JP2016522186A - ポリペプチドからなる農薬組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明者らは、植物または作物の有害生物の標的、具体的には植物の病原性有害生物、例えば、限定されないが、植物の病原性真菌に対して、驚くほど高い特異性、親和性および効力を有するポリペプチドの開発に成功した。さらに、これらのポリペプチドは、農薬組成物(本明細書においてさらに定義される。)においてそれらの完全性、安定性および活性を維持し、有効な有害生物または病原体の防除は、驚くべきことに、本出願において開示されているポリペプチドを含む農薬組成物を作物に適用することによって達成され得ることが示される。
配列番号85を有するCDR1領域、配列番号169を有するCDR2領域および配列番号253を有するCDR3領域、または
配列番号86を有するCDR1領域、配列番号170を有するCDR2領域および配列番号254を有するCDR3領域、または
配列番号87を有するCDR1領域、配列番号171を有するCDR2領域および配列番号255を有するCDR3領域、または
配列番号88を有するCDR1領域、配列番号172を有するCDR2領域および配列番号256を有するCDR3領域、または
配列番号89を有するCDR1領域、配列番号173を有するCDR2領域および配列番号257を有するCDR3領域、または
配列番号90を有するCDR1領域、配列番号174を有するCDR2領域および配列番号258を有するCDR3領域、または
配列番号91を有するCDR1領域、配列番号175を有するCDR2領域および配列番号259を有するCDR3領域、または
配列番号92を有するCDR1領域、配列番号176を有するCDR2領域および配列番号260を有するCDR3領域、または
配列番号93を有するCDR1領域、配列番号177を有するCDR2領域および配列番号261を有するCDR3領域、または
配列番号94を有するCDR1領域、配列番号178を有するCDR2領域および配列番号262を有するCDR3領域、または
配列番号95を有するCDR1領域、配列番号179を有するCDR2領域および配列番号263を有するCDR3領域、または
配列番号96を有するCDR1領域、配列番号180を有するCDR2領域および配列番号264を有するCDR3領域、または
配列番号97を有するCDR1領域、配列番号181を有するCDR2領域および配列番号265を有するCDR3領域、または
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配列番号102を有するCDR1領域、配列番号186を有するCDR2領域および配列番号270を有するCDR3領域、または
配列番号103を有するCDR1領域、配列番号187を有するCDR2領域および配列番号271を有するCDR3領域、または
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配列番号125を有するCDR1領域、配列番号209を有するCDR2領域および配列番号293を有するCDR3領域、または
配列番号126を有するCDR1領域、配列番号210を有するCDR2領域および配列番号294を有するCDR3領域、または
配列番号127を有するCDR1領域、配列番号211を有するCDR2領域および配列番号295を有するCDR3領域、または
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配列番号138を有するCDR1領域、配列番号222を有するCDR2領域およびアミノ酸配列NRYを有するCDR3領域、または
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配列番号140を有するCDR1領域、配列番号224を有するCDR2領域および配列番号307を有するCDR3領域、または
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配列番号142を有するCDR1領域、配列番号226を有するCDR2領域および配列番号309を有するCDR3領域、または
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配列番号144を有するCDR1領域、配列番号228を有するCDR2領域および配列番号311を有するCDR3領域、または
配列番号145を有するCDR1領域、配列番号229を有するCDR2領域および配列番号312を有するCDR3領域、または
配列番号146を有するCDR1領域、配列番号230を有するCDR2領域および配列番号313を有するCDR3領域、または
配列番号147を有するCDR1領域、配列番号231を有するCDR2領域および配列番号314を有するCDR3領域、または
配列番号148を有するCDR1領域、配列番号232を有するCDR2領域および配列番号315を有するCDR3領域、または
配列番号149を有するCDR1領域、配列番号233を有するCDR2領域および配列番号316を有するCDR3領域、または
配列番号150を有するCDR1領域、配列番号234を有するCDR2領域および配列番号317を有するCDR3領域、または
配列番号151を有するCDR1領域、配列番号235を有するCDR2領域および配列番号318を有するCDR3領域、または
配列番号152を有するCDR1領域、配列番号236を有するCDR2領域および配列番号319を有するCDR3領域、または
配列番号153を有するCDR1領域、配列番号237を有するCDR2領域および配列番号320を有するCDR3領域、または
配列番号154を有するCDR1領域、配列番号238を有するCDR2領域および配列番号321を有するCDR3領域、または
配列番号155を有するCDR1領域、配列番号239を有するCDR2領域および配列番号322を有するCDR3領域、または
配列番号156を有するCDR1領域、配列番号240を有するCDR2領域および配列番号323を有するCDR3領域、または
配列番号157を有するCDR1領域、配列番号241を有するCDR2領域および配列番号324を有するCDR3領域、または
配列番号158を有するCDR1領域、配列番号242を有するCDR2領域および配列番号325を有するCDR3領域、または
配列番号159を有するCDR1領域、配列番号243を有するCDR2領域および配列番号326を有するCDR3領域、または
配列番号160を有するCDR1領域、配列番号244を有するCDR2領域および配列番号327を有するCDR3領域、または
配列番号161を有するCDR1領域、配列番号245を有するCDR2領域および配列番号328を有するCDR3領域、または
配列番号162を有するCDR1領域、配列番号246を有するCDR2領域および配列番号329を有するCDR3領域、または
配列番号163を有するCDR1領域、配列番号247を有するCDR2領域および配列番号330を有するCDR3領域、または
配列番号164を有するCDR1領域、配列番号248を有するCDR2領域および配列番号331を有するCDR3領域、または
配列番号165を有するCDR1領域、配列番号249を有するCDR2領域および配列番号332を有するCDR3領域、または
配列番号166を有するCDR1領域、配列番号250を有するCDR2領域および配列番号333を有するCDR3領域、または
配列番号167を有するCDR1領域、配列番号251を有するCDR2領域および配列番号334を有するCDR3領域、または
配列番号168を有するCDR1領域、配列番号252を有するCDR2領域および配列番号335を有するCDR3領域
を少なくとも含む。
−植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)またはその機能的断片を入手するステップ、および
−農薬組成物に重鎖可変ドメインまたはその機能的断片を製剤化するステップ
を少なくとも含む方法を提供する。
(a)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の重鎖可変ドメインまたはその機能的断片をコードするヌクレオチド配列を発現するステップ、および場合により
(b)可変ドメインもしくはその機能的断片を単離するおよび/または精製するステップ
を含む。
a)VHH配列もしくはVH配列またはそれらの機能的断片の配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;
b)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合するおよび/またはそれに対して親和性を有する配列について、VHH配列もしくはVH配列またはそれらの機能的断片の配列のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングするステップ、および場合により
c)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合するおよび/またはそれに対して親和性を有するVHH配列もしくはVH配列またはそれらの機能的断片の配列を単離するステップ
を含む。
1.活性物質として、80から200個のアミノ酸の少なくとも1つのポリペプチドを含む、植物の有害生物に対抗するための農薬組成物。
2.植物の有害生物に対抗するための農薬組成物であって、活性物質として、80から200個のアミノ酸の少なくとも1つのポリペプチドを含み、該ポリペプチドが、農薬組成物の全重量の0.01から50%(w/w)の濃度で存在する農薬組成物。
3.特定の植物の有害生物標的に対する親和性選択によって得られる、記述1または2に記載の農薬組成物。
4.ポリペプチドが、10−6Mを下回る解離定数で標的に対する親和性を有する、記述3に記載の農薬組成物。
5.ポリペプチドが3つのCDRと4つのFRを含む、記述1から4のいずれかに記載の農薬組成物。
6.ポリペプチドがラクダ抗体由来である、記述1から5のいずれかに記載の農薬組成物。
7.ポリペプチドがVHHである、記述1から6のいずれかに記載の農薬組成物。
8.植物の有害生物が真菌病原体である、記述1から7のいずれかに記載の農薬組成物。
9.1ヘクタールあたり、農薬組成物に含まれるポリペプチドの50gより高い施用量で作物に記述1から8のいずれかに記載の組成物を施用することを含む、植物の有害生物に対抗するための方法。
10.少なくとも1つの慣例の農薬助剤とともに、殺虫作用を有する80から200個のアミノ酸のポリペプチドを製剤化することを含む、記述1から8のいずれかに記載の農薬組成物を生成するための方法。
11.約0.00001から1μMの最小阻害濃度で作物有害生物の増殖および/または活性を阻害することができる、特定の植物の有害生物標的に対する親和性選択によって得られる、80から200個のアミノ酸のポリペプチド。
12.記述11に記載のポリペプチドをコードする核酸配列。
13.植物発現性プロモーター、記述12に記載の核酸配列および末端配列を含むキメラ遺伝子。
14.記述13のキメラ遺伝子を含む組換えベクター。
15.記述14に定義されるキメラ遺伝子を含む植物。
16.植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)またはその機能的断片を含む農薬組成物。
17.植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)またはその機能的断片を含む、記述1から8のいずれかに記載の農薬組成物。
18.植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する重鎖抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメイン(VHH)またはその機能的断片を含む記述1から8および17のいずれかに記載の農薬組成物。
19.植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する、重鎖抗体の少なくとも1つのラクダ重鎖可変ドメイン(ラクダVHH)またはその機能的断片を含む、記述1から8、17および18のいずれかに記載の農薬組成物。
20.植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する、従来の4本鎖抗体の少なくとも1つのラクダ重鎖可変ドメイン(ラクダVH)またはその機能的断片を含む、記述1から8および17のいずれかに記載の農薬組成物。
21.スフィンゴ脂質がセラミドである、記述1から8および17から20のいずれかに記載の農薬組成物。
22.スフィンゴ脂質がグルコシルセラミドである、記述1から8および17から18のいずれかに記載の農薬組成物。
23.植物病原体が植物病原性真菌である、記述1から8および17から22のいずれかに記載の農薬組成物。
