BR112015027430B1

BR112015027430B1 - Composição compreendendo pelo menos um polipeptídeo que se liga especificamente a uma glicosilceramida de uma praga de fungos

Info

Publication number: BR112015027430B1
Application number: BR112015027430-7A
Authority: BR
Inventors: Bruno Cammue; Peter Verheesen; Chris De Jonghe; Inge Elodie Van Daele; Miguel Francesco Coleta De Bolle; João Filipe Veloso Vieira; Karin Thevissen
Original assignee: Agrosavfe N.V.
Priority date: 2013-04-29
Filing date: 2014-04-29
Publication date: 2022-09-06
Also published as: DK2992100T3; JP2016522186A; HUE047580T2; WO2014191146A1; CN105358699A; US20160145325A1; CA2910874C; EP2992100B1; JP2016526015A; JP6720252B2; BR112015027430A8; CN114732017A; AU2020205327A1; EP2992101B1; EP2992101A1; PT2992100T; CN116076508A; CA2910632A1; AU2014273418B2; HRP20192182T1

Abstract

COMPOSIÇÕES AGROQUÍMICAS COMPREENDENDO ANTICORPOS DE LIGAÇÃO A ESFINGOLIPÍDIO. A presente invenção refere-se a composições de controle agroquímicas e biológicas para comba ter pragas, mais especificamente pragas de plantas, compreendendo pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga . A invenção refere-se ainda a métodos para a proteção ou tratamento de uma planta ou parte de uma planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos, compreendendo a etapa de aplicar direta ou indiretamente a uma planta ou a uma parte de uma planta, uma composição agroquímica, sob condições eficazes para proteger ou tratar uma planta ou parte de uma planta contra uma infecção ou interação biológica com um patógeno da planta. São ainda proporcionados métodos para a produção de tais composições e formulações agroquímicas, com polipeptídeos com uma atividade pesticida específica compreendida dentro de uma formulação agroquímica, a ácidos nucleicos que codificam polipeptídeo , tais como a as plantas que compreendem os genes quiméricos compreendendo tais ácidos nucleico.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para Campo da invenção

[0001] A presente invenção refere-se a efetuar o controle de pragas de plantas. Mais especificamente, a invenção fornece composições agroquímicas que compreendem composições de polipeptídeos de comprimento e uma concentração específica que são úteis para combater pragas de culturas, tais como insetos, fungos, nemátodos, bactérias e semelhantes.

Antecedentes

[0002] A presença e a persistência de infecções fúngicas patogênicas observadas em pacientes e animais, mas também em culturas de plantas podem ser atribuídas principalmente à pressão seletiva de antifúngicos de largo espectro e à falta geral de eficácia de agentes antifúngicos, que estão disponíveis no momento. Nos seres humanos e animais, infecções fúngicas sistêmicas tais como candidíase invasiva e aspergilose invasiva podem ser causadas por uma variedade de fungos patogênicos, por exemplo, as espécies de Cândida virulentas C. albicans, C. albicans e C. krusei e a espécie menos virulentas C. parapsilosis e Torulopsis glabrata (esta última por vezes referida como Candida glabrata). Apesar de C. albicans ser outrora o isolado fúngico mais comum obtido a partir de unidades de terapia intensiva, estudos posteriores indicaram que C. albicans, C. glabrata, C. parapsilosis e C. krusei agora respondem por cerca de metade de tais isolados. O aumento de espécies não albicans implica na emergência de espécies de Câdida resistentes à terapia convencional antifúngica.

[0003] Tradicionalmente, C. albicans, C. albicans e C. parapsilosis foram tratados pelo agente antifúngico anfotericina B, considerado como o "padrão de ouro" da terapia antifúngica sistêmica. Infelizmente, a anfotericina B é em si altamente tóxica e seu uso é temperado por efeitos colaterais, incluindo calafrios, febre, mialgias ou tromboflebite. Outros agentes antifúngicos incluem os fármacos azóis orais (miconazol, cetoconazol, itraconazol, fluconazol) e 5-fluorocitosina. No entanto, as espécies de fungos, tais como C. krusei e T. glabrata são resistentes ao fluconazol, e essas espécies ocorrem frequentemente em doentes em que este fármaco foi administrado profilaticamente. Além disso, também foram relatadas cepas resistentes ao fluconazol de C. albicans. Assim, apesar dos avanços feitos em fármacos antifúngicos terapêuticos, a necessidade de agentes eficazes para tratamento de infecções fúngicas permanece aguda.

[0004] Na agricultura, a proteção das culturas depende muito do uso de pesticidas, que são aplicados às culturas pulverizando-os na cultura, aplicando durante a rega das culturas ou incorporando-os no solo. Os pesticidas são frequentemente moléculas químicas orgânicas e sua aplicação repetida a culturas as coloca em ameaças de toxicidade aos trabalhadores agrícolas durante o manuseio e ao meio ambiente, devido ao arrastamento da pulverização, a persistência no solo ou lavagem com água na superfície ou subterrânea. Seria vantajoso ser capaz de usar compostos alternativos que são menos tóxicos para os seres humanos e para o ambiente, mas que, ao mesmo tempo, proporcionam um controle eficaz de pragas de plantas.

[0005] Pesticidas proteicos com especificidade contra uma determinada praga de planta alvo podem ser muito vantajosos a este respeito, uma vez que espera-se que sejam de curta duração no ambiente e tenham efeitos menos tóxicos fora do alvo. No entanto, existem apenas alguns pesticidas proteicos ou peptidérgicos conhecidos. Alguns exemplos são toxinas Bt, lectinas, defensinas, fabatinas, taquiplesina, magainina, harpina (vide WO2010019442), subunidade b 1 de albumina de ervilha (PA1b). No entanto, estes pesticidas proteicos são ou peptídeos pequenos com estruturas compactas, estabilizados por meio de várias pontes de dissulfureto, ou são proteínas maiores (> 300 aminoácidos) que ocorrem na forma cristalina (toxinas cry). Na verdade, é conhecido no domínio da agricultura que biológicos, e em determinadas proteínas, são estruturas desafiantes para pesticidas em desenvolvimento, uma vez que geralmente têm muito pouca estabilidade de manter a sua função de pesticida em uma formulação de agroquímicos, em particular, para aplicações no campo.

Sumario da Invenção

[0006] Os presentes inventores desenvolveram com sucesso, polipeptídeos com especificidade, afinidade e potência surpreendentemente elevada contra alvos de pragas, em particular pragas patogênicas de planta, animal ou humanas, tais como, mas não limitado a fungos patogênicos plantas, animais ou humanos. Além disso, mostra-se que estes polipeptídeos retêm a sua integridade, estabilidade e atividade em uma composição e que praga eficaz ou controle patogênico podem surpreendentemente ser alcançados através da aplicação de composições compreendendo os polipeptídeos tal como descrito no presente pedido, para as culturas, animais ou seres humanos.

[0007] A eficácia e a potência dos polipeptídeos como aqui descrito sugere um potencial tanto para uma dosagem de tratamento mais baixa e/ou um tratamento mais eficaz com a mesma dose. Este pode implicar a redução de efeitos colaterais indesejáveis e toxicidade reduzida em ambas as aplicações médicas e agroquímicas. Além disso, isto permite a aplicação de menores quantidades ou dosagens dos polipeptídeos ou composições aqui divulgadas.

[0008] Mais particularmente, os presentes inventores descobriram que a segmentação de uma estrutura molecular de um patógeno ou praga com os polipeptídeos aqui providos permite um controle eficiente do mesmo patógeno. Em particular, os presentes inventores desenvolveram polipeptídeos que são capazes de prevenir, proteger, tratar ou curar uma planta, animal ou ser humano a partir de (desenvolvimento) uma infecção por um patógeno ou a partir de qualquer outra interação biológica com um agente patogênico. Por conseguinte, a presente invenção demonstra pela primeira vez que as moléculas biológicas, tais como polipeptídeos ou sequências de aminoácidos, podem ser utilizadas para proteger ou tratar de forma eficaz uma planta, animal ou ser humano de serem danificados de alguma forma por ou de sofrerem uma interação biológica entre a planta, animal ou ser humano e um agente patogênico, tal como, por exemplo, através de uma infecção patogênica.

[0009] Em um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona composições agroquímicas compreendendo pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga.

[0010] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como aqui descritas, compreendem pelo menos um anticorpo ou um seu fragmento funcional, tal como, mas não limitado a um anticorpo de cadeia pesada ou um seu fragmento funcional.

[0011] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como aqui descritas, compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada (VHH), que é naturalmente desprovido de cadeias leves ou um seu fragmento funcional, tais como, mas não limitado a um domínio de cadeia pesada variável de um anticorpo de cadeia pesada de camelídeo (camelídeo VHH) ou um seu fragmento funcional.

[0012] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como aqui descritas, compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de camelídeos de um anticorpo convencional de quatro cadeias (VH camelizados), ou um seu fragmento funcional.

[0013] Em certas modalidades particulares, as composições agroquímicas como aqui descritas, compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou um seu fragmento funcional, que não tem uma sequência de aminoácidos que é exatamente a mesma que (isto é, como em um grau de identidade de sequência de 100% com) a sequência de aminoácidos de um domínio VH que ocorre naturalmente, tal como a sequência de aminoácidos de um Domínio VH que ocorre naturalmente a partir de um mamífero, e em particular de um ser humano.

[0014] Em outras modalidades particulares, as composições agroquímicas como aqui divulgadas compreendem pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a, pelo menos, um componente de membrana plasmática de uma praga.

[0015] Em certas modalidades específicas, o de pelo menos um componente de membra plasmática das pragas às quais os polipeptídeos compreendidos nas composições como aqui descritas se ligam, não é uma proteína. Em certas modalidades específicas, o pelo menos um componente de membrana plasmática das pragas às quais os polipeptídeos compreendidos nas composições como aqui descritas se ligam, é um esfingolipídio, tal como, mas não se limitando a uma ceramida, por exemplo, uma glicosilceramida.

[0016] Em certas modalidades específicas, o pelo menos polipeptídeo nas composições agroquímicas aqui divulgadas está presente em uma quantidade eficaz para proteger ou tratar uma planta ou parte da planta a partir de uma infecção ou outra interação biológica com o patógeno da planta, tais como, por exemplo, mas não se limitando à concentração do polipeptídeo na composição agroquímica que varia entre 0,0001% e 50% em peso.

[0017] De acordo com outras modalidades particulares, o pelo menos polipeptídeo nas composições agroquímicas aqui descritos é formulado em uma solução aquosa, opcionalmente, mas sem limitação, juntamente com um veículo adequado agroquimicamente e/ou um ou mais adjuvantes adequados.

[0018] Em modalidades específicas, as composições agroquímicas compreendem pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a um fungo patogênico.

[0019] De acordo com outras modalidades específicas, as composições agroquímicas compreendem pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga de planta, tal como, mas não limitado a um fungo patogênico de plantas.

[0020] Em certas modalidades particulares, as composições agroquímicas como aqui divulgadas compreendem pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a um fungo patogênico de planta, tal como, mas não se limitando a um fungo patogênico de planta de um gênero escolhido do grupo que compreende Alternaria, Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia, Erysiphe, Fusarium, Leptosphaeria, Gaeumanomyces, Helminthosporium, Macrophomina, Nectria, Penicillium, Peronospora, Phoma, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara, Podosphaera, Puccinia, Pyrenophora, Pyricularia, Pythium, Rhizoctonia, Scerotium, Sclerotinia, Septoria, Thielaviopsis, Uncinula, Venturia, Verticillium, Magnaporthe, Blumeria, Mycosphaerella, Ustilago, Melampsora, Phakospora, Monilinia, Mucor, Rhizopus, e Aspergillus.

[0021] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como aqui divulgadas compreendem pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, que é uma praga para uma planta escolhida a partir do grupo que compreende cereais, sorgo, arroz, beterraba sacarina, beterraba forrageira, frutas, nozes, a família de bananeira ou videiras, leguminosas, oleaginosas, cucurbitáceas, plantas fibrosas, culturas para combustíveis, produtos hortícolas, plantas ornamentais, arbustos, árvores de folhas largas, sempre-vivas, ervas, café, chá, tabaco, lúpulo, pimenta, borracha e plantas de látex.

[0022] Em ainda outras de modalidades particulares, o pelo menos um polipeptídeo nas composições agroquímicas aqui divulgadas, pelo menos compreende qualquer uma das combinações de:

[0023] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 85, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 169, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 253, e/ou

[0024] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 86, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 170, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 254, e/ou

[0025] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 87, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 171, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 255, e/ou

[0026] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 88, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 172, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 256, e/ou

[0027] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 89, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 173, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 257, e/ou

[0028] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 90, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 174, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 258, e/ou

[0029] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 91, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 175, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 259, e/ou

[0030] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 92, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 176, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 260, e/ou

[0031] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 93, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 177, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 261, e/ou

[0032] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 94, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 178, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 262, e/ou

[0033] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 95, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 179, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 263, e/ou

[0034] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 96, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 180, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 264, e/ou

[0035] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 97, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 181, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 265, e/ou

[0036] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 98, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 182, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 266, e/ou

[0037] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 99, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 183, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 267, e/ou

[0038] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 100, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 184, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 268, e/ou

[0039] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 101, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 185, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 269, e/ou

[0040] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 102, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 186, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 270, e/ou

[0041] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 103, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 187, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 271, e/ou

[0042] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 104, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 188, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 272, e/ou

[0043] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 105, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 189, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 273, e/ou

[0044] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 106, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 190, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 274, e/ou

[0045] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 107, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 191, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 275, e/ou

[0046] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 108, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 192, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 276, e/ou

[0047] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 109, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 193, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 277, e/ou

[0048] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 110, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 194, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 278, e/ou

[0049] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 111, tendo uma região CDR2 tem a SEQ ID NO: 195, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 279, e/ou

[0050] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 112, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 196, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 280, e/ou

[0051] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 113, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 197, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 281, e/ou

[0052] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 114, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 198, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 282, e/ou

[0053] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 115, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 199, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 283, e/ou

[0054] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 116, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 200, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 284, e/ou

[0055] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 117, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 201, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 285, e/ou

[0056] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 118, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 202, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 286, e/ou

[0057] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 119, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 203, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 287, e/ou

[0058] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 120, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 204, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 288, e/ou

[0059] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 121, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 205, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 289, e/ou

[0060] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 122, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 206, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 290, e/ou

[0061] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 123, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 207, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 291, e/ou

[0062] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 124, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 208, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 292, e/ou

[0063] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 125, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 209, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 293, e/ou

[0064] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 126, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 210, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 294, e/ou

[0065] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 127, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 211, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 295, e/ou

[0066] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 128, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 212, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 296, e/ou

[0067] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 129, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 213, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 297, e/ou

[0068] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 130, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 214, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 298, e/ou

[0069] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 131, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 215, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 299, e/ou

[0070] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 132, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 216, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 300, e/ou

[0071] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 133, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 217, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 301, e/ou

[0072] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 134, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 218, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 302, e/ou

[0073] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 135, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 219, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 303, e/ou

[0074] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 136, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 220, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 304, e/ou

[0075] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 137, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 221, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 305, e/ou

[0076] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 138, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 222, e uma região CDR3 tendo a sequência de aminoácidos NRY, e/ou

[0077] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 139, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 223, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 306, e/ou

[0078] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 140, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 224, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 307, e/ou

[0079] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 141, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 225, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 308, e/ou

[0080] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 142, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 226, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 309, e/ou

[0081] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 143, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 227, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 310, e/ou

[0082] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 144, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 228, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 311, e/ou

[0083] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 145, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 229, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 312, e/ou

[0084] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 146, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 230, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 313, e/ou

[0085] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 147, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 231, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 314, e/ou

[0086] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 148, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 232, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 315, e/ou

[0087] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 149, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 233, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 316, e/ou

[0088] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 150, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 234, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 317, e/ou

[0089] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 151, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 235, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 318, e/ou

[0090] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 152, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 236, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 319, e/ou

[0091] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 153, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 237, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 320, e/ou

[0092] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 154, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 238, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 321, e/ou

[0093] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 155, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 239, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 322, e/ou

[0094] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 156, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 240, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 323, e/ou

[0095] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 157, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 241, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 324, e/ou

[0096] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 158, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 242, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 325, e/ou

[0097] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 159, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 243, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 326, e/ou

[0098] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 160, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 244, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 327, e/ou

[0099] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 161, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 245, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 328, e/ou

[0100] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 162, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 246, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 329, e/ou

[0101] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 163, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 247, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 330, e/ou

[0102] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 164, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 248, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 331, e/ou

[0103] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 165, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 249, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 332, e/ou

[0104] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 166, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 250, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 333, e/ou

[0105] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 167, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 251, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 334, e/ou

[0106] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 168, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 252, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 335.

[0107] Em modalidades adicionais, o pelo menos um polipeptídeo nas composições agroquímicas aqui descritas, compreende pelo menos uma sequência de aminoácidos escolhida a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 a 84.

[0108] Em um outro aspecto, a presente invenção proporciona composições que compreendem pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, para utilização como um agente antipragas.

[0109] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona utilizações de composições agroquímicas compreendendo pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, como um agente antipragas em plantas.

[0110] Em modalidades específicas, o agente antipragas é um agente biostático ou um agente pesticida, tal como, mas não se limitando a um agente fungistático ou fungicida.

[0111] Em um outro aspecto, a presente invenção proporciona métodos para a proteção ou tratamento de uma planta ou parte de uma planta a partir de uma infecção ou outra interação biológica com uma praga de planta, em que os métodos, pelo menos, compreendem a etapa de aplicar direta ou indiretamente na planta ou em uma parte da planta, uma composição agroquímica, tal como aqui descrito, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta ou a uma parte da planta contra a infecção ou interação biológica com o patógeno da planta.

[0112] Em modalidades particulares, estes métodos compreendem a aplicação direta ou indiretamente, à planta ou a uma parte da planta de uma composição agroquímica, tal como aqui divulgado, a uma taxa de aplicação mais alta do que 50 g da composição agroquímica por hectare, tal como, mas não se limitando a uma taxa de aplicação superior a 75 g da composição agroquímica por hectare, tal como uma taxa de aplicação mais alta do que 100 g da composição agroquímica por hectare, ou, em particular, uma taxa de aplicação mais alta do que 200 g da composição agroquímica por hectare.

[0113] Em modalidades particulares, estes métodos compreendem a aplicação direta ou indiretamente, à planta ou a uma parte da planta de uma composição agroquímica, tal como aqui divulgado, a uma taxa de aplicação entre 50g e 100g da composição agroquímica por hectare, tal como, mas não limitado a uma aplicação taxa de entre 50g e 200 g da composição agroquímica por hectare, a saber, uma taxa de aplicação compreendida entre 75g e 175g da composição agroquímica por hectare, tal como entre 75g e 150g da composição agroquímica por hectare ou entre 75g e 125g por hectare.

[0114] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas, como aqui divulgadas, são direta ou indiretamente aplicadas à planta ou a uma parte da planta por pulverização, atomização, formação de espuma, nebulização, cultura em hidrocultura, cultura em culturas hidropônicas, revestimento, submersão e/ou incrustantes, opcionalmente pós-colheita.

[0115] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona métodos de tratamento de pós-colheita para proteger ou tratar uma planta colhida ou uma parte de planta colhida de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos, compreendendo a etapa de aplicar direta ou indiretamente na planta colhida ou em uma parte da planta colhida, uma composição agroquímica, tal como aqui descrito, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta colhida, ou uma parte das plantas colhidas contra a infecção ou interação biológica com o patógeno da planta.

[0116] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona métodos para inibir o crescimento de um patógeno de planta ou métodos de matar um patógeno de planta, os métodos compreendendo, pelo menos, a etapa de aplicar direta ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica, tal como aqui divulgado.

[0117] Em modalidades específicas destes métodos, as composições agroquímicas, como aqui divulgado, direta ou indiretamente aplicadas à planta ou a uma parte da planta por pulverização, atomização, formação de espuma, nebulização, cultura em hidrocultura, cultura em culturas hidropônicas, revestimento, submersão e/ou incrustantes, opcionalmente pós-colheita.

[0118] Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona métodos para a produção de uma composição agroquímica, tal como aqui divulgado, os métodos que compreendem, pelo menos, as etapas de: - obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, e - formulação do polipeptídeo em uma composição agroquímica.

[0119] Em modalidades específicas destes métodos, a etapa de obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga compreende: (a) expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, e facultativamente (b) isolamento e/ou purificação do polipeptídeo.

[0120] Em modalidades específicas destes métodos, a etapa de obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga compreende: a) proporcionar um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de polipeptídeos; b) peneirar o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de polipeptídeos para sequências que se ligam especificamente a e/ou têm afinidade para uma praga, e facultativamente c) isolar as sequências de polipeptídeos que se ligam especificamente a e/ou têm afinidade para uma praga. Descrição detalhada da invenção

[0121] A presente invenção será descrita em relação a modalidades particulares, mas a invenção não está limitada a elas.

[0122] Declarações (características) e modalidades dos polipeptídeos, composições e métodos aqui divulgados são como definidas a seguir. Cada uma das declarações e modalidades, como divulgado pela invenção assim definida pode ser combinada com qualquer outra declaração e/ou modalidade, a menos que expressamente indicado em contrário. Em particular, qualquer característica indicada como sendo preferida ou vantajosa pode ser combinada com qualquer outra característica ou características indicadas como sendo preferidas ou vantajosas.

[0123] Declarações numeradas como divulgadas no presente pedido são: 1. Uma composição agroquímica para combater pragas de plantas, cuja composição compreende pelo menos um polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa. 2. Uma composição agroquímica para combater pragas de plantas, cuja composição compreende pelo menos um polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos, como a substância ativa, em que o polipeptídeo está presente em uma concentração de 0,01 a 50% (p/p) do peso total da composição agroquímica. 3. A composição agroquímica de acordo com a declarações 1 ou 2, em que o polipeptídeo é obtido por seleção de afinidade a um alvo específico de praga de planta. 4. A composição agroquímica de acordo com a declaração 3, em que o polipeptídeo tem uma afinidade para o alvo com uma constante de dissociação inferior a 10-6 M. 5. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 4, em que o polipeptídeo compreende 3 CDRs e 4 FRs. 6. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 5, em que o polipeptídeo é derivado de um anticorpo dos camelídeos. 7. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 6, em que o polipeptídeo é um VHH. 8. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 7, em que a praga de planta é um patógeno de fungo. 9. Um método para combater pragas de plantas, método esse que compreende a aplicação da composição de acordo com qualquer uma das declarações de 1 a 8 a uma cultura em uma taxa de aplicação mais elevada do que 50 g por hectare do polipeptídeo contido na composição agroquímica. 10. O método para a produção de uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações de 1 a 8, que compreende a formulação de um polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos com atividade pesticida, juntamente com pelo menos um agente auxiliar agroquímico habitual. 11. Um polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos, obtido por seleção de afinidade a um alvo específico de praga de planta, que é capaz de inibir o crescimento e/ou a atividade de uma praga de cultura a uma concentração inibitória mínima de cerca de 0,00001 a 1 μM. 12. Uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de acordo com a declaração 11. 13. Um gene quimérico compreendendo um promotor expressável de planta, uma sequência de ácido nucleico de acordo com a declaração 12 e uma sequência de terminação. 14. Um vetor recombinante que compreende um gene quimérico de declaração 13. 15. Uma planta que compreende um gene quimérico tal como definido na declaração 14. 16. Composição agroquímica compreendendo pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga. 17. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8, que compreende pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga. 18. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17, em que o pelo menos um polipeptídeo é um anticorpo ou um seu fragmento funcional. 19. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações de 1 a 8, 17 e 18, em que o pelo menos um polipeptídeo é um anticorpo de cadeia pesada ou um seu fragmento funcional. 20. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 19, que compreende pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada (VHH) ou um seu fragmento funcional, que se liga especificamente a uma praga. 21. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 20, que compreende pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de camelídeo de um anticorpo de cadeia pesada (VHH de camelídeos) ou um seu fragmento funcional, que se liga especificamente a um esfingolipídio de um patógeno da planta. 22. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 21, que compreende pelo menos um domínio variável de cadeia pesada camelizado de um anticorpo convencional de quatro cadeias (VH camelizado) ou um seu fragmento funcional, que se liga especificamente a um esfingolipídio de um patógeno de planta. 23. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 22, em que o referido pelo menos um polipeptídeo se liga especificamente a, pelo menos, um componente de membrana plasmática de uma praga. 24. A composição agroquímica de acordo com a declaração 23, em que o pelo menos um componente de membrana plasmática da praga não é uma proteína. 25. A composição agroquímica de acordo com as declarações 23 ou 24, em que o pelo menos um componente da membrana plasmática da praga é um esfingolipídio. 26. A composição agroquímica de acordo com a indicação 25, em que o esfingolipídio é uma ceramida. 27. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 25 ou 26, em que o esfingolipídio é glicosilceramida. 28. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 27, em que o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada está presente em uma quantidade eficaz para proteger ou tratar uma planta ou parte da planta a partir de uma infecção ou outra interação biológica com o patógeno de planta. 29. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 28, em que a concentração do pelo menos um domínio variável de cadeia pesada na composição agroquímica varia entre 0,0001% e 50% em peso. 30. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 29, em que o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada é formulado em uma solução aquosa. 31. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 30, que compreende adicionalmente um veículo agroquimicamente adequado e/ou um ou mais adjuvantes adequados. 32. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 31, em que a praga é um fungo patogênico. 33. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 32, em que a praga de planta é uma praga. 34. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 33, em que a praga de planta é uma fungo patogênico de planta. 35. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 34, em que o gênero do fungo patogênico de planta é selecionado entre o grupo que compreende Alternaria, Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia, Erysiphe, Fusarium, Leptosphaeria, Gaeumanomyces, Helminthosporium, Macrophomina, Nectria, Penicillium, Peronospora, Phoma, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara, Podosphaera, Puccinia, Pyrenophora, Pyricularia, Pythium, Rhizoctonia, Scerotium, Sclerotinia, Septoria, Thielaviopsis, Uncinula, Venturia, Verticillium, Magnaporthe, Blumeria, Mycosphaerella, Ustilago, Melampsora, Phakospora, Monilinia, Mucor, Rhizopus, e Aspergillus. 36. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 33 a 35, em que a praga de planta é um patógeno de planta para uma planta escolhida a partir do grupo que compreende cereais, sorgo, arroz, beterraba sacarina, beterraba forrageira, frutas, nozes, família de bananeira ou videiras, leguminosas, oleaginosas, cucurbitáceas, plantas fibrosas, culturas para combustíveis, produtos hortícolas, plantas ornamentais, arbustos, árvores de folhas largas, perenes, ervas, café, chá, tabaco, lúpulo, pimenta, borracha e plantas de látex. 37. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 36, em que o pelo menos um polipeptídeo pelo menos compreende uma ou mais das seguintes combinações:

[0124] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 85, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 169, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 253, e/ou

[0125] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 86, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 170, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 254, e/ou

[0126] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 87, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 171, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 255, e/ou

[0127] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 88, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 172, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 256, e/ou

[0128] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 89, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 173, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 257, e/ou

[0129] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 90, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 174, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 258, e/ou

[0130] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 91, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 175, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 259, e/ou

[0131] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 92, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 176, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 260, e/ou

[0132] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 93, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 177, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 261, e/ou

[0133] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 94, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 178, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 262, e/ou

[0134] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 95, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 179, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 263, e/ou

[0135] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 96, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 180, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 264, e/ou

[0136] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 97, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 181, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 265, e/ou

[0137] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 98, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 182, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 266, e/ou

[0138] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 99, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 183, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 267, e/ou

[0139] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 100, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 184, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 268, e/ou

[0140] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 101, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 185, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 269, e/ou

[0141] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 102, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 186, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 270, e/ou

[0142] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 103, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 187, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 271, e/ou

[0143] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 104, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 188, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 272, e/ou

[0144] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 105, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 189, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 273, e/ou

[0145] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 106, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 190, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 274, e/ou

[0146] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 107, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 191, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 275, e/ou

[0147] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 108, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 192, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 276, e/ou

[0148] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 109, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 193, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 277, e/ou

[0149] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 110, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 194, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 278, e/ou

[0150] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 111, tendo uma região CDR2 tem a SEQ ID NO: 195, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 279, e/ou

[0151] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 112, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 196, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 280, e/ou

[0152] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 113, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 197, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 281, e/ou

[0153] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 114, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 198, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 282, e/ou

[0154] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 115, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 199, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 283, e/ou

[0155] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 116, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 200, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 284, e/ou

[0156] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 117, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 201, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 285, e/ou

[0157] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 118, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 202, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 286, e/ou

[0158] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 119, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 203, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 287, e/ou

[0159] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 120, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 204, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 288, e/ou

[0160] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 121, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 205, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 289, e/ou

[0161] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 122, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 206, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 290, e/ou

[0162] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 123, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 207, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 291, e/ou

[0163] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 124, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 208, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 292, e/ou

[0164] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 125, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 209, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 293, e/ou

[0165] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 126, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 210, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 294, e/ou

[0166] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 127, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 211, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 295, e/ou

[0167] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 128, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 212, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 296, e/ou

[0168] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 129, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 213, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 297, e/ou

[0169] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 130, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 214, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 298, e/ou

[0170] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 131, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 215, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 299, e/ou

[0171] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 132, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 216, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 300, e/ou

[0172] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 133, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 217, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 301, e/ou

[0173] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 134, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 218, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 302, e/ou

[0174] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 135, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 219, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 303, e/ou

[0175] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 136, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 220, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 304, e/ou

[0176] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 137, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 221, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 305, e/ou

[0177] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 138, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 222, e uma região CDR3 tendo a sequência de aminoácidos NRY, e/ou

[0178] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 139, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 223, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 306, e/ou

[0179] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 140, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 224, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 307, e/ou

[0180] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 141, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 225, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 308, e/ou

[0181] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 142, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 226, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 309, e/ou

[0182] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 143, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 227, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 310, e/ou

[0183] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 144, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 228, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 311, e/ou

[0184] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 145, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 229, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 312, e/ou

[0185] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 146, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 230, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 313, e/ou

[0186] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 147, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 231, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 314, e/ou

[0187] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 148, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 232, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 315, e/ou

[0188] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 149, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 233, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 316, e/ou

[0189] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 150, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 234, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 317, e/ou

[0190] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 151, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 235, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 318, e/ou

[0191] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 152, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 236, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 319, e/ou

[0192] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 153, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 237, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 320, e/ou

[0193] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 154, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 238, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 321, e/ou

[0194] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 155, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 239, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 322, e/ou

[0195] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 156, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 240, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 323, e/ou

[0196] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 157, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 241, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 324, e/ou

[0197] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 158, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 242, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 325, e/ou

[0198] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 159, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 243, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 326, e/ou

[0199] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 160, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 244, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 327, e/ou

[0200] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 161, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 245, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 328, e/ou

[0201] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 162, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 246, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 329, e/ou

[0202] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 163, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 247, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 330, e/ou

[0203] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 164, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 248, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 331, e/ou

[0204] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 165, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 249, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 332, e/ou

[0205] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 166, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 250, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 333, e/ou

[0206] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 167, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 251, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 334, e/ou

[0207] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 168, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 252, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 335. 38. A composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 37, em que o pelo menos um polipeptídeo compreende uma sequência de aminoácidos escolhida a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 a 84. 39. Uma composição compreendendo pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, para utilização como um agente antipragas. 40. Utilização de uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 38 como um agente antipragas em plantas. 41. A composição de acordo com a indicação 39 ou o uso de acordo com a indicação 40, em que o agente antipragas é um agente biostático. 42. A composição de acordo com a indicação 39 ou o uso de acordo com a indicação 40, em que o agente antipragas é um agente fungistático. 43. A composição de acordo com a indicação 39 ou o uso de acordo com a indicação 40, em que o agente antipragas é um agente pesticida. 44. A composição de acordo com a indicação 39 ou o uso de acordo com a indicação 40, em que o agente antipragas é um agente fungicida. 45. Um método para a proteção ou tratamento de uma planta ou de uma parte da planta a partir de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, compreendendo, pelo menos, a etapa de aplicar direta ou indiretamente, à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 38, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta ou uma parte da planta contra a infecção ou interação biológica com o patógeno da planta. 46. Um método de acordo com a declaração 9 para a proteção ou tratamento de uma planta ou uma parte da planta a partir de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, compreendendo, pelo menos, a etapa de aplicar direta ou indiretamente, à planta ou a uma parte de da planta, uma composição agroquímica de acordo com qualquer das declarações 1 a 8 e 17 a 38, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta ou uma parte da planta contra a infecção ou interação biológica com o patógeno da planta. 47. O método de acordo com qualquer das declarações 9, 45 ou 46, que compreende a aplicação direta ou indiretamente, à planta ou a uma parte da planta de uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e de 17 a 38 a uma taxa de aplicação superior 50g da composição agroquímica por hectare. 48. O método de acordo com qualquer das declarações 9 ou 45 a 47, em que a composição agroquímica é diretamente ou indiretamente aplicar à planta ou a uma parte da planta por pulverização, atomização, formação de espuma, nebulização, cultura em hidrocultura, cultura jidropônica, revestimento, submersão, e/ou incrustantes. 49. O método de acordo com qualquer das declarações 9 ou 45 a 48, em que a composição agroquímica é diretamente ou indiretamente aplicar à planta ou a uma parte da planta, opcionalmente pós-colheita. 50. Um método de tratamento de pós-colheita para proteger ou tratar uma planta colhida, ou uma parte da planta colhida a partir de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, compreendendo, pelo menos, a etapa de aplicar direta ou indiretamente na planta colhida ou em uma parte de planta colhida, uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 38, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta colhida, ou uma parte de planta colhida contra a infecção ou interação biológica com o patógeno de planta. 51. Um método de inibir o crescimento de um patógeno de planta, compreendendo, pelo menos, a etapa de aplicar direta ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e de 17 a 38. 52. Um método de matar um patógeno de planta, compreendendo, pelo menos, a etapa de aplicar direta ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e de 17 a 38. 53. O método de acordo com declarações 51 ou 52, em que a composição agroquímica é direta ou indiretamente aplicada à planta ou a uma parte da planta por pulverização, atomização, formação de espuma, nebulização, cultura em hidrocultura, cultura em culturas hidropônicas, revestimento, submersão, e/ou incrustantes. 54. O método de acordo com qualquer uma das declarações 51 a 53, em que a composição agroquímica é diretamente ou indiretamente aplicar à planta ou a uma parte da planta, opcionalmente pós-colheita. 55. Um método para a produção de uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e de 17 a 38, compreendendo pelo menos as etapas de: - obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, e - formulação do polipeptídeo em uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 38. 56. Um método de acordo com a indicação 10 para a produção de uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e de 17 a 38, compreendendo pelo menos as etapas de: - obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, e - formulação do polipeptídeo numa composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 38. 57. O método de acordo com declarações 10 ou 56, em que a etapa de obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga compreende: (a) expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, e facultativamente (b) isolamento e/ou purificação do polipeptídeo. 58. O método de acordo com declarações 10, 56 ou 57, em que a etapa de obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga compreende: a) proporcionar um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de polipeptídeos; b) peneirar o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de polipeptídeos de sequências que se ligam especificamente a e/ou têm afinidade para uma praga, e facultativamente c) isolar as sequências de polipeptídeos que se ligam especificamente a e/ou têm afinidade para uma praga.

DEFINIÇÕES

[0208] A presente invenção será descrita em relação a modalidades particulares, mas a invenção não está limitada à mesma, mas apenas pelas reivindicações. Quaisquer sinais de referência nas reivindicações não devem ser interpretados como limitando o âmbito.

[0209] Onde o termo "compreendendo" é usado na presente descrição e nas reivindicações, ele não exclui outros elementos ou etapas.

[0210] Sempre que um artigo indefinido ou definitivo é usado quando se refere a um substantivo no singular por exemplo, "a, o" ou "um, uma", isto inclui um plural desse substantivo, a menos que alguma coisa esteja expressamente indicada.

[0211] O termo "cerca de" tal como aqui utilizado, quando se refere a um valor mensurável, tal como um parâmetro, uma quantidade, uma duração temporal e outros semelhantes, pretende englobar variações de +/- 10% ou menos, preferivelmente 5% +/- ou menos, mais preferivelmente de +/- 1% ou menos, e ainda mais preferivelmente +/0,1% ou menos de e a partir do valor especificado, na medida em que tais variações são apropriadas para executar a invenção apresentada. Deve ser entendido que o valor ao qual o modificador "cerca de" refere- se, é por si só, especificamente, e preferivelmente, divulgado.

