JP2016539190A5

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Publication number: JP2016539190A5
Application number: JP2016554939A
Authority: JP
Filing date: 2014-11-24
Publication date: 2018-01-18
Anticipated expiration: 2034-11-24

Description

本発明は、以下の態様を含む。
［１］
還元可能なジスルフィド結合を含むポリペプチドを、式［ＰＰ］−Ｓ−ＣＨ _２ −Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ _２ −Ｓ−［ＰＰ］の基（式中、各Ｓは前記ジスルフィド結合に由来する硫黄であり、［ＰＰ］は連結基の末端が前記ポリペプチドに結合している場所を示す）を含むケトンで修飾されたポリペプチドに変換する方法であって、
還元可能なジスルフィド結合を含むポリペプチド、水性緩衝液、および１，３−ジハロアセトンの混合物を形成し、次いで前記ジスルフィド結合を還元できる還元剤を添加することを含む、前記方法。
［２］
前記１，３−ジハロアセトンが、１，３−ジクロロアセトンである、［１］に記載の方法。
［３］
前記還元剤が、水溶性のホスフィンまたはホスフィン塩である、［１］または［２］に記載の方法。
［４］
前記ポリペプチドが、抗体または抗体フラグメントである、［１］から［３］のいずれか一項に記載の方法。
［５］
ケトンで修飾されたポリペプチドをオキシムで修飾されたポリペプチドに変換する方法であって、前記ケトンで修飾されたポリペプチドをアミン系促進剤の存在下で式Ｒ−Ｏ−ＮＨ _２の基と少なくとも約１ｍｇ／ｍＬのポリペプチド濃度で接触させることを含む、前記方法。
［６］
前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、［１］から［４］のいずれか一項に記載の方法で調製される、［５に記載の方法。
［７］
前記アミン系促進剤が、カルボキシ置換アニリンまたはアシルヒドラジンである、［６］に記載の方法。
［８］
式Ｒ−Ｏ−ＮＨ _２の基が、式Ｈ _２Ｎ−Ｏ−Ｌ−ＰＬの化合物（式中、Ｌはリンカーを表し、ＰＬはペイロード基を表す）である、［５］から［７］のいずれか一項に記載の方法。
［９］
前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、式：

（式中、円は前記ポリペプチドを表し、各硫黄原子は、前記ポリペプチドのシステイン残基のスルフヒドリルである）のものである、［５］に記載の方法。
［１０］
前記タンパク質−ペイロード複合体が、式：

