BR112015027192B1

BR112015027192B1 - Métodos para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da referida planta, e tratar pós-colheita para proteger ou tratar uma planta colhida ou uma parte colhida da referida planta, e uso de uma composição farmacêutica

Info

Publication number: BR112015027192B1
Application number: BR112015027192-8A
Authority: BR
Inventors: Peter Verheesen; Chris De Jonghe; Inge Elodie Van Daele; Miguel Francesco Coleta De Bolle; João Filipe Veloso Vieira; Karin Thevissen; Bruno Cammue
Original assignee: Agrosavfe N.V.
Priority date: 2013-04-29
Filing date: 2014-04-29
Publication date: 2022-05-10
Also published as: PL2992101T3; CN105358698B; ES2703192T3; JP6967347B2; US20180022791A1; US20210253677A1; EP2992100B1; PT2992100T; AU2014273418B2; CN105358699A; BR112015027430B1; US20160075769A1; WO2014191146A1; AU2020205327A1; BR112015027192A2; EP2992100A1; JP6720252B2; AU2014261434A1; CA2910874C; JP2019178136A

Abstract

composições agroquímicas que compreendem anticorpos que se ligam a esfingolipídeos. a presente invenção refere-se às composições agroquímicas e de controle biológico para combater pestes, mais especificamente pestes de planta, que compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo que especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta. a invenção também fornece métodos para proteger ou tratar uma planta ou uma parte de uma planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos que compreende a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente a uma planta ou a uma parte de uma planta, uma composição agroquímica, sob condições eficazes para proteger ou tratar uma planta ou uma parte de uma planta contra uma infecção ou interação biológica com um patógeno de planta. também fornecidos são métodos para produzir tais composições e formulações agroquímicas, para domínios variáveis de cadeia pesada com uma atividade pesticida específica compreendida dentro de uma formulação agroquímica, para ácidos nucleicos que codificam tais domínios variáveis de cadeia pesada e para plantas que compreendem genes quiméricos que compreendem tais ácidos nucleicos.

Description

Campo da Invenção

[001] A presente invenção se refere a efetuar o controle de pestes de planta. Mais especificamente, a invenção fornece composições agroquímicas que compreendem composições de polipeptídeo de um comprimento e concentração específicos que são úteis para combater pestes de cultura tais como, insetos, fungos, nematódeos, bactérias e similares.

Antecedente

[002] A proteção de cultura, requerida para agricultura eficaz, conta profundamente com o uso de pesticidas, que são aplicados às culturas pulverizando-os sobre a cultura, aplicando durante a irrigação das culturas ou incorporando-os no solo. Pesticidas são frequentemente moléculas químicas orgânicas e sua aplicação repetida a culturas representa ameaças de toxicidade igualmente aos trabalhadores agrícolas durante o manuseio e ao ambiente, devido à deriva do spray, persistência no solo ou lavagem na superfície ou água subterrânea. Seria vantajoso poder usar compostos alternativos que são menos tóxicos aos humanos e ao ambiente, porém que ao mesmo tempo fornece controle eficaz de pestes de planta. Pesticidas proteináceos com especificidade contra um certo alvo de peste de planta podem ser muito vantajosos neste respeito, como é esperado que eles sejam de vida curta no ambiente e tenham menos efeitos fora de alvo menos tóxicos. Entretanto, há apenas alguns pesticidas proteináceos ou peptidérgicos conhecidos. Alguns exemplos são toxinas Bt, lectinas, defensinas, fabatinas, taquiplesina, magainina, grampo de cabelo (veja WO2010019442), 1-subunidade b de albumina de ervilha (PA1 b). Entretanto, estes pesticidas proteináceos são peptídeos pequenos com estruturas compactas, estabilizadas por várias pontes de dissulfeto, ou são proteínas maiores (>300 aminoácidos) que ocorrem em forma cristalina (toxinas cry). Na verdade é conhecido no campo da agricultura que substâncias biológicas, e em particular proteínas, são estruturas desafiadoras para pesticidas em desenvolvimento, visto que elas geralmente têm muito pouca estabilidade para manter sua função pesticida em uma formulação agroquímica, em particular para aplicações no campo.

Sumário da Invenção

[003] Os presentes inventores desenvolveram bem sucedidamente, polipeptídeos com surpreendentemente alta especificidade, afinidade e potência contra alvos de planta ou pestes de cultura, em pestes patogênicas de planta particulares, tais como, porém não limitados a, fungos patogênicos de planta. Além disso, é mostrado que estes polipeptídeos retêm suas integridade, estabilidade e atividade em uma composição agroquímica (como também definido aqui) e que o controle patogênico ou de peste eficaz pode ser obtido surpreendentemente aplicando composições agroquímicas, que compreende os polipeptídeos como descrito no presente pedido, para culturas.

[004] A eficácia e potência dos polipeptídeos como descrito aqui sugere um potencial para uma dosagem de tratamento mais baixa e/ou um tratamento mais eficaz na mesma dose. Isto pode insinuar uma redução dos efeitos colaterais indesejados e toxicidade reduzida. Além disso, isto permite a aplicação de quantidades mais baixas dos polipeptídeos ou composições agroquímicas descritas aqui por hectare. Mais particularmente, os presentes inventores constataram que o alvejamento de uma estrutura molecular de um patógeno de planta com os polipeptídeos considerados aqui permite o controle eficiente daquele patógeno quando aplicado diretamente ou indiretamente em uma planta ou em uma ou mais partes de uma planta.

[005] Em particular, os presentes inventores desenvolveram polipeptídeos ou sequências de aminoácido que são capazes de prevenir, proteger, tratar ou curar uma planta a partir de (desenvolvimento) uma infecção por um patógeno de planta ou a partir de qualquer outra interação biológica com um patógeno de planta. Portanto, a presente invenção demonstra pela primeira vez que moléculas biológicas, tais como, polipeptídeos ou sequências de aminoácido, podem ser usadas para proteger ou tratar eficazmente uma planta, de ser danificado de qualquer forma por ou sofrer de uma interação biológica entre a planta e um patógeno de planta, tal como, por exemplo por uma infecção de patógeno de planta.

[006] Em um primeiro aspecto, a presente invenção fornece composições agroquímicas compreendendo pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (um VHH ou um VH) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta.

[007] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como descrito aqui, compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada (VHH) que é naturalmente destituído de cadeias leves ou um fragmento funcional do mesmo, tal como porém não limitado a, um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada de camelídeo (VHH de camelídeo) ou um fragmento funcional do mesmo.

[008] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como descrito aqui, compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada camelizado de um anticorpo de quatro cadeias convencional (VH camelizado), ou um fragmento funcional do mesmo.

[009] Em certas modalidades particulares, as composições agroquímicas como descrito aqui, compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo, que não têm uma sequência de aminoácido que é exatamente igual (isto é, como em um grau de identidade de sequência de 100% com) a sequência de aminoácido de um domínio de VH de ocorrência natural, tal como a sequência de aminoácido de um domínio de VH de ocorrência natural de um mamífero, e em particular de um ser humano.

[0010] Em outras modalidades particulares, as composições agroquímicas como descrito aqui, pelo menos compreendem um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, tal como por exemplo, porém não limitado à glicosilceramida.

[0011] Em certas modalidades particulares, as composições agroquímicas como descrito aqui, pelo menos compreendem um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um fungo patogênico de planta, tal como, porém não limitado a, um fungo patogênico de planta de um gênero escolhido a partir do grupo que compreende, Alternaria, Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia, Erysiphe, Fusarium, Leptosphaeria, Gaeumanomyces, Helminthosporium, Macrophomina, Nectria, Penicillium, Peronospora, Phoma, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara, Podosphaera, Puccinia, Pyrenophora, Pyricularia, Pythium, Rhizoctonia, Scerotium, Sclerotinia, Septoria, Thielaviopsis, Uncinula, Venturia, Verticillium, Magnaporthe, Blumeria, Mycosphaerella, Ustilago, Melampsora, Phakospora, Monilinia, Mucor, Rhizopus e Aspergillus.

[0012] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como descrito aqui, pelo menos compreendem um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um patógeno de planta que é um patógeno de planta para uma planta selecionada a partir do grupo que compreende cereais, sorgo, arroz, beterraba açucareira, beterraba forrageira, fruta, nozes, a família da banana ou videiras, culturas de leguminosas, culturas de oleagenosas, cucurbitáceas, plantas fibrosas, culturas de combustível, legumes, ornamentais, arbustos, árvores de folhas largas, sempre-vivas, gramas, café, chá, tabaco, lúpulo, pimenta, plantas de borracha e látex.

[0013] Em certas modalidades específicas, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento funcional do mesmo nas composições agroquímicas descritas aqui, está presente em uma quantidade eficaz para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da planta de uma infecção ou outra interação biológica com o patógeno de planta, tal como por exemplo, porém não limitado à concentração do pelo menos um domínio variável de cadeia pesada na composição agroquímica que varia a partir de 0,0001% a 50% em peso.

[0014] Em outras modalidades particulares, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento funcional do mesmo nas composições agroquímicas descritas aqui, é formulado em uma solução aquosa, opcionalmente, porém sem limitação, juntamente com um veículo agroquimicamente adequado e/ou um ou mais adjuvantes adequados.

[0015] Em ainda outras modalidades particulares, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento funcional do mesmo nas composições agroquímicas descritas aqui, pelo menos compreende:

[0016] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 85, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 169, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 253, ou

[0017] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 86, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 170, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 254, ou

[0018] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 87, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 171, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 255, ou

[0019] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 88, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 172, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 256, ou

[0020] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 89, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 173, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 257, ou

[0021] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 90, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 174, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 258, ou

[0022] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 91, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 175, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 259, ou

[0023] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 92, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 176, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 260, ou

[0024] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 93, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 177, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 261, ou

[0025] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 94, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 178, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 262, ou

[0026] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 95, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 179, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 263, ou

[0027] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 96, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 180, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 264, ou

[0028] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 97, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 181, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 265, ou

[0029] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 98, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 182, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 266, ou

[0030] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 99, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 183, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 267, ou

[0031] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 100, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 184, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 268, ou

[0032] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 101, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 185, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 269, ou

[0033] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 102, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 186, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 270, ou

[0034] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 103, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 187, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 271, ou

[0035] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 104, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 188, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 272, ou

[0036] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 105, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 189, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 273, ou

[0037] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 106, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 190, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 274, ou

[0038] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 107, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 191, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 275, ou

[0039] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 108, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 192, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 276, ou

[0040] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 109, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 193, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 277, ou

[0041] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 110, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 194, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 278, ou

[0042] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 111, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 195, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 279, ou

[0043] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 112, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 196, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 280, ou

[0044] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 113, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 197, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 281, ou

[0045] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 114, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 198, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 282, ou

[0046] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 115, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 199, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 283, ou

[0047] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 116, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 200, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 284, ou

[0048] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 117, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 201, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 285, ou

[0049] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 118, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 202, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 286, ou

[0050] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 119, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 203, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 287, ou

[0051] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 120, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 204, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 288, ou

[0052] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 121, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 205, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 289, ou

[0053] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 122, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 206, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 290, ou

[0054] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 123, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 207, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 291, ou

[0055] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 124, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 208, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 292, ou

[0056] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 125, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 209 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 293, ou

[0057] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 126, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 210 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 294, ou

[0058] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 127, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 21 1 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 295, ou

[0059] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 128, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 212 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 296, ou

[0060] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 129, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 213 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 297, ou

[0061] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 130, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 214 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 298, ou

[0062] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 131, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 215 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 299, ou

[0063] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 132, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 216 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 300, ou

[0064] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 133, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 217 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 301, ou

[0065] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 134, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 218 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 302, ou

[0066] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 135, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 219 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 303, ou

[0067] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 136, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 220 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 304, ou

[0068] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 137, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 221 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 305, ou

[0069] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 138, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 222 e uma região de CDR3 que tem a sequência de aminoácido NRY, ou uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 139, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 223 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 306, ou uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 140, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 224 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 307, ou uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 141, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 225 e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 308, ou

[0070] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 142, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 226, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 309, ou

[0071] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 143, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 227, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 310, ou

[0072] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 144, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 228, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 31 1, ou

[0073] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 145, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 229, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 312, ou

[0074] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 146, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 230, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 313, ou

[0075] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 147, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 231, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 314, ou

[0076] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 148, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 232, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 315, ou

[0077] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 149, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 233, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 316, ou

[0078] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 150, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 234, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 317, ou

[0079] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 151, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 235, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 318, ou

[0080] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 152, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 236, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 319, ou

[0081] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 153, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 237, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 320, ou

[0082] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 154, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 238, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 321, ou

[0083] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 155, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 239, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 322, ou

[0084] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 156, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 240, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 323, ou

[0085] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 157, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 241, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 324, ou

[0086] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 158, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 242, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 325, ou

[0087] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 159, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 243, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 326, ou

[0088] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 160, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 244, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 327, ou

[0089] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 161, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 245, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 328, ou

[0090] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 162, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 246, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 329, ou

[0091] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 163, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 247, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 330, ou

[0092] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 164, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 248, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 331, ou

[0093] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 165, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 249, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 332, ou

[0094] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 166, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 250, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 333, ou

[0095] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 167, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 251, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 334, ou

[0096] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 168, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 252, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 335.

[0097] Em outras modalidades, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento funcional do mesmo nas composições agroquímicas descritas aqui, pelo menos compreende uma sequência de aminoácido que tem uma sequência selecionada a partir de qualquer uma dentre SEQ ID N°'s: 1 a 84.

[0098] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece métodos para proteger ou tratar uma planta ou uma parte de uma planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, em que os métodos pelo menos compreendem a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica como descrito aqui, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta ou uma parte da planta contra infecção ou interação biológica com o patógeno de planta.

[0099] Em modalidades particulares, estes métodos compreendem aplicar diretamente ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica como descrito aqui a uma taxa de aplicação mais alta do que 50 g da composição agroquímica por hectare, tal como porém não limitado a, uma taxa de aplicação mais alta do que 75 g da composição agroquímica por hectare, tal como uma taxa de aplicação mais alta do que 100 g da composição agroquímica por hectare, ou em particular uma taxa de aplicação mais alta do que 200 g da composição agroquímica por hectare.

[00100] Em modalidades particulares, estes métodos compreendem aplicar diretamente ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica como descrito aqui a uma taxa de aplicação entre 50 g e 100 g da composição agroquímica por hectare, tal como, porém não limitado a, uma taxa de aplicação dentre 50 g e 200 g da composição agroquímica por hectare, em particular uma taxa de aplicação dentre 75 g e 1 75 g da composição agroquímica por hectare, tal como entre 75 g e 150 g da composição agroquímica por hectare ou entre 75 g e 125 g por hectare.

[00101] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas como descrito aqui são diretamente ou indiretamente aplicadas à planta ou a uma parte da planta pulverizando, atomizando, espumando, enevoando, cultivando em hidrocultura, cultivando em hidroponia, revestindo, submergindo e/ou encrustando, opcionalmente pós-colheita.

[00102] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção fornece métodos de tratamento pós-colheita para proteger ou tratar uma planta colhida ou uma parte colhida da planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos compreendendo a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente à planta colhida ou a uma parte colhida da planta, uma composição agroquímica como descrito aqui, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta colhida ou uma parte colhida da planta contra infecção ou interação biológica com o patógeno de planta.

[00103] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de uma composição agroquímica como descrito aqui, como um agente antipeste. Em modalidades particulares, o agente antipeste é agente biostático, um agente fungistático, agente pesticida e/ou agente fungicida.

[00104] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção fornece métodos de inibir o crescimento de um patógeno de planta ou métodos de matar um patógeno de planta, os métodos compreendendo pelo menos a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica como descrito aqui.

[00105] Em modalidades particulares destes métodos, as composições agroquímicas como descrito aqui, são diretamente ou indiretamente aplicadas à planta ou a uma parte da planta pulverizando, atomizando, espumando, enevoando, cultivando em hidrocultura, cultivando em hidroponia, revestindo, submergindo e/ou encrustando, opcionalmente pós-colheita.

[00106] Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece métodos para produzir uma composição agroquímica como descrito aqui, os métodos pelo menos que compreendem as etapas de: - obter pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (VHH ou VH) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e - formular o domínio variável de cadeia pesada ou fragmento funcional do mesmo em uma composição agroquímica.

[00107] Em modalidades particulares destes métodos, a etapa de obter pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (VHH ou VH) ou fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta compreende: (a) expressar uma sequência de nucleotídeo que codifica um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e opcionalmente (b) isolar e/ou purificar o domínio variável ou fragmento funcional do mesmo.

[00108] Em modalidades particulares destes métodos, a etapa de obter pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento funcional do mesmo (VHH ou VH), o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta compreende: a) fornecer um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de VHH ou sequências de VH ou sequências de fragmentos funcionais dos mesmos; b) avaliar o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de VHH ou sequências de VH ou sequências de fragmentos funcionais dos mesmos para sequências que especificamente ligam-se a e/ou tem afinidade por um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e opcionalmente c) isolar as sequências de VHH ou sequências de VH ou sequências de fragmentos funcionais dos mesmos que especificamente ligam-se a e/ou tem afinidade por um esfingolipídeo de um patógeno de planta.

Descrição Detalhada da Invenção

[00109] A presente invenção será descrita com respeito a modalidades particulares, porém a invenção não está limitada a isto.

[00110] Declarações (aspectos) e modalidades dos polipeptídeos, composições e métodos como descrito aqui é definido aqui abaixo. Cada uma das declarações e modalidades como descrito pela invenção assim definido podem ser combinadas com qualquer outra declaração e/ou modalidade, a menos que claramente indicado o contrário. Em particular, qualquer aspecto indicado como sendo preferido ou vantajoso pode ser combinado com qualquer outro aspecto ou aspectos indicados como sendo preferido ou vantajoso.

[00111] Declarações numeradas como descrito no presente pedido é:

[00112] 1. Uma composição agroquímica para combater pestes de planta, cuja composição compreende pelo menos um polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa.

[00113] 2. Uma composição agroquímica para combater pestes de planta, cuja composição compreende pelo menos um polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa, em que o polipeptídeo está presente em uma concentração de 0,01 a 50% (p/p) do peso total da composição agroquímica.

[00114] 3. A composição agroquímica de acordo com as declarações 1 ou 2, em que o polipeptídeo é obtido por seleção de afinidade a um alvo de peste de planta específico.

[00115] 4. A composição agroquímica de acordo com a declaração 3, em que o polipeptídeo tem uma afinidade pelo alvo com uma constante de dissociação abaixo de 10-6M.

[00116] 5. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 4, em que o polipeptídeo compreende 3 CDRs e 4 FRs.

[00117] 6. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 5, em que o polipeptídeo é derivado a partir de um anticorpo de camelídeo.

[00118] 7. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 6, em que o polipeptídeo é um VHH.

[00119] 8. A composição agroquímica de acordo com qualquer um das declarações 1 a 7, em que a peste de planta é um patógeno fúngico.

[00120] 9. Um método para combater pestes de planta, cujo método compreende aplicar a composição de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 a uma cultura a uma taxa de aplicação mais alta do que 50 g por hectare do polipeptídeo compreendido na composição agroquímica.

[00121] 10. O método para produzir uma composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8, que compreende formular um polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos com atividade pesticida juntamente com pelo menos um agente auxiliar agroquímico habitual.

[00122] 11. Um polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos, obtido por seleção de afinidade a um alvo de peste de planta específico, que é capaz de inibir o crescimento e/ou a atividade de uma peste de cultura a uma concentração inibidora mínima de cerca de 0,00001 a 1 μM.

[00123] 12. Uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de acordo com a declaração 11.

[00124] 13. Um gene quimérico que compreende um promotor expressível de planta, uma sequência de ácido nucleico de acordo com a declaração 12 e uma sequência terminatora.

[00125] 14. Um vetor recombinante que compreende um gene quimérico de declaração 13.

[00126] 15. Uma planta que compreende um gene quimérico como definido na declaração 14.

[00127] 16. Uma composição agroquímica que compreende pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (VHH ou VH) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente ligase a um esfingolipídeo de um patógeno de planta.

[00128] 17. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8, que compreendem pelo menos, um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (VHH ou VH) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta.

[00129] 18. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 que compreendem pelo menos, um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada (VHH) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta.

[00130] 19. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8, 17 e 1 8 que compreendem pelo menos, um camelídeo domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada (VHH de camelídeo) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta.

[00131] 20. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 que compreendem pelo menos, um domínio variável de cadeia pesada camelizado de um anticorpo de quatro cadeias convencional (VH camelizado) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta.

[00132] 21. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 20, em que o esfingolipídeo é uma ceramida.

[00133] 22. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 21, em que o esfingolipídeo é glicosilceramida.

[00134] 23. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 22, em que o patógeno de planta é um fungo patogênico de planta.

[00135] 24. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 23, em que o gênero da fungo patogênico de planta é selecionado a partir do grupo que compreende Alternaria, Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia, Erysiphe, Fusarium, Leptosphaeria, Gaeumanomyces, Helminthosporium, Macrophomina, Nectria, Penicillium, Peronospora, Phoma, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara, Podosphaera, Puccinia, Pyrenophora, Pyricularia, Pythium, Rhizoctonia, Scerotium, Sclerotinia, Septoria, Thielaviopsis, Uncinula, Venturia, Verticillium, Magnaporthe, Blumeria, Mycosphaerella, Ustilago, Melampsora, Phakospora, Monilinia, Mucor, Rhizopus e Aspergillus.

[00136] 25. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 24, em que o patógeno de planta é um patógeno de planta para uma planta selecionada a partir do grupo que compreende cereais, sorgo, arroz, beterraba açucareira, beterraba forrageira, fruta, nozes, a família da banana ou videiras, culturas de leguminosas, culturas de oleaginosas, cucurbitáceas, plantas fibrosas, culturas de combustível, legumes, ornamentais, arbustos, árvores de folhas largas, sempre-vivas, gramas, café, chá, tabaco, lúpulo, pimenta, plantas de borracha e látex.

[00137] 26. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 25, em que o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada está presente em uma quantidade eficaz para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da planta de uma infecção ou outra interação biológica com o patógeno de planta.

[00138] 27. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 26, em que a concentração do pelo menos um domínio variável de cadeia pesada na composição agroquímica varia a partir de 0,0001% a 50% em peso.

[00139] 28. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 27, em que o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada é formulado em uma solução aquosa.

[00140] 29. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 28, que também compreende um veículo agroquimicamente adequado e/ou um ou mais adjuvantes adequados.

[00141] 30. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 29, em que o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo pelo menos compreende

[00142] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 85, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 169, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 253, e/ou

[00143] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 86, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 170, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 254, e/ou

[00144] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 87, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 171, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 255, e/ou

[00145] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 88, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 172, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 256, e/ou

[00146] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 89, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 173, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 257, e/ou

[00147] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 90, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 174, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 258, e/ou

[00148] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 91, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 175, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 259, e/ou

[00149] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 92, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 176, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 260, e/ou

[00150] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 93, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 177, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 261, e/ou

[00151] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 94, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 178, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 262, e/ou

[00152] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 95, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 179, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 263, e/ou

[00153] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 96, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 180, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 264, e/ou

[00154] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 97, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 181, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 265, e/ou

[00155] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 98, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 182, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 266, e/ou

[00156] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 99, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 183, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 267, e/ou

[00157] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 100, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 184, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 268, e/ou

[00158] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 101, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 185, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 269, e/ou

[00159] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 102, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 186, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 270, e/ou

[00160] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 103, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 187, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 271, e/ou

[00161] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 104, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 188, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 272, e/ou

[00162] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 105, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 189, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 273, e/ou

[00163] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 106, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 190, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 274, e/ou

[00164] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 107, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 191, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 275, e/ou

[00165] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 08, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 192, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 276, e/ou

[00166] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 109, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 193, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 277, e/ou

[00167] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 110, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 194, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 278, e/ou

[00168] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 111, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 195, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 279, e/ou

[00169] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 112, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 196, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 280, e/ou

[00170] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 113, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 197, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 281, e/ou

[00171] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 114, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 198, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 282, e/ou

[00172] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 115, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 199, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 283, e/ou

[00173] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 116, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 200, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 284, e/ou

[00174] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 117, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 201, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 285, e/ou

[00175] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 118, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 202, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 286, e/ou

[00176] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 119, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 203, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 287, e/ou

[00177] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 120, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 204, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 288, e/ou

[00178] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 121, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 205, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 289, e/ou

[00179] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 122, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 206, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 290, e/ou

[00180] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 123, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 207, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 291, e/ou

[00181] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 124, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 208, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 292, e/ou

[00182] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 125, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 209, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 293, e/ou

[00183] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 126, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 210, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 294, e/ou

[00184] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 127, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 21 1, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 295, e/ou

[00185] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 128, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 212, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 296, e/ou

[00186] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 129, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 213, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 297, e/ou

[00187] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 130, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 214, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 298, e/ou

[00188] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 131, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 215, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 299, e/ou

[00189] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 132, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 216, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 300, e/ou

[00190] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 133, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 217, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 301, e/ou

[00191] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 134, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 218, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 302, e/ou

[00192] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 135, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 219, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 303, e/ou

[00193] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 136, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 220, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 304, e/ou

[00194] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 137, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 221, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 305, e/ou

[00195] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 138, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 222, e uma região de CDR3 que tem a sequência de aminoácido NRY, e/ou

[00196] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 139, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 223, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 306, e/ou

[00197] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 140, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 224, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 307, e/ou

[00198] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 141, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 225, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 308, e/ou

[00199] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 142, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 226, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 309, e/ou

[00200] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 143, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 227, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 310, e/ou

[00201] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 144, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 228, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 31 1, e/ou

[00202] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 145, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 229, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 312, e/ou

[00203] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 146, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 230, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 313, e/ou

[00204] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 147, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 231, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 314, e/ou

[00205] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 148, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 232, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 315, e/ou

[00206] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 149, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 233, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 316, e/ou

[00207] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 150, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 234, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 317, e/ou

[00208] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 151, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 235, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 318, e/ou

[00209] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 152, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 236, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 319, e/ou

[00210] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 153, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 237, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 320, e/ou

[00211] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 154, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 238, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 321, e/ou

[00212] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 155, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 239, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 322, e/ou

[00213] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 156, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 240, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 323, e/ou

[00214] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 157, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 241, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 324, e/ou

[00215] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 158, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 242, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 325, e/ou

[00216] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 159, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 243, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 326, e/ou

[00217] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 160, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 244, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 327, e/ou

[00218] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 161, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 245, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 328, e/ou

[00219] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 162, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 246, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 329, e/ou

[00220] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 163, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 247, e região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 330, e/ou

[00221] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 164, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 248, e região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 331, e/ou

[00222] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 165, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 249, e região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 332, e/ou

[00223] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 166, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 250, e região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 333, e/ou

[00224] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 167, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 251, e região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 334, e/ou

[00225] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 168, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 252, e região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 335.

[00226] 31. A composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 30, em que o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada compreende pelo menos uma sequência de aminoácido selecionada a partir do grupo que compreende SEQ ID No's: 1 a 84.

[00227] 32. Um método para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos que compreende a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 31, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta ou uma parte da planta contra a infecção ou interação biológica com o patógeno de planta.

[00228] 33. Um método de acordo com a declaração 9 para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos que compreende a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica de acordo com quaisquer das declarações 1 a 8 e 17 a 31, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta ou uma parte da planta contra a infecção ou interação biológica com o patógeno de planta.

[00229] 34. O método de acordo com quaisquer das declarações 9, 32 ou 33, que compreende aplicar diretamente ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 31 a uma taxa de aplicação mais alta do que 50 g da composição agroquímica por hectare.

[00230] 35. O método de acordo com quaisquer das declarações 9 ou 32 a 34, em que a composição agroquímica é diretamente ou indiretamente aplicada à planta ou a uma parte da planta pulverizando, atomizando, espumando, enevoando, cultivando em hidrocultura, cultivando em hidroponia, revestindo, submergindo e/ou encrustando.

[00231] 36. O método de acordo com quaisquer das declarações 9 ou 32 a 35, em que a composição agroquímica é diretamente ou indiretamente aplicada à planta ou a uma parte da planta, opcionalmente pós-colheita.

[00232] 37. Um método de tratamento pós-colheita para proteger ou tratar uma planta colhida ou uma parte colhida da planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos que compreende a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente à planta colhida ou a uma parte colhida da planta, uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 31, sob condições eficazes para proteger ou tratar a planta colhida ou uma parte colhida da planta contra a infecção ou interação biológica com o patógeno de planta.

[00233] 38. Uso de uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 31 como um agente antipeste.

[00234] 39. O uso de acordo com a declaração 38, em que o agente antipeste é um agente biostático.

[00235] 40. O uso de acordo com as declarações 38 ou 39, em que o agente antipeste é um agente fungistático.

[00236] 41. O uso de acordo com a declaração 38, em que o agente antipeste é um agente pesticida.

[00237] 42. O uso de acordo com as declarações 38 ou 41, em que o agente antipeste é um agente fungicida.

[00238] 43. Um método de inibir o crescimento de um patógeno de planta, que compreende pelo menos a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 31.

[00239] 44. Um método de matar um patógeno de planta, que compreende pelo menos a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 17 a 31.

[00240] 45. O método de acordo com as declarações 43 ou 44, em que a composição agroquímica é diretamente ou indiretamente aplicada à planta ou a uma parte da planta pulverizando, atomizando, espumando, enevoando, cultivando em hidrocultura, cultivando em hidroponia, revestindo, submergindo e/ou encrustando.

[00241] 46. O método de acordo com qualquer uma das declarações 43 a 45, em que a composição agroquímica é diretamente ou indiretamente aplicada à planta ou a uma parte da planta, opcionalmente pós-colheita.

[00242] 47. Um método para produzir uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 1 7 a 31 pelo menos que compreende as etapas de: - obter pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (VHH ou VH) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e - formular o domínio variável ou fragmento funcional do mesmo em uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 1 7 a 31.

[00243] 48. Um método de acordo com a declaração 10 para produzir uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 1 7 a 31 pelo menos que compreende as etapas de: - obter pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (VHH ou VH) ou um fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e - formular o domínio variável ou fragmento funcional do mesmo em uma composição agroquímica de acordo com qualquer uma das declarações 1 a 8 e 1 7 a 31.

[00244] 49. O método de acordo com as declarações 1 0, 47 ou 48, em que a etapa de obter pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta compreende: (a) expressar uma sequência de nucleotídeo que codifica um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (VHH ou VH) ou fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e opcionalmente (b) isolar e/ou purificar o domínio variável ou fragmento funcional do mesmo.

[00245] 50. O método de acordo com as declarações 1 0, 47 ou 48, em que a etapa de obter pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento funcional do mesmo, o qual especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta compreende: a) fornecer um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de domínio variável de cadeia pesada ou sequências de fragmentos funcionais das mesmas; b) avaliar o conjunto, coleção ou biblioteca sequências de domínio variável de cadeia pesada ou sequências de fragmentos funcionais das mesmas para sequências que especificamente ligam-se a e/ou tem afinidade por um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e opcionalmente c) isolar as sequências de domínio variáveis ou sequências de fragmentos funcionais das mesmas, que especificamente ligam-se a e/ou tem afinidade por um esfingolipídeo de um patógeno de planta. DEFINIÇÕES

[00246] A presente invenção será descrita com respeito a modalidades particulares, porém a invenção não está limitada a isto, porém apenas pelas reivindicações. Quaisquer sinais de referência nas reivindicações não serão interpretados como limitantes do escopo.

[00247] Onde o termo "que compreende" é usado na presente descrição e nas reivindicações, não exclui outros elementos ou etapas.

[00248] Onde um artigo indefinido ou definido é usado ao referir-se a um pronome singular, por exemplo, "um" ou "uma", "o(a)", isto inclui um plural do pronome, a menos que outro modo seja especificamente indicado.

[00249] O termo "cerca de" quando aqui usado, ao referir-se a um valor mensurável tais como, um parâmetro, uma quantidade, uma duração temporal, e similares, entende-se abranger variações de +/10% ou menos, preferivelmente +/-5% ou menos, mais preferivelmente +/-1% ou menos, e ainda mais preferivelmente +/-0,1% ou menos, e do valor especificado, enquanto tais variações são apropriadas para realizar na invenção descrita. Deve ser entendido que o valor ao qual o modificador ‘cerca de' refere-se, é da mesma forma especificamente, e preferivelmente, descrito.

[00250] Os termos ou as definições seguintes são fornecidos somente para auxiliar na compreensão da invenção. A menos que especificamente definido aqui, todos os termos usados aqui têm o mesmo significado como teriam para alguém versado na técnica da presente invenção. Os médicos são particularmente direcionados a Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a. ed., Cold Spring Harbor Press, Plainsview, New York (1989); e Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Suplemento 47), John Wiley & Sons, New York (1999), para definições e termos da técnica. As definições fornecidas aqui não deveriam ser interpretadas como apresentando um escopo inferior ao compreendido por uma pessoa de experiência ordinária na técnica.

[00251] A menos que indicado de outro modo, todos os métodos, etapas, técnicas e manipulações que especificamente não são descritos em detalhes podem ser realizados, e foram realizados de uma maneira conhecida per se, como estará claro à pessoa versada. Referência é, por exemplo, novamente feita aos manuais padrão, à técnica antecedente geral referida acima e a outras referências citadas aqui.

[00252] Quando aqui usados, os termos "polipeptídeo", "proteína", "peptídeo" e "sequência de aminoácido" são alternadamente usados, e referem-se a uma forma polimérica de aminoácidos de qualquer comprimento, que pode incluir aminoácidos codificados e não codificados, quimicamente ou bioquimicamente modificados ou aminoácidos derivados e polipeptídeos que tem esqueletos de peptídeo modificados.

[00253] Quando aqui usados, resíduos de aminoácido serão indicados por seu nome completo ou de acordo com o código de aminoácido de três letras ou uma letra padrão.

