JP2020085881A - 擬似移動層方式クロマト分離方法及び擬似移動層方式クロマト分離システム - Google Patents

Abstract

【課題】原液中の精製対象成分を高効率かつ高純度に分取する擬似移動層方式クロマト分離方法、及びこのクロマト分離方法の実施に好適なクロマト分離システムを提供する。【解決手段】吸着剤Ａｂが充填された複数の単位充填塔１０ａ〜１０ｄが配管１を介して直列かつ無端状に連結された循環系１００を用いて、原液７中に含まれる、吸着剤に対して弱吸着性成分と、強吸着性成分と、両成分の中間的な吸着性の中吸着性成分とを、２種以上の溶離液９ａ〜９ｄを用いて分離する擬似移動層方式クロマト分離方法であって、循環系の配管には、原液供給口と、２種以上の各溶離液に対応する２つ以上の溶離液供給口と、弱吸着性成分を含む弱吸着性画分の抜出口と、中吸着性成分を含む中吸着性画分の抜出口と、強吸着性成分を含む強吸着性画分の抜出口とが設けられ、原液供給口、抜出口、抜出口及び抜出口の位置を特定の関係とする。【選択図】図１

Description

本発明は、擬似移動層方式クロマト分離方法及び擬似移動層方式クロマト分離システムに関する。

擬似移動層方式によるクロマト分離では、原液中に含まれる２成分以上の成分中の特定成分に対して選択的吸着能力を有する吸着剤を充填した複数の単位充填塔（以下、単に「充填塔」とも称し、「カラム」ということもある。）を、配管を介して直列に連結し、かつ、最下流部の充填塔と最上流部の充填塔を連結して無端状とした循環系を構築する。この循環系に対して原液と溶離液を供給するとともに、循環系内の移動速度が速い画分（弱吸着性画分）と、遅い画分（強吸着性画分）と、必要により移動速度が中間的な画分（中吸着性画分）とをそれぞれ異なる位置から抜き出し、次いで、原液供給位置、溶離液供給位置、弱吸着性画分の抜き出し位置、中吸着性画分の抜き出し位置、及び強吸着性画分の抜き出し位置を、一定の位置関係に保ちながら循環系の流体循環方向に向けて移動させる。この操作を繰り返すことにより、原液供給を連続的に行うことができる移動層の処理操作を擬似的に実現する。
特許文献１には、１系列の改良された擬似移動層装置に、溶離液と原液を供給しながら中吸着性画分を抜き出す工程と、溶離液を供給しながら弱吸着性画分と強吸着性画分を抜き出す工程とを繰り返すことにより、吸着剤に対する親和力が異なる３つ以上の画分を連続的に分離する方法が開示されている。

特許文献１記載の技術をはじめ従来の一般的な擬似移動層方式によるクロマト分離では、基本的に１種の溶離液を用いる。したがって、吸着剤に対する吸着性の強い成分を含む原液や、テーリング（濃度分布がブロードになる現象）を生じやすい成分を含む原液を循環系に供給する場合、これらの成分を脱着（脱離）させるために大量の溶離液を用いる必要がある。溶離液の大量使用は、抜出液の濃縮コストの上昇を招き、また、目的の精製物の、吸着剤あたりの生産量の低下にも繋がる。

他方、擬似移動層方式によるクロマト分離において、２種以上の溶離液を用いることも報告されている。例えば特許文献２には、脱着力の弱い第１溶離液と、脱着力の強い第２溶離液を用いて、これらの溶離液や原液の供給のタイミングと、弱吸着性画分、中吸着性画分及び強吸着性画分の抜き出しのタイミングとを特定の組み合わせとすることにより、少ない吸着剤量で高い分離性能を実現したことが記載されている。

特許第１９９８８６０号公報 特許第４６０６０９２号公報

擬似移動層方式のクロマト分離は、目的の精製対象物を連続的に、高純度で得ることが可能であるため、医療分野等への適用も検討されている。例えば抗体医薬の製造において、抗体を産生する培養細胞の抽出液や培養液には、目的の抗体の他、抗体が切断等されて生じた抗体として十分に機能しないフラグメントや、抗体が凝集して巨大化した凝集体が生じる。一般に、上記フラグメントは吸着剤との相互作用部位が少なく当該吸着剤に対する吸着性が弱い。逆に、凝集体は吸着剤への吸着性が強い。したがって、擬似移動層方式のクロマト分離を抗体医薬の精製に適用する場合、目的の抗体を、吸着剤に対して中間的な吸着性を示す中吸着性画分として分取する必要がある。他方、弱吸着性画分と強吸着性画分については、いずれも高い除去率で十分に取り除く必要がある。
また、このようなクロマト分離の実用化においては、必要な吸着剤量をできるだけ減らして分離処理効率を高め、低コスト化を実現することも重要である。
しかし、本発明者らが上記各特許文献に記載の技術をはじめ従来の擬似移動層方式によるクロマト分離を検討したところ、上記の目的を十分に達成することが難しいことが分かってきた。

そこで本発明は、擬似移動層方式を用いたクロマト分離方法であって、原液中の精製対象成分をより少ない吸着剤の使用量で、高純度に分取することを可能とするクロマト分離方法を提供することを課題とする。
また、本発明は、上記クロマト分離方法の実施に好適なクロマト分離システムを提供することを課題とする。

本発明者らは上記課題に鑑み鋭意検討を重ねた結果、擬似移動層方式を用いたクロマト分離方法において、溶離液を２種以上用いて、また循環系における原液供給口、強吸着性画分抜出口、中吸着性画分抜出口、及び弱吸着性画分抜出口を特定の位置関係とすることにより、上記課題の解決が可能となることを見い出した。本発明はこれらの知見に基づきさらに検討を重ね、完成されるに至ったものである。

本発明の上記課題は下記手段により解決された。
〔１〕
吸着剤が充填された複数の単位充填塔が配管を介して直列かつ無端状に連結された循環系を用いて、原液中に含まれる、前記吸着剤に対して弱吸着性成分と、強吸着性成分と、両成分の中間的な吸着性の中吸着性成分とを、２種以上の溶離液を用いて分離することを含む擬似移動層方式クロマト分離方法であって、
前記循環系の前記配管には、原液供給口Ｆと、前記２種以上の各溶離液に対応する２つ以上の溶離液供給口Ｄと、前記弱吸着性成分を含む弱吸着性画分の抜出口Ａと、前記中吸着性成分を含む中吸着性画分の抜出口Ｂと、前記強吸着性成分を含む強吸着性画分の抜出口Ｃとが設けられ、該原液供給口Ｆ、該抜出口Ａ、該抜出口Ｂ及び該抜出口Ｃの位置を下記（ａ）〜（ｃ）とし：
（ａ）前記抜出口Ｂを、前記原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける；
（ｂ）前記抜出口Ｃを、前記原液供給口Ｆを有する配管に設けるか、又は、前記抜出口Ｃを、前記原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで上流側に設ける；
（ｃ）前記抜出口Ａを、前記抜出口Ｂを有する配管に設けるか、又は、前記抜出口Ａを、前記抜出口Ｂの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける；
前記クロマト分離方法は下記ステップ（Ａ）及び（Ｂ）を順に繰り返すことを含む、擬似移動層方式クロマト分離方法：
［ステップ（Ａ）］
前記原液供給口Ｆから原液を、前記２つ以上の溶離液供給口Ｄから２種以上の溶離液を、それぞれ同時に又は別々に供給し、かつ、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を、前記抜出口Ｂから中吸着性画分を、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を、それぞれ同時に又は別々に抜き出すステップ；
［ステップ（Ｂ）］
前記ステップ（Ａ）終了後、前記原液供給口Ｆ、前記溶離液供給口Ｄ、前記抜出口Ａ、前記抜出口Ｂ及び前記抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させるステップ。
〔２〕
前記ステップ（Ａ）が複数のサブステップで構成され、該複数のサブステップは、原液を供給するサブステップと、原液を供給しないサブステップとを含む、〔１〕に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法。
〔３〕
前記抜出口Ｃを、２種以上の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給する溶離液供給口Ｄ１の下流側に設け、前記溶離液供給口Ｄ１から前記抜出口Ｃまでの間には少なくとも１つの単位充填塔を配し、前記ステップ（Ａ）において、前記溶離液ｄ１を供給している間、前記抜出口Ｃから、前記溶離液ｄ１の供給量と同じ量の強吸着性画分を抜き出す、〔１〕又は〔２〕に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法。
〔４〕
前記抜出口Ｂを、２種以上の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給する溶離液供給口Ｄ２の下流側に設け、前記溶離液供給口Ｄ２から前記抜出口Ｂまでの間には少なくとも１つの単位充填塔を配し、前記ステップ（Ａ）において、前記溶離液ｄ２を供給している間に、前記抜出口Ｂから、前記溶離液ｄ２の供給量と同じ量の中吸着性画分を抜き出す時間帯を設ける、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法。
〔５〕
互いに脱着力が異なる４〜６種の溶離液を用いる、〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法。
〔６〕
前記循環系が単位充填塔を４つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した４つのセクション１〜４に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−１）、（Ａ２−１）及び（Ａ３−１）を行う、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
＜サブステップ（Ａ１−１）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ２−１）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ３−１）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
〔７〕
前記循環系が単位充填塔を４つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した４つのセクション１〜４に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−２）、（Ａ２−２）及び（Ａ３−２）を行う、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
＜サブステップ（Ａ１−２）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ２−２）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ３−２）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−２）における前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
〔８〕
前記循環系が単位充填塔を５つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−３）、（Ａ２−３）及び（Ａ３−３）を行う、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
＜サブステップ（Ａ１−３）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力と同じか又はセクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ２−３）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ３−３）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−３）における前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
〔９〕
前記循環系が単位充填塔を７つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−４）、（Ａ２−４）及び（Ａ３−４）を行う、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
＜サブステップ（Ａ１−４）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力と同じか又はセクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ２−４）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ３−４）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−４）における前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｖとして、該溶離液供給口Ｄ−Ｖから溶離液ｄ−Ｖを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
〔１０〕
前記循環系が単位充填塔を５つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−５）、（Ａ２−５）及び（Ａ３−５）を行う、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
＜サブステップ（Ａ１−５）＞
セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ２−５）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ３−５）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
〔１１〕
前記循環系が単位充填塔を５つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−６）、（Ａ２−６）及び（Ａ３−６）を行う、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
＜サブステップ（Ａ１−６）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１、２及び３を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション１、２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ２−６）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ３−６）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
〔１２〕
前記循環系が単位充填塔を５つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−７）、（Ａ２−７）及び（Ａ３−７）を行う、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
＜サブステップ（Ａ１−７）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ２−７）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
＜サブステップ（Ａ３−７）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
〔１３〕
吸着剤が充填された複数の単位充填塔が配管を介して直列かつ無端状に連結された循環系を用いて、原液中に含まれる、前記吸着剤に対して弱吸着性成分と、強吸着性成分と、両成分の中間的な吸着性の中吸着性成分とを、２種以上の溶離液を用いて分離する擬似移動層方式クロマト分離システムであって、
前記循環系の前記配管には、原液供給口Ｆと、前記２種以上の各溶離液に対応する２つ以上の溶離液供給口Ｄと、前記弱吸着性成分を含む弱吸着性画分の抜出口Ａと、前記中吸着性成分を含む中吸着性画分の抜出口Ｂと、前記強吸着性成分を含む強吸着性画分の抜出口Ｃとが設けられ、該原液供給口Ｆ、該抜出口Ａ、該抜出口Ｂ及び該抜出口Ｃの位置を下記（ａ）〜（ｃ）とし：
（ａ）前記抜出口Ｂを、前記原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける；
（ｂ）前記抜出口Ｃを、前記原液供給口Ｆを有する配管に設けるか、又は、前記抜出口Ｃを、前記原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで上流側に設ける；
（ｃ）前記抜出口Ａを、前記抜出口Ｂを有する配管に設けるか、又は、前記抜出口Ａを、前記抜出口Ｂの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける；
前記クロマト分離システムは下記ステップ（Ａ）及び（Ｂ）を順に繰り返す手段を有する、擬似移動層方式クロマト分離システム：
［ステップ（Ａ）］
前記原液供給口Ｆから原液を、前記２つ以上の溶離液供給口Ｄから２種以上の溶離液を、それぞれ同時に又は別々に供給し、かつ、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を、前記抜出口Ｂから中吸着性画分を、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を、それぞれ同時に又は別々に抜き出すステップ；
［ステップ（Ｂ）］
前記ステップ（Ａ）終了後、前記原液供給口Ｆ、前記溶離液供給口Ｄ、前記抜出口Ａ、前記抜出口Ｂ及び前記抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させるステップ。

