JP2021504705A - 鉄キレート剤を含むプロトロンビン時間試薬 - Google Patents
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Abstract
Description
t0時点で、組換えヒト組織因子タンパク質、合成リン脂質およびカルシウムイオンを含む液体のプロトロンビン時間試薬に下記の最終濃度でデフェロキサミン(デフェロキサミンメシル酸塩、Sigma−Aldrich Chemie GmbH、Steinheim、Germany)を、様々なバッチで、添加した:
1.デフェロキサミン 0mM、
2.デフェロキサミン 0.0137mM(9mg/L)、
3.デフェロキサミン 0.0183mM(12mg/L)、
4.デフェロキサミン 0.0228mM(15mg/L)、
5.デフェロキサミン 0.114mM(75mg/L)、
6.デフェロキサミン 0.228mM(150mg/L)。
・Dade(登録商標)Ci−Trol(登録商標)Coagulation Control Level 1(Ci−Trol 1)対照血漿;プロトロンビン時間の決定のための正常対照;結果は、新鮮な正常のクエン酸血漿に相当する;
・Dade(登録商標)Ci−Trol(登録商標)Coagulation Control Level 2(Ci−Trol 2)対照血漿;凝固障害において観察されるようなプロトロンビン時間の決定のための異常対照;凝固時間は、新鮮な正常のクエン酸血漿の凝血時間と比較して延長される。
t0時点で、以下の金属イオンキレート剤 0.0228mmol/Lの各々を、様々なバッチで、組換えヒト組織因子タンパク質、合成リン脂質およびカルシウムイオンを含む液体のプロトロンビン時間試薬に添加した:
i.ピオベルジン(ピオベルジン、Sigma−Aldrich Chemie GmbH、Steinheim、Germany);
ii.フェリクローム(ウスティラゴ・セファロジェナ(Ustilago sphaerogena)由来の鉄不含フェリクローム、Sigma−Aldrich Chemie GmbH、Steinheim、Germany);
iii.デフェロキサミン(デフェロキサミンメシル酸塩、Sigma−Aldrich Chemie GmbH、Steinheim、Germany)デフェロキサミン(デフェロキサミンメシル酸塩、Sigma−Aldrich Chemie GmbH、Steinheim、Germany);
iv.デフェラシロクス(Combi−Blocks, Inc.、San Diego、USA);
v.DTPA(ジエチレントリアミン五酢酸);
vi.EDTA(エチレンジアミン四酢酸);
vii.BAPTA(1,2−ビス(2−アミノフェノキシ)エタン−N,N,N’,N’−四酢酸)。
t0時点で、FeCl3 0.00308mM(0.5mg/L)を、組換えヒト組織因子タンパク質、合成リン脂質およびカルシウムイオンを含む液体のプロトロンビン時間試薬に添加し、その後、実施例2において言及されている金属イオンキレート剤 0.0228mMの各々を、様々なバッチで添加した。
Claims (19)
- 組織因子タンパク質およびリン脂質を含むプロトロンビン時間試薬であって、該試薬は、少なくとも1つの鉄キレート剤をさらに含み、該少なくとも1つの鉄キレート剤は、シデロフォアおよび3,5−ジフェニル−1,2,4−トリアゾールを含む群から選択されることを特徴とする前記プロトロンビン時間試薬。
- シデロフォアは、デフェロキサミン、ピオベルジンおよびフェリクロームを含む群から選択される、請求項1に記載のプロトロンビン時間試薬。
- 3,5−ジフェニル−1,2,4−トリアゾールは、デフェラシロクス、エチル[3,5−ビス(2−ヒドロキシフェニル)−[1,2,4]トリアゾール−1−イル]アセテートおよび3,5−ビス(2−ヒドロキシフェニル)−1−(2,2,2−トリフルオロエチル)−1H−[1,2,4]トリアゾールを含む群から選択される、請求項1に記載のプロトロンビン時間試薬。