[0212] Os termos ou definições que se seguem são fornecidos apenas para auxiliar na compreensão da invenção. A menos que especificamente aqui definido, todos os termos aqui utilizados têm o mesmo significado que teriam para um versado na técnica da presente invenção. Os médicos são particularmente direcionados a Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Press, Plainsview, New York (1989); e Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Suplement 47), John Wiley & Sons, New York (1999), para definições e termos da técnica. As definições aqui proporcionadas não devem ser interpretadas de forma a terem um alcance inferior ao compreendido por uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica.

[0213] A menos que indicado de outro modo, todos os métodos, etapas, técnicas e manipulações que não estão especificamente descritos em detalhes podem ser realizados e foram realizados de um modo conhecido per se, tal como será evidente para o versado na técnica. Referência é feita, por exemplo, de novo aos manuais-padrão, com a técnica de fundamento geral acima referida e às referências restantes aqui citadas.

[0214] Tal como aqui utilizado, os termos "polipeptídeo", "proteína", "peptídeo" e "sequência de aminoácidos" são utilizados indiferentemente, e referem-se a uma forma polimérica de aminoácidos de qualquer comprimento, que pode incluir aminoácidos codificados e não codificados, aminoácidos quimicamente ou bioquimicamente derivatizados ou modificados, e polipeptídeos tendo estruturas principais peptídicas modificadas.

[0215] Tal como aqui utilizado, resíduos de aminoácidos irão ser indicados pelo seu nome completo ou de acordo com o padrão de três letras ou o código de aminoácidos de uma letra.

[0216] Tal como aqui utilizado, os termos "molécula de ácido nucleico", "polinucleotídeo", "ácido polinucleico", "ácido nucleico" são utilizados indiferentemente e referem-se a uma forma polimérica de nucleotídeos de qualquer comprimento, quer ribonucleotídeos ou desoxirribonucleotídeos ou seus análogos. Os polinucleotídeos podem ter qualquer estrutura tridimensional e podem desempenhar qualquer função conhecida ou desconhecida. Os exemplos não limitativos de polinucleotídeos incluem um gene, um fragmento de gene, éxons, íntrons, RNA mensageiro (mRNA), RNA de transferência, RNA ribossomal, ribozimas, cDNA, polinucleotídeos recombinantes, polinucleotídeos ramificados, plasmídeos, vetores, DNA isolado de qualquer sequência, regiões de controle, RNA isolado de qualquer sequência, sondas de ácido nucleico, e iniciadores. A molécula de ácido nucleico pode ser linear ou circular.

[0217] Tal como aqui utilizado, o termo "homologia" denota a semelhança estrutural entre pelo menos duas macromoléculas secundárias, em particular entre dois polipeptídeos ou polinucleotídeos, de táxons iguais ou diferentes, em que a referida semelhança é devido à ancestralidade comum. Assim, o termo "homólogos" denota macromoléculas relacionadas com o modo de tendo a dita semelhança estrutural secundária e opcionalmente terciária. Para comparar duas ou mais sequências de nucleotídeos, a 'identidade de sequência (percentagem de)’ entre uma primeira sequência de nucleotídeos e uma segunda sequência de nucleotídeos pode ser calculada usando métodos conhecidos pelo versado na técnica, por exemplo, dividindo o número de nucleotídeos na primeira sequência de nucleotídeos que são idênticos aos nucleotídeos nas posições correspondentes na segunda sequência de nucleotídeos pelo número total de nucleotídeos na primeira sequência de nucleotídeos e multiplicando por 100% ou utilizando um algoritmo de computador para alinhamento de sequências conhecidas, tais como NCBI Blast. Para determinar o grau de identidade de sequências entre duas sequências de aminoácidos, o versado na técnica poderá considerar as chamadas substituições de aminoácidos "conservadoras", que podem ser geralmente descritas como substituições de aminoácidos em que um resíduo de aminoácido é substituído por um outro resíduo de aminoácido de estrutura química semelhante e que tem pouca ou essencialmente nenhuma influência sobre a função, ou atividade de outras propriedades biológicas do polipeptídeo. Possíveis substituições de aminoácidos conservadoras serão claras para a pessoa versada na técnica. As sequências de aminoácidos e sequências de ácido nucleico são referidas como sendo "exatamente a mesma" se elas têm 100% de identidade de sequência ao longo de todo o seu comprimento.

[0218] Tal como aqui utilizado, os termos "região determinante de complementaridade" ou "CDR" no contexto de anticorpos referem-se a regiões variáveis de ambos as cadeias H (pesada) ou L (leve) (também abreviadas como VH e VL, respectivamente) e contêm as sequências de aminoácidos capazes de se ligarem especificamente a alvos antigênicos. Estas regiões CDR são responsáveis pela especificidade básica do anticorpo para uma estrutura determinante antigênica particular. Estas regiões também são referidas como "regiões hipervariáveis". As CDRs representam extensões não contíguas de aminoácidos dentro das regiões variáveis, mas, independentemente da espécie, os locais de posição destas sequências de aminoácidos críticas no interior das regiões de cadeia pesada e leve variáveis têm sido encontradas como tendo locais semelhantes no interior das sequências de aminoácidos das cadeias variáveis. As cadeias pesadas e leves variáveis de todos os anticorpos canônicos cada um tendo 3 regiões CDRs, cada uma não contígua com a outra (denominada L1, L2, L3, H1, H2, H3) para as respectivas cadeias leve (L) e pesada (H).

[0219] O termo "afinidade", como aqui utilizado, refere-se ao grau em que um polipeptídeo, em especial, uma imunoglobulina, tal como um anticorpo, ou um fragmento de imunoglobulina, tal como uma VHH, se liga a um antígeno, de modo a deslocar o equilíbrio de polipeptídeo e antígeno para a presença de um complexo formado pela sua ligação. Assim, por exemplo, onde um antígeno e o anticorpo (fragmento) são combinados em concentração relativamente igual, um anticorpo (fragmento) de alta afinidade irá ligar-se ao antígeno disponível, de modo a deslocar o equilíbrio para a concentração elevada do complexo resultante. A constante de dissociação é geralmente usada para descrever a afinidade entre o domínio de ligação da proteína e o alvo antigênico. Tipicamente, a constante de dissociação é inferior a 10-5 M. De preferência, a constante de dissociação é inferior a 10-6 M, mais preferivelmente, inferior a 10-7 M. Mais preferivelmente, a constante de dissociação é inferior a 10-8 M. Os termos "ligar-se especificamente" e "ligação específica", como aqui utilizado, referem-se geralmente à capacidade de um polipeptídeo, em particular, uma imunoglobulina, tal como um anticorpo, ou um fragmento de imunoglobulina, tal como um VHH, para se ligar preferivelmente a um antígeno específico que está presente em uma mistura homogênea de antígenos diferentes. Em certas modalidades, uma interação de ligação específica irá discriminar entre antígenos desejáveis e indesejáveis em uma amostra, em algumas modalidades mais do que cerca de 10 a 100 vezes ou mais (por exemplo, superior a cerca de 1000 ou 10.000 vezes).

[0220] Assim, uma sequência de aminoácidos tal como aqui divulgado é dita que "se liga especificamente a" um alvo em particular, quando essa sequência de aminoácidos tem afinidade com, especificidade com e/ou é especificamente direcionada contra o alvo (ou a pelo menos uma parte ou um seu fragmento). A "especificidade" de uma sequência de aminoácidos tal como aqui divulgada pode ser determinada com base na afinidade e/ou avidez.

[0221] Uma sequência de aminoácidos tal como aqui divulgado é dita ser "específica para um primeiro antígeno-alvo de interesse, em oposição a um segundo antígeno-alvo de interesse", quando se liga ao primeiro antígeno-alvo de interesse com uma afinidade que é pelo menos 5 vezes, tal como pelo menos 10 vezes, tal como pelo menos 100 vezes, e preferivelmente pelo menos 1000 vezes maior do que a afinidade com que essa sequência de aminoácidos tal como aqui divulgada se liga ao segundo antígeno-alvo de interesse. Assim, em certas modalidades, quando uma sequência de aminoácidos tal como aqui divulgada é dita ser "específica para" um primeiro antígeno-alvo de interesse, em oposição a um segundo antígeno-alvo de interesse, ela pode ligar-se especificamente a (como aqui definido) o primeiro alvo antígeno de interesse, mas não ao segundo antígeno-alvo de interesse.

[0222] Tal como aqui utilizado, os termos "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" podem referir-se a (o uso de) uma sequência de aminoácidos como aqui descrito que se liga especificamente a um antígeno-alvo de interesse e inibe, reduz e/ou impede a interação entre o antígeno-alvo de interesse, e o seu parceiro de ligação natural. Os termos "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" podem também referir-se a (o uso de) uma sequência de aminoácidos como aqui descrita que se liga especificamente a um antígeno-alvo de interesse e inibe, reduz e/ou impede uma atividade biológica do antígeno-alvo de interesse, tal como medido utilizando um ensaio in vitro, celular in vivo adequado. Por conseguinte, "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" pode também referir-se a (o uso de) uma sequência de aminoácidos como aqui descrita que se liga especificamente a um antígeno-alvo de interesse e inibe, reduz e/ou impede um ou mais mecanismos biológicos ou fisiológicos, efeitos, respostas, funções, vias ou atividades em que o antígeno-alvo de interesse está envolvido. Tal ação da sequência de aminoácidos como aqui descrita como um antagonista pode ser determinada de qualquer forma adequada e/ou utilizando qualquer ensaio adequado (in vitro e geralmente celular ou in vivo) conhecido na especialidade, dependendo do antígeno-alvo de interesse. Assim, mais particularmente, "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" usando sequência de aminoácidos tal como aqui divulgado pode significar quer inibir, reduzir e/ou prevenir a interação entre um antígeno-alvo de interesse e o seu parceiro de ligação natural, ou, inibição, redução e/ou prevenção da atividade de um antígeno-alvo de interesse, ou, inibição, redução e/ou prevenção de um ou mais mecanismos biológicos ou fisiológicos, efeitos, respostas, funções de vias e atividades em que o antígeno-alvo de interesse é envolvido, tal como pelo menos 10%, mas preferivelmente pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou mais, tal como medido utilizando um ensaio in vitro adequado, celular ou in vivo, em comparação com a atividade do antígeno-alvo de interesse no mesmo ensaio sob as mesmas condições, mas sem usar a sequência de aminoácidos tal como aqui divulgado. Além disso, a "inibição", "redução" e/ou "prevenção" também pode significar a indução de uma diminuição na afinidade, avidez, especificidade e/ou a seletividade de um antígeno- alvo de interesse por um ou mais dos seus parceiros de ligação natural e/ou indução de uma diminuição na sensibilidade do antígeno-alvo de interesse para uma ou mais condições do meio ambiente ou em que o antígeno-alvo de interesse está presente (por exemplo, pH, força iônica, a presença de cofatores, etc.), em comparação com as mesmas condições mas sem a presença da sequência de aminoácidos tal como aqui divulgado. No contexto da presente invenção, "inibir", "reduzir" e/ou "previr" pode também envolver a inibição, redução e/ou prevenção alostérica da atividade de um antígeno-alvo de interesse.

[0223] A atividade de inibição ou antagonização ou a atividade de melhoramento ou agonização de uma sequência de aminoácidos como aqui descrito pode ser reversível ou irreversível, mas para aplicações agroquímica, farmacêutica e farmacológica tipicamente ocorrerá de forma reversível.

[0224] Uma sequência de aminoácidos como aqui descrita é considerado como sendo "(em) (forma) essencialmente isolada", tal como aqui utilizado, quando tiver sido extraída ou purificada a partir da célula hospedeira e/ou meio no qual é produzida.

[0225] No que respeita às sequências de aminoácidos, como aqui divulgadas, os termos "região de ligação", "sítio de ligação" ou "sítio de interação" presentes nas sequências de aminoácidos como aqui divulgados tem o significado de um sítio particular, região, locus parte, ou domínio presente na molécula-alvo, cujo sítio particular, região, locus, parte, ou domínio é responsável pela ligação a essa molécula- alvo. Tal região de ligação, portanto, consiste essencialmente naquele sítio particular, região, locus, parte, ou domínio da molécula-alvo, que está em contato com a sequência de aminoácidos quando ligada a molécula-alvo. "Planta" como aqui utilizado, significa plantas vivas e partes de plantas vivas, incluindo frutas frescas, legumes e sementes. Além disso, o termo "planta" tal como aqui utilizado, engloba plantas inteiras, ancestrais e a descendência das plantas e partes de plantas, incluindo sementes, rebentos, caules, folhas, raízes (incluindo tubérculos), flores, e tecidos e órgãos, em que cada um dos acima mencionados compreendem o gene / ácido nucleico de interesse. O termo "planta" também engloba células vegetais, culturas em suspensão, embriões, tecidos de caules, regiões meristemáticas, gametófitos, esporófitos, pólen e micrósporos, novamente em que cada um dos acima mencionados compreende o gene / ácido nucleico de interesse. A escolha de plantas de controle apropriadas é uma parte da rotina de uma configuração experimental e pode incluir plantas correspondentes de tipo selvagem ou plantas correspondente sem o gene de interesse. A planta de controle é tipicamente da mesma espécie de planta ou mesmo da mesma variedade da planta a ser avaliada. A planta de controle também pode ser um nullizygote da planta a ser avaliada. Nullizygotes são indivíduos que faltam o transgene pela segregação. Uma "planta de controle" como aqui utilizada refere não apenas a plantas inteiras, mas também às partes da planta, incluindo as sementes e as partes da semente.

[0226] "Culturas" como aqui utilizado significa uma espécie de planta ou variedade que é cultivada para ser colhida como alimento, forragem de gado, matéria-prima de combustível, ou para qualquer outra finalidade econômica. Como um exemplo não limitativo, as referidas culturas podem ser de milho, cereais, tais como trigo, centeio, cevada e aveia, sorgo, arroz, beterraba de açúcar e beterraba de forragem, frutas, tais como frutas de pomar (por exemplo, as maçãs e as peras), citrinos (por exemplo, laranjas, limões, limas, toranja, ou mandarins), frutas de caroço (por exemplo, pêssegos, nectarinas ou ameixas), nozes (por exemplo, amêndoas ou nozes), fruto macio (por exemplo, cerejas, morangos, amoras ou framboesas), a família da banana ou videiras, leguminosas, tais como feijões, lentilhas, ervilhas e soja, oleaginosas, como girassol, cártamo, colza, canola, mamona ou azeitonas, cucurbitáceas, como pepinos, melões ou abóboras, plantas fibrosas, tais como o algodão, o linho ou de cânhamo, colheitas de combustível, como a cana de açúcar, miscanthus ou switchgrass, legumes, como batata, tomate, pimentão, alface, espinafre, cebola, cenouras, beringelas, aspargos ou cabage, plantas ornamentais, tais como flores (por exemplo, petúnias, pelargoniums , rosas, tulipas, lírios, ou crisântemos), arbustos, árvores de folhas largas (por exemplo, álamos ou salgueiros) e sempre-vivas (por exemplo, coníferas), gramíneas, tais como o gramado, relva ou forragem de grama ou outras plantas úteis, tais como café, chá , tabaco, lúpulo, pimenta, borracha ou plantas de látex.

[0227] Uma "praga", como usado aqui, é um organismo que é prejudicial para as plantas, animais, seres humanos ou relativo a seres humanos, e inclui, mas não está limitado às pragas das plantas (como definido mais tarde), às pragas domésticas, tais como baratas, formigas, etc., e vetores de doenças, tais como mosquitos malária.

[0228] Uma "praga de planta", "patógeno de planta" ou "pragas agrícolas", tal como utilizado no pedido alternadamente, refere-se a organismos que especificamente provocam danos às plantas, partes de plantas e produtos vegetais, em particular, partes de plantas e produtos vegetais, usados em agricultura. Nota-se que o termo "praga de planta" ou "praga agrícola" é utilizado no sentido de que pragas que miram e prejudicam as plantas. Pragas particularmente pertencem aos animais invertebrados (por exemplo, insetos (incluindo insetos das pragas agrícolas, insetos de pragas de plantas ornamentais, insetos de pragas de florestas). São exemplos relevantes de pragas de culturas incluem, mas não estão limitados a, pulgões, lagartas, moscas, vespas, e similares, nematoides (que vivem em liberdade em solo ou em particular espécies que parasitam as raízes das plantas, tais como galhas de nematoides e cisto de nematoides tais como nematoide de cisto da soja e nematoide de cisto de batata), ácaros (tais como ácaros, ácaros de aranha, ácaro rajado e ácaros das galhas) e gastrópodes (incluindo lesmas, tais como Deroceras spp., Milax spp., Tandonia sp., Umax spp., Arion spp. e Veronicella spp., e caracóis, tais como Helix spp., Cernuella spp., Theba spp., Cochlicella spp., Achatina spp., Succinea spp., Ovachlamys spp., Amphibulima spp., Zachrysia spp., Bradybaena spp., e Pomacea spp.), fungos patogênicos (incluindo Ascommicetos (por exemplo, Fusarium spp., Thielaviopsis spp., Verticillium spp., Magnaporthe spp.), Basidiommicetos (por exemplo, Rhizoctonia spp., Phakospora spp., Puccinia spp.), e fungos do tipo Oommicetos (por exemplo, Pythium spp. e Phytophthora spp.), bactérias (tais como Burkholderia spp. e Proteobacteria tais como Xanthomonas spp. Pseudomonas spp e.), Fitoplasma, Spiroplasma, vírus (tais como o vírus do mosaico do tabaco e vírus de mosaico da couve-flor) e protozoários.

[0229] "Micróbio", tal como aqui utilizado, significa bactéria, vírus, fungo, levedura e outros semelhantes e "microbiano", significa derivado a partir de um micróbio.

[0230] "Fungos", tal como aqui utilizado, significa um organismo eucariótico, que pertence ao grupo da Eumycota. O termo fungo na presente invenção também inclui organismos do tipo fúngicos, como o Oomycota. Oomycota (ou Oommicetos) formam uma linhagem filogenética distinta de micro-organismos eucarióticos tipo fungo. Este grupo foi originalmente classificado entre os fungos, mas ideias modernas suportam uma relação relativamente estreita com os organismos fotossintéticos, como algas marrons e diatomáceas, dentro do grupo de heterokonts.

[0231] "Infecção das pragas" ou "doença de pragas", tal como aqui utilizado refere-se a qualquer condição inflamatória, doença ou desordem em um organismo vivo, tal como uma planta, animal ou ser humano, que é causada por uma praga.

[0232] "Infecção fúngica" ou "doença fúngica", tal como aqui utilizado refere-se a qualquer condição inflamatória, doença ou desordem em um organismo vivo, tal como uma planta, animal ou ser humano, que é causada por um fungo.

[0233] "Substância ativa", "ingrediente ativo" ou "princípio ativo", como aqui indiferentemente utilizado, significa qualquer elemento biológico, bioquímico ou químico e seus derivados, fragmentos ou compostos à base dos mesmos, incluindo micro-organismos, com uma ação geral ou específica contra organismos prejudiciais em um indivíduo, e em particular nos vegetais, partes de vegetais ou produtos vegetais, à medida que ocorrem naturalmente ou são produzidos pela indústria, incluindo qualquer impureza inevitavelmente resultante do processo de fabricação.

[0234] "Agrotóxico", como aqui utilizado, significa adequado para uso na indústria agroquímica (incluindo a agricultura, horticultura, floricultura e usos caseiros e em jardinagem, mas também produtos destinados a utilizações não agrícolas relacionadas, tais como operador de controle de pragas / saúde pública utilizam para controlar insetos indesejáveis e roedores, usos domésticos, tais como fungicidas de uso doméstico e inseticidas e agentes, para proteger as plantas ou partes de plantas, culturas, bulbos, tubérculos, frutas (por exemplo, de organismos prejudiciais, doenças ou pragas); para controlar, de preferência promover ou aumentar, o crescimento das plantas; e/ou para promover a produção de plantas, culturas ou partes de plantas que são colhidas (por exemplo, os seus frutos, flores, sementes, etc.). Exemplos de tais substâncias serão evidentes para o versado na técnica e podem por exemplo, incluir compostos que são ativos como inseticidas (inseticidas por exemplo, contato de contato ou inseticidas sistêmicos, incluindo inseticidas para uso doméstico), herbicidas (por exemplo herbicidas de contato ou herbicidas sistêmicos, incluindo herbicidas para uso doméstico), fungicidas (por exemplo, fungicidas de contato ou fungicidas sistêmicos, incluindo fungicidas para uso doméstico), nematicidas (nematicidas por exemplo, contato ou nematicidas sistêmicos, incluindo nematicidas para uso doméstico) e outros pesticidas ou biocidas (por exemplo agentes para matar insetos e caracóis); assim como fertilizantes; reguladores de crescimento, tais como hormônios de plantas; micronutrientes, agentes de proteção, feromônios; repelentes; iscas de insetos; e/ou princípios ativos que são utilizados para modular (isto é, aumentar, diminuir, inibir, melhorar e/ou acionar) expressão do gene (e/ou outros processos biológicos ou bioquímicos) em ou pela planta-alvo (por exemplo, a planta a ser protegida ou a planta a ser controlada), tais como os ácidos nucleicos (por exemplo, RNA de cadeia simples ou de cadeia dupla, como por exemplo, utilizado no contexto da tecnologia de RNAi) e outros fatores, proteínas, produtos químicos, etc. conhecido per se para este efeito, etc. Exemplos de tais produtos agroquímicos serão evidentes para o versado na técnica; e por exemplo incluem, sem limitação: glifosato, paraquat, metolacloro, acetocloro, mesotriona, 2,4-D,atrazina, glufosinato, sulfosato, fenoxaprop, pendimetalina, picloram, trifluralin, bromoxinil, clodinafop, fluroxipir, nicosulfuron, bensulfuron, imazetapir, dicamba, imidacloprid, tiametoxam, fipronil, clorpirifós, deltametrina, lambda-cihalotrin, endosulfan, metamidofós, carbofurano, clotianidina, cipermetrina, abamectina, diflufenicão, espinosade, indoxacarbe, bifentrina, teflutrina, azoxistrobina, tiametoxam, tebuconazol, mancozeb, ciazofamida, fluaziname, piraclostrobina, epoxiconazole, clorotalonil, fungicidas de cobre, trifloxistrobina, protioconazol, difenoconazol, carbendazime, propiconazol, tiofanato, enxofre, boscalide e outros agroquímicos conhecidos ou qualquer combinação adequada (s) dos mesmos.

[0235] Uma "composição agroquímica", tal como aqui utilizado, significa uma composição para o uso agroquímico, como adicionalmente definido, que compreende pelo menos uma substância ativa, opcionalmente com um ou mais aditivos que favorecem a dispersão ideal, atomização, deposição, molhagem de folha, distribuição, retenção e/ou absorção de agroquímicos. Ficará claro a partir da descrição mais detalhada neste documento que uma composição agroquímica, tal como aqui utilizada, inclui agentes de controle biológicos ou pesticidas biológicos (incluindo, mas não se limitando a biocida biológico, agentes biostáticos, fungistáticos e fungicidas) e estes termos serão alternadamente utilizados no presente pedido. Por conseguinte, uma composição agroquímica, tal como aqui utilizada, inclui as composições que compreendem pelo menos uma molécula biológica como um ingrediente ativo, substância ou princípio para controlar pragas em plantas ou em outras aplicações relacionadas à agricultura (tal como, por exemplo, no solo). Exemplos não limitativos de moléculas biológicas a serem utilizadas como princípios ativos nas composições agroquímicas aqui divulgados são proteínas (incluindo anticorpos e seus fragmentos, tais como, mas não se limitando a fragmentos de cadeia pesada do domínio variável dos anticorpos, incluindo VHH’s), sequências de ácidos nucleicos, (polissorbatos) sacarídeos, lipídios, vitaminas, hormônios, glicolipídios esteróis, e glicerolipídios.

[0236] Como um exemplo não limitativo, os aditivos nas composições agroquímicas aqui divulgadas podem incluir, mas não estão limitados a, diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos, agentes umectantes, agentes de espalhamento, óleos, etiquetas, espessantes, agentes de penetração, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelantes, fotoprotetores, agentes antiespumantes, biocidas e/ou agentes de controle de tração.

[0237] Uma "composição biostática" ou um "agente biostático", tal como aqui utilizado, significa qualquer ingrediente ativo, substância ou princípio ou uma composição compreendendo qualquer ingrediente ativo, substância ou princípio para uso biostático (conforme aqui definido) compreende pelo menos uma substância biostática ativa ou ingrediente, opcionalmente combinado com um ou mais aditivos que favorecem a dispersão ideal, atomização, deposição, molhagem de folha, distribuição, retenção e/ou a absorção da substância ou ingrediente ativo. Como exemplos de tais aditivos são diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos (iônicos), agentes umectantes, agentes de espalhamento, óleos, adesivos, espessantes, agentes de penetração, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelantes, fotoprotetores, agentes antiespuma, biocidas, inibidores de protease e/ou agentes de controle de movimento.

[0238] Uma "composição biocida" ou um "agente biocida", tal como aqui utilizado, significa qualquer ingrediente ativo, substância ou princípio ou uma composição compreendendo qualquer ingrediente ativo, substância ou princípio para utilização como biocidas (conforme aqui definido) compreende pelo menos uma substância biocida ativa ou ingrediente, opcionalmente combinada com um ou mais aditivos que favorecem a dispersão ideal, atomização, deposição, molhagem de folha, de distribuição, de retenção e/ou a absorção da substância ou ingrediente ativo. Como exemplos de tais aditivos são diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos (iônicos), agentes umectantes, agentes de espalhamento, óleos, adesivos, espessantes, agentes de penetração, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelantes, fotoprotetores, agentes antiespuma, biocidas, inibidores de protease e/ou agentes de controle de movimento.

[0239] Uma "composição fungistática" ou um "agente fungistático" como aqui utilizado significa qualquer ingrediente ativo, substância ou princípio ou uma composição que compreende qualquer ingrediente ativo, substância ou princípio para uso fungistático (conforme aqui definido) compreende pelo menos uma substância fungistática ativa ou ingrediente, opcionalmente combinada com um ou mais aditivos que favorecem a dispersão ideal, atomização, deposição, molhagem de folha, distribuição, retenção e/ou absorção da substância ou ingrediente ativo. Como exemplos de tais aditivos são diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos (iônicos), agentes umectantes, agentes de espalhamento, óleos, adesivos, espessantes, agentes de penetração, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelantes, fotoprotetores, agentes antiespuma, biocidas, inibidores de protease e/ou agentes de controle de movimento.

[0240] Uma "composição fungicida" ou um "agente fungicida" como aqui utilizado significa qualquer substância ativa, substância ou princípio ou uma composição que compreende qualquer ingrediente ativo, substância ou princípio para utilização fungicida (tal como aqui a seguir definido) compreendendo pelo menos uma substância fungicida ativa ou ingrediente, opcionalmente combinada com um ou mais aditivos que favorecem a dispersão ideal, atomização, deposição, molhagem de folha, distribuição, de retenção e/ou absorção da substância ou ingrediente ativo. Como exemplos de tais aditivos são diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos (iônicos), agentes umectantes, agentes de espalhamento, óleos, adesivos, espessantes, agentes de penetração, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelantes, fotoprotetores, agentes antiespuma, biocidas, inibidores de protease e/ou agentes de controle de movimento.

[0241] "Uso agroquímico", tal como aqui utilizado, inclui não só a utilização de agroquímicos como definido acima (por exemplo, pesticidas, reguladores de crescimento, nutrientes fertilizantes, repelentes / desfolhantes, etc.) que são adequados e/ou destinados a serem utilizados no campo de culturas cultivadas (por exemplo, agricultura), mas também inclui o uso de agroquímicos como definidos acima (por exemplo, pesticidas, reguladores de crescimento, nutrientes / fertilizantes, repelentes, desfolhantes, etc.) que são destinados para uso em culturas cultivadas em estufa (por exemplo, horticultura / floricultura) ou sistemas de cultivo hidropônico e até mesmo o uso de agrotóxicos como acima definido que são adequados e/ou destinados a usos de não cultura tal como usos em jardins privados, usos domésticos (por exemplo, herbicidas ou inseticidas para uso doméstico), ou usos por operadores de controle de pragas (por exemplo, controle de plantas daninhas, etc.).

[0242] "Biostático (efeito)" ou "uso biostático", tal como aqui utilizado, inclui qualquer efeito ou utilização de uma substância ativa (opcionalmente compreendido em uma composição biostático, biocida, fungicida ou fungistática, tal como aqui definido) para controlar, modular ou interferir com a atividade prejudicial de uma praga, tal como uma praga de planta ou um patógeno de planta, incluindo, mas não se limitando a inibição do crescimento ou da atividade da praga, alterando o comportamento da praga, e repelindo ou atraindo a praga em plantas, partes de plantas ou nas outras configurações relacionadas à agricultura, tais como, por exemplo, usa para uso doméstico ou no solo.

[0243] "Biocida (efeito)" ou "uso biocida", tal como aqui utilizado, inclui qualquer efeito ou uso de uma substância ativa (opcionalmente compreendido em uma composição biocida ou fungicida, tal como aqui definido) para controlar, modular ou interferir com a atividade prejudicial de uma praga, tal como uma praga de planta ou um patógeno de planta, incluindo, mas não se limitando a morte da praga, inibição do crescimento ou a atividade da praga, alteração do comportamento da praga, e repelindo ou atraindo a praga em plantas, partes de plantas ou nas outras aplicações relacionadas à agricultura, tais como, por exemplo, para uso doméstico ou no solo.

[0244] "Fungistático (efeito)" ou "uso fungistático", tal como aqui utilizado, inclui qualquer efeito ou uso de uma substância ativa (opcionalmente compreendida em um composição fungicida ou fungistática como aqui definido) para controlar, modular ou interferir com a atividade prejudicial de um fungo, incluindo, mas não se limitando a inibir o crescimento ou a atividade do fungo, alterar o comportamento do fungo, e repelir ou atrair o fungo em plantas, partes de plantas ou em outras aplicações relacionadas a agricultura, tais como por exemplo para usos domésticos ou no solo.

[0245] "Fungicida (efeito)" ou "uso fungicida", tal como aqui utilizado, inclui qualquer efeito ou uso de uma substância ativa (opcionalmente compreendida em uma composição fungicida tal como aqui definida) para controlar, modular ou interferir com a atividade prejudicial de um fungo, incluindo, mas não se limitando a matar o fungo, inibir o crescimento ou a atividade do fungo, alterar o comportamento do fungo, e repelir ou atrair o fungo em plantas, partes de plantas ou em outras aplicações relacionadas a agricultura, tais como, por exemplo, para uso doméstico ou uso no solo.

[0246] "Atividade pesticida", ou "atividade biocida", como aqui indiferentemente utilizado, significa interferir com a atividade prejudicial de uma praga, incluindo, mas não se limitando a matar a praga, inibir o crescimento ou a atividade da praga, alterar o comportamento da praga, afastar ou atrair a praga.

[0247] "Atividade biostática", tal como aqui utilizado, significa interferir com a atividade prejudicial de uma praga, incluindo, mas não se limitando a inibir o crescimento ou a atividade da praga, alterar o comportamento da praga, repelir ou atrair a praga.

[0248] Pesticida, biocida, ou atividade biostática de um ingrediente ativo, substância ou princípio ou uma composição ou agente compreendendo um pesticida, biocida, ou ingrediente ativo biostático, substância ou princípio, podem ser expressos como a atividade inibitória mínima (MIC) de um agente (expresso em unidades de concentração, tais como por exemplo, mg/mL), no entanto sem ser restrita a isto.

[0249] "Atividade fungicida", tal como aqui utilizado, significa interferir com a atividade prejudicial de um fungo, incluindo, mas não se limitando a matar o fungo, inibir o crescimento ou a atividade do fungo, alterar o comportamento do fungo, e repelir ou atrair o fungo.

[0250] "Atividade fungistática", tal como aqui utilizado, significa interferir com a atividade prejudicial de um fungo, incluindo, mas não se limitando a inibir o crescimento ou a atividade do fungo, alterar o comportamento do fungo, e repelir ou atrair o fungo.

[0251] Atividade fungicida ou fungistática de um ingrediente ativo, substância ou princípio ou uma composição ou agente compreendendo um pesticida, biocida, ou ingrediente ativo biostático, substância ou princípio, pode ser expressa como a atividade inibidora mínima (MIC) de um agente (expressa em unidades de concentração, tal como por exemplo, mg/mL), no entanto sem ser restrita a este.

[0252] Um "veículo", tal como aqui utilizado, significa qualquer veículo sólido, semissólido ou líquido ou em (a) uma substância ativa que pode ser adequadamente incorporado, incluído, imobilizado, adsorvido, absorvido, ligado, encapsulado, incorporado, anexado, ou compreendido. Exemplos não limitativos de tais veículos incluem nanocápsulas, microcápsulas, nanoesferas, microesferas, nanopartículas, micropartículas, lipossomas, vesículas, grânulos, um gel, partículas de resina iônicas fracas, lipossomas, veículos de entrega de cocleado, pequenos grânulos, granulados, nanotubos, esferas de bucky, gotas de água que fazem parte de uma emulsão água em óleo, gotas de óleo que são parte de uma emulsão de óleo em água, materiais orgânicos, tais como cortiça, madeira ou outros materiais derivados de plantas (por exemplo, sob a forma de cascas de semente, aparas de madeira, celulose, esferas, grânulos, folhas ou qualquer outra forma adequada), papel ou papelão, materiais inorgânicos, tais como talco, argila, celulose microcristalina, sílica, alumina, silicatos e zeólitos, ou mesmo células microbianas (por exemplo, células de levedura) ou frações adequadas ou seus fragmentos.

[0253] Tal como aqui utilizado, o termo "anticorpo" refere-se a anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, anticorpos humanizados, anticorpos de cadeia simples, e seus fragmentos tais como Fab F(ab)2, Fv e outros fragmentos que retêm a função de ligação ao antígeno do anticorpo progenitor. Como tal, um anticorpo pode referir-se a uma imunoglobulina ou glicoproteína ou seu fragmento ou uma sua porção, ou a um construto que compreende uma porção de ligação ao antígeno compreendida dentro de uma estrutura tipo imunoglobulina modificada, ou a uma sua porção de ligação ao antígeno compreendida dentro de um construto compreendendo uma estrutura tipo não imunoglobulina ou arcabouço.

[0254] Tal como aqui utilizado, o termo "anticorpo monoclonal" refere-se a uma composição de anticorpos com uma população homogênea de anticorpos. O termo não é limitado em relação à espécie ou fonte do anticorpo, nem pretende que seja limitado pela forma em que ele é feito. O termo abrange imunoglobulinas inteiras assim como fragmentos, tais como Fab, F (ab)2, Fv e outros, que retêm a função de ligação ao antígeno do anticorpo. Os anticorpos monoclonais de qualquer espécie de mamífero podem ser utilizados na presente invenção. Na prática, no entanto, os anticorpos serão tipicamente de rato ou de origem murina devido à disponibilidade de linhagem de células de rato ou murina para uso na preparação de linhagens de células híbridas ou hibridomas necessárias para a produção de anticorpos monoclonais.

[0255] Tal como aqui utilizado, o termo "anticorpo policlonal" refere- se a uma composição de anticorpos com uma população heterogênea de anticorpos. Os anticorpos policlonais são geralmente derivados a partir do soro reunido a partir de animais imunizados ou a partir de seres humanos selecionados.

[0256] "Domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou um seu fragmento funcional", tal como aqui utilizado, significa (i) o domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada, que é naturalmente desprovido de cadeias leves (também indicadas a seguir como VHH), incluindo, mas não se limitando ao domínio variável de cadeia pesada de anticorpos de cadeias pesadas dos camelídeos ou tubarões ou (ii) o domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo convencional de quatro cadeias (também indicado a seguir como VH), incluindo mas não se limitando a um domínio variável camelizado (conforme aqui definido) da cadeia pesada de um anticorpo convencional de quatro cadeias (também indicado a seguir como VH camelizado). Tal como adicionalmente descrito a seguir, a sequência de aminoácidos e estrutura de um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo pode ser considerada, sem, no entanto, ser limitada ao mesmo, para ser formada por quatro regiões estruturais, ou "FR’s", que são referidas na técnica e aqui a seguir como "região de estrutura 1" ou "FR1"; como "região de estrutura 2" ou "FR2"; como "região de estrutura 3" ou "FR3"; e como "região de estrutura 4" ou "FR4", respectivamente, que são regiões estruturais interrompidas por três regiões determinantes complementares ou "CDR", que são referidas na técnica como "região determinante de complementaridade 1" ou "CDR1"; como "região determinante de complementaridade 2" ou "CDR2"; e como "região determinante de complementaridade 3" ou "CDR3" respectivamente.

