JP2019011335A - タンパク質−ポリマー−薬物共役体 - Google Patents

タンパク質−ポリマー−薬物共役体 Download PDF

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Abstract

【課題】タンパク質をベースとする認識分子（ＰＢＲＭ）−ポリマー−薬物共役体の提供。
【解決手段】タンパク質をベースとする認識分子（ＰＢＲＭ）と共役させて、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を形成するのに有用なポリマー足場が、１個または複数の末端マレイミド基を含むＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体。及び共役体を含む組成物、これらの調製の方法、および共役体またはこれらの組成物で様々な障害を処置する方法。
【選択図】なし

Description

本出願は、全体を引用することにより本明細書の一部を成すものとする、２０１３年１
０月１１日に出願したＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ
ｓという名称の米国特許仮出願第６１／８９０，０６５号、および２０１４年４月４日に
出願したＰｒｏｔｅｉｎ−Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓという名称
の米国特許仮出願第６１／９７５，２９０号の出願日の利益を主張するものである。
従来、医薬品は（固体ピルおよび液体として）経口的に分配されるか、または注射剤と
して、主に小分子からなってきた。過去３０年間に亘って、製剤（すなわち、薬物送達の
経路および／または速度を制御し、かつそれが必要とされる部位における治療剤の送達を
可能とする組成物）は、ますます一般的となり、そして複雑になってきている。それにも
関わらず、新規な処置およびこれらを投与する機序の開発に関する多くの問題と課題につ
いて、未だ対処がなされていない。例えば、多くの薬物は、一般的にこれらが体内の所望
の標的に到達する前に部分的な分解に供されるか、または標的以外の組織中に蓄積するか
、またはそれら両方となるために、限定された若しくはその他の点で低減された効力と治
療効果を示す。
このような薬物送達システムの分野における１つの目的は、生理的若しくは化学的機序
またはそれら両方を利用して、薬物を安定化し、かつ治療剤のｉｎ ｖｉｖｏでの移動を
制御できる系により、体内の特に標的とされる領域に未変化のまま医薬を送達することで
ある。
抗体−薬物共役体(antibody-drug conjugates)は、標的特異的な治療剤として開発され
てきた。様々ながん細胞表面抗原に対する抗体は、様々な必要不可欠な細胞標的、例えば
、微小管（マイタンシノイド、アウリスタチン、タキサン：米国特許第５，２０８，０２
０号明細書；同第５，４１６，０６４号明細書；同第６，３３３，４１０号明細書；同第
６，４４１，１６３号明細書；同第６，３４０，７０１号明細書；同第６，３７２，７３
８号明細書；同第６，４３６，９３１号明細書；同第６，５９６，７５７号明細書；およ
び同第７，２７６，４９７号明細書）；ＤＮＡ（カリケアマイシン、ドキソルビシン、Ｃ
Ｃ−１０６５類似体；米国特許第５，４７５，０９２号明細書；同第５，５８５，４９９
号明細書；同第５，８４６，５４５号明細書；同第６，５３４，６６０号明細書；同第６
，７５６，３９７号明細書；および同第６，６３０，５７９号明細書）を阻害する異なる
細胞毒性剤と共役されてきた。これらの細胞毒性薬のいくつかとの抗体共役体は、がん療
法のためにクリニックにおいて活発に調査されている（Ｒｉｃａｒｔ， Ａ． Ｄ．およ
びＴｏｌｃｈｅｒ， Ａ． Ｗ．、２００７、Ｎａｔｕｒｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａ
ｃｔｉｃｅ、４、２４５〜２５５；Ｋｒｏｐら、２０１０、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏ
ｌ．、２８、２６９８〜２７０４）。しかしながら、現存する抗体−薬物共役体は、いく
つかの制限を示してきた。主要な制限は、限定された数の標的とされる抗原、ならびに制
がん剤、例えば、メソトレキセート、ダウノルビシン、マイタンシノイド、タキサン、お
よびビンクリスチンの相対的に穏やかな細胞毒性のために、十分な濃度の薬物を標的部位
へと送達することができないことである。有意な細胞毒性を達成する１つのアプローチは
、直接的または間接的な抗体への多数の薬物分子の連結によるものである。しかしながら
、このような重度に修飾された抗体は、標的抗原の結合の障害および速いｉｎ ｖｉｖｏ
での血流からのクリアランスを示すことが多い。このような、薬物について最大の細胞毒
性が達成されるように、標的へ十分な濃度の薬物を送達する能力を改善させることが必要
とされている。
本発明は、生分解性の生体適合性であり、高い薬物の添加量および標的抗原への強い結
合を示すタンパク質−ポリマー−薬物共役体に関する。また、本発明は、タンパク質−ポ
リマー−薬物共役体を得るために、タンパク質をベースとする認識分子（ＰＢＲＭ）と共
役させるのに有用なポリマー足場に関する。
別の態様において、本発明は、タンパク質をベースとする認識分子（ＰＢＲＭ）と共役
させるのに有用である式（Ｉｄ）のポリマー足場に関し、
式中、
足場は、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリ（１−ヒドロキシメチ
ルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含み、Ｄは、出現する毎に独立
に、≦５ｋＤａの分子量を有する治療剤であり、Ｄおよびカルボニル基の間の
は、カルボニル基へのＤの直接的また間接的な付着を表し、
Ｘは、ＣＨ２、Ｏ、またはＮＨであり、ｍは、１〜約３００の整数であり、ｍ１は、１
〜約１４０の整数であり、ｍ７は、１〜約４０の整数であり、ｍ３は、１〜約１８の整数
であり、ｍ、ｍ１、ｍ３、およびｍ７の合計は、約１５〜約３００の範囲である。
式（Ｉｄ）の足場は、下記のフィーチャの１つまたは複数を含むことができる。
式（Ｉｄ）におけるＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ７は、１〜約２０の整数であり、ｍ３は、１〜約１０の整数であり、ｍ１は、１〜約７
０の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ３およびｍ７の合計は、約１５〜約１５０の範囲である。
式（Ｉｄ）におけるＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ７は、２〜約１５の整数であり、ｍ３は、１〜約８の整数であり、ｍ１は、２〜約５０
の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ３およびｍ７の合計は、約２０〜約１１０の範囲である。
式（Ｉｄ）におけるＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ７は、約３〜約１０の整数であり、ｍ３は、１〜約５の整数であり、ｍ１は、約５〜約
３５の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ３およびｍ７の合計は、約４０〜約７５の範囲である。
式（Ｉｄ）の「ｍ３」単位におけるマレイミド部分は、出現する毎に、ＰＢＲＭの官能
基と共有結合を形成しない。
一実施形態にて、ｍ１およびｍ７の合計は、２〜約１８０の整数である。
式（Ｉｄ）の足場は、Ｄ含有足場の１個または複数のマレイミド基を介してＤ含有足場
に共役しているＰＢＲＭをさらに含み、タンパク質−ポリマー−薬物共役体を形成するこ
とができる。例えば、式（Ｉｄ）の足場は、足場の２個またはそれ超のマレイミド基（例
えば、５個まで）を介してＤ含有足場に共役している１個のＰＢＲＭをさらに含む。例え
ば、１個のＰＢＲＭは、１個または複数の式（Ｉｄ）のＤ含有ポリマー足場に接続してい
る。
ある特定の実施形態にて、ポリマー薬物共役体（Ｉｄ）は、ＰＢＲＭに共役していると
き、式（Ｉｅ）のものであり、
式中、
ＸａおよびＸｂの一方はＨであり、他方はマレイミド遮断部分であるか、あるいはＸａ
およびＸｂは、それらが付着している炭素原子と一緒になって、炭素−炭素二重結合を形
成し、
ｍ３ａは、０〜約１７の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ３ａおよび
ｍ３ｂの合計は、ｍ３であり、ｍ、ｍ１、ｍ７、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約１５
〜約３００の範囲であり、ｍ５は、１〜約１０の整数である。
式（Ｉｄ）のタンパク質−ポリマー−薬物共役体において、各Ｄは、同じまたは異なる
部分でよく、各ＰＢＲＭは、同じまたは異なる部分でよい。
特定の実施形態にて、ＤとＰＢＲＭの比は、約３０：１、２９：１、２８：１、２７：
１、２６：１、２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：
１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：
１、１０：１、９：１、８：１、７：１または６：１でよい。
いくつかの実施形態にて、ＤとＰＢＲＭの比は、約２０：１、１９：１、１８：１、１
７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１または１０：１
でよい。
他の実施形態にて、ＤとＰＢＲＭの比は、約１８：１、１７：１、１６：１、１５：１
、１４：１、１３：１または１２：１でよい。
特定の実施形態にて、ＰＨＦとＰＢＲＭの比は、約１０：１、９：１、８：１、７：１
、６：１、５：１、４：１、３：１または２：１でよい。
いくつかの実施形態にて、ＰＨＦとＰＢＲＭの比は、約６：１、５：１、４：１、３：
１または２：１でよい。
他の実施形態にて、ＰＨＦとＰＢＲＭの比は、約４：１、３：１または２：１でよい。
一実施形態にて、Ｄは、ａ）アウリスタチン化合物；（ｂ）カリケアマイシン化合物；
（ｃ）デュオカルマイシン化合物；（ｄ）トポイソメラーゼ阻害剤、（ｅ）ピロロベンゾ
ジアゼピン化合物；（ｆ）ビンカ化合物；（ｇ）タンパク合成阻害剤；（ｈ）ＲＮＡポリ
メラーゼ阻害剤；（ｉ）チューブリン結合化合物；またはその類似体である。
特定の実施形態にて、Ｄは、ａ）アウリスタチン化合物；（ｂ）カリケアマイシン化合
物；（ｃ）デュオカルマイシン化合物；（ｄ）カンプトテシン化合物、（ｅ）ピロロベン
ゾジアゼピン化合物；（ｆ）ビンカ化合物；またはその類似体である。
一実施形態にて、アウリスタチン化合物は、アウリスタチン、ドラスタチン、モノメチ
ルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリス
タチンＦヒドロキシプロピルアミド（ＡＦ ＨＰＡ）、またはアウリスタチンＦフェニレ
ンジアミン（ＡＦＰ）である。
一実施形態にて、デュオカルマイシンまたはその類似体は、デュオカルマイシンＡ、デ
ュオカルマイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカル
マイシンＣ２、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、ＣＣ−１０６５、アド
ゼレシン、ビゼレシン、またはカルゼレシンである。
一実施形態にて、カンプトテシン化合物は、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１（イリノテ
カン）、ＳＮ−３８、またはトポテカンである。
一実施形態にて、ピロロベンゾジアゼピン化合物は、ピロロベンゾジアゼピンモノマー
、対称ピロロベンゾジアゼピン二量体または非対称ピロロベンゾジアゼピン二量体である
。
一実施形態にて、Ｄは、ＡＦ ＨＰＡであり、ＡＦ ＨＰＡとＰＢＲＭの比は、約３０
：１、２９：１、２８：１、２７：１、２６：１、２５：１、２４：１、２３：１、２２
：１、２１：１、２５：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５
：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１ま
たは６：１でよい。
別の実施形態にて、ＡＦ ＨＰＡとＰＢＲＭの比は、約２０：１、１９：１、１８：１
、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１または１０
：１でよい。
他の実施形態にて、ＡＦ ＨＰＡとＰＢＲＭの比は、約１８：１、１７：１、１６：１
、１５：１、１４：１、１３：１または１２：１でよい。
別の態様において、本発明は、タンパク質をベースとする認識分子（ＰＢＲＭ）と共役
させるのに有用である式（Ｉａ）のポリマー足場に関し、
式中、
足場は、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリ（１−ヒドロキシメチ
ルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含み、Ｘは、ＣＨ２、Ｏ、また
はＮＨであり、ｍは、１〜約３００の整数であり、ｍ１は、１〜約１４０の整数であり、
ｍ２は、１〜約４０の整数であり、ｍ３は、１〜約１８の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２お
よびｍ３の合計は、約１５〜約３００の範囲である。
式（Ｉａ）の足場は、下記のフィーチャの１つまたは複数を含むことができる。
式（Ｉａ）におけるＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ２は、１〜約２０の整数であり、ｍ３は、１〜約１０の整数であり、ｍ１は、１〜約７
０の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３の合計は、約１５〜約１５０の範囲である。
式（Ｉａ）におけるＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ２は、２〜約１５の整数であり、ｍ３は、１〜約８の整数であり、ｍ１は、２〜約５０
の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３の合計は、約２０〜約１１０の範囲である。
式（Ｉａ）におけるＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ２は、約３〜約１０の整数であり、ｍ３は、１〜約５の整数であり、ｍ１は、約５〜約
３５の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３の合計は、約４０〜約７５の範囲である。
式（Ｉａ）の「ｍ３」単位におけるマレイミド部分は、出現する毎に、ＰＢＲＭの官能
基と共有結合を形成しない。
一実施形態にて、式（Ｉａ）の足場は、式（Ａ）または（Ａ１）のものであり、
式中、
ＰＨＦは、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍは、１〜約７５の整数
であり、ｍ１は、約５〜約３５の整数であり、ｍ２は、約３〜約１０の整数であり、ｍ３
は、１〜約５の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３の合計は、４０〜約７５の範囲で
ある。
例えば、式（Ａ）または（Ａ１）の「ｍ３」単位におけるマレイミド部分は、出現する
毎に、ＰＢＲＭの官能基と共有結合を形成しない。
式（Ｉａ）の足場は、ポリマー足場の１個または複数のマレイミド基を介して足場に共
役しているＰＢＲＭをさらに含む。例えば、式（Ｉａ）の足場は、足場の２個またはそれ
超のマレイミド基（例えば、５個まで）を介して足場に共役している１個のＰＢＲＭをさ
らに含む。
ＰＢＲＭは、約４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若しくはこれ超；８０
ｋＤａ若しくはこれ超；１００ｋＤａ若しくはこれ超；１２０ｋＤａ若しくはこれ超；１
４０ｋＤａ若しくはこれ超；１６０ｋＤａ若しくはこれ超；１８０ｋＤａ若しくはこれ超
；または２００ｋＤａ若しくはこれ超、または約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤ
ａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤ
ａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜２００ｋ
Ｄａ、１００〜１８０ｋＤａ、または１００〜１４０ｋＤａ）の分子量を有する。
ＰＢＲＭは、約４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若しくはこれ超；８０
ｋＤａ若しくはこれ超；１００ｋＤａ若しくはこれ超；１２０ｋＤａ若しくはこれ超；１
４０ｋＤａ若しくはこれ超；１６０ｋＤａ若しくはこれ超；１８０ｋＤａ若しくはこれ超
；または２００ｋＤａ若しくはこれ超、または約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤ
ａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤ
ａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜２００ｋ
Ｄａ、１００〜１８０ｋＤａ、または１００〜１４０ｋＤａ）の分子量を有し、スルフヒ
ドリル（すなわち、−ＳＨまたはチオール）基を有する。
ＰＢＲＭは、薬物担持ポリマー共役体のマレイミド基に接続しているＰＢＲＭのスルフ
ヒドリル基を介して薬物担持ポリマー共役体に共役している。例えば、本明細書にて開示
されている式のいずれか、例えば、式（Ｉｂ）、（Ｂ）、（Ｂ１）または（Ｉｅ）の括弧
内の「ｍ３ｂ」単位における硫黄原子（−Ｓ−）を参照されたい。実施形態にて、硫黄原
子はＰＢＲＭの一部であり、ＰＢＲＭ中のスルフヒドリル（チオール）基に由来し、これ
はマレイミド基と反応し、薬物担持ポリマー共役体への付着（スルフィド結合）を形成す
る。
１個のＰＢＲＭは、１個または複数の式（Ｉａ）の薬物を担持したポリマー足場に接続
している。
ＰＢＲＭを含む足場は、式（Ｉｂ）のものであり、
式中、
ＸａおよびＸｂの一方はＨであり、他方はマレイミド遮断部分であるか、あるいはＸａ
およびＸｂは、それらが付着している炭素原子と一緒になって、炭素−炭素二重結合を形
成し、ｍ３ａは、０〜約１７の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ３ａお
よびｍ３ｂの合計は、ｍ３（例えば、整数１〜約１８）であり、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ
、およびｍ３ｂの合計は、約１５〜約３００の範囲であり、ｍ５は、１〜約１０の整数で
ある。
式（Ｉｂ）の足場は、下記のフィーチャの１つまたは複数を含み得る。
ＰＢＲＭは、約４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若しくはこれ超；８０
ｋＤａ若しくはこれ超；１００ｋＤａ若しくはこれ超；１２０ｋＤａ若しくはこれ超；１
４０ｋＤａ若しくはこれ超；１６０ｋＤａ若しくはこれ超；１８０ｋＤａ若しくはこれ超
；または２００ｋＤａ若しくはこれ超、または約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤ
ａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤ
ａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜２００ｋ
Ｄａ、１００〜１８０ｋＤａ、または１００〜１４０ｋＤａ）の分子量を有する。
ＰＢＲＭは、スルフヒドリル（すなわち、−ＳＨまたはチオール）基を有する。
ＰＨＦおよびＰＢＲＭの間に形成される共有結合（例えば、スルフィド結合）の総数（
または付着点の総数）は、１０またはそれ未満である。
式（Ｉｂ）中のＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、ｍ、
ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約１５〜約１５０の範囲であり、ｍ１は、１
〜約７０の整数であり、ｍ２は、１〜約２０の整数であり、ｍ３ａは、０〜約９の整数で
あり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ５は、２〜約８の整数である。
式（Ｉｂ）中のＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、ｍ、
ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約２０〜約１１０の範囲であり、ｍ１は、２
〜約５０の整数であり、ｍ２は、２〜約１５の整数であり、ｍ３ａは、０〜約７の整数で
あり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ５は、２〜約４の整数である。
式（Ｉｂ）中のＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、ｍ、
ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約４０〜約７５の範囲であり、ｍ１は、約５
〜約３５の整数であり、ｍ２は、約３〜約１０の整数であり、ｍ３ａは、０〜約４の整数
であり、ｍ３ｂは、１〜約５の整数であり、ｍ５は、２〜約４の整数である。
ある特定の実施形態にて、アウリスタチンＦヒドロキシルプロピルアミド（「ＡＦ Ｈ
ＰＡ」）とＰＢＲＭの比は、約３０：１、２９：１、２８：１、２７：１、２６：１、２
５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１
７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９
：１、８：１、７：１または６：１でよい。
いくつかの実施形態にて、ＡＦ ＨＰＡとＰＢＲＭの比は、約２０：１、１９：１、１
８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１また
は１０：１でよい。
他の実施形態にて、ＡＦ ＨＰＡとＰＢＲＭの比は、約１８：１、１７：１、１６：１
、１５：１、１４：１、１３：１または１２：１でよい。
ある特定の実施形態にて、ＰＨＦとＰＢＲＭの比は、約１０：１、９：１、８：１、７
：１、６：１、５：１、４：１、３：１、または２：１でよい。
いくつかの実施形態にて、ＰＨＦとＰＢＲＭの比は、約６：１、５：１、４：１、３：
１、または２：１でよい。
他の実施形態にて、ＰＨＦとＰＢＲＭの比は、約４：１、３：１、または２：１でよい
。
マレイミド遮断部分（例えば、ＸａまたはＸｂ）は、マレイミド基と式（ＩＩ）のチオ
ール含有化合物との反応によって、２個のオレフィン炭素原子の１つに共有結合的に付着
することができる部分であり、
Ｒ９０−（ＣＨ２）ｄ−ＳＨ
（ＩＩ）
式中、
Ｒ９０は、ＮＨＲ９１、ＯＨ、ＣＯＯＲ９３、ＣＨ（ＮＨＲ９１）ＣＯＯＲ９３または
置換フェニル基であり、
Ｒ９３は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ９１は、水素、ＣＨ３またはＣＨ３ＣＯであり、
ｄは、１〜３の整数である。
一実施形態にて、式（ＩＩ）のマレイミド遮断化合物は、システイン、Ｎ−アセチルシ
ステイン、システインメチルエステル、Ｎ−メチルシステイン、２−メルカプトエタノー
ル、３−メルカプトプロパン酸、２−メルカプト酢酸、メルカプトメタノール（すなわち
、ＨＯＣＨ２ＳＨ）、ベンジル、チオール（フェニルは、１個若しくは複数の親水性置換
基で置換されている）、または３−アミノプロパン−１−チオールでよい。フェニル上の
１個若しくは複数の親水性置換基は、ＯＨ、ＳＨ、メトキシ、エトキシ、ＣＯＯＨ、ＣＨ
Ｏ、ＣＯＣ１〜４アルキル、ＮＨ２、Ｆ、シアノ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ３Ｈなどを含む。
別の態様において、マレイミド遮断基は、−Ｓ−（ＣＨ２）ｄ−Ｒ９０であり、
ここで、Ｒ９０は、ＯＨ、ＣＯＯＨ、またはＣＨ（ＮＨＲ９１）ＣＯＯＲ９３であり、
Ｒ９３は、水素またはＣＨ３であり、
Ｒ９１は、水素またはＣＨ３ＣＯであり、
ｄは、１または２である。
別の実施形態にて、マレイミド遮断基は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨであ
る。
いくつかの実施形態にて、マレイミド遮断基は、水溶性である。
式（Ｉｂ）の足場は、式（Ｂ）または（Ｂ１）のものであり、
式中、
ＰＨＦは、５ｋＤａ〜１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍは、１〜７５の整数であり
、ｍ１は、約５〜約３５の整数であり、ｍ２は、約３〜約１０の整数であり、ｍ３ａは、
０〜約４の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約５の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよ
びｍ３ｂの合計は、約４０〜約７５の範囲であり、ｍ５は、２〜約４の整数である。
ある特定の実施形態にて、式（Ｂ）または（Ｂ１）において、付着点の総数は、１０ま
たはそれ未満である。
本発明はまた、式（Ｉｃ）のポリマー足場を提供し、
式中、
足場は、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するＰＨＦを含み、Ｘは、ＣＨ
２、Ｏ、またはＮＨであり、ｍは、１〜約３００の整数であり、ｍ６は、２〜約１８０の
整数であり、ｍ３は、１〜約１８の整数であり、ｍ、ｍ６、およびｍ３の合計は、約１５
〜約３００の範囲である。
式（Ｉｃ）の足場は、下記のフィーチャの１つまたは複数を含むことができる。
式（Ｉｃ）におけるＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ、ｍ６およびｍ３の合計は、約１５〜約１５０の範囲であり、ｍ６は、２〜約９０の整
数であり、ｍ３は、１〜約１０の整数である。
式（Ｉｃ）におけるＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ、ｍ６およびｍ３の合計は、約２０〜約１１０の範囲であり、ｍ６は、約４〜約６５の
整数であり、ｍ３は、１〜約８の整数である。
式（Ｉｃ）におけるＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有するとき、
ｍ、ｍ６およびｍ３の合計は、約４０〜約７５の範囲であり、ｍ６は、約８〜約４５の整
数であり、ｍ３は、１〜約５の整数である。
式（Ｉｃ）の「ｍ３」単位におけるマレイミド部分は、出現する毎に、ＰＢＲＭの官能
基と共有結合を形成しない。
式（Ｉｃ）の足場は、式（Ｃ）または（Ｃ１）のものであり、
式中、
ＰＨＦは、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍは、１〜約７５の整数
であり、ｍ６は、約８〜約４５の整数であり、ｍ３は、１〜約５の整数であり、ｍ、ｍ６
およびｍ３の合計は、約４０〜約７５の範囲である。
式（Ｃ）または（Ｃ１）の「ｍ３」単位におけるマレイミド部分は、出現する毎に、Ｐ
ＢＲＭの官能基と共有結合を形成しない。
式（Ｉｃ）の足場は、ＰＨＦに接続した１個または複数の薬物分子（「Ｄ」）をさらに
含むことができる。
一実施形態にて、式（Ｉｃ）のＤ含有足場は、式（Ｉｄ）のものである。
本明細書にて開示されている式、例えば、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）
、（Ｉｅ）、（Ａ）、（Ａ１）、（Ｂ）、（Ｂ１）、（Ｃ）、（Ｃ１）または（Ｅ）にお
いて、ポリアセタール単位の間の切断またはギャップは、単位を任意の順序で互いに接続
することができることを示す。さらに、本明細書にて開示する特定の式（例えば、表Ｄに
おけるもの）において、角括弧の構造、すなわち、ポリアセタールモノマー単位は、例示
を単純化する目的のために、反復単位（例えば、ｍ１、ｍ２、ｍ３など）の数が伴わない
が、それぞれ１個のみの反復単位を有すると解釈すべきではない。
ＰＢＲＭの例には、これらに限定されないが、完全長抗体、例えば、ＩｇＧおよびＩｇ
Ｍ、抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＦｃ、ラクダ科の動物の抗
体、Ｆａｂ２など、低分子タンパク質、およびペプチドが含まれる。
一実施形態にて、ＰＢＲＭは、完全長抗体またはヒト化抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ抗体であ
る。例えば、ＰＢＲＭは、ヒト癌胎児性のタンパク質５Ｔ４を標的とする免疫グロブリン
またはその機能的なフラグメントを含むリガンド（ＬＧ）である。
さらなる実施形態にて、抗新生物療法において有用な治療薬および標的化共役体(targe
ting conjugate)を提供する。治療薬および標的化共役体は、
（ａ）ヒト癌胎児性のタンパク質５Ｔ４を標的とする免疫グロブリンまたはその機能的
なフラグメントを含むリガンド（ＬＧ）（リガンド（例えば、いくつかの実施形態にて、
約４０ｋＤａ若しくはこれ超の分子量を有する）は、（ｂ）のポリマー足場のｍ５との結
合を有し、ｍ５は、１〜約１０である）と、
（ｂ）約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリ（１−ヒドロキシメチル
エチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含むポリマー足場（ポリマー足場
は、下記のように定義するランダムに配置されたモノマー単位ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、
およびｍ３ｂを含む）と
を含み、
（ｉ）ｍ３ａ：
ｍ３ａは、存在しないものであるか、または１〜約１７個のモノマーｍ３ａ単位がポリ
マー足場中に存在するものであり、各単位において、ＸａおよびＸｂは、（Ａ）一方はＨ
であり、他方はマレイミド遮断部分であるか、または（Ｂ）ＸａおよびＸｂは、それらが
付着している炭素原子と一緒になって、炭素−炭素二重結合を形成することから独立に選
択され、
（ｉｉ）ｍ３ｂ：
スルフィド結合（−Ｓ−）は、ＬＧへの付着点を形成し、１〜約８個のモノマーｍ３ｂ
単位がポリマー足場中に存在するものであり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、１〜１８で
あり、硫黄原子は、リガンド（ＬＧ）の部分であり、
（ｉｉｉ）ｍ：
１〜約３００個のモノマーｍ単位がポリマー足場中に存在するものであり、
（ｉｖ）ｍ１：
１〜約１４０個のモノマーｍ１単位がポリマー足場中に存在するものであり、
（ｖ）ｍ２：
１〜約４０個のモノマーｍ２単位がポリマー足場中に存在するものであり、モノマー単
位ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂのそれぞれにおいて、Ｘは、ＣＨ２、Ｏまたは
ＮＨであり、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約１５〜約３００の範囲
であり、Ｄは、出現する毎に独立に、≦５ｋＤａの分子量を有する治療剤であり、Ｄおよ
びカルボニル基の間の
は、カルボニル基へのＤの直接的また間接的な付着を表す。
一実施形態にて、治療薬および標的化共役体は、下記の構造を有し、
式中、
ＰＨＦは、５ｋＤａ〜１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍは、１〜７５であり、ｍ１
は、約５〜約３５であり、ｍ２は、約３〜約１０であり、ｍ３ａは、０〜約４であり、ｍ
３ｂは、１〜約５であり、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約４０〜約
７５であり、ｍ５は、２〜約４である。
さらなる実施形態にて、抗新生物療法において有用な治療用抗５Ｔ４薬物の標的化共役
体(therapeutic anti-5T4 drug targeting conjugate)を提供する。共役体は、約２ｋＤ
ａ〜約４０ｋＤａの分子量を有するポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチ
ル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含むポリマー足場を含み、共役体は、下記の構造のもので
あり、
式中、ｍ５は、１〜１０であり、ｍは、１〜約３００の整数であり、ｍ１は、１〜約１
４０の整数であり、ｍ２は、１〜約４０の整数であり、ｍ３ａは、０〜約１７の整数であ
り、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、１〜約１８の整数
であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３の合計は、約１５〜約３００の範囲であり、Ｘは、Ｎ
Ｈであり、ＸａまたはＸｂの一方はＨであり、他方はマレイミド遮断部分であり、Ｄは、
出現する毎に独立に、≦５ｋＤａの分子量を有する治療剤であり、Ｄおよびカルボニル基
の間の
は、カルボニル基へのＤの直接的また間接的な付着を表し、ＡＮＴＩ−５Ｔ４は、ヒト癌
胎児性抗原５Ｔ４について選択的である免疫グロブリンまたはその機能的なフラグメント
を含む抗５Ｔ４リガンドである。例えば、抗５Ｔ４の分子量は、少なくとも約４０ｋＤａ
である。
またさらなる実施形態にて、互いにランダムに接続し得る下で示す単位を含む抗５Ｔ４
およびポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）
ポリマー足場を含む、抗新生物療法において有用な治療薬および標的化共役体を提供し、
式中、
ＡＮＴＩ−５Ｔ４は、配列番号Ａと示されるアミノ配列を含む単鎖抗体構築体であり、
ＰＨＦは、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ポリマー足場と抗５Ｔ４抗
体の平均比は、約２：１〜約３：１または約３：１〜約４：１であり、ＡＦ ＨＰＡと抗
５Ｔ４抗体の比は、約１２：１〜約１８：１である。
いくつかの実施形態にて、本発明に係るポリマー足場は、ランダムに配置されたモノマ
ー単位ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂを含有する。いくつかの実施形態にて、本
発明に係るポリマー足場は、ランダムに配置されたモノマー単位ｍ、ｍ１、ｍ２、および
ｍ３ｂを含有する。
いくつかの実施形態にて、本発明に係るポリマー足場は、ランダムに配置されたモノマ
ー単位ｍ、ｍ１、ｍ７、ｍ３ａ、およびｍ３ｂを含有する。いくつかの実施形態にて、本
発明に係るポリマー足場は、ランダムに配置されたモノマー単位ｍ、ｍ１、ｍ７、および
ｍ３ｂを含有する。
別の態様において、本発明は、共役体を含む組成物、これらの調製のための方法、およ
びこれらに限定されないが、がんを含めた様々な障害の処置におけるその使用方法を提供
する。標的がんは、肛門、星状細胞腫、白血病、リンパ腫、頭頸部、肝臓、精巣、子宮頸
部、肉腫、血管腫、食道、眼、喉頭、口、中皮腫、皮膚、骨髄腫、口腔、直腸、咽喉、膀
胱、乳房、子宮、卵巣、前立腺、肺、結腸、膵臓、腎臓、または胃のがんでよい。
本発明はさらに、本明細書に記載のポリマー足場または共役体、および薬学的に許容さ
れる担体を含む医薬組成物に関する。
さらに別の態様において、本発明は、障害を疑われる対象において障害を診断する方法
に関する。この方法は、有効量の本明細書に記載の共役体を、障害を有すると疑われる対
象に投与すること、または対象が標的抗原または受容体を発現しているかを決定するため
に、アッセイを行って、対象からの試料において標的抗原／受容体を検出することを含む
。
別段の定義がない限り、本明細書にて使用される全ての技術用語および科学用語は、本
発明が属する技術分野における当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。明細書
にて、単数形はまた、文脈によって明らかにそれ以外のことの指示がない限り複数形を含
む。本明細書に記載のものと同様または同等な方法および材料を本発明の実施または試験
にて使用できるが、適切な方法および材料を下に記載する。本明細書にて記述する全ての
公開資料、特許出願、特許および他の参照文献は、参照により組み込む。本明細書にて引
用した参照文献は、特許請求された本発明に対する従来技術であると認められない。矛盾
がある場合は、定義を含めた本明細書が優先する。さらに、材料、方法および実施例は単
に例示のためであり、限定的なものではない。
本発明の利点の１つは、本明細書に記載のタンパク質−ポリマー−薬物共役体またはポ
リマー足場が、送達される薬物の生体利用効率を非常に増強させ、かつ／またはポリマー
担体に付着したタンパク質の生体利用効率を増強させることである。本発明の別の利点は
、共役体の薬物の添加量の増加によって、本明細書に記載のタンパク質−ポリマー−薬物
共役体の有効性が、増加するか、または少なくとも実質的に同じに留まることである。本
発明のさらに別の利点は、タンパク質のシステイン部分へのチオール共役を介したタンパ
ク質−ポリマー共役体が、実質的に改善された安定性を示すことである。本発明の他のフ
ィーチャおよび利点は、下記の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
１日目に単回投与として、ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ（トラスツズマブ）；２．５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇでの実施例４または実施例１３に記載したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＩＶ投与後の、ＢＴ４７４腫瘍を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。 １日目に単回投与として、ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ（トラスツズマブ）；２．５ｍｇ／ｋｇでの実施例４または実施例７に記載したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＩＶ投与後の、ＪＩＭＴ−１細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。 １日目に単回投与として、ビヒクル；２０ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ（リンツズマブ）；または２０ｍｇ／ｋｇでの実施例８に記載したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＩＶ投与後の、ＨＬ−６０細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。 １日目に単回投与として、ビヒクル；２０ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ（トラスツズマブ）；２０ｍｇ／ｋｇでのＫａｄｃｙｌａ（登録商標）；または２ｍｇ／ｋｇ、０．６７ｍｇ／ｋｇ若しくは０．３ｍｇ／ｋｇでの実施例１４に記載したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＩＶ投与後の、ＪＩＭＴ−１細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。 １日目に単回投与として、ビヒクル、または３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ若しくは０．３ｍｇ／ｋｇでの実施例１５に記載したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＩＶ投与後の、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。 １日目に単回投与として、ビヒクル、０．６７ｍｇ／ｋｇでの実施例１４に記載した、または３ｍｇ／ｋｇでの実施例１６に記載したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＩＶ投与後の、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。 １日目に単回投与として、ビヒクル、０．６７ｍｇ／ｋｇでの実施例３３に記載した、１ｍｇ／ｋｇでの実施例４３Ａに記載した、または０．６７ｍｇ／ｋｇ若しくは３ｍｇ／ｋｇでの実施例４３Ｃに記載したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＩＶ投与後の、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。 １日目に単回投与として、ビヒクル、０．２２ｍｇ／ｋｇでの実施例５Ａに記載したポリマー−薬物共役体；またはそれぞれ２ｍｇ／ｋｇでの実施例３０Ｂ若しくは実施例３０Ｃに記載したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体；実施例４０、０．６７ｍｇ／ｋｇ、または実施例４３Ｂ、１ｍｇ／ｋｇ；または実施例３８、１０ｍｇ／ｋｇ；または実施例３９、１０ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与後の、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。それぞれ、毎週１回３週間投与。 １日目に単回投与として、ビヒクル；１ｍｇ／ｋｇでの実施例４０および２ｍｇ／ｋｇでの実施例４３ＣのＩＶ投与後の、ＪＩＭＴ−１細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応を示す（各群についてｎ＝１０）。 実施例４に記載されているＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の５ｍｇ／ｋｇでのＩＶボーラス投与後（３匹の動物／時点）の、ＢＴ４７４腫瘍を皮下に播種されたマウスにおける共役ＡＦ ＨＰＡ（総）、非共役ＡＦ ＨＰＡおよびＡＦ（「遊離ＡＦ−ＨＰＡ」と表される）、およびトラスツズマブについての血漿ＰＫを示す。 表面プラズモン共鳴によって測定した、ヒト５Ｔ４細胞外ドメインへの５Ｔ４特異的ｓｃＡＤＣの親和性および反応速度を例示する。結合親和性（＜３０ｐＭのＫＤ）は、非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃの結合親和性と同様である。 Ａ４３１腫瘍異種移植片モデルにおいて測定したような、５Ｔ４特異的ｓｃＡＤＣの抗腫瘍の有効性を例示する。腫瘍容積は、特定の日に決定する。値は平均±ＳＥＭとして表す。統計解析は、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン５）を使用した、二元配置ＡＮＯＶＡ、それに続いてボンフェローニ事後試験によって行った。 ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ ５Ｔ４を過剰発現しているトランスフェクタント腫瘍異種移植片を担持するヌードマウスにおける５Ｔ４特異的ｓｃＡＤＣの抗腫瘍の有効性を例示する。値は平均±ＳＥＭとして表す。統計解析は、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン５）を使用した、二元配置ＡＮＯＶＡ、それに続いてボンフェローニ事後試験によって行った。
本発明は、新規なタンパク質−ポリマー−薬物共役体、共役体を作製するためのポリマ
ー足場、共役体またはポリマー足場を作製するための合成法、これらを含有する医薬組成
物、および共役体の様々な使用を提供する。
また、本発明は、新規なポリマー−薬物共役体、共役体を作製するための合成法、これ
らを含有する医薬組成物、および共役体の様々な使用を提供する。
さらに、本発明は、新規な薬物誘導体、誘導体を作製するための合成法、これらを含有
する医薬組成物、および薬物誘導体の様々な使用を提供する。
［定義／用語法］
本明細書にて、本発明に係る特定の化合物および特定の官能基の定義をより詳細に記載
する。本発明の目的のために、化学元素は元素周期表、ＣＡＳバージョン、Ｈａｎｄｂｏ
ｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７５版、内表紙によって
同定し、特定の官能基は一般的にそこに記載されているように定義する。さらに、有機化
学の一般的原理、ならびに特定の機能的部分および反応性は、その内容全体を参照により
本明細書中に組み込む「Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒ
ｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：
１９９９に記載されている。さらに、本明細書に記載のような合成法は種々の保護基を
利用することを当業者は認識する。
以下の説明および特許請求の範囲における冠詞「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」の使
用は、本明細書にて他に示さない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、単
数および複数の両方をカバーすると解釈される。用語「含む」、「有する」、「化学式で
ある」におけるような「である」、「含めた」および「含有する」は、他に断らない限り
、オープンな用語であると解釈される（すなわち、「これらに限定されないが、以下を含
めた」を意味する）。例えば、特定の式のポリマー足場は、式に示す全てのモノマー単位
を含み、式に示されないさらなるモノマー単位をまた含み得る。さらに、「含む」または
別の開放型の用語が一実施形態にて使用されるときはいつでも、同じ実施形態は、中間的
用語「から本質的になる」または閉鎖的用語「からなる」を使用して、より狭く特許請求
することができることを理解すべきである。
用語「約(about)」、「概ね(approximately)」または「およそ(approximate)」は、数
値に関連して使用されるとき、値の集まりまたは範囲が含まれることを意味する。例えば
、「約Ｘ」は、Ｘの±２０％、±１０％、±５％、±２％、±１％、±０．５％、±０．
２％、または±０．１％である値の範囲を含み、ここで、Ｘは、数値である。一実施形態
にて、用語「約」は、特定の値の５％超または未満である一連の値を指す。別の実施形態
にて、用語「約」は、特定の値の２％超または未満である一連の値を指す。また、別の実
施形態にて、用語「約」は、特定の値の１％超または未満である一連の値を指す。
値の範囲の記載は、本明細書にて他に示さない限り、範囲内に入るそれぞれの別々の値
を個々に指す簡単かつ明瞭な表現方法としての役割を果たすことを単に意図し、それぞれ
の別々の値は、本明細書にて個々に記載されているかのように明細書に組み込む。本明細
書にて使用される範囲は、他に特定しない限り、範囲の２つの限度を含む。例えば、「ｘ
は整数１〜６である」および「ｘは１〜６の整数である」という表現は、両方とも「ｘが
１、２、３、４、５、または６である」ことを意味し、すなわち、用語「Ｘ〜Ｙ」および
「Ｘ〜Ｙの範囲」は、ＸおよびＹならびにそれらの間の整数を含む。
本明細書に記載の全ての方法は、本明細書にて他に示さない限り、または他に文脈によ
って明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で行うことができる。本明細書にて提供
するありとあらゆる例、または例示的な言語（例えば、「など」）の使用は、本発明をよ
り良好に例示することを単に意図し、明確にその他の点でクレームしない限り、特許請求
の範囲に対する限定と解釈されない。明細書における言語は、任意の特許請求していない
要素が特許請求の範囲にとって絶対必要であることを示すと解釈されない。
用語「抗体(Antibody)」は、免疫グロブリンを含む完全長抗体または抗体の機能的なフ
ラグメントを指す。「機能的なフラグメント(functional fragment)」は、免疫グロブリ
ンまたは抗体の十分なポーションが提供され、その部分が、その標的細胞集団、例えばヒ
ト癌胎児性抗原についての細胞表面分子と効果的に結合または複合体化することを意味す
る。
本明細書にて、ヒト癌胎児性抗原は、例えば、腫瘍関連タンパク質、例えば、アルファ
フェトプロテイン、癌胎児性抗原、前立腺特異的抗原、および癌胎児性抗原タンパク質（
未熟ラミニン受容体タンパク質としてまた公知であり、例えば、腸癌および腎癌と関連付
けられてきた）を含む。
免疫グロブリンは、当業者に公知の技術を使用して、精製するか、組換え技術によって
生じさせるか、合成的に生じさせるか、またはこれらの組合せであり得る。ＩｇＧ抗体内
の、またはＩｇＧ抗体に由来する免疫グロブリンは、本発明における使用のために特に適
している一方、クラスまたはサブクラスのいずれかからの免疫グロブリン、例えば、Ｉｇ
Ｇ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥを選択し得る。適切には、免疫グロブリンは、
これらに限定されないが、抗原上の特異的エピトープに特異的に結合することができる、
ＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、２、３および４）を含めたクラスＩｇＧ、またはクラスＩ
ｇＭのものである。抗体は、自然源または組換え源に由来する、損なわれていない免疫グ
ロブリンでよく、損なわれていない免疫グロブリンの免疫反応性ポーションでよい。抗体
は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、細
胞内の抗体(intracellular antibodies)（「細胞内抗体(intrabodies)」）、組換え抗体
、抗イディオタイプ抗体、ドメイン抗体、線状抗体、多特異性抗体、抗体フラグメント、
例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ）３、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（
ａｂ’）２、単鎖可変フラグメント抗体（ｓｃＦｖ）、タンデム／ビス−ｓｃＦｖ、Ｆｃ
、ｐＦｃ’、ｓｃＦｖＦｃ（またはｓｃＦｖ−Ｆｃ）、ジスルフィドＦｖ（ｄｓｆｖ）、
二重特異性抗体（ｂｃ−ｓｃＦｖ）、例えば、ＢｉＴＥ抗体；ラクダ科の動物の抗体、表
面再構成抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ＮＡＮＯＢＯ
ＤＹ（登録商標）としてまた公知である）、キメラ抗体、少なくとも１つのヒト定常領域
を含むキメラ抗体、二重親和性抗体、例えば、二重親和性再標的化タンパク質（ＤＡＲＴ
（商標））、これらに限定されないが、ミニ抗体、二特異性抗体、三特異性抗体または三
重特異性抗体、四特異性抗体などを含めた二価（または二価の）単鎖可変フラグメント（
ジ−ｓｃＦｖ、ビ−ｓｃＦｖ）、および多価抗体を含めて種々の形態で存在し得る。「抗
体フラグメント(Antibody fragment)」は、その標的、すなわち、抗原結合領域に結合す
る免疫グロブリン分子の可変領域の少なくとも１ポーションを指す。本明細書にて、用語
「抗体(antibody)」は、他に特定しない限り、完全長抗体および抗体フラグメントの両方
を指す。
用語「タンパク質をベースとする認識分子(Protein based recognition-molecule)」ま
たは「ＰＢＲＭ」は、細胞表面マーカーまたは受容体を認識し、これに結合する分子、例
えば、膜貫通タンパク質、表面固定化されたタンパク質またはプロテオグリカンを指す。
ＰＢＲＭの例には、これらに限定されないが、抗体（例えば、トラスツズマブ、セツキシ
マブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、エプラツズマブ、ベルツズマブ、ラベツズマブ、Ｂ
７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ３、ＣＡ１２５、ＣＤ３３、ＣＸＣＲ２、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ１、Ｆ
ＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＨＥＲ２、ＮａＰｉ２ｂ、ｃ−Ｍｅｔ、ＮＯＴＣＨ
１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＤ−Ｌ１、ｃ−Ｋｉｔ、ＭＵＣ１お
よび抗５Ｔ４）またはペプチド（ＬＨＲＨ受容体標的化ペプチド、ＥＣ−１ペプチド）、
リポカリン、例えば、アンチカリン、タンパク質、例えば、インターフェロン、リンフォ
カイン、増殖因子、コロニー刺激因子など、ペプチドまたはペプチド模倣物などが含まれ
る。タンパク質をベースとする認識分子はまた、修飾ポリマー共役体を特定の細胞、組織
または場所に標的化することに加えて、標的細胞または経路に対する特定の治療効果、例
えば、抗増殖性（細胞増殖抑制性および／または細胞毒性）活性を有し得る。タンパク質
をベースとする認識分子は、少なくとも１個の化学的な反応性基、例えば、−ＣＯＯＨ、
第一級アミン、第二級アミン−ＮＨＲ、−ＳＨ、または化学的反応性アミノ酸部分若しく
は側鎖、例えば、チロシン、ヒスチジン、システイン、若しくはリシンを含むか、あるい
はこれらを含むように工学処理し得る。一実施形態にて、ＰＢＲＭは、所与の標的細胞集
団についての細胞表面分子、例えば、細胞表面受容体または抗原と特異的に結合または複
合体化するリガンド（ＬＧ）または標的化部分であり得る。リガンドとその受容体との特
異的結合、または複合体化に続いて、細胞はリガンドまたはリガンド−薬物−共役体の取
込みを可能とし、これは次いで細胞中に内部移行される。本明細書にて、細胞表面分子に
「特異的に結合するか若しくは複合体化する(specifically binds or complexes with)」
またはこれを「標的(targets)」とするリガンドは、分子間力によって細胞表面分子と優
先的に会合する。例えば、リガンドは、約５０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、または５００ｐ
Ｍ未満のＫｄを伴って細胞表面分子と優先的に会合することができる。細胞表面分子への
リガンドの結合親和性を測定するための技術は周知である。例えば、１つの適切な技術は
、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）と称される。一実施形態にて、リガンドは標的化のため
に使用され、リガンドが送達する薬物と分離されると、検出可能な治療効果を有さない。
別の実施形態にて、リガンドは、標的化部分として、および治療剤または免疫調節剤（例
えば、活性薬物またはプロドラッグの活性を増強する）の両方として機能する。
用語「生体適合性(Biocompatible)」は、本明細書にて、体液または生細胞または組織
と接触している間に、最小の破壊的効果または宿主応答効果を発揮する化合物を説明する
ことを意図する。このように、生体適合性基は、本明細書にて、上記および本明細書にて
に定義されているような生体適合性という用語の定義内に入る、脂肪族、シクロアルキル
、ヘテロ脂肪族、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール部分を指す。
また、用語「生体適合性」は、本明細書にて、このような相互作用が特に望ましくない限
り、化合物が認識タンパク質、例えば、天然に生じた抗体、細胞タンパク質、生物系の細
胞および他の構成要素との最小の相互作用を示すことを意味する。このように、上記最小
の相互作用を特にもたらすことを意図する物質および官能基、例えば、薬物およびプロド
ラッグは、生体適合性であると考えられる。好ましくは（細胞毒性であることが意図され
る化合物、例えば、抗新生物剤を除いて）化合物は、意図する全身的なｉｎ ｖｉｖｏで
の濃度と同様の濃度でのｉｎ ｖｉｔｒｏでの正常細胞へのこれらの添加が、ｉｎ ｖｉ
ｖｏでの化合物の半減期（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏで投与された化合物の５０％が排出／
クリアランスされるのに必要とされる期間）と等しい時間の間に、１％と等しい、または
これ未満の細胞死をもたらし、ｉｎ ｖｉｖｏでのこれらの投与が、最小および医学的に
許容される炎症、異物反応、免疫毒性、化学毒性および／または他のこのような有害効果
を誘発する場合、「生体適合性」である。上記の文章において、用語「正常細胞(nomal c
ells)」は、試験を受ける化合物により破壊されるか、またはその他の点で有意に影響を
与えられることを意図されない細胞を指す。
用語「生分解性(Biodegradable)」：本明細書にて「生分解性」ポリマーは、ｉｎ ｖ
ｉｖｏでの生物学的処理の影響を受けやすいポリマーである。本明細書にて、「生分解性
」化合物または部分は、細胞によって取り込まれるとき、リソソームの若しくは他の化学
機構によって、または細胞に対する有意な毒性効果を伴わずに細胞が再使用できるか、若
しくは処分することができる構成要素への加水分解によって分解することができるもので
ある。用語「生物切断可能な(biodegradable)」は、本明細書にて「生分解性」と同じ意
味を有する。分解フラグメントは好ましくは、器官若しくは細胞の過負荷、またはｉｎ
ｖｉｖｏでのこのような過負荷によってもたらされる病的過程、または他の有害効果を僅
かに誘発するか、誘発しない。生分解プロセスの例には、酵素加水分解および非酵素加水
分解、酸化および還元が含まれる。本明細書に記載の生分解性タンパク質−ポリマー−薬
物共役体（またはこれらの構成要素、例えば、生分解性ポリマー担体、および担体および
抗体の間のリンカー、または薬物分子）の非酵素加水分解のための適切な条件は、例えば
、リソソームの細胞内区画の温度およびｐＨでの水への生分解性の共役体の曝露を含む。
いくつかのタンパク質−ポリマー−薬物共役体（またはこれらの構成要素、例えば、生分
解性ポリマー担体、および担体および抗体の間のリンカー、または薬物分子）の生分解は
また、細胞外で、例えば、動物体の低ｐＨ領域、例えば、分解促進因子を放出する活性化
マクロファージまたは他の細胞の近傍にある炎症領域において増強することができる。あ
る特定の好ましい実施形態にて、ｐＨ約７．５でのポリマー担体の有効なサイズは、１〜
７日に亘り検出可能な程度に変化せず、少なくとも数週間は当初のポリマーサイズの５０
％以内に留まる。他方、ｐＨ約５で、ポリマー担体は好ましくは、１〜５日に亘り検出可
能な程度に分解し、２週間から数カ月の時間枠以内で低分子量フラグメントに完全に変換
される。このような試験におけるポリマーの完全性は、例えば、サイズ排除ＨＰＬＣによ
って測定することができる。より速い分解が場合によって好ましくあり得るが、一般的に
ポリマーは、細胞によるポリマーフラグメントの代謝または排泄の速度を超えない速度で
、細胞中で分解することがより望ましくてもよい。好ましい実施形態にて、ポリマーおよ
びポリマーの生分解副生成物は、生体適合性である。
用語「生体利用効率(Bioavailability)」：「生体利用効率」は、対象に投与される所
与の量の薬物または化合物の全身的な利用効率（すなわち、血液／血漿レベル）を指す。
生体利用効率は、投与された剤形から全身循環に達する薬物または化合物の時間（速度）
および総量（程度）の両方の測定を示す絶対的な用語である。
用語「マレイミド遮断化合物(Maleimid blocking compound)」は、本明細書にて、マレ
