JP2020519284A5 - - Google Patents

Claims (25)

1. アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端リピート（ＩＴＲ）に隣接する、Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子のＧ_４Ｃ_２リピートの反対側に隣接する標的核酸配列に対して特異的にハイブリダイズする２以上のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）をコードする導入遺伝子を含む、単離された核酸。
2. ２以上のｇＲＮＡが、各々、配列番号１〜４のいずれか１つに示される配列、またはそれらのいずれか１つに相補的な配列を含むまたはからなる、請求項１に記載の単離された核酸。
3. 導入遺伝子が、配列番号１に示される配列を有する第１のｇＲＮＡおよび配列番号３に示される配列を有する第２のｇＲＮＡをコードする、請求項１または２に記載の単離された核酸。
4. 導入遺伝子が、配列番号２に示される配列を有する第１のｇＲＮＡおよび配列番号３に示される配列を有する第２のｇＲＮＡをコードする、請求項１または２に記載の単離された核酸。
5. ＡＡＶ ＩＴＲが、ＡＡＶ２ ＩＴＲ、ＡＡＶ３ ＩＴＲ、ＡＡＶ４ ＩＴＲ、ＡＡＶ５ ＩＴＲ、ＡＡＶ６ ＩＴＲ、ＡＡＶ７ ＩＴＲ、ＡＡＶ８ ＩＴＲ、またはＡＡＶ９ ＩＴＲである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸。
6. 導入遺伝子がプロモーターを含み、任意に、プロモーターがＣＢプロモーターである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された核酸。
7. 配列番号１〜４のいずれか１つに示される配列、またはそれらのいずれか１つに相補的な配列を有するガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）をコードする核酸配列を含む、単離された核酸。
8. （ｉ）請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離された核酸；および
   （ｉｉ）少なくとも１のＡＡＶカプシドタンパク質
   を含む、組み換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）。
9. カプシドタンパク質が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、または上記のいずれかのバリアントから選択される血清型のものである、請求項８に記載のｒＡＡＶ。
10. カプシドタンパク質が、ＡＡＶ９カプシドタンパク質である、請求項８または９に記載のｒＡＡＶ。
11. 請求項８〜１０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、および組み換え遺伝子編集タンパク質を含む、組成物。
12. 組み換え遺伝子編集タンパク質が、ｒＡＡＶベクターによってコードされる、請求項１１に記載の組成物。
13. 組み換え遺伝子編集タンパク質が、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓタンパク質であり、任意に、Ｃａｓ９タンパク質である、請求項１１または１２に記載の組成物。
14. （ｉ）Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子のＧ_４Ｃ_２リピートの反対側に隣接する標的核酸配列に対して特異的にハイブリダイズする２以上のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）；および
    （ｉｉ）２以上のｇＲＮＡと相互作用する組み換え遺伝子編集タンパク質
    を発現する、哺乳動物の細胞。
15. 組み換え遺伝子編集タンパク質がＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓタンパク質である、請求項１４に記載の哺乳動物の細胞。
16. 組み換え遺伝子編集タンパク質が、Ｃａｓ９、Ｃａｓ６、およびＣｐｆ１から選択されるＣａｓタンパク質である、請求項１４または１５に記載の哺乳動物の細胞。
17. ｇＲＮＡの各々が、配列番号１〜４のいずれか１つに示される配列、またはそれらのいずれか１つに相補的な配列を含む、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の哺乳動物の細胞。
18. 細胞が、Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子のＧ_４Ｃ_２リピートの反対側に隣接する標的核酸配列に対して特異的に各々ハイブリダイズする、２、３、または４のｇＲＮＡを発現する、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の哺乳動物の細胞。
19. 配列番号１に示される配列を有する第１のｇＲＮＡおよび配列番号３に示される配列を有する第２のｇＲＮＡを発現する、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の哺乳動物の細胞。
20. 配列番号２に示される配列を有する第１のｇＲＮＡおよび配列番号３に示される配列を有する第２のｇＲＮＡを発現する、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の哺乳動物の細胞。
21. （ｉ）組み換え遺伝子編集タンパク質；および
    （ｉｉ）Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子のＧ_４Ｃ_２リピートの反対側に隣接する標的核酸配列に対して特異的にハイブリダイズする２以上のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）
    を細胞へ送達することを含む、方法。
22. ｇＲＮＡが、配列番号１〜４から選択される配列またはそれらのいずれか１つに相補的な配列を含む、請求項２１に記載の方法または複合体。
23. （ｉ）Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子のエキソン領域に対して特異的にハイブリダイズするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）；および
    （ｉｉ）ｇＲＮＡと相互作用する組み換え遺伝子編集タンパク質
    を発現する、哺乳動物の細胞。
24. 細胞においてＣ９ＯＲＦ７２遺伝子のエキソン領域に対して特異的にハイブリダイズするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）およびｇＲＮＡと相互作用する組み換え遺伝子編集タンパク質を含む組み換え遺伝子編集複合体を発現させることを含む、細胞においてＲＮＡフォーカスおよび／またはジペプチド形成を低減する方法であって、
    組み換え遺伝子編集複合体の細胞への送達が、前記遺伝子から転写されたＣ９ｏｒｆ７２転写産物のナンセンス変異依存分解につながるＣ９ＯＲＦ７２遺伝子における挿入または欠失をもたらす、前記方法。
25. （ｉ）Ｃ９ＯＲＦ７２遺伝子の１以上のエキソン領域に対して特異的にハイブリダイズするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）；および
    （ｉｉ）ｇＲＮＡと相互作用する組み換え遺伝子編集タンパク質
    を細胞へ送達することを含む、方法。