[0257] Como também descrito mais adiante, o número total de resíduos de aminoácidos de um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (incluindo um VHH ou um VH) pode estar na região de 10130, é de preferência 112-115, e é mais preferivelmente 113. Deve, contudo, ser notado que as partes, fragmentos ou análogos de um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo não estão particularmente limitadas, ao seu comprimento e/ou tamanho, desde que tais partes, fragmentos ou análogos retenham (pelo menos parte de) a atividade funcional, tal como o pesticida, biocida, atividade biostática, fungicida ou atividade fungistática (como aqui definido) e/ou retenham (pelo menos parte de) especificidade de ligação do domínio variável de cadeia pesada inicial de um anticorpo a partir do qual estas partes, fragmentos ou análogos são derivados. Partes, fragmentos ou análogos de que retém (pelo menos parte de) a atividade funcional, tal como pesticida, biocida, atividade biostática, atividade fungicida ou fungistática (como aqui definido) e/ou retém (pelo menos parte de) a especificidade de ligação do domínio variável de cadeia pesada original de um anticorpo a partir do qual estas partes, fragmentos ou análogos são derivados são também ainda aqui referidos como "fragmentos funcionais" de um domínio variável de cadeia pesada.

[0258] Os resíduos de aminoácidos de um domínio variável de um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (incluindo um VHH ou um VH) são numerados de acordo com a numeração geral para os domínios variáveis de cadeia pesada dados por Kabat et al. ("Sequence of proteins of immunological interest", Serviços Públicos de Saúde dos Estados Unidos, NIH Bethesda, Md., Publicação No. 91), quando aplicado a domínios VHH de Camelídeos no artigo de Riechmann e Muyldermans, acima referido (vide, por exemplo Fig. 2 da dita referência). De acordo com esta numeração, FR1 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácido nas posições 1-30, CDR1 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 31-35, FR2 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os aminoácidos nas posições 36-49, CDR2 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 50-65, FR3 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 66-94, CDR3 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácido nas posições 95-102, e FR4 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 103-113. [A este respeito, deve-se observar que - tal como é bem conhecido na técnica para domínios VHH - o número total de resíduos de aminoácidos em cada uma das CDRs pode variar e pode não coincidir com o número total de resíduos de aminoácidos indicados pela numeração de Kabat (isto é, uma ou mais posições de acordo com a numeração Kabat pode não ser ocupada na sequência real, ou a sequência real pode conter mais resíduos de aminoácidos do que o número permitido pela numeração de Kabat). Isto significa que, em geral, a numeração de acordo com Kabat pode ou não coincidir com a numeração real dos resíduos de aminoácidos na sequência real. Geralmente, no entanto, pode-se dizer que, de acordo com a numeração de Kabat e independentemente do número de resíduos de aminoácidos na CDR, posição 1 de acordo com a numeração de Kabat corresponde ao início de FR1 e vice-versa, posição 36 de acordo com a numeração de Kabat corresponde ao início de FR2 e vice-versa, posição 66 de acordo com a numeração de Kabat corresponde ao início de FR3 e vice-versa, e a posição 103 de acordo com a numeração de Kabat corresponde ao início de FR4 e vice-versa.].

[0259] Os métodos alternativos para a numeração dos resíduos de aminoácidos dos domínios variáveis de cadeia pesada são o método descrito por Chothia et al. (Nature 342, 877-883 (1989)), o assim chamado "definição de AbM" e o assim chamado "definição de contato". No entanto, na presente descrição, reivindicações e figuras, a numeração de acordo com Kabat, tal como aplicado a domínios VHH por Riechmann e Muyldermans será seguida, a menos que indicado de outra forma.

[0260] Para uma descrição geral de anticorpos de cadeia pesada e seus domínios variáveis, referência é feita inter alia, para as seguintes referências, as quais são mencionadas como técnica geral: WO 94/04678, WO 95/04079 e WO 96/341 03 do Vrije Universiteit Brussel; WO 94/25591, WO 99/37681, WO 00/40968, WO 00/43507, WO 00/65057, WO 01/40310, WO 01/44301, EP 1134231 e WO 02/48193 de Unilever; WO 97/49805, WO 01/21817, WO 03/035694, WO 03/054016 e WO 03/055527 do Vlaams Instituut voor Biotechnologie (VIB); WO 03/050531 de Algonomics N.V. e Ablynx NV; WO 01/90190 pelo National Research Council of Canada; WO 03/025020 (=EP 1 433 793) pelo Institute of Antibodies; bem como WO 04/041 867, WO 04/041862, WO 04/041865, WO 04/041863, WO 04/062551 por Ablynx NV e os pedido de patente publicados adicionais por Ablynx NV; Hamers-Casterman et al., Nature 1993 Jun. 3; 363 (6428) : 446-8; Davies and Riechmann, FEBS Lett. 1994 Feb. 21; 339(3): 285-90; Muyldermans et al., Protein Eng. 1 994 September; 7(9): 11 29-3; Davies and Riechmann, Biotechnology (NY) 1995 May; 13(5) : 475-9; Gharoudi et al., 9th Forum of Applied Biotechnology, Med. 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[0261] Em geral, deve notar-se que o termo "domínio variável de cadeia pesada", tal como aqui utilizado no seu sentido mais lato, não está limitado a uma fonte biológica específica ou a um método específico de preparação. Por exemplo, como será discutido em mais detalhe abaixo, os domínios variáveis de cadeia pesada da presente invenção podem ser obtidos (1) por meio do isolamento do domínio VHH de uma cadeia pesada de anticorpo que ocorre naturalmente; (2) pelo isolamento do domínio VH de um anticorpo de quatro cadeias que ocorre naturalmente (3), através da expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica um domínio VHH que ocorre naturalmente; (4) por expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica um domínio VH que ocorre naturalmente (5) por "camelização" (conforme descrito abaixo) de um domínio VH que ocorre naturalmente a partir de qualquer espécie animal, em particular uma espécie de mamífero, tal como a partir de um ser humano, ou por expressão de um ácido nucleico que codifica para um tal Domínio VH camelizado; (6) por "camelisação" de um "anticorpo de domínio" ou "DAB", como descrito por Ward et al. (supra), ou por expressão de um ácido nucleico que codifica para um tal domínio VH camelizado (7) usando técnicas sintéticas ou semissintéticas para a preparação de proteínas, polipeptídeos ou outras sequências de aminoácidos; (8) através da preparação de um ácido nucleico que codifica um VHH ou um VH utilizando técnicas de síntese de ácido nucleico, seguido por expressão do ácido nucleico assim obtido; e/ou (9) por qualquer combinação dos anteriores. Métodos e técnicas adequados para a realização do exposto serão evidentes para o versado na técnica com base na descrição aqui e incluem, por exemplo, os métodos e as técnicas descritas em mais detalhe a seguir.

[0262] No entanto, de acordo com uma modalidade específica, os domínios variáveis de cadeia pesada como aqui divulgados não têm uma sequência de aminoácidos que seja exatamente a mesma que (isto é, como um grau de identidade de sequência de 100% com) a sequência de aminoácidos de um domínio VH que ocorre naturalmente, tal como a sequência de aminoácidos de um domínio VH que ocorre naturalmente a partir de um mamífero, e em particular de um ser humano.

[0263] Os termos "quantidade eficaz" e "dose eficaz", tal como aqui utilizado, significa a quantidade necessária para conseguir o resultado ou resultados desejados.

[0264] Tal como aqui utilizados, os termos "determinar", "medir", "avaliar", "monitorizar" e "ensaiar" são utilizados indiferentemente e incluem tanto determinações quantitativas quanto qualitativas.

[0265] Todos os documentos citados no presente fascículo são aqui incorporados por referência na sua totalidade. A menos que de outro modo definido, todos os termos utilizados na divulgação da invenção, incluindo os termos técnicos e científicos, têm o significado que é normalmente entendido por um versado na técnica à qual esta invenção pertence. Por meio de mais orientações, definições de termos são incluídas para apreciar melhor o ensinamento da presente invenção.

COMPOSIÇÕES COMPREENDENDO PELO MENOS UM POLIPEPTÍDEO

[0266] Em um aspecto, os presentes inventores identificaram composições agroquímicas compreendendo pelo menos um polipeptídeo, que pode especificamente se ligar a uma praga. Importantemente, através desta interação com uma estrutura molecular específica da praga, as composições aqui descritas são capazes de controlar, modular, inibir, prevenir ou reduzir uma ou mais atividades biológicas do patógeno de planta, de tal modo que o crescimento do patógeno da planta é controlado, modulado, inibido, reduzido ou prevenido. Em certas modalidades, as composições agroquímicas como aqui descritas são capazes de matar uma praga de planta através da interação específica de pelo menos um polipeptídeo, que pode especificamente se ligar a uma praga, e que é compreendido nas composições. Por conseguinte, as composições agroquímicas, como aqui divulgadas podem ser usadas para modular, de modo a alterar, diminuir ou inibir a função biológica de uma praga de planta através da ligação a um sítio de ligação presente em um alvo daquela praga de planta desse modo afetando as atividades biológicas naturais (tais como, mas não se limitando a, crescimento) da praga e/ou um ou mais percursos biológicos, no qual o alvo estrutural daquela praga está envolvido.

[0267] Além disso, as composições que compreendem pelo menos um polipeptídeo, tal como aqui descrito tem várias vantagens adicionais sobre os agentes de ligação de imunoglobulina e não imunoglobulina tradicionais conhecidos na técnica. De fato, em certas modalidades, as sequências de aminoácidos tal como aqui divulgadas são domínios isolados de imunoglobulina de cadeia pesada variável, que são mais potentes e mais estáveis do que os anticorpos de quatro cadeias convencionais, que conduzem a (1) as formas de dosagem mais baixas, dosagem menos frequente e, assim, menos efeitos colaterais; e (2) uma estabilidade melhorada, resultando em uma maior escolha de vias de administração. Devido ao seu tamanho pequeno, domínios variáveis de imunoglobulina de cadeia pesada tem a capacidade de atravessar as membranas e penetrar em compartimentos fisiológicos, tecidos e órgãos que não são acessíveis para outros polipeptídeos e proteínas maiores.

[0268] Em uma modalidade específica, mas não limitativa, o pelo menos um polipeptídeo compreendido nas composições como aqui descritas pode ser um polipeptídeo compreendendo ou, sob condições adequadas (por exemplo, condições fisiológicas), capaz de formar uma dobra de imunoglobulina (isto é, desdobramento). Referência é feita, nomeadamente, a revisão de Halaby et al., J. (1999) Protein Eng. 12, 563-71. De um modo preferido, quando devidamente dobrada de modo a formar uma dobra de imunoglobulina, uma tal sequência de polipeptídeo é capaz de se ligar (como aqui definido) a um alvo ou um antígeno específico; e mais preferivelmente capaz de se ligar a um alvo de praga ou um antígeno de pragas com uma afinidade (medida adequadamente e/ou expressa como um valor de KD (real ou aparente), um valor de KA (real ou aparente), uma taxa de kon e/ou taxa de koff, ou, alternativamente, como um valor de IC50, como adicionalmente aqui descrito) que é como aqui definido. Também, partes, fragmentos, análogos, mutantes, alelos, variantes e/ou derivados de tais sequências de polipeptídeos são preferivelmente de tal modo que eles compreendem uma dobra de imunoglobulina ou são capazes de formar, sob condições adequadas, uma dobra de imunoglobulina.

[0269] Em modalidades particulares, a invenção proporciona uma composição agroquímica ou uma composição pesticida biológica para combater pragas de plantas, mais particularmente um fungo da planta, cuja composição compreende pelo menos um polipeptídeo de sequência de aminoácido de entre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa.

[0270] Em certas outras modalidades, a invenção proporciona uma composição agroquímica para combater pragas de plantas, composição essa que compreende, pelo menos, dois polipeptídeos ou, pelo menos, duas sequências de aminoácidos de entre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa.

[0271] Em ainda outras modalidades, a invenção proporciona uma composição agroquímica para combater pragas de plantas, cuja composição compreende pelo menos três polipeptídeos ou, pelo menos, três sequências de aminoácidos de entre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa. A composição agroquímica de acordo com a invenção é uma composição agroquímica, tal como aqui definido, para o combate de parasitas de plantas, tal como definido antes, o que significa que a composição agroquímica, mais em particular, a substância ativa, tal como definido antes, compreendida na composição agroquímica, é capaz de interferir com, de preferência, reduzir ou interromper, os efeitos prejudiciais de uma ou mais pragas de planta em uma ou mais plantas, de preferência culturas. Assim, em uma modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa. Em modalidades mais específicas a composição agroquímica compreende um polipeptídeo de entre 80-100 aminoácidos 800-120, 80-140 aminoácidos, 80-160 aminoácidos, 80-180 aminoácidos ou aminoácidos. Em ainda outra modalidade a composição agroquímica compreende um polipeptídeo de entre 100-200 aminoácidos, 100-180 aminoácidos, 100-160 aminoácidos, 100-150 aminoácidos, 100-140 aminoácidos ou 100-120 aminoácidos. Em ainda outra modalidade a composição agroquímica compreende um polipeptídeo de entre 110200 aminoácidos, 110-180 aminoácidos, 110-160 aminoácidos, 110-140 aminoácidos ou 110-130 aminoácidos. Em ainda uma outra modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo de entre 120-200 aminoácidos, 120-180 aminoácidos, 120-160 aminoácidos, ou 120140 aminoácidos. Em ainda uma outra modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo de entre 140-200 aminoácidos, 140-180 aminoácidos ou 140-160 aminoácidos. Em ainda uma outra modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo de entre 160-200 aminoácidos ou 160-180 aminoácidos.

[0272] As sequências de polipeptídeos ou aminoácidos compreendidos nas composições aqui descritos podem ser polipeptídeos que ocorrem naturalmente ou sequências de aminoácidos, que podem ser derivadas de um polipeptídeo que ocorre naturalmente, ou alternativamente elas podem ser integralmente concebidas artificialmente. Os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos podem ser à base de imunoglobulina ou podem basear-se em domínios presentes em proteínas, incluindo, mas não se limitando a proteínas microbianas, inibidores de protease, toxinas, fibronectina, lipocalinas, proteínas em espiral enroladas antiparalelas de cadeia simples ou proteínas de motivo de repetição. Exemplos de tais polipeptídeos não limitativos, com as faixas aqui descritas de comprimentos de aminoácidos, incluem domínios de ligação de carboidratos (CBD) (Blake et al. (2006) J. Biol. Chem. 281, 2932129329), anticorpos de cadeia pesada (HCAB), anticorpos de domínio único (sdAb), minicorpos (Tramontano et al. (1994) J. Mol. Recognition 7, 9-24), o domínio variável de cadeia pesada de anticorpos de camelídeo (VHH), o domínio variável dos novos receptores de antígenos (VNAR), aficorpos (Nygren PA (2008) FEBS J. 275, 2668-2676), alfacorpos (vide WO2010066740), domínios de repetição de anquirina projetada (DARPins) (Stumpp et al (2008) Drug Discovery Today 13, 695-701), anticalinas (Skerra et al (2008) FEBS J. 275, 2677-2683), knotinas (Kolmar et al (2008) FEBS J. 275, 2684-2690) e domínios CH2 construídos (nanoanticorpos, vide Dimitrov DS (2009) mAbs 1, 26-28). Em particular, os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos tal como aqui descritos consistem em uma única cadeia polipeptídica e não são modificados pós-tradução. Mais particularmente, os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos tais como os descritos são derivados a partir de um sistema imune inato ou adaptativo, de preferência a partir de uma proteína de um sistema imune inato ou adaptativo. Ainda mais particularmente, os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos, como aqui divulgados são derivados de uma imunoglobulina. Mais particularmente, os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos aqui divulgados compreendem 4 regiões estruturais e 3 regiões determinantes de complementaridade, ou qualquer fragmento adequado (o qual, então, irão geralmente conter, pelo menos, alguns dos resíduos de aminoácidos que formam pelo menos uma das regiões determinantes de complementaridade). Em particular, os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos, como aqui divulgados são fáceis de produzir com elevado rendimento, preferivelmente em um sistema de expressão microbiano recombinante, e conveniente para isolar e/ou purificar posteriormente. Particularmente, os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos, como aqui divulgados são selecionados a partir do grupo que consiste em DARPins, knotinas, alfacorpos e VHH's. Mais particularmente, os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos, como aqui divulgados são selecionados a partir do grupo que consiste em Alfacorpos e VHH's. Mais particularmente, os polipeptídeos ou sequências de aminoácidos, como aqui divulgado são VHH's.

[0273] Em particular, o pelo menos um polipeptídeo compreendido nas composições aqui descritas é composto por uma única cadeia polipeptídica e não é modificado após tradução. Mais particularmente, o pelo menos um polipeptídeo compreendido nas composições aqui descritas é derivado a partir de um sistema imune inato ou adaptativo, de preferência a partir de uma proteína de um sistema imune inato ou adaptativo. Ainda mais particularmente, o pelo menos um polipeptídeo compreendido nas composições aqui divulgadas, tal como aqui divulgados são derivados de uma imunoglobulina. Mais particularmente, o, pelo menos um polipeptídeo compreendido nas composições aqui descritas compreendem 4 regiões estruturais e 3 regiões determinantes de complementaridade, ou qualquer seu fragmento adequado (os quais então, irão geralmente conter, pelo menos, alguns dos resíduos de aminoácidos que formam pelo menos uma das regiões determinantes de complementaridade). Em particular, o pelo menos um polipeptídeo compreendido nas composições aqui descritas são fáceis de produzir com elevado rendimento, preferivelmente em um sistema de expressão microbiano recombinante, e conveniente para isolar e/ou purificar posteriormente.

[0274] De acordo com modalidades particulares, a invenção proporciona um certo número de extensões de resíduos de aminoácidos (isto é, pequenos peptídeos) que são particularmente adequadas para a ligação a um antígeno de pragas ou um alvo de praga, tal como, mas não limitado a um antígeno fúngico ou um alvo fúngico. Estas extensões de resíduos de aminoácidos podem estar presentes, e/ou podem ser incorporadas nos polipeptídeos como aqui divulgado, em particular, de tal modo que elas formam (parte de) o sítio de ligação ao antígeno do referido polipeptídeo. Como estas extensões de resíduos de aminoácidos foram primeiro geradas como sequências de CDR de anticorpos, tais como anticorpos de cadeia pesada, ou de sequências VH ou VHH que foram criadas contra um alvo de praga (ou podem ser baseadas e/ou derivadas de tais sequências CDR, como adicionalmente aqui descrito), elas serão também aqui referidas como "sequências de CDR" (isto é, como sequências de CDR1, CDR2 e CDR3, respectivamente). Deve, no entanto, notar-se que a invenção no seu sentido mais lato, não está limitada a um papel estrutural ou função específica que estas extensões de resíduos de aminoácidos podem ter nos polipeptídeos tal como aqui descritos, desde que estas extensões de resíduos de aminoácidos permitam que os polipeptídeos como aqui descrito se liguem especificamente a um alvo de praga. Assim, em geral, a invenção no seu sentido mais lato, refere-se a composições agroquímicas compreendendo um polipeptídeo que é capaz de se ligar a um alvo de praga e que compreende uma combinação de sequências de CDR como aqui descrito.

[0275] Assim, em particular, modalidades, mas não limitativo, os polipeptídeos como aqui divulgados podem ser polipeptídeos que compreendem pelo menos uma sequência de aminoácidos que é escolhida a partir do grupo que consiste nas sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 que são aqui descritas. Em particular, um polipeptídeo, tal como aqui descrito pode compreender, pelo menos, um sítio de ligação ao antígeno, em que o referido sítio de ligação ao antígeno compreende pelo menos uma combinação de uma sequência de CDR1, uma sequência de CDR2 e uma sequência de CDR3 que são aqui descritas.

[0276] Qualquer polipeptídeo compreendido nas composições agroquímicas como aqui descritas e tendo uma destas combinações de sequências de CDR é de preferência tal que pode especificamente se ligar (como aqui definido) a um alvo de praga ou um antígeno de pragas e mais particularmente de tal modo que se liga especificamente a um alvo de um patógeno da planta, em particular com a constante de dissociação (Kd) de 10-8 moles / litro ou menos do referido polipeptídeo em solução. A ligação específica de um polipeptídeo a um alvo de praga pode ser determinada de qualquer forma adequada conhecida per se, incluindo, por exemplo, bioprospecção, análise de Scatchard e/ou ensaios de ligação competitiva, tais como radioimunoensaios (RIA), imunoensaios enzimáticos (EIA) e ensaios de competição intercalados, e as diferentes variantes conhecidas na técnica.

[0277] Em uma modalidade preferida, o polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos, é obtido por seleção por afinidade contra uma determinada molécula-alvo de pragas e o referido polipeptídeo tem uma elevada afinidade para a referida molécula-alvo de pragas: tipicamente, a constante de dissociação da ligação entre o polipeptídeo e a sua molécula-alvo de pragas é inferior a 10-5 M, mais de preferência, a constante de dissociação é inferior a 10-6 M, ainda mais preferivelmente, a constante de dissociação é inferior a 10-7 M, mais de preferência, a constante de dissociação é inferior a 10-8 M.

[0278] Em modalidades particulares, o pelo menos um polipeptídeo compreendido nas composições aqui descritas tem um valor de concentração inibitória mínimo (MIC) para o referido fungo patogênico de planta de 1.0 μg/mL ou menos do referido domínio variável em solução. Também aqui divulgados são polipeptídeos de entre 80 e 200 aminoácidos ou uma subfaixa tal como aqui descrita antes, obtidos por seleção de afinidade a um alvo de praga de planta específico, que é capaz de inibir o crescimento e/ou a atividade de uma praga agrícola em uma concentração inibitória mínima de cerca de 0,00001 a 1 μM. Em modalidades específicas das concentrações inibitórias mínimas estão compreendidas entre 0,0001 a 1 μM, entre 0,001 a 1 μM, entre 0,01 a 1 μM, entre 0,1 a 1 μM, entre 0,0001 a 1 μM, entre 0,001 a 0,1 μM, entre 0,01 a 0,1 μM, entre, 00001 a 0,01 μM, entre 0,0001 a 0,01 μM, entre 0,001 a 0,01 μM. A concentração inibitória mínima ou o valor MIC é a concentração mais baixa de um agente tal como um polipeptídeo que inibe o crescimento visível da cultura ou pragas de planta após incubação. Por exemplo, a concentração de fungicida mínima (CFM) é considerada como a menor concentração de polipeptídeo que impede o crescimento e reduz o inóculo fúngico em 99,90% em 24 h. MFCs (Concentrações fúngicas mínimas) podem ser determinadas em placas de ágar, mas podem também ser convenientemente determinadas em fluidos (por exemplo, em placas de micropoços), dependendo do tipo de fungo e as condições de ensaio.

[0279] De acordo com outras modalidades particulares, as composições tal como aqui descritas, pelo menos compreendem um polipeptídeo compreendendo uma ou mais das combinações escolhidas a partir do grupo compreendendo:

[0280] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 85, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 169, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 253, e/ou

[0281] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 86, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 170, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 254, e/ou

[0282] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 87, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 171, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 255, e/ou

[0283] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 88, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 172, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 256, e/ou

[0284] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 89, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 173, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 257, e/ou

[0285] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 90, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 174, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 258, e/ou

[0286] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 91, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 175, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 259, e/ou

[0287] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 92, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 176, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 260, e/ou

[0288] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 93, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 177, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 261, e/ou

[0289] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 94, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 178, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 262, e/ou

[0290] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 95, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 179, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 263, e/ou

[0291] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 96, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 180, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 264, e/ou

[0292] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 97, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 181, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 265, e/ou

[0293] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 98, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 182, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 266, e/ou

[0294] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 99, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 183, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 267, e/ou

[0295] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 100, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 184, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 268, e/ou

[0296] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 101, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 185, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 269, e/ou

[0297] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 102, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 186, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 270, e/ou

[0298] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 103, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 187, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 271, e/ou

[0299] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 104, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 188, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 272, e/ou

[0300] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 105, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 189, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 273, e/ou

[0301] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 106, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 190, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 274, e/ou

[0302] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 107, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 191, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 275, e/ou

[0303] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 108, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 192, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 276, e/ou

[0304] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 109, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 193, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 277, e/ou

[0305] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 110, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 194, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 278, e/ou

[0306] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 111, tendo uma região CDR2 tem a SEQ ID NO: 195, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 279, e/ou

[0307] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 112, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 196, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 280, e/ou

[0308] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 113, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 197, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 281, e/ou

[0309] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 114, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 198, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 282, e/ou

[0310] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 115, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 199, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 283, e/ou

[0311] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 116, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 200, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 284, e/ou

[0312] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 117, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 201, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 285, e/ou

[0313] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 118, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 202, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 286, e/ou

[0314] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 119, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 203, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 287, e/ou

[0315] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 120, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 204, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 288, e/ou

[0316] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 121, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 205, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 289, e/ou

[0317] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 122, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 206, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 290, e/ou

[0318] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 123, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 207, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 291, e/ou

[0319] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 124, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 208, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 292, e/ou

[0320] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 125, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 209, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 293, e/ou

[0321] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 126, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 210, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 294, e/ou

[0322] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 127, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 211, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 295, e/ou

[0323] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 128, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 212, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 296, e/ou

[0324] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 129, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 213, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 297, e/ou

[0325] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 130, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 214, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 298, e/ou

[0326] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 131, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 215, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 299, e/ou

[0327] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 132, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 216, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 300, e/ou

[0328] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 133, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 217, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 301, e/ou

[0329] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 134, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 218, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 302, e/ou

[0330] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 135, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 219, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 303, e/ou

[0331] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 136, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 220, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 304, e/ou

[0332] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 137, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 221, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 305, e/ou

[0333] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 138, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 222, e uma região CDR3 tendo a sequência de aminoácidos NRY, e/ou

[0334] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 139, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 223, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 306, e/ou

[0335] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 140, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 224, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 307, e/ou

[0336] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 141, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 225, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 308, e/ou

[0337] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 142, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 226, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 309, e/ou

[0338] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 143, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 227, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 310, e/ou

[0339] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 144, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 228, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 311, e/ou

[0340] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 145, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 229, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 312, e/ou

[0341] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 146, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 230, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 313, e/ou

[0342] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 147, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 231, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 314, e/ou

[0343] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 148, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 232, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 315, e/ou

[0344] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 149, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 233, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 316, e/ou

[0345] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 150, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 234, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 317, e/ou

[0346] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 151, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 235, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 318, e/ou

[0347] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 152, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 236, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 319, e/ou

[0348] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 153, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 237, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 320, e/ou

[0349] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 154, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 238, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 321, e/ou

[0350] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 155, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 239, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 322, e/ou

[0351] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 156, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 240, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 323, e/ou

[0352] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 157, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 241, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 324, e/ou

[0353] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 158, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 242, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 325, e/ou

[0354] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 159, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 243, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 326, e/ou

[0355] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 160, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 244, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 327, e/ou

[0356] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 161, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 245, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 328, e/ou

[0357] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 162, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 246, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 329, e/ou

[0358] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 163, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 247, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 330, e/ou

[0359] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 164, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 248, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 331, e/ou

[0360] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 165, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 249, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 332, e/ou

[0361] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 166, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 250, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 333, e/ou

[0362] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 167, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 251, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 334, e/ou

[0363] uma região CDR1 tendo a SEQ ID NO: 168, uma região CDR2 tendo a SEQ ID NO: 252, e uma região CDR3 tendo a SEQ ID NO: 335.

[0364] Em modalidades particulares, os polipeptídeos nas composições como aqui descritas são domínios variáveis de cadeia pesada que consistem essencialmente em quatro regiões estruturais (FR1 a FR4, respectivamente) e três regiões determinantes de complementaridade (CDR1 a CDR3, respectivamente); ou qualquer fragmento adequado de um domínio variável de cadeia pesada tal (que será, em seguida, geralmente contêm, pelo menos, alguns dos resíduos de aminoácidos que formam pelo menos uma das CDR, como adicionalmente aqui descrito).

[0365] Os polipeptídeos como aqui divulgados podem ser em particular um anticorpo, tal como, por exemplo, um anticorpo de cadeia pesada. De acordo com outras modalidades particulares, os polipeptídeos como aqui divulgados podem ser uma sequência de domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo que é derivada de um anticorpo de quatro cadeias convencionais (tais como, sem limitação, uma sequência VH que é derivada de um anticorpo humano) ou ser uma assim chamada sequência VHH (como aqui definido) que é derivada a partir de um assim chamado "anticorpo de cadeia pesada" (como aqui definido).

[0366] Em modalidades particulares, as composições tal como aqui descritas, compreendem pelo menos uma sequência de domínio variável de cadeia pesada derivada de um anticorpo ou um seu fragmento funcional, tal como, mas não limitado a um anticorpo de cadeia pesada de camelídeo ou um seu fragmento funcional, cuja sequência de domínio variável assim, pode ser por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada de camelídeo (VHH).

[0367] No entanto, deve notar-se que a invenção não está limitada quanto à origem dos polipeptídeos compreendidos nas composições aqui descritas (ou da sequência de nucleotídeos da invenção utilizada para expressá-los), nem como à forma que os polipeptídeos ou sequências de nucleotídeos dos mesmos são (ou têm sido) gerados ou obtidos. Assim, os polipeptídeos nas composições aqui divulgadas podem ser polipeptídeos (a partir de quaisquer espécies adequadas) ou semissintéticos ou polipeptídeos sintéticos que ocorrem naturalmente. Em uma modalidade específica, mas não limitativa da invenção, o polipeptídeo é uma sequência de imunoglobulina que ocorre naturalmente (a partir de quaisquer espécies adequadas) ou uma sequência de imunoglobulina sintética ou semissintética, incluindo, mas não se limitando a sequências de imunoglobulina "camelizadas", bem como sequências de imunoglobulina que foram obtidas por meio de técnicas, tais como a maturação de afinidade (por exemplo, a partir de sequências de imunoglobulina sintéticas, aleatórias ou de ocorrência natural), enxerto de CDR, folheados, combinando fragmentos derivados de diferentes sequências de imunoglobulina, montagem por PCR utilizando iniciadores que se sobrepõem, e técnicas similares para sequências de imunoglobulina construídas bem conhecidas pelo versado na técnica; ou qualquer combinação adequada de qualquer um dos anteriores.

[0368] As sequências polipeptídicas das composições aqui descritas podem ser em particular um anticorpo de domínio (ou um domínio variável de cadeia pesada que é adequado para utilização como um anticorpo de domínio), um anticorpo de domínio único (ou de um domínio variável de cadeia pesada que é adequado para utilização como um anticorpo de domínio único), ou um "dAb" (ou um domínio variável de cadeia pesada que é adequado para uso como um dAb); outros domínios variáveis individuais, ou qualquer fragmento adequado de qualquer um destes. Para uma descrição geral de anticorpos de domínio (único), é também feita referência à técnica anterior citada acima, bem como a EP 0 368 684. Para o termo "dAb", referência é feita, por exemplo, Ward et al. (Nature 12 de outubro de 1989; 341 (6242): 544-6), a Holt et al., Trends Biotechnol de 2003, 21 (11): 484-490; bem como por exemplo, WO 06/030220, WO 06/003388 e outros pedidos de patente publicados de Domantis Ltd.

[0369] Assim, em modalidades particulares, a presente invenção proporciona polipeptídeos com a estrutura (geral) FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4

[0370] em que FR1 a FR4 referem-se a regiões de estrutura 1 a 4, respectivamente, e em que CDR1 a CDR3 referem-se a regiões determinantes de complementaridade de 1 a 3, respectivamente, e são como aqui adicionalmente definidas.

[0371] SEQ ID NOs: 1 a 84 (vide Tabela 1) dão as sequências de aminoácidos de um número de polipeptídeos que foram criados contra um alvo de praga, em particular contra glucosilceramida fúngica.

[0372] Em particular, a invenção em algumas modalidades específicas proporciona composições agroquímicas compreendendo pelo menos um polipeptídeo que é direcionado contra um alvo de praga e que tem pelo menos 80%, de preferência pelo menos 85%, tal como 90% ou 95% ou mais de identidade de sequência com pelo menos uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1 a 84 (vide Tabela 1), e sequências de ácidos nucleicos que codificam estas sequências de aminoácidos.

[0373] Algumas sequências de polipeptídeos particularmente preferidas, como aqui divulgadas são aquelas que podem ligar-se e/ou são direcionadas contra uma praga, e que têm identidade de aminoácidos de pelo menos 90% com pelo menos uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1 a 84 (vide Tabela 1), em que, para efeitos de determinação do grau de identidade de aminoácidos, os resíduos de aminoácidos que formam as sequências de CDR são desconsiderados.

[0374] Nestes polipeptídeos, as sequências de CDR (vide Tabela 2) são, em geral, como adicionalmente aqui definidas. Tabela 2: Sequências de CDR

[0375] Mais uma vez, tais polipeptídeos podem ser derivados de qualquer forma apropriada e a partir de qualquer fonte adequada, e pode, por exemplo ser de ocorrência natural sequências VHH (isto é, de uma espécie adequada de camelídeo) ou domínios variáveis de cadeiapesada sintéticos ou semissintéticos, incluindo mas não limitado a sequências de imunoglobulina "camelizados" (e em particular sequências de domínio variável de cadeia pesada camelizadas), bem como aqueles que foram obtidos por meio de técnicas, tais como a maturação de afinidade (por exemplo, a partir de sequências de imunoglobulina sintética, aleatória ou de ocorrência natural), enxerto de CDR, folheados, combinando fragmentos derivados de diferentes sequências de imunoglobulina, por PCR utilizando iniciadores que se sobrepõem a montagem, e técnicas semelhantes para engenharia de sequências de imunoglobulina bem conhecidas para o versado na técnica; ou qualquer combinação adequada de qualquer um dos anteriores, como adicionalmente aqui descrito.

