からして第2抗体の重鎖と第1抗体の変異軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体が、第2抗体の重鎖と第1抗体の軽鎖を組み合わせたハイブリッド抗体を上回るようにし、そして第1抗体の変異軽鎖を共通軽鎖とする、請求項26に記載の作製方法。 - 前記ペプチドリンカーは、人工リンカーであり、かつG、GS、SG、GGS、GSG、SGG、GGG、GGGS、SGGG、GGGGS、GGGGSGS、GGGGSGGS、GGGGSGGGGS、GGGGSGGGGSGGGGS、AKTTPKLEEGEFSEAR、AKTTPKLEEGEFSEARV、AKTTPKLGG、SAKTTPKLGG、SAKTTP、RADAAP、RADAAPTVS、RADAAAAGGPGS、SAKTTPKLEEGEFSEARV、ADAAP、ADAAPTVSIFPP、TVAAP、TVAAPSVFIFPP、QPKAAP、QPKAAPSVTLFPP、AKTTPP、AKTTPPSVTPLAP、AKTTAPSVYPLAP、ASTKGP、ASTKGPSVFPLAP、GENKVEYAPALMALS、GPAKELTPLKEAKVSおよびGHEAAAVMQVQYPASからなる群より選ばれる任意の1種である、請求項25に記載の作製方法。
- 前記人工リンカーは、GGGGSGGGGSGGGGSである、請求項28に記載の作製方法。
- 前記ポリペプチド鎖においてN末端近傍のCH1構造ドメインおよびCH1-CH2-CH3は、同じサブタイプ又は異なるサブタイプの重鎖定常領域に由来する、請求項25に記載の作製方法。
- 前記ポリペプチド鎖においてN末端近傍のCH1構造ドメインおよびCH1-CH2-CH3は、IgG1の重鎖定常領域、IgG2の重鎖定常領域、IgG3の重鎖定常領域およびIgG4の重鎖定常領域からなる群より選ばれる重鎖定常領域に由来する、請求項30に記載の作製方法。
- 前記ポリペプチド鎖においてCH1-CH2-CH3は、IgG1又はIgG4の重鎖定常領域に由来する、請求項31に記載の作製方法。
- 前記IgG4に、サイト変異としてS228Pを含む、請求項31又は32に記載の作製方法。
- 前記CLは、κ軽鎖の定常領域又はλ軽鎖の定常領域である、請求項25に記載の作製方法。
- 前記第1抗原および前記第2抗原は、VEGF/PD-1、PD-1/VEGF、TGF-β/PD-1、PD-1/TGF-β、HER2/CD47、CD47/HER2、HER2/CD137、CD137/HER2、PD-1/CD137、CD137/PD-1、PD-1/CD40、CD40/PD-1、PD-1/EGFR、EGFR/PD-1、PD-1/HER2、HER2/PD-1、PD-1/CTLA-4、CTLA-4/PD-1、PD-1/LAG-3、及びLAG-3/PD-1からなる群より選ばれる、請求項25に記載の作製方法。
- 前記VH-A又は前記VH-Bは、配列番号83で表される配列を有する、請求項25に記載の作製方法。
- 前記VH-A、前記VH-Bおよび前記VLの配列は、配列番号1、11、15;配列番号11、1、15;配列番号20、11、15;配列番号11、20、15;配列番号29、41、42;配列番号41、29、42;配列番号31、41、42;配列番号41、31、42;配列番号53、61、54;配列番号61、53、54;配列番号53、77、54;配列番号77、53、54;配列番号83、91、92;配列番号91、83、92;配列番号83、105、106;配列番号105、83、106;配列番号83、113、114;配列番号113、83、114;配列番号83、117、118;配列番号117、83、118;配列番号83、119、120;配列番号119、83、120;配列番号83、121、122;及び配列番号121、83、122からなる群より選ばれる、請求項35又は36に記載の作製方法。
- 前記ポリペプチド鎖および前記共通軽鎖の配列は、配列番号16、13;配列番号18、13;配列番号21、13;配列番号45、43;配列番号47、43;配列番号49、43;配列番号51、43;配列番号65、63;配列番号67、63;配列番号79、63;配列番号81、63;配列番号95、93;配列番号97、93;配列番号109、107;配列番号111、107;配列番号131、123;配列番号133、125;配列番号135、127;配列番号137、127;配列番号139、127;配列番号141、127;配列番号143、129;及び配列番号145、129からなる群より選ばれる、請求項37に記載の作製方法。
- 少なくとも2つの異なる重鎖可変領域及び少なくとも2つの共通軽鎖を含み、
前記共通軽鎖は、同じ軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域が抗原結合サイトを形成し、
前記重鎖可変領域は、配列番号83で表されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする、二重特異性抗体。 - 配列番号83で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域の、二重特異性抗体の作製における用途であって、
前記二重特異性抗体は、少なくとも2つの異なる重鎖可変領域及び少なくとも2つの共通軽鎖を含み、前記共通軽鎖は、同じ軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域が抗原結合サイトを形成することを特徴とする、用途。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2022027368A JP2022145555A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | Pd-1とlag-3を標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027366A JP2022153280A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | Pd-1とvegfを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027367A JP2022153281A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2023137169A JP2023159379A (ja) | 2020-04-29 | 2023-08-25 | Pd-1とvegfを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2023137170A JP2023159380A (ja) | 2020-04-29 | 2023-08-25 | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010357134.4A CN113563473A (zh) | 2020-04-29 | 2020-04-29 | 四价双特异性抗体、其制备方法和用途 |
CN202010357134.4 | 2020-04-29 | ||
PCT/CN2021/088153 WO2021218684A1 (zh) | 2020-04-29 | 2021-04-19 | 四价双特异性抗体、其制备方法和用途 |
