JP2018509394A5

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Publication number: JP2018509394A5
Application number: JP2017541594A
Authority: JP
Filing date: 2016-02-05
Publication date: 2019-03-22
Anticipated expiration: 2036-02-05

Claims

ダイマーを作製する方法であって、少なくとも以下のステップ：
（ｉ）第１のポリペプチドを提供すること、ここで、前記第１のポリペプチドは、
− 少なくとも１つの免疫グロブリン単一可変ドメイン（ISVD）および
− システイン部分を、好ましくはＣ末端において含む、Ｃ末端伸長
を含む；
（ｉｉ）第２のポリペプチドを提供すること、ここで、前記第２のポリペプチドは、
− 少なくとも１つの免疫グロブリン単一可変ドメイン（ISVD）および
− システイン部分を、好ましくはＣ末端において含む、Ｃ末端伸長
を含む；ならびに
（ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドのＣ末端における前記システイン部分のチオール部分および前記第２のポリペプチドのＣ末端における前記システイン部分のチオール部分を、任意に、酸化性銅イオン（Ｃｕ^２＋）を添加することにより、および好ましくはｐＨ６．５〜ｐＨ７．５において、ジスルフィド誘導型シスチンへと酸化すること；
（ｉｖ）ジスルフィド誘導型シスチンを、シスチンから誘導される２個のシステイン残基の間に架橋を形成するコンジュゲート剤と反応させること；および
（ｖ）任意に、好ましくは分子ふるいクロマトグラフィーを介して、ダイマーを精製すること；を含み、、ISVDの完全性が維持されることを特徴とし、
ここで、好ましくは第１および第２のポリペプチドの少なくとも８０％、例えば８５％、９０％、９５％、９９％またはそれより多く、例えば前記第１および第２のポリペプチドの１００％が、二量体化されることが、例えば質量分析により決定され；およびここで、前記コンジュゲート剤が、
式（Ｉ）：
、ここで、
Ｗは、電子求引性基を表し；Ａは、Ｃ_１〜５アルキレンもしくはアルケニレン鎖を表し；Ｂは、結合またはＣ_１−４アルキレンもしくはアルケニレン鎖を表し；および、各々のＬは、独立して、脱離基を表す；の官能基を含むコンジュゲート剤;
式（Ｉａ）：
ここで、Ｑは、連結基を表し、Ｄは、診断、治療もしくは標識剤（例えば薬物など）、または診断、治療もしくは標識剤（例えば薬物など）のための結合剤（例えばリンカー）を表す；の官能基を含む、コンジュゲート剤；
式（Ｉｂ）、ここで、Ｗは、シアノ基を表し：
ここで、Ｑは、連結基を表し、Ｄは、診断、治療もしくは標識剤（例えば薬物など）、または診断、治療もしくは標識剤（例えば薬物など）のための結合剤（例えばリンカー）を表す；の官能基を含む、コンジュゲート剤；および
式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）あるいは（ＩＶ）：
ここで、ＸおよびＸ’のうちの一方は、ポリマーを表し、他方は、水素原子を表し；
Ｑは、連結基を表し；
Ｗは、電子求引性基を表すか；または、Ｘ’がポリマーを表す場合、Ｘ−Ｑ−Ｗは、一緒に、電子求引性基を表してもよく；
Ａは、Ｃ_１〜５アルキレンもしくはアルケニレン鎖を表し；
Ｂは、結合またはＣ_１〜４アルキレンもしくはアルケニレン鎖を表し；ならびに
各々のＬは、独立して、脱離基を表す；
（ＩＩＩ）
ここで、Ｘ、Ｘ’、Ｑ、Ｗ、ＡおよびＬは、一般式ＩＩについて示される意味を有し、加えて、Ｘがポリマーを表す場合、Ｘ’および電子求引性基Ｗは、介在原子と一緒に、環を形成してもよく、ｍは、整数１、２、３または４を表す；あるいは
Ｘ−Ｑ−Ｗ−ＣＲ^１Ｒ^１’−ＣＲ^２．Ｌ．Ｌ’ （ＩＶ）
ここで、Ｘ、ＱおよびＷは、一般式ＩＩについて示される意味を有し、
Ｒ^１は、水素原子またはＣ_１〜４アルキル基を表し、Ｒ^１’は、水素原子を表し、ＬおよびＬ’の各々は、独立して、脱離基を表す；または
Ｒ^１は、水素原子またはＣ_１〜４アルキル基を表し、Ｌは、脱離基を表し、および
Ｒ^１とＬ’とは、一緒に、結合を表す；または
Ｒ^１とＬとは、一緒に、結合を表し、Ｒ^１とＬ’とは、一緒に、結合を表し；ならびに
Ｒは、水素原子またはＣ_１〜４アルキル基を表す、
の官能基を含む、コンジュゲート剤；からなる群から選ばれる、前記方法。
