JP2016534739A5 - - Google Patents

Description

別の実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、血友病Ａを患う患者を治療するのに有用なＡＡＶウイルス粒子を作製するために使用される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ＡＡＶ２ ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、肝臓特異的な転写調節領域、コドンを最適化した機能的に活性なＦＶＩＩＩコード領域、所望により一つまたは複数のイントロン、ポリアデニル化配列、およびＡＡＶ２ ３’ＩＴＲを含む核酸を含む、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）ベクター。
（項目２）
核酸が以下から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、項目１に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩ ベクター、
ｉ． 配列番号１に記載されるＰｒｏｔｏ１配列、
ｉｉ． 配列番号２に記載されるＰｒｏｔｏ１Ｓ配列、
ｉｉｉ． 配列番号３に記載されるＰｒｏｔｏ２Ｓ配列、
ｉｖ． 配列番号４に記載されるＰｒｏｔｏ３Ｓ配列、
ｖ． 配列番号５に記載されるＰｒｏｔｏ４配列、
ｖｉ． 配列番号６に記載されるＰｒｏｔｏ５配列、
ｖｉｉ． 配列番号７に記載されるＰｒｏｔｏ６配列、
ｖｉｉｉ． 配列番号８に記載されるＰｒｏｔｏ７配列、
ｉｘ． 配列番号９に記載されるコンストラクト１００ＡＴＧ配列、
ｘ． 配列番号１０に記載されるコンストラクト１００ＡＴＧ ｂＧＨポリＡ配列、
ｘｉ． 配列番号１１に記載されるコンストラクト１００ＡＴＧ短ｂＧＨポリＡ配列、
ｘｉｉ． 配列番号１２に記載されるコンストラクト１０３ＡＴＧ配列、
ｘｉｉｉ． 配列番号１３に記載されるコンストラクト１０３ＡＴＧ短ｂＧＨポリＡ配列、
ｘｉｖ． 配列番号１４に記載されるコンストラクト１０５ＡＴＧ ｂＧＨポリＡ配列、ｘｖ． 配列番号１５に記載されるコンストラクトＤＣ１７２ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ配列、ｘｖｉ． 配列番号１６に記載されるコンストラクトＤＣ１７２ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ ｈＡＡＴ配列、
ｘｖｉｉ． 配列番号１７に記載されるコンストラクトＤＣ１７２ ２×ＨＣＲ ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ配列、
ｘｖｉｉｉ． 配列番号１８に記載されるコンストラクトＤＣ１７２ ２×ＨＣＲ ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ ｈＡＡＴ配列、
ｘｉｘ． 配列番号１９に記載されるコンストラクト２×セルピンＡ ｈＡＡＴ ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ配列、
ｘｘ． 配列番号２０に記載されるコンストラクト２×セルピンＡ ｈＡＡＴ ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ ２×μ−グロブリン・エンハンサー配列、
ｘｘｉ． 配列番号２１に記載されるコンストラクト１００ＡＴＧ 短ポリＡ ２×μ−グロブリン・エンハンサー配列、
ｘｘｉｉ． 配列番号２２に記載されるコンストラクト第ＶＩＩＩ因子−ＢＭＮ００１配列、
ｘｘｉｉｉ． 配列番号２３に記載されるコンストラクト第ＶＩＩＩ因子−ＢＭＮ００２配列、
ｘｘｉｖ． 配列番号２４に記載されるコンストラクト９９配列、
ｘｘｖ． 配列番号２５に記載されるコンストラクト１００配列、
ｘｘｖｉ． 配列番号２６に記載されるコンストラクト１００逆配向配列、
ｘｘｖｉｉ． 配列番号２７に記載されるコンストラクト１００ＡＴ配列、
ｘｘｖｉｉｉ． 配列番号２８に記載されるコンストラクト１００ＡＴ ２×ＭＧ配列、ｘｘｉｘ． 配列番号２９に記載されるコンストラクト１００ＡＴ ２×ＭＧ ポリＡ配列、
ｘｘｘ． 配列番号３０に記載されるコンストラクト１００ＡＴ ２×ＭＧ（逆）ｂＧＨポリＡ配列、
ｘｘｘｉ． 配列番号３１に記載されるコンストラクト１００ ｂＧＨポリＡ配列、
ｘｘｘｉｉ． 配列番号３２に記載されるコンストラクト１００〜４００配列、
ｘｘｘｉｉｉ． 配列番号３３に記載されるコンストラクト１０１配列、
ｘｘｘｉｖ． 配列番号３４に記載されるコンストラクト１０２配列、
ｘｘｘｖ． 配列番号３５に記載されるコンストラクト１０３配列、
ｘｘｘｖｉ． 配列番号３６に記載されるコンストラクト１０３逆配向配列、
ｘｘｘｖｉｉ． 配列番号３７に記載されるコンストラクト１０３ＡＴ配列、
ｘｘｘｖｉｉｉ． 配列番号３８に記載されるコンストラクト１０３ＡＴ ２×ＭＧ配列、
ｘｘｘｉｘ． 配列番号３９に記載されるコンストラクト１０３ＡＴ ２×ＭＧ ポリＡ配列、
ｘｌ． 配列番号４０に記載されるコンストラクト１０３ｂＧＨポリＡ配列、
ｘｌｉ． 配列番号４１に記載されるコンストラクト１０４配列、
