JP2017536344A - 免疫修飾因子 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2014年10月10日に提出した米国仮出願番号第62/062,240号に対する優先権を主張するものであって、その全てを参照により本明細書に組み込むものである。
Aは、−CH2CH2−、
から選択され;
nは、0、1または2であり;
mは、1または2であり;
m’は、0または1であり;
zは、1または2であり;
zが1である場合、wは2であり;
zが2である場合、wは1または2であり;
pが、0、1または2であり;
R14およびR15は、独立して、水素およびメチルから選択され;
Rxは、水素、アミノ、ヒドロキシおよびメチルから選択され;および
Rzは、水素および−C(O)NHR16から選択され;ここでR16は、水素、−CHR17C(O)NH2、−CHR17C(O)NHCHR18C(O)NH2および−CHR17C(O)NHCHR18C(O)NHCH2C(O)NH2から選択される;ここで、R17は、水素および−CH2OHから選択され、ここでR18は、水素およびメチルから選択される;
Rvは、水素、メチルまたは天然のアミノ酸側鎖であり;
Rc、Rf、Rh、RiおよびRmは、水素であり;
Rnは、水素またはメチルであるか、またはRvおよびRnは、ピロリジン環を形成しており;
Ra、Re、RjおよびRkは、独立して、水素およびメチルから選択され;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12およびR13は、独立して天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖から選択されるか、あるいは以下に記載したような対応する隣接するR基と共に環を形成しており;
ReおよびRkは、対応する隣接するR基と共に各環を形成しており、それらに結合した原子は、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される;ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基で所望により置換されていてもよい;
Rbは、メチルであるか、またはRbおよびR2は、それらに結合した原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成しており;ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基で所望により置換されていてもよい;
Rdは、水素またはメチルであるか、あるいはRdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成することができる;ここで、各環は、所望により、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシおよびフェニルから独立して選択される1〜4つの基で置換されていてもよい;
Rgは、水素またはメチルであるか、あるいはRgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成することができる;ここで、各環は、アミノ、所望によりハロ基で置換されていてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、所望によりメトキシ基で置換されていてもよいイソキノリニルオキシ、所望によりハロ基で置換されていてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリルから独立して選択される1〜4つの基により所望により置換されていてもよい;ここで、前記ピロリジンおよび前記ピペリジン環は、所望により、シクロヘキシル、フェニルまたはインドール基と縮合されていてもよい;ならびに
RLはメチルであるか、あるいはRLおよびR12は、それらに結合している原子と一緒になって、アゼチジンおよびピロリジンから選択される環を形成しており、ここで、各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基により所望により置換されていてもよい]
の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。
RdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており;
RgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、ここで前記環は、所望により1つのヒドロキシ基で置換されていてもよく;ならびに、
Rkは、メチルである。
RdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており;
RgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、ここで前記環は、所望により1つのヒドロキシ基で置換されていてもよい;
Rkは、メチルであり;
Ra、ReおよびRjは、水素であり;
RbおよびR2は、各メチルであるか、あるいはRbおよびR2は、それらが結合している原子と一緒になって、ピペリジン環を形成しており;
RLはメチルであり;
Rnは、水素、メチルであるか、またはRnおよびRvは、ピロリジン環を形成しており;
R1は、フェニルメチルであり、ここで前記フェニルは、ハロ、ヒドロキシ、メトキシまたはメチルから選択される1つの基で置換されていてもよい;
R3は、−CH2C(O)NH2および−CH2CO2Hから選択され;
R5は、水素、−CH2NH2、−CH2(イミダゾリル)および−CH2C(O)NH2から選択され;
R6は、−CH2CH(CH3)2、−(CH2)4NH2、−(CH2)2CO2Hおよび(CH2)2C(O)NH2から選択され;
R8およびR10は、−CH2(インドリル)であり、ここで前記インドリルは、所望により−CH2CO2Hで置換されていてもよい;
R9は、水素、−(CH2)2NH2、−(CH2)4NH2、−CH2OHおよび−CH2C(O)NH2から選択され;
R11およびR12は、−(CH2)3CH3であり;ならびに
R13は、メチル、−CH2OH、−CH2CH(CH3)2および−(CH2)2CO2Hから選択される。
RdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており;
RgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、ここで前記環は、所望により1つのヒドロキシ基で置換されていてもよい;
Rkは、メチルである;
Ra、ReおよびRjは、水素であり;
RbおよびR2は、各メチルであるか、あるいはRbおよびR2は、それらが結合している原子と一緒になって、ピペリジン環を形成しており;
RLはメチルであり;
Rnは、水素、メチルであるか、あるいはRnおよびRvは、ピロリジン環を形成しており;
R1は、フェニルメチルであり、ここで前記フェニルは、ハロ、ヒドロキシ、メトキシまたはメチルから選択される1つの基で置換されていてもよい;
R3は、−CH2C(O)NH2および−CH2CO2Hから選択され;
R5は、水素、−CH2NH2、−CH2(イミダゾリル)および−CH2C(O)NH2であり;
R6は、−CH2CH(CH3)2、−(CH2)4NH2、−(CH2)2CO2Hおよび(CH2)2C(O)NH2から選択され;
R8およびR10は、−CH2(インドリル)であり、ここで前記インドリルは、所望により−CH2CO2Hで置換されていてもよい;
R9は、水素、−(CH2)2NH2、−(CH2)4NH2、−CH2OHおよび−CH2C(O)NH2から選択され;
R11およびR12は、−(CH2)3CH3であり;ならびに
R13は、メチル、−CH2OH、−CH2CH(CH3)2および−(CH2)2CO2Hから選択され;ならびに
Aは−CH2CH2である。
RdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており;
RgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、ここで前記環は、所望により1つのヒドロキシ基で置換されていてもよい;
Rkは、メチルであり;
Ra、ReおよびRjは、水素であり;
RbおよびR2は、各メチルであるか、あるいはRbおよびR2は、それらが結合している原子と一緒になって、ピペリジン環を形成しており;
RLはメチルであり;
Rnは、水素、メチルであるか、あるいはRnおよびRvは、ピロリジン環を形成しており;
R1は、フェニルメチルであり、ここで前記フェニルは、ハロ、ヒドロキシ、メトキシまたはメチルから選択される1つの基で置換されていてもよい;
R3は、−CH2C(O)NH2および−CH2CO2Hから選択され;
R5は、水素、−CH2NH2、−CH2(イミダゾリル)および−CH2C(O)NH2であり;
R6は、−CH2CH(CH3)2、−(CH2)4NH2、−(CH2)2CO2Hおよび(CH2)2C(O)NH2から選択され;
R8およびR10は、−CH2(インドリル)であり、ここで前記インドリルは、所望により−CH2CO2Hで置換されていてもよい;
R9は、水素、−(CH2)2NH2、−(CH2)4NH2、−CH2OHおよび−CH2C(O)NH2から選択され;
R11およびR12は、−(CH2)3CH3であり;および
R13は、メチル、−CH2OH、−CH2CH(CH3)2および−(CH2)2CO2Hから選択され;ならびに
Aは、
RdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており;
RgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、ここで前記環は、所望により1つのヒドロキシ基で置換されていてもよい;
Rkは、メチルである;
Ra、ReおよびRjは、水素であり;
RbおよびR2は、各メチルであるか、あるいはRbおよびR2は、それらが結合している原子と一緒になって、ピペリジン環を形成しており;
RLはメチルであり;
Rnは、水素、メチルであるか、あるいはRnおよびRvは、ピロリジン環を形成しており;
R1は、フェニルメチルであり、ここで前記フェニルは、ハロ、ヒドロキシ、メトキシまたはメチルから選択される1つの基で置換されていてもよい;
R3は、−CH2C(O)NH2および−CH2CO2Hから選択され;
R5は、水素、−CH2NH2、−CH2(イミダゾリル)および−CH2C(O)NH2であり;
R6は、−CH2CH(CH3)2、−(CH2)4NH2、−(CH2)2CO2Hおよび(CH2)2C(O)NH2から選択され;
R8およびR10は、−CH2(インドリル)であり、ここで前記インドリルは、所望により−CH2CO2Hで置換されていてもよい;
R9は、水素、−(CH2)2NH2、−(CH2)4NH2、−CH2OHおよび−CH2C(O)NH2から選択され;
R11およびR12は、−(CH2)3CH3であり;ならびに
R13は、メチル、−CH2OH、−CH2CH(CH3)2および−(CH2)2CO2Hから選択され;ならびに
Aは、
RdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており;
RgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、ここで前記環は、所望により1つのヒドロキシ基で置換されていてもよい;
Rkは、メチルであり;
Ra、ReおよびRjは、水素であり;
RbおよびR2は、各メチルであるか、あるいはRbおよびR2は、それらが結合している原子と一緒になって、ピペリジン環を形成しており;
RLはメチルであり;
Rnは、水素、メチルであるか、あるいはRnおよびRvは、ピロリジン環を形成しており;
R1は、フェニルメチルであり、ここで前記フェニルは、ハロ、ヒドロキシ、メトキシまたはメチルから選択される1つの基で置換されていてもよい;
R3は、−CH2C(O)NH2および−CH2CO2Hから選択され;
R5は、水素、−CH2NH2、−CH2(イミダゾリル)および−CH2C(O)NH2であり;
R6は、−CH2CH(CH3)2、−(CH2)4NH2、−(CH2)2CO2Hおよび(CH2)2C(O)NH2から選択され;
R8およびR10は、−CH2(インドリル)であり、ここで前記インドリルは、所望により−CH2CO2Hで置換されていてもよい;
R9は、水素、−(CH2)2NH2、−(CH2)4NH2、−CH2OHおよび−CH2C(O)NH2から選択され;
R11およびR12は、−(CH2)3CH3であり;および
R13は、メチル、−CH2OH、−CH2CH(CH3)2および−(CH2)2CO2Hから選択され;および
Aは
RdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており;
RgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、ここで前記環は、所望により1つのヒドロキシ基で置換されていてもよい;
Rkは、メチルであり;
Ra、ReおよびRjは、水素であり;
RbおよびR2は、各メチルであるか、あるいはRbおよびR2は、それらが結合している原子と一緒になって、ピペリジン環を形成しており;
RLは、メチルであり;
Rnは、水素、メチルであるか、あるいはRnおよびRvは、ピロリジン環を形成しており;
R1は、フェニルメチルであり、ここで前記フェニルは、ハロ、ヒドロキシ、メトキシまたはメチルから選択される1つの基で置換されていてもよい;
R3は、−CH2C(O)NH2および−CH2CO2Hから選択され;
R5は、水素、−CH2NH2、−CH2(イミダゾリル)および−CH2C(O)NH2であり;
R6は、−CH2CH(CH3)2、−(CH2)4NH2、−(CH2)2CO2Hおよび(CH2)2C(O)NH2から選択され;
R8およびR10は、−CH2(インドリル)であり、ここで前記インドリルは、所望により−CH2CO2Hで置換されていてもよい;
R9は、水素、−(CH2)2NH2、−(CH2)4NH2、−CH2OHおよび−CH2C(O)NH2から選択され;
R11およびR12は、−(CH2)3CH3であり;および
R13は、メチル、−CH2OH、−CH2CH(CH3)2および−(CH2)2CO2Hから選択され;ならびに
Aは、
から選択され;
nは、0または1であり;
mは、1または2であり;
zは、1または2であり;
zが1である場合、wは2であり;
zが2である場合、wは1または2であり;
pが、0、1または2であり;
R14およびR15は、独立して、水素およびメチルから選択され;および
Rzは、水素および−C(O)NHR16から選択され;式中、R16は、水素、−CHR17C(O)NH2、−CHR17C(O)NHCHR18C(O)NH2および−CHR17C(O)NHCHR18C(O)NHCH2C(O)NH2から選択される;ここでR17は、水素および−CH2OHから選択され;ここでR18は、水素およびメチルから選択される;
Rvは、水素であるか、または天然アミノ酸側鎖であり;
Rc、Rf、Rh、RiおよびRmは、水素であり;
Rnは、水素またはメチルであるか、またはRvおよびRnは、ピロリジン環を形成し;
Ra、Re、RjおよびRkは、独立して、水素およびメチルから選択され;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12およびR13は、独立して天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖から選択されるか、または以下に記載したような対応する隣接するR基と共に環を形成し;
ReおよびRkは、対応する隣接するR基およびそれらが結合している原子と共に、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を各々形成しており;ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基で所望により置換されていてもよい;
Rbは、メチルであるか、またはRbおよびR2は、それらに結合した原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成しており;ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基で所望により置換されていてもよい;
Rdは、水素またはメチルであるか、あるいはRdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成することができる;ここで、各環は、所望により、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシおよびフェニルから独立して選択される1〜4つの基で置換されていてもよい;