- 少なくとも1つの鉄キレート剤を、0.007〜2.5mmol/L、特に好ましくは0.01〜0.5mmol/Lの濃度で含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載のプロトロンビン時間試薬。
- Ca2+も含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載のプロトロンビン時間試薬。
- 塩化カルシウム 5〜500mmol/Lを含む、請求項5に記載のプロトロンビン時間試薬。
- 組織因子タンパク質は、ヒトまたは動物の組換え組織因子タンパク質および組織抽出物由来の天然のヒトまたは動物の組織因子タンパク質の群から選択される、請求項1〜6のいずれか1項に記載のプロトロンビン時間試薬。
- 組織因子タンパク質およびリン脂質ならびに場合によりCa2+イオンを含む液体のプロトロンビン時間試薬を調製するための方法であって、組織因子タンパク質、リン脂質ならびにシデロフォアおよび3,5−ジフェニル−1,2,4−トリアゾールを含む群から選択される少なくとも1つの鉄キレート剤を含む液体を準備し、該液体を、この液体を凍結乾燥することなく試薬バイアル中に充填することを特徴とする前記方法。
- 組織因子タンパク質およびリン脂質ならびに場合によりCa2+イオンを含むプロトロンビン時間試薬を安定化するための方法であって、シデロフォアおよび3,5−ジフェニル−1,2,4−トリアゾールを含む群から選択される少なくとも1つの鉄キレート剤を該試薬に添加することを特徴とする前記方法。
- 少なくとも1つの鉄キレート剤を、試薬が少なくとも1つの鉄キレート剤を0.007〜2.5mmol/L、特に好ましくは0.01〜0.5mmol/Lの濃度で含むような量で添加する、請求項9に記載の方法。
- シデロフォアは、デフェロキサミン、ピオベルジンおよびフェリクロームを含む群から選択される、請求項8または9に記載の方法。
- 3,5−ジフェニル−1,2,4−トリアゾールは、デフェラシロクス、エチル[3,5−ビス(2−ヒドロキシフェニル)−[1,2,4]トリアゾール−1−イル]アセテートおよび3,5−ビス(2−ヒドロキシフェニル)−1−(2,2,2−トリフルオロエチル)−1H−[1,2,4]トリアゾールを含む群から選択される、請求項8または9に記載の方法。
- 血漿サンプル中の凝固パラメーターを決定するための方法における、請求項1〜7のいずれか1項に記載のプロトロンビン時間試薬の使用。
- 血漿サンプル中の凝固パラメーターを決定するための方法であって、該血漿サンプルを請求項1〜7のいずれか1項に記載のプロトロンビン時間試薬と混合して、反応混合物を得、該反応混合物中の該凝固パラメーターを決定することを特徴とする前記方法。
- プロトロンビン時間、誘導フィブリノーゲンおよび内因性トロンビン活性の群から凝固パラメーターを決定するための、請求項14に記載の方法。
- 反応混合物の吸光度の変化を、測光法で測定し、プロトロンビン時間試薬と血漿サンプルの混合の時点から閾値に達するまでの時間を決定する、プロトロンビン時間を決定するための、請求項14に記載の方法。
- 組織因子タンパク質およびリン脂質を含むプロトロンビン時間試薬を調製するための、シデロフォアおよび3,5−ジフェニル−1,2,4−トリアゾールを含む群からの鉄キレート剤の使用。
- シデロフォアは、デフェロキサミン、ピオベルジンおよびフェリクロームを含む群から選択される、請求項17に記載の使用。
- 3,5−ジフェニル−1,2,4−トリアゾールは、デフェラシロクス、エチル[3,5−ビス(2−ヒドロキシフェニル)−[1,2,4]トリアゾール−1−イル]アセテートおよび3,5−ビス(2−ヒドロキシフェニル)−1−(2,2,2−トリフルオロエチル)−1H−[1,2,4]トリアゾールを含む群から選択される、請求項17に記載の使用。
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