本明細書において、「上流」、「下流」との用語は、循環系内の流体の流通方向に対して用いられる。すなわち、循環系のある部位に対して「上流側」とは、当該部位に向けて流体が流通してくる側を意味し、「下流側」とは、当該部位から流体が流れ出ていく側を意味する。
本明細書において、「強吸着性成分」とは、原液中に含まれる複数成分のうち、吸着剤に対する吸着力が強い成分を意味し、「弱吸着性成分」とは、原液中に含まれる複数成分のうち、吸着剤に対する吸着力が弱い成分を意味し、「中吸着性成分」とは、上記強吸着性成分よりも吸着剤に対する吸着性が弱いが、上記弱吸着性成分よりは吸着剤に対する吸着性が強い成分を意味する。つまり「強吸着性」、「中吸着性」及び「弱吸着性」との用語は、原液中に含まれる各成分の吸着剤に対する吸着力を比較した際の、相対的な吸着力の強さを示すものである。
上記の「強吸着性成分」、「中吸着性成分」及び「弱吸着性成分」は、それぞれ、単一成分からなってもよく、複数の成分からなってもよい。また、当該複数の成分は吸着力が同じでも異なってもよい。
原液中の各成分の、「強吸着性成分」、「中吸着性成分」及び「弱吸着性成分」へのグループ分けは、目的に応じて適宜に設定することができる。原液が４種の成分を含む場合を例にとると、吸着剤に対する吸着力が強い順に２種の成分を合わせて強吸着性成分とし、吸着剤に対する吸着力が３番目に強い成分を中吸着性成分、吸着剤に対する吸着力が最も弱い成分を弱吸着性成分として位置付けることができる。また、吸着剤に対する吸着力が最も強い成分を強吸着性成分、吸着剤に対する吸着力が２番目の成分と３番目の成分を合わせて中吸着性成分、吸着剤に対する吸着力が最も弱い成分を弱吸着性成分として位置付けることもできる。また、吸着剤に対する吸着力が最も強い成分を強吸着性成分、吸着剤に対する吸着力が２番目の成分を中吸着性成分、吸着剤に対する吸着力が３番目の成分と最も弱い成分を合わせて弱吸着性成分として位置付けることもできる。原液が５種以上の成分を含む場合にも、同様に、種々のグループ分けに基づく分離、精製をすることができる。
本発明において、溶離液の「脱着力」とは、吸着剤に吸着した成分を、当該吸着剤から脱離させる作用の強さを意味する。

本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法によれば、吸着剤の使用量を抑えながら、原液中の精製対象成分を高純度に分取することができる。また、本発明の擬似移動層方式クロマト分離システムは、本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法の実施に好適に用いることができる。

図１は、本発明の擬似移動層方式クロマト分離システムの一例を示す系統図である。 図２は、本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法の一実施形態において、ステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図３は、図２に示すステップ（Ａ）を終了後、ステップ（Ｂ）を実施し、その後のステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図４は、本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法の別の実施形態において、ステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図５は、図４に示すステップ（Ａ）を終了後、ステップ（Ｂ）を実施し、その後のステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図６は、本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法のさらに別の実施形態において、ステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図７は、図６に示すステップ（Ａ）を終了後、ステップ（Ｂ）を実施し、その後のステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図８は、本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法のさらに別の実施形態において、ステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図９は、図８に示すステップ（Ａ）を終了後、ステップ（Ｂ）を実施し、その後のステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図１０は、比較例１及び２における単カラム・ステップグラジエントの運転工程を示すフロー図である。 図１１は、比較例３における擬似移動相方式クロマト分離の運転工程を示すフロー図である。 図１２は、比較例４における擬似移動相方式クロマト分離の運転工程を示すフロー図である。 図１３は、本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法のさらに別の実施形態において、ステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図１４は、図１３に示すステップ（Ａ）を終了後、ステップ（Ｂ）を実施し、その後のステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図１５は、本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法のさらに別の実施形態において、ステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図１６は、図１５に示すステップ（Ａ）を終了後、ステップ（Ｂ）を実施し、その後のステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図１７は、本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法のさらに別の実施形態において、ステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。 図１８は、図１７に示すステップ（Ａ）を終了後、ステップ（Ｂ）を実施し、その後のステップ（Ａ）を構成する各サブステップのフロー図である。

本発明の擬似移動層方式クロマト分離方法（以下、単に「本発明の方法」ともいう。）の好ましい実施形態について説明する。

本発明の方法は、吸着剤が充填された複数の単位充填塔を、配管を介して直列かつ無端状に連結した循環系を用いて実施される。擬似移動層方式に用いられる循環系自体は公知であり、例えば、特開２００９−３６５３６号公報や特許第４６０６０９２号公報等を参照することができる。
当該循環系について図面を用いて以下に説明するが、本発明は、本発明で規定すること以外はこれらの態様に限定されるものではない。
なお、以下で言及する図面は本発明の理解を容易にするための説明図であり、各構成のサイズや相対的な大小関係は説明の便宜上大小を変えている場合があり、実際の関係をそのまま示すものではない。また、本発明で規定する事項以外はこれらの図面に示された形状、相対的な位置関係等に限定されるものでもない。
また、本発明で規定すること以外の条件、例えば、単位充填塔の容量、配管の管内断面積や長さ、循環系に供給する液の流速等は、目的に応じて適宜に設定することができる。

本発明の方法に用いる循環系の好ましい一実施形態を図１に示す。図１に示される循環系１００は、吸着剤Ａｂが充填された単位充填塔（カラム）を４本（単位充填塔１０ａ、１０ｂ、１０ｃ、１０ｄ）備え、各単位充填塔の出口は、隣接する単位充填塔の入口へと配管１を介して連結され、全体として各単位充填塔が直列に連結されている。
そして、最後部の単位充填塔（例えば単位充填塔１０ｄ）の出口は、最前部の単位充填塔（例えば単位充填塔１０ａ）の入口へと配管１を介して連結され、全単位充填塔は無端状に（円環状に）連結されている。かかる構成により、循環系１００内に、流体を循環させることが可能となる。単位充填塔１０ａ〜１０ｄは、内部の形、サイズ、吸着剤の充填量が互いに同一でも異なっていてもよい。単位充填塔１０ａ〜１０ｄは、内部の形、サイズ、吸着剤の充填量がいずれも等価なもの（好ましくは同じもの）を用いることが好ましい。

上記循環系１００内には、流体を矢印方向に流通させるための循環ポンプＰ１を配設することができる。循環ポンプＰ１は定量ポンプであることが好ましい。また、循環系１００内において、互いに隣接する２つの単位充填塔の間の配管１には、その下流側の単位充填塔への流体の流通を遮断可能な遮断弁Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が設けられている。

各遮断弁Ｒ１〜Ｒ４と、その上流側に位置する各単位充填塔１０ａ〜１０ｄの出口との間には、それぞれ、吸着剤Ａｂに対する弱吸着性成分を多く含む画分（本明細書において「吸着剤Ａｂに対する弱吸着性画分」又は単に「弱吸着性画分」という。）を抜き出す弱吸着性画分抜出ライン２ａ、２ｂ、２ｃ、２ｄが分岐配設されている。各弱吸着性画分抜出ライン２ａ、２ｂ、２ｃ、２ｄには、それぞれ、各弱吸着性画分抜出ラインを開閉可能な弱吸着性画分抜出弁Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４が設けられている。各弱吸着性画分抜出ライン２ａ、２ｂ、２ｃ、２ｄは、合流されて一つの弱吸着性画分合流管２Ｊにまとめられる。

また同様に、各遮断弁Ｒ１〜Ｒ４と、その上流側に位置する各単位充填塔１０ａ〜１０ｄの出口との間には、吸着剤Ａｂに対する中吸着性成分を多く含む画分（本明細書において「吸着剤Ａｂに対する中吸着性画分」又は単に「中吸着性画分」という。）を抜き出す中吸着性画分抜出ライン３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄが分岐配設されている。各中吸着性画分抜出ライン３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄには、それぞれ、各中吸着性画分抜出ラインを開閉可能な中吸着性画分抜出弁Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４が設けられている。各中吸着性画分抜出ライン３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄは、合流されて一つの中吸着性画分合流管３Ｊにまとめられる。

また同様に、各遮断弁Ｒ１〜Ｒ４と、その上流側に位置する各単位充填塔１０ａ〜１０ｄの出口との間には、吸着剤Ａｂに対する強吸着性成分を多く含む画分（本明細書において「吸着剤Ａｂに対する強吸着性画分」又は単に「強吸着性画分」という。）を抜き出す強吸着性画分抜出ライン４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄが分岐配設されている。各強吸着性画分抜出ライン４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄには、それぞれ、各強吸着性画分抜出ラインを開閉可能な強吸着性画分抜出弁Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４が設けられている。各強吸着性画分抜出ライン４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄは、合流されて一つの強吸着性画分合流管４Ｊにまとめられる。

後述するステップ（Ａ）の中で、弱吸着性画分抜出弁Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４のいずれかが開弁された状態となる。当該開弁された弱吸着性画分抜出弁が設置された弱吸着性画分抜出ラインと、配管１との連結部位が、後述するステップ（Ａ）における弱吸着性画分の抜出口Ａとなる。
また、後述するステップ（Ａ）の中で、中吸着性画分抜出弁Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４のいずれかが開弁された状態となる。当該開弁された中吸着性画分抜出弁が設置された中吸着性画分抜出ラインと、配管１との連結部位が、後述するステップ（Ａ）における中吸着性画分の抜出口Ｂとなる。
また、後述するステップ（Ａ）の中で、強吸着性画分抜出弁Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４のいずれかが開弁された状態となる。当該開弁された強吸着性画分抜出弁が設置された強吸着性画分抜出ラインと、配管１との連結部位が、後述するステップ（Ａ）における強吸着性画分の抜出口Ｃとなる。

循環系１００には、循環系１００の圧力が上昇し過ぎるのを防ぐために、適当な部位に図示していない安全弁（又はリリーフ弁）を設けることができる。また、隣接する２つの単位充填塔の間には、逆流防止用の逆止弁Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４を設けることが好ましい。