Rgは、水素またはメチルであるか、あるいはRgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成することができる;ここで、各環は、アミノ、所望によりハロ基で置換されていてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、所望によりメトキシ基で置換されていてもよいイソキノリニルオキシ、所望によりハロ基で置換されていてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリル;ここで、前記ピロリジンおよび前記ピペリジン環は、所望により、シクロヘキシル、フェニルまたはインドール基と縮合されていてもよい;
RLはメチルであるか、あるいはRLおよびR12は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジンおよびピロリジンから選択される環を形成し、ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基により所望により置換されていてもよい]
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
C2−C7アルケニル、C1−C3アルコキシC1−C3アルキル、C1−C6アルコキシカルボニルC1−C3アルキル、C1−C7アルキル、C1−C3アルキルスルファニルC1−C3アルキル、C1−C3アルキルスルホニルC1−C3アルキル、アミドC1−C3アルキル、アミノC1−C3アルキル、アザインドリルC1−C3アルキル、ベンゾチアゾリルC1−C3アルキル、ベンゾチエニルC1−C3アルキル、ベンジルオキシC1−C3アルキル、カルボキシC1−C3アルキル、シアノC1−C3アルキル、C3−C6シクロアルキルC1−C3アルキル、ジフェニルメチル、フラニルC1−C3アルキル、ハロC1−C3アルキル、ヒドロキシC1−C3アルキル、イミダゾリルC1−C3アルキル、ナフチルC1−C3アルキル、ピラニルC1−C3アルキル、ピリジニルC1−C3アルキル、テトラヒドロフリルC1−C3アルキル、チアゾリルC1−C3アルキル、チエニルC1−C3アルキル;
ビフェニルC1−C3アルキル(ここで、ビフェニルは、場合によりC1−C3アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシおよびニトロから選択される基で置換されていてよい);
インドリルC1−C3アルキル(ここで、インドリル部分は、場合によりC1−C3アルキル、カルボキシC1−C3アルキル、ハロ、ヒドロキシ、ニトロおよびフェニルから選択される1個の基で置換されていてよく、該フェニルは、場合によりC1−C3アルコキシ、C1−C3アルキルおよびハロから独立して選択される1個、2個または3個の基でさらに置換されていてよい);
NRaRb(C1−C7アルキル)(ここで、RaおよびRbは、独立して水素、C2−C4アルケニルオキシカルボニル、C1−C3アルコキシカルボニル、C1−C3アルキル、C1−C3アルキルカルボニル、C3−C6シクロアルキルカルボニル、フラニルカルボニル、フェニルC1−C3アルキル、フェニルカルボニル、ピラニルカルボニル、テトラヒドロフリルカルボニルおよびチエニルカルボニルから選択される。アルキルリンカーが1個を超える炭素を含むならば、さらなるNRaRb基が鎖上にあり得る);
NRcRdカルボニルC1−C3アルキル(ここで、RcおよびRdは、水素、C3−C4アルケニル、C1−C3アルキル、フェニルC1−C3アルキルおよびトリフェニルメチルから独立して選択される);
フェニルC1−C3アルキル(ここで、フェニル部分は、場合によりC1−C4アルコキシ、C1−C4アルキル、C1−C3アルキルスルホニルアミノ、アミド、アミノ、アミノC1−C3アルキル、アミノスルホニル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロC1−C3アルキル、ヒドロキシ、−NC(NH2)2、ニトロおよび−OP(O)(OH)2から独立して選択される1個、2個、3個、4個または5個の基で置換されていてよい);および
フェノキシC1−C3アルキル(ここで、フェニルは、場合によりC1−C4アルコキシ、C1−C4アルキル、C1−C3アルキルスルホニルアミノ、アミド、アミノ、アミノC1−C3アルキル、アミノスルホニル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロC1−C3アルキル、ヒドロキシおよびニトロから選択される1個、2個、3個、4個または5個の基で置換されていてよい)。
本明細書で使用する用語“アミド”は、−C(O)NH2をいう。
本明細書で使用する用語“アミノ”は、−NH2をいう。
本明細書で使用する用語“カルボキシ”は、−CO2Hをいう。
本明細書で使用する用語“シアノ”は、−CNをいう。
本明細書で使用する用語“ヒドロキシ”は、−OHをいう。
本発明はまた少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%および少なくとも約100%まで、参照抗PD−L1抗体(MDX−1105)の結合と競合できる大環状ペプチドに関する。このような大環状ペプチドは、PD−L1と特異的に結合する限り、変異体、保存的置換、機能的置換および欠失形態を含み、1個以上の本明細書に開示する大環状ペプチドと構造相同性であり得る。例えば、大環状ペプチドがPD−L1の参照抗PD−L1抗体と同じ領域に実質的に結合するならば、大環状ペプチドは、抗PD−L1モノクローナル抗体が結合するPD−L1エピトープと少なくとも重複するPD−L1のエピトープと結合するはずである。重複領域は、アミノ酸残基から数百アミノ酸残基の範囲であり得る。そうであれば、大環状ペプチドは、抗PD−L1モノクローナル抗体のPD−L1への結合と競合および/または遮断し、それにより抗PD−L1モノクローナル抗体のPD−L1への結合を、競合アッセイにおいて好ましくは少なくとも約50%減少させるはずである。
本発明は、本発明の1個または大環状ペプチドを組み合わせて含み、薬学的に許容される担体と共に製剤された組成物、例えば、医薬組成物を提供する。このような組成物は、本発明の1個または複数の(2以上の異なる)大環状ペプチドまたは免疫コンジュゲートまたは二重特異性分子を含み得る。例えば、本発明の医薬組成物は、標的抗原上の異なるエピトープに結合するか、または相補的活性を有する、大環状ペプチド(または免疫コンジュゲートまたは二重特異性物)の組み合わせを含み得る。
本発明の大環状ペプチド、組成物および方法は、例えば、PD−L1検出またはPD−L1遮断による免疫応答を含む、多くのインビトロおよびインビボ有用性を有する。例えば、これらの分子を、培養細胞に、インビトロまたはエクスビボでまたはヒト対象に、例えば、インビボで投与し、多様な状況での免疫を増強する。したがって、一つの面において、本発明は、本発明の大環状ペプチドを、対象における免疫応答が修飾されるように対象に投与することを特徴とする、対象における免疫応答を修飾する方法を提供する。好ましくは、応答は、増強、刺激または上方制御される。他の点において、大環状ペプチドは、抗カニクイザル、抗マウスおよび/または抗マーモット結合および治療活性を有し得る。
大環状ペプチドによるPD−1の遮断は、患者における癌細胞に対する免疫応答を増強できる。PD−1に対するリガンドであるPD−L1は、正常なヒトの細胞では発現されないが、多様なヒトの癌において多く存在する(Dong et al., Nat. Med., 8:787-789(2002))。PD−1とPD−L1の相互作用は、腫瘍浸潤性リンパ球減少、T細胞受容体仲介増殖減少および癌細胞の免疫回避をもたらす(Dong et al., J. Mol. Med., 81:281-287(2003); Blank et al., Cancer Immunol. Immunother., 54:307-314(2005); Konishi et al., Clin. Cancer Res., 10:5094-5100(2004))。免疫抑制は、PD−1とPD−L1の局所相互作用の阻害により逆転され得て、PD−1とPD−L2の相互作用が同様に遮断されたとき、この効果は相加的である(Iwai et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 99:12293-12297(2002); Brown et al., J. Immunol., 170:1257-1266(2003))。先の研究では、T細胞増殖が、PD−1のPD−L1への相互作用の阻害により回復できることが示されているが、PD−1/PD−L1相互作用の遮断によるインビボ癌腫瘍増殖に対する直接の効果についての報告はない。一つの面において、本発明は、癌性腫瘍の増殖が阻害されるように大環状ペプチドを使用するインビボでの対象の処置に関する。大環状ペプチドを、癌性腫瘍増殖阻害のために単独で使用してもよい。あるいは、大環状ペプチドを、下に記戴するとおり、他の免疫原性剤、標準的癌処置または他の大環状ペプチドと組み合わせて使用してもよい。
本発明の他の方法は、特定の毒素または病原体に曝されている患者の処置に使用される。したがって、本発明の他の面は、対象の感染性疾患が処置されるように、対象に本発明の大環状ペプチドを投与することを特徴とする、対象における感染性疾患の処置方法を提供する。
大環状ペプチドは自己免疫応答を誘発および増幅する。実際、腫瘍細胞およびペプチドワクチンを使用した抗腫瘍応答の誘発は、多くの抗腫瘍応答が抗自己反応性を含むことを明らかにする(van Elsas et al., supraにおける抗CTLA−4+GM−CSF修飾B16黒色腫で観察される色素脱失;Trp−2ワクチン接種マウスにおける色素脱失(Overwijk, W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96:2982-2987(1999));TRAMP腫瘍細胞ワクチンにより誘発される自己免疫性前立腺炎(Hurwitz, A., supra(2000))、ヒト臨床試験において見られる黒色腫ペプチド抗原ワクチン接種および白斑症(Rosenberg, S.A. et al., J. Immunother. Emphasis Tumor Immunol., 19(1):81-84(1996))。
大環状ペプチドを、抗PD−1大環状分子と目的の抗原(例えば、ワクチン)の共投与により抗原特異的免疫応答を刺激するために使用し得る。従って、他の面において、本発明は、対象における抗原に対する免疫応答を増強する方法であって、対象に(i)抗原;および(ii)対象における抗原に対する免疫応答が増強されるような抗PD−1大環状分子を投与することを特徴とする、方法が提供される。抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原または病原体からの抗原であり得る。このような抗原の非限定的例は、上記の腫瘍抗原(または腫瘍ワクチン)または上記のウイルス、細菌または他の病原体からの抗原を含む。
本発明の大環状ペプチドと他のPD−L1アンタゴニストおよび/または別の免疫修飾剤の組み合わせは、過増殖性疾患に対する免疫応答の増強に有用である。例えば、これらの分子を、インビトロまたはエクスビボで培養中の細胞またはヒト対象に、例えばインビボで投与して、多様な状況における免疫を増強する。したがって、一つの面において、本発明は、本発明の大環状ペプチドを、対象における免疫応答が修飾されるように対象に投与することを特徴とする、対象における免疫応答を修飾する方法を提供する。好ましくは、応答は、増強、刺激または上方制御される。他の態様において、本発明は、対象に本発明の大環状ペプチドおよび別の免疫修飾剤の治療以下の投与量を投与することを特徴とする、免疫刺激性治療剤での過増殖性疾患の処置と関係する有害事象を変える方法を提供する。
適切な式Iのペプチドまたはより具体的に本明細書に記戴する大環状ペプチドを、化合物の単独および/または許容される担体との混合物で医薬製剤の形態で糖尿病および他の関連疾患の処置のために患者に投与できる。糖尿病処置の当業者は、このような処置を必要とするヒトを含む哺乳動物への化合物の投与量および投与経路を容易に決定できる。投与経路は、経口、口腔内、直腸、経皮、バッカル、鼻腔内、肺、皮下、筋肉内、皮内、舌下、結腸内、眼内、静脈内または腸管投与を含むが、これらに限定されない。化合物を、認可された調剤行為に基づき、投与経路に従って製剤する(Fingl et al., in The Pharmacological Basis of Therapeutics, Chapter 1, p.1(1975); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co., Easton, PA(1990))。
カプセル
多数の単位カプセルを、100mgの粉末活性成分、150mgのラクトース、50mgのセルロースおよび6mgのステアリン酸マグネシウムを、標準的な2ピースの硬ゼラチンカプセルに充填することにより製造できる。
ダイズ油、綿実油またはオリーブ油のような消化可能油中の活性成分の混合物を製造し、ゼラチンに陽圧式排出ポンプで充填して、100mgの活性成分を含む軟ゼラチンカプセルを製造する。カプセルは、洗浄および乾燥されるべきである。
錠剤を、投与量単位が、例えば100mgの活性成分、0.2mgのコロイド状二酸化ケイ素、5mgのステアリン酸マグネシウム、275mgの微結晶セルロース、11mgのデンプンおよび98.8mgのラクトースであるように、慣用の方法で製し得る。嗜好性を高めるため、または吸収を遅延するために適当なコーティングを施してよい。
本明細書に記戴するペプチド組成物の注射可能製剤は、規制機関により承認されているような添加物の使用を必要としても、または必要としない可能性がある。これらの添加物は、溶媒および共溶媒、可溶化、乳化または濃化剤、キレート剤、抗酸化剤および還元剤、抗微生物防腐剤、緩衝液およびpH調節剤、充填剤、保護剤および張性調節剤および特殊な添加物を含むが、これらに限定されない。注射可能製剤は、無菌、無発熱物質、溶液の場合、無粒状物質でなければならない。
水性懸濁液を、例えば、各々5mLが100mgの微粉化活性成分、20mgのナトリウムカルボキシメチルセルロース、5mgの安息香酸ナトリウム、1.0gのソルビトール溶液、U.S.P.および0.025mLのバニリンまたは別の味の良い風味剤を含む、経口および/または非経腸投与用として製造できる。
注射による投与に適する徐放性非経腸組成物は、例えば、適切な生分解性ポリマーを溶媒に溶解し、活性剤をポリマー溶液に添加して導入し、溶媒をマトリクスから除去し、それによりマトリクス中に活性剤が分散したポリマーのマトリクスを形成させることにより製造され得る。
本発明の大環状ペプチドの化学合成は、段階的固相合成、配座的に支援される再ライゲーションを経るペプチドフラグメントの半合成、クローン化または合成ペプチドセグメントの酵素ライゲーションおよび化学ライゲーションを含めた多様な当該技術分野において承認されている方法を使用して合成できる。本明細書に記戴する大環状ペプチドおよびそのアナログの好ましい合成方法は、Chan, W.C. et al., eds., Fmoc Solid Phase Synthesis, Oxford University Press, Oxford(2000); Barany, G. et al., The Peptides:Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 2:“Special Methods in Peptide Synthesis, Part A”, pp. 3-284, Gross, E. et al., eds., Academic Press, New York(1980);およびStewart, J.M. et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, 2nd Edition, Pierce Chemical Co., Rockford, IL(1984)に記戴されているような、種々の固相技術を使用する化学合成である。好ましいストラテジーは、α−アミノ基を一時的に保護するためのFmoc(9−フルオレニルメチルメチル−オキシカルボニル)基と、アミノ酸側鎖を一時的に保護するためのtert−ブチル基の組み合わせである(例えばtherton, E. et al., “The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group”, in The Peptides:Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 9:"Special Methods in Peptide Synthesis, Part C", pp. 1-38, Undenfriend, S. et al., eds., Academic Press, San Diego(1987))。
質量スペクトル分析法:“ESI−MS(+)”とは、正イオンモードで実施したエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示す;“ESI−MS(−)”とは、負イオンモードで実施したエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示す;“ESI−HRMS(+)”とは、正イオンモードで実施された高分解エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示す;“ESI−HRMS(−)”とは、負イオンモードで実施した高分解エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示す。検出された質量は、“m/z”単位表記に従って報告された。1000より大きい正確な質量を有する化合物は、二重電荷イオンまたは三重電荷イオンとして高頻度で検出された。