[00254] Quando aqui usados, os termos "molécula de ácido nucleico", "polinucleotídeo", "ácido polinucleico" e "ácido nucleico" são alternadamente usados e referem-se a uma forma polimérica de nucleotídeos de qualquer comprimento, desoxiribonucleotídeos ou ribonucleotídeos, ou análogos dos mesmos. Polinucleotídeos podem ter qualquer estrutura tridimensional, e podem realizar qualquer função, conhecida ou desconhecida. Exemplos não limitantes de polinucleotídeos incluem um gene, um fragmento de gene, exons, íntrons, RNA mensageiro (mRNA), RNA de transfência, RNA ribossômico, ribozimas, cDNA, polinucleotídeos recombinantes, polinucleotídeos ramificados, plasmídeos, vetores, DNA isolado de qualquer sequência, regiões de controle, RNA isolado de qualquer sequência, sondas de ácido nucleico e iniciadores. A molécula de ácido nucleico pode ser linear ou circular.

[00255] Quando aqui usado, o termo "homologia" denota pelo menos similaridade estrutural secundária entre duas macromoléculas, particularmente entre dois polipeptídeos ou polinucleotídeos, dos mesmos ou diferentes taxons, em que a referida similaridade é devido à ascendência compartilhada. Consequentemente, o termo "homólogos" denota macromoléculas assim relacionadas que tem a referida similaridade estrutural secundária e opcionalmente terciária. Para comparar duas ou mais sequências de nucleotídeo, a ‘(porcentagem de) identidade de sequência' entre uma primeira sequência de nucleotídeo e uma segunda sequência de nucleotídeo usando métodos conhecidos pela pessoa versada na técnica pode ser calculada, por exemplo dividindo-se o número de nucleotídeos na primeira sequência de nucleotídeo que são idênticos aos nucleotídeos nas posições correspondentes na segunda sequência nucleotídeo pelo número total de nucleotídeos na primeira sequência de nucleotídeo e multiplicando por 100% ou usando um algoritmo de computador conhecido para alinhamento de sequência tal como NCBI Blast. Determinando o grau de identidade de sequência entre duas sequências de aminoácido, a pessoa versada pode levar em conta substituições de aminoácido denominadas 'conservadoras' que geralmente podem ser descritas como substituições de aminoácido, nas quais um resíduo de aminoácido é substituído com outro resíduo de aminoácido de estrutura química similar e que têm pouca ou essencialmente nenhuma influência na função, atividade ou outras propriedades biológicas do polipeptídeo. Possíveis substituições de aminoácido conservadoras estarão leves à pessoa versada na técnica. Sequências de aminoácido e sequências de ácido nucleico são ditas serem "exatamente as mesmas" se elas têm 100% de identidade de sequência sobre seu comprimento inteiro.

[00256] Quando aqui usados, os termos "região de determinação de complementaridade" ou "CDR" dentro do contexto de anticorpos referem-se a regiões variáveis de cadeias H (pesadas) ou L (leves) (da mesma forma abreviado como VH e VL, respectivamente) e contêm as sequências de aminoácido capazes de especificamente ligarem-se a alvos antigênicos. Estas regiões de CDR respondem pela especificidade básica do anticorpo para uma estrutura determinante antigênica particular. Tais regiões são da mesma forma chamadas "regiões hiperdisponíveis". As CDRs representam forças não contíguas de aminoácidos dentro das regiões variáveis, porém, embora de espécies, os locais posicionais destas sequências de aminoácido críticas dentro das regiões de cadeias pesada e leve variáveis foram constatados ter locais similares dentro das sequências de aminoácido das cadeias variáveis. As cadeias pesada e leve variáveis de todos os anticorpos canônicos, cada qual tem 3 regiões de CDR, cada qual não contígua com os outras (denominadas L1, L2, L3, H1, H2, H3) para as respectivas cadeias leve (L) e pesada (H).

[00257] O termo "afinidade", quando aqui usado, refere-se ao grau ao qual um polipeptídeo, em particular uma imunoglobulina, tal como um anticorpo, ou um fragmento de imunoglobulina, tal como um VHH, liga-se a um antígeno para mudar o equilíbrio de antígeno e polipeptídeo com relação à presença de um complexo formado por sua ligação. Desse modo, por exemplo, onde um antígeno e anticorpo (fragmento) são combinados em concentração relativamente igual, um anticorpo (fragmento) de alta afinidade se ligará ao antígeno disponível para mudar o equilíbrio com relação à alta concentração do complexo resultante. A constante de dissociação é geralmente usada para descrever a afinidade entre o domínio de ligação proteína e o alvo antigênico. Tipicamente, a constante de dissociação é mais baixa do que 10-5 M. Preferivelmente, a constante de dissociação é mais baixa do que 10-6 M, mais preferivelmente, mais baixa do que 10-7 M. Ainda mais preferivelmente, a constante de dissociação é mais baixa do que 10-8 M.

[00258] Os termos "especificamente liga-se" e "ligação específica", quando aqui usados, geralmente referem-se à experiência de um polipeptídeo, em particular uma imunoglobulina, tal como um anticorpo, ou um fragmento de imunoglobulina, tal como um VHH, para ligar-se preferencialmente a um antígeno particular, que está presente em uma mistura homogênea de antígenos diferentes. Em certas modalidades, uma interação de ligação específica discriminará entre antígenos desejáveis e indesejáveis em uma amostra, em algumas modalidades mais que cerca de 10 a 100 vezes ou mais (por exemplo, mais do que cerca de 1000 ou 10.000 vezes).

[00259] Consequentemente, uma sequência de aminoácido como descrito aqui significa "especificamente ligar-se a" um alvo particular quando aquela sequência de aminoácido tem afinidade para, especificidade para e/ou especificamente é direcionada contra aquele alvo (ou para pelo menos uma parte ou fragmenta do mesmo).

[00260] A "especificidade" de uma sequência de aminoácido como descrito aqui pode ser determinada com base na afinidade e/ou avidez.

[00261] Uma sequência de aminoácido como descrito aqui significa ser "específica para um primeiro antígeno alvo de interesse ao invés de um segundo antígeno alvo de interesse" quando liga-se ao primeiro antígeno alvo de interesse com uma afinidade que é pelo menos 5 vezes, tal como pelo menos 10 vezes, tal como pelo menos 100 vezes, e preferivelmente pelo menos 1000 vezes mais alta do que a afinidade com que aquela sequência de aminoácido como descrito aqui, liga-se ao segundo antígeno alvo de interesse. Consequentemente, em certas modalidades, quando uma sequência de aminoácido como descrito aqui é dita ser "específica para" um primeiro antígeno alvo de interesse ao invés de um segundo antígeno alvo de interesse, especificamente pode ligar-se ao (como definido aqui) primeiro antígeno alvo de interesse, porém não ao segundo antígeno alvo de interesse.

[00262] Quando aqui usado, os termos "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" podem se referir a (ao uso de) uma sequência de aminoácido como descrito aqui, que especificamente liga-se a um antígeno alvo de interesse e inibe, reduz e/ou previne a interação entre aquele antígeno alvo de interesse, e seu par de ligação natural. Os termos "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" podem se referir da mesma forma a (ao uso de) uma sequência de aminoácido como descrito aqui, que especificamente liga-se a um antígeno alvo de interesse e inibe, reduz e/ou previne uma atividade biológica daquele antígeno alvo de interesse, quando medido usando um ensaio in vitro, celular ou in vivo adequado. Consequentemente, "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" podem se referir da mesma forma a (ao uso de) uma sequência de aminoácido como descrito aqui, que especificamente liga-se a um antígeno alvo de interesse e inibe, reduz e/ou previne um ou mais mecanismos biológicos ou fisiológicos, efeitos, respostas, séries de reação de funções ou atividades, nas quais o antígeno alvo de interesse está envolvido. Uma tal ação da sequência de aminoácido como descrito aqui como um antagonista, pode ser determinada de qualquer maneira adequada e/ou usando qualquer ensaio adequado (in vitro e normalmente celular ou in vivo) conhecido na técnica, dependendo do antígeno alvo de interesse.

[00263] Mais particularmente, desse modo "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" usando sequência de aminoácido como descrito aqui, pode significar inibir, reduzir e/ou prevenir a interação entre um antígeno alvo de interesse e seu par de ligação natural, ou, inibir, reduzir e/ou prevenir a atividade de um antígeno alvo de interesse, ou, inibir, reduzir e/ou prevenir um ou mais mecanismos biológicos ou fisiológicos, efeitos, respostas, séries de reação de funções ou atividades, nas quais o antígeno alvo de interesse está envolvido, tais como por pelo menos 10%, porém preferivelmente pelo menos 20%, por exemplo, por pelo menos 50% pelo menos 60% pelo menos 70% pelo menos 80% pelo menos 90% pelo menos 95% ou mais, quando medido usando um adequado ensaio in vitro, celular ou in vivo, comparado à atividade do antígeno alvo de interesse no mesmo ensaio sob as mesmas condições, porém sem usar a sequência de aminoácido como descrito aqui. Além disso, "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" podem da mesma forma significar induzir uma diminuição na afinidade, avidez, especificidade e/ou seletividade de um antígeno alvo de interesse para um ou mais de seus pares de ligação naturais e/ou induzir uma diminuição na sensibilidade do antígeno alvo de interesse para uma ou mais condições no meio ou ambientes, nos quais o antígeno alvo de interesse está presente (tais como, pH, força iônica, a presença de cofatores, etc.), comparado às mesmas condições, porém sem a presença da sequência de aminoácido como descrito aqui. No contexto da presente invenção, "inibir", "reduzir" e/ou "prevenir" podem da mesma forma envolver inibição alostérica, redução e/ou prevenção da atividade de um antígeno alvo de interesse.

[00264] A atividade inibidora ou antagonizadora ou a atividade realçadora ou agonizante de uma sequência de aminoácido como descrito aqui, pode ser reversível ou irreversível, porém para aplicações agroquímicas tipicamente ocorrerá reversivelmente.

[00265] Uma sequência de aminoácido como descrito aqui é considerada ser "(em) essencialmente isolada (forma)" quando aqui usado, quando foi extraída ou purificada a partir da célula hospedeira e/ou meio no qual é produzida.

[00266] Em relação às sequências de aminoácido como descrito aqui, os termos "região de ligação", "sítio de ligação" ou "sítio de interação" presente nas sequências de aminoácido como descrito aqui, terão o significado de um sítio, região, local, parte ou domínio particular presente na molécula alvo, cujo sítio, região, local, parte ou domínio particular é responsável por ligar-se àquela molécula alvo. Tal região de ligação consiste desse modo essencialmente naquele sítio particular, região, local, parte ou domínio da molécula alvo que entra em contato com a sequência de aminoácido quando ligado àquela molécula alvo.

[00267] "Planta" quando aqui usado, significa plantas vivas e partes de planta vivas, incluindo fruta fresca, legumes e sementes. Da mesma forma, o termo "planta" quando aqui usado, abrange plantas inteiras, ancestrais e progênie das plantas e partes de planta, inclusive sementes, brotos, talos, folhas, raízes (inclusive tubérculos), flores e tecidos e órgãos, em que cada um dos acima mencionados compreende o gene/ácido nucleico de interesse. O termo "planta" também abrange células de planta, culturas em suspensão, tecido de calo, embriões, regiões meristemáticas, gametófitos, esporófitos, pólen e microsporos, novamente, em que cada um dos acima mencionados compreende o gene/ácido nucleico de interesse.

[00268] A escolha de plantas de controle adequadas é uma parte rotineira de uma configuração experimental e pode incluir plantas tipo selvagens correspondentes ou plantas correspondentes sem o gene de interesse. A planta de controle é tipicamente da mesma espécie de planta ou até mesmo da mesma variedade como a planta a ser avaliada. A planta de controle pode ser da mesma forma um nulizigoto da planta a ser avaliada. Nulizigotos são indivíduos que perdem o transgene por segregação. Uma "planta de controle" quando aqui usada, refere-se não apenas a plantas inteiras, porém da mesma forma a partes de planta, inclusive sementes e partes de semente.

[00269] "Cultura" quando aqui usado, refere-se a uma espécie de planta ou variedade que é cultivada para ser colhida como alimento, forragem de gado, matéria-prima de combustível, ou para qualquer outro propósito econômico. Como um exemplo não limitante, as referidas culturas podem ser, milho, cereais, tais como trigo, centeio, cevada e aveia, sorgo, arroz, beterraba açucareira e beterraba forrageira, fruta, tais como pomoideas (por exemplo, maçãs, peras), fruta cítrica (por exemplo, laranjas, limões, limas, toronja ou mandarinas), frutas de caroço (por exemplo, pêssegos, nectarinas ou ameixas), nozes(nuts) (por exemplo, amêndoas ou nozes(walnuts)), fruta macia (por exemplo, cerejas, morangos, amoras ou framboesas), a família da banana ou videiras, culturas de leguminosas, tais como feijões, lentilhas, ervilhas e soja, culturas de oleagenosas, tais como girassol, cártamo, colza, óleo de colza, rícino ou azeitonas, cucurbitáceas, tais como pepinos, melões ou abóboras, plantas fibrosas, tais como algodão, linho ou cânhamo, culturas de combustível, tais como cana-de-açúcar, miscanthus ou switchgrass, legumes, tais como, batatas, tomates, pimentas, alface, espinafre, cebolas, cenouras, beringelas, aspargos ou repolho, ornamentais, tais como flores (por exemplo, petúnias, pelargônio, rosas, tulipas, lírios ou crisântemos), arbustos, árvores de folha larga (por exemplo, álamos ou salgueiros) e sempre-vivas (por exemplo, coníferas), gramíneas, tal como, gramado, relva ou grama de forragem ou outras plantas úteis, tal como, café, chá, tabaco, lúpulo, pimenta, borracha ou plantas de látex.

[00270] Uma "peste", quando aqui usada, é um organismo que é prejudicial a plantas, animais, humanos ou interesses humanos, e inclui, porém não está limitado a, pestes de cultura (como depois definido), pestes domésticas, tais como baratas, formigas, etc., e vetores de doença, tais como mosquitos da malária.

[00271] Uma "peste de planta", "patógeno de planta ou "peste de cultura", quando usado no pedido alternadamente, refere-se a organismos que especificamente causam dano a plantas, partes de planta ou produtos de planta, particularmente plantas, partes de planta ou produtos de planta usados na agricultura. Note que o termo "peste de planta" ou "peste de cultura" é usado no significado que a peste alveja e prejudica as plantas. Pestes pertencem particularmente a animais invertebrados (por exemplo, insetos (incluindo insetos pestes agrícolas, pestes insectos de plantas ornamentais, pestes insectos de florestas). Exemplos de peste de cultura relevantes incluem, porém não são limitados a, afídeos, lagartas, moscas, vespas, e similares, nematódeos (que vivem livremente no solo ou particularmente espécies que parasitam raízes de planta, tais como nematódeos formadores de galha e nematódeos formadores de cisto tais como, nematódeos de cisto da soja e nematódeos de cisto da batata), ácaros (tais como, ácaros aranha, ácaros thread-footed e ácaros de galha) e gastrópodes (inclusive lesmas tais como, Deroceras spp., Milax spp., Tandonia sp., Umax spp., Arion spp. e Veronicella spp. e caracóis tais como, Helix spp., Cernuella spp., Theba spp., Cochlicella spp., Achatina spp., Succinea spp., Ovachlamys spp., Amphibulima spp., Zachrysia spp., Bradybaena spp. e Pomacea spp.), fungos patogênicos (inclusive Ascomicetos (tais como, Fusarium spp., Thielaviopsis spp., Verticillium spp., Magnaporthe spp.), Basidiomicetos (tais como, Rhizoctonia spp., Phakospora spp., Puccinia spp.) e Oomicetos do tipo fúngico (tais como, Pythium spp. e Phytophthora spp.), bactérias (tais como, Burkholderia spp. e Proteobactérias tais como, Xanthomonas spp. e Pseudomonas spp.), Fitoplasma, Espiroplasma, vírus (tais como, vírus mosaico do tabaco e vírus mosaico da couve-flor) e protozoários.

[00272] "Micróbio", quando aqui usado, significa bactéria, vírus, fungo, levedura e similares, e "microbiano" significa derivado de um micróbio.

[00273] "Fungo", quando aqui usado, significa um organismo eucariótico, que pertence ao grupo de Eumycota. O termo fungo na presente invenção também inclui organismos do tipo fúngico tais como, o Oomycota. Oomycota (ou oomicetos) forma uma linhagem filogenética distinta dos microorganismos eucarióticos do tipo fúngico. Este grupo foi classificado originalmente entre os fungos, porém critérios modernos apoiam uma relação relativamente íntima com os organismos fotossintéticos tais como, algas marrons e diatomáceas, dentro do grupo de heterokonts.

[00274] "Infecção por peste" ou "doença por peste" quando aqui usado, refere-se a qualquer condição inflamatória, doença ou transtorno em um organismo vivo, tal como uma planta, animal ou humano que são causados por uma peste.

[00275] "Infecção fúngica" ou "doença fúngica" quando aqui usado, refere-se a qualquer condição inflamatória, doença ou transtorno em um organismo vivo, tal como uma planta, animal ou humano que é causado por um fungo.

[00276] "Substância ativa", "ingrediente ativo" ou "princípio ativo", quando usado alternadamente aqui, significa qualquer elemento biológico, bioquímico ou químico e seus derivados, fragmentos ou compostos com base nestes, inclusive micro-organismos, apresentando ação general ou específica contra organismos prejudiciais em um indivíduo, e em particular em plantas, partes de plantas ou em produtos de planta, quando eles ocorrem naturalmente ou por fabricação, incluindo qualquer impureza que é o resultado inevitavelmente do processo industrial.

[00277] "Agroquímico", quando aqui usado, significa adequado para uso na indústria agroquímica (inclusive agricultura, horticultura, floricultura e usos domésticos e em jardim, porém da mesma forma, produtos pretendidos para usos não relacionados à cultura tais como, usos de operador de controle de saúde pública/peste para controlar insetos indesejáveis e roedores, usos domésticos, tais como fungicidas e inseticidas domésticos e agentes para proteção de plantas ou partes de plantas, culturas, bulbos, tubérculos, frutas (por exemplo, de organismos prejudiciais, doenças ou pragas); para controlar, preferivelmente promover ou aumentar o crescimento de plantas; e/ou para a promoção da produção de plantas, culturas ou partes de plantas que são colhidas (por exemplo, suas frutas, flores, sementes etc.). Exemplos de tais substâncias estarão claros à pessoa versada e poderão, por exemplo, incluir compostos que são ativos como inseticidas (por exemplo, inseticidas de contato ou inseticidas sistêmicos, incluindo inseticidas para uso doméstico), herbicidas (por exemplo, herbicidas de contato ou herbicidas sistêmicos, inclusive herbicidas para uso doméstico), fungicidas (por exemplo, fungicidas de contato ou fungicidas sistêmicos, incluindo fungicidas para uso doméstico), nematicidas (por exemplo, nematicidas de contato ou nematicidas sistêmicos, inclusive nematicidas para uso doméstico) e outros pesticidas ou biocidas (por exemplo, os agentes para matar insetos ou caracóis); bem como fertilizantes; reguladores de crescimento tais como, hormônios de planta; micronutrientes, protetores, feromônios; repelentes; iscas de inseto; e/ou princípios ativos que são usados para modular (isto é, aumentar, diminuir, inibir, realçar e/ou ativar) a expressão de gene (e/ou outros processos biológicos ou bioquímicos) em ou pela planta alvejada (por exemplo, a planta a ser protegida ou a planta a ser controlada), tais como ácidos nucleicos (por exemplo, RNA de filamento único ou de filamento duplo, como por exemplo, usados no contexto de tecnologia de RNAi) e outros fatores, proteínas, substâncias químicas, etc. conhecidas per se para este propósito, etc. Exemplos de tais substâncias agroquímicas estarão claros à pessoa versada; e por exemplo, incluem, sem limitação: glifosato, paraquate, metolaclor, acetoclor, mesotriona, 2,4-D,atrazina, glifosinato, sulfosato, fenoxaprope, pendimetalina, picloram, trifluralina, bromoxinil, clodinafope, fluroxipir, nicossulfurona, bensulfurona, imazetapir, dicamba, imidaclopride, tiametoxam, fipronil, clorpirifos, deltametrina, lambda-cialotrina, endosulfano, metamidofos, carbofurano, clotianidina, cipermetrina, abamectina, diflufenicano, espinosade, indoxacarbe, bifentrina, teflutrina, azoxistrobina, tiametoxam, tebuconazol, mancozebe, ciazofamida, fluazinam, piraclostrobina, epoxiconazol, clorotalonil, fungicidas de cobre, trifloxistrobina, protioconazol, difenoconazol, carbendazim, propiconazol, tiofanato, enxofre, boscalide e outras substâncias agroquímicas conhecidas ou qualquer(quaisquer) combinação(ões) adequada(s) dos mesmos.

[00278] Uma "composição agroquímica" quando aqui usada, significa uma composição para uso agroquímico, como também definido, que compreende pelo menos uma substância ativa, opcionalmente com um ou mais aditivos que favorecem ótima dispersão, atomização, deposição, umedecimento foliar, distribuição, retenção e/ou captação de substâncias agroquímicas. Ficará claro a partir da outra descrição aqui, que uma composição agroquímica quando aqui usada inclui agentes de controle biológico ou pesticidas biológicos (incluindo porém não limitado a, agentes biológicos, biocidas, biostáticos, fungistáticos e fungicidas) e estes termos serão alternadamente usados no presente pedido. Consequentemente, uma composição agroquímica quando aqui usada inclui, composições que compreende pelo menos uma molécula biológica como um princípio, substância ou ingrediente ativo para controlar pestes em plantas ou em outras aplicações agrorrelacionadas (tal como, por exemplo, no solo). Exemplos não limitantes de moléculas biológicas que são usadas como princípios ativos nas composições agroquímicas descritas aqui são proteínas (inclusive anticorpos e fragmentos dos mesmos, tais como porém não limitados a, fragmentos de domínio variável de cadeia pesada de anticorpos, inclusive VHH), sequências de ácido nucleico, (polissacarídeos, lipídeos, vitaminas, hormônios, glicolipídeos, esteróis, e glicerolipídeos.

[00279] Como um exemplo não limitante, os aditivos nas composições agroquímicas descritas aqui podem incluir, porém não estão limitados a, diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos, agentes umectantes, agentes de propagação, óleos, adesivos, espessantes, penetrantes, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelamento, fotoprotetores, agentes desespumantes, biocidas e/ou agentes de controle de deriva.

[00280] Uma "composição biostática" ou um "agente biostático" quando aqui usado, significa qualquer princípio, substância ou ingrediente ativo ou uma composição que compreende qualquer princípio, substância ou ingrediente ativo para uso biostático (como também definido aqui) que compreende pelo menos um ingrediente ou substância biostática ativa, opcionalmente combinada com um ou mais aditivos que favorecem dispersão ideal, atomização, deposição, umedecimento foliar, distribuição, retenção e/ou captação do ingrediente ou substância ativa. Como um exemplo não limitante, tais aditivos são diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos (iônicos), agentes umectantes, agentes de propagação, óleos, adesivos, espessantes, penetrantes, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelamento, fotoprotetores, agentes desespumantes, biocidas, inibidores de protease e/ou agentes de controle de deriva.

[00281] Uma "composição biocida" ou um "agente biocida", quando aqui usado, significa qualquer princípio, substância ou ingrediente ativo ou uma composição que compreende qualquer princípio, substância ou ingrediente ativo para uso biocida (como também definido aqui) que compreende pelo menos um ingrediente ou substância biocida ativa, opcionalmente combinada com um ou mais aditivos que favorecem dispersão ideal, atomização, deposição, umedecimento foliar, distribuição, retenção e/ou captação do ingrediente ou substância ativa. Como um exemplo não limitante, tais aditivos são diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos (iônicos), agentes umectantes, agentes de propagação, óleos, adesivos, espessantes, penetrantes, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelamento, fotoprotetores, agentes desespumantes, biocidas, inibidores de protease e/ou agentes de controle de deriva.

[00282] Uma "composição fungistática" ou um "agente fungistático" quando aqui usado, significa qualquer princípio, substância ou ingrediente ativo ou uma composição que compreende qualquer princípio, substância ou ingrediente ativo para uso fungistático (como também definido aqui) que compreende pelo menos um ingrediente ou uma substância fungistática ativa, opcionalmente combinada com um ou mais aditivos que favorecem dispersão ideal, atomização, deposição, umedecimento foliar, distribuição, retenção e/ou captação do ingrediente ou substância ativa. Como um exemplo não limitante, tais aditivos são diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos (iônicos), agentes umectantes, agentes de propagação, óleos, adesivos, espessantes, penetrantes, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelamento, fotoprotetores, agentes desespumantes, biocidas, inibidores de protease e/ou agentes de controle de deriva.

[00283] Uma "composição fungicida" ou um "agente fungicida" quando aqui usado, significa qualquer princípio, substância ou ingrediente ativo ou uma composição que compreende qualquer princípio, substância ou ingrediente ativo para uso fungicida (como também definido aqui) que compreende pelo menos uma substância fungicida ativa ou ingrediente, opcionalmente combinada com um ou mais aditivos que favorecem dispersão ideal, atomização, deposição, umedecimento foliar, distribuição, retenção e/ou captação do ingrediente ou substância ativa. Como um exemplo não limitante, tais aditivos são diluentes, solventes, adjuvantes, tensoativos (iônicos), agentes umectantes, agentes de propagação, óleos, adesivos, espessantes, penetrantes, agentes de tamponamento, acidificantes, agentes antissedimentação, agentes anticongelamento, fotoprotetores, agentes desespumantes, biocidas, inibidores de protease e/ou agentes de controle de deriva.

[00284] "Uso agroquímico", quando aqui usado, não apenas inclui o uso substâncias agroquímicas como definido acima (por exemplo, pesticidas, reguladores de crescimento, nutrientes/fertilizantes, repelentes, desfolhantes etc.) que são adequadas e/ou pretendidas para uso nas culturas cultivadas em campo (por exemplo, agricultura), porém da mesma forma inclui o uso de substâncias agroquímicas como definido acima (por exemplo, pesticidas, regulatores de crescimento, nutrientes/fertilizantes, repelentes, desfolhantes etc.) que são pretendidos para uso em culturas cultivadas em estufa (por exemplo, horticultura/floricultura) ou sistemas de cultura hidropônica e ainda o uso de substâncias agroquímicas como definido acima, que são adequadas ou pretendidas para usos de não cultura tais como, usos em jardins privados, usos domésticos (por exemplo, herbicidas ou inseticidas para uso doméstico), ou usos por operadores de controle de peste (por exemplo, controle de ervas daninhas, etc.).

[00285] "Biostático (efeito)" ou "uso biostático", quando aqui usado, inclui qualquer efeito ou uso de uma substância ativa (opcionalmente compreendida em uma composição biostática, biocida, fungicida ou fungistática como definido aqui) para controlar, modular ou interferir com a atividade prejudicial de uma peste, tal como uma peste de planta ou um patógeno de planta, que inclui porém não limitado a, inibir o crescimento ou atividade da peste, alterar o comportamento da peste, e repelir ou atrair a peste em plantas, partes de planta ou em outras aplicações agrorrelacionadas, tais como por exemplo, para usos domésticos ou no solo.

[00286] "Biocida (efeito)" ou "uso biocida", quando aqui usado, inclui qualquer efeito ou uso de uma substância ativa (opcionalmente compreendido em uma composição biocida ou fungicida como definido aqui) para controlar, modular ou interferir com a atividade prejudicial de uma peste, tal como uma peste de planta ou um patógeno de planta, que inclui, porém não limitado a, matar a peste, inibir o crescimento ou atividade da peste, alterar o comportamento da peste, e repelir ou atrair a peste em plantas, partes de planta ou em outras aplicações agrorrelacionadas, tais como por exemplo, para usos domésticos ou no solo.

[00287] "Fungistático (efeito)" ou "Uso Fungistático", quando aqui usado, inclui qualquer efeito ou uso de uma substância ativa (opcionalmente compreendido em um fungicida ou composição fungistática como definido aqui) para controlar, modular ou interferir com a atividade prejudicial de um fungo, incluindo, porém não limitado a, inibir o crescimento ou atividade do fungo, alterar o comportamento do fungo, e repelir ou atrair o fungo em plantas, partes de planta ou em outras aplicações agrorrelacionadas, tais como por exemplo, para usos domésticos ou no solo.

[00288] "Fungicida (efeito)" ou "Uso Fungicida", quando aqui usado, inclui qualquer efeito ou uso de uma substância ativa (opcionalmente compreendido em uma composição fungicida como definido aqui) para controlar, modular ou interferir com a atividade prejudicial de um fungo, incluindo porém não limitado a, matar o fungo, inibir o crescimento ou atividade do fungo, alterar o comportamento do fungo, e repelir ou atrair o fungo em plantas, partes de planta ou em outras aplicações agrorrelacionadas, tais como por exemplo, para usos domésticos ou no solo.

[00289] "Atividade pesticida" ou "atividade biocida", como alternadamente usado aqui, significa interferir com a atividade prejudicial de uma peste, incluindo, porém não limitado a, matar a peste, inibir o crescimento ou atividade da peste, alterar o comportamento da peste, repelir ou atrair a peste.

[00290] "Atividade biostática", quando aqui usado, significa interferir com a atividade prejudicial de uma peste, incluindo, porém não limitado a, inibir o crescimento ou atividade da peste, alterar o comportamento da peste, repelir ou atrair a peste.

[00291] Atividade pesticida, biocida ou biostática de um princípio, substância ou ingrediente ativo ou uma composição ou agente que compreende um princípio, substância ou ingrediente ativo pesticida, biocida ou biostático, pode ser expressa como a atividade inibidora mínima (MIC) de um agente (expresso em unidades de concentração tais como, por exemplo, mg/mL), sem no entanto se limitar aos mesmos.

[00292] "Atividade fungicida", quando aqui usado, significa interferir com a atividade prejudicial de um fungo, incluindo, porém não limitado a, matar o fungo, inibir o crescimento ou atividade do fungo, alterar o comportamento do fungo, e repelir ou atrair o fungo.

[00293] "Atividade fungistática", quando aqui usado, significa interferir com a atividade prejudicial de um fungo, incluindo, porém não limitado a, inibir o crescimento ou atividade do fungo, alterar o comportamento do fungo, e repelir ou atrair o fungo.

[00294] Atividade fungicida ou fungistática de um princípio, substância ou ingrediente ativo ou uma composição ou agente que compreende um princípio, substância ou ingrediente ativo pesticida, biocida ou biostático, pode ser expressa como a atividade inibidora mínima (MIC) de um agente (expresso em unidades de concentração tais como, por exemplo, mg/mL), sem no entanto se limitar aos mesmos.

[00295] "Veículo", quando aqui usado, significa qualquer sólido, semissólido ou veículo líquido em ou sobre(o) qual uma substância ativa pode ser incorporada, incluída, imobilizada, adsorvida, absorvida, ligada, encapsulada, embutida, unida ou compreendida adequadamente. Exemplos não limitantes de tais veículos incluem nanocápsulas, microcápsulas, nanoesferas, microesferas, nanopartículas, micropartículas, lipossomas, vesículas, contas, um gel, partículas de resina iônica fracas, lipossomas, veículos de liberação de cocleado, grânulos pequenos, granulados, nanotubos, bucky-balls, gotículas de água que fazem parte de uma emulsão de água-em-óleo, gotículas de óleo que fazem parte de uma emulsão de óleo-em-água, materiais orgânicos tais como, cortiça, madeira ou outros materiais derivados de planta (por exemplo, sob a forma de cascas de sementes, lascas de madeira, celulose, esferas, contas, folhas ou qualquer outra forma adequada), de papel ou de papelão, materiais inorgânicos tais como, talco, argila, celulose microcristalina, sílica, alumina, silicatos e zeólitos, ou até mesmo células microbianas (tais como, células de levedura) ou frações adequadas ou fragmentos dos mesmos.

[00296] Quando aqui usado, o termo "anticorpo" refere-se a anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, anticorpos humanizados, anticorpos de cadeia única, e fragmentos dos mesmos tais como, Fab F(ab)2, Fv, e outros fragmentos que mantêm a função de ligação de antígeno do anticorpo de origem. Como tal, um anticorpo pode referir-se a uma imunoglobulina ou glicoproteína, ou fragmento ou parte dos mesmos, ou a uma construção compreendendo uma porção de ligação de antígeno compreendida dentro de uma modificou estrutura semelhante à imunoglobulina, ou a uma porção de ligação de antígeno compreendida dentro de uma construção compreendendo um andaime ou estrutura não semelhante à imunoglobulina.

[00297] Quando aqui usado, o termo "anticorpos monoclonais" refere-se a uma composição de anticorpo que tem uma população de anticorpo homogênea. O termo não está limitado relativo às espécies ou fonte do anticorpo, não é pretendido ser limitado pela maneira na qual é feito. O termo abrange imunoglobulinas inteiras bem como fragmentos tais como, Fab, F ab)2, Fv, e outros que mantêm a função de ligação de antígeno do anticorpo. Anticorpos monoclonais de qualquer espécie mamífera podem ser usados nesta invenção. Em prática, entretanto, os anticorpos serão tipicamente de origem de rato ou murino por causa da disponibilidade de linhagens celulares de murino ou rato para uso na preparação de linhagens celulares híbridas requeridas ou hibridomas para produzir os anticorpos monoclonais.

[00298] Quando aqui usado, o termo "anticorpo policlonal" refere-se a uma composição de anticorpo apresentando uma população de anticorpo heterogênea. Anticorpos policlonais são derivados frequentemente a partir do soro agrupado de animais imunizados ou de seres humanos selecionados.