Related Child Applications (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022027366A Division JP2022153280A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | Pd-1とvegfを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027368A Division JP2022145555A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | Pd-1とlag-3を標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027367A Division JP2022153281A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2023137170A Division JP2023159380A (ja) | 2020-04-29 | 2023-08-25 | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2023137169A Division JP2023159379A (ja) | 2020-04-29 | 2023-08-25 | Pd-1とvegfを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022540319A true JP2022540319A (ja) | 2022-09-15 |
JPWO2021218684A5 JPWO2021218684A5 (ja) | 2022-09-26 |
Family
ID=78158563
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021574257A Pending JP2022540319A (ja) | 2020-04-29 | 2021-04-19 | 四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027366A Pending JP2022153280A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | Pd-1とvegfを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027368A Pending JP2022145555A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | Pd-1とlag-3を標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027367A Pending JP2022153281A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2023137170A Pending JP2023159380A (ja) | 2020-04-29 | 2023-08-25 | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2023137169A Pending JP2023159379A (ja) | 2020-04-29 | 2023-08-25 | Pd-1とvegfを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
Family Applications After (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022027366A Pending JP2022153280A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | Pd-1とvegfを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027368A Pending JP2022145555A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | Pd-1とlag-3を標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2022027367A Pending JP2022153281A (ja) | 2020-04-29 | 2022-02-25 | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2023137170A Pending JP2023159380A (ja) | 2020-04-29 | 2023-08-25 | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
JP2023137169A Pending JP2023159379A (ja) | 2020-04-29 | 2023-08-25 | Pd-1とvegfを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220259330A1 (ja) |
EP (4) | EP4050031A1 (ja) |
JP (6) | JP2022540319A (ja) |
CN (5) | CN113563473A (ja) |
TW (4) | TW202144426A (ja) |
WO (1) | WO2021218684A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113563473A (zh) * | 2020-04-29 | 2021-10-29 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 四价双特异性抗体、其制备方法和用途 |
AR127714A1 (es) * | 2021-11-19 | 2024-02-21 | Merus Nv | UNIDADES DE UNIÓN MULTIESPECÍFICAS QUE COMPRENDEN LOS DOMINIOS DE UNIÓN A PD-1 Y TGF-bRII |
WO2024072893A1 (en) * | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Incyte Corporation | Anti-pd-1/lag-3 bispecific antibodies and uses thereof |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001077342A1 (en) * | 2000-04-11 | 2001-10-18 | Genentech, Inc. | Multivalent antibodies and uses therefor |
US20070071675A1 (en) * | 2005-08-19 | 2007-03-29 | Chengbin Wu | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
WO2009131239A1 (ja) * | 2008-04-25 | 2009-10-29 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | 安定な多価抗体 |
JP2016533714A (ja) * | 2013-10-11 | 2016-11-04 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体 |