質量スペクトル分析法:“ESI−MS(+)”とは、正イオンモードで実施したエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示す;“ESI−MS(−)”とは、負イオンモードで実施したエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示す;“ESI−HRMS(+)”とは、正イオンモードで実施された高分解エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示す;“ESI−HRMS(−)”とは、負イオンモードで実施した高分解エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析法を示す。検出された質量は、“m/z”単位表記に従って報告された。1000より大きい正確な質量を有する化合物は、二重電荷イオンまたは三重電荷イオンとして高頻度で検出された。
カラム:Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10mM 酢酸アンモニウムを含む);温度:50℃;グラジエント:0%B、3分かけて0〜100%B、次いで0.5分間100%Bで保持;流量:1mL/分;検出:220nmでUV。
カラム:Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10mM 酢酸アンモニウムを含む);温度:50℃;グラジエント:0%B、3分かけて0〜100%B、次いで0.5分間100%Bで保持;流量:0.5 mL/分;検出:220nmでUV。
カラム:Wsters Aquity BEH C18 2.1 X 50 mm 1.7 μm粒子;移動相A:水(0.05% TFAを含む);移動相B:アセトニトリル(0.05% TFA);温度:40℃;グラジエント:0%B、3分かけて0〜100%B、次いで0.5分間100%Bで保持;流量:0.8 mL/分;検出:220nmでUV。
カラム:Wsters Aquity BEH C18 2.1 X 50 mm 1.7 μm粒子;移動相A:水(0.05% TFAを含む);移動相B:メタノール(0.05% TFAを含む);温度:40℃;グラジエント:0%B、3分かけて0〜100%B、次いで0.5分間100%Bで保持;流量:0.8 mL/分;検出:220nmでUV。
Prelude法A:
全ての操作を、Preludeペプチド合成器(Protein Technologies)でオートメーション下において行なった。記載が無ければ、全ての方法を、底部フリットを備えた10mLポリプロピレンチューブ内で実施した;反応スケールが0.100 mmolを超える場合、底部フリットを備えた40mL ポリプロピレンチューブを使用した。このチューブを、チューブの底部と上部の双方を介してPreludeペプチド合成器と連結させた。DMFおよびDCMを、チューブ上部から加えて、このチューブの両サイドを均一に洗い落とした。残りの試薬を、チューブの底から加えて、フリットを通して樹脂と接触させる。全ての溶液を、チューブの底から除去する。“周期的攪拌”とは、底部フリットからのN2ガスの短時間のパルスを意味する;このパルスは、おおよそ5秒続き、30秒毎におこる。一般的には、アミノ酸溶液を、調製してから一週間を過ぎて使用しない。HATU溶液を、調整5日以内で使用する。DMF=ジメチルホルムアミド;HATU=1−[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]−1H−1,2,3−トリアゾロ[4,5−b]ピリジニウム 3−オキシドヘキサフルオロリン酸塩;DIPEA=ジイソプロピルエチルアミン;TIPS=トリイソプロピルシラン;DTT=DL−ジチオスレイトール。使用した樹脂は、2−クロロオトリチルクロリド樹脂(1.42mmol/g ローディング)。使用される一般的なアミノ酸を、下記に列挙して、側鎖保護基は括弧内に示した。Fmoc−Ala−OH;Fmoc−Arg(Pbf)−OH;Fmoc−Asn(Trt)−OH;Fmoc−Asp(OtBu)−OH;Fmoc−Bzt−OH;Fmoc−Cys(Trt)−OH;Fmoc−Dab(Boc)−OH;Fmoc−Dap(Boc)−OH;Fmoc−Gln(Trt)−OH;Fmoc−Gly−OH;Fmoc−His(Trt)−OH;Fmoc−Hyp(tBu)−OH;Fmoc−Ile−OH;Fmoc−Leu−OH;Fmoc−Lys(Boc)−OH;Fmoc−Nle−OH;Fmoc−Met−OH;Fmoc−[N−Me]Ala−OH;Fmoc−[N−Me]Nle−OH;Fmoc−Phe−OH;Fmoc−Pro−OH;Fmoc−Sar−OH;Fmoc−Ser(tBu)−OH;Fmoc−Thr(tBu)−OH;Fmoc−Trp(Boc)−OH;Fmoc−Tyr(tBu)−OH;Fmoc−Val−OH。
ポリプロピレン固相反応容器(10mL)に、2−クロロトリチルクロリド樹脂(100 mg, 1.42 mmol/g ローディング)を加えた。反応容器を、Preludeペプチド合成機器上においた。反応容器に、DCM中のFmoc-保護C末端アミノ酸(0.1 mmol)およびジイソプロピルエチルアミン溶液を手動で加えた。反応溶液に、メタノール(0.20 mL)を加えた。この混合物を、15分間の反応容器の底部からのN2バブリングにより、周期的に攪拌して、溶媒をフリットから排出した。この樹脂を、以下のように連続して3回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部に加えて、得られる混合物を90秒周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに周期的に3回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を容器の上部に加えて、得られる混合物を90秒間周期的に攪拌して、溶液をフリットから排出した。樹脂を、下記のとおりに連続して2回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部に加えて、得られる混合物を90秒周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。樹脂を、下記のとおりに連続して3回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を容器の上部に加えて、得られる混合物を90秒間周期的に攪拌して、その後この溶液をフリットから排出した。
先の工程からの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v, 5.0mL)を加えた。混合物を、3分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v, 5.0mL)を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。樹脂を、下記の通りに連続的に6回洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、溶液をフリットから排出した。反応容器に、アミノ酸(DMF中で0.2M, 1.0mL, 2等量)、次いでHATU(DMF中の0.2M, 1.0mL, 2等量)を加えて、最終的にDIPEA(DMF中の0.8M, 0.5mL, 4等量)を加えた。混合物を、周期的に15分間攪拌して、次いで反応溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに4回連続的に洗った:各洗いに対して、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。エンドキャップ工程を、下記の通りに行なった:反応容器に、DMF(0.65 mL)、次いでDIPEA(0.8M/DMF, 0.45 mL)、次いで無水酢酸(1.0M/DMF, 1.45 mL)の溶液を加えた。混合物を、周期的に10分間攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。樹脂を下記の通りに4回連続的に洗った:各洗いに対して、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、溶液をフリットから排出した。得られる樹脂を、次工程に直接使用した。
先の工程からの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v, 2.0 mL)の溶液を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いでこの溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v, 5.0mL)溶液を加えた。混合物を、3分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに6回連続的に洗った:各洗いに対して、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、アミノ酸(DMF中で0.2M, 1.0 mL,2等量)、次いでHATU(DMF中で0.2M, 1.0mL, 2等量)、最終的にDIPEA(DMF中で0.8M,0.5mL,4等量)を加えた。混合物を、周期的に15分間攪拌して、次いで反応溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに2回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に30秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、アミノ酸(0.2 M/DMF, 1.0 mL, 2等量)、次いでHATU(0.2M/DMF, 1.0 mL, 2等量)、最終的にDIPEA(0.8M/DMF, 0.5 mL, 4等量)を加えた。混合物を、15分間周期的に攪拌して、次いで反応溶液をフリットから排出した。樹脂を、下記の通り洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、溶液をフリットから排出した。エンドキャップ工程を、下記の通りに行なった:反応容器に、DMF(0.65 mL)、次いでDIPEA(0.8M/DMF, 0.45 mL)、次いで無水酢酸(1.0M/DMF, 1.45 mL)を加えた。混合物を、10分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。樹脂を、4回連続的に洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を90秒間周期的に攪拌して、溶液をフリットから排出した。得られる樹脂を、次工程に直接使用した。
この方法のコレクションは、注記した以外“Prelude方法A”のものと同一である。全ての方法について、SymphonyXペプチド合成器(Protein Technologies)を、Preludeペプチド合成器の代わりに使用して、全ての試薬を、反応容器の上部から加えた。
ペプチドカップリング工程に使用されるペプチド合成器に拘わらず、樹脂ローディング工程は、常に“Prelude方法A:樹脂ローディング法”に従いPrelude合成器上で行なった。
この方法は、DIPEA溶液の濃度が0.4 Mであり、この溶液の1.0 mLが反応に移行されることを除いて“Prelude法A:単カップリング法”と同一である。また、エンドキャップ工程に使用される試薬は、DIPEA(0.4 M, 1.0 mL)に懸濁された樹脂に加えられた溶媒不含の無水酢酸(1.0 mL)であった。
この方法は、DIPEA溶液の濃度が0.4Mであり、この溶液の1.0 mLが反応に移行されることを除いて“Prelude法A:二重カップリング法”と同一である。また、エンドキャップ工程に使用される試薬は、DIPEA(0.4 M, 1.0 mL)に懸濁された樹脂に加えられた溶媒不含の無水酢酸(1.0 mL)であった。
“一般合成法A”は、本明細書に記述した環状ペプチドを得るために使用した方法の一般手順である。この一般方法の目的のために、“Symphony法A”の方法は、“Prelude法A”の方法と互換性がある。この方法は、記戴した体積をスケールの倍数で調整することにより、0.100mmolのスケールを超えて拡大できる。
“Prelude法A:樹脂ローディング法”を、0.100 mmolのアミノ酸を用いて行なった。次いで、一連のアミノ酸カップリングを、樹脂結合ペプチドのN末端が、第一級アミンである場合には“Prelude法A:単カップリング法”に従って、または樹脂結合ペプチドのN末端が二級アミンである場合には“Prelude法A:二重カップリング法”に従って、Prelude上で順に実施した。
“一般合成法A”を行なった。自動化シークエンスからの樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。反応溶液に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、周期的に4分間攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。樹脂を、下記のとおりに5回連続的に洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を90秒間周期的に攪拌して、溶液をフリットから排出した。樹脂を、以下の通りに連続的に洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、90秒間周期的に攪拌して、溶液をフリットから排出した。次いで樹脂を、DCM(8 mL)を用いて、15 mLバイアルに直ちに移した。溶液に、ヘキサフルオロイソプロパノール(2 mL)を加えた。樹脂は、直ちに深赤色に変わった;溶液は無色のままであった。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで室温で15分間静置して、濾過した。濾液を、15 mLのバイアルに移して、N2ストリームの下で濃縮して、固体残留物である中間体5001Aを得た。
上記で製造した全ての中間体5001Aを入れた15 mLのバイアルに、DMF(0.50 mL)、次いでHATU(45.6 mg, 0.120 mmol)、次いでDIPEA(0.114 mL, 0.650 mmol)を加えた。黄色の溶液を30分間攪拌した。溶液を、以下の条件下にてHPLC精製に付した:カラム:Luna C18, 30 x 100 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(0.1% TFAを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(0.1% TFAを含む);グラジエント:10分かけて60〜100% B、次いで10分間100%Bで保持;流量:42 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させて、白色固体である中間体5001Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLのガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調整した。上記で製造した全ての中間体5001Bを入れた1ドラムバイアルに、“脱保護溶液”(1.0 mL)を加えた。溶液を、500rpmにて作動しているシェーカーにおいて1.5時間混合して、次いでEt2O(20 mL)を入れた25 mL試験管中に注ぎ入れた。少量の白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離した;液体をデンキャンテーションした。固体をEt2O(10 mL)に入れた。混合物を遠心分離して、液体をデンキャンテーションした。得られる残留物を、MeOHに溶解して、粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて15〜55%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は0.5 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は100%であった。
分析条件A:保持時間=1.49分;ESI−MS(+) m/z 864.2(M+2H)
分析条件B:保持時間=2.73分;ESI−MS(+) m/z 863.8(M+2H)
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:863.4774 実測値:863.4768.