[0376] Entende-se que as composições agroquímicas ou as composições de controle biológico como aqui descritas são estáveis, tanto durante o armazenamento quanto durante a utilização, o que significa que a integridade da composição agroquímica é mantida nas condições de armazenagem e/ou nas condições de utilização da composição agroquímica, que pode incluir temperaturas elevadas, ciclos de congelamento e descongelamento, alterações no pH ou na força iônica, irradiação UV, presença de produtos químicos nocivos e semelhantes. Mais preferivelmente, o polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos, e as várias subfaixas aqui descritas, permanecem estáveis na composição agroquímica, o que significa que a integridade e a atividade pesticida do polipeptídeo é mantida nas condições de armazenagem e/ou nas condições de utilização da composição agroquímico, que pode incluir temperaturas elevadas, ciclos de congelamento e descongelamento, alterações no pH ou na força iônica, irradiação UV, a presença de produtos químicos nocivos e semelhantes. Mais preferivelmente, o referido polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos, e as várias subfaixa aqui descritas, permanecem estáveis na composição agroquímica quando a composição agroquímica é armazenada à temperatura ambiente durante um período de dois anos, ou quando a composição agroquímica é armazenada a 54 °C por um período de duas semanas. De preferência, a composição agroquímica da presente invenção retém 70% da atividade, mais preferivelmente pelo menos cerca de 70% a 80% da atividade, mais preferivelmente cerca de 80% a 90% da atividade ou mais. Opcionalmente, o polipeptídeo pode ser compreendido em um veículo, tal como definido, para proteger o polipeptídeo de efeitos nocivos causados por outros componentes na composição agroquímica ou de efeitos nocivos durante o armazenamento ou durante a aplicação. Exemplos de veículos adequados incluem, mas não estão limitados a, gomas, alginatos, amido de p-ciclodextrinas, celuloses, poliureia, poliuretano, poliéster, células microbianas ou argila. A composição agroquímica pode ocorrer em qualquer tipo de formulação, formulações preferidas são os pós, pós molháveis, grânulos molháveis, grânulos dispersíveis em água, emulsões, concentrados emulsionáveis, pós, suspensões, concentrados em suspensão, suspoemulsões (misturas de suspensões e emulsões), suspensões de cápsula. As dispersões aquosas, dispersões oleosas, aerossóis, espumas, pastas, suspensões ou concentrados escoáveis. O polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos, e as várias subfaixas aqui descritas antes, pode ser a única substância ativa na composição de controle biológica ou agroquímica de acordo com a invenção; no entanto, também é possível que a composição agroquímica compreenda um ou mais agroquímicos adicionais, como definido, em adição à sequência de ácido polipeptídeo ou amino (ou pelo menos um, pelo menos, dois ou, pelo menos, três polipeptídeos ou sequências de aminoácidos como divulgado aqui). Tais produtos agroquímicos adicionais ou composições de controle biológico podem ter um efeito diferente sobre as pragas de plantas como a sequência de polipeptídeo ou aminoácido, eles podem ter um efeito sinérgico com a sequência de polipeptídeo ou aminoácidos, ou podem mesmo modificar a atividade da sequência de polipeptídeo ou aminoácido em certas plantas. Agroquímicos adicionais adequados podem ser herbicidas, inseticidas, fungicidas, nematicidas, acaricidas, bactericidas, viricidas, reguladores de crescimento de plantas, fitoprotetores e semelhantes, e incluem, mas não estão limitados a glifosato, paraquat, metolacloro, acetocloro, mesotriona, 2,4-D,atrazina, glufosinato, sulfosato, fenoxaprop, pendimetalina, picloram, trifluralin, bromoxinil, clodinafop, fluroxipir, nicosulfuron, bensulfuron, imazetapir, dicamba, imidacloprid, tiametoxam, fipronil, clorpirifós, deltametrina, lambda-cihalotrin, endosulfan, metamidofós, carbofurano, clotianidina, cipermetrina, abamectina, diflufenicão, espinosade, o indoxacarbe, bifentrina, teflutrina, azoxistrobina, tiametoxam, tebuconazol, mancozeb, ciazofamida, fluaziname, pyraclostrobin, epoxiconazole, clorotalonil, fungicidas de cobre, trifloxistrobina, protioconazol, difenoconazole, carbendazim, propiconazole, tiofanato, enxofre, agroquímicos e outros conhecidos boscalide ou qualquer combinação adequada (s) da mesma.

COMPOSIÇÕES QUE COMPREENDEM VARIANTES DE SEQUÊNCIAS DE POLIPEPTÍDEO

[0377] Em certos aspectos, os polipeptídeos compreendidos nas composições agroquímicas, tal como aqui divulgados podem ser opcionalmente ligados a um ou mais grupos, porções, ou resíduos através de um ou mais ligantes. Estes um ou mais outros grupos, porções ou resíduos podem servir para a ligação a outros alvos de interesse. Deve ficar claro que esses outros grupos, resíduos, unidades e/ou sítios de ligação podem ou não proporcionar uma funcionalidade acrescida aos polipeptídeos como aqui descrito (e/ou à composição na qual ele está presente) e podem ou não podes modificar as propriedades dos polipeptídeos como aqui descrito. Tais grupos, resíduos, porções ou unidades de ligação podem também ser por exemplo, grupos químicos que podem ser biologicamente ativos. Estes grupos, porções ou resíduos são, em modalidades particulares, ligados N- ou C-terminalmente aos polipeptídeos nas composições como aqui descrito. Em modalidades particulares, os polipeptídeos nas composições agroquímicas, tal como aqui descrito também podem ter sido quimicamente modificados. Por exemplo, uma tal modificação pode envolver a introdução ou ligação de um ou mais grupos funcionais, resíduos ou porções dentro ou à superfície do domínio variável de cadeia pesada. Estes grupos, resíduos ou porções podem conferir uma ou mais propriedades desejadas ou funcionalidades aos polipeptídeos. Exemplos de tais grupos funcionais serão evidentes para o versado na técnica. Por exemplo, a introdução ou a ligação de tais grupos funcionais de um polipeptídeo pode resultar em um aumento da solubilidade e/ou a estabilidade do polipeptídeo, em uma redução da toxicidade do polipeptídeo, ou na eliminação ou a atenuação de qualquer efeito colateral indesejável do polipeptídeo, e/ou em outras propriedades vantajosas. Em modalidades particulares, os um ou mais grupos, resíduos, unidades estão ligados ao polipeptídeo através de um ou mais ligantes ou espaçadores adequados.

[0378] De acordo com outras modalidades particulares, dois ou mais polipeptídeos específicos do alvo nas composições agroquímicas aqui divulgadas podem ser ligados uns aos outros ou podem estar interligados. Em modalidades particulares, os dois ou mais polipeptídeos estão ligados entre si através de um ou mais ligantes ou espaçadores adequados. Os espaçadores ou ligantes adequados para utilização no acoplamento de diferentes polipeptídeos pesados divulgados no presente documento como será evidente para o versado na técnica e podem, geralmente, ser qualquer ligante ou espaçador usados na técnica para ligar peptídeos e/ou proteínas. Alguns ligantes ou espaçadores particularmente adequados incluem, por exemplo, mas não estão limitados a, ligantes polipeptídicos, tais como ligantes de glicina, ligantes de serina, ligantes de serina / glicina misto, ligantes de rico em glicina e serina ou ligantes compostos por fragmentos de polipeptídeo em grande parte polar ou compostos de reticulação heterobifuncionais homo ou hetero-bifuncionais, tais como glutaraldeído ou, maleimidas ou ésteres de NHS opcionalmente PEG espaçadas. Por exemplo, um polipeptídeo ligante ou espaçador pode ser uma sequência de aminoácidos adequada tendo um comprimento entre 1 e 50 aminoácidos, tal como entre 1 e 30, e em particular entre 1 e 10 resíduos de aminoácidos. Deve ficar claro que o comprimento, o grau de flexibilidade e/ou outras propriedades do ligante (s) podem ter alguma influência sobre as propriedades dos polipeptídeos, incluindo, mas não se limitando à afinidade, a especificidade e avidez para o alvo de pragas. Deve ficar claro que, quando dois ou mais ligantes são usados, estes ligantes podem ser os mesmos ou diferentes. No contexto e na divulgação da presente invenção, o versado na técnica será capaz de determinar os ligantes ideais para efeitos de acoplamento de domínios variáveis de cadeia pesada como aqui descrito sem qualquer encargo indevido experimental.

COMPOSIÇÕES QUE COMPREENDEM FRAGMENTOS DE SEQUÊNCIAS DE POLIPEPTÍDEO

[0379] A presente invenção também engloba partes, fragmentos, análogos, mutantes, variantes e/ou derivados dos polipeptídeos compreendidos nas composições tal como aqui divulgado e/ou polipeptídeos compreendendo ou consistindo essencialmente em um ou mais de tais partes, fragmentos, análogos, mutantes, variantes e/ou derivados, desde que estas partes, fragmentos, análogos, mutantes, variantes e/ou derivados seja adequadas para os fins aqui previstos. Tais partes, fragmentos, análogos, mutantes, variantes e/ou derivados de acordo com a invenção são ainda capazes de se ligar especificamente ao alvo de pragas.

ALVO

[0380] Em modalidades particulares, os polipeptídeos compreendidos nas composições aqui descritas são obtidos por seleção de afinidade contra um alvo de praga particular. A obtenção de polipeptídeos adequados, por seleção por afinidade contra um alvo de praga particular pode por exemplo, ser realizada por seleção de um conjunto, coleção ou biblioteca de células que expressam polipeptídeos na sua superfície (por exemplo, bacteriófagos) para ligação contra uma molécula-alvo de pragas, cuja molécula é conhecida na técnica como sendo um alvo para um pesticida; todos os quais podem ser realizados de um modo conhecido per se, compreendendo essencialmente as seguintes etapas não limitativas: a) obtenção de uma solução ou suspensão isolada de uma molécula-alvo de pragas, cuja molécula é conhecida por ser um alvo para um pesticida; b) bio-separação de fagos ou outras células de uma biblioteca de polipeptídeo contra a referida molécula-alvo; c) isolamento dos fagos ou outras células que se ligam à molécula-alvo; d) determinação da sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo a partir de inserção de fagos de ligação individuais ou outras células; e) produção de uma quantidade de polipeptídeo de acordo com esta sequência com a expressão da proteína recombinante e f) determinação da afinidade do referido polipeptídeo para o referido alvo de pragas e, opcionalmente, g) teste da atividade pesticida do referido polipeptídeo em um bio-ensaio para as referidas pragas. Vários métodos podem ser utilizados para determinar a afinidade entre o polipeptídeo e a molécula-alvo de pragas, incluindo, por exemplo, ensaios de imunossorvente ligado à enzima (ELISA) ou ensaios de Ressonância de Plasmon de Superfície (SPR), que são prática comum na técnica, por exemplo, quanto descrito em Sambrook et al. (2001), Molecular Cloning, A Laboratory Manual. Terceira edição. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. A constante de dissociação é geralmente usada para descrever a afinidade entre um polipeptídeo e a sua molécula-alvo de pragas. Tipicamente, a constante de dissociação da ligação entre o polipeptídeo e a sua molécula-alvo de pragas é inferior a 10-5 M, mais de preferência, a constante de dissociação é inferior a 10-6 M, ainda mais preferivelmente, a constante de dissociação é inferior a 10-7 M, com maior preferência, a constante de dissociação é inferior a 10-8 M.

[0381] Moléculas-alvo de pragas, tal como aqui divulgadas são moléculas que ocorrem dentro ou em organismos de pragas e que, quando ligadas e/ou inibidas, matam ou param, inibem ou reduzem o crescimento ou a atividade pesticida do referido organismo de praga. Tais moléculas-alvo adequadas são prontamente disponíveis a partir de bancos de dados da literatura ou patentes existentes para o versado na técnica e incluem, sem limitação proteínas de parasitismo segregado tal como 16D10 como moléculas-alvo de pragas adequadas para os nemátodos do nó raiz (Huang et al (2006) PNAS 103: 14.302-14306), a bomba de prótons V-ATPase como molécula-alvo de pragas adequada para coleópteros, hemíptero, espécies de insetos dípteros e nematoides (Knight AJ e Behm CA (2011) Ex. Parasitol. 19 de setembro), o PLS1 de tetraspanina como molécula-alvo de pragas fúngicas adequada para B. cinerea e M. grisea (Gourgues et al. (2002) Biochem. Biophys. Res. Commun. 297: 1197) ou o próton-bombeamento-ATPase como alvo antifúngico (Manavathu EK et al. (1999) Antimicrob Agents and Chemotherapy, Dez p. 2950). Entende-se que as moléculas-alvo de pragas preferidas são acessíveis no espaço extracelular (por oposição aos alvos intracelulares de pragas).

[0382] Mais particularmente, um alvo de praga ao qual o pelo menos um polipeptídeo das composições agroquímicas como aqui divulgadas se liga, pode ser um componente da membrana plasmática de uma praga. Um componente da membrana plasmática de uma praga, tal como aqui utilizado pode ser qualquer componente compreendido em ou fazendo parte do (ou seja, pelo menos, uma parte do qual está associada com, presente em, ligado a ou conectado a) à bicamada fosfolipídica da membrana plasmática ou qualquer uma dos proteínas embutidas nela de uma célula da praga. Em modalidades particulares, um componente da membrana plasmática de uma praga pode ser um fosfolipídio, uma glicoproteína, um carboidrato ou colesterol. Em modalidades particulares, o componente de membrana plasmática de uma praga à qual o pelo menos um polipeptídeo nas composições aqui descritas se liga especificamente não é uma proteína. Assim, em modalidades particulares, o componente de membrana plasmática de uma praga à qual o pelo menos um polipeptídeo nas composições aqui descritas se liga especificamente é um lipídio, tal como, por exemplo, um fosfolipídio, um carboidrato ou colesterol.

[0383] De acordo com outras modalidades particulares, o componente de membrana plasmática de uma praga à qual o pelo menos um polipeptídeo nas composições aqui descritas se liga especificamente é um esfingolipídio. Os esfingolipídios constituem um grupo distinto de lipídios da membrana, caracterizado por uma cadeia longa (monossaturado), estrutura de amina di-hidróxi (esfingosina). Os esfingolipídios são componentes essenciais da membrana plasmática das células, onde eles são normalmente encontrados no folheto exterior. Eles são constituintes da membrana de alguns grupos de bactérias, em particular as anaeróbias. Esses grupos incluem Bacteroides, Prevotella, Porphyromonas, Fusobacterium, Sphingomonas, Sphingobacterium, Bdellovibrio, Cystobacter, Mycoplasma, Flectobacillus e, possivelmente, Acetobacter. Fungos em que foram encontrados esfingolipídios compreendem Saccharomyces, Candida, Histoplasma, Phytophthora, Cryptococcus, Aspergillus, Neurospora, Schizosaccharomyces, Fusicoccum, Shizophyllum, Amanita, Hansenula, Lactarius, Lentinus, Penicillium, Clitocybe, Paracoccidioides, Agaricus, Sporothrix, e patógenos de plantas oomicetos. O bloco de construção básico dos esfingolipídios fúngicos é esfinganina, que pode ser convertido, quer para a ceramida e, finalmente, para mono-hexosídeos de ceramida (CMH cerebrósidos) ou para fitoceramida e, finalmente, a ceramida dihexosides (CCD) ou para glicoinositol fosforilceramidas (GIPCs). Exemplos de esfigolipídio contra o qual a pelo menos um domínios de cadeia pesada de anticorpo variável das composições como aqui descritas são direcionadas incluem, por exemplo, 9-metil-4,8-esfingadienina, glicosilceramidas, glucosilceramida, monoglucosilceramidas, oligoglucosilceramidas, gangliósidos, sulfatidos, ceramidas, esfingosina-1-fosfato, ceramida-1- fosfato, galactosilceramida, inositol-fosforilceramida (IPC), manosil- inositol- fosforilceramida (MIPC), galactosil-inositol- fosforilceramida, manosil- (inositol-fosforil)2 -ceramida (M(IP)2C), fosforilceramida dimanosil-inositol- (M2IPC), galactosil-di-inositol-dimanosil- fosforilceramida (GalM2IPC), manosil-di-inositol-difosforilceramida, di- inositol-difosforilceramida, trigalactosil-glicosilceramida.

[0384] Exemplos não limitantes de esfingolipídios contra o qual o pelo menos um polipeptídeo das composições como aqui descritas são direcionados incluem, por exemplo, glicosilceramidas não limitativos, glucosilceramida, esfingomielina, monoglicosilceramidas, oligoglicosilceramidas, gangliósidos, sulfatidos, ceramidas, esfingosina- 1-fosfato e ceramida-1-fosfato.

[0385] Em certas modalidades particulares, o alvo ao qual os polipeptídeos das composições agroquímicas da presente invenção se ligam não é um componente da parede celular. Em certas modalidades específicas, o alvo ao qual os polipeptídeos das composições agroquímicas da presente invenção se ligam não é quitina.

[0386] Em uma modalidade preferida, a praga (s) de planta que é / são combatidas pela composição agroquímica ou composição de controle biológica, tal como aqui descrito é um fungo, tal como um fungo patogênico de plantas, tal como definido antes. Os fungos podem ser muito prejudiciais para as plantas e podem causar perdas substanciais nas culturas de colheita. Fungos patogênicos de plantas incluem fungos necrotróficos e fungos biotróficos, e incluem ascomicetis, basidiommicetos e oommicetos. Exemplos de fungos patogênicos de plantas são conhecidos na técnica e incluem, mas não estão limitados a, aqueles selecionados a partir do grupo consistindo dos gêneros: Alternaria; Ascochyta; Botrytis; Cercospora; Colletotrichum; Diplodia; Erysiphe; Fusarium; Leptosphaeria; Gaeumanomyces; Helminthosporium; Macrophomina; Nectria; Peronospora; Phoma; Phymatotrichum; Phytophthora; Plasmopara; Podosphaera; Puccinia; Puthium; Pyrenophora; Pyricularia; Pythium;Rhizoctonia; Scerotium; Sclerotinia; Septoria; Thielaviopsis; Uncinula; Venturia; e Verticillium. Exemplos específicos de infecções fúngicas de plantas que podem ser combatidas com as composições agroquímicas da presente invenção incluem, Erysiphe graminis em cereais, Erysiphe cichoracearum e Sphaerotheca fuliginea em cucurbitáceas, Podosphaera leucotricha em maçãs, Uncinula necator em videiras, Puccinia sp. Em cereais, Rhizoctonia sp. em algodão, batata, arroz e relvados, Ustilago sp. em cereais e cana de açúcar, Venturia inaequalis (sRNAa) em maçãs, Helmintosporiose sp. em cereais, Septoria nodorum em trigo, Septoria tritici em trigo, Rhynchosporium secalis em cevada, Botrytis cinerea (podridão cinzenta) em morangos, tomates e uvas, Cercospora arachidicola em amendoins, Peronospora tabacina no tabaco, ou outra Peronospora em várias culturas, Pseudocercosporella herpotrichoides em trigo e cevada, Pyrenophera teres em cevada, Pyricularia oryzae em arroz, Phytophthora infestans em batatas e tomates, Fusarium sp. (tal como Fusarium oxysporum) e Verticillium sp. em várias plantas, Plasmopara vitícola nas uvas, Alternaria sp. em frutas e legumes, Pseudoperonospora cubensis em pepinos, Mycosphaerella fijiensis em bananas, Ascochyta sp. em grão de bico, Leptosphaeria sp. em canola, e Colleotrichum sp. em várias culturas. As composições de acordo com a invenção são ativas contra espécies normalmente sensíveis e resistentes e contra todas ou algumas fases do ciclo de vida da planta, fungo patogênico.

[0387] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como aqui divulgadas são direcionadas contra um fungo patogênico de planta do gênero escolhida de entre o grupo que compreende Alternaria, Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia, Erysiphe, Fusarium, Leptosphaeria, Gaeumanomyces, Helminthosporium, Macrophomina, Nectria, Penicillium, Peronospora, Phoma, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara, Podosphaera, Puccinia, Pyrenophora, Pyricularia, Pythium, Rhizoctonia, Scerotium, Sclerotinia, Septoria, Thielaviopsis, Uncinula, Venturia, Verticillium, Magnaporthe, Blumeria, Mycosphaerella, Ustilago, Melampsora, Phakospora, Monilinia, Mucor, Rhizopus, e Aspergillus.

[0388] Em certas modalidades particulares, as composições tal como aqui descritas, pelo menos compreendem um polipeptídeo, o qual se liga especificamente a um alvo de um fungo da espécie fúngica Botrytis, Fusarium ou Penicillium, tal como um componente da membrana plasmática de um fungo, em particular um esfingolipídio de um fungo. De acordo com outras modalidades particulares, o esfingolipídio fúngico é uma ceramida, tal como, em particular, glicosilceramida.

[0389] Em modalidades particulares, a presente invenção proporciona composições agroquímicas que compreendem os polipeptídeos que são especificamente direcionados contra um componente molecular estrutural da membrana celular plasmática de uma praga.

[0390] Em modalidades particulares, a presente invenção proporciona composições agroquímicas que compreendem os polipeptídeos que são especificamente direcionados contra um componente molecular estrutural da membrana celular plasmática de uma praga, que não é uma proteína. De fato, em certas modalidades, os inventores foram surpreendentemente bem-sucedidos em identificar tais polipeptídeos, enquanto que é geralmente descrito na técnica que é (tecnicamente) difícil gerar proteínas ou sequências de aminoácidos que têm uma interação única e específica com estruturas moleculares não proteicas. Com base no presente ensinamento, exemplos não limitativo adicionais de moléculas-alvo de pragas fúngicas adequadas podem ser providos por um versado na técnica e compreendem, por exemplo, quitina sintase, β-1,3-glucano sintase, succinato desidrogenase, glicosilceramidas fúngicas, ou tetraspanina PLS1.

[0391] Ainda em outra modalidade uma determinada praga de planta são bactérias patogênicas de plantas, incluindo, mas não se limitando a, Acidovorax avenae subesp. Avenae (causando listra marrom bacteriana do arroz), Acidovorax avenae subsp. cattleyae (causando mancha marrom bacteriana do cattleya), Acidovorax konjaci Konnyaku (causando mancha foliar bacteriana), rhizogenes (causando raiz peluda do melão), Agrobacterium (causando coroa biliar), Burkholderia andropogonis (causando mancha bacteriana do cravo), Burkholderia caryophylli (causando murcha bacteriana do cravo), Burkholderia cepacia (causando mancha marrom bacteriana do cymbidium), Burkholderia gladioli pv. gladíolos (causando podridão gargalo do tipo de flor), Burkholderia glumae (causando podridão bacteriana grão de arroz), Burkholderia plantarii (causando ferrugem bacteriana mudas de arroz), Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (causando câncer bacteriano de tomate), Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (causando podridão anelar da batata), Clostridium spp. (causando podridão viscosa de batata), flaccumfaciens bactéria curta (causando câncer bacteriano da cebola), Erwinia amylovora (causando fogo bacteriano de pêra), Erwinia ananás (causando escurecimento bacteriano de palea de arroz), Erwinia carotovora subsp. atroseptica (causando perna preta de batata), Erwinia carotovora subsp. carotovora (causando podridão mole bacteriana de legumes), Erwinia chrysanthemi (causando ferrugem bacteriana de mudas de inhame), Erwinia chrysanthemi pv. zeae (causando podridão bacteriana pé de arroz), Erwinia herbicola pv. millettiae (causando fel bacteriano de glicínias), Pseudomonas cichorii (causando mancha bacteriana do crisântemo), Pseudomonas corrugate Pith (causando necrose de tomate), Pseudomonas fuscovaginae (causando podridão parda do arroz), Pseudomonas marginalis pv. marginalis (causando podridão mole de repolho) rubrisubalbicans Pseudomonas (causando listra manchado de cana de açúcar), Pseudomonas syringae pv. aptata (causando crestamento bacteriano de açúcar de beterraba), Pseudomonas syringae pv. atropurpurea (causando auréola da praga de azevém), Pseudomonas syringae pv. castaneae (causando câncer bacteriano de castanha), Pseudomonas syringae pv. glycinea (causando crestamento bacteriano de soja), Pseudomonas syringae pv. lachrymans (causando mancha bacteriana do pepino), Pseudomonas syringae pv. maculicola (causando mancha preta bacteriana de repolho), Pseudomonas syringae pv. mori (causando crestamento bacteriano de amoreira), Pseudomonas syringae pv. morsprunorum (causando câncer bacteriano de ameixas), Pseudomonas syringae pv. oryzae (causando auréola praga do arroz), Pseudomonas syringae pv. phaseolicola (causando auréola praga de feijão), Pseudomonas syringae pv. pisi (causando crestamento bacteriano de ervilha), Pseudomonas syringae pv. gergelim (causando mancha bacteriana de gergelim), Pseudomonas syringae pv. striafaciens (causando listra bacteriana praga de aveia), Pseudomonas syringae pv. syringae (causando mancha marrom bacteriana da pequena pérola vermelho), Pseudomonas syringae pv. tabaci (causando fogo selvagem de tabaco), Pseudomonas syringae pv.theae (causando bacteriana praga tiro de chá), Pseudomonas syringae pv. tomate (causando mancha bacteriana do tomateiro), Pseudomonas viridiflava (causando mancha marrom bacteriana de feijão), Ralstonia solanacearum (causando murcha bacteriana), Rathayibacter rathayi (causando giberela bacteriana de orchardgrass), sRNAa Streptomyces (causando sRNAa comum de batata) , Streptomyces ipomoea (causando podridão solo de batata doce), Xanthomonas albilineans (causando faixa branca de cana de açúcar), Xanthomonas campestris pv. cerealis (causando raia bacteriana de centeio), Xanthomonas campestris pv. campestris (causando podridão negra), Xanthomonas campestris pv. citri (causando câncer de citrus), Xanthomonas campestris pv. cucurbitae (causando mancha marrom bacteriana do pepino), Xanthomonas campestris pv. glycines (causando pastule bacteriana de soja), Xanthomonas campestris pv. incanae (causando podridão negra de estoque), Xanthomonas campestris pv. (causando mancha angular de malvacearum algodão), Xanthomonas campestris pv.(causando câncer bacteriano da manga), mangiferaeindicae Xanthomonas campestris pv. mellea (Wisconsin causando mancha bacteriana do tabaco), Xanthomonas campestris pv. (causando mancha bacteriana em grande bardana nigromaculans), Xanthomonas campestris pv. phaseoli (causando pastule bacteriana de feijão), Xanthomonas campestris pv. pisi (causando bacteriana caule-rot de feijão), Xanthomonas campestris pv. pruni (causando furo de tiro bacteriana de pêssego), Xanthomonas campestris pv. raphani (causando mancha bacteriana do rabanete japonês), Xanthomonas campestris pv. ricini (causando mancha bacteriana de mamona), Xanthomonas campestris pv. theicola (causando câncer de chá), Xanthomonas campestris pv. translucens (causando crestamento bacteriano de orchardgrass), Xanthomonas campestris pv. vesicatoria (causando mancha bacteriana do tomateiro), Xanthomonas oryzae pv. oryzae (causando mancha foliar bacteriana de arroz).

[0392] Em ainda outra modalidade as formulações agroquímicas da presente invenção também podem ser utilizadas para combater pragas de plantas tais como insetos, aracnídeos, helmintos, vírus, nemátodos e moluscos encontrados na agricultura, em horticultura, em florestas, jardins e em equipamentos de lazer. As composições de acordo com a invenção são ativas contra espécies normalmente sensíveis e resistentes e contra todas ou algumas fases de desenvolvimento. Estas pragas de plantas incluem: pragas do Filo: Arthropoda, em especial da classe dos aracnídeos, por exemplo, Acarus spp, Aceria sheldoni, Aculops spp, Aculus spp, Amblyomma spp, Amphitetranychus Viennensis, Argas spp, Boophilus spp., Brevipalpus spp., Bryobia praetiosa, Centruroides spp., Chorioptes spp., Dermanyssus gallinae, Dermatophagoides pteronyssius, Dermatophagoides farinae, Dermacentor spp., Eotetranychus spp., Epitrimerus pyri, Eutetranychus spp., Eriophyes spp., Halotydeus destructor, Hemitarsonemus spp., Hyalomma spp., Ixodes spp., Latrodectus spp., Loxosceles spp., Metatetranychus spp., Nuphersa spp., Oligonychus spp., Ornithodorus spp., Ornithonyssus spp., Panonychus spp., Phyllocoptruta oleivora, Polyphagotarsonemus latus, Psoroptes spp., Rhipicephalus spp., Rhizoglyphus spp., Sarcoptes spp., Escorpião maurus, Stenotarsonemus spp., Tarsonemus spp., Tetranychus spp., Vaejovis spp., Vasates lycopersici. Ainda outros exemplos são da ordem da Anoplura (Phthiraptera), por exemplo, Damalinia spp., Haematopinus spp., Linognathus spp., Pediculus spp., Ptirus púbis, Trichodectes spp. Ainda outros exemplos são da ordem dos Chilopoda, por exemplo, Geophilus spp., Scutigera spp. Ainda outros exemplos são da ordem da Coleoptera, por exemplo, Acalymma vittatum, Acanthoscelides obtectus, Adoretus spp., Agelastica alni, Agriotes spp., Alphitobius diaperinus, solstitialis Amphimallon, Anobium punctatum, Anoplophora spp., Anthonomus spp., Anthrenus spp ., Apion spp., Apogonia spp., Atomaria spp., Attagenus spp., Bruchidius obtectus, Bruchus spp., Cassida spp., Cerotoma trifurcata, Ceutorrhynchus spp., Chaetocnema spp., Cleonus mendicus, Conoderus spp., Cosmopolites spp., Costelytra zealandica, Ctenicera spp., Curculio spp., Cryptorhynchus lapathi, Cylindrocopturus spp., Dermestes spp., Diabrotica spp., Dichocrocis spp., Diloboderus spp., Epilachna spp., Epitrix spp., Faustinus spp., Psylloides Gibbium, undalis hellula, Heteronychus Arator, Heteronyx spp., Elegans Hylamorpha, Hylotrupes Hylotrupes, Hypera Postica, Hypothenemus spp., Lachnosterna consanguinea, Lema spp., Leptinotarsa decemlineata, Leucoptera spp., Lissorhoptrus oryzophilus, Lixus spp., Luperodes spp., Lyctus spp., Megascelis spp., melanotus spp., Meligethes aeneus, Melolontha spp., Migdolus spp., Monochamus spp., Naupactus xanthographus , Niptus hololeucus, Oryctes rinoceronte, Oryzaephilus surinamensis, Oryzaphagus oryzae, Otiorrhynchus spp., Oxycetonia jucunda, Phaedon cochleariae, Phyllophaga spp., Phyllotreta spp., Popillia japonica, Premnotrypes spp., Prostephanus truncatus, Psylliodes spp., Ptinus spp., Rhizobius ventralis, Rhizopertha dominica, Sitophilus spp., Sphenophorus spp., Stegobium paniceum, Sternechus spp., Symphyletes spp., Tanymecus spp., Tenebrio molitor, Tribolium spp., Trogoderma spp., Tychius spp., Xylotrechus spp., Zabrus spp. Ainda outros exemplos são da ordem dos Collembola, por exemplo, Onychiurus armatus. Ainda outros exemplos são da ordem dos Diplopoda, por exemplo, Blaniulus guttulatus. Ainda outros exemplos são da ordem da Diptera, por exemplo, Aedes spp., Agromyza spp., Anastrepha spp., Anopheles spp., Asphondylia spp., Bactrocera spp., Bibio hortulanus, Calliphora erythrocephala, Ceratitis capitata, Chironomus spp. , Chrysomyia spp., Chrysops spp., Cochliomyia spp., Contarinia spp., Cordylobia anthropophaga, Culex spp., Culicoides spp., Culiseta spp., Cuterebra spp., Dacus oleae, Dasyneura spp., Delia spp., Dermatobia hominis, Drosophila spp., Echinocnemus spp., Fannia spp., Gasterophilus spp., Glossina spp., Haematopota spp., Hydrellia spp., Hylemyia spp., Hyppobosca spp., Hypoderma spp., Liriomyza spp., Lucilia spp., Lutzomia spp ., Mansonia spp., Musca spp., Nezara spp., Oestrus spp., Oscinella frit, Pegomyia spp., Phlebotomus spp., Phorbia spp., Phormia spp., Prodiplosis spp., Psila rosae, Rhagoletis spp., Sarcophaga spp ., Simulium spp., Stomoxys spp., Tabanus spp., Tannia spp., Tetanops spp., Tipula sp p.Ainda outros exemplos são da ordem dos Heteroptera, por exemplo, Anasa tristis, Antestiopsis spp., Boisea spp., Blissus spp., Calocoris spp., Campylomma livida, Cavelerius spp., Cimex spp., Collaria spp., Creontiades dilutus , Dasynus piperis, Dichelops furcatus, Diconocoris hewetti, Dysdercus spp., Euschistus spp., Eurygaster spp., Heliopeltis spp., Horcias Leptocorisa spp., Leptoglossus phyllopus, Lygus spp., Macropes excavatus, Miridae, Monalonion atratum, Nezara spp ., Oebalus spp., Pentomidae, Piesma quadrata, Piezodorus spp., Psallus spp., Pseudacysta persea, Rhodnius spp., Sahlbergella singularis, Scaptocoris castanea, Scotinophora spp., Stephanitis nashi, Tibraca spp., Triatoma spp. Ainda outros exemplos são da ordem da Homoptera, por exemplo, Acyrthosipon spp., Acrogonia spp., Aeneolamia spp., Agonoscena spp., Aleurodes spp., Aleurolobus barodensis, Aleurothrixus spp., Amrasca spp., Anuraphis cardui, Aonidiella spp ., pin Aphanostigma, Aphis spp., Arboridia apicalis, Aspidiella spp., Aspidiotus spp., Atanus spp., Aulacorthum solani, Bemisia spp., Brachycaudus helichrysii, Brachycolus spp., Brevicoryne brassicae, Calligypona marginata, CRNAeocephala fulgida, Ceratovacuna lanigera, Cercopidae, Ceroplastes spp., Chaetosiphon fragaefolii, Chionaspis tegalensis, Chlorita onukii, Chromaphis juglandicola, Chrysomphalus ficus, Cicadulina Mbila, Coccomytilus halli, Coccus spp., ribis Cryptomyzus, Dalbulus spp., Dialeurodes spp., Diaphorina spp., Diaspis spp., Drosicha spp., Dysaphis spp., Dysmicoccus spp., Empoasca spp., Eriosoma spp., Erythroneura spp., Euscelis bilobatus, Ferrisia spp., Geococcus coffeae, Hieroglyphus spp., Homalodisca coagulata, arundinis Hyalopterus, lcerya spp., Idiocerus spp ., Idioscopus spp., Laodelphax striatellus, Lecanium spp., Lepidosaphes spp., Lipaphis erysimi, Macrosiphum spp., Mahanarva spp., Melanaphis sacchari, Metcalfiella spp., Metopolophium dirhodum, Monellia costalis, pecanis Monelliopsis, Myzus spp., Nasonovia ribisnigri , Nephotettix spp., Nilaparvata lugens, Oncometopia spp., Orthezia praelonga, Parabemisia myricae, Paratrioza spp., Parlatoria spp., Pemphigus spp., Peregrinus maidis, Phenacoccus spp., Phloeomyzus passerinii, Phorodon humuli, Phylloxera spp., Pinnaspis aspidistrae, Planococcus spp., pyriformis Protopulvinaria, Pseudaulacaspis pentagona, Pseudococcus spp., Psylla spp., Pteromalus spp., Pyrilla spp., Quadraspidiotus spp., Quesada gigas, Rastrococcus spp., Rhopalosiphum spp., Saissetia spp., Scaphoides TITANUS, Schizaphis graminum , Selenaspidus articulatus, Sogata spp., Sogatella furcifera, Sogatodes spp., Stictocephala festina, Tenalaphara malayensis, Tinocallis caryaefoliae, Tomaspis spp., Toxoptera spp., Trialeurodes spp., Trioza spp., Typhlocyba spp., Unaspis spp., Viteus vitifolii , Zygina spp. Ainda outros exemplos são da ordem dos Hymenoptera, por exemplo, Acromyrmex spp., Athalia spp., Atta spp., Diprion spp., Hoplocampa spp., Lasius spp., Monomorium pharaonis, Solenopsis invicta, Tapinoma spp., Vespa spp. Ainda outros exemplos são da ordem do Isopoda, por exemplo, Armadillidium vulgare, Oniscus Asellus, Porcellio scaber. Ainda outros exemplos são da ordem da Isoptera, por exemplo, Coptotermes spp., Cornitermes cumulans, Cryptotermes spp., Incisitermes spp., Microtermes obesi, Odontotermes spp., Reticulitermes spp. Ainda outros exemplos são da ordem da Lepidoptera, por exemplo, Acronicta major, Adoxophyes spp., Leucomelas Aedia, Agrotis spp., Alabama spp., Amyelois transitella, Anarsia spp., Anticarsia spp., Argyroploce spp., Barathra brassicae, Borbo cinnara, Bucculatrix thurberiella, Bupalus piniarius, busseola spp., Cacoecia spp., Caloptilia theivora, Capua reticulana, Carpocapsa pomonella, Carposina niponensis, Chematobia brumata, Chilo spp., Choristoneura spp., Clysia ambiguella, Cnaphalocerus spp., Cnephasia spp. , Conopomorpha spp., Conotrachelus spp., Copitarsia spp., Cydia spp., noctuides Dalaca, Diaphania spp., Diatraea saccharalis, Earias spp., Ecdytolopha aurantium, Elasmopalpus lignosellus, Eldana saccharina, Ephestia spp., Epinotia spp., Epiphyas postvittana , Etiella spp., Eulia spp., Eupoecilia ambiguella, Euproctis spp., Euxoa spp., Feltia spp., Galleria mellonella, Gracillaria spp., Grapholitha spp., Hedylepta spp., Helicoverpa spp., Heliothis spp., Hofmannophila pseudospretella, Homoeosoma spp., Homona spp., Hyponomeuta padella, Kakivoria flavofasciata, Laphygma spp., Laspeyresia molesta, orbonalis Leucinodes, Leucoptera spp., Lithocolletis spp., antennata Lithophane, Lobesia spp., Loxagrotis albicosta, Lymantria spp., Lyonetia spp., Malacosoma neustria, Maruca testulalis, Mamestra brassicae, Mocis spp., Mythimna separata, nymphula spp., Oiketicus spp., Oria spp., orthaga spp., Ostrinia spp., Oulema oryzae, Panolis flammea, PRNAara spp., Pectinophora spp., Perileucoptera spp., Phthorimaea spp., Phyllocnistis citrella, Phyllonorycter spp., Pieris spp., platynota stultana, Plodia interpunctella, Plusia spp., Plutella xylostella, Prays spp., Prodenia spp., Protoparce spp., Pseudaletia spp., Pseudoplusia includens , nubilalis Pyrausta, Rachiplusia nu, schoenobius spp., Scirpophaga spp., Scotia segetum, Sesamia spp., Sparganothis spp., Spodoptera spp., stathmopoda spp., Stomopteryx subsecivella, Synanthedon spp., Tecia solanivora, gemmatalis Thermesia, Tinea pellionella, traça-das-roupas, Tortrix spp., Trichophaga tapetzella, Trichoplusia spp., Tuta absoluta, Virachola spp. Ainda outros exemplos são da ordem dos Orthoptera, por exemplo, Acheta domesticus, orientalis Blatta, Blattella germanica, Dichroplus spp., Gryllotalpa spp., Leucophaea maderae, Locusta spp., Melanoplus spp., Periplaneta spp., Pulex irritans, Schistocerca gregaria, Supella longipalpa.