JP2018504113A (ja) * | 2015-01-08 | 2018-02-15 | 蘇州康寧傑瑞生物科技有限公司 | 共通軽鎖を有する二重特異性抗体又は抗体混合物 |
US20190352401A1 (en) * | 2018-03-30 | 2019-11-21 | Merus N.V. | Multivalent antibody |
WO2020138487A1 (ja) * | 2018-12-28 | 2020-07-02 | 協和キリン株式会社 | TfRに結合するバイスペシフィック抗体 |
Family Cites Families (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5571714A (en) | 1988-12-22 | 1996-11-05 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Monoclonal antibodies which bind both transforming growth factors β1 and β2 and methods of use |
DE69624436T2 (de) | 1995-04-08 | 2003-08-28 | Lg Chemical Ltd | Humaner 4-1bb spezifischer humaner antikörper und diesen produzierende zellinie |
US20020032315A1 (en) | 1997-08-06 | 2002-03-14 | Manuel Baca | Anti-vegf antibodies |
US6051228A (en) | 1998-02-19 | 2000-04-18 | Bristol-Myers Squibb Co. | Antibodies against human CD40 |
AU2940900A (en) | 1999-03-10 | 2000-09-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Single-stranded fv inducing apoptosis |
US7605238B2 (en) | 1999-08-24 | 2009-10-20 | Medarex, Inc. | Human CTLA-4 antibodies and their uses |
ES2592271T3 (es) | 2005-03-31 | 2016-11-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Métodos de producción de polipéptidos mediante la regulación de la asociación de los polipéptidos |
WO2007044887A2 (en) * | 2005-10-11 | 2007-04-19 | Transtarget, Inc. | Method for producing a population of homogenous tetravalent bispecific antibodies |
EP1966243B1 (en) | 2005-12-23 | 2012-02-15 | Eli Lilly And Company | Tgf-beta binding antibodies |
JOP20200236A1 (ar) | 2012-09-21 | 2017-06-16 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها |
CA2903056A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Merck Patent Gmbh | Tetravalent bispecific antibodies |
BR112016015140A2 (pt) | 2013-12-30 | 2018-01-23 | Epimab Biotherapeutics Inc. | imunoglobulina com fabs in-tandem e usos das mesmas |
MA44054A (fr) * | 2015-12-18 | 2018-10-24 | Biogen Ma Inc | Plateforme d'anticorps bispécifique |
WO2017136562A2 (en) * | 2016-02-02 | 2017-08-10 | Kadmon Corporation, Llc | Bispecific binding proteins for pd-l1 and kdr |
JP7258556B2 (ja) * | 2016-04-28 | 2023-04-17 | ビオミューネクス・ファルマシューティカル | Egfr及びher2をターゲティングする二重特異性抗体 |
CN118005799A (zh) * | 2016-09-23 | 2024-05-10 | 马伦戈治疗公司 | 包含λ轻链和κ轻链的多特异性抗体分子 |
AU2017341936A1 (en) * | 2016-10-14 | 2019-04-04 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Modular tetravalent bispecific antibody platform |
JP2020504123A (ja) * | 2016-12-29 | 2020-02-06 | ディベロップメント センター フォー バイオテクノロジーDevelopment Center For Biotechnology | Klk6媒介性cns特異的抗体プロドラッグ活性化 |
TWI787230B (zh) | 2017-01-20 | 2022-12-21 | 法商賽諾菲公司 | 抗TGF-β抗體及其用途 |
CN108341871A (zh) | 2017-01-24 | 2018-07-31 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 抗pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用 |
KR101961871B1 (ko) * | 2017-02-20 | 2019-07-17 | 주식회사 와이바이오로직스 | 신규 다중특이적 결합 단백질 |
CA3068932A1 (en) * | 2017-07-06 | 2019-01-10 | Merus N.V. | Bispecific anti pd1-anti tim3 antibodies |
BR112020001360A2 (pt) * | 2017-07-24 | 2020-08-11 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno deste que se liga a cd8, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, conjugado de anticorpo, métodos para gerar imagens de um tecido que expressa cd8, para tratar um sujeito tendo um tumor sólido, para prever uma resposta positiva a uma terapia antitumoral, para monitorar uma resposta de um tumor em um sujeito a uma terapia antitumoral, para prever ou monitorar a eficácia da terapia antitumoral e para monitorar a presença de células t em um tumor ao longo do tempo, e, composto. |