[00299] "Domínio variável de cadeia pesada" de um anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo", quando aqui usado, significa (i) o domínio variável da cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada que é naturalmente destituído de cadeias leves (da mesma forma indicado daqui por diante como VHH), incluindo, porém, não limitado ao domínio variável da cadeia pesada de anticorpos de cadeia pesadas de camelídeos ou tubarões ou (ii) o domínio variável da cadeia pesada de um anticorpo de quatro cadeias convencional (da mesma forma indicado daqui por diante como VH), incluindo porém não limitado a, um domínio variável camelizado (como também definido aqui) da cadeia pesada de um anticorpo de quatro cadeias convencional (da mesma forma indicado daqui por diante como VH camelizado). Como também descrito a seguir, a sequência de aminoácido e estrutura de uma cadeia pesada pode ser considerada domínio variável de um anticorpo, sem estar sendo limitada a este, ser compreendida de quatro regiões de estrutura ou "FRs", que são referidas na técnica e a seguir como "região de estrutura 1" ou "FR1"; como "região de estrutura 2" ou "FR2"; como "região de estrutura 3" ou "FR3"; e como "região de estrutura 4" ou "FR4", respectivamente, cujas regiões de estrutura são interrompidas por três regiões de determinação complementares ou "CDRs", que são referidas na técnica como "região de determinação de complementaridade 1" ou "CDR1"; como "região de determinação de complementaridade 2" ou "CDR2"; e como "região de determinação de complementaridade 3" ou "CDR3", respectivamente.

[00300] Como da mesma forma também descrito a seguir, o número total de resíduos de aminoácido em um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (incluindo um VHH ou um VH) pode estar na região de 110-130, ser preferivelmente 112-115, e ser preferivelmente 113. Deve ser notado, entretanto, que partes, fragmentos ou análogos de um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo não são particularmente limitados quanto ao seu comprimento e/ou tamanho, contanto que tais partes, fragmentos ou análogos mantenham (pelo menos parte de) a atividade funcional, tal como a atividade pesticida, biocida, biostática, atividade fungicida ou fungistática (como definido aqui) e/ou mantenham (pelo menos parte de) a especificidade de ligação do domínio variável de cadeia pesada original de um anticorpo a partir do qual estas partes, fragmentos ou análogos são derivados a partir destes. Partes, fragmentos ou análogos mantendo (pelo menos parte de) a atividade funcional, tais como a atividade pesticida, biocida, biostática, atividade fungicida ou fungistática (como definido aqui) e/ou mantendo (pelo menos parte de) a especificidade de ligação do domínio variável de cadeia pesada original de um anticorpo do qual estas partes, fragmentos ou análogos são derivados a partir deste são da mesma forma referidos aqui como "fragmentos funcionais" de um domínio variável de cadeia pesada.

[00301] Os resíduos de aminoácido de um domínio variável de um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (incluindo um VHH ou um VH) são numerados de acordo com a numeração geral para domínios variáveis de cadeia pesada produzidos por Kabat ET AL.. ("Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, Md., Publication No. 91), como aplicado aos domínios de VHH de Camelídeos no artigo de Riechmann e Muyldermans, referido acima (veja por exemplo, FIG. 2 da referida referência). De acordo com esta numeração, FR1 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácido nas posições 1-30, CDR1 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácido nas posições 31-36, FR2 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os aminoácidos nas posições 36-49, CDR2 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácido nas posições 50-65, FR3 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácido nas posições 66-94, CDR3 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácido nas posições 95-102, e FR4 de um domínio variável de cadeia pesada compreende os resíduos de aminoácido nas posições 1 03-1 13. [Neste respeito, deveria ser notado que - como é bem conhecido na técnica por domínios de VHH - o número total de resíduos de aminoácido em cada dentre as CDR's pode variar e pode não corresponder ao número total de resíduos de aminoácido indicados pela numeraração de Kabat (isto é, uma ou mais posições de acordo com a numeração de Kabat podem não ser ocupadas na sequência atual, ou a sequência atual pode conter mais resíduos de aminoácido que o número permitido pela numeração de Kabat). Geralmente, isto significa que a numeração de acordo com Kabat pode ou não pode corresponder à numeração atual dos resíduos de aminoácido na sequência atual. Entretanto, geralmente, pode ser dito que, de acordo com a numeração de Kabat e independente do número de resíduos de aminoácido nas CDR's, a posição 1 de acordo com a numeração de Kabat que corresponde ao começo de FR1 e vice-versa, posição 36 de acordo com a numeração de Kabat que corresponde ao começo de FR2 e vice-versa, posição 66 de acordo com a numeração de Kabat que corresponde ao começo de FR3 e vice-versa, e posicção 1 03 de acordo com a numeração de Kabat que corresponde ao começo de FR4 e vice-versa.].

[00302] Métodos alternativos para numerar os resíduos de aminoácido de domínios variáveis de cadeia pesada são o método descrito por Chothia et al. (Nature 342, 877-883 (1 989)), a denominada "definição de AbM" e denominada "definição de contato". Entretanto, na presente descrição, reivindicações e figuras, a numeração de Kabat quando aplicada aos dompinios VHH por Riechmann e Muyldermans, serão serguidas, a menos que indicado de outra maneira.

[00303] Para uma descrição geral de anticorpos de cadeia pesadas e os domínios variáveis dos mesmos, referência é inter alia feita às seguintes referências que são mencionadas como técnica antecedente geral: WO 94/04678, WO 95/04079 e WO 96/34103 do Vrije Universiteit Brussel; WO 94/25591 , WO 99/37681, WO 00/40968, WO 00/43507, WO 00/65057, WO 01 /40310, WO 01/44301 , EP 1 134231 e WO 02/48193 de Unilever; WO 97/49805, WO 01/21817, WO 03/035694, WO 03/05401 6 e WO 03/055527 do Vlaams Instituut voor Biotechnologie (VIB); WO 03/050531 de Algonomics N.V. and Ablynx NV; WO 01 /90190 pelo National Research Council of Canada; WO 03/025020 (=EP 1 433 793) pelo Institute of Antibodies; bem como WO 04/041 867, WO 04/041862, WO 04/041865, WO 04/041863, WO 04/062551 por Ablynx NV e os outros pedidos de patente publicados por Ablynx NV; Hamers-Casterman et al., Nature 1993 Jun. 3; 363 (6428) : 446-8; Davies e Riechmann, FEBS Lett. 1994 Feb. 21 ; 339(3): 285-90; Muyldermans et al., Protein Eng. 1994 September; 7(9) : 1129-3; Davies e Riechmann, Biotechnology (NY) 1995 May; 1 3(5) : 475-9; Gharoudi et al., 9th Forum of Applied Biotechnology, Med. 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[00304] Geralmente, deveria ser notado que o termo "domínio variável de cadeia pesada" quando aqui usado em seu sentido mais amplo não está limitado a uma fonte biológica específica ou a um método específico de preparação. Por exemplo, como será discutido em mais detalhes abaixo, os domínios variáveis de cadeia pesada da invenção pode ser obtidos (1) isolando-se o domínio de VHH de um anticorpo de cadeia pesada de ocorrência natural; (2) isolando-se o domínio de VH de um anticorpo de quatro cadeias de ocorrência natural (3) por expressão de uma sequência de nucleotídeo que codifica um domínio de VHH de ocorrência natural; (4) por expressão de uma sequência de nucleotídeo que codifica um domínio de VH de ocorrência natural (5) por "camelização" (como descrito abaixo) de um domínio de VH de ocorrência natural a partir de qualquer espécie animal, em particular uma espécie mamífera, tal como a partir de um ser humano, ou por expressão de um ácido nucleico que codifica um tal domínio de VH camelizado; (6) por "camelização" de um "anticorpo de domínio" ou "Dab" como descrito por Ward et al (supra), ou por expressão de um ácido nucleico que codifica um tal domínio de VH camelizado (7) usando técnicas sintéticas ou semissintéticas para preparar proteínas, polipeptídeos ou outras sequências de aminoácido; (8) preparando-se um ácido nucleico que codifica um VHH ou um VH usando técnicas para síntese de ácido nucleico, seguido por expressão do ácido nucleico desse modo obtido; e/ou (9) por qualquer combinação dos antecedentes. Métodos e técnicas adequados para realizar o precedente ficará clara à pessoa versada com base na descrição aqui e, por exemplo, incluem os métodos e técnicas descritos em mais detalhes a seguir.

[00305] Entretanto, de acordo com uma modalidade específica, os domínios variáveis de cadeia pesada como descritos aqui não têm uma sequência de aminoácido igual à que é exatamente (isto é, como um grau de identidade de sequência de 100% com) a sequência de aminoácido de um domínio de VH de ocorrência natural, tal como a sequência de aminoácido de um domínio de VH de ocorrência natural a partir de um mamífero, e em particular a partir de um ser humano.

[00306] Os termos "quantidade eficaz" e "dose eficaz", quando aqui usados, significam a quantidade necessária para alcançar o resultado ou resultados desejados.

[00307] Quando aqui usado, os termos "determinando", "medindo", "avaliando", "monitorando" e "analisandor" são alternadamente usados e incluem determinações quantitativas e qualitativas.

[00308] Todos os documentos citados na especificação presente estão por este meio incorporados por referência em sua totalidade. A menos que de outra maneira definido, todos os termos usados na descrição da invenção, incluindo termos técnicos e científicos, têm o significado como geralmente entendido por alguém de experiência ordinária na técnica a qual esta invenção pertence. Por meio de orientação adicional, o termo definições está incluído para apreciar melhor o ensino da presente invenção.

COMPOSIÇÕES COMPREENDENDO PELO MENOS UM DOMÍNIO VARIÁVEL DE CADEIA PESADA DE UM ANTICORPO

[00309] Em um aspecto, os presentes inventores identificaram composições agroquímicas compreendendo pelo menos um domínio variável de um anticorpo que especificamente pode ligar-se a um esfingolipídeo de uma peste de planta. Importantemente, por esta interação com uma estrutura molecular específica da peste, as composições descritas aqui são capazes de controlar, modular, inibir, prevenir ou reduzir uma ou mais atividades biológicas do patógeno de planta, tal que o crescimento do patógeno de planta é controlado, modulado, inibido, prevenido ou reduzido. Em certas modalidades, as composições agroquímicas como descrito aqui são capazes de matar uma peste de planta pela interação específica de pelo menos um domínio variável de um anticorpo que especificamente pode ligar-se a um esfingolipídeo de uma peste de planta e que é compreendido nas composições. Consequentemente, as composições agroquímicas como descrito aqui podem ser usadas para modular, tais como mudar, diminuir ou inibir, a função biológica de uma peste de planta ligando-se a um sítio de ligação presente em um alvo de esfingolipídeo daquela peste de planta desse modo afetando as atividades biológicas naturais (tais como, porém não limitadas a, crescimento) da peste e/ou um ou mais caminhos biológicos nos quais o alvo estrutural daquela peste está envolvido.

[00310] Além disso, as composições compreendendo pelo menos um domínio variável de cadeia pesada como descrito aqui têm várias vantagens adicionais sobre a imunoglobulina tradicional e agentes de ligação de não imunoglobulina conhecidos na técnica. Realmente, em certas modalidades, as sequências de aminoácido como descrito aqui são domínios variáveis de imunoglobulina de cadeia pesada isolados, que são mais potentes e mais estáveis do que anticorpos de quatro cadeias convencionais, levando a (1) formas de dosagem mais baixas, dosagem menos frequente e desse modo menos efeitos colaterais; e (2) estabilidade melhorada que resulta em uma escolha mais ampla de rotinas de administração. Por causa de seu tamanho pequeno, domínios variáveis de imunoglobulina de cadeia pesada têm a capacidade de cruzar as membranas e penetrar em compartimentos fisiológicos, tecidos e órgãos não acessíveis a outro, polipeptídeos e proteínas maiores.

[00311] Em uma modalidade específica, porém não limitante, as composições compreende pelo menos um domínio variável de cadeia pesada como descrito aqui são capazes de ligação específica (como definido aqui) a um alvo de peste de planta ou um antígeno de peste de planta; e mais preferivelmente capaz de ligação a uma peste ou alvo de patógeno de planta ou um antígeno de peste de planta ou antígeno de patógeno de planta com uma afinidade (apropriadamente medida e/ou expressa como um valor KD (real ou aparente), um valor KA (real ou aparente), uma taxa kon e/ou uma taxa Koff, ou alternativamente como um valor de IC50, como também descrito aqui) que é como aqui definido.

[00312] Em modalidades particulares, a invenção fornece uma composição agroquímica ou uma composição pesticida biológica para combater pestes de planta, mais particularmente um fungo de planta, cuja composição compreende pelo menos um polipeptídeo ou sequência de aminoácido dentre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa.

[00313] Em certas modalidades adicionais, a invenção fornece uma composição agroquímica para combater pestes de planta, cuja composição compreende pelo menos dois polipeptídeos ou pelo menos duas sequências de aminoácido dentre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa.

[00314] Em ainda outras modalidades, a invenção fornece uma composição agroquímica para combater pestes de planta, cuja composição compreende pelo menos três polipeptídeos ou pelo menos três sequências de aminoácido dentre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa.

[00315] A composição agroquímica de acordo com a invenção é uma composição agroquímica, como definido aqui, para combater pestes de planta, como definido anteriormente, significando que a composição agroquímica, mais em particular a substância ativa, como definido anteriormente, compreendida na composição agroquímica, pode interferir com, preferivelmente reduzir ou impedir, os efeitos prejudiciais de uma ou mais pestes de planta em uma ou mais plantas, preferivelmente culturas.

[00316] Desse modo, em uma modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos como a substância ativa.

[00317] Em modalidades mais específicas, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo dentre 80-100 aminoácidos, 800-120 aminoácidos, 80-140 aminoácidos, 80-160 aminoácidos ou 80180 aminoácidos.

[00318] Em ainda outra modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo dentre 100-200 aminoácidos, 100-180 aminoácidos, 100-160 aminoácidos, 100-150 aminoácidos, 100-140 aminoácidos ou 100-120 aminoácidos.

[00319] Em ainda outra modalidade a composição agroquímica compreende um polipeptídeo dentre 110-200 aminoácidos, 110-180 aminoácidos, 110-160 aminoácidos, 110-140 aminoácidos ou 110-130 aminoácidos.

[00320] Em ainda outra modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo dentre 120-200 aminoácidos, 120-180 aminoácidos, 120-160 aminoácidos, ou 120-140 aminoácidos.

[00321] Em ainda outra modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo dentre 140-200 aminoácidos, 140-180 aminoácidos, ou 140-160 aminoácidos.

[00322] Em ainda outra modalidade, a composição agroquímica compreende um polipeptídeo dentre 160-200 aminoácidos ou 160-180 aminoácidos.

[00323] O pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo compreendido nas composições descritas aqui pode ser derivado a partir de um polipeptídeo de ocorrência natural, ou alternativamente eles podem ser projetados completamente artificialmente. Exemplos não limitantes de tais polipeptídeos de ocorrência natural incluem anticorpos de cadeia pesada (hcAb).

[00324] Em particular pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo compreendido nas composições descritas aqui consiste em uma única cadeia de polipeptídeo e não é pós- translacionalmente modificado. Mais particularmente, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo compreendido nas composições descritas aqui é derivado a partir de um sistema imune inato ou adaptável, preferivelmente a partir de uma proteína de um sistema imune inato ou adaptável. Ainda mais particularmente, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo compreendido nas composições descritas aqui como descrito aqui é derivado a partir de uma imunoglobulina. Particularmente, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo compreendido nas composições descritas aqui compreende 4 regiões de estrutura e 3 regiões de determinação complementares, ou qualquer fragmento adequado dos mesmos (que conterá em seguida normalmente pelo menos alguns dos resíduos de aminoácido que formam pelo menos uma das regiões de determinação complementares). Em particular, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo compreendido nas composições descritas aqui é fácil de produzir a alto rendimento, preferivelmente em um sistema de expressão recombinante microbiano, e conveniente para isolar e/ou purificar subsequentemente.

[00325] De acordo com modalidades particulares, a invenção fornece várias extensões de resíduos de aminoácido (isto é, peptídeos pequenos) que são particularmente adequados para ligar-se a um antígeno de esfingolipídeo ou um alvo de esfingolipídeo, tal como, porém não limitado a, um antígeno de esfingolipídeo fúngico ou um alvo de esfingolipídeo fúngico.

[00326] Estas extensões de resíduos de aminoácido podem estar presentes em, e/ou podem ser incorporados nos domínios variáveis de cadeia pesada como descrito aqui, em particular de um tal modo que eles formam (parte de) o sítio de ligação de antígeno daquela domínio variável de cadeia pesada. Visto que estas extensões de resíduos de aminoácido foram geradas primeiro como sequências de CDR de anticorpos, tais como anticorpos de cadeia pesadas, ou de sequências de VH ou VHH que foram elevadas contra um alvo de esfingolipídeo (ou podem ser com base em e/ou derivadas de tais sequências de CDR, como também descrita aqui), elas se referirão da mesma forma geralmente aqui como "sequências de CDR" (isto é, como sequências de CDR1, sequências de CDR2 e sequências de CDR3, respectivamente). Deveria ser notado, entretanto, que a invenção em seu sentido mais amplo, não está limitada a um papel ou função estrutural específico que estas extensões de resíduos de aminoácido podem ter nos domínios variáveis de cadeia pesada como descrito aqui, contanto que estas extensões de resíduos de aminoácido permitam os domínios variáveis como descrito aqui especificamente ligarem-se a um alvo de esfingolipídeo. Geralmente, desse modo a invenção em seu sentido mais amplo refere-se às composições agroquímicas que compreendem um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo que é capaz de ligação a um alvo de esfingolipídeo e isso compreende uma combinação de sequências de CDR como descrito aqui.

[00327] Desse modo, em particular, porém, modalidades não limitantes, as sequências de domínio variável de cadeia pesada como descrito aqui podem ser domínios variáveis de cadeia pesada que compreendem pelo menos uma sequência de aminoácido que é selecionado a partir do grupo que consiste nas sequências de CDR1, sequências de CDR2 e sequências de CDR3 que são descritas aqui. Em particular, um domínio variável de cadeia pesada como descrito aqui pode compreender pelo menos um sítio de ligação de antígeno, em que o referido sítio de ligação de antígeno compreende pelo menos uma combinação de uma sequência de CDR1, uma sequência de CDR2 e uma sequência de CDR3 que são descritas aqui.

[00328] Qualquer domínio variável de cadeia pesada compreendido nas composições agroquímicas como descrito aqui e apresentando um estas combinações de sequência de CDR é preferivelmente tal que especificamente pode ligar-se (como definido aqui) a um alvo de esfingolipídeo ou um antígeno de esfingolipídeo, e mais em particular tal que especificamente liga-se a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, em particular, com constante de dissociação (Kd) de 10-8 moles/litro ou menos do referido domínio variável na solução. A ligação específica de um domínio variável de cadeia pesada a um alvo de esfingolipídeo pode ser determinada de qualquer maneira adequada conhecida per se, incluindo, por exemplo, biopaniculação, análise de Scatchard e/ou ensaios de ligação competitivos, tais como radioimunoensaios (RIA), imunoensaios de enzima (EIA) e ensaios de competição sanduíche, e as variantes diferentes dos mesmos conhecidas na técnica.

[00329] Em uma modalidade preferida, o polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos, é obtido por seleção de afinidade contra uma molécula alvo de peste particular e o referido polipeptídeo tem uma afinidade elevada para a referida molécula alvo de peste: tipicamente, a constante de dissociação da ligação entre o polipeptídeo e sua molécula alvo de peste é mais baixa do que 10-5 M, mais preferivelmente, a constante de dissociação é mais baixa do que 10-6 M, ainda mais preferivelmente, a constante de dissociação é mais baixa do que 10-7 M, preferivelmente, a constante de dissociação é mais baixa do que 10-8 M.

[00330] Em modalidades particulares, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo compreendido nas composições descritas aqui tem um valor de concentração inibidora mínima (MIC) para o referido fungo patogênico de planta de 1,0 μg/mL g ou menos do referido domínio variável na solução. Da mesma forma descrito aqui são polipeptídeos dentre 80 e 200 aminoácidos ou uma subfaixa como descrito aqui anteriormente, obtidos por seleção de afinidade a um alvo de peste de planta específico, que é capaz de inibir o crescimento e/ou a atividade de uma peste de cultura a uma concentração inibidora mínima de cerca de 0,00001 a 1 μM. Em modalidades específicas estão as concentrações inibidora mínimas entre 0,0001 a 1 μM, estão entre 0,001 a1 μM, entre 0,01 a 1 μM, entre 0,1 a 1 μM, entre 0,0001 a 0,1 μM, entre 0,001 a 0,1 μM, entre 0,01 a 0,1 μM, entre 0,00001 a 0,01 μM, entre 0,0001 a 0,01 μM, entre 0,001 a 0,01 μM.

[00331] A Concentração Inibidora Mínima ou o valor de MIC é a concentração mais baixa de um agente tal como, um polipeptídeo que inibe o crescimento visível da cultura ou peste de planta após a incubação. Por exemplo, a concentração fungicida mínima (MFC) é considerada como a concentração mais baixa de polipeptídeo que previne o crescimento e reduz o inóculo fúngico por 99,90% dentro de 24 h. MFCs (Concentrações Fúngicas Mínimas) podem ser determinados em placas de ágar, porém, podem ser determinadas da mesma forma convenientemente em fluidos (por exemplo, em placas de microcavidade) dependendo do tipo do fungo e das condições de ensaio.

[00332] Em outras modalidades particulares, as composições agroquímicas como descrito aqui, pelo menos compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo pelo menos uma combinação de sequências de CDR selecionadas a partir do grupo compreendendo:

[00333] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 85, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 169, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 253, e/ou

[00334] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 86, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 170, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 254, e/ou

[00335] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 87, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 171, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 255, e/ou

[00336] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 88, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 172, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 256, e/ou

[00337] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 89, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 173, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 257, e/ou

[00338] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 90, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 174, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 258, e/ou

[00339] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 91, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 175, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 259, e/ou

[00340] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 92, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 176, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 260, e/ou

[00341] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 93, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 177, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 261, e/ou

[00342] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 94, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 178, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 262, e/ou

[00343] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 95, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 179, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 263, e/ou

[00344] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 96, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 180, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 264, e/ou

[00345] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 97, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 181, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 265, e/ou

[00346] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 98, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 182, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 266, e/ou

[00347] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 99, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 183, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 267, e/ou

[00348] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 100, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 184, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 268, e/ou

[00349] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 101, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 185, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 269, e/ou

[00350] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 102, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 186, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 270, e/ou

[00351] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 103, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 187, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 271, e/ou

[00352] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 104, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 188, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 272, e/ou

[00353] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 105, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 189, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 273, e/ou

[00354] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 106, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 190, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 274, e/ou

[00355] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 107, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 191, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 275, e/ou

[00356] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 108, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 192, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 276, e/ou

[00357] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 109, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 193, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 277, e/ou

[00358] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 110, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 194, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 278, e/ou

[00359] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 111, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 195, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 279, e/ou

[00360] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 112, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 196, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 280, e/ou

[00361] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 113, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 197, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 281, e/ou

[00362] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 114, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 198, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 282, e/ou

[00363] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 115, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 199, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 283, e/ou

[00364] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 116, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 200, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 284, e/ou

[00365] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 117, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 201, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 285, e/ou

[00366] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 118, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 202, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 286, e/ou

[00367] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 119, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 203, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 287, e/ou

[00368] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 120, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 204, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 288, e/ou

[00369] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 121, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 205, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 289, e/ou

[00370] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 122, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 206, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 290, e/ou

[00371] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 123, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 207, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 291, e/ou

[00372] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 124, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 208, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 292, e/ou

[00373] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 125, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 209, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 293, e/ou

[00374] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 126, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 210, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 294, e/ou

[00375] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 127, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 21 1, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 295, e/ou

[00376] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 128, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 212, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 296, e/ou

[00377] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 129, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 213, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 297, e/ou

[00378] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 130, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 214, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 298, e/ou

[00379] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 131, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 215, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 299, e/ou

[00380] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 132, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 216, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 300, e/ou

[00381] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 133, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 217, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 301, e/ou

[00382] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 134, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 218, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 302, e/ou

[00383] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 135, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 219, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 303, e/ou

[00384] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 136, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 220, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 304, e/ou

[00385] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 137, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 221, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 305, e/ou

[00386] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 138, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 222, e uma região de CDR3 que tem a sequência de aminoácido NRY, e/ou

[00387] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 139, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 223, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 306, e/ou

[00388] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 140, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 224, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 307, e/ou

[00389] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 141, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 225, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 308, e/ou

[00390] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 142, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 226, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 309, e/ou

[00391] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 143, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 227, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 310, e/ou

[00392] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 144, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 228, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 31 1, e/ou

[00393] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 145, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 229, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 312, e/ou

[00394] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 146, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 230, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 313, e/ou

[00395] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 147, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 231, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 314, e/ou

[00396] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 148, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 232, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 315, e/ou

[00397] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 149, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 233, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 316, e/ou

[00398] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 150, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 234, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 317, e/ou

[00399] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 151, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 235, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 318, e/ou

[00400] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 152, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 236, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 319, e/ou

[00401] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 153, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 237, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 320, e/ou

[00402] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 154, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 238, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 321, e/ou

[00403] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 155, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 239, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 322, e/ou

[00404] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 156, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 240, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 323, e/ou

[00405] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 157, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 241, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 324, e/ou

[00406] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 158, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 242, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 325, e/ou

[00407] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 159, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 243, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 326, e/ou

[00408] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 160, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 244, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 327, e/ou

[00409] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 161, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 245, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 328, e/ou

[00410] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 162, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 246, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 329, e/ou

[00411] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 163, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 247, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 330, e/ou

[00412] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 164, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 248, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 331, e/ou

[00413] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 165, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 249, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 332, e/ou

[00414] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 166, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 250, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 333, e/ou

[00415] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 167, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 251, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 334, e/ou

[00416] uma região de CDR1 que tem SEQ ID N°: 168, uma região de CDR2 que tem SEQ ID N°: 252, e uma região de CDR3 que tem SEQ ID N°: 335.

[00417] Em modalidades particulares, os domínios variáveis de cadeia pesada nas composições como descrito aqui são domínios variáveis de cadeia pesada que essencialmente consistem em quatro regiões de estrutura (FR1 a FR4 respectivamente) e três regiões de determinação de complementaridade (CDR1 a CDR3 respectivamente); ou qualquer fragmento adequado de um tal domínio variável de cadeia pesada (que conterá em seguida normalmente pelo menos alguns dos resíduos de aminoácido que formam pelo menos uma das CDR's, como também descrito aqui).

[00418] Os domínios variáveis de cadeia pesada como descrito aqui podem ser em particular uma sequência de domínio variável de cadeia pesada que é derivada a partir de um anticorpo de quatro cadeias convencionais (tal como, sem limitação, uma sequência de VH que é derivada a partir de um anticorpo humano) ou ser uma denominada sequência de VHH (como definido aqui) que é derivada de um denominado "anticorpo de cadeia pesada" (como definido aqui).

[00419] Em modalidades particulares, as composições como descrito aqui, pelo menos compreendem uma sequência de domínio variável de cadeia pesada derivada de um anticorpo ou um fragmento funcional do mesmo, tal como, porém não limitado a um anticorpo de cadeia pesada de camelídeo ou um fragmento funcional do mesmo, cuja sequência de domínio variável pode ser desse modo por exemplo um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada de camelídeo (VHH).

[00420] Entretanto, deveria ser notado que a invenção não está limitada quanto à origem da sequência de domínio variável de cadeia pesada compreendida nas composições descritas aqui (ou da sequência de nucleotídeo da invenção usada para expressar), nem quanto a maneira que o domínio variável de cadeia pesada ou sequência de nucleotídeo do mesmo é (ou foi) gerado ou obtido. Desse modo, os domínios variáveis de cadeia pesada nas composições descritas aqui podem ser de domínios variáveis de cadeia pesada de ocorrência natural de ocorrência natural (a partir de qualquer espécie adequada) ou domínios variáveis de cadeia pesada sintéticos ou semissintéticos. Em uma modalidade específica, porém, não limitante da invenção, o domínio variável de cadeia pesada é uma sequência de imunoglobulina de ocorrência natural (a partir de qualquer espécie adequada) ou uma sequência de imunoglobulina sintética ou semissintética, incluindo, porém não limitada a sequências de imunoglobulina "camelizadas", bem como sequências de imunoglobulina que foram obtidas por técnicas tais como, maturação por afinidade (por exemplo, a partir de sequências de imunoglobulina sintéticas, randomizadas ou de ocorrência natural), enxerto de CDR, revestimento, fragmentos de combinação derivados de sequências de imunoglobulina diferentes, reunião de PCR usando iniciadores de sobreposição, e técnicas similares para criar sequências de imunoglobulina bem conhecidas pela pessoa versada; ou qualquer combinação adequada de quaisquer dos antecedentes.

[00421] As sequências de domínio variável de cadeia pesada das composições descritas aqui podem ser em particular um anticorpo de domínio (ou um domínio variável de cadeia pesada que é adequado para uso como um anticorpo de domínio), um anticorpo de domínio isolado (ou um domínio variável de cadeia pesada que é adequado para uso como um anticorpo de domínio isolado), ou um "dAb" (ou um domínio variável de cadeia pesada que é adequado para uso como um dAb); outros domínios de variável isolados, ou qualquer fragmento adequado de qualquer um dos mesmos. Para uma descrição geral de (isolados) anticorpos de domínio, referência é feita da mesma forma à técnica anterior citada acima, bem como para EP 0 368 684. Para o termo "dAb", referência é por exemplo feita para Ward et al. (Nature 1989 Oct 12; 341 (6242): 544-6), para Holt et al., Trends Biotechnol., 2003, 21 (11):484-490; bem como para, por exemplo, WO 06/030220, WO 06/003388 e outros pedidos de patente publicados de Domantis Ltd.

[00422] Desse modo, em modalidades particulares, a presente invenção fornece domínios variáveis de cadeia pesada com a estrutura (geral) FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4

[00423] em que FR1 a FR4 referem-se às regiões de estrutura 1 a 4, respectivamente, e em que CDR1 a CDR3 refere,-se às regiões de determinação de complementaridade 1 a 3, respectivamente, e são como também definidos aqui.

[00424] SEQ ID N°'s: 1 a 84 (veja Tabela 1) produzem as sequências de aminoácido de vários domínios variáveis de cadeia pesada que foram elevados contra um alvo de esfingolipídeo, em particular contra glicosilceramida. Tabela 1: Sequências de VHH

[00425] Em particular, a invenção em algumas modalidades específicas fornece composições agroquímicas que compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada que é direcionado contra um alvo de esfingolipídeo e que tem pelo menos 80%, preferivelmente pelo menos 85%, tal como 90% ou 95% ou mais identidade de sequência com pelo menos um dos domínios variáveis de cadeia pesada de SEQ ID N°'s: 1 a 84 (veja Tabela 1), e sequências de ácido nucleico que codifica tais domínios variáveis de cadeia pesada.

[00426] Algumas sequências de domínio variável de cadeia pesada particularmente preferidas como descrito aqui são aquelas que podem ligar-se a e/ou são direcionadas contra um esfingolipídeo de um patógeno de planta e que tem pelo menos 90% de identidade de aminoácido com pelo menos um dos domínios variáveis de cadeia pesada de SEQ ID No's: 1 a 84 (veja Tabela 1) em que para os propósitos de determinar o grau de identidade de aminoácido, os resíduos de aminoácido que formam as sequências de CDR são desconsiderados.

[00427] Nestes domínios variáveis de cadeia pesada, as sequências de CDR (veja Tabela 2) são geralmente como também definido aqui. Tabela 2: Sequências de CDR

[00428] Novamente, tais domínios variáveis de cadeia pesada podem ser derivados de qualquer maneira adequada e de qualquer fonte adequada, e pode por exemplo, ser sequências de VHH de ocorrência natural (isto é, de uma espécie adequada de Camelídeo) ou domínios variáveis de cadeia pesada sintética ou semissintética, incluindo porém não limitados às sequências de imunoglobulina "camelizadas" (e em particular sequências de domínio variável de cadeia pesada camelizadas), bem como aquelas que foram obtidas através de técnicas tais como, maturação por afinidade (por exemplo, a partir de sequências de imunoglobulina sintéticas, randomizadas ou de ocorrência natural), enxerto de CDR, revestimento, fragmentos de combinação derivados de sequências de imunoglobulina diferentes, reunião de PCR usando iniciadores de sobreposição, e técnicas similares para criar sequências de imunoglobulina bem conhecidas pela pessoa versada; ou qualquer combinação adequada de quaisquer dos antecedentes como também descrito aqui.

[00429] É compreendido que as composições agroquímicas ou as composições de controle biológico como descrito aqui são estáveis, ambas durante o armazenamento e durante a utilização, significando que a integridade da composição agroquímica é mantida sob condições de armazenamento e/ou utilização da composição agroquímica, que podem incluir temperaturas elevadas, ciclos de congelamento- descongelamento, alterações em pH ou em força iônica, irradiação UV, presença de substâncias químicas prejudiciais e similares. Mais preferivelmente, o polipeptídeo dentre 80 e 200 aminoácidos, e as várias subfaixas descritas aqui, permanecem estáveis na composição agroquímica, significando que a integridade e a atividade pesticida do polipeptídeo são mantidas sob condições de armazenamento e/ou utilização da composição agroquímica que podem incluir temperaturas elevadas temperaturas, ciclos de congelamento-descongelamento, mudanças em pH ou em força iônica, irradiação de UV, presença de produtos químicos nocivos e similares. Mais preferivelmente, o referido polipeptídeo entre 80 e 200 aminoácidos, e as várias subfaixas descritas aqui, permanecem estáveis em uma composição agroquímica quando a composição agroquímica é armazenada em temperatura ambiente durante um período de dois anos ou quando a composição agroquímica é armazenada em 54oC durante um período de duas semanas. Preferivelmente, a composição agroquímica da presente invenção retém pelo menos cerca de 70% de atividade, mais preferivelmente pelo menos cerca de 70% a 80% de atividade, mais preferivelmente cerca de 80% a 90% de atividade ou mais. Opcionalmente, o polipeptídeo pode ser compreendido em um veículo, como definido, para proteger o polipeptídeo de efeitos nocivos causados por outros componentes em uma composição agroquímica ou de efeitos nocivos durante a armazenagem ou durante a aplicação. Exemplos de veículos adequados incluem,porém não estão limitados a alginatos, gomas, amido, β-ciclodextrinas, celuloses, poliureia, poliuretano, poliéster, células microbianas ou argila.