イミドと反応して、これをスクシンイミドに変換することができる化合物を指し、用語「
マレイミド遮断部分(maleimide blocking moiety)」は、変換によってスクシンイミドに
付着する化学部分を指す。ある特定の実施形態にて、マレイミド遮断化合物は、マレイミ
ドと反応するための末端チオール基を有する化合物である。ある特定の実施形態にて、マ
レイミド遮断化合物は、マレイミドとの反応が水溶液中で起こることができるように水溶
性である。例えば、このように得られたマレイミド遮断部分は、水溶性または親水性であ
る。一実施形態にて、マレイミド遮断化合物は、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、
システインメチルエステル、Ｎ−メチルシステイン、２−メルカプトエタノール、３−メ
ルカプトプロパン酸、２−メルカプト酢酸、メルカプトメタノール（すなわち、ＨＯＣＨ
２ＳＨ）、ベンジル、チオール（フェニルは、１個若しくは複数の親水性置換基で置換さ
れている）、または３−アミノプロパン−１−チオールである。
用語「親水性(Hydrophilic)」：「親水性」は、例えば、置換基を親水性または水溶性
とするポリマーのモノマー単位上またはマレイミド遮断部分上の置換基に関するとき、当
技術分野でこの用語の一般の意味と本質的に異ならず、イオン化可能、極性、若しくは極
性化可能な原子を含有するか、またはその他の点で水分子によって溶媒和し得る、化学的
部分を表す。このように、親水基は、本明細書にて、上記に定義されているような親水性
という用語の定義内に入る、脂肪族、シクロアルキル、ヘテロ脂肪族、ヘテロシクロアル
キル、アリールまたはヘテロアリール部分を指す。適切である特定の親水性有機部分の例
には、これらに限定されないが、約１〜１２個の原子の範囲の原子の鎖を含む脂肪族また
はヘテロ脂肪族基、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミン、カルボキシル、アミド
、カルボキシルエステル、チオエステル、アルデヒド、ニトリル、イソニトリル、ニトロ
ソ、ヒドロキシルアミン、メルカプトアルキル、複素環、カルバメート、カルボン酸およ
びこれらの塩、スルホン酸およびこれらの塩、スルホン酸エステル、リン酸およびこれら
の塩、リン酸エステル、ポリグリコールエーテル、ポリアミン、ポリカルボキシレート、
ポリエステルおよびポリチオエステルが含まれる。ある特定の実施形態にて、親水性置換
基は、カルボキシル基（ＣＯＯＨ）、アルデヒド基（ＣＨＯ）、ケトン基（ＣＯＣ１〜４
アルキル）、メチロール（ＣＨ２ＯＨ）またはグリコール（例えば、ＣＨＯＨ−ＣＨ２Ｏ
ＨまたはＣＨ−（ＣＨ２ＯＨ）２）、ＮＨ２、Ｆ、シアノ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ３Ｈなどを含
む。
用語「親水性」は、本発明に係るポリマーに関するとき、当技術分野でのこの用語の用
法とは一般的に異ならない、上記に定義されているような親水性の官能基を含むポリマー
を表す。好ましい実施形態にて、親水性ポリマーは、水溶性ポリマーである。ポリマーの
親水性は、水和エネルギーの決定によって直接測定することができ、あるいは２つの液相
の間の調査によって、または公知の疎水性を有する固相、例えば、Ｃ４若しくはＣ１８上
のクロマトグラフィによって決定することができる。
用語「ポリマー担体(Polymeric Carrier)」：「ポリマー担体」は、本明細書にて、示
されたリンカーを有する１個若しくは複数の薬物分子および／または示されたリンカーを
有する１個若しくは複数のＰＢＲＭに共有結合的に付着するのに適しているか、あるいは
これに共有結合的に付着することができるポリマーまたは修飾ポリマーを指す。
用語「生理学的条件(Physiological conditions)」：「生理学的条件」は、本明細書に
て、生体組織の細胞外液中で遭遇する可能性がある一連の化学的（例えば、ｐＨ、イオン
強度）および生化学的（例えば、酵素濃度）条件を指す。大部分の正常組織について、生
理学的ｐＨは、約７．０〜７．４の範囲である。循環血漿および正常な間質液は、正常な
生理学的条件の典型的な例を表す。
用語「多糖(Polysaccharide)」、「炭水化物(carbohydrate)」または「オリゴ糖(oligo
saccharide)」：「多糖」、「炭水化物」または「オリゴ糖」は、当技術分野にて公知で
あり、一般的に、化学式（ＣＨ２Ｏ）ｎ（式中、一般的に、ｎ＞２である）を有する物質
、およびこれらの誘導体を指す。炭水化物は、ポリヒドロキシアルデヒド若しくはポリヒ
ドロキシケトン、または単純な化学的変換、例えば、加水分解、酸化若しくは還元による
このような物質への変化である。典型的には、炭水化物は、環状アセタールまたはケター
ルの形態（例えば、グルコースまたはフルクトース）で存在する。これらの環状単位（単
糖）は互いに接続して、僅かな単糖単位（オリゴ糖）またはいくつかの単糖単位（多糖）
を有する分子を形成し得る。しばしば、明確な数、タイプおよび位置付けの単糖単位を有
する炭水化物はオリゴ糖と称され、一方、可変の数および／または位置付けの単糖単位の
分子の混合物からなる炭水化物は多糖と称される。用語「多糖」、「炭水化物」、および
「オリゴ糖」は、本明細書にて互換的に使用される。多糖は、天然糖（例えば、グルコー
ス、フルクトース、ガラクトース、マンノース、アラビノース、リボース、およびキシロ
ース）ならびに／または天然に生じた糖の誘導体（例えば、２’−フルオロリボース、２
’−デオキシリボース、およびヘキソース）を含み得る。
用語「薬物(Drug)」：「薬物」は、本明細書にて、生物活性があり、それを必要とする
対象への投与（例えば、活性医薬成分）に続いて所望の生理学的な効果を実現する化合物
を指す。
用語「プロドラッグ(Prodrug)」：「プロドラッグ」は、本明細書にて、活性薬物の前
駆体、すなわち活性薬物に変換することができる化合物を指す。典型的には、このような
プロドラッグは、ｉｎ ｖｉｖｏでの処理に供され、これによって薬物は生理学的に活性
な形態に変換される。場合によって、プロドラッグはそれ自体が所望の生理学的な効果を
有し得る。所望の生理学的な効果は、例えば、治療的、細胞毒性、免疫調節性等であり得
る。
用語「細胞毒性(Cytotoxic)」：「細胞毒性」は、本明細書にて、細胞または選択した
細胞集団（例えば、がん細胞）に対して毒性であることを意味する。毒性効果は、細胞死
および／または溶解をもたらし得る。場合によっては、毒性効果は、細胞に対する亜致死
性の破壊的効果、例えば、細胞増殖を遅延または抑止することであり得る。細胞毒性効果
を達成するために、薬物またはプロドラッグは、数ある中でも、ＤＮＡ損傷剤、微小管撹
乱剤、または細胞毒性タンパク質若しくはポリペプチドからなる群から選択し得る。
用語「細胞増殖抑制性(Cytostatic)」：「細胞増殖抑制性」は、本明細書にて、細胞増
殖および／または繁殖を阻害または停止する薬物または他の化合物を指す。
用語「小分子(Small molecule)」：「小分子」は、本明細書にて、天然に生じようとも
、または人工的に生じよう（例えば、化学合成による）とも、相対的に低い分子量を有す
る分子を指す。好ましい小分子は、動物、好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒト
において局所または全身効果を生じさせるという点で生物活性がある。ある特定の好まし
い実施形態にて、小分子は、薬物であり、小分子は、「薬物分子(drug molecule)」、「
薬物(drug)」または「治療剤(therapeutic agent)」と称される。ある特定の実施形態に
て、薬物分子は、約５ｋＤａと等しい、またはこれ未満のＭＷを有する。他の実施形態に
て、薬物分子は、約１．５ｋＤａと等しい、またはこれ未満のＭＷを有する。実施形態に
て、薬物分子は、ビンカアルカロイド、アウリスタチン、デュオカルマイシン、キナーゼ
阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＫＳＰ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、カリケアマイシン、ＳＮ
３８、カンプトテシン、トポイソメラーゼ阻害剤、非天然カンプトテシン、タンパク合成
阻害剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、ピロロベンゾジアゼピン、マイタンシノイド、ＤＮ
Ａ結合薬、ＤＮＡインターカレーション薬およびその類似体から選択される。好ましくは
、必要ではないが、薬物は、適当な政府機関または行政体、例えば、ＦＤＡによって使用
のために安全および有効であると既に見なされてきたものである。例えば、参照により本
明細書中に組み込むＦＤＡによって連邦規則集２１章３３０．５、３３１〜３６１項、お
よび４４０〜４６０項において一覧表示されているヒトへの使用のための薬物；ＦＤＡに
よって連邦規則集２１章５００〜５８９項において一覧表示されている獣医学のための薬
物は全て、本親水性ポリマーと共に使用するのに適していると考えられる。本発明の実施
において使用することができるクラスの薬物分子には、これらに限定されないが、抗がん
物質、放射性核種、ビタミン、抗ＡＩＤＳ物質、抗生物質、免疫抑制剤、抗ウイルス物質
、酵素阻害剤、神経毒、オピオイド、催眠剤、抗ヒスタミン、滑沢剤、トランキライザー
、抗痙攣薬、筋弛緩剤および抗パーキンソン物質、鎮痙剤および筋肉収縮剤（チャネル遮
断薬、縮瞳薬および抗コリン作用薬を含めた）、抗緑内障化合物、抗寄生虫および／また
は抗原生動物化合物、細胞−細胞外マトリックス相互作用のモジュレーター（細胞成長阻
害剤および抗接着分子を含めた）、血管拡張剤、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質合成の
阻害剤、降圧剤、鎮痛剤、解熱剤、ステロイド性および非ステロイド性抗炎症剤、抗血管
形成因子、抗分泌性因子、抗凝血剤および／または抗血栓剤、局所麻酔剤、眼病薬、プロ
スタグランジン、抗うつ剤、抗精神病物質、制吐剤、造影剤が含まれる。多くの大分子は
また薬物であり、このような大分子は、本明細書に記載の共役体および他の構築体におい
て使用し得る。適切な大分子の例には、例えば、アミノ酸ベースの分子が含まれる。アミ
ノ酸ベースの分子は、例えば、数ある中でも、ペプチド、ポリペプチド、酵素、抗体、免
疫グロブリン、またはその機能的なフラグメントを包含し得る。
本発明において、使用するのに適したクラスおよび特定の薬物の網羅的ではないがより
完全な一覧は、これらの両方が参照によって本明細書中に組みこむ「Ｐｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ： Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ， Ｐａｔｅｎｔｓ， Ａｐ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｘｅｌ ＫｌｅｅｍａｎｎおよびＪｕｒｇｅｎ Ｅｎｇｅｌ
、Ｔｈｉｅｍｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、１９９９および「Ｍｅｒｃｋ
Ｉｎｄｅｘ： Ａｎ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ， Ｄｒ
ｕｇｓ， ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ」、編Ｓｕｓａｎ Ｂｕｄａｖａｒｉら、Ｃ
ＲＣ Ｐｒｅｓｓ、１９９６に見出し得る。好ましい実施形態にて、本発明に係る薬物は
、標的細胞または経路に対して抗増殖性（細胞増殖抑制性および／または細胞毒性）活性
を有する治療剤である。薬物は、化学的な反応性基、例えば、−ＣＯＯＨ、第一級アミン
、第二級アミン−ＮＨＲ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ
ＨＲ２ｂ、Ｃ（Ｓ）ＯＨ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ２ｂ、−Ｐ（Ｏ）２ＯＲ２ｂ、−ＣＮ、−Ｎ
Ｃまたは−ＯＮＯを有してもよく、Ｒは、脂肪族、ヘテロ脂肪族、炭素環式またはヘテロ
シクロアルキル部分であり、Ｒ２ｂは、水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、炭素環式、または
複素環部分である。
用語「薬物誘導体(Drug derivative)」または「修飾薬物(modified drug)」などは、本
明細書にて、本発明に係る共役体によって送達されることを意図する薬物分子を含む化合
物、およびポリマー担体に薬物分子を付着させることができる官能基を指す。
用語「活性形態(Active form)」は、本明細書にて、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉ
ｔｒｏで意図する医薬の有効性を示す化合物の形態を指す。特に、本発明に係る共役体に
よって送達されることを意図する薬物分子が共役体から放出されるとき、活性形態は、意
図する治療特性を示す薬物自体またはその誘導体であり得る。共役体からの薬物の放出は
、薬物をポリマー担体に付着するリンカーの生分解性結合の切断によって達成することが
できる。したがって、活性薬物誘導体は、リンカーのポーションを含むことができる。
用語「診断用標識(Diagnostic label)」：「診断用標識」は、本明細書にて、当技術分
野において公知の分析法を使用してｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで検出すること
ができる、原子、原子の群、部分または官能基、ナノ結晶、または組成物の他の別個の要
素を指す。本発明に係る共役体と会合するとき、このような診断用標識は、共役体のｉｎ
ｖｉｖｏでのモニターを可能とする。代わりにまたはさらに、診断用標識を含む構築体
および組成物を使用して、生物学的機能または構造をモニターすることができる。診断用
標識の例には、これらに限定されないが、医学的診断法において使用することができる標
識、例えば、ガンマシンチグラフィーおよびポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）のための
放射性同位体（放射性核種）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）のためのコントラスト剤
（例えば、常磁性原子および超常磁性ナノ結晶）、コンピューター断層撮影法および他の
Ｘ線をベースとするイメージング方法のためのコントラスト剤、超音波をベースとする診
断法（超音波検査）のための薬剤、中性子放射化のための薬剤（例えば、ホウ素、ガドリ
ニウム）、様々な光学的手順のためのフルオロフォア、ならびに、一般的に、電磁場若し
くは電磁波（例えば、ガンマ線、Ｘ線、電波、マイクロ波、光）、粒子（例えば、アルフ
ァ粒子、電子、ポジトロン、中性子、プロトン）または他の形態の放射線、例えば、超音
波を放射するか、反射するか、吸収するか、散乱するか、若しくはその他の点で影響を与
えることができる部分が含まれる。
下記は、本明細書にて使用される、より一般的な用語である。
用語「動物(Animal)」：「動物」は、本明細書にて、ヒト、ならびに例えば、哺乳動物
、鳥、爬虫類、両生類、魚、虫および単細胞を含めた発達の任意の段階におけるヒトでは
ない動物を指す。細胞培養物および生きている組織試料は、複数の動物であると考えられ
る。好ましくは、ヒトではない動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、
ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長類、またはブタ）である。動物は、トランスジェニック
動物またはヒトクローンであり得る。用語「対象(subject)」は、動物を包含する。
用語「効率的な量(Efficient amount)」：一般的に、活性剤または薬物送達装置に言及
するとき、用語「効率的な量」は、所望の生物学的反応を誘発するのに必要とされる量を
指す。当業者が認識できるように、効率的な量の薬剤または装置は、所望の生物学的エン
ドポイント、送達する薬剤、カプセル化マトリックスの組成、標的組織などの要因によっ
て変化し得る。例えば、送達されて個体を免疫化する抗原を含有する微粒子の効率的な量
は、投与された抗原を有する生物の感染を予防するのに十分な免疫応答をもたらす量であ
る。
用語「天然アミノ酸(Natural amino acid)」は、本明細書にて、天然に生じたタンパク
質において見出される一般の天然に生じたＬ−アミノ酸のいずれかの１つを指す。グリシ
ン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイ
シン（Ｉｌｅ）、リシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、プ
ロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈ
ｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グ
ルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、システイン（
Ｃｙｓ）およびメチオニン（Ｍｅｔ）。
用語「非天然アミノ酸(Unnatural amino acid)」は、本明細書にて、天然アミノ酸でな
い任意のアミノ酸を指す。これは、例えば、α−、β−、ω−、Ｄ−、Ｌ−アミノアシル
残基を含むアミノ酸を含む。より一般的に、非天然アミノ酸は、一般式の残基を含み、
ここで、式中、側鎖Ｒは、天然で生じるアミノ酸側鎖以外である。例示的な非天然アミ
ノ酸には、これらに限定されないが、サルコシン（Ｎ−メチルグリシン）、シトルリン（
ｃｉｔ）、ホモシトルリン、 −ウレイドアラニン、チオシトルリン、ヒドロキシプロリ
ン、アロトレオニン、ピペコリン酸（ホモプロリン）、α−アミノイソ酪酸、ｔｅｒｔ−
ブチルグリシン、ｔｅｒｔ−ブチルアラニン、ａｌｌｏ−イソロイシン、ノルロイシン、
α−メチルロイシン、シクロヘキシルグリシン、β−シクロヘキシルアラニン、β−シク
ロペンチルアラニン、α−メチルプロリン、フェニルグリシン、α−メチルフェニルアラ
ニンおよびホモフェニルアラニンが含まれる。
用語「アミノアシル(Amino acyl)」：より一般的に、「アミノアシル」は、本明細書に
て、天然アミノ酸および非天然アミノ酸を包含する。
用語「ポリアミド(Polyamide)」は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸のホモ−また
はヘテロ−ポリマーを指す。例示的なホモ−ポリマーには、これらに限定されないが、ポ
リ−リシン、ポリ−アルギニン、ポリ−γ−グルタル酸などが含まれる。例示的なヘテロ
−ポリマーには、これらに限定されないが、ペプチダーゼ、リゾチーム、メタロプロテイ
ナーゼなどから選択されるペプチドフラグメントを含むポリマーが含まれる。
用語「ＰＨＦ」は、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル−ホルマー
ル）を指す。
用語「ポリマー単位」、「モノマー単位」、「モノマー」、「モノマー単位」、「単位
」は全て、ポリマーにおける反復可能な構造単位を指す。
本明細書にて、ポリマーまたはポリマー担体／足場またはポリマー共役体の「分子量」
または「ＭＷ」は、他に特定しない限り、重量平均分子量を指す。
本発明は、本化合物中に生じる原子の全ての同位体を含むことを意図する。同位体は、
同じ原子番号を有するが、異なる質量数であるこれらの原子を含む。一般の例として、制
限なく、水素の同位体は、トリチウムおよび重水素を含む。炭素の同位体は、Ｃ−１３お
よびＣ−１４を含む。
本発明は、化合物の全ての異性体を含むことを意図し、これは光学異性体、および互変
異性体を指し、かつ含み、光学異性体は、エナンチオマーおよびジアステレオマー、キラ
ル異性体および非キラル異性体を含み、光学異性体は、単離した光学異性体、ならびにラ
セミ混合物および非ラセミ混合物を含む光学異性体の混合物を含み、異性体は、単離した
形態、または１種若しくは複数の他の異性体との混合物であり得る。
＜ポリマー担体＞
特定の例示的な実施形態にて、本発明に係る共役体は、生物医学的な用途、例えば、薬
物送達および組織工学に使用され、担体は、生体適合性および生分解性である。ある特定
の実施形態にて、担体は、可溶性ポリマー、ナノ粒子、ゲル、リポソーム、ミセル、縫合
糸、埋込物などである。ある特定の実施形態にて、用語「可溶性ポリマー(soluble polym
er)」は、生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、ポリアル（例えば、親水性ポリアセ
タールまたはポリケタール）を包含する。ある特定の他の実施形態にて、担体は、完全合
成、半合成または天然の高分子である。ある特定の他の実施形態にて、担体は、親水性で
ある。
特定の例示的な実施形態にて、本発明に係る担体は、主鎖内に位置する各モノマー単位
において少なくとも１つの加水分解性結合を含む生分解性の生体適合性ポリアルである。
これは、分解プロセス（モノマー単位の加水分解／切断による）がモノマー構成要素への
ポリマー共役体の断片化（すなわち、分解）をもたらすことを確実にし、本発明に係るポ
リマー共役体にこれらの生分解性特性を与える。生分解性の生体適合性ポリマー共役体の
特性（例えば、溶解性、生体接着力および親水性）は、さらなる親水性または疎水性基の
それに続く置換によって修飾することができる。本発明を実施するのに適した生分解性の
生体適合性ポリマーの例は、とりわけ、米国特許第５，８１１，５１０号明細書；同第５
，８６３，９９０号明細書；同第５，９５８，３９８号明細書；同第７，８３８，６１９
号明細書および同第７，７９０，１５０号明細書；ならびに米国特許出願公開第２００６
／００５８５１２号明細書に見出すことができ、上で一覧表示した特許文献のそれぞれは
参照によりその全体を本明細書に組み込む。このタイプのポリマーの有意性、調製、およ
び用途についてのガイダンスは、上記の引用文献において見出し得る。ある特定の実施形
態にて、本発明は、上で参照した特許文献、ならびに米国特許第５，５８２，１７２号明
細書および同第６，８２２，０８６号明細書と組み合わせて特に有用であることが予測さ
れ、上で一覧表示した特許文献のそれぞれは参照によりその全体を本明細書に組み込む。
本発明に係る共役体は、親水性、加水分解性であり、かつ１個または複数の生分解性結
合を含有する連結を介してポリマー担体に共有結合的に付着している、薬物分子（例えば
、ビンカアルカロイドまたは誘導体、トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ＳＮ３８、カン
プトテシン、トポテカン、エキサテカン、非天然カンプトテシン化合物または誘導体；ア
ウリスタチン、ドラスタチン、ネモルビシンおよびその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、
アントラサイクリン、デュオカルマイシン、キナーゼ阻害剤（例えば、ＰＩ３キナーゼ阻
害剤またはＭＥＫ阻害剤）、ＫＳＰ阻害剤、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン
、マイタンシノイド、エリナフィド、ＤＮＡ−結合薬、ＤＮＡインターカレーション薬、
および立体異性体、アイソスター、類似体およびその誘導体）ならびに抗体（例えば、ト
ラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、エプラツズマブ、ベルツズ
マブ、ラベツズマブ、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ３、ＣＡ１２５、ＣＤ３３、ＣＸＣＲ２、Ｅ
ＧＦＲ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＨＥＲ２、ＮａＰｉ２ｂ、
ｃ−Ｍｅｔ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＤ−Ｌ１、
ＮａＰｉ２ｂ、ｃ−Ｋｉｔ、ＭＵＣ１、および抗５Ｔ４）またはペプチド（ＬＨＲＨ受容
体標的化ペプチド、ＥＣ−１ペプチド）を含む。このように、特定の例示的な実施形態に
て、本発明を実施するのに適した担体は、主鎖内に位置している各モノマー単位中に少な
くとも１個のアセタール／ケタール酸素原子を有するポリアルである。上記で考察するよ
うに、これは、分解プロセス（ポリマーアセタール／ケタール基の加水分解／切断による
）が、低分子量構成要素へのポリアル共役体の断片化（すなわち、分解）をもたらすこと
を確実にする。ある特定の実施形態にて、本発明に係るポリマー共役体の調製のために使
用される生分解性の生体適合性ポリマー担体は、天然に生じた多糖、グリコ多糖、ならび
にポリグリコシド、ポリアセタール、ポリアミド、ポリエーテル、およびポリエステル起
源の合成ポリマー、ならびにこれらの酸化、脚色、修飾、架橋、および共役の生成物であ
る。
ある特定の他の実施形態にて、担体は、炭水化物、グリコ多糖、糖脂質、グリコ共役体
、ポリアセタール、ポリケタール、およびその誘導体からなる群より選択される親水性生
分解性ポリマーである。
特定の例示的な実施形態にて、担体は、セルロース、アミロース、デキストラン、レバ
ン、フコイダン、カラギーナン、イヌリン、ペクチン、アミロペクチン、グリコーゲンお
よびリキセナン(lixenan)からなる群より選択される天然に生じた直鎖状および／または
分岐状の生分解性の生体適合性ホモ多糖である。
特定の他の例示的な実施形態にて、担体は、アガロース、ヒアルロナン、コンドロイチ
ン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、アルギン酸およびヘパリンからなる群より選択
される天然に生じた直鎖状および分岐状の生分解性の生体適合性ヘテロ多糖である。
さらに他の例示的な実施形態にて、ポリマー担体は、ポリアクリレート、ポリビニルポ
リマー、ポリエステル、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリペプチド、およびその誘
導体からなる群より選択されるポリアセタール／ポリケタールおよび親水性ポリマーのコ
ポリマーを含む。
さらに別の実施形態にて、ポリマー担体は、様々な天然物、例えば、コムギ、米、トウ
モロコシおよびタピオカから得られるデンプンの加水分解によって生成されるデキストリ
ンである。デンプン出発材料の構造によって、各デキストリンは、α−１，４連結および
α−１，６連結の独特な分布を含む。α−１，６連結の生分解性の速度は典型的にはα−
１，４連結の生分解性の速度未満であるため、好ましくは、α−１，６連結の百分率は１
０％未満、より好ましくは５％未満である。一実施形態にて、デキストリンの分子量は、
約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ、より好ましくは、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、または約３ｋ
Ｄａ〜約１５ｋＤａまたは約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲である。
ある特定の実施形態にて、担体は、薬物分子またはＰＢＲＭとの共役の前に、１，２−
、１，４−、１，６−、および２，６−ピラノシド、ならびに１，２−、１，５−、１，
６−フラノシドの環状ビシナルジオールの選択的酸化によって、またはラテラル６−ヒド
ロキシおよび５，６−ジオール含有多糖の酸化によって、活性化された多糖を含む。
また他の実施形態にて、ポリマー担体は、生分解性の生体適合性ポリアセタールを含み
、ここではポリアセタール反復構造単位の少なくとも１サブセットは、下記の化学構造を
有し、
式中、ｎの角括弧構造が出現する毎に、Ｒ１およびＲ２の一方は水素であり、他方は生
体適合性基であり、かつＣ１に共有結合的に付着している炭素原子を含み、Ｒｘは、Ｃ２
に共有結合的に付着している炭素原子であり、ｎ’’は、整数であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５
およびＲ６は、出現する毎に、生体適合性基であり、独立に、水素または有機部分であり
、角括弧構造ｎが出現する毎に、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の少なくとも
１つは、カップリングに適した官能基を含む。ある特定の実施形態にて、官能基は、ヒド
ロキシル部分である。
一実施形態にて、ポリマー担体は、その骨格が下記の化学構造
（−ＣＨ２−ＣＨＲ７−Ｏ−ＣＨＲ８−Ｏ−）ｏ
によって表される０．１％〜１００％のポリアセタール部分を含む、活性化された親水性
生分解性の生体適合性ポリマーを含み、
式中、
Ｒ７およびＲ８は、独立に、水素、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル（例えば、−ＣＨ
２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨ）、−ＣＨＯ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨＯまたは−カ
ルボニルであり、
ｏは、２０〜２０００の整数である。
また他の実施形態にて、ポリマー担体は、生分解性の生体適合性ポリケタールを含み、
ポリケタールの反復可能な構造単位の少なくとも１サブセットは、下記の化学構造を有し
、
式中、Ｒ１およびＲ２は、出現する毎に、生体適合性基であり、Ｒｘ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５
、Ｒ６は、本明細書に定義されている通りである。
ある特定の実施形態にて、ケタール単位は、式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）のモノマー
である。
生分解性の生体適合性ポリケタールポリマーおよびこれらの作製方法は、参照により本
明細書にその全体が組み込む米国特許第５，８１１，５１０号明細書、同第７，７９０，
１５０号明細書および同第７，８３８，６１９号明細書に記載されてきた。
一実施形態にて、ポリマー担体は、部分的に酸化されたデキストラン（β１→６）−Ｄ
−グルコース）、それに続く還元から得ることができる。この実施形態にて、ポリマーは
、下記の構造の未修飾デキストラン（Ａ）、部分的に酸化されたデキストランアセタール
単位（Ｂ）および徹底的デキストランアセタール単位（Ｃ）のランダム混合物を含む。
別の実施形態にて、ポリマー担体は、未修飾アセタール単位、すなわち、ポリアセター
ルセグメントを含む。いくつかの実施形態にて、ポリアセタールは、徹底的に酸化された
デキストラン、それに続く還元から得ることができる。これらのポリマーは、参照文献に
おいて記載されてきた。例えば、第２欄、第６５行から第８欄、第５５行におけるポリア
セタールのその記載、および第１０欄、第４５行から第１１欄、第１４行におけるこれら
の合成について参照により本明細書に組み込む米国特許第５，８１１，５１０号明細書を
参照されたい。一実施形態にて、未修飾ポリアセタールポリマーは、ポリ（ヒドロキシメ
チルエチレンヒドロキシメチルホルマール）ポリマー（ＰＨＦ）である。
ポリ（ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）ポリマーに加えて、ポ
リマー担体の骨格はまた、ポリ（ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール
）ブロックのコポリマー、および他のアセタールまたは非アセタールのモノマーまたはポ
リマーを含むことができる。例えば、ポリエチレングリコールポリマーは、付加された官
能基のポリマー側鎖の間の相互作用を減少させることができるため、ポリマー骨格におけ
るステルス剤として有用である。このような基はまた、相互作用、例えば、血清因子およ
び修飾ポリマーの間のものを制限するのに有用であり得る。ポリマー骨格中に含まれるた
めの他のステルス剤モノマーは、例えば、エチレンイミン、メタクリル酸、アクリルアミ
ド、グルタミン酸、およびこれらの組合せを含む。
アセタールまたはケタール単位は、生体適合性を促進するのに有効な量で修飾ポリマー
中に存在する。未修飾アセタールまたはケタール単位は、修飾ポリマーに生体適合性およ
び溶解性を実現する「ステルス剤(stealth agent)」と記載することができる。さらに、
ポリアセタールまたはポリケタールポリマーへの共役は、そこに付着した部分の代謝およ
び分解に対する感受性を修飾し、体内分布、クリアランスおよび分解に影響を与えること
ができる。
未修飾アセタール単位は、式（ＩＩＩ）のモノマーである。
未修飾ポリアセタール単位のモル分率ｎは、修飾ポリマー中のポリマー単位の総数に基
づいて、生体適合性、溶解性を促進し、かつ半減期を増加させることができるモル分率で
ある。モル分率ｎは、生体適合性、溶解性、安定性、若しくは特定の半減期を実現するの
に必要とされる未修飾モノマーアセタール単位の最小の画分でよいか、またはより大きな
画分でよい。最も望ましい程度の細胞毒性は実質的に存在せず、すなわち、修飾ポリマー
は、対象に対して実質的に不活性である。しかしながら、当業者が理解するように、ある
程度の細胞毒性は、処置される疾患または症状の重症度、処置の有効性、免疫応答のタイ
プおよび程度、ならびに同様の考察によって許容することができる。
一実施形態にて、修飾ポリマー骨格は、式（ＩＶ）の単位を含み、
式中、Ｘ’は、ポリマー骨格のヒドロキシル基についての置換基を示す。式（ＩＶ）お
よび本明細書に記載の他の式において示されているように、各ポリアセタール単位は、単
位のグリセロール部分に付着した単一のヒドロキシル基、および単位のグリコールアルデ
ヒド部分に付着したＸ’基（または別の置換基、例えば、−ＬＤ−Ｄ）を有する。これは
単に便宜のためであり、式（ＩＶ）および本明細書に記載の他の式の単位を有するポリマ
ーは、単位のグリコールアルデヒド部分に付着したＸ’基（または別の置換基、例えば、
マレイミド末端を含むリンカー）を有する単位、および単位のグリセロール部分に付着し
た単一のＸ’基（または別の置換基、例えば、マレイミド末端を含むリンカー）を有する
単位、ならびに一方はグリコールアルデヒド部分に付着し、他方は単位のグリセロール部
分に付着している２個のＸ’基（または他の置換基、例えば、マレイミド末端を含むリン
カー）を有する単位のランダム分布を含有することができると解釈すべきである。
一実施形態にて、本発明を実施するのに適した生分解性の生体適合性ポリアルは、約０
．５〜約３００ｋＤａの分子量を有する。例えば、生分解性の生体適合性ポリアルは、約
１〜約３００ｋＤａ（例えば、約１〜約２００ｋＤａ、約２〜約３００ｋＤａ、約２〜約
２００ｋＤａ、約５〜約１００ｋＤａ、約１０〜約７０ｋＤａ、約２０〜約５０ｋＤａ、
約２０〜約３００ｋＤａ、約４０〜約１５０ｋＤａ、約５０〜約１００ｋＤａ、約２〜約
４０ｋＤａ、約６〜約２０ｋＤａ、または約８〜約１５ｋＤａ）の分子量を有する。例え
ば、本発明に係るポリマー足場または共役体のために使用される生分解性の生体適合性ポ
リアルは、約２〜約４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａ、３〜１５ｋＤａ、または５
〜１０ｋＤａ）の分子量を有するＰＨＦである。
一実施形態にて、本発明を実施するのに適した生分解性の生体適合性ポリアルは、薬物
またはＰＢＲＭとの共役の前に修飾される。例えば、ポリアルは、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ−（
ＣＨ２）ｖ−Ｃ（＝Ｏ）−を含有し、Ｘは、ＣＨ２、Ｏ、またはＮＨであり、ｖは、１〜
６の整数である。下記の表Ａは、薬物またはＰＢＲＭまたはその誘導体と共役するのに適
した修飾ポリアルのいくつかの例を提供する。他に特定しない限り、下記の表Ａ〜Ｄにお
ける参照番号は、本明細書に記載の実施例の番号に対応する。用語「ＮＤ」は、未決定を
意味し、Ｘは、ＣＨ２、Ｏ、またはＮＨである。
＜治療剤＞
ある特定の実施形態にて、治療剤は、好ましくは、≦約５ｋＤａ、より好ましくは、≦
約４ｋＤａ、より好ましくは、≦約３ｋＤａ、最も好ましくは、≦約１．５ｋＤａまたは
≦約１ｋＤａの分子量を有する小分子である。
ある特定の実施形態にて、治療剤は、約１ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
別の実施形態にて、治療剤は、約１ｎＭ超のＩＣ５０を有し、例えば、治療剤は、約１
〜５０ｎＭのＩＣ５０を有する。
約１ｎＭ超のＩＣ５０を有するいくつかの治療剤（例えば、「より強力でない薬物」）
は、当技術分野で認識されている共役技術を使用したＰＢＲＭとの共役に適していない。
理論に束縛されるものではないが、このような治療剤は、従来の技術を使用して標的とす
るＰＢＲＭ−薬物共役体において使用するのには不十分な効力を有する。これは、十分な
コピーの薬物（すなわち、８超）を、共役体の薬物動態特性および生理化学的特性の減少
をもたらすことなしに、当技術分野で認識されている技術を使用して共役させることがで
きないためである。しかしながら、これらのより強力でない薬物の十分に高い添加量は、
本明細書に記載の共役戦略を使用して達成することができ、それによって、望ましい薬物
動態特性および生理化学的特性を維持する一方で、治療剤の高い添加量をもたらす。この
ように、本発明はまた、ＰＢＲＭ、ＰＨＦおよび少なくとも８つの治療剤部分を含むＰＢ
ＲＭ−ポリマー−薬物共役体に関し、治療剤は、約１ｎＭ超のＩＣ５０を有する。
ある特定の実施形態にて、約０．３〜約１５％、より好ましくは、約２〜約１２％、さ
らにより好ましくは、約５〜約１０％のモノマーが、治療剤を含む。
本発明に係る小分子治療剤［例えば、ポリマー担体に連結することができる抗増殖性（
細胞毒性および細胞増殖抑制性）薬剤］は、細胞毒性化合物（例えば、広スペクトル）、
血管形成阻害剤、細胞周期進行阻害剤、ＰＩ３Ｋ／ｍ−ＴＯＲ／ＡＫＴ経路阻害剤、ＭＡ
ＰＫシグナル伝達経路阻害剤、キナーゼ阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ＨＤＡＣ
阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｗｎｔ／Ｈｅｄｇｅｈｏｇシグナル伝達経路阻害剤およびＲＮ
Ａポリメラーゼ阻害剤を含む。
広スペクトル細胞毒には、これらに限定されないが、ＤＮＡの結合、挿入またはアルキ
ル化薬物、微小管安定化剤および不安定化剤、白金化合物、トポイソメラーゼＩ阻害剤お
よびタンパク質合成阻害剤が含まれる。
例示的なＤＮＡの結合、インターカレーションまたはアルキル化薬物には、ＣＣ−１０
６５およびその類似体、アントラサイクリン（ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビ
シン、ダウノルビシン、ネモルビシンおよびその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２）、ビス
ナフタルイミド化合物、例えば、エリナフィド（ＬＵ７９５５３）およびその類似体、ア
ルキル化剤、例えば、カリケアマイシン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、ピロロベ
ンゾジアゼピンなどが含まれる。例示的なＣＣ−１０６５類似体には、デュオカルマイシ
ンＳＡ、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシンＣ２、デ
ュオカルマイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＤ、ＤＵ−８６、
ＫＷ−２１８９、アドゼレシン、ビゼレシン、カルゼレシン、セコ−アドゼレシン、およ
び関連する類似体およびプロドラッグ形態が含まれ、これらの例は、米国特許第５，４７
５，０９２号明細書；同第５，５９５，４９９号明細書；同第５，８４６，５４５号明細
書；同第６，５３４，６６０号明細書；同第６，５８６，６１８号明細書；同第６，７５
６，３９７号明細書および同第７，０４９，３１６号明細書に記載されている。ドキソル
ビシンおよびその類似体は、米国特許第６，６３０，５７９号明細書に記載されているも
のを含む。カリケアマイシンは、例えば、エンジイン、例えば、エスペラマイシン、なら
びに米国特許第５，７１４，５８６号明細書および同第５，７３９，１１６号明細書に記
載されているものを含む。デュオカルマイシンは、米国特許第５，０７０，０９２号明細
書；同第５，１０１，０３８号明細書；同第５，１８７，１８６号明細書；同第６，５４
８，５３０号明細書；同第６，６６０，７４２号明細書；および同第７，５５３，８１６
Ｂ２号明細書；およびＬｉら、Ｔｅｔ Ｌｅｔｔｓ．、５０：２９３２〜２９３５（２０
０９）に記載されているものを含む。
ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）およびその類似体は、Ｄｅｎｎｙ、Ｅｘｐ． Ｏｐ
ｉｎ． Ｔｈｅｒ． Ｐａｔｅｎｔｓ．、１０（４）：４５９〜４７４ （２０００）お
よびＡｎｔｏｎｏｗおよびＴｈｕｒｓｔｏｎ、Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ．、２８１５〜２８６４
（２０１０）に記載されているものを含む。
例示的な微小管安定化剤および不安定化剤には、タキサン化合物、例えば、パクリタキ
セル、ドセタキセル、テセタキセルおよびカバジタキセル；マイタンシノイド、アウリス
タチンおよびその類似体、ビンカアルカロイド誘導体、エポチロンおよびクリプトフィシ
ンが含まれる。
例示的なマイタンシノイドまたはマイタンシノイド類似体は、マイタンシノールおよび
マイタンシノール類似体、メイタンシンまたはＤＭ−１およびＤＭ−４を含み、これらは
米国特許第５，２０８，０２０号明細書；同第５，４１６，０６４号明細書；同第６，３
３３．４１０号明細書；同第６，４４１，１６３号明細書；同第６，７１６，８２１号明
細書；ＲＥ３９，１５１および７，２７６，４９７に記載されているものである。ある特
定の実施形態にて、細胞毒性剤は、マイタンシノイド、抗チューブリン剤の別の群（Ｉｍ
ｍｕｎｏＧｅｎ， Ｉｎｃ．；Ｃｈａｒｉら、１９９２、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５２
：１２７〜１３１をまた参照されたい）、マイタンシノイドまたはマイタンシノイド類似
体である。適切なマイタンシノイドの例には、マイタンシノールおよびマイタンシノール
類似体が含まれる。適切なマイタンシノイドは、米国特許第４，４２４，２１９号明細書
；同第４，２５６，７４６号明細書；同第４，２９４，７５７号明細書；同第４，３０７
，０１６号明細書；同第４，３１３，９４６号明細書；同第４，３１５，９２９号明細書
；同第４，３３１，５９８号明細書；同第４，３６１，６５０号明細書；同第４，３６２
，６６３号明細書；同第４，３６４，８６６号明細書；同第４，４５０，２５４号明細書
；同第４，３２２，３４８号明細書；同第４，３７１，５３３号明細書；同第６，３３３
，４１０号明細書；同第５，４７５，０９２号明細書；同第５，５８５，４９９号明細書
；および同第５，８４６，５４５号明細書に開示されている。
例示的なアウリスタチンには、アウリスタチンＥ（ドラスタチン−１０の誘導体として
また公知である）、アウリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、アウリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）
、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）
、アウリスタチンＦ、アウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）、アウリスタチン
Ｆ ＨＰＡおよびドラスタチンが含まれる。適切なアウリスタチンはまた、それらの開示
の全内容が参照により本明細書中に組み込む、米国特許出願公開第２００３／００８３２
６３号明細書、同第２０１１／００２０３４３号明細書、および同第２０１１／００７０
２４８号明細書；国際公開第０９／１１７５３１号、同第２００５／０８１７１１号、同
第０４／０１０９５７号；同第０２／０８８１７２号および同第０１／２４７６３号、な
らびに米国特許第７，４９８，２９８号明細書；同第６，８８４，８６９号明細書；同第
６，３２３，３１５号明細書；同第６，２３９，１０４号明細書；同第６，１２４，４３
１号明細書；同第６，０３４，０６５号明細書；同第５，７８０，５８８号明細書；同第
５，７６７，２３７号明細書；同第５，６６５，８６０号明細書；同第５，６６３，１４
９号明細書；同第５，６３５，４８３号明細書；同第５，５９９，９０２号明細書；同第
５，５５４，７２５号明細書；同第５，５３０，０９７号明細書；同第５，５２１，２８
４号明細書；同第５，５０４，１９１号明細書；同第５，４１０，０２４号明細書；同第
５，１３８，０３６号明細書；同第５，０７６，９７３号明細書；同第４，９８６，９８
８号明細書；同第４，９７８，７４４号明細書；同第４，８７９，２７８号明細書；同第
４，８１６，４４４号明細書；および同第４，４８６，４１４号明細書に記載されている
。
例示的なビンカアルカロイドには、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、お
よびナベルビン（ビノレルビン）が含まれる。本発明において使用することができる適切
なビンカアルカロイドはまた、それらの開示の全内容が参照により本明細書中に組み込む
米国特許出願公開第２００２／０１０３１３６号明細書および同第２０１０／０３０５１
４９号明細書、および米国特許第７，３０３，７４９Ｂ１号明細書に開示されている。
例示的なエポチロン化合物には、エポチロンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦ、ならびにそ
の誘導体が含まれる。適切なエポチロン化合物およびその誘導体は、例えば、それらの開
示の全内容が参照により本明細書中に組み込む米国特許第６，９５６，０３６号明細書；
同第６，９８９，４５０号明細書；同第６，１２１，０２９号明細書；同第６，１１７，
６５９号明細書；同第６，０９６，７５７号明細書；同第６，０４３，３７２号明細書；
同第５，９６９，１４５号明細書；および同第５，８８６，０２６号明細書；並びに国際
公開第９７／１９０８６号；国際公開第９８／０８８４９号；国際公開第９８／２２４６
１号；国際公開第９８／２５９２９号；国際公開第９８／３８１９２号；国際公開第９９
／０１１２４号；国際公開第９９／０２５１４号；国際公開第９９／０３８４８号；国際
公開第９９／０７６９２号；国際公開第９９／２７８９０号；および国際公開第９９／２
８３２４号に記載されている。
例示的なクリプトフィシン化合物は、米国特許第６，６８０，３１１号明細書および同
第６，７４７，０２１号明細書に記載されている。
例示的な白金化合物には、シスプラチン（ＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標））、カルボプ
ラチン（ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（登録商標））、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＥ
（登録商標））、イプロプラチン、オルマプラチン、およびテトラプラチンが含まれる。
例えば、マイトマイシンＣ、マイトマイシンＡ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、モ
ルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、アミノプテリン、ブレ
オマイシン、１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール
−５−オール、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ポリアミドおよびその二量体を含めて
、これらまたは他の細胞毒性の作用機序を有する化合物のまた他のクラスを選択し得る。
他の適切な細胞毒性剤には、例えば、ピューロマイシン、トポテカン、リゾキシン、エキ
ノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エストラムスチン、クリプトフィシン
、セマドチン、ディスコデルモリド、エレウセロビン、およびミトキサントロンが含まれ
る。
例示的なトポイソメラーゼＩ阻害剤には、カンプトテシン、カンプトテシン誘導体、カ
ンプトテシン類似体および非天然カンプトテシン、例えば、ＣＰＴ−１１（イリノテカン
）、ＳＮ−３８、ＧＩ−１４７２１１Ｃ、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、７−
ヒドロキシメチルカンプトテシン、７−アミノメチルカンプトテシン、１０−ヒドロキシ
カンプトテシン、（２０Ｓ）−カンプトテシン、ルビテカン、ギマテカン、カレニテシン
、シラテカン、ルルトテカン、エキサテカン、ジフロモテカン、ベロテカン、ルルトテカ
ンおよびＳ３９６２５が含まれる。本発明において使用することができる他のカンプトテ
シン化合物は、例えば、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、２９：２３５８〜２３６３ （１
９８６）；Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、２３：５５４ （１９８０）； Ｊ． Ｍｅｄ
． Ｃｈｅｍ．、３０：１７７４ （１９８７）に記載されているものを含む。
血管形成阻害剤には、これらに限定されないが、ＭｅｔＡＰ２阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤
、ＰＩＧＦ阻害剤、ＶＧＦＲ阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＭｅｔＡＰ２阻害剤が含まれる
。例示的なＶＧＦＲおよびＰＤＧＦＲ阻害剤には、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ）、ス
ニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ）およびバタラニブが含まれる。例示的なＭｅｔＡＰ２阻害剤は
、フマギロール類似体を含み、これは、Ｒｏｄｅｓｃｈｉｎｉら、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈ
ｅｍ．、６９、３５７〜３７３、２００４およびＬｉｕ，ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８２、
１３２４〜１３２７、１９９８に記載されているようなタンパク質からＮＨ２−末端メチ
オニンを除去するＭｅｔＡＰ−２の能力を阻害するフマギラミン(fumagillamine)を含め
たフマギリンコア構造を含む任意の化合物を意味する。「フマギロール類似体」の非限定
的な例は、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．、６９、３５７、２００４；Ｊ．Ｏｒｇ． Ｃｈ
ｅｍ．、７０、６８７０、２００５；欧州特許第０３５４７８７号明細書；Ｊ． Ｍｅｄ
． Ｃｈｅｍ．、４９、５６４５、２００６；Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、
１１、５０５１、２００３；Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、１４、９１、２０
０４；Ｔｅｔ． Ｌｅｔｔ． ４０、４７９７、１９９９；国際公開９９／６１４３２号
；米国特許第６，６０３，８１２号明細書；同第５，７８９，４０５号明細書；同第５，
７６７，２９３号明細書；同第６，５６６，５４１号明細書；および同第６，２０７，７
０４号明細書に開示されている。
例示的な細胞周期進行阻害剤には、ＣＤＫ阻害剤、例えば、ＢＭＳ−３８７０３２およ
びＰＤ０３３２９９１；Ｒｈｏ−キナーゼ阻害剤、例えば、ＧＳＫ４２９２８６；チェッ
クポイントキナーゼ阻害剤、例えば、ＡＺＤ７７６２；オーロラキナーゼ阻害剤、例えば
、ＡＺＤ１１５２、ＭＬＮ８０５４およびＭＬＮ８２３７；ＰＬＫ阻害剤、例えば、ＢＩ
２５３６、ＢＩ６７２７（Ｖｏｌａｓｅｒｔｉｂ）、ＧＳＫ４６１３６４、ＯＮ−０１９
１０（Ｅｓｔｙｂｏｎ）；ならびにＫＳＰ阻害剤、例えば、ＳＢ７４３９２１、ＳＢ７１
５９９２（ｉｓｐｉｎｅｓｉｂ）、ＭＫ−０７３１、ＡＺＤ８４７７、ＡＺ３１４６およ
びＡＲＲＹ−５２０が含まれる。
例示的なＰＩ３Ｋ／ｍ−ＴＯＲ／ＡＫＴシグナル伝達経路阻害剤には、ホスホイノシチ
ド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、ＧＳＫ−３阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＤＮＡ−ＰＫ阻
害剤およびＰＤＫ−１阻害剤が含まれる。
例示的なＰＩ３キナーゼ阻害剤は米国特許第６，６０８，０５３号明細書に開示されて
おり、ＢＥＺ２３５、ＢＧＴ２２６、ＢＫＭ１２０、ＣＡＬ１０１、ＣＡＬ２６３、デメ
トキシビリジン、ＧＤＣ−０９４１、ＧＳＫ６１５、ＩＣ８７１１４、ＬＹ２９４００２
、Ｐａｌｏｍｉｄ５２９、ペリホシン、ＰＩ−１０３、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＸ−
８６６、ＳＡＲ２４５４０８、ＳＡＲ２４５４０９、ＳＦ１１２６、ウォルトマンニン、
ＸＬ１４７およびＸＬ７６５が含まれる。
例示的なＡＫＴ阻害剤には、これらに限定されないが、ＡＴ７８６７が含まれる。
例示的なＭＡＰＫシグナル伝達経路阻害剤には、ＭＥＫ、Ｒａｓ、ＪＮＫ、Ｂ−Ｒａｆ
およびｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤が含まれる。
例示的なＭＥＫ阻害剤は米国特許第７，５１７，９９４号明細書に開示されており、Ｇ
ＤＣ−０９７３、ＧＳＫ１１２０２１２、ＭＳＣ１９３６３６９Ｂ、ＡＳ７０３０２６、
ＲＯ５１２６７６６およびＲＯ４９８７６５５、ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ６２４４、
ＡＺＤ８３３０およびＧＤＣ−０９７３が含まれる。
例示的なＢ−ｒａｆ阻害剤には、ＣＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４０３２、およびＳＢ５
９０８８５が含まれる。
例示的なＢ ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤には、ＢＩＲＢ７９６、ＬＹ２２２８８２０および
ＳＢ２０２１９０が含まれる。
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、がん細胞の制御されない増殖および血管新生を
刺激するシグナル伝達経路と関連することが多い細胞表面受容体である。これらに限定さ
れないが、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＥｐｈＲおよびＲＥＴ受容体
ファミリー受容体を含めた受容体の恒常的活性化をもたらす変異を過剰発現または有する
多くのＲＴＫが同定されてきた。例示的な特異的ＲＴＫ標的には、ＥｒｂＢ２、ＦＬＴ−
３、ｃ−Ｋｉｔ、およびｃ−Ｍｅｔが含まれる。
ＥｒｂＢ２受容体（ＥＧＦＲファミリー）の例示的な阻害剤には、これらに限定されな
いが、ＡＥＥ７８８（ＮＶＰ−ＡＥＥ７８８）、ＢＩＢＷ２９９２、（Ａｆａｔｉｎｉｂ
）、ラパチニブ、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）、およびゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ
）が含まれる。
複数のシグナル伝達経路を標的化する例示的なＲＴＫ阻害剤（多標的キナーゼ阻害剤）
には、ＦＧＦＲ、ＦＬＴ−３、ＶＥＧＦＲ−ＰＤＧＦＲおよびＢｃｒ−Ａｂｌ受容体を標
的とするＡＰ２４５３４（ポナチニブ）；ＦＬＴ−３およびＶＥＧＦＲ−ＰＤＧＦＲ受容
体を標的とするＡＢＴ−８６９（リニファニブ）；ＶＥＧＦＲ−ＰＤＧＦＲ、Ｆｌｔ−１
およびＶＥＧＦ受容体を標的とするＡＺＤ２１７１；ＶＥＧＦＲ−ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲ
、Ｆｌｔ−３、およびｃ−Ｋｉｔ受容体を標的とするＣＨＲ−２５８（Ｄｏｖｉｔｉｎｉ
ｂ）；ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＫＩＴ、ＦＬＴ−３およびＣＳＦ−ＩＲを標的とするス
ニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ）；ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＲａｆ／Ｍｅｋ／Ｅｒｋ経路
における細胞内セリン／トレオニンキナーゼを標的とするソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ
）およびバタラニブが含まれる。
例示的なタンパク質シャペロン阻害剤には、ＨＳＰ９０阻害剤が含まれる。例示的なＨ
ＳＰ９０阻害剤には、１７ＡＡＧ誘導体、ＢＩＩＢ０２１、ＢＩＩＢ０２８、ＳＮＸ−５
４２２、ＮＶＰ−ＡＵＹ−９２２およびＫＷ−２４７８が含まれる。
例示的なＨＤＡＣ阻害剤には、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ＣＵＤＣ−１０１、
ドロキシノスタット、ＩＴＦ２３５７（ギビノスタット、ガビノスタット）、ＪＮＪ−２
６４８１５８５、ＬＡＱ８２４（ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、ダシノスタット）、ＬＢＨ−５
８９（パノビノスタット）、ＭＣ１５６８、ＭＧＣＤ０１０３（モセチノスタット）、Ｍ
Ｓ−２７５（エンチノスタット）、ＰＣＩ−２４７８１、ピロキサミド（ＮＳＣ６９６０
８５）、ＳＢ９３９、トリコスタチンＡおよびボリノスタット（ＳＡＨＡ）が含まれる。
例示的なＰＡＲＰ阻害剤には、イニパリブ（ＢＳＩ２０１）、オラパリブ（ＡＺＤ−２
２８１）、ＡＢＴ−８８８（ベリパリブ）、ＡＧ０１４６９９、ＣＥＰ９７２２、ＭＫ４
８２７、ＫＵ−００５９４３６（ＡＺＤ２２８１）、ＬＴ−６７３、３−アミノベンズア
ミド、Ａ−９６６４９２、およびＡＺＤ２４６１が含まれる。
例示的なＷｎｔ／ヘッジホッグシグナル伝達経路阻害剤には、ビスモデギブ（ＲＧ３６
１６／ＧＤＣ−０４４９）、シクロパミン（１１−デオキソジェルビン）（ヘッジホッグ
経路阻害剤）およびＸＡＶ−９３９（Ｗｎｔ経路阻害剤）が含まれる。
例示的なＲＮＡポリメラーゼ阻害剤には、アマトキシンが含まれる。例示的なアマトキ
シンには、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマヌ
リン、アマヌリン酸(amanullic acid)、アマニンアミド、アマニン、およびプロアマヌリ
ンが含まれる。
例示的なタンパク質合成阻害剤には、トリコテセン化合物が含まれる。
一実施形態にて、本発明に係る薬物は、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、非天然カン
プトテシン化合物）、ビンカアルカロイド、キナーゼ阻害剤（例えば、ＰＩ３キナーゼ阻
害剤（ＧＤＣ−０９４１およびＰＩ−１０３））、ＭＥＫ阻害剤、ＫＳＰ阻害剤、ＲＮＡ
ポリメラーゼ阻害剤、タンパク合成阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ドセタキセル、パクリタキ
セル、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カリケア