（式中、ＸはＯであり、Ｌはリンカーを表し、ｚは１〜１０の整数であり、ＰＬ、ＰＬ ^１およびＰＬ ^２は、出現する毎に独立に、ペイロード基を表す）のものである、［５］から［９］のいずれか一項に記載の方法。
［１１］
前記ポリペプチドが抗体である、［５］から［１０］のいずれか一項に記載の方法。
［１２］
前記ポリペプチドがワクチン担体である、［５］から［１０］のいずれか一項に記載の方法。
［１３］
前記ペイロードが、治療薬を含む、［５］から［１２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４］
前記ペイロードが、検出可能な標識または結合基を含む、［５］から［１３］のいずれか一項に記載の方法。
［１５］
Ｌが、開裂可能な連結部分を含む、［１４］に記載の方法。
［１６］
Ｌが、
（ａ）結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（（Ｃ _１〜Ｃ _６）アルキル）Ｈ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；
（ｂ）（Ｃ _１〜Ｃ _２０）アルキレン、（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルケニレン、（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルキニレン、−Ｚ−（Ｃ _１〜Ｃ _２０）アルキレン、−Ｚ−（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルケニレン、−Ｚ−（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルキニレン、（Ｃ _１〜Ｃ _２０）アルキレン−Ｚ−（Ｃ _１〜Ｃ _２０）アルキレン、（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルケニレン−Ｚ−（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルケニレン、（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルキニレン−Ｚ−（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルキニレン［式中、Ｚは、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ _１〜Ｃ _６）アルキル）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ _３〜Ｃ _７）シクロアルキレン、フェニレン、ヘテロアリーレン、またはヘテロシクレンであり、前記（Ｃ _１〜Ｃ _２０）アルキレン、前記（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルケニレン、および前記（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルキニレン部分は、それぞれ独立に、前記部分内に散在する１〜１０個の酸素原子を任意選択で含んでいてもよい］；
（ｃ）（Ｃ _３〜Ｃ _７）シクロアルキレン、（Ｃ _３〜Ｃ _７）シクロアルキレン−Ｙ−（Ｃ _３〜Ｃ _７）シクロアルキレン、−Ｙ−（Ｃ _３〜Ｃ _７）シクロアルキレン、フェニレン、−Ｙ−フェニレン、フェニレン−Ｙ−フェニレン、ヘテロアリーレン、Ｙ−ヘテロアリーレン、ヘテロアリーレン−Ｙ−ヘテロアリーレン、ヘテロシクレン、−Ｙ−ヘテロシクレン、またはヘテロシクレン−Ｙ−ヘテロシクレン［式中、Ｙは、（Ｃ _１〜Ｃ _２０）アルキレン、（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルケニレン、（Ｃ _２〜Ｃ _２０）アルキニレン、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（（Ｃ _１〜Ｃ _６）アルキル）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり、前記（Ｃ _３〜Ｃ _７）シクロアルキレン、前記フェニレン、前記ヘテロアリーレン、および前記ヘテロシクレン部分は、それぞれ独立に、ハロ、（Ｃ _１〜Ｃ _４）アルキル、またはハロ置換（Ｃ _１〜Ｃ _４）アルキルから選択される１〜３個の置換基で、任意選択で置換されていてもよい］；
（ｄ）−［ＯＣＨ _２ＣＨ _２］ _ｖ −または−Ｊ−｛ＣＨ _２［ＯＣＨ _２ＣＨ _２］ _ｖ｝ _ｗ −（式中、ｖは１〜２，０００であり、ｗは１〜４であり、ＪはＣＨ _２またはＮＨである）；
（ｅ）１〜１００個のアミノ酸を含むペプチド；および
（ｆ）デンドリマー、デンドロン、および超分岐ポリマーを含む樹状高分子から選択される少なくとも１つのスペーサーを含む、［５］から［１５］のいずれか一項に記載の方法。

Claims

還元可能なジスルフィド結合を含むポリペプチドを、式［ＰＰ］−Ｓ−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｓ−［ＰＰ］の基（式中、各Ｓは前記ジスルフィド結合に由来する硫黄であり、［ＰＰ］は前記基の末端が前記ポリペプチドに結合している場所を示す）を含むケトンで修飾されたポリペプチドに変換する方法であって、
還元可能なジスルフィド結合を含むポリペプチド、水性緩衝液、および１，３−ジハロアセトンの混合物を形成し、次いで前記ジスルフィド結合を還元できる還元剤を添加することと、ケトンで修飾されたポリペプチドをアミン系促進剤の存在下で式Ｒ−Ｏ−ＮＨ_２の基と接触させることを含み、式Ｒ−Ｏ−ＮＨ_２の基が、式Ｈ_２Ｎ−Ｏ−Ｌ−ＰＬの化合物（式中、Ｌはリンカーを表し、ＰＬはペイロード基を表す）である、前記方法。
前記１，３−ジハロアセトンが、１，３−ジクロロアセトンである、請求項１に記載の方法。
前記還元剤が、水溶性のホスフィンまたはホスフィン塩である、請求項１または２に記載の方法。
前記ポリペプチドが、抗体または抗体フラグメントである、請求項１または２に記載の方法。
ケトンで修飾されたポリペプチドをオキシムで修飾されたポリペプチドに変換する方法であって、前記ケトンで修飾されたポリペプチドをアミン系促進剤の存在下で式Ｒ−Ｏ−ＮＨ_２の基と少なくとも約１ｍｇ／ｍＬのポリペプチド濃度で接触させることを含み、式Ｒ−Ｏ−ＮＨ_２の基が、式Ｈ_２Ｎ−Ｏ−Ｌ−ＰＬの化合物（式中、Ｌはリンカーを表し、ＰＬはペイロード基を表す）であり、前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法で調製される、前記方法。
前記アミン系促進剤が、カルボキシ置換アニリンまたはアシルヒドラジンである、請求項５に記載の方法。
前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、式：