[00430] A composição agroquímica pode ocorrer em qualquer tipo de formulação, formulações preferidas são pós, pós umectáveis, grânulos umectáveis, grânulos dispersíveis em água, emulsões, concentrados emulsificáveis, poeiras, suspensões, concentrados de suspensão, suspoemulsões (misturas de suspensões e emulsões), suspensões em cápsula, dispersões aquosas, dispersões oleosas, aerossóis, pastas, espumas, suspensões ou concentrados fluíveis.

[00431] O polipeptídeo entre 80 e 200 aminoácidos, e as várias subfaixas descritas aqui anteriormente, podem ser a única substância ativa na composição de controle agroquímica ou biológicade acordo com a invenção; entretanto, é também possível que a composição agroquímica compreenda um ou mais produtos agroquímicos adicionais, como definido, além da sequência de polipeptídeo ou aminoácido (ou o pelo menos um, pelo menos dois ou pelo menos três sequências de polipeptídeos ou aminoácido como descrito aqui). Tais produtos agroquímicos adicionais ou composições de controle biológicas podem ter um efeito diferente sobre pestes de planta como a sequência de polipeptídeo ou aminoácido, eles podem ter um efeito sinérgico com a sequência de polipeptídeo ou aminoácido, ou eles podem ainda modificar a atividade da sequência de polipeptídeo ou aminoácido sobre certas plantas. Produtos agroquímicos adicionais adequados podem ser herbicidas, inseticidas, fungicidas, nematicidas, acaricidas, bactericidas, viricidas, reguladores de crescimento de planta, protetores e similares e incluem, porém não estão limitados um glifosato, paraquat, metoclor, acetoclor, mesotriona, 2,4-D-atrazina, glifosinato, sulfosato, fenoxaprope, pendimetalina, picloram, trifluralina, bromoxinila, clodinafop, fluroxypir, nicossulfuron, bensulfuron, imazetapir, dicamba, imidacloprid, tiametoxam, fipronil, clorpirifos, deltametrina, lambda-cihalotrina, endossulfano, metamidofos, carbofurano, clotianidina,cipermetrina, abamectina, diflufenicano, espinosad, indoxacarbe, bifentrina, teflutrina, azoxistrobina, tiametoxam, tebuconazol, mancozebe, ciazofamid, fluazinam, piraclostrobina, epoxiconazol, clorotalonil, copper fungicidas, trifloxistrobina, protioconazol, difenoconazol, carbendazim, propiconazol, tiofanato, enxofre, boscalide e outros produtos agroquímicos conhecidos ou quaisquer combinações adequadas dos mesmos.

COMPOSIÇÕES COMPREENDENDO VARIANTES DE SEQUÊNCIAS DE DOMÍNIO VARIÁVEL DE CADEIA PESADA

[00432] Em certos aspectos, os domínios variáveis de cadeia pesada compreendidos nas composições agroquímicas como descrito aqui pode ser opcionalmente ligado a um ou mais outros grupos, porções, ou resíduos por meio de um ou mais ligantes. Estes um ou mais outros grupos, porções ou resíduos podem servir para ligação a outros aslvos de interesse. Deve ficar claro que tais outros grupos, resíduos, porções e/ou sítios de ligação podem ou não fornecer outra funcionalidade para o domínio variável de cadeia pesada como descrito aqui (e/ou para a composição em que está presente) e podem ou não modificar as propriedades do domínio variável de cadeia pesada como descrito aqui. Tais grupos, resíduos, porções ou unidades de ligação podem também, por exemplo, ser grupos químicos que podem ser biologicamente ativos.

[00433] Estes grupos, porções ou resíduos são, em modalidades particulares, N ou C terminalmente ligadas ao domínio variável de cadeia pesada nas composições, como descrito aqui.

[00434] Em modalidades particulares, o domínio variável de cadeia pesada nas composições agroquímicas como descrito aqui, podem também ter sido quimicamente modificados. Por exemplo, tal modificação pode envolver a introdução ou ligação de um ou mais funcional grupos, resíduos ou porções em ou sobre o domínio variável de cadeia pesada. Estes grupos, resíduos ou porções podem conferir uma ou mais propriedades ou funcionalidades desejadas ao domínio variável de cadeia pesada. Exemplos de tais grupos funcionais ficarão claros para a pessoa versada.

[00435] Por exemplo, a introdução ou ligação de tais grupos funcionais a um domínio variável de cadeia pesada pode resultar em um aumento na solubilidade e/ou na estabilidade do domínio variável de cadeia pesada, em uma redução da toxicidade do domínio variável de cadeia pesada, ou na eliminação ou atenuação de quaisquer efeitos colaterais indesejados do domínio variável de cadeia pesada, e/ou em outras propriedades vantajosas.

[00436] Em modalidades particulares, o um ou mais grupos, resíduos, porções são ligados ao domínio variável de cadeia pesada por meio de um ou mais ligantes ou espaçadores adequados.

[00437] Em outras modalidades particulares, dois ou mais domínios variáveis de cadeia pesada específicos do alvo nas composições agroquímicas descritos aqui podem ser ligados entre si ou podem ser interconectados. Em modalidades particulares, os dois ou mais domínios variáveis de cadeias pesadas são ligados entre si por meio de um ou mais ligantes ou espaçadores adequados. Espaçadores ou ligantes adequados para uso no acoplamento de diferentes domínios variáveis de cadeia pesada como descrito aqui ficarão claros para a pessoa versada e podem geralmente ser qualquer ligador ou espaçador usado na técnica para ligar peptídeos e/ou proteínas.

[00438] Alguns ligantes ou espaçadores particularmente adequadosincluem, por exemplo, porém não estão limitados a, ligantes de polipeptídeo tais como, ligantes de glicina, ligantes de serina, ligantes mistos de glicina/serina, ligantes ricos em glicina e serina ou ligantes compostos de fragmentos de polipeptídeo largamente polares, ou compostos de reticulação química homo- ou heterobifuncional tais como, glutaraldeído ou, maleimidas ou ésteres de NHS opcionalmente espaçados por PEG.

[00439] Por exemplo, um ligador ou espaçador de polipeptídeo pode ser uma sequência de aminoácido adequada apresentando um comprimento entre 1 e 50 aminoácidos, tais como, entre 1 e 30, e em particular entre 1 e 10 resíduos de aminoácido. Deve ficar claro que o comprimento, o grau de flexibilidade e/ou outras propriedades do(s) ligante(s) podem ter alguma influência sobre as propriedades do domínio variável de cadeia pesada, incluindo, porém não limitadas à afinidade, especificidade ou avidez para o alvo fúngico. Deve ficar claro que quando dois ou mais ligantes são usados, estes ligantes podem ser iguais ou diferentes. No contexto e descrição da presente invenção, a pessoa versada na técnica será capaz de determinar os ligantes ideais para o propósito de acoplamento de domínio variável de cadeia pesada como descrito aqui sem qualquer ônus experimental indevido. COMPOSIÇÕES COMPREENDENDO FRAGMENTOS DE DOMÍNIOS VARIÁVEIS DE CADEIA PESADA

[00440] A presente invenção também abrange partes, fragmentos, análogos, mutantes, variantes, e/ou derivados dos domínios variáveis de cadeia pesada compreendidos nas composições como descrito aqui e/ou polipeptídeos compreendendo ou essencialmente consistindo em um ou mais de tais partes, fragmentos, análogos, mutantes, variantes, e/ou derivados, contanto que estas partes, fragmentos, análogos, mutantes, variantes, e/ou derivados são adequados para os propósitos previstos aqui. Tais partes, fragmentos, análogos, mutantes, variantes, e/ou derivados de acordo com a invenção são também capazes de especificamente se ligar ao alvo de esfingolipídeo. ALVOS

[00441] Em modalidades particulares, os domínios variáveis de cadeia pesada compreendidos nas composições descritas aqui são obtidos por seleção de afinidade contra um alvo de peste particular. A obtenção de polipeptídeos adequados por seleção de afinidade contra um alvo de peste particular pode, por exemplo, ser realizada por avaliação de um conjunto, coleção ou biblioteca de células que expressam polipeptídeos sobre sua superfície (por exemplo, bacteriofagos) para ligação a uma molécula alvo de peste, cuja molécula é conhecida na técnica ser um alvo para um pesticida; todos os quais podem ser realizados de uma maneira por si só conhecida, essencialmente compreendendo as seguintes etapas não limitantes: a) obtenção de uma solução ou suspensão isolada de uma molécula alvo de peste, cuja molécula é conhecida ser um alvo para um pesticida; b) bio-paniculação de fagos ou outras células de uma biblioteca de polipeptídeo contra a referida molécula alvo; c) isolamento dos fagos ou outras células em ligação à molécula alvo; d) determinação da sequência de nucleotídeo codificando a inserção de polipeptídeo de fagos de ligação individual ou outras células; e) produção de uma quantidade de polipeptídeo de acordo com esta sequência usando expressão de proteína recombinante e f) determinação da afinidade do referido polipeptídeo para o referido alvo de peste e opcionalmente g) teste da atividade pesticida do referido polipeptídeo em um bioensaio para a referida peste. Vários métodos podem ser usados para determinar a afinidade entre o polipeptídeo e a molécula alvo de peste, incluindo, por exemplo, ensaios de imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA) ou Ensaios de Ressonância de Plasmônio de Superfície (SPR), que são prática comum na técnica, por exemplo, como descrito em Sambrooket al. (2001 ), Molecular Cloning, A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. A constante de dissociação é normalmente usada para descrever a afinidade entre um polipeptídeo e sua molécula alvo de peste. Tipicamente, a constante de dissociação da ligação entre o polipeptídeo e sua molécula alvo de peste é menor do que 10-5 M, mais preferivelmente, a constante de dissociação é menor do que 10-6 M, ainda mais preferivelmente, a constante de dissociação é menor do que 10-7 M, mais preferivelmente, a constante de dissociação é menor do que 10-8 M.

[00442] Moléculas alvo de peste, como descrito aqui, são moléculas que ocorrem em ou sobre organismos de peste e que, quando ligadas e/ou inibidas, matam ou interrompem, inibem ou reduzem o crescimento ou atividade pesticida do referido organismo de peste. Tais moléculas alvo adequadas são facilmente disponíveis de literatura ou bases de dados existentes para a pessoa versada e incluem, sem limitaçãoproteínas de parasitismo secretadas, tais como, 16D10 como moléculas alvo de peste adequadas para nematódeos de nó de raiz (Huanget al (2006) PNAS 103: 14302-14306), a bomba de próton de V- ATPase como molécula alvo de peste adequada para espécies de inseto coleopterano, hemipterano, dipterano e nematódeos (Knight AJ e Behm CA (201 1 ) Ex. Parasitol. 19 de setembro), a tetraspanina PLS1 como molécula alvo de peste fúngica adequada para B. cinerea e M. grisea (Gourgues et al (2002) Biochem. Biophys. Res. Commun. 297: 1 197) ou a ATPase de bomba de próton como agente antifúngico (Manavathu EK et al (1999) Antimicrob Agents e Chemotherapy, Dec p. 2950). Entende-se que moléculas alvo de pestes preferidas são acessíveis no espaço extracelular (quando em oposição a pestes alvo intracelulares).

[00443] Mais particularmente, os alvos de esfingolipídeo aos quais o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada das composições agroquímicas como descrito aqui liga-se, constituem um grupo distintivo de lipídeos de membrana caracterizados por uma estrutura de di-hidróxi amina de cadeia longa (monoinsaturado)(esfingosina). Esfingolipídeos são componentes essenciais da membrana de plasma de células onde eles são tipicamente encontrados na monocamada externa. Eles são constituintes de membrana de alguns grupos bacterianos, particularmente anaeróbios. Estes grupos incluem Bacteroides, Prevotella, Porfiromonas, Fusobactéria, Esfingomonas, Esfingobactéria, Bdellovibrio, Cystobacter, Micoplasma, Flectobacillus, e possivelmente Acetobacter. Fungos em que os esfingolipídeos foram descobertos compreender Saccharomyces, Cândida, Histoplasma, Phytophthora, Criptococcus, Aspergillus, Neurospora, Schizosaccharomyces, Fusicoccum, Shizophyllum, Amanita, Hansenula, Lactarius, Lentinus, Penicillium, Clitocybe, Paracoccidioides, Agaricus, Sporothrix, e patógenos de planta de oomiceto.

[00444] O bloco de construção básico de esfingolipídeos fúngicos é esfinganina, que pode ser convertida em ceramida e finalmente em mono-hexosídeos de ceramida (CMH; cerebrosídeos), ou em fitoceramida e finalmente em di-hexosídeos de ceramida (CDH) ou em fosforilceramidas de glicoinositol (GIPCs). Exemplos não limitantes de esfinglolipídeos contra os quais o pelo menos um domínio de anticorpo variável de cadeia pesada das composições, como descrito aqui, é direcionado, incluem, por exemplo, 9-metil 4,8-esfingadienina, glicosilceramidas, glicosilceramida, monoglicosilceramidas, oligoglicosilceramidas, gangliosídeos, sulfatídeos, ceramidas, esfingosina-1-fosfato, ceramida-1-fosfato, galactosilceramida, inositol- fosforilceramida (IPC), manosil-inositol-fosforilceramida (MIPC), galactosil-inositol-fosforilceramida, manosil-(inositol-fosforil)2-ceramida (M(IP)2C), dimanosil-inositol-fosforilceramida (M2IPC), galactosil- dimanosil-inositol-fosforilceramida (GalM2IPC), manosil-di-inositol- difosforilceramida, di-inositol-difosforilceramida, trigalactosil- glicosilceramida.

[00445] Exemplos não limitantes de esfingolipídeos contra os quais pelo menos um domínio de anticorpo variável de cadeia pesada das composições, como descrito aqui, é direcionado incluem, por exemplo, glicosilceramidas, glicosilceramida, esfingomielina, monoglicosilceramidas, oligoglicosilceramidas, gangliosídeos, sulfatídeos, ceramidas, esfingosina-1-fosfato e ceramida-1-fosfato.

[00446] Em determinadas modalidades específicas, o alvo ao qual os domínios variáveis nas composições agroquímicas da presente invenção liga-se, não é quitina.

[00447] Em uma modalidade preferida, a(s) peste(s) de planta que é/são combatida(s) por uma composição agroquímica ou composição biológica de controle, como descrito aqui, é um fungo, tal como, um fungo patogênico de planta, como definido anteriormente. Os fungos podem ser altamente prejudiciais para as plantas e podem causar perdas substanciais de cultura em colheitas. Fungos patogênicos de plantaincluem fungos necrotróficos e fungos biotróficos, e incluem ascomicetos, basidiomicetos e oomicetos.

[00448] Exemplos de fungos patogênicos de planta são conhecidos na técnica e incluem, porém não estão limitados àqueles selecionados do grupo consistindo nos Gêneros: Alternaria; Ascochyta; Botrytis; Cercospora; Colletotrichum; Diplodia; Erysiphe; Fusarium; Leptosphaeria; Gaeumanomyces; Helminthosporium; Macrophomina; Nectria; Peronospora; Phoma; Phymatotrichum; Phytophthora; Plasmopara; Podosphaera; Puccinia; Puthium; Pirenophora; Piricularia; Pythium; Rhizoctonia; Scerotium; Sclerotinia; Septoria; Thielaviopsis; Uncinula; Venturia; eVerticillium. Exemplos específicos de infecções por fungos de planta que podem ser combatidas com as composições agroquímicas da invenção incluem, Erysiphe graminis em cereais, Erysiphe cichoracearum e Sphaerotheca fuliginea em abóboras, Podosphaera leucotricha em maçãs, Uncinula necator em videiras, Puccinia sp. em cereais, Rhizoctonia sp. em algodão, batatas, arroz e gramados, Ustilago sp. em cereais e cana-de-açúcar, Venturia inaequalis (crosta) em maçãs, Helminthosporium sp. em cereais, Septoria nodorum em trigo, Septoria tritici em trigo, Rhynchosporium secalis em cevada, Botrytis cinerea (mofo cinza) em morangos, tomates e uvas, Cercospora arachidicola em amendoins, Peronospora tabacina em tabaco, ou outroPeronospora em várias colheitas, Pseudocercosporella herpotrichoidesem trigo e cevada, Pirenophera teresem em cevada, Piricularia oryzae em arroz, Phytophthora infestans em batatas e tomates, Fusarium sp. (tal como Fusarium oxysporum) e Verticillium sp. em várias plantas, Plasmopara viticola em uvas, Alternaria sp. em frutos e vegetais, Pseudoperonospora cubensis em pepinos, Mycosphaerella fijiensis em banana, Ascochyta sp. em grão de bico, Leptosphaeria sp. em canola, e Colleotrichum sp. em várias colheitas. As composições de acordo com a invenção são ativas contra espécies normalmente sensíveis e resistentes e contra todos ou alguns estágios no ciclo de vida do fungo patogênico de planta.

[00449] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas, como descrito aqui, são direcionadas contra um fungo patogênico de plantado gênero escolhidodo grupo compreendendo Alternaria, Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia, Erysiphe, Fusarium, Leptosphaeria, Gaeumanomyces, Helminthosporium, Macrophomina, Nectria, Penicillium, Peronospora, Phoma, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara, Podosphaera, Puccinia, Pirenophora, Piricularia, Pythium, Rhizoctonia, Scerotium, Sclerotinia, Septoria, Thielaviopsis, Uncinula, Venturia, Verticillium, Magnaporthe, Blumeria, Mycosphaerella, Ustilago, Melampsora, Phakospora, Monilinia, Mucor, Rhizopus e Aspergillus.

[00450] Em determinadas modalidades particulares, as composições, como descrito aqui, pelo menos compreendem um domínio variável de cadeia pesada, que se liga especificamente a um esfingolipídeo de um fungo da espécie fungal Botrytis, Fusarium ou Penicillium. Em outras modalidades particulares, o esfingolipídeo fúngico é uma ceramida, tal como, em particular, glicosilceramida.

[00451] Na verdade, em modalidades particulares, a presente invenção fornece composições agroquímicas compreendendo domínio variável de cadeia pesada que são especificamente direcionados contra um componente molecular estruturaldo fungo, isto é, um esfingolipídeo fúngico. Os inventores surpreendentemente conseguiram identificar tal domínio variável de cadeia pesada ao mesmo tempo em que ele é de modo geral descrito na técnica que é (tecnicamente) difícil de gerar sequências de aminoácido ou proteínas apresentando uma única e específica interação com estruturas moleculares de não proteína.

[00452] Com base no presente ensinamento, outros exemplos não limitantes de molécula alvo de pestes fúngicas adequadas podem ser previstos pela pessoa versada na técnica e compreendem, por exemplo, quitina sintase, β-1,3-glucano sintase, succinatodesidrogenase, glicosilceramidas fúngicas, ou a tetraspanina PLS1.

[00453] São também descritas aqui bactérias patogênicas de plantaincluindo, porém não limitadas a, Acidovorax avenae subsp. avenae (causando listra marrom bacteriana de arroz), Acidovorax avenae subsp. cattleyae (causando mancha marrom bacteriana de catléia), Acidovorax konjaci Konnyaku (causando ferrugem bacteriana de folha), Agrobactéria rhizogenes (causando raiz pilosa de melão), Agrobactéria tumefaciens (causando vesícula coroa), Burkholderia andropogonis (causando mancha bacteriana de cravo), Burkholderia caryophylli (causando murchamento bacteriano de cravo), Burkholderia cepacia (causando mancha marrom bacteriana de cimbídio), Burkholderia gladioli pv. gladioli (causando podridão do pescoço de gladíolo), Burkholderia glumae (causando podridão bacteriana do grão de arroz), Burkholderia plantarii (causando ferrugem bacteriana de muda de arroz), Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (causando cancro bacteriano de tomate), Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (causando podridão de anel da batata), Clostridium spp. (causando slimy rot of batata), Curtobactéria flaccumfaciens (causando cancro bacteriano de cebola), Erwinia amylovora (causando fogo bacteriano de pera), Erwinia ananas (causando escurecimento bacteriano da palea de arroz), Erwinia carotovora subsp. atroseptica (causando perna preta de batata), Erwinia carotovora subsp. carotovora (causando podridão bacteriana macia de vegetais), Erwinia chrysanthemi (causando ferrugem bacteriana de muda de inhame), Erwinia chrysanthemi pv. zeae (causando podridão bacteriana do pé de arroz), Erwinia herbicola pv. millettiae (causando vesícula bacteriana deglicínias), Pseudomonas cichorii (causando mancha bacteriana de crisântemo), Pseudomonas corrugate Pith (causando necrose de tomate), Pseudomonas fuscovaginae (causando podridão marrom da bainha de arroz), Pseudomonas marginalis pv. marginalis (causando podridão macia de repolho) Pseudomonas rubrisubalbicans (causando listra mosqueada de cana de açúcar), Pseudomonas syringae pv. aptata (causando ferrugem bacteriana de beterraba açucareira), Pseudomonas syringae pv. atropurpurea (causando ferrugem de auréola de azevém), Pseudomonas syringae pv. castaneae (causando cancro bacteriano de castanha), Pseudomonas syringae pv. glycinea (causando ferrugem bacteriana de soja), Pseudomonas syringae pv. lachrymans (causando mancha bacteriana de pepino), Pseudomonas syringae pv. maculicola (causando mancha preta bacteriana de repolho), Pseudomonas syringae pv. mori (causando ferrugem bacteriana de amoreira), Pseudomonas syringae pv. morsprunorum (causando cancro bacteriano de ameixa), Pseudomonas syringae pv. oryzae (causando ferrugem da auréola do arroz), Pseudomonas syringae pv. phaseolicola (causando ferrugem da auréola do feijão comum), Pseudomonas syringae pv. pisi (causando ferrugem bacteriana de ervilha de jardim), Pseudomonas syringae pv. sésamo (causando mancha bacteriana de sésamo), Pseudomonas syringae pv. striafaciens (causando ferrugem bacteriana em listras de aveias), Pseudomonas syringae pv. syringae (causando mancha marrom bacteriana de grão vermelho pequeno), Pseudomonas syringae pv. tabaci (causando fogo selvagem de tabaco), Pseudomonas syringae pv. theae (causando ferrogem bacteriana do broto de chá), Pseudomonas syringae pv.tomate (causando mancha bacteriana da folha de tomate), Pseudomonas viridiflava (causando mancha marrom bacteriana de feijão comum), Ralstonia solanacearum (causando murchamento bacteriano), Rathayibacter rathayi (causando ferrugem bacteriana da cabeça de capim de pastagem), Streptomyces scabies (causando crosta comum de batata), Streptomyces ipomoea (causando podridão do solo de batata doce), Xanthomonas albilineans (causando listra branca de cana de açúcar), Xanthomonas campestris pv. cerealis (causando listra bacteriana de centeio), Xanthomonas campestris pv. campestris (causando podridão preta), Xanthomonas campestris pv. citri (causando cancro de cítricos), Xanthomonas campestris pv. cucurbitae (causando mancha marrom bacteriana de pepino), Xanthomonas campestris pv. glycines (causando pústula bacteriana de soja), Xanthomonas campestris pv. incanae (causando podridão preta de estoque), Xanthomonas campestris pv. (causando mancha angular da folha de algodão malvacearum), Xanthomonas campestris pv. (causando cancro bacteriano de manga), Mangiferaeindicae Xanthomonas campestris pv. mellea (causando mancha bacteriana Wisconsinda folha de tabaco), Xanthomonas campestris pv. (causando mancha bacteriana de bardana nigromaculansgrande), Xanthomonas campestris pv. phaseoli (causando pústula bacteriana de feijão comum), Xanthomonas campestris pv. pisi (causando podridão do caule bacteriano de feijão comum), Xanthomonas campestris pv. pruni (causando furo bacteriano do broto de pêssego), Xanthomonas campestris pv. raphani (causando mancha bacteriana de Rabanete japonês),Xanthomonas campestris pv. ricini (causando mancha bacteriana de mamona), Xanthomonas campestris pv. theicola (causando canker of chá), Xanthomonas campestris pv. translucens (causando ferrugem bacteriana de capim de pastagem), Xanthomonas campestris pv. vesicatoria (causando mancha bacteriana de tomate), Xanthomonas oryzae pv. oryzae (causando ferrugem bacteriana de folha de arroz).

[00454] São também descritas aqui pestes de planta tais como, insetos, aracnídeos, helmintos, viroses, nematódeos e moluscosencontrados em agricultura, em horticultura, em florestas, em jardins e em equipamentos de lazer. As composições de acordo com a invenção são ativas contra espécies normalmente sensíveis e resistentes e contra todos ou alguns estágios de desenvolvimento. Estas pestes de planta incluem: pestes do filo: Artrópodes, em particular, da classe dos aracnídeos, por exemplo, Acarus spp., Aceria sheldoni, Aculops spp., Aculus spp., Amblyomma spp., Amphitetranychus viennensis, Argas spp., Boophilus spp., Brevipalpus spp., Bryobia praetiosa, Centruroides spp., Chorioptes spp., Dermanyssus gallinae, Dermatophagoides pteronyssius, Dermatophagoides farinae, Dermacentor spp., Eotetranychus spp., Epitrimerus piri, Eutetranychus spp., Eriophyes spp., Halotydeus destructor, Hemitarsonemus spp., Hyalomma spp., Ixodes spp., Latrodectus spp., Loxosceles spp., Metatetranychus spp., Nuphersa spp., Oligonychus spp., Ornithodorus spp., Ornithonyssus spp., Panonychus spp., Phyllocoptruta oleivora, Poliphagotarsonemus latus, Psoroptes spp., Rhipicephalus spp., Rhizoglyphus spp., Sarcoptes spp., Scorpio maurus, Stenotarsonemus spp., Tarsonemus spp., Tetranychus spp., Vaejovis spp., Vasates lycopersici. Ainda outros exemplos são da ordem da Anoplura (Phthiraptera), por exemplo, Damalinia spp., Haematopinus spp., Linognathus spp., Pediculus spp., Ptirus pubis, Trichodectes spp. Ainda outros exemplos são da ordem da Chilopoda, por exemplo, Geophilus spp., Scutigera spp.

[00455] Ainda outros exemplos são da ordem da Coleoptera, por exemplo, Acalymma vittatum, Acanthoscelides obtectus, Adoretus spp., Agelastica alni, Agriotes spp., Alphitobius diaperinus, Amphimallon solstitialis, Anobium punctatum, Anoplophora spp., Anthonomus spp., Anthrenus spp., Apion spp., Apogonia spp., Atomaria spp., Attagenus spp., Bruchidius obtectus, Bruchus spp., Cassida spp., Cerotoma trifurcata, Ceutorrhynchus spp., Chaetocnema spp., Cleonus mendicus, Conoderus spp., Cosmopolites spp., Costelytra zealandica, Ctenicera spp., Curculio spp., Criptorhynchus lapathi, Cylindrocopturus spp., Dermestes spp., Diabrotica spp., Dichocrocis spp., Diloboderus spp., Epilachna spp., Epitrix spp., Faustinus spp., Gibbium psylloides, Hellula undalis, Heteronychus arator, Heteronyx spp., Hylamorpha elegans, Hylotrupes bajulus, Hypera postica, Hypothenemus spp., Lachnosterna consanguinea, Lema spp., Leptinotarsa decemlineata, Leucoptera spp., Lissorhoptrus oryzophilus, Lixus spp., Luperodes spp., Lyctus spp., Megascelis spp., Melanotus spp., Meligethes aeneus, Melolontha spp., Migdolus spp., Monochamus spp., Naupactus xanthographus, Niptus hololeucus, Oryctes rhinoceros, Oryzaephilus surinamensis, Oryzaphagus oryzae, Otiorrhynchus spp., Oxycetonia jucunda, Phaedon cochleariae, Phyllophaga spp., Phyllotreta spp., Popillia japonica, Premnotrypes spp., Prostephanus truncatus, Psylliodes spp., Ptinus spp., Rhizobius ventralis, Rhizopertha dominica, Sitophilus spp., Sphenophorus spp., Stegobium paniceum, Sternechus spp., Symphyletes spp., Tanymecus spp., Tenebrio molitor, Tribolium spp., Trogoderma spp., Tychius spp., Xylotrechus spp., Zabrus spp.

[00456] Ainda outros exemplos são da ordem da Collembola, por exemplo, Onychiurus armatus. Ainda outros exemplos são da ordem da Diplopoda, por exemplo, Blaniulus guttulatus.

[00457] Ainda outros exemplos são da ordem dos Dípteros, por exemplo, Aedes spp., Agromyza spp., Anastrepha spp., Anopheles spp., Asphondylia spp., Bactrocera spp., Bibio hortulanus, Calliphora erythrocephala, Ceratitis capitata, Chironomus spp., Chrysomyia spp., Chrysops spp., Cochliomyia spp., Contarinia spp., Cordylobia anthropophaga, Culex spp., Culicoides spp., Culiseta spp., Cuterebra spp., Dacus oleae, Dasyneura spp., Delia spp., Dermatobia hominis, Drosophila spp., Echinocnemus spp., Fannia spp., Gasterophilus spp., Glossina spp., Haematopota spp., Hydrellia spp., Hylemyia spp., Hyppobosca spp., Hypoderma spp., Liriomyza spp., Lucilia spp., Lutzomia spp., Mansonia spp., Musca spp., Nezara spp., Oestrus spp., Oscinella frit, Pegomyia spp., Phlebotomus spp., Phorbia spp., Phormia spp., Prodiplosis spp., Psila rosae, Rhagoletis spp., Sarcophaga spp., Simulium spp., Stomoxys spp., Tabanus spp., Tannia spp., Tetanops spp., Tipula spp.

[00458] Ainda outros exemplos são da ordem da Heteroptera, por exemplo, Anasa tristis, Antestiopsis spp., Boisea spp., Blissus spp., Calocoris spp., Campylomma livida, Cavelerius spp., Cimex spp., Collaria spp., Creontiades dilutus, Dasynus piperis, Dichelops furcatus, Diconocoris hewetti, Dysdercus spp., Euschistus spp., Eurygaster spp., Heliopeltis spp., Horcias nobilellus, Leptocorisa spp., Leptoglossus phyllopus, Lygus spp., Macropes excavatus, Miridae, Monalcebola atratum, Nezara spp., Oebalus spp., Pentomidae, Piesma quadrata, Piezodorus spp., Psallus spp., Pseudacysta persea, Rhodnius spp., Sahlbergella singularis, Scaptocoris castanea, Scotinophora spp., Stephanitis nashi, Tibraca spp., Triatoma spp.

[00459] Ainda outros exemplos são da ordem da Homoptera, por exemplo, Acyrthosipon spp., Acrogonia spp., Aeneolamia spp., Agonoscena spp., Aleurodes spp., Aleurolobus barodensis, Aleurothrixus spp., Amrasca spp., Anuraphis cardui, Aonidiella spp., Aphanostigma pin, Aphis spp., Arboridia apicalis, Aspidiella spp., Aspidiotus spp., Atanus spp., Aulacorthum solani, Bemisia spp., Brachycaudus helichrysii, Brachycolus spp., Brevicoryne brassicae, Calligypona marginata, Carneocephala fulgida, Ceratovacuna lanigera, Cercopidae, Ceroplastes spp., Chaetosiphon fragaefolii, Chionaspis tegalensis, Clorita onukii, Chromaphis juglandicola, Chrysomphalus ficus, Cicadulina mbila, Coccomytilus halli, Coccus spp., Criptomyzus ribis, Dalbulus spp., Dialeurodes spp., Diaphorina spp., Diaspis spp., Drosicha spp., Dysaphis spp., Dysmicoccus spp., Empoasca spp., Eriosoma spp., Erythroneura spp., Euscelis bilobatus, Ferrisia spp., Geococcus coffeae, Hieroglyphus spp., Homalodisca coagulata, Hyalopterus arundinis, lcerya spp., Idiocerus spp., Idioscopus spp., Laodelphax striatellus, Lecanium spp., Lepidosaphes spp., Lipaphis erysimi, Macrosiphum spp., Mahanarva spp., Melanaphis sacchari, Metcalfiella spp., Metopolophium dirhodum, Monellia costalis, Monelliopsis pecanis, Myzus spp., Nasonovia ribisnigri, Nephotettix spp., Nilaparvata lugens, Oncometopia spp., Orthezia praelonga, Parabemisia myricae, Paratrioza spp., Parlatoria spp., Pemphigus spp., Peregrinus maidis, Phenacoccus spp., Phloeomyzus passerinii, Phorodon humuli, Phylloxera spp., Pinnaspis aspidistrae, Planococcus spp., Protopulvinaria piriformis, Pseudaulacaspis pentagona, Pseudococcus spp., Psylla spp., Pteromalus spp., Pirilla spp., Quadraspidiotus spp., Quesada gigas, Rastrococcus spp., Rhopalosiphum spp., Saissetia spp., Scaphoides titanus, Schizaphis graminum, Selenaspidus articulatus, Sogata spp., Sogatella furcifera, Sogatodes spp., Stictocephala festina, Tenalaphara malayensis, Tinocallis caryaefoliae, Tomaspis spp., Toxoptera spp., Trialeurodes spp., Trioza spp., Typhlocyba spp., Unaspis spp., Viteus vitifolii, Zygina spp.

[00460] Ainda outros exemplos são da ordem da Hymenoptera, por exemplo, Acromyrmex spp., Athalia spp., Atta spp., Diprion spp., Hoplocampa spp., Lasius spp., Monomorium pharaonis, Solenopsis invicta, Tapinoma spp., Vespa spp.