24.植物病原性真菌の属が、アルテルナリア属(Alternaria)、アスコキタ属(Ascochyta)、ボトリチス属(Botrytis)、セルコスポラ属(Cercospora)、コレトトリクム属(Colletotrichum)、ジプロジア属(Diplodia)、エリシフェ属(Erysiphe)、フサリウム属(Fusarium)、レプトスファエリア属(Leptosphaeria)、ゴウマノマイセス属(Gaeumanomyces)、ヘルミントスポリウム属(Helminthosporium)、マクロホミナ属(Macrophomina)、ネクトリア属(Nectria)、ペニシリウム属(Penicillium)、ペロノスポラ属(Peronospora)、ホマ属(Phoma)、フィマトトリクム属(Phymatotrichum)、フィトフトラ属(Phytophthora)、プラスモパラ属(Plasmopara)、ポドスファエラ属(Podosphaera)、プッシニア属(Puccinia)、ピレノホラ属(Pyrenophora)、ピリクラリア属(Pyricularia)、ピシウム属(Pythium)、リゾクトニア属(Rhizoctonia)、スセロチウム属(Scerotium)、スクレロチニア属(Sclerotinia)、セプトリア属(Septoria)、チエラビオプシス属(Thielaviopsis)、ウンシヌラ属(Uncinula)、ベンツリア属(Venturia)、ベルチシリウム属(Verticillium)、マグナポルテ属(Magnaporthe)、ブルメリア属(Blumeria)、ミコスファエレラ属(Mycosphaerella)、ウスチラゴ属(Ustilago)、メラムプソラ属(Melampsora)、ファコスポラ属(Phakospora)、モニリニア属(Monilinia)、ムコール属(Mucor)、リゾプス属(Rhizopus)およびアスペルギルス属(Aspergillus)を含む群から選択される、記述1から8および17から23のいずれかに記載の農薬組成物。
25.植物病原体が、穀物、モロコシ、イネ、テンサイ、飼料用ビート、フルーツ、ナッツ、オオバコ科またはブドウの木、マメ科作物、油料作物、ウリ科植物、繊維植物、燃料作物、野菜、観賞植物、灌木、広葉樹、常緑樹、草、コーヒー、茶、タバコ、ホップ、コショウ、ゴムおよびラテックス植物を含む群から選択される植物に対する植物病原体である、記述1から8および17から24のいずれかに記載の農薬組成物。
26.少なくとも1つの重鎖可変ドメインが、植物病原体による感染または他の生物学的相互作用から植物または植物の一部を保護するまたは処置するのに有効な量で存在する、記述1から8および17から25のいずれかに記載の農薬組成物。
27.農薬組成物中の少なくとも1つの重鎖可変ドメインの濃度が0.0001重量%から50重量%の範囲である、記述1から8および17から26のいずれかに記載の農薬組成物。
28.少なくとも1つの重鎖可変ドメインが水溶液中に製剤化される、記述1から8および17から27のいずれかに記載の農薬組成物。
29.農薬的に適切な担体および/または1つ以上の適切なアジュバントをさらに含む、記述1から8および17から28のいずれかに記載の農薬組成物。
30.抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメインが、
配列番号85を有するCDR1領域、配列番号169を有するCDR2領域および配列番号253を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号86を有するCDR1領域、配列番号170を有するCDR2領域および配列番号254を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号87を有するCDR1領域、配列番号171を有するCDR2領域および配列番号255を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号88を有するCDR1領域、配列番号172を有するCDR2領域および配列番号256を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号89を有するCDR1領域、配列番号173を有するCDR2領域および配列番号257を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号90を有するCDR1領域、配列番号174を有するCDR2領域および配列番号258を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号91を有するCDR1領域、配列番号175を有するCDR2領域および配列番号259を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号92を有するCDR1領域、配列番号176を有するCDR2領域および配列番号260を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号93を有するCDR1領域、配列番号177を有するCDR2領域および配列番号261を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号94を有するCDR1領域、配列番号178を有するCDR2領域および配列番号262を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号95を有するCDR1領域、配列番号179を有するCDR2領域および配列番号263を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号96を有するCDR1領域、配列番号180を有するCDR2領域および配列番号264を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号97を有するCDR1領域、配列番号181を有するCDR2領域および配列番号265を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号98を有するCDR1領域、配列番号182を有するCDR2領域および配列番号266を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号99を有するCDR1領域、配列番号183を有するCDR2領域および配列番号267を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号100を有するCDR1領域、配列番号184を有するCDR2領域および配列番号268を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号101を有するCDR1領域、配列番号185を有するCDR2領域および配列番号269を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号102を有するCDR1領域、配列番号186を有するCDR2領域および配列番号270を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号103を有するCDR1領域、配列番号187を有するCDR2領域および配列番号271を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号104を有するCDR1領域、配列番号188を有するCDR2領域および配列番号272を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号105を有するCDR1領域、配列番号189を有するCDR2領域および配列番号273を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号106を有するCDR1領域、配列番号190を有するCDR2領域および配列番号274を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号107を有するCDR1領域、配列番号191を有するCDR2領域および配列番号275を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号108を有するCDR1領域、配列番号192を有するCDR2領域および配列番号276を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号109を有するCDR1領域、配列番号193を有するCDR2領域および配列番号277を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号110を有するCDR1領域、配列番号194を有するCDR2領域および配列番号278を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号111を有するCDR1領域、配列番号195を有するCDR2領域および配列番号279を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号112を有するCDR1領域、配列番号196を有するCDR2領域および配列番号280を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号113を有するCDR1領域、配列番号197を有するCDR2領域および配列番号281を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号114を有するCDR1領域、配列番号198を有するCDR2領域および配列番号282を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号115を有するCDR1領域、配列番号199を有するCDR2領域および配列番号283を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号116を有するCDR1領域、配列番号200を有するCDR2領域および配列番号284を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号117を有するCDR1領域、配列番号201を有するCDR2領域および配列番号285を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号118を有するCDR1領域、配列番号202を有するCDR2領域および配列番号286を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号119を有するCDR1領域、配列番号203を有するCDR2領域および配列番号287を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号120を有するCDR1領域、配列番号204を有するCDR2領域および配列番号288を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号121を有するCDR1領域、配列番号205を有するCDR2領域および配列番号289を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号122を有するCDR1領域、配列番号206を有するCDR2領域および配列番号290を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号123を有するCDR1領域、配列番号207を有するCDR2領域および配列番号291を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号124を有するCDR1領域、配列番号208を有するCDR2領域および配列番号292を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号125を有するCDR1領域、配列番号209を有するCDR2領域および配列番号293を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号126を有するCDR1領域、配列番号210を有するCDR2領域および配列番号294を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号127を有するCDR1領域、配列番号211を有するCDR2領域および配列番号295を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号128を有するCDR1領域、配列番号212を有するCDR2領域および配列番号296を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号129を有するCDR1領域、配列番号213を有するCDR2領域および配列番号297を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号130を有するCDR1領域、配列番号214を有するCDR2領域および配列番号298を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号131を有するCDR1領域、配列番号215を有するCDR2領域および配列番号299を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