（式中、円は前記ポリペプチドを表し、各硫黄原子は、前記ポリペプチドのシステイン残基のスルフヒドリルである）のものである、請求項５に記載の方法。
前記オキシムで修飾されたポリペプチドが、式：

（式中、ＸはＯであり、Ｌはリンカーを表し、ｚは１〜１０の整数であり、ｍおよびｎはそれぞれ独立に１〜１０であり、ＰＬ、ＰＬ^１およびＰＬ^２は、出現する毎に独立に、ペイロード基を表す）のものである、請求項５から７のいずれか一項に記載の方法。
前記ポリペプチドが抗体である、請求項５から８のいずれか一項に記載の方法。
前記ポリペプチドがワクチン担体である、請求項５から８のいずれか一項に記載の方法。
前記ペイロードが、治療薬を含む、請求項５から１０のいずれか一項に記載の方法。
前記ペイロードが、検出可能な標識または結合基を含む、請求項５から１１のいずれか一項に記載の方法。
Ｌが、開裂可能な連結部分を含む、請求項１２に記載の方法。
Ｌが、
（ａ）結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル）Ｈ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；
（ｂ）（Ｃ_１〜Ｃ_２０）アルキレン、（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルケニレン、（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルキニレン、−Ｚ−（Ｃ_１〜Ｃ_２０）アルキレン、−Ｚ−（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルケニレン、−Ｚ−（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルキニレン、（Ｃ_１〜Ｃ_２０）アルキレン−Ｚ−（Ｃ_１〜Ｃ_２０）アルキレン、（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルケニレン−Ｚ−（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルケニレン、（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルキニレン−Ｚ−（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルキニレン［式中、Ｚは、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ_３〜Ｃ_７）シクロアルキレン、フェニレン、ヘテロアリーレン、またはヘテロシクレンであり、前記（Ｃ_１〜Ｃ_２０）アルキレン、前記（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルケニレン、および前記（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルキニレン部分は、それぞれ独立に、前記部分内に散在する１〜１０個の酸素原子を任意選択で含んでいてもよい］；
（ｃ）（Ｃ_３〜Ｃ_７）シクロアルキレン、（Ｃ_３〜Ｃ_７）シクロアルキレン−Ｙ−（Ｃ_３〜Ｃ_７）シクロアルキレン、−Ｙ−（Ｃ_３〜Ｃ_７）シクロアルキレン、フェニレン、−Ｙ−フェニレン、フェニレン−Ｙ−フェニレン、ヘテロアリーレン、Ｙ−ヘテロアリーレン、ヘテロアリーレン−Ｙ−ヘテロアリーレン、ヘテロシクレン、−Ｙ−ヘテロシクレン、またはヘテロシクレン−Ｙ−ヘテロシクレン［式中、Ｙは、（Ｃ_１〜Ｃ_２０）アルキレン、（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルケニレン、（Ｃ_２〜Ｃ_２０）アルキニレン、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり、前記（Ｃ_３〜Ｃ_７）シクロアルキレン、前記フェニレン、前記ヘテロアリーレン、および前記ヘテロシクレン部分は、それぞれ独立に、ハロ、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキル、またはハロ置換（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルから選択される１〜３個の置換基で、任意選択で置換されていてもよい］；
（ｄ）−［ＯＣＨ_２ＣＨ_２］_ｖ−または−Ｊ−｛ＣＨ_２［ＯＣＨ_２ＣＨ_２］_ｖ｝_ｗ−（式中、ｖは１〜２，０００であり、ｗは１〜４であり、ＪはＣＨ_２またはＮＨである）；
（ｅ）１〜１００個のアミノ酸を含むペプチド；および
（ｆ）デンドリマー、デンドロン、および超分岐ポリマーを含む樹状高分子から選択される少なくとも１つのスペーサーを含む、請求項５から１３のいずれか一項に記載の方法。