[0393] Ainda outros exemplos são da ordem dos Siphonaptera, por exemplo, Ceratophyllus spp., Ctenocephalides spp., Tunga penetrans, Xenopsylla cheopis. Ainda outros exemplos são da ordem do Symphyla, por exemplo, Scutigerella spp. Ainda outros exemplos são da ordem da Thysanoptera, por exemplo, Anaphothrips obscurus, Baliothrips biformis, Drepanothris reuteri, Enneothrips flavens, Frankliniella spp., Heliothrips spp., Femoralis Hercinothrips, Rhipiphorothrips cruentatus, Scirtothrips spp., Taeniothrips cardamoni, Thrips spp. Ainda outros exemplos são da ordem de Zygentoma o (= Thysanura), por exemplo, Lepisma saccharina, Thermobia domestica. Por exemplo, Lepisma saccharina, Thermobia domestica. Em outra modalidade pragas do filo dos Moluscos, em particular a partir da classe do Bivalvia, por exemplo, Dreissena spp. também são importantes pragas de plantas. Em outra modalidade pragas da classe dos Gastrópodes são pragas importantes da planta, por exemplo, de aniões spp., Biomphalaria spp., Bulinus spp., Deroceras spp., Galba spp., Lymnaea spp., Oncomelania spp., Pomacea spp., Succinea spp.

[0394] Em ainda outra modalidade pragas de plantas são do filo Nematoda são importantes pragas de plantas, ou seja, nematoides fitoparasitas, significando assim fitonematoides que causam danos às plantas. Fitonematoides abranger os fitonematoides e nemátodos que vivem no solo. Nemátodos parasitas de plantas incluem, mas não estão limitados a, os ectoparasitas, tais como Xiphinema spp., Longidorus spp., Trichodorus spp.; e semiparasites tais como Tylenchulus spp .;endoparasitas migratórios, tais como Pratylenchus spp., Radopholus, spp., e Scutellonerna. spp.; parasitas sedentárias como Heterodera spp., Globodera spp., e Meloidogyne spp., e endoparasitas de caule e folha, tais como Ditylenchus spp., Aphelenchoides spp., e Hirshmaniella spp. Além disso, a raiz prejudicial nematoides do solo são parasitas nematoides formadores de cisto dos gêneros Heterodera ou Globodera, e/ou nematoides de galhas do gênero Meloidogyne. Espécies nocivas desses gêneros são, por exemplo, Meloidogyne incognata, Heterodera glycines (nematoides de cisto da soja), Globodera pallida e Globodera rostochiensis (potato nematoide de cisto). Ainda outros gêneros importantes de importância como pragas de plantas compreendem Rotylenchulus spp., Paratriclodorus spp., Pratylenchus penetrans, Radolophus o estímulo, Ditylenchus dispaci, Tylenchulus semipenetrans, Xiphinema spp., Bursaphelenchus spp., E outros semelhantes, em particular, Aphelenchoides spp., Bursaphelenchus spp ., Ditylenchus spp., Globodera spp., Heterodera spp., Longidorus spp., Meloidogyne spp., Pratylenchus spp., Radopholus similis, Trichodorus spp., Tylenchulus semipenetrans, Xiphinema spp. Ainda em outra modalidade, pragas da planta são vírus e as formulações agroquímicas da presente invenção são direcionadas para o tratamento de uma infecção viral ou para inibir a infecciosidade viral numa planta, o vírus de plantas é selecionado a partir de um alfamovirus, um allexivirrus, um alphacryptovirus, um anulavirus, um apscaviroid, um aureusvirus, um avenavirus, um aysunviroid, um BDNAavirus, um begomoviroses, um benyvirus, um betacryptovirus, um betaflexiviridae, um bromovirus, um bymovirus, um Capillovirus, um carlavirus, um carmovirus, um caulimovirus, um cavemovirus, um cheravirus, uma closterovirus, um cocadviroid, um coleviroid, um Comovirus, um crinivirus, um cucumovirus, um curtovirus, um cytorhabdovirus, um dianthovirus, um enamovirus, um umbravirus & vírus de satélite tipo B, um fabavirus, um fijivirus, um furovirus, um hordeivirus, um hostuviroid, um idaeovirus, um ilarvirus, um ipomovirus, um luteovirus, um machlomovirus, um macluravirus, um Marafivirus, um Mastrevirus, um nanovirus, um necrovirus, um nepovirus, um nucleorhabdovirus, um oleavirus, um ophiovirus, um oryzavirus, um panicovirus, um pecluvirus, um petuvirus, um phytoreovirus, um Polerovirus, um pomovirus, um pospiviroid, um Potexvirus, um potyvírus, um reovirus, um rabdovírus, um rymovirus, um sadwavirus, um vírus tipo SbCMV, um sequivirus, um sobemovirus, uma Tenuivirus, um vírus de satélite tipo TNsatV, um tobamovirus, um topocuvirus, um tospovírus, um trichovirus, um tritimovirus, um Tungrovirus, um Tymovirus, um umbravirus, um Varicosavirus, um Vitivirus, ou um waikavirus.

FORMAS DE ANTÍGENO-ALVO

[0395] Será apreciado com base na descrição aqui feita que, para aplicações de controle de agroquímicos e biológicos, os polipeptídeos das composições como aqui descritas, em princípio, são direcionados contra ou se ligam especificamente a várias formas diferentes do alvo de pragas. Espera-se também que os polipeptídeos das composições como aqui descritas liguem-se a vários análogos de ocorrência natural ou sintéticos, variantes, mutantes, alelos, partes e fragmentos de pragas alvo. Mais particularmente, espera-se que os polipeptídeos das composições como aqui descritas liguem-se a, pelo menos, estes análogos, variantes, mutantes, alelos, partes e fragmentos do alvo que (ainda) contêm o sítio de ligação, uma parte ou domínio do alvo natural ao qual esses polipeptídeos se ligam.

FORMULAÇÕES

[0396] Prevê-se que o teor de polipeptídeo contido na composição de controle de agroquímicos ou biológica tal como aqui descrito pode variar dentro de uma larga gama e é geralmente até ao fabricante para modificar o faixa de concentração de um determinado polipeptídeo de acordo com a praga agrícola específica que está sendo atenuada. Em modalidades particulares, a presente invenção proporciona composições agroquímicas compreendendo pelo menos um polipeptídeo, em que o referido domínio variável de cadeia pesada está presente em uma quantidade eficaz para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da referida planta a partir de uma infecção ou outra interação biológica com a referida planta patógeno. Em uma modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 50% em peso. Em modalidades particulares, a presente invenção proporciona composições agroquímicas compreendendo pelo menos um polipeptídeo, em que a concentração do pelo menos um polipeptídeo na composição agroquímica varia de 0,001% a 50% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,001% a 50% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,01% a 50% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,1% a 50% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser desde 1% a 50% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 10% a 50% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 40% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser desde 0,001% a 40% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,01% a 40% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,1% a 40% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser desde 1% a 40% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 30% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser desde 0,001% a 30% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,01% a 30% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,1% a 30% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser desde 1% a 30% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 10% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser desde 0,001% a 10% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,01% a 10% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,1% a 10% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser desde 1% a 10% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 1% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser desde 0,001% a 1% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,01% a 1% em peso. Ainda em outra modalidade específica a concentração do polipeptídeo contido na composição agroquímica pode ser de 0,1% a 1% em peso.

[0397] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas aqui divulgadas compreendem pelo menos um polipeptídeo, que é formulado em uma solução aquosa. Em outras modalidades particulares, as composições agroquímicas aqui divulgadas compreendem pelo menos um polipeptídeo e compreendem ainda um veículo agroquimicamente adequado e/ou um ou mais adjuvantes adequados. As composições de acordo com a invenção podem compreender, além do polipeptídeo antipragas descrito acima, veículos sólidos ou líquidos que são aceitáveis no tratamento de pragas de plantas e/ou partes de plantas e/ou tensoativos que são também aceitáveis para o tratamento de praga de plantas e/ou partes de plantas. Em particular, podem-se utilizar veículos inertes e habituais e os tensoativos habituais. Estas composições cobrem não só as composições prontas para serem aplicadas às plantas e/ou partes de plantas a serem tratadas por imersão ou utilizando um dispositivo apropriado, mas também as composições concentradas comerciais que devem ser diluídas antes da aplicação às plantas e/ou partes de plantas.

[0398] Essas composições agroquímicas de acordo com a invenção podem também conter qualquer tipo de outros ingredientes tais como, por exemplo, coloides protetores, adesivos, espessantes, agentes tixotrópicos, agentes de penetração, estabilizantes, sequestrantes, agentes de texturização, agentes aromatizantes, intensificadores de sabor, acares, edulcorantes, corantes e semelhantes. Mais geralmente, as substâncias ativas, ou seja, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada, pode ser combinado com quaisquer aditivos sólidos ou líquidos que correspondem às técnicas de formulação usuais. Essas composições agroquímicas de acordo com a invenção podem também conter qualquer tipo de outro ingrediente ativo, tal como, por exemplo, outros ingredientes ativos antibacterianos ou antifúngicos.

[0399] O termo "veículo", na presente divulgação, indica uma substância orgânica ou inorgânica natural ou sintética com a qual a substância ativa antipragas é combinada para facilitar a sua aplicação às plantas e/ou um ou mais partes de planta. Este veículo é, portanto, geralmente inerte e deve ser aceitável no setor agrícola. O veículo pode ser sólido (argilas, silicatos naturais ou sintéticos, sílica, resinas, ceras, fertilizantes sólidos e semelhantes) ou líquido (água, álcoois, em especial butanol e semelhantes).

[0400] O tensoativo pode ser um agente emulsionante, um agente dispersante ou um agente molhante do tipo iônico ou não iônico ou uma mistura de tais tensoativos. Podem ser mencionados, por exemplo, sais de ácidos poliacrílicos, sais de ácidos lignossulfônico, sais de ácidos fenolssulfônico ou naftalenossulfônico, policondensados de óxido de etileno com álcoois graxos ou com ácidos graxos ou com aminas graxas, fenóis substituídos (em particular alquilfenóis ou arilfenóis), sais de ésteres de ácidos sulfossuccínico, derivados de taurina (em particular tauratos de alquila), ésteres fosfóricos de fenóis polioxietilados ou álcoois, ésteres de ácidos graxos e polióis, sulfato, sulfonato e derivados contendo grupos funcionais de fosfato dos compostos acima. A presença de pelo menos um tensoativo é geralmente essencial quando o veículo inerte não é solúvel em água e quando o agente de vetor para aplicação é a água. As composições agroquímicas como aqui divulgadas são por si só em formas bastante diversas, sólidas ou líquidas. Como formas de composições sólidas, podem ser mencionados pós polvilháveis (teor de substância ativa que pode ir até 100%) e grânulos, em particular aqueles obtidos por extrusão, por compactação, por impregnação de um suporte granulado, por granulação utilizando um pó de material de partida (o teor de substância ativa nestes grânulos compreendido entre 0,5 e 80% para estes últimos casos). Tais composições sólidas podem ser opcionalmente utilizadas na forma de um líquido viscoso que deve ser um grau maior ou menor, dependendo do tipo de aplicação desejada, por exemplo, por diluição em água. Como formas de composição líquida ou formas destinadas a constituir composições líquidas durante a aplicação, pode-se mencionar as soluções, em particular concentrados solúveis em água, emulsões, concentrados em suspensão, pós molháveis (ou pó de pulverização), óleos e ceras.

[0401] Os concentrados em suspensão, que podem ser aplicados por pulverização, são preparados de modo a obter um produto fluido estável que não formam um depósito e eles normalmente contêm de 10 a 75% de substância ativa, de 0,5 a 15% de tensoativos, de 0,1 a 10% de agentes tixotrópicos, de 0 a 10% de aditivos apropriados, tais como antiespumantes, inibidores de corrosão, estabilizadores, agentes de penetração e adesivos e, como veículo, água ou um líquido orgânico no qual a substância ativa não solúvel ou pouco solúvel: alguns sólidos orgânicos ou sais inorgânicos podem ser dissolvidos no veículo para ajudar a impedir a sedimentação ou como antigeles para água.

[0402] As composições agroquímicas como aqui divulgadas podem ser utilizadas como tal, na forma das suas formulações ou como as formas de utilização preparadas a partir destas, tais como dispensador de aerossol, suspensão em cápsula, concentrado de nebulização a frio, concentrado de nebulização a quente, granulado encapsulado, granulado fino, concentrado que flui para tratamento de sementes, soluções prontas-para-utilização, pó de polvilhação, concentrado emulsionável, óleo de emulsão em água, emulsão de água em óleo, macrogrânulo, macrogrânulo, dispersível em óleo em pó, concentrado fluido miscível em óleo, líquido miscível em óleo, espumas, pastas, semente revestida com um pesticida, concentrado em suspensão (concentrado escoável), suspensões - emulsões - concentrados, concentrado solúvel, suspensões, pós solúveis, grânulos, grânulos solúveis em água ou comprimidos, pó solúvel em água para tratamento de semente, pó molhável, impregnados de materiais naturais e sintéticos com composto ativo, microencapsulação em materiais poliméricos e em revestimentos para sementes, bem como formulações ULV-frio e de nebulização a quente, gás (sob pressão), produto de geração de gás, rodlet de plantas, pó para o tratamento de sementes a seco, solução para o tratamento de sementes, líquido de volume ultra baixo (ULV), suspensão de volume ultra baixo (ULV), grânulos dispersíveis em água ou comprimidos, pó dispersível em água para tratamento de suspensão.

[0403] Estas formulações são preparadas de um modo conhecido misturando os compostos ativos ou combinações de substâncias ativas com aditivos usuais, tais como, por exemplo, diluentes habituais e também solventes ou diluentes, emulsionantes, dispersantes e/ou agentes de ligação ou agentes de fixação, agentes umectantes, repelentes de água, se secantes adequados e estabilizadores de UV, corantes, pigmentos, antiespumantes, conservantes, espessantes secundários, adesivos, giberelinas e água, bem como outros auxiliares de processamento.

[0404] Estas composições incluem não só composições que estão prontas para serem aplicadas à planta ou às sementes a serem tratadas por meio de um dispositivo adequado, tal como um dispositivo de pulverização ou de polvilhação, mas as composições concentradas comerciais também que devem ser diluídas antes da aplicação à cultura.

MÉTODOS DE PROTEÇÃO OU TRATAMENTO DE PLANTAS

[0405] Em certos aspectos, a presente invenção proporciona métodos para a proteção ou tratamento de uma planta ou parte de uma planta a partir de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos, compreendendo a etapa de aplicar direta ou indiretamente, à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica, tal como aqui descrito, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta ou parte da planta contra a infecção ou interação biológica com o patógeno da planta.

[0406] Em modalidades particulares, estes métodos compreendem a aplicação direta ou indireta, à planta ou a uma parte da planta de uma composição agroquímica, tal como aqui divulgado, a uma taxa de aplicação mais alta do que 50 g da composição agroquímica por hectare, tal como, mas não se limitando a uma taxa de aplicação superior a 75 g da composição agroquímica por hectare, tal como uma taxa de aplicação mais elevada do que 100 g da composição agroquímica por hectare, ou, em particular, uma taxa de aplicação mais elevada do que 200 g da composição agroquímica por hectare.

[0407] Em modalidades particulares, estes métodos compreendem a aplicação direta ou indireta, à planta ou a uma parte da planta de uma composição agroquímica, tal como aqui divulgado, a uma taxa de aplicação entre 50g e 200g da composição agroquímica por hectare, tal como, mas não limitado a uma aplicação taxa de entre 50g e 200 g da composição agroquímica por hectare, em especial, uma taxa de aplicação compreendida entre 75g e 175g da composição agroquímica por hectare, tal como entre 75g e 150g da composição agroquímica por hectare ou entre 75g e 125g por hectare.

[0408] Em ainda uma outra modalidade, a invenção proporciona métodos para combater as pragas de plantas, métodos esses que compreendem aplicar uma composição de controle de agroquímicos ou biológica de acordo com a invenção a uma planta, tal como uma cultura, ou uma parte de uma planta ou de uma cultura, em uma taxa de aplicação inferior a 50 g do referido polipeptídeo por hectare. Em modalidades específicas a taxa de aplicação está abaixo de 45 g/ha, abaixo de 40 g/ha, abaixo de 35 g/ha, abaixo de 30 g/ha, abaixo de 25 g/ha, abaixo de 20 g/ha, abaixo de 15 g/ha, a seguir 10 g/ha, abaixo de 5 g/ha, abaixo de 1 g/ha, ou mesmo quantidades mais baixas de polipeptídeo / ha.

[0409] Entende-se dependendo da cultura e a pressão do ambiente das pragas de plantas que o agricultor pode variar a taxa de aplicação. Estas variações de taxas de aplicação são especificadas na ficha técnica entregue com a composição agroquímica específica. Em ainda uma outra modalidade, a invenção proporciona a utilização das composições de controle agroquímica ou biológica da invenção para combater pragas de plantas.

[0410] A aplicação de uma composição de controle agroquímica ou biológica de acordo com a invenção para a cultura pode ser realizada utilizando qualquer método adequado para a aplicação de uma composição de controle agroquímica ou biológica para uma cultura, incluindo, mas não se limitando a pulverização (incluindo pulverização de alto volume (HV), baixo volume (LV) e ultrabaixo volume (ULV)), escovação, submersão, gotejamento, revestimento, imersão, imersão, espalhamento, nebulização, aplicação como pequenas gotas, uma névoa ou um aerossol.

[0411] Assim, em modalidades particulares, os métodos para a proteção ou tratamento de uma planta ou parte de uma planta a partir de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno da planta tal como aqui descrito, compreendem a aplicação da composição agroquímica, direta ou indiretamente, à planta ou a uma parte da planta por pulverização, atomização, a formação de espuma, nebulização, cultivo em hidrocultura, cultivo em hidroponia, revestimento, submersão, e/ou incrustantes.

[0412] Em certas modalidades particulares, a presente invenção proporciona métodos de inibição, prevenção, redução ou controle do crescimento de um patógeno de planta, compreendendo, pelo menos, a etapa de aplicar direta ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da referida planta, uma composição agroquímica quanto aqui divulgado.

[0413] Em certas outras modalidades, a presente invenção proporciona métodos para matar um patógeno de planta, compreendendo, pelo menos, a etapa de aplicar direta ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da referida planta, uma composição agroquímica, tal como aqui divulgado.

[0414] Alternativamente, a taxa de aplicação da composição agroquímica de acordo com a invenção, ou seja, a quantidade de composição agroquímica que é aplicada à cultura, é tal que menos do que 50 g, 45 g, 40 g, 35 g, 30 g, 25 g, 20 g, 20 g, 15 g, 10 g, 5 g, 1 g ou mesmo inferior a 1 g do polipeptídeo, compreendido na composição de controle biológica ou agroquímica de acordo com a invenção, é aplicada à cultura por hectare.

[0415] De acordo com os métodos tal como aqui divulgado, a composição de controle biológica ou agroquímica pode ser aplicada uma vez a uma cultura, ou pode ser aplicada duas ou mais vezes após o outro com um intervalo entre cada duas aplicações. De acordo com o método da presente invenção, a composição de controle biológica ou agroquímica de acordo com a invenção pode ser aplicada isoladamente ou em mistura com outros materiais, de preferência, outras composições agroquímicas ou biológicas de controle, para a colheita; Alternativamente, a composição de controle biológica ou agroquímica de acordo com a invenção pode ser aplicada separadamente à cultura com outros materiais, de preferência, outras composições agroquímicas ou biológicas de controle, aplicada em alturas diferentes para a mesma cultura. De acordo com o método da presente invenção, a composição de controle biológica ou agroquímica de acordo com a invenção pode ser aplicada à cultura profilaticamente, ou alternativamente, pode ser aplicada uma vez que as pragas-alvo foram identificadas na cultura particular a ser tratada. As composições agroquímicas como aqui descritas podem ser aplicadas diretamente a uma planta, uma cultura ou a uma ou mais partes da planta pelos métodos acima mencionados, tais como diretamente a totalidade da instalação, ou diretamente a uma ou mais partes da planta, tanto em uma fase pré-colheita ou em pós- colheita. Em certas outras modalidades, as composições agroquímicas, como aqui divulgadas podem ser aplicadas diretamente a uma ou mais partes da planta pelos métodos acima mencionados, tais como diretamente aos caules, folhas, tubérculos, caules, rebentos, sementes, frutos, raízes, flores, grãos, papilas etc.

[0416] O método de tratamento como aqui descrito também pode ser usado no campo da proteção dos produtos de armazenamento contra o ataque de patógenos de plantas. De acordo com a presente invenção, o termo "produto de armazenamento" pretende denotar substâncias naturais de origem vegetal ou animal e suas formas processadas, que foram retiradas do ciclo de vida natural e para as quais é desejada a proteção a longo prazo. Produtos de armazenamento de origem vegetal, tais como plantas ou partes das mesmas, por exemplo, talos, folhas, tubérculos, sementes, frutas ou grãos, podem ser protegidos no estado recentemente colhido ou na forma processada, como pré-seco, umedecido, triturado, moído, prensado ou torrado. Também se enquadrando na definição de produtos de armazenamento é madeira, seja na forma de madeira em bruto, tais como madeira de construção, postes de eletricidade e barreiras, ou sob a forma de artigos acabados, tais como móveis ou objetos feitos a partir de madeira. Produtos de armazenamento de origem animal são peles, couros, peles, cabelos e afins. As combinações de acordo com a presente invenção podem prevenir efeitos desvantajosos tais como decaimento, descoloração ou bolor. Preferivelmente "produtos de armazenamento" pretende denotar substâncias naturais de origem vegetal e as suas formas processadas, mais preferivelmente frutas e suas formas processadas, tais como pomos, frutos de caroço, frutos vermelhos e frutos cítricos e suas formas processadas.

[0417] As composições agroquímicas como aqui divulgadas também podem ser aplicadas indiretamente, a uma planta, uma cultura ou a uma ou mais partes da planta pelos métodos acima mencionados, tal como indiretamente, a toda a planta ou indiretamente a uma ou mais partes da planta, ou em uma fase pré-colheita ou pós-colheita. Assim, em certas modalidades, as composições agroquímicas como aqui descritas podem ser aplicadas indiretamente, a uma planta, uma cultura ou a uma ou mais partes da planta pelos métodos acima mencionados, tais como através da aplicação da composição agroquímica no meio envolvente ou no meio no qual a planta ou uma ou mais partes da planta está crescendo ou está armazenada, tais como, por exemplo, mas não se limitando ao ar, o solo, a cultura hidropônica, hidrocultura, ou a forma líquida, tal como, por exemplo, o meio líquido aquoso ou água, em que a planta ou a uma ou mais partes da planta em crescimento são ou são armazenadas.

[0418] Portanto, deve ser geralmente entendido no contexto do presente pedido, que o tratamento de plantas e partes de plantas com as composições agroquímicas como aqui divulgadas é realizado diretamente ou por ação sobre o seu ambiente, habitat ou área de armazenamento por meio de métodos normais de tratamento, por exemplo, molhagem (encharcamento), irrigação por gotejamento, pulverização, vaporização, atomização, radiodifusão, polvilhamento, formação de espuma, espalhamento, e como um pó. Além disso, é possível aplicar as composições pelo método de volume ultrabaixo ou injetando a preparação de composto ativo ou o composto ativo em si no solo. Em modalidades particulares, os métodos para a proteção ou tratamento de uma planta ou parte de uma planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno da planta tal como aqui descrito, compreendem aplicar a composição agroquímica direta ou indiretamente, à planta ou a uma parte da planta ou em uma fase pré- colheita, ou em pós-colheita. De acordo com modalidades específicas, o produto colhido é uma fruta, flor, fruto ou vegetal, um fruto ou vegetal com casca não comestível, de preferência selecionados a partir de abacates, bananas, banana, limões, toranjas, melões, laranjas, abacaxi, kiwi, goiabas, tangerinas, mangas e abóbora, é preferido, mais preferivelmente, bananas, laranjas, limões e pêssegos, em particular bananas. De acordo com outras modalidades específicas, o produto colhido é uma flor cortada de plantas ornamentais, de preferência selecionadas de alstroemeria, cravo, crisântemo, frésia, gérbera, dladíolo, baby’s breath (espe Gypsophila), Helianthus, Hydrangea, Lilium, Lisianthus, rosas e flores de verão. As espécies de plantas às quais as composições agroquímicas, como aqui divulgadas podem ser aplicadas podem ser, por exemplo, mas não estão limitadas a milho, soja, alfafa, algodão, girassol, sementes de oleaginosas de Brassica, tais como por exemplo, Brassica napus (canola, semente de colza), Brassica rapa, B. juncea (por exemplo, (campo) mostarda)) e Brassica carinata, Arecaceae sp. (por exemplo, dendê, coco), arroz, trigo, beterraba sacarina, cana-de-açúcar, aveia, centeio, cevada, milho e sorgo, triticale, linho, nozes, uvas e videira e vários frutos e produtos hortícolas a partir de vários táxons botânicos, por exemplo, Rosaceae sp. (por exemplo, frutas pomes tais como maçãs e pêras, mas também frutas de caroço, como damascos, cerejas, amêndoas, ameixas e pêssegos e frutas de baga como morangos, framboesas, passas vermelhas e pretas e groselha), Ribesioidae sp., Juglandaceae sp., Betulaceae sp., Anacardiaceae sp., Fagaceae sp., Moraceae sp., Oleaceae sp. (por exemplo, oliveira), Actinidaceae sp., Lauraceae sp. (por exemplo, abacate, canela, cânfora), Musaceae sp. (por exemplo, bananeiras e plantações), Rubiaceae sp. (por exemplo, café), Theaceae sp. (por exemplo, chá), Sterculiceae sp., Rutaceae sp. (por exemplo, limões, laranjas, tangerinas e toranjas); Solanaceae sp. (por exemplo, tomates, batatas, pimentas, capsicum, beringelas, tabaco), Liliaceae sp., Compositae sp. (por exemplo, alface, alcachofra e Chicória - inclusive raiz de chicória, escarola ou chicória comum), Umbelliferae sp. (por exemplo, cenouras, salsa, aipo e aipo-rábano), Cu- curbitaceae sp. (por exemplo, pepinos - incluindo picles, abóboras, melancias, melões e cabaças), Alliaceae sp. (por exemplo, alho-poró e cebola), Cruciferae sp. (por exemplo, repolho branco, repolho vermelho, brócolis, couve- flor, couve de Bruxelas, pak choi, couve-rábano, rabanetes, rábano- silvestre, agrião e couve chinesa), Leguminosae sp. (por exemplo, amendoim, ervilhas, lentilhas e feijão - por exemplo, feijão e favas), Chenopodiaceae sp. (por exemplo, acelga, beterraba forrageira, espinafre, beterraba), Linaceae sp. (por exemplo, cânhamo), Cannabeacea sp. (por exemplo, cannabis), Malvaceae sp. (por exemplo, quiabo, cacau), Papaveraceae (por exemplo, papoula), Asparagaceae (por exemplo, espargos); plantas úteis e plantas ornamentais no jardim e bosques, incluindo relva, gramado, grama e Stevia rebaudiana; e em cada caso, estes tipos de plantas geneticamente modificadas.

[0419] Em uma modalidade preferida dos métodos de tratamento aqui descritos, a colheita é selecionada de entre o grupo que consiste em culturas de campo, gramíneas, frutas e vegetais, relvados, plantas ornamentais e árvores.

[0420] Em certos aspectos, a presente invenção proporciona também métodos de tratamento de pós-colheita para proteger ou tratar uma planta colhida ou uma parte de planta colhida a partir de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos, compreendendo a etapa de aplicar direta ou indiretamente à planta colhida ou a uma parte de planta colhida, uma composição agroquímica, tal como aqui descrito, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta colhida ou uma parte colhida da planta contra a infecção ou interação biológica com o patógeno da planta. De acordo com modalidades específicas, o produto colhido é uma fruta, flor, porca ou vegetal, uma fruta ou vegetal com casca não comestível, de preferência selecionados a partir de abacates, bananas, banana, limões, toranjas, melões, laranjas, abacaxi, kiwi, goiabas, tangerinas, mangas e abóbora, é preferido, mais preferivelmente, bananas, laranjas, limões e pêssegos, em particular bananas. De acordo com outras modalidades específicas, o produto colhido é uma flor cortada de plantas ornamentais, de preferência selecionadas de alstroemeria, cravo, crisântemo, frésia, gérbera, gladíolo, baby’s brief (espe Gypsophila), Helianthus, Hydrangea, Lilium, Lisianthus, rosas e flores de verão. De acordo com outras modalidades específicas, o produto colhido é relva cortada ou madeira. Distúrbios pós-colheita são, por exemplo, pontos lenticel, chamuscados, desagregação senescentes, mancha amarga (bitter pit), escaldão, water core, escurecimento, degradação vascular, deficiência CO2 ou de CO2, e amaciamento. Doenças fúngicas podem ser causadas, por exemplo, pelos seguintes fungos: Mycosphaerella spp, Mycosphaerella musae, Mycosphaerella frag um AE, Mycosphaerella citri;. Mucor spp, por exemplo, Mucor piriformis.; Monilinia spp, por exemplo, Monilinia fructigena, Monilinia laxa.; Phomopsis spp., Phomopsis natalensis; Colletotrichum spp, por exemplo, Colletotrichum musae, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum coccodes; Verticillium spp, por exemplo VerticiHium theobromae.; Nigrospora spp.; Botrytis spp, por exemplo, Botrytis cinerea.; Diplodia spp, por exemplo Diplodia citri.; Pezicula spp.; Alternaria spp, por exemplo Alternaria citri, Alternaria alternata; Septoria spp, por exemplo, Septoria depressa.; Venturia spp, por exemplo Venturia inaequalis, Venturia pyrina.; Rhizopus spp., por exemplo, Rhizopus stolonifer, Rhizopus oryzae.; Glomerella spp, por exemplo Glomerella cingulata.; Sclerotinia spp., por exemplo, Sclerotinia Fruiticola; Ceratocystis spp, por exemplo Ceratocystis paradoxa.; Fusarium spp., por exemplo, Fusarium semitectum, Fusarium moniliforme, Fusarium solani, Fusarium oxysporum; Cladosporium spp., por exemplo Cladosporium fulvum, Cladosporium cladosporioides, Cladosporium cucumerinum, Cladosporium musae; Penicillium spp., por exemplo, Penicillium funiculosum, Penicillium expansum, Penicillium digitatum, Penicillium italicum; Phytophthora spp., por exemplo, Phytophthora citrophthora, Phytophthora fragariae, Phytophthora cactorum, Phytophthora parasitica; Phacydiopycnis spp., por exemplo Phacydiopycnis malirum.; Gloeosporium spp., por exemplo Gloeosporium album, Gloeosporium perennans, Gloeosporium fructigenum, Gloeosporium singulata; Geotrichum spp., por exemplo, Geotrichum candidum; Phlyctaena spp., por exemplo Phlyctaena vagabunda.; Cylindrocarpon spp., por exemplo, Cylindrocarpon mail; Stemphyllium spp., por exemplo Stemphyllium vesica urna; Thielaviopsis spp., por exemplo Thielaviopsis paradoxia; Aspergillus spp., por exemplo Aspergillus niger, Aspergillus carbonari us.; Nectria spp., por exemplo Nectria galligena; Cercospora spp., por exemplo, Cercospora angreci, Cercospora apii, Cercospora atrofiliformis, Cercospora musae, Cercospora zeae-maydis.

[0421] Em aspectos adicionais, a presente invenção proporciona utilizações das composições agroquímicas, como aqui divulgado como um agente antiparasitas, tais como, por exemplo, um agente biostático ou um agente pesticida, incluindo, mas não se limitando a um fungistático ou a um agente fungicida. Em uma modalidade particular, as pragas de plantas combatidas mediante o método de acordo com a presente invenção são fungos patogênicos para plantas, conforme definido antes. O número de lesões, o tamanho da lesão, e extensão da esporulação de fungos patogênicos podem todos ser diminuídos como um resultado da aplicação do método de acordo com a presente invenção.

APLICAÇÕES MÉDICAS

[0422] Em certas outras modalidades, a presente invenção proporciona métodos para a proteção ou cura de um ser humano ou animal de uma infecção por uma praga e, em particular, um fungo, pelo menos, compreendendo a etapa de aplicar direta ou indiretamente a um ser humano ou animal ou a uma parte do ser humano ou animal, uma composição compreendendo pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, tal como, mas não limitado a um fungo, sob condições eficazes para proteger ou curar o ser humano ou animal da praga.

[0423] Por conseguinte, a presente invenção proporciona polipeptídeos que se ligam especificamente a um alvo de praga ou ao uso em um método para a prevenção e/ou tratamento de, pelo menos, uma doença e/ou desordem causada por uma praga, tal como, por exemplo, uma doença e/ou desordem causada por um fungo. Em modalidades particulares, a presente invenção também proporciona métodos para a prevenção e/ou tratamento de, pelo menos, uma doença e/ou desordem causada por uma praga, que compreende a administração a um indicíduo que dela necessite, de uma quantidade farmaceuticamente ativa de uma ou mais sequências de aminoácidos, polipeptídeos e/ou composições farmacêuticas, tal como aqui divulgado. Em particular, a quantidade farmaceuticamente ativa pode ser uma quantidade que é suficiente (para criar um nível da sequência de aminoácidos ou polipeptídeo em circulação) para inibir, prevenir ou diminuir uma ou mais atividades biológicas ou as vias da praga, assim, ligadas.

[0424] Por conseguinte, em determinados aspectos a presente invenção proporciona composições que compreendem pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga para uso como um agente antipragas em um indivíduo, tal como um animal ou um ser humano, sofrendo de uma doença e/ou desordem causada por uma praga (por exemplo, um fungo). Em modalidades específicas, o agente antipragas é um agente biostático ou um pesticida. Em modalidades específicas, o agente antipragas é um agente fungistático ou um fungicida.

[0425] Além disso, em certos aspectos, a presente invenção proporciona métodos para a prevenção e/ou tratamento de uma doença e/ou desordem causada por uma praga, cujos métodos compreendem as etapas de: (a) proporcionar uma sequência de aminoácidos, polipeptídeo ou composição, tal como aqui divulgado, (b) administrar a sequência de aminoácidos, polipeptídeo ou composição farmacêutica a um paciente que sofre da doença e/ou desordem causada por uma praga.