循環系１００内は、図１に示されるように、原液タンク６に収容された原液７が供給可能な構成となっている。また、循環系１００内は、２種以上の溶離液が供給可能な構成となっている。図１では、一例として、４種の溶離液を供給する形態を示した。
原液７は、供給流量を制御可能な原液供給ポンプＰ２により、原液供給ライン１１を介して供給される。原液供給ポンプＰ２は定量ポンプであることが好ましい。原液供給ライン１１は、図１に示すように４本の原液供給分岐ライン１１ａ、１１ｂ、１１ｃ、１１ｄに分岐され、各原液供給分岐ライン１１ａ、１１ｂ、１１ｃ、１１ｄを介して、原液を、それぞれ各単位充填塔１０ａ、１０ｂ、１０ｃ、１０ｄの入り口へと供給可能な構成となっている。各原液供給分岐ライン１１ａ、１１ｂ、１１ｃ、１１ｄには、開閉可能な原液供給弁Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４が設けられ、開弁された原液供給弁を有する原液供給分岐ラインを通って、その下流に連結する単位充填塔へと原液が供給される。
後述するステップ（Ａ）の中で、上記原液供給弁Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４のいずれかが開弁された状態となる。当該開弁された原液供給弁が設置された原液供給分岐ラインと、配管１との連結部位が、後述するステップ（Ａ）における原液供給口Ｆとなる。

図１は、脱着力の異なる４種の溶離液を供給する形態を示す。溶離液タンク８ａに収容された溶離液９ａは、供給流量を制御可能な溶離液供給ポンプＰ３により溶離液供給ライン１２へと供給される。溶離液タンク８ｂに収容された溶離液９ｂは、供給流量を制御可能な溶離液供給ポンプＰ４により溶離液供給ライン１３へと供給される。溶離液タンク８ｃに収容された溶離液９ｃは、供給流量を制御可能な溶離液供給ポンプＰ５により溶離液供給ライン１４へと供給される。さらに、溶離液タンク８ｄに収容された溶離液９ｄは、供給流量を制御可能な溶離液供給ポンプＰ６により溶離液供給ライン１５へと供給される。
溶離液供給ポンプＰ３〜Ｐ６は定量ポンプであることが好ましい。溶離液供給ライン１２は、図１に示すように４本の溶離液供給分岐ライン１２ａ、１２ｂ、１２ｃ、１２ｄに分岐され、各溶離液供給分岐ライン１２ａ、１２ｂ、１２ｃ、１２ｄを介して、溶離液を、各単位充填塔１０ａ、１０ｂ、１０ｃ、１０ｄの入り口へと供給可能な構成となっている。各溶離液供給分岐ライン１２ａ、１２ｂ、１２ｃ、１２ｄには、開閉可能な溶離液供給弁Ｅ１ａ、Ｅ２ａ、Ｅ３ａ、Ｅ４ａが設けられ、開弁された溶離液供給弁を有する溶離液供給分岐ラインを通って、その下流に連結する単位充填塔へと溶離液が供給される。
同様に、溶離液供給ライン１３は４本の溶離液供給分岐ライン１３ａ、１３ｂ、１３ｃ、１３ｄに分岐され、溶離液供給ライン１４は４本の溶離液供給分岐ライン１４ａ、１４ｂ、１４ｃ、１４ｄに分岐され、溶離液供給ライン１５は４本の溶離液供給分岐ライン１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄに分岐され、各溶離液を、各単位充填塔１０ａ、１０ｂ、１０ｃ、１０ｄの入り口へと供給可能な構成となっている。
溶離液供給分岐ライン１３ａ、１３ｂ、１３ｃ、１３ｄには、それぞれ、開閉可能な溶離液供給弁Ｅ１ｂ、Ｅ２ｂ、Ｅ３ｂ、Ｅ４ｂが設けられ、溶離液供給分岐ライン１４ａ、１４ｂ、１４ｃ、１４ｄには、それぞれ、開閉可能な溶離液供給弁Ｅ１ｃ、Ｅ２ｃ、Ｅ３ｃ、Ｅ４ｃが設けられ、溶離液供給分岐ライン１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄには、それぞれ、開閉可能な溶離液供給弁Ｅ１ｄ、Ｅ２ｄ、Ｅ３ｄ、Ｅ４ｄが設けられている。
後述するステップ（Ａ）の中で、開弁された溶離液供給弁が設置された溶離液供給分岐ラインと、配管１との連結部位が、溶離液供給口Ｄとなる。本発明の方法では、溶離液を２種以上用いるため、後述するステップ（Ａ）の中で、開弁される溶離液供給弁は複数ある。したがって、後述するステップ（Ａ）の中で、溶離液供給口Ｄは、使用する溶離液の種類に応じた数（２つ以上）存在することになる。

続いて、上記循環系により本発明の方法を実施する際の、循環系の作動について説明するが、本発明は、本発明で規定すること以外は、これらの実施態様に限定されるものではない。
本発明の方法において、循環系は、原液供給口Ｆと、弱吸着性画分の抜出口Ａと、中吸着性画分の抜出口Ｂと、強吸着性画分の抜出口Ｃの位置を、下記（ａ）〜（ｃ）を満たす関係とする。すなわち、後述するステップ（Ａ）及び（Ｂ）の繰り返しにおいて、原液供給口Ｆと、弱吸着性画分の抜出口Ａと、中吸着性画分の抜出口Ｂと、強吸着性画分の抜出口Ｃとの、互いの相対的な位置関係が、当該（ａ）〜（ｃ）を常に満たしている。

（ａ）中吸着性画分抜出口Ｂを、原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける。

（ｂ）強吸着性画分抜出口Ｃを、原液供給口Ｆを有する配管に設けるか、又は、強吸着性画分抜出口Ｃを、原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで上流側に設ける。
ここで、「強吸着性画分抜出口Ｃを、原液供給口Ｆを有する配管に設ける」とは、強吸着性画分抜出口Ｃと、原液供給口Ｆとの間に、単位充填塔が配されていないことを意味する。
また、「強吸着性画分抜出口Ｃを、原液供給口Ｆを有する配管に設ける」場合、強吸着性画分抜出口Ｃの方が、原液供給口Ｆよりも、同じ配管の上流側に設ける。このことは、同じ配管に設けられた抜出口と供給口との関係のすべてに当てはまる。つまり、循環系において、ある抜出口と供給口が同じ配管に設けられている場合（単位充填塔を挟まずに抜出口と供給口が設けられている場合）、抜出口の方を、供給口よりも、同じ配管の上流側に配置する。これは、供給した液がその下流の単位充填塔に届く前に、当該液が抜出口から抜き出されてしまうことを防ぐためである。
上記（ｂ）は、強吸着性画分抜出口Ｃを、原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで上流側に設ける形態であることが好ましい。

（ｃ）弱吸着性画分抜出口Ａを、中吸着性画分抜出口Ｂを有する配管に設けるか、又は、弱吸着性画分抜出口Ａを、中吸着性画分抜出口Ｂの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける。
ここで、「弱吸着性画分抜出口Ａを、中吸着性画分抜出口Ｂを有する配管に設ける」とは、弱吸着性画分抜出口Ａと、中吸着性画分抜出口Ｂとの間に、単位充填塔が配されていないことを意味する。
上記（ｃ）は、弱吸着性画分抜出口Ａを、中吸着性画分抜出口Ｂの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける形態であることが好ましい。

本発明の方法では、上記循環系を用いて、下記ステップ（Ａ）及び（Ｂ）を順に繰り返す。

［ステップ（Ａ）］
原液供給口Ｆから原液を、２つ以上の溶離液供給口Ｄから２種以上の溶離液を、それぞれ同時に又は別々に供給し、かつ、弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を、中吸着性画分抜出口Ｂから中吸着性画分を、強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を、それぞれ同時に又は別々に抜き出すステップ。
ここで、ステップ（Ａ）において、原液供給口Ｆから供給される原液の量と、溶離液供給口Ｄから供給される溶離液の量との合計と、弱吸着性画分抜出口Ａから抜き出される弱吸着性画分の量と、中吸着性画分抜出口Ｂから抜き出される中吸着性画分の量と、強吸着性画分抜出口Ｃから抜き出される強吸着性画分Ｃの量との合計とは、一致する。すなわち、循環系内に液が供給されている状態においては、それと同じ量だけ、循環系内から液が抜き出される。
より詳細に説明すると、ある供給口（Ｘ）から液が供給され、その下流側のある抜出口（Ｙ）から液が抜き出される場合において、Ｘよりも下流側でＹよりも上流側から液が供給されていない場合、Ｙから抜き出される液の量は、Ｘから供給される液の量と同じである。また、Ｘよりも下流側でＹよりも上流側から液が供給されている場合には、Ｙから抜き出される液の量は、Ｘから供給される液の量と、Ｘよりも下流側でとＹよりも上流側から供給されている液の量との合計と同じである。例えば図２のサブステップ（Ａ１−１）において、溶離液供給口Ｄ１から供給する溶離液の供給量と、強吸着性画分抜出口Ｃから抜き出す強吸着性画分の抜出量は同じである。また、同じくサブステップ（Ａ１−１）において、溶離液供給口Ｄ２から供給する溶離液の供給量と原液供給口Ｆから供給する原液の供給量との合計は、弱吸着性画分抜出口Ａから抜き出す弱吸着性画分の量と同じである。
また、上記の「同時に又は別々に供給」するとは、時間的な差を設けず（供給するタイミングをずらさず）に供給するか、又は、時間的な差を設けて（供給するタイミングをずらして）供給することを意味する。ただし、一のステップ（Ａ）内において、同じ配管に２種以上の液を供給する２つ以上の供給口が配される場合（配管に２つ以上の供給口が単位充填塔を挟まずに配され、当該２つ以上の各供給口から異なる液を供給する場合）には、当該２種以上の液の供給は同時には行わない。すなわち、一のステップ（Ａ）の中で、当該２種以上の液の供給を異なるサブステップとして行う。同様に、一のステップ（Ａ）内において、同じ配管に２種以上の画分を抜き出す２つ以上の抜出口が配される場合（配管に２つ以上の抜出口が単位充填塔を挟まずに配され、当該２つ以上の各抜出口から異なる画分を抜き出す場合）には、当該２種以上の画分の抜き出しは同時には行わない。すなわち、一のステップ（Ａ）の中で、当該２種以上の画分の抜き出しを異なるサブステップとして行う。

［ステップ（Ｂ）］
前記ステップ（Ａ）終了後、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させるステップ。
この下流側への移行は、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま、単位充填塔１個分だけ下流側へと移行させることを意味する。
例えば、ステップ（Ａ）において、原液供給弁Ｆ１が設置された原液供給分岐ラインと配管１との連結部位が原液供給口Ｆであった場合、ステップ（Ｂ）により、この原液供給口Ｆは、原液供給弁Ｆ２が設置された原液供給分岐ラインと配管１との連結部位へと移行することになる。このことは、前記溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃについても同様である。また、上記の各供給口及び抜出口の、単位充填塔１個分の下流側への移行は、循環系に配した各種ポンプや各種弁の開閉を調節することにより行うことができる。
ステップ（Ｂ）の実施により、続くステップ（Ａ）（ステップ（Ａ２）と称す。）において、当該ステップ（Ｂ）の直前のステップ（Ａ）（ステップ（Ａ１）と称す。）において各単位充填塔に対して行ったのと同じように、液の供給及び抜き出しを、ステップ（Ａ１）よりも一つ分だけ下流側の各単位充填塔に対して行うことになる。