“一般合成法A”を行なった。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。次いで樹脂を、直ちにDCM(8 mL)を用いて、15 mLのバイアルに移した。この溶液に、ヘキサフルオロイソプロパノール(2 mL)を加えた。樹脂は、直ちに深赤色に変わった;溶液は無色のままであった。混合物を、手動により短時間で攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いで濾過した。濾液を、15 mLバイアルに移して、N2ストリーム下で濃縮して、固体残留物の中間体5002Aを得た。
上記で製造した全ての中間体5002Aを入れた15 mLのバイアルに、DMF(0.50 mL)、次いでHATU(45.6 mg, 0.120 mmol)、次いでDIPEA(0.114 mL, 0.650 mmol)を加えた。黄色溶液を、30分間攪拌した。溶液を、以下の条件下でHPLC精製に直接付した:カラム:Luna C18, 30 x 100 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(0.1% TFAを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(0.1% TFAを含む);グラジエント:10分かけて60〜100% B、次いで10分間100%Bで保持;流量:42 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させて、白色固体である中間体5002Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内でトリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調整した。上記に製造した全ての中間体5002Bを入れた1ドラムバイアルに、“脱保護溶液”(1.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1.0時間混合して、次いでEt2O(15 mL)を入れた25 mLの試験管に注ぎ入れた。少量の白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離した;この溶液をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この溶液をデキャンテーションした。得られる残留物を、MeOHに溶解して、この溶液にDIPEA(0.050 mL)を加えた。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて45〜85%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は1.7 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は95%であった。
分析条件A:保持時間=1.69分;ESI-MS(−) m/z 891.3(M−2H)
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:892.4801 実測値:892.4796.
“一般合成法A”を、45 mL反応容器(RV)を用いて0.200 mmolスケールにて行なった。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応溶液に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(4.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(4.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。RVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通して濾過した。濾液を、25 mLの試験管に移して、遠心エバポレーションにより濃縮して、中間体5003Aを得た。
上記で製造した全ての中間体5003Aを入れた25 mL試験管に、DMF(2.0 mL)、次いでHATU(84 mg, 0.220 mmol)、次いでDIPEA(0.350 mL, 2.00 mmol)を加えた。試験管を、500 rpmで作動しているシェーカーに30分間置いた。溶液を、次いでPhMeで20 mLの体積に希釈して、この溶液を、次いで遠心エバポレーションにより濃縮して、固体残留物である粗製中間体5003Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル中でトリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調製した。上記製造した全ての粗製中間体5003Bを入れた25 mL試験管に、“脱保護溶液”(2.0 mL)を入れた。この溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1.0時間混合して、次いでEt2O(15 mL)の添加により希釈した。混合物として形成した白色沈殿物を完全に混合した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。この混合物を遠心分離にかけて、液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、水:MeOH:MeCN(1 mL:1 mL:1 mL)に溶解して、この溶液を炭酸水素アンモニウム(約25 mg)に加えた。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm 粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて50〜90%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて20〜60%B、次いで3分間100%Bで保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は1.0 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は100%であった。分析条件A:保持時間=1.93 分;ESI−MS(+) m/z 846.7(M+2H);ESI−HRMS(+) m/z:計算値:845.9588 実測値:845.9576.
“一般合成法A”を、45 mLの反応容器(RV)を用いて0.200 mmolのスケールで行なった。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応溶液に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(4.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(4.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。RVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を、25 mLの試験管に移して、遠心エバポレーションにより濃縮して、中間体5004Aを得た。
上記で製造した全ての中間体5004Aを入れた25 mLの試験管に、DMF(2.0 mL)、次いでDIPEA(0.350 mL, 2.00 mmol)、次いでHATU(84 mg, 0.220 mmol)/DMF(0.5 mL)の溶液を加えた。試験管を、500rpmで2時間作動するシェーカーに置いた。次いで、この溶液を、20 mLの体積までPhMeで希釈して、この溶液を、遠心エバポレーションにより濃縮して、固体残留物である粗製中間体5004Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調整した。上記で製造した粗製中間体5004Bの全てを入れた25 mL試験管に、“脱保護溶液”(2.0 mL)を加えた。この溶液を、500 rpmで作動しているシェーカー上で1時間混合して、次いでEt2O(15 mL)の添加により希釈した。混合物を十分混合したときに白色沈殿物が形成した。混合物を遠心分離した;この溶液をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離にかけて、溶液をデキャンテーションした。得られる残留物を、溶液を、水:MeOH:MeCN(1 mL:1 mL:1 mL)に溶解して、溶液に、炭酸水素アンモニウムを加えた(app. 100 mg)。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて15〜55%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて20〜60%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は5.5 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は100%であった。分析条件A:保持時間=1.84 分;ESI−MS(+) m/z 874.4(M+2H)
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:874.4696 実測値:874.4679.
“一般合成法A”を、45 mLの反応容器(RV)を用いて0.200 mmolのスケールで行なった。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応溶液に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(4. 0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(4.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。RVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を、25 mLの試験管に移して、遠心エバポレーションにより濃縮して、中間体5005Aを得た。
上記で製造した全ての中間体5005Aを入れた25 mL試験管に、DMF(2.0 mL)、次いでDIPEA(0.350 mL, 2.00 mmol)、次いでHATU溶液(84 mg, 0.220 mmol)/DMF(0.5 mL)を加えた。試験管を、500 rpmで作動しているシェーカーで2時間置いた。溶液を、次いで20 mLの体積にPhMeで希釈して、次いでこの溶液を遠心エバポレーションにより濃縮して、固体残留物である粗製中間体5005Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内でトリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調製した。上記で製造した全ての粗製中間体5005Bを入れた25 mL試験管に、“脱保護溶液”(2.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1.0時間混合して、次いでEt2O(15 mL)の添加により希釈した。この混合物をしっかりと混合するにつれて白色沈殿物が形成した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。この混合物を遠心分離にかけて、この液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、水:MeOH:MeCN(1 mL:1 mL:1 mL)に溶解して、溶液を炭酸水素アンモニウム(約100 mg)に溶解した。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて50〜90%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて20〜60%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は4.5 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は95%であった。分析条件A:保持時間=1.84分;ESI−MS(+) m/z 881.5(M+2H);ESI−HRMS(+) m/z:計算値:881.4774 実測値:881.4761.
“一般合成法A”を、45 mLの反応容器(RV)を用いて0.200 mmolのスケールで行なった。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応溶液に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(4.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(4.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。RVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を保持した。樹脂を含有するRVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を合わせて、遠心エバポレーションにより濃縮して、中間体5006Aを得た。
上記で製造した中間体5006Aの全てを入れた7 mLのバイアルに、DMF(2.0 mL)、次いでDIPEA(0.350 mL, 2.00 mmol)、次いでHATU(84 mg, 0.220 mmol)を加えた。試験管を、500 rpmにて作動しているシェーカーに1時間置いた。溶液を、N2ストリーム下で濃縮して、次いで高真空下でさらに濃縮して、琥珀色の固体として粗製中間体5006Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調整した。上記で製造した粗製中間体5006Bの全てを入れたバイアルに、“脱保護溶液”(2.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1時間混合して、次いでEt2O(15 mL)の添加により希釈した。混合物を完全に混合するにつれて白色沈殿物が形成した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、水:MeOH:MeCN(1 mL:1 mL:1 mL)に溶解して、この溶液に、炭酸水素アンモニウム(app. 25 mg)を加えた。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて45〜85%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて10〜50%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は6.4 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は100%であった。分析条件A:保持時間=1.77分;ESI−MS(+) m/z 870.1(M+2H);分析条件C:保持時間=1.44分;ESI−MS(+) m/z 871.2(M+2H).
“一般合成法A”を、45 mLの反応容器(RV)を用いて0.200 mmolのスケールで行なった。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応溶液に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(4.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(4.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。RVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を保持した。樹脂を含有するRVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を合わせて、遠心エバポレーションにより濃縮して、中間体5007Aを得た。
上記で製造した中間体5007Aの全てを入れた7 mLのバイアルに、DMF(2.0 mL)、次いでDIPEA(0.350 mL, 2.00 mmol)、次いでHATU(84 mg, 0.220 mmol)を加えた。試験管を、500 rpmで作動しているシェーカーに1時間おいた。溶液を、N2ストリーム下で濃縮して、次いで高真空下でさらに濃縮して、琥珀色の固体である粗製中間体5007Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調整した。上記で製造した粗製中間体5007Bの全てを入れたバイアルに、“脱保護溶液”(2.0 mL)を加えた。この溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1時間混合して、次いでEt2O(15 mL)の添加により希釈した。この混合物を完全に混合するにつれて白色沈殿物が形成した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、水:MeOH:MeCN(1 mL:1 mL:1 mL)に溶解して、この溶液に炭酸水素アンモニウムを加えた(app. 25 mg)。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて15〜55%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて10〜50%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は6.5 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は97%であった。分析条件A:保持時間=1.70分;ESI−MS(+) m/z 871.0(M+2H).
“一般合成法A”を、45 mLの反応容器(RV)を用いて0.200 mmolのスケールで行なった。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応溶液に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(4.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(4.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。RVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を保持した。樹脂を含有するRVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を合わせて、遠心エバポレーションにより濃縮して、中間体5008Aを得た。
上記で製造した中間体5008Aの全てを入れた7 mL バイアルに、DMF(2.0 mL)、次いでDIPEA(0.350 mL, 2.00 mmol)、次いでHATU(84 mg, 0.220 mmol)を加えた。試験管を、500 rpmで作動しているシェーカーに1時間置いた。溶液を、N2ストリーム下にて濃縮して、次いで、高真空下において更に濃縮して、琥珀色の固体である粗製中間体5008Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調整した。上記で製造した粗製中間体5008Bの全てを入れたバイアルに、“脱保護溶液”(2.0 mL)を加えた。この溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1時間混合して、次いでEt2O(15 mL)の添加により希釈した。混合物が完全に混合されるにつれて、白色沈殿物が形成した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、水:MeOH:MeCN(1 mL:1 mL:1 mL)に溶解して、この溶液に、炭酸水素アンモニウムを加えた(app. 25 mg)。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(0.1% トリフルオロ酢酸を含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(0.1% トリフルオロ酢酸を含む);グラジエント:30分かけて15〜55%B、次いで4分間100% Bで保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて45〜85%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は5.1 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は98%であった。分析条件A:保持時間=1.75分;ESI−MS(+) m/z 883.7(M+2H);分析条件B:保持時間=2.73分;ESI−MS(+) m/z 884.3(M+2H).
“一般合成法A”を、45 mLの反応容器(RV)を用いて0.200 mmolのスケールで行なった。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応溶液に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 4.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(4. 0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(4.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。RVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を保持した。樹脂を含有するRVに、DCM(16 mL)、続いてヘキサフルオロイソプロパノール(4 mL)を加えた。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いでRVの底部フリットを通りして濾過した。濾液を合わせて、遠心エバポレーションにより濃縮して、中間体5009Aを得た。
中間体5009Aの全てを入れた7mL バイアルに、DMF(2.0 mL)、次いでDIPEA(0.350 mL,2.00 mmol)、次いでHATU(84 mg,0.220 mmol)を加えた。試験管を、500 rpmで作動しているシェーカーに1時間置いた。溶液を、N2ストリーム下にて濃縮して、次いで高真空下において更に濃縮して、琥珀色の固体の粗製中間体5009Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(22 mL)、フェノール(1.325 g)、水(1.25 mL)、TIPS(0.5 mL)およびDTT(0.25 g)を合わせて調整した。上記で製造した粗製中間体5009Bの全てを入れたバイアルに、“脱保護溶液”(2.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1時間混合して、次いでEt2O(15 mL)の添加により希釈した。混合物が完全に混合されるにつれて白色沈殿物を形成した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、水:MeOH:MeCN(1 mL:1 mL:1 mL)に溶解して、この溶液に、炭酸水素アンモニウムを加えた(app. 25 mg)。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて45〜85%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて10〜50%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は6.2 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は100%であった。分析条件A:保持時間=1.72分;ESI−MS(+) m/z 869.1(M+2H);分析条件C:保持時間=1.47分;ESI−MS(+) m/z 1852.5(M+TFA).