[00461] Ainda outros exemplos são da ordem da Isopoda, por exemplo, Armadillidium vulgare, Oniscus asellus, Porcelio scaber.

[00462] Ainda outros exemplos são da ordem da Isoptera, por exemplo, Coptotermes spp., Cornitermes cumulans, Criptotermes spp., Incisitermes spp., Microtermes obesi, Odontotermes spp., Reticulitermes spp.

[00463] Ainda outros exemplos são da ordem da Lepidoptera, por exemplo, Acronicta major, Adoxophyes spp., Aedia leucomelas, Agrotis spp., Alabama spp., Amyelois transitella, Anarsia spp., Anticarsia spp., Argyroploce spp., Barathra brassicae, Borbo cinnara, Bucculatrix thurberiella, Bupalus piniarius, Busseola spp., Cacoecia spp., Caloptilia theivora, Capua reticulana, Carpocapsa pomonella, Carposina niponensis, Chematobia brumata, Chilo spp., Choristoneura spp., Clysia ambiguella, Cnaphalocerus spp., Cnephasia spp., Conopomorpha spp., Conotrachelus spp., Copitarsia spp., Cydia spp., Dalaca noctuides, Diaphania spp., Diatraea saccharalis, Earias spp., Ecdytolopha aurantium, Elasmopalpus lignosellus, Eldana saccharina, Ephestia spp., Epinotia spp., Epiphyas postvittana, Etiella spp., Eulia spp., Eupoecilia ambiguella, Euproctis spp., Euxoa spp., Feltia spp., Galleria mellonella, Gracillaria spp., Grapholitha spp., Hedylepta spp., Helicoverpa spp., Heliothis spp., Hofmannophila pseudospretella, Homoeosoma spp., Homona spp., Hyponomeuta padella, Kakivoria flavofasciata, Laphygma spp., Laspeyresia molesta, Leucinodes orbonalis, Leucoptera spp., Lithocolletis spp., Lithophane antennata, Lobesia spp., Loxagrotis albicosta, Lymantria spp., Lyonetia spp., Malacosoma neustria, Maruca testulalis, Mamestra brassicae, Mocis spp., Mythimna separata, Nymphula spp., Oiketicus spp., Oria spp., Orthaga spp., Ostrinia spp., Oulema oryzae, Panolis flammea, Parnara spp., Pectinophora spp., Perileucoptera spp., Phthorimaea spp., Phyllocnistis citrella, Phyllonorycter spp., Pieris spp., Platynota stultana, Plodia interpunctella, Plusia spp., Plutella xylostella, Prays spp., Prodenia spp., Protoparce spp., Pseudaletia spp., Pseudoplusia includens, Pirausta nubilalis, Rachiplusia nu, Schoenobius spp., Scirpophaga spp., Scotia segetum, Sesamia spp., Sparganothis spp., Spodoptera spp., Stathmopoda spp., Stomopteryx subsecivella, Synanthedon spp., Tecia solanivora, Thermesia gemmatalis, Tinea pellionella, Tineola bisselliella, Tortrix spp., Trichophaga tapetzella, Trichoplusia spp., Tuta absoluta, Virachola spp.

[00464] Ainda outros exemplos são da ordem da Orthoptera, por exemplo, Acheta domesticus, Blatta orientalis, Blattella germanica, Dichroplus spp., Gryllotalpa spp., Leucophaea maderae, Locusta spp., Melanoplus spp., Periplaneta spp., Pulex irritans, Schistocerca gregaria, Supella longipalpa.

[00465] Ainda outros exemplos são da ordem da Siphonaptera, por exemplo, Ceratophyllus spp., Ctenocephalides spp., Tunga penetrans, Xenopsylla cheopis.

[00466] Ainda outros exemplos são da ordem da Symphyla, por exemplo, Scutigerella spp.

[00467] Ainda outros exemplos são da ordem da Thysanoptera, por exemplo, Anaphothrips obscurus, Baliothrips biformis, Drepanothris reuteri, Enneothrips flavens, Frankliniella spp., Heliothrips spp., Hercinothrips femoralis, Rhipiphorothrips cruentatus, Scirtothrips spp., Taeniothrips cardamoni, Thrips spp.

[00468] Ainda outros exemplos são da ordem da Zygentoma (=Thysanura), por exemplo, Lepisma saccharina, Thermobia domestica, por exemplo, Lepisma saccharina, Thermobia domestica.

[00469] Em outra modalidade pestes do filo Mollusca, em particular, da classe da Bivalvia, por exemplo, Dreissena spp. são também pestes importantes de planta.

[00470] Em outra modalidade, pestes da classe da Gastropoda são pestes importantes de planta, por exemplo, Anion spp., Biomphalaria spp., Bulinus spp., Deroceras spp., Galba spp., Lymnaea spp., Oncomelania spp., Pomacea spp., Succinea spp.

[00471] Em ainda outra modalidade, pestes de planta que são do filo Nematoda são pestes importantes de planta, isto é, nematódeos fitoparasíticos, desse modo significando nematódeos parasíticos de plantaque causam dano às plantas. Nematódeos de planta abrangem nematódeos parasíticos de planta e nematódeos que vivem no solo. Nematódeos parasíticos de planta incluem, porém não estão limitados a, ectoparasitas tais como, Xiphinema spp., Longidorus spp., e Trichodorus spp.; semiparasitas tais como, Tylenchulus spp.; endoparasitas migratórios tais como, Pratylenchus spp., Radopholus spp., e Scutellonerna spp.; parasitas sedentários, tais como, Heterodera spp., Globodera spp., e Meloidogyne spp., e endoparasitas de caule e folha tais como, Ditylenchus spp., Aphelenchoides spp., e Hirshmaniella spp. além disso, nematódeos de solo parasíticos de raiz nocivos são nematódeos formadores de cisto dos gêneros Heterodera ou Globodera, e/ou nematódeos do nó da raiz do gênero Meloidogyne. Espécies nocivas destes gêneros são, por exemplo, Meloidogyne incognata, Heterodera glycines (nematódeo do cisto da soja), Globodera pallida e Globodera rostochiensis (nematódeo do cisto da batata). Ainda outros gêneros importantes de importância como pestes de planta compreendem Rotylenchulus spp.,Paratriclodorus spp., Pratylenchus penetrans, Radolophus simuli, Ditylenchus dispaci, Tylenchulus semipenetrans, Xiphinema spp., Bursaphelenchus spp., e similares, em particular, Aphelenchoides spp., Bursaphelenchus spp., Ditylenchus spp., Globodera spp., Heterodera spp., Longidorus spp., Meloidogyne spp., Pratylenchus spp., Radopholus similis, Trichodorus spp., Tylenchulus semipenetrans, Xiphinema spp.

[00472] São também descritos aqui como sendo pestes de planta viroses de planta selecionadas de um alfamovírus, um alexivírus, um alfacriptovírus, um anulavírus, um apscaviroide, um aureusvírus, um avenavírus, um aisunviroide, um badnavírus, um begomovírus, um benivírus, a betacriptovírus, um betaflexiviridae, um bromovírus, um bimovírus, um capilovírus, um carlavírus, um carmovírus, um caulimovírus, um cavemovírus, um queravírus, um closterovírus, um cocadviroide, um coleviroide, um comovírus, um crinivírus, um cucumovírus, um curtovírus, um citorhabdovírus, um diantovírus, um enamovírus, um umbravírus &vírus satélite tipo B, um fabavírus, um fijivírus, um furovírus, um hordeivírus, um hostuviroide, um idaeovírus, um ilarvírus, um ipomovírus, um luteovírus, um maclomovírus, um macluravírus, um marafivírus, um mastrevírus, um nanovírus, um necrovírus, um nepovírus, um nucleorhabdovírus, um oleavírus, um ofiovírus, um orizavírus, um panicovírus, um pecluvírus, um petuvírus, umfitoreovírus, um polerovírus, um pomovírus, um pospiviroide, um potexvírus, um potivírus, um reovírus, um rabdovírus, um rimovírus, um sadwavírus, um vírus tipo SbCMV, um sequivírus, um sobemovírus, um tenuivírus, a TNsatV-like satellite vírus, a tobamovírus, a topocuvírus, um tospovírus, um tricovírus, um tritimovírus, um tungrovírus, um timovírus, um umbravírus, um varicosavírus, um vitivírus, ou um waicavírus.

FORMAS DE ANTÍGENO ALVO

[00473] Será apreciado com base na descrição aqui apresentada, que para aplicações de controle agroquímicas e biológicas, o domínio variável de cadeia pesada das composições, como descrito aqui, em princípio será direcionado contra ou especificamente ligar-se-á a diversas diferentes formas do alvo de esfingolipídeo. Espera-se também que o domínio variável de cadeia pesada das composições, como descrito aqui, ligar-se-á a diversos análogos, variantes, mutantes, alelos, partes e fragmentos de ocorrência natural de seu alvo de esfingolipídeo. Mais particularmente, espera-se que o domínio variável de cadeia pesada das composições, como descrito aqui, ligar-se-á a pelo menos aqueles análogos, variantes, mutantes, alelo, partes e fragmentosdo alvo de esfingolipídeoque (ainda) conterá o sítio de ligação, parte ou domínio do alvo de esfingolipídeo natural ao qual aqueles domínios variáveis de cadeia pesada ligar-se-ão.

FORMULAÇÕES

[00474] É previsto que o teor de polipeptídeo contido na composição de controle agroquímica ou biológica, como descrito aqui, possa variar dentro de uma ampla faixa e seja de modo geral até o fabricante modificar uma faixa de concentração de um particular polipeptídeo de acordo com peste de colheita específica que deve ser atenuada.

[00475] Em modalidades particulares, a presente invenção fornece composições agroquímicas compreendendo pelo menos um domínio variável de cadeia pesada, em que referido domínio variável de cadeia pesada está presente em uma quantidade efetiva para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da referida planta de uma infecção ou outra interação biológica com o referido patógeno de planta.

[00476] Em uma modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeocontida em uma composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 50% em peso.

[00477] Em modalidades particulares, a presente invenção fornece composições agroquímicas compreendendo pelo menos um domínio variável de cadeia pesada, em que a concentração do pelo menos um domínio variável em uma composição agroquímica varia de 0,001% a 50% em peso. Em ainda outra modalidade específica aconcentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,001% a 50% em peso. Em ainda outra modalidade específica aconcentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,01% a 50% em peso. Em ainda outra modalidade específica aconcentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,1% a 50% em peso. Em ainda outra modalidade específica aconcentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 1% a 50% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 10% a 50% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 40% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,001% a 40% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,01% a 40% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,1% a 40% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 1% a 40% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 30% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,001% a 30% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,01% a 30% em peso. Em ainda outra modalidade específica aconcentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,1% a 30% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 1% a 30% em peso. Em ainda outra modalidade específica aconcentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 10% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,001% a 10% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,01% a 10% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,1% a 10% em peso. Em ainda outra modalidade específica aconcentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 1% a 10% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,0001% a 1% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,001% a 1% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,01% a 1% em peso. Em ainda outra modalidade específica a concentração do domínio variável de cadeia pesada ou polipeptídeo contida em uma composição agroquímica pode ser de 0,1% a 1% em peso.

[00478] Em modalidades particulares, as composições agroquímicas descritas aqui compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada, que é formulado em uma solução aquosa.

[00479] Em outras modalidades particulares, as composições agroquímicas descritas aqui compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia pesada e também compreendem um veículo agroquimicamente adequado e/ou um ou mais adjuvantes adequados.

[00480] As composições de acordo com a invenção podem compreender, além dos domínios variáveis anti-peste descritos acima, veículos sólidos ou líquidos que são aceitáveis no tratamento de peste de plantas e/ou partes de plantas e/ou tensoativos que são também aceitáveis no tratamento de peste de plantas e/ou partes de plantas. Em particular, neste contexto podem ser usados veículos inertes e habituais e tensoativos habituais. Estas composições abrangem não apenas composições prontas para serem aplicadas às plantas e/ou partes de plantas a serem tratadas por imersão ou usando um dispositivo adequado, porém também as composições concentradas comerciais que devem ser diluídas antes da aplicação às plantas e/ou partes de plantas.

[00481] Estas composições agroquímicas de acordo com a invenção podem também conter qualquer espécie de outros ingredientes, tais como, por exemplo, coloides protetores, adesivos, espessantes, agentes tixotrópicos, agentes de penetração, estabilizantes, sequestrantes, agentes de textura, agentes aromatizantes, realçadores de sabor, açúcares, adoçantes, colorantes e similares. Mais geralmente, as substâncias ativas, isto é, o pelo menos um domínio variável de cadeia pesada, podem ser combinadas com quaisquer aditivos sólidos ou líquidos que correspondam às técnicas de formulação usuais.

[00482] O termo "veículo", na presente descrição, denota uma substância orgânica ou inorgânica natural ou sintética com a qual a substância ativa anti-peste é combinada para facilitar sua aplicação às plantas e/ou uma ou mais partes de planta. O veículo é, portanto, geralmente inerte e deve ser aceitável no agri-setor. O veículo pode ser sólido (argilas, silicatos naturais ou sintéticos, sílica, resinas, ceras, fertilizantes sólidos e similares) ou líquido (água, álcoois, em particular, butanol e similares).

[00483] O tensoativo pode ser um agente emulsificante, um agente dispersante ou um agente umectante do tipo iônico ou não iônico ou uma mistura de tais tensoativos. Neste contexto podem ser mencionados, por exemplo, sais de ácidos poliacrílicos, sais de ácidos lignossulfônicos, sais de ácidos fenolsulfônicos ou naftalenossulfônico, policondensados de óxido de etileno com álcoois graxos ou com ácidos graxos ou com aminas graxas, fenóis substituídos (em particular alquilfenóis ou arilfenóis), sais de ésteres de ácidos sulfossuccínicos, derivadosde taurina (em particular, tauratos de alquila), ésteres fosfóricos de fenóis ou álcoois polioxietilados, ésteres de ácidos graxos e polióis, sulfato, sulfonato e derivados contendo grupo funcional de fosfatodos compostos acima.

[00484] A presença de pelo menos um tensoativo é geralmente essencial quando o veículo inerte não é solúvel em água e quando o agente vetor para aplicação é a água.

[00485] As composições agroquímicas, como descrito aqui, são em si em relativamente diversas formas sólidas ou líquidas.

[00486] Como formas de composição sólida, neste contexto podem ser mencionados pós pulverizáveis (teor de substância ativa que pode ser até 100%) e grânulos, em particular, aqueles obtidos por extrusão, por compactação, por impregnação de um veículo granulado, por granulação usando um pó como material de partida (o teor de substância ativa nestes grânulos sendo entre 0,5 e 80% para estes últimos casos). Tais composições sólidas podem ser opcionalmente usadas na forma de um líquido que é viscoso a um maior ou menor grau, dependendo do tipo de aplicação desejado, por exemplo, por diluição em água.

[00487] Como formas de composição líquida ou formas destinadas a constituir composições líquidas durante a aplicação, neste contextopodem ser mencionadas soluções, em particular, concentrados solúveis em água, emulsões, concentrados de suspensão, pós umectáveis (ou pó para spray), óleos e ceras. Os concentrados de suspensão, que podem ser aplicados por vaporização, são preparados a fim de obter um produto fluido estável que não forma um depósito e eles geralmente contêm de 10 a 75% de substância ativa, de 0,5 a 15% de tensoativos, de 0,1a 10% de agentes tixotrópicos, de 0 a 10% de aditivos apropriados, tais como, agentes antiespumas, inibidores de corrosão, estabilizantes, de penetração e adesivos e, como veículo, água ou um líquido orgânico, em que a substância ativa não é, ou não é muito solúvel: alguns sólidos orgânicos ou sais inorgânicos podem ser dissolvidos no veículo para ajudar a prevenir a sedimentação ou como antigéis para água.

[00488] As composições agroquímicas, como descrito aqui, podem ser usadas em seu estado natural, em forma de suas formulações ou como as formas de uso preparadas delas, tais como, dispensador de aerossol, suspensão em cápsula, concentrado de nebulização a frio, concentrado de nebulização quente, grânulo encapsulado, grânulo fino concentrado fluível, fluível para tratamento de semente, soluções prontas para uso, pó pulverizável, concentrado emulsificável, emulsão de óleo em água, emulsão água em óleo, macrogrânulo, pó dispersível em óleo, concentrado fluível miscível em óleo, líquido miscível em óleo, espumas, pasta, semente revestida com um pesticida, concentrado em suspensão (concentrado fluível), suspensões-emulsões-concentrados, concentrado solúvel, suspensões, pó solúvel, grânulo, grânulos ou comprimidos solúveis em água, pó solúvel em água para tratamento de semente, pó umectável, materiais naturais e sintéticos impregnados com composto ativo, microencapsulação em materiais poliméricos e em blazers para semente, bem como formulações de pulverização quente e a frio de ULV, gás (sob pressão), produto de geração de gás, caule de planta, pó para tratamento de semente a seco, solução para tratamento de semente, líquido de volume ultra baixo (ULV), suspensão de volume ultra baixo (ULV), grânulos ou comprimidos dispersíveis em água, pó dispersível em água para tratamento de suspensão.

[00489] Estas formulações são preparadas de uma maneira conhecida misturando os compostos ativos ou combinações de composto ativo com aditivos habituais, tais como, por exemplo, extensores habituais e também solventes ou diluentes, emulsificantes, dispersantes, e/ou agente de ligação ou fixação, agentes umectantes, repelentes de água, se apropriado secantes e estabilizantes de UV, colorantes, pigmentos, desespumantes, preservativos, espessantes secundários, adesivos, giberelinas e água bem como outros auxiliares de processamento.

[00490] Estas composições incluem não apenas composições que são prontas para serem aplicadas à planta ou semente a ser tratada por meio de um dispositivo adequado, tal como, dispositivo de vaporização ou pulverização, porém também composições comerciais concentradas que devem ser diluídas antes da aplicação à colheita.

MÉTODOS DE PROTEÇÃO OU TRATAMENTO DE PLANTA

[00491] Em certos aspectos, a presente invenção fornece métodos para proteger ou tratar uma planta ou uma parte de uma planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos compreendendo a etapa de aplicar diretamente ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta, uma composição agroquímica como descrito aqui, sob condições efetivas para proteger ou tratar a planta ou uma parte da planta contra aquela infecção ou interação biológica com o patógeno de planta.

[00492] Em modalidades particulares, estes métodos compreendem aplicar direta ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta uma composição agroquímica, como descrito aqui, em uma taxa de aplicação maior do que 50g de uma composição agroquímica por hectare, tal como, porém não limitada auma taxa de aplicação maior do que 75g de uma composição agroquímica por hectare, tal como, uma taxa de aplicação maior do que 100g de uma composição agroquímica por hectare, ou em particular uma taxa de aplicação maior do que 200g de uma composição agroquímica por hectare.

[00493] Em modalidades particulares, estes métodos compreendem aplicar direta ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta uma composição agroquímica, como descrito aqui, em uma taxa de aplicação entre 50g e 100g de uma composição agroquímica por hectare, tal como, porém não limitada a uma taxa de aplicação entre 50g e 200g de uma composição agroquímica por hectare, em particular, uma taxa de aplicação entre 75g e 175g de uma composição agroquímica por hectare, tal como, entre 75g e 150g de uma composição agroquímica por hectare ou entre 75g e 125g por hectare.

[00494] Em ainda outra modalidade, a invenção fornece métodos para combater pestes de planta, cujos métodos compreendem aplicar uma composição agroquímica ou biológica de controle de acordo com a invenção a uma planta, tal como, uma colheita, ou uma parte de uma planta ou uma colheita, em uma taxa de aplicação abaixo de 50g do referido polipeptídeo por hectare. Em modalidades específicas a taxa de aplicação é abaixo de 45 g/ha, abaixo de 40 g/ha, abaixo de 35 g/ha, abaixo de 30 g/ha, abaixo de 25 g/ha, abaixo de 20 g/ha, abaixo de 15 g/ha, abaixo de 10 g/ha, abaixo de 5 g/ha, abaixo de 1 g/ha ou mesmo menores quantidades de polipeptídeo/ha.

[00495] Entende-se, dependendo da colheita e da pressão ambiental das pestes de planta, que o fazendeiro pode variar a taxa de aplicação. Estas variações de taxas de aplicação são especificadas na folha técnica liberada com a composição agroquímica específica.

[00496] Em ainda outra modalidade, a invenção fornece o uso das composições de controle agroquímicas ou biológicas da invenção para combater pestes de planta.

[00497] A aplicação de uma composição agroquímica ou biológica de controle de acordo com a invenção a uma colheita pode ser feita usando qualquer método adequado para aplicar uma composição agroquímica ou biológica de controle a uma colheita, incluindo, porém não limitada à vaporização (incluindovaporização de alto volume (HV), baixo volume (LV) e volume ultra baixo (ULV)), escovação, adubagem, gotejamento, revestimento, mergulho, imersão, dispersão, vaporização, aplicação como pequenas gotículas, uma névoa ou um aerossol.

[00498] Desse modo, em modalidades particulares, os métodos para proteger ou tratar uma planta ou uma parte de uma planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta como descrito aqui, compreendem aplicar a composição agroquímica direta ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta por vaporização, atomização, espumação, nebulização, cultura em hidrocultura, cultura em hidropônicos, revestimento, submersão e/ou encrustação.

[00499] Em determinadas modalidades particulares, a presente invenção fornece métodos inibição, prevenção, redução ou controle do crescimento de um patógeno de planta, compreendendo pelo menos a etapa de aplicação direta ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da referida planta, uma composição agroquímica como descrito aqui.

[00500] Em determinadas outras modalidades, a presente invenção fornece métodos para matar um patógeno de planta, compreendendo pelo menos a etapa de aplicação direta ou indiretamente a uma planta ou a uma parte da referida planta, uma composição agroquímica como descrito aqui.

[00501] A taxa de aplicação de uma composição agroquímica de acordo com a invenção, significando a quantidade de uma composição agroquímica que é aplicada à colheita, é de modo que menos do que 50g, 45 g, 40g, 35 g, 30 g, 25 g, 20 g, 20 g, 15 g, 10 g, 5 g, 1 g ou mesmo menos do que 1 g do polipeptídeo, compreendidos na composição de controle agroquímica ou biológica de acordo com a invenção, seja aplicado à colheita por hectare.

[00502] De acordo com os métodos como descrito aqui, a composição agroquímica ou biológica de controle pode ser aplicada uma vez a uma colheita, ou ela pode ser aplicada duas ou mais vezes uma após a outra, com um intervalo entre cada duas aplicações. De acordo com o método da presente invenção, a composição agroquímica ou biológica de controle de acordo com a invenção pode ser aplicada sozinha ou em mistura com outros materiais, preferivelmente outras composições de controle agroquímicas ou biológicas, à colheita; alternativamente, a composição agroquímica ou biológica de controle de acordo com a invenção pode ser aplicada separadamente à colheita com outros materiais, preferivelmente outras composições de controle agroquímicas ou biológicas, aplicadas em diferentes momentos à mesma colheita. De acordo com o método da presente invenção, a composição agroquímica ou biológica de controle de acordo com a invenção pode ser aplicada à colheita profilaticamente, ou alternativamente, podem ser aplicadas assim que pestes algo foram identificadas na colheita particular a ser tratada.

[00503] As composições agroquímicas, como descrito aqui, podem ser aplicadas diretamente a uma planta, uma colheita ou a uma ou mais partes da planta pelos métodos acima mencionados, tal como, diretamente à toda a planta ou diretamente a uma ou mais partes da planta, ou em um estágio pré-colheita ou em um pós-colheita. Em determinadas outras modalidades, as composições agroquímicas, como descrito aqui, podem ser aplicadas diretamente a uma ou mais partes da planta pelos métodos acima mencionados, tal como, diretamente aos talos, folhas, tubérculos, caules, brotos, as sementes, os frutos, as raízes, as flores, os grãos, os botões, etc.

[00504] O método de tratamento, como descrito aqui, pode também ser usado no campo de proteção de mercadorias de armazenagem contra o ataque de patógenos de planta. De acordo com a presente invenção, o termo "mercadorias de armazenagem" é entendido denotar substâncias naturais de origem vegetal ou animal e suas formas processadas, que foram tiradas do ciclo de vida natural e para o qual a proteção a longo prazo é desejada. Mercadorias de armazenagem de origem vegetal, tais como, plantas ou partes da mesma, por exemplo, talos, folhas, tubérculos, sementes, frutos ou grãos, podem ser protegidas no estado recentemente colhido ou em forma processada, tal como, pré-secada, umedecida, triturada, moída, prensada ou torrada. Também incluído na definição de mercadorias de armazenagemestá a madeira, seja na forma de madeira bruta, tais como, madeira para construção, pylons e barreiras de eletricidade, ou na forma de artigos acabados, tais como, mobiliários ou objetos feitos de madeira. Mercadorias de armazenagem de origem animal são couros (hides), couro (leather), peles, cabelos e similares. As combinações de acordo com a presente invenção podem prevenir efeitos desvantajosos, tais como, deterioração, descoloração ou mofo. Preferivelmente "mercadorias de armazenagem" é entendido denotar substâncias naturais de origem vegetal e suas formas processadas, mais preferivelmente frutos e suas formas processadas, tais como, pomos, frutos com caroço, frutos macios e frutos cítricos e suas formas processadas.

[00505] As composições agroquímicas, como descrito aqui, podem também ser aplicadas indiretamente a uma planta, uma colheita ou a uma ou mais partes da planta pelos métodos acima mencionados, tais como, indiretamente a toda a planta ou indiretamente a uma ou mais partes da planta, ou em um estágio de pré-colheita ou em um pós- colheita. Desse modo, em determinadas modalidades, as composições agroquímicas, como descrito aqui, podem ser aplicadas indiretamente a uma planta, uma colheita ou a uma ou mais partes da planta pelos métodos acima mencionados, tais como, aplicando a composição agroquímica ao redor ou ao meio em que a planta ou uma ou mais partes da planta são crescendo ou são armazenadas, tais como, por exemplo, porém não limitadas ao ar, solo, a cultura hidropônica, a hidrocultura, ou o meio líquido, tais como, por exemplo, o meio líquido aquoso ou água, em que a planta ou uma ou mais partes da planta são crescendo ou são armazenadas.

[00506] Desse modo, deve ser de modo geral entendido no contexto deste pedido, que o tratamento de plantas e partes de planta com as composições agroquímicas, como descrito aqui, é realizado diretamente ou pela ação sobre seu ambiente, habitat ou área de armazenagem por meio dos métodos de tratamento normal, por exemplo,rega (encharcamento), irrigação por gotejamento, borrifação, vaporização, atomização, semeadura feita a mão, pulverização, espumação, espalhamento, e como um pó. É também possível aplicar as composições pelo método de volume ultrabaixo, ou injetar a preparação de composto ativo ou o próprio composto ativo no solo.

[00507] Em modalidades particulares, os métodos para proteger ou tratar uma planta ou uma parte de uma planta de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta como descrito aqui, compreende aplicar a composição agroquímica direta ou indiretamente à planta ou a uma parte da planta ou em um estágio de pré-colheita ou em um pós-colheita.

[00508] De acordo com as modalidades específicas, o produto colhido é um fruto, flor, noz ou vegetal, um fruto ou vegetal com casca não comestível, preferivelmente selecionado de abacates, bananas, plátanos, limões, toranjas, melões, laranjas, abacaxis, kiwi, goiabas, mandarins, mangas e abóbora, é preferido, mais preferivelmente bananas, laranjas, limões e pêssegos, em particular, bananas. De acordo com outras modalidades específicas, o produto colhido é uma flor cortada de plantas ornamentais, preferivelmente selecionadas de Alstroemeria, Cravo, Crisântemo, Frésia, Gérbera, Gladíolo, respiração de bebê (Gypsophila spec), Helianthus, Hydrangea, Lilium, Lisianthus, rosas e flores de verão.

[00509] As espécies de planta às quais as composições agroquímicas, como descrito aqui, podem ser aplicadas podem, por exemplo, ser, porém não estão limitadas a milho, soja, alfafa, algodão, girassol, sementes oleosas de brássica tais como, Brassica napus (por exemplo, canola, colza), Brassica rapa, B. juncea (por exemplo, (campo) mostarda) e Brassica carinata, Arecaceae sp. (por exemplo, dendê, coco), arroz, trigo, beterraba açucareira, cana de açúcar, aveias, centeio, cevada, milho miúdo e sorgo, tritical, linho, nozes, uvas e videiras e vários frutos e vegetais de vários graus botânicos, por exemplo, Rosaceae sp. (por exemplo, pomoideas, tais como, maçãs e peras, porém também frutos com caroço tais como, damascos, cerejas, amêndoas, ameixa e pêssego, e frutos silvestres, tais como, morangos, framboesas, groselhas (currant) vermelha e preta e groselha (gooseberry), Ribesioidaesp., Juglandaceae sp., Betulaceae sp., Anacardiaceae sp., Fagaceae sp., Moraceae sp., Oleaceae sp. (por exemplo, oliveira), Actinidaceae sp., Lauraceae sp. (por exemplo, abacate, canela, cânfora), Musaceae sp. (por exemplo, bananeira e plantações), Rubiaceae sp. (por exemplo, café), Theaceae sp. (por exemplo, chá), Sterculiceae sp., Rutaceae sp. (por exemplo, limões, laranjas, mandarins e toranja); Solanaceae sp. (por exemplo, tomates, batatas, pimentas, capsicum, beringelas, tabaco), Liliaceae sp., Compositae sp. (por exemplo, alface, alcachofraechicória- incluindo chicória raiz, chicória endívia ou comum), Umbelliferae sp. (por exemplo, cenouras, salsa, aipo (celery) e aipo (celeriac), Cucurbitaceae sp. (por exemplo, pepinos - incluindo pepinos, abóboras, melancias, cabaças e melões), Alliaceae sp. (por exemplo, alho-poró e cebolas), Cruciferae sp. (por exemplo, repolho branco, repolho vermelho, brócolis, couve-flor, Couves de Bruxelas, pakchoi, couve-rábano, rabanetes, rábano, agrião e repolho chinês), Leguminosae sp. (por exemplo, amendoim, ervilhas, lentilhas e feijão - por exemplo, feijões comuns e feijões amplos), Chenopodiaceae sp. (por exemplo, Acelga,beterraba forrageira, espinafre, beterraba), Linaceae sp. (por exemplo, cânhamo), Cannabeacea sp. (por exemplo, canabis), Malvaceae sp. (por exemplo, quiabo, cacau), Papaveraceae (por exemplo, papoula), Asparagaceae (por exemplo, aspargo); plantas úteis e plantas ornamentais no jardim e florestas incluindo relva do gramado, grama e Stevia rebaudiana; e em cada caso geneticamente tipos geneticamente modificados destas plantas.

[00510] Em uma modalidade preferida dos métodos de tratamento descritos aqui, a colheita é selecionada do grupo que consiste em colheitas de campo, gramíneas, frutos e vegetais, gramados, árvores e plantas ornamentais.

[00511] Em certos aspectos, a presente invenção desse modo também fornece métodos de tratamento pós-colheita para proteger ou tratar uma planta colhida ou uma parte da planta colhida de uma infecção ou outra interação biológica com um patógeno de planta, pelo menos compreendendo a etapa de aplicação direta ou indiretamente à planta colhida ou a uma parte da planta colhida, uma composição agroquímica como descrito aqui, sob condições efetivas para proteger ou tratar a planta colhida ou uma parte da planta colhida contra a infecção ou interação biológica com o patógeno de planta. De acordo com modalidades específicas, o produto colhido é um fruto, flor, noz ou vegetal, é preferido um fruto ou vegetal com casca não comestível, preferivelmente selecionado dos frutos abacates, bananas, plátanos, limões, toranjas, melões, laranjas, abacaxis, kiwi, goiabas, mandarins, mangas e abóbora,mais preferivelmente bananas, laranjas, limões e pêssegos, em particular, bananas. De acordo com outras modalidades específicas, o produto colhidoé uma flor de corte de plantas ornamentais, preferivelmente selecionadas de Alstroemeria, Cravo, Crisântemo, Frésia, Gérbera, Gladíolo, respiração de bebê (Gypsophila spec), Helianthus,Hydrangea, Lilium, Lisianthus, rosas e flores de verão. De acordo com outras modalidades específicas, o produto colhido é grama ou madeira cortada.

[00512] Distúrbios pós-colheita são, por exemplo, manchas lenticel, murchamento, degenerescência senescente, cova amarga, escaldadura, núcleo de água, escurecimento, colapso vascular, lesão de CO2, CO2 ou deficiência de O2, e amaciamento. Doenças fúngicas podem ser causadas, por exemplo, pelos seguintes fungos: Mycosphaerella spp., Mycosphaerella musae, Mycosphaerella frag a ae, Mycosphaerella citri; Mucor spp., por exemplo, Mucor piriformis; Monilinia spp., por exemplo,Monilinia fructigena, Monilinia laxa; Phomopsis spp., Phomopsis natalensis; Colletotrichumspp., por exemplo,Colletotrichum musae, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum coccodes; Verticilliumspp., por exemplo, VerticiHium theobromae; Nigrospora spp.; Botrytis spp., por exemplo,Botrytis cinerea; Diplodia spp., por exemplo,Diplodia citri; Pezicula spp.; Alternaria spp., por exemplo,Alternaria citri, Alternaria alternata; Septoria spp., por exemplo, Septoria depressa; Venturia spp., por exemplo, Venturia inaequalis, Venturia pirina; Rhizopus spp., por exemplo, Rhizopus stolonifer, Rhizopus oryzae; Glomerella spp., por exemplo,Glomerella cingulata; Sclerotinia spp., por exemplo, Sclerotinia fruiticola; Ceratocystis spp., por exemplo, Ceratocystis paradoxa; Fusarium spp., por exemplo, Fusarium semitectum, Fusarium moniliforme, Fusarium solani, Fusarium oxysporum; Cladosporium spp., por exemplo,Cladosporium fulvum, Cladosporium cladosporioides, Cladosporium cucumerinum, Cladosporium musae; Penicillium spp., por exemplo, Penicillium funiculosum, Penicillium expansum, Penicillium digitatum, Penicillium italicum; Phytophthoraspp., por exemplo, Phytophthora citrophthora, Phytophthora fragariae, Phytophthora cactorum, Phytophthora parasitica; Phacydiopycnis spp., por exemplo, Phacydiopycnis malirum; Gloeosporium spp., por exemplo, Gloeosporium album, Gloeosporium perennans, Gloeosporium fructigenum, Gloeosporium singulata; Geotrichum spp., por exemplo,Geotrichum candidum; Phlyctaena spp., por exemplo,Phlyctaena vagabunda; Cylindrocarpon spp., por exemplo,Cylindrocarpon mail; Stemphyllium spp., por exemplo,Stemphyllium vesica urn; Thielaviopsis spp., por exemplo,Thielaviopsis paradoxy; Aspergillus spp., por exemplo, Aspergillus niger, Aspergillus carbonari us; Nectria spp., por exemplo, Nectria galligena; Cercospora spp., por exemplo, Cercospora angreci, Cercospora apii, Cercospora atrofiliformis, Cercospora musae, Cercospora zeae-maydis.