号132を有するCDR1領域、配列番号216を有するCDR2領域および配列番号300を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号133を有するCDR1領域、配列番号217を有するCDR2領域および配列番号301を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号134を有するCDR1領域、配列番号218を有するCDR2領域および配列番号302を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号135を有するCDR1領域、配列番号219を有するCDR2領域および配列番号303を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号136を有するCDR1領域、配列番号220を有するCDR2領域および配列番号304を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号137を有するCDR1領域、配列番号221を有するCDR2領域および配列番号305を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号138を有するCDR1領域、配列番号222を有するCDR2領域およびアミノ酸配列NRYを有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号139を有するCDR1領域、配列番号223を有するCDR2領域および配列番号306を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号140を有するCDR1領域、配列番号224を有するCDR2領域および配列番号307を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号141を有するCDR1領域、配列番号225を有するCDR2領域および配列番号308を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号142を有するCDR1領域、配列番号226を有するCDR2領域および配列番号309を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号143を有するCDR1領域、配列番号227を有するCDR2領域および配列番号310を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号144を有するCDR1領域、配列番号228を有するCDR2領域および配列番号311を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号145を有するCDR1領域、配列番号229を有するCDR2領域および配列番号312を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号146を有するCDR1領域、配列番号230を有するCDR2領域および配列番号313を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号147を有するCDR1領域、配列番号231を有するCDR2領域および配列番号314を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号148を有するCDR1領域、配列番号232を有するCDR2領域および配列番号315を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号149を有するCDR1領域、配列番号233を有するCDR2領域および配列番号316を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号150を有するCDR1領域、配列番号234を有するCDR2領域および配列番号317を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号151を有するCDR1領域、配列番号235を有するCDR2領域および配列番号318を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号152を有するCDR1領域、配列番号236を有するCDR2領域および配列番号319を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号153を有するCDR1領域、配列番号237を有するCDR2領域および配列番号320を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号154を有するCDR1領域、配列番号238を有するCDR2領域および配列番号321を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号155を有するCDR1領域、配列番号239を有するCDR2領域および配列番号322を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号156を有するCDR1領域、配列番号240を有するCDR2領域および配列番号323を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号157を有するCDR1領域、配列番号241を有するCDR2領域および配列番号324を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号158を有するCDR1領域、配列番号242を有するCDR2領域および配列番号325を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号159を有するCDR1領域、配列番号243を有するCDR2領域および配列番号326を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号160を有するCDR1領域、配列番号244を有するCDR2領域および配列番号327を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号161を有するCDR1領域、配列番号245を有するCDR2領域および配列番号328を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号162を有するCDR1領域、配列番号246を有するCDR2領域および配列番号329を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号163を有するCDR1領域、配列番号247を有するCDR2領域および配列番号330を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号164を有するCDR1領域、配列番号248を有するCDR2領域および配列番号331を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号165を有するCDR1領域、配列番号249を有するCDR2領域および配列番号332を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号166を有するCDR1領域、配列番号250を有するCDR2領域および配列番号333を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号167を有するCDR1領域、配列番号251を有するCDR2領域および配列番号334を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号168を有するCDR1領域、配列番号252を有するCDR2領域および配列番号335を有するCDR3領域
を少なくとも含み、記述1から8および17から29のいずれかに記載の農薬組成物。
31.少なくとも1つの重鎖可変ドメインが、配列番号1から84を含む群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列を含む、記述1から8および17から30のいずれかに記載の農薬組成物。
32.植物病原体による感染または他の生物学的相互作用から植物または植物の一部を保護または処置するための方法であって、該方法は、植物病原体による感染または生物学的相互作用に対して植物または植物の一部を保護または処置するのに有効な条件下で、記述1から8および17から31のいずれかに記載の農薬組成物を植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む方法。
33.植物病原体による感染または他の生物学的相互作用から植物または植物の一部を保護または処置するための記述9に記載の方法であって、該方法は、植物病原体による感染または生物学的相互作用に対して植物または植物の一部を保護または処置するのに有効な条件下で、記述1から8および17から31のいずれかに記載の農薬組成物を植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む方法。
34.1ヘクタールあたり農薬組成物の50gより高い敵用量で、記述1から8および17から31のいずれか1つに記載の農薬組成物を植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用することを含む、記述9、32または33のいずれかに記載の方法。
35.農薬組成物が、噴霧すること(spraying)、粉末にすること、泡状にすること、噴霧すること(fogging)、ハイドロカルチャーにおいて培養すること、水耕栽培において培養すること、コーティングすること、浸漬することおよび/または被覆すること(encrusting)によって、植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用される、記述9または32から34のいずれかに記載の方法。
36.農薬組成物が、場合により収穫後に、植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用される、記述9または32から35のいずれかに記載の方法。
37.植物病原体による感染または他の生物学的相互作用から収穫した植物または収穫した植物の一部を保護または処置するための収穫後の処置方法であって、該方法は、植物病原体による感染または生物学的相互作用に対して収穫した植物または収穫した植物の一部を保護または処置するのに有効な条件下で、記述1から8および17から31のいずれかに記載の農薬組成物を収穫した植物または収穫した植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む方法。
38.抗有害生物剤としての記述1から8および17から31のいずれかに記載の農薬組成物の使用。
39.抗有害生物剤が制生剤である、記述38に記載の使用。
40.抗有害生物剤が静真菌剤である、記述38または39に記載の使用。
41.抗有害生物剤が殺虫剤である、記述38に記載の使用。
42.抗有害生物剤が殺真菌剤である、記述38または41に記載の使用。
43.記述1から8および17から31のいずれか1つに記載の農薬組成物を植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む、植物病原体の増殖を阻害するための方法。
44.記述1から8および17から31のいずれか1つに記載の農薬組成物を植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む、植物病原体を死滅させるための方法。
45.農薬組成物が、噴霧すること(spraying)し、粉末にすること、泡状にすること、噴霧すること(fogging)、ハイドロカルチャーにおいて培養すること、水耕栽培において培養すること、コーティングすること、浸漬することおよび/または被覆すること(encrusting)によって、植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用される、記述43または44に記載の方法。
46.農薬組成物が、場合により収穫後に、植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用される、記述43から45のいずれか1つに記載の方法。
47.記述1から8および17から31のいずれか1つに記載の農薬組成物を生成するための方法であって、該方法は、
−植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)またはその機能的断片を入手するステップ、および
−記述1から8および17から31のいずれか1つに記載の農薬組成物に重鎖可変ドメインまたはその機能的断片を製剤化するステップ
を少なくとも含む方法。
48.記述1から8および17から31のいずれか1つに記載の農薬組成物を生成するための記述10に記載の方法であって、該方法は、