上記ステップ（Ａ）は、複数のサブステップで構成されていることが好ましい。この場合において、原液供給口Ｆからの原液の供給、２つ以上の溶離液供給口Ｄからの２種以上の各溶離液の供給、弱吸着性画分抜出口Ａからの弱吸着性画分の抜き出し、中吸着性画分抜出口Ｂからの中吸着性画分の抜き出し、強吸着性画分抜出口Ｃからの強吸着性画分の抜き出しを、どのサブステップにおいて行うかは、本発明の効果を損なわない範囲で、目的に応じて適宜に設定することができる。
なかでも本発明の方法では、上記ステップ（Ａ）は、原液を供給するサブステップと、原液を供給しないサブステップとを含むことが好ましい。すなわち、ステップ（Ａ）の中に、原液を供給する時間と、原液を供給しない時間があることが好ましい。

ステップ（Ａ）において、２種以上の溶離液が供給される。これら２種以上の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液の供給口を、強吸着性画分抜出口Ｃに対し、単位充填塔を挟んで上流側の配管に設けることが好ましい。残りの溶離液の供給口ないし原液供給口については、脱着力が最も強い溶離液の供給口と同じ配管に設けるか、又は、脱着力が最も強い溶離液の供給口よりも、単位充填塔を挟んでさらに上流側に設けることが好ましい。「脱着力が最も強い溶離液の供給口と同じ配管に設けるか、又は、脱着力が最も強い溶離液の供給口よりも、単位充填塔を挟んでさらに上流側に設ける」とは、最も強い溶離液の供給口が設けられた配管を始点として上流側へ進み、強吸着性画分抜出口Ｃが設けられた配管に到達するまでの間のいずれかの配管に、最も強い溶離液以外の溶離液の供給口ないし原液供給口を設けることを意味する（換言すれば、強吸着性画分抜出口Ｃが設けられた配管を始点として下流側へ進み、最も強い溶離液の供給口が設けられた配管に到達するまでの間のいずれかの配管に、最も強い溶離液以外の溶離液の供給口ないし原液供給口を設けることを意味する。さらに別の言い方をすれば、最も強い溶離液の供給口と強吸着性画分抜出口Ｃとの間に単位充填塔が２つ以上設けられている場合において、当該２つ以上の単位充填塔同士を繋ぐ配管には、溶離液の供給口ないし原液供給口を設けないことを意味する）。この場合において、最も強い溶離液以外の溶離液が２種以上ある場合には、これらに対応する２つ以上の供給口は、それらの一部が同じ配管に設けられていてもよいし、それぞれが単位充填塔を挟んだ別々の配管に設けられていてもよい。また、最も強い溶離液以外の溶離液の供給口と原液供給口とが、同じ配管に設けられていてもよい。
なお、脱着力が最も強い溶離液以外の溶離液の供給口のうち１つの供給口を、脱着力が最も強い溶離液の供給口と同じ配管に設けることは、本発明の好ましい一実施形態である。

ステップ（Ａ）において、２種以上の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液を供給している間は、その下流から、脱着力が最も強い溶離液の供給量と同じ量の強吸着性画分を抜き出す形態とすることが好ましい。この場合、脱着力が最も強い溶離液の供給口からその下流の強吸着性画分抜出口までの間には、少なくとも１つの単位充填塔が配され、また、当該間には他の供給口は存在しない形態とすることが好ましい。

ステップ（Ａ）において、２種以上の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液を供給しながら、その下流から、脱着力が２番目に強い溶離液の供給量と同じ量の中吸着性画分を抜き出す時間帯（サブステップ）を設けることが好ましい。この場合、脱着力が２番目に強い溶離液の供給口からその下流の中吸着性画分抜出口までの間には、少なくとも１つの単位充填塔（好ましくは複数の単位充填塔）が配される。また、脱着力が２番目に強い溶離液の供給口が設けられた配管からその下流側の中吸着性画分抜出口が設けられた配管までの間に他の供給口が存在していたとしても、上記の中吸着性画分を抜き出す時間帯には当該他の供給口からは液を供給しない。

ステップ（Ａ）を実施している間は、常に弱吸着性画分を抜き出していることが好ましい。したがって、ステップ（Ａ）を複数のサブステップで構成する場合にも、当該複数のサブステップにおいて、弱吸着性画分は常に抜き出されていることが好ましい。

本発明に方法には、互いに脱着力が異なる３種以上の溶離液を用いることが好ましく、互いに脱着力が異なる４種以上の溶離液を用いることがより好ましく、互いに脱着力が異なる４〜６種の溶離液を用いることがさらに好ましく、互いに脱着力が異なる４種又は５種の溶離液を用いることが特に好ましい。
溶離液の種類は特に制限されず、吸着剤の種類や原液中の成分の種類との関係により適宜に設定される。例えば、吸着剤としてイオン交換樹脂を用いる場合、溶離液の塩濃度を変えることにより、脱着力が異なる複数の溶離液を調製することができる。例えば、陽イオン交換樹脂を用いる場合には、ＮａＣｌ濃度を変えた複数の溶離液を、２種以上の溶離液として用いることができる。

上記ステップ（Ａ）におけるサブステップの組み合わせの好ましい実施形態について、以下に説明する。これらの形態の実施は、図１のシステムを用いたり、図１のシステムに準じる、目的の形態を実施可能なシステムを用いたりして行うことができる。また、下記の実施形態は本発明の一例であり、例えば、相対的な脱着力の観点から、下記の溶離液ｄ−１として位置付けられる２種以上の溶離液を用意し、溶離液ｄ−１を供給するサブステップ間において、使用する溶離液ｄ−１の種類を変えることもできる。このことは、溶離液ｄ−II〜ｄ−Ｖについても同様である。
すなわち本発明では、ある実施形態において「溶離液ｄ−１」という場合、この実施形態において、異なるサブステップで「溶離液ｄ−１」を使用する場合には、異なるサブステップで使用する「溶離液ｄ−１」は互いに同じでもよいし、異なってもよい。このことは、溶離液ｄ−II〜ｄ−Ｖについても同様である。

−実施形態１−
実施形態１では、単位充填塔を４つ以上有する循環系を用いる。そして、この循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した４つのセクション１〜４に区切ったものを想定する。また、溶離液として、脱着力の異なる４種の溶離液ｄ−Ｉ〜ｄ−IVを用いる。
この実施形態１においては、ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−１）、（Ａ２−１）及び（Ａ３−１）を行う。
本発明において、「ステップ（Ａ）においてサブステップＸ、Ｙ及びＺを行う」とは、ステップ（Ａ）が、サブステップＸ、Ｙ及びＺを含んでいることを意味し、サブステップＸ，Ｙ及びＺを行う順序は、本発明の効果を損なわない範囲で適宜に設定することができる。また、ステップ（Ａ）は、サブステップＸ、Ｙ及びＺ以外の、他のサブステップを含んでもよい。
「ステップ（Ａ）においてサブステップＸ、Ｙ及びＺを行う」形態として、典型的には、ステップ（Ａ）としてサブステップＸ、Ｙ及びＺを順に行う形態が挙げられるが、本発明はこの形態に限定されない。すなわち、「ステップ（Ａ）においてサブステップＸ、Ｙ及びＺを行う」とは、サブステップＸの直後にサブステップＹを行い、サブステップＹの直後にサブステップＺを行い、サブステップＺの直後にステップ（Ｂ）を行い、ステップ（Ｂ）の直後にサブステップＸを行う形態に限られない。例えば、上記の他のサブステップを含む形態では、サブステップＸの前（ステップ（Ｂ）とサブステップＸとの間）、サブステップＸとＹとの間、サブステップＹとＺとの間、サブステップＺとステップ（Ｂ）との間の少なくとも１つにおいて、本発明の効果を損なわない範囲で、他のサブステップ（サブステップＸ、Ｙ及びＺ以外のサブステップ）を組み込むことができる。供給流量、流速、溶離液強さ等の調整により、サブステップＸ，Ｙ及びＺ以外の付加的なサブステップを込み込んでも目的の効果が得られる場合があり、このことは本明細書に接した当業者であれば容易に理解することである。

＜サブステップ（Ａ１−１）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
サブステップ（Ａ１−１）では、上記の各液の供給と、各画分の抜き出しが、連続的に行われる（すなわち、サブステップ（Ａ１−１）では常に、上記の各液の供給と、各画分の抜き出しのすべてが絶え間なく行われている。）。このことは、以降に説明する各サブステップにおいても同様である。
また、本発明ないし本明細書において、各サブステップで説明する溶離液の脱着力の強弱の説明は、当該サブステップ内における溶離液の脱着力の強弱であり、異なるサブステップにおける溶離液の脱着力の強弱を説明するものではない。例えば、ステップ（Ａ）を構成する一のサブステップにおいてセクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くすることが説明され、当該ステップ（Ａ）を構成する別のサブステップにおいてもセクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くすることが説明されている場合、当該一のサブステップにおいてセクション１を流通する溶離液の脱着力と、当該別のサブステップにおいてセクション１を流通する溶離液の脱着力とは、同じでもよいし、異なっていてもよい。

＜サブステップ（Ａ２−１）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
このサブステップ（Ａ２−１）における溶離液供給口Ｄ−IIIは、上記サブステップ（Ａ１−１）における原液供給口Ｆと同じ配管に設けられている。

＜サブステップ（Ａ３−１）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

上記サブステップ（Ａ２−１）において、セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力は、上記サブステップ（Ａ３−１）において、セクション４を流通する溶離液の脱着力と同じであることも好ましい。

上記サブステップ（Ａ１−１）の一例として、下記サブステップ（Ａ１−１ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ１−１）はサブステップ（Ａ１−１ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ１−１ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ１として、該溶離液供給口Ｄ１から４種の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給し、
セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして、該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から４種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして、該原液供給口Ｆから原液を供給し、
セクション４の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして、該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ２−１）の一例として、下記サブステップ（Ａ２−１ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ２−１）はサブステップ（Ａ２−１ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ２−１ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から前記溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の上流側末端を溶離液供給口Ｄ３として、該溶離液供給口Ｄ３から４種の溶離液のうち脱着力が最も弱い溶離液ｄ３を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。
このサブステップ（Ａ２−１ｅｘ）における溶離液供給口Ｄ３は、上記サブステップ（Ａ１−１）における原液供給口Ｆと同じ配管に設けられている。

上記サブステップ（Ａ３−１）の一例として、下記サブステップ（Ａ３−１ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ３−１）はサブステップ（Ａ３−１ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ３−１ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして、該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ４として、該溶離液供給口Ｄ４から４種の溶離液のうち脱着力が３番目に強い溶離液ｄ４を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