[0426] A eficácia dos polipeptídeos como aqui descritos, e de composições que os compreendem, pode ser testadas utilizando qualquer ensaio in vitro adequado, ensaio à base de células, ensaio in vivo e/ou modelo animal conhecido per se, ou qualquer sua combinação, dependendo a doença ou desordem específica envolvida. Ensaios adequados e modelos animais serão evidentes para o versado na técnica, bem como os ensaios e modelos animais utilizados na parte experimental abaixo e na técnica anterior aqui citada. O versado na técnica será geralmente capaz de selecionar um ensaio in vitro adequado, ensaio celular ou modelo animal para testar as sequências de aminoácidos e polipeptídeos tal como aqui descritas para a ligação a um alvo de praga ou antígeno de praga ou para a sua capacidade em afetar a atividade de um alvo de praga ou antígeno de pragas, e/ou os mecanismos biológicos nos quais eles estão envolvidos; bem como para o seu efeito terapêutico e/ou profilático, em relação a uma ou mais doenças e distúrbios que estão associados com o antígeno de pragas.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

[0427] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais sequências de aminoácidos, polipeptídeos e/ou sequências de ácidos nucleicos, tal como aqui e, opcionalmente, pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável divulgado (também aqui referidos como composições farmacêuticas da invenção). De acordo com determinadas modalidades particulares, as composições farmacêuticas, como aqui divulgadas podem ainda, opcionalmente, compreender pelo menos um outro composto farmaceuticamente ativo. As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser utilizadas no diagnóstico, prevenção e/ou tratamento de doenças e desordens associadas com a praga, tal como um fungo, dos quais a alvo de praga é ligado aos polipeptídeos aqui divulgados. Em particular, a presente invenção proporciona composições farmacêuticas que compreendem os polipeptídeos que são adequados para utilização profilática, terapêutica e/ou diagnóstico de animais de sangue quente, e em particular em um mamífero e, mais em particular em um ser humano.

[0428] A presente invenção também proporciona composições farmacêuticas compreendendo sequências de aminoácidos e polipeptídeos tal como aqui descrito que pode ser usado para fins veterinários na prevenção e/ou tratamento ou diagnóstico de uma ou mais doenças, distúrbios ou condições associadas com a praga, tal como, por exemplo, um fungo, dos quais a alvo de praga é ligada aos polipeptídeos aqui divulgados. Em geral, para utilização farmacêutica, os polipeptídeos como aqui divulgados, podem ser formulados como uma preparação farmacêutica ou composições compreendendo pelo menos um polipeptídeo tal como aqui descrito e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente e/ou adjuvante, e opcionalmente um ou mais outros polipeptídeos farmaceuticamente ativos e/ou compostos. Tal formulação pode ser adequada para administração oral, parentérica, tópica ou para administração por inalação. Assim, as sequências de aminoácidos, ou polipeptídeos, tal como aqui divulgado e/ou as composições que compreendem as mesmas podem, por exemplo, ser administradas por via oral, intraperitoneal (por exemplo, por via intravenosa, subcutânea, intramuscular, transdérmica, tópica, por meio de um supositório, por inalação, novamente dependendo da formulação ou composição farmacêutica específica a ser utilizada. O médico será capaz de selecionar uma via de administração adequada e uma formulação farmacêutica apropriada ou composição a ser usada em tal administração.

[0429] As composições farmacêuticas podem também conter ligantes, agentes desintegrantes, agentes edulcorantes ou agentes aromatizantes. Comprimidos, pílulas, ou cápsulas podem ser revestidos, por exemplo, com gelatina, cera ou açúcar e outros semelhantes. Além disso, as sequências de aminoácidos e polipeptídeos tal como aqui divulgado podem ser incorporadas em preparações e dispositivos de liberação sustentada.

[0430] As formas de dosagem farmacêuticas adequadas para injeção ou infusão podem incluir soluções ou dispersões aquosas estéreis ou pós estéreis compreendendo o ingrediente ativo os quais são adaptados para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis ou para infusão estéreis, opcionalmente encapsuladas em lipossomas. Em todos os casos, a forma de dosagem final deve ser estéril, fluida e estável sob as condições de fabricação e armazenamento. O veículo líquido ou veículo pode ser um solvente ou meio de dispersão líquida que compreende, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol, polietileno glicóis líquidos, e semelhantes), óleos vegetais, ésteres de glicerila não tóxicos, e misturas adequadas. Antibacterianos e antifúngicos e semelhantes podem opcionalmente ser adicionados.

[0431] As dosagens úteis das sequências de aminoácidos e polipeptídeos tal como aqui descritos podem ser determinadas por comparação da sua atividade in vitro, e atividade in vivo em modelos animais. Métodos para a extrapolação de dosagens eficazes em camundongos, e outros animais, a humanos são conhecidos do versado na técnica.

[0432] A quantidade das sequências de aminoácidos e polipeptídeos tal como aqui divulgados necessários para uso na profilaxia e/ou tratamento pode variar não apenas com a sequência de aminoácidos particular, ou polipeptídeo selecionado, mas também com a via de administração, a natureza da condição a ser tratada e a idade e condição do paciente e será em última análise à discrição do médico assistente ou do clínico. Além disso, a dosagem das sequências de aminoácidos e polipeptídeos tal como aqui descritos podem variar, dependendo da célula alvo, tumor, tecido, enxerto, ou órgão.

[0433] As sequências de aminoácidos ou de polipeptídeos, como aqui divulgadas e/ou as composições que as compreendem foram administradas de acordo com um regime de tratamento que é adequado para a prevenção e/ou tratamento da doença ou distúrbio a ser prognosticado, diagnosticado, tratado ou prevenido. O clínico irá geralmente ser capaz de determinar um regime de tratamento apropriado. Geralmente, o regime de tratamento compreende a administração de uma ou mais sequências de aminoácidos ou polipeptídeos tal como aqui descrito, ou uma ou mais composições compreendendo os mesmos, em quantidades eficazes de um ou mais veículos farmaceuticamente ou doses. A dose desejada pode ser convenientemente apresentada em uma dose única ou como doses divididas (que pode novamente ser subdoseada) administrada em intervalos apropriados. Um regime de administração pode incluir a longo prazo (isto é, pelo menos duas semanas, e, por exemplo, vários meses ou anos) ou o tratamento diário. As sequências de aminoácidos ou polipeptídeos tal como aqui descritas serão administrada em uma quantidade que irá ser determinada pelo médico assistente com base, inter alia, na gravidade da condição e o paciente a ser tratado. Tipicamente, para cada uma das indicações da doença uma dosagem ideal irá ser determinada especificando a quantidade a ser administrada por kg de peso corporal por dia, quer de modo contínuo (por exemplo, por infusão), como uma dose diária única ou como várias doses divididas durante o dia. O clínico irá geralmente ser capaz de determinar uma dose diária adequada, dependendo dos fatores mencionados neste documento. Será também claro que, em determinados casos, o médico pode escolher se desviar destes valores, por exemplo, com base dos fatores supramencionados e sua experiência.

[0434] Em particular, as sequências de aminoácidos ou polipeptídeos, tal como aqui divulgadas podem ser utilizadas em combinação com outros compostos farmaceuticamente ativos ou princípios que são ou podem ser utilizados para a prevenção e/ou tratamento das doenças e distúrbios aqui citados, como um resultado dos quais um efeito sinérgico pode ou não pode ser obtido. Exemplos de tais compostos e os princípios, bem como das vias, métodos e formulações farmacêuticas ou composições para administrá-los irá ser claro para o clínico.

[0435] Composições da invenção podem ser utilizadas em conjunto com antifúngicos conhecidos. Antifúngicos apropriados incluem, mas não estão limitados a, azóis (por exemplo, fluconazol, itraconazol), polienos (por exemplo, anfotericina B), flucitosina, e inibidores da esqualeno epoxidase (por exemplo, terbinafina) [vide também ref 57]. As composições também podem ser utilizadas em conjunto com antivirais conhecidos por exemplo, inibidores da protease de HIV, um 2',3'-didesoxinucleosídeo (por exemplo, DDC, DDI), 3'-azido-2',3'- didesoxinucleosídeos (AZT), 3'-fluoro-2',3'-didesoxinucleosídeos (FLT), 2',3'-didesidro-2',3'-didesoxinucleosídeos (por exemplo, D4C, D4T) e derivados carbocíclicos dos mesmos (por exemplo, carbovir), 2'-fluoro- ara-2',3'-didesoxinucleosídeos, derivados de 1,3-dioxolano (por exemplo, 2',3'-dideoxil-3'-tiacitidina), oxetanocina, análogos e derivados carbocíclicos dos mesmos (por exemplo, ciclobut-G) e os derivados de 9-(2-fosfonilmetoxietil)adenina (PMEA) e 9-(3-fluoro-2- fosfonilmetoxipropil)adenina (FPMPA), tetra- irmidazo[4,5,1jk][1,4]benzodiazepin-2(1H)ona (TIBO), 1-[(2- hidroxietóxi)-metil]-6-(feniltio)timina (HEPT); dipirido [3,2-b:2',3'-e]- [1,4]diazepin-6-ona (nevirapina) e piridin-2(1H)ona, 3TC, etc.

[0436] As sequências de aminoácidos, polipeptídeos e composições farmacêuticas são particularmente úteis para o tratamento de infecções em animais e humanos de espécies de Cândida tais como C. albicans; Espécies de Cryptococcus tais como C. neoformans; Espécies de Enterococcus, tais como E. faecalis; Espécies de Streptococcus, tais como Spneumoniae, S. mutans, S. pyogenes e S.agalactiae; Espécies de Leishmania, tais como a L. major e L.infantum; Espécies de Acanthamoeba, tais como A. castellani; Espécies de Aspergillus, tais como A. fumigatus e A. flavus; Espécies de Pneumocystis, tais como P.carinii; Espécies de Mycobacterium, tais como M. tuberculosis; Espécies Pseudomonas, como P. aeruginosa; Espécies de Staphylococcus, tais como S. aureus; Espécies de Salmonella, tais como S. typhimurium; Espécies de Coccidioides tais como C.iminitis; Espécies de Trichophyton, tais como T. verrucosum; Espécies de Blastomyces tais como B. dermatidis; Espécie Histoplasma, tais como H.capsulatum; Espécies de Paracoccidioides, como P. brasiliensis; espécies de Pythiumn tais como P.insidiosum; e espécies de Escherichia, tal como E. coli. As sequências de aminoácidos, polipeptídeos e composições farmacêuticas são particularmente úteis para o tratamento de doenças incluindo, mas não se limitando a: candidose, aspergilose, criptococose, dermatomicoses, sporothrychosis e outras micoses subcutâneas, blastomicose, histoplasmose, coccidiomicose, paracoccidiomicose, pneumocistose, aftas, tuberculose, micobacteriose, infecções respiratórias, escarlatina, pneumonia, impetigo, febre reumática, sepse, septicemia, leishmaniose cutânea e visceral, acanthamoebiasis córnea, ceratite, fibrose cística, febre tifoide, gastroenterite e síndrome hemolítico-urêmica. Atividade anti-C.albicans é particularmente útil para o tratamento de infecções em pacientes com AIDS.

MÉTODOS DE PRODUÇÃO E FABRICAÇÃO DOS POLIPEPTÍDEOS

[0437] A invenção proporciona ainda métodos para a preparação ou a geração de sequências de polipeptídeo, bem como métodos para a produção de ácidos nucleicos que os codificam e células hospedeiras, produtos e composições que compreendem estas sequências de polipeptídeo. Alguns exemplos preferidos, mas não limitativos, de tais métodos se tornarão claros a partir da descrição mais adiante.

[0438] Como será evidente para o versado na técnica, um método particularmente útil para a preparação de sequências de polipeptídeos tal como aqui descrito compreende geralmente as etapas de: (a) expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de polipeptídeo, tal como aqui descrito ou um vetor ou um construto genético de nucleotídeos que codifica essa sequência de sequência de polipeptídeo e (b) opcionalmente, isolamento e/ou purificação da sequência de polipeptídeo.

[0439] Em modalidades particulares aqui previstas, as sequências de um polipeptídeo específicas de pragas podem ser obtidas por métodos que envolvem a geração de uma biblioteca aleatória de sequências de aminoácidos e seleção desta biblioteca para uma sequência de aminoácidos capaz de se ligar especificamente a um alvo de praga.

[0440] Por conseguinte, em modalidades particulares, os métodos para a preparação de uma sequência de polipeptídeo, tal como aqui divulgada compreendem as etapas de a) fornecimento de um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácidos; e b) seleção do referido conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácidos que se podem se ligar a e/ou têm afinidade com a alvo de praga. e c) isolamento da sequência (s) de aminoácido que pode ligar-se e/ou têm afinidade com a alvo de praga.

[0441] Em tal método, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de polipeptídeo pode ser qualquer conjunto apropriado, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácidos. Por exemplo, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácidos pode ser um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmentos de imunoglobulina (tal como aqui descrito), como um conjunto puro, coleção ou biblioteca de sequências de fragmentos de imunoglobulina; um conjunto sintético ou semissintético, coleção ou biblioteca de sequências de fragmentos de imunoglobulina; e/ou um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmentos de imunoglobulina que tenham sido submetidos à maturação de afinidade.

[0442] Em modalidades particulares do presente método, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácidos pode ser um conjunto imune, coleção ou biblioteca de sequências de fragmentos de imunoglobulina, por exemplo, derivado de um mamífero que tenha sido adequadamente imunizado com um alvo de praga ou com um determinante antigênico adequado à base ou derivados dos mesmos, tal como uma parte antigênica, fragmento, região, domínio, loop ou outro epítopo. Em um aspecto particular, o referido determinante antigênico pode ser uma parte extracelular, região, domínio, loop ou outro epítopo extracelular (s).

[0443] Nos métodos acima, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de polipeptídeo pode ser exibido em um fago, fagemídeo, ribossoma ou micro-organismo adequado (tal como a levedura), de modo a facilitar a seleção. Os métodos adequados, técnicas e organismos hospedeiros para a exibição e seleção (um conjunto, coleção ou biblioteca de) sequências de aminoácidos será claro para a pessoa versada na técnica, por exemplo, na base de uma divulgação adicional inclusa aqui. Também é feita referência à revisão por Hoogenboom na Nature Biotechnology, 23, 9, 1116 105-1 (2005).

[0444] Em outras modalidades, os métodos para gerar as sequências de polipeptídeos tal como aqui descritas compreendem pelo menos as etapas de: a) proporcionar uma coleção ou amostra de células que expressam as sequências de polipeptídeo; b) selecionar a referida coleção ou amostra de células para as células que expressam uma sequência de aminoácidos que pode se ligar a e/ou têm uma afinidade com o alvo de pragas; e c) quer (i) isolar a referida sequência de aminoácidos; ou (ii) isolar da referida célula uma sequência de ácido nucleico que codifica a referida sequência de aminoácidos, seguido de expressar a referida sequência de aminoácidos.

[0445] A coleção ou amostra de células pode ser por exemplo, uma ou coleção ou e amostra de células B. Além disso, neste método, a amostra de células pode ser derivada de um mamífero que tenha sido adequadamente imunizado com um alvo fúngico ou com um respectivo determinante antigênico adequado, baseado ou derivados dos mesmos, tal como uma parte antigênica, fragmento, região, domínio, loop ou outro epítopo. Em uma modalidade particular, o determinante antigênico pode ser uma parte extracelular, região, domínio, loop ou outro epítopo extracelular (s).

[0446] Em outras modalidades, o método para a geração de uma sequência de polipeptídeo direcionado contra um alvo da praga pode compreender pelo menos as etapas de: a) fornecimento de um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico codificando uma sequência de aminoácidos do polipeptídeo; b) seleção do referido conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácidos nucleicos para sequências de ácidos nucleicos que codificam uma sequência de aminoácidos que pode se ligar a e/ou tem afinidade com o alvo de pragas; e c) isolamento da referida sequência de ácido nucleico, seguido por expressão da referida sequência de aminoácidos.

[0447] Nos métodos acima, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácidos nucleicos que codificam sequências de aminoácidos pode ser por exemplo, um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico que codificam um conjunto puro, coleção ou biblioteca de sequências de fragmentos de imunoglobulina; um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico que codificam um conjunto sintética ou semissintético, coleção ou biblioteca de sequências de fragmentos de imunoglobulina; e/ou um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácidos nucleicos que codificam um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmentos de imunoglobulinas que tenham sido submetidas à maturação de afinidade.

[0448] Em particular, em um tal método, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácidos nucleicos que codifica para um conjunto, coleção ou biblioteca de polipeptídeos (tais como domínios VH ou domínios VHH). Por exemplo, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácidos nucleicos pode codificar para um conjunto, coleção ou biblioteca de anticorpos de domínio ou anticorpos de domínio simples, ou um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácidos que são capazes de funcionar como um anticorpo de domínio ou anticorpo de domínio único. Em modalidades específicas, o grupo, coleção ou biblioteca de sequências de nucleotídeos codifica um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências VHH.

[0449] Nos métodos acima, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de nucleotídeos pode ser exibido em um fago, fagemídeo, ribossoma ou micro-organismo adequado (tal como a levedura), de modo a facilitar a seleção. Os métodos adequados, técnicas e organismos hospedeiros para a exibição e seleção (um conjunto, ou biblioteca ou coleção) de sequências nucleotidicas codificando sequências de aminoácidos será claro para a pessoa especialista na técnica, por exemplo, na base de uma divulgação adicional inclusa. Também é feita referência à revisão por Hoogenboom in Nature Biotechnology, 23, 9, 1116 105-1 (2005).

[0450] A invenção também se refere a sequências de polipeptídeos que são obtníveis ou obtidas pelos métodos acima, ou, alternativamente, por um método que compreende um dos métodos acima mencionados e, além disso, pelo menos, as etapas de determinar a sequência nucleotídica ou uma sequência de aminoácidos da referida sequência de imunoglobulina; e expressar ou sintetizar a referida sequência de aminoácidos de um modo conhecido per se, tal como, por expressão em uma célula hospedeira ou organismo hospedeiro adequado ou por síntese química.

ISOLAMENTO DE SEQUÊNCIAS DE POLIPEPTÍDEO

[0451] Em alguns casos, os métodos para produzir as sequências de aminoácidos que se ligam especificamente a um alvo de fungos, tal como previsto neste documento podem ainda compreender a etapa de isolar da biblioteca de sequência de aminoácidos pelo menos um polipeptídeo possuindo afinidade de ligação detectável por, ou efeito detectável in vitro sobre um alvo de praga.

[0452] Estes métodos podem ainda compreender a etapa de amplificação de uma sequência que codifica pelo menos um polipeptídeo tendo afinidade de ligação detectável para, ou detectável no efeito in vitro sobre a atividade de um alvo de praga. Por exemplo, um clone de fagos exibindo uma sequência de aminoácidos em particular, obtida a partir de uma etapa de seleção de um método aqui descrito, pode ser amplificado por uma reinfecção de bactérias hospedeiras e a incubação em um meio de crescimento. Em modalidades particulares, estes métodos podem incluir a determinação da sequência de uma ou mais sequências de aminoácidos capazes de se ligarem a um alvo de praga.

[0453] Quando uma sequência de polipeptídeo, compreendida em um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácidos, é apresentada em uma célula ou um fago ou partículas adequadas, é possível isolar a partir da referida célula ou fago ou partículas, a sequência de nucleotídeos que codifica essa sequência de aminoácido. Deste modo, a sequência de nucleotídeos do membro da biblioteca de sequência de aminoácidos selecionada (s) pode ser determinada por um método de sequenciação de rotina.

[0454] De acordo com outras modalidades particulares, os métodos para a produção de um polipeptídeo tal como aqui previsto compreendem a etapa de expressar a referida sequência (s) de nucleotídeos em um organismo hospedeiro em condições adequadas, de modo a obter a sequência de aminoácidos desejada real. Esta etapa pode ser realizada por métodos conhecidos dos versados na técnica.

[0455] Além disso, as sequências de polipeptídeos obtidas com afinidade de ligação para detectável, ou detectáveis em efeito in vitro sobre a atividade de um alvo de praga, podem ser sintetizadas tal como construção de proteína solúvel, facultativamente após a sua sequência ter sido identificada.

[0456] Por exemplo, as sequências de polipeptídeos obtidas, obteníveis ou selecionadas pelos métodos anteriores podem ser sintetizads utilizando métodos de síntese química ou recombinante conhecidos na técnica. Além disso, as sequências de aminoácidos obtidas, que podem ser obtidas ou selecionadas pelos métodos acima referidos podem ser produzidas por técnicas de engenharia genética. Assim, os métodos para sintetizar sequências de polipeptídeo obtidas, obteníveis ou selecionadas pelos métodos acima podem compreender a transformação ou infecção de uma célula hospedeira com um ácido nucleico ou um vetor que codifica uma sequência de aminoácidos possuindo afinidade de ligação detectável por, ou detectável in vitro sobre a atividade de um alvo de praga. Por conseguinte, as sequências de aminoácidos que têm afinidade de ligação detectável para, ou detectável no efeito in vitro sobre a atividade de um alvo de praga pode ser feita por métodos de DNA recombinante. DNA que codifica as sequências de aminoácidos pode ser prontamente sintetizado utilizando procedimentos convencionais. Uma vez preparado, o DNA pode ser introduzido em vetores de expressão, que pode então ser transformado ou transfectado em células hospedeiras, tais como E. coli, ou qualquer sistema de expressão adequado, de modo a obter a expressão das sequências de aminoácidos nas células hospedeiras recombinantes e/ou no meio em que estas células hospedeiras recombinantes residem.

[0457] Deve ser entendido, como é conhecido por alguém especialista na técnica de expressão e purificação de proteínas, que o polipeptídeo produzido a partir de um vetor de expressão utilizando um sistema de expressão adequado pode ser marcado (geralmente na extremidade N-terminal ou C-terminal da sequência de aminoácidos) com por exemplo, um His-tag ou outro marcador de sequência para facilitar a purificação.

[0458] A transformação ou transfecção de ácidos nucleicos ou vetores em células hospedeiras pode ser conseguida por uma variedade de meios conhecidos dos versados na técnica, incluindo coprecipitação de DNA de fosfato de cálcio, transfecção mediada por DEAE-dextrano, transfecção mediada por polibreno, eletroporação, microinjeção, fusão de lipossomas, lipofecção, fusão de protoplastos, infecção retroviral, e biolística.

[0459] As células hospedeiras adequadas para a expressão das sequências de polipeptídeo desejadas pode ser qualquer célula procariótica ou eucariótica (por exemplo, células bacterianas tais como E. coli, células de levedura, células de mamífero, células de aves, células de anfíbios, células vegetais, células de peixes, e células de inseto), quer esteja localizada in vitro ou in vivo. Por exemplo, as células hospedeiras podem ser localizadas em uma planta transgênica ou animal.

[0460] Assim, a aplicação também proporciona métodos para a produção de sequências de polipeptídeos com afinidade de ligação detectável por, ou detectável no efeito in vitro sobre a atividade de um alvo de praga compreendendo a transformação, transfecção ou infecção de uma célula hospedeira com sequências de ácidos nucleicos ou vetores que codificam tais sequências de aminoácido e que expressam as sequências de aminoácidos em condições adequadas.

[0461] Em ainda outra modalidade, a invenção proporciona ainda métodos para a fabricação (ou a produção do qual é uma formulação equivalente) uma composição de controle agroquímica ou biológica, como aqui divulgado.

[0462] Em modalidades particulares, a invenção proporciona métodos para a produção de uma composição agroquímica, tal como aqui divulgado, compreendendo pelo menos as etapas de: - obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, e - formulação do polipeptídeo ou seu fragmento funcional em uma composição agroquímica.

[0463] Em modalidades específicas destes métodos, a etapa de obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga compreende: (a) expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga, e facultativamente (b) isolamento e/ou purificação do polipeptídeo.

[0464] Em outras modalidades específicas destes métodos, a etapa de obtenção de pelo menos um polipeptídeo, que se liga especificamente a uma praga compreende: a) fornecimento de um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de polipeptídeos; b) seleção do referido conjunto, coleção ou biblioteca de polipeptídeo sequencesfor sequências que se ligam especificamente a e/ou têm afinidade para uma praga, e facultativamente c) isolamento das sequências de polipeptídeos que se ligam especificamente a e/ou têm afinidade para uma praga.

[0465] O presente pedido divulga ainda processos para a fabricação (ou a produção dos quais é uma formulação equivalente) de uma composição de controle agroquímica ou biológica, tal como aqui divulgado, compreendendo a formulação de uma sequência de aminoácidos ou polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos, ou outra subfaixa adequada como aqui definido antes, com atividade pesticida, juntamente com pelo menos um agente auxiliar de agroquímicos habitual. Métodos de fabricação adequados são conhecidos na técnica e incluem, mas não se limitam a, mistura de elevado ou de baixo cisalhamento, moagem por via úmida ou seca, gotejamento de fundição, encapsulação, emulsão, revestimento, incrustantes, empilhamento, granulação por extrusão, granulação em leito fluidizado, coextrusão, secagem por pulverização, aspersão e ventilação, atomização, adição ou polimerização por condensação, polimerização interfacial, polimerização in situ, coacervação, encapsulamento por pulverização, dispersões fundidas por resfriamento, evaporação de solvente, separação de fases, extração com solvente, polimerização de sol-gel, revestimento em leito fluido, revestimento pan, fusão, fusão ou absorção ou adsorção passiva ou ativa. Especificamente, as sequências de aminoácidos ou polipeptídeos de entre 80 e 200 aminoácidos, como aqui divulgadas, ou outras subfaixas adequadas tal como aqui definido antes, podem ser preparadas por síntese química. É ainda divulgado que as sequências de aminoácidos ou polipeptídeos de entre 80 e 200 aminoácidos, ou outras subfaixas adequadas tal como aqui definido antes, podem ser preparadas por sistemas de expressão microbiana recombinante in vitro e isoladas para utilização posterior. Tais sequências de aminoácidos ou polipeptídeos podem ser, quer em lisados celulares brutos, suspensões, coloides, etc, ou, alternativamente, podem ser purificadas, refinadas, tamponadas e/ou adicionalmente processadas, antes de formular em conjunto com agentes auxiliares habituais agroquímicos.

[0466] Especificamente metodologias recombinantes geralmente envolvem a inserção de uma molécula de DNA que expressa uma sequência de aminoácidos, proteína ou polipeptídeo de interesse em um sistema de expressão para o qual a molécula de DNA é heteróloga (ou seja, não normalmente presente no hospedeiro). A molécula de DNA heteróloga é inserida no sistema de expressão ou vetor em orientação de sentido adequada e quadro de leitura correto. O vetor contém os elementos necessários para a transcrição e tradução das sequências de codificação de proteínas inseridas. A transcrição do DNA é dependente da presença de um promotor. De modo semelhante, a tradução de mRNA em procariotas depende da presença dos sinais procarióticos adequados que diferem dos eucarióticos. Para uma revisão sobre a expressão do gene maximizando, vide Roberts e Lauer, Methods in Enzymology 68: 473 (1979). Independentemente das sequências reguladoras específicas empregues, a molécula de DNA é clonada no vetor usando procedimentos de clonagem convencionais na técnica, como descrito por Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Laboratory, Cold Springs Harbor, Nova Iorque (1989). Uma vez que a molécula de DNA isolada que codifica a proteína foi clonada em um sistema de expressão, ela está pronta para ser incorporada em uma célula hospedeira. Esta incorporação pode ser realizada por diversas formas de transformação, dependendo do vetor / sistema de célula hospedeira. As células hospedeiras adequadas incluem, mas não estão limitadas a, bactérias, vírus, leveduras, células de mamífero, insetos, vegetais, e outros semelhantes. Opcionalmente, as células hospedeiras recombinantes podem ser células hospedeiras que expressam um sistema de secreção nativo ou recombinante, tipo III funcional. Isto está descrito em detalhes na US 6.596.509. Como uma consequência de expressar o sistema de secreção de tipo III funcional, as células irão expressar o polipeptídeo e, em seguida, segregar a proteína para o meio de cultura. Isto pode simplificar o isolamento e purificação do polipeptídeo. As células hospedeiras recombinantes podem ser cultivadas em câmaras de fermentação apropriadas, de preferência sob condições de temperatura e de nutrientes que optimizar o crescimento das células hospedeiras e a expressão do polipeptídeo. As pessoas especialistas na técnica são capazes de identificar as condições ideals para as células hospedeiras particulares. Após a fermentação, por exemplo, a suspensão bacteriana pode ser diluída em, por exemplo, cerca de 2 a 5 volumes de desdobramento de um tampão para ajustar o pH entre cerca de 5,5 a 10, mais preferivelmente a um pH entre cerca de 7 a 9, e ainda mais preferivelmente de um pH de cerca de 8,0. Os tampões adequados são bem conhecidos na técnica e podem incluir, por exemplo, tampão de fosfato de potássio ou um tampão de Tris-EDTA. A concentração do tampão pode ser de cerca de 0,001 mM a cerca de 0,5 M. Após o ajuste do pH, a solução de suspensão (bacteriana) é tratada termicamente a uma temperatura de cerca de 60-130 °C, de preferência a uma temperatura de cerca de 95-125 °C. O tratamento térmico pode ser realizado por qualquer período de tempo adequado. Em uma modalidade, o tratamento térmico é efetuado durante um período de cerca de cinco minutos até cerca de 30 minutos. A solução de suspensão aquecida é então arrefecida. Uma temperatura fria adequada é, sem limitação, cerca de 35-55 °C, de preferência cerca de 45 °C. Após arrefecimento, as células bacterianas na suspensão bacteriana são lisadas, se necessário, para liberar o polipeptídeo. A lise celular pode ser realizada, por exemplo, contactando a suspensão bacteriana com uma lisozima. A concentração de lisozima pode ser em qualquer lugar desde cerca de 2 ppm a 100 ppm. Alternativamente, a lise celular pode envolver métodos não químicos, tais como alta pressão ou sonicação, ambas as quais são bem conhecidas por pessoas com conhecimentos normais na técnica. Pode ser desejável, após a lise celular, incubar a suspensão bacteriana. Tempos de incubação adequados podem variar. Por exemplo, pode ser desejável incubar a suspensão bacteriana durante um período de cerca de 30-45 minutos a uma temperatura de cerca de 40-42 °C. Após a lise, o polipeptídeo desejado pode ser, posteriormente, extraída através da remoção dos resíduos celulares e as proteínas desnaturadas resultantes da etapa de tratamento térmico anterior. Em uma modalidade, o extrato é centrifugado durante cerca de 10-20 minutos para remover alguns dos detritos de células. Velocidades de centrifugação adequadas podem ser desde cerca de 4.000 a 20.000 rpm e o tempo de giro pode ser de cerca de 10 minutos a 20 minutos. Além disso, em seguida, os detritos celulares podem ser removidos por tratamento térmico e centrifugação do sobrenadante para se obter um extrato líquido que é substancialmente livre de detritos celulares através da remoção de mais do que cerca de 60%, 70%, 80%, 90%, ou 95% de sólidos totais. Este tratamento térmico subsequente pode ser realizado a uma temperatura de cerca de 60 °C durante até cerca de duas horas, a cerca de 100 °C durante cerca de 10 minutos, ou a cerca de 121 °C com 15 psi de pressão durante cerca de 5 minutos. Estas temperaturas e tempos podem variar, dependendo de outras condições. O método de preparação de uma composição líquida estável, contendo uma sequência de aminoácidos ou polipeptídeo como aqui descrito envolve adicionalmente a introdução no extrato líquido um agente biocida e, opcionalmente, um ou ambos de um inibidor da protease e um tensoativo não iônico, obtendo-se assim uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo. Em uma modalidade, um inibidor de protease é introduzido no extrato líquido sem um tensoativo não iônico. Em uma outra modalidade, um tensoativo não iônico é introduzido no extrato líquido sem um inibidor de protease. Em uma modalidade adicional, tanto um inibidor da protease quanto um tensoativo não iônico são introduzidos no extrato líquido. Em ainda outra modalidade, nem um inibidor da protease nem um tensoativo não iônico são introduzidos no extrato líquido. Alternativamente, a estabilidade da composição líquida tal como aqui divulgado pode ser avaliada utilizando, por exemplo, análise por HPLC ou outros procedimentos adequados que podem identificar a quantidade de uma proteína ou polipeptídeo específico. A estabilidade das sequências de aminoácidos ou polipeptídeos em uma composição, tal como aqui divulgado pode ser determinada por comparação da quantidade de proteína na composição líquida envelhecida com a de uma composição líquida recentemente preparada ou com uma quantificação anterior realizada na mesma composição. A medição da estabilidade de proteínas se correlaciona fortemente com uma retenção da sua atividade. Agentes auxiliares agroquímicos usuais são bem conhecidos na técnica e incluem, mas não estão limitados a solventes aquosos ou orgânicos, agentes de tamponamento, acidificantes, tensoativos, agentes umectantes, agentes de espalhamento, agentes de pegajosidade, etiquetas, veículos, preenchedores, espessantes, emulsionantes, dispersantes, agentes sequestrantes, agentes antissedimentação, modificadores de reologia, antiespumantes, fotoprotetores, agentes anticongelantes, biocidas, agentes de penetração, óleos minerais ou vegetais, pigmentos e agentes de controle de movimento ou qualquer combinação adequada destes. Em ainda uma outra modalidade, a invenção proporciona um polipeptídeo de entre 80 e 200 aminoácidos ou as subfaixas aqui divulgadas antes, obtidas por seleção de afinidade para um determinado alvo de pragas de planta, que é capaz de inibir o crescimento e/ou a atividade de uma praga de planta com uma concentração inibitória mínima de cerca de 0,00001 a 1 μM. Em modalidades particulares dos métodos como aqui divulgados para proteger, prevenir, curar ou tratar uma planta a partir de uma infecção por um fungo, polipeptídeos ou composições como aqui descritos são direta ou indiretamente aplicados à planta por pulverização, atomização, formação de espuma, nebulização, em hidrocultura / hidroponia, revestimento, submersão, e/ou incrustantes.

SEQUÊNCIAS DE ÁCIDO NUCLEICO

[0467] Em um outro aspecto, a presente invenção proporciona sequências de ácidos nucleicos que codificam para as sequências de polipeptídeos nas composições como aqui descritas (ou seus fragmentos) adequados.

[0468] Estas sequências de ácido nucleico também podem ser na forma de um vetor ou um construto genético ou polinucleotídeo. As sequências de ácidos nucleicos, como aqui divulgadas podem ser sequências sintéticas ou semissintéticas, sequências de nucleotídeos que foram isoladas a partir de uma biblioteca (e, em particular, uma biblioteca de expressão), sequências de nucleotídeos que foram preparadas por PCR utilizando iniciadores que se sobrepõem, ou sequências de nucleotídeos que foram preparadas utilizando técnicas de síntese de DNA conhecidas de per si.

CONSTRUTOS, VETORES, CÉLULAS HOSPEDEIRAS

[0469] Os construtos genéticos como aqui divulgados podem ser DNA ou RNA, e são preferivelmente DNA de duplo filamento. Os construtos genéticos da invenção podem também estar numa forma adequada para a transformação da célula hospedeira pretendida ou organismo hospedeiro numa forma adequada para a integração no DNA genômico da célula hospedeira pretendida ou numa forma adequada para replicação independente, manutenção e/ou herança no organismo hospedeiro pretendido. Por exemplo, os construtos genéticos da presente invenção podem estar na forma de um vetor, tal como por exemplo, um plasmídeo, cosmídeo, YAC, um vetor viral ou de transposon. Em particular, o vetor pode ser um vetor de expressão, ou seja, um vetor que pode prover a expressão in vitro e/ou in vivo (por exemplo, em uma célula hospedeira adequada, organismo hospedeiro e/ou sistema de expressão).

[0470] Por conseguinte, em um outro aspecto adicional, a presente invenção também proporciona vetores compreendendo uma ou mais sequências de ácidos nucleicos da invenção.

[0471] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção proporciona hospedeiros ou células hospedeiras que expressam ou são capazes de expressar uma ou mais sequências de aminoácidos, como aqui divulgado. Os exemplos adequados de hospedeiros ou células hospedeiras para a expressão das sequências de aminoácidos, polipeptídeos da invenção serão evidentes para o versado na técnica.