[00513] Em outros aspectos, a presente invenção fornece usos das composições agroquímicas, como descrito aqui, como um agente anti- peste, tal como, por exemplo, um agente bioestático ou um agente pesticida, incluindo porém não limitada a um agente fungistático ou um fungicida.

[00514] Em uma modalidade particular, as pestes de planta combatidas pelo método de acordo com a presente invenção são fungos patogênicos de planta, como definido anteriormente. Número de lesão, tamanho da lesão, e extensão de esporulação de patógenos fúngicos podem todos ser reduzidos como um resultado da aplicação do método de acordo com a presente invenção.

MÉTODOS DE PRODUÇÃO E FABRICAÇÃO DE SEQUÊNCIAS DE DOMÍNIO VARIÁVEL DE CADEIA PESADA

[00515] A invenção também fornece métodos para preparar ou gerar as sequências de domínio variável de cadeia pesada, bem como métodos para produzir ácidos nucleicos codificando as mesmas e células hospedeiras, produtos e composições compreendendo estas sequências de domínio variável de cadeia pesada. Alguns exemplos preferidos, porém não limitantes de tais métodos tornar-se-ão claro a partir de descrição adicional inclusa.

[00516] Como ficará claro para a pessoa versada, um método particularmente útil para preparar sequências de domínio variável de cadeia pesada, como descrito aqui, geralmente compreende as etapas de: (a) Expressar a sequência de nucleotídeo codificando uma sequência de domínio variável de cadeia pesada, como descrito aqui, ou um vetor ou construção genética de uma sequência de nucleotídeo codificando aquela sequência de domínio variável de cadeia pesada e (b) opcionalmente isolar e/ou purificar a sequência de domínio variável de cadeia pesada.

[00517] Em modalidades particulares consideradas aqui, as sequências de domínio variável de cadeia pesada específicas de peste podem ser obtidas por métodos que envolvem a geração de uma biblioteca aleatória de sequências de aminoácido e avaliação desta biblioteca quanto a uma sequência de aminoácido capaz de especificamente ligar-se a um alvo de esfingolipídeo.

[00518] Consequentemente, em modalidades particulares, métodos para a preparação de uma sequência de domínio variável de cadeia pesada, como descrito aqui, compreendem as etapas de a) fornecer um conjunto,coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido de uma sequência de domínio variável de cadeia pesada; e b) analisar o referido conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido quanto às sequências de aminoácido que podem se ligar a e/ou ter afinidade para o esfingolipídeo alvo. e c) isolamento da(s) sequência(s) de aminoácido que podem se ligar a e/ou ter afinidade para o esfingolipídeo alvo.

[00519] Em tal método, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido pode ser qual adequado conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido. Por exemplo, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido pode ser um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmento de imunoglobulina (como descrito aqui), tais como, um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmento de imunoglobulina naive; um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmento de imunoglobulina sintético ou semissintético; e/ou um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmento de imunoglobulinaque foi submetido à maturação de afinidade.

[00520] Em modalidades particulares deste método, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido pode ser um imune conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmento de imunoglobulina, por exemplo, derivado de um mamífero que foi adequadamente imunizado com um esfingolipídeo alvo ou com um determinante antigênico adequado com base nele ou derivado dele, tais como, uma parte antigênica, fragmento, região, domínio, alça ou outro epitopo do mesmo. Em um aspecto particular, a referida determinante antigênicapode ser uma parte extracelular, região, domínio, alça ou outro(s) epitopo(s) extracelular(es).

[00521] Nos métodos acima, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido pode ser apresentado em um fago, fagemídeo, ribossoma ou micro-organismo adequado (tal como levedura), tal como, para facilitar a avaliação. Adequados métodos, técnicas e organismos hospedeiros para exibição e avaliação (um conjunto, coleção ou biblioteca de) de sequências de aminoácido ficarão claros para a pessoa versada na técnica, por exemplo, com base em outra descrição inclusa aqui. Referência é também feita à revisão por Hoogenboom em Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116 (2005).

[00522] Em outras modalidades, os métodos para gerar as sequências de domínio variável de cadeia pesada, como descrito aqui, compreendem pelo menos as etapas de: a) Fornecer uma coleção ou amostra de células expressando domínio variável de cadeia pesada sequências de aminoácido; b) Analisar a referida coleção ou amostra de células quanto a células que expressam uma sequência de aminoácido que podem ligar-se a e/ou ter afinidade para um esfingolipídeo alvo; e c) ou (i) isolar a referida sequência de aminoácido; ou (ii) isolar da referida célula,uma sequência de ácido nucleico que codifica a referida sequência de aminoácido, seguida pela expressão da referida sequência de aminoácido.

[00523] A coleção ou amostra de células pode, por exemplo, ser uma coleção ou amostra de células B. Além disso, neste método, a amostra de células pode ser derivada de um mamífero que foi adequadamente imunizado com um alvo fúngico ou com um determinante antigênico adequado com base nele ou derivado dele, tais como, uma parte antigênica, fragmento, região, domínio, alça ou outro epitopo do mesmo. Em uma particular modalidade, a determinante antigênica pode ser uma parte extracelular, região, domínio, alça ou outro(s) epitopo(s) extracelular(es).

[00524] Em outras modalidades, o método para gerar uma sequência de domínio variável de cadeia pesada direcionada contra um esfingolipídeo alvo pode compreender pelo menos as etapas de: a) fornecer um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico codificando uma sequência de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada; b) analisar o referido conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico para sequências de ácido nucleico que codificam uma sequência de aminoácido que pode ligar-se a, e/ou tem afinidade para o esfingolipídeo alvo; e c) isolar a referida sequência de ácido nucleico, seguida pela expressão da referida sequência de aminoácido.

[00525] Nos métodos acima, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico codificando sequências de aminoácido pode, por exemplo, ser um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico codificando um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmento de imunoglobulina naive; um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico codificando um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmento de imunoglobulina sintético ou semissintético; e/ou um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico codificando um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de fragmento de imunoglobulina que foi submetido à maturação de afinidade.

[00526] Em particular, em tal método, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico codifica um conjunto, coleção ou biblioteca de domínio variável de cadeia pesada (tal como domínios de VH ou domínios VHH). Por exemplo, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de ácido nucleico pode codificar um conjunto, coleção ou biblioteca de domínio de anticorpos ou único domínio de anticorpos, ou um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido que são capazes de funcionar como um domínio de anticorpo ou único domínio de anticorpo. Em modalidades específicas, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de nucleotídeo codifica um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências VHH.

[00527] Nos métodos acima, o conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de nucleotídeo pode ser apresentado em um fago, fagemídeo, ribossoma ou micro-organismo adequado (tal como levedura), tal como, para facilitar a avaliação. Métodos, técnicas e organismos hospedeiros adequados para exibir e avaliar (um conjunto, coleção ou biblioteca de) sequências de nucleotídeo codificando sequências de aminoácido ficarão claro para a pessoa versada na técnica, por exemplo, com base em outra descrição inclusa aqui. Referência é também feita à revisão por Hoogenboom em Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116 (2005).

[00528] A invenção também se refere a sequências de aminoácido que são obteníveis ou obtidas pelos métodos acima mencionados, ou alternativamente por um método que compreende um dos métodos acima mencionados e, além disso, pelo menos as etapas de determinação da sequência de nucleotídeo ou sequência de aminoácido da referida sequência de imunoglobulina; e de expressão ou sintetização da referida sequência de aminoácido de uma maneira por si só conhecida, tal como, por expressão em uma célula hospedeira adequada ou organismo hospedeiro ou por síntese química.

ISOLAMENTO DE DOMÍNIOS VARIÁVEIS DE CADEIA PESADA

[00529] Em alguns casos, os métodos para produzir as sequências de aminoácido que se ligam especificamente a um alvo fúngico como considerado aqui, podem também compreender a etapa de isolar da biblioteca de sequência de aminoácido pelo menos um domínio variável de cadeia pesada apresentando afinidade de ligação detectável para, ou efeito in vitro detectável sobre um esfingolipídeo alvo.

[00530] Estes métodos podem também compreender a etapa de amplificar a sequência codificando pelo menos um domínio variável de cadeia pesada apresentando afinidade de ligação detectável para, ou efeito in vitro detectável sobre a atividade de um esfingolipídeo alvo. Por exemplo, um clone de fago apresentando uma sequência de aminoácido particular, obtida de uma etapa de seleção de um método descrito aqui, pode ser amplificado por reinfecção de uma bactéria hospedeira e incubação em um meio de crescimento.

[00531] Em modalidades particulares, estes métodos podem abranger determinar a sequência de uma ou mais sequências de aminoácido capazes de ligação a um esfingolipídeo alvo.

[00532] Onde uma sequência de domínio variável de cadeia pesada, compreendida em um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de aminoácido, é exibida em uma célula ou fago ou partícula adequada, é possível isolar da referida célula ou fago ou partícula, a sequência de nucleotídeo que codifica aquela sequência de aminoácido. Deste modo, a sequência de nucleotídeo do(s) membro(s) de biblioteca de sequência de aminoácido selecionada pode ser determinada por um método de sequenciamento de rotina.

[00533] Em outras modalidades particulares, os métodos para produzir um domínio variável de cadeia pesada como considerado aqui compreendem a etapa de expressar a(s) referida(s) sequência(s) de nucleotídeo em um organismo hospedeiro sob condições adequadas, a fim de obter a sequência de aminoácido desejada real. Esta etapa pode ser realizada por métodos conhecidos por uma pessoa versada na técnica.

[00534] Além disso, as sequências de domínio variável de cadeia pesada obtidas, apresentando afinidade de ligação detectável para, ou efeito in vitro detectável sobre a atividade de um esfingolipídeo alvo, podem ser sintetizadas como construção de proteína solúvel, opcionalmente após sua sequência ter sido indentificada.

[00535] Por exemplo, as sequências de domínio variável de cadeia pesada obtidas, obteníveis ou selecionadas pelos métodos acima, podem ser sintetizadas usando métodos de síntese química ou recombinante conhecidos na técnica. Além disso, as sequências de aminoácido obtidas, obteníveis ou selecionadas pelos métodos acima mencionados, podem ser produzidas por técnicas de engenharia genética. Desse modo, métodos para sintetizar as sequências de domínio variável de cadeia pesada obtidas, obteníveis ou selecionadas pelos métodos acima mencionados, podem compreender transformar ou infectar uma célula hospedeira com um ácido nucleico ou um vetor codificando uma sequência de aminoácido apresentando afinidade de ligação detectável para, ou efeito in vitro detectável sobre a atividade de um esfingolipídeo alvo. Consequentemente, as sequências de aminoácido tendoafinidade de ligação detectável para, ou efeito in vitro detectável sobre a atividade de um esfingolipídeo alvo podem ser feitas por métodos de DNA recombinantes. DNA codificando as sequências de aminoácido pode ser facilmente sintetizado usando procedimentos convencionais. Assim que preparado, o DNA pode ser introduzido em vetores de expressão, que podem então ser transformados ou transfectados em células hospedeiras, tais como, E. coli ou qualquer sistema de expressão adequado,a fim de obter a expressão de sequências de aminoácidonas células hospedeiras recombinantese/ouno meio em que estas células hospedeiras recombinantes residem.

[00536] Deve ser entendido, como sabido por alguém versado na técnicade expressão e purificação de proteína, que o domínio variável de cadeia pesada produzido de um vetor de expressão usando um sistema de expressão adequado pode ser rotulado (tipicamente na extremidade de terminal N ou terminal C da sequência de aminoácido) com, por exemplo, um rótulo His ou outro rótulo de sequência para fácil purificação.

[00537] Transformação ou transfecção de ácidos nucleicos ou vetores em células hospedeiras pode ser realizada por uma variedade de métodos conhecidos por uma pessoa versada na técnica, incluindo coprecipitação de DNA de fosfato de cálcio, transfecção mediada por destrana de DEAE, transfecção mediada por polibreno, eletroporação, microinjeção, fusão de lipossoma, lipofecção, fusão de protoplasto, infecção retroviral, e biolísticos.

[00538] Células hospedeiras adequadas para a expressão das sequências desejadas de domínio variável de cadeia pesada podem serqualquer célula eucariótica ou procariótica (por exemplo, células bacterianas, tais como, E. coli, células de levedura, células mamíferas, células aviárias, células anfíbias, células de planta, células de peixe, e células de inseto), se localizada in vitro ou in vivo. Por exemplo, células hospedeiras podem ser localizadas em uma planta transgênica.

[00539] Desse modo, a aplicação também fornece métodos para a produção de sequências de domínio variável de cadeia pesada tendoafinidade de ligação detectável para, ou efeito in vitro detectável sobre a atividade de um esfingolipídeo alvo compreendendo transformar, transfectar ou infectar uma célula hospedeira com sequências de ácido nucleico ou vetores codificando tais sequências de aminoácido e expressando as sequências de aminoácido sob condições adequadas.

[00540] Em ainda outra modalidade, a invenção também fornece métodos para fabricação ("ou a produção de" que é palavra equivalente) de uma composição agroquímica ou biológica de controle como descrito aqui.

[00541] Em modalidades particulares, a invenção fornece métodos para a produção de uma composição agroquímica como descrito aqui, pelo menos compreendendo as etapas de: - obtenção de pelo menos um domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo (VHH ou VH) ou um fragmento funcional do mesmo, que se liga especificamente a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e - formulação do referido domínio variável de cadeia pesada ou fragmento funcional do mesmo em uma composição agroquímica.

[00542] Em modalidades particulares destes métodos, a etapa de obtenção de pelo menos um domínio variável de cadeia pesada oufragmento funcional do mesmo, que se liga especificamente a um esfingolipídeo de um patógeno de planta compreende: (a) Expressar a sequência de nucleotídeo codificando um domínio variável de cadeia pesada ou fragmento funcional do mesmo, que se liga especificamente a um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e opcionalmente (b) isolar e/ou purificar o domínio variável de cadeia pesada ou fragmento funcional do mesmo.

[00543] Em outras modalidades particulares destes métodos, a etapa de obtenção de pelo menos um domínio variável de cadeia pesada ou fragmento funcional do mesmo, que se liga especificamente a um esfingolipídeo de um patógeno de planta compreende: (a) fornecer um conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de domínio variável de cadeia pesada ou fragmentos funcionais de sequências de domínio variável de cadeia pesada; (b) analisar o referido conjunto, coleção ou biblioteca de sequências de domínio variável de cadeia pesada ou sequências de fragmentos funcionais do mesmo para sequências que especificamente se ligam a, e/ou têm afinidade para um esfingolipídeo de um patógeno de planta, e opcionalmente a) isolar as sequências de domínio variável de cadeia pesada ou sequências de fragmentos funcionais do mesmo que especificamente se ligam a, e/ou têm afinidade para um esfingolipídeo de um patógeno de planta.

[00544] O presente pedido também descreve métodos para a fabricação ("ou a produção de" que é palavra equivalente) de uma composição agroquímica ou biológica de controle como descrito aqui, compreendendo formular uma sequência de aminoácido ou polipeptídeo entre 80 e 200 aminoácidos, ou outras subfaixas adequadas como definido aqui anteriormente, com atividade pesticida juntamente com pelo menos um agente auxiliar agroquímico habitual.

[00545] Métodos de fabricação adequados são conhecidos na técnica e incluem, porém não estão limitados a, mistura de cisalhamento elevado ou baixo, moagem úmida ou seca, fundição por gotejamento, encapsulação, emulsificação, revestimento, encrustação, formação de pílulas, granulação por extrusão, granulação de leito fluido, co-extrusão, secagem por spray, resfriamento por spray, atomização, adição ou polimerização por condensação, polimerização interfacial, polimerização in situ, coacervação, encapsulação de spray, dispersões fundidas por resfriamento, evaporação de solvente, separação de fase, extração de solvente, polimerização solução-gel, revestimento de leito fluido, revestimento de panela, fusão, adsorção ou absorção passiva ou ativa.

[00546] Especificamente, as sequências de aminoácido ou polipeptídeos entre 80 e 200 aminoácidos como descrito aqui, ou outras subfaixas adequadas como definido aqui anteriormente, podem ser preparadas por síntese química.

[00547] É também descrito que as sequências de aminoácido ou os polipeptídeos entre 80 e 200 aminoácidos, ou outras subfaixas adequadas como definido aqui anteriormente, podem ser preparados por sistemas de expressão microbiana recombinante in vitroe isoladas para outro uso. Tais sequências de aminoácido ou polipeptídeos podem estar em lisados celulares crus, suspensões, coloides, etc., ou alternativamente podem ser purificadas, refinadas, tamponadas e/ou também processadas antes da formulação juntamente com agentes auxiliares agroquímicos habituais.

[00548] Metodologias especificamente recombinantes geralmente envolvem inserir uma molécula de DNA expressando uma sequência de aminoácido, proteína ou polipeptídeode interesse em um sistema de expressão para o qual a molécula de DNA é heteróloga (isto é, não presentes normalmente no hospedeiro). A molécula de DNA heteróloga é inserida no sistema de expressão ou vetor em orientação de sentido adequado e estrutura de leitura correta. O vetor contém os elementos necessários para a transcrição e translação das sequências de codificação de proteína inseridas. A transcrição de DNA é dependenteda presença de um promotor. Similarmente, a translação de mRNA em procariotas depende da presença dos sinais procarióticos adequados que diferem daqueles de eucariotas. Para uma revisão em maximização de expressão de gene, veja Roberts e Lauer, Methods in Enzymology 68:473 (1979. Independente das sequências regulatórias específicas empregadas, a molécula de DNA é clonada no vetor usando procedimentos de clonagem padrões na técnica, como descrito por Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Laboratory, Cold Springs Harbor, N.Y. (1989). Assim que a molécula de DNA isolada codificando a proteína é clonada em um sistema de expressão, ela está pronta para ser incorporada em uma célula hospedeira. Tal incorporação pode ser realizada pelas várias formas de transformação, dependendo do vetor/sistema de célula hospedeira. Células hospedeiras adequadas incluem,porém não estão limitados a, bactérias, vírus, levedura, células mamíferas, inseto, planta, e similares. Opcionalmente, as células hospedeiras recombinantes podem ser células hospedeiras que expressam um sistema de secreção tipo III funcional, nativo ou recombinante. Isto é descrito em detalhes na US6.596.509. Como uma consequência da expressão do sistema de secreção tipo III funcional, as células expressarão o polipeptídeo e em seguida secretaram a proteína no meio de cultura. Isto pode simplificar o isolamento e purificação do polipeptídeo. As células hospedeiras recombinantes podem ser cultivadas em câmaras de fermentação apropriada, preferivelmentesob condições de temperatura e nutriente que otimizam o crescimento das células hospedeiras e a expressão do polipeptídeo. Pessoas versadas na técnica são capazes de identificar as condições ideais para células hospedeiras particulares. Após fermentação, por exemplo, a suspensão bacteriana pode ser diluída em, por exemplo, cerca de 2 a 5 vezes o volume de um tampão para ajustar o pH entre cerca de 5,5 a 10, mais preferivelmentepara um pH entre cerca de 7 a 9, e ainda mais preferivelmentepara um pH de cerca de 8,0. Tampões adequados são bem conhecidos na técnica e podem incluir,por exemplo, tampão de fosfato de potássio ou um tampão Tris- EDTA. A concentração do tampão pode ser decerca de 0,001 mM a cerca de 0,5 M. Após o ajuste do pH, a solução de suspensão (bacteriana) é tratada por aquecimento para uma temperatura de cerca de 60 a 130°C, preferivelmente para uma temperatura de cerca de 95 a 125°C. O tratamento por aquecimento pode ser realizado durante qualquer período de tempo adequado. Em uma modalidade, o tratamento por aquecimento é realizado durante um período de cerca de cinco minutos até cerca de 30 minutos. A solução de suspensão aquecida é em seguida resfriada. Uma temperatura de resfriação é, sem limitação, de cerca de 35 a 55°C, preferivelmente cerca de 45°C. Após o resfriamento as células bacterianas na suspensão bacteriana são lisadas, se requerido, para liberar o polipeptídeo. A lise celular pode ser realizada, por exemplo, contatando-se a suspensão bacteriana com uma lisozima. A concentração da lisozima pode qualquer uma de cerca de 2 ppm a 100 ppm. Alternativamente, a lise celular pode envolver métodos não químicos, tais como, pressão elevada ou sonicação, ambas as quais são bem conhecidas pelas pessoas versadas na técnica. Pode ser desejável, após a lise celular, incubar a suspensão bacteriana. Os tempos de incubação adequados podem variar. Por exemplo, pode ser desejável incubar a suspensão bacteriana durante um período de cerca de 30 a 45 minutos em uma temperatura de cerca de 40 a 42°C. Após a lise, o polipeptídeo desejado pode ser também extraído removendo-se os detritos celulares e as proteínas desnaturadas resultantes da etapa de tratamento por aquecimento anterior. Em uma modalidade, o extrato é centrifugado durante cerca de 10 a 20 minutos para remover alguns dos detritos celulares. As velocidades de centrífuga adequadas podem ser de cerca de 4.000 a 20.000 rpm e o tempo de rotação pode ser de cerca de 10 minutos a 20 minutos. Outros detritos celulares podem então ser removidos por tratamento por aquecimento e centrifugação do sobrenadante para obter um extrato líquido que é substancialmente livre de detritos celulares removendo mais do que cerca de 60%, 70%, 80%, 90%, ou 95% de total de sólidos. Este subsequente tratamento por aquecimento pode ser realizado em uma temperaturadecerca de 60°C durante até cerca de duas horas, em cerca de 100°C durante cerca de 10 minutos, ou em cerca de 121°C com 1,05 kg/cm2(15 psi) de pressão durante cerca de 5 minutos. Estas temperaturas e tempos podem variar dependendo de outras condições. O método de preparação de uma composição líquida estável contendo uma sequência de aminoácido ou polipeptídeo, como descrito aqui, também envolve introduzir no extrato líquido um agente biocida e, opcionalmente, um ou ambos de um inibidor de protease e um tensoativo não iônico, desse modo obtendo uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo. Em uma modalidade, um inibidor de protease é introduzido no extrato líquido sem um tensoativo não iônico. Em outra modalidade, um tensoativo não iônico é introduzido no extrato líquido sem um inibidor de protease. Em uma outra modalidade, ambos um inibidor de protease e umtensoativo não iônico são introduzidos no extrato líquido. Em ainda outra modalidade, nem um inibidor de protease nem um tensoativo não iônico é introduzido no extrato líquido. Alternativamente, a estabilidade da composição líquida, como descrito aqui, pode ser avaliada usando, por exemplo, análise de HPLC ou outros procedimentos adequados que podem identificar a quantidade de uma proteína ou polipeptídeo específico. A estabilidade das sequências de aminoácido ou polipeptídeos em uma composição, como descrito aqui, pode ser determinada comparando-se a quantidade da proteína na composição líquida envelhecida àquela de uma composição líquida recentemente preparada ou a uma quantificação anterior realizada na mesma composição. A medição de estabilidade de proteína correlaciona-se fortemente com uma retenção de sua atividade.

[00549] Agentes auxiliares agroquímicos habituais são bem conhecidos na técnica e incluem, porém não estão limitados a solventes aquosos ou orgânicos, agentes de tamponamento, acidificantes, tensoativos, agentes umectantes, agentes de dispersão, agentes de aderência, adesivos, veículos, cargas, espessantes, emulsificantes, dispersantes, agentes sequestrantes, agentes antissedimentação, agenes de coalescência, modificadores de reologia, agentes desespumantes, fotoprotetores, agentes anti-congelamento, biocidas, penetrantes, óleo mineral ou vegetal, pigmentos e agentes de controle de deriva ou qualquer combinação adequada dos mesmos.

[00550] Em ainda outra modalidade, a invenção fornece um polipeptídeo entre 80 e 200 aminoácidos ou as subfaixas descritas aqui anteriormente, obtidas por seleção de afinidade para um determinado alvo de peste de planta, que é capaz de inibir o crescimento e/ou a atividade de uma peste de planta em uma concentração inibitória mínima de cerca de 0,00001a 1 μM.

[00551] Em modalidades particulares dos métodos, como descrito aqui, para proteger, prevenir, curar ou tratar uma planta de uma infecçãopor um fungo ou de outra interação biológica com um fungo, as sequências de domínio variável de cadeia pesada, polipeptídeos ou composições, como descrito aqui, são direta ou indiretamente aplicadas à planta por vaporização, atomização, espumação, vaporização, em hidrocultura/hidropônicos, revestimento, submersão, e/ou encrustação. SEQUÊNCIAS DE ÁCIDO NUCLEICO

[00552] Em outro aspecto, a presente invenção fornece sequências de ácido nucleico codificando as sequências de aminoácido de domínio variável de cadeia pesada nas composições, como descrito aqui, (ou fragmentos adequados das mesmas). Estas sequências de ácido nucleico podem também ser na forma de um vetor ou uma construção genética ou polinucleotídeo. As sequências de ácido nucleico, como descrito aqui, podem ser sequências sintéticas ou semissintéticas, sequências de nucleotídeo que foram isoladas de uma biblioteca (e em particular, uma biblioteca de expressão), sequências de nucleotídeo que foram preparadas por PCR usando iniciadores de sobreposição, ou sequências de nucleotídeo que foram preparadas usando técnicas para síntese de DNA por si só conhecidas. CONSTRUTOS, VETORES, CÉLULAS HOSPEDEIRAS

[00553] Os construtos genéticos, como descrito aqui, podem ser DNA ou RNA, e são preferivelmente DNA de filamento duplo. Os construtos genéticos da invenção podem também ser em uma forma adequada para a transformação da célula hospedeira ou organismo hospedeiro pretendidos em uma forma adequada para a integração no DNA genômico da célula hospedeira pretendida ou em uma forma adequada para replicação independente, manutenção e/ou herança no organismo hospedeiro pretendido. Por exemplo, os construtos genéticos da invenção podem ser na forma de um vetor, tal como, por exemplo, um plasmídeo, cosmídeo, YAC, um vetor viral ou transposon. Em particular, o vetor pode ser um vetor de expressão, isto é, um vetor que pode prover expressão in vitro e/ou in vivo (por exemplo, em uma célula hospedeira, organismo hospedeiro e/ou sistema de expressão adequado).

[00554] Consequentemente, em outro aspecto adicional, a presente invenção também fornece vetores compreendendo uma ou mais sequências de ácido nucleico da invenção.

[00555] Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece hospedeiros ou células hospedeiras que expressam ou são capazes de expressar uma ou mais sequências de aminoácido como descrito aqui. Exemplos adequados de hospedeiros ou células hospedeiras para expressão das sequências de aminoácido, polipeptídeos da invenção serão claros para a pessoa versada.

[00556] O pedido também descreve, polipeptídeos entre 80 e 200 aminoácidos ou as subfaixas discutidas aqui anteriormente, permanecem estáveis em uma composição de controle agroquímica ou biológica, como definido, significando que a integridade e a atividade de pesticida, como definido, do polipeptídeo são mantidas sob condições de utilização e/ou armazenagem da composição agroquímica, que pode incluir temperaturas elevadas, ciclos de congelamento descongelamento, mudanças em pH ou em força iônica, irradiação de UV, presença de produtos químicos nocivos e similares. Mais preferivelmente, estes polipeptídeos entre 80 e 200 aminoácidos permanecem estáveis em uma composição agroquímica quando a composição agroquímica for armazenada em temperatura ambiente durante um período de dois anos ou quando a composição agroquímica for armazenada em 54°C durante um período de duas semanas. Particularmente, os polipeptídeos entre 80 e 200 aminoácidos compreendidos em uma composição agroquímica retêm pelo menos cerca de 70% de atividade, mais particularmente pelo menos cerca de 70% a 80% de atividade, mais particularmente cerca de 80% a 90% de atividade, após serem armazenados em uma composição agroquímica em temperatura ambiente durante um período de dois anos ou quando a composição agroquímica contendo o polipeptídeo for armazenada em 54°C durante um período de duas semanas.

[00557] Em ainda outra modalidade, para uso nos métodos descritos aqui, o pedido descreve sequências de ácido nucleico codificando um polipeptídeo entre 80 e 200 aminoácidos, em que polipeptídeos são obtidos por seleção de afinidade para um alvo pantogênico de planta específico, cujo polipeptídeo é capaz de inibir o desenvolvimento e/ou a atividade de uma peste de colheita em uma concentração inibitória mínima de cerca de 0,00001a 1 μM.

[00558] Também descritos são genes quiméricos compreendendo os seguintes elementos de DNA operavelmente ligados: a) um promotor expressável de planta, b) uma região de DNA que quando transcrita produz uma molécula de mRNA capazs de ser traduzida em um polipeptídeo e c) uma região de extremidade 3' compreendendo terminação de transcrição e sinais de poliadenilação funcionando em células de referida planta.

[00559] Um "gene quimérico" ou "construtor quimérico" é uma sequência de ácido nucleico recombinante em que um promotor (por exemplo, um promotor expressável de planta) ou sequência de ácido nucleico regulatória é operativamente ligado a, ou associado com, uma sequência de ácido nucleico que codifica um mRNA, de tal modo que a sequência de ácido nucleico regulatória seja capaz de regular transcrição ou expressão da sequência codificando ácido nucleico associado quando introduzida em uma célula tal como uma célula de planta. A sequência de ácido nucleico regulatória do gene quimérico não é normalmente operativamente ligada à sequência de ácido nucleico associada como encontrado na natureza.

[00560] Na presente invenção, um "promotor de planta" compreende elementos regulatórios, que mediam a expressão de um segmento de sequência de codificação em células de planta. Para expressão em plantas, a molécula de ácido nucleico deve ser ligada operacionalmentea ou compreender um promotor adequado que expressa o gene noponto certo no tempo e com o requerido padrão de expressão espacial.

[00561] O termo "operacionalmente ligado" como usado aqui refere- se a uma ligação funcional entre a sequência de promotor e o gene de interesse, de tal modo que a sequência de promotor seja capaz de iniciar transcrição do gene de interesse.

[00562] Promotor expressável de plantas compreende sequências de ácido nucleico que são capazes de direcionar a expressão de um transgene em uma planta. Exemplos de promotor expressável de plantas são promotores constitutivos que são transcricionalmente ativos durante a maior parte, porém não necessariamente todas, as fases decrescimento e desenvolvimento e soba maioria das condições ambientais, em pelo menos uma célula, tecido ou órgão, outros promotores são promotores indutíveis, outros exemplos são promotores específicos de tecido, ainda outros exemplos são promotores indutíveis de estresse abiótico.

[00563] O gene quimérico (ou o cassete de expressão) quando transformado em uma planta expressaum ácido nucleico que resultaem expressão de uma proteína.

[00564] Também descrito é um vetor recombinante que compreende um cassete de expressão (ou um gene quimérico) como aqui descrito anteriormente.

[00565] O termo "terminador" abrange uma sequência de controle que é uma sequência de DNA no término de uma unidade transcricional que sinaliza processamento 3' e poliadenilação de um transcrito primário e terminação de transcrição. O terminador pode ser derivado do gene natural, de uma variedade de outros genes de planta, ou de T- DNA. O terminador a ser adicionado pode ser derivado de, por exemplo, os genes de sintase de octopina ou sintase de nopalina, ou alternativamente de outro gene de planta, ou menos preferivelmente de qualquer outro gene eucariótico.

[00566] "Marcador selecionável", "gene de marcador selecionável" ou "gene repórter" inclui qualquer gene que confereumfenótiposobre uma célula em queele é expresso para facilitar a identificação e/ou seleção de células que são transfectadas ou transformadas com um construtor de ácido nucleico da invenção. Estes genes marcadores permitem a identificação de uma transferência bem sucedida das moléculas de ácido nucleico por meio de uma série de diferentes princípios. Marcadores adequados podem ser selecionados de marcadores que conferem resistência à herbicida ou antibiótico, que introduzem um novo traço metabólico ou que permitem seleção visual. Exemplos de genes de marcadores selecionáveis incluem genes conferindo resistência aos antibióticos (tal como nptll que fosforila neomicina e canamicina, ou hpt, fosforilando higromicina, ou genes conferindo resistência a, por exemplo, bleomicina, estreptomicina, tetraciclina, cloramfenicol, ampicilina, gentamicina, geneticina (G418), espectinomicina ou blasticidina), às herbicidas (por exemplo, bar que fornece resistência a Basta®; aroA ou gox fornecendo resistência contra glifosato, ou os genes conferindo resistência a, por exemplo, imidazolinona, fosfinotricina ou sulfonilureia), ou genes que fornecem um traço metabólico (tal como manA que permite plantas usarem manose como única fonte de carbono ou xilose isomerase para a utilização de xilose, ou marcadores anti-nutritivo tal como a resistência a 2-deoxiglicose). Expressão de marcadores de genes visuais resulta na formação de cor (por exemplo, β-glucuronidase, GUS ou β- galactosidase com seus substratos coloridos, por exemplo, X-Gal), luminescência (tal como o sistema de luciferina/luceferase) ou fluorescência (proteína verde fluorescente, GFP, e derivados da mesma). Esta lista representa somente um pequeno numero de marcadores possíveis. O trabalhador versado é familiar com tais marcadores. Diferentes marcadores são preferidos, dependendo do organismo e o método de seleção.