一般的なカップリング法:
全ての操作を、SymphonyXペプチド合成器(Protein Technologies)で自動化の下において行った。別段の記載が無けば、全ての方法を、底部フリットを備えた10 mLポリプロピレンチューブで実施した;反応スケールが0.100mmolを超える場合、底部フリットを備えた40mLのポリプロピレンチューブを使用した。このチューブは、チューブの底部および上部の双方を介して、Symphonyペプチド合成器と連結させた。DMFおよびDCMを、チューブの上部から加えることができ、チューブの側面を均一に洗いおとすことができる。残りの反応材を、チューブの上部から加えて、フリットを通過させて樹脂と接触させる。全ての溶液を、チューブの底部から除去した。“周期的攪拌”とは、底部フリットからのN2ガスの短時間パルスを意味する;このパルスは、おおよそ5秒続き、30秒毎におこる。クロロ塩化アセチル/DMFの溶液は、調整してから24時間以内に使用した。一般的に、アミノ酸溶液は、調製してから3週間を超過して使用しない。HATU溶液を、調製の5日以内で使用する。DMF=ジメチルホルムアミド;HATU=1−[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]−1H−1,2,3−トリアゾロ[4,5−b]ピリジニウム 3−オキシドヘキサフルオロリン酸塩;DIPEA=ジイソプロピルエチルアミン; Rink樹脂:4−((2,4−ジメトキシフェニル)(Fmocアミノ)メチル)フェノキシメチルポリスチレン。
10mL ポリプロピレン固相反応容器に、樹脂(0.100 mmol)を加えた。樹脂を下記の通りに3回洗った(膨潤させた):反応容器に、DMF(2.0mL)を加えて、混合物を、10分間周期的に攪拌して、この溶媒をフリットから排出した。
先の工程からの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v,2.0mL)を加えた。混合物を、3分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v,2.0mL)を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに6回連続的に洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、アミノ酸(DMF中で0.2M,1.0mL,2等量)、次いでHATU(DMF中で0.2M,1.0mL,2等量)を加えて、最後にDIPEA(DMF中で0.4M,1.0 mL, 4等量)を加えた。混合物を、周期的に15分間攪拌して、次いで反応溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに4回連続して洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、無水酢酸(2.0mL)を加えた。この混合物を、10分間周期的に攪拌して、次いで該溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに4回連続的に洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、溶液をフリットから排出した。得られる樹脂を、直接次工程に使用した。
先の工程からの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v,2.0mL)を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v,2.0mL)を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに6回連続的に洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、アミノ酸(DMF中で0.4M,1.0mL,2等量)を加えて、次いでHATU(DMF中で0.2M,1.0mL,2等量)、最後にDIPEA(DMF中で0.4M,1.0mL,4等量)を加えた。混合物を、周期的に60分間攪拌して、次いで反応溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに4回連続的に洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、無水酢酸(2.0mL)を加えた。混合物を、10分間周期的に攪拌して、次いでこの溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに4回連続的に洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、溶液をフリットから排出した。得られる樹脂を、次工程で直接使用した。
先の工程からの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v,2.0mL)を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v,2.0mL)を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに6回連続的に洗った:各洗いに対して、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、アミノ酸(DMF中で0.2M,1.0mL,2等量)、次いでHATU(DMF中で0.2M,1.0mL,2等量)、最後にDIPEA(DMF中で0.4M,1.0mL,4等量)を加えた。混合物を、周期的に15分間攪拌して、次いで反応溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに2回洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、アミノ酸(DMF中で0.2M,1.0mL,2等量)を加えて、次いでHATU(DMF中で0.2M,1.0mL,2等量)、最後にDIPEA(DMF中で0.4M,1.0mL,4等量)を加えた。混合物を、周期的に15分間攪拌して、次いで反応溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに2回洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、無水酢酸(2.0mL)を加えた。混合物を、10分間周期的に攪拌して、次いで該溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに4回連続的に洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液を、フリットから排出した。得られる樹脂を、次工程に直接使用した。
先の工程からの樹脂を含む反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v,2.0mL)を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80v/v,2.0mL)を加えた。混合物を、周期的に3分間攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに6回連続的に洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、30秒間周期的に攪拌して、この溶液をフリットから排出した。反応容器に、DIPEA(DMF中で0.8M,3.0mL,24等量)、次いでクロロアセチルクロライド(DMF中で0.8M, 1.65mL,13.2等量)を加えた。混合物を、30分間周期的に攪拌して、この溶液を、フリットから排出した。次いで溶液を、フリットから排出した。樹脂を、下記の通りに3回連続的に洗った:各洗いに対し、DMF(2.0mL)を、容器の上部に加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、溶液をフリットから排出した。樹脂を、下記の通りに4回連続的に洗った:各洗いに対し、CH2Cl2(2.0mL)を、容器の上部に加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、溶液をフリットから排出した。得られる樹脂を、15分間N2ストリーム下に置いた。
全ての操作を、特に断らない限り手動で行なった。“脱保護方法”の方法は、0.100mmolスケールで実施した実験を記述するものである。この方法は、記載した体積をスケールの倍数で調整することにより、0.100mmolスケールを超えて拡大できる。“脱保護溶液”を、トリフルオロ酢酸(38mL)、DTT(1g)およびトリイソプロピルシラン(1mL)を合わせることにより調製した。樹脂を、反応容器から除去して、4mL ガラスバイアルに移した。バイアルに、“脱保護溶液”(2.0mL)を加えた。混合物を、シェーカー(1000RPM,15〜30分間)内で激しく混合した。混合物を、0.2ミクロンシリンジフィルターにより濾過して、固体を“脱保護溶液”(1.0mL)で抽出した。合わせた濾液を入れた24mL試験管に、Et2O(15mL)を加えた。混合物を激しく攪拌すると、相当量の白色固体が沈殿した。混合物を3分間遠心分離して、次いでこの溶液を、傾捨して固体と分けて、廃棄した。固体を、Et2O(20mL)に懸濁した;次いで、混合物を3分間遠心分離した;溶液を、傾斜して固体と分けて、廃棄した。最後に、固体を、Et2O(20mL)に懸濁した;混合物を、3分間遠心分離した;溶液を、傾斜して固体と分けて、廃棄して、粗製ペプチドを白色〜オフホワイトの固体を得た。
全ての操作を、特に断らない限り手動で行なった。“環化方法E”の方法は、0.100mmolのスケールで行なった実験を記述するものである。この方法は、記載した体積をスケールの倍数により調整することにより、0.100 mmolのスケールを超えて拡大できる。粗製ペプチド固体を、DMF(20 mL)に溶解して、次いでこの溶液にDIEA(0.5mL)、次いでKI(50mg)を加えた。この溶液を65℃で終夜加熱した。反応溶液を濃縮して、残留物を逆相HPLC精製に付して、目的とする環状ペプチドを得た。
“SymphonyXの方法Eのための一般方法”は、本明細書に記述した環状ペプチドを得るために使用した方法の一般的な手順を記述するものである。10mL ポリプロピレン固相反応容器に、Rink樹脂を加えて、反応容器を、SymphonyXペプチド合成器上においた。“一般的なカップリング方法E”:樹脂膨潤法を行なった。次いで、一連のアミノ酸カップリングを、SymphonyXペプチド合成器で、樹脂結合ペプチドのN末端が第一級アミンである場合には“単カップリング法”に従うか、または樹脂結合ペプチドのN末端が二級アミンである場合には“二重カップリング法”に従って順に行った。“単カップリング1時間”法を用いて、アミノ酸(S)−2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−(1−(2−(tert−ブトキシ)−2−オキソエチル)−1H−インドール−3−イル)プロパン酸と共に、樹脂上でカップリングさせた。クロロ塩化アセチルカップリング法を行なった;次いで、脱保護方法を行ない;次いで、環化方法Eを行なう。
全ての操作を、特に断らない限り手動で行なった。“環化方法F”の方法は、0.100mmolのスケールで行なった実験を記述するものである。この方法は、記載した体積をスケールの倍数により調整することにより、0.100mmolのスケールを超えて拡大できる。粗製ペプチド固体を、20 mL DMFに溶解して、この溶液をDIEA(0.2 mL)に溶解した。反応混合物を、5分間攪拌して、0℃に冷却した。0.2M CDI/DMF溶液(0.5 mL)をこの反応混合物に滴加した。この溶液を室温で終夜攪拌した。この反応溶液を濃縮して、残留物を逆相HPLC精製に付して、目的とする環化ペプチドを得た。
“SymphonyXの方法Fのための一般法”は、本明細書に記述された環状ペプチドを得るために使用された方法の一般的な手順を記述している。ポリプロピレン固相反応容器(10 mL)に、Rink樹脂を加えて、反応容器を、SymphonyXペプチド合成器上に置いた。“一般的なカップリング方法”:樹脂膨潤法に従った。次いで、一連のアミノ酸カップリングを、SymphonyXペプチド合成器上で連続的に行ない、その後樹脂結合ペプチドのN末端が、第一級アミンであるならば、“単カップリング”に従い、あるいは樹脂結合ペプチドのN末端が、第二級アミンであるならば、“二重カップリング”に従った。“単カップリング1時間”法を、アミノ酸(S)−2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−(1−(2−(tert−ブトキシ)−2−オキソエチル)−1H−インドール−3−イル)プロパン酸を用いて使用して、樹脂上でカップリングした。最後のアミノ酸をペプチド上でカップリングさせた後に、反応容器を、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)に加えた。混合物を、振とう器上で30分間攪拌した。この溶液を、フリットから排出した。樹脂を、DMF、次いでDCMを用いて連続的に洗った。脱保護方法に従った;次いで、環化方法Fに従った。
全ての操作を、特に断らない限り手動で行なった。“環化方法G”の方法は、0.100 mmolスケールで行なった実験を記述するものである。この方法は、記載した体積をスケールの倍数により調整することにより、0.100mmolのスケールを超えて拡大できる。粗製ペプチド固体を、20 mL THFに溶解して、この溶液をDIEA(0.2 mL)に溶解した。反応混合物を、5分間攪拌して、0℃に冷却した。0.2M 塩化オキサリル/THF溶液(0.5 mL)を、反応混合物に滴加した。この溶液を室温で終夜攪拌した。この反応溶液を濃縮して、残留物を逆相HPLC精製に付して、目的とする環化ペプチドを得た。
“SymphonyXの方法Gのための一般法”は、本明細書に記述された環状ペプチドを得るために使用された方法の一般的な手順を記述している。ポリプロピレン固相反応容器(10 mL)に、Rink樹脂を加えて、反応容器を、SymphonyXペプチド合成器上に置いた。“一般的なカップリング方法”:樹脂膨潤法に従った。次いで、一連のアミノ酸カップリングを、SymphonyXペプチド合成器上で連続的に行ない、その後、樹脂結合ペプチドのN末端が、第一級アミンであるならば、“単カップリング”に従い、あるいは樹脂結合ペプチドのN末端が、第二級アミンであるならば、“二重カップリング”に従った。“単カップリング1時間”法を、アミノ酸(S)−2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−(1−(2−(tert−ブトキシ)−2−オキソエチル)−1H−インドール−3−イル)プロパン酸を用いて使用して、樹脂上でカップリングした。最後のアミノ酸をペプチド上でカップリングさせた後に、反応容器を、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)に加えた。混合物を、振とう器上で30分間攪拌した。溶液を、フリットから排出した。この溶液を、フリットから排出した。樹脂を、DMF、次いでDCMを用いて連続的に洗った。脱保護方法に従った;次いで、環化方法Gに従った。
分析条件A:保持時間=1.64分;ESI−MS(+) m/z(M+2H). 927.55
分析条件B:保持時間=3.14分;ESI−MS(+) m/z 927.75(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:927.4885(M+2H);実測値:927.4877(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.70分;ESI−MS(+) m/z 919.75(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.19分;ESI−MS(+) m/z 919.75(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:919.4910(M+2H);実測値:919.4897(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.71分;ESI−MS(+) m/z 931.30(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.21分;ESI−MS(+) m/z 931.30(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:930.9990(M+2H);実測値:930.9985(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.64分;ESI−MS(+) m/z 933.20(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.14分;ESI−MS(+) m/z 933.25(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:932.9783(M+2H);実測値:932.9775(M+2H).
分析条件A:保持時間=2.46分;ESI−MS(+) m/z 910.50(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.29分;ESI−MS(+) m/z 910.50(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:910.0553(M+2H);実測値:910.0541(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.44分;ESI−MS(+) m/z 947.40(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.56分;ESI−MS(+) m/z 946.80(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:946.4963(M+2H);実測値:946.4941(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.38分;ESI−MS(+) m/z 954.70(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.52分;ESI−MS(+) m/z 954.40(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:954.4938(M+2H);実測値:954.4915(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.40分;ESI−MS(+) m/z 962.30(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.92分;ESI−MS(+) m/z 962.25(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:961.9810(M+2H);実測値:961.9804(M+2H).
分析条件A:保持時間=2.38分;ESI−MS(+) m/z 917.50(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:917.0631(M+2H);実測値:917.0618(M+2H).