各セクションが単位充填塔を一つ有する場合を例にとり、上記ステップ（Ａ）が上記サブステップ（Ａ１−１ｅｘ）、（Ａ２−１ｅｘ）及び（Ａ３−１ｅｘ）を順に行う場合のフロー図を図２に示す。図２中、四角の囲いは単位充填塔１つ分を示し、当該囲いの中の数字は単位充填塔の番号（左から順に付番した）を示す。
上記サブステップ（Ａ１−１ｅｘ）、（Ａ２−１ｅｘ）及び（Ａ３−１ｅｘ）を順に行うステップ（Ａ）が終了後、ステップ（Ｂ）により、原液供給口Ｆ、前記溶離液供給口Ｄ、前記弱吸着性画分抜出口Ａ、前記中吸着性画分抜出口Ｂ及び前記強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させ、次いで上記サブステップ（Ａ１−１ｅｘ）、（Ａ２−１ｅｘ）及び（Ａ３−１ｅｘ）を順に行った場合のフロー図を図３に示す。図２に示す、各セクションに配される単位充填塔が、図３では１つずつ下流側のものへとシフトする。この場合、図２に示すステップ（Ａ）からスタートし、次いでステップ（Ｂ）を行うことを１セットとし、これを４セット行うことにより、再び図２に示す形態に戻ることになる。

−実施形態２−
実施形態２も実施形態１と同様に、単位充填塔を４つ以上有する循環系を用いる。そして、この循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した４つのセクション１〜４に区切ったものを想定する。また、溶離液として、脱着力の異なる４種の溶離液ｄ−Ｉ〜ｄ−IVを用いる。
この実施形態２においては、ステップ（Ａ）として下記サブステップ（Ａ１−２）、（Ａ２−２）及び（Ａ３−２）を順に行う。

＜サブステップ（Ａ１−２）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

＜サブステップ（Ａ２−２）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
このサブステップ（Ａ２−２）における溶離液供給口Ｄ−Ｉは、上記サブステップ（Ａ１−２）における溶離液供給口Ｄ−IIと同じ配管に設けられている。また、溶離液供給口Ｄ−IIIは、原液供給口Ｆと同じ配管に設けられている。
このサブステップ（Ａ２−２）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力は、上記サブステップ（Ａ１−２）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力よりも強いことが好ましい。

＜サブステップ（Ａ３−２）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−２）における前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

上記サブステップ（Ａ１−２）の一例として、下記サブステップ（Ａ１−２ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ１−２）はサブステップ（Ａ１−２ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ１−２ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から４種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして、該原液供給口Ｆから原液を供給し、
セクション４の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして、該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ２−２）の一例として、下記サブステップ（Ａ２−２ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ２−２）はサブステップ（Ａ２−２ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ２−２ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ１として、該溶離液供給口Ｄ１から４種の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給し、
セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして、該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から４種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の上流側末端を溶離液供給口Ｄ３として、該溶離液供給口Ｄ３から４種の溶離液のうち脱着力が最も弱い溶離液ｄ３を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。
このサブステップ（Ａ２−２ｅｘ）における溶離液供給口Ｄ１は、上記サブステップ（Ａ１−２ｅｘ）における溶離液供給口Ｄ２と同じ配管に設けられている。また、溶離液供給口Ｄ３は、上記サブステップ（Ａ１−２ｅｘ）における原液供給口Ｆと同じ配管に設けられている。

上記サブステップ（Ａ３−２）の一例として、下記サブステップ（Ａ３−２ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ３−２）はサブステップ（Ａ３−２ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ３−２ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から前記溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
サブステップ（Ａ２−２ｅｘ）における前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして、該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ４として、該溶離液供給口Ｄ４から４種の溶離液のうち脱着力が３番目に強い溶離液ｄ４を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

各セクションが単位充填塔を一つ有する場合を例にとり、上記ステップ（Ａ）が上記サブステップ（Ａ１−２ｅｘ）、（Ａ２−２ｅｘ）及び（Ａ３−２ｅｘ）を順に行う場合のフロー図を図４に示す。図４中、四角の囲いは単位充填塔１つ分を示し、当該囲いの中の数字は単位充填塔の番号を示す。
上記サブステップ（Ａ１−２ｅｘ）、（Ａ２−２ｅｘ）及び（Ａ３−２ｅｘ）を順に行うステップ（Ａ）が終了後、ステップ（Ｂ）により、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させ、次いで上記サブステップ（Ａ１−２ｅｘ）、（Ａ２−２ｅｘ）及び（Ａ３−２ｅｘ）を順に行った場合のフロー図を図５に示す。図４に示す、各セクションに配される単位充填塔が、図５では１つずつ下流側のものへとシフトする。この場合、図４に示すステップ（Ａ）からスタートし、次いでステップ（Ｂ）を行うことを１セットとし、これを４セット行うことにより、再び図４に示す形態に戻ることになる。

−実施形態３−
実施形態３は、単位充填塔を５つ以上有する循環系を用いる。そして、この循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切ったものを想定する。また、溶離液として、脱着力の異なる４種の溶離液ｄ−Ｉ〜ｄ−IVを用いる。
この実施形態３においては、ステップ（Ａ）として下記サブステップ（Ａ１−３）、（Ａ２−３）及び（Ａ３−３）を順に行う。

＜サブステップ（Ａ１−３）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力と同じか又はセクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

＜サブステップ（Ａ２−３）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
このサブステップ（Ａ２−３）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力は、上記サブステップ（Ａ１−３）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力よりも強いことが好ましい。
このサブステップ（Ａ２−３）における溶離液供給口Ｄ−Ｉは、上記サブステップ（Ａ１−３）における溶離液供給口Ｄ−IIと同じ配管に設けられている。

＜サブステップ（Ａ３−３）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−３）における前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

上記サブステップ（Ａ１−３）の一例として、下記サブステップ（Ａ１−３ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ１−３）はサブステップ（Ａ１−３ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ１−３ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から４種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして、該原液供給口Ｆから原液を供給し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ３として、該溶離液供給口Ｄ３から４種の溶離液のうち脱着力が最も弱い溶離液ｄ３を供給し、
セクション５の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして、該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ２−３）の一例として、下記サブステップ（Ａ２−３ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ２−３）はサブステップ（Ａ２−３ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ２−３ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ１として、該溶離液供給口Ｄ１から４種の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給し、
セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして、該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から４種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
前記溶離液供給口Ｄ３から前記溶離液ｄ３を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。
このサブステップ（Ａ２−３ｅｘ）における溶離液供給口Ｄ１は、上記サブステップ（Ａ１−３ｅｘ）における溶離液供給口Ｄ２と同じ配管に設けられている。

上記サブステップ（Ａ３−３）の一例として、下記サブステップ（Ａ３−３ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ３−３）はサブステップ（Ａ３−３ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ３−３ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から前記溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
サブステップ（Ａ２−３ｅｘ）における前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、
セクション４の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして、該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、
セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ４として、該溶離液供給口Ｄ４から４種の溶離液のうち脱着力が３番目に強い溶離液ｄ４を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

各セクションが単位充填塔を一つ有する場合を例にとり、上記ステップ（Ａ）が上記サブステップ（Ａ１−３ｅｘ）、（Ａ２−３ｅｘ）及び（Ａ３−３ｅｘ）を順に行う場合のフロー図を図６に示す。図６中、四角の囲いは単位充填塔１つ分を示し、当該囲いの中の数字は単位充填塔の番号を示す。
上記サブステップ（Ａ１−３ｅｘ）、（Ａ２−３ｅｘ）及び（Ａ３−３ｅｘ）を順に行うステップ（Ａ）が終了後、ステップ（Ｂ）により、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させ、次いで上記サブステップ（Ａ１−３ｅｘ）、（Ａ２−３ｅｘ）及び（Ａ３−３ｅｘ）を順に行った場合のフロー図を図７に示す。図６に示す、各セクションに配される単位充填塔が、図７では１つずつ下流側のものへとシフトする。この場合、図６に示すステップ（Ａ）からスタートし、次いでステップ（Ｂ）を行うことを１セットとし、これを５セット行うことにより、再び図６に示す形態に戻ることになる。

−実施形態４−
実施形態４は、単位充填塔を７つ以上有する循環系を用いる。そして、この循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切ったものを想定する。また、溶離液として、脱着力の異なる５種の溶離液ｄ−Ｉ〜ｄ−Ｖを用いる。
この実施形態４においては、ステップ（Ａ）として下記サブステップ（Ａ１−４）、（Ａ２−４）及び（Ａ３−４）を順に行う。

＜サブステップ（Ａ１−４）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力と同じか又はセクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

＜サブステップ（Ａ２−４）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
このサブステップ（Ａ２−４）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力は、上記サブステップ（Ａ１−４）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力よりも強いことが好ましい。
このサブステップ（Ａ２−４）における溶離液供給口Ｄ−Ｉは、上記サブステップ（Ａ１−４）における溶離液供給口Ｄ−IIと同じ配管に設けられている。

＜サブステップ（Ａ３−４）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−４）における前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、セクション４の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｖとして、該溶離液供給口Ｄ−Ｖから溶離液ｄ−Ｖを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

上記サブステップ（Ａ１−４）の一例として、下記サブステップ（Ａ１−４ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ１−４）はサブステップ（Ａ１−４ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ１−４ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から５種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして、該原液供給口Ｆから原液を供給し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ３として、該溶離液供給口Ｄ３から５種の溶離液のうち脱着力が最も弱い溶離液ｄ３を供給し、
セクション５の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして、該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ３−３）において、セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力は、上記サブステップ（Ａ３−４）において、セクション５を流通する溶離液の脱着力と同じであることも好ましい。

上記サブステップ（Ａ２−４）の一例として、下記サブステップ（Ａ２−４ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ２−４）はサブステップ（Ａ２−４ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ２−４ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ１として、該溶離液供給口Ｄ１から５種の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給し、
セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして、該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から５種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ４として、該溶離液供給口Ｄ４から５種の溶離液のうち脱着力が４番目に強い溶離液ｄ４を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。
このサブステップ（Ａ２−４ｅｘ）における溶離液供給口Ｄ１は、上記サブステップ（Ａ１−４ｅｘ）における溶離液供給口Ｄ２と同じ配管に設けられている。

上記サブステップ（Ａ３−４）の一例として、下記サブステップ（Ａ３−４ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ３−４）はサブステップ（Ａ３−４ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ３−４ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から前記溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
サブステップ（Ａ２−４ｅｘ）における前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、
セクション４の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして、該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、
セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ５として、該溶離液供給口Ｄ５から５種の溶離液のうち脱着力が３番目に強い溶離液ｄ５を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記ステップ（Ａ）が上記サブステップ（Ａ１−４ｅｘ）、（Ａ２−４ｅｘ）及び（Ａ３−４ｅｘ）を順に行う場合のフローの一例を図８に示す。図８中、四角の囲いは単位充填塔１つ分を示し、当該囲いの中の数字は単位充填塔の番号を示す。また、図８に示す形態は単位充填塔を７つ有し、セクション１に単位充填塔が１つ、セクション２に単位充填塔が２つ、セクション３に単位充填塔が２つ、セクション４に単位充填塔が１つ、セクション５に単位充填塔が１つ含まれている。
上記サブステップ（Ａ１−４ｅｘ）、（Ａ２−４ｅｘ）及び（Ａ３−４ｅｘ）を順に行うステップ（Ａ）が終了後、ステップ（Ｂ）により、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させ、次いで上記サブステップ（Ａ１−４ｅｘ）、（Ａ２−４ｅｘ）及び（Ａ３−４ｅｘ）を順に行った場合のフロー図を図９に示す。図８に示す、各セクションに配される単位充填塔が、図９では単位充填塔１つ分ずつ下流側のものへとシフトする。この場合、図８に示すステップ（Ａ）からスタートし、次いでステップ（Ｂ）を行うことを１セットとし、これを７セット行うことにより、再び図８に示す形態に戻ることになる。