−植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)またはその機能的断片を入手するステップ、および
−記述1から8および17から31のいずれか1つに記載の農薬組成物に重鎖可変ドメインまたはその機能的断を製剤化するステップ
を少なくとも含む方法。
49.植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメインまたはその機能的断片を入手するステップが
(a)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)またはその機能的断片をコードするヌクレオチド配列を発現するステップ、および場合により
(b)重鎖ドメインもしくはその機能的断片を単離するおよび/または精製するステップ
を含む、記述10、47または48に記載の方法。
50.植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメインまたはその機能的断片を入手するステップが
a)重鎖可変ドメイン配列もしくはその機能的断片の配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;
b)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合しおよび/またはそれに対して親和性を有する配列について、重鎖可変ドメイン配列もしくはその機能的断片のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングするステップ、および場合により
c)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合するおよび/またはそれに対して親和性を有する重鎖可変ドメイン配列またはその機能的断片の配列を単離するステップ
を含む、記述10、47または48に記載の方法。
本発明は、特定の実施形態を参照して説明されるが、本発明は、これらに限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。特許請求の範囲におけるいずれの引用符号も、範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
一態様において、本発明者らは、植物有害生物のスフィンゴ脂質に特異的に結合することができる、抗体の少なくとも1つの可変ドメインを含む農薬組成物を同定した。重要なことには、有害生物の特定の分子構造とのこの相互作用を介して、本明細書に開示されている組成物は、植物病原体の成長が制御され、調節され、阻害され、妨げられまたは低減されるように、植物病原体の1つ以上の生物学的活性を制御し、調節し、阻害し、妨げまたは低減することができる。ある種の実施形態において、本明細書に開示される農薬組成物は、植物有害生物のスフィンゴ脂質に特異的に結合することができ、組成物に含まれる抗体の少なくとも1つの可変ドメインポリペプチドの特定の相互作用を介して植物の有害生物を死滅させることができる。したがって、本明細書に開示される農薬組成物は、植物の有害生物のスフィンゴ脂質標的に存在する結合部位に結合することによって、その植物の有害生物の生物学的機能を調節、例えば、変化、減少または阻害するために使用され得、それによって、有害生物の自然な生物学的活性(例えば、限定されないが、増殖)および/またはその有害生物の構造標的が関与する1つ以上の生物学的経路に影響を及ぼすことができる。
配列番号85を有するCDR1領域、配列番号169を有するCDR2領域および配列番号253を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号86を有するCDR1領域、配列番号170を有するCDR2領域および配列番号254を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号87を有するCDR1領域、配列番号171を有するCDR2領域および配列番号255を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号88を有するCDR1領域、配列番号172を有するCDR2領域および配列番号256を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号89を有するCDR1領域、配列番号173を有するCDR2領域および配列番号257を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号90を有するCDR1領域、配列番号174を有するCDR2領域および配列番号258を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号91を有するCDR1領域、配列番号175を有するCDR2領域および配列番号259を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号92を有するCDR1領域、配列番号176を有するCDR2領域および配列番号260を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号93を有するCDR1領域、配列番号177を有するCDR2領域および配列番号261を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号94を有するCDR1領域、配列番号178を有するCDR2領域および配列番号262を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号95を有するCDR1領域、配列番号179を有するCDR2領域および配列番号263を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号96を有するCDR1領域、配列番号180を有するCDR2領域および配列番号264を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号97を有するCDR1領域、配列番号181を有するCDR2領域および配列番号265を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号98を有するCDR1領域、配列番号182を有するCDR2領域および配列番号266を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号99を有するCDR1領域、配列番号183を有するCDR2領域および配列番号267を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号100を有するCDR1領域、配列番号184を有するCDR2領域および配列番号268を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号101を有するCDR1領域、配列番号185を有するCDR2領域および配列番号269を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号102を有するCDR1領域、配列番号186を有するCDR2領域および配列番号270を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号103を有するCDR1領域、配列番号187を有するCDR2領域および配列番号271を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号104を有するCDR1領域、配列番号188を有するCDR2領域および配列番号272を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号105を有するCDR1領域、配列番号189を有するCDR2領域および配列番号273を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号106を有するCDR1領域、配列番号190を有するCDR2領域および配列番号274を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号107を有するCDR1領域、配列番号191を有するCDR2領域および配列番号275を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号108を有するCDR1領域、配列番号192を有するCDR2領域および配列番号276を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号109を有するCDR1領域、配列番号193を有するCDR2領域および配列番号277を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号110を有するCDR1領域、配列番号194を有するCDR2領域および配列番号278を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号111を有するCDR1領域、配列番号195を有するCDR2領域および配列番号279を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号112を有するCDR1領域、配列番号196を有するCDR2領域および配列番号280を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号113を有するCDR1領域、配列番号197を有するCDR2領域および配列番号281を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号114を有するCDR1領域、配列番号198を有するCDR2領域および配列番号282を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号115を有するCDR1領域、配列番号199を有するCDR2領域および配列番号283を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号116を有するCDR1領域、配列番号200を有するCDR2領域および配列番号284を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号117を有するCDR1領域、配列番号201を有するCDR2領域および配列番号285を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号118を有するCDR1領域、配列番号202を有するCDR2領域および配列番号286を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号119を有するCDR1領域、配列番号203を有するCDR2領域および配列番号287を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号120を有するCDR1領域、配列番号204を有するCDR2領域および配列番号288を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号121を有するCDR1領域、配列番号205を有するCDR2領域および配列番号289を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号122を有するCDR1領域、配列番号206を有するCDR2領域および配列番号290を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号123を有するCDR1領域、配列番号207を有するCDR2領域および配列番号291を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号124を有するCDR1領域、配列番号208を有するCDR2領域および配列番号292を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号125を有するCDR1領域、配列番号209を有するCDR2領域および配列番号293を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号126を有するCDR1領域、配列番号210を有するCDR2領域および配列番号294を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号127を有するCDR1領域、配列番号211を有するCDR2領域および配列番号295を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号128を有するCDR1領域、配列番号212を有するCDR2領域および配列番号296を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号129を有するCDR1領域、配列番号213を有するCDR2領域および配列番号297を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