分析条件A:保持時間=2.36分;ESI−MS(+) m/z 924.55(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:924.0709(M+2H);実測値:924.0700(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.33分;ESI−MS(+) m/z 912.90(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.78分;ESI−MS(+) m/z 912.85(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:912.4468(M+2H);実測値:912.4468(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.50分;ESI−MS(+) m/z 919.90(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.97分;ESI−MS(+) m/z 919.90(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:919.4547(M+2H);実測値:919.4549(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.38分;ESI−MS(+) m/z 927.00(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.73分;ESI−MS(+) m/z 926.95(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.28分;ESI−MS(+) m/z 941.90(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.71分;ESI−MS(+) m/z 941.90(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.32分;ESI−MS(+) m/z 948.90(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.80分;ESI−MS(+) m/z 948.80(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.31分;ESI−MS(+) m/z 955.90(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.82分;ESI−MS(+) m/z 955.90(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.64分;ESI−MS(+) m/z 918.40(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.16分;ESI−MS(+) m/z 918.40(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:917.9730(M+2H);実測値:917.9720(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.61分;ESI−MS(+) m/z 924.45(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.15分;ESI−MS(+) m/z 925.40(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:924.9808(M+2H);実測値:924.9808(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.61分;ESI−MS(+) m/z 932.45(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.15分;ESI−MS(+) m/z 932.40(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:931.9887(M+2H);実測値:931.9878(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.42分;ESI−MS(+) m/z 947.40(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.95分;ESI−MS(+) m/z 947.40(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:946.9758(M+2H);実測値:946.9756(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.44分;ESI−MS(+) m/z 954.40(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.99分;ESI−MS(+) m/z 954.35(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.46分;ESI−MS(+) m/z 961.45(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.52分;ESI−MS(+) m/z 949.00(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.80分;ESI−MS(+) m/z 948.85(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.56分;ESI−MS(+) m/z 920.30(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.05分;ESI−MS(+) m/z 920.30(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.43分;ESI−MS(+) m/z 934.60(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.97分;ESI−MS(+) m/z 934.35(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.69分;ESI−MS(+) m/z 910.85(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.18分;ESI−MS(+) m/z 910.85(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.66分;ESI−MS(+) m/z 917.85(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.18分;ESI−MS(+) m/z 917.90(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.65分;ESI−MS(+) m/z 924.90(M+2H).
分析条件B:保持時間=3.17分;ESI−MS(+) m/z 924.90(M+2H).
“一般合成法A”に従った。2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)エトキシ)酢酸を、“樹脂ローディング法”に使用した。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。次いで、樹脂を、DCM(8 mL)を15 mLのバイアルに直ちに移した。溶液にヘキサフルオロイソプロパノール(2 mL)を加えた。樹脂は、直ちに深赤色に変わった;溶液は無色のままであった。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで室温で15分間静置して、次いで濾過した。濾液を、15 mL バイアルに移して、N2ストリーム下で濃縮して、固体残留物である中間体10500を得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(23.75 mL)、1,4-ジチオ-DL-スレイトール(625 mg)、トリイソプロピルシラン(0.625 mL)を合わせて調整した。中間体10500の全てを入れた1ドラムバイアルに、“脱保護溶液”(1.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカー内で1.5時間攪拌して、次いでEt2O(20 mL)を入れた25 mLの試験管に注ぎ入れた。少量の白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体を、Et2O(10 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:20分間かけて40〜80%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は7.3 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は100%であった。
分析条件A:保持時間=2.57分;ESI−MS(+) m/z 764.9(M+2H).
分析条件E:保持時間=2.57分;ESI−MS(+) m/z 765.4(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:765.4602 実測値:765.4581.
“一般合成法A”に従った。2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)エトキシ)酢酸を、“樹脂ローディング法”に使用した。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。次いで、樹脂を、DCM(8 mL)を15 mLのバイアルに直ちに移した。溶液にヘキサフルオロイソプロパノール(2 mL)を加えた。樹脂は、直ちに深赤色に変わった;溶液は無色のままであった。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで室温で15分間静置して、次いで濾過した。濾液を、15 mL バイアルに移して、N2ストリーム下で濃縮して、固体残留物である中間体10501Aを得た。
上記製造した中間体10501Aの全てを入れた15 mLのバイアルに、DCM(2 mL)、次いでHATU(38 mg, 0.10 mmol)、次いでDIPEA(0.114 mL, 0.650 mmol)を加えた。溶液を、2時間攪拌した。溶液を、真空下にて乾燥させて、中間体10501Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(23.75 mL)、1,4−ジチオ−DL−スレイトール(625 mg)、トリイソプロピルシラン(0.625 mL)を合わせて調整した。中間体10501Aの全てを入れた1ドラムバイアルに、“脱保護溶液”(1.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1時間混合して、次いでEt2O(15 mL)を入れた25 mLの試験管に注ぎ入れた。少量の白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、MeOHに溶解して、この溶液にDIPEA(0.050 mL)を加えた。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて15〜55%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。
物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて40〜80%B、次いで4分間100% Bで保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は1.0 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は95%であった。
分析条件A:保持時間=1.65分;ESI−MS(−) m/z 856.8(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.72分;ESI−MS(−) m/z 857.2(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:856.9798 実測値:856.9790.
“一般合成法A”に従った。2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)エトキシ)酢酸を、“樹脂ローディング法”に使用した。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。次いで、樹脂を、DCM(8 mL)を用いて15 mLのバイアルに直ちに移した。溶液にヘキサフルオロイソプロパノール(2 mL)を加えた。樹脂は、直ちに深赤色に変わった;溶液は無色のままであった。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで室温で15分間静置して、次いで濾過した。濾液を、15 mL バイアルに移して、N2ストリーム下で濃縮して、固体残留物である中間体10502Aを得た。
上記で製造した中間体10501Aの全てを入れた15 mLのバイアルに、DCM(2 mL)、次いでHATU(38 mg, 0.10 mmol)、次いでDIPEA(0.114 mL, 0.650 mmol)を加えた。溶液を2時間攪拌した。溶液を、真空下にて乾燥させて、MeOHに再溶解させて得て、次いで以下の条件下においてHPLC精製に付した:カラム:Waters XBridge C18, 30 x 100 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:15分間かけて55〜100%B、次いで100%Bで15分間保持;流量:30 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させて、白色固体である中間体10502Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(23.75 mL)、1,4-ジチオ-DL-スレイトール(625 mg)、トリイソプロピルシラン(0.625 mL)を合わせて調整した。上記した中間体10501Aの全てを入れた1ドラムバイアルに、“脱保護溶液”(1.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1時間混合して、次いでEt2O(15 mL)を入れた25 mLの試験管に入れた。少量の白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、MeOHに溶解して、この溶液にDIPEA(0.050 mL)を加えた。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて50〜100%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は0.1 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は83%であった。
分析条件A:保持時間=1.79分;ESI−MS(−) m/z 886.1(M+2H).
“一般合成法A”に従った。2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)エトキシ)酢酸を、“樹脂ローディング法”で使用した。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を入れた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液を、フリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。次いで、樹脂を、DCM(8 mL)を用いて、15 mLのバイアルに直ちに移した。この溶液に、ヘキサフルオロイソプロパノール(2 mL)を入れた。樹脂は、直ちに深赤色に変わった;溶液は無色のままであった。混合物を、手動により短時間で攪拌して、次いで室温で15分間静置して、次いで濾過した。濾液を、15 mL バイアルに移して、N2ストリーム下で濃縮して、固体残留物である中間体10503Aを得た。
上記で製造した中間体10501Aの全体を入れた15 mLのバイアルに、DCM(2 mL)、次いでHATU(38 mg, 0.10 mmol)、次いでDIPEA(0.114 mL, 0.650 mmol)を加えた。溶液を2時間攪拌した。この溶液を、真空下で乾燥させて、中間体10503Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(23.75 mL)、1,4-ジチオ-DL-スレイトール(625 mg)、トリイソプロピルシラン(0.625 mL)を合わせて調整した。上記で製造した中間体10501Aの全てを入れた1ドラムバイアルに、“脱保護溶液”(1.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで1時間混合して、次いでEt2O(15 mL)を入れた25 mLの試験管に注ぎ入れた。少量の白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。得られる残留物を、MeOHに溶解して、この溶液にDIPEA(0.050 mL)を加えた。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 メタノール:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて40〜90%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:Waters CSH c-18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(0.1% トリフルオロ酢酸を含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(0.1% トリフルオロ酢酸を含む);グラジエント:30分かけて10〜50%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は0.8 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は99%であった。
分析条件A:保持時間=1.81分;ESI−MS(−) m/z 879.3(M+2H).
分析条件E:保持時間=1.81分;ESI−MS(−) m/z 1758.1(M−H).
分析条件A:保持時間=1.24分;ESI−MS(+) m/z 907.2(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.67分;ESI−MS(+) m/z 906.9(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:906.5014(M+2H);実測値:906.4994(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.65分;ESI−MS(+) m/z 935.75(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.70分;ESI−MS(+) m/z 935.80(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:935.5041(M+2H);実測値:935.5024(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.14分;ESI−MS(+) m/z 944.20(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.59分;ESI−MS(+) m/z 943.50(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:943.4834(M+2H);実測値:943.4808(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.15分;ESI−MS(+) m/z 950.2(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.47分;ESI−MS(+) m/z 950.3(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:949.5198(M+2H);実測値:949.5158(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.17分;ESI−MS(+) m/z 921.2(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.48分;ESI−MS(+) m/z 920.9(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:計算値:921.0091(M+2H);実測値:921.0053(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.17分;ESI−MS(+) m/z 906.9(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.56分;ESI−MS(+) m/z 907.1(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.15分;ESI−MS(+) m/z 915.0(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.48分;ESI−MS(+) m/z 915.2(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:914.9724(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.16分;ESI−MS(+) m/z 943.0(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.51分;ESI−MS(+) m/z 942.6(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:942.5112(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.17分;ESI−MS(+) m/z 949.1(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.57分;ESI−MS(+) m/z 949.1(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:948.5098(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.20分;ESI−MS(+) m/z 920.1(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.60分;ESI−MS(+) m/z 921.0(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:919.9986(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.24分;ESI−MS(+) m/z 943.1(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.73分;ESI−MS(+) m/z 943.1(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:942.5096(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.28分;ESI−MS(+) m/z 956.1(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.80分;ESI−MS(+) m/z 956.1(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:955.5169(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.23分;ESI−MS(+) m/z 950.4(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.64分;ESI−MS(+) m/z 950.4(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:950.4883(M+2H).
分析条件A:保持時間=1.47分;ESI−MS(+) m/z 926.9(M+2H).
分析条件B:保持時間=1.83分;ESI−MS(+) m/z 926.2(M+2H).
ESI−HRMS(+) m/z:927.0048(M+2H).
スキーム:
(S)−1−ベンジル2−メチルアジリジン−1,2−ジカルボキシレート(5.105 g,21.70 mmol)およびベンジル2−ヒドロキシアセテート(6.16 ml,43.4 mmol)を、DCM(43.4 ml)に溶解して、0℃に冷却して、BF3・OEt2(0.275 ml,2.170 mmol)を添加した。この反応を2時間攪拌した。TLCにより、アジリジン開始物質は消費されたことが示された。この反応を、更に14時間攪拌した。飽和炭酸水素ナトリウム溶液をこの反応に加えて、二相性混合物を、20分間激しく攪拌した。この反応を、DCMで希釈して、水相と分離した。有機層を、塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空濃縮した。粗製物質を、10〜40%EtOAc/ヘキサンを用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物の画分を集めて、溶媒を真空除去して、メチル O−(2−(ベンジルオキシ)−2−オキソエチル)−N−((ベンジルオキシ)カルボニル)−L−セリネート[3.0(34%)]を得た。
ESI−MS(+) m/z 402.1(M+1).
1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) d 7.43 - 7.30(m, 10H), 5.95(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.18(s, 2H), 5.15(s, 2H), 4.50(dt, J=8.4, 3.1 Hz, 1H), 4.12(d, J=2.8 Hz, 2H), 4.10 - 4.04(m, 1H), 3.81(dd, J=9.4, 3.1 Hz, 1H), 3.77(s, 3H).
(S)−メチル 3−(2−(ベンジルオキシ)−2−オキソエトキシ)−2−(((ベンジルオキシ)カルボニル)アミノ)プロパノエート(3 g, 7.47 mmol)を、MeOH(37.4 ml)に溶解して、N2の雰囲気下に置いた。Pd−C(0.398 g, 0.374 mmol)を、激しく攪拌しながら溶液に加えた。この反応を、H2の雰囲気下で行い、16時間攪拌した。反応を、セライトを通して濾過して、真空下で濃縮して、(S)−2−(2−アミノ−3−メトキシ−3−オキソプロポキシ)酢酸[1.32 g,(100%)]を得て、これを更なる精製をせずに工程3で使用した。ESI−MS(+) m/z 178.1(M+1).
(S)−2−(2−アミノ−3−メトキシ−3−オキソプロポキシ)酢酸(1.323 g, 7.47 mmol)を、THF(29.9 ml)に溶解して、続いて水(29.9 ml)を加えた。次いで炭酸水素ナトリム(1.255 g,14.94 mmol)を加えて、その後(9H-フルオレン-9−イル)メチル(2,5-ジオキソピロリジン-1−イル)カーボネート(2.52 g, 7.47 mmol)を加えた。反応を2時間攪拌した。大部分のTHFを、真空下で除去して、次いでEt2Oを加えた。有機層を廃棄して、この水層を再度Et2Oで洗った。水相を集めて、1N HClで酸性化して、EtOAcで抽出した。有機層を集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下で濃縮して、更なる精製をせずに(S)−2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−メトキシ−3−オキソプロポキシ)酢酸[2.76g(93%)]を得た。
ESI−MS(+) m/z 400.1(M+1).
