JP2020519294A5

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Info

Publication number: JP2020519294A5
Application number: JP2019562556A
Authority: JP
Filing date: 2018-05-11
Publication date: 2021-07-26

Claims

組み換えウイルス産生収率を制御するための方法であって、以下：
（ｉ）宿主細胞に導入遺伝子を含む第１核酸を導入すること；
（ｉｉ）宿主細胞に干渉核酸を発現することができる第２核酸を導入すること、ここで、干渉核酸は導入遺伝子の発現を特異的に阻害する；
（ｉｉｉ）宿主細胞内で導入遺伝子を含む核酸を複製すること；および
（ｉｖ）任意に、宿主細胞から第１核酸を含むウイルス粒子を単離すること
を含む、前記方法。
宿主細胞は、（ａ）ウイルスベクターパッケージング細胞、（ｂ）哺乳動物細胞、（ｃ）ヒト細胞、任意にＨＥＫ２９３Ｔ細胞、または、（ｄ）昆虫細胞、任意にSpodoptera frugiperda (Sf9)細胞である、請求項１に記載の方法。
第１核酸は、レンチウイルス導入プラスミド、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター、またはレトロウイルスベクターである、請求項１または２に記載の方法。
第１核酸は、レンチウイルス導入プラスミドまたはレトロウイルス導入プラスミドであり、少なくとも１つの末端反復配列（ＬＴＲ）を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
第１核酸は、ＡＡＶベクターであり、少なくとも１つの逆位反復配列（ＩＴＲ）を含み、任意に、ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９ＩＴＲである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
ＡＡＶベクターは、少なくとも１つのΔＩＴＲまたはｍＴＲを含む自己相補的なＡＡＶベクターである、請求項５に記載の方法。
導入遺伝子の発現は、宿主細胞中のウイルスベクターパッケージングと干渉する、および／または、導入遺伝子は、細胞傷害性であるか、または、宿主細胞のフィットネスに有害な生理化学的特徴（例として、導入遺伝子は、高い熱安定性を有する２次構造を形成するタンパク質をコードする）を１以上含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
第１核酸によってコードされる転写産物は、阻害性核酸のための１以上の結合部位を含み、任意に、阻害性核酸は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）または人工のｍｉＲＮＡ（ａｍｉＲＮＡ）であり、任意に１以上の結合部位は、配列番号３および４から選択される配列を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
１以上の結合部位の各々の配列は、宿主細胞の内在性のｍｉＲＮＡによって認識されない、および／または、１以上の結合部位は、転写産物の最終コドンとポリＡテールとの間に位置する、または、１以上の結合部位は、転写産物の５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）に位置する、請求項８に記載の方法。
第２核酸は、低分子ヘアピンＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはａｍｉＲＮＡを発現し、任意に、第２核酸は、導入遺伝子をコードする核酸に結合するｍｉＲＮＡまたはａｍｉＲＮＡを発現する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
ｍｉＲＮＡまたはａｍｉＲＮＡは、非ヒト細胞あるいは昆虫細胞または植物細胞中で発現されるｍｉＲＮＡ配列を含む、請求項１０に記載の方法。
ｍｉＲＮＡまたはａｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ−３３３配列（配列番号１）またはｍｉＲ−８５６配列（配列番号２）を含み、任意にａｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ−３０足場を含む、請求項１０または１１に記載の方法。
宿主細胞は、１以上のアクセサリープラスミドをさらに含み、任意に、１以上のアクセサリープラスミドの各々は、パッケージングプラスミド、Ｅｎｖコーディングプラスミド、Ｒｅｖコーディングプラスミド、Ｒｅｐコーディングプラスミド、またはＣａｐコーディングプラスミドから選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
第１核酸および第２核酸は、宿主細胞に同時にまたは個別に導入され、任意に、第１核酸および第２核酸は、同じプラスミド上に位置する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
導入遺伝子発現の阻害は、一過的または持続性である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。