号130を有するCDR1領域、配列番号214を有するCDR2領域および配列番号298を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号131を有するCDR1領域、配列番号215を有するCDR2領域および配列番号299を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号132を有するCDR1領域、配列番号216を有するCDR2領域および配列番号300を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号133を有するCDR1領域、配列番号217を有するCDR2領域および配列番号301を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号134を有するCDR1領域、配列番号218を有するCDR2領域および配列番号302を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号135を有するCDR1領域、配列番号219を有するCDR2領域および配列番号303を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号136を有するCDR1領域、配列番号220を有するCDR2領域および配列番号304を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号137を有するCDR1領域、配列番号221を有するCDR2領域および配列番号305を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号138を有するCDR1領域、配列番号222を有するCDR2領域およびアミノ酸配列NRYを有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号139を有するCDR1領域、配列番号223を有するCDR2領域および配列番号306を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号140を有するCDR1領域、配列番号224を有するCDR2領域および配列番号307を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号141を有するCDR1領域、配列番号225を有するCDR2領域および配列番号308を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号142を有するCDR1領域、配列番号226を有するCDR2領域および配列番号309を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号143を有するCDR1領域、配列番号227を有するCDR2領域および配列番号310を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号144を有するCDR1領域、配列番号228を有するCDR2領域および配列番号311を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号145を有するCDR1領域、配列番号229を有するCDR2領域および配列番号312を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号146を有するCDR1領域、配列番号230を有するCDR2領域および配列番号313を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号147を有するCDR1領域、配列番号231を有するCDR2領域および配列番号314を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号148を有するCDR1領域、配列番号232を有するCDR2領域および配列番号315を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号149を有するCDR1領域、配列番号233を有するCDR2領域および配列番号316を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号150を有するCDR1領域、配列番号234を有するCDR2領域および配列番号317を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号151を有するCDR1領域、配列番号235を有するCDR2領域および配列番号318を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号152を有するCDR1領域、配列番号236を有するCDR2領域および配列番号319を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号153を有するCDR1領域、配列番号237を有するCDR2領域および配列番号320を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号154を有するCDR1領域、配列番号238を有するCDR2領域および配列番号321を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号155を有するCDR1領域、配列番号239を有するCDR2領域および配列番号322を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号156を有するCDR1領域、配列番号240を有するCDR2領域および配列番号323を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号157を有するCDR1領域、配列番号241を有するCDR2領域および配列番号324を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号158を有するCDR1領域、配列番号242を有するCDR2領域および配列番号325を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号159を有するCDR1領域、配列番号243を有するCDR2領域および配列番号326を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号160を有するCDR1領域、配列番号244を有するCDR2領域および配列番号327を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号161を有するCDR1領域、配列番号245を有するCDR2領域および配列番号328を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号162を有するCDR1領域、配列番号246を有するCDR2領域および配列番号329を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号163を有するCDR1領域、配列番号247を有するCDR2領域および配列番号330を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号164を有するCDR1領域、配列番号248を有するCDR2領域および配列番号331を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号165を有するCDR1領域、配列番号249を有するCDR2領域および配列番号332を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号166を有するCDR1領域、配列番号250を有するCDR2領域および配列番号333を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号167を有するCDR1領域、配列番号251を有するCDR2領域および配列番号334を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号168を有するCDR1領域、配列番号252を有するCDR2領域および配列番号335を有するCDR3領域
の群から選択される少なくとも1つのCDR配列の組み合わせを含む抗体の重鎖可変ドメインを少なくとも含む。
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
を有する重鎖可変ドメインを提供し、FR1からFR4はそれぞれフレームワーク領域1から4を指し、CDR1からCDR3はそれぞれ相補性決定領域1から3を指し、本明細書においてさらに定義される。
ある種の態様において、本明細書に開示されている農薬組成物に含まれる重鎖可変ドメインは、場合により、1つ以上のリンカーを介して1つ以上のさらなる基、部分または残基に連結されてもよい。これらの1つ以上のさらなる基、部分または残基は、目的の他の標的に結合するために役立ち得る。このようなさらなる基、残基、部分および/もしくは結合部位は、本明細書に開示されている重鎖可変ドメインに対して(および/もしくは重鎖可変ドメインが存在する組成物に対して)さらなる官能性を与えてもよくまたは与えなくてもよく、本明細書に開示されている重鎖可変ドメインの特性を修飾してもよくまたは修飾しなくてもよいことは明らかになるべきである。このような基、残基、部分または結合単位はまた、例えば、生物学的活性であり得る化学基であってもよい。
本発明はまた、本明細書に開示されている組成物に含まれる重鎖可変ドメインの部分、断片、アナログ、変異体、改変体および/または誘導体を包含し、ならびに/またはこれらの部分、断片、アナログ、変異体、改変体および/または誘導体が本明細書において想定される目的に適切である限り、このような部分、断片、アナログ、変異体、改変体および/もしくは誘導体の1つ以上を含むまたはそれらから本質的になるポリペプチドを包含する。本発明に係るこのような部分、断片、アナログ、変異体、改変体および/または誘導体は、なおもスフィンゴ脂質標的に特異的に結合することができる。
特定の実施形態において、本明細書に開示されている組成物に含まれる重鎖可変ドメインは、特定の有害生物標的に対する親和性選択によって得られる。特定の有害生物標的に対する親和性選択によって適切なポリペプチドを得ることは、例えば、有害生物標的分子が農薬に対する標的であることが当該技術分野において耕地である該分子に対する結合に対して、細胞の表面でポリペプチドを発現する細胞(例えば、バクテリオファージ)のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングすることによって行われてもよく;それらの全ては、それ自体で公知の方法で行われてもよく、本質的には、以下の非制限的なステップ:a)農薬に対する標的であることが公知である有害生物標的分子の単離された溶液または懸濁液を得るステップ;b)該標的分子に対するポリペプチドライブラリーからファージまたは他の細胞をバイオパニングするステップ;c)標的分子に結合するファージまたは他の細胞を単離するステップ;d)個々の結合ファージまたは他の細胞からポリペプチドインサートをコードするヌクレオチド配列を決定するステップ;e)組換えタンパク質発現を用いてこの配列に従ってある量のポリペプチドを生成するステップ、およびf)該有害生物標的について該ポリペプチドの親和性を決定するステップ;場合によりg)該有害生物に対するバイオアッセイにおいて該ポリペプチドの殺虫活性を試験することを含む。ポリペプチドと有害生物標的分子の間の親和性を決定するために様々な方法が用いられ得、例えば、酵素結合免疫吸着法(ELISA)または表面プラズミン共鳴(SPR)アッセイが挙げられ、これらは、例えば、Sambrookら(2001),Molecular Cloning,A Laboratory Manual.Third Edition.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NYに記載されるように、当該技術分野において一般的な方法である。解離定数は、通常、ポリペプチドとその有害生物標的分子の間の親和性を決定するために使用される。典型的には、ポリペプチドとその有害生物標的分子の間の結合の解離定数は10−5Mよりも低く、より好ましくは解離定数は10−6Mよりも低く、さらにより好ましくは10−7Mよりも低く、最も好ましくは解離定数は10−8Mよりも低い。