(S)−2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−メトキシ−3−オキソプロポキシ)酢酸(3.78 g,9.46 mmol)/酢酸エチル(40.6 ml)およびヘキサン(15.05 ml)の溶液に、tert−ブチル 2,2,2−トリクロロアセトイミデート(1.692 ml, 9.46 mmol)を滴加した。15分後、BF3・OEt2(0.060 ml, 0.473 mmol)を加えて、反応を1時間攪拌した。追加のtert−ブチル 2,2,2−トリクロロアセトイミデート(1.692 ml, 9.46 mmol)を加えて、次いでBF3・OEt2(0.060 ml, 0.473 mmol)を加えて、1時間攪拌した。このプロセスをもう一度繰り返して、tert−ブチル 2,2,2−トリクロロアセトイミデート(1.692 ml, 9.46 mmol)、次いでBF3・OEt2(0.060 ml, 0.473 mmol)を加えて、1時間攪拌した。飽和炭酸水素塩を、この反応に加えて、15分間攪拌した。有機相を集めて、塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下にて濃縮して、粗生成物を得て、これを、溶離液として20〜30% EtOAc/ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより更に精製した。生成物の画分を集めて、溶媒を真空下で除去して、メチル N-(((9H-フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)-O-(2-(tert-ブトキシ)-2-オキソエチル)-L-セリネート[3.9 g, (90%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 478.1(M+Na).
(S)−メチル2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−(2−(tert−ブトキシ)−2−オキソエトキシ)プロパノエート(3.9 g,8.56 mmol)を、DCE(42.8 ml)に溶解して、続いてトリメチルスタンナノール(3.10 g, 17.12 mmol)を加えた。この反応を、80℃で5時間加熱した。この溶媒を、真空下で除去して、残留物を、EtOAcに再溶解して、1N HCl 3x、次いで塩水で洗った。有機層を集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下にて濃縮して、目的とする生成物を得た。NMRにより、幾らかの残存スズが示された。この物質を、EtOAcに再度溶解して、0.1M KHSO4で洗い、その後3x塩水で洗った。有機層を集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下で濃縮して、N−(((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)−O−(2−(tert−ブトキシ)−2−オキソエチル)−L−セリン[3.36 g(89%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 464.0(M+Na).
1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) d 7.78(d, J=7.5 Hz, 2H), 7.66(t, J=7.4 Hz, 2H), 7.45 - 7.38(m, 2H), 7.36 - 7.29(m, 2H), 6.44(d, J=7.0 Hz, 1H), 4.55 - 4.33(m, 3H), 4.26(t, J=7.3 Hz, 1H), 4.12 - 4.01(m, 3H), 3.82(dd, J=9.7, 4.4 Hz, 1H), 1.52(s, 9H).
(S)−2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−(tert−ブトキシ)−6−オキソヘキサン酸(850 mg,1.934 mmol)、2−アミノアセトアミド,HCl(278 mg,2.51 mmol)を、DCM(9670 μl)に懸濁して、次いでヒューニッヒ塩基(1013 μl, 5.80 mmol)、次いでHATU(809 mg, 2.127 mmol)を加えた。この反応を2時間攪拌した。反応を、DCMで希釈して、1N HCl、次いで塩水で洗った。有機層を集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下にて濃縮した。粗製物質を、20〜60% アセトン/DCMを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物の画分を集めて、溶媒を真空下で除去して、目的とする生成物[789 mg(82%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 498.1(M+H).
(S)−tert−ブチル 2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−((2−アミノ−2−オキソエチル)アミノ)−3−オキソプロポキシ)アセテート(1.25 g,2.51 mmol)を、HCl(4N/ジオキサン)(15 ml,60.0 mmol)に溶解した。反応を、4時間撹拌した。溶媒を、真空下で除去して、(S)−2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−((2−アミノ−2−オキソエチル)アミノ)−3−オキソプロポキシ)酢酸[1.11 g(100%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 442.0(M+H).
(S)−2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−(2−(tert−ブトキシ)−2−オキソエトキシ)プロパン酸(1.875 g, 4.25 mmol)(別の個所で記述した合成)、塩化アンモニウム(0.568 g, 10.62 mmol)を、DMF(21.24 ml)に懸濁して、次いでヒューニッヒ塩基(2.225 ml, 12.74 mmol)、次いでHATU(1.776 g, 4.67 mmol)を加えた。反応を2時間撹拌した。反応をDCMで希釈して、1N HCl、次いで塩水で洗った。有機層を集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下にて濃縮した。粗製物質を、20〜40%アセトン/DCMを用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物の画分を集めて、溶媒を、真空下で除去して、tert−ブチル(S)−2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−アミノ−3−オキソプロポキシ)アセテート[1.43 g(76%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 441.0(M+1). 1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) d 7.78(d, J=7.5 Hz, 2H), 7.65(d, J=7.5 Hz, 2H), 7.46 - 7.38(m, 2H), 7.36 - 7.30(m, 2H), 6.99(d, J=17.3 Hz, 1H), 6.44(br. s., 1H), 5.46(br. s., 1H), 4.43(d, J=6.3 Hz, 2H), 4.31(br. s., 1H), 4.27 - 4.21(m, 1H), 4.16 - 3.95(m, 3H), 3.73 - 3.64(m, 1H), 1.51(s, 9H).
(S)−tert−ブチル 2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−アミノ−3−オキソプロポキシ)アセテート(1.432 g,3.25 mmol)を、HCl(ジオキサン中で4N)(15 ml, 60.0 mmol)に溶解した。反応を、4時間撹拌した。溶媒を、真空下で除去して、(S)−2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−アミノ−3−オキソプロポキシ)酢酸[1.25 g,(100)]を得た。
ESI−MS(+) m/z 385.0(M+1).
(S)−2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−(tert−ブトキシ)−6−オキソヘキサン酸(850 mg,1.934 mmol)、2−アミノアセトアミド,HCl(278 mg,2.51 mmol)を、DCM(9670 μl)に続いてヒューニッヒ塩基(1013 μl,5.80 mmol)、次いでHATU(809 mg,2.127 mmol)に懸濁した。反応を2時間撹拌した。反応をDCMで希釈して、1N HCl、次いで塩水で洗った。有機層を集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下にて濃縮した。粗製物質を、20〜60% アセトン/DCMを用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物の画分を集めて、溶媒を真空下で除去して、tert−ブチル(S)−5−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−((2−アミノ−2−オキソエチル)アミノ)−6−オキソヘキサノエート[789 mg(82%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 496.1(M+1). 1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) d 7.78(d, J=7.5 Hz, 2H), 7.60(d, J=7.5 Hz, 2H), 7.45 - 7.39(m, 2H), 7.35 - 7.30(m, 2H), 6.78(br. s., 1H), 6.42(br. s., 1H), 5.71(d, J=6.0 Hz, 1H), 5.45(br. s., 1H), 4.44(d, J=6.8 Hz, 2H), 4.25 - 4.19(m, 1H), 4.10(d, J=6.0 Hz, 1H), 3.97(d, J=5.5 Hz, 2H), 2.36 - 2.24(m, 2H), 1.90(br. s., 1H), 1.76 - 1.55(m, 3H), 1.46(s, 9H)
(S)−tert−ブチル 5−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−((2−アミノ−2−オキソエチル)アミノ)−6−オキソヘキサノエート(0.789 g,1.593 mmol)を、HCl(ジオキサン中で4N)(15 ml,60.0 mmol)に溶解した。反応を、6時間撹拌した。溶媒を、真空下で除去して、(S)−5−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−((2−アミノ−2−オキソエチル)アミノ)−6−オキソヘキサン酸[700mg(100%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 440.0(M+1).
(S)−2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−(tert−ブトキシ)−6−オキソヘキサン酸(2.5 g,5.69 mmol)、塩化アンモニウム(0.761 g,14.22 mmol)を、DMF(28.4 ml)に懸濁して、続いてヒューニッヒ塩基(2.98 ml,17.06 mmol)、次いでHATU(2.379 g,6.26 mmol)を加えた。反応を2時間撹拌した。反応を、Et2Oで希釈して、1N HCl、次いで塩水で洗った。有機層を集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下にて濃縮した。粗製物質を、0〜20%アセトン/DCMを用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物の画分を集めて、溶媒を真空下にて除去して、tert−ブチル(S)−5−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−アミノ−6−オキソヘキサノエート[1.89 g(76%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 439.0(M+1).
(S)−tert−ブチル 5−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−アミノ−6−オキソヘキサノエート(1.89g,4.31 mmol)を、HCl(ジオキサン中で4N)(15 ml, 60.0 mmol)に溶解した。この反応を、4時間攪拌した。溶媒を、真空下で除去して、(S)−5−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−6−アミノ−6−オキソヘキサン酸[1.65 g, (100)]を得た。ESI−MS(+) m/z 385.0(M+1).
1H NMR(400MHz, メタノール-d4) d 7.80(d, J=7.5 Hz, 2H), 7.71 - 7.65(m, 2H), 7.43 - 7.36(m, 2H), 7.35 - 7.29(m, 2H), 4.47 - 4.35(m, 2H), 4.26 - 4.21(m, 1H), 4.09(d, J=7.8 Hz, 1H), 2.32(t, J=6.4 Hz, 2H), 1.88 - 1.57(m, 4H).
スキーム:
(R)−5−アミノ−2−((tert−ブトキシカルボニル)アミノ)ペンタン酸(4.77 g, 20.54 mmol)を、THF(82 ml)に溶解して、次いで水(82 ml)を加えた。次いで、炭酸水素ナトリム(3.45 g, 41.1 mmol)を加えて、その後(9H-フルオレン-9−イル)メチル(2,5-ジオキソピロリジン-1−イル)カーボネート(6.93 g, 20.54 mmol)を加えた。反応を2時間撹拌した。大部分のTHFを、真空下で除去して、次いでEt2Oを加えた。有機層を廃棄して、水層を、Et2Oで再度洗った。水相を集めて、1N HClで酸性化して、EtOAcで抽出した。有機層を集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下にて濃縮して、(R)-5-((((9H-フルオレン-9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)ペンタン酸[8.76 g(94%)]を得た。ESI−MS(+) m/z 454.9(M+1).
“一般合成法A”に従った。(S)−2−(2−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−3−((2−アミノ−2−オキソエチル)アミノ)−3−オキソプロポキシ)酢酸を、“樹脂ローディング法”に使用した。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。次いで、樹脂を、DCM(8 mL)を用いて15 mLのバイアルに直ぐに移した。この溶液に、ヘキサフルオロイソプロパノール(2 mL)を加えた。樹脂は、直ちに深赤色に変わった;溶液は無色のままであった。混合物を、手動により短時間で攪拌して、次いで、15分間室温で静置して、次いで濾過した。濾液を、15 mL バイアルに移して、N2ストリーム下で濃縮して、固体残留物である中間体10501Aを得た。
上記で製造した中間体10504Aの全てを入れた40 mLバイアルに、DCM(20 mL)、次いでHATU(38 mg, 0.10 mmol)、次いでDIPEA(0.114 mL, 0.650 mmol)を加えた。溶液を2時間攪拌した。溶液を、真空下で攪拌して、中間体10504Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(23.75 mL)、1,4-ジチオ-DL-スレイトール(625 mg)、トリイソプロピルシラン(0.625 mL)を合わせて調整した。上記で製造した中間体10504Aの全てを入れた5ドラム バイアルに、“脱保護溶液”(2.0 mL)を加えた。溶液を、500 rpmで作動しているシェーカー内で20分間攪拌して、次いでEt2O(15 mL)を入れた25 mLの試験管に注ぎ入れた。少量の白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて10〜50%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。この物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて0〜40%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は7.3 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は93%であった。
分析条件A:保持時間=1.58分;ESI−MS(+) m/z 936.1(M+2H).
分析条件B:保持時間=2.70分;ESI−MS(+) m/z 935.9(M+2H).