マイシン、トポテカン、ＳＮ３８、カンプトテシン、エキサテカン、ネモルビシンおよび
その誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、ＣＣ１０６５、エリナフィド、トリコテセン、ピロ
ロベンゾジアゼピン、マイタンシノイド、ＤＮＡ−結合薬または白金化合物、およびその
類似体である。特定の実施形態にて、薬物は、ＳＮ−３８、カンプトテシン、トポテカン
、エキサテカン、カリケアマイシン、エキサテカン、ネモルビシン、ＰＮＵ−１５９６８
２、アントラサイクリン、マイタンシノイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、
エリナフィド、ビンデシン、ビンブラスチン、ＰＩ−１０３、ＡＺＤ８３３０、ドラスタ
チン、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦ、デュオカルマイシン化合物、イスピネシブ
、ピロロベンゾジアゼピン、ＡＲＲＹ−５２０の誘導体、ならびにその立体異性体、アイ
ソスターおよび類似体である。
別の実施形態にて、本発明に係る薬物は、２種またはそれ超の薬物の組合せ、例えば、
ＰＩ３キナーゼ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤；広スペクトル細胞毒性化合物および白金化合
物；ＰＡＲＰ阻害剤および白金化合物；広スペクトル細胞毒性化合物およびＰＡＲＰ阻害
剤である。
さらに別の実施形態にて、本発明に係る薬物は、アウリスタチンＦ−ヒドロキシプロピ
ルアミド−Ｌ−アラニンである。
一実施形態にて、ビンカアルカロイドは、式（Ｖ）の化合物であり、
ここで、式中、
Ｒ１４は、水素、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜３アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）−クロロ置換Ｃ１〜
３アルキルであり、
Ｒ１５は、水素、−ＣＨ３または−ＣＨＯであり、
Ｒ１７およびＲ１８が独立に取られるとき、Ｒ１８は、水素であり、Ｒ１６またはＲ１
７のいずれかはエチルであり、他方はヒドロキシルであり、
Ｒ１７およびＲ１８はこれらが付着している炭素と一緒になってオキシラン環を形成す
るとき、Ｒ１６はエチルであり、
Ｒ１９は、水素、ＯＨ、アミノ基、アルキルアミノまたは−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ
−Ｒ２２であり、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ（Ｈ
）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２−Ｃ
Ｈ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）ｄ
−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロ
アルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有複素環部分を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数である。
ビンカアルカロイドのさらなる例は、米国特許第８,５２４,２１４号明細書および米国
特許公開第２００２／０１０３１３６号明細書に開示されている。
一実施形態にて、式（Ｖ）のビンカアルカロイドは、式（ＶＩ）の化合物であり、
ここで、式中、Ｒ４０は、水素、−ＯＨ、−ＮＨ２、または下記の構造のいずれかであ
り、
ここで、式中、
ａは、１〜６の整数であり、ｇは、２〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数である。
一実施形態にて、式（ＶＩ）において、Ｒ４０は、
である。
別の実施形態にて、Ｒ４０は、
である。
別の実施形態にて、式（ＶＩ）の化合物は、式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩｃ）ま
たは（ＶＩｄ）の化合物である。
別の実施形態にて、トポイソメラーゼ阻害剤は、式（ＶＩＩ）のカンプトテシン化合物
であり、
ここで、式中、
Ｒ２４は、−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＯＨまたはアルキルであり、あるいはＲ２４および
Ｒ２５は、一緒になって、任意選択的に置換されている５員または６員環を形成してもよ
く、
Ｒ２５は、−Ｈ、−Ｆ、−ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−ｔ−ブチル、−ＣＨ２Ｃ
Ｈ２Ｓｉ（ＣＨ３）３、−Ｓｉ（（ＣＨ３）２）−ｔ−ブチル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２９
であり、
Ｒ２９は、−ＮＨ２、−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２、５〜１２員のヘテロシク
ロアルキル、Ｒ２８−Ｃ５〜１２ヘテロシクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２また
は−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ６〜１２アリール−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２であり
、あるいはＲ２９は、本明細書に定義されているようなＲ４７であり、
Ｒ２６は、−Ｈ、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨ２、またはＮＯ２であり、
Ｒ２７は、−Ｈ、エチル、Ｎ−メチルピペリジン、シクロアルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−
ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、または−Ｎ−４−メチルシクロヘキシルアミンであ
り、
Ｒ７９は、−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２８−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ−Ｒ２２であり
、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ（Ｈ
）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２−Ｃ
Ｈ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）ｄ
−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロア
ルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
あるいはＲ２６およびＲ２７は、これらが付着している２個の炭素原子、および２個の炭
素原子を接続している第３の炭素原子と一緒になったとき、任意選択的に置換されている
６員環を形成し、
Ｒ２８は、不存在、ＮＨまたは酸素であり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数であり、ｕは、整数０または１であり、ｗは、整数０または１であ
り、
ただし、式（ＶＩＩ）の化合物は、Ｒ２９およびＲ７９の少なくとも１つを含有しなけ
ればならない。
一実施形態にて、式（ＶＩＩ）のカンプトテシン化合物は、式（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩ
Ｉａ）、または（ＶＩＩＩｂ）、または式（ＸＸＶ）または（ＸＸＶａ）の化合物であり
、
ここで、式中、Ｒ３０は、−ＮＨ２、−Ｒ２８−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ−Ｒ２２、
−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２、５〜１２員のヘテロシクロアルキル、Ｒ２８−Ｃ
５〜１２ヘテロシクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２または−Ｒ２８−Ｃ１〜６ア
ルキル−Ｃ６〜１２アリール−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２であり、
Ｒ２８は、不存在、ＮＨまたは酸素であり、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ（Ｈ
）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２−Ｃ
Ｈ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）ｄ
−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロア
ルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数である。
いくつかの実施形態にて、Ｒ３０は、下記の構造のいずれか１つであり、
ここで、式中、ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｇは、２〜６
の整数である。
一実施形態にて、式（ＶＩＩ）において、Ｒ３０は、
である。
別の実施形態にて、式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）、（ＶＩ
Ｉｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩｅ）または（ＶＩＩｆ）の化合物である。
別の実施形態にて、ＰＩ３キナーゼ阻害剤は、式（ＩＸ）の化合物であり、
ここで、式中、
Ｒ４７は、アミノ基、−Ｒ９−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ−Ｒ１０、−Ｒ９−Ｃ５〜１
２ヘテロシクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ１０、５〜１２員のヘテロシクロアルキ
ル、または−Ｒ９−Ｃ６〜１０アリールであり、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ１０は、−ＯＨ、−ＮＨＲ８３、−Ｎ−（Ｒ８３）Ｒ１１、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−
Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）
（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２−ＣＨ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−
ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）ｄ−Ｒ７７または−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ
−Ｒ８２−Ｒ８３であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロア
ルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
Ｒ９は、不存在、Ｎ−（Ｒ８３）または酸素であり、
Ｒ８３は、水素またはＣＨ３であり、
Ｒ１１は、
であり、
各Ｒ１２は、独立に、水素、クロリド、−ＣＨ３または−ＯＣＨ３であり、
Ｒ１３は、水素または−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｄ−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｆ−ＮＨ２
であり、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり
Ｘ４は、リシン、アルギニン、シトルリン、アラニンまたはグリシンの側鎖であり、
Ｘ５は、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンまたはトリプトファンの
側鎖であり、
Ｘ６およびＸ７のそれぞれは独立に、グリシン、アラニン、セリン、バリンまたはプロ
リンの側鎖であり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数であり、各ｕは、独立に、整数０または１であり、
あるいはＲ１１は、−Ｙｕ−Ｗｑ−Ｒ８８であり、
式中、
Ｙは、下記の構造のいずれか１つであり、
これらのそれぞれにおいて、Ｙの末端ＮＲ８３基は、Ｒ８８の近位にあり、
Ｒ８３は、水素またはＣＨ３であり、
各Ｗは、アミノ酸単位であり、
各Ｒ１２’は、独立に、ハロゲン、−Ｃ１〜８アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜８アルキル、ニ
トロまたはシアノであり、
Ｒ８８は、水素または−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｆｆ−（ＮＨ−Ｃ（Ｏ））ａａ−Ｅｊ−
（ＣＨ２）ｂｂ−Ｒ８５であり、
Ｒ８５は、ＮＨ２またはＯＨであり、
Ｅは、−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であり、
ｕは、整数０または１であり、ｑは、０〜１２の整数であり、ａａは、整数０または１
であり、ｂｂは、整数０または２であり、ｆｆは、０〜１０の整数であり、ｈは、０〜４
の整数であり、ｊは、０〜１２の整数であり、
Ｅが−ＣＨ２−であるとき、ｂｂは、０であり、ｊは、０〜１０の整数であり、Ｅが−
ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−であるとき、ｂｂは、２であり、ｊは、１〜１２の整数であり、
あるいはＲ１１は、
であり、
式中、
Ｒ８３は、水素またはＣＨ３であり、
Ｒ８４は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ６〜１０アリールであり、
各Ｒ１２’は、独立に、ハロゲン、−Ｃ１〜８アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜８アルキル、ニ
トロまたはシアノであり、
ｈは、０〜４の整数であり、ｕは、整数０または１である。
いくつかの実施形態にて、Ｒ１１は、
であり、
ここで、式中、
各Ｒ１２’は、独立に、クロリド、−ＣＨ３または−ＯＣＨ３であり、
Ｒ８８は、水素または−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｆｆ−（ＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２
−ＣＨ２−ＮＨ２であり、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
Ｘ４は、リシン、アルギニン、シトルリン、アラニンまたはグリシンの側鎖であり、
Ｘ５は、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンまたはトリプトファンの
側鎖であり、
Ｘ６およびＸ７のそれぞれは独立に、グリシン、アラニン、セリン、バリンまたはプロ
リンの側鎖であり、
ｆｆは、１〜３の整数であり、ｊは、１〜１２の整数であり、ｈは、０〜４の整数であ
り、各ｕは、独立に、整数０または１である。
いくつかの実施形態にて、
は、シトルリン−バリン；リシン−フェニルアラニン；シトルリン−フェニルアラニン
；シトルリン−ロイシン；シトルリン−バリン−グリシン−グリシン；グリシン−フェニ
ルアラニン−グリシン−グリシン；バリン；プロリン；ロイシンまたはイソロイシンであ
る。
別の実施形態にて、Ｒ１１は、下記の構造のいずれか１つである。
いくつかの実施形態にて、Ｒ４７は、下記の構造のいずれか１つであり、
ここで、式中、ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｇは、２〜６
の整数である。
別の実施形態にて、アウリスタチンは、式（Ｘ）の化合物であり、
ここで、式中、
Ｒ３１およびＲ３２のそれぞれは独立に、水素またはＣ１〜８アルキルであり、Ｒ３１
およびＲ３２のうち多くとも１つは、水素であり、
Ｒ３３は、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ３〜８炭素環、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ１〜８
アルキル−Ｃ６〜１０アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜８炭素環）、Ｃ３〜８複素環またはＸ１
−（Ｃ３〜８複素環）であり、
Ｒ３４は、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ３〜８炭素環、Ｃ６〜１０アリール、Ｘ１−Ｃ
６〜１０アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜８炭素環）、Ｃ３〜８複素環またはＸ１−（Ｃ３〜８
複素環）であり、
Ｒ３５は、水素またはメチルであり、
あるいはＲ３４およびＲ３５は、これらが付着している炭素原子と一緒になって、式−（
ＣＲ５５Ｒ４１）ｂ−を有する炭素環式環を形成し、Ｒ５５およびＲ４１のそれぞれは独
立に、水素またはＣ１〜８アルキルであり、ｂは、３〜７の整数であり、
Ｒ３６は、水素またはＣ１〜８アルキルであり、
Ｒ３７は、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ３〜８炭素環、Ｃ６〜１０アリール、−Ｘ１−
Ｃ６〜１０アリール、−Ｘ１−（Ｃ３〜８炭素環）、Ｃ３〜８複素環または−Ｘ１−（Ｃ
３〜８複素環）であり、
各Ｒ３８は、独立に、水素、ＯＨ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ３〜８炭素環またはＯ−（Ｃ
１〜８アルキル）であり、
Ｒ５３は、
またはＲ５４であり、
Ｒ３９は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ６〜１０アリール、−Ｘ１−Ｃ６〜１０アリール
、Ｃ３〜８炭素環、Ｃ３〜８複素環、−Ｘ１−Ｃ３〜８複素環、−Ｃ１〜８アルキレン−
ＮＨ２、または（ＣＨ２）２ＳＣＨ３であり、
各Ｘ１は、独立に、Ｃ１〜１０アルキレンまたはＣ３〜１０シクロアルキレンであり、
Ｒ４４は、水素またはＣ１〜８アルキルであり、
Ｒ４５は、Ｘ３−Ｒ４２またはＮＨ−Ｒ１９であり、
Ｘ３は、ＯまたはＳであり、
Ｒ１９は、水素、ＯＨ、アミノ基、アルキルアミノまたは−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ
−Ｒ２２であり、
Ｒ４２は、アミノ基、Ｃ１〜６アルキルアミノまたは−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ−Ｒ
２２であり、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨＲ２３、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ（
Ｈ）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２−
ＣＨ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）ｄ
−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロア
ルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
Ｒ５４は、−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ６〜１０アリール、−Ｃ（Ｒ５６）
２−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ３〜８複素環または−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ３〜
８炭素環であり、
Ｒ５６は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ３〜８炭素環、−Ｏ−Ｃ１〜８アルキル、−
Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２９および−Ｏ−Ｒ２３−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２から独立に選
択され、
Ｒ２９は、アミノ基、５〜１２員のヘテロシクロアルキル、−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル
−Ｒ２２、Ｒ２８−Ｃ５〜１２ヘテロシクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２、−［
Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ−Ｒ２２、または−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ６〜１２アリ
ール−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２であり、あるいはＲ２９は、本明細書に定義されている
ようなＲ４７であり、
Ｒ２８は、不存在、ＮＨまたは酸素であり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数である。
いくつかの実施形態にて、式（Ｘ）のアウリスタチン化合物において、
Ｒ３９は、ベンジル、または
であり、
Ｒ４４は、水素である。
別の実施形態にて、アウリスタチンは、式（Ｘａ）の化合物であり、
ここで、式中、
Ｒ３３からＲ３８、およびＲ４４は、本明細書に定義されている通りであり、
Ｒ３１およびＲ３２の一方は、水素またはＣ１〜８アルキルであり、他方は、
であり、
ここで、式中、
Ｒ８３は、水素またはＣＨ３であり、
Ｒ８４は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ６〜１０アリールであり、
各Ｒ１２’は、独立に、ハロゲン、−Ｃ１〜８アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜８アルキル、ニ
トロまたはシアノであり、
ｈは、０〜４の整数であり、ｕは、整数０または１であり、
Ｒ５３は、
またはＲ５４であり、
Ｒ３９は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ６〜１０アリール、−Ｘ１−Ｃ６〜１０アリール
、Ｃ３〜８炭素環、Ｃ３〜８複素環、−Ｘ１−Ｃ３〜８複素環、−Ｃ１〜８アルキレン−
ＮＨ２、または（ＣＨ２）２ＳＣＨ３であり、
各Ｘ１は、独立に、Ｃ１〜１０アルキレンまたはＣ３〜１０シクロアルキレンであり、
Ｒ４５は、Ｘ３−Ｒ４２またはＮＨ−Ｒ１９であり、
Ｘ３は、ＯまたはＳであり、
Ｒ１９は、水素、ＯＨ、アミノ基、アルキルアミノまたは−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ
−Ｒ２２であり、
Ｒ４２は、Ｈ、アミノ基、Ｃ１〜６アルキルアミノまたは−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ
−Ｒ２２であり、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨＲ２３、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ（
Ｈ）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２−
ＣＨ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）ｄ
−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロア
ルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
Ｒ５４は、−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ６〜１０アリール、−Ｃ（Ｒ５６）
２−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ３〜８複素環または−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ（Ｒ５６）２−Ｃ３〜
８炭素環であり、
Ｒ５６は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ３〜８炭素環、−Ｏ−Ｃ１〜８アルキル、−
Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２９および−Ｏ−Ｒ２３−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２から独立に選
択され、
Ｒ２９は、アミノ基、５〜１２員のヘテロシクロアルキル、−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル
−Ｒ２２、Ｒ２８−Ｃ５〜１２ヘテロシクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２、−［
Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ−Ｒ２２、または−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ６〜１２アリ
ール−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２であり、あるいはＲ２９は、本明細書に定義されている
ようなＲ４７であり、
Ｒ２８は、不存在、ＮＨまたは酸素であり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数である。
一実施形態にて、式（Ｘａ）のアウリスタチン化合物は、式（ＸＩａ）または式（ＸＩ
ｂ）の化合物であり、
ここで、式中、
Ｒ９２は、
であり、
Ｒ８３は、水素またはＣＨ３である。
一実施形態にて、式（Ｘ）のアウリスタチンは、式（ＸＩ）、式（ＸＩＩ）または式（
ＸＩＩＩ）の化合物であり、
式（ＸＩ）の化合物は、
であり、ここで、式中、Ｒ４２は、−ＣＨ３または下記の構造のいずれか１つであり、
ここで、式中、ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｇは、２〜６
の整数であり、
式（ＸＩＩ）の化合物は、
であり、Ｒ４０は、水素、−ＯＨ、−ＮＨ２、または下記の構造のいずれかであり、
ここで、式中、ａは、１〜６の整数であり、ｇは、２〜６の整数であり、ｃは、０〜３
の整数であり、
式（ＸＩＩＩ）の化合物は、
であり、
ここで、式中、Ｒ２９は、アミノ基、５〜１２員のヘテロシクロアルキル、−Ｒ２８−
Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２、Ｒ２８−Ｃ５〜１２ヘテロシクロアルキル−Ｃ１〜６アルキ
ル−Ｒ２２、−Ｒ２８−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ−Ｒ２２、または−Ｒ２８−Ｃ１〜６
アルキル−Ｃ６〜１２アリール−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２であり、あるいはＲ２９は、
本明細書に定義されているようなＲ４７であり、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨＲ２３、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ
（Ｈ）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２
−ＣＨ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）
ｄ−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロ
アルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
Ｒ２８は、不存在、ＮＨまたは酸素であり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数である。
一実施形態にて、式（ＸＩＩ）において、Ｒ４０は、
である。
別の実施形態にて、式（ＸＩＩ）の化合物は、式（ＸＩＩｂ）または（ＸＩＩｃ）の化
合物である。
一実施形態にて、式（ＸＩＩＩ）の化合物において、Ｒ２９は、−ＮＨ２、５員ヘテロ
シクロアルキル、−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２、Ｒ２８−Ｃ５〜１２ヘテロシク
ロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２または−Ｒ２８−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ６〜１２
アリール−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ２２であり、あるいはＲ２９は、本明細書に定義されて
いるようなＲ４７であり、
Ｒ２８は、不存在、ＮＨまたは酸素であり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨＲ２３、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ
（Ｈ）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２
−ＣＨ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）
ｄ−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロア
ルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、ｆは、１〜１２の整数である
。
さらに別の実施形態にて、Ｒ２９は、下記の構造のいずれか１つであり、
ここで、式中、ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｇは、２〜６
の整数である。
一実施形態にて、ＭＥＫ阻害剤は、式（ＸＩＶ）の化合物であり、
ここで、式中、Ｒ４３は、Ｈまたは−Ｒ４６−Ｒ４７であり、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ（Ｈ
）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２−Ｃ
Ｈ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）ｄ
−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロ
アルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
Ｒ４６は、−Ｃ（Ｏ）−；−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、または不存在であ
り、
Ｒ４７は、本明細書に定義されている通りであり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数である。
ＭＥＫ阻害剤のさらなる例は、米国特許第７，５１７，９９４号明細書に開示されてい
る。
いくつかの実施形態にて、Ｒ４３は、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ａ−ＮＨ２、または−Ｃ
（Ｏ）−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｃ−ＮＨ２であり、ａは、１〜６の整数であり
、ｃは、０〜３の整数である。
別の実施形態にて、デュオカルマイシン化合物は、式（ＸＶ）の化合物であり、
ここで、式中、
Ｒ４７は、本明細書に定義されている通りであり、
Ｒ４８は、水素、−ＣＯＯＣ１〜６アルキル、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２または−ＣＨ３で
あり、
Ｒ４９は、Ｃｌ、Ｂｒまたは−ＯＨであり、
Ｒ５０は、水素、−ＯＣＨ３、
であり、
Ｒ５１およびＲ５２のそれぞれは独立に、水素または−ＯＣＨ３であり、
環ＡＡは、フェニルまたはピロリル環である。
デュオカルマイシン化合物のさらなる例は、米国特許第７，５５３，８１６号明細書に
開示されている。
一実施形態にて、式（ＸＶ）のデュオカルマイシン化合物は、式（ＸＶＩ）、（ＸＶＩ
Ｉ）、（ＸＶＩＩＩ）または（ＸＩＸ）の化合物であり、
ここで、式中、
Ｒ４９は、Ｃｌ、Ｂｒまたは−ＯＨであり、
Ｒ４７は、本明細書に定義されている通りである。
別の実施形態にて、デュオカルマイシン化合物は、式（ＸＸ）：ＵＳ５１０１０３８；
または（ＸＸＩ）のデュオカルマイシンＳＡ化合物であり、
ここで、式中、
Ｒ４２は、Ｃ１〜６アルキルアミノまたは−［Ｃ（Ｒ２０Ｒ２１）］ａ−Ｒ２２であり
、
Ｒ２０およびＲ２１のそれぞれは独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリー
ル、ヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、ポリヒドロキシル化Ｃ６〜１０アリール、５〜
１２員の複素環、Ｃ３〜８シクロアルキル、ヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、ポ
リヒドロキシル化Ｃ３〜８シクロアルキル、または天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖で
あり、
Ｒ２２は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｃ−Ｃ（Ｈ
）（Ｒ２３）−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、−Ｒ８２−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｄ−（ＯＣＨ２−Ｃ
Ｈ２）ｆ−Ｎ（Ｈ）（Ｒ２３）、または−Ｒ８２−（Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｘ２）−ＮＨ）ｄ
−Ｒ７７であり、
各Ｒ２３は、独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ３〜８シクロ
アルキル、−ＣＯＯＨ、または−ＣＯＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｘ２は、天然若しくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
Ｒ７７は、水素またはＸ２であり、ＮＲ７７は、窒素含有環式化合物を形成し、
Ｒ８２は、−ＮＨまたは酸素であり、
ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｄは、１〜３の整数であり、
ｆは、１〜１２の整数である。
いくつかの実施形態にて、Ｒ４２は、下記の構造のいずれか１つであり、
ここで、式中、ａは、１〜６の整数であり、ｇは、２〜６の整数であり、ｃは、０〜３
の整数である。
別の実施形態にて、ＫＳＰ阻害剤化合物は、式（ＸＸＶＩ）の化合物であり、
ここで、式中、Ｒ３０は、本明細書に定義されている通りである。
いくつかの実施形態にて、Ｒ３０は、
であり、
ここで、式中、ａは、１〜６の整数であり、ｃは、０〜３の整数であり、ｇは、２〜６
の整数である。
別の実施形態にて、デュオカルマイシン化合物は、デュオカルマイシンＡ、デュオカル
マイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシン
Ｃ２、デュオカルマイシンＤ、ＣＣ−１０６５、アドゼレシン、ビゼレシンまたはカルゼ
レシンである。
別の実施形態にて、ＫＳＰ阻害剤化合物は、式（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）また
は（ＸＸＩＸ）の化合物であり、
ここで、式中、Ｒ１１は、本明細書に定義されている通りである。
本明細書に記載の治療剤のそれぞれは、このように得られた化合物が当初の化合物の特
異性および／または活性をまた保持するような様式で修飾することができることを治療剤
の当業者は容易に理解する。これらの化合物の多くを、本明細書に記載の治療剤の代わり
に使用することができることを当業者はまた理解する。このように、本発明に係る治療剤
は、本明細書に記載の化合物の類似体および誘導体を含む。
下記の表Ｂは、本発明に係るポリマー薬物−タンパク質共役体またはポリマー−薬物足
場を形成する共役に適した治療剤およびその誘導体のさらなる例を提供する。特定の化合
物のスペクトルデータをまた提供する（表におけるＮＤは「未決定」を意味する）。これ
らの例はまた、これが共役体からｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで放出されると
き、薬物の活性形態であり得る。
＜タンパク質をベースとする認識分子（ＰＢＲＭ）＞
タンパク質をベースとする認識分子は、特定の組織、細胞、または細胞中の場所へと薬
物−ポリマー担体共役体を方向付ける。タンパク質をベースとする認識分子は、培養物ま
たは完全な生物、または両方において修飾ポリマーを方向付けることができる。それぞれ
の場合、タンパク質をベースとする認識分子は、有効な特異性、親和性および結合力を伴
って結合する標的とする細胞（複数可）の細胞表面上に存在するリガンドを有する。いく
つかの実施形態にて、タンパク質をベースとする認識分子は、修飾ポリマーを、肝臓以外
の組織へと標的化する。他の実施形態にて、タンパク質をベースとする認識分子は、修飾
ポリマーを、特定の組織、例えば、肝臓、腎臓、肺または膵臓へと標的化する。タンパク
質をベースとする認識分子は、修飾ポリマーを、標的細胞、例えば、がん細胞、例えば、
細胞、例えば、がん細胞上に発現する受容体、マトリックス組織、またはがんと関連する
タンパク質、例えば、腫瘍抗原へと標的化することができる。代わりに、腫瘍血管系を含
む細胞を標的とし得る。タンパク質をベースとする認識分子は、ポリマーを特定のタイプ
の細胞に方向付けることができ、例えば、クッパー細胞と対立するものとして肝臓中の肝
細胞への特異的標的化である。他の場合において、タンパク質をベースとする認識分子は
、ポリマーを細網内皮系若しくはリンパ系の細胞、または専門の食細胞、例えば、マクロ
ファージ若しくは好酸球に方向付けることができる。（このような場合、ポリマー自体は
また、特異的標的化を必要とせずに有効な送達系であり得る）。
また他の実施形態にて、タンパク質をベースとする認識分子は、修飾ポリマーを、細胞
、例えば、細胞核、細胞質、またはエンドソーム内の場所へと標的化することができる。
特定の実施形態にて、タンパク質をベースとする認識分子は、受容体への細胞の結合、ま
たは細胞核への細胞質内輸送、および細胞核への侵入、またはエンドソーム若しくは他の
細胞内小胞からの放出を増強することができる。
特定の実施形態にて、タンパク質をベースとする認識分子は、抗体、タンパク質および
ペプチドまたはペプチド模倣物を含む。
好ましい実施形態にて、タンパク質をベースとする認識分子は、スルフヒドリル基を含
み、タンパク質をベースとする認識分子は、ポリマーのスルフヒドリル基および官能基を
介して共有結合を形成することによって、ポリマー−薬物共役体に共役している。
細胞表面マーカーに特異的であるＦａｂ、Ｆａｂ２、ｓｃＦｖまたはラクダ抗体重鎖フ
ラグメントに由来する例示的な抗体または抗体には、これらに限定されないが、５Ｔ４、
ＡＯＣ３、ＡＬＫ、ＡＸＬ、Ｃ２４２、ＣＡ−１２５、ＣＣＬ１１、ＣＣＲ５、ＣＤ２、
ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１５、ＣＡ１５〜３、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＡ１９〜９
、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３３
、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５１、ＣＤ
５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７４
、ＣＤ７９−Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４７、ＣＤ１
５２、ＣＤ１５４、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、クランピング因子、ＣＴＬＡ−４、ＣＸＣＲ２
、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＢ
２、ＥＰＨＢ４、ＦＧＦＲ（すなわち、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ
４）、ＦＬＴ３、葉酸受容体、ＦＡＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＮＭＢ、ＨＧＦ、ＨＥＲ２
、ＨＥＲ３、ＨＭＩ．２４、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＩＧＦ−１受容体、ＶＥＧＦＲ１
、ＥｐｈＡ２、ＴＲＰＶ１、ＣＦＴＲ、ｇｐＮＭＢ、ＣＡ９、Ｃｒｉｐｔｏ、ｃ−ＫＩＴ
、ｃ−ＭＥＴ、ＡＣＥ、ＡＰＰ、アドレナリン作動性受容体−ベータ２、Ｃｌａｕｄｉｎ
ｅ３、メソテリン、ＭＵＣ１、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ
３、ＮＯＴＣＨ４、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｂ
４、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−１３受容体、インテグリン（α４、αｖβ
３、αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α４β７、α５β１、α６β４、αＩＩ
ｂβ３インテグリンを含めた）、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩｇＥ、ＩｇＥ、ＩＧＦ−１
受容体、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１３、ＩＬ−２２、ＩＬ−４、ＩＬ
−５、ＩＬ−６、インターフェロン受容体、ＩＴＧＢ２（ＣＤ１８）、ＬＦＡ−１（ＣＤ
１１ａ）、Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ムチン、ＭＵＣ１、ミオスタチン、ＮＣＡ−
９０、ＮＧＦ、ＰＤＧＦＲα、ホスファチジルセリン、前立腺癌細胞、シュードモナス・
エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、狂犬病、ＲＡＮＫＬ
、呼吸器合胞体ウイルス、Ｒｈ因子、ＳＬＡＭＦ７、スフィンゴシン−１−リン酸、ＴＡ
Ｇ−７２、Ｔ細胞受容体、テネイシンＣ、ＴＧＦ−１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β、ＴＮ
Ｆ−α、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ
−Ａ、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン等が含まれる。
一実施形態にて、細胞表面マーカーに特異的であるＦａｂ、Ｆａｂ２、ｓｃＦｖまたは
ラクダ抗体重鎖フラグメントに由来する抗体（複数可）には、ＣＡ−１２５、Ｃ２４２、
ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３３、ＣＤ３７、Ｃ
Ｄ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２
Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ−４、ＥＧＦＲ
（ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＦＡＰ、葉酸受容体、ＩＧＦ−１受容体、ＧＤ
３、ＧＰＮＭＢ、ＨＧＦ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ１、Ｅｐ
ｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、５Ｔ４、ＴＡＧ−７２、テネイシンＣ、ＴＲＰＶ１、ＣＦＴＲ、ｇ
ｐＮＭＢ、ＣＡ９、Ｃｒｉｐｔｏ、ＡＣＥ、ＡＰＰ、ＰＤＧＦＲα、ホスファチジルセリ
ン、前立腺癌細胞、アドレナリン作動性受容体−ベータ２、Ｃｌａｕｄｉｎｅ３、ムチン
、ＭＵＣ１、メソテリン、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−１３受容体およびイ
ンテグリン（αｖβ３、 αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α５β１、α６β
４インテグリンを含めた）、テネイシンＣ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２ならびにビメンチンが含ま
れる。
例示的な抗体には、３Ｆ８、アバゴボマブ、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ）、アダリ
ムマブ（ＨＵＭＩＲＡ）、アデカツムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマ
ブ、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ）、アルツモマブ、アマツキシマブ
、アナツモマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ（ＣＥＡ−ＳＣＡＮ
）、アセリズマブ、アトリズマブ（トシリズマブ、Ａｃｔｅｍｒａ、ＲｏＡｃｔｅｍｒａ
）、アトロリムマブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ）、バビツキ
シマブ、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＯＳＣＡＮ）、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ）、ベ
ンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ（ＳＣＩＮＩＴＩＭＵＮ）、ベバシズマブ
（ＡＶＡＳＴＩＮ）、ビシロマブ（ＦＩＢＲＩＳＣＩＮＴ）、ビバツズマブ、ブリナツモ
マブ、ブレンツキシマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ（ＩＬＡＲＩＳ）、カンツズマ
ブ、カプロマブ、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ）、ＣＣ４９、セデリズマブ、セルト
リズマブ、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ）、シタツズマブ、シクスツムマブ、クレノリ
キシマブ、クリバツズマブ、コナツムマブ、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ
（ＺＥＮＡＰＡＸ）、ダラツムマブ、デノスマブ（ＰＲＯＬＩＡ）、デツモマブ、ドルリ
モマブ、ドルリキシズマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ）、エド
バコマブ、エドレコロマブ（ＰＡＮＯＲＥＸ）、エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ）、エ
フングマブ（ＭＹＣＯＧＲＡＢ）、エロツズマブ、エルシリモマブ、エンリモマブ、エピ
ツモマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ（ＲＥＸＯＭＵＮ）、エタ
ラシズマブ（ＡＢＥＧＲＩＮ）、エキスビビルマブ、ファノレソマブ（ＮＥＵＴＲＯＳＰ
ＥＣ）、ファラリモマブ、ファーレツズマブ、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィギ
ツムマブ、ホントリズマブ（ＨｕＺＡＦ）、ホラビルマブ、フレソリムマブ、ガリキシマ
ブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマ
ブ、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩ）、ゴミリキシマブ、イバリズマブ、イブリツモマブ、
イゴボマブ（ＩＮＤＩＭＡＣＩＳ−１２５）、イムシロマブ（ＭＹＯＳＣＩＮＴ）、イン
フリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブ、イ
ピリムマブ、イラツムマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ（ＣＥＡ−ＣＩＤＥ）、レブリ
キズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リンツズマ
ブ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マスリモマブ、マツズマブ、メポリ
ズマブ（ＢＯＳＡＴＲＩＡ）、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマ
ブ、モロリムマブ、モタビズマブ（ＮＵＭＡＸ）、ムロモナブ−ＣＤ３（ＯＲＴＨＯＣＬ
ＯＮＥ ＯＫＴ３）、ナコロマブ、ナプツモマブ、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ）、ネ
バクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ）、ノフェツ
モマブ、オクレリズマブ、オズリモマブ、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ）、オララツ
マブ、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ）、オンテシズマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ
（ＯＶＡＲＥＸ）、オテリキシズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ
）、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ）、パノバクマブ、パスコリズマブ、ペムツモマブ
（ＴＨＥＲＡＧＹＮ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ）、パキセリズマブ、ピンツモ
マブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、
ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リ
ロツムマブ、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ）、ロバツムマブ、ロンタリズマブ、ロベリ
ズマブ（ＬＥＵＫＡＲＲＥＳＴ）、ルプリズマブ（ＡＮＴＯＶＡ）、サツモマブペンデチ
ド、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シプリズマブ、ソ
ラネズマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ（ＬＥＵＫＯＳ
ＣＡＮ）、タカツズマブ（ＡＦＰ−ＣＩＤＥ）、テトラキセタン、タドシズマブ、タリズ
マブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトックス、テフィバズマブ（ＡＵＲＥＸＩＳ）、
テリモマブ、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリム
マブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシリズマブ（アトリズマブ
、ＡＣＴＥＭＲＡ）、トラリズマブ、トシツモマブ（ＢＥＸＸＡＲ）、トラスツズマブ（
ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、トレメリムマブ、ツコツズマブ、ツビルマブ、ウルトキサズマブ
、ウステキヌマブ（ＳＴＥＬＥＲＡ）、バパリキシマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、
ベパリモマブ、ビジリズマブ（ＮＵＶＩＯＮ）、ボロシキシマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ）
、ボツムマブ、ザルツムマブ（ＨｕＭＥＸ−ＥＧＦｒ）、ザノリムマブ（ＨｕＭＡＸ−Ｃ
Ｄ４）、ジラリムマブおよびゾリモマブが含まれる。
いくつかの実施形態にて、抗体は、５Ｔ４、ＣＡ−１２５、ＣＥＡ、ＣＤ３、ＣＤ１９
、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＴＬＡ
−４、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）、ＦＡＰ、葉酸受容体、ＨＧＦ、イ
ンテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、ＩＧＦ−１受容体、ＧＤ３、ＧＰＮＭＢ、
ムチン、ＭＵＣ１、ホスファチジルセリン、前立腺癌細胞、ＰＤＧＦＲα、ＴＡＧ−７２
、テネイシンＣ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＶＥＧＦ−ＡおよびＶＥＧＦＲ２についての細胞表
面マーカーに方向付けられる。この実施形態にて、抗体は、アバゴボマブ、アデカツムマ
ブ、アラシズマブ、アルツモマブ、アナツモマブ、アルシツモマブ、バビツキシマブ、ベ
バシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ）、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カ
ンツズマブ、カツマキソマブ、カプロマブ、セツキシマブ、シタツズマブ、クリバツズマ
ブ、コナツムマブ、ドアセツズマブ、エドレコロマブ、エプラツズマブ、エルツマキソマ
ブ、エタラシズマブ、ファーレツズマブ、フィギツムマブ、ゲムツズマブ、グレンバツム
マブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、インテツムマブ、イノツズマブ、ラベツズマブ、レ
クサツムマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、マツズマブ、ミツモマブ、ナプツモマブエ
スタフェナトキス、ネシツムマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、パニツムマブ、ペム
ツモマブ、ペルツズマブ、プリツムマブ、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ）、リロツムマ
ブ、ロバツムマブ、サツモマブ、シブロツズマブ、タプリツモマブ、テナツモマブ、テナ
ツモマブ、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、トラスツズマブ（ＨＥＲＣ
ＥＰＴＩＮ）、トシツモマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ボロシキ
シマブおよびザルツムマブである。
特定の実施形態にて、ＨＥＲ２について細胞表面マーカーに方向付けられる抗体は、ペ
ルツズマブまたはトラスツズマブであり、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）について、抗体は、セツ
キシマブまたはパニツムマブであり、ＣＤ２０について、抗体は、リツキシマブであり、
ＶＥＧＦ−Ａについて、ベバシズマブであり、ＣＤ−２２について、抗体は、エプラツズ
マブまたはベルツズマブであり、ＣＥＡについて、抗体は、ラベツズマブである。
例示的なペプチドまたはペプチド模倣物は、インテグリン標的化ペプチド（ＲＧＤペプ
チド）、ＬＨＲＨ受容体標的化ペプチド、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）受容体標的化ペプチド
、前立腺特異的膜結合抗原（ＰＳＭＡ）標的化ペプチド、リポタンパク質受容体ＬＲＰ１
標的化、ＡｐｏＥタンパク質に由来するペプチド、ＡｐｏＡタンパク質ペプチド、ソマト
スタチン受容体標的化ペプチド、クロロトキシンに由来するペプチド、およびボンベシン
を含む。
特定の実施形態にて、ペプチドまたはペプチド模倣物は、ＬＨＲＨ受容体標的化ペプチ
ドおよびＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）受容体標的化ペプチドである。
例示的なタンパク質には、インスリン、トランスフェリン、フィブリノゲン−ガンマフ
ラグメント、トロンボスポンジン、クローディン、アポリポタンパク質Ｅ、Ａｆｆｉｂｏ
ｄｙ分子、例えば、ＡＢＹ−０２５、アンキリンリピートタンパク質、アンキリン様反復
タンパク質および合成ペプチドが含まれる。
本発明のいくつかの実施形態にて、タンパク質−ポリマー−薬物共役体は、細胞表面マ
ーカーと組み合わせた広スペクトル細胞毒を含み、ＨＥＲ２について、例えば、ペルツズ
マブまたはトラスツズマブ；ＥＧＦＲについて、例えば、セツキシマブおよびパニツムマ
ブ；ＣＥＡについて、例えば、ラベツズマブ；ＣＤ２０について、例えば、リツキシマブ
；ＶＥＧＦ−Ａについて、例えば、ベバシズマブ；またはＣＤ−２２について、例えば、
エプラツズマブまたはベルツズマブである。
本発明の他の実施形態にて、本発明に係るタンパク質−薬物−ポリマー共役体またはタ
ンパク質−ポリマー共役体は、２個またはそれ超のタンパク質をベースとする認識分子の
組合せ、例えば、腫瘍細胞上のＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）ならびにＴ細胞上のＣＤ３およ
びＣＤ２８を対象とする二重特異性抗体の組合せ；Ｆａｂ、Ｆａｂ２、ｓｃＦｖまたはラ
クダ抗体重鎖フラグメントに由来する抗体（複数可）、およびペプチドまたはペプチド模
倣物の組合せ；Ｆａｂ、Ｆａｂ２、ｓｃＦｖまたはラクダ抗体重鎖フラグメントに由来す
る抗体（複数可）、およびタンパク質の組合せ；２種の二重特異性抗体、例えば、ＣＤ３
×ＣＤ１９およびＣＤ２８×ＣＤ２２二重特異性抗体の組合せを含む。
本発明の他の実施形態にて、本発明に係るタンパク質−薬物−ポリマー共役体またはタ
ンパク質−ポリマー共役体は、抗原に対する抗体、例えば、トラスツズマブ、セツキシマ
ブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、エプラツズマブ、ベルツズマブ、ラベツズマブ、Ｂ７