アルテルナリア属;アスコキタ属;ボトリチス属;セルコスポラ属;コレトトリクム属;ジプロジア属;エリシフェ属;フサリウム属;レプトスファエリア属;ゴウマノマイセス属;ヘルミントスポリウム属;マクロホミナ属;ネクトリア属;ペロノスポラ属;ホマ属;フィマトトリクム属;フィトフトラ属;プラスモパラ属;ポドスファエラ属;プッシニア属;プチウム属(Puthium);ピレノホラ属;ピリクラリア属;ピシウム属;リゾクトニア属;スセロチウム属;スクレロチニア属;セプトリア属;チエラビオプシス属;ウンシヌラ属;ベンツリア属;およびベルチシリウム属からなる群から選択されるものが含まれる。本発明の農薬組成物を用いて対抗し得る植物真菌感染の具体的な例としては、穀物におけるエリシフェ・グラミニス(Erysiphe graminis)、ウリ科植物におけるエリシフェ・シコラセアラム(Erysiphe cichoracearum)およびスファエロテカ・フリジネア(Sphaerotheca fuliginea)、リンゴにおけるポドスファエラ・レウコトリカ(Podosphaera leucotricha)、つる植物におけるウンシヌラ・ネカタトール(Uncinula necator)、穀物におけるプチニア属種(Puccinia sp.)、綿、ジャガイモ、コメおよびシバにおけるリゾクトニア属種(Rhizoctonia sp.)、穀物およびサトウキビにおけるウスチラゴ属種(Ustilago sp.)、リンゴにおけるベンツリア・イナエクアリス(Venturia inaequalis)(黒星病)、穀物におけるヘルミントスポリウム属種(Helminthosporium sp.)、コムギにおけるセプトリア・ノドラム(Septoria nodorum)、コムギにおけるセプトリア・トリチシ(Septoria tritici)、オオムギにおけるリンコスポリウム・セカリス(Rhynchosporium secalis)、イチゴ、トマトおよびブドウにおけるボトリチス・シネレア(Botrytis cinerea)(灰色カビ病)、ラッカセイにおけるセルコスポラ・アラキジコラ(Cercospora arachidicola)、タバコにおけるペロノスポラ・タバシナ(Peronospora tabacina)または種々の農作物における他のペロノスポラ(Peronospora)、コムギおよびオオムギにおけるシュードセルコスポレラ・ヘルポトリコイデス(Pseudocercosporella herpotrichoides)、オオムギにおけるピレノフェラ・テレス(Pyrenophera teres)、コメにおけるピリクラリア・オリザエ(Pyricularia oryzae)、ジャガイモおよびトマトにおけるフィトフトラ・インフェスタンス(Phytophthora infestans)、種々の植物におけるフサリウム属種(Fusarium sp.)(フサリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)など)および種々の植物におけるベルチシリウム属種(Verticillium sp.)、ブドウにおけるプラスモパラ・ビチコラ(Plasmopara viticola)、果物および野菜におけるアルタナリア属種(Alternaria sp.)、キュウリにおけるシュードペロノスポラ・クベンシス(Pseudoperonospora cubensis)、バナナにおけるマイコスファエレラ・フィジエンシス(Mycosphaerella fijiensis)、ヒヨコマメにおけるアスコチタ属種(Ascochyta sp.)、アブラナにおけるレプトスファエリア属種(Leptosphaeria sp.)および種々の農作物におけるコレオトリカム属種(Colleotrichum sp.)が挙げられる。本発明による組成物は、通常に感受性があり耐性の種に対して活性があり、植物病原性真菌のライフサイクルにおける全てのまたはいくつかの段階に対して活性がある。
本明細書における開示に基づいて、農薬および生物学的対照応用に関して、本明細書に開示されている組成物の重鎖可変ドメインは、原則として、スフィンゴ脂質標的のいくつかの異なる形態に対して指向され、または特異的に結合することは承認される。また、本明細書に開示されている組成物の重鎖可変ドメインは、多数の天然に存在するまたは合成のアナログ、改変体、変異体、対立遺伝子、部分およびこれらのスフィンゴ脂質対象の断片に結合することが予期される。より具体的には、本明細書に開示されている組成物の重鎖可変ドメインは、それらの重鎖可変ドメインが結合する天然のスフィンゴ脂質標的の結合部位、部分またはドメインを(なおも)含有するそれらのアナログ、改変体、変異体、対立遺伝子、部分およびスフィンゴ脂質標的の断片に少なくとも結合することが予期される。
本明細書に開示されている農薬または生物防除組成物に含まれるポリペプチド含有量は広範囲内で変化し得、概して、弱毒化されるべき特定の作物有害生物に応じて、特定のポリペプチドの濃度範囲を変更することは製造業者次第であることは想定される。
ある種の態様において、本発明は、植物病原体による感染または他の生物学的相互作用から植物または植物の一部を保護または処置するための方法であって、植物病原体による感染または生物学的相互作用に対して植物または植物の一部を保護または処置するのに有効な条件下で、本明細書に開示されている農薬組成物を植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む方法を提供する。
本発明は、重鎖可変ドメイン配列を調製または生成するための方法、ならびにこれをコードする核酸を生成するための方法、これらの重鎖可変ドメイン配列を含む宿主細胞、生成物および組成物を提供する。いくつかの好ましいが限定されないこのような方法の例は、本明細書においてさらなる記述から明らかになる。
(a)本明細書に開示されている重鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列またはその重鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を含むベクターもしくは遺伝子構築物を発現するステップ、および
(b)場合により、該重鎖可変ドメイン配列を単離および/または精製するステップ
を含む。
a)重鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;
b)有害生物標的に結合することができおよび/またはスフィンゴ脂質標的に対して親和性を有するアミノ酸配列のためのアミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングするステップ、および
c)スフィンゴ脂質標的に結合することができおよび/またはスフィンゴ脂質標的に対して親和性を有するアミノ酸配列を単離するステップ
を含む。
a)重鎖可変ドメインアミノ酸配列を発現する細胞のコレクションまたは試料を用意するステップ、
b)有害生物標的に結合することができおよび/またはスフィンゴ脂質標的に対して親和性を有するアミノ酸配列を発現する細胞に対して、細胞のコレクションまたは試料をスクリーニングするステップ;および
c)(i)該アミノ酸配列を単離し;または(ii)該細胞から該アミノ酸配列をコードする核酸配列を単離し、続いて、該アミノ酸配列を発現させるステップ
を少なくとも含む。
a)重鎖可変ドメインアミノ酸配列をコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;
b)該スフィンゴ脂質標的に結合することができおよび/または有害生物標的に対して親和性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列に関して、上記核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングするステップ;および
c)上記核酸配列を単離し、続いて、該アミノ酸配列を発現するステップ
を少なくとも含み得る。
いくつかの場合において、本明細書において想定される真菌標的に特異的に結合するアミノ酸配列を生成するための方法は、有害生物標的に対する検出可能な結合親和性またはスフィンゴ脂質標的における検出可能なインビトロ効果を有する少なくとも1つの重鎖可変ドメインをアミノ酸配列ライブラリーから単離するステップをさらに含んでもよい。
−植物の有害生物のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメイン(VHHもしくはVH)またはその機能的断片を得るステップ、および
−農薬組成物に重鎖可変ドメインまたはその機能的断片を製剤化するステップ
を少なくとも含む方法を提供する。
(a)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する重鎖可変ドメインまたはその機能的断片をコードするヌクレオチド配列を発現し、および、場合により
(b)重鎖可変ドメインまたはその機能的断片を単離および/精製する
ことを含む。
a)重鎖可変ドメイン配列または重鎖可変ドメインの機能的断片のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;
b)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合しおよび/またはそれに対して親和性を有する配列について、重鎖可変ドメイン配列もしくはその機能的断片のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングするステップ;および場合により
c)植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合するおよび/またはそれに対して親和性を有する重鎖可変ドメイン配列またはその機能的断片の配列を単離するステップ
を含む。
さらなる態様において、本発明は、本明細書に開示されている組成物中の重鎖可変ドメインアミノ酸配列をコードする核酸配列(または適切なその断片)を提供する。また、これらの核酸配列は、ベクターまたは構築物またはポリヌクレオチドの形態であってもよい。本明細書に開示されている核酸配列は、合成もしくは半合成の配列、ライブラリー(および特に発現ライブラリー)から単離されたヌクレオチド配列、重複プライマーを用いるPCRによって調製されたヌクレオチド配列、またはそれ自体が公知のDNA合成のための技術を用いて調製されたヌクレオチド配列であってもよい。
本明細書に開示されている遺伝子構築物は、DNAまたはRNAであり得、好ましくは二本鎖DNAである。本発明の遺伝子構築物はまた、意図される宿主細胞もしくは宿主生物の形質転換に適した形態、意図された宿主細胞のゲノムDNAへの組み込みに適した形態、または意図された宿主生物における独立した複製、維持および/または継承に適した形態であってもよい。例えば、本発明の遺伝子構築物は、ベクター、例えば、プラスミド、コスミド、YAC、ウイルスベクターまたはトランスポゾンの形態であってもよい。具体的には、ベクターは、発現ベクター、すなわち、インビトロおよび/またはインビボにおいて(例えば、適切な宿主細胞、宿主生物および/または発現系において)発現用に提供し得るベクターであり得る。
実施例1
真菌グルコシルセラミドに対する親和性を有するペプチドをコードする核酸配列の単離
動物の免疫化:VHHは、真菌グルコシルセラミド(GlcCer)で免疫化されたラマから生じされた。ラマは、プレロトス・シトリノピレタス(Pleurotus citrinopileatus)由来の薄層クロマトグラフィー(TLC)精製された(99%)のグルコシルセラミド(GlcCer)(Nacalai Tesque)の6ブーストを用いて、標準的なプロトコルに従って免疫化された。精製されたGlcCerは水:メタノール:クロロホルム混合物に溶解され、TLCシリカガラスプレート上にスポットされた。吸着されたGlcCerを有するシリカはプレートから剥がされ、リン酸緩衝液中に懸濁された。懸濁液は超音波処理され、フロイント不完全アジュバントと混合され、皮下注射に使用された。VHHはまた、天然の発芽した真菌または卵菌胞子で免疫されたラマから生成された。ラマは、皮下注射によって、ボトリチス・シネレア(Botrytis cinerea)またはフィトフトラ・インフェスタンス(Phytophthora infestans)の天然発芽胞子の6ブートを用いて標準的なプロトコルに従って免疫化された。すべてのラマは、免疫化プロセスを通じて健常のままであり、血液試料は、免疫化の前後に採取された。
抗GlcCer VHH 41 D01および/またはプロテアーゼ阻害剤および/または非イオン性界面活性剤および/または保存剤を含有する水性組成物が調製された。組成物A1(プロテアーゼ阻害剤:0.06μg/mlアプロチニン(Roche、cat#:10236624001)、0.5μg/mlロイペプチン(Roche、cat#:11017101001)、24μg/mlの4−ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩(Sigma、A8456)、1mMのEDTA(Carl−Roth、cat# 8040.1)および非イオン性界面活性剤:0.00001%ポリソルベート20(Tween20、Sigma、cat# P2287))、組成物A2(プロテアーゼ阻害剤:1μg/mlアプロチニン、2.5μg/mlロイペプチン、100μg/mlの4−ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩、1mMのEDTAおよび非イオン性界面活性剤:0.05%ポリソルベート20);組成物A3(プロテアーゼ阻害剤:2μg/mlアプロチニン、5μg/mlロイペプチン、240μg/mlの4−ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩、1mMのEDTAおよび非イオン性界面活性剤:5%ポリソルベート20)、組成物B1(非イオン性界面活性剤:0.0001%ポリソルベート20)、組成物B2(非イオン性界面活性剤:0.05%ポリソルベート20)、組成物B3(非イオン性界面活性剤:5%ポリソルベート20)および組成物C1(保存剤:0.05%安息香酸ナトリウム(Sigma、cat# B3420))。異なる水性組成物における真菌GlcCerへの抗GlcCer VHH(0.1μg/ml)の結合は、F.オキシスポルム由来の被覆GlcCerを用いたELISAにおいて試験され、ブランクの非被覆ウェルと比較された。結合は、酵素をコンジュゲートした検出抗体とともに連続インキュベーション後、基質を添加して測定され、405nmで吸光度を測定した。