[00567] É conhecido que após integração transitória ou estável de ácidos nucleicos em células de planta, somente uma minoria das células apreende o DNA estranho e, se desejado, integra-se em seu genoma, dependendo do vetor de expressão usado e a técnica de transfecção usada. Para identificar e selecionar estes integrantes, um gene codificando para um marcador selecionável (tais como aqueles descritos acima) é usualmente introduzido nas células hospedeiras juntamente com o gene de interesse. Estes marcadores podem, por exemplo, ser usados em mutantes em que estes genes não são funcionais por, por exemplo, deleção por métodos convencionais. Além disso, moléculas de ácido nucleico codificando um marcador selecionável podem ser introduzidas em uma célula hospedeira sobre o mesmo vetor que compreende a sequência codificando os polipeptídeos da invenção ou usados nos métodos da invenção, ou ainda em um vetor separado. As células que foram transfectadas estáveis com o ácido nucleico introduzido podem ser identificadas, por exemplo, por seleção (por exemplo, células que integraram o marcador selecionável sobrevivem, ao passo que as outras células morrem).

[00568] Visto que os genes marcadores, particularmente genes para resistência a antibióticos e herbicidas, não são mais requeridos ou são indesejados na célula hospedeira transgênica, uma vez queos ácidos nucleicos foram introduzidos com sucesso, o processo de acordo com a invenção para introduzir os ácidos nucleicos vantajosamente emprega técnicas que permitem a remoção ou excisão destes genes marcadores. Um tal método é o que é conhecido como cotransformação. O método de cotransformação emprega dois vetores simultaneamente para a transformação, um vetor transportando o ácido nucleico de acordo com a invenção e um segundo transportando o(s) gene(s) marcador(es). Uma grande proporção de transformantes recebe ou, no caso de plantas, compreende (até 40% ou mais dos transformantes), ambos os vetores. No caso de transformação com Agrobactéria, os transformantes usualmente recebem somente uma parte do vetor, isto é, a sequência flanqueada pelo T-DNA, que usualmente representa o cassete de expressão. Os genes marcadores podem subsequentemente ser removidos das plantas transformadas realizando cruzamentos. Em outro método, genes marcadores integrados em um transposon são usados para a transformação juntamente com ácido nucleico desejado (conhecido como a tecnologia de Ac/Ds). Os transformantes podem ser cruzados com uma fonte de transposase ou os transformantes são transformados com um construtor de ácido nucleico conferindo expressão de uma transposase, transitória ou estável. Em alguns casos (aproximadamente 10%), o transposon pula para fora do genoma da célula hospedeira assim que a transformação ocorre bem sucedidamente e é perdida. Em outro número de casos, o transposon salta para uma locação diferente. Nestes casos, o gene marcador deve ser eliminado realizando cruzamentos. Em microbiologia, as técnicas foram desenvolvidas, o que torna possível, ou facilita, a detecção de tais eventos. Outro método vantajoso se baseia no que é conhecido como sistemas de recombinação; cuja vantagem é que a eliminação por cruzamento pode ser dispensada. O sistema mais conhecido deste tipo é o que é conhecido como o sistema Cre/lox. Cre1 é uma recombinase que remove as sequências localizadas entre as sequências loxP. Se o gene marcador for integrado entre as sequências loxP, eleé removido uma vez que a transformação ocorreu com sucesso, por expressão da recombinase. Outros sistemas de recombinação são os sistemas HIN/HIX, FLP/FRT e REP/STB (Tribble e outros, J. Biol. Chem., 275, 2000: 22255-22267; Velmurugan e outro, J. Cel Biol., 149, 2000: 553-566). Uma integração de sítio específico no genoma de planta das sequências de ácido nucleico de acordo com a invenção é possível.

[00569] Para os propósitos da invenção, "transgênico", "transgene" ou "recombinante" significa no que diz respeito a, por exemplo, uma sequência de ácido nucleico, um cassete de expressão, construtor de gene ou um vetor compreendendo a sequência de ácido nucleico ou um organismo transformado com as sequências de ácido nucleico, cassetes de expressão ou vetores de acordo com a invenção.

[00570] Uma planta transgênica para os propósitos da invenção é desse modo entendido como significando, como acima, que os ácidos nucleicos usados no método da invenção não estão presentes em, ou originando de, o genoma da referida planta, ou estão presentes no genoma da referida planta, porém não em seu locus natural no genoma da referida planta, sendo possível para os ácidos nucleicos serem expressos homóloga ou heterologamente. Entretanto, como mencionado, transgênico também significa que, ao mesmo tempo em que os ácidos nucleicos de acordo com a invenção ou usados no método inventivo estão em sua posição natural no genoma de uma planta, a sequência foi modificada no que diz respeito à sequência natural, e/ou que as sequências regulatórias das sequências naturais foram modificadas. Transgênico é preferivelmente entendido como significando a expressão dos ácidos nucleicos de acordo com a invenção em um locus não natural no genoma, isto é, expressão homóloga ou, heteróloga dos ácidos nucleicos ocorre. As plantas transgênicas preferidas são mencionadas aqui. O termo "expressão" ou "expressão de gene" significa a transcrição de um gene específico ou genes específicos ou construtor genético específico. O termo "expressão" ou "expressão de gene" em particular significa a transcrição de um gene ou genes ou construtor genético em RNA estrutural (rRNA, tRNA) ou mRNA com ou sem subsequente tradução deste último em uma proteína. O processo inclui transcrição de DNA e processamento do produto de mRNA resultante.

[00571] O termo "expressão aumentada" ou "superexpressão" como usado aqui significa qualquer forma de expressão que seja adicional ao nível de expressão do tipo selvagem original. Para os propósitos desta invenção, o nível de expressão do tipo selvagem original pode também ser zero, isto é, ausência de expressão ou expressão imensurável.

[00572] Métodos para expressão aumentada de genes ou produtos de gene são bem documentados na arte e incluem, por exemplo, superexpressão impulsionada por promotores apropriados (como descrito aqui anteriormente), o uso de realçadores de transcrição ou realçadores de tradução. Os ácidos nucleicos isolados que servem como promotor ou elementos realçadores podem ser introduzidos em uma posição apropriada (tipicamente a montante) de uma forma não heteróloga de um polinucleotídeo a fim de super-regular a expressão de um ácido nucleico codificando o polipeptídeo de interesse. Se expressão de polipeptídeo for desejada, é geralmente desejável incluir uma região de poliadenilação na terminação 3 de uma região codificando polinucleotídeo. A região de poliadenilação pode ser derivada do gene natural, de uma variedade de outros genes de planta, ou de T-DNA. A sequência de terminação 3'a ser adicionada pode ser derivada de, por exemplo, os genes de sintase de octopina ou sintase de nopalina, ou alternativamente de outro gene de planta, ou menos preferivelmente de qualquer outro gene eucariótico.

[00573] Uma sequência de íntron pode também ser adicionada à região não transladada 5' (UTR) ou à sequência de codificação da sequência de codificação parcial para aumentar a quantidade da mensagem madura que se acumula no citosol. Inclusão de um íntron ligável na unidade de transcrição em ambos construtores de expressão de animal e planta foi mostrada para aumentar expressão de gene em ambos os níveis de proteína e mRNAaté 1000 vezes (Buchman e Berg (1988) Mol. Cel biol. 8: 4395-4405; Callis e outro (1987) Genes Dev 1 :1 183-1200). Tal realçamento de íntron de expressão de gene é tipicamente maior quando colocado próximo à terminação 5' da unidade de transcrição. Uso dos íntrons de milho Adh1-S íntron 1, 2 e 6, o íntron de bronze-1 são conhecidos na técnica. Para informação geral veja: The Maize Handbook, Capítulo 1 16, Freeling e Walbot, Eds., Springer, N.Y. (1994).

[00574] O termo "introdução" ou "transformação" como referido aqui abrange a transferência de um polinucleotídeo exógeno ou gene quimérico (ou cassete de expressão) em uma célula hospedeira, independente do método usado para transferir. Tecido de planta capaz de subsequente propagação clonal, seja por organogênese ou embriogênese, pode ser transformado com um construtor genético da presente invenção e uma planta inteira regenerada dele. O tecido particular escolhido variará dependendo dos sistemas de propagação clonal disponíveis para, e mais adequados para, as espécies particular e sendo transformadas. Alvos de tecido exemplares incluem discos de folhas, pólen, embriões, cotilédones, hipocótilos, megagametófitos, tecido de calo, tecido meristemático existente (por exemplo, meristema apical, gemas axilares, e meristemas radiculares), e tecido de meristema induzido (por exemplo, meristema cotilédone e meristemade hipocótila). O polinucleotídeo pode ser transitoriamente ou estavelmente introduzido em uma célula hospedeira e pode ser mantido não integrado, por exemplo, como um plasmídeo. Alternativamente, ele pode ser integrado no genoma hospedeiro. As células de planta transformadas resultantes podem em seguida ser usadas para regenerar uma planta transformada de uma maneira conhecida por pessoas versadas na técnica.

[00575] A transferência de genes estranhos no genoma de uma planta é chamada transformação. Transformação de espécies de planta é agora uma técnica razoavelmente de rotina. Vantajosamente, quaisquer de métodos de transformação severos podem ser usados para introduzir o gene de interesse em uma célula antecessora adequada. Os métodos descritos para a transformação e regeneração de plantas de tecido de plantas ou células de planta podem ser utilizados para transformação transitória ou estável. Os métodos de transformação incluem o uso de lipossomos, eletroporação, químicas que aumentam a captação de DNA livre, injeção do DNA diretamente na planta, bombardeio de pistola de partícula, transformação usando vírus ou pólen e microprojeção. Os métodos podem ser selecionados do método de cálcio/polietileno glicol para protoplastos (Krens, F.A. e outro, (1982) Nature 296, 72-74; Negrutiu I e outros (1987) Plant Mol Biol 8: 363- 373); eletroporaçãode protoplastos (Shillito R.D. e outro (1985) Bio/Technol 3, 1099-1 102); microinjeção em material de planta (Crossway A e outro, (1986) Mol. Gen Genet 202: 179-185); bombardeio de partícula revestida de DNA ou RNA (Klein TM e outro, (1987) Nature 327: 70), infecção com vírus (não integrativos) e similares. Plantas transgênicas, incluindo plantas de colheita transgênica, são preferivelmente produzidas por meio de transformação mediada por Agrobacterium. Um método de transformação vantajoso é a transformação em planta. Para este fim, é possível, por exemplo, permitir a agrobactéria agir sobre sementes de planta ou inocularo meristema de planta com agrobactéria. Foi provado particularmente expediente de acordo com a invenção para permitir uma suspensão de agrobactéia transformada para agir sobre a planta intacta ou pelo menos sobre a flor primórdia. A planta é subsequentemente cultivada até as sementes da planta tratada serem obtidas (Clough e Bent, Plant J. (1998) 16, 735-743). Os métodos para transformação mediada por Agrobactéria de arroz incluem métodos bem conhecidos para transformação e arroz, tais como aqueles descritos em qualquer um dos seguintes: Pedido de Patente Europeia EP1 198985, Aldemita e Hodges (Planta 199: 612-617, 1996); Chan e outros (Plant Mol Biol 22 (3): 491 - 506, 1993), Hiei e outros (Plant J 6 (2): 271 -282, 1994), cujas descrições são incorporadas por referência aqui como se totalmente estabelecido. No caso de transformação de milho, o método preferido é como descrito em Ishida e outros (Nat. Biotechnol 14(6): 745-50, 1996) ou Frame e outros (Plant Physiol 129(1): 13-22, 2002), cujas descrições são incorporadas por referência aqui como se totalmente estabelecido. Referidos métodos são também descritos por meio de exemplo em B. Jenes e outros, Techniques for Gene Transfer, in: Transgenic plants, Vol. 1 , Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung e R. Wu, Academic Press (1993) 128-143(1993) 128-143 e in Potrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225). Os ácidos nucleicos ou o construtor a serem expressos são preferivelmente clonados em um vetor, que é adequado para transformar Agrobacterium tumefaciens, por exemplo, pBin19 (Bevan e outros (1984) Nucl. Acids Res. 12-8711). Agrobactéria transformada por um tal vetor pode em seguida ser usada de maneira conhecida para a transformação de plantas, tais como, plantas usadas como um modelo, tipo Arabidopsis (Arabidopsis thalianaestá dentro do escopo da presente invenção não considerada como umaplanta de colheita), ou plantas de colheita tais como, por meio de exemplo, plantas de tabaco, por exemplo imergindo as folhas machucadas ou folhas picadas em uma solução de agrobactéria e em seguida cultivando-as em meio adequado. A transformação de plantas por meio de Agrobacterium tumefaciens é descrita, por exemplo, por Hofgen e Willmitzer em Nucl. Acid Res. (1988) 16, 9877 ou é conhecidainter aliade F.F. White, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; in transgenic plants, Vol. 1 , Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung e R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38.

[00576] Além da transformação de células somáticas, que então devem ser regeneradas em plantas intactas, é também possível transformar as células de meristema de plantas e em particular aquelas células quese desenvolveram em gametos. Neste caso, os gametos transformados seguem o desenvolvimento de planta natural, dando origem às plantas transgênicas. Desse modo, por exemplo, sementes de Arabidopsis são tratadas com agrobactéria e sementes são obtidas das plantas em desenvolvimento das quais uma certa proporção é transformada e desse modo transgênica [Feldman, KA e Marks MD (1987). Mol Gen Genet 208:1 -9; Feldmann K (1992). In: C Koncz, N-H Chua e J Shell, eds, methods in Arabidopsis Research. Word Scientific, Singapore, pp. 274-289]. Os métodos alternativos são baseados na remoção repetida das inflorescências e incubação do sítio de excisãono centro da roseta com agrobactéria transformada, pela qual, sementes transformadas podem da mesma forma ser obtidas em um ponto posterior no tempo (Chang (1994). Plant J. 5: 551 -558; Katavic (1994). Mol Gen Genet, 245: 363-370). Entretanto, um método especialmente efetivo é o método de infiltração a vácuo com suas modificações tal como o método de "imersão floral". No caso de infiltração a vácuo de Arabidopsis, plantas intactas sob pressão reduzida são tratadas com uma suspensão agrobacteriana [Bechthold, N (1993). CR Acad Sci Paris Life Sci, 316: 1 194-1 199], ao mesmo tempo em que no caso do método de "imersão floral", o tecido floral em desenvolvimento é incubado brevemente com uma suspensão agrobacteriana tratada por tensoativo [Clough, SJ e Bent AF (1998) The plant J. 16, 735-743]. Uma certa proporção de sementes transgênicas é colhida em ambos os casos, e estas sementes podem ser distinguidas de sementes não transgênicas por desenvolvimento sob as condições seletivas acima descritas. Além disso, a transformação estável de plastídeo é vantajosa porque os plastídeos são herdados maternalmente na maioria das colheitas reduzindo ou eliminando o risco de fluxo de transgene por meio do pólen. A transformação do genoma de cloroplasto é geralmente ativada por um processo que foi esquematicamente apresentado em Klaus e outros, 2004 [Nature Biotechnology 22 (2), 225-229]. Brevemente, as sequências a serem transformadas são clonadas juntamente com um gene de marcador selecionável entre sequências flanqueadoras homólogas ao genoma de cloroplasto. Estas sequências flanqueadoras homólogas direcionam integração específica de sítio no plastoma. A transformação plastidal foi descrita para muitas espécies de planta diferentes e uma visão geral é fornecida em Bock (2001) Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology. J Mol Biol. 2001 Sep 21; 312 (3):425-38 ou Maliga, P (2003) Progress towards commercialization of plastid transformation technology. Trends Biotechnol. 21 , 20-28. Outro progresso biotecnológico foi recentemente reportado em forma de transformantes de plastídeo livre de marcador, que podem ser produzidos por um gene marcador cointegrado transitório (Klaus e outros, 2004, Nature Biotechnology 22(2), 225-229).

[00577] As células de planta geneticamente modificadas podem ser regeneradas por meio de todos os métodos com que o trabalhador versado é familiar. Os métodos adequados podem ser encontrados nas publicações acima mencionadas por S.D. Kung e R. Wu, Potrykus ou Hofgen e Willmitzer.

[00578] Geralmente após transformação, as células de planta ou os agrupamentos celulares são selecionados para a presença de um ou mais marcadores que são codificados por genes expressíveis por planta cotransferidos com o gene de interesse, seguindo que o material transformado é regenerado em uma planta inteira. Para selecionar plantas transformadas, o material de planta obtidona transformação é, como regra, submetido às condições seletivas de modo que as plantas transformadas possam ser distinguidas de plantas não transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas da maneira acima descrita podem ser plantadas e, após um período de cultivo inicial, submetidas a uma seleção adequada por pulverização. Outra possibilidade consiste em cultivar as sementes, se apropriado após esterilização, sobre placas de ágar usando um agente de seleção adequado de modo que somente as sementes transformadas possam cultivar em plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são selecionadas para a presença de um marcador selecionável, tal como, àqueles descritos acima. Seguindo regeneração e transferência de DNA, plantas putativamente transformadas podem também ser avaliadas, por exemplo, usando análise de Southern, para a presença do gene de interesse, número de cópia e/ou organização genômica. Alternativamente ou adicionalmente, níveis de expressão do DNA recentemente introduzido podem ser monitorados usando análise de Northern e/ou Western, ambas as técnicas sendo bem conhecidas por pessoas versadas na técnica.

[00579] As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por uma variedade de meios, tal como, por propagação clonal ou técnicas de reprodução clássicas. Por exemplo, uma planta transformada de primeira geração (ou T1) pode ser autofecundada e transformantes de segunda geração (ou T2) de homozigoto selecionados, e asplantas de T2 podem em seguida também ser propagadas através de técnicas de reprodução clássicas. Os organismos transformados gerados podem tomar uma variedade de formas. Por exemplo, eles podem ser quimeras de células transformadas e células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas para conter o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um porta- enxerto transformado enxertado em um rebento não transformado).

[00580] Os seguintes exemplos não limitantes descrevem métodos e meios de acordo com a invenção. A menos que estabelecido de outro modo nos Exemplos, todas as técnicas são realizadas de acordo com protocolos padrão na técnica. Os seguintes exemplos são incluídos para ilustrar as modalidades da invenção. Aqueles versados na técnica devem, à luz da presente descrição, apreciar que muitas mudanças podem ser feitas nas modalidades específicas que são descritas e ainda obter um resultado igual ou semelhantes em afastamento do conceito, espírito e escopo da invenção. Mais especificamente, será aparente que certos agentes que são ambos quimicamente e fisiologicamente relacionados podem ser substituídos pelos agentes descritos aqui ao mesmo tempo em que os mesmos ou similares resultados seriam ativados. Todos tais similares substitutos e modificações aparentes por aqueles versados na técnica são considerados como estando dentro do espírito, escopo e conceito da invenção como definido pelas reivindicações anexas.

[00581] Desse modo, as figuras, listagem de sequência e os exemplos/parte experimentais são somente fornecidos para também ilustrar a invenção e não devem ser interpretados ou construídos como limitantes do escopo da invenção e/ou das reivindicações anexas de qualquer maneira, a menos que explicitamente indicado de outro modo aqui.

[00582] A descrição acima será também descrita por meio dos seguintes exemplos não limitantes e Figuras, onde as Figuras mostram:

[00583] Figura 1: Ligação de VHH como extratos periplásmicos crus contendo VHH a GlcCer fúngica revestido de Pleurotus citrinopileatus. VHH anti-GlcCer liga-se a GlcCer fúngica, nenhuma ligação é observada para VHH não relacionado.

[00584] Figura 2: Especificidade de ligação de41D01 de VHH. Ligação de 41D01 de VHH purificado a 0,1 μg/mlGlcCer fúngica revestido de Fusarium oxysporum ou Pleurotus citrinopileatus, e GlcCer não fúngico de planta (soja), ou mamífero (porco). As barras representam os valores médios de OD 405 nm, as barras de erro representam os erros padrão da média de n = 6. 41D01 de VHH anti- GlcC e respecificamente liga GlcCer fúngica e não GlcCer de planta ou mamífero.

[00585] Figura 3A: Especificidade de ligação de VHH. Ligação de VHH purificado a 1 μg/ml de GlcCer fúngica revestido de Fusarium oxysporum ou Pleurotus citrinopileatus. Diferente VHH anti-GlcCer especificamente liga-se a diferente GlcCer fúngica.

[00586] Figura 3B: Especificidade de ligação de VHH. Ligação de VHH purificado a 1 μg/ml a GlcCer não fúngico revestido de planta (soja). Diferente VHH anti-GlcCernão se liga a GlcCer de planta.

[00587] Figura 3C: Especificidade de ligação de VHH. Ligação de VHH purificado a 1 μg/ml a GlcCer mamífero não fúngico revestido (porco). Diferente VHH anti-GlcCer não se liga a GlcCer mamífero.

[00588] Figura 4: Medição em tempo realda interação de anticorpo- antígeno entre 41D01 de VHH eGlcCer fúngica.41D01 de VHH liga-se a GlcCer fúngica. Uma lenta dissociação de GlcCerde 41D01 de VHH é observada. VHH_A não relacionado não se liga a GlcCer fúngica.

[00589] Figura 5: Reatividade cruzada e especificidade de 41D01 de VHH e VHH 56F11. Ligação de 41D01 de VHH purificado a 0,1 μg/ml e 56F11 de VHH a 1 μg/ml a extratos de lipídeo fúngico revestidos, GlcCer de Pleurotus citrinopileatus, e compostos não relacionados: pectina de maçã, pectina de cítricos, ou lectina de batata. As barras representam os valores médios de OD 405 nm, as barras de erro representam os erros padrãos da média de n = 2. 41D01 de VHH anti-GlcCer e 56F11 de VHH especificamente liga cada um dos extratos de lipídeo fúngico testado. 41D01 de VHH anti-GlcCer e 56F11 de VHH não mostram ligação a compostos revestidos não relacionados ou cavidades não revestidas.

[00590] Figura 6: Ligação de 41D01 de VHH em diferentes composições a GlcCer fúngica de Fusarium oxysporum. Composições aquosas contendo 41D01 de VHH anti-GlcCer a 0,1 μg/ml e inibidores de protease e/ou tensoativo não iônico e/ou preservativo foram testadas quanto à ligação à GlcCer fúngica. 41D01 de VHH específico de GlcCer liga-se a GlcCer fúngica em todas as composições testadas sem efeitos adversos de qualquer dos aditivos.

[00591] Figura 7A: Avaliação visual de crescimento fúngico. Diluição serial de VHH (41D01, 56E05, 56F11, e 57A06 de VHH anti-GlcCer, bem como VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado) foi inoculada com esporos deBotrytis cinerea(1 E+05/ml) e incubadas em temperatura ambiente. Efeito sobre o crescimento fúngico de 41D01, 56E05, 56F11, e 57A06 de VHH anti-GlcCer,VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado foi quantificado com base em um grupo de padrões fotográficos. As barras representam o % médio de crescimento, as barras de erro representam os erros padrão da média de pelo menos 3 réplicas.

[00592] Figura 7B: Avaliação visual de crescimento fúngico. Diluição serial de VHH (56C09, 56H07, 57C09, 57E07, 57E11 de VHH anti- GlcCer bem como VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado) foi inoculada com esporos de Botrytis cinerea(1 E+05/ml) e incubada em temperatura ambiente. O efeito sobre o crescimento fúngico de 56C09, 56H07, 57C09, 57E07, 57E11 de VHH anti-GlcCer,VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado foi quantificado com base em um grupo de padrões fotográficos. As barras representam o % médio de crescimento, as barras de erro representam os erros padrões da média de pelo menos 3 réplicas.

[00593] Figura 7C: Avaliação visual de crescimento fúngico. Diluição serial de VHH (54C08, 54C11, 56A05, 56A09 de VHH anti-GlcCer, bem como VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado) foi inoculada com esporos de Botrytis cinerea(1 E+05/ml) e incubada em temperatura ambiente. O efeito sobre o crescimento fúngico de 54C08, 54C11, 56A05, 56A09 de VHH anti-GlcCer,VHH_A não relacionado ou VHH_B não relacionado foi quantificado com base em um grupo de padrões fotográficos. As barras representam o % médio de crescimento, as barras de erro representam os erros padrões da média de pelo menos 3 réplicas.

[00594] Figura 8A: Avaliação visual de crescimento fúngico de diferentes espécies fúngicas. Diluições seriais de duas vezes de VHH (VHH anti-GlcCer ou VHH não relacionado) são incubadas com esporos (1 E+05/ml) deAlternaria brassicicolaem temperatura ambiente. O efeito sobre o crescimento fúngico de VHH e compostos de controle foi com base em um grupo de padrões fotográficos. As barras representam o % médio de crescimento, as barras de erro representam os erros padrões da média de n = 2.

[00595] Figura 8B: Avaliação visual de crescimento fúngico de diferentes espécies fúngicas. Diluições seriais de duas vezes de VHH (VHH anti-GlcCer ou VHH não relacionado) são incubadas com esporos (1 E+05/ml) de Cercospora beticola em temperatura ambiente. O efeito sobre o crescimento fúngico de VHH e compostos de controle foi com base em um grupo de padrões fotográficos. As barras representam o % médio de crescimento, as barras de erro representam os erros padrões da média de n = 2.

[00596] Figura 8C: Avaliação visual de crescimento fúngico de diferentes espécies fúngicas. Diluições seriais de duas vezes de VHH (VHH anti-GlcCer ou VHH não relacionado) são incubadas com esporos (1 E+05/ml) de Fusarium culmorum em temperatura ambiente. O efeito sobre o crescimento fúngico de VHH e compostos de controle foi com base em um grupo de padrões fotográficos. As barras representam o % médio de crescimento, as barras de erro representam os erros padrões da média de n = 2.

[00597] Figura 8D: Avaliação visual de crescimento fúngico de diferentes espécies fúngicas. Diluições seriais de duas vezes de VHH (VHH anti-GlcCer ou VHH não relacionado) são incubadas com esporos (1 E+05/ml) de Verticillium dahliae em temperatura ambiente. O efeito sobre o crescimento fúngico de VHH e compostos de controle foi com base em um grupo de padrões fotográficos. As barras representam o % médio de crescimento, as barras de erro representam os erros padrão da média de n = 2.

[00598] Figura 9: ensaio antifúngico in vitro usando Penicillium expansum. Diluições seriais de duas vezes de VHH foram inoculadas com esporos de P. expansum (1 E+03/ml) em temperatura ambiente. 41D01 de VHH anti-GlcCer, VHH_A não relacionado, BSA, hlgG não relacionado, anticorpo monoclonal de camundongo anti-GlcCer e água foram testados. A luminescência (RLU) foi medida após 24 horas de incubação. O % de RLU de esporos tratados é expresso versus esporos não tratados. Os valores representam o % médio de RLU, as barras de erro representam os erros padrão da média de n = 4.

[00599] Figura 10: A severidade da doença foi medida sobre folhas de tomate preventivamente tratada com 41D01 de VHH anti-GclCer, VHH_A não relacionado, ou água, e inoculadas com esporos de Botrytis cinerea (6E+06 esporos/ml). As barras representam o diâmetro de lesão médio (mm) classificado em 6 dias após a infecção, as barras de erro representam os erros padrão da média de n = 5.

[00600] Figura 11: A severidade da doença foi medida sobre folhas de tomate curativamente tratadas com 41D01 de VHH anti-GclCer, VHH_A não relacionado, ou BSA, e inoculadas com esporos de Botrytis cinerea (6E+06 esporos/ml). As barras representam o diâmetro de lesão médio (mm) classificado em 5 dias após a infecção, as barras de erro representam os erros padrão da média de n = 5.

[00601] Figura 12: A severidade da doença foi medida sobre peras preventivamente tratada com 41D01 de VHH anti-GclCer, VHH_A não relacionado, ou água, e inoculadas com esporos de Botrytis cinerea (1 E+04 esporos/ml). As barras representam o diâmetro de lesão médio (mm) classificado em 4 dias após a infecção, as barras de erro representam os erros padrão da média de n = 5

Exemplos e materiais e métodos Exemplo 1

[00602] Isolamento de sequências de ácido nucleico codificando peptídeos com afinidade glicosilceramida fúngica Imunizações de animal: VHH's foram gerados de llamas imunizadas com glicosilceramida fúngica (GlcCer). Llamas foram imunizadas de acordo com protocolos padrão com 6 impulsos de glicosilceramida (GlcCer) purificada (99%) por Cromatografia de Camada Fina (TLC)dePleurotus citrinopileatus (Nacalai Tesque). GlcCer purificada foi dissolvido em uma mistura de água:metanol:clorofórmio e manchado sobre uma placa de vidro de sílica de TLC. Silica com GlcCer adsorvido foi raspada da placa e suspensa em tampão de fosfato. A suspensão foi sonicada, misturada com adjuvante incompleto de Freund, e usada para injeções subcutâneas. VHH foi também gerado de llamas imunizadas com esporos de oomiceto ou fúngicos germinados nativos. As Llamas foram imunizadas de acordo com protocolos padrão com 6impulsos de esporos germinados nativos de Botrytis cinerea ou Phytophthora infestans por injeções subcutâneas. Todas as llamas permaneceram saudáveis durante todo o processo de imunização e amostras de sangue foram tiradas antes e após as imunizações. Construção de biblioteca:Uma biblioteca de fago de antibodies é uma população de fagona qual cada fago individual expõe um único domínio de anticorpo de ligação a antígeno sobre sua superfície como uma parte de uma proteína de pílula quimérica. Células mononucleares de sangue periférico foram preparadas de amostras de sangue das IIamas imunizadas usando Ficoll-Hypaque de acordo com as instruções do fabricante. O total de RNA foi extraído destas células e usado como material de partida para RT-PCR para amplificar o VHH codificando fragmentos de gebe. Estes fragmentos foram clonados em vetor de fagemídeo pASF20. pASF20 é um vetor de expressão que é derivado de pUC119 que contém o promotor lacZ, uma sequência líder sintética, um sítio de clonagem múltiplo, uma sequência de codificação de proteína de pílula de colifago, um gene de resistência para ampicilina, e uma origem de fago M13 para produção de único filamento. Em estrutura com a sequência de codificação de VHH, o vetor codifica para um rótulo de peptídeo (His)6 de terminal C e rótulo de peptídeo c-myc. O fago foi preparado de acordo com métodos padrão (Phage Display of Peptide and Proteins: A Laboratory Manual; Brian K. Kay, Jill Winter, Dr. John McCafferty). 4 bibliotecas cada uma com uma diversidade clonal igual a ou maior do que 1 E+08 foram obtidas e fago foi produzido garantindo a apresentação da diversidade de anticorpo. Seleções VHH por exibição de fago: Fago expressando domínios de anticorpo de ligação a antígeno específicos para um antígeno particular foi isolado selecionando o fago na biblioteca para ligação ao antígeno. GlcCer fúngica foi imobilizado em placas de múltiplas cavidades Maxisorp de poliestireno dissolvendo GlcCer fúngica em uma mistura de água:metanol:clorofórmio ou metanol em diferentes concentrações, adicionando GlcCer fúngica dissolvido às cavidades da placa de múltiplas cavidades, e deixando secar durante a noite em temperatura ambiente. Cavidades com GlcCer fúngica revestido foram lavadas e bloqueadas com 1% de gelatina de peixe em preparação de seleções de VHH por exibição de fago. O fago de biblioteca de VHH foi deixado ligar-se durante duas horas em temperatura ambiente a cavidades de placa de 96 cavidades revestida com GlcCer fúngica. Para especificamente selecionar quanto à ligação de fago a GlcCer fúngica o fago foi pré-incubado com gelatina de peixe a 1% e/ou BSA e/ou leite desnatado e/ou GlcCer de planta e/ou GlcCer mamífero. Fago não ligado foi removido por lavagem extensiva e fago ligado foi eluído por eluição competitiva com RsAFP2 (Osborn et al., 1995) ou com tripsina. Um a três ciclos consecutivos de seleção foram realizados, e os títulos de fago de cavidades revestidas por GlcCer fúngica foram comparadas aos títulos de fago de cavidades pretas e esfingolipídeos de patógeno não alvo para enriquecimento e especificidade, respectivamente. Enriquecimentos foram observados no primeiro e subsequentes ciclos de seleção, e populações de fago após um ou mais ciclos de seleção já mostraram especificida de para GlcCer fúngica em ELISA (não mostrado). Clones individuais foram retirados de seleções de primeiro, segundo e/ou terceiro ciclos para outra caracterização por análise de sequência e ensaios de ligação primária. Caracterização VHH por ensaios de sequenciamento e ligação: A diversidade do anticorpo obtido ou população de domínio de anticorpo pode ser rapidamente determinada usando sequenciamento de DNA de alta produtividade e permite quantificação precisa de diversidade clonal. Ligação de anticorpo ou domínio de anticorpo e especificidadede ligação a um antígeno pode ser analisada em ensaios para ligação àquele antígeno e comparada a controles relacionados e não relacionados. Cada anticorpo ou domínio de anticorpo pode ligar-se a um antígeno específico e possivelmente a variantes antigênicas daquele antígeno. Especificidade é o grau ao qual a ligação de um anticorpo ou domínio de anticorpo discrimina entre variantes antigênicas. De clones de VHH individuais que são retirados de seleções de exibição de fago de primeiro, segundo ou terceiro fago o DNA foi amplificado em um PCR de colônia e produtos de PCR foram sequenciados por sequenciamento Sanger. Após análise de sequência e com base em diversidade de sequência, VHH foi selecionado para outra caracterização. Para checar quanto à especificidade de espécies, GlcCer fúngica e não fúngico de espécies alvo e não alvo foram usados em ensaios de ligação. Ensaios de ligação primários para identificar que clones foram funcionalmente selecionados das bibliotecas foram realizados com GlcCer purificada por TLC(99%) ou frações de glicoesfingolipídeos enriquecidos por GlcCer(GSL) deA. brassicicola, B. cinerea, C. beticola,F. culmorum, F. graminearum, F. oxysporum, P. citrinopileatus P. digitatum, P. expansum,ouV. dahlia (preparados como descrito em Ternes et al., 201 1 JBC 286:1 1401 -14). GlcCerdesoja e GlcCer porcinoforam adquiridos de Avanti Polar Lipídeos. VHH foi produzido em placas de cavidade profunda de 96 cavidades e o perfil de ligação de extratos periplásmicos contendo VHH cru diluído foi avaliado em formato ELISA. Do mesmo modo, ensaios de ligação foram realizados com VHH purificado.