[0472] A aplicação também descreve, os polipeptídeos de entre 80 e 200 aminoácidos ou as subfaixas aqui discutidas antes, permanecem estáveis numa composição de controle de agroquímicos ou biológico, tal como definido, o que significa que a integridade e a atividade pesticida, tal como definido, o polipeptídeo é mantido nas condições de armazenagem e/ou as condições de utilização da composição agroquímica, que podem incluir temperaturas elevadas, ciclos de congelamento-descongelamento, alterações do pH ou força iônica, irradiação UV, a presença de produtos químicos nocivos e semelhantes. Mais preferivelmente, estes polipeptídeos de entre 80 e 200 aminoácidos permanecem estáveis na composição agroquímica quando a composição agroquímica é armazenada à temperatura ambiente durante um período de dois anos, ou quando a composição agroquímica é armazenada a 54 °C durante um período de duas semanas. Particularmente, os polipeptídeos de entre 80 e 200 aminoácidos que integram uma composição agroquímica retém a atividade de pelo menos cerca de 70%, mais particularmente pelo menos cerca de 70% a 80% de atividade, mais particularmente cerca de 80% a 90% de atividade, depois de ter sido armazenada na composição agroquímica à temperatura ambiente durante um período de dois anos, ou quando a composição agroquímica que contém o polipeptídeo é armazenado a 54 °C por um período de duas semanas. Em ainda uma outra modalidade, para utilização nos métodos aqui descritos, o pedido revela sequências de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos de entre 80 e 200 aminoácidos, em que os polipeptídeos são obtidos por seleção de afinidade a um alvo patogênico específico da planta, cujo polipeptídeo é capaz de inibir o crescimento e/ou a atividade de uma praga de culturas a uma concentração inibitória mínima de cerca de 0,00001 a 1 μM. Também são descritos os genes quiméricos que compreendem os seguintes elementos de DNA operacionalmente ligadas: a) uma unidade de promotor expressável, b) uma região de DNA que quando transcrita produz uma molécula de mRNA capaz de ser traduzida em um poliptido e c) uma região da extremidade 3' que compreende terminação da transcrição e sinais de poliadenilação funcionando em células da referida planta.

[0473] Um "gene quimérico" ou "construto quimérico" é uma sequência de ácido nucleico recombinante em que um promotor (por exemplo, uma planta promotor expressável) ou sequência de ácido nucleico regulador está operacionalmente ligado a, ou associados com, uma sequência de ácido nucleico que codifica para um mRNA, de tal modo que a sequência de ácido nucleico reguladora é capaz de regular a transcrição ou a expressão da sequência de codificação de ácido nucleico associada, quando introduzida em uma célula tal como uma célula de planta. A sequência de ácido nucleico reguladora do gene quimérico não é normalmente ligada operacionalmente à sequência de ácido nucleico associada como encontrado na natureza. Na presente invenção, um "promotor vegetal" inclui elementos reguladores, que medeiam a expressão de um segmento de sequência de codificação em células vegetais. Para a expressão em plantas, a molécula de ácido nucleico deve ser operativamente ligada a um promotor ou compreender adequado que expressa o gene no ponto certo no tempo e com o padrão de expressão espacial requerida. O termo "operativamente ligado", tal como aqui utilizado refere-se a uma ligação funcional entre a sequência de promotor e o gene de interesse, de tal modo que a sequência do promotor é capaz de iniciar a transcrição do gene de interesse. Promotores expressáveis de planta compreendem sequências de ácidos nucleicos que são capazes de dirigir a expressão de um transgene numa planta. Exemplos de promotores expressáveis de plantas são promotores constitutivos que são transcricionalmente ativos durante a maior parte, mas não necessariamente todas, as fases de crescimento e desenvolvimento e na maioria das condições ambientais, em pelo menos uma célula, tecido ou órgão, outros promotores são promotores indutíveis, outros exemplos são promotores específicos de tecidos, ainda outros exemplos são promotores induzidos de estresse abiótico. O gene quimérico (ou o cassete de expressão) quando transformado em uma planta expressa um ácido nucleico que resulta na expressão de uma proteína. Também é divulgado um vetor recombinante que compreende um cassete de expressão (ou um gene quimérico) como aqui descrito antes.

[0474] O termo "terminador" engloba uma sequência de controle que é uma sequência de DNA no final de uma unidade de transcrição que sinaliza processamento 3' e poliadenilação do transcrito primário e uma terminação da transcrição. O terminador pode ser derivado do gene natural, a partir de uma variedade de outros genes vegetais, ou de T- DNA. O terminador a ser adicionado pode ser derivado de, por exemplo, os genes da sintase de nopalina ou sintase de octopina, ou, alternativamente, a partir de outro gene vegetal, ou de menor preferência a partir de qualquer outro gene eucariótico.

[0475] "Marcador selecionável", "gene marcador selecionável" ou "gene repórter" inclui qualquer gene que confere um fenótipo de uma célula na qual ele é expresso para facilitar a identificação e/ou seleção de células que são transfectadas ou transformadas com um construto de ácido nucleico da invenção. Estes genes marcadores permitem a identificação de uma transferência bem sucedida das moléculas de ácidos nucleicos através de uma série de princípios diferentes. Marcadores adequados podem ser selecionados a partir de marcadores que conferem resistência a antibióticos ou a herbicidas, que introduzem um novo traço metabólico ou que permitem a seleção visual. Exemplos de genes marcadores selecionáveis incluem genes que conferem resistência aos antibióticos (tais como nptII que fosforila a neomicina e canamicina, ou HPT, que fosforila higromicina, ou genes que conferem resistência a, por exemplo, bleomicina, estreptomicina, tetraciclina, cloranfenicol, ampicilina, gentamicina, geneticina (G418), espectinomicina ou blasticidina), a herbicidas (por exemplo, bar, que fornece resistência à Basta ®; aroA ou gox que fornece resistência contra o glifosato, ou os genes que conferem resistência a, por exemplo, imidazolinonas, fosfinotricina ou sulfonilureia), ou genes que conferem um traço metabólico (tal como manA que permite que as plantas utilizem manose como única fonte de carbono ou xilose isomerase para a utilização de xilose, ou marcadores antinutritivas, tais como a resistência a 2-desoxiglucose). Expressão de genes marcadores visuais resulta na formação de cor (por exemplo, β-glucuronidase, GUS ou β- galactosidase com os seus substratos coloridos, por exemplo, X-Gal), luminescência (tais como o sistema luceferase / luciferina) ou fluorescência (proteína fluorescente verde, GFP e seus derivados). Essa lista representa apenas um pequeno número de possíveis marcadores. O versado qualificado está familiarizado com esses marcadores. Diferentes marcadores são preferidos, dependendo do organismo e do método de seleção. Sabe-se que após a integração estável ou transiente de ácidos nucleicos em células de plantas, apenas uma minoria das células leva o DNA estranho e, se desejado, o integra no seu genoma, dependendo do vetor de expressão usado e da técnica de transfecção usada. Para identificar e selecionar estes integrantes, um gene que codifica para um marcador de seleção (tal como os descritos acima) é geralmente introduzido nas células hospedeiras em conjunto com o gene de interesse. Estes marcadores podem ser usados, por exemplo, em mutantes nos quais estes genes não são funcionais, por exemplo, eliminação por métodos convencionais. Além disso, as moléculas de ácido nucleico que codifica um marcador selecionável podem ser introduzidas em uma célula hospedeira no mesmo vetor que compreende a sequência que codifica os polipeptídeos da invenção ou utilizadas nos métodos da invenção, ou então num vetor separado. As células que foram transfectadas estavelmente com o ácido nucleico introduzido podem ser identificadas por exemplo, por seleção (por exemplo, as células que integraram o marcador selecionável sobrevivem, enquanto as outras células morrem).

[0476] Uma vez que os genes marcadores, especialmente genes de resistência a antibióticos e herbicidas, não são mais necessários ou são indesejáveis na célula hospedeira transgênica, uma vez que os ácidos nucleicos têm sido introduzidos com sucesso, o processo de acordo com a invenção para a introdução de ácidos nucleicos vantajosamente emprega técnicas que permitir a remoção ou a excisão destes genes marcadores. Um tal método é o que é conhecido como cotransformação. O método de cotransformação emprega dois vetores para a transformação simultânea, um vetor de rolamento do ácido nucleico de acordo com a invenção e um segundo portador do gene (s) marcador. Uma grande parte dos transformantes recebe ou, no caso de plantas, compreende (até 40% ou mais dos transformantes), ambos os vetores. Em caso de transformação com Agrobacterium, os transformantes normalmente recebem somente uma parte do vetor, isto é, a sequência flanqueada por T-DNA, que geralmente representa o cassete de expressão. Os genes marcadores podem ser subsequentemente removidos da planta transformada através da realização de cruzamentos. Em um outro método, genes marcadores integrados num transposon são utilizados para a transformação em conjunto com o ácido nucleico desejado (conhecida como a tecnologia Ac / Ds). Os transformantes podem ser cruzados com uma fonte de transposase ou dos transformantes são transformados com um construto de ácido nucleico que confere uma expressão de transposase, transiente ou estável. Em alguns casos (aprox. 10%), o transposon salta para fora do genoma da célula hospedeira, uma vez que tenha ocorrido a transformação bem sucedida e é perdido. Em uma outra série de casos, o transposon salta para uma localização diferente. Nestes casos, o gene marcador deve ser eliminado através da realização de cruzamentos. Em microbiologia, técnicas que foram desenvolvidas tornam possível ou facilitam a detecção de tais eventos. Um método ainda vantajoso se baseia no que é conhecido como sistemas de recombinação; cuja vantagem é que a eliminação por cruzamento pode ser dispensada. O sistema melhor conhecido deste tipo é o que é conhecido como o sistema Cre / lox. Cre1 é uma recombinase que remove as sequências situadas entre as sequências loxP. Se o gene marcador é integrado entre as sequências loxP, ele é removido uma vez que a transformação tenha ocorrido com sucesso, através da expressão da recombinase. Outros sistemas de recombinação são sistema HIN/HIX, FLP/FRT e REP/STB (Tribble et al., J. Biol Chem, 275, 2000: 22.255-22.267; Velmurugan et al., J. Cell Biol, 149, 2000: 553-566). A integração específica de sítio no genoma da planta das sequências de ácido nucleico de acordo com a invenção é possível.

[0477] Para os fins da invenção, "transgênico", "transgene" ou "recombinante" significa, relativamente, por exemplo, uma sequência de ácido nucleico, um cassete de expressão, construto de gene ou um vetor que compreende a sequência de ácido nucleico ou um organismo transformado com as sequências de ácidos nucleicos, vetores ou cassetes de expressão de acordo com a invenção.

[0478] Uma planta transgênica para os fins da presente invenção é, portanto, entendida como significando, como acima, que os ácidos nucleicos utilizados no método da invenção não estão presentes no, ou proveniente de, no genoma da referida planta, ou estão presentes no genoma da referida planta, mas não no seu local natural no genoma da referida planta, sendo possível que os ácidos nucleicos a ser expressa heterologamente ou homologamente. No entanto, como mencionado, transgênica também significa que, enquanto os ácidos nucleicos de acordo com a invenção ou utilizados no método da invenção são a sua posição natural no genoma de uma planta, a sequência foi alterada em relação à sequência natural, e/ou que as sequências reguladoras das sequências naturais foram modificados. Transgênico é de preferência entendido como significando a expressão dos ácidos nucleicos de acordo com a invenção a um locus não natural no genoma, ou seja expressão homóloga ou, heteróloga dos ácidos nucleicos ocorre. Plantas transgênicas preferidas são aqui mencionadas. O termo "expressão" ou "expressão do gene" entende-se a transcrição de um gene específico ou genes específicos ou construção genética específica. O termo "expressão" ou "expressão do gene" significa, em particular, a transcrição de um gene ou genes ou construção genética em RNA estrutural (rRNA, tRNA) ou mRNA com ou sem subsequente tradução deste último em proteína. O processo inclui a transcrição do DNA e transformação do produto de mRNA resultante.

[0479] O termo "aumento da expressão" ou "sobre-expressão", tal como aqui utilizado, significa qualquer forma de expressão que é adicional ao nível original de expressão de tipo selvagem. Para os fins desta invenção, o nível inicial de expressão do tipo selvagem pode também ser igual a zero, ou seja, ausência de expressão ou expressão incomensurável.

[0480] Os métodos para aumentar a expressão de genes ou produtos de genes estão bem documentados na arte e incluem, por exemplo, a sobre-expressão conduzida por promotores apropriados (tal como aqui descrito antes), a utilização de intensificadores de transcrição ou de tradução potenciadores. Os ácidos nucleicos isolados que servem como promotor ou potenciador elementos podem ser introduzidos na posição apropriada (normalmente a montante) de uma forma não heterólogo de um polinucleotídeo, de modo a regular a expressão de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo de interesse. Se a expressão do polipeptídeo é desejada, é geralmente desejável incluir uma região de poliadenilação na extremidade 3' de uma região de codificação de polinucleotídeo. A região de poliadenilação pode ser derivada do gene natural, a partir de uma variedade de outros genes vegetais, ou de T-DNA. A sequência da extremidade 3' a ser adicionada pode ser derivada de, por exemplo, os genes da sintase de nopalina sintase de octopina ou, ou, alternativamente, a partir de outro gene vegetal, ou de menor preferência a partir de qualquer outro gene eucariótico.

[0481] Uma sequência de íntron também pode ser adicionada à extremidade 5' não traduzida (UTR) ou a sequência de codificação da sequência de codificação parcial para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula-se no citosol. A inclusão de um íntron divisível na unidade de transcrição, em ambos os construtos de expressão animais e vegetais foi mostrada para aumentar a expressão do gene em ambos os níveis de mRNA e proteína de até 1000 vezes (Buchman e Berg (1988) Mol Cell Biol. 8: 4395-4405; Callis et al. (1987) Genes Dev 1: 1183-1200). Tal melhoramento de íntron da expressão do gene é tipicamente maior quando colocado próximo da extremidade 5' da unidade de transcrição. Utilização da íntrons de milho íntron Adh1 - S 1, 2, e 6, íntron bronze-1 são conhecidos na técnica. Para informação geral, vide: The Maize Handbook, Capítulo 16 1, Freeling e Walbot, Eds, Springer, Nova Iorque (1994).

[0482] O termo "introdução" ou "transformação" tal como aqui referido compreende a transferência de um polinucleotídeo exógeno ou gene quimérico (ou cassete de expressão) para uma célula hospedeira, independentemente do método utilizado para a transferência. Tecido de planta capaz de propagação clonal subsequente, quer por organogênese ou embriogênese, pode ser transformado com um construto genético da presente invenção e uma planta inteira regenerada a partir de lá. O tecido particular escolhido variará dependendo dos sistemas de propagação clonal disponíveis para, e mais adequados para, as espécies particulares a serem transformadas. Tecidos-alvo exemplares incluem discos de folhas, pólen, embriões, cotilédones, hipocótilo, megagametofitos, tecido caloso, tecido meristemático existente (por exemplo, meristema apical, gemas axilares e meristemas radiculares), e tecido de meristema induzido (por exemplo, meristema cotilédones e meristema hipocótilo). O polinucleotídeo pode ser transientemente ou estavelmente introduzido em uma célula hospedeira e pode ser mantido não integrado, por exemplo, como um plasmídeo. Em alternativa, pode ser integrado no genoma do hospedeiro. A célula de planta transformada resultante pode então ser usada para regenerar uma planta transformada de uma maneira conhecida das pessoas versadas na técnica.

[0483] A transferência de genes estranhos no genoma de uma planta é chamada de transformação. Transformação de espécies vegetais é agora uma técnica bastante rotineira. Vantajosamente, qualquer um dos vários métodos de transformação pode ser usado para introduzir o gene de interesse em uma célula ancestral adequada. Os métodos descritos para a transformação e regeneração de plantas a partir de tecidos de plantas ou células de plantas podem ser utilizados para transformação transiente ou estável. Os métodos de transformação incluem a utilização de lipossomas, eletroporação, produtos químicos que aumentem a captação de DNA livre, injeção do DNA diretamente na planta, bombardeamento de partículas, transformação usando vírus ou pólen e microprojeção. Os métodos podem ser selecionados a partir do método de cálcio / polietilenoglicol para protoplastos (Krens, FA et al., (1982) Nature 296, 72-74; Negrutiu I et al. (1987) Plant Mol Biol 8: 363-373); eletroporação de protoplastos (Shillito R.D. et al. (1985) Bio / Technol 3, 1099-1102.); microinjeção em material vegetal (Crossway A et al, (1986) Mol Gen Genet 202: 179185); bombardeamento de partículas com DNA ou RNA revestido (Klein TM et al, (1987) Nature 327: 70) Infecção por vírus (não integrativos) e semelhantes. As plantas transgênicas, incluindo espécies vegetais transgênicas, são preferivelmente produzidas através de transformação mediada por Agrobacterium. Um método de transformação vantajosa é a transformação in planta. Para este fim, é possível, por exemplo, permitir que as Agrobacteria teum em sementes de plantas ou inoculem o meristema da planta com Agrobacterium. Ela provou ser particularmente vantajosa de acordo com a invenção para permitir que uma suspensão de Agrobacterium transformada atue na planta intacta ou, pelo menos, sobre os primórdios da flor. A planta é subsequentemente cultivada até que as sementes da planta tratada sejam obtidas (Clough e Bent, Plant J. (1998) 16, 735-743). Os métodos para a transformação mediada por Agrobacterium de arroz incluem métodos bem conhecidos para a transformação de arroz, tais como os descritos em qualquer um dos seguintes: Pedido de Patente Europeia EP1 198985, Aldemita and Hodges (Planta 199: 612-617, 1996); Chan et al. (Plant Mol Biol 22 (3): 491 -506, 1993), Hiei et al. (Plant J 6 (2): 271 -282, 1994), cujas descrições saõ incorporadas or referência aqui como se fosse completamente apresentada. No caso de trasnformação de milho, o método preferido é como descrito em Ishida et al. (Nat. Biotechnol 14(6): 745-50, 1996) ou Frame et al. (Plant Physiol 129(1): 13-22, 2002), cujas descrições saõ incorporadas ou referência aqui como se fosse completamente apresentada. Tais métodos são adicionalmente descritos por meio de exemplos em B. Jenes et al., Techniques for Gene Transfer, in: Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press (1993) 128143 and in Potrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225). Os ácidos nucleicos ou o constructo a ser expresso é de preferência clonado em um vetor, que é adequado para a transformação de Agrobacterium tumefaciens, por exemplo, pBIN19 (Bevan et al. (1984) Nucl. Acids Res. 112-871). Agrobacteria transformada por tal um vetor pode, então, ser usada de uma maneira conhecida para a transformação de plantas, tais como plantas utilizadas como um modelo, tal como a Arabidopsis (Arabidopsis thaliana está dentro do âmbito da presente invenção não é considerada como uma planta de colheita), ou cultura de plantas, tais como, a título de exemplo, as plantas de tabaco, por exemplo, por imersão de folhas moídas ou folhas cortadas em uma solução agrobacteriana e depois sua cultura em meios adequados. A transformação de plantas por meio de Agrobacterium tumefaciens é descrita, por exemplo, por Hofgen e Willmitzer em Nucl. Acid Res. (1988) 16, 9877, ou é conhecida, nomeadamente, do F.F. White, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; in Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38.

[0484] Além da transformação de células somáticas, que depois têm de ser regeneradas em plantas intactas, também é possível transformar as células de meristemas de plantas e, em particular, as células que se desenvolvem em gâmetas. Neste caso, os gâmetas transformados seguir o desenvolvimento natural da planta, dando origem a plantas transgênicas. Assim, por exemplo, sementes de Arabidopsis são tratadas com Agrobacteria e sementes são obtidas a partir do desenvolvimento de plantas das quais uma certa proporção é transformada e assim transgênica [Feldman, KA e Marks MD (1987). Mol Gen Genet 208: 1 -9; Feldmann K (1992). In: C Koncz, NH Chua e J Shell, eds, Methods in Arabidopsis Research. Word Scientific, Singapore, pp. 274-289]. Métodos alternativos estão baseados na remoção repetida das inflorescências e incubação do local de excisão no centro da roseta com Agrobacteria transformada, através da qual as sementes transformadas podem igualmente ser obtidas em um momento posterior (Chang (1994). Plant J. 5 : 551 -558; Katavic (1994) Mol Gen Genet, 245: 363-370). No entanto, um método particularmente eficaz é o método de infiltração por vácuo com as suas modificações tais como o método de "mergulho floral". No caso de infiltração por vácuo da Arabidopsis, as plantas intactas sob pressão reduzidas são tratadas com uma suspensão agrobacteriaana [Bechthold, N (1993). CR Acad Sci Paris Life Sci, 316: 1194-1199], enquanto que no caso do método de "mergulho floral" o tecido floral desenvolvimento é incubado com uma suspensão brevemente agrobacteriana tratada com tensoativo [Clough, SJ e Bent AF (1998) The Plant J. 16, 735-743]. Uma certa proporção de sementes transgênicas são colhidas em ambos os casos, e estas sementes podem ser distinguidas a partir de sementes não transgênicas através do crescimento sob as condições seletivas acima descritas. Além disso, a transformação estável de plastídios é vantajosa, porque plastídios são herdados maternalmente é a maioria das culturas reduzem ou eliminam o risco de transgene fluir através do pólen. A transformação do genoma do cloroplasto é geralmente conseguida através de um processo que tem sido apresentado esquematicamente em Klaus et al., 2004 [Nature Biotechnology 22 (2), 225-229]. Resumidamente, as sequências a serem transformadas são clonadas juntamente com um gene marcador selecionável entre sequências homólogas flanqueando o genoma do cloroplasto. Estes homólogos flanqueando sequências direcionam integração específica de sítio direto para o plastoma. Transformação plasticida foi descrita por muitas espécies de plantas diferentes e uma visão geral é dada em Bock (2001) Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology. J Mol Biol. 2001 Sep 21 ; 312 (3):425-38 or Maliga, P (2003) Progress towards commercialization of plastid transformation technology. Trends Biotechnol. 21, 20-28. Outros progressos da biotecnologia tem sido recentemente relatados na forma de marcadores de transformantes plasticidas livres, que podem ser produzidos por um gene marcador cointegrado transiente (Klaus et al., 2004, Nature Biotechnology 22 (2), 225-229).

[0485] As células de plantas geneticamente modificadas podem ser regeneradas por meio de todos os métodos com que o versado está familiarizado. Métodos adequados podem ser encontrados nas publicações acima mencionadas por Kung S.D. e R. Wu, Potrykus ou Hofgen e Willmitzer.

[0486] Geralmente, após a transformação, as células vegetais ou agrupamentos de células são selecionadas quanto à presença de um ou mais marcadores, que são codificados por genes de plantas expressável cotransferidas com o gene de interesse, após o que o material de transformação é regenerado numa planta completa. Para selecionar as plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, em regra, submetido a condições seletivas de modo que as plantas transformadas podem ser distinguidas a partir de plantas não transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas do modo acima descrito podem ser plantadas e, após um período de crescimento inicial, submetidas a uma seleção adequada por pulverização. Uma outra possibilidade consiste no cultivo de sementes, se for o caso, após a esterilização, em placas de ágar utilizando um agente de seleção adequado, de modo que apenas as sementes transformadas podem crescer em plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são testadas quanto à presença de um marcador selecionável, tal como os descritos acima. Após a transferência de DNA e regeneração, as plantas transformadas putativamente também podem ser avaliadas, por exemplo, utilizando análise de Southern, para detectar a presença do gene de interesse, número de cópias e/ou organização genômica. Alternativamente ou adicionalmente, os níveis de DNA recentemente introduzidos de expressão podem ser controlados por meio de análise de Northen e/ou Western, sendo ambas as técnicas bem conhecidas das pessoas com conhecimentos comuns na técnica.

[0487] As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por uma variedade de meios, tais como por técnicas clássicas de propagação clonal ou reprodução. Por exemplo, uma primeira geração (ou T1) de plantas transformadas pode ser autopolinizada e os transformantes de segunda geração homozigóticos (ou T2) selecionados, e as plantas T2 podem então ser ainda mais propagadas através de técnicas de reprodução clássicas. Os organismos transformados gerados podem tomar uma variedade de formas. Por exemplo, eles podem ser quimeras de células transformadas e células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas para conter o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um enxerto transformado enxertado a um rebento não transformado).

[0488] Os seguintes exemplos não limitativos descrevem métodos e meios de acordo com a invenção. Salvo indicação em contrário nos exemplos, todas as técnicas são realizadas de acordo com protocolos padrão na área. Os exemplos seguintes são incluídos para ilustrar modalidades da invenção. Os versados na técnica deverão, à luz da presente descrição, apreciar que muitas alterações podem ser feitas nas modalidades específicas que são divulgadas e ainda assim obter um resultado igual ou similar sem afastamento do conceito, espírito e âmbito da invenção. Mais especificamente, será aparente que certos agentes que são quimicamente e fisiologicamente relacionados podem ser substituídos pelos agentes aqui descritos enquanto seriam alcançados os resultados iguais ou semelhantes. Todos esses substitutos, semelhantes e modificações aparentes para os versados na técnica são considerados como estando dentro do espírito, âmbito e conceito da invenção como definido pelas reivindicações anexas.

[0489] Assim, as Figuras, Listagem de Sequências e a parte experimental / Exemplos apenas são fornecidos para ilustrar adicionalmente a invenção e não devem ser interpretados ou construídos como limitando o âmbito da invenção e/ou das reivindicações anexas, em qualquer forma, a menos que explicitamente indicado em contrário aqui.

[0490] A descrição acima irá agora ser descrita adicionalmente por meio dos seguintes exemplos não limitativos e Figuras, em que as figuras mostram:

[0491] Figura 1: Ligação de VHH como extratos periplasmáticos contendo VHH bruto para GlcCer fúngico revestido de Pleurotus Citrinopileatus. Ligação VHH anti-GlcCer_A GlcCer fúngico, nenhuma ligação é observada para VHH não relacionado.

[0492] Figura 2: Especificidade de ligação de VHH 41 D01. Ligação de VHH 41D01 purificado a 0.1 μg/ml a GlcCer fúngico revestido de Fusarium oxysporum ou Pleurotus Citrinopileatus, e GlcCer não fúngico de planta (soja), ou mamífero (cRNAe de porco). As barras representam valores médios de OD 405 nm, barras de erro representam erros padrão da média de n = 6. 41D01 VHH anti-GlcCer se liga especificamente a GlcCer fúngico e GlcCer não vegetal ou mamíferos.

[0493] Figura 3A: Especificidade de ligação de VHH. A ligação de VHH purificado a 1 μg/ml a GlcCer fúngico revestido de Fusarium oxysporum ou Pleurotus Citrinopileatus. Diferentes VHH anti-GlcCer se ligam especificamente a diferente GlcCer fúngico.

[0494] Figura 3B: Especificidade de ligação de VHH. A ligação de VHH purificado a 1 μg/ml a GlcCer não revestido a partir de fungos de plantas (soja). Diferente VHH anti-GlcCer não se ligam a GlcCer de planta.

[0495] Figura 3C: Especificidade de ligação de VHH. A ligação de VHH purificado em 1 μg/ml a GlcCer de mamífero não-revestido fúngica (de porco). Diferente VHH anti-GlcCer não se ligam a GlcCer de mamíferos.

[0496] Figura 4: medição em tempo real da interação anticorpo- antígeno entre VHH 41D01 e GlcCer fúngico. VHH 41D01 se liga a GlcCer fúngico. A dissociação lenta de GlcCer de VHH 41D01 é observada. Um VHH não relacionado não se liga a GlcCer fúngico.

[0497] Figura 5: Reatividade cruzada e especificidade de VHH 41D01 e VHH 56F11. A ligação de VHH 41D01 purificado a 0,1 μg/ml e VHH 56F11 a 1 μg/ml a extratos lipídicos fúngicos revestidos, GlcCer de Pleurotus Citrinopileatus, e compostos não relacionados: pectina de maçã, pectina cítrica, ou lectina de batata. As barras representam valores médios de OD 405 nM, barras de erro representam erros padrão da média de n = 2. 41D01 VHH anti-GlcCer e VHH 56F11 se ligam especificamente a cada um dos extratos de lipídios de fungos testados. 41D01 VHH anti-GlcCer e VHH 56F11 não mostram ligação de compostos revestidos não relacionados ou poços não revestidos.

[0498] Figura 6: Ligação de VHH 41D01 em diferentes composições para GlcCer fúngico de Fusarium oxysporum. As composições aquosas que contêm 41D01 VHH anti-GlcCer a 0,1 μg/ml e inibidores da protease e/ou tensoativos e/ou conservante não iônico foram testados quanto à ligação a GlcCer fúngico. VHH 41D01 específico de GlcCer liga-se a GlcCer fúngico em todas as composições testadas, sem os efeitos adversos de qualquer um dos aditivos.

[0499] Figura 7A: Pontuação visual de crescimento fúngico. A diluição em série de VHH (41D01 de VHH anti-GlcCer, 56E05, 56F11, e 57A06, bem como VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado) foram inoculados com esporos de Botrytis cinerea (1E + 05/mL) e incubados à temperatura ambiente. Efeito sobre o crescimento de fungos de 41D01 de VHH anti-GlcCer, 56E05, 56F11, e 57A06, VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado foi quantificado com base em um conjunto de normas fotográficas. As barras representam % média do crescimento, as barras de erro representam erros padrão da média de pelo menos 3 réplicas.

[0500] Figura 7B: Pontuação visual de crescimento fúngico. A diluição em série de VHH (56C09, 56H07, 57C09, 57E07, 57E11 de VHH anti-GlcCer bem como VHH A não relacionado ou VHH B não relacionado) com esporos de Botrytis cinerea (1E + 05/mL) e incubados à temperatura ambiente. Efeito sobre o crescimento de fungos de 56C09, 56H07, 57C09, 57E07, 57E11 de VHH anti-GlcCer, VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado foi quantificado com base em um conjunto de normas fotográficas. As barras representam % média do crescimento, as barras de erro representam erros padrão da média de pelo menos 3 réplicas.

[0501] Figura 7C: Pontuação visual de crescimento fúngico. A diluição em série de VHH (54C08, 54C11, 56A05, 56A09 de VHH anti- GlcCer bem como VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado) foram inoculados com esporos de Botrytis cinerea (1E + 05/mL) e incubados à temperatura ambiente. Efeito sobre o crescimento de fungos de 54C08, 54C11, 56A05, 56A09 de VHH anti-GlcCer, VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado foi quantificado com base em um conjunto de normas fotográficas. As barras representam % média do crescimento, as barras de erro representam erros padrão da média de pelo menos 3 réplicas.

[0502] Figura 8A: Pontuação visual de crescimento de fungos de diferentes espécies fúngicas. Diluições em série de duas vezes de VHH (VHH anti-GlcCer ou VHH não relacionado) são incubadas com esporos (1E + 05/mL) de Alternaria brassicicola à temperatura ambiente. Efeito sobre o crescimento de fungos de VHH e compostos de controle foi baseado em um conjunto de padrões fotográficos. As barras representam a % média de crescimento, barras de erro representam erros padrão da média de n = 2.

[0503] Figura 8B: Pontuação visual de crescimento de fungos de diferentes espécies fúngicas. Diluições em série de duas vezes de VHH (VHH anti-GlcCer ou VHH não relacionado) são incubadas com esporos (1E + 05/mL) de Cercospora beticola, à temperatura ambiente. Efeito sobre o crescimento de fungos de VHH e compostos de controle foi baseado em um conjunto de padrões fotográficos. As barras representam a % média de crescimento, barras de erro representam erros padrão da média de n = 2.

[0504] Figura 8C: pontuação visual de crescimento de fungos de diferentes espécies fúngicas. Diluições em série de duas vezes de VHH (VHH anti-GlcCer ou VHH não relacionado) são incubadas com esporos (1E + 05/mL) de Fusarium culmorum à temperatura ambiente. Efeito sobre o crescimento de fungos de VHH e compostos de controle foi baseado em um conjunto de padrões fotográficos. As barras representam a % média de crescimento, barras de erro representam erros padrão da média de n = 2.

[0505] Figura 8D: Pontuação visual de crescimento de fungos de diferentes espécies fúngicas. Duas diluições em série de VHH (VHH anti- GlcCer ou VHH não relacionado) são incubadas com esporos (1E + 05/mL) de Verticillium dahliae, à temperatura ambiente. Efeito sobre o crescimento de fungos de VHH e compostos de controle foi baseado em um conjunto de padrões fotográficos. As barras representam a % média de crescimento, barras de erro representam erros padrão da média de n = 2.

[0506] Figura 9: Ensaio antifúngico in-vitro utilizando Penicillium expansum. Diluições em série de duas vezes de VHH foram inoculadas com esporos de P. expansum (1E + 03/mL) à temperatura ambiente. 41D01 VHH anti-GlcCer, VHH_A não relacionado, BSA, hlgG não relacionado, anticorpo monoclonal de camundongo anti-GlcCer e água foram testados. A luminescência (RLU) foi medida após 24 h de incubação. % de RLU de esporos tratados é expressa contra esporos não tratados. Os valores representam a % média de RLU, barras de erro representam erros padrão da média de n = 4.

[0507] Figura 10: A severidade da doença foi medida em folhas de tomate preventivamente tratadas com 41D01 VHH anti-GclCer, VHH_A não relacionado, ou água, e inoculadas com esporos de Botrytis cinerea (6E + 06 esporos/mL). As barras representam diâmetro da lesão média (mm) marcado a 6 dias após a infecção, barras de erro representam erros padrão da média de n = 5.

[0508] Figura 11: A severidade da doença foi medida em folhas de tomate curativamente tratadas com 41D01 VHH anti-GclCer, VHH_A não relacionado, ou BSA, e inoculadas com esporos de Botrytis cinerea (6E + 06 esporos / mL). As barras representam diâmetro da lesão média (mm) marcado em 5 dias após a infecção, barras de erro representam erros padrão da média de n = 5.

[0509] Figura 12: A severidade da doença foi medida em pêras preventivamente tratadas com 41D01 VHH anti-GclCer, VHH_A não relacionado, ou água, e inoculadas com esporos de Botrytis cinerea (1 + E 04 esporos / mL). As barras representam diâmetro da lesão média (mm) marcou aos 4 dias após a infecção, barras de erro representam erros padrão da média de n = 5

Exemplos de materiais e de métodos Exemplo 1 Isolamento de sequências de ácidos nucleicos que codificam peptídeos com afinidade para glucosilceramida fúngica

[0510] Imunizações animais: VHH foram gerados a partir de lhamas imunizadas com glicosilceramida fúngica (GlcCer). Lhamas foram imunizadas de acordo com protocolos-padrão com 6 reforços de glucosilceramida (GlcCer) (99%) purificada com cromatografia em camada fina (TLC) de Pleurotus Citrinopileatus (Nacalai Tesque). GlcCer purificada foi dissolvida em uma mistura de água: metanol: clorofórmio e corada sobre uma placa de vidro de sílica CCF. A sílica adsorvida com GlcCer foi raspada da placa e suspensa em tampão de fosfato. A suspensão foi sonicada, misturada com adjuvante incompleto de Freund, e utilizada para as injeções subcutâneas. VHH também oi gerado a partir lhamas imunizadas com fungos ou esporos germinados nativos ou de oomicetos. Lhamas foram imunizadas de acordo com protocolos padrão com 6 reforços de esporos germinados nativos de Botrytis cinerea, Phytophthora infestans ou por injeções subcutâneas. Todas as lhamas mantiveram-se saudáveis durante todo o processo de imunização e amostras de sangue foram coletadas antes e depois de imunizações.

[0511 ] Construção da biblioteca: A biblioteca de fagos de anticorpos de fagos é uma população de fagos em que cada indivíduo expõe um domínio de anticorpo de ligação ao antígeno exclusivo na sua superfície, como uma parte de uma proteína quimérica comprimida. As células mononucleares do sangue periférico foram preparadas a partir de amostras de sangue das lhamas imunizadas utilizando Ficoll-Hypaque de acordo com as declarações do fabricante. O RNA total foi extraído destas células e usado como material de partida para RT-PCR, para amplificar os fragmentos de gene que codificam VHH. Estes fragmentos foram clonados no vetor de fagemídeo pASF20. pASF20 é um vetor de expressão que é derivado de pUC119, que contém o promotor lacZ, uma sequência líder sintética, um sítio de clonagem múltipla, uma sequência de codificação de proteína pIII de colifago, um gene de resistência à ampicilina e uma origem de fago M13 para a produção de filamento simples. Na estrutura com a sequência de codificação de VHH, os códigos de vetor para um marcador de peptídeo C-terminal (His)6 e marcador de peptídeo c-myc. Os fagos foram preparados de acordo com métodos padrão (Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual; Brian K. Kay, Jill Winter, Dr. John McCafferty). 4 bibliotecas cada uma com uma diversidade clonal igual ou maior do que 1 E + 08 foram obtidas e os fagos foram produzidos assegurando apresentação da diversidade de anticorpos.