−実施形態５−
実施形態５は、単位充填塔を５つ以上有する循環系を用いる。そして、この循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切ったものを想定する。また、溶離液として、脱着力の異なる４種の溶離液ｄ−Ｉ〜ｄ−IVを用いる。
この実施形態５においては、ステップ（Ａ）として下記サブステップ（Ａ１−５）、（Ａ２−５）及び（Ａ３−５）を順に行う。

＜サブステップ（Ａ１−５）＞
セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

＜サブステップ（Ａ２−５）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

＜サブステップ（Ａ３−５）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
このサブステップ（Ａ３−５）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力は、上記サブステップ（Ａ２−５）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力と同じであることが好ましい。

上記サブステップ（Ａ１−５）の一例として、下記サブステップ（Ａ１−５ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ１−５）はサブステップ（Ａ１−５ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ１−５ｅｘ）＞
セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして、該原液供給口Ｆから原液を供給し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ３として、該溶離液供給口Ｄ３から４種の溶離液のうち脱着力が最も弱い溶離液ｄ３を供給し、
セクション５の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして、該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ２−５）の一例として、下記サブステップ（Ａ２−５ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ２−５）はサブステップ（Ａ２−５ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ２−５ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ１として、該溶離液供給口Ｄ１から４種の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給し、
セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして、該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から４種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
前記溶離液供給口Ｄ３から前記溶離液ｄ３を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ３−５）の一例として、下記サブステップ（Ａ３−５ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ３−５）はサブステップ（Ａ３−５ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ３−５ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から前記溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、
セクション４の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして、該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、
セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ４として、該溶離液供給口Ｄ４から４種の溶離液のうち脱着力が３番目に強い溶離液ｄ４を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

各セクションが単位充填塔を一つ有する場合を例にとり、上記ステップ（Ａ）が上記サブステップ（Ａ１−５ｅｘ）、（Ａ２−５ｅｘ）及び（Ａ３−５ｅｘ）を順に行う場合のフロー図を図１３に示す。図１３中、四角の囲いは単位充填塔１つ分を示し、当該囲いの中の数字は単位充填塔の番号を示す。
上記サブステップ（Ａ１−５ｅｘ）、（Ａ２−５ｅｘ）及び（Ａ３−５ｅｘ）を順に行うステップ（Ａ）が終了後、ステップ（Ｂ）により、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させ、次いで上記サブステップ（Ａ１−５ｅｘ）、（Ａ２−５ｅｘ）及び（Ａ３−５ｅｘ）を順に行った場合のフロー図を図１４に示す。図１３に示す、各セクションに配される単位充填塔が、図１４では１つずつ下流側のものへとシフトする。この場合、図１３に示すステップ（Ａ）からスタートし、次いでステップ（Ｂ）を行うことを１セットとし、これを５セット行うことにより、再び図１３に示す形態に戻ることになる。

−実施形態６−
実施形態６は、単位充填塔を５つ以上有する循環系を用いる。そして、この循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切ったものを想定する。また、溶離液として、脱着力の異なる４種の溶離液ｄ−Ｉ〜ｄ−IVを用いる。
この実施形態６においては、ステップ（Ａ）として下記サブステップ（Ａ１−６）、（Ａ２−６）及び（Ａ３−６）を順に行う。

＜サブステップ（Ａ１−６）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、セクション５の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１、２及び３を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション１、２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

＜サブステップ（Ａ２−６）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
このサブステップ（Ａ２−６）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力は、上記サブステップ（Ａ１−６）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力よりも強いことが好ましい。
このサブステップ（Ａ２−６）における溶離液供給口Ｄ−Ｉは、上記サブステップ（Ａ１−６）における溶離液供給口Ｄ−IIと同じ配管に設けられている。

＜サブステップ（Ａ３−６）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
このサブステップ（Ａ３−６）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力は、上記サブステップ（Ａ２−６）においてセクション１を流通する溶離液の脱着力と同じであることが好ましい。

上記サブステップ（Ａ１−６）の一例として、下記サブステップ（Ａ１−６ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ１−６）はサブステップ（Ａ１−６ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ１−６ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から４種の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給し、
セクション３の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして、該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ４として、該溶離液供給口Ｄ４から４種の溶離液のうち脱着力が３番目に強い溶離液ｄ４を供給し、
セクション５の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして、該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ２−６）の一例として、下記サブステップ（Ａ２−６ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ２−６）はサブステップ（Ａ２−６ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ２−６ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ１として、該溶離液供給口Ｄ１から４種の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給し、
セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして、該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして、該原液供給口Ｆから原液を供給し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ３として、該溶離液供給口Ｄ３から４種の溶離液のうち脱着力が最も弱い溶離液ｄ３を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ３−６）の一例として、下記サブステップ（Ａ３−６ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ３−６）はサブステップ（Ａ３−６ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ３−６ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から前記溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として、該溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、
前記溶離液供給口Ｄ３から前記溶離液ｄ３を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

各セクションが単位充填塔を一つ有する場合を例にとり、上記ステップ（Ａ）が上記サブステップ（Ａ１−６ｅｘ）、（Ａ２−６ｅｘ）及び（Ａ３−６ｅｘ）を順に行う場合のフロー図を図１５に示す。図１５中、四角の囲いは単位充填塔１つ分を示し、当該囲いの中の数字は単位充填塔の番号を示す。
上記サブステップ（Ａ１−６ｅｘ）、（Ａ２−６ｅｘ）及び（Ａ３−６ｅｘ）を順に行うステップ（Ａ）が終了後、ステップ（Ｂ）により、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させ、次いで上記サブステップ（Ａ１−６ｅｘ）、（Ａ２−６ｅｘ）及び（Ａ３−６ｅｘ）を順に行った場合のフロー図を図１６に示す。図１５に示す、各セクションに配される単位充填塔が、図１６では１つずつ下流側のものへとシフトする。この場合、図１５に示すステップ（Ａ）からスタートし、次いでステップ（Ｂ）を行うことを１セットとし、これを５セット行うことにより、再び図１５に示す形態に戻ることになる。

−実施形態７−
実施形態７は、単位充填塔を５つ以上有する循環系を用いる。そして、この循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切ったものを想定する。また、溶離液として、脱着力の異なる４種の溶離液ｄ−Ｉ〜ｄ−IVを用いる。
この実施形態７においては、ステップ（Ａ）として下記サブステップ（Ａ１−７）、（Ａ２−７）及び（Ａ３−７）を順に行う。

＜サブステップ（Ａ１−７）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

＜サブステップ（Ａ２−７）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

＜サブステップ（Ａ３−７）＞
前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。

上記サブステップ（Ａ１−７）の一例として、下記サブステップ（Ａ１−７ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ１−７）はサブステップ（Ａ１−７ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ１−７ｅｘ）＞
セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ１として、該溶離液供給口Ｄ１から４種の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給し、
セクション１の下流側末端を強吸着性画分抜出口Ｃとして、該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
セクション３の上流側末端を原液供給口Ｆとして、該原液供給口Ｆから原液を供給し、
セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ３として、該溶離液供給口Ｄ３から４種の溶離液のうち脱着力が最も弱い溶離液ｄ３を供給し、
セクション５の下流側末端を弱吸着性画分抜出口Ａとして、該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ２−７）の一例として、下記サブステップ（Ａ２−７ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ２−７）はサブステップ（Ａ２−７ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ２−７ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から前記溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
前記溶離液供給口Ｄ３から前記溶離液ｄ３を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

上記サブステップ（Ａ３−７）の一例として、下記サブステップ（Ａ３−７ｅｘ）を実施するサブステップが挙げられるが、上記サブステップ（Ａ３−７）はサブステップ（Ａ３−７ｅｘ）に限定されるものではない。
＜サブステップ（Ａ３−７ｅｘ）＞
前記溶離液供給口Ｄ１から前記溶離液ｄ１を供給し、
前記強吸着性画分抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、
前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、
セクション４の下流側末端を中吸着性画分抜出口Ｂとして、該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、
セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ４として、該溶離液供給口Ｄ４から４種の溶離液のうち脱着力が３番目に強い溶離液ｄ４を供給し、
前記弱吸着性画分抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出す。

各セクションが単位充填塔を一つ有する場合を例にとり、上記ステップ（Ａ）が上記サブステップ（Ａ１−７ｅｘ）、（Ａ２−７ｅｘ）及び（Ａ３−７ｅｘ）を順に行う場合のフロー図を図１７に示す。図１７中、四角の囲いは単位充填塔１つ分を示し、当該囲いの中の数字は単位充填塔の番号を示す。
上記サブステップ（Ａ１−７ｅｘ）、（Ａ２−７ｅｘ）及び（Ａ３−７ｅｘ）を順に行うステップ（Ａ）が終了後、ステップ（Ｂ）により、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させ、次いで上記サブステップ（Ａ１−７ｅｘ）、（Ａ２−７ｅｘ）及び（Ａ３−７ｅｘ）を順に行った場合のフロー図を図１８に示す。図１７に示す、各セクションに配される単位充填塔が、図１８では１つずつ下流側のものへとシフトする。この場合、図１７に示すステップ（Ａ）からスタートし、次いでステップ（Ｂ）を行うことを１セットとし、これを５セット行うことにより、再び図１７に示す形態に戻ることになる。

本発明の方法において、目的の液を目的の場所に供給したり、目的の液を目的の場所から抜き出したりするのは、循環系に設けた各所のポンプの作動、各所の弁の開閉を適宜に調整して行うことができる。すなわち、循環系における目的の流体の供給や目的の画分の抜き出しの方法それ自体は公知である。また、各液の供給流量や抜き出しの流量も、処理効率等の目的に応じて適宜に設定することができる。

本発明の方法において、精製対象成分は強吸着性成分、中吸着性成分、弱吸着性成分のいずれであってもよいが、なかでも中吸着性成分を精製するのに好適な方法である。本発明の方法は、タンパク質の精製に好適に用いることができる。本発明の方法により中吸着性成分を高純度に得ることができるため、目的のタンパク質の他にその分解物や凝集体を含む原液から、目的のタンパク質を高純度に得るために好適な方法である。
上記タンパク質に特に制限はなく、例えば、抗体を精製対象成分とすることができる。 本発明において「抗体」とは、天然に存在する抗体でもよく、キメラ抗体であってもよく、酵素等によりフラグメント化された抗体であってもよい（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆａｂフラグメント）。また、単鎖抗体やその２量体（ダイアボディー）もしくは３量体（トリアボディー）、又はミニボディーも含まれる。また、シングルドメイン抗体であってもよい。なお、これらは一例であり、抗原に対して特異的な結合能を有するタンパク質ないしその誘導体はすべて、本発明における抗体の概念に含まれるものとする。
本発明の方法で高純度化した抗体は、抗体医薬としての適用も可能である。すなわち、本発明の方法を適用して原液中に含まれる抗体を分取することにより、抗体医薬の製造方法を提供することができる。より具体的には、本発明の方法により、抗体産生細胞の培養液及び／又は抗体産生細胞の抽出液を原液とし、その中に含まれる抗体を分取することにより、抗体医薬を得ることができる。本発明において「抗体産生細胞の培養液」や「抗体産生細胞の抽出液」は、抗体産生細胞の培養液や抗体産生細胞の抽出液を、遠心分離処理やクロマト分離処理等の各種処理に付して、ある程度分画ないし精製等された状態としたものを包含する意味である。