薬物が、細胞分裂阻害剤、細胞傷害剤、化学療法剤、増殖阻害剤、トキシン（例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物由来の酵素活性トキシン、またはそのフラグメント）、トキシン部分、および放射性同位元素からなる群より選択され、前記薬物が、好ましくはMMAEである、請求項１に記載の方法。
結合剤が、診断、治療または標識剤のためのリンカーである、請求項１または２に記載の方法。
第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドが、マレイミド-val-cit-MMAEをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
リンカーが、非切断可能リンカーであるか、または、細胞の酵素（例えば細胞エステラーゼ、カテプシンＢなどの細胞プロテアーゼ）のための切断部位を含む切断可能リンカー、例えばｐＨ切断可能リンカーである、請求項３または４に記載の方法。
薬物対ダイマー比（ＤＡＲ）が、１である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドが、システイン部分を、好ましくはＣ末端において含む、５０、４０、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１アミノ酸残基のＣ末端伸長を含み、好ましくは前記Ｃ末端伸長が、ポリペプチド中の最Ｃ末端に位置するISVDのＣ末端に遺伝子融合される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含むダイマーであって、
ここで、前記第１のポリペプチドは、
− 少なくとも１つの免疫グロブリン単一可変ドメイン（ISVD）および
− システイン部分を（好ましくはＣ末端において）含むＣ末端伸長
を含み；
ここで、前記第２のポリペプチドは、
− 少なくとも１つの免疫グロブリン単一可変ドメイン（ISVD）および
− システイン部分を（好ましくはＣ末端において）含むＣ末端伸長
を含み；および
ここで、前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとは、前記第１のポリペプチドのＣ末端伸長中のシステイン部分（Ｃ）のチオエーテル結合および前記第２のポリペプチドのＣ末端伸長中のシステイン部分（Ｃ）のチオエーテル結合を介して、式（Ｖ）または式（ＶＩ）による化合物
と、共有結合により連結されており、
ここで、
「−Ｃ−」は、本発明のポリペプチドのＣ末端伸長中のシステイン部分を表し；
「−Ｃ」は、本発明のポリペプチドのＣ末端伸長のＣ末端におけるシステイン部分を表し；
Ｒ^１は、Ｃ_１〜４アルキル基を表し；Ｄは、診断、治療もしくは標識剤（例えば薬物など）、または診断、治療もしくは標識剤（例えば薬物など）のための結合剤（例えばリンカー）を表す、
前記ダイマー。
薬物が、細胞分裂阻害剤、細胞傷害剤、化学療法剤、増殖阻害剤、トキシン（例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物由来の酵素活性トキシン、またはそのフラグメント）、トキシン部分、および放射性同位元素からなる群より選択され、好ましくは前記薬物が、MMAEである、請求項８に記載のダイマー。
マレイミド-val-cit-MMAEを含む、請求項８または９に記載のダイマー。
結合剤が、診断、治療または標識剤のためのリンカーである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のダイマー。
リンカーが、非切断可能リンカーであるか、または、細胞の酵素（例えば細胞エステラーゼ、カテプシンＢなどの細胞プロテアーゼ）のための切断部位を含む切断可能リンカー、例えばｐＨ切断可能リンカーである、請求項８〜１１のいずれか一項に記載のダイマー。
薬物対ダイマー比（ＤＡＲ）が、１である、請求項８〜１２のいずれか一項に記載のダイマー。
第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドが、システイン部分を含み、５０、４０、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１アミノ酸残基のＣ末端伸長を含み、ここで前記システイン部分が、好ましくはＣ末端に位置する、請求項８〜１３のいずれか一項に記載のダイマー。
Ｃ末端伸長が、配列番号１〜１５からなる群より選択される、請求項１４に記載のダイマー。
がんの処置における使用のための請求項８〜１５のいずれか一項に記載のダイマーであって、内部移行する、前記ダイマー。
がんの処置のための医薬の製造のための請求項１〜１５のいずれか一項に記載のダイマーであって、内部移行する、前記ダイマーの使用。