CN109385445A (zh) * | 2017-08-09 | 2019-02-26 | 北京睿诚海汇健康科技有限公司 | 植物作为宿主在表达贝伐抗体中的应用 |
SG11202002261VA (en) | 2017-09-22 | 2020-04-29 | Wuxi Biologics Ireland Ltd | Novel bispecific polypeptide complexes |
AU2018366199A1 (en) * | 2017-11-08 | 2020-05-28 | Xencor, Inc. | Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences |
WO2019113464A1 (en) * | 2017-12-08 | 2019-06-13 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multispecific molecules and uses thereof |
WO2019149716A1 (en) * | 2018-01-31 | 2019-08-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies comprising an antigen-binding site binding to lag3 |
CA3090878A1 (en) * | 2018-02-11 | 2019-08-15 | Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. | Anti-pd-1/anti-vegf natural antibody structure-like heterodimeric form bispecific antibody and preparation thereof |
BR112020021279A2 (pt) * | 2018-04-17 | 2021-04-13 | Invenra Inc. | Constructos de anticorpos trispecíficos trivalentes |
CN110790840A (zh) | 2018-08-01 | 2020-02-14 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 结合人her2的抗体、其制备方法和用途 |
CN110678484B (zh) * | 2018-08-21 | 2022-12-27 | 天境生物科技(杭州)有限公司 | 抗pd-l1/抗lag3双特异性抗体及其用途 |
WO2020038397A1 (en) * | 2018-08-21 | 2020-02-27 | I-Mab | Anti-pd-l1/anti-lag3 bispecific antibodies and uses thereof |
CN110272495A (zh) * | 2019-06-11 | 2019-09-24 | 南京华岩生物技术有限公司 | 一种能结合两种抗原的双特异性结合的免疫球蛋白及其用途 |
CN110330566A (zh) * | 2019-06-11 | 2019-10-15 | 南京华岩生物技术有限公司 | 一种具有双重可变结构域的双特异性结合的免疫球蛋白 |
AU2019456113A1 (en) * | 2019-07-11 | 2022-03-03 | Wuhan Yzy Biopharma Co., Ltd. | Tetravalent symmetric bispecific antibody |
CN110498857B (zh) * | 2019-08-09 | 2022-09-09 | 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 | 一种抗vegf-抗pd1双特异性抗体 |
CN113563473A (zh) * | 2020-04-29 | 2021-10-29 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 四价双特异性抗体、其制备方法和用途 |
CN113754774A (zh) * | 2020-06-02 | 2021-12-07 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 一种抗pd-l1和egfr的四价双特异性抗体 |
CN115154598A (zh) * | 2021-04-06 | 2022-10-11 | 丹生医药技术(上海)有限公司 | 一种抗pd-1/vegf双特异性抗体液体制剂 |
-
2020
- 2020-04-29 CN CN202010357134.4A patent/CN113563473A/zh active Pending
-
2021
- 2021-04-19 CN CN202111644268.5A patent/CN114349866B/zh active Active
- 2021-04-19 WO PCT/CN2021/088153 patent/WO2021218684A1/zh unknown
- 2021-04-19 US US17/617,516 patent/US20220259330A1/en active Pending
- 2021-04-19 EP EP22152938.1A patent/EP4050031A1/en not_active Withdrawn
- 2021-04-19 EP EP22152931.6A patent/EP4047018B1/en active Active
- 2021-04-19 EP EP22152936.5A patent/EP4050028A1/en not_active Withdrawn
- 2021-04-19 EP EP21796353.7A patent/EP3967711A4/en active Pending
- 2021-04-19 CN CN202180003485.8A patent/CN113993901A/zh active Pending
- 2021-04-19 CN CN202111641110.2A patent/CN114262379B/zh active Active
- 2021-04-19 CN CN202111641121.0A patent/CN114349865B/zh active Active
- 2021-04-19 JP JP2021574257A patent/JP2022540319A/ja active Pending
- 2021-04-29 TW TW110115679A patent/TW202144426A/zh unknown
- 2021-04-29 TW TW111104813A patent/TW202221044A/zh unknown
- 2021-04-29 TW TW111104812A patent/TWI815306B/zh active