−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ３、ＣＡ１２５、ＣＤ３３、ＣＸＣＲ２、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ１、ＦＧ
ＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＨＥＲ２、ＮａＰｉ２ｂ、ｃ−Ｍｅｔ、ＮＯＴＣＨ１
、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＤ−Ｌ１、ｃ−Ｋｉｔ、ＭＵＣ１およ
び５Ｔ４であるタンパク質をベースとする認識分子を含む。
本発明の特定の実施形態にて、本発明に係るタンパク質−薬物−ポリマー共役体または
タンパク質−ポリマー共役体は、５Ｔ４に対する抗体、例えば、ヒト化抗５Ｔ４ｓｃＦｖ
Ｆｃ抗体であるタンパク質をベースとする認識分子を含む。
適切な５Ｔ４標的化リガンドまたは免疫グロブリンの例は、市販されているものを含み
、または特許若しくは非特許文献、例えば、米国特許第８，０４４，１７８号明細書、米
国特許第８，３０９，０９４号明細書、米国特許第７，５１４，５４６号明細書、欧州特
許第１０３６０９１号明細書（ＴｒｏＶａｘ（商標）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃ
ａとして市販されている）、欧州特許第２３６８９１４号明細書、国際公開第２０１３／
０４１６８７号（Ａｍｇｅｎ）、米国特許公開第２０１０／０１７３３８２号明細書、お
よびＰ． Ｓａｐｒａら、Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ． ２０１３、１２：３８
〜４７に記載されてきた。抗５Ｔ４抗体は、２０１３年９月１３日に出願された米国特許
仮出願第６１／８７７，４３９号明細書、および２０１３年６月１７日に出願された米国
特許仮出願第６１／８３５，８５８号明細書に開示されている。特許文献および科学的公
開資料のそれぞれの内容は、参照により本明細書にその全体が組み込む。
用語「５Ｔ４抗原結合ポーション(5T4 antigen-binding portion)」は、本明細書にて
、５Ｔ４抗原に選択的に結合することができるポリペプチド配列を指す。例示的な共役体
において、５Ｔ４抗原結合ポーションは一般的に、抗５Ｔ４抗体から工学処理した単鎖ｓ
ｃＦｖ−Ｆｃ形態を含む。単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ−Ｆｃ）は、リンカーペプチ
ドに接続しており、抗体のヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３領域を含むＦｃ領域に
さらに接続している、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融
合タンパク質である（お互いとのまたは他のペプチド配列との抗体ポーションの任意のこ
のような組合せは、本明細書にて「免疫融合(immunofusion)」分子と称されることがある
）。このようなｓｃＦｖＦｃ分子内で、ｓｃＦｖセクションは、リンカーペプチドによっ
てＦｃセクションのＮ末端にＣ末端で連結し得る。
免疫融合分子の５Ｔ４抗原結合ポーションの少なくとも１ポーションは、マウス源から
由来し得る。例えば、配列番号Ａによるポリペプチド配列を有する少なくともマウスの抗
５Ｔ４ｓｃＦｖ領域をコードするように工学処理されたポリヌクレオチドを発現させるこ
とによって免疫融合分子を得てもよい（例えば、２０１３年６月１７日に出願された米国
特許仮出願第６１／８３５，８５８号明細書を参照されたい）。さらに、５Ｔ４−抗原結
合ポーションの少なくとも１ポーションは、周知の方法によってキメラまたはヒト化であ
るように生じさせてもよい。Ｂｏｒｒａｓら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２０１０
、Ｍａｒ １９；２８５（１２）：９０５４〜６６を参照されたい。このように、少なく
とも配列番号Ｂによるポリペプチド配列をコードするように工学処理されたポリヌクレオ
チドを発現させることによって、ヒト化ｓｃＦｖポーションを伴う５Ｔ４−抗原結合ポー
ションを有する免疫融合分子を得ることができる（例えば、２０１３年６月１７日に出願
された米国特許仮出願第６１／８３５，８５８号明細書を参照されたい）。
いくつかの例において、５Ｔ４抗原結合ポーションのＦｖポーションを周知の分子生物
学技術によって工学処理して、ＶＨ領域において１個または複数のアミノ酸置換を含み得
る。５Ｔ４抗原結合ポーションのＦｃポーションは好ましくは、抗５Ｔ４抗体のヒトヒン
ジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域から工学処理したポリペプチド配列を含む。例えば、配列番
号Ｃによるポリペプチド配列を有する少なくともＦｃポーションをコードするポリヌクレ
オチドを工学処理することが可能である（例えば、２０１３年６月１７日に出願された米
国特許仮出願第６１／８３５，８５８号明細書を参照。）。
ペプチドをコードするポリヌクレオチド（単鎖ＦｖおよびＦｃ領域は一緒に連結してい
る）は、配列番号Ｄによるポリペプチド配列を有する共役体の少なくともキメラ５Ｔ４抗
原結合ポーションをコードしてもよく、または配列番号Ｅ若しくはＦによるポリペプチド
配列を有するヒト化５Ｔ４抗原結合ポーションをコードしてもよい。
ポリペプチドリンカー、例えば、ポリペプチド配列ＡＳＴＣ（配列番号Ｙ）またはＡＳ
ＴＸ（配列番号Ｚ）を有するもの（「Ｘ」は、任意のアミノ酸、または隣接するアミノ酸
の間の直接のペプチド結合を指す）は、ＳｃＦｖポーションのＣ末端を５Ｔ４抗原結合ポ
ーションのＦｃポーションのＮ末端に縮合し得る。このように、配列番号ＹまたはＺによ
るポリペプチド配列を有する少なくともリンカーをコードするポリヌクレオチドを工学処
理することが可能である。配列番号ＹまたはＺはリンカーとして使用し得る一方、配列番
号Ｙによるペプチドリンカーを有する免疫融合分子は、システイン残基の存在によって部
位特異的共役の恩恵を受ける。
好ましくは、任意のアミノ酸の置換、挿入、若しくは欠失またはペプチド模倣物の使用
は、５Ｔ４抗原結合ポーションの親和性または特異性を実質的に低減しない。アミノ酸の
置換、挿入、若しくは欠失を有する免疫融合分子、または５Ｔ４抗原結合ポーション中の
ペプチド模倣物は好ましくは、未修飾５Ｔ４−抗原結合ポーションを有する共役体と比較
して、７５％超、好ましくは８０％超、好ましくは８５％超、好ましくは９０％超、また
は好ましくは９５％超の、５Ｔ４抗原を結合するための親和性または特異性を保持する。
２０１３年６月１７日に出願された米国特許仮出願第６１／８３５，８５８号明細書に
おいて開示されているように、抗５Ｔ４単鎖抗体−Ｆｃ融合タンパク質（「抗５Ｔ４ｓｃ
Ｆｖ−Ｆｃ」）を、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞中で調製した。
配列番号Ａ：５Ｔ４特異的マウスｓｃＦｖ：
配列番号Ｂ：５Ｔ４特異的ヒト化ｓｃＦｖ：
配列番号Ｃ：ヒトヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３（Ｆｃガンマ１）：
配列番号Ｙ：部位特異的共役−１：ＡＳＴＣ
配列番号Ｚ：非部位特異的共役−１：ＡＳＴＸ
配列番号Ｄ：キメラ抗５Ｔ４ｓｃＦｖ−Ｆｃ：
配列番号Ｅ：ヒト化抗５Ｔ４ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＡＳＴＣ）：
配列番号Ｆ：ヒト化抗５Ｔ４ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＡＳＴＸ）：
これらの抗体は、組換え技術によって、合成的に、または他の適切な当技術分野におい
て公知の方法によって産生し得る。このような方法および構築体は、ポリペプチドをコー
ドする核酸配列、および本明細書にて同定されるペプチド配列を利用する。代わりに、抗
体産生のためのこのような方法および構築体は、天然にまたは人工的に修飾された配列、
例えば、本明細書にて提供する配列番号（例えば、Ａ）の天然変異体またはコドン最適化
変異体を利用する。種々のコドン最適化スキームは、当技術分野において公知である。例
えば、ウェブベースの最適化方法であるＵｐＧｅｎｅ（商標）およびＯｐｔｉｍｉｚｅｒ
（商標）を参照されたい。さらに、いくつかの営利団体は、独自開発のスキーム、例えば
、数ある中でもＳｉｇｎＧｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＤＮＡ２．０、ＯｐｅｎＸ
を使用してコドン最適化を行う。
本明細書に記載のこれらの標的化リガンド、リンカーおよび薬物またはプロドラッグフ
ラグメントは、例えば、開示されている技術および方法によって、本発明に係る治療薬お
よび標的化共役体に構築することができる。本発明に係る治療剤および標的化共役体、な
らびにこれらを生成する方法を、非限定的実施例によって下で記載する。
＜共役体またはポリマー足場＞
本発明に係る共役体は、１回または複数回出現するＤを含み、Ｄは、治療剤、例えば薬
物であり、１回または複数回出現するＤは、同じでも、または異なってもよい。
ある特定の他の実施形態にて、１回または複数回出現するＰＢＲＭは、ポリマー担体に
付着しており、１回または複数回出現するＰＢＲＭは、同じまたは異なり得る。ある特定
の他の実施形態にて、１回または複数回出現するＤを含有する１個または複数のポリマー
担体は、ＰＢＲＭ（例えば、抗体）に接続している。
上記でより一般的に考察するように、ある特定の実施形態にて、各ポリマー担体は、独
立に、約０．１％〜約２５％、より好ましくは、約０．５％〜約２０％、より好ましくは
、約１％〜約１５％、さらにより好ましくは、約２％〜約１０％の、Ｄを含むモノマーを
有する。例えば、ポリマー担体は、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの分子量を有するＰＨＦで
あり、約０．３％〜約１５％、より好ましくは、約２％〜１２％、より好ましくは、約５
％〜１０％の、アウリスタチンＦを含むモノマーを有する。
ある特定の実施形態にて、Ｄが、広範囲の細胞株において抗増殖活性についてＩＣ５０
＜１０ｐＭを有する薬物であるとき、ポリマー担体は、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの分子
量を有するＰＨＦであり、約０．１％〜約２５％、より好ましくは、約２％〜１０％、よ
り好ましくは、約２％〜５％の、Ｄを含むモノマーを有する。
ある特定の実施形態にて、本発明に係る共役体は、式（Ｉｄ）のものであり、
ここで、式中、
Ｄは、出現する毎に独立に、≦５ｋＤａの分子量を有する治療剤であり、Ｄおよびカル
ボニル基の間の
は、カルボニル基へのＤの直接的また間接的な付着を表し、
ｍ１は、１〜約１４０の整数であり、ｍ７は、１〜約４０の整数であり、ｍ１およびｍ
７の合計は、ｍ６（すなわち、２〜約１８０）である。
一実施形態にて、Ｄは、ａ）アウリスタチン化合物；（ｂ）カリケアマイシン化合物；
（ｃ）デュオカルマイシン化合物；（ｄ）トポイソメラーゼ阻害剤、（ｅ）ピロロベンゾ
ジアゼピン化合物；（ｆ）ビンカ化合物；（ｇ）タンパク合成阻害剤；（ｈ）ＲＮＡポリ
メラーゼ阻害剤；（ｉ）チューブリン結合化合物；またはその類似体である。
特定の実施形態にて、Ｄは、（ａ）アウリスタチン化合物；（ｂ）カリケアマイシン化
合物；（ｃ）デュオカルマイシン化合物；（ｄ）カンプトテシン化合物、（ｅ）ピロロベ
ンゾジアゼピン化合物；（ｆ）ビンカ化合物；またはその類似体である。
例えば、アウリスタチン化合物は、アウリスタチン、ドラスタチン、モノメチルアウリ
スタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＦ
、ＡＦ ＨＰＡ、フェニレンジアミン（ＡＦＰ）である。
例えば、デュオカルマイシンまたはその類似体は、デュオカルマイシンＡ、デュオカル
マイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシン
Ｃ２、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、ＣＣ−１０６５、アドゼレシン
、ビゼレシン、またはカルゼレシンである。
例えば、カンプトテシン化合物は、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１（イリノテカン）、
ＳＮ−３８、またはトポテカンである。
例えば、ピロロベンゾジアゼピン化合物は、ピロロベンゾジアゼピンモノマー、対称ピ
ロロベンゾジアゼピン二量体または非対称ピロロベンゾジアゼピン二量体である。
式（Ｉｄ）のポリマー−薬物共役体は、約４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋ
Ｄａ若しくはこれ超；８０ｋＤａ若しくはこれ超；１００ｋＤａ若しくはこれ超；１２０
ｋＤａ若しくはこれ超；１４０ｋＤａ若しくはこれ超；１６０ｋＤａ若しくはこれ超；１
８０ｋＤａ若しくはこれ超；または２００ｋＤａ若しくはこれ超、または約４０〜２００
ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０
ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０
ｋＤａ、１００〜２００ｋＤａ、１００〜１８０ｋＤａ、若しくは１００〜１４０ｋＤａ
）の分子量を有するＰＢＲＭとの共役に有用である。
例えば、４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若しくはこれ超、８０ｋＤａ
若しくはこれ超、１００ｋＤａ若しくはこれ超、１２０ｋＤａ若しくはこれ超、１４０ｋ
Ｄａ若しくはこれ超、１６０ｋＤａ若しくはこれ超または１８０ｋＤａ若しくはこれ超）
の分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本発明に係る足場のポリマー担体は、ポリ
アセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３
〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ
）を有するＰＨＦである。
例えば、４０ｋＤａ〜２００ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本発
明に係る足場のポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ（
例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分
子量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。
例えば、４０ｋＤａ〜８０ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本発明
に係る足場のポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ（例
えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子
量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。例えば、ＰＨＦは、約５ｋ
Ｄａ、１０ｋＤａまたは１５ｋＤａの分子量を有する。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、抗体フラグメン
ト、例えば、Ｆａｂが含まれる。
例えば、６０ｋＤａ〜１２０ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本発
明に係る足場のポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ（
例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分
子量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。例えば、ＰＨＦは、約５
ｋＤａ、１０ｋＤａまたは１５ｋＤａの分子量を有する。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、ラクダ科の動物
の抗体、Ｆａｂ２、ｓｃＦｖＦｃなどが含まれる。
例えば、１４０ｋＤａ〜１８０ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本
発明に係る足場のポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ
（例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の
分子量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。例えば、ＰＨＦは、約
５ｋＤａ、１０ｋＤａまたは１５ｋＤａの分子量を有する。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、完全長抗体、例
えば、ＩｇＧ、ＩｇＭが含まれる。
ある特定の実施形態にて、ポリマー薬物共役体（Ｉｄ）は、ＰＢＲＭに共役していると
き、式（Ｉｅ）のものであり、
ここで、式中、
ＸａおよびＸｂの一方はＨであり、他方はマレイミド遮断部分であるか、あるいはＸａ
およびＸｂは、それらが付着している炭素原子と一緒になって、炭素−炭素二重結合を形
成し、
ｍ３ａは、０〜約１７の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ３ａおよび
ｍ３ｂの合計は、ｍ３であり、ｍ、ｍ１、ｍ７、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約１５
〜約３００の範囲であり、ｍ５は、１〜約１０の整数である。
ＰＢＲＭは、約４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若しくはこれ超；８０
ｋＤａ若しくはこれ超；１００ｋＤａ若しくはこれ超；１２０ｋＤａ若しくはこれ超；１
４０ｋＤａ若しくはこれ超；１６０ｋＤａ若しくはこれ超；１８０ｋＤａ若しくはこれ超
；または２００ｋＤａ若しくはこれ超、または約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤ
ａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤ
ａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜２００ｋ
Ｄａ、１００〜１８０ｋＤａ、または１００〜１４０ｋＤａ）の分子量を有する。
例えば、ＰＢＲＭは、約４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若しくはこれ
超；８０ｋＤａ若しくはこれ超；１００ｋＤａ若しくはこれ超；１２０ｋＤａ若しくはこ
れ超；１４０ｋＤａ若しくはこれ超；１６０ｋＤａ若しくはこれ超；１８０ｋＤａ若しく
はこれ超；または２００ｋＤａ若しくはこれ超、または約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１
８０ｋＤａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１
４０ｋＤａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜
２００ｋＤａ、１００〜１８０ｋＤａ、または１００〜１４０ｋＤａ）の分子量を有し、
スルフヒドリル（すなわち、−ＳＨまたはチオール）基を有する。
例えば、ＰＨＦおよびＰＢＲＭの間に形成されるスルフィド結合の総数（または付着点
の総数）は、１０またはそれ未満である。
例えば、ｍ７とｍ３ｂの比は、１：１超および１０：１と等しい、またはこれ未満であ
る。
例えば、ｍ７とｍ３ｂの比は、約９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、
３：１、または２：１である。
例えば、ｍ７とｍ３ｂの比は、２：１〜８：１である。
例えば、ｍ７とｍ３ｂの比は、約８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、
または２：１である。
例えば、ｍ７とｍ３ｂの比は、２：１〜４：１である。
例えば、ｍ７とｍ３ｂの比は、約４：１、３：１、または２：１である。
例えば、式（Ｉｅ）中のＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有すると
き、ｍ、ｍ１、ｍ７、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約１５〜約１５０の範囲であり、ｍ
１は、１〜約７０の整数であり、ｍ７は、１〜約２０の整数であり、ｍ３ａは、０〜約９
の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ５は、２〜約８の整数である。
例えば、式（Ｉｅ）中のＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有すると
き、ｍ、ｍ１、ｍ７、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約２０〜約１１０の範囲であり、ｍ
１は、２〜約５０の整数であり、ｍ７は、２〜約１５の整数であり、ｍ３ａは、０〜約７
の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ５は、２〜約４の整数である。
例えば、式（Ｉｅ）中のＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有すると
き、ｍ、ｍ１、ｍ７、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約４０〜約７５の範囲であり、ｍ１
は、約５〜約３５の整数であり、ｍ７は、約３〜約１０の整数であり、ｍ３ａは、０〜約
４の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約５の整数であり、ｍ５は、２〜約４の整数である。
ある特定の実施形態にて、本発明に係るタンパク質−ポリマー薬物共役体は、本明細書
に記載のような式（Ｉｂ）のものであり、
ここで、式中、
ＸａおよびＸｂの一方はＨであり、他方はマレイミド遮断部分であるか、あるいはＸａ
およびＸｂは、それらが付着している炭素原子と一緒になって、炭素−炭素二重結合を形
成し、
ｍ３ａは、０〜約１７の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ３ａおよび
ｍ３ｂの合計は、ｍ３であり、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約１５
〜約３００の範囲であり、ｍ５は、１〜約１０の整数である。
例えば、ＰＢＲＭは、約４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若しくはこれ
超；８０ｋＤａ若しくはこれ超；１００ｋＤａ若しくはこれ超；１２０ｋＤａ若しくはこ
れ超；１４０ｋＤａ若しくはこれ超；１６０ｋＤａ若しくはこれ超；１８０ｋＤａ若しく
はこれ超；または２００ｋＤａ若しくはこれ超、または約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１
８０ｋＤａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１
４０ｋＤａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜
２００ｋＤａ、１００〜１８０ｋＤａ、または１００〜１４０ｋＤａ）の分子量を有する
。
例えば、ＰＨＦおよびＰＢＲＭの間に形成されるスルフィド結合の総数（または付着点
の総数）は、１０またはそれ未満である。
例えば、ｍ２とｍ３ｂの比は、１：１超および１０：１と等しい、またはこれ未満であ
る。
例えば、ｍ２とｍ３ｂの比は、約９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、
３：１、または２：１である。
例えば、ｍ２とｍ３ｂの比は、２：１〜８：１である。
例えば、ｍ２とｍ３ｂの比は、約８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、
または２：１である。
例えば、ｍ２とｍ３ｂの比は、２：１〜４：１である。
例えば、ｍ２とｍ３ｂの比は、約４：１、３：１、または２：１である。
例えば、式（Ｉｂ）中のＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有すると
き、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約１５〜約１５０の範囲であり、ｍ
１は、１〜約７０の整数であり、ｍ２は、１〜約２０の整数であり、ｍ３ａは、０〜約９
の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ５は、２〜約８の整数である。
例えば、式（Ｉｂ）中のＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有すると
き、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約２０〜約１１０の範囲であり、ｍ
１は、２〜約５０の整数であり、ｍ２は、２〜約１５の整数であり、ｍ３ａは、０〜約７
の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ５は、２〜約４の整数である。
例えば、式（Ｉｂ）中のＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有すると
き、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、約４０〜約７５の範囲であり、ｍ１
は、約５〜約３５の整数であり、ｍ２は、３〜約１０の整数であり、ｍ３ａは、０〜約４
の整数であり、ｍ３ｂは、１〜約５の整数であり、ｍ５は、２〜約４の整数である。
例えば、マレイミド遮断部分は、マレイミド基と式（ＩＩ）のチオール含有化合物との
反応によって、２個のオレフィン炭素原子の１つに共有結合的に付着することができる部
分であり、
Ｒ９０−（ＣＨ２）ｄ−ＳＨ
（ＩＩ）
ここで、式中、
Ｒ９０は、ＮＨＲ９１、ＯＨ、ＣＯＯＲ９３、ＣＨ（ＮＨＲ９１）ＣＯＯＲ９３または
置換フェニル基であり、
Ｒ９３は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ９１は、水素、ＣＨ３またはＣＨ３ＣＯであり、
ｄは、１〜３の整数である。
例えば、式（ＩＩ）のマレイミド遮断化合物は、システイン、Ｎ−アセチルシステイン
、システインメチルエステル、Ｎ−メチルシステイン、２−メルカプトエタノール、３−
メルカプトプロパン酸、２−メルカプト酢酸、メルカプトメタノール（すなわち、ＨＯＣ
Ｈ２ＳＨ）、ベンジル、チオール（フェニルは、１個若しくは複数の親水性置換基で置換
されている）、または３−アミノプロパン−１−チオールでよい。フェニル上の１個若し
くは複数の親水性置換基は、ＯＨ、ＳＨ、メトキシ、エトキシ、ＣＯＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯ
Ｃ１〜４アルキル、ＮＨ２、Ｆ、シアノ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ３Ｈなどを含む。
例えば、マレイミド遮断基は、−Ｓ−（ＣＨ２）ｄ−Ｒ９０であり、
Ｒ９０は、ＯＨ、ＣＯＯＨ、またはＣＨ（ＮＨＲ９１）ＣＯＯＲ９３であり、
Ｒ９３は、水素またはＣＨ３であり、
Ｒ９１は、水素またはＣＨ３ＣＯであり、
ｄは、１または２である。
例えば、マレイミド遮断基は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨである。
例えば、ＰＨＦが２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５
ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有するとき、ＰＨＦ毎の薬物の数（例
えば、ｍ２）は、１〜約４０（例えば、約１〜２０または約２〜１５または約３〜１０）
の整数である。この足場は、例えば、４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若
しくはこれ超；８０ｋＤａ若しくはこれ超；または１００ｋＤａ若しくはこれ超；１２０
ｋＤａ若しくはこれ超；１４０ｋＤａ若しくはこれ超；１６０ｋＤａ若しくはこれ超また
は１８０ｋＤａ若しくはこれ超）の分子量を有するＰＢＲＭを共役するために使用するこ
とができる。この実施形態にて、ＰＨＦ毎のＰＢＲＭの比は、約１：１〜約１：１０、約
１：１〜約１：９、約１：１〜約１：８、約１：１〜約１：７、約１：１〜約１：６、約
１：１〜約１：５、約１：１〜約１：４、約１：１〜約１：３、約１：１〜約１：２、約
１：２〜約１：６、約１：２〜約１：５、約１：２〜約１：４または約１：２〜約１：３
である。
例えば、ＰＨＦが２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５
ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有するとき、ＰＨＦ毎の薬物の数（例
えば、ｍ２）は、１〜約４０（例えば、約１：２０または約２〜１５または約３：１０）
の整数である。この足場は、例えば、１４０ｋＤａ〜１８０ｋＤａの分子量を有するＰＢ
ＲＭを共役するために使用することができる。この実施形態にて、ＰＨＦ毎のＰＢＲＭの
比は、約１：１〜約１：１０、約１：１〜約１：９、約１：１〜約１：８、約１：１〜約
１：７、約１：１〜約１：６、約１：１〜約１：５、約１：１〜約１：４、約１：１〜約
１：３、約１：１〜約１：２、約１：２〜約１：６、約１：２〜約１：５、約１：２〜約
１：４または約１：２〜約１：３である。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、完全長抗体、例
えば、ＩｇＧ、ＩｇＭが含まれる。
例えば、ＰＨＦが２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５
ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有するとき、ＰＨＦ毎の薬物の数（例
えば、ｍ２）は、１〜約４０（例えば、約１：２０または約２：１５または約３：１０）
の整数である。この足場は、例えば、６０ｋＤａ〜１２０ｋＤａの分子量を有するＰＢＲ
Ｍを共役するために使用することができる。この実施形態にて、ＰＨＦ毎のＰＢＲＭの比
は、約１：１〜約１：１０、約１：１〜約１：９、約１：１〜約１：８、約１：１〜約１
：７、約１：１〜約１：６、約１：１〜約１：５、約１：１〜約１：４、約１：１〜約１
：３、約１：１〜約１：２、約１：２〜約１：６、約１：２〜約１：５、約１：２〜約１
：４または約１：２〜約１：３である。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、抗体フラグメン
ト、例えば、Ｆａｂ２、ｓｃＦｃＦｖおよびラクダ科の動物の抗体が含まれる。
例えば、ＰＨＦが２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５
ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有するとき、ＰＨＦ毎の薬物の数（例
えば、ｍ２）は、１〜約４０（例えば、約１：２０または約２〜１５または約３：１０）
の整数である。この足場は、例えば、４０ｋＤａ〜８０ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭ
を共役するために使用することができる。この実施形態にて、ＰＨＦ毎のＰＢＲＭの比は
、約１：１〜約１：１０、約１：１〜約１：９、約１：１〜約１：８、約１：１〜約１：
７、約１：１〜約１：６、約１：１〜約１：５、約１：１〜約１：４、約１：１〜約１：
３、約１：１〜約１：２、約１：２〜約１：６、約１：２〜約１：５、約１：２〜約１：
４または約１：２〜約１：３である。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、抗体フラグメン
ト、例えば、Ｆａｂが含まれる。
別の態様において、本発明は、タンパク質をベースとする認識分子（ＰＢＲＭ）および
治療剤（Ｄ）の両方と共役するのに有用なポリマー足場を特徴とする。Ｄ−非含有足場は
、ポリマー担体、ＰＢＲＭをポリマー担体に接続するのに適したポリマー担体に接続した
１個または複数のリンカー、および薬物（Ｄ）をポリマー担体に接続するのに適した１個
または複数のリンカーを含む。
ある特定の実施形態にて、共役体は、いくつかのステップで形成される。これらのステ
ップは、（１）薬物またはその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含有する
ように、ポリマーを修飾するステップと；（２）薬物がポリマーに連結するように、修飾
ポリマーと薬物またはその誘導体とを反応させるステップと；（３）ポリマーがＰＢＲＭ
またはその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含有するように、ポリマー−
薬物共役体を修飾するステップと；（４）修飾されたポリマー−薬物共役体とＰＢＲＭま
たはその誘導体とを反応させ、本発明に係る共役体を形成するステップとを含む。ステッ
プ（１）によって生成される修飾ポリマーが、ＰＢＲＭまたはその誘導体の官能基と反応
することができる官能基を含有する場合、ステップ（３）は省略し得る。
別の実施形態にて、共役体は、いくつかのステップ：（１）ポリマーを、第１の薬物ま
たはその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含有するように修飾するステッ
プと；（２）第１の薬物がポリマーに連結するように、修飾ポリマーと第１の薬物または
その誘導体とを反応させるステップと；（３）ポリマー−薬物共役体を、第２の薬物また
はその誘導体の官能基と反応することができる異なる官能基を含有するように修飾するス
テップと（４）第２の薬物がポリマー−薬物共役体に連結するように、修飾されたポリマ
ー−薬物共役体と第２の薬物またはその誘導体とを反応させるステップと；（５）２種の
異なる薬物を含有するポリマー−薬物共役体を、ポリマーがＰＢＲＭまたはその誘導体の
官能基と反応することができる官能基を含有するように修飾するステップと；（６）ステ
ップ（５）の修飾されたポリマー−薬物共役体とＰＢＲＭまたはその誘導体とを反応させ
、本発明に係る共役体を形成させるステップとにおいて形成される。２種の異なるＰＢＲ
Ｍまたはその誘導体が共役されて、２種の異なる薬物および２種の異なるＰＢＲＭを含む
ポリマー−薬物共役体を形成する場合、ステップ（５）および（６）は反復し得る。
さらに別の実施形態にて、共役体は、いくつかのステップで形成される。これらのステ
ップは、（１）薬物またはその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含有する
ようにポリマーを修飾するステップと；（２）ポリマーを、ＰＢＲＭまたはその誘導体の
官能基と反応することができる官能基をまた含有するようにさらに修飾するステップと；
（３）薬物がポリマーに連結するように、修飾ポリマーと薬物またはその誘導体とを反応
させるステップと；（４）修飾されたポリマー−薬物共役体とＰＢＲＭまたはその誘導体
とを反応させて、本発明に係る共役体を形成するステップとを含む。ステップ（１）およ
び（２）の順序、またはステップ（３）および（４）の順序は、逆転させることができる
。さらに、修飾ポリマーが、薬物またはその誘導体の官能基、およびＰＢＲＭまたはその
誘導体の官能基の両方と反応することができる官能基を含有する場合、ステップ（１）ま
たは（２）は、省略し得る。
別の実施形態にて、共役体は、いくつかのステップ：（１）第１の薬物またはその誘導
体の官能基と反応することができる官能基を含有するように、ポリマーを修飾するステッ
プと；（２）ＰＢＲＭまたはその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含有す
るように、ポリマーをさらに修飾するステップと；（３）第１の薬物がポリマーに連結す
るように、修飾ポリマーと第１の薬物またはその誘導体とを反応させるステップと；（４
）第２の薬物またはその誘導体の官能基と反応することができる異なる官能基を含有する
ように、ポリマー−薬物共役体を修飾するステップと、（５）第２の薬物がポリマー−薬
物共役体に連結するように、修飾されたポリマー−薬物共役体と第２の薬物またはその誘
導体とを反応させるステップと；（６）ＰＢＲＭまたはその誘導体を有するポリマーが本
発明に係る共役体を形成するように、２種の異なる薬物を含有する修飾されたポリマー−
薬物共役体を反応させるステップとにおいて形成される。２種の異なるＰＢＲＭまたはそ
の誘導体が共役されて、２種の異なる薬物および２種の異なるＰＢＲＭを含むポリマー−
薬物共役体を形成する場合、ステップ（６）は反復し得る。修飾ポリマーが２種の異なる
薬物またはこれらの誘導体と反応することができる２個の異なる官能基を含有するように
、ステップ（４）はステップ（１）の後に行い得る。この実施形態にて、２種の異なる薬
物またはこれらの誘導体と反応することができる２個の異なる官能基を含有する修飾ポリ
マーは、修飾ポリマーと２種の異なる薬物（ステップ（３）およびステップ（５））また
はＰＢＲＭ（ステップ（６））との反応の前に、ＰＢＲＭまたはその誘導体の官能基と反
応することができる官能基を含有するように、さらに修飾することができる。
本発明に係る生分解性の生体適合性共役体を調製して、生分解性および親水性の所望の
必要性を満たすことができる。例えば、生理学的条件下で、生分解性および安定性の間の
バランスは達することができる。例えば、特定の閾値を超える分子量（一般的に、分子の
物理的形状によって４０超〜１００ｋＤａ）を有する分子は腎臓を通して排泄されないこ
とは公知である。これは、小分子が、細胞による取込み、および細胞内区画、最も特に、
リソソームにおける分解によってのみ体からクリアランスされ、クリアランスされること
ができるためである。この観察は、一般の生理学的条件（ｐＨ＝７．５±０．５）下でお
よびリソソームのｐＨ（約ｐＨ５）でこれらの安定性をモジュレートすることによって、
どのように機能的に安定的ではあるが生分解性の材料を設計し得るかを例示する。例えば
、アセタールおよびケタール基の加水分解は酸によって触媒されることは公知であり、し
たがって、ポリアルは、例えば、血漿中よりも、酸性リソソームの環境中で一般的により
安定的ではない。試験を設計し、例えば、ｐＨ＝５およびｐＨ＝７．５で３７℃にて水性
媒体中のポリマー分解プロファイルを比較し、このように正常な生理的環境中、および細
胞による取込み後の「消化性」リソソーム区画中でのポリマー安定性の予想されるバラン
スを決定することができる。このような試験におけるポリマーの完全性は、例えば、サイ
ズ排除ＨＰＬＣによって測定することができる。当業者は、本発明に係る分解された共役
体の様々なフラグメントを研究するための他の適切な方法を選択することができる。
多くの場合において、ｐＨ＝７．５で、ポリマーの有効なサイズは１〜７日に亘り検出
可能な程度に変化せず、少なくとも数週間は当初から５０％内に留まることが好ましい。
他方、ｐＨ＝５で、ポリマーは好ましくは、１〜５日に亘り検出可能な程度に分解して、
２週間から数カ月の時間枠以内に低分子量フラグメントに完全に変換すべきである。より
速い分解が場合によって好ましくあり得るが、一般的に、細胞によるポリマーフラグメン
トの代謝または排泄の速度を超えない速度でポリマーが細胞中で分解することがより望ま
しい。したがって、ある特定の実施形態にて、本発明に係る共役体は、特に、細胞による
取込みによって生分解性であり、生物系に対して相対的に「不活性」であると予想される
。担体分解の生成物は好ましくは、無電荷であり、環境のｐＨを有意に変化させない。ア
ルコール基の存在量は、特に、食細胞の細胞受容体によるポリマー認識の低い割合を実現
し得ることが提唱される。本発明に係るポリマー骨格は一般的に、たとえあったにしても
、僅かな抗原決定基を含有し（例えば、いくつかの多糖およびポリペプチドに特有である
）、後者が望ましくない限り、一般的に、ｉｎ ｖｉｖｏでの「キー−および−ロック」
タイプの相互作用に関与することができる強固な構造を含まない。このように、本発明に
係る可溶性、架橋および固体共役体は低毒性および生体接着力を有することが予想され、
これによってこれらはいくつかの生物医学的な用途に適したものとなる。
本発明のある特定の実施形態にて、生分解性の生体適合性共役体は、直鎖状または分岐
状の構造を形成することができる。例えば、本発明に係る生分解性の生体適合性ポリアル
共役体は、キラル（光学活性）でよい。任意選択的に、本発明に係る生分解性の生体適合
性ポリアル共役体は、スカレミックでよい。
ある特定の実施形態にて、本発明に係る共役体は、水溶性である。ある特定の実施形態
にて、本発明に係る共役体は、水不溶性である。ある特定の実施形態にて、本発明に係る
共役体は、固体形態である。ある特定の実施形態にて、本発明に係る共役体は、コロイド
である。ある特定の実施形態にて、本発明に係る共役体は、粒子形態である。ある特定の
実施形態にて、本発明に係る共役体は、ゲル形態である。
本発明はまた、ＰＢＲＭと共役して、本明細書に記載のポリマー−薬物−ＰＢＲＭ共役
体を形成するのに有用なポリマー足場に注目する。足場は、タンパク質をベースとする認
識分子（ＰＢＲＭ）、例えば、約４０ｋＤａ若しくはこれ超の分子量を有するＰＢＲＭと
共役するのに有用な式（Ｉａ）のポリマー担体を含み、
足場は、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリ（１−ヒドロキシメチ
ルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含み、
Ｘは、ＣＨ２、Ｏ、またはＮＨであり、
ｍは、１〜約３００の整数であり、ｍ１は、１〜約１４０の整数であり、ｍ２は、１〜
約４０の整数であり、ｍ３は、１〜約１８の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３の合
計は、約１５〜約３００の範囲である。
例えば、式（Ｉａ）の「ｍ３」単位におけるマレイミド部分は、出現する毎に、ＰＢＲ
Ｍの官能基と共有結合を形成しない。
例えば、４０ｋＤａ若しくはこれ超（例えば、６０ｋＤａ若しくはこれ超、８０ｋＤａ
若しくはこれ超、１００ｋＤａ若しくはこれ超、１２０ｋＤａ若しくはこれ超、１４０ｋ
Ｄａ若しくはこれ超、１６０ｋＤａ若しくはこれ超または１８０ｋＤａ若しくはこれ超、
または約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００
ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０
ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜２００ｋＤａ、１００〜１８０ｋＤａ、または１
００〜１４０ｋＤａ）の分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本発明に係る足場の
ポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ（例えば、約２〜
２０ｋＤａまたは約３〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量（すなわち
、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。
例えば、４０ｋＤａ〜２００ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本発
明に係る足場のポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ（
例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分
子量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。
例えば、４０ｋＤａ〜８０ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本発明
に係る足場のポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ（例
えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子
量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦ
である。例えば、ＰＨＦは、約５ｋＤａ、８ｋＤａ、１０ｋＤａ、１３ＫＤａまたは１５
ｋＤａの分子量を有する。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、抗体フラグメン
ト、例えば、Ｆａｂが含まれる。
例えば、６０ｋＤａ〜１２０ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本発
明に係る足場のポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約５ｋＤａ〜約４０ｋＤａ（
例えば、約５〜３０ｋＤａ、約５〜２０ｋＤａまたは約５〜１５ｋＤａまたは約５〜１０
ｋＤａ）の範囲の分子量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。例え
ば、ＰＨＦは、約１０ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を有す
る。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、ラクダ科の動物
の抗体、Ｆａｂ２、ｓｃＦｃＦｖなどが含まれる。
例えば、１４０ｋＤａ〜１８０ｋＤａの分子量を有するＰＢＲＭを共役するために、本
発明に係る足場のポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ
（例えば、約２〜２０ｋＤａまたは約３〜１５ｋＤａまたは約５〜１０ｋＤａ）の範囲の
分子量（すなわち、未修飾ＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。例えば、ＰＨＦは、約
５ｋＤａ、８ｋＤａ、１０ｋＤａ、１３ｋＤａまたは１５ｋＤａの分子量を有する。
この分子量の範囲のＰＢＲＭには、これらに限定されないが、例えば、完全長抗体、例
えば、ＩｇＧ、ＩｇＭが含まれる。
例えば、式（Ｉａ）中のＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有する
（すなわち、ｍ、ｍ１、ｍ２、およびｍ３の合計は、約１〜約３００の範囲である）とき
、ｍ２は、１〜約４０の整数であり、ｍ３は、１〜約１８の整数であり、かつ／またはｍ
１は、１〜約１４０の整数である（例えば、ｍ１は、約１〜９０である）。
例えば、式（Ｉａ）中のＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する
（すなわち、ｍ、ｍ１、ｍ２、およびｍ３の合計は、約１〜約１５０の範囲である）とき
、ｍ２は、１〜約２０の整数であり、ｍ３は、１〜約１０の整数であり、かつ／またはｍ
１は、１〜約７０の整数である（例えば、ｍ１は、約４〜４５である）。
例えば、式（Ｉａ）中のＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する
（すなわち、ｍ、ｍ１、ｍ２、およびｍ３の合計は、約１〜約１１０の範囲である）とき
、ｍ２は、２〜約１５の整数であり、ｍ３は、１〜約８の整数であり、かつ／またはｍ１
は、２〜約５０の整数である（例えば、ｍ１は、約４〜３０である）。
例えば、式（Ｉａ）中のＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有する
（すなわち、ｍ、ｍ１、ｍ２、およびｍ３の合計は、約１〜約７５の範囲である）とき、
ｍ２は、３〜約１０の整数であり、ｍ３は、１〜約５の整数であり、かつ／またはｍ１は
、５〜約３５の整数である（例えば、ｍ１は、約１０〜２５である）。
例えば、１個または複数の薬物担持ポリマー担体は、１個のＰＢＲＭに接続している。
例えば、足場（例えば、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体）は、約４０ｋＤａ若しくはこ
れ超の分子量を有するＰＢＲＭ、およびＰＢＲＭに接続した１個または複数のＤ担持ポリ
マー担体を含む。
例えば、足場は、マレイミド基を介してポリマー担体に接続しているＰＢＲＭをさらに
含む。
本発明はまた、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量の式（Ｉｃ）のポリマー足場
を提供し、
ここで、式中、
Ｘは、ＣＨ２、Ｏ、またはＮＨであり、ｍは、１〜約３００の整数であり、ｍ６は、２
〜約１８０の整数であり、ｍ３は、１〜約１８の整数であり、ｍ、ｍ６およびｍ３の合計
は、約１５〜約３００の範囲である。
例えば、式（Ｉｃ）の「ｍ３」単位におけるマレイミド部分は、出現する毎に、ＰＢＲ
Ｍの官能基と共有結合を形成しない。
例えば、式（Ｉｃ）中のＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する
（すなわち、ｍ、ｍ６およびｍ３の合計は、約１５〜約１５０の範囲である）とき、ｍ３
は、１〜約９の整数であり、かつ／またはｍ６は、２〜約９０の整数である（例えば、ｍ
６は、約６〜６０である）。
例えば、式（Ｉｃ）中のＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する
（すなわち、ｍ、ｍ６およびｍ３の合計は、約２０〜約１１０の範囲である）とき、ｍ３
は、１〜約８の整数であり、かつ／またはｍ６は、４〜約６５の整数である（例えば、ｍ
６は、約６〜４５である）。
例えば、式（Ｉｃ）中のＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有すると
き、ｍ、ｍ６およびｍ３の合計は、約４０〜約７５の範囲であり、ｍ６は、約８〜約４５
の整数であり、ｍ３は、１〜約５の整数である。
いくつかの実施形態にて、ポリマー足場（例えば、ポリアセタールポリマー、例えば、
ＰＨＦ）は、システインをベースとする生体共役反応戦略を利用することによってＰＢＲ
Ｍと共役している。例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込む国際公開第２
０１０／１００４３０号および米国特許第７，５９５，２９２号明細書を参照されたい。
一実施形態にて、ポリマー足場（例えば、ポリアセタールポリマー、例えば、ＰＨＦ）は
、抗体ヒンジ領域中のシステインを介してＰＢＲＭ（例えば、抗体）と共役している。理
論に束縛されるものではないが、このように得られた共役体は、鎖間架橋構造の形成によ
り安定化する。
したがって、本発明はまた、ポリマー足場に接続している少なくとも２つの部分を含む
ポリマー足場（例えば、ポリアルポリマー）に関し、ここでは各部分は、タンパク質−ポ
リマー共役体を形成するように、ＰＢＲＭ中のアミノ酸（例えば、システイン）からのチ
オール基に共役することができる。一実施形態にて、ポリマー足場に接続している少なく
とも２つの部分は、マレイミド基である。
一実施形態にて、ＰＢＲＭの１個または複数の遊離チオール基は、タンパク質を還元す
ることによって生成される。次いで、ＰＢＲＭの１個または複数の遊離チオール基は、Ｐ
ＢＲＭをポリマー足場と共役させるように、アミノ酸からのチオール基と共役することが
できる、ポリマー足場中に含有される少なくとも２つの部分と反応する。一実施形態にて
、ポリマー足場に接続している少なくとも２つの部分は、マレイミド基である。
一実施形態にて、共役のために使用されるＰＢＲＭの遊離チオール基は、天然タンパク
質のジスルフィド架橋、またはジスルフィド架橋によって接続している２つ若しくはそれ
超のタンパク質鎖からなるタンパク質複合体のジスルフィド架橋に由来する。ジスルフィ
ド架橋は、鎖内または鎖間架橋であり得る。代わりに、ＰＢＲＭの遊離チオール基は、鎖
間または鎖内ジスルフィド架橋形成に関与していない、天然タンパク質のシステインまた
は対になっていないチオール基からである。
ジスルフィド結合は、従来の方法を使用して、例えば、ジチオトレイトール、メルカプ
トエタノール、トリス−カルボキシエチルホスフィン、デヒドロアスコルビン酸、硫酸銅
で還元させることができる。タンパク質は、１個または複数のジスルフィド架橋を含有す
ることができる。遊離チオール基を得る還元を制御して、タンパク質中の１個または複数
の特定のジスルフィド架橋を還元することができる。ジスルフィド還元の程度およびポリ
マー足場上の部分の化学量論によって、１個または複数のポリマー足場をタンパク質に共
役することが可能である。ジスルフィドの総数未満を還元することが望ましい場合、異な
る反応条件または変性剤の添加を使用した部分的還元ができるように、固定化した還元剤
を使用し得る。
チオールを介してタンパク質へとポリマーを共役する利点には、これらに限定されない
が、有効性の最適化、投与毎の一貫性および均一性の改善（タンパク質毎の共役ポリマー
分子の数は、各タンパク質分子について実質的に同じであるため）、各タンパク質上の特
定の残基（複数可）を対象にする特定の共役、およびより容易な精製が含まれる。また、
チオール共役を介したタンパク質−ポリマー共役体は、非共役タンパク質と比較して、実
質的に改善された半減期、平均滞留時間、および／または循環におけるクリアランス速度
を示す。
いくつかの実施形態にて、本明細書に記載の薬物−ポリマー−ＰＢＲＭ共役体、薬物−
ポリマー共役体、薬物を担持したポリマー足場、またはＰＢＲＭ担持ポリマー足場はそれ
ぞれ典型的には、≦１．５、例えば、＜１．２の多分散性指数（ＰＤＩ）を有する。
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体、薬物を担持したポリマー足場、またはＰＢＲＭ担持
ポリマー足場は、大規模なダイアフィルトレーションによって精製することができる（す
なわち、残留する未反応の薬物、ＰＢＲＭ、またはポリマー出発材料の除去）。必要に応
じて、サイズ排除クロマトグラフィによるさらなる精製を行って、凝集したＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体を除去することができる。一般的に、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役
体は精製されると典型的には、ＳＥＣによって決定した５％未満（例えば、＜２％ｗ／ｗ
）の凝集したＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体；ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定した０．５
％未満（例えば、＜０．１％ｗ／ｗ）の遊離（非共役）薬物；ＳＥＣによって決定した１
％未満のポリマー−薬物共役体、およびＨＩＣ−ＨＰＬＣによって決定した２％未満（例
えば、＜１％ｗ／ｗ）の非共役ＰＢＲＭを含有する。
下記の表ＣおよびＤは、それぞれ、本発明に係る薬物を担持したポリマー足場およびポ
リマー−薬物−タンパク質共役体の例を提供する。表Ｄにおいて、化学構造におけるｍ５
は、本明細書に記載の式（Ｉｂ）におけるように定義される。
さらなる例において、抗５Ｔ４治療薬および標的化共役体を提供する。共役体は、（ａ
）ヒト癌胎児性のタンパク質５Ｔ４を標的とする免疫グロブリンまたはその機能的なフラ
グメントであるリガンド（ＬＧ）であって、約４０ｋＤ超の分子量を有し、そこに結合し
たｍ５の（ｂ）のポリマー足場を有し、ｍ５は、１〜約１０である、リガンドと、（ｂ）
約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリ（１−ヒドロキシメチルエチレン
ヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含むポリマー足場であって、下記で定義す
るようなランダムに配置されたモノマー単位ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂを含
む、ポリマー足場とを含み、
（ｉ）ｍ３ａ：
ｍ３ａは、存在しないものであるか、または１〜約１７個のモノマーｍ３ａ単位がポリ
マー足場中に存在するものであり、各単位において、ＸａおよびＸｂは、（Ａ）一方はＨ
であり、他方はマレイミド遮断部分であるか、または（Ｂ）ＸａおよびＸｂは、それらが
付着している炭素原子と一緒になって、炭素−炭素二重結合を形成することから独立に選
択され、
（ｉｉ）ｍ３ｂ、
スルフィド結合は、ＬＧへの付着点を形成し、
１〜約８個のモノマーｍ３ｂ単位がポリマー足場中に存在するものであり、ｍ３ａおよ
びｍ３ｂの合計は、１〜１８であり、硫黄原子は、ＬＧの一部であり、
（ｉｉｉ）ｍ：
１〜約３００個のモノマーｍ単位がポリマー足場中に存在するものであり、
（ｉｖ）ｍ１：
１〜約１４０個のモノマーｍ１単位がポリマー足場中に存在するものであり、
（ｖ）ｍ２：
１〜約４０個のモノマーｍ２単位がポリマー足場中に存在するものであり、モノマー単
位ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂのそれぞれにおいて、Ｘは、ＣＨ２、Ｏまたは
ＮＨであり、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約１５〜約３００の範囲
であり、Ｄは、出現する毎に独立に、≦５ｋＤａの分子量を有する治療剤であり、Ｄおよ
びカルボニル基の間の
は、カルボニル基へのＤの直接的また間接的な付着を表す。適切には、抗５Ｔ４リガンド
は、本明細書に定義されているような免疫グロブリンまたはその機能的なフラグメントで
ある。例えば、免疫グロブリンまたはその機能的なフラグメントは、モノクローナル抗体
、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、イムノアドヘシン、Ｆ（Ａｂ）２、ミニ抗体、Ｆ
ａｂ’、単一ドメイン抗体、ナノ抗体、単鎖Ｆｖ、タンデム／ビス−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ
）３、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（またはｓｃＦｖＦｃ）、ｄｓＦｖ、二特異性抗体、三特異性抗体
、および四特異性抗体からなる群より選択される。
さらなる例において、治療薬および標的化共役体は、式（Ｅ）に例示する構造によって
特性決定され、
ここで、式中、
ＰＨＦは、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍは、１〜７５であり、
ｍ１は、約５〜約３５であり、ｍ２は、約３〜約１０であり、ｍ３ａは、０〜約４であり
、ｍ３ｂは、１〜約５であり、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約４０
〜約７５であり、ｍ５は、２〜約４である。
さらなる実施形態にて、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの分子量を有するＰＨＦを含むポリ
マー足場を含む、抗新生物療法において有用な治療用抗５Ｔ４薬物の標的化共役体を提供
し、共役体は、下記の構造のものであり、
ここで、式中、ｍ５は、１〜１０であり、ｍは、１〜約３００の整数であり、ｍ１は、