[0512] Seleções de VHH para exibição de fagos: Fagos expressando domínios de anticorpo de ligação ao antígeno específico para um antígeno particular foram isolados por seleção de fago na biblioteca para a ligação ao antígeno. GlcCer fúngico foi imobilizado em placas de múltiplos poços de poliestireno Maxisorp dissolvendo GlcCer fúngico em uma mistura de água: metanol: clorofórmio ou metanol, a diferentes concentrações, adicionando GlcCer fúngico dissolvido em poços da placa de múltiplos poçs, e permitindo que secasse durante a noite à temperatura ambiente. Poços com GlcCer fúngico revestido foram lavados e bloqueadas com 1% de gelatina de peixe na preparação de seleções de VHH por exibição de fagos. Biblioteca de fagos VHH foi permitida se ligar durante duas horas à temperatura ambiente a poços de placa de 96 poços revestidos com GlcCer fúngico. Para selecionar especificamente para a ligação de fago a GlcCer fúngico, fagos foram pré-incubados com 1% de gelatina de peixe e/ou BSA e/ou leite desnatado e/ou GlcCer de planta e/ou GlcCer de mamífero. Fagos não ligados foram removidos por lavagem extensiva e os fagos ligados foram eluídos por eluição competitiva com RsAFP2 (Osborn et al., 1995) ou com tripsina. Uma a três ciclos consecutivos de seleção foram realizados, e as titulações de fagos a partir de poços revestidos com GlcCer fúngico foram comparadas com as titulações de fago a partir de poços em branco e esfingolipídios patogênicos não alvo para o enriquecimento e especificidade, respectivamente. Enriquecimentos foram observados no primeiro e subsequentes ciclos de seleção, e as populações de fagos depois de um ou mais ciclos de seleção já mostrou especificidade para GlcCer fúngico em ELISA (não mostrado). Os clones individuais foram colhidos a partir de primeira, segunda e/ou terceira seleções de ciclos para posterior caracterização por análise da sequência e ensaios de ligação primária.

[0513] Caracterização de VHH por sequenciação e ensaios de ligação: A diversidade da população de anticorpo obtido ou domínio de anticorpo pode ser rapidamente determinada utilizando sequenciação de DNA de alto rendimento e permitindo a quantificação precisa da diversidade clonal. Anticorpo ou domínio de anticorpo de ligação e especificidade de ligação a um antígeno pode ser analisado em ensaios para a ligação a esse antígeno e comparado com os controles relacionados e não relacionados. Cada domínio de anticorpo ou anticorpo se pode ligar a um antígeno específico e, eventualmente, a variantes antigênicas do referido antígeno. A especificidade é o grau em que a ligação de um domínio de anticorpo ou anticorpo discrimina entre variantes antigênicas. A partir de clones de VHH individuais que foram selecionados a partir de primeira, segunda ou terceira seleções de exibição de fago, o DNA foi amplificado em um PCR de colônias e produtos de PCR foram sequenciados por sequenciação de Sanger. Após a análise da sequência e baseado na diversidade da sequência, VHH foram selecionados para posterior caracterização. Para verificar a especificidade das espécies, GlcCer fúngico e não fúngico de espécies alvo e não alvo foi utilizado em ensaios de ligação. Ensaios de ligação primário para identificar quais clones que foram funcionalmente selecionados a partir das bibliotecas foram realizados com GlcCer (99%) purificado com CCF ou frações de glicoesfingolipídeos (GSL) enriquecido com GlcCer a partir de A. brassicicola, B. cinerea, C. beticola, F. culmorum, F. graminearum, F. oxysporum, P. citrinopileatus P. digitatum, P. expansum, ou V. dahlia (preparados tal como descrito em Ternes et al., 1201 JBC 286: 11401-14). GlcCer de soja e GlcCer de porcino foram adquiridos de Avanti Polar Lipids. VHH foi produzido em placas de 96 poços de poços profundos e o perfil de ligação de extratos periplasmáticos contendo VHH bruto diluído foi avaliado em formato de ELISA. Da mesma forma, os ensaios de ligação foram realizados com VHH purificado. A partir dos ensaios de ligação primários 130 extratos periplasmáticas contendo VHH mostraram se ligar a GlcCer fúngico com maiores valores de OD 405 nm do que o VHH_A não relacionado, VHH_B não relacionado e em branco. Valores OD 405 nm demonstram a ligação específica de vários destes VHH de ligação de GlcCer fúngico são mostrados na Figura 1. A análise da sequência revelou 84 sequências únicas do conjunto identificado de VHH anti-GlcCer.

[0514] Caracterização adicional por seleções de ligação diferenciais: para caracterização adicional, VHH pertencente ao painel de ligação acima referido foram produzidos em E. coli em frascos de cultura de acordo com processos convencionais. VHH marcado com hexa- histidina foram purificados a partir do extrato periplasmático com resina de afinidade de metal TALON (Clontech), de acordo com as declarações do fabricante. VHH purificado foram concentrados e dialisados para PBS. VHH ainda foram purificados utilizando sistemas automatizados de purificação, utilizando uma combinação de IMAC Niquel imobilizado e colunas de dessalinização. VHH do painel de ligação que positivamente pontuou em ensaios de ligação primários, foram subsequentemente testados quanto à sua especificidade para GlcCer ou frações de parede celular de diferentes fitopatógenos fúngicos.

[0515] Como demonstrado nas Figuras 2, 3A, 3B e 3C, VHH específico de GlcCer mostrou ligação específica a GlcCer fúngico (Pleurotus citrinopileatus, Fusarium oxysporum) e não a outro GlcCer não fúngico ou poço em branco não revestido.

[0516] Ressonância de plasma de superfície: A ligação de VHH de GlcCer fúngico foi caracterizada por ressonância de plasma de superfície em um instrumento Biacore 3000. 41D01 VHH anti-GlcCer ou VHH_A não relacionado foram covalentemente ligados a superfície de chips de sensor CM5 através de acoplamento de amina, até que foi alcançado um aumento de 1000 unidades de resposta. Grupos reativos restantes foram inativados. Uma gama de concentrações de GlcCer de Fusarium oxysporum em solução preparadas de acordo com Salio et al., 2013, PNAS 110, E4753-E4761 foi injetada durante 2 minutos a uma taxa de fluxo de 30 μl/min para permitir a ligação de VHH ligados a chip. O tampão de execução sem GlcCer foi injetado sobre o chip com a mesma taxa de fluxo para permitir a dissociação espontânea de GlcCer fúngico ligado durante 10 minutos. Um valor de Koff foi calculado a partir dos sensorgramas obtidos para as diferentes concentrações de GlcCer fúngico com 1:1 de dissociação de modelo de ajuste global de Langmuir.

[0517] Para VHH anti-GlcCer uma taxa de off lenta de 4,86 * 1E-4/s foi calculada. Como mostrado na Figura 4, um VHH não relacionado não se ligou a GlcCer fúngico. GlcCer de planta (soja), de mamífero (de porco) e de fungos (Fusarium oxysporum) em solução foram injetados sequencialmente durante 2 minutos a uma taxa de fluxo de 30 μl/min para permitir a ligação ao VHH ligado a chip (41D01 VHH anti-GlcCer ou VHH_A não relacionado). O tampão de execução sem GlcCer foi injetado sobre o chip entre cada injeção com a mesma taxa de fluxo para permitir a dissociação espontânea de GlcCer ligado. Nenhuma ligação de GlcCer de planta ou de mamífero foi observada a 41D01 VHH anti-GlcCer ou VHH_A não relacionado. A ligação específica de GlcCer fúngico foi observada para 41D01 VHH anti-GlcCer e não para VHH_A não relacionado.

[0518] Ligação diferencial a diferentes extratos de lipídios fúngicos: A ligação de composições VHH anti-GlcCer de diferentes extratos lipídicos de fungo em comparação com compostos não relacionados. Extratos fúngicos foram preparados de acordo com Rodrigues et al. 2000 Infection and Immunity 68 (12): 7049-60. Resumidamente, micélio de Botrytis cinerea B05-10, Botrytis cinerea MUCL401, Botrytis cinerea R16, Botrytis cinerea (isolado da própria pera), Fusarium culmorum MUCL555, Fusarium graminearum MUCL53451, Penicillium digitatum MUCL43-410, Penicillium digitatum (isolado do próprio limão) ou Penicillium expansum CBS 146,45 foram colhidos a partir de fungos cultivados em placas de ágar e os lipídios foram extraídos com clorofórmio / metanol a 2:1 (vol / vol) e 1:2 (vol / vol); extrato de lipídios em bruto foi dividido de acordo com Folch et al. 1957. Journal of Biological Chemistry 226 (1): 497-509. Extratos lipídicos fúngicos foram recuperados a partir de fase inferior de Folch. A ligação de 41D01 VHH anti-GIcCer (0,1 μg/ml) e VHH anti-GlcCer 56F11 (1 μg/ml) foi avaliada para poços revestidos com os lipídios fúngicos extraídos (cada um em 1/20 de diluição), GlcCer de Fusarium oxysporum purificado, GlcCer de Pleurotus Citrinopileatus purificado e compostos não relacionados: pectina de maçã (pectina de maça altamente esterificada 70-75%, Sigma, cat #: 76282), pectina cítrica (pectina cítrica pouco esterificada 20-34%, Sigma, cat # P9311) ou lectina de batata (Solanum Tuberosum Lectin, Vector Labs, cat#: L-1160) ou um poço em branco não revestido. A ligação foi medida após a incubação consecutiva com substrato antibodiesadding de detecção conjugada com enzima e medindo a absorvância a 405 nm. As barras representam valores médios de OD 405 nM, barras de erro representam erros padrão da média de n = 2.

[0519] Como mostrado na Figura 5, o 41D01 e 56F11 VHH anti- GlcCer especificamente reconheceam todos os extratos de lipídios de fungos testados. 41D01 e 56F11VHH anti-GlcCer não apresentaram ligação a compostos não relacionados ou poços revestidos não revestidos. A ligação das composições de VHH anti-GlcCer a uma grande variedade de extratos lipídios fúngicos potencia uma variedade de aplicações para as composições de VHH anti-GlcCer como aqui divulgado contra vários tipos de fungos.

Ligação de VHH anti-GlcCer a GlcCer fúngico em diferentes composições aquosas:

[0520] As composições aquosas que contêm 41D01 VHH anti- GlcCer e/ou os inibidores da protease e/ou tensoativos e/ou conservantes não iônicos foram preparadas. Composição A1 (inibidores da protease: 0,06 μg/ml de aprotinina (Roche, cat #: 10236624001), 0,5 mg/mL de leupeptina (Roche, cat #: 11017101001), 24 μg/ml de 4- benzenossulfonil cloridrato de fluoreto (Sigma, A8456), 1 mM de EDTA (Carl-Roth, cat # 8040,1) e tensoativo não iônico: 0,00001% de polissorbato 20 (Tween 20, Sigma, cat # P2287); Composição A2 (inibidores de protease: 1 μg/ml de aprotinina, 2,5 μg/ml de leupeptina, 100 μg/ml de cloridrato de 4-benzenossulfonil fluoreto, 1 mM de EDTA e tensoativo não iônico: 0,05% de Polissorbato 20); Composição A3 (inibidores de protease: 2 μg/ml de aprotinina, 5 μg/ml de leupeptina, 240 μg/ml de cloridrato de 4-benzenossulfonil fluoreto, 1 mM de EDTA e tensoativo não iônico: 5% de polissorbato 20), Composição B1 (tensoativo não iônico: 0,0001 % de Polissorbato 20), Composição B2 (tensoativo não iônico: 0,05% de Polissorbato 20), Composição B3 (tensoativo não iônico: 5% de polissorbato 20) e Composição C1 (conservante: 0,05% de benzoato de sódio (Sigma, cat # B3420)). A ligação do VHH anti-GlcCer (a 0,1 μg/ml) a GlcCer fúngico em diferentes composições aquosas foi testado em ELISA com GlcCer revestido de F. oxysporum e em comparação com poços em branco não revestidos. A ligação foi medida após a incubação consecutiva com os anticorpos de detecção conjugados com enzima, adicionando substrato e medindo a absorvância a 405 nm.

[0521] Na Figura 6, os valores de VHH 41D01 específico de GlcCer nas diferentes composições foram comparados com 41D01 em solução, sem outros aditivos. Mostra-se na Figura 6 que VHH-D01 41 específico de GlcCer foi capaz de se ligar especificamente a GlcCer fúngico em todas as composições testadas.

Exemplo 2 Avaliação in vitro da atividade antifúngica de composições VHH anti-GlcCer

[0522] Avaliação in vitro da atividade antifúngica de VHH: A atividade antifúngica do anti-GlcCer-VHH foi testada usando ensaios antifúngicos em meio líquido e em placas de ágar, conforme descrito no Thevissen et al, 2011, Bioorg. Med. Chem. Lett. 21 (12): 3686-92; François et al., 2009, J. Biol. Chem. 284 (47): 32680-5; Aerts et al., 2009, FEBS Lett. 583 (15): 25143-6. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para o VHH no crescimento in vitro de Botrytis cinerea e Phytophthora infestans.

[0523] Um ensaio in vitro para testar o crescimento dos fungos em meio líquido em formato de placa de 96 poços também pode ser usado para selecionar diretamente VHH diferente que são gerados contra material fúngico selecionado integral e contra antígenos moleculares diferentes, a partir de GlcCer, para atividade antifúngica. Esta seleção é efetuada em extratos periplasmáticos contendo VHH bruto de células de E. coli nas quais o VHH é produzido, ou purificado com VHH.

[0524] Avaliação in vitro da atividade antifúngica de composições VHH anti-GlcCer contra fungos patogênicos de plantas diferentes: A atividade antifúngica de composições VHH anti-GlcCer foi avaliada in vitro contra uma série de fungos patogênicos de plantas e em comparação com a atividade antifúngica de VHH não relacionado.

[0525] Diluições de duas vezes das composições VHH aquosas em água (a partir de 1,5 mg de VHH / ml) foram preparadas em placas de microtitulação de 96 poços. A 20 μl destas diluições a 20 μl de água como um controle, 80 μl de esporos de fungos de suspensão (1E + 05 esporos / ml em caldo de dextrose de batata (PDB)) com metade da força foram adicionados. As cepas fúngicas de teste foram Alternaria brassicicola MUCL20297, Botrytis cinerea R16, Cercospora beticola (isolado da própria sacarina de beterraba), Fusarium culmorum MUCL555 e Verticillium dahliae MUCL6963. As placas de teste foram incubadas durante 72 h à temperatura ambiente no escuro e a atividade antifúngica dos compostos de teste foi marcada microscopicamente e quantificada com base em padrões fotográficos, no qual uma pontuação de 0 ou 100 se refere a nenhum crescimento de fungos ou máximo crescimento, respectivamente. Todos os testes foram realizados pelo menos em 2 réplicas.

[0526] Os resultados dos ensaios de atividade antifúngica, mostrados nas Figuras 7A, 7B, 7C, 8A, 8B, 8C e 8D indicaram uma clara diferença entre o padrão de inibição do crescimento, expresso como a % de crescimento de fungos em função da concentração de VHH (μg/ml), do VHH anti-GlcCer (incluindo 41D01, 56F11, 56E05 ou 57A06) e o VHH não relacionado (VHH_A e VHH_B). Esta diferença foi evidente, independentemente da espécie de fungo de teste. De um modo geral, em uma concentração de ensaio de 100 μg / ml, todos os VHH anti- GlcCer não permitem mais de 20% do crescimento de fungos, enquanto que a 100 μg/ml o VHH não relacionado mostrou nenhuma atividade antifúngica ou muito fraca (80% ou mais de crescimento de fungos). A partir de todos os diferentes VHH anti-GlcCer testados, 41D01 mostrou a atividade antifúngica mais proeminente, para diversas cepas de ensaio, mesmo para concentrações de teste menor do que 50 μg/ml, crescimento fúngico foi inferior a 20%.

[0527] Os resultados mostram a potência antifúngica de VHH anti- GlcCer em comparação com VHH não relacionado. Além disso, os resultados revelam um largo espectro de atividade antifúngica de composições VHH anti-GlcCer no sentido de pelo menos 5 diferentes agentes patogênicos fúngicos de plantas e indicam que o espectro de atividade antifúngica do VHH anti-GlcCer selecionado pode ser alargado a outros fungos patogênicos de plantas.

[0528] Avaliação in vitro da atividade antifúngica de composições VHH anti-GlcCer contra Penicillium expansum utilizando luminescência: A atividade antifúngica in vitro da composição 41D01 VHH anti-GlcCer foi avaliada contra o fungo patógeno de planta CBS 146.45 de Penicillium expansum e comparada com a atividade antifúngica de VHH_A não relacionado, um anticorpo anti-GlcCer monoclonal de camundongo (mAb de anti-GlcCer de camundongo), imunoglobulina G humana (hlgG) ou albumina de soro bovino (BSA) como controles utilizando luminescência como leitura.

[0529] Duas diluições de todos os compostos de ensaio em água (a partir de 1,5 mg/mL) foram preparadas em placas de microtitulação de 96 poços. Para 20 μl destas diluições e 20 μl de água como um controle, 80 μl de esporos de suspensão de fungos (1E + 03 esporos / ml em 4 vezes APO) foram adicionados. As placas de teste foram incubadas durante 24 h à temperatura ambiente no escuro e a viabilidade dos esporos foi determinada a 24 pós-inoculação (HPI) utilizando luminescência de acordo com as declarações do fornecedor (BacTiter Glo; Promega). Foram determinadas as unidades relativas de luz (RLU) (Tecan luminometer) e a RLU medida para 41D01 VHH anti-GlcCer, VHH_A não relacionado, hlgG, MAb anti-GlcCer de camundongo ou esporos fúngicos tratado com BSA foram expressos em relação a RLU determinada para os esporos de fungos não tratados como % de RLU. Quatro réplicas foram incluídas no ensaio (n = 4).

[0530] Conforme mostrado na Figura 9, a % de RLU determinada sobre o tratamento da composição 41D01 VHH anti-GlcCer difere claramente da % de RLU registrada nos tratamentos de VHH_A não relacionado, MAb anti-GlcCer de camundongo, hlgG ou BSA. Particularmente, o efeito do tratamento de 41D01 em esporos de fungos, expresso como % de RLU em relação ao controle não tratado foi inferior a 25% a 300 μg/ml ou 150 μg/ml de 41D01, e menos de 50%, a 75 μg/ml, 37,5 μg/ml e 19 μg/ml. Em contraste, o efeito de todas as outras composições de teste, expressas em % de RLU versus o controle não tratado foi em geral de 100% para todas as concentrações testadas.

[0531] Estes resultados mostram que a composição 41D01 VHH anti-GlcCer específica teve um efeito antifúngico claro sobre o fungo patogênico de planta Penicillium expansum até 19 μg/ml e está superando VHH_A não relacionado, MAb anti-GlcCer de camundongo, hlgG, ou BSA. Como tal, as composições VHH anti-GlcCer podem ser utilizadas para proteger plantas contra fungos patogênicos de plantas.

Exemplo 3 Formulação de VHH em formulações agrícolas

[0532] VHH anti-GlcCer foram produzidos como proteínas recombinantes em uma cepa de produção de E. coli adequada. VHH anti-GlcCer foram purificados a partir dos meios e/ou o periplasma e/ou as células de E. coli foram mortas e lisadas no final do processo de fermentação. VHH anti-GlcCer podem também ser produzidos como proteínas recombinantes em Pichia pastoris, ou Saccharomyces cerevisiae e segregados para o meio de fermentação. VHH anti-GlcCer são então purificados a partir de componentes do meio e os componentes celulares por diafiltração. A solução de proteína resultante é diluída em um tampão adequado, tal como solução salina tamponada com fosfato, para ajustar o pH a cerca de 7. Opcionalmente, um agente biocida, tal como azida de sódio em uma concentração de cerca de 0,0001% a 0,1% e um detergente não iônico, tal como Tween 20 em uma concentração de cerca de 0,0001% a 5%, é adicionado à solução de proteína tamponadas. Alternativamente, a solução de proteína resultante é misturada com um molhante adequado e agente de dispersão na presença de um material de enchimento habitual, antes de ser seco por pulverização em grânulos molháveis.

Exemplo 4 Avaliação da atividade antifúngica de VHH em culturas

[0533] A eficácia do VHH com atividade antifúngica potente in vitro contra B. cinerea e P. infestans é ainda avaliada na planta através de bioensaios de doença sobre (i) folhas destacadas de plantas e tomate e da batata (ii) em plantas de batata e tomate cultivadas em estufa. Ensaios para doenças folha destacadas são realizados usando o modelo de patossistemas S. cinerea de tomate e P. infestans de batata. Plantas de tomate e batata cultivadas em estufa são pulverizadas em uma câmara de pulverização com uma solução aquosa de VHH em um volume equivalente a 300 litros por hectare, e com uma taxa de aplicação inferior a 50 g por hectare de VHH. Após a pulverização, o depósito de pulverização é deixado secar nas plantas e as folhas compósitas são subsequentemente separadas das plantas e colocadas em placas de ágar-água. As folhas nas placas de ágar com água são inoculadas em gotas em diferentes momentos com uma suspensão de esporos de B. cinerea e P. infestans (5x105 esporos / ml). O desenvolvimento da doença é monitorado visualmente e/ou digitalmente medindo o diâmetro da lesão e com software de análise de imagem, respectivamente (Avaliar, Lamari 2002, St. Paul, Minnesota, EUA: APS Press).

Exemplo 5 Na avaliação de planta da atividade antifúngica de composição VHH anti-GlcCer para proteger as culturas contra infecção fúngica

[0534] Eficácia de composições VHH anti-GlcCer nas folhas de tomate inoculadas com Botrytis cinérea; tratamento preventivo: O efeito de um tratamento preventivo com composições VHH anti-GlcCer na severidade da doença de folhas de tomate inoculadas om Botryts cinerea B05-10 foi avaliado e comparado com os efeitos de VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado.

[0535] Folhas destacadas de plantas de tomate cultivadas em estufa foram tratadas com 10 μl de uma composição VHH aquosa (anti- GlcCer ou um VHH não relacionado, a 5 mg/mL), e, água e Scala (1 mg de pirimetanil / ml, tal como recomendado pelo fabricante) como controles. Após a secagem das composições aplicadas, 10 μl em gotas de uma suspensão de esporos de Botrytis cinerea (6 E + 06 esporos / ml em PBD diluído 4 vezes) foram aplicados sobre as superfícies tratadas. Folhas tratadas e inoculadas foram incubadas a uma umidade relativa elevada e à temperatura ambiente em pequenos propagadores de plantas. A gravidade da doença foi marcada medindo o diâmetro bidirecional em 6 dias após a inoculação (dpi).

[0536] Como mostrado na Figura 10, o tratamento preventivo com a composição VHH anti-GlcCer resultou em um diâmetro médio de lesão de 6 mm (+/- 1 .4 mm), enquanto que o tratamento com um VHH não relacionado ou água mostrou um diâmetro médio de lesão de 13,4 mm (+/- 4 mm) ou 15 mm (+/- 4 mm), respectivamente. No tratamento de controle com um fungicida químico comercial formulado, folhas de tomate foram efetivamente protegidas contra a infecção Botrytis cinerea (sem lesão visível). Como também é mostrado na Figura 10, o tratamento preventivo de folhas de tomate com a aplicação da composição VHH anti-GlcCer claramente resultou em uma redução de 2 vezes a gravidade da doença em comparação com o tratamento com um VHH não relacionado ou água. Por conseguinte, o anticorpo VHH anti-GlcCer específico, ainda aplicado como uma composição aquosa não formulada, a 5 mg/mL, revelou que a potência de VHH anti-GlcCer específico sendo usada como compostos antifúngicos para proteger as culturas contra fungos patogênicos em aplicações agrícolas.

[0537] Eficácia de composições VHH anti-GlcCer nas folhas de tomate inoculadas com Botrytis cinérea; tratamento curativo: O efeito de um tratamento curativo com as composições VHH anti-GlcCer na severidade da doença de folhas de tomate inoculadas com Botrytis cinerea B05-10 foi avaliado e comparado com o efeito de VHH não relacionado, albumina de soro bovino (BSA) ou um fungicida químico comercial formulado.

[0538] Folhas destacadas de plantas de tomate cultivadas em estufa foram inoculadas com 10 μl em gotas de uma suspensão de esporos de Botrytis cinerea ((6 E + 06 esporos / ml) em caldo de dextrose de bata diluído 4 vezes). Uma hora após a inoculação, as manchas nas folhas inoculadas foram tratadas com 10 μl de uma composição aquosa de VHH (VHH_A anti-GlcCer e não relacionada a 1,6 mg/mL), e, BSA a 1,6 mg/mL e Scala (1 mg de pirimetanil / ml, tal como recomendado pelo fabricante) como controles. Folhas tratadas e inoculadas foram incubadas a uma umidade relativa elevada e à temperatura ambiente em pequenos propagadores de plantas. A gravidade da doença foi marcada medindo o diâmetro bidirecional a 5 dpi.

[0539] Como mostrado na Figura 11, o tratamento curativo com a composição VHH anti-GlcCer resultou em um diâmetro médio de lesão de 3 mm (+/- 0,8 mm), enquanto que o tratamento com um VHH não relacionado ou BSA mostrou uma lesão com diâmetro médio de 15 mm (+/- 3,5 mm) ou 13 mm (+/- 3,5 mm), respectivamente. No tratamento de controle com um fungicida químico comercial formulado, folhas de tomate foram efetivamente protegidas contra a infecção por Botrytis cinerea (sem lesão visível).

[0540] Como também é mostrado na Figura 11, o tratamento curativo de folhas de tomate com a aplicação da composição VHH anti- GlcCer claramente resultou em uma redução de 4 vezes da severidade da doença em comparação com o tratamento de VHH não relacionado ou BSA. Por conseguinte, o anticorpo VHH anti-GlcCer específico, ainda aplicado como uma composição aquosa não formulado em 1,6 mg/mL, revelou que a potência do VHH anti-GlcCer específico sendo usado como compostos antifúngicos para proteger as culturas contra fungos patogênicos em aplicações agrícolas. Eficácia do composições VHH anti-GlcCer em pêras inoculadas com Botrytis cinérea; tratamento preventivo: O efeito de um tratamento preventivo com composições VHH anti-GlcCer na severidade da doença de peras inoculados com Botrytis cinerea (próprio isolado de peras) foi avaliado e comparado com o efeito de VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado.

[0541] Pêras (variedade Williams) de agricultura biológica, previamente confirmadas como sem tratamento, foram tratadas com 10 μl de composições VHH aquosas (contendo VHH anti-GlcCer ou um VHH não relacionado a 5 mg/mL), e, água e Scala (1 mg de pirimetanil / ml, tal como recomendado pelo fabricante) como controles. Após a secagem das soluções aplicadas, 10 μl em gotas de uma suspensão de esporos de Botrytis cinerea (1 E + 04 esporos / ml em água) foram aplicados sobre as superfícies tratadas. Pêras tratadas e inoculadas foram incubadas a uma umidade relativa elevada e a temperatura ambiente em recipientes pequenos. A gravidade da doença foi marcada medindo o diâmetro bidirecional em 4 dpi.

[0542] Como mostrado na Figura 12, o tratamento preventivo com a composição VHH anti-GlcCer resultou em um diâmetro médio de lesão de 3 mm (+/- 2 mm), enquanto que o tratamento com um VHH não relacionado ou água mostrou um diâmetro médio de lesão de 9,6 mm (+ / - 0,8 mm) ou 6,6 mm (+/- 1 .6 mm), respectivamente. No tratamento preventivo de controle com um fungicida químico comercial formulado, pêras foram eficazmente protegidas contra a infecção por Botrytis cinerea (sem lesão visível).

[0543] Como também é mostrado na Figura 12, o tratamento preventivo de pêras com a aplicação da composição VHH anti-GlcCer claramente resultou em uma redução de pelo menos 2 vezes da gravidade da doença em comparação com o tratamento de um VHH não relacionado ou água. Por conseguinte, o anticorpo VHH anti-GlcCer específico, ainda aplicado como uma solução aquosa não formulada a 5 mg/mL, revelou a potência do VHH anti-GlcCer específico a ser usado como um compostos antifúngicos para proteger as culturas contra fungos patogênicos em aplicações agrícolas.

[0544] Composição VHH anti-GlcCer para proteger sementes de plantas contra a infecção fúngica: O efeito de uma composição VHH anti-GlcCer na proteção de sementes de plantas contra fungos patogênicos pode ser avaliado como se segue. Sementes de plantas de superfície estéril, tratadas com um VHH anti-GlcCer, um VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado são colocadas no topo de uma placa de ágar de dextrose de batata contendo 1 E + 03 esporos / ml do fungo de teste Fusarium graminearum. As placas de teste foram incubadas à temperatura ambiente e as zonas de inibição do crescimento de fungos (mm) que rodeiam as sementes podem ser medida, permitindo comparar o efeito dos diferentes tratamentos.

[0545] Composição VHH anti-GlcCer para proteger raízes de plantas contra a infecção fúngica em hidropônicos: O efeito de uma composição VHH anti-GlcCer na proteção das raízes de plantas contra fungos patogênicos e na fitossanidade, em geral, pode ser avaliado como se segue. As plantas de tomate são cultivadas com suas raízes em uma solução de nutrientes minerais ou em suportes inertes tais como perlite suplementado ou encharcado, respectivamente, com uma composição de VHH anti-GlcCer, um VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado. Verticillium dahliae (1E + 03 esporos / ml) pode ser usado para inocular as raízes das plantas e o efeito dos diferentes tratamentos é marcado na colheita medindo a gravidade da doença sobre as plantas com base em uma escala arbitrária de classes de doenças: 0 = ausência de sintomas, 1 = ligeiro amarelecimento da folha, nanismo, ou murcha, 2 = amarelecimento moderado da folha, nanismo, ou murcha, 3 = amarelecimento grave da folha, nanismo, ou murcha, e 4 = morte da folha (como descrito por Fakhro et al., 2010).

[0546] Composição VHH anti-GIcCer para proteger as flores da planta contra a infecção fúngica: O efeito de uma composição VHH anti- GlcCer relativa à proteção das flores da planta contra fungos patogênicos pode ser avaliado utilizando cereais ou Arabidopsis thaliana e Fusarium culmorum ou Fusarium graminearum como fungos de teste (como descrito por Urban et al., 2002). Em suma, plantas com flores são inoculadas por aspersão com 1E + 05 esporos / ml) do fungo Fusarium culmorum ou Fusarium graminearum, seguido por um tratamento com uma composição de VHH anti-GlcCer, um VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado (tratamento curativo) ou vice-versa (tratamento preventivo). As plantas são incubadas e o marcador da doença é realizado como descrito por Urban et al. (2002) e permite quantificar o efeito dos diferentes tratamentos.

Claims

1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um polipeptídeo que se liga especificamente a uma glicosilceramida de uma praga de fungos, em que o referido pelo menos um polipeptídeo é um domínio variável da cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada (VHH), ou em que o referido pelo menos um polipeptídeo é um alfacorpo, e em que a composição compreende ainda um ou mais aditivos selecionados do grupo que consiste em diluentes, solventes, adjuvantes, surfactantes, agentes umectantes, agentes de espalhamento, óleos, adesivos, espessantes, penetrantes, agentes tamponantes, acidificantes, agentes anti-sedimentação, agentes anti-congelamento, fotoprotetores, agentes antiespumantes, biocidas e/ou agentes de controle de deriva.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um veículo farmaceuticamente ou agroquimicamente adequado e/ou um ou mais adjuvantes adequados.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a referida praga é um fungo patogênico.

4. Composição, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a referida glicosilceramida é uma glicosilceramida de um fungo patogênico de plantas selecionado dentre o grupo que compreende Alternaria, Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia, Erysiphe, Fusarium, Leptosphaeria, Gaeumanomyces, Helminthosporium, Macrophomina, Nectria, Penicillium, Peronospora, Phoma, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara, Podosphaera, Puccinia, Pyrenophora, Pyricularia, Pythium, Rhizoctonia, Scerotium, Sclerotinia, Septoria, Thielaviopsis, Uncinula, Venturia, Verticillium, Magnaporthe, Blumeria, Mycosphaerella, Ustilago, Melampsora, Phakospora, Monilinia, Mucor, Rhizopus, e Aspergillus; ou uma glicosilceramida de uma praga humana ou animal escolhida a partir do grupo que compreende espécies de Cândida tais como C. albicans; Espécies de Cryptococcus tais como C. neoformans; Espécies de Enterococcus, tais como E. faecalis; Espécies de Streptococcus, tais como S.pneumoniae, S. mutans, S. pyogenes e S.agalactiae; Espécies de Leishmania, tais como a L. major e L.infantum; Acanthamoeba espécies, tais como A.castellani; Espécies de Aspergillus, tais como A. fumigatus e A.flavus; Espécies de Pneumocystis, tais como P.carinii; Espécies de Mycobacterium, tais como M. tuberculosis; Espécies Pseudomonas, como P. aeruginosa; Espécies de Staphylococcus, tais como S. aureus; Espécies de Salmonella, tais como S. typhimurium; Espécies de Coccidioides tais como C.iminitis; Espécies de Trichophyton, tais como T.verrucosum; Espécies de Blastomyces tais como B.dermatidis; Espécie Histoplasma, tais como H.capsulatum; Paracoccidioides espécies, como P. brasiliensis; Pythiumn espécies tais como P.insidiosum; e espécies de Escherichia, tal como E. coli.

5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um polipeptídeo compreende uma ou mais das combinações escolhidas de entre o grupo que compreende: uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 86, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 170, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 254, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 146, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 230, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 313, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 85, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 169, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 253, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 87, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 171, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 255, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 88, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 172, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 256, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 89, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 173, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 257, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 90, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 174, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 258, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 91, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 175, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 259, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 92, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 176, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 260, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 93, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 177, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 261, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 94, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 178, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 262, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 95, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 179, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 263, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 96, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 180, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 264, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 97, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 181, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 265, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 98, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 182, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 266, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 99, uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 183, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 267, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 100, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 184, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 268, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 101, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 185, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 269, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 102, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 186, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 270, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 103, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 187, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 271, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 104, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 188, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 272, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 105, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 189, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 273, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 106, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 190, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 274, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 107, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 191, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 275, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 108, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 192, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 276, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 109, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 193, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 277, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 110, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 194, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 278, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 111, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 195, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 279, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 112, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 196, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 280, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 113, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 197, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 281, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 114, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 198, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 282, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 115, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 199, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 283, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 116, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 200, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 284, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 117, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 201, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 285, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 118, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 202, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 286, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 119, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 203, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 287, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 120, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 204, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 288, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 121, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 205, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 289, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 122, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 206, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 290, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 123, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 207, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 291, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 124, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 208, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 292, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 125, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 209, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 293, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 126, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 210, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 294, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 127, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 211, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 295, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 128, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 212, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 296, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 129, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 213, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 297, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 130, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 214, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 298, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 131, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 215, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 299, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 132, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 216, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 300, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 133, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 217, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 301, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 134, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 218, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 302, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 135, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 219, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 303, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 136, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 220, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 304, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 137, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 221, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 305, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 138, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 222, e uma região CDR3 apresentando a sequência de aminoácidos NRY, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 139, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 223, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 306, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 140, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 224, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 307, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 141, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 225, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 308, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 142, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 226, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 309, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 143, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 227, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 310, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 144, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 228, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 311, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 145, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 229, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 312, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 147, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 231, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 314, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 148, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 232, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 315, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 149, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 233, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 316, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 150, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 234, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 317, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 151, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 235, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 318, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 152, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 236, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 319, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 153, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 237, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 320, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 154, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 238, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 321, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 155, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 239, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 322, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 156, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 240, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 323, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 157, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 241, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 324, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 158, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 242, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 325, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 159, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 243, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 326, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 160, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 244, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 327, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 161, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 245, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 328, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 162, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 246, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 329, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 163, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 247, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 330, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 164, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 248, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 331, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 165, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 249, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 332, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 166, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 250, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 333, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 167, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 251, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 334, e/ou uma região CDR1 apresentando a SEQ ID NO: 168, Uma região CDR2 apresentando a SEQ ID NO: 252, e uma região CDR3 apresentando a SEQ ID NO: 335.

6. Composição, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que é para uso como um agente antipragas.

7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo é de 0,0001% a 50% em peso da composição.