抗GlcCer VHH組成物の抗真菌活性のインビトロ評価
VHHの抗真菌活性のインビトロ評価:抗GlcCer VHHの抗真菌活性は、Thevissenら、2011,Bioorg.Med.Chem.Lett.21(12):3686−92;Frangoisら、2009,J.Biol.Chem.284(47):32680−5;Aertsら、2009,FEBS Lett.583(15):25143−6に記載されるように、液体培地中および寒天プレート上での抗真菌アッセイを用いて試験された。最小阻害濃度(MIC)は、ボトリチス・シネレアおよびフィトフトラ・インフェスタンスのインビトロ増殖におけるVHHに対して決定された。
農業用製剤へのVHHの製剤化
抗GlcCer VHHは、適切なE.コリ生成菌株において組換えタンパク質として生成された。抗GlcCer VHHは、培地および/もしくはペリプラズムから精製され、ならびに/またはE.コリ細胞は死滅され、発酵プロセスの終了時に溶解された。また、抗GlcCer VHHは、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)またはサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)において組換えタンパク質として生成され得て、発酵培地中に分泌され得る。次に、抗GlcCer VHHは、透析濾過によって培地成分と細胞構築物から精製される。
作物におけるVHHの抗真菌活性の評価
B.シネレアおよびP.インフェスタンスに対する強力なインビトロ抗真菌活性を有するVHHの有効性は、(i)トマトとポテト植物から切断葉、ならびに(ii)温室栽培されたトマトとポテト植物において、疾患バイオアッセイにおいてさらに評価される。
真菌感染に対して作物を保護するための抗GlcCer VHH組成物の抗真菌活性の植物体評価
ボトリチス・シネレアで植菌されたトマト葉における抗GlcCer VHH組成物の有効性:防止的処置:ボトリチス・シネレアB05−10が植菌されたトマト葉の疾患重症度における抗GlcCer VHH組成物を用いた防止的処置の効果が評価され、無関係なVHH、水または製剤化された市販の化学殺菌剤の効果と比較した。
Claims (15)
- 植物病原体のスフィンゴ脂質に特異的に結合する抗体の少なくとも1つの重鎖可変ドメインまたはその機能的断片を含む農薬組成物。
- 抗体の重鎖可変ドメインまたはその機能的断片が、重鎖抗体の重鎖可変ドメインまたはその機能的断片である、請求項1に記載の農薬組成物。
- スフィンゴ脂質がグルコシルセラミドである、請求項1または2のいずれか一項に記載の農薬組成物。
- 植物病原体が植物病原性真菌である、請求項1から3のいずれか一項に記載の農薬組成物。
- 植物病原性真菌の属が、アルテルナリア属(Alternaria)、アスコキタ属(Ascochyta)、ボトリチス属(Botrytis)、セルコスポラ属(Cercospora)、コレトトリクム属(Colletotrichum)、ジプロジア属(Diplodia)、エリシフェ属(Erysiphe)、フサリウム属(Fusarium)、レプトスファエリア属(Leptosphaeria)、ゴウマノマイセス属(Gaeumanomyces)、ヘルミントスポリウム属(Helminthosporium)、マクロホミナ属(Macrophomina)、ネクトリア属(Nectria)、ペニシリウム属(Penicillium)、ペロノスポラ属(Peronospora)、ホマ属(Phoma)、フィマトトリクム属(Phymatotrichum)、フィトフトラ属(Phytophthora)、プラスモパラ属(Plasmopara)、ポドスファエラ属(Podosphaera)、プッシニア属(Puccinia)、ピレノホラ属(Pyrenophora)、ピリクラリア属(Pyricularia)、ピシウム属(Pythium)、リゾクトニア属(Rhizoctonia)、スセロチウム属(Scerotium)、スクレロチニア属(Sclerotinia)、セプトリア属(Septoria)、チエラビオプシス属(Thielaviopsis)、ウンシヌラ属(Uncinula)、ベンツリア属(Venturia)、ベルチシリウム属(Verticillium)、マグナポルテ属(Magnaporthe)、ブルメリア属(Blumeria)、ミコスファエレラ属(Mycosphaerella)、ウスチラゴ属(Ustilago)、メラムプソラ属(Melampsora)、ファコスポラ属(Phakospora)、モニリニア属(Monilinia)、ムコール属(Mucor)、リゾプス属(Rhizopus)およびアスペルギルス属(Aspergillus)を含む群から選択される、請求項4に記載の農薬組成物。
- 少なくとも1つの重鎖可変ドメインが、植物病原体による感染または他の生物学的相互作用から植物または植物の一部を保護または処置するのに有効な量で存在する、請求項1から5のいずれか一項に記載の農薬組成物。
- 農薬組成物中の少なくとも1つの重鎖可変ドメインの濃度が0.0001重量%から50重量%の範囲である、請求項1から6のいずれか一項に記載の農薬組成物。
- 農薬的に適切な担体および/または1つ以上の適切なアジュバントをさらに含む、請求項1から7のいずれか一項に記載の農薬組成物。
- 少なくとも1つのVHHが、
配列番号85を有するCDR1領域、配列番号169を有するCDR2領域および配列番号253を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号86を有するCDR1領域、配列番号170を有するCDR2領域および配列番号254を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号87を有するCDR1領域、配列番号171を有するCDR2領域および配列番号255を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号88を有するCDR1領域、配列番号172を有するCDR2領域および配列番号256を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号89を有するCDR1領域、配列番号173を有するCDR2領域および配列番号257を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号90を有するCDR1領域、配列番号174を有するCDR2領域および配列番号258を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号91を有するCDR1領域、配列番号175を有するCDR2領域および配列番号259を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号92を有するCDR1領域、配列番号176を有するCDR2領域および配列番号260を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号93を有するCDR1領域、配列番号177を有するCDR2領域および配列番号261を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号94を有するCDR1領域、配列番号178を有するCDR2領域および配列番号262を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号95を有するCDR1領域、配列番号179を有するCDR2領域および配列番号263を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号96を有するCDR1領域、配列番号180を有するCDR2領域および配列番号264を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号97を有するCDR1領域、配列番号181を有するCDR2領域および配列番号265を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号98を有するCDR1領域、配列番号182を有するCDR2領域および配列番号266を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号99を有するCDR1領域、配列番号183を有するCDR2領域および配列番号267を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号100を有するCDR1領域、配列番号184を有するCDR2領域および配列番号268を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号101を有するCDR1領域、配列番号185を有するCDR2領域および配列番号269を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号102を有するCDR1領域、配列番号186を有するCDR2領域および配列番号270を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号103を有するCDR1領域、配列番号187を有するCDR2領域および配列番号271を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号104を有するCDR1領域、配列番号188を有するCDR2領域および配列番号272を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号105を有するCDR1領域、配列番号189を有するCDR2領域および配列番号273を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号106を有するCDR1領域、配列番号190を有するCDR2領域および配列番号274を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号107を有するCDR1領域、配列番号191を有するCDR2領域および配列番号275を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号108を有するCDR1領域、配列番号192を有するCDR2領域および配列番号276を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号109を有するCDR1領域、配列番号193を有するCDR2領域および配列番号277を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号110を有するCDR1領域、配列番号194を有するCDR2領域および配列番号278を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号111を有するCDR1領域、配列番号195を有するCDR2領域および配列番号279を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号112を有するCDR1領域、配列番号196を有するCDR2領域および配列番号280を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号113を有するCDR1領域、配列番号197を有するCDR2領域および配列番号281を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号114を有するCDR1領域、配列番号198を有するCDR2領域および配列番号282を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号115を有するCDR1領域、配列番号199を有するCDR2領域および配列番号283を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号116を有するCDR1領域、配列番号200を有するCDR2領域および配列番号284を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号117