１〜約１４０の整数であり、ｍ２は、１〜約４０の整数であり、ｍ３ａは、０〜約１７の
整数であり、ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、１〜約１
８の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３の合計は、約１５〜約３００の範囲であり、
Ｘは、ＮＨであり、ＸａまたはＸｂの一方はＨであり、他方はマレイミド遮断部分であり
、Ｄは、出現する毎に独立に、≦５ｋＤａの分子量を有する治療剤であり、Ｄおよびカル
ボニル基の間の
は、カルボニル基へのＤの直接的また間接的な付着を表し、ＡＮＴＩ−５Ｔ４は、ヒト癌
胎児性抗原５Ｔ４について選択的である免疫グロブリンまたはその機能的なフラグメント
を含む抗５Ｔ４リガンドである。例えば、抗５Ｔ４の分子量は、少なくとも約４０ｋＤａ
である。一実施形態にて、Ｄは、ヒドロキシプロピルアミド−Ｌ−アラニン部分を介して
ｍ２のカルボニル部分に付着している、アウリスタチンまたはその類似体である。一実施
形態にて、薬物と抗５Ｔ４の比は、約５：１〜約３０：１、または約１２：１〜約１８：
１である。別の実施形態にて、ＰＨＦ薬物共役体と抗５Ｔ４抗体の平均比は、約２：１〜
約４：１である。
これらの共役体は、共役体を形成する様々な単位のモル百分率またはモル分率によって
さらに定義し得る。例えば、リガンドに連結したジエチレングリコールマレイミド（ＥＧ
２−ＭＩ）部分を含むモノマー単位は、約２モル％〜約５モル％のモル分率を有する。ま
たさらなる例において、薬物を担持するモノマー単位は、約５モル％〜約１０モル％のモ
ル分率を有する。例えば、薬物と抗５Ｔ４の比は、約５：１〜約３０：１、または約１２
：１〜約１８：１である。さらなる例において、薬物を含むＰＨＦ足場と抗５Ｔ４抗体の
平均比は、約２：１〜約３：１または約３：１〜約４：１である。一実施形態にて、共役
体は、抗５Ｔ４−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−
（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））である。この共役体は、実施例１０、およびより一般
的に、スキーム５に記載するように調製し得る。
またさらなる実施形態にて、抗新生物療法において有用な治療薬および標的化共役体を
提供し、これは互いにランダムに接続し得る下で示す単位を含む抗５Ｔ４およびＰＨＦポ
リマー足場を含み、
ここで、式中、
抗５Ｔ４は、配列番号Ａのアミノ配列を含む単鎖抗体構築体であり、ＰＨＦは、約２ｋ
Ｄａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ポリマー足場と抗５Ｔ４抗体の平均比は、約
２：１〜約３：１または約３：１〜約４：１であり、ＡＦ−ＨＰＡと抗５Ｔ４抗体の比は
、約１２：１〜約１８：１である。
これらの共役体は本明細書に記載のように調製し、対象への送達に適した組成物へと適
切な担体と合わせることができる。これらの組成物は、これらの抗５Ｔ４薬物の標的化共
役体のブレンドを含有してもよく、すなわち、単一の組成物は、異なる薬物および／また
は異なるポリマー足場を有する抗５Ｔ４薬物の標的化共役体を含有し得る。
＜合成法＞
本発明によれば、任意の利用可能な技術を使用して、本発明に係る共役体、またはこれ
らを含む組成物、ならびにこれらを作製するのに有用な中間体および構成要素（例えば、
担体およびモディファイヤー）を作製することができる。例えば、半合成および完全合成
法を使用し得る。
＜担体＞
モディファイヤーへの共役に適したポリマー担体（例えば、生体適合性、生分解性ポリ
マー担体）を調製する方法は当技術分野において公知である。例えば、合成のガイダンス
は、これらのそれぞれの内容が参照により本明細書にその全体が組み込む、米国特許第５
，８１１，５１０号明細書；同第５，８６３，９９０号明細書；同第５，９５８，３９８
号明細書；同第７，８３８，６１９号明細書；同第７，７９０，１５０号明細書；同第８
，６８５，３８３号明細書；および同第８，８１５，２２６号明細書において見出すこと
ができる。これらの方法をどのように適合させて、本発明の実施における使用のためのポ
リマー担体を作製するかを当業者は知っている。
一実施形態にて、本発明に係る生分解性の生体適合性ポリアル共役体を形成する方法は
、適切な多糖を効率的な量のグリコール特異的酸化剤と併せて、アルデヒド中間体を形成
させるプロセスを含む。次いで、ポリアル自体であるアルデヒド中間体を対応するポリオ
ールに還元し、スクシニル化し、１種または複数の適切なモディファイヤーとカップリン
グし、スクシンアミド含有連結を含む生分解性の生体適合性ポリアル共役体を形成し得る
。
別の好ましい実施形態にて、本発明において使用するための完全合成生分解性の生体適
合性ポリアルは、適切な開始剤と適切な前駆体化合物とを反応させることによって調製す
ることができる。
例えば、完全合成ポリアルは、ビニルエーテルと保護された置換ジオールとの縮合によ
って調製し得る。他の方法、例えば、開環重合を使用してもよく、ここでは方法の有効性
は、保護基の置換度およびバルキネスによって決まり得る。
溶媒系、触媒および他の要因を最適化して、高分子量生成物を得てもよいことを当業者
は認識する。
ある特定の実施形態にて、担体は、ＰＨＦである。
一実施形態にて、ポリマー担体は、１．５未満、例えば、＜１．２の多分散性指数（Ｐ
ＤＩ）を有するＰＨＦである。
＜薬物および薬物誘導体＞
ある特定の実施形態にて、薬物は、ポリマー担体への共役の前に修飾し得る。スキーム
１および２は、ビンカアルカロイドを修飾するための例示的な方法である。スキーム３は
、非天然カンプトテシン誘導体を修飾する方法を示す。スキーム４は、アウリスタチンＦ
を修飾する方法を示す。さらなる修飾方法は、参照により本明細書に組み込むＵＳ２０１
０／０３０５１４９に記載されている。
ビンカアルカロイドのＣ２３エステルとヒドラジンとの反応、それに続くＮａＮＯ２に
よる処理は、活性アジドエステルをもたらす。アジドエステルとアミノ化合物、例えば、
プロパノールアミンまたは１−アミノプロパン−２−オールとの反応は、官能化ヒドロキ
シルを有するビンカアルカロイド誘導体をもたらし、これは、ポリマーとの共役のために
、アミノ含有化合物、例えば、アラニンまたはメチルアラニン誘導体でさらに誘導体化す
ることができる（スキーム１を参照されたい）。
保護されたアミノ含有つなぎ鎖、例えば、ｔ−ブトキシエステル化アミノ酸によるビン
カアルカロイドのヒドロキシル誘導体の処理、それに続くエステルのＴＦＡ加水分解によ
って、ビンカアルカロイドのトリフレート塩が得られる。（スキーム２）官能化ポリマー
へのビンカアルカロイドの共役は薬物−ポリマー共役体をもたらし、これはＰＢＲＭまた
はその誘導体とさらに共役して、タンパク質−ポリマー−薬物共役体をもたらすことがで
きる。
非天然カンプトテシン誘導体、例えば、ＳＮ３８の１０−ヒドロキシ基は、トリエチル
アミンの存在下で誘導体とｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド（ＴＢＤＰＳｉＣ
ｌ）とを反応させることによって選択的に保護される。Ｓａｐｒａ， Ｐ．ら、Ｃｌｉｎ
． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１４：１８８８〜１８９６（２００８）に記載されている
手順を使用して、２０−ヒドロキシ基をｔ−ブチルカルボニル−アラニンと反応させて、
アラニン誘導体を形成させることができる。代わりに、他のアミノ酸、例えば、グリシン
を用いることができる。第一級アミンは、トリフルオロ酢酸による処理によってＢｏｃ保
護基を除去し、それに続いてフッ化テトラブチルアンモニウムによってＴＢＤＰＳ保護基
を除去することによって曝露される（スキーム３を参照されたい）。このように得られた
アミノ誘導体化ＳＮ３８化合物は、官能化ポリマーと共役して、薬物−ポリマー共役体を
形成することができる。
保護されたアミノ含有つなぎ鎖、例えば、ｔ−ブトキシエステル化２−ヒドロキシプロ
ピルアミンによるアウリスタチンＦの処理、それに続くエステルのＨＣｌ加水分解によっ
て、アウリスタチンＦの２−ヒドロキシルプロピルアミノ誘導体が得られる（スキーム４
を参照されたい）。官能化ポリマーへのアウリスタチンＦ誘導体の共役によって、薬物−
ポリマー共役体がもたらされ、これをＰＢＲＭまたはその誘導体とさらに共役して、タン
パク質−ポリマー−薬物共役体を得ることができる。
＜共役体またはポリマー足場＞
下記のスキーム５は、本発明に係るポリマー薬物足場を作製する合成スキームを示す。
一実施形態にて、共役体は、いくつかのステップにおいて形成される。（１）ポリマー、
ＰＨＦを修飾して、ＣＯＯＨ部分（例えば、−Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ）
を含有させ；（２）次いで、ＰＢＲＭの官能基と反応させることができるマレイミド部分
（例えば、ＥＧ２−ＭＩ）を含有するように、ポリマーをさらに修飾し；（３）２個の異
なる官能基を含有する修飾ポリマーを、薬物またはその誘導体（例えば、ＡＦ−ＨＰＡ−
Ａｌａ）の官能基と反応させ、ポリマー−薬物共役体を形成させ；（４）ＰＢＲＭのジス
ルフィド結合を還元し；（５）次いで、還元されたＰＢＲＭをポリマー−薬物共役体と反
応させ、タンパク質−ポリマー−薬物共役体を形成させ；（６）残ったマレイミド部分を
、マレイミド遮断化合物（例えば、システイン）と任意選択的に反応させる。
別の実施形態にて、ステップ（２）および（３）の順序は、下記のスキーム５における
右側の経路において示すように逆転させることができる。
さらに別の実施形態にて、上記のステップ（２）および（３）を、下記のスキーム６に
おいて示すように、同時に行う。
＜医薬組成物＞
また含まれるのは、許容される担体、例えば、安定剤、緩衝液など中に本明細書に開示
されている１個または複数のタンパク質−ポリマー−薬物共役体を含む医薬組成物である
。共役体は、安定剤、緩衝液などを伴うか、または伴わない標準的手段によって対象に投
与し、導入して、医薬組成物を形成することができる。投与は、局所的（眼、ならびに膣
および直腸送達を含めた粘膜を含めた）、肺、例えば、粉末の吸入若しくは吹送による、
またはネブライザーによるものを含めたエアゾール；気管内、鼻腔内、上皮および経皮的
、経口または非経口投与（静脈内、動脈内、皮下、腹腔内若しくは筋内の注射若しくは注
入、または頭蓋内、例えば、くも膜下腔内若しくは脳室内の投与を含めた）でよい。共役
体は、注射可能な投与のための無菌溶液剤および／または懸濁剤；注射／注入前の再構成
のための凍結乾燥した粉末；局所組成物；経口投与のための錠剤、カプセル剤、またはエ
リキシル剤として；あるいは直腸投与のための坐剤、および当技術分野において公知の他
の組成物として配合および使用することができる。
薬理学的組成物または製剤は、細胞、または、例えば、ヒトを含めた対象への投与、例
えば、全身投与に適した形態の組成物または製剤を指す。適切な形態は、部分的に、使用
または侵入の経路、例えば、経口、吸入、経皮的、または注射／注入によって決まる。こ
のような形態は、組成物または製剤が標的細胞（すなわち、薬物が送達されるのに望まし
い細胞）に達することを妨げるべきではない。例えば、血流中に注射される薬理学的組成
物は、可溶性であるべきである。他の要因は当技術分野において公知であり、考慮すべき
事項、例えば、組成物または製剤がその効果を発揮することを妨げる毒性および形態を含
む。
用語「全身投与(systemic administration)」は、血流における修飾ポリマーのｉｎ
ｖｉｖｏでの全身的吸収または蓄積、それに続く全身に亘る分布を意味する。全身的吸収
をもたらす投与経路は、これらに限定されないが、静脈内、皮下、腹腔内、吸入、経口、
肺内、および筋内を含む。これらの投与経路のそれぞれは、修飾ポリマーを到達可能な患
部組織に曝露させる。循環への活性剤の侵入の速度は、分子量またはサイズの関数である
ことが示されてきた。本発明に係る共役体の使用は、ＰＢＲＭの特異性によって、薬物送
達を特定の細胞、例えば、がん細胞に局在化することができる。
用語「薬学的に許容される製剤(pharmaceutically acceptable formulation)」は、こ
れらの所望の活性に最も適した物理的場所における共役体の有効な分布を可能とする組成
物または製剤を意味する。一実施形態にて、有効な送達は、細網内皮系によるクリアラン
ス、または有効性若しくは毒性の低減をもたらすことができるオフターゲット結合が生じ
る前に起こる。共役体との配合に適した薬剤の非限定的な例は、ＣＮＳ中への活性剤の侵
入を増強させることができるＰ糖タンパク質阻害剤（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ８５
）；生分解性ポリマー、例えば、脳内の埋込み後の持続放出送達のためのポリ（ＤＬ−ラ
クチド−ｃｏグリコリド）ミクロスフィア；および血液脳関門を通して活性剤を送達する
ことができ、かつニューロンの取込み機序を変化させることができる充填されたナノ粒子
、例えば、ポリブチルシアノアクリレートでできたものを含む。
本明細書にてまた含まれるのは、薬学的に許容される担体または賦形剤中に医薬有効量
の所望の共役体を含む、貯蔵または投与のために調製される医薬組成物である。治療上の
使用のための許容される担体、賦形剤、および／または添加剤は、製薬技術において周知
である。例えば、緩衝液、保存剤、増量剤、分散剤、安定剤、色素を提供することができ
る。さらに、抗酸化剤および懸濁化剤を使用することができる。適切な担体、賦形剤およ
び／または添加剤の例には、これらに限定されないが、（１）約１ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ
／ｍｌのヒト血清アルブミンを含有するダルベッコリン酸緩衝食塩水、ｐＨ約６．５、（
２）０．９％食塩水（０．９％ｗ／ｖのＮａＣｌ）、および（３）５％（ｗ／ｖ）デキス
トロースが含まれる。
用語「医薬有効量(pharmaceutically effective amount)」は、本明細書にて、同定さ
れた疾患若しくは状態を処置するか、寛解するか、若しくは予防するか、または検出可能
な治療効果若しくは阻害効果を示す、医薬品の量を指す。効果は、当技術分野において公
知の任意のアッセイ方法によって検出することができる。対象についての正確な有効量は
、対象の体重、サイズ、および健康；状態の性質および程度；ならびに投与のために選択
される治療（複数可）の組合せによって決まる。所与の状況のための医薬有効量は、臨床
医の技量および範囲内である通例の実験法によって決定することができる。好ましい態様
において、疾患または状態は、遺伝子発現抑制によって処置することができる。
任意の共役体について、医薬有効量は、例えば、新生細胞の細胞培養アッセイにおいて
、または動物モデル、通常、ラット、マウス、ウサギ、イヌ、若しくはブタにおいて、最
初に推定することができる。動物モデルをまた使用して、適当な濃度範囲および投与経路
を決定し得る。次いで、このような情報を使用して、ヒトにおける投与のための有用な用
量および経路を決定することができる。治療的／予防的有効性および毒性は、細胞培養物
または実験動物において標準的医薬手順によって決定し得る。例えば、ＥＤ５０（集団の
５０％において治療的に有効な用量）およびＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用
量）。毒性効果および治療効果の間の用量比は治療係数であり、比、ＬＤ５０／ＥＤ５０
として表すことができる。大きな治療係数を示す医薬組成物が好ましい。投与量は、用い
る剤形、患者の感受性、および投与経路によって、この範囲内で変化し得る。
例えば、薬物またはその誘導体、薬物−ポリマー共役体またはＰＢＲＭ−ポリマー−薬
物共役体は、Ｃｅｌｌ ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを使用して、いくつかの細胞株における腫瘍
増殖を阻害するこれらの能力について評価することができる。用量反応曲線はＳｏｆｔＭ
ａｘ Ｐｒｏソフトウェアを使用して作製することができ、ＩＣ５０値は４パラメーター
曲線の当てはめから決定することができる。用いる細胞株は、ＰＢＲＭの標的であるもの
、および試験共役体中に含有されるＰＢＲＭの標的ではない対照細胞株を含むことができ
る。
一実施形態にて、共役体は、従来のカテーテル処置技術または注入を使用することを含
めて、非経口の注射による投与のために配合される。注射のための製剤は、加えた保存剤
を伴う単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器で提示し得る。共役体は、無菌培
地中で非経口的に投与することができる。共役体は、使用するビヒクルおよび濃度によっ
て、ビヒクルに懸濁または溶解することができる。有利なことには、アジュバント、例え
ば、局所麻酔剤、保存剤、および緩衝剤は、ビヒクルに溶解することができる。用語「非
経口(parenteral)」は、本明細書にて、経皮的、皮下、血管内（例えば、静脈内）、筋内
、またはくも膜下腔内の注射または注入技術などを含む。さらに、共役体および薬学的に
許容される担体を含む医薬製剤を提供する。共役体の１つまたは複数は、１種または複数
の無毒性の薬学的に許容される担体および／または賦形剤および／またはアジュバント、
ならびに所望である場合、他の活性成分と関連して存在することができる。
無菌の注射可能な調製物はまた、無毒性の非経口的に許容される賦形剤または溶媒中の
無菌の注射可能な溶液または懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液でよい。
用いることができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液、および等
張食塩液がある。さらに、無菌の不揮発性油は、溶媒または懸濁媒として従来通り用いら
れる。この目的のために、合成のモノまたはジグリセリドを含めて刺激の少ない不揮発性
油を用いることができる。さらに、脂肪酸、例えば、オレイン酸は、注射剤の調製に使用
される。
本明細書にて、共役体および組成物は、適当な形態で、好ましくは、非経口的に、より
好ましくは、静脈内に投与し得る。非経口投与のために、共役体または組成物は、無菌の
水溶液若しくは非水溶液、懸濁液またはエマルジョンでよい。プロピレングリコール、植
物性油および注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルは、溶媒またはビヒク
ルとして使用することができる。組成物はまた、アジュバント、乳化剤または分散剤を含
有することができる。
１日当たり体重１キログラム当たり約０．００１ｍｇ〜約１４０ｍｇ程度の投与量レベ
ルは、上で示した状態の処置において有用である（１日当たり対象当たり約０．０５ｍｇ
〜約７ｇ）。いくつかの実施形態にて、患者に投与される投与量は、約０．００１ｍｇ／
ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ対象の体重である。いくつかの実施形態にて、患者に投与され
る投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ対象の体重である。いくつかの実
施形態にて、患者に投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ対象の
体重である。いくつかの実施形態にて、患者に投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ
〜約２０ｍｇ／ｋｇ対象の体重である。いくつかの実施形態にて、投与される投与量は、
約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ対象
の体重である。いくつかの実施形態にて、投与される投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１５
ｍｇ／ｋｇ対象の体重である。いくつかの実施形態にて、投与される投与量は、約１ｍｇ
／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ対象の体重である。担体材料と合わせて単一の剤形を生成する
ことができる共役体の量は、処置されるホストおよび特定の投与のモードによって変化す
る。投与量単位形態は一般的に、約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ；約０．０１ｍｇ〜約
７５ｍｇ；または約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇ；または約０．０１ｍｇ〜約２５ｍｇの共
役体を含有することができる。
静脈内投与のために、投与量レベルは、先行するパラグラフに記載した範囲、または動
物の体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約２００ｍｇの共役体を含むことができる。一態様に
おいて、組成物は、動物の体重１ｋｇ当たり約１〜約１００ｍｇの共役体を含むことがで
きる。別の態様において、投与される量は、約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の
範囲である。
いくつかの実施形態にて、共役体は、下記のように投与することができる。共役体は、
ｉ．ｖ．として、約５日間毎日のボーラス、または約５日間持続注入として約５日毎日与
えることができる。
代替的に、共役体は、週１回、６週間またはそれ超投与することができる。別の方法と
して、共役体は、２週間または３週間毎に１回投与することができる。ボーラス用量は約
５０〜約４００ｍｌの生理食塩水中で与えられ、ここに約５〜約１０ｍｌのヒト血清アル
ブミンを加えることができる。持続注入は、２４時間の期間当たり、約２５０〜約５００
ｍｌの生理食塩水中で与えられ、ここに約２５〜約５０ｍｌのヒト血清アルブミンを加え
ることができる。
いくつかの実施形態にて、処置の約１〜約４週間後、患者は、第２の一連の処置を受け
ることができる。投与経路、添加剤、賦形剤、投与量、および時間に関しての特定の臨床
プロトコルは、臨床的症状が是認するように当業者が決定することができる。
他の実施形態にて、治療有効量は、別の規則的スケジュールで、すなわち、毎日、毎週
、毎月、若しくは毎年のベースで、または投与の様々な日数、週数、月数などの不規則性
スケジュールで提供し得る。代わりに、投与される治療有効量は変化し得る。一実施形態
にて、第１の投与についての治療有効量は、それに続く投与の１つまたは複数についての
治療有効量より高い。別の実施形態にて、第１の投与についての治療有効量は、それに続
く投与の１つまたは複数についての治療有効量より低い。等しい投与量を、これらに限定
されないが、約２時間毎、約６時間毎、約８時間毎、約１２時間毎、約２４時間毎、約３
６時間毎、約４８時間毎、約７２時間毎、約１週間毎、約２週間毎、約３週間毎、約１カ
月毎、および約２カ月毎を含めた様々な期間に亘り投与し得る。完全な一連の治療に対応
する投与量の数および頻度は、関連する規制機関の推奨および健康管理の実務家の判断に
よって決定される。本明細書に記載の治療有効量は、所与の期間について投与される総量
を指す。すなわち、複数種の本明細書に記載の異なる共役体が投与される場合、治療有効
量は、投与される総量に対応する。特定の対象についての特定の用量レベルは、特定の共
役体の活性、年齢、体重、身体全体の健康、性別、食事、投与の時間、投与経路、および
排せつ率、他の活性剤との組合せ、および治療を受けている特定の疾患の重症度を含めた
種々の要因によって決まることが理解される。
ヒトではない動物への投与のために、共役体はまた、動物の飼料または飲料水に加える
ことができる。動物が治療的に適当な量の共役体をその食事と共に摂取するように、動物
の飼料および飲料水を配合することは好都合であり得る。餌または飲料水への添加のため
のプレミックスとして共役体を提示することがまた好都合であり得る。
共役体をまた、他の治療化合物と組み合わせて対象に投与して、全体的な治療効果を増
加させることができる。適応症を処置するための複数の化合物の使用は、副作用の存在を
低減させる一方で、有益な効果を増加させることができる。いくつかの実施形態にて、共
役体は、化学療法剤、例えば、米国特許第７，３０３，７４９号明細書に開示されている
ものと組み合わせて使用される。他の実施形態にて、化学療法剤には、これらに限定され
ないが、レトロゾール、オキサリプラチン、ドセタキセル、５−ＦＵ、ラパチニブ、カペ
シタビン、ロイコボリン、エルロチニブ、ペルツズマブ、ベバシズマブ、およびゲムシタ
ビンが含まれる。本発明はまた、１種または複数の化学療法剤を含めた本発明に係る共役
体および／または組成物の１つまたは複数を充填した１つまたは複数の容器を含む医薬キ
ットを提供する。このようなキットはまた、例えば、他の化合物および／または組成物、
化合物および／または組成物を投与するための装置（複数可）、ならびに医薬品または生
物学的製剤の製造、使用または販売を規制する政府機関によって定められた形態の書面で
の説明書を含むことができる。本明細書に記載の組成物は、単回投与として、または連続
的若しくは定期的な非連続的投与のためにパッケージ化することができる。連続的投与の
ために、パッケージまたはキットは、各投与量単位（例えば、溶液、または上記若しくは
薬物送達において利用される他の単位）での共役体、および任意選択的に用量を所定の期
間、毎日、毎週、若しくは毎月、または処方されたように投与するための説明書を含むこ
とができる。長期に亘る様々な濃度の組成物、組成物の構成要素、または組成物内の共役
体若しくは薬剤の相対比が望ましい場合、パッケージまたはキットは、一連の投与量単位
を含有してもよく、これによって所望の変動性を実現する。
いくつかのパッケージまたはキットは、定期的な経口使用のために医薬品を分配するた
めに当技術分野において公知である。一実施形態にて、パッケージは、各期間について指
標を有する。別の実施形態にて、パッケージは、ラベルを付けたブリスターパッケージ、
ダイヤルディスペンサーパッケージ、またはボトルである。キットのパッケージ化手段は
、それ自体投与のために適合させてもよく、例えば、シリンジ、ピペット、点眼容器、ま
たは他のこのような器具であり、ここから製剤を体の患部に適用し、対象に注射し、また
はそれどころかキットの他の構成要素に適用および混合し得る。
＜使用の方法＞
＜処置の方法＞
本発明のある特定の好ましい実施形態にて、本発明に係るタンパク質−ポリマー−薬物
共役体は、動物（好ましくは、哺乳動物、最も好ましくは、ヒトであり、男性、女性、乳
児、小児および成人を含む）を処置する方法において使用される。一実施形態にて、本発
明に係る共役体は、動物に本発明に係る生分解性の生体適合性共役体を投与することを含
む、動物を処置する方法において使用し得る。例えば、本発明による共役体は、可溶性直
鎖状ポリマー、コポリマー、共役体、コロイド、粒子、ゲル、固体物、ファイバー、フィ
ルムなどの形態で投与することができる。本発明に係る生分解性の生体適合性共役体は、
制御された薬物放出系における薬物担体および薬物担体の構成要素、低侵襲的外科手術の
ための調製物などとして使用することができる。医薬製剤は、注射可能、埋込み可能など
でよい。
さらに別の態様において、本発明は、対象に効率的な量の少なくとも１種の本発明に係
る共役体を投与することを含む、それを必要とする対象において疾患または障害を処置す
る方法を提供し、前記共役体は、生分解によって１種または複数の治療剤を放出する。
別の実施形態にて、共役体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ
ｖｉｖｏで投与して、患者を処置し、かつ／または例えば、がんを含めた選択した細胞
集団の増殖をモジュレートすることができる。いくつかの実施形態にて、共役体で処置す
ることができる特定のタイプのがんには、これらに限定されないが、（１）これらに限定
されないが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫
、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑
筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸がん、結腸直腸がん、腎臓がん、膵臓がん、骨がん、乳がん、
卵巣がん、前立腺がん、食道がん、胃がん、口腔がん、鼻腔がん、咽喉がん、扁平上皮細
胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、
気管支癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、胆管細胞癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウ
ィルムス腫瘍、子宮頸がん、子宮がん、精巣がん、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、
肺がん、上皮癌、神経膠腫、神経膠芽腫、多形星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細
胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、皮膚がん、黒色腫、神
経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫含めた固形腫瘍；（２）これらに限定されないが、急性
リンパ芽球性白血病「ＡＬＬ」、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細
胞白血病、急性骨髄芽球性白血病「ＡＭＬ」、急性前骨髄球性白血病「ＡＰＬ」、急性単
芽球性白血病、急性赤血白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非
リンパ球性白血病、急性未分化白血病、慢性骨髄球性白血病「ＣＭＬ」、慢性リンパ球性
白血病「ＣＬＬ」、有毛細胞白血病、多発性骨髄腫、急性および慢性白血病、例えば、リ
ンパ芽球性骨髄性およびリンパ球性骨髄球性白血病を含めた血液由来のがん；ならびに（
３）リンパ腫、例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンシュ
トレームマクログロブリン血症、重鎖病、および真性赤血球増加症が含まれる。
別の実施形態にて、共役体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ
ｖｉｖｏで投与して、患者を処置し、かつ／または肛門、星状細胞腫、白血病、リンパ
腫、頭頸部、肝臓、精巣、子宮頸部、肉腫、血管腫、食道、眼、喉頭、口、中皮腫、皮膚
、骨髄腫、口腔、直腸、咽喉、膀胱、乳房、子宮、卵巣、前立腺、肺、結腸、膵臓、腎臓
、または胃のがんを有する患者において選択した細胞集団の増殖をモジュレートすること
ができる。
別の実施形態にて、がんは、乳がん、胃がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、および
卵巣がんからなる群より選択される。
別の実施形態にて、共役体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ
ｖｉｖｏで投与して、特定の病態、例えば、がんを処置し、予防し、発生する危険性を
低減させ、かつ／または発症を遅延させることができる。例えば、本発明に係る共役体は
、肛門がん、星状細胞腫、白血病、リンパ腫、頭頸部がん、肝臓がん、精巣がん、子宮頸
がん、肉腫、血管腫、食道がん、眼がん、喉頭がん、口腔のがん、中皮腫、皮膚がん、骨
髄腫、口腔がん、直腸がん、咽喉がん、膀胱がん、乳がん、子宮がん、卵巣がん、前立腺
がん、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、結腸がん、膵臓がん、腎臓がん、および
胃がんからなる群より選択されるがんの症状を処置し、予防し、進行を遅延させ、または
その他の点で寛解することにおいて有用である。
別の実施形態にて、共役体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ
ｖｉｖｏで投与して、自己免疫疾患、例えば、全身性狼瘡、関節リウマチ、乾癬、およ
び多発性硬化症；移植片拒絶、例えば、腎臓移植片拒絶、肝臓移植片拒絶、肺移植片拒絶
、心臓移植片拒絶、および骨髄移植拒絶；移植片対宿主病；ウイルス感染症、例えば、Ｃ
ＭＶ感染症、ＨＩＶ感染症、およびＡＩＤＳ；ならびに寄生虫感染症、例えば、ジアルジ
ア症、アメーバ症、住血吸虫症などを処置することができる。
ある特定の実施形態にて、共役体はまた、例えば、細胞の異常な増殖（例えば、がん）
によって特徴付けられる障害の重症度を処置または和らげるのに有用な医薬の製造のため
に使用することができる。
ある特定の実施形態にて、治療剤は、特定の標的細胞、組織、または器官に局所的に送
達される。
ある特定の実施形態にて、本発明に係る方法の実施において、共役体はさらに、診断用
標識を含むか、診断用標識と関連している。特定の例示的な実施形態にて、診断用標識は
、ガンマシンチグラフィーおよびＰＥＴのための放射性医薬品または放射性同位体、磁気
共鳴イメージングのためのコントラスト剤（ＭＲＩ）、コンピューター断層撮影法のため
のコントラスト剤、Ｘ線イメージング法のためのコントラスト剤、超音波診断法のための
薬剤、中性子放射化のための薬剤、Ｘ線、超音波、電波およびマイクロ波を反射するか、
散乱するか、または影響を与えることができる部分、ならびにフルオロフォアからなる群
より選択される。特定の例示的な実施形態にて、共役体は、ｉｎ ｖｉｖｏでさらにモニ
ターされる。
診断用標識の例には、これらに限定されないが、ガンマシンチグラフィーおよびＰＥＴ
のための診断用放射性医薬品または放射性同位体、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）のた
めのコントラスト剤（例えば、常磁性原子および超常磁性ナノ結晶）、コンピューター断
層撮影法のためのコントラスト剤、Ｘ線イメージング法のためのコントラスト剤、超音波
診断法のための薬剤、中性子放射化のための薬剤、ならびにＸ線、超音波、電波およびマ
イクロ波を反射するか、散乱するか、または影響を与えることができる部分、様々な光学
的手順におけるフルオロフォアなどが含まれる。診断用の放射性医薬品は、γ−放射放射
性核種、例えば、インジウム−１１１、テクネチウム−９９ｍおよびヨウ素−１３１など
を含む。ＭＲＩ（磁気共鳴イメージング）のためのコントラスト剤は、磁性化合物、例え
ば、常磁性イオン、鉄、マンガン、ガドリニウム、ランタニド、有機常磁性部分ならびに
超常磁性、強磁性および反強磁性化合物、例えば、酸化鉄コロイド、フェライトコロイド
などを含む。コンピューター断層撮影法および他のＸ線をベースとするイメージング方法
のためのコントラスト剤は、Ｘ線を吸収する化合物、例えば、ヨウ素、バリウムなどを含
む。超音波をベースとする方法のためのコントラスト剤は、超音波を吸収し、反射し、散
乱することができる化合物、例えば、エマルジョン、結晶、気泡などを含む。また他の例
は、中性子放射化のために有用な物質、例えば、ホウ素およびガドリニウムを含む。さら
に、Ｘ線、超音波、電波、マイクロ波および診断法において有用な他の光線を反射するか
、屈折させるか、散乱するか、またはその他の点で影響を与えることができる標識を用い
ることができる。蛍光標識を、フォトイメージングのために使用することができる。特定
の実施形態にて、モディファイヤーは、常磁性イオンまたは基を含む。
別の態様において、本発明は、少なくとも１種の本発明に係る共役体の水性製剤を調製
し、対象において前記製剤を非経口的に注射することを含む、対象において疾患または障
害を処置する方法を提供する。
別の態様において、本発明は、少なくとも１種の本発明に係る共役体を含む埋込物を調
製し、前記埋込物を対象に埋込みすることを含む、対象において疾患または障害を処置す
る方法を提供する。特定の例示的な実施形態にて、埋込物は生分解性ゲルマトリックスで
ある。
別の態様において、本発明は、上記の方法による共役体を投与することを含む、それを
必要とする動物を処置する方法を提供する。
別の態様において、本発明は、上記の方法におけるように共役体を投与することを含む
、動物において免疫応答を誘発する方法を提供する。
別の態様において、本発明は、上記の方法におけるように共役体を投与するステップで
あって、前記共役体は、検出可能な分子を含むステップと、
検出可能な分子を検出するステップと
を含む、動物において疾患を診断する方法を提供する。
特定の例示的な実施形態にて、検出可能な分子を検出するステップは、非侵襲的に行わ
れる。特定の例示的な実施形態にて、検出可能な分子を検出するステップは、適切なイメ
ージング設備を使用して行われる。
一実施形態にて、動物を処置する方法は、そこから腫瘍または増殖物が除去された手術
創のためのパッキングとして動物に本発明に係る生分解性の生体適合性共役体を投与する
ことを含む。生分解性の生体適合性共役体のパッキングは、回復の間に腫瘍部位に取って
代わり、創傷が治癒するにつれ分解および消散する。
ある特定の実施形態にて、共役体は、ｉｎ ｖｉｖｏでのモニタリングのための診断用
標識と関連する。
上記の共役体は、動物の治療的、予防的、および分析的（診断的）処置のために使用す
ることができる。共役体は一般的に、非経口投与を意図するが、場合によって、他の経路
によって投与し得る。
一実施形態にて、可溶性またはコロイド状共役体は、静脈内に投与される。別の実施形
態にて、可溶性またはコロイド状共役体は、局所（例えば、皮下、筋内の）注射によって
投与される。別の実施形態にて、固体共役体（例えば、粒子、埋込物、薬物送達システム
）は、埋込または注射によって投与される。
別の実施形態にて、検出可能な標識を含む共役体を投与して、動物体中の標識分布のパ
ターンおよび動態を研究する。
ある特定の実施形態にて、本明細書にて開示されている共役体の任意の１つまたは複数
は、上記の方法のいずれかの実施において使用し得る。特定の例示的な実施形態にて、共
役体は、トラスツズマブ−ＰＨＦ−、リツキシマブ−ＰＨＦ−、リンツズマブ−ＰＨＦま
たは抗５Ｔ４−ＰＨＦ−薬物共役体である。
記載を通して、組成物が特定の構成要素を有するか、含まれるか、または含むと記載さ
れている場合、組成物はまた、記載された構成要素から本質的になるか、または記載され
た構成要素からなることが意図されている。同様に、方法またはプロセスが特定のプロセ
スステップを有するか、含まれるか、または含むと記載されている場合、プロセスはまた
、記載された処理ステップから本質的になるか、または記載された処理ステップからなる
。さらに、ステップの順序または特定の措置を行う順序は、本発明が実施可能であり続け
る限り重要ではないことを理解すべきである。さらに、２つまたはそれ超のステップまた
は措置は、同時に行うことができる。
本発明に係る合成プロセスは、多種多様の官能基を許容することができる。したがって
、様々な置換された出発材料を使用することができる。プロセスは一般的に、全体的なプ
ロセスの終わりに、または終わり近くに、所望の最終化合物を実現するが、場合によって
は、化合物をその薬学的に許容される塩、エステルまたはプロドラッグにさらに変換する
ことが望ましくてもよい。
本発明に係る共役体のために使用される薬物化合物は、市販の出発材料を使用して、文
献において公知の化合物を使用して、または容易に調製される中間体から、標準的合成法
、および当業者には公知である、または本明細書における教示に鑑みて当業者には明らか
である手順を用いることによって種々の方法で調製することができる。有機分子の調製の
ための標準的合成法および手順、ならびに官能基の変換および操作は、関連する科学文献
から、または当分野における標準的テキストから得ることができる。任意の１つまたはい
くつかの源に限定されるものではないが、古典的テキスト、例えば、本明細書にて参照に
より組み込むＳｍｉｔｈ， Ｍ． Ｂ．、Ｍａｒｃｈ， Ｊ．、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖ
ａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ： Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈ
ａｎｉｓｍｓ， ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、第５版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓ
ｏｎｓ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１；およびＧｒｅｅｎｅ， Ｔ．Ｗ．、Ｗｕｔｓ，
Ｐ．Ｇ． Ｍ．、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、
１９９９は、当業者に公知の有機合成の有用でに認められた参照テキストである。合成法
の以下の説明は、本発明に係る化合物の調製のための一般手順を限定するためではなく、
例示するために設計されている。
本発明に係る共役体およびその中に含まれる薬物化合物は、当業者にはよく知られた種
々の方法によって好都合に調製することができる。本明細書に記載の式のそれぞれを有す
る本発明に係る共役体または化合物は、市販の出発材料、または文献手順を使用して調製
することができる出発材料から下記の手順によって調製し得る。これらの手順は、本発明
に係る代表的な共役体の調製を示す。
上記の方法によって設計され、選択され、かつ／または最適化される共役体は、一旦生
成されると、当業者には公知の種々のアッセイを使用して特性決定して、共役体が生物活
性を有するかを決定することができる。例えば、共役体は、これらに限定されないが、下
記に記載するこれらのアッセイを含めた従来のアッセイによって特性決定して、これらが
予想される活性、結合活性および／または結合特異性を有するかを決定することができる
。
さらに、ハイスループットスクリーニングを使用して、このようなアッセイを使用した
分析を迅速化することができる。その結果、当技術分野で公知の技術を使用して本明細書
に記載の共役体分子を活性について急速にスクリーニングすることができる。ハイスルー
プットスクリーニングを行うための一般方法は、例えば、Ｄｅｖｌｉｎ （１９９８）
Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；
および米国特許第５，７６３，２６３号明細書に記載されている。ハイスループットアッ
セイは、これらに限定されないが、下記のものを含めた、１つまたは複数の異なるアッセ
イ技術を使用することができる。
本明細書にて引用した全ての公開資料および特許文献は、それぞれのこのような公開資
料または文献が参照により本明細書中に組み込むことが特におよび個々に示されているか
のように、参照により本明細書中に組み込む。公開資料および特許文献の引用は、いずれ
かが関連する従来技術であるという承認であることを意図せず、これらの内容または日付
に関する何らかの承認を構成しない。本発明を書面による明細によってこれまで記載して
きたが、本発明は種々の実施形態にて実施することができ、上記の記載および下記の実施
例は例示の目的のためであり、下記の特許請求の範囲を制限するためではないことを当業
者は認識する。
下記の実施例は、リンカー、薬物分子およびＰＢＲＭ、ならびにこれらを調製する方法
の例示である。これらは限定的なものではなく、他の試薬または方法を利用し得ることを
当業者は容易に理解する。
本明細書に記載の共役体は、上で全体的に概要を述べたスキームによって、および下記
の実施例において記載する方法によって調製することができる。用語「含量」は、下記の
特定の実施例において使用するように、他に特定しない限り、意図する部分、例えば、リ
ンカー、薬物分子、またはＰＢＲＭで置換されているポリマー構造単位のモル分率または
モル百分率を意味する。したがって、ポリマー−薬物またはＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共
役体における様々なポリマー単位についての報告された百分率は、下記の実施例において
使用されるように、他に特定しない限りモル百分率である。
［略語］
本明細書では、下記の略語を、下記の反応スキームおよび合成の実施例にて使用する。
このリストは、さらなる標準的略語として本出願において使用される略語の全てを含むリ
ストであることを意味せず、これは有機合成の当業者が容易に理解し、また合成スキーム
および実施例において使用することができる。
ＡＣＮ：アセトニトリル
ＡＦ−ＨＰＡ：アウリスタチンＦ−ヒドロキシプロピルアミド
Ａｌａ：アラニン
ＢＡ：β−アラニン
ＢＯＣ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ：Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＡＣ：Ｎ１−（（エチルイミノ）メチレン）−Ｎ３，Ｎ３−ジメチルプロパン−１
，３−ジアミン塩酸塩
ＥＤＣ・ＨＣｌ：１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩
酸塩
ＧＡ：グルタル酸
ＨＩＣ−ＨＰＬＣ：疎水的相互作用高圧液体クロマトグラフィ
ＨＯＡｔ：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
ＨＰＬＣ：高圧液体クロマトグラフィ
ＨＰＳＥＣ：高速サイズ排除クロマトグラフィ
ＨＰＶ：ヒドロキシプロピルビンデシン
２ＨＰＶ：２−ヒドロキシプロピルビンデシン
ＭＷＣＯ：分画分子量
ＮＨＳ：１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（すなわち、Ｎ−ヒドロキシ−ス
クシンイミド）
ＮＭＰ：Ｎ−メチル−２−ピロリドン
ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水、０．９％ＮａＣｌ
ＥＧ：エチレングリコール
ＥＧ２：ジエチレングリコール
ＭＩ：マレイミドまたはマレイミド
ＨＰＡ−Ａｌａ：ヒドロキシプロピルアミド−Ｌ−アラニン
ＰＨＦ：ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシルメチルホルマール）または
ＦＬＥＸＩＭＥＲ（登録商標）
ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィ
ＳＥＣ：サイズ排除クロマトグラフィ
ＴＢＳＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルクロリド
ＴＣＥＰ：トリス［２−カルボキシエチル］ホスフィン
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＥＡＡ：トリエチルアンモニウムアセテート
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＷＣＸ：弱カチオン交換クロマトグラフィ
［一般情報］
マレイミド−ＥＧ２−ＮＨＳエステルは、Ｂｉｏｍａｔｒｉｋ、Ｃｈｉｎａから購入し
た。
Ｂｏｃ−ジアミノエタンＨＣｌは、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ、ＩＬから購入した。
Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって製造された注射のためのＫａｄｃｙｌａ（登録商標）（ア
ド−トラスツズマブエムタンシン）は購入した。
ＨＰＬＣ精製は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ、５μｍ、１１０Å、２５０×
１０ｍｍ、５ミクロン、セミ調製カラムで行った。
ＳＥＣは、Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＴＳＫゲルＧ５０００カラム（７．
８ｍｍ×３０ｃｍ、１０ｕｍ）またはＳｕｐｅｒｏｓｅ１２カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ
ｃａｒｅ）で行った。
ＷＣＸは、ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ−１０（９４ｍｍ×２５０ｍｍ）カラム（Ｔｈｅｒｍ
ｏＦｉｓｈｅｒ）で行った。
可能ならいつでも、共役体の薬物含量は分光光度法で決定し、他にＬＣ／ＭＳまたは１
Ｈ−ＮＭＲは薬物含量の定量のために行った。
タンパク質−ポリマー−薬物共役体のタンパク質含量は、２８０ｎｍでの分光光度法で
またはＥＬＩＳＡによって決定した。
ポリマー共役体の分子量（見かけの重量平均分子量またはピーク分子量として報告）は
、多糖またはタンパク質の分子量標準を伴うＳＥＣによって決定した。さらに具体的には
、ポリマーまたはポリマー−薬物共役体について、多糖分子量標準を使用し、タンパク質
−薬物−ポリマー共役体について、タンパク質標準を使用する。特に明示しない限り、報
告するポリマー担体の分子量は、ＰＨＦの重量平均分子量であり、ポリマー−薬物共役体
分子量およびタンパク質−ポリマー−薬物共役体は、ピーク分子量である。ＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、約１６０ｋＤａ〜約２６０ｋＤａのピーク分子量を有する。合成
／測定したポリマーおよびポリマー共役体は典型的には、多分散性≦１．５を有する。
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、大規模なダイアフィルトレーションによって残留
する未反応の薬物−ポリマー共役体から分離した。必要に応じて、サイズ排除クロマトグ
ラフィおよび／またはＷＣＸクロマトグラフィによるさらなる精製を行って、凝集したＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を除去した。一般的に、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体
は典型的には、ＳＥＣによって決定すると、＜５％（ｗ／ｗ、例えば、＜２％ｗ／ｗ）の
凝集した画分；ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって決定すると、＜０．５％
（ｗ／ｗ、例えば、＜０．１％ｗ／ｗ）の遊離（非共役）薬物；ＳＥＣおよび／またはＲ
Ｐ−ＨＰＬＣによって決定すると、＜１％（ｗ／ｗ）の遊離ポリマー−薬物共役体、なら
びにＨＩＣ−ＨＰＬＣおよび／またはＷＣＸ ＨＰＬＣによって決定すると、＜２％（ｗ
／ｗ、例えば、＜１％ｗ／ｗ）の非共役ＰＢＲＭを含有した。還元されたまたは部分的に
還元された抗体は、文献に記載されている手順を使用して調製した。例えば、Ｆｒａｎｃ
ｉｓｃｏら、Ｂｌｏｏｄ １０２ （４）：１４５８〜１４６５（２００３）を参照され
たい。総薬物（共役および非共役）濃度は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって決定した。
薬物動態特性、すなわち、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の吸収、分布、代謝、およ
び排泄の時間経過を研究するために、アッセイを開発して、例えば、血漿、腫瘍および組
織試料中の、ＰＢＲＭ−ＰＨＦ−ＡＦ−ＨＰＡ共役体（すなわち、共役したＡＦ−ＨＰＡ
）の濃度、ならびに放出された非共役ＡＦ−ＨＰＡおよびＡＦ（遊離薬物）の濃度を測定
した。試料中の遊離薬物の濃度を決定するために、酸性化した試料をアセトニトリルで処
理した。遊離薬物を上清から抽出し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。共役したＡＦ
−ＨＰＡの濃度を決定するために、酸性化した血漿、腫瘍または組織ホモジネートを、塩
基性加水分解、それに続く、アセトニトリルによる酸性化およびタンパク質沈殿に供した
。放出されたＡＦ−ＨＰＡおよびＡＦを含有するアセトニトリル上清を、ＬＣ−ＭＳ／Ｍ
Ｓによって分析した。血漿および腫瘍および組織ホモジネート中の遊離薬物および共役し
たＡＦ−ＨＰＡについての標準曲線は、それぞれ、０．３〜３，０００ｎｇ／ｍＬおよび
１０〜２０，０００ｎｇ／ｍＬの濃度範囲に亘って直線状であった。総トラスツズマブ濃
度は、ＥＬＩＳＡによって決定した。
全ての本明細書に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの実験において、他
に特定しない限り、使用する容量は全て、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＰＢＲＭ（
例えば、抗体）をベースとした。
ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたはキャピラリー電気泳動を使用して、ＰＢＲＭ
−ポリマー−薬物共役体におけるシステイン生体共役反応部位の特異性および分布を特性
決定した。結果は、ＰＢＲＭの重鎖（Ｈ）および軽鎖（Ｌ）上の薬物−ポリマー共役体の
位置分布を示し、ＰＢＲＭへの共役が、重鎖鎖間システインヒンジ領域において主に起こ
ったことを示した。同様の結果が、ＬＣ−ＭＳ ＰＢＲＭペプチドマップで得られた。
［一般手順］
＜手順Ａ．ポリマーとリンカーまたは薬物との共役＞
一般的に、ポリマー（ＰＨＦ−ＢＡまたはＰＨＦ−ＧＡ）と、アミン含有リンカー、例
えば、ＥＧ２−マレイミドまたはアミン含有リンカー薬物、例えば、ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌ
ａ、ＨＰＶ−Ａｌａとの共役は、活性化剤、例えば、ＥＤＣ・ＨＣｌの存在下で、水性ま
たは１０〜９０％有機／水性溶媒混合物中で行う。典型的な有機溶媒には、これらに限定
されないが、水混和性溶媒、例えば、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＮＭＰおよびＡＣＮが
含まれる。カップリングを促進するために、コアクチベーター、例えば、ＮＨＳを加える
。ポリマーをアミノ含有化合物と最初に混合し、それに続いてコアクチベーター（ＮＨＳ
）を加え、次いで、アクチベーター（ＥＤＣ・ＨＣｌ）を加える。反応は、０〜１０℃に
て、ｐＨ４．５〜７．５で周囲温度にて１時間〜２４時間行われる。このように得られた
ポリマー共役生成物を、ダイアフィルトレーションまたはＳＥＣによって精製する。生成
物を２〜５０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、ｐＨを４．５〜６．５に調節して、薬物−ポリマーリ
ンカーの安定性を確実にし、共役体を−２０〜−８０℃にてさらなる使用まで凍結貯蔵す
る。
ポリマーとアミン含有リンカーまたは薬物との共役は、逐次的に任意の順序で、または
同時に行うことができる。
＜手順Ｂ．タンパク質（ＰＢＲＭ）の部分的選択的還元＞
ポリマー−薬物共役体との共役の前の、関連するＰＢＲＭ中の鎖間ジスルフィド基また
は対になっていないジスルフィドの部分的選択的還元は、還元剤、例えば、ＴＣＥＰ、Ｄ
ＴＴまたはβ−メルカプトエタノールを使用することによって達成される。還元が過剰な
還元剤と共に行われるとき、還元剤はＳＥＣによる共役の前に除去される。反応性スルフ
ヒドリル基へのＰＢＲＭジスルフィド基の変換の程度は、ＰＢＲＭの化学量論、還元剤、
ｐＨ、温度および／または反応の期間によって決まる。ＰＢＲＭ中のジスルフィド基の全
部ではなくいくらかが還元されるとき、還元されたＰＢＲＭは、部分的に還元されたＰＢ
ＲＭである。
＜手順Ｃ、部分的に還元されたＰＢＲＭとポリマー薬物共役体との共役＞
ポリマー−薬物共役体への部分的に還元されたＰＢＲＭの共役は、１〜１０ｍｇ／ｍＬ
のＰＢＲＭ濃度および０．５〜１０ｍｇ／ｍＬのポリマー−薬物共役体濃度で、中性また
は僅かに塩基性条件（ｐＨ６．５〜８．５）下で行われる。ポリマー−薬物共役体は典型
的には、所望のタンパク質−ポリマー−薬物共役体の化学量論に対して１〜５．０倍過剰
で使用される。ＰＢＲＭがポリマー−薬物共役体のマレイミド基に共役しているとき、共
役は、水溶性マレイミド遮断化合物、例えば、Ｎ−アセチルシステイン、システインメチ
ルエステル、Ｎ−メチルシステイン、２−メルカプトエタノール、３−メルカプトプロパ
ン酸、２−メルカプト酢酸、メルカプトメタノール（すなわち、ＨＯＣＨ２ＳＨ）、ベン
ジル、チオールなどを加えることによって任意選択的に終了させる。
このように得られたＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を典型的にはダイアフィルトレー
ションによって精製し、非共役ポリマー−薬物共役体、非共役薬物および小分子不純物を
除去する。代わりにまたはさらに、適当なクロマトグラフィ分離手順、例えば、サイズ排
除クロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、イオンクロマトグラフィ、例え
ば、ＷＣＸクロマトグラフィ；逆相クロマトグラフィ、ヒドロキシルルアパタイトクロマ
トグラフィ、アフィニティークロマトグラフィまたはこれらの組合せを使用して、ＰＢＲ
Ｍ−ポリマー−薬物共役体を精製し得る。このように得られた精製されたＰＢＲＭ−ポリ
マー−薬物共役体は典型的には、緩衝液中でｐＨ５．０〜６．５にて配合される。
［実施例１］
＜ＥＧ２−マレイミド：（Ｏ−［Ｎ−（３−マレイミドプロピオニル）アミノエチル］−
Ｏ’−［３−（Ｎ−（２−アミノエチル）アミノ）−３−オキソプロピル］エチレングリ
コール）の合成＞
氷冷のマレイミド−ＥＧ２−ＮＨＳエステル（Ｏ−［Ｎ−（３−マレイミドプロピオニ
ル）アミノエチル］−Ｏ’−［３−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）−３−オキソプロピ
ル］エチレングリコール、１．２ｇ、２．８２ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−ジアミノエタン
塩酸塩（５６０ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（１５ｍＬ）懸濁液に、撹拌しながら
ＴＥＡ（０．５７１ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）を滴下で添加した。このように得られた混合
物を室温にし、撹拌を室温にて一晩続けた。さらなるＢＯＣ−ジアミノエタン塩酸塩を加
え（１１０ｍｇ）、反応を完了させた。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をＲＰ−ＨＰ
ＬＣ（水中の０〜１００％ＡＣＮ）上で精製し、Ｂｏｃ−ジアミノエタン−ＥＧ２−マレ
イミドを無色の固体として得た（１．１８ｇ、８９％収率）。ＥＳＩ ＭＳ：計算値Ｃ２
１Ｈ３５Ｎ４Ｏ８［Ｍ＋Ｈ＋］４７１．３；実測値４７１．２。
Ｂｏｃ−ジアミノエタン−ＥＧ２−マレイミド（１．１８ｇ、２．５０８ｍｍｏｌ）を
、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の３０％ＴＦＡ溶液に０℃にて溶解し、このように得られた溶液
を室温にて２時間撹拌した。粗反応混合物を真空下で濃縮し、次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣ（
０．１％ＴＦＡを含有する水中の０〜１０％ＡＣＮ）上で精製し、表題の化合物（ＥＧ２
−マレイミド）を無色の油として得た（１．０４ｇ、８６％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6+D2O): δ 6.95 (s, 2 H), 3.66-3.54 (m, 10 H), 3.34 (t,
2 H, J = 5.6 Hz), 3.27 (t, 2 H, J = 6.7 Hz), 3.18-3.10 (m, 2 H), 2.84 (t, 2 H,
J = 6.2 Hz), 2.33 (q, 4 H, J = 6.7 Hz); ESI MS: 計算値C16H27N4O6[M+H+] 371.2;
実測値371.2.