[00603] Dos ensaios de ligação primários 130 extratos periplásmicos contendo VHH mostraram ligar-se a GlcCer fúngica com valores OD 405 nm mais elevados do que o VHH_A não relacionado,VHH_B não relacionado e vazio. Valores OD 405 nm demonstrando a ligação específica de diversos destes VHH de ligação à GlcCer fúngica são mostrados na Figura 1. Análise de sequência revelou 84 sequências individuais do grupo identificado de VHH anti-GlcCer. Outra caracterização por avaliações de ligação diferencial: Para outra caracterização, VHH pertencendo ao painel de chumbo acima mencionado foi produzido em E.coli em frascos de cultura de acordo com procedimentos padrões. VHH rotulado por hexa-histidina foi purificado do extrato periplásmico com resina de afinidade de metal TALON (Clontech), de acordo com as instruções do fabricante. VHH purificado foi concentrado e dializado em PBS. VHH foi também purificado usando sistemas de purificação automatizados usando uma combinação de IMACde níquel imobilizado e colunas de desalinização. VHH do painel de chumbo que classificou positivamente em ensaios de ligação primário, foram subsequentemente testados quanto a sua especificidade para GlcCer ou frações da parede celular de diferentes fitopatógenos fúgicos.

[00604] Como demonstrado nas Figuras 2, 3A, 3B e 3C, VHH específico de GlcCer mostrou ligação específica à GlcCer fúngica (Pleurotus citrinopileatus, Fusarium oxysporum) e não à outra GlcCer não fúngica ou cavidade não revestida vazia. Ressonância de plasmônio de superfície: Ligação de VHH à GlcCer fúngica foi caracterizada por ressonância de plasmônio de superfície em um instrumento Biacore 3000. 41D01 de VHH anti-GlcCer ouVHH_A não relacionado foi covalentemente ligado à superfície de chips sensores CM5 por meio de acoplamento de amina até um aumento de 1000 unidades de resposta ser obtido. Grupos reativos restantes foram inativados. Uma faixa de concentrações de GlcCer de Fusarium oxysporum em solução preparada de acordo com Salio et al., 2013 PNAS 110, E4753-E4761 foi injetada durante 2 minutos em uma taxa de fluxo de 30 μl/min para permitir a ligação a VHH ligada ao chip. Tampão de operação sem GlcCer foi injetado sobre o chip na mesma taxa de fluxo para permitir dissociação espontânea de GlcCer fúngica ligada durante 10 minutos. Um valor Kofffoi calculado dos sensorgramas obtidos para as diferentes concentrações de GlcCer fúngica com modelo de ajuste global de dissociação 1:1 Langmuir.

[00605] Para VHH anti-GlcCer uma baixa taxa lenta de 4,86*1 E-4/s foi calculada. Como mostrado na Figura 4, um VHH não relacionado não ligou GlcCer fúngica.

[00606] GlcCerde Planta (soja), mamífera (porco) e fúngica (Fusarim oxysporum) em solução foram sequencialmente injetadas durante 2 minutos em uma taxa de fluxo de 30 μl/min para permitir ligação a VHH ligado ao chip ( 41D01 de VHH anti-GlcCer ouVHH_A não relacionado). Tampão de trabalho sem GlcCer foi injetado sobre o chip entre cada injeção na mesma taxa de fluxo para permitir espontânea dissociação de GlcCer ligada.

[00607] Nenhuma GlcCer de planta ou mamífera ligando-se a 41D01 de VHH anti-GlcCer ou VHH_A não relacionado foi observada. Ligação específica de GlcCer fúngica foi observada para 41D01 de VHH anti- GlcCer e não para VHH_A não relacionado. Ligação diferencial a diferentes extratos de lipídeo fúngico: A ligação de composições de VHH anti-GlcCer a diferentes extratos de lipídeo fúngicos em comparação a compostos não relacionados.

[00608] Extratos fúngicos foram preparados de acordo com Rodrigueset al. 2000 Infection and Immunity 68 (12): 7049-60. Em síntese, micélio de Botrytis cinerea B05-10, Botrytis cinerea MUCL401, Botrytis cinerea R16, Botrytis cinerea (o próprio isolado da pera), Fusarium culmorum MUCL555, Fusarium graminearum MUCL53451, Penicillium digitatum MUCL43-410, Penicillium digitatum (o próprio isolado do limão) ou Penicillium expansum CBS 146.45 foram colhidos de fungos desenvolvidos em placas de ágar e os lipídeos foram extraídos com clorofórmio/metanol 2:1 (vol/vol) e 1 :2 (vol/vol); extrato de lipídeo cru foi dividido de acordo com Folch et al. 1957. Journal of Biological Chemistry 226 (1 ): 497-509. Extratos de lipídeo fúngico foram recuperados de fase mais baixa de Folch. Ligação de VHH anti-GlcCer 41 D01 (0,1 μg/ml) e VHH anti-GlcCer 56F11 (1 μg/ml) foi avaliada para cavidades revestidas com os lipídeos fúngicos extraídos (cada uma em diluição de 1/20), GlcCer de Fusarium oxysporum purificada, GlcCer de Pleurotus citrinopileatus purificada e compostos não relacionados: pectina de maçã (pectina de maçã elevada esterificada 70-75%, Sigma, cat#: 76282), pectina de cítricos (pectina de cítricos baixa esterificada 20-34%, Sigma, cat# P931 1) ou lectina de batata (Solanum Tuberosum Lectin, Vector labs, cat#: L-1160) ou uma cavidade não revestida vazia. Ligação foi medida após incubação consecutiva com anticorpos de detecção conjugados à enzima adicionando substrato e medindo a absorvência a 405nm. As barras representam os valores de OD 405 nm médios, as barras de erro representam os erros padrão da média de n = 2.

[00609] Como mostrado na Figura 5, 41D01 e 56F11 de VHH anti- GlcCer especificamente reconheceram todos os extratos de lipídeo de fungos testados. 41D01 e 56F11 de VHH anti-GlcCer não mostraram ligação a compostos revestidos não relacionados ou cavidades não revestidas. A ligação das composições de VHH anti-GlcCer a uma ampla disposição de extratos de lipídeo fúngicos potencia uma variedade de aplicações para as composições de VHH anti-GlcCer, como descrito aqui, contra diferentes fungos. Ligação de VHH anti-GlcCer a GlcCer fúngica em diferentes composições aquosas:

[00610] Aquelas composições contendo 41D01 de VHH anti-GlcCer e/ou inibidores de protease e/ou tensoativos não iônicos e/ou preservativos foram preparados. Composição A1 (inibidores de protease: 0,06 μg/ml de aprotinina (Roche, cat#: 10236624001), 0,5 μg/ml de leupeptina (Roche, cat#: 11017101001), 24 μg/ml de cloridrato de fluoreto de4-benzenossulfonila (Sigma, A8456), EDTA s 1 mM (Carl- Roth, cat# 8040,1) e tensoativo não iônico: 0,00001% de Polissorbato 20 (Tween20, Sigma, cat# P2287); Composição A2 (inibidores de protease: 1 μg/mlde aprotinina, 2,5 μg/ml deleupeptina, 100 μg/ml de 4- cloridrato de fluoreto de benzenossulfonila, EDTA a 1 mM e tensoativonão iônico: 0,05% de Polissorbato 20); Composição A3 (inibidores de protease: 2 μg/ml de aprotinina, 5μg/ml de leupeptina, 240 μg/ml de cloridrato de fluoreto de 4-benzenossulfonila, EDTA a 1 mM e tensoativo não iônico: 5% de Polissorbato 20), Composição B1 (tensoativo não iônico: 0,0001% de Polissorbato 20), Composição B2 (tensoativo não iônico: 0,05% de Polissorbato 20), Composição B3 (tensoativo não iônico: 5% de Polissorbato 20) e Composição C1 (preservativo: 0,05% de benzoato de sódio (Sigma, cat# B3420)). A ligação de VHH anti-GlcCer (a 0,1 μg/ml) aGIcCer fúngica em diferentes composições aquosas foi testada em ELISA com GlcCer revestida de F. oxysporum e comparada a cavidades não revestidas vazias. A ligação foi medida após consecutiva incubação com anticorpos de detecção conjugados à enzima, adicionando substrato e meadindo a absorvência a 405nm.

[00611] Na Figura 6, os valores de GlcCer-específica 41D01 de VHH nas diferentes composições foram comparados com 41D01 em solução sem outros aditivos. É mostrado na Figura 6 que 41D01 específico de GlcCer de VHH foi capaz de especificamente ligar-se à GlcCer fúngica em todas as composições testadas.

Exemplo 2 Avaliação in vitro da atividade antifúngica de composições de VHH anti-GlcCer

[00612] Avaliação in vitro da atividade antifúngica de VHH: A atividade antifúngica do VHH anti-GlcCerfoi testada usando ensaios antifúngicos em meio líquido e sobre placas de ágar como descrito em Thevissenet al., 2011, Bioorg. Med. Chem. Lett. 21 (12): 3686-92; Frangoiset al., 2009, J. Biol.Chem. 284(47): 32680-5; Aertset al., 2009, FEBS Lett. 583(15): 25143-6. A concentração inibitória mínima (MIC) foi determinada para o VHH em crescimento in vitro de Botrytis cinérea e Phytophthora infestans.

[00613] Um ensaio in vitro para testar o crescimento fúngico em meio líquido em formato de placa de 96 cavidades pode também ser usado para diretamente avaliar diferentes VHH que são gerados contra material fúngico integral e selecionados em oposição a antígenos moleculares, diferentes de GlcCer, para atividade antifúngica. Esta avaliação é realizada em extratos periplásmicos contendo VHH cru decélulas de E.colinas quais o VHH é produzido, ou com VHH purificado.

[00614] Avaliação in vitro da atividade antifúngica de composições de VHH anti-GlcCer em oposição a diferentes fungos patogênicos de planta: A atividade antifúngica de composições de VHH anti-GlcCer foi avaliada in vitro em comparação a diversos fungos patogênicos de planta e comparados com a atividade antifúngica de VHH não relacionado.

[00615] Diluições de duas vezes das composições de VHH aquosas em água (iniciando a 1,5 mg de VHH/ml) foram preparadas em placas de microtítulo de 96 cavidades. A 20 μl destas diluições e a 20 μl de água como um controle, 80 μl de suspensão de esporos fúngicos (1 E+05 esporos/ml em caldo de dextrose de batata de metade da intensidade (PDB)) foram adicionados. As linhagens de teste fúngicas foram Alternaria brassicicola MUCL20297, Botrytis cinerea R16, Cercospora beticola (o próprio isolado de beterraba açucareira), Fusarium culmorum MUCL555 e Verticillium dahliae MUCL6963. As placas de teste foram incubadas durante 72 horas em temperatura ambiente no escuro e a atividade antifúngica dos compostos de teste foi classificada microscopicamente e quantificada com base em padrões fotográficos, pelos quais um escore de 0 ou 100 referente a nenhum ou máximo crescimento fúngico, respectivamente. Todos os testes foram realizados em pelo menos 2 réplicas.

[00616] Os resultados de um ensaio de atividade antifúngica, mostrados nas Figuras 7A, 7B, 7C, 8A, 8B, 8C e 8D indicaram uma clara diferença entre o padrão de inibição de crescimento, expresso como o % de crescimento fúngico em função de concentração de VHH (μg/ml), do VHH anti-GlcCer (incluindo 41D01, 56F11, 56E05 ou 57A06) e o VHH não relacionado (VHH A e VHH B). Esta diferença ficou clara independente das espécies dos fugos testes. Geralmente, em uma concentração teste de 100 μg/ml, todos os VHH anti-GlcCer não permitiram mais do que 20% de crescimento fúngico, ao passo que a 100 μg/ml o VHH não relacionado mostrou muito fraca ou nenhuma atividade antifúngica (80% ou mais de crescimento fúngico). Para todos os VHH anti-GlcCer testados diferentes, 41D01 mostrou a mais proeminente atividade antifúngica, para diversas linhagens de teste, mesmo em concentrações de teste menores do que 50 μg/ml de crescimento fúngico, foi menor do que 20%.

[00617] Os resultados mostram a potência antifúngica de VHH anti- GlcCer em comparação a VHH não relacionado. Além disso, os resultados revelam um amplo espectro de atividade antifúngica de composições de VHH anti-GlcCerpara pelo menos 5 diferentes patógenos fúngicos de planta e indicam que o espectro de atividade antifúngica do VHH anti-GlcCer selecionado pode ser amplificado para outros fungos patogênicos de planta.

[00618] Avaliação in vitro da atividade antifúngica de composições de VHH anti-GlcCer contra Penicillium expansum usando luminescência: A atividade antifúngica in vitro da composição de 41 D01 de VHH anti-GlcCer foi avaliada contra o fungo de patógeno de planta Penicillium expansum CBS 146,45 e comparado com a atividade antifúngicade VHH_A não relacionado, um anticorpo anti-GlcCer monoclonal de camundongo (anti-GlcCer de MAb de camundongo), imunoglobulina G humana (hlgG) ou albumina de soro bovina (BSA) como controles usando a luminescência como leitura.

[00619] Diluições seriais de duas vezes de todas as composições de teste em água (iniciando a 1,5 mg/ml) foram preparadas em placas de microtítulo de 96 cavidades. A 20 μl destas diluições e a 20 μl deágua como um controle, 80 μl de suspensão de esporos fúngicos (1 E+03 esporos/ml em 4-vezes PDB) foram adicionados. As placas de teste foram incubadas durante 24horas, em temperatura ambiente no escuro, e a viabilidade de esporo foi determinada em 24 após a inoculação (hpi) usando a luminescência de acordo com as instruções do fornecedor (BacTiter Glo; Promega). As unidades de luz relativas (RLU) foram determinadas (Tecan luminometer) e a RLU medida para o VHH anti- GlcCer 41D01, VHH_A não relacionado, hlgG, MAb anti-GlcCerde camundongo ou esporos fúngicos tratados com BSA foram expressos versus a RLU determinada para os esporos fúngicos não tratados como % de RLU. Quatro réplicas foram incluídas no teste (n=4).

[00620] Como mostrado na Figura 9, o % de RLU determinado no tratamento com a composição de 41D01 de VHH anti-GlcCer divergiu claramente do % de RLU registrado nos tratamentos de VHH_A não relacionado, MAb anti-GlcCer de camundongo, hlgG ou BSA. Particularmente, o efeito de tratamento de 41 D01 sobre esporos fúngicos, expressos como % de RLU versus o controle não tratado, foi menor do que 25% a 300 μg/ml ou 150 μg/ml de 41D01, e menos do que 50% a 75 μg/ml, 37,5 μg/ml e 19 μg/ml. Ao contrário, o efeito de todas as outras composições teste, expresso como o % de RLU versus o controle não tratado foi geralmente de 100 % para todas as concentrações testadas.

[00621] Estes resultados mostram que a composição de 41D01 de VHH anti-GlcCer específica teve um claro efeito antifúngico sobre o fungo patogênico de planta Penicillium expansumaté 19 μg/ml e está superando o VHH_A não relacionado, MAb anti-GlcCer de camundongo, hlgG, ou BSA. Como tal, composições de VHH anti- GlcCerpodem ser usadas para proteger plantas contra fungos patogênicos de planta.

Exemplo 3 Formulação de VHH em formulações agrícolas

[00622] VHH Anti-GlcCer foi produzido como proteínas recombinantes em uma linhagem de produção de E. coli adequada. VHH Anti-GlcCer foi purificado do meio e/ou o periplasma e/ou as células de E.coliforam mortas e lisadas ao final do processo de fermentação. VHH anti-GlcCer pode também ser produzido como proteínas recombinantes em Pichia pastoris, ou Saccharomyces cerevisiae e secretado no meio de fermentação. VHH anti-GlcCer é então purificado de componentes do meio e constituintes celulares por diafiltração.

[00623] A solução de proteína resultante é diluída em um tampão adequado, tal como, salina tamponada por fosfato, para ajustar o pH para cerca de 7. Opcionalmente um agente biocida, tal como, azida de sódio em uma concentração de cerca de 0,0001% a 0,1% e um detergente não iônico, tal como, Tween 20 em uma concentração de cerca de 0,0001% a 5%, é adicionado à solução de proteína tamponada.

[00624] Alternativamente, a solução de proteína resultante é misturada com um agente umectante e dispersante adequado na presença de um material de carga habitual antes de ser vaporizado seco em grânulos umectáveis. Exemplo 4 Avaliação de atividade antifúngica de VHH sobre as colheitas

[00625] A eficácia do VHH com potente atividade antifúngica in vitrocontra B. cinerea e P. infestansé também avaliada em planta por meio de bioensaios de doença em (i) folhas destacadas de plantas de tomate e batata e (ii) em plantas de tomate e batata cultivadas em estufa.

[00626] Ensaios de doença de folha destacada são realizados usando o modelo de patosistemas de tomate -S. cinerea e batata-P. infestans. As plantas de tomate e batata cultivadas em estufa são vaporizadas em uma cabine de vaporização com uma solução de VHH aquosa em um volume equivalentea 300 litros por ha e com uma taxa de aplicação abaixo de 50g de VHH por hectare. Após vaporização, o depósito de spray é deixado secar sobre as plantas e folhas de compósito são subsequentemente destacadas das plantas e colocadas sobre placas de água-ágar. As folhas sobre as placas de água-ágar são inoculadas por gotejamento em diferentes momentos com uma suspensão de esporo de B. cinerea ou P. infestans (5x105 esporos/ml). O desenvolvimento de doença é monitorado visualmente e/ou digitalmente por meio de medição do diâmetro de lesão e software de análise de imagem, respectivamente (Assess, Lamari 2002, St. Paul, Minnesota, USA: APS Press). Exemplo 5 Em avaliação da planta da atividade antifúngica de composição de VHH anti-GlcCer para proteger as colheitas contra infecção fúngica. Eficácia de composições de VHH anti-GlcCer sobre folhas de tomate inoculadas com Botrytis cinerea: Tratamento preventivo:O efeito de um tratamento preventivo com composições de VHH anti-GlcCersobre a severidade da doença de folhas de tomate inoculadas com Botryts. cinerea B05-10 foi avaliado e comparado com os efeitos de VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado.

[00627] Folhas destacadas de plantas de tomate cultivadas em estufa foram tratadas com 10 μl de uma composição de VHH aquosa (VHH anti-GlcCer ou não relacionado a 5 mg/ml), e, água e Scala (1 mg de pirimetanila/ml, como recomendado pelo fabricante) como controles. Em secagem das composições aplicadas, 10 μl de gotas de uma suspensão de esporos de Botrytis cinerea (6 E+06 esporos/ml em PDB 4 vezes diluído) foram aplicados sobre as superfícies tratadas. Folhas tratadas e inoculadas foram incubadas em alta umidade relativa e em temperatura ambiente em propagadores de planta pequena. A severidade da doença foi classificada medindo-se o diâmetro bidirecional a 6 dias após a inoculação (dpi).

[00628] Como mostrado na Figura 10, tratamento preventivo com uma composição de VHH anti-GlcCer resultou em um diâmetro de lesão médio de 6 mm (+/- 1,4 mm), ao passo que o tratamento com um VHH não relacionado ou água mostrou um diâmetro de lesão médio de 13,4 mm (+/- 4 mm) ou 15 mm (+/- 4 mm), respectivamente. No tratamento de controle com um fungicida químico comercial formulado, folhas de tomate foram efetivamente protegidas contra infecção por Botrytis cinerea (sem uma lesão visível). Como também mostrado na Figura 10, tratamento preventivo de folhas de tomate com a aplicação da composição de VHH anti-GlcCer claramente resultou em um redução de 2 vezes de severidade de doença em comparação com o tratamento com um VHH não relacionado ou água. Portanto, o VHH anti-GlcCer específico, embora aplicado como uma composição aquosa não formulada a 5 mg/ml, mostrou a potência de VHH anti-GlcCer específico a ser usado como compostos antifúngicos para proteger colheitas contra patógenos fúngicos em aplicações agrícolas. Eficácia de composições de VHH anti-GIcCer sobre folhas de tomate inoculadas com Botrytis cinerea: Tratamento curativo: O efeito de um tratamento curativo com composições de VHH anti-GlcCer sobre a severidade de doença de folhas de tomate inoculadas com Botrytis cinerea B05-10 foi avaliado e comparado com o efeito de VHH não relacionado, albumina de soro bovino (BSA) ou um fungicida químico comercial formulado.

[00629] Folhas destacadas de plantas de tomate cultivadas em estufa foram inoculadas com 10 μl de gotas de uma suspensão de esporos de Botrytis cinerea ((6 E+06 esporos/ml) em caldo de dextrose de batata diluído 4 vezes). Uma hora após a inoculação, as manchas inoculadas sobre as folhas foram tratadas com 10 μl de uma composição de VHH aquosa (anti-GlcCer eVHH_A não relacionado 1,6 mg/ml), e, BSA a 1,6 mg/ml e Scala (1 mg de pirimetanila/ml, como recomendado pelo fabricante) como controles. Folhas inoculadas e tratadas foram incubadas em alta umidade relativa e em temperatura ambiente em propagadores de planta pequena. A severidade da doença foi classificada medindo-se o diâmetro bidirecional a 5 dpi.

[00630] Como mostrado na Figura 11, tratamento curativo com a composição de VHH anti-GlcCer resultou em um diâmetro de lesão médio de 3 mm (+/- 0,8 mm), ao passo que tratamento com um VHH não relacionado ou BSA mostrou um diâmetro de lesão médio de 15 mm (+/- 3,5 mm) ou 13 mm (+/- 3,5 mm), respectivamente. No tratamento de controle com um fungicida químico comercial formulado, folhas de tomate foram efetivamente protegidas contra infecção por Botrytis cinerea (sem uma lesão visível). Como também mostrado na Figura11, tratamento curativo de folhas de tomate com a aplicação da composição de VHH anti-GlcCer claramente resultou em uma redução de 4 vezes de severidade de doença em comparação com o tratamento de VHH não relacionado ou BSA. Portanto, o VHH anti-GlcCer específico, embora aplicado como uma composição aquosa não formulada a 1,6 mg/ml, mostrou a potência de VHH anti-GlcCer específico a ser usado como compostos antifúngicos para proteger colheitas contra patógenos fúngicos em aplicações agrícolas. Eficácia de composições de VHH anti-GIcCer sobre peras inoculadas com Botrytis cinerea: Tratamento preventivo: O efeito de um tratamento preventivo com composições de VHH anti-GlcCer sobre a severidade de doença de peras inoculadas de Botrytis cinerea (o próprio isolado de peras) foi avaliado e comparado com o efeito de VHH não relacionado, água, ou um fungicida químico comercial formulado.

[00631] Peras (variedade Williams) de agricultura biologicamente, anteriormente confirmadas como não tratadas, foram tratadas com 10 μl decomposições de VHH aquosas (contendo VHH anti-GlcCer ouum VHH_A não relacionado 5 mg/ml), e, água e Scala (1 mg de pirimetanila/ml, como recomendado pelo fabricante) como controles. Na secagem das soluções aplicadas, 10 μl de gotas de uma suspensão de esporos de Botrytis cinerea (1 E+04 esporos/ml em água) foram aplicados sobre as superfícies tratadas. Peras tratadas e inoculadas foram incubadas em alta umidade relativa e em temperatura ambiente em pequenos recipientes. A severidade da doença foi classificada medindo-se o diâmetro bidirecional a 4 dpi.

[00632] Como mostrado na Figura 12, tratamento preventivo com a composição de VHH anti-GlcCer resultou em um diâmetro de lesão médio de 3 mm (+/- 2 mm), ao passo que tratamento com um VHH não relacionado ou água mostrou um diâmetro de lesão médio de 9,6 mm (+/- 0,8 mm) ou 6,6 mm (+/- 1,6 mm), respectivamente. No tratamento preventivo de controle com um fungicida químico comercial formulado peras foram efetivamente protegidas contra infecção por Botrytis cinerea (sem uma lesão visível).

[00633] Como também mostrado na Figura12, tratamento preventivo de peras com a aplicação da composição de VHH anti-GlcCer claramente resultou em uma redução de pelo menos duas vezes de severidade de doença em comparação com o tratamento de um VHH não relacionado ou água. Portanto, o VHH anti-GlcCer específico, embora aplicado como uma solução aquosa não formulada a 5 mg/ml, mostrou a potência de VHH anti-GlcCer específico a ser usado como um composto antifúngico para proteger colheitas contra patógenos fúngicos em aplicações agrícolas. Composição de VHH anti-GlcCer para proteger sementes de planta contra infecção fúngica: O efeito de uma composição de VHH anti- GlcCer sobre a proteção de sementes de planta contra fungos patogênicos pode ser avaliado como segue. Sementes de planta estéreis de superfície, tratadas com um anti-GlcCer VHH, um VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado são colocados sobre o topo de uma placa de ágar de dextrose de batatacontendo 1 E+03 esporos/ml do fungo teste Fusarium graminearum. Placas teste são incubadas em temperatura ambiente e as zonas de inibição de cresimento fúngico (mm) que circunda as sementes podem ser medidas permitindo comparar o efeito dos diferentes tratamentos. Composição de VHH anti-GIcCer para proteger raízes de planta contra infecção fúngica em hidropônicos: O efeito de uma composição de VHH anti-GlcCer sobre a proteção de raízes de planta contra fungos patogênicose sobre a saúde geral da planta pode ser avaliado como segue. Plantas de tomate são cultivadas com suas raízes em uma solução de nutriente mineral ou em meio inerte tal como, perlita suplementada ou encharcada respectivamente com uma composição de VHH anti-GlcCer, um VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado. Verticillium dahliae (1 E+ 03 esporos/ml) pode ser usado para inocular uma raiz de planta e o efeito dos diferentes tratamentos é classificado em colheita medindo a severidade da doença nas plantas com base em uma escala arbitrária de classes de doenças: 0= nenhum sintoma, 1 = leve amarelamento da folha, nanismo, ou murchamento, 2= moderado amarelamento da folha, nanismo, ou murchamento, 3= severo amarelamento da folha, nanismo, ou murchamento, e 4= morte da folha (como descrito por Fakhro et al., 2010). Composição VHH anti-GlcCer para proteger flores de planta contra infecção fúngica: O efeito de uma composição de VHH anti-GlcCer sobre a proteção de flores de planta contra fungos patogênicos pode ser avaliado usando cereais ou Arabidopsis thaliana e Fusarium culmorum ou Fusarium graminearum como fungos de teste (como descrito por Urban et al., 2002). Em resumo, plantas de floração são inoculadas por spray com 1 E+05 esporos/ml de Fusarium culmorum ou Fusarium graminearum seguidos por um tratamento com uma composição de VHH anti-GlcCer, um VHH não relacionado, água ou um fungicida químico comercial formulado (tratamento curativo) ou vice-versa (tratamento preventivo). As plantas são incubadas e a classificação da doença é realizada como descrito por Urban et al. (2002) e permite quantificar o efeito dos diferentes tratamentos.

Claims

1. Método para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da referida planta de uma infecção ou outra interação biológica com um fungo patogênico de planta, caracterizado pelo fato de que pelo menos compreende a etapa de aplicar à referida planta ou a uma parte da referida planta, uma composição agroquímica sob condições eficazes para proteger ou tratar a referida planta ou uma parte da referida planta contra a referida infecção ou interação biológica com o referido fungo patogênico de planta, sendo que a composição compreende pelo menos um VHH, que especificamente se liga à glicosilceramida de um fungo patogênico de planta.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o gênero do referido fungo patogênico de planta é escolhido a partir do grupo que compreende Alternaria, Ascochyta, Botrytis, Cercospora, Colletotrichum, Diplodia, Erysiphe, Fusarium, Leptosphaeria, Gaeumanomyces, Helminthosporium, Macrophomina, Nectria, Penicillium, Peronospora, Phoma, Phymatotrichum, Phytophthora, Plasmopara, Podosphaera, Puccinia, Pyrenophora, Pyricularia, Pythium, Rhizoctonia, Scerotium, Sclerotinia, Septoria, Thielaviopsis, Uncinula, Venturia, Verticillium, Magnaporthe, Blumeria, Mycosphaerella, Ustilago, Melampsora, Phakospora, Monilinia, Mucor, Rhizopus e Aspergillus.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o referido pelo menos um VHH está presente em uma quantidade eficaz para proteger ou tratar uma planta ou uma parte da referida planta de uma infecção ou outra interação biológica com o referido fungo patogênico de planta.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a concentração do referido pelo menos um VHH na composição agroquímica varia de 0,0001% a 50% em peso.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a concentração do referido pelo menos um VHH na composição agroquímica varia de 0,1% a 10% em peso.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a composição agroquímica compreende ainda um veículo agroquimicamente adequado e/ou um ou mais adjuvantes adequados.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o referido pelo menos um VHH compreende: uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 86, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 170, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 254, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 146, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 230, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 313, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 85, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 169, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 253, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 87, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 171, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 255, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 88, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 172, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 256, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 89, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 173, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 257, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 90, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 174, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 258, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 91, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 175, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 259, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 92, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 176, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 260, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 93, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 177, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 261, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 94, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 178, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 262, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 95, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 179, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 263, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 96, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 180, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 264, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 97, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 181, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 265, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 98, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 182, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 266, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 99, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 183, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 267, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 100, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 184, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 268, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 101, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 185, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 269, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 102, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 186, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 270, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 103, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 187, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 271, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 104, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 188, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 272, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 105, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 189, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 273, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 106, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 190, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 274, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 107, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 191, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 275, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 108, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 192, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 276, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 109, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 193, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 277, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 110, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 194, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 278, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 111, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 195, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 279, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 112, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 196, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 280, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 113, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 197, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 281, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 114, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 198, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 282, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 115, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 199, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 283, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 116, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 200, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 284, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 117, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 201, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 285, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 118, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 202, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 286, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 119, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 203, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 287, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 120, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 204, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 288, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 121, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 205, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 289, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 122, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 206, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 290, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 123, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 207, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 291, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 124, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 208, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 292, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 125, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 209, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 293, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 126, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 210, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 294, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 127, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 211, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 295, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 128, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 212, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 296, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 129, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 213, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 297, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 130, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 214, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 298, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 131, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 215, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 299, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 132, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 216, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 300, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 133, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 217, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 301, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 134, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 218, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 302, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 135, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 219, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 303, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 136, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 220, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 304, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 137, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 221, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 305, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 138, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 222, e uma região de CDR3 apresentando a sequência de aminoácido NRY, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 139, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 223, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 306, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 140, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 224, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 307, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 141, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 225, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 308, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 142, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 226, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 309, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 143, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 227, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 310, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 144, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 228, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 311, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 145, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 229, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 312, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 147, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 231, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 314, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 148, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 232, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 315, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 149, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 233, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 316, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 150, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 234, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 317, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 151, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 235, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 318, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 152, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 236, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 319, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 153, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 237, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 320, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 154, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 238, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 321, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 155, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 239, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 322, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 156, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 240, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 323, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 157, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 241, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 324, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 158, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 242, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 325, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 159, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 243, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 326, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 160, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 244, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 327, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 161, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 245, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 328, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 162, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 246, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 329, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 163, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 247, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 330, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 164, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 248, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 331, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 165, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 249, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 332, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 166, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 250, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 333, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 167, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 251, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 334, e/ou uma região de CDR1 apresentando SEQ ID N°: 168, uma região de CDR2 apresentando SEQ ID N°: 252, e uma região de CDR3 apresentando SEQ ID N°: 335.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a referida composição agroquímica é aplicada à referida planta ou a uma parte da referida planta pulverizando-se, atomizando-se, espumando-se, enevoando-se, cultivando-se em hidrocultura, cultivando-se em hidropônicos, revestindo-se, submergindo-se, e/ou incrustando-se.

9. Método para tratamento pós-colheita para proteger ou tratar uma planta colhida ou uma parte colhida da referida planta de uma infecção ou outra interação biológica com um fungo patogênico de planta, caracterizado pelo fato de que pelo menos compreende a etapa de aplicar à referida planta colhida ou a uma parte colhida da referida planta, uma composição agroquímica sob condições eficazes para proteger ou tratar a referida planta colhida ou uma parte colhida da referida planta contra a referida infecção ou interação biológica com o referido fungo patogênico de planta, sendo que a composição agroquímica compreende pelo menos um VHH, que se liga especificamente à glicosilceramida de um fungo vegetal patogênico.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a composição agroquímica é como definida em qualquer uma das reivindicações 2 a 7.

11. Uso de uma composição agroquímica, como definida em qualquer uma das reivindicações 2 a 7, caracterizado pelo fato de que é como um fungicida e/ou agente fungistático, sendo que a composição agroquímica compreende pelo menos um VHH, que se liga especificamente à glicosilceramida de um fungo vegetal patogênico.