ｘｌｉｉ． 配列番号４２に記載されるコンストラクト１０５配列、
ｘｌｉｉｉ． 配列番号４３に記載されるコンストラクト１０６配列、
ｘｌｉｖ． 配列番号４４に記載されるコンストラクト１０６ＡＴ配列、および
ｘｌｖ． 配列番号４５に記載されるコンストラクト２×セルピンＡ ｈＡＡＴ配列。
（項目３）
組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子を作製する方法であって、
Ａ）項目１または２に記載のＡＡＶベクターを形質移入された細胞を培養し；
Ｂ）形質移入された細胞の上清から組換えＡＡＶ粒子を回収することを含む、
上記方法。
（項目４）
項目１または２に記載のウイルスベクターを含むウイルス粒子。
（項目５）
項目１または２に記載のウイルスベクターを含む細胞。
（項目６）
患者に有効量の項目１または２に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターを投与することを含む、血友病Ａを患う患者を治療する方法。
（項目７）
血友病Ａの治療用薬剤を調製するための、項目１または２に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターの用途。
（項目８）
血友病Ａの治療用の、項目１または２に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターを含む組成物。

Claims (19)

1. ＡＡＶ２ ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、肝臓特異的な転写調節領域、コドンを最適化した機能的に活性なＦＶＩＩＩコード領域、所望により一つまたは複数のイントロン、ポリアデニル化配列、およびＡＡＶ２ ３’ＩＴＲを含む核酸を含む、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）ベクター。
2. ５．０ｋｂ長未満である、請求項１に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクター。
3. 前記肝臓特異的な転写調節領域が配列番号１のヌクレオチド１４６〜３９７を含む、請求項１または２に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクター。
4. 前記肝臓特異的な転写調節領域が配列番号１のヌクレオチド１４６〜３９７からなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクター。
5. 配列番号１のヌクレオチド１〜３９７を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクター。
6. 前記機能的に活性なＦＶＩＩＩコード領域が配列番号９のヌクレオチド９２３〜５２９６を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクター。
7. 前記機能的に活性なＦＶＩＩＩコード領域が配列番号９のヌクレオチド９２３〜５２９６からなる、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクター。
8. 前記核酸が以下から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクター：
   ｉ． 配列番号１に記載されるＰｒｏｔｏ１配列、
   ｉｉ． 配列番号２に記載されるＰｒｏｔｏ１Ｓ配列、
   ｉｉｉ． 配列番号３に記載されるＰｒｏｔｏ２Ｓ配列、
   ｉｖ． 配列番号４に記載されるＰｒｏｔｏ３Ｓ配列、
   ｖ． 配列番号５に記載されるＰｒｏｔｏ４配列、
   ｖｉ． 配列番号６に記載されるＰｒｏｔｏ５配列、
   ｖｉｉ． 配列番号７に記載されるＰｒｏｔｏ６配列、
   ｖｉｉｉ． 配列番号８に記載されるＰｒｏｔｏ７配列、
   ｉｘ． 配列番号９に記載されるコンストラクト１００ＡＴＧ配列、
   ｘ． 配列番号１０に記載されるコンストラクト１００ＡＴＧ ｂＧＨポリＡ配列、
   ｘｉ． 配列番号１１に記載されるコンストラクト１００ＡＴＧ短ｂＧＨポリＡ配列、
   ｘｉｉ． 配列番号１２に記載されるコンストラクト１０３ＡＴＧ配列、
   ｘｉｉｉ． 配列番号１３に記載されるコンストラクト１０３ＡＴＧ短ｂＧＨポリＡ配列、
   ｘｉｖ． 配列番号１４に記載されるコンストラクト１０５ＡＴＧ ｂＧＨポリＡ配列、ｘｖ． 配列番号１５に記載されるコンストラクトＤＣ１７２ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ配列、ｘｖｉ． 配列番号１６に記載されるコンストラクトＤＣ１７２ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ ｈＡＡＴ配列、
   ｘｖｉｉ． 配列番号１７に記載されるコンストラクトＤＣ１７２ ２×ＨＣＲ ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ配列、
   ｘｖｉｉｉ． 配列番号１８に記載されるコンストラクトＤＣ１７２ ２×ＨＣＲ ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ ｈＡＡＴ配列、