［実施例２］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＥＧ２−ＭＩ（３％）の合成＞
１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）（５８８ｍｇ、３．４６ｍｍｏｌ、ＵＳ１３／４９３
，８９９、現在、米国特許第８，６８５，３８３号明細書、実施例１に記載されているの
と同様の態様で調製）の水（１０ｍＬ）溶液に、ＥＧ２−マレイミド（１０２ｍｇ、０．
２１１ｍｍｏｌ、実施例１に記載されているのと同様の態様で調製）の水（５ｍＬ）溶液
を加え、それに続いて、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド（ＮＨＳ、２５ｍｇ、０．２１
１ｍｍｏｌ）を加えた。このように得られた混合物を５〜１０℃に冷却し、０．１ＮのＮ
ａＯＨ溶液を使用してｐＨを（５．３から）５．８に調節した。次いで、水（２ｍＬ）中
のＥＤＣ・ＨＣｌ（９４ｍｇ、０．４８６ｍｍｏｌ）を、反応混合物に４０分に亘り加え
た。反応混合物を室温とし、撹拌を室温にて１８時間続けた。このように得られた生成物
を、３Ｋ ＭＷＣＯ膜上のダイアフィルトレーションによって精製し、凍結乾燥し、表題
の化合物をオフホワイトの固体生成物として得た（０．４６０ｇ、７１％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：６．９ｐｐｍ（幅広い一重線、ＭＩ）、５．
０〜４．７ｐｐｍ（ｍ、１Ｈ、Ｏ−ＣＨ−Ｏ−、アセタール−プロトンポリマー）、４．
３〜３．６ｐｐｍ（ｍ、Ｏ−ＣＨ２−ポリマー骨格およびリンカープロトン）、３．４〜
３．３ｐｐｍ（ｍ、ＣＨ２−ＮＨ−、ベータ−アラニンおよびリンカープロトン）、２．
７〜２．４ｐｐｍ（ｍ、ＣＨ２−ＣＯＯＨ−、ベータ−アラニンおよびリンカープロトン
）。１Ｈ−ＮＭＲによって決定したＥＧ２−ＭＩリンカー添加量（すなわち、ＥＧ２−Ｍ
Ｉリンカーを含有するポリマー単位の含量）は、ポリマー構造単位の３ｍｏｌ％であった
。
［実施例３］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＥＧ２−ＭＩ（３％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８
％）の合成＞
水（４．２ｇ）中の１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）ＥＧ２−ＭＩ（３％）の均一溶液
（１４４ｍｇ、１１．０８μｍｏｌ、実施例２に記載されているのと同様の態様で調製）
を、５〜１０℃に冷却した。１ＮのＨＣｌを使用して溶液のｐＨを５．８に調節し、それ
に続いて、ＮＭＰ（１．４ｍＬ）に溶解したアウリスタチンＦ−ヒドロキシプロピルアミ
ド−Ｌ−アラニン・２ＴＦＡ（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ・２ＴＦＡ）（８５ｍｇ、７７．５
２μｍｏｌ、ＵＳ１３／４９３，８９９、現在、米国特許第８，６８５，３８３号明細書
、実施例５０に記載されているのと同様の態様で調製）、およびＮＨＳ（０．５ｍＬの水
中１６ｍｇ）を加えた。混合物を５〜１０℃にて激しく撹拌し、０．１ＮのＮａＯＨで溶
液のｐＨを５．８に調節した。このように得られた混合物に、ＥＤＣ・ＨＣｌの新たに調
製した水溶液（０．５ｍＬの水中３０ｍｇ）を加えた。４５分後、さらなるＥＤＣ・ＨＣ
ｌ（０．５ｍＬの水中３０ｍｇ）を加え、このように得られた混合物を、ｐＨを５．８で
維持する一方で、１８〜２４時間撹拌した。反応混合物のＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、出発材
料アウリスタチン化合物の＞９５％の消費を示した。生成物を、３Ｋ ＭＷＣＯ膜上のダ
イアフィルトレーションによって精製し、それに続いてＨＰＬＣによって精製し、凍結乾
燥し、表題の化合物を得た（１４３ｍｇ、７８％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：７．１５ｐｐｍ（幅広い一重線、ＡＦ−ＨＰ
Ａ芳香族プロトン）、６．９ｐｐｍ（幅広い一重線、ＭＩ）、５．０〜４．８ｐｐｍ（ｍ
、１Ｈ、Ｏ−ＣＨ−Ｏ−アセタール−プロトンポリマー）、４．４〜３．６ｐｐｍ（ｍ、
Ｏ−ＣＨ２−ポリマー骨格および薬物／リンカープロトン）、３．４〜２．８ｐｐｍ（ｍ
、ＣＨ２−ＮＨ−、ベータ−アラニンおよび薬物／リンカープロトン）、２．２〜１．８
ｐｐｍ（ｍ、ＣＨ２−ＣＯＯＨ−、ベータ−アラニンおよび薬物／リンカープロトン）お
よび１．６〜０．９ｐｐｍ（ｍ、薬物／リンカープロトン）。
１Ｈ−ＮＭＲによって決定した共役生成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有する
ポリマー単位の含量）は、ポリマー構造単位の８ｍｏｌ％であった（または平均して、ポ
リマー鎖毎に約６個のＡＦ−ＨＰＡ分子）。表題共役体の分子量は、約１７ｋＤａであっ
た。
［実施例４］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％
）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））の合成＞
トラスツズマブ（６．１９ｍＬ、１００ｍｇ、０．６７６μｍｏｌ）のＴＥＡＡ緩衝液
溶液に、撹拌しながらＴＣＥＰの溶液（０．６ｍＬ、２．３６μｍｏｌ、０．６７８ｍｇ
）を加えた。混合物を３７℃にて１時間インキュベートし、次いで、約０℃に冷却した。
次いで、部分的に還元されたトラスツズマブを、激しく撹拌した１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（
３０％）−ＥＧ２−ＭＩ（３％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％）（７６ｍｇ、実施例３
に記載されているのと同様の態様で調製）のＴＥＡＡ緩衝液（ｐＨ７．４）（２６．５ｍ
Ｌ）溶液に０℃にて加えた。０℃にて３０分間撹拌を続けた。反応物を、塩酸システイン
の水溶液（６５ｍｇ、３７１μｍｏｌ、１．９ｍＬ）でクエンチした。ｐＨ７．０で周囲
温度にて１時間撹拌した後、反応混合物をｐＨ５．０に酸性化した。粗生成物をクロマト
グラフィによって精製し、それに続いてＳＥＣ精製を行い、表題の化合物を得た（６１ｍ
ｇ、６１％収率）。
ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約１２：１〜約１７：１であった。表題共役体
の分子量は、１８０ｋＤａ、ＰＤＩ１．１５であった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラス
ツズマブの比は、約２：１〜約３：１または約３：１〜約４：１であった。
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体、トラスツズマブ−（（ＰＥＧ２−ＭＩ（３％））−
（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））（２．５μ
ｇ、上記ものと同様の様式で調製）を、非還元および還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥ、す
なわち、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、Ｏｄｙｓｓｅ
ｙ ＩＲＤｙｅ（登録商標）Ｂｌｕｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｉｎ緩衝液で可視化した
。非還元条件下で、共役体を７０℃にて１０分間加熱するか、またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ分
析の前に加熱しなかった。
ＳＧＳ−ＰＡＧＥゲルは、共役体が安定的であり、非還元条件下で、例えば、１０分間
７０℃にて解離しなかったことを示した。還元条件下で、共役体は、重鎖および軽鎖フラ
グメントに解離した。他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例
えば、セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレ
ムツズマブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態
が関与する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を
有するＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−
ポリマー共役体薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例５］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％）の合成＞
均一な１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）（７００ｍｇ、ＵＳ１３／４９３，８９９、現
在、米国特許第８，６８５，３８３号明細書、実施例１に記載されているのと同様の態様
で調製）の水（２０ｍＬ）溶液に、ＮＭＰ（６．７ｇ）に溶解したアウリスタチンＦ−ヒ
ドロキシプロピルアミド−Ｌ−アラニン・２ＴＦＡ（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ・２ＴＦＡ）
（４６０ｍｇ、４１７μｍｏｌ、ＵＳ１３／４９３，８９９、現在、米国特許第８，６８
５，３８３号明細書、実施例５０に記載されているのと同様の態様で調製）を加えた。こ
のように得られた混合物を、５〜１０℃に冷却する一方で、激しく撹拌した。溶液のｐＨ
を５．８に調節し、それに続いてＮＨＳ（１ｍＬの水中１２９ｍｇ）を加えた。このよう
に得られた混合物に、ＥＤＣ・ＨＣｌの新たに調製した水溶液（１ｍＬの水中２２３ｍｇ
）を加えた。３０分後、さらなるＥＤＣ・ＨＣｌ（１ｍＬの水中２２０ｍｇ）を加え、こ
のように得られた混合物を、ｐＨを５．８に維持する一方で、１８時間撹拌した。ＲＰ−
ＨＰＬＣ分析は、出発材料アウリスタチン化合物の＞９５％の消費を示した。生成物を、
ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥し、表題の化合物を得た（８５９ｍｇ、８３％収率）
。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：７．７〜７．２ｐｐｍ（幅広い一重線、ＡＦ
−ＨＰＡ芳香族プロトン）、５．０〜４．８ｐｐｍ（ｍ、１Ｈ、Ｏ−ＣＨ−Ｏ−アセター
ル−プロトンポリマー、水シグナル下に部分的に埋没）、４．４〜３．６ｐｐｍ（ｍ、Ｏ
−ＣＨ２−ポリマー骨格および薬物／リンカープロトン）、３．５〜２．８ｐｐｍ（ｍ、
ＣＨ２−ＮＨ−、ベータ−アラニンおよび薬物／リンカープロトン）、２．２〜１．６ｐ
ｐｍ（ｍ、ＣＨ２−ＣＯＯＨ−、ベータ−アラニンおよび薬物／リンカープロトン）およ
び１．６〜０．８ｐｐｍ（ｍ、薬物／リンカープロトン）。
１Ｈ−ＮＭＲによって決定した共役生成物の薬物の添加量は、ポリマー構造単位の８．
７ｍｏｌ％であった（または平均して、ポリマー鎖毎に約６個のＡＦ−ＨＰＡ分子）。共
役体Ａ：１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９．５％）は、上記
の手順を使用して１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）（１００ｍｇ）から調製した。
［実施例６］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＥＧ２−ＭＩ（２％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９
％）の合成＞
１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％）（５００ｍｇ、３５
μｍｏｌ、実施例５に記載されているのと同様の態様で調製）の水（１３．７ｍＬ）溶液
に、ＥＧ２−マレイミドの溶液（８３ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ、実施例１に記載されて
いるのと同様の態様で調製）、それに続いてＮ−ヒドロキシ−スクシンイミド（ＮＨＳ、
４０ｍｇ、０．３４８ｍｍｏｌ）を加えた。このように得られた混合物を５〜１０℃に冷
却し、０．１ＮのＮａＯＨ溶液を使用してｐＨを（４．６から）５．８に調節した。次い
で、水（２ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（１７４ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を、４０分に亘
り２つの等しいポーションで反応混合物に加えた。反応混合物のＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、
ＥＧ２−マレイミドの＞９５％の消費を示した。反応混合物を室温にし、撹拌を室温にて
１８時間続けた。このように得られた生成物を、３Ｋ ＭＷＣＯ膜上のダイアフィルトレ
ーションによって精製し、凍結乾燥し、表題の化合物をオフホワイトの固体生成物として
得た（０．５７ｇ、１００％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：７．４〜７．２ｐｐｍ（幅広い一重線、ＡＦ
−ＨＰＡ芳香族プロトン）、６．９ｐｐｍ（幅広い一重線、ＭＩ）、５．０〜４．８ｐｐ
ｍ（ｍ、１Ｈ、Ｏ−ＣＨ−Ｏ−アセタール−プロトンポリマー、水ピーク下に部分的に埋
没）、４．４〜３．６ｐｐｍ（ｍ、Ｏ−ＣＨ２−ポリマー骨格および薬物／リンカープロ
トン）、３．５〜２．８ｐｐｍ（ｍ、ＣＨ２−ＮＨ−、ベータ−アラニンおよび薬物／リ
ンカープロトン）、２．２〜１．６ｐｐｍ（ｍ、ＣＨ２−ＣＯＯＨ−、ベータ−アラニン
および薬物／リンカープロトン）および１．６〜０．８ｐｐｍ（ｍ、薬物／リンカープロ
トン）。
１Ｈ−ＮＭＲによって決定したＥＧ２−ＭＩリンカー添加量は、ポリマー構造単位の約
２％ｍｏｌであった。表題の化合物の分子量は、約２０ｋＤａであった。平均して、ポリ
マー鎖毎に６個のＡＦ−ＨＰＡ分子が存在した。
［実施例７］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）
−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））の合成＞
トラスツズマブ（６．４ｍＬ、１００ｍｇ、０．６８μｍｏｌ）のＴＥＡＡ緩衝液溶液
に、撹拌しながらＴＣＥＰ（０．９９３ｍｇ、３．４μｍｏｌ）の溶液を加えた。混合物
を室温にて１．５時間インキュベートした。次いで、部分的に還元されたトラスツズマブ
を、激しく撹拌した１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＥＧ２−ＭＩ（２％）−ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（９％）（８６ｍｇ、４．７μｍｏｌ、実施例６に記載されているのと同様
の態様で調製）のＴＥＡＡ緩衝液（ｐＨ７．４）（２６．５ｍＬ）溶液に０℃にて加えた
。撹拌を室温にて４５分間続けた。反応物を、ＴＥＡＡ緩衝液、ｐＨ６．８中のシステイ
ンの水溶液（６５ｍｇ、３７１μｍｏｌ、１．９ｍＬ）でクエンチした。周囲温度にてｐ
Ｈ７．０で１時間撹拌した後、反応混合物をｐＨ５．８に酸性化した。粗生成物をＳＥＣ
精製によって精製し、表題の化合物（３５ｍｇ、３５％収率）を得た。
ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約１６：１〜約２１：１であった。表題共役体
の分子量は、２１０ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、
約２：１〜約３：１または約３：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例８］
＜リンツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−
（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＥＧ２−ＭＩ（２％）−ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（９％）（実施例３または実施例６に記載されているのと同様の態様で調製
）、リンツズマブおよびＴＣＥＰ：リンツズマブ３．５：１を使用したことを除いては、
実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。
ＡＦ−ＨＰＡとリンツズマブの比は、約１０：１〜約１５：１であった。表題共役体の
分子量は、１８４ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とリンツズマブの比は、約２
：１〜約３：１または約３：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例９］
＜リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−
（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＥＧ２−ＭＩ（３％）−ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（８％）（実施例３または実施例６に記載されているのと同様の態様で調製
）、リツキシマブおよびＴＣＥＰ：リツキシマブ３．５：１を使用したことを除いては、
実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。
ＡＦ−ＨＰＡとリツキシマブの比は、約１３：１〜約１８：１であった。表題共役体の
分子量は、１６３ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とリツキシマブの比は、約２
：１〜約３：１または約３：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例１０］
＜抗５Ｔ４−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（Ａ
Ｆ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））の合成＞
表題の化合物（「抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃポリマー薬物共役体」、または「抗５Ｔ４ｓｃ
ＡＤＣ」）は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−ＥＧ２−ＭＩ（３％）−ＡＦ−ＨＰＡ
−Ａｌａ（８％）（実施例３または実施例６に記載されているのと同様の態様で調製）、
および抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ抗体およびＴＣＥＰ：抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ抗体３：１を使
用したことを除いては、実施例７に記載されているのと同様の態様で調製した。抗５Ｔ４
ｓｃＦｖＦｃ抗体（抗５Ｔ４単鎖抗体−Ｆｃ融合タンパク質）を、参照により本明細書中
に組み込む２０１３年６月１７日に出願された米国特許仮出願第６１／８３５，８５８号
明細書に開示されているように、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞において組換え技術によって調製
した。
ＡＦ−ＨＰＡと抗５Ｔ４抗体の比は、約１２：１〜約１８：１であった。表題共役体の
分子量は、２００ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体と抗５Ｔ４抗体の比は、約２
：１〜約３：１または約３：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例１１］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＧＡ（２９％）−ＥＧ２−ＭＩ（１％）の合成＞
１０Ｋ ＰＨＦ−ＧＡ（２９％）（１．７ｇ、１０．１ｍｍｏｌ、ＵＳ１３／４９３，
８９９、現在、米国特許第８，６８５，３８３号明細書、実施例２に記載されているのと
同様の態様で調製）の水（３５ｍＬ）溶液に、ＥＧ２−マレイミド（２０４ｍｇ、０．４
２ｍｍｏｌ、実施例１に記載されているのと同様の態様で調製）のＤＭＡ（３ｍＬ）溶液
を加え、それに続いてＮ−ヒドロキシ−スクシンイミド（ＮＨＳ、７０．３ｍｇ、０．６
１１ｍｍｏｌ）を加えた。このように得られた混合物を５〜１０℃に冷却した。次いで、
水（２ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（２６９ｍｇ、１．４０２ｍｍｏｌ）を、反応混合物に
２つの等しいポーションで４０分に亘り加えた。反応混合物を室温とし、撹拌を室温にて
１８時間続けた。このように得られた生成物を、３Ｋ ＭＷＣＯ膜上でのダイアフィルト
レーションによって精製し、凍結乾燥し、表題の化合物をオフホワイトの固体生成物とし
て得た（１．７ｇ、９１％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：６．９ｐｐｍ（幅広い一重線、ＭＩ）、５．
０〜４．７ｐｐｍ（ｍ、１Ｈ、Ｏ−ＣＨ−Ｏ−、アセタール−プロトンポリマー、水ピー
ク下に部分的に埋没）、４．４〜３．６ｐｐｍ（ｍ、Ｏ−ＣＨ２−ポリマー骨格およびリ
ンカープロトン）、３．３〜２．６ｐｐｍ（ｍ、リンカープロトン）、２．５ｐｐｍ（ｍ
、ＣＨ２−ＣＯ−、グルタル酸プロトン）、２．３ｐｐｍ（幅広い一重線、ＣＨ２−ＣＯ
Ｏ−、グルタル酸プロトン）、１．９ｐｐｍ（幅広い一重線、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２
−ＣＯ−、グルタル酸プロトン）。
１Ｈ−ＮＭＲによって決定したＥＧ２−ＭＩリンカー添加量は、ポリマー構造単位の１
ｍｏｌ％であった。
［実施例１２］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＧＡ（２９％）−ＥＧ２−ＭＩ（１％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（６
％）の合成＞
水（５．４ｇ）中の１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２９％）−ＥＧ２−ＭＩ（１％）の均一溶
液（２１４ｍｇ、１５μｍｏｌ、実施例１１に記載されているのと同様の態様で調製）に
、ＮＭＰ（１．８５ｍＬ）に溶解したＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ・２ＴＦＡ（９８ｍｇ、９０
μｍｏｌ、ＵＳ１３／４９３，８９９、現在、米国特許第８，６８５，３８３号明細書、
実施例５０に記載されているのと同様の態様で調製）、およびＮＨＳ（０．５ｍＬの水中
２５ｍｇ）を加えた。混合物を５〜１０℃にて激しく撹拌した。このように得られた混合
物に、ＥＤＣ・ＨＣｌの新たに調製した水溶液（０．８ｍＬの水中４０ｍｇ）を加えた。
３０分後、さらなるＥＤＣ・ＨＣｌ（０．８ｍＬの水中４４ｍｇ）を加え、このように得
られた混合物を、ｐＨを５．８に維持する一方で、１８〜２４時間撹拌した。ＲＰ−ＨＰ
ＬＣ分析は、出発材料アウリスタチン化合物の＞９５％の消費を示した。生成物を、３Ｋ
ＭＷＣＯ膜上でのダイアフィルトレーションによって精製し、１０ｍＬに濃縮し、表題
の化合物を得た（１７７ｍｇ、６３％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：７．４〜７．２ｐｐｍ（幅広い一重線、ＡＦ
−ＨＰＡ芳香族プロトン）、６．９ｐｐｍ（幅広い一重線、ＭＩ）、５．０〜４．８ｐｐ
ｍ（ｍ、１Ｈ、Ｏ−ＣＨ−Ｏ−、アセタール−プロトンポリマー）、４．４〜３．６ｐｐ
ｍ（ｍ、Ｏ−ＣＨ２−ポリマー骨格およびリンカープロトン）、３．４〜２．９ｐｐｍ（
ｍ、薬物リンカープロトン）、２．５ｐｐｍ（幅広い三重線、ＣＯ−ＣＨ２−、グルタル
酸プロトン）、２４〜２．２ｐｐｍ（ｍ、ＣＨ２−ＣＯＯ−、グルタル酸プロトンおよび
薬物／リンカープロトン）、２．０〜１．８ｐｐｍ（ｍ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ
Ｏ−、グルタル酸プロトン）、１．５〜０．８（ｍ、薬物／リンカープロトン）。
１Ｈ−ＮＭＲによって決定した共役生成物の薬物の添加量は、ポリマー構造単位の５．
９ｍｏｌ％であった（または平均して、ポリマー鎖毎に約４．５個のＡＦ−ＨＰＡ分子）
。表題共役体の分子量は、約１７ｋＤａであった。
［実施例１３］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（１％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＧＡ（２９％
）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（６％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＧＡ（２９％）−ＥＧ２−ＭＩ（１％）−ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（６％）（７８ｍｇ、実施例１２に記載されているのと同様の態様で調製）
およびトラスツズマブ（２５ｍｇ）およびＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５：１を使用し
たことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。ＡＦ−
ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約１８：１〜約２３：１であった。表題共役体の分子量
は、２００ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、約４：１
〜約５：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例１４］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）
−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−ＥＧ２−ＭＩ（２％）−ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（９％）（１１ｍｇ、実施例３または実施例６に記載されている手順を使用
して調製）、トラスツズマブ（６２０ｍｇ）およびＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５：１
を使用したことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した
。
ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約１０：１〜約１５：１であった。表題共役体
の分子量は、１８３ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、
約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例１５］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）
−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−ＥＧ２−ＭＩ（２％）−ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（９％）（２４３ｍｇ、実施例３または実施例６に記載されている手順を使
用して調製）、トラスツズマブ（４３５ｍｇ）およびＴＣＥＰ：トラスツズマブ３：１を
使用したことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。
ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約１１：１〜約１６：１であった。表題共役体
の分子量は、１９７ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、
約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例１６］
＜リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−
（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−ＥＧ２−ＭＩ（２％）−ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（９％）（１７０ｍｇ、実施例３または実施例６に記載されている手順を使
用して調製）３００ｍｇリツキシマブおよびＴＣＥＰ：リツキシマブ３：１を使用したこ
とを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。
ＡＦ−ＨＰＡとリツキシマブの比は、約１３：１〜約１８：１であった。表題共役体の
分子量は、１８０ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とリツキシマブの比は、約３
：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例１７］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）
−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−ＥＧ２−ＭＩ（２％）−ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（９％）（８．４ｍｇ、実施例３または実施例６に記載されている手順を使
用して調製）、トラスツズマブ（１５ｍｇ）および（ＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５：
１を使用したことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製し
た。ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約５：１〜約１０：１であった。表題共役体
の分子量は、１８３ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、
約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例１８］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）
−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））の合成＞
表題の化合物は、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。
共役体Ａ−ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約１９：１〜約２４：１であった。
表題共役体の分子量は、２０１ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマ
ブの比は、約２：１〜約４：１であった。
共役体Ｂ−ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約２０：１〜約２５：１であった。
表題共役体の分子量は、２２４ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマ
ブの比は、約２：１〜約４：１であった。
共役体Ｃ−ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約２３：１〜約２８：１であった。
表題共役体の分子量は、２５９ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマ
ブの比は、約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例１９］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（１４
％）の合成＞
均一な１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）（２５．００ｍｇ、
２．８０μｍｏｌ、実施例２に記載されているのと同様の態様で調製）の水（０．６１２
ｍＬ）およびＮＭＰ（０．１４ｍＬ）溶液を、０℃に冷却した。ＮＭＰ（０．１４ｍＬ）
中の１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（８．０６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、
それに続いて水（０．２５０ｍＬ）中のＨＰＶ−アラニン（１５．５６ｍｇ、０．０１８
ｍｍｏｌ、米国特許第８，５２４，２１４号明細書、実施例１に記載されているのと同様
の態様で調製）を加えた。全ての材料が溶解するまで混合物を激しく撹拌し、次いで、Ｅ
ＤＣ・ＨＣｌの新たに調製した水溶液（０．１２５ｍＬの水中６．７１ｍｇ）を加えた。
４５分後、さらなるＥＤＣ・ＨＣｌ（０．１２５ｍＬの水中６．７１ｍｇ）を加え、この
ように得られた混合物を、ｐＨを５．８に維持する一方で、１８時間撹拌した。反応混合
物のＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、反応が不完全であることを示した。混合物を０℃に冷却し、
ＥＤＣ・ＨＣｌ（０．２５０ｍＬ中１２ｍｇ）を加えた。溶液のｐＨを０．１ＮのＮａＯ
Ｈで５．９に調節し、混合物をさらに２時間撹拌し、この時点で反応混合物のＲＰ−ＨＰ
ＬＣ分析は出発材料の完全な消費を示した。生成物を、カラムクロマトグラフィ（Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘ Ｇ２５Ｇｅｌ）によって精製し、それに続いてＨＰＬＣによって精製し、凍
結乾燥し、表題の化合物を得た（１０．１８ｍｇ、２４％収率）。
共役体Ａ：１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ＨＰＶ−Ａ
ｌａ（１４％）を、上で記載したものと同様の様式で調製した。１Ｈ−ＮＭＲによって決
定した共役生成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有するポリマー単位の含量）は、
ポリマー構造単位の１４ｍｏｌ％であった（すなわち、平均して、ポリマー鎖毎に２．４
個のＨＰＶ−Ａｌａ分子）。
共役体Ｂ：１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ＨＰＶ−Ａ
ｌａ（７．７％）を、上記の手順を使用して調製した。１Ｈ−ＮＭＲによって決定した共
役生成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有するポリマー単位の含量）は、ポリマー
構造単位の２８．３ｍｏｌ％であった（すなわち、平均して、ポリマー鎖毎に４．６個の
ＨＰＶ−Ａｌａ分子）。
共役体Ｃ：１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）ＥＧ２−ＭＩ（３．５％）−（ＨＰＶ−Ａ
ｌａ（４．３％）を、上記の手順を使用して調製した。ＨＰＬＣによって決定した共役生
成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有するポリマー単位の含量）は、ポリマー構造
単位の４．３ｍｏｌ％であった（すなわち、平均して、ポリマー鎖毎に２．６個のＨＰＶ
−Ａｌａ分子）。
［実施例２０］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０
％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（１４％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ＨＰ
Ｖ−Ａｌａ（１４％）（１．５ｍｇ、実施例１９に記載されているのと同様の態様で調製
）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラスツズマブ４：１を使用したことを除いては、
実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。
共役体Ａ：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（３０％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（１４％））。ＨＰＶ−Ａｌａとトラスツズマブの比
は、約１３：１〜約１８：１であった。表題共役体の分子量は、約１６８ｋＤａであった
。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。
共役体Ｂ：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（３０％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（７．７％））は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）
ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（７．７％）（５．７ｍｇ、実施例１９、
共役体Ｂ）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラスツズマブ４：１を使用したことを除
いては、上記の手順を使用して調製した。ＨＰＶ−Ａｌａとトラスツズマブの比は、約１
０：１〜約１４：１であった。表題共役体の分子量は、約１８０ｋＤａであった。平均Ｐ
ＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。
共役体Ｃ：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３．５％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（３０％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（４．３％））は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（３０％）
ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（４．３％）（４．２ｍｇ、実施例１９、
共役体Ｃに記載されているのと同様の態様で調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：ト
ラスツズマブ４：１を使用したことを除いては、この実施例に記載されているのと同様の
態様で調製した。ＨＰＶ−Ａｌａとトラスツズマブの比は、約８．５：１〜約１２：１で
あった。表題共役体の分子量は、約１８１ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とト
ラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例２１］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（イスピネシブ−ＰＡＢ
Ａ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ（３．５％）の合成＞
１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）（６０．８ｍｇ、実施例２
に記載されているのと同様の態様で調製）のＮＭＰ（５ｍＬ）溶液に、ＮＭＰ（０．５ｍ
Ｌ）中のイスピネシブ−ＰＡＢＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＮＨ２（ＴＦＡ塩、１０．０ｍｇ、
米国特許第８，８１５，２２６号明細書、実施例８４に記載されているのと同様の態様で
調製）を加えた。この混合物に、ＮＭＰ（０．５ｍＬ）中のＨＡＴＵ（５．５ｍｇ）、そ
れに続いてＤＩＥＡ（４．４ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温にて５〜１０分間撹拌し
た。粗混合物を、限外濾過によって精製し、表題の化合物を得た（収率：６４％、イスピ
ネシブをベースとする）。
ＵＶによって決定した共役生成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有するポリマー
単位の含量）は、ポリマー構造単位の３．５ｍｏｌ％であった（または平均して、ポリマ
ー鎖毎に約２．５個のイスピネシブ−ＰＡＢＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ分子）。
［実施例２２］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２８％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２．７
％）−（イスピネシブ−ＰＡＢＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−（３．５％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（イス
ピネシブ−ＰＡＢＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ（３．５％）（５．６ｍｇ、実施例２１に記載され
ているのと同様の態様で調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５
：１を使用したことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製
した。イスピネシブとトラスツズマブの比は、約７．５：１〜約１０：１であった。平均
ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例２３］
＜リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％
）−（イスピネシブ−ＰＡＢＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−（３．５％））の合成＞
表題の化合物は、リツキシマブおよびＴＣＥＰ：リツキシマブ３．５：１を使用したこ
とを除いては、実施例２２に記載した手順を使用して調製した。イスピネシブとリツキシ
マブの比は、約６．５：１〜約１０：１であった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズ
マブの比は、約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例２４］
＜ＴＨＰ−２−メチル−イスピネシブの合成＞
化合物１：４−（ヒドロキシメチル）−２，６−ジメトキシフェノール（２．７７ｇ）
のＤＭＡ（２５ｍＬ）溶液に、イミダゾール（１．１３ｇ）を加えた。混合物をアルゴン
下で０℃に冷却し、次いで、ＴＢＳＣｌ（２．４９ｇ）を加えた。反応混合物を室温に温
め、光から保護してアルゴン下で３日間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で
希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有
機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、粗生成物を得て、これをシリカゲル上のフラッシ
ュクロマトグラフィ（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、０％Ｂ〜３０％Ｂ）によって精製し、無色の
油を得た（２．２４ｇ、５０％収率）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.17 (s, 1H), 6
.54 (s, 2 H), 4.59 (s, 2 H), 3.72 (s, 6 H), 0.89 (s, 9 H), 0.05 (s, 6 H).
化合物２：氷冷の化合物１（０．５０８ｇ）、ＴＥＡ（０．６０３ｇ）およびＤＭＡＰ
（０．０２１ｇ）の乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、４−ニトロフェニルクロロホルメート
（０．６８ｇ）のＴＨＦ（約３ｍＬ）溶液を加えた。氷浴を除去し、撹拌を室温にて続け
た。反応物をＮＨ４Ｃｌ（２０ｍＬ）でクエンチし、次いで、酢酸エチル（６０ｍＬ）で
抽出した。有機物をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、次いで、濃
縮し、粗生成物を得て、これをシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：酢
酸エチル、０％Ｂ〜２０％Ｂ）によって精製し、化合物２を無色の固体として得た（０．
７２４ｇ、９２％収率）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.32-8.28 (m, 2 H), 7.51-7.48
(m, 2 H), 7.12 (s, 1 H), 6.64 (s, 1 H), 4.75 (d, 2 H, J = 12.9 Hz), 3.93 (d, 3
H, J = 13.5 Hz), 3.88 (s, 3 H), 1.0-0.94 (m, 9 H), 0.15 (s, 3 H), 0.12 (s, 3 H).
化合物３：化合物２（０．５ｇ）の乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、ＨＯＢｔ（０．２９
１ｇ）を加え、このように得られた混合物を約５分間撹拌した。この混合物に、２−アミ
ノプロパノール（０．３２４ｇ）およびＴＥＡ（０．５４６ｇ）を加えた。このように得
られた混合物を０℃にて約１時間撹拌し、この時点でＴＬＣは反応が完了したことを示し
た。混合物をＤＣＭ（６０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２０ｍＬ）、それに続いて
ブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、黄色の
油を得た。粗生成物を、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：酢酸エチ
ル、０％Ｂ〜８０％Ｂ）によって精製し、化合物３を黄色の固体として得た（０．３５６
ｇ、８３％収率）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.50 (t, 1 H J = 5.8 Hz), 6.64 (s
, 2 H), 4.68 (s, 2 H), 4.64 (d, 1 H, J = 4.8 Hz), 3.71 (s, 6 H), 3.70-3.61 (m, 1
H), 3.04-2.96 (m, 1 H), 2.96-2.86 (m, 1 H), 1.05 (d, 3 H, J = 6.1 Hz), 0.10 (s,
6 H); ESI MS: 理論値C19H33NO6Si (M + H) 400.2, 実測値400.2.
化合物４：氷冷の化合物３（０．３５８ｇ）およびＤＭＡＰ（０．２１９ｇ）の乾燥Ｄ
ＣＭ（５ｍＬ）溶液に、ＤＣＣ（０．３６９ｇ）のＤＣＭ（約５ｍＬ）溶液をアルゴン下
で加えた。氷浴を除去し、混合物を室温にて一晩撹拌した。反応混合物を濾過し、ＤＣＭ
（約６０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２×２０ｍＬ）、それに続いてブライン（約
２０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、粗生成物を得て、これ
をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィによって精製し、化合物４を無色の油とし
て得た（０．４２２ｇ、７５％収率）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.65 (s, 1 H),
7.39 (s, 1 H), 6.64 (s, 2 H), 4.93-4.84 (m, 1 H), 4.68 (s, 2 H), 3.71 (s, 6 H),
3.68-3.62 (m, 1 H), 3.62-3.47 (m, 4 H) 3.16 (t, 2 H, J = 5.9 Hz), 2.88 (s, 4 H
), 2.01-1.93 (m, 2 H), 1.91-1.77 (m, 3 H), 1.75-1.66 (m, 1 H), 1.57-1.47 (m, 1 H
), 1.39 (s, 9 H), 1.35-1.29 (m, 1 H), 1.28-1.22 (m, 1 H), 1.15-1.10 (m,3 H), 0.9
2 (s, 9 H); ESI MS: 理論値C30H50N2O10Si (M + H) 627.3, 実測値527.2 (M - Boc + H
).