予め付加されたFmoc−L−Pro−2−クロロトリチルを使用した為に付加工程を必要としないことを除いて、“一般合成法A”に従った。5−((((9H−フルオレン−9−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)ペンタン酸を、4thアミド結合形成工程に使用した。自動化シークエンスにより樹脂を含有する反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。反応容器に、ピペリジン:DMF(20:80 v/v, 2.0 mL)を加えた。混合物を、4分間周期的に攪拌して、次いで溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DMF(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。この樹脂を、下記のとおりに連続的に5回洗った:各洗いに対して、DCM(2.0 mL)を、容器の上部から加えて、得られる混合物を、周期的に90秒間攪拌して、この溶液をフリットから排出した。次いで、樹脂を、DCM(8 mL)を用いて、15 mLのバイアルに直ちに移した。この溶液に、ヘキサフルオロイソプロパノール(2 mL)を加えた。樹脂は、直ちに深赤色に変わった;溶液は無色のままであった。混合物を、手動により短時間攪拌して、次いで15分間室温で静置して、次いで濾過した。濾液を、15 mL バイアルに移して、N2ストリーム下で濃縮して、固体残留物の中間体10501Aを得た。
上記で製造した中間体10504Aの全てを入れた40 mL バイアルに、DCM(20 mL)、次いでHATU(76 mg, 0.20 mmol)、次いでDIPEA(0.052 mL, 0.30 mmol)を加えた。溶液を2時間攪拌した。溶液を、真空下で乾燥させて、中間体10504Bを得た。
“脱保護溶液”を、40 mLガラスバイアル内で、トリフルオロ酢酸(23.75 mL)、1,4-ジチオ-DL-スレイトール(625 mg)、トリイソプロピルシラン(0.625 mL)を合わせて調整した。上記で製造した中間体10504Aの全てを入れた5ドラム バイアルに、“脱保護溶液”(2.0 mL)を加えた。この溶液を、500 rpmで作動しているシェーカーで20分間混合して、次いでEt2O(15 mL)を入れた25 mLの試験管に注ぎ入れた。少量の白色固体が沈殿した。混合物を遠心分離した;この液体をデキャンテーションした。固体をEt2O(15 mL)に懸濁した。混合物を遠心分離して、この液体をデキャンテーションした。粗製物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて10〜50%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。この物質を、以下の条件に従って分取LC/MSにより精製した:カラム:Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5 μm粒子;移動相A:5:95 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);移動相B:95:5 アセトニトリル:水(10 mM 酢酸アンモニウムを含む);グラジエント:30分かけて0〜40%B、次いで100%Bで5分間保持;流量:20 mL/分。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心エバポレーションにより乾燥させた。生成物の収量は7.0 mgであり、LCMS分析によるその算出された純度は95%であった。
本発明の大環状ペプチドがPD−L1に結合する能力をPD−1/PD−L1均一時間分解蛍光(HTRF)結合アッセイを使用して試験した。
可溶性PD−1の可溶性PD−L1への結合の均一時間分解蛍光(HTRF)アッセイ。可溶性PD−1および可溶性PD−L1は、膜貫通領域が排除されたカルボキシル末端切除型のタンパク質であって、かつ異種性配列、特にヒト免疫グロブリンG配列(Ig)のFc部分またはヘキサヒスチジンエピトープタグ(His)と融合されているものを指す。全ての結合研究を、0.1%(w/v)ウシ血清アルブミンおよび0.05%(v/v)Tween−20を添加したdPBSからなるHTRFアッセイ緩衝液で行った。PD−1−Ig/PD−L1−His結合アッセイについて、阻害剤をPD−L1−His(10nM最終)と、15分、4μlのアッセイ緩衝液と共にプレインキュベートし、続いて1μlのアッセイ緩衝液中のPD−1−Ig(20nM最終)を添加し、さらに15分インキュベートした。ヒト、カニクイザル、マウスまたはその他の種のいずれかからのPD−L1融合タンパク質を使用した。HTRF検出を、ユウロピウムクリプテート標識抗Igモノクローナル抗体(1nM最終)およびアロフィコシアニン(APC)標識抗Hisモノクローナル抗体(20nM最終)を使用して達成した。抗体をHTRF検出緩衝液で希釈し、5μlを結合反応の上部に分配した。反応を30分平衡化させ、EnVision蛍光光度計を使用してシグナル(665nm/620nm比)を得た。さらなる結合アッセイをPD−1−Ig/PD−L2−His(それぞれ20nMおよび5nM)、CD80−His/PD−L1−Ig(それぞれ100nMおよび10nM)およびCD80−His/CTLA4−Ig(それぞれ10nMおよび5nM)で確立した。ビオチニル化化合物番号71とヒトPD−L1−Hisの間の結合/競合研究を次のとおり行った。大環状ペプチド阻害剤をPD−L1−His(10nM最終)と60分、4μlのアッセイ緩衝液中でプレインキュベートし、1μlのアッセイ緩衝液中のビオチニル化化合物番号71(0.5nM最終)を添加した。結合を30分平衡化させ、5μlのHTRF緩衝液中のユウロピウムクリプテート標識ストレプトアビジン(2.5pM最終)およびAPC標識抗His(20nM最終)を添加した。反応を30分平衡化させ、シグナル(665nm/620nm比)をEnVision蛍光光度計を使用して得た。
Claims (20)
- 式(I):
[式中、
Aは、−CH2CH2−、
は、窒素原子との結合点を表す)から選択され;
nは、0、1または2であり;
mは、1または2であり;
m’は、0または1であり;
zは、1または2であり;
zが1である場合、wは2であり;
zが2である場合、wは1または2であり;
pは、0、1または2であり;
R14およびR15は、独立して、水素およびメチルから選択され;
Rxは、水素、アミノ、ヒドロキシおよびメチルから選択され;ならびに
Rzは、水素および−C(O)NHR16から選択され;ここでR16は、水素、−CHR17C(O)NH2、−CHR17C(O)NHCHR18C(O)NH2および−CHR17C(O)NHCHR18C(O)NHCH2C(O)NH2から選択される;ここでR17は、水素およびCH2OHから選択され、ここでR18は、水素およびメチルから選択される;
Rvは、水素、メチルまたは天然アミノ酸側鎖であり;
Rc、Rf、Rh、RiおよびRmは、水素であり;
Rnは、水素またはメチルであるか、またはRvおよびRnは、ピロリジン環を形成しており;
Ra、Re、RjおよびRkは、各々独立して、水素およびメチルから選択され;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12およびR13は、独立して天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖から選択されるか、または、以下に記載したような対応する隣接するR基と共に環を形成しており;
ReおよびRkは、互いに、対応する隣接するR基と共に環を形成しており、それらに結合している原子は、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される;ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基で所望により置換されていてもよい;
Rbは、メチルであるか、またはRbおよびR2は、それらに結合した原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成しており;ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基で所望により置換されていてもよい;
Rdは、水素またはメチルであるか、あるいはRdおよびR4は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成することができる;ここで、各環は、所望により、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシおよびフェニルから独立して選択される1〜4つの基で置換されていてもよい;
Rgは、水素またはメチルであるか、あるいはRgおよびR7は、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびテトラヒドロチアゾールから選択される環を形成することができる;ここで、各環は、アミノ、所望によりハロ基で置換されていてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、所望によりメトキシ基で置換されていてもよいイソキノリニルオキシ、所望によりハロ基で置換されていてもよいキノリニルオキシおよびテトラゾリルから独立して選択される1〜4つの基により所望により置換されていてもよい;ここで前記ピロリジンおよび前記ピペリジン環は、所望により、シクロヘキシル、フェニルまたはインドール基と縮合されていてもよく;
RLは、メチルであるか、あるいはRLおよびR12が、それらが結合している原子と一緒になって、アゼチジンおよびピロリジンから選択される環を形成することができる、ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される1〜4つの基により所望により置換されていてもよい]
の化合物またはその薬学的に許容される塩。 - RdおよびR4が、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており;
RgおよびR7が、それらが結合している原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、前記環は、所望により1つのヒドロキシ基で置換されていてもよく;ならびに
Rkが、メチルである、
請求項1に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。 - Ra、ReおよびRjが、水素であり;
RbおよびR2が、各メチルであるか、あるいはRbおよびR2が、それらが結合している原子と一緒になって、ピペリジン環を形成しており;
RLが、メチルであり;
Rnが、水素、メチルであるか、RnおよびRvは、ピロリジン環を形成しており;
R1が、フェニルメチルであり、ここで前記フェニルは、ハロ、ヒドロキシ、メトキシまたはメチルから選択される1つの基で置換されていてもよい;
R3が、−CH2C(O)NH2および−CH2CO2Hから選択され;
R5が、水素、−CH2NH2、−CH2(イミダゾリル)および−CH2C(O)NH2であり;
R6が、−CH2CH(CH3)2、−(CH2)4NH2、−(CH2)2CO2Hおよび(CH2)2C(O)NH2から選択され;
R8およびR10が、−CH2(インドリル)であり、ここで前記インドリルは、所望により−CH2CO2Hで置換されていてもよい;
R9が、水素、−(CH2)2NH2、−(CH2)4NH2、−CH2OHおよび−CH2C(O)NH2から選択され;
R11およびR12が、−(CH2)3CH3であり;ならびに
R13が、メチル、−CH2OH、−CH2CH(CH3)2および−(CH2)2CO2Hから選択される、
請求項2に記載の化合物またはその治療上許容される塩。 - 化合物が、実施例5001、実施例5002、実施例5003、実施例5004、実施例5005、実施例5006、実施例5007、実施例5008、実施例5009、実施例10001、実施例10002、実施例10003、実施例10004、実施例10005、実施例10006、実施例10007、実施例10008、実施例10009、実施例10010、実施例10011、実施例10012、実施例10013、実施例10014、実施例10015、実施例10016、実施例10017、実施例10018、実施例10019、実施例10020、実施例10021、実施例10022、実施例10023、実施例10024、実施例10025、実施例10026、実施例10027、実施例10028、実施例10500、実施例10501、実施例10502、実施例10503、実施例9005、実施例9006、実施例9007、実施例9008、実施例9009、実施例9010、実施例9011、実施例9012、実施例9013、実施例9014、実施例9015、実施例9016、実施例9017、実施例9018、実施例9019、実施例9020、実施例9021、実施例9022、実施例9023、実施例9024、実施例9025、実施例9026、実施例9027、実施例9028、実施例9029、実施例9030、実施例9031、実施例9032、実施例9033、実施例9034、実施例9035、実施例9036、実施例9037、実施例9038、実施例9039、実施例9040、実施例9041、実施例9042、実施例9043、実施例9044、実施例9045、実施例9046、実施例9047、実施例9048、実施例9049、実施例9050、実施例9051、実施例9052、実施例9053、実施例9054、実施例9055、実施例9056、実施例9057、実施例9058、実施例9059、実施例10029、実施例10030、実施例10031、実施例10032、実施例10033、実施例10034、実施例10035、実施例10036、実施例10037、実施例10038、実施例10039、実施例10040、実施例10041、実施例10042、実施例10504、実施例10505、実施例10506、実施例10507、実施例10508、実施例10509、実施例10510、実施例10511、実施例10512、実施例10513、実施例10514、実施例10515、実施例10516、実施例10517、実施例10518、実施例10519、実施例10520、実施例10521、実施例10522、実施例10525、実施例10526、実施例10527、実施例10528、実施例10529、10530、実施例10531、実施例10532、実施例10533、実施例10534、実施例10535、実施例10536、実施例10537、実施例10538、実施例10539、実施例10540、実施例10541、実施例10542、実施例10543、実施例10544、実施例10545、実施例10546、実施例10547、実施例10548、実施例10549、実施例10550、実施例10551、実施例10552、実施例10553、実施例10554、実施例10555、実施例10556、実施例10557、実施例10558、実施例10559、実施例10560、実施例10561、実施例10562、実施例10563、実施例10564、実施例10566、実施例10567、実施例10568、実施例10569、実施例10570、実施例10571および実施例10572から選択される、化合物またはその薬学的に許容される塩。
- 治療上の有効量の請求項1に記載の化合物またはその治療上許容される塩を対象に投与することを特徴とする、その必要のある対象において免疫応答を増強、刺激および/または増加させる方法。
- 請求項1に記載の化合物またはその治療上許容される塩を、別の薬剤の投与前、後または同時に投与することを更に特徴とする、請求項9に記載の方法。
- 別の薬剤が、殺菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性剤および/または免疫応答修飾剤である、請求項10に記載の方法。
- 別の薬剤が、HDAC阻害剤である、請求項10に記載の方法。
- 別の薬剤が、TLR7および/またはTLR8アゴニストである、請求項10に記載の方法。
- 治療上の有効量の請求項1に記載の化合物またはその治療上許容される塩を対象に投与することを特徴とする、その必要のある対象における癌細胞の成長、増殖または転移を阻害する方法。
- 癌が黒色腫、腎細胞癌、扁平非小細胞性肺癌(NSCLC)、非扁平NSCLC、結腸直腸癌、去勢抵抗性前立腺癌、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、膵臓癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、食道、消化管および乳房の癌ならびに造血器腫瘍から選択される、請求項14に記載の方法。
- 治療上の有効量の請求項1に記載の化合物またはその治療上許容される塩を対象に投与することを特徴とする、その必要のある対象における感染性疾患の治療方法。
- 感染性疾患がウイルスを原因とする、請求項16に記載の方法。
- ウイルスがHIV、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、ヘルペスウイルスおよびインフルエンザから選択される、請求項17に記載の方法。
- 治療上の有効量の請求項1に記載の化合物またはその治療上許容される塩を対象に投与することを特徴とする、その必要のある対象における敗血症性ショックの治療方法。
- 治療上の有効量の請求項1に記載の化合物またはその治療上許容される塩を対象に投与することを特徴とする、PD−L1とPD−1および/またはCD80の相互作用の遮断方法。
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