本発明の方法において、単位充填塔に充填される吸着剤は、精製対象成分に応じて適宜に選択されるものであり、種々の吸着剤を採用することができる。例えば、強酸性陽イオン交換樹脂、弱酸性陽イオン交換樹脂、強塩基性陰イオン交換樹脂、弱塩基性陰イオン交換樹脂、合成吸着剤、ゼオライト、シリカゲル、及び官能基修飾されたシリカゲル（好ましくはオクタデシルシリル修飾シリカゲル）、また、その他のゲルろ過クロマトグラフィー材、アフィニティ―吸着材を吸着剤として用いることができる。
精製対象成分がタンパク質の場合、吸着剤はイオン交換樹脂が好ましい。なかでも陽イオン交換樹脂を好適に用いることができる。

本発明の擬似移動層方式クロマト分離システムは、本発明の方法を実施するためのシステムである。すなわち、本発明の擬似移動層方式クロマト分離システムは、上述した循環系の構成を有し、当該循環系が、上述したステップ（Ａ）の作動とステップ（Ｂ）の作動を順に繰り返すことができるシステムである。

以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。

［原液の調製］
ヒトのイムノグロブリンＧ２（ＩｇＧ２）を産生する細胞を培養し、その培養液の上澄みを透析により脱塩したのち、ＮａＣｌを加えて塩濃度を調整したものを原液とした。この上澄み中に含まれる抗体と、そのフラグメント及び凝集体の含有量は下記の通りである。下表中、フラグメント１は分子量５０００付近をピークとする分子量が２５０００未満の画分に含まれるタンパク質とし、フラグメント２は分子量が２５０００以上５００００未満の画分に含まれるタンパク質とした。また、抗体は分子量１５００００付近をピークとする分子量が５００００以上３０００００未満の画分に含まれるタンパク質とした。また、凝集体は分子量が３０００００以上の画分に含まれるタンパク質とした。下記成分組成は、分析カラム（東ソーＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬ）を用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により決定した。

［単位充填塔（カラム）に用いる吸着剤］
吸着剤として陽イオン交換樹脂（商品名：Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（登録商標）ＥＭＤ ＳＯ_３ ⁻（Ｍ）、メルク社製）を用いた。

［溶離液］
下記Ａ液及びＢ液を用いて各種ＮａＣｌ濃度のリン酸緩衝液を調製し、溶離液として用いた。
＜Ａ液＞
２０ｍＭリン酸緩衝液 ｐＨ６．０
＜Ｂ液＞
ＮａＣｌを０．３Ｍ（１７．５３ｇ／Ｌ）の濃度で含有する２０ｍＭリン酸緩衝液 ｐＨ６．０

［比較例１］ 単カラム・ステップグラジエント
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ１００ｍｍ １本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．０５ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
下記工程１〜６を順に行った。工程１〜６のフロー図を図１０に示した。
下記運転条件は、弱吸着性画分へのフラグメント１及びフラグメント２の回収率が９８％以上、中吸着性画分への抗体の回収率が９８％以上、かつ、強吸着性画分への凝集体の回収率が９８％以上となる条件とした。このことは、後記する各比較例及び実施例においても同じである。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及びフラグメント２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。この回収率は、１００×［画分中の質量］／［原液中の質量］により算出される。

−分離処理効率−
吸着剤の体積（単位：「Ｌ（リットル）−Ｒ」、ＲはＲｅｓｉｎの略）当たり、時間（単位：「ｈ（ｈｏｕｒ）」当たりの原液の処理量（単位：「Ｌ（リットル）−原液」を分離処理効率とした。なお、後述するカラムを複数本用いるマルチカラム系では、吸着剤の体積は、すべてのカラムに含まれる吸着剤の総量である。
比較例１における分離処理効率は、６．０４（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［比較例２］ 単カラム・ステップグラジエント
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ４００ｍｍ １本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．０５ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
下記工程１〜６を順に行った。工程１〜６のフロー図は図１０の通りである。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及びフラグメント２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
比較例２における分離処理効率は、１２．５１（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［比較例３］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ１００ｍｍ ４本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．２３ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
図１１に比較例３の運転のフロー図を示す。図１１に示す第１〜第４ステップを１サイクルとして、１０サイクル実施した。各ステップの間には、原液供給口Ｆ、溶離液供給口Ｄ（Ｄ１〜Ｄ３）、弱吸着性画分抜出口Ａ、中吸着性画分抜出口Ｂ及び強吸着性画分抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったままカラム１つ分だけ下流側へと移行させるステップを行っている。
なお、図１１に示す第１〜第４ステップは、本発明のステップ（Ａ）に対応するが、当該ステップ（Ａ）とは異なり、複数のサブステップから構成されるものではない（換言すれば、１つのサブステップで１つのステップが構成されている。）。図１１中の「Ｄ１」、「Ｄ２」及び「Ｄ３」はいずれも溶離液供給口であり、それぞれ、溶離液Ｄ１、Ｄ２及びＤ３が供給される。図１１中の「Ｃ」は強吸着性画分抜出口であり、強吸着性画分が抜き出される。同様に「Ｂ」は中吸着性画分抜出口であり、中吸着性画分が抜き出され、「Ａ」は弱吸着性画分抜出口であり、弱吸着性画分が抜き出される。
図１１に示す各ステップにおける溶離液（Ｄ１〜Ｄ３）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。なお、下表には抜き出される液の流速を記載していないが、強吸着性画分抜出口Ｃから抜き出される強吸着性画分の流速は溶離液Ｄ１を供給する流速と同じである。また、中吸着性画分抜出口Ｂから抜き出される中吸着性画分の流速は溶離液Ｄ２を供給する流速と同じである。また、弱吸着性画分抜出口Ａから抜き出される弱吸着性画分の流速は、溶離液Ｄ３を供給する流速と、原液供給口Ｆから原液を供給する流速の合計となる。つまり、供給流量と抜出流量は常に同じであり、このことは以降の比較例ないし実施例でも同様である。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及びフラグメント２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
比較例３における分離処理効率は、７．１１（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［比較例４］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ１００ｍｍ ４本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．２４ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
図１２に比較例４の運転のフロー図を示す。図１２に示す第１〜第４ステップを１サイクルとして、１０サイクル実施した。なお、図１２に示す各ステップは、第１サブステップと第２サブステップの２つのサブステップから構成され、第２サブステップは液の供給と抜き出しのいずれも行わずに、循環系内の流体を循環させるものである。
図１２に示す各ステップにおける溶離液（Ｄ１〜Ｄ３）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及び２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
比較例４における分離処理効率は、７．１９（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［実施例１］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ１００ｍｍ ４本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は１．９３ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
図２に示すサブステップの組み合わせによりステップ（Ａ）を構成した。このステップ（Ａ）とそれに続くステップ（Ｂ）を１セットとし、これを４セット行って１サイクルとして、１０サイクル実施した。各ステップ（Ａ）における溶離液（Ｄ１〜Ｄ４）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及び２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
実施例１における分離処理効率は、１９．６９６（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［実施例２］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ１００ｍｍ ４本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．０２ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
図４に示すサブステップの組み合わせによりステップ（Ａ）を構成した。このステップ（Ａ）とそれに続くステップ（Ｂ）を１セットとし、これを４セット行って１サイクルとして、１０サイクル実施した。各ステップ（Ａ）における溶離液（Ｄ１〜Ｄ４）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及び２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
実施例２における分離処理効率は、１８．６１０（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［実施例３］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ８０５ｍｍ ５本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．４６ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
図６に示すサブステップの組み合わせによりステップ（Ａ）を構成した。このステップ（Ａ）とそれに続くステップ（Ｂ）を１セットとし、これを５セット行って１サイクルとして、１０サイクル実施した。各ステップ（Ａ）における溶離液（Ｄ１〜Ｄ４）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及び２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
実施例３における分離処理効率は、１６．４９９（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［実施例４］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ１００ｍｍ ７本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．５７ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
図８に示すサブステップの組み合わせによりステップ（Ａ）を構成した。このステップ（Ａ）とそれに続くステップ（Ｂ）を１セットとし、これを７セット行って１サイクルとして、１０サイクル実施した。各ステップ（Ａ）における溶離液（Ｄ１〜Ｄ５）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及び２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
実施例４における分離処理効率は、１５．２２５（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

上記の通り、擬似移動層方式クロマト分離において、２種以上の溶離液を用いて、循環系における弱吸着性画分抜出口Ａと、中吸着性画分抜出口Ｂと、強吸着性画分抜出口Ｃと、原液供給口Ｆとの位置関係を本発明で規定する特定の関係とすることにより、弱吸着性成分と中吸着性成分と強吸着性成分とを、より少ない吸着剤の使用量で、十分に高純度化して分取できることがわかる。本実施例により、目的の抗体を中吸着性画分中に、高純度に、高効率に得られることが示された。

［実施例５］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ８０ｍｍ ５本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．４６ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

図１３に示すサブステップの組み合わせによりステップ（Ａ）を構成した。このステップ（Ａ）とそれに続くステップ（Ｂ）を１セットとし、これを５セット行って１サイクルとして、１０サイクル実施した。各ステップ（Ａ）における溶離液（Ｄ１〜Ｄ４）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及び２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
実施例５における分離処理効率は、１６．５０２（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［実施例６］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ８０ｍｍ ５本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．５５ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
図１５に示すサブステップの組み合わせによりステップ（Ａ）を構成した。このステップ（Ａ）とそれに続くステップ（Ｂ）を１セットとし、これを５セット行って１サイクルとして、１０サイクル実施した。各ステップ（Ａ）における溶離液（Ｄ１〜Ｄ４）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及び２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
実施例６における分離処理効率は、１８．８９８（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

［実施例７］ マルチカラム・グラジエント・擬似移動層方式
＜カラム＞
直径１０ｍｍ×長さ８０ｍｍ ５本
＜原液＞
原液中のＮａＣｌ濃度は２．５５ｇ／Ｌとした。
＜溶離液＞
下記溶離液を用いた。

＜運転条件＞
図１７に示すサブステップの組み合わせによりステップ（Ａ）を構成した。このステップ（Ａ）とそれに続くステップ（Ｂ）を１セットとし、これを５セット行って１サイクルとして、１０サイクル実施した。各ステップ（Ａ）における溶離液（Ｄ１〜Ｄ４）と原液（Ｆ）の供給流速は下記の通りとした。

＜結果＞
−回収率−
弱吸着性画分へのフラグメント１及び２の回収率、中吸着性画分への抗体の回収率、強吸着性画分への凝集体の回収率を下表に示す。

−分離処理効率−
実施例７における分離処理効率は、１６．５０２（Ｌ−原液）／（Ｌ−Ｒ）・ｈであった。

１００ 循環系
１０ａ、１０ｂ、１０ｃ、１０ｄ 単位充填塔（カラム）
Ａｂ 吸着剤
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４ 遮断弁
２ａ、２ｂ、２ｃ、２ｄ 弱吸着性画分抜出ライン
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４ 弱吸着性画分抜出弁
３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄ 中吸着性画分抜出ライン
Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４ 中吸着性画分抜出弁
４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ 強吸着性画分抜出ライン
Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４ 強吸着性画分抜出弁
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４ 逆止弁
１ 配管
２Ｊ 弱吸着性画分合流管
３Ｊ 中吸着性画分合流管
４Ｊ 強吸着性画分合流管
６ 原液タンク
７ 原液
８ａ、８ｂ、８ｃ、８ｄ 溶離液タンク
９ａ、９ｂ、９ｃ、９ｄ 溶離液
１１ 原液供給ライン
１１ａ、１１ｂ、１１ｃ、１１ｄ 原液供給分岐ライン
Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４ 原液供給弁
１２、１３、１４、１５ 溶離液供給ライン
１２ａ、１２ｂ、１２ｃ、１２ｄ 溶離液供給分岐ライン
１３ａ、１３ｂ、１３ｃ、１３ｄ 溶離液供給分岐ライン
１４ａ、１４ｂ、１４ｃ、１４ｄ 溶離液供給分岐ライン
１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄ 溶離液供給分岐ライン
Ｅ１ａ、Ｅ２ａ、Ｅ３ａ、Ｅ４ａ 溶離液供給弁
Ｅ１ｂ、Ｅ２ｂ、Ｅ３ｂ、Ｅ４ｂ 溶離液供給弁
Ｅ１ｃ、Ｅ２ｃ、Ｅ３ｃ、Ｅ４ｃ 溶離液供給弁
Ｅ１ｄ、Ｅ２ｄ、Ｅ３ｄ、Ｅ４ｄ 溶離液供給弁
Ｐ１ 循環ポンプ
Ｐ２ 原液供給ポンプ
Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６ 溶離液供給ポンプ