化合物５：化合物４（０．４００ｇ）およびＳｎＣｌ２二水和物（０．１４４ｇ）のＥ
ｔＯＨ／水（７．２５ｍＬ、９：１）溶液を、室温にてアルゴン下で約３時間撹拌した。
反応が完了すると（ＴＬＣ）、反応混合物を６０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、次いで、飽
和ＮＨ４Ｃｌ（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ
４で脱水し、濃縮し、粗生成物を得て、これをシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフ
ィ（Ｈｅｘ：酢酸エチル、０％Ｂ〜１００％Ｂ）によって精製し、化合物５を無色の油と
して得た（０．２２０ｇ、６７％収率）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.61 (s, 2 H),
5.82 (brs, 1 H), 5.16 (brs, 1 H), 4.87 (m, 1 H), 4.64 (s, 2 H), 3.90-3.75 (m, 8
H), 3.75-3.62 (m, 2 H), 3.62-3.51 (m, 1 H), 3.41-3.18 (m, 1 H), 2.31-2.13 (m, 2
H), 1.93-1.81 (m, 2 H), 1.44 (s, 9 H), 1.29 (d, 3 H, J = 6.6 Hz); ESI MS: 理論値
C24H36N2O10 (M + H) 513.2, 実測値413.2 (M - Boc + H).
化合物６：化合物５（０．２２０ｇ）の乾燥ＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に、ＴＥＡ（０．１
５２ｇ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（０．
０８７ｇ）を固体として加えた。混合物を室温に温め、約４時間撹拌した。さらなるクロ
ロホルメート（約１ｍＬのＴＨＦ中の約０．０５ｇ）を加え、混合物を一晩撹拌した。反
応混合物を３０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１０ｍＬ）、それ
に続いてブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、粗
生成物を油として得た。粗生成物を、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィ（ヘキ
サン：ＥｔＯＡｃ、０％Ｂ〜９０％Ｂ）によって精製し、化合物６を無色の固体として得
た（０．２５７ｇ、８８％収率）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (d, 2 H, J = 9.3
Hz), 7.39 (d, 2 H, J = 9.8 Hz), 6.67 (s, 2 H), 5.90 (brs, 1 H), 5.23 (s, 2 H),
5.21-5.13 (m, 1 H), 4.87 (brs, 1 H), 3.89-3.76 (m, 8 H), 3.75-3.64 (m, 2 H), 3.6
3-3.53 (m, 1 H), 2.30-2.19 (m, 1 H)1.95-1.83 (m, 2 H), 1.44 (s, 9 H), 1.29 (d, 3
H, J = 6.7 Hz); ESI MS: 理論値C31H39N3O14 (M + H) 678.2, 実測値578.2 (M - Boc
+ H).
化合物７：化合物６（５３．５ｍｇ）の乾燥ＤＭＡ（０．５ｍＬ）溶液に、イスピネシ
ブ（３７．１ｍｇ）、ＤＩＥＡ（９．２７ｍｇ）、およびＨＯＡｔ（２．９３ｍｇ）を連
続して加えた。混合物を窒素下で室温にて一晩撹拌した。粗反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰ
ＬＣ（Ｈｅｘ：酢酸エチル、２５分に亘り５０％Ｂ〜９０％Ｂ、両方の移動相中０．１％
ＴＦＡ）によって精製し、化合物７を無色の固体として得た（６４ｍｇ、８４％収率）。
ＥＳＩ ＭＳ：理論値Ｃ５５Ｈ６７ＣｌＮ６Ｏ１３（Ｍ＋Ｈ）１０５５．５、実測値１０
５５．４。
化合物８：氷冷の化合物７（６４ｍｇ）の乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１ｍ
Ｌ）を窒素下で加えた。氷浴を除去し、混合物を室温にて１時間撹拌し、この時点でＬＣ
／ＭＳは反応が完了したことを示した。溶媒をロータリーエバポレーションによって除去
し、残渣を凍結乾燥し、化合物８を無色の固体として得た（６４ｍｇ、９９％）。ＥＳＩ
ＭＳ：理論値Ｃ５０Ｈ５９ＣｌＮ６Ｏ１１（Ｍ＋Ｈ）９５５．４、実測値９５５．３。
［実施例２５］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ＴＨＰ−２−メチル−
イスピネシブ）（２．４％）の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）（５８．
９ｍｇ、実施例２に記載されているのと同様の態様で調製）およびＴＨＰ−２−メチル−
イスピネシブ（１０．０ｍｇ、実施例２４に記載されているのと同様の態様で調製）を使
用して実施例２１に記載したのと同様の様式で調製した；４６％収率（イスピネシブをベ
ースとする）。
ＵＶによって決定した共役生成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有するポリマー
単位の含量）は、ポリマー構造単位の２．４ｍｏｌ％であった（または平均して、ポリマ
ー鎖毎に約１．７個のＴＨＰ−２−メチル−イスピネシブ分子）。
［実施例２６］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８
％）−（ＴＨＰ−２−メチル−イスピネシブ）（２．４％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ＴＨ
Ｐ−２−メチル−イスピネシブ）（２．４％ｍｇ、実施例２５に記載されているのと同様
の態様で調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５：１を使用した
ことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。イスピネ
シブとトラスツズマブの比は、約５：１〜約８：１であった。平均ＰＨＦ−薬物共役体と
トラスツズマブの比は、約３：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例２７］
＜リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％
）−（ＴＨＰ−２−メチル−イスピネシブ）（２．４％））の合成＞
表題の化合物は、リツキシマブおよびＴＣＥＰ：リツキシマブ３．５：１を使用したこ
とを除いては、実施例２６に記載した手順を使用して調製した。平均イスピネシブとリツ
キシマブの比は、約４．５：１〜約７：１であった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツ
ズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例２８］
＜バリン−アシルオキシイソプロピルオキシ−ＭＭＡＥの合成＞
化合物１：（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタン酸（
４．７６ｇ、１８．９３ｍｍｏｌ）、１−クロロ−２−メチルプロピル４−（メチルチオ
）フェニルカーボネート（２．６ｇ、９．４６ｍｍｏｌ）および一銀（Ｉ）一銀（ＩＩＩ
）モノオキシド（２．１９３ｇ、９．４６ｍｍｏｌ）を、９０℃にて１時間加熱した。反
応混合物を室温に冷却し、残渣をエチルエーテルで粉砕し、固体をエーテルで洗浄した。
有機物を、水（４×）、ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、
麦わら色の油へと濃縮した。ＤＣＭ中の原油を、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラ
フィ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、０％Ｂ〜２０％Ｂ）、それに続いて０．１％ＴＦＡで緩衝
した２０〜９５％アセトニトリルのアセトニトリル／水の勾配を使用したＣ−１８逆相Ｈ
ＰＬＣによって精製し、無色の油を得た（２．７８ｇ、６０％収率）。化合物を、１Ｈ、
１３Ｃ ＮＭＲおよび質量スペクトル、Ｍ／ｚ＝４９０．３によって特性決定した。
化合物２：氷冷の化合物１、（２．５ｇ、５．１１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍｌ）溶
液に、過酢酸の酢酸（１２．１４ｇ、５１．１ｍｍｏｌ）溶液を滴下で添加し、添加が完
了した後、２時間撹拌した。反応をＬＣ／ＭＳによってモニターした。２時間後、反応混
合物に２５ｍＬの水を加え、３０分間冷やして撹拌し、有機物を１００ｍＬのＤＣＭで希
釈し、氷冷水（５×）、ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した
。粗生成物を、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、０
％Ｂ〜５０％Ｂ）によって精製した。
化合物３：ＭＭＡＥ、（３００ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ）、化合物２、（４３６ｍｇ
、０．８３６ｍｍｏｌ）、３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３
−オール水和物（１２９ｍｇ、０．８３６ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（２５ｍｌ）を合わせ
、氷浴中で撹拌した。このように得られた混合物に、トリエチルアミン（０．２９１ｍｌ
、２．０８９ｍｍｏｌ）を加え、ＬＣ／ＭＳによって示されるように反応が完了するまで
、１５分間冷やして、次いで、４０℃にて撹拌した。４時間後、反応混合物を酢酸エチル
で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液、５％クエン酸水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、
濃縮し、逆相クロマトグラフィによって精製し、化合物３を白色のアモルファス固体とし
てＴＦＡ塩として得た。ＬＣ／ＭＳ、Ｍ／ｚ＝１０６７．６。
化合物４：ＴＨＦ（１０ｍｌ）およびＥｔＯＨ（１０．００ｍｌ）中の化合物３（１５
０ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）に、アルゴンを泡立てた。この混合物に、１０％パラジウ
ム担持カーボン（２９．９ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を加え、それに続いて水素のバル
ーン（０．２８３ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を付着させ、反応をＬＣ／ＭＳによってモ
ニターした。完了すると、反応混合物を移動相として０．１％ＴＦＡで緩衝した水中のア
セトニトリルの勾配を使用した逆相クロマトグラフィによって精製し、表題の化合物を白
色のアモルファス固体としてＴＦＡ塩として得た（５６％収率）。Ｍ／ｚ＝９３３．６
［実施例２９］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（バリン−アシルオキシ
イソプロピルオキシ−ＭＭＡＥ）（３％）の合成＞
１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）（２０ｍｇ、実施例２に記
載されているのと同様の態様で調製）のＮＭＰ（１ｍＬ）溶液に、バリン−アシルオキシ
イソプロピルオキシ−ＭＭＡＥ（９．９８ｍｇ、実施例２８に記載されているのと同様の
態様で調製）を加えた。この混合物に、ＨＯＡｔ（５．４１ｍｇ）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（７
．６２ｍｇ）、およびＤＩＥＡ（３．１ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温にて一晩撹拌
し、次いで、ＮａＣｌの撹拌した水溶液（１％、約５０ｍＬ）にゆっくりと加えた。粗混
合物をダイアフィルトレーションによって精製し、表題の化合物を得た（ＭＭＡＥをベー
スとして２１％収率）。
ＬＣ／ＭＳによって決定した共役生成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有するポ
リマー単位の含量）は、ポリマー構造単位の３．１ｍｏｌ％であった（または平均して、
ポリマー鎖毎に約２．２個のＭＭＡＥ−ｖａｌ−イソプロピル−アシルオキシイソプロピ
ルオキシ分子）。表題共役体の分子量は、約８．３ｋＤａであった。
［実施例３０］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８
％）−（バリン−アシルオキシイソプロピルオキシ−ＭＭＡＥ）（３％））の合成＞
共役体Ａ：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（２８％）−（バリン−アシルオキシイソプロピルオキシ−ＭＭＡＥ）（３％））は
、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（バリン−アシルオキシ
イソプロピルオキシ−ＭＭＡＥ（３％）（５．６ｍｇ、実施例２９に記載されているのと
同様の態様で調製）、およびＴＣＥＰ ＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５：１を使用した
ことを除いては、実施例４または実施例７に記載されている手順を使用して調製した。平
均ＭＭＡＥとトラスツズマブの比は、約１１：１〜約１５：１であった。表題共役体の分
子量は、約１７１ｋＤａであった。
共役体Ｂ、トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（２８％）−（バリン−アシルオキシイソプロピルオキシ−ＭＭＡＥ）（９％））は
、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（バリン−アシルオキシ
イソプロピルオキシ−ＭＭＡＥ）（９％）（３１．７ｍｇ、実施例３０に記載されている
手順を使用して調製）、トラスツズマブ（５７ｍｇ、ＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５：
１を使用したことを除いては、実施例４または実施例７に記載されている手順を使用して
調製した。平均ＭＭＡＥとトラスツズマブの比は、約１２：１〜約１６．５：１であった
。表題共役体の分子量は、約２２４ｋＤａであった。
共役体Ｃ：リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−Ｂ
Ａ（２８％）−（バリン−アシルオキシイソプロピルオキシ−ＭＭＡＥ）（９％））は、
共役体Ａについて上記の手順において還元されたリツキシマブを置換することによって調
製した。ＭＭＡＥとリツキシマブの比は、約９．５：１〜約１３：１であった。表題共役
体の分子量は、約２０２ｋＤａであった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例３１］
＜ｔ−ブチルグリシンＡＦ−ＨＰＡトリフルオロアセテートの合成＞
氷冷の（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３，３−ジメチルブタ
ン酸（６７．６ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍｌ）溶液に、ＤＣＣ（０．０
４６ｍｌ、０．２９２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１５〜２０分間冷やして撹拌した
。別々に、ＤＣＭ（５ｍｌ）中のＡＦ−ＨＰＡ（１３４ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ、米国
特許第８，６８５，３８３号明細書、実施例１８に記載されているのと同様の態様で調製
）およびＤＭＡＰ（５３．６ｍｇ、０．４３８ｍｍｏｌ）を冷却し、２つの反応混合物を
合わせ、冷やして２０〜３０分間、次いで室温にて撹拌した。反応混合物をＬＣ／ＭＳに
よってモニターした。４時間後、ＬＣ／ＭＳは、反応が完了しなかったことを示した。第
２の一定分量の活性化アミノ酸および活性化ＤＣＣエステル（ＤＣＭ中、それぞれ１当量
）を加え、反応ミックスを室温にて一晩撹拌し、それに続いて２５〜９０％アセトニトリ
ル／水の勾配を使用してＨＰＬＣ精製を行い、移動相は０．１％ＴＦＡで緩衝した。ＡＦ
−ＨＰＡ−Ｂｏｃ−ｔ−ブチルグリシンを、白色のアモルファス固体としてＴＦＡ塩とし
て得た（８５％収率）。Ｍ／ｚ＝１０１６．６。
氷冷のＡＦ−ＨＰＡ−Ｂｏｃ−ｔ−ブチルグリシン（１４０ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ
）のＤＣＭ（５ｍｌ）溶液に、ＴＦＡ（０．４７７ｍｌ、６．１９ｍｍｏｌ）を加え、Ｌ
Ｃ／ＭＳによって示されるように完了するまで、反応混合物を１時間冷やして、次いで室
温にて撹拌した。混合物を濃縮し、このように得られた残渣を、移動相として使用した０
．１％ＴＦＡで緩衝した１０〜９０％アセトニトリルのアセトニトリル／水の勾配を使用
してＨＰＬＣ精製によって精製した。表題の化合物を白色のアモルファス固体としてＴＦ
Ａ塩として得た。Ｍ／ｚ＝９１７．６
［実施例３２］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ｔ−ブチルグリシンＡ
Ｆ−ＨＰＡ）（７．５％）の合成＞
氷冷の１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−ＰＥＧ２−ＭＩ（２．７％）（１３７ｍｇ、
１０．８４μｍｏｌ、実施例２に記載されているのと同様の態様で調製）の水（５．５ｍ
ｌ）およびＮＭＰ（１．３７５ｍｌ）溶液に、ＡＦ−ＨＰＡ−ｔ−ブチルグリシン（６７
ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ、実施例３１に記載されているのと同様の態様で調製）を加え
、このように得られた混合物を１５分間冷やして撹拌し、それに続いて１−ヒドロキシピ
ロリジン−２，５−ジオン（１５．５９ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合
物に、ＥＤＡＣ（５１．９ｍｇ、０．２７１ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、同じ量の試
薬の第２の添加を加えた。４時間後、０．１ＮのＮａＨＣＯ３でｐＨを５．６に調節し、
さらなる一定分量のＥＤＡＣ（５０ｍｇ）を加え、反応混合物を一晩撹拌した。生成物を
、ゲル濾過および逆相ＨＰＬＣによって精製した。
１Ｈ−ＮＭＲによって決定した共役生成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有する
ポリマー単位の含量）は、ポリマー構造単位の７．５ｍｏｌ％であった（または平均して
、ポリマー鎖毎に約５．７個のｔ−ブチルグリシンＡＦ−ＨＰＡ分子）。
［実施例３３］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８
％）−（ｔ−ブチルグリシンＡＦ−ＨＰＡ）（７．５％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ｔ−
ブチルグリシンＡＦ−ＨＰＡ）（７．５％）（４５．７ｍｇ、実施例３２に記載されてい
るのと同様の態様で調製）、トラスツズマブＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５：１を使用
したことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。ＡＦ
−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約４：１〜約６：１であった。平均ＰＨＦ−薬物共役
体とトラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。表題共役体の分子量は、約２
１５ｋＤａであった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例３４］
＜リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％
）−（ｔ−ブチルグリシン−ＡＦ−ＨＰＡ）（７．５％））の合成＞
表題の化合物は、リツキシマブおよびＴＣＥＰ：リツキシマブ３．５：１を使用したこ
とを除いては、実施例３３に記載した手順を使用して調製した。平均ＡＦ−ＨＰＡとリツ
キシマブの比は、約２．５：１〜約３．５：１であった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラ
スツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。表題共役体の分子量は、約２０２ｋＤ
ａであった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例３５］
＜ｖａｌ−ＡＦ−ＨＰＡトリフルオロアセテートの合成＞
ＡＦ−ＨＰＡ−Ｂｏｃ−バリンは、（（Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルア
ミノ）−３−メチルブタン酸（６３．５ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）を使用したことを除
いては、実施例３１に記載したのと同様の様式で調製した。ＡＦ−ＨＰＡ−Ｂｏｃ−バリ
ンを、白色のアモルファス固体としてＴＦＡ塩として得た（８５％収率）。Ｍ／ｚ＝１０
０２．６。
表題の化合物は、ＡＦ−ＨＰＡ−Ｂｏｃ−バリン（１２８ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）
を使用したことを除いては実施例３１に記載したのと同様の様式で調製し、１０６ｍｇ、
９１％収率を得た。Ｍ／ｚ＝９０３．３
［実施例３６］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８
％）−（ｖａｌ−ＡＦ−ＨＰＡ）（７．２％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（ｖａ
ｌ ＡＦ−ＨＰＡ）（７．２％）（５２．３ｍｇ、実施例３２に記載されている手順を使
用して調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラスツズマブ３．５：１を使用したこ
とを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。ＡＦ−ＨＰ
Ａとトラスツズマブの比は、約１４．５：１〜約２０：１であった。平均ＰＨＦ−薬物共
役体とトラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。表題共役体の分子量は、約
２３５ｋＤａであった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例３７］
＜１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡ
ＢＡ−Ａｒｒｙ５２０）（２．９％）の合成＞
１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（２５２ｍｇ、実施例２
に記載されているのと同様の態様で調製）のＮＭＰ（２３ｍＬ）溶液に、ＮＭＰ（１ｍＬ
）中のＡｒｒｙ５２０−ＰＡＢＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＮＨ２（３７．６ｍｇ、米国特許第
８，８１５，２２６号明細書、実施例８４に記載されている手順を使用して調製）を加え
た。この混合物に、ＮＭＰ（１ｍＬ）中のＨＡＴＵ（２２．８ｍｇ）、それに続いてＤＩ
ＥＡ（２０．７ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温にて３０分撹拌した。粗混合物をダイ
アフィルトレーションによって精製し、表題の化合物を得た（Ａｒｒｙ５２０をベースと
して４７％収率）。
ＵＶによって決定した共役生成物の薬物の添加量（すなわち、薬物を含有するポリマー
単位の含量）は、ポリマー構造単位の２．９ｍｏｌ％であった（または平均して、ポリマ
ー鎖毎に約２．１個のＡｒｒｙ５２０−ＰＡＢＡ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ分子）。表題共役体の
分子量は、約９．０ｋＤａであった。
［実施例３８］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８
％）−（Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｒｒｙ５２０（２．９％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（Ｖａ
ｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｒｒｙ５２０）（２．９％）（５５．６ｍｇ、実施例３８に記
載されているのと同様の態様で調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラスツズマブ
２．５：１を使用したことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用し
て調製した。Ａｒｒｙ５２０とトラスツズマブの比は、約４：１〜約６：１であった。表
題共役体の分子量は、約２４５ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマ
ブの比は、約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例３９］
＜リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％
）−（Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｒｒｙ５２０（２．９％））の合成＞
表題の化合物は、リツキシマブおよびＴＣＥＰ：リツキシマブ２．５：１を使用したこ
とを除いては、実施例３８に記載した手順を使用して調製した。平均Ａｒｒｙ５２０とリ
ツキシマブの比は、約４：１〜約６：１であった。表題共役体の分子量は、約２３１ｋＤ
ａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であ
った。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のような
セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズ
マブ、リンツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与
する、上記の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー
共役体の薬物の添加量を変化させることによって得る。
［実施例４０］
＜ｓｃ−ＦｖＦｃ−トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−（１０ｋＤａのＰ
ＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））の合成＞
表題の化合物（「ｓｃＦｖＦｃ−トラスツズマブポリマー薬物共役体」、または「トラ
スツズマブｓｃＡＤＣ」）は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−ＥＧ２−ＭＩ（２．８
％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％）（２．２ｍｇ、実施例３または実施例６に記載され
ているのと同様の態様で調製）およびｓｃＦｖＦｃトラスツズマブ抗体およびＴＣＥＰ：
ｓｃＦｖＦｃトラスツズマブ抗体３：１を使用したことを除いては、実施例４または実施
例７に記載されているのと同様の態様で調製した。ｓｃＦｖＦｃトラスツズマブ抗体（ト
ラスツズマブ単鎖抗体−Ｆｃ融合タンパク質）の配列は、定常領域における３つの修飾を
伴って、Ｏｌａｆｓｅｎら（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６５（１３）：５９０７〜１６、
２００５）において公表されている通りである。ヒンジは、軽鎖定常と通常結合する対に
なっていないシステインを除去する１つの変異（Ｃ−＞Ｓ）を有する（ＹａｎｇおよびＲ
ａｄｅｒ、Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ， ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ ｓｃＦｖ−Ｆｃ Ｆｏｒ
ｍａｔ． Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．、編Ｐｒ
ｏｅｔｚｅｌおよびＥｂｅｒｓｂａｃｋ、２０１２）。２つの他の修飾はまた、ＩｇＧ１
配列にある。Ｏｌａｆｓｅｎら、２００５は、改善されたイメージングの目的のために抗
体フラグメントの半減期を短くするために、トラスツズマブ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（Ｈ３１０
Ａ、Ｈ４３５Ｑ）二重変異体を生じさせた。修飾を、標準的ＩｇＧ１配列に復帰させた。
ＡＦ−ＨＰＡとｓｃＦｖＦｃトラスツズマブ抗体の比は、約１４：１〜約１９：１であ
った。表題共役体の分子量は、約１８２ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とｓｃ
ＦｖＦｃトラスツズマブ抗体の比は、約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例４１］
＜トポテカン−アラニン＞
トポテカン（０．５００ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）、ＢＯＣ−ａｌａ−ＯＨ（０．４４９
ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（０．１４５ｇ
、１．１９ｍｍｏｌ）を、無水ＣＨ２Ｃｌ２（５．９３ｍＬ）に溶解した。無水ＣＨ２Ｃ
ｌ２（１ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−メタンジイリデンジシクロヘキサンアミン（ＤＣＣ）（０
．５８０ｇ、２．８１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて１８時間撹拌した。さらなる
ＤＣＣ（３００ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を４８時間撹拌した。固体を濾
過によって除去し、溶液を０．１ＮのＨＣｌ（２×５ｍＬ）、水（５ｍＬ）、およびブラ
イン（５ｍＬ）で洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ４で脱水し、それに続いて０．１％ＴＦＡ／
ＣＨ３ＣＮ：０．１％ＴＦＡ／水（ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ、Ｃ１８、１００Ｇカラム；５
分０％Ｂ、２０分に亘り１００％Ｂへの傾斜）で溶出するＲＰ−ＨＰＬＣを行い、トポテ
カン−ＢＯＣ−アラニンを固体として得た（１８６．６ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ、２６
．５％収率）。
トポテカン−ＢＯＣ−アラニン（１８６．６ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）を、無水ＣＨ
２Ｃｌ２（１．５ｍＬ）に溶解した。２，２，２−トリフルオロ酢酸（１．２０５ｍｌ、
１５．７４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて１時間撹拌し、それに続いてＲＰ−ＨＰ
ＬＣ（Ｃ１８、０．１％ＴＦＡ：ＡｃＮ／０．１％ＴＦＡ；水で溶出するＨＰＬＣ）を行
い、表題の化合物をオレンジ色／黄色の固体として得た（９３．０ｍｇ、０．１８９ｍｍ
ｏｌ、６０．０％収率）。
［実施例４２］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．４％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２２
．３％）−（トポテカンアラニン）（６．５％））の合成＞
共役体Ａ：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．４％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（２２．３％）−（トポテカンアラニン）（６．５％））は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ
（２２．３％）ＥＧ２−ＭＩ（２．４％）−（トポテカンアラニン）（６．５％）（１９
．３ｍｇ、平均して、ポリマー鎖毎に約４．２個のトポテカン分子を有する、実施例３ま
たは実施例６に記載されている手順を使用して調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：
トラスツズマブ３：１を使用したことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手
順を使用して調製した。表題共役体の分子量は、約２５６ｋＤａであった。平均トポテカ
ンとトラスツズマブの比は、約１９：１〜約２６：１であった。平均ＰＨＦ−薬物共役体
とトラスツズマブの比は、約２：１〜約５：１であった。
共役体Ｂ：リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．４％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−Ｂ
Ａ（２２．３％）−（トポテカンアラニン）（１３％））を、上記の手順において還元さ
れたリツキシマブを置換することによって調製した。表題共役体の分子量は、約２１２ｋ
Ｄａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体とリツキシマブの比は、約１６：１〜約２２：１
であった。
トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ）−（トポテカン
バリン）は、実施例４１に記載されている手順を使用して調製した１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ
ＥＧ２−ＭＩ−（トポテカンバリン）を使用することを除いては、上記の手順を使用し
て調製する。
他のＰＢＲＭ−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、上記のようなセツキシマ
ブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リン
ツズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記
の手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を伴うＰＢＲＭ−薬
物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物の添加量を変化させることによっ
て得る。
［実施例４３］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８
％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（７．３％））の合成＞
表題の化合物は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−（ＨＰ
Ｖ−Ａｌａ（７．２％）（８．３６ｍｇ、実施例３または実施例６に記載されているのと
同様の態様で調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラスツズマブ２．５：１を使用
したことを除いては、実施例４または実施例７に記載した手順を使用して調製した。
共役体Ａ：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（７．３％））。ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマ
ブの比は、約６：１〜約９：１であった。表題共役体の分子量は、約１８３ｋＤａであっ
た。平均ＰＨＦ−薬物共役体とトラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。
共役体Ｂ：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．５％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８．４％））は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２
８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．５％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（８．４％）（実施例３または実施
例６に記載されているのと同様の態様で調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラス
ツズマブ３．５：１を使用したことを除いては、上記のこの実施例に記載されているのと
同様の態様で調製した。ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約１２：１〜約１７：１
であった。表題共役体の分子量は、約２１８ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体と
トラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。
共役体Ｃ：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．５％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−
ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８．４％））は、１０Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ（２
８％）ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（８．４％）（実施例３または実施
例６に記載されているのと同様の態様で調製）、トラスツズマブおよびＴＣＥＰ：トラス
ツズマブ２．７５：１を使用したことを除いては、上記のこの実施例に記載されているの
と同様の態様で調製した。ＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比は、約１２：１〜約１６：
１であった。表題共役体の分子量は、約２４７ｋＤａであった。平均ＰＨＦ−薬物共役体
とトラスツズマブの比は、約２：１〜約４：１であった。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例４４］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ）−（ＳＮ３８ア
ラニン）の合成＞
表題の化合物は、実施例４２および４１に記載されている手順を使用して調製した１０
Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ ＥＧ２−ＭＩ−（ＳＮ３８アラニン）を使用することを除いては、実
施例４２に記載されている手順を使用して調製する。
トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ）−（ＳＮ−３８
バリン）は、実施例４１および４２に記載されている手順を使用して調製した１０Ｋ Ｐ
ＨＦ−ＢＡ ＥＧ２−ＭＩ−（ＳＮ−３８バリン）を使用することを除いては、上記の手
順を使用して調製する。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例４５］
＜トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ）−（カンプトテ
シン−アラニン）の合成＞
表題の化合物は、実施例４２および４１に記載されている手順を使用して調製した１０
Ｋ ＰＨＦ−ＢＡ ＥＧ２−ＭＩ−（カンプトテシンアラニン）を使用することを除いて
は、実施例４２に記載されている手順を使用して調製することができる。
トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ）−（カンプトテ
シンバリン）は、実施例４１および４２に記載されている手順を使用して調製した１０Ｋ
ＰＨＦ−ＢＡ ＥＧ２−ＭＩ−（カンプトテシンバリン）を使用することを除いては、
上記の手順を使用して調製する。
他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を、他のＰＢＲＭ誘導体、例えば、セツキシマブ
、リツキシマブ、ベバシズマブ、ニモツズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リンツ
ズマブ、抗５Ｔ４または抗メソテリン抗体の部分的に還元された形態が関与する、上記の
手順と同様の方法で合成する。また、薬物とＰＢＲＭの変動する比を有するＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体は、ＰＢＲＭスルフヒドリル基の数および薬物−ポリマー共役体薬物
の添加量を変化させることによって得る。
［実施例４６］
＜ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のための細胞生存率アッセイ＞
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ
Ｃｏｒｐ）を使用して、腫瘍細胞株におけるｉｎ ｖｉｔｒｏでのこれらの抗増殖特性
について評価した。細胞をブラックウォール９６ウェルプレート中に蒔き、３７℃にて５
％ＣＯ２の加湿雰囲気下で一晩接着させた。ＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４、ＮＣＩ−Ｎ８７細
胞（ＨＥＲ２発現細胞）、ＭＣＦ７細胞（ＨＥＲ２低発現レベルの細胞）およびＪＩＭＴ
１細胞（ＨＥＲ２中程度発現レベルの細胞）を、ウェル毎に５，０００個の細胞の密度で
蒔いた。翌日、培地を５０μＬの新鮮な培地および５０μＬの２×ＰＢＲＭ−ポリマー−
薬物共役体のストックで置換え、薬物ポリマー共役体または薬物を、適当なウェルに加え
、混合し、７２時間インキュベートした。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を室温にて
ウェルに加え、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄ
ｅｖｉｃｅｓ）を使用して１０分後に発光シグナルを測定した。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ
ソフトウェアを使用して用量反応曲線を作製した。ＩＣ５０値は、４パラメーター曲線の
当てはめから決定した。
ＣＤ３３発現細胞ＨＬ−６０を、ウェル毎に５，０００個の細胞の密度でパスし、同じ
日にＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体で処理した。７２時間のインキュベーション後、上
記の同じ手順を使用して細胞を分析した。
ＯＶＣＡＲ−３、ＴＦ−１αおよびＨＣＴ−１５発現細胞を蒔き、上記の同じ手順を使
用して分析した。
５Ｔ４発現細胞株Ａ４３１（Ａ４３１、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）、
Ｍａｎａｓｓａｓ Ｖｉｒｇｉｎｉａ ＵＳから受託番号ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−
１５５５で入手可能な扁平上皮癌細胞株）；ＰＣ３（ヒト前立腺細胞株、ＡＴＣＣ（登録
商標）ＣＲＬ−１４３５）、ＭＤＡＭＢ２３１−５Ｔ４ＯＥおよび標的陰性対照細胞株Ｌ
ＬＣ１発現細胞（５Ｔ４の発現に対して陰性である肺細胞癌腫細胞）を蒔き、上記の同じ
手順を使用して分析した。「ＭＤＡＭＢ２３１−５Ｔ４ＯＥ」は、５Ｔ４を過剰発現して
いる組換えＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を意味する（安定的トランスフェクションによって
生じる；参照により本明細書に組み込む２０１３年６月１７日に出願された米国特許仮出
願第６１／８３５，８５８号明細書に開示されている）。
表Ｉ〜ＩＩＩは、ＨＥＲ２発現細胞（表Ｉ）、ＣＤ３３発現細胞（表ＩＩ）または５Ｔ
４発現細胞（表ＩＩＩ）におけるＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の抗増殖特性について
の例示的な結果である。
表ＩＶは、ＯＶＣＡＲ−３およびＴＦ−１α細胞株における薬物、ＡＦ−ＨＰＡの抗増
殖特性についての例示的な結果である。
表Ｉは、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％）
）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））、（Ａ
Ｆ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１２：１〜１７：１）、実施例４；トラスツズマブ−（
（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａ
ｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１６：１〜約２１：１）、実施例
７；トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（１％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＧＡ（２９
％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（６％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１８：
１〜約２３：１）、実施例１３；トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％））−（１０
ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ
：トラスツズマブ、約１０：１〜約１５：１）、実施例１４；トラスツズマブ−（（ＥＧ
２−ＭＩ（２％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ
（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１１：１〜約１６：１）、実施例１５
；およびリツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２
８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１３
：１〜約１８：１）、実施例１６；トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０
ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％）、（ＡＦ−ＨＰＡ：
トラスツズマブ、約５：１〜約１０：１）、実施例１７；トラスツズマブ−（（ＥＧ２−
ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％
）、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１９：１〜約２４：１）、実施例１８Ａ；（Ａ
Ｆ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約２０：１〜約２５：１）、実施例１８Ｂ；（ＡＦ−ＨＰ
Ａ：トラスツズマブ、約２３：１〜約２８：１）、実施例１８Ｃ；トラスツズマブ−（（
ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ
（１４％））、実施例２０Ａ；トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０
ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＨＰＶ−Ａｌａ（７．７％））、実施例２０Ｂ；ト
ラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３．５％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）
−（ＨＰＶ−Ａｌａ（４．３％））、実施例２０Ｃ；ｓｃ−ＦｖＦｃ−トラスツズマブ−
（（ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰ
Ａ−Ａｌａ（８％））、実施例４０；トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−
（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（７．３％）ＡＦ−Ｈ
ＰＡ：トラスツズマブ、約６：１〜約９：１）、実施例４３Ａ；トラスツズマブ−（（Ｅ
Ｇ２−ＭＩ（２．５％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａ
ｌａ（８．４％）、ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１２：１〜約１６：１）、実施例
４３Ｃ；遊離薬物（ＡＦ−ＨＰＡ）；およびＫａｄｃｙｌａ（登録商標）についての結果
を一覧表示する。
ＨＥＲ２発現細胞株ＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４、Ｎ８７およびＪＩＭＴ１について、ＰＢ
ＲＭ−ポリマー−薬物共役体（実施例４、実施例７、実施例１３〜１５、実施例１７、実
施例１８Ａ〜１８Ｃ、実施例２０Ａ、実施例４３Ａおよび実施例４３Ｃ）は、低ＨＥＲ２
発現細胞株ＭＣＦ７と比較して、および対照ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体（実施例１
６）またはＫａｄｃｙｌａ（登録商標）と比較して、より高い抗増殖活性を示したことを
表Ｉにおける結果は示す。
表ＩＩは、リンツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（
３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：リンツズマブ、約１０
：１〜約１５：１）、実施例８；およびリツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％）−（１
０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））（ＡＦ−ＨＰＡ
：リツキシマブ、約１３：１〜約１８：１）、実施例９；および遊離薬物（ＡＦ−ＨＰＡ
）についての結果を一覧表示する。
ＣＤ３３発現細胞株ＨＬ−６０について、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体（実施例８
）は、対照ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体（実施例９）と比較して、より高い抗増殖活
性を示したことを表ＩＩにおける結果は示す。
表ＩＩＩは、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体抗５Ｔ４−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％）−
（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））、（ＡＦ−
ＨＰＡ：抗５Ｔ４、約１２：１〜約１８：１）、実施例１０；およびリツキシマブ−（（
ＥＧ２−ＭＩ（３％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌ
ａ（８％）））、（ＡＦ−ＨＰＡ：リツキシマブ、約１３：１〜約１８：１）、実施例９
；および遊離薬物（ＡＦ−ＨＰＡ）についての結果を一覧表示する。
５Ｔ４発現細胞株Ａ４３１、ＰＣ３およびＭＤＡＭＢ２３１ＯＥについて、ＰＢＲＭ−
ポリマー−薬物共役体（実施例１０）が、対照ＰＢＲＭ−薬物共役体（実施例９）および
非発現標的細胞ＬＬＣ１に対してより高い抗増殖活性を示したことを表ＩＩＩにおける結
果は示す。
表ＩＶは、遊離薬物（ＡＦ−ＨＰＡ）についての結果を一覧表示する。
［実施例４７］
＜ＢＩＡｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるリガンド結合の研究＞
固定化された受容体へのＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の動力学的結合は、ＢＩＡｃ
ｏｒｅ ＳＰＲによって決定する。ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体中のＰＢＲＭ、およ
びＰＢＲＭ単独についての結合定数は、標準的ＢＩＡｃｏｒｅ手順を使用して決定するこ
とができる。
標準的アミンカップリング化学を使用して、ｈＥｒｂＢ２を、表面プラズモン共鳴セン
サーチップ表面への３つのフローチャネルにおいて３つの同様の密度で固定化する。トラ
スツズマブは固定化されたｈＥｒｂＢ２に容易に結合し、それによって両方の結合パート
ナーが活性であったことを示した。結合パラメーターｋａ（会合または親和性速度定数）
およびＫＤ（解離定数）は、ＧＬＣセンサーチップを備え、泳動用緩衝液で平衡化したＢ
ｉｏＲａｄ ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６光学バイオセンサーを使用して２５℃にてＰＢ
ＲＭ−ポリマー−薬物共役体およびＰＢＲＭについて測定する。
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体中のＰＢＲＭがＰＢＲＭ受容体によって認識され、Ｐ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体中のＰＢＲＭの結合が非共役ＰＢＲＭに対して有意に影響
を与えられないことを結果は示す。
［実施例４８］
＜ＦＡＣＳ結合アッセイ＞
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％））−（１
０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））、（ＡＦ−ＨＰ
Ａ：トラスツズマブ、約１２：１〜１７：１）、実施例４の細胞表面結合を、異なるヒト
がん細胞株においてＭＡＣＳＱｕａｎｔ（登録商標）Ａｎａｌｙｚｅｒ１０デジタルベン
チトップフローサイトメーターを使用して評価した。１００，０００個の細胞を、氷上の
６％ヤギ血清中でインキュベートした。ＰＢＲＭポリマー薬物共役体または非共役ＰＢＲ
Ｍを細胞に加え、氷上で３時間インキュベートし、次いで、細胞を氷冷のＰＢＳで洗浄し
、氷中の二次蛍光標識抗体と共に１時間インキュベートした。完了すると、細胞をＰＢＳ
で洗浄し、１％パラホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメーターによって分析した
。ＰＢＲＭポリマー薬物共役体の細胞表面結合は滴定によって決定し、非共役ＰＢＲＭの
それと比較した。
表Ｖは、ＪＩＭＴ−１細胞へのＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体トラスツズマブ−（（
ＥＧ２−ＭＩ（３％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａ
ｌａ（８％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１２：１〜１７：１）、実施例４
、およびトラスツズマブ単独の結合定数（Ｋｄ）を示す。
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体中のＰＢＲＭの細胞表面結合は、非共役ＰＢＲＭのそ
れと匹敵したことを結果は示す。
他のヒトがん細胞への他のＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体中のＰＢＲＭの細胞表面結
合を決定することができ、これは非共役ＰＢＲＭのそれと匹敵するはずである。
［実施例４９］
＜ＢＩＡｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるリガンド結合の研究＞
固定化された受容体へのＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の動力学的結合は、ＢＩＡｃ
ｏｒｅ ＳＰＲによって決定した。ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体、例えば、トラスツ
ズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ
−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１２：１〜１７：１
）、実施例４；トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−Ｂ
Ａ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、
約１６：１〜約２１：１）、実施例７、トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（
１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−Ｈ
ＰＡ：トラスツズマブ、約５：１〜１０：１）、実施例１７；およびトラスツズマブ−（
（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａ
ｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１９：１〜２４：１）、実施例１
８Ａ；（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約２０：１〜２５：１）、実施例１８Ｂ；（Ａ
Ｆ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約２３：１〜２８：１）、実施例１８Ｃ中のＰＢＲＭ；Ｐ
ＢＲＭ−薬物共役体（すなわち、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標））中のＰＢＲＭ、ならびに
ＰＢＲＭ（すなわち、トラスツズマブ）単独についての結合定数を、標準的ＢＩＡｃｏｒ
ｅ手順を使用して決定した。
標準的アミンカップリング化学を使用して、ｈＥｒｂＢ２を、表面プラズモン共鳴セン
サーチップ表面への３つのフローチャネルにおいて３つの同様の密度で固定化した。トラ
スツズマブは固定化されたｈＥｒｂＢ２に容易に結合し、それによって両方の結合パート
ナーは活性であったことを示した。表ＶＩは、ＧＬＣセンサーチップを備え、泳動用緩衝
液で平衡化したＢｉｏＲａｄ ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６光学バイオセンサーを使用し
て、実施例４および実施例７の共役体ならびにトラスツズマブについて２５℃にて測定し
た結合パラメーターｋａ（会合または親和性速度定数）、ｋｄ（解離速度定数）、および
ＫＤ（解離定数）を提供する。
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体中のＰＢＲＭはＰＢＲＭ受容体によって認識されたこ
とを結果は示す。
［実施例５０］
＜Ｉｎ ｖｉｖｏでの有効性、薬物動態および体内分布の研究＞
タンパク質の薬物共役体の有効性および薬物動態を評価するために、マウスおよびラッ
トの皮下および同所異種移植片モデルを使用する。
試験物質を、適当な対照と共に、尾静脈注射によって静脈内に（ＩＶ）または腹腔内投
与する。試験物質の循環レベルをアセスメントするために、終末心臓穿刺によって指定し
た時間に血液試料を集める。試料を室温にて３０分間保持して凝固させ、次いで、１，０
００×ｇで４℃にて１０分間遠心し、−８０℃にて直ちに凍結する。血清試料中の総ＰＢ
ＲＭ濃度を、ＥＬＩＳＡを使用して測定する。循環薬物濃度（共役および遊離）を、ＬＣ
／ＭＳ／ＭＳ方法によって決定する。
ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の有効性をアセスメントするために、デジタルカリパ
スを使用して腫瘍サイズを測定する。腫瘍容積を計算し、腫瘍増殖の遅延を決定するため
に使用する。
薬物体内分布の決定のために、腫瘍、および主要な器官、例えば、肝臓、腎臓、脾臓、
肺、心臓、筋肉、および脳を収集し、直ちに液体窒素中で凍結し、−８０℃にて貯蔵する
。ＰＢＲＭおよび／または薬物レベルを、組織ホモジネートにおいて標準的方法、例えば
、それぞれ、ＥＬＩＳＡまたはＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法によって決定する。
［実施例５１］
＜ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の投与後のマウス組織分布＞
雌性ＣＢ−１７ＳＣＩＤマウスの皮下にＢＴ４７４腫瘍を播種した（各群についてｎ＝
４）。ビヒクルまたはＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体：トラスツズマブ−（（ＥＧ２−
ＭＩ（３％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８
％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１２：１〜約１７：１）、実施例４、５ｍ
ｇ／ｋｇ；およびトラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（１％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ
−ＧＡ（２９％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（６％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマ
ブ、約１８：１〜約２３：１）、実施例１３、５ｍｇ／ｋｇを、１日目に単回投与として
ＩＶ投与した。
投与の４８時間後に、マウスを屠殺し、終末心臓によって血液を集めた。器官：左腎臓
、肝臓、肺、骨格筋、脾臓および腫瘍を収集し、直ちに液体窒素中で凍結し、共役、遊離
ＡＦ−ＨＰＡおよびＡＦについて分析まで−８０℃にて貯蔵した。
表ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＶＩＩＩＡは、異なる組織における共役薬物（共役ＡＦ−Ｈ
ＰＡ、すなわち、ＰＢＲＭ−ＰＨＦ−ＡＦ−ＨＰＡ）；非共役（遊離）薬物（すなわち、
ＡＦ−ＨＰＡおよびＡＦ）；遊離ＡＦ−ＨＰＡおよび遊離ＡＦの濃度を示す。濃度は、ｎ
ｇ ＡＦ−ＨＰＡ（および／またはＡＦ）当量／ｇ組織として平均値±標準偏差として報
告する。
組織において、放出された非共役ＡＦ−ＨＰＡはＡＦにさらに代謝され、一方、血漿に
おいて、非共役ＡＦ−ＨＰＡはＡＦに変換されないことを結果は示す。
［実施例５２］
＜ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の投与に対する腫瘍増殖反応＞
雌性ＣＢ−１７ＳＣＩＤマウスの皮下に、ＢＴ４７４腫瘍（各群についてｎ＝１０）ま
たはＪＩＭＴ−１細胞（各群についてｎ＝１０）またはＮＣＩ−Ｎ８７細胞（各群につい
てｎ＝１０）を播種した。雌性ＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウスの皮下に、ＨＬ−６０細胞を播
種した（各群についてｎ＝１０）。試験化合物またはビヒクルを、１日目に単回投与とし
てＩＶ投与した。腫瘍サイズを、デジタルカリパスを使用して図１〜９において示した時
間において測定した。腫瘍容積を計算し、腫瘍増殖の遅延を決定するために使用した。腫
瘍が１０００ｍｍ３のサイズに達したときに、マウスを屠殺した。腫瘍容積を各群につい
ての平均±ＳＥＭとして報告する。
図１は、１日目に単回投与として、ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ（トラスツ
ズマブ）；ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％）
）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））、（Ａ
Ｆ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１２：１〜約１７：１）、実施例４、２．５ｍｇ／ｋｇ