   ｘｉｘ． 配列番号１９に記載されるコンストラクト２×セルピンＡ ｈＡＡＴ ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ配列、
   ｘｘ． 配列番号２０に記載されるコンストラクト２×セルピンＡ ｈＡＡＴ ＡＴＧ ＦＶＩＩＩ ２×μ−グロブリン・エンハンサー配列、
   ｘｘｉ． 配列番号２１に記載されるコンストラクト１００ＡＴＧ 短ポリＡ ２×μ−グロブリン・エンハンサー配列、
   ｘｘｉｉ． 配列番号２２に記載されるコンストラクト第ＶＩＩＩ因子−ＢＭＮ００１配列、
   ｘｘｉｉｉ． 配列番号２３に記載されるコンストラクト第ＶＩＩＩ因子−ＢＭＮ００２配列、
   ｘｘｉｖ． 配列番号２４に記載されるコンストラクト９９配列、
   ｘｘｖ． 配列番号２５に記載されるコンストラクト１００配列、
   ｘｘｖｉ． 配列番号２６に記載されるコンストラクト１００逆配向配列、
   ｘｘｖｉｉ． 配列番号２７に記載されるコンストラクト１００ＡＴ配列、
   ｘｘｖｉｉｉ． 配列番号２８に記載されるコンストラクト１００ＡＴ ２×ＭＧ配列、ｘｘｉｘ． 配列番号２９に記載されるコンストラクト１００ＡＴ ２×ＭＧ ポリＡ配列、
   ｘｘｘ． 配列番号３０に記載されるコンストラクト１００ＡＴ ２×ＭＧ（逆）ｂＧＨポリＡ配列、
   ｘｘｘｉ． 配列番号３１に記載されるコンストラクト１００ ｂＧＨポリＡ配列、
   ｘｘｘｉｉ． 配列番号３２に記載されるコンストラクト１００〜４００配列、
   ｘｘｘｉｉｉ． 配列番号３３に記載されるコンストラクト１０１配列、
   ｘｘｘｉｖ． 配列番号３４に記載されるコンストラクト１０２配列、
   ｘｘｘｖ． 配列番号３５に記載されるコンストラクト１０３配列、
   ｘｘｘｖｉ． 配列番号３６に記載されるコンストラクト１０３逆配向配列、
   ｘｘｘｖｉｉ． 配列番号３７に記載されるコンストラクト１０３ＡＴ配列、
   ｘｘｘｖｉｉｉ． 配列番号３８に記載されるコンストラクト１０３ＡＴ ２×ＭＧ配列、
   ｘｘｘｉｘ． 配列番号３９に記載されるコンストラクト１０３ＡＴ ２×ＭＧ ポリＡ配列、
   ｘｌ． 配列番号４０に記載されるコンストラクト１０３ｂＧＨポリＡ配列、
   ｘｌｉ． 配列番号４１に記載されるコンストラクト１０４配列、
   ｘｌｉｉ． 配列番号４２に記載されるコンストラクト１０５配列、
   ｘｌｉｉｉ． 配列番号４３に記載されるコンストラクト１０６配列、
   ｘｌｉｖ． 配列番号４４に記載されるコンストラクト１０６ＡＴ配列、および
   ｘｌｖ． 配列番号４５に記載されるコンストラクト２×セルピンＡ ｈＡＡＴ配列。
9. 組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子を作製する方法であって、
   Ａ）請求項１〜８のいずれか一項に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターを形質移入された細胞を培養し；
   Ｂ）培養された形質移入された細胞の上清から組換えＡＡＶ粒子を回収することを含む、
   上記方法。
10. 前記細胞が昆虫細胞である、請求項９に記載の方法。
11. 前記昆虫細胞がＳｆ９細胞である、請求項１０に記載の方法。
12. ＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターで形質移入された前記細胞の前記形質移入が、前記ＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターを含むバキュロウイルスによる前記細胞の感染によって達成される、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
13. ＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターで形質移入された前記細胞の前記形質移入が、ＡＡＶ ｒｅｐ遺伝子およびＡＡＶ ｃａｐ遺伝子を含む第２のベクターでの同時形質移入である、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 請求項９〜１３のいずれか一項に記載の方法によって作製される組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子。
15. ＡＡＶ５カプシドを含む、請求項１４に記載の組換えＡＡＶ粒子。
16. 請求項１〜８のいずれか一項に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターを含むウイルス粒子。
17. 請求項１〜８のいずれか一項に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターを含む細胞。
18. 血友病Ａの治療用の、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＡＡＶ ＦＶＩＩＩベクターを含む組成物。
19. 血友病Ａの治療用の、請求項１４〜１５のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子または請求項１６に記載のウイルス粒子を含む組成物。