- 2021-04-29 TW TW111104811A patent/TWI815305B/zh active
-
2022
- 2022-02-25 JP JP2022027366A patent/JP2022153280A/ja active Pending
- 2022-02-25 JP JP2022027368A patent/JP2022145555A/ja active Pending
- 2022-02-25 JP JP2022027367A patent/JP2022153281A/ja active Pending
-
2023
- 2023-08-25 JP JP2023137170A patent/JP2023159380A/ja active Pending
- 2023-08-25 JP JP2023137169A patent/JP2023159379A/ja active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001077342A1 (en) * | 2000-04-11 | 2001-10-18 | Genentech, Inc. | Multivalent antibodies and uses therefor |
US20070071675A1 (en) * | 2005-08-19 | 2007-03-29 | Chengbin Wu | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
WO2009131239A1 (ja) * | 2008-04-25 | 2009-10-29 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | 安定な多価抗体 |
JP2016533714A (ja) * | 2013-10-11 | 2016-11-04 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体 |
JP2018504113A (ja) * | 2015-01-08 | 2018-02-15 | 蘇州康寧傑瑞生物科技有限公司 | 共通軽鎖を有する二重特異性抗体又は抗体混合物 |
US20190352401A1 (en) * | 2018-03-30 | 2019-11-21 | Merus N.V. | Multivalent antibody |
WO2020138487A1 (ja) * | 2018-12-28 | 2020-07-02 | 協和キリン株式会社 | TfRに結合するバイスペシフィック抗体 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2022153281A (ja) | 2022-10-12 |
EP4050031A1 (en) | 2022-08-31 |
CN114349866A (zh) | 2022-04-15 |
WO2021218684A1 (zh) | 2021-11-04 |
TW202221043A (zh) | 2022-06-01 |
CN113563473A (zh) | 2021-10-29 |
CN114349865B (zh) | 2023-06-09 |
EP4050028A1 (en) | 2022-08-31 |
TW202221044A (zh) | 2022-06-01 |
US20220259330A1 (en) | 2022-08-18 |
EP3967711A1 (en) | 2022-03-16 |
JP2023159379A (ja) | 2023-10-31 |
CN114262379A (zh) | 2022-04-01 |
CN114349866B (zh) | 2023-06-02 |
EP3967711A4 (en) | 2023-08-16 |
TW202144426A (zh) | 2021-12-01 |
CN113993901A (zh) | 2022-01-28 |
EP4047018B1 (en) | 2023-12-13 |
CN114349865A (zh) | 2022-04-15 |
JP2022153280A (ja) | 2022-10-12 |
JP2023159380A (ja) | 2023-10-31 |
TW202221042A (zh) | 2022-06-01 |
TWI815305B (zh) | 2023-09-11 |
EP4047018A1 (en) | 2022-08-24 |
EP4047018C0 (en) | 2023-12-13 |
TWI815306B (zh) | 2023-09-11 |
JP2022145555A (ja) | 2022-10-04 |
CN114262379B (zh) | 2023-06-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2801873T3 (es) | Anticuerpo de PDL-1, composición farmacéutica del mismo y sus usos | |
JP2022153281A (ja) | PD-1とTGF-betaを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 | |
JP7288984B2 (ja) | Pd-1及びpd-l1を標的とする四価二重特異性抗体 | |
KR20210100654A (ko) | Cd3 항체 및 그의 약제학적 용도 | |
US20220127360A1 (en) | Tetravalent bispecific antibody against pd-1 and vegf, preparation method therefor, and use thereof | |
US20220135686A1 (en) | Antibody that binds to human pd-l1 | |
CN117355540A (zh) | 抗cd137抗体和使用方法 | |
CN115010810A (zh) | 抗ctla-4抗体及其应用 | |
EA042365B1 (ru) | Бифункциональное антитело против ctla4 и против pd-1, его фармацевтическая композиция и их применение |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220208 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220208 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20220912 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220912 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230124 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230420 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230801 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231023 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231226 |