および５ｍｇ／ｋｇ；またはトラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（１％））−（１０ｋＤ
ａのＰＨＦ−ＧＡ（２９％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（６％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：ト
ラスツズマブ、約１８：１〜約２３：１）、実施例１３、２．５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ
／ｋｇのＩＶ投与後の、皮下にＢＴ４７４腫瘍を播種されたマウス（各群についてｎ＝１
０）における腫瘍反応についての結果を示す。結果は、実施例４および１３について腫瘍
容積の低減を示し、５ｍｇ／ｋｇの用量で１００％の退縮ならびに、それぞれ、１００％
および８０％腫瘍を伴わない生存を伴う。ビヒクルおよびトラスツズマブ単独は、腫瘍容
積の増加を示した。薬物ポリマー共役体へのＨＥＲ２に対して特異的なＰＢＲＭ（トラス
ツズマブ）の共役は、腫瘍容積の低減のために必要であった。ＰＢＲＭ単独は、腫瘍容積
の低減を示さなかったためである。
図２は、ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ（トラスツズマブ）；ＰＢＲＭ−ポリ
マー−薬物共役体トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ
−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマ
ブ、約１２：１〜約１７：１）、実施例４、２．５ｍｇ／ｋｇ；またはトラスツズマブ−
（（ＥＧ２−ＭＩ（２％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−
Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１６：１〜約２１：１）、実施
例７、２．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与後の、皮下にＪＩＭＴ−１細胞を播種されたマウス（
各群についてｎ＝１０）における腫瘍反応についての結果を示す。結果は、実施例４およ
び７の両方について腫瘍容積の低減を示す。具体的には、実施例４に記載した共役体を投
与された試験群において、２．５用量で１００％の退縮が存在し、これは９匹の完全な退
縮（１匹の動物は処置に関連しない死亡によって死亡した）および３匹の腫瘍を伴わない
生存動物からなった。実施例７に記載した共役体を投与された試験群において、１００％
の退縮が存在し、これは完全な退縮からなり、全ての動物は腫瘍を伴わないままであった
（２匹の動物は、処置に関連しない死亡によって研究の終わりに腫瘍を伴わないで死亡し
た）。ビヒクル、およびトラスツズマブ単独は、腫瘍容積の増加を示した。薬物ポリマー
共役体へのＨＥＲ２に対して特異的なＰＢＲＭ（トラスツズマブ）の共役は、腫瘍容積の
低減のために必要であった。ＰＢＲＭ単独は腫瘍容積の低減を示さなかったためである。
雌性ＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウスの皮下に、ＨＬ−６０細胞を播種した（各群についてｎ
＝１０）。試験化合物またはビヒクルを、１日目に単回投与としてＩＶ投与した。腫瘍サ
イズは、デジタルカリパスを使用して図３において示した時間において測定した。腫瘍容
積を計算し、腫瘍増殖の遅延を決定するために使用した。腫瘍が２０００ｍｍ３のサイズ
に達したときに、マウスを屠殺した。腫瘍容積は、各群について平均±ＳＥＭとして報告
する。
図３は、１日目に単回投与として、ビヒクル；２０ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ（リンツズ
マブ）；またはＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体リンツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％
）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（Ａ
Ｆ−ＨＰＡ：リンツズマブ、約１０：１〜約１５：１）、実施例８、２０ｍｇ／ｋｇのＩ
Ｖ投与後の、ＨＬ−６０細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応についての結果
を提供する（各群についてｎ＝１０）。結果は、実施例８について腫瘍容積の低減を示し
、４４日目に１００％の退縮および７０％の腫瘍を伴わない生存を伴う。ビヒクル、およ
びリンツズマブ単独は、腫瘍容積の増加を示した。薬物ポリマー共役体へのＣＤ３３に対
して特異的なＰＢＲＭ（リンツズマブ）の共役は、腫瘍容積の低減のために必要であった
。これはＰＢＲＭ単独が、腫瘍容積の低減を示さなかったためであった。
図４は、１日目に単回投与として、ビヒクル；２０ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ（トラスツ
ズマブ）；２０ｍｇ／ｋｇでのＫａｄｃｙｌａ（登録商標）（ＰＢＲＭ−薬物共役体）；
または２ｍｇ／ｋｇ、０．６７ｍｇ／ｋｇ若しくは０．３ｍｇ／ｋｇでのＰＢＲＭ−ポリ
マー−薬物共役体トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ
−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマ
ブ、約１０：１〜約１５：１）、実施例１４のＩＶ投与後の、ＪＩＭＴ−１細胞を皮下に
接種されたマウスにおける腫瘍反応についての結果を提供する（各群についてｎ＝１０）
。結果は、実施例１４について腫瘍容積の低減を示し、２．０用量で１００％の退縮およ
び１００％の腫瘍を伴わない生存を伴う。ビヒクル、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）および
トラスツズマブ単独は、腫瘍容積の増加を示した。薬物ポリマー共役体へのＨＥＲ２に対
して特異的なＰＢＲＭ（トラスツズマブ）の共役は、腫瘍容積の低減のために必要であっ
た。これは、ＰＢＲＭ単独が腫瘍容積における低減を示さなかったためであった。
図５は、１日目に単回投与として、ビヒクル、またはＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体
トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）
−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１１：１〜
約１６：１）、実施例１５、３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ若しくは０．３ｍｇ／ｋｇのＩ
Ｖ投与後の、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応についての
結果を提供する（各群についてｎ＝１０）。結果は、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体（
実施例１５）についての用量反応を示し、３ｍｇ／ｋｇの最も高い用量は、腫瘍容積の完
全な退縮を示し、１００の完全寛解を伴った。中間用量の１ｍｇ／ｋｇにおいて、１０匹
の動物のうち７匹の部分的退縮および１匹の完全な退縮があった。
図６は、１日目に単回投与として、ビヒクル、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体トラス
ツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（Ａ
Ｆ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１１：１〜約１６
：１）、実施例１４、０．６７ｍｇ／ｋｇ、またはリツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２
％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９％））、
（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１３．７〜約１８．７）、実施例１６、３ｍｇ／ｋ
ｇのＩＶ投与後の、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫瘍反応につ
いての結果を提供する（各群についてｎ＝１０）。結果は、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共
役体（実施例１４）についての腫瘍増殖の遅延反応を示す。ビヒクルまたは３ｍｇ／ｋｇ
の用量でのリツキシマブ−薬物ポリマー共役体（実施例１６）は、腫瘍増殖に対して効果
を有さない。
図７は、１日目に単回投与として、ビヒクル、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体トラス
ツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（
ｔ−ブチルグリシンＡＦ−ＨＰＡ）（７．５％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、
約４：１〜約６：１）実施例３３、０．６７ｍｇ／ｋｇ；トラスツズマブ−（（ＥＧ２−
ＭＩ（２．８％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（
７．３％））（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約６：１〜約９：１）、実施例４３Ａ、
１ｍｇ／ｋｇ；またはトラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．５％）−（１０ｋＤａの
ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８．４％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：ト
ラスツズマブ、約１２：１〜約１６：１）、実施例４３Ｃ、０．６７ｍｇ／ｋｇ若しくは
３ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与後の、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を皮下に接種されたマウスにおける腫
瘍反応についての結果を提供する（各群についてｎ＝１０）。結果は、０．６７ｍｇ／ｋ
ｇの用量でのＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体、実施例４３Ｃについての腫瘍増殖の遅延
反応を示し、３ｍｇ／ｋｇの用量は、１１５日目に９０％の腫瘍を伴わない生存を示した
。
図８は、１日目に単回投与として、ビヒクル、ポリマー−薬物共役体１０Ｋ ＰＨＦ−
ＢＡ（３０％）−ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（９．５％）、実施例５Ａ、０．２２ｍｇ／ｋｇ
；またはＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％
）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（バリン−アシルオキシイソプロピルオキ
シ−ＭＭＡＥ）（９％））、（ＭＭＡＥ：トラスツズマブ、約１２：１〜約１６．５：１
）実施例３０Ｂ、２ｍｇ／ｋｇ；リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．７％）−（１０
ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（バリン−アシルオキシイソプロピルオキシ−ＭＭＡ
Ｅ）（９％））（ＭＭＡＥ：リツキシマブ、約９．５：１〜約１３：１）、実施例３０Ｃ
、２ｍｇ／ｋｇ；ｓｃ−ＦｖＦｃ−トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−（
１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８．１％））、（ＡＦ
−ＨＰＡ：ｓｃＦｖＦｃトラスツズマブ抗体、約１４：１〜約１９：１）、実施例４０、
０．６７ｍｇ／ｋｇ；またはトラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．５％）−（１０ｋ
ＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８．４％）、（ＡＦ−ＨＰＡ
：トラスツズマブ、約１２：１〜約１７：１）、実施例４３Ｂ、１ｍｇ／ｋｇ；または３
週間の毎週の投与、トラスツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．６５％）−（１０ｋＤａの
ＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｒｒｙ５２０（２．９％））
、（Ａｒｒｙ５２０：トラスツズマブ、約４：１〜約６：１）、実施例３８、１０ｍｇ／
ｋｇ；または３週間の毎週の投与、リツキシマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．６５％）−（
１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｒｒｙ５２０（
２．９％））、（Ａｒｒｙ５２０：トラスツズマブ、約４：１〜約６：１）、実施例３９
、１０ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与後の、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞を皮下に接種されたマウスにおけ
る腫瘍反応についての結果を提供する（各群についてｎ＝１０）。結果は、ＰＢＲＭ−ポ
リマー−薬物共役体（実施例４０および実施例４３Ｂ）についての腫瘍増殖の遅延反応を
示す。
図９は、１日目に単回投与として、ビヒクル、またはｓｃ−ＦｖＦｃ−トラスツズマブ
−（（ＥＧ２−ＭＩ（２．８％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−Ｈ
ＰＡ−Ａｌａ（８．１％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：ｓｃＦｖＦｃトラスツズマブ抗体、約１
４：１〜約１９：１）、実施例４０、１ｍｇ／ｋｇ；またはトラスツズマブ−（（ＥＧ２
−ＭＩ（２．５％）−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（２８％）−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ
（８．４％））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１２：１〜約１６：１）、実施例
４３Ｃ、２ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与後の、ＪＩＭＴ−１細胞を皮下に接種されたマウスにお
ける腫瘍反応についての結果を提供する（各群についてｎ＝１０）。
［実施例５３］
＜ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の投与後のマウス血漿ＰＫ＞
雌性ＣＤ−１マウスを、最初の投与の前に少なくとも４日間順化させた。全てのマウス
に通常の固形飼料および水を自由に与え、化合物投与の前に絶食させなかった。試験化合
物またはビヒクルを、ＩＶで単回投与として１日目に投与した。
マウスの静脈内に、ビヒクル（ｎ＝３）またはＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体、トラ
スツズマブ−（（ＥＧ２−ＭＩ（３％））−（１０ｋＤａのＰＨＦ−ＢＡ（３０％）−（
ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ（８％）））、（ＡＦ−ＨＰＡ：トラスツズマブ、約１２：１〜約
１７：１）、実施例４、５ｍｇ／ｋｇ、各群についてｎ＝３）を注射した。投与５分後、
１時間後、３時間後、６時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、７日後および１
４日後において血漿を集めた。投与前に１日目に、ならびに１日目、７日目および１４日
目に体重を測定した。全ての動物を、１４日の期間を通して死亡率または罹患率について
観察した。
共役ＡＦ−ＨＰＡおよび非共役（遊離）薬物（例えば、ＡＦ−ＨＰＡおよびＡＦ）濃度
は、ＬＣ／ＭＳ分析によって決定した。総トラスツズマブ濃度は、ＥＬＩＳＡによって決
定した。
図１０における結果は、トラスツズマブが約１００μｇ／ｍＬの血漿濃度および約１２
日の半減期を有し、一方、非共役ＡＦ−ＨＰＡおよびＡＦが＜１ｎｇ／ｍＬの総血漿濃度
を有したことを示した。ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体は、約３００ｕｇ・日／ｍＬの
ＡＵＣ０〜ｉｎｆを伴って＞５日の半減期を有した。
［実施例５４］
＜ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体の投与後のマウス血漿ＰＫ＞
雌性ＣＤ−１マウスを最初の投与の前に少なくとも４日間順化させた。全てのマウスに
通常の固形飼料および水を自由に与え、化合物投与の前に絶食させなかった。試験化合物
またはビヒクルを、１日目に単回投与としてＩＶ投与した。
マウスの静脈内に、ビヒクル（ｎ＝３）、または実施例４、７、１８Ａ、１８Ｂおよび
１８Ｃに記載したようなＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体を注射した。投与５分後、１時
間後、３時間後、６時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、７日後および１４日
後において血漿を集めた。１日目の投与前に、ならびに１日目、７日目および１４日目に
体重を測定した。全ての動物を、１４日の期間を通して死亡率または罹患率について観察
した。
総ＡＦ−ＨＰＡ（共役ＡＦ−ＨＰＡ）および非共役（遊離）薬物（例えば、ＡＦ−ＨＰ
ＡおよびＡＦ）濃度を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析によって決定した。
表ＩＸにおける結果は、ＰＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体が約１２０〜１５４時間（約
５〜６．４日）の半減期、約１９〜２５μｇ・時間／ｍＬのＡＵＣ０〜３３６を有し、Ｐ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体のＡＦ−ＨＰＡとトラスツズマブの比と無関係であること
を示した。
［実施例５５］
＜ＰＢＲＭ−ポリマー薬物共役体の忍容性（ＭＴＤ研究）＞
ＰＢＲＭ−ポリマー薬物共役体の忍容性を、ＣＤ−１雌性マウスにおいて推定した。Ｐ
ＢＲＭ−ポリマー−薬物共役体、実施例４を、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍ
ｇ／ｋｇの用量で単一のＩＶ用量として投与した（各群についてｎ＝６）。ビヒクル対照
群は生理食塩水を投与された。動物を２１日の期間に亘り臨床的徴候についてモニターし
た。全ての研究動物の個体別体重を、０日目（ベースライン）に、最初の５日間は毎日お
よびその後は概ね１日おきに記録した。結果を表Ｘに要約する。
２０ｍｇ／ｋｇの用量は耐用性良好であり、この群におけるマウスのいずれにおいても
体重減少は観察されなかった。４０ｍｇ／ｋｇの用量で、約２０％の最大体重減少が７日
目に観察された。この群における１匹の動物は７日目に死亡したことが見出され、前日に
約１２％の体重が減少した。研究の終わりまでに（２１日目）、この研究群における全て
の生存動物（６匹のうち５匹）は、対照群に対して体重が増えた。６０ｍｇ／ｋｇの用量
は最大耐用量を明らかに超えた。これは、この群における全ての動物が７日目に有意に体
重が減少し、瀕死であり、９日目に屠殺したためである。
マウスについての最大耐用量は２０〜４０ｍｇ／ｋｇであったことを結果は示す。
［実施例５６］
＜アウリスタチンＦ−ヒドロキシプロピルアミドの忍容性（ＭＴＤ研究）＞
アウリスタチンＦ−ヒドロキシプロピルアミド（ＡＦ−ＨＰＡ）の忍容性を、ＣＤ−１
雌性マウスにおいて推定した。ＡＦ−ＨＰＡ（ＵＳ１３／４９３，８９９、現在、米国特
許第８，６８５，３８３号明細書、実施例４８に記載されているのと同様の態様で調製）
を、１．６ｍｇ／ｋｇ、３．２ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋｇの用量で単一のＩＶ用量と
して投与した（各群についてｎ＝６）。ビヒクル対照群は、生理食塩水を投与された。動
物を、２１日の期間に亘り臨床的徴候についてモニターした。全ての研究動物の個体別体
重を、０日目（ベースライン）に、最初の５日間は毎日、およびその後概ね１日おきに記
録した。結果を表ＸＩにおいて要約する。
１．６ｍｇ／ｋｇの用量は容認できるように許容され、１１．６％の体重減少が７日目
に観察された。動物は２１日目までにその群のベースラインに対して５．５％の体重増加
を伴って完全に回復した。３．２ｍｇ／ｋｇの用量で、１匹の動物は７日目に死亡し、３
匹の動物は瀕死であり、７日目に屠殺した。研究の終わり（２１日目）までに、６匹の動
物のうち２匹は生存した。４．７ｍｇ／ｋｇの用量は最大耐用量を明らかに超えた。これ
は、この群における全ての動物が死亡したか、または瀕死であり、屠殺したためである。
［実施例５７］
＜表面プラズモン共鳴によってヒト５Ｔ４（細胞外ドメイン）に結合する抗５Ｔ４ｓｃＦ
ｖＦｃポリマー薬物共役体の親和性および反応速度の推定＞
５Ｔ４抗原への実施例１０に記載されているのと同様の態様で調製した抗５Ｔ４ｓｃＦ
ｖＦｃポリマー薬物共役体の結合についての親和性および反応速度パラメーターは、ＧＥ
ＨｅａｌｔｈｃａｒｅからのＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器を使用して表面プラズモン
共鳴によって測定した。５Ｔ４−ＥＣＤ−Ｆｃ抗原（ヒトＩｇＧ１サブタイプのＦｃドメ
インに融合したヒト５Ｔ４細胞外ドメイン）を、キットとして提供されている試薬（ＧＥ
Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用したアミンカップリング法によって、ＢＩＡｃｏｒｅ
ＣＭ５センサーチップ上に共有結合的に固定化した。結合研究において、抗５Ｔ４ｓｃＦ
ｖＦｃポリマー薬物共役体または対照タンパク質を、ＢＩＡｃｏｒｅ泳動用緩衝液ＨＢＳ
−ＥＰ＋（ＥＤＴＡおよびＰ２０を補充したＨＥＰＥＳ緩衝食塩水）中で一連の濃度に段
階希釈し、固定化された抗原上を固定した期間流し、結合させ、それに続いて泳動用緩衝
液を流し、抗原を解離させ、最終的に低ｐＨ溶液（１０ｍＭのグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ２
）を使用して表面の再生を行った。全てのＢＩＡｃｏｒｅ試薬は、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃ
ａｒｅから調達した。このように得られたデータ曲線はセンサーグラムと称され、未加工
の結合データを構成する。データを、ＢＩＡ評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａ
ｒｅ）を使用して１：１ラングミュア結合モデルにフィットさせ、親和性／反応速度パラ
メーター、例えば、会合速度、解離速度および親和性を推定した。親和性の推定は、複数
の測定の平均である。
図１１において例示するように、抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃポリマー薬物共役体（実施例１
０）は、高親和性（＜３０ｐＭのＫＤ）を伴ってヒト５Ｔ４細胞外ドメインに結合した。
この値は、非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃについて決定したものと同様である。
［実施例５８］
＜細胞表面５Ｔ４抗原への抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃポリマー薬物共役体の結合＞
抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃポリマー薬物共役体（抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ）（実施例１０）の細
胞表面結合を、様々なヒトがん細胞株においてＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｒｅフローサイトメ
ーター（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して評価した。抗５Ｔ４ｓｃＦｖ
Ｆｃポリマー薬物共役体の細胞表面結合を滴定によって決定し、非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖ
Ｆｃ抗体について測定した細胞表面結合と比較した。
５Ｔ４を過剰発現している組換えＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１−５Ｔ
４ＯＥ）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（５Ｔ４対して陰性；アメリカ培養細胞系統保存機関、
Ｍａｎａｓｓａｓ Ｖｉｒｇｉｎｉａ ＵＳから受託番号ＨＴＢ−２６で入手可能）およ
びＡ４３１（天然に発現している５Ｔ４）細胞（Ａ４３１、アメリカ培養細胞系統保存機
関、Ｍａｎａｓｓａｓ Ｖｉｒｇｉｎｉａ ＵＳから受託番号ＣＲＬ−１５５５で入手可
能）を、抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃポリマー薬物共役体および非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃの
滴定のために使用した。指数関数的に増殖している細胞を、０．５ｍＭのＰＢＳ／ＥＤＴ
Ａ緩衝液を使用して培養フラスコから剥離した。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、１％ＢＳＡ
−ＰＢＳ中の抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ、抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ、または非結合ｓｃＦｖＦｃ融
合タンパク質（０．０１〜１０μｇ／ｍＬ）と室温にて１時間インキュベートする。細胞
をＰＢＳで３回洗浄し、抗Ｆｃ特異的−ＦＩＴＣ抗体と共に４℃にて４５分間インキュベ
ートした。抗Ｆｃ特異的ＦＩＴＣ抗体のインキュベーション後、細胞をＰＢＳで３回洗浄
し、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｒｅ、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓ
ｏｎ）を使用して分析した。蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を、試料について決定した。
抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃポリマー薬物共役体（実施例１０）についての特異的用量依存的
細胞表面結合は、Ａ４３１および５Ｔ４の両方を過剰発現しているＭＤＡ−ＭＢ−２３１
細胞において非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃのそれと相当した。関連のないｓｃＦｖＦｃ融
合タンパク質の結合は、５μｇ／ｍＬで２００分の１であった。さらに、５Ｔ４発現につ
いて陰性であるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃまたは共役抗５Ｔ４
ｓｃＦｖＦｃ ＡＤＣへの細胞表面結合を示さなかった。
［実施例５９］
＜抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃポリマー薬物共役体のＩｎ ｖｉｖｏでの有効性＞
材料：ＢＤ１ｍＬシリンジ（２７１／２ゲージ）、無菌培養培地、無菌リン酸緩衝食塩
水、Ｍａｔｒｉｇｅｌ−ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（カタログ番号３５４２４８）、
無菌綿栓、無菌エッペンドルフチューブ（１．５ｍＬ、２ｍＬ）、ピペット、濾紙、７０
％アルコール／イソプロピルアルコール、バーニヤカリパス（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ）。使用
した全ての他の必要不可欠な品目は、分析用のものであった。
動物：５〜６週齢、体重２０〜２２ｇの胸腺欠損雌性ヌードマウス（Ｈｓｄ：胸腺欠損
Ｎｕｄｅ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ）は、Ｈａｒｌａｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから得た。Ｒｅ
ｇｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｒｐｏｓｅ ｏ
ｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
ｏｎ Ａｎｉｍａｌｓ（ＣＰＣＳＥＡ）、インド政府およびＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ
ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）のコンプライアンスに従って動
物を世話した。動物実験を行うための「フォームＢ」は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ
Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅが見直し、承認した。
収容および給餌：動物を、２２±３℃の温度、５０±２０％の湿度、それぞれ１２時間
の明／暗サイクル、および１時間当たり１５〜２０回の新鮮な空気の交換を伴う制御され
た環境に維持した。動物を群毎に収容し、加圧滅菌したトウモロコシの穂軸を敷料材料と
して使用した。研究期間の間、動物を認定された照射済みの試験施設用げっ歯類食餌を自
由に給餌した。
動物の調製および動物の同定：動物を実験室において少なくとも５日の期間、順化させ
た。動物を個々に番号を付け、実験、研究番号、腫瘍埋込の日付、無作為化の日付、腫瘍
タイプ、マウス系統、性別、および個々のマウス番号を示すケージカードを、対応するケ
ージに示した。無作為化の後、群のアイデンティティー、試験化合物、投与量、スケジュ
ールおよび投与経路を加えた。
腫瘍細胞の調製：全ての手順は、殺菌技術に続いて層流フードにおいて行った。がん細
胞（ａ）Ａ４３１（類表皮）、（ｂ）５Ｔ４を過剰発現している組換えＭＤＡ−ＭＢ−２
３１（乳房）（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ ５Ｔ４＋＋）（５Ｔ４ＯＥ）、および（ｃ）Ｈ１
９７５（非小細胞肺癌）を、７０〜８０％コンフルエントおよび＞９０％の生存度で研究
のために選択した。５×１０６個の細胞を、氷中に保存した５０％のｍａｔｒｉｇｅｌを
含有する２００μＬのＰＢＳまたは無血清培地に再懸濁した。
細胞の皮下注射：個々の換気したケージ（ＩＶＣ）に収容したヌードマウス（Ｈｓｄ：
胸腺欠損Ｎｕｄｅ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ）を使用した。動物の側腹部または背中において皮下
に注射することによってがん細胞株を動物において増殖させた。腫瘍の増殖について埋込
みされた領域をモニターした。腫瘍が触診可能であり、必要とされる容積（ＴＶ約１５０
ｍｍ３）となると、腫瘍容積をベースとして動物を無作為化し、投与を開始した。腫瘍容
積は、無作為化の日（０日目）に、次いで、３日に１回（すなわち、マウスを秤量した同
じ日に）、カリパスによる二次元測定によって決定した。バーニヤカリパスを使用して、
腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）を測定した。下記の式を使用して腫瘍容積（ＴＶ）を計
算した。
腫瘍容積（ｍｍ３）＝Ｌ×Ｗ２／２
（式中、Ｌ＝長さ（ｍｍ）であり、Ｗ＝幅（ｍｍ）である。）
抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃポリマー薬物共役体（実施例１０）を、無菌１×ＰＢＳに溶解し
、これによって全ての調製した濃度で透明な溶液となり、尾静脈から静脈内に投与した。
投与の日に試験品目を新たに調製し、投与容量を５ｍＬ／ｋｇ体重に保持した。各群につ
いて、別々の新しいシリンジおよび針を使用した。
体重：ケージサイドの観察、体重を３日に１回研究期間の間測定した。個々のマウスの
体重の変化％を計算した。
抗腫瘍活性：抗腫瘍活性は、ビヒクル対照群に対する最大腫瘍容積の阻害として評価し
た。データ評価は、統計ソフトウェアＧｒａｐｈ ｐａｄバージョン５を使用して行った
。
％での試験／対照値（Ｔ／Ｃ％）：特定の日における腫瘍阻害（Ｔ／Ｃ、％）を、１０
０％を乗じた対照群に対する試験群の平均ＴＶ値の比から下記の通り計算した。Ｔ／Ｃ（
Ｘ日目）＝（Ｘ日目の試験群の平均ＴＶ−０日目の試験群の平均ＴＶ）／（Ｘ日目の対照
群の平均ＴＶ−０日目の対照群の平均ＴＶ）×１００％
実験の間の特定の試験群について記録した最少（または最大）Ｔ／Ｃ％値は、それぞれ
の処置についての最大抗腫瘍活性を表す。ＴＶ＝腫瘍容積（ｍｍ３）
腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）：ＴＧＩは、下記の式を使用して計算した。
ＴＧＩ＝（１−Ｔ／Ｃ）×１００
式中、Ｔ＝（Ｘ日目の試験群の平均ＴＶ−０日目の試験群の平均ＴＶ）およびＣ＝（Ｘ日
目の対照群の平均ＴＶ−０日目の対照群の平均ＴＶ）
臨床的徴候：罹患率および死亡率：動物を、３日に１回研究期間の間目に見える全身の
臨床的徴候について個々に観察した。全ての動物を、罹患率と死亡率についてチェックし
た。
統計解析：腫瘍阻害の統計的有意性の評価のために、二元配置ＡＮＯＶＡ、それに続い
てボンフェローニ事後試験を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ５を使用して行った。
ｐ値＜０．０５は、群間の統計的有意差を示す。
＜結果＞
［Ａ４３１−皮下異種移植片抗腫瘍活性］
Ａ４３１細胞株による異種移植片実験において［「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ Ａ４３１ ｔｕｍｏｒ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ａｓ ａｎ ｉｎ ｖｉ
ｖｏ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｅｓｔｉｎｇ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａ
ｃｔｏｒ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ」、Ｓ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、
Ｉｎｔ． Ｊ． Ｏｎｃｏｌ． １９９２、１（３）：２９３〜８］、実施例１０に記載
されているのと同様の態様で調製した抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣを、腫瘍担持マウスに下記の用
量：１０ｍｇ／ｋｇ、単回投与；１ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４；３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４
；および６ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４でＩＶ投与した。「Ｑ４Ｄ×４」は、４日に１回の投
与、計４用量を意味する。腫瘍担持マウスの別々の群に、非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ（
１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４）を投与した。この研究において、抗５Ｔ４ｓｃＡＤ
Ｃ治療は、単回投与または反復投与として上記の用量レベルで投与したとき、Ａ４３１癌
腫異種移植片に対して強い抗腫瘍活性を示した（図１２）。単回投与（１０ｍｇ／ｋｇ、
ＩＶ）での抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣによる処置は、２４日目に−４％の最適なＴ／Ｃ値をもた
らした。１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ単回投与群についての腫瘍増殖阻害％（ＴＧＩ）は、１０
４％であることが見出された（２４日目、ｐ＜０．００１）。反復投与群（１ｍｇ／ｋｇ
、３ｍｇ／ｋｇおよび６ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４）における最適なＴ／Ｃ値は、２
４日目にそれぞれ、−２％、−４％および−３％であることが見出された。反復投与群（
１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび６ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４）についてのさらな
る腫瘍増殖阻害％（ＴＧＩ）は、それぞれ、１０２％（２４日目、ｐ＜０．００１）、１
０４％（２４日目、ｐ＜０．００１）および１０３％（２４日目、ｐ＜０．００１）であ
ることが見出された。単回投与および反復投与の抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ処置群の間で有意差
はなかった。１０ｍｇ／ｋｇの用量、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４での非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ
の投与は、Ａ４３１異種移植片の腫瘍容積において有意な低減％をもたらさなかった。２
４日目のＴ／Ｃ％値は、８７％であることが見出された。ビヒクル処理群および抗５Ｔ４
ＳｃＦｖＦｃ処置群の間の腫瘍サイズの差異は統計的に有意でなく、この用量での腫瘍増
殖阻害％（ＴＧＩ）は、１３％であることが見出された（２４日目）。処置後レジメン、
抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ試験群における動物を９０日目まで観察し、この時点で研究を終了し
た。６ｍｐｋ、ｉ．ｖ、Ｑ４Ｄ×４で処置した抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣの反復投与群において
、２４日目までに処置に関連する重度の体重減少および死亡率（７／１０匹の動物）はな
かった。この投与群における生存動物は、９０日目まで観察された。完全な腫瘍増殖の退
縮が抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ処置群の全てにおいて観察され、研究期間の終わりまでに腫瘍の
再増殖の徴候はなかった（６ｍｐｋ、ｉ．ｖ．、Ｑ４Ｄ×４投与群において３／１０匹を
含めた）。
［ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ ５Ｔ４＋＋−皮下異種移植片抗腫瘍活性］
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１−５Ｔ４ＯＥの異種移植片による実験において、実施例１０に記
載されているのと同様の態様で調製した抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣを、腫瘍担持マウスに下記の
用量で投与した。１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、単回投与；１ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４；
３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４；および６ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４。別々の群に
、非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４）を投与した。この
研究において、抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ治療は、単回投与または反復投与として上記の用量レ
ベルで投与したときに、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１−５Ｔ４ＯＥ異種移植片に対して強い抗腫
瘍活性を示した（図１３）。単回投与（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）での抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ
による処置は、１８日目に−２５％の最適なＴ／Ｃ値をもたらした。１０ｍｇ／ｋｇ、Ｉ
Ｖ単回投与群についての腫瘍増殖阻害％（ＴＧＩ）は、１２５％であることが見出された
（１８日目、ｐ＜０．００１）。反復投与群（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび６ｍｇ
／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４）における最適なＴ／Ｃ値は、１８日目にそれぞれ、−２６％
、−３２％および−３８％であることが見出された。反復投与群（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ
／ｋｇおよび６ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４）についてのさらなる腫瘍増殖阻害％（Ｔ
ＧＩ）は、それぞれ、１２６％（１８日目、ｐ＜０．００１）、１３２％（１８日目、ｐ
＜０．００１）および１３８％（１８日目、ｐ＜０．００１）であることが見出された。
単回投与および反復投与の抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ処置群の間に有意差は存在しなかった。１
０ｍｇ／ｋｇの用量、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４での非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ治療は、ＭＤＡ
−ＭＢ−２３１ ５Ｔ４ＯＥ異種移植片に対して穏やかな抗腫瘍活性を示した。１８日目
のＴ／Ｃ％値は４５％であることが見出され、この用量での腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、
５５％であった（１８日目、ｐ＜０．００１）。さらに、ビヒクル対照群についての６６
日目の平均腫瘍容積は、１７６３ｍｍ３であることが見出された。抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣの
反復投与群（１ｍｐｋ、３ｍｐｋ、ｉ．ｖ；Ｑ４Ｄ×４）および単回投与群（１０ｍｐｋ
、ｉ．ｖ）において、４５日目から９０日目まで完全な腫瘍増殖の退縮があり、この時点
で研究を終了した。研究期間の終わりまでに上記の抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ処置群において腫
瘍の再増殖の徴候はなかった。しかしながら、６ｍｐｋ、ｉ．ｖ、Ｑ４Ｄ×４で処置され
た抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣの反復投与群において、処置に関連する重度の体重減少および死亡
率（１０／１０）は２１日目までなかった。非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ抗体処置群につ
いての７２日目の平均腫瘍容積は、１５０２ｍｍ３であることが見出された。この抗体処
置群についての６６日目のＴ／Ｃ％値は６０％であることが見出され、この用量での腫瘍
増殖阻害（ＴＧＩ）は、４０％であった（６６日目、ｐ＜０．００１）。
［Ｈ１９７５−皮下異種移植片抗腫瘍活性］
Ｈ１９７５肺癌細胞株で同様の様式で行った異種移植片実験において、実施例１０に記
載したのと同様の様式で調製した抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣを、腫瘍担持マウス（群毎にｎ＝５
匹のマウス、最初の腫瘍容積、約１５０ｍｍ３）に下記の用量：０．３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４
Ｄ×４；１ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４；および３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４でＩＶ投与した。
別々の群に、非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ抗体を３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ×４で投与
した。抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ（０．３ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ；Ｑ４Ｄ×４
）による処置は、上で述べた用量レベルでの反復投与として投与したとき、Ｈ１９７５腫
瘍異種移植片の部分的寛解（３９日目に）をもたらした。３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ；Ｑ４Ｄ
×４での抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣによる処置は、Ｈ１９７５腫瘍異種移植片の完全な寛解（３
９日目に）をもたらした。０．３ｍｐｋ、１ｍｐｋおよび３ｍｐｋ、ｉ．ｖ；Ｑ４Ｄ×４
での抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣによる処置は、３９日目にそれぞれ、−０．７％、−４％および
−５％の最適なＴ／Ｃ値をもたらし、腫瘍増殖阻害％（ＴＧＩ）は、１０１％、１０４％
および完全な寛解（ＣＲ）であることが見出された（３９日目、ｐ＜０．００１）。非共
役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ抗体による処置は、乏しい抗腫瘍活性をもたらし、３９日目に８
８％のＴ／Ｃ％値を伴い、％ＴＧＩは１２％であった。処置後レジメン、試験群における
動物を８１日目まで観察し、この時点で研究を終了した。６０日目に、抗５Ｔ４ｓｃＡＤ
Ｃ治療（０．３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ；Ｑ４Ｄ×４）は、Ｈ１９７５異種移植片を担持する
ヌードマウスにおいて完全な寛解（３／５）を示し、一方、３９日目以降から６０日目ま
で、腫瘍の再増殖は２匹の動物において観察されたが、この時点でこの群における動物を
屠殺した。しかしながら、８１日目に、抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ（１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ
／ｋｇ、ｉ．ｖ；Ｑ４Ｄ×４）による治療は、Ｈ１９７５異種移植片を担持するヌードマ
ウスにおいて完全な寛解（５／５；８１日目）をもたらした。
［ＮＣＩ−Ｎ８７−皮下異種移植片抗腫瘍活性］
上記の腫瘍異種移植片研究と同様の様式で、ＮＣＩ−Ｎ８７（胃癌腫）細胞株で異種移
植片実験を行った。実施例１０に記載したのと同様の様式で調製した抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ
を、腫瘍担持ＳＣＩＤマウス（群毎にｎ＝１０匹のマウス、最初の腫瘍容積、約１３５ｍ
ｍ３）に下記の用量：３ｍｇ／ｋｇ、単回投与；および３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×３でＩＶ
投与した。別々の群に、非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ抗体を３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、Ｑ４Ｄ
×３にて投与した。１件の処置に関連しない死亡を抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ、３ｍｇ／ｋｇの
単回投与群においてアセスメントし、この動物についてのデータを分析から除外した。１
９日目に、抗５Ｔ４ｓｃＡＤＣ処置群は、それぞれ、３ｍｇ／ｋｇ、単回投与；および３
ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×３で、９２％および８７％の腫瘍増殖阻害を示した。両方の抗５Ｔ
４ｓｃＡＤＣ処置群は、１００％の完全な退縮を有したが、これは７５日目の研究の終わ
りまで長続きした。非共役抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃ抗体による処置は、乏しい抗腫瘍活性を
もたらし、１９日目に１４％の腫瘍増殖阻害値を有した。この処置群における全ての動物
は、５６日目までに８００ｍｍ３の腫瘍容積のエンドポイントに達した。
例えば、本明細書の非特許文献、特許出願および特許を含めた全ての公開資料は、引用
することによりその全てを本明細書中に組み込む。本発明は、その精神または本質的な特
徴から逸脱することなく、他の特定の形態として具体化できる。したがって、上記の実施
形態は、あらゆる点で本明細書に記載の本発明に対する限定ではなく、例示である。本発
明の範囲は、上記の記載よりむしろ添付の特許請求の範囲によって示されるものであり、
特許請求の範囲と同等の意味および範囲内にある全ての変形が包含されることを意図する
。

Claims (32)

  1. 抗新生物療法に有用な治療薬および標的化共役体であって、
    （ａ）ヒト癌胎児性のタンパク質５Ｔ４を標的とする免疫グロブリンまたはその機能的
    なフラグメントを含むリガンド（ＬＧ）であり、このリガンドが、以下（ｂ）のポリマー
    足場のｍ５と結合しており、ｍ５が１〜約１０である、リガンドと、
    （ｂ）約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリ（１−ヒドロキシメチル
    エチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含むポリマー足場であり、下記に
    定義するランダムに配置されたモノマー単位ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂを含む
    、前記ポリマー足場と
    を含み、
    （ｉ）ｍ３ａ：
    ｍ３ａは、存在しないものであるか、または１〜約１７個のモノマーｍ３ａ単位が、前
    記ポリマー足場中に存在するものであり、各単位において、ＸａおよびＸｂは、（Ａ）一
    方はＨであり、他方はマレイミド遮断部分であること、または（Ｂ）それらが付着してい
    る炭素原子と一緒になって、炭素−炭素二重結合を形成することとのいずれかから独立に
    選択され、
    （ｉｉ）ｍ３ｂ、
    式中のスルフィド結合は、前記リガンドへの付着点を形成し、１〜約８個のモノマーｍ
    ３ｂ単位が、前記ポリマー足場中に存在するものであり、ただし、ｍ３ａおよびｍ３ｂの
    合計は、１〜１８であり、硫黄原子は、前記リガンドの一部であり、
    （ｉｉｉ）ｍ：
    １〜約３００個のモノマーｍ単位が、前記ポリマー足場中に存在するものであり、
    （ｉｖ）ｍ１：
    １〜約１４０個のモノマーｍ１単位が、前記ポリマー足場中に存在するものであり、
    （ｖ）ｍ２：
    １〜約４０個のモノマーｍ２単位が、前記ポリマー足場中に存在するものであり、
    前記モノマー単位ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂのそれぞれにおいて、Ｘは、
    ＣＨ２、ＯまたはＮＨであり、
    ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約１５〜約３００の範囲であり、
    Ｄは、出現する毎に独立に、≦５ｋＤａの分子量を有する治療剤であり、Ｄおよびカル
    ボニル基の間の
    は、前記カルボニル基へのＤの直接的また間接的な付着を表すものである、
    治療薬および標的化共役体。
  2. 前記リガンドが、約４０ｋＤを超える分子量を有し、前記ＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約４
    ０ｋＤａの範囲の分子量を有する、請求項１に記載の治療薬および標的化共役体。
  3. 前記リガンドが、免疫グロブリンまたはその機能的なフラグメントを含む、請求項１に
    記載の治療薬および標的化共役体。
  4. 前記免疫グロブリンまたはその機能的なフラグメントが、モノクローナル抗体、キメラ
    抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、イムノアドヘシン、Ｆ（Ａｂ）２、ミニ抗体、Ｆａｂ’、
    単一ドメイン抗体、ナノ抗体、単鎖Ｆｖ、タンデム／ビス−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）３、ｓ
    ｃＦｖ−Ｆｃ（またはｓｃＦｖＦｃ）、ｄｓＦｖ、二特異性抗体、三特異性抗体、および
    四特異性抗体からなる群より選択される、請求項３に記載の治療薬および標的化共役体。
  5. 前記免疫グロブリンまたはその機能的なフラグメントが、抗５Ｔ４ｓｃＦｖＦｃであり
    、配列番号Ａのアミノ酸配列を有する、請求項４に記載の治療薬および標的化共役体。
  6. ｍ５が、２〜８である、請求項１に記載の治療薬および標的化共役体。
  7. ｍ５が、２〜４である、請求項６に記載の治療薬および標的化共役体。
  8. Ｄが、（ａ）アウリスタチンおよびその類似体、（ｂ）カリケアマイシンおよびその誘
    導体、（ｃ）デュオカルマイシンおよびその類似体、（ｄ）ＳＮ３８、ならびに（ｅ）ピ
    ロロベンゾジアゼピンおよびその類似体からなる群から独立に選択される、請求項７に記
    載の治療薬および標的化共役体。
  9. 前記アウリスタチンまたはその類似体が、アウリスタチン、ドラスタチン、モノメチル
    アウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタ
    チンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）およびアウリスタチンＦヒドロキシプロピルアミド
    （ＡＦ ＨＰＡ）からなる群より選択される、請求項８に記載の治療薬および標的化共役
    体。
  10. 前記デュオカルマイシンまたはその類似体が、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイ
    シンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシンＣ２
    、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、ＣＣ−１０６５、アドゼレシン、ビ
    ゼレシン、およびカルゼレシンからなる群より選択される、請求項８に記載の治療薬およ
    び標的化共役体。
  11. Ｘが、ＮＨである、請求項１に記載の治療薬および標的化共役体。
  12. 前記ＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ
    ３ａおよびｍ３ｂの合計が、約１５〜約１５０であり、ｍ１が、１〜約７０であり、ｍ２
    が、１〜約２０であり、ｍ３ａが、０〜約９であり、ｍ３ｂが、１〜約８であり、ｍ５が
    、２〜約８であり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、１〜１０である、請求項１に記載の治
    療薬および標的化共役体。
  13. 前記ＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ
    ３ａおよびｍ３ｂの合計が、約２０〜約１１０であり、ｍ１が、２〜約５０であり、ｍ２
    が、２〜約１５であり、ｍ３ａが０〜約７であり、ｍ３ｂが、１〜約８であり、ｍ５が、
    ２〜約４であり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、１〜８である、請求項１に記載の治療薬
    および標的化共役体。
  14. 前記ＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ
    ３ａおよびｍ３ｂの合計が、約４０〜約７５であり、ｍ１が、約５〜約３５であり、ｍ２
    が、約３〜約１０であり、ｍ３ａが、０〜約４であり、ｍ３ｂが、１〜約５であり、ｍ５
    が、２〜約４であり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、１〜５である、請求項１に記載の治
    療薬および標的化共役体。
  15. ｍ５が、２〜４である、請求項１に記載の治療薬および標的化共役体。
  16. 式（Ｂ）を有する、請求項１に記載の治療薬および標的化共役体
    （ここで、式中、
    前記ＰＨＦは、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、
    前記硫黄原子は、前記リガンドの一部であり、
    ｍは、１〜７５であり、
    ｍ１は、約５〜約３５であり、
    ｍ２は、約３〜約１０であり、
    ｍ３ａは、０〜約４であり、
    ｍ３ｂは、１〜約５であり、
    ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａ、およびｍ３ｂの合計は、約４０〜約７５であり、
    ｍ５は、２〜約４である。）。
  17. ｍ１およびｍ２の合計が、約８〜約４５である、請求項１に記載の治療薬および標的化
    共役体。
  18. 前記ＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ２が、１〜約２０
    であり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、１〜約１０であり、ｍ１が、１〜約７０の整数で
    あり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、約１５〜約１５０である、請
    求項１に記載の治療薬および標的化共役体。
  19. 前記ＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ２が、２〜約１５
    の整数であり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、１〜約８であり、ｍ１が、２〜約５０の整
    数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、約２０〜約１１０である
    、請求項１に記載の治療薬および標的化共役体。
  20. 前記ＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ２が、約３〜約１
    ０の整数であり、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、１〜約５であり、ｍ１が、約５〜約３５
    の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計が、約４０〜約７５である、
    請求項１に記載の治療薬および標的化共役体。
  21. ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）が、
    約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ、ｍ１、ｍ２、ｍ３ａおよびｍ３ｂ
    の合計が、１５〜約１５０である、請求項１に記載の治療薬および標的化共役体。
  22. 抗新生物療法において有用な治療用抗５Ｔ４薬物の標的化共役体であって、抗５Ｔ４リ
    ガンドと、分子量約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａを有するポリ（１−ヒドロキシメチルエチレ
    ンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含むポリマー足場とを含み、下記の構造
    のものである、治療用抗５Ｔ４薬物の標的化共役体
    （ここで、式中、ｍ５は、１〜１０であり、
    ｍは、１〜約３００の整数であり、
    ｍ１は、１〜約１４０の整数であり、
    ｍ２は、１〜約４０の整数であり、
    ｍ３ａは、０〜約１７の整数であり、
    ｍ３ｂは、１〜約８の整数であり、ただし、ｍ３ａおよびｍ３ｂの合計は、１〜約１８
    の整数であり、ｍ、ｍ１、ｍ２およびｍ３の合計は、約１５〜約３００の範囲であり、
    Ｘは、ＮＨであり、
    ＸａまたはＸｂの一方はＨであり、他方は水溶性マレイミド遮断部分であり、
    Ｄは、出現する毎に独立に、≦５ｋＤａの分子量を有する治療剤であり、Ｄおよびカル
    ボニル基の間の
    は、前記カルボニル基へのＤの直接的また間接的な付着を表し、
    ＡＮＴＩ−５Ｔ４は、ヒト癌胎児性抗原５Ｔ４について選択的である免疫グロブリンま
    たはその機能的なフラグメントを含む抗５Ｔ４リガンドであり、
    硫黄原子は、前記リガンドの一部である。）。
  23. Ｄが、（ａ）アウリスタチンまたはその類似体；（ｂ）カリケアマイシンまたはその誘
    導体；（ｃ）デュオカルマイシンまたはその類似体；（ｄ）ＳＮ３８、および（ｅ）ピロ
    ロベンゾジアゼピンまたはその類似体からなる群の１つまたは複数から選択される、請求
    項２２に記載の共役体。
  24. Ｄが、アウリスタチン、ドラスタチン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モ
    ノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ
    ）およびアウリスタチンＦヒドロキシプロピルアミド（ＡＦ ＨＰＡ）からなる群より選
    択されるアウリスタチンまたはその類似体である、請求項２３に記載の共役体。
  25. Ｄが、ヒドロキシプロピルアミド−Ｌ−アラニン部分を介してｍ２のカルボニル部分に
    付着している、アウリスタチンまたはその類似体である、請求項２２に記載の共役体。
  26. 前記治療剤と前記抗５Ｔ４リガンドの比が、約５：１〜約３０：１である、請求項２２
    に記載の共役体。
  27. 前記治療剤と前記抗５Ｔ４リガンドの比が、約１２：１〜約１８：１である、請求項２
    ２に記載の共役体。
  28. 前記治療剤を含む前記ポリマー足場と前記抗５Ｔ４リガンドの平均比が、約２：１〜約
    ４：１である、請求項２２に記載の共役体。
  29. 抗新生物療法において有用な治療薬および標的化共役体であって、互いにランダムに接
    続し得る下記で示す単位を含む抗５Ｔ４リガンドおよびポリ（１−ヒドロキシメチルエチ
    レンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）ポリマー足場を含む、治療薬および標的
    化共役体
    （ここで、式中、
    ＡＮＴＩ−５Ｔ４は、配列番号Ａと示されるアミノ配列を含む単鎖抗体構築体であり、
    硫黄原子は、前記単鎖抗体構築体の一部であり、
    前記ＰＨＦは、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有し、
    ポリマー足場と抗５Ｔ４単鎖抗体の平均比は、約２：１〜約４：１であり、
    アウリスタチンＦ ＨＰＡと抗５Ｔ４抗体の比は、約１２：１〜約１８：１である。）
    。
  30. 請求項１〜２９のいずれか一項に記載の治療薬および標的化共役体、ならびに薬学的に
    許容される担体を含む医薬組成物。
  31. 対象に有効量の請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、それを必要とす
    る対象において障害を処置する方法。
  32. 前記障害が、肛門、星状細胞腫、白血病、リンパ腫、頭頸部、肝臓、精巣、子宮頸部、
    肉腫、血管腫、食道、眼、喉頭、口、中皮腫、皮膚、骨髄腫、口腔、直腸、咽喉、膀胱、
    乳房、子宮、卵巣、前立腺、肺、結腸、膵臓、腎臓、および胃のがんからなる群より選択
    されるがんである、請求項３１に記載の方法。
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