Claims (13)

1. 吸着剤が充填された複数の単位充填塔が配管を介して直列かつ無端状に連結された循環系を用いて、原液中に含まれる、前記吸着剤に対して弱吸着性成分と、強吸着性成分と、両成分の中間的な吸着性の中吸着性成分とを、２種以上の溶離液を用いて分離することを含む擬似移動層方式クロマト分離方法であって、
   前記循環系の前記配管には、原液供給口Ｆと、前記２種以上の各溶離液に対応する２つ以上の溶離液供給口Ｄと、前記弱吸着性成分を含む弱吸着性画分の抜出口Ａと、前記中吸着性成分を含む中吸着性画分の抜出口Ｂと、前記強吸着性成分を含む強吸着性画分の抜出口Ｃとが設けられ、該原液供給口Ｆ、該抜出口Ａ、該抜出口Ｂ及び該抜出口Ｃの位置を下記（ａ）〜（ｃ）とし：
   （ａ）前記抜出口Ｂを、前記原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける；
   （ｂ）前記抜出口Ｃを、前記原液供給口Ｆを有する配管に設けるか、又は、前記抜出口Ｃを、前記原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで上流側に設ける；
   （ｃ）前記抜出口Ａを、前記抜出口Ｂを有する配管に設けるか、又は、前記抜出口Ａを、前記抜出口Ｂの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける；
   前記クロマト分離方法は下記ステップ（Ａ）及び（Ｂ）を順に繰り返すことを含む、擬似移動層方式クロマト分離方法：
   ［ステップ（Ａ）］
   前記原液供給口Ｆから原液を、前記２つ以上の溶離液供給口Ｄから２種以上の溶離液を、それぞれ同時に又は別々に供給し、かつ、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を、前記抜出口Ｂから中吸着性画分を、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を、それぞれ同時に又は別々に抜き出すステップ；
   ［ステップ（Ｂ）］
   前記ステップ（Ａ）終了後、前記原液供給口Ｆ、前記溶離液供給口Ｄ、前記抜出口Ａ、前記抜出口Ｂ及び前記抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させるステップ。
2. 前記ステップ（Ａ）が複数のサブステップで構成され、該複数のサブステップは、原液を供給するサブステップと、原液を供給しないサブステップとを含む、請求項１に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法。
3. 前記抜出口Ｃを、２種以上の溶離液のうち脱着力が最も強い溶離液ｄ１を供給する溶離液供給口Ｄ１の下流側に設け、前記溶離液供給口Ｄ１から前記抜出口Ｃまでの間には少なくとも１つの単位充填塔を配し、前記ステップ（Ａ）において、前記溶離液ｄ１を供給している間、前記抜出口Ｃから、前記溶離液ｄ１の供給量と同じ量の強吸着性画分を抜き出す、請求項１又は２に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法。
4. 前記抜出口Ｂを、２種以上の溶離液のうち脱着力が２番目に強い溶離液ｄ２を供給する溶離液供給口Ｄ２の下流側に設け、前記溶離液供給口Ｄ２から前記抜出口Ｂまでの間には少なくとも１つの単位充填塔を配し、前記ステップ（Ａ）において、前記溶離液ｄ２を供給している間に、前記抜出口Ｂから、前記溶離液ｄ２の供給量と同じ量の中吸着性画分を抜き出す時間帯を設ける、請求項１〜３のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法。
5. 互いに脱着力が異なる４〜６種の溶離液を用いる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法。
6. 前記循環系が単位充填塔を４つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した４つのセクション１〜４に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−１）、（Ａ２−１）及び（Ａ３−１）を行う、請求項１〜５のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
   ＜サブステップ（Ａ１−１）＞
   セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ２として該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
   ＜サブステップ（Ａ２−１）＞
   前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
   ＜サブステップ（Ａ３−１）＞
   前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
7. 前記循環系が単位充填塔を４つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した４つのセクション１〜４に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−２）、（Ａ２−２）及び（Ａ３−２）を行う、請求項１〜５のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
   ＜サブステップ（Ａ１−２）＞
   セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
   ＜サブステップ（Ａ２−２）＞
   セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
   ＜サブステップ（Ａ３−２）＞
   前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−２）における前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション４を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
8. 前記循環系が単位充填塔を５つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−３）、（Ａ２−３）及び（Ａ３−３）を行う、請求項１〜５のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
   ＜サブステップ（Ａ１−３）＞
   セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力と同じか又はセクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
   ＜サブステップ（Ａ２−３）＞
   セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
   ＜サブステップ（Ａ３−３）＞
   前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−３）における前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
9. 前記循環系が単位充填塔を７つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−４）、（Ａ２−４）及び（Ａ３−４）を行う、請求項１〜５のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
   ＜サブステップ（Ａ１−４）＞
   セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１及び２を流通する溶離液の脱着力と同じか又はセクション１及び２を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
   ＜サブステップ（Ａ２−４）＞
   セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
   ＜サブステップ（Ａ３−４）＞
   前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、サブステップ（Ａ２−４）における前記溶離液供給口Ｄ２から前記溶離液ｄ２を供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｖとして、該溶離液供給口Ｄ−Ｖから溶離液ｄ−Ｖを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
   セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
   セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
   セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
10. 前記循環系が単位充填塔を５つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−５）、（Ａ２−５）及び（Ａ３−５）を行う、請求項１〜５のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
    ＜サブステップ（Ａ１−５）＞
    セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション３を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
    ＜サブステップ（Ａ２−５）＞
    セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
    セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
    ＜サブステップ（Ａ３−５）＞
    前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
    セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
11. 前記循環系が単位充填塔を５つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−６）、（Ａ２−６）及び（Ａ３−６）を行う、請求項１〜５のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
    ＜サブステップ（Ａ１−６）＞
    セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、セクション３の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション１、２及び３を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション３及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション１、２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
    ＜サブステップ（Ａ２−６）＞
    セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
    セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
    ＜サブステップ（Ａ３−６）＞
    前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
    セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
12. 前記循環系が単位充填塔を５つ以上有し、該循環系を、各セクションが少なくとも１つの単位充填塔を有するように上流側から下流側に向けて円環状に連続した５つのセクション１〜５に区切り、また、前記の２種以上の溶離液を用いて、前記ステップ（Ａ）において下記サブステップ（Ａ１−７）、（Ａ２−７）及び（Ａ３−７）を行う、請求項１〜５のいずれか１項に記載の擬似移動層方式クロマト分離方法：
    ＜サブステップ（Ａ１−７）＞
    セクション１の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−Ｉとして該溶離液供給口Ｄ−Ｉから溶離液ｄ−Ｉを供給し、セクション１の下流側末端を前記抜出口Ｃとして該抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション３の上流側末端を前記原液供給口Ｆとして該原液供給口Ｆから原液を供給し、セクション４の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIIとして該溶離液供給口Ｄ−IIIから溶離液ｄ−IIIを供給し、セクション５の下流側末端を前記抜出口Ａとして該抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
    セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
    ＜サブステップ（Ａ２−７）＞
    前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、セクション２の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IIとして該溶離液供給口Ｄ−IIから溶離液ｄ−IIを供給し、前記溶離液供給口Ｄ−IIIから前記溶離液ｄ−IIIを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
    セクション４及び５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２及び３を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする；
    ＜サブステップ（Ａ３−７）＞
    前記溶離液供給口Ｄ−Ｉから前記溶離液ｄ−Ｉを供給し、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を抜き出し、前記溶離液供給口Ｄ−IIから前記溶離液ｄ−IIを供給し、セクション４の下流側末端を前記抜出口Ｂとして該抜出口Ｂから中吸着性画分を抜き出し、セクション５の上流側末端を溶離液供給口Ｄ−IVとして該溶離液供給口Ｄ−IVから溶離液ｄ−IVを供給し、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を抜き出すことにより、
    セクション１を流通する溶離液の脱着力を最も強くし、
    セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力を、セクション１を流通する溶離液の脱着力よりも弱くし、
    セクション５を流通する溶離液の脱着力を、セクション２、３及び４を流通する溶離液の脱着力よりも弱くする。
13. 吸着剤が充填された複数の単位充填塔が配管を介して直列かつ無端状に連結された循環系を用いて、原液中に含まれる、前記吸着剤に対して弱吸着性成分と、強吸着性成分と、両成分の中間的な吸着性の中吸着性成分とを、２種以上の溶離液を用いて分離する擬似移動層方式クロマト分離システムであって、
    前記循環系の前記配管には、原液供給口Ｆと、前記２種以上の各溶離液に対応する２つ以上の溶離液供給口Ｄと、前記弱吸着性成分を含む弱吸着性画分の抜出口Ａと、前記中吸着性成分を含む中吸着性画分の抜出口Ｂと、前記強吸着性成分を含む強吸着性画分の抜出口Ｃとが設けられ、該原液供給口Ｆ、該抜出口Ａ、該抜出口Ｂ及び該抜出口Ｃの位置を下記（ａ）〜（ｃ）とし：
    （ａ）前記抜出口Ｂを、前記原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける；
    （ｂ）前記抜出口Ｃを、前記原液供給口Ｆを有する配管に設けるか、又は、前記抜出口Ｃを、前記原液供給口Ｆの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで上流側に設ける；
    （ｃ）前記抜出口Ａを、前記抜出口Ｂを有する配管に設けるか、又は、前記抜出口Ａを、前記抜出口Ｂの、少なくとも１つの単位充填塔を挟んで下流側に設ける；
    前記クロマト分離システムは下記ステップ（Ａ）及び（Ｂ）を順に繰り返す手段を有する、擬似移動層方式クロマト分離システム：
    ［ステップ（Ａ）］
    前記原液供給口Ｆから原液を、前記２つ以上の溶離液供給口Ｄから２種以上の溶離液を、それぞれ同時に又は別々に供給し、かつ、前記抜出口Ａから弱吸着性画分を、前記抜出口Ｂから中吸着性画分を、前記抜出口Ｃから強吸着性画分を、それぞれ同時に又は別々に抜き出すステップ；
    ［ステップ（Ｂ）］
    前記ステップ（Ａ）終了後、前記原液供給口Ｆ、前記溶離液供給口Ｄ、前記抜出口Ａ、前記抜出口Ｂ及び前記抜出口Ｃを、これらの相対的な位置関係を保ったまま下流側へと移行させるステップ。
    

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