を有するCDR1領域、配列番号201を有するCDR2領域および配列番号285を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号118を有するCDR1領域、配列番号202を有するCDR2領域および配列番号286を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号119を有するCDR1領域、配列番号203を有するCDR2領域および配列番号287を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号120を有するCDR1領域、配列番号204を有するCDR2領域および配列番号288を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号121を有するCDR1領域、配列番号205を有するCDR2領域および配列番号289を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号122を有するCDR1領域、配列番号206を有するCDR2領域および配列番号290を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号123を有するCDR1領域、配列番号207を有するCDR2領域および配列番号291を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号124を有するCDR1領域、配列番号208を有するCDR2領域および配列番号292を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号125を有するCDR1領域、配列番号209を有するCDR2領域および配列番号293を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号126を有するCDR1領域、配列番号210を有するCDR2領域および配列番号294を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号127を有するCDR1領域、配列番号211を有するCDR2領域および配列番号295を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号128を有するCDR1領域、配列番号212を有するCDR2領域および配列番号296を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号129を有するCDR1領域、配列番号213を有するCDR2領域および配列番号297を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号130を有するCDR1領域、配列番号214を有するCDR2領域および配列番号298を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号131を有するCDR1領域、配列番号215を有するCDR2領域および配列番号299を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号132を有するCDR1領域、配列番号216を有するCDR2領域および配列番号300を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号133を有するCDR1領域、配列番号217を有するCDR2領域および配列番号301を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号134を有するCDR1領域、配列番号218を有するCDR2領域および配列番号302を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号135を有するCDR1領域、配列番号219を有するCDR2領域および配列番号303を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号136を有するCDR1領域、配列番号220を有するCDR2領域および配列番号304を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号137を有するCDR1領域、配列番号221を有するCDR2領域および配列番号305を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号138を有するCDR1領域、配列番号222を有するCDR2領域およびアミノ酸配列NRYを有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号139を有するCDR1領域、配列番号223を有するCDR2領域および配列番号306を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号140を有するCDR1領域、配列番号224を有するCDR2領域および配列番号307を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号141を有するCDR1領域、配列番号225を有するCDR2領域および配列番号308を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号142を有するCDR1領域、配列番号226を有するCDR2領域および配列番号309を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号143を有するCDR1領域、配列番号227を有するCDR2領域および配列番号310を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号144を有するCDR1領域、配列番号228を有するCDR2領域および配列番号311を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号145を有するCDR1領域、配列番号229を有するCDR2領域および配列番号312を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号146を有するCDR1領域、配列番号230を有するCDR2領域および配列番号313を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号147を有するCDR1領域、配列番号231を有するCDR2領域および配列番号314を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号148を有するCDR1領域、配列番号232を有するCDR2領域および配列番号315を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号149を有するCDR1領域、配列番号233を有するCDR2領域および配列番号316を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号150を有するCDR1領域、配列番号234を有するCDR2領域および配列番号317を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号151を有するCDR1領域、配列番号235を有するCDR2領域および配列番号318を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号152を有するCDR1領域、配列番号236を有するCDR2領域および配列番号319を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号153を有するCDR1領域、配列番号237を有するCDR2領域および配列番号320を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号154を有するCDR1領域、配列番号238を有するCDR2領域および配列番号321を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号155を有するCDR1領域、配列番号239を有するCDR2領域および配列番号322を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号156を有するCDR1領域、配列番号240を有するCDR2領域および配列番号323を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号157を有するCDR1領域、配列番号241を有するCDR2領域および配列番号324を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号158を有するCDR1領域、配列番号242を有するCDR2領域および配列番号325を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号159を有するCDR1領域、配列番号243を有するCDR2領域および配列番号326を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号160を有するCDR1領域、配列番号244を有するCDR2領域および配列番号327を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号161を有するCDR1領域、配列番号245を有するCDR2領域および配列番号328を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号162を有するCDR1領域、配列番号246を有するCDR2領域および配列番号329を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号163を有するCDR1領域、配列番号247を有するCDR2領域および配列番号330を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号164を有するCDR1領域、配列番号248を有するCDR2領域および配列番号331を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号165を有するCDR1領域、配列番号249を有するCDR2領域および配列番号332を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号166を有するCDR1領域、配列番号250を有するCDR2領域および配列番号333を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号167を有するCDR1領域、配列番号251を有するCDR2領域および配列番号334を有するCDR3領域、ならびに/または
配列番号168を有するCDR1領域、配列番号252を有するCDR2領域および配列番号335を有するCDR3領域
を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の農薬組成物。 - 少なくとも1つのVHHが、配列番号1から84からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の農薬組成物。
- 植物病原体による感染または他の生物学的相互作用から植物または植物の一部を保護または処置するための方法であって、植物病原体による感染または生物学的相互作用に対して植物または植物の一部を保護または処置するのに有効な条件下で、請求項1から10のいずれか一項に記載の農薬組成物を植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む方法。
- 農薬組成物が、噴霧(spraying)、散布、発泡、噴霧(fogging)、ハイドロカルチャーにおける培養、水耕栽培における培養、塗布、浸漬(submerging)および/または被覆(encrusting)によって、植物または植物の一部に直接的または間接的に施用される、請求項11に記載の方法。
- 植物病原体による感染または他の生物学的相互作用から収穫した植物または収穫した植物の一部を保護または処置するための収穫後の処置方法であって、植物病原体による感染または生物学的相互作用に対して収穫した植物または収穫した植物の一部を保護または処置するのに有効な条件下で、請求項1から10のいずれか一項に記載の農薬組成物を収穫した植物または収穫した植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む方法。
- 抗有害生物剤としての、請求項1から10のいずれか一項に記載の農薬組成物の使用。
- 植物病原体の増殖を阻害または死滅させるための方法であって、請求項1から10のいずれか一項に記載の農薬組成物を植物または植物の一部に直接的にまたは間接的に施用するステップを少なくとも含む方法。
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