JP2016516744A - プレガバリンの調製のための方法および中間体 - Google Patents
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Abstract
Description
水素、
(C1〜C6)アルキル、
(C1〜C6)ハロアルキル、
(C1〜C3)アルコキシ(C2〜C6)アルキル、
(C2〜C6)アルケニル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル、
シクロアルキル基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル(C1〜C6)アルキル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール、
アリール基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール(C1〜C6)アルキル、
R1−C(O)−、ならびに
R2−SO2−
から選択され、
R1は、
水素、
(C1〜C6)アルキル、
(C1〜C6)ハロアルキル、
(C1〜C3)アルコキシ(C2〜C6)アルキル、
(C2〜C6)アルケニル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル、
シクロアルキル基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル(C1〜C6)アルキル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール、ならびに
アリール基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール(C1〜C6)アルキル
から選択され、
R2は、
(C1〜C6)アルキル、
(C1〜C6)ハロアルキル、
(C1〜C3)アルコキシ(C2〜C6)アルキル、
(C2〜C6)アルケニル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル、
シクロアルキル基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル(C1〜C6)アルキル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール、ならびに
アリール基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール(C1〜C6)アルキル
から選択される]
を提供する。
nは1であり、M+は、Li+、Na+、K+、Rb+、NH4 +、((C1〜C3)アルキル)NH3 +、((C1〜C3)アルキル)2NH2 +、((C1〜C3)アルキル)3NH+および((C1〜C3)アルキル)4N+から選択されるか、または
nは2であり、M2+は、Mg2+、Ca2+およびZn2+から選択される]
を提供する。
4−(2−メチルプロペニル)−5−ピロリジン−1−イル−5H−フラン−2−オン;
4−(2−メチルプロペニル)−5−ピペリジン−1−イル−5H−フラン−2−オン;
4−(2−メチルプロペニル)−5−モルホリン−4−イル−5H−フラン−2−オン;および
1,4−ビス−(4−(2−メチルプロペニル)−5H−フラン−2−オン−5−イル)ピペラジン
から選択される、実施形態A3E1による化合物を提供する。
4−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)モルホリン;
1−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)−ピペラジン、
1−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)−4−メチルピペラジン、
4−エチル−1−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)−ピペラジン、
4−ベンジル−1−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)−ピペラジン、および
1,4−ビス−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)ピペラジン
から選択される、実施形態A4E1による化合物を提供する。
(a)式(VII)の化合物
(a)上記で定義した通りの実施形態A5E1、A5E2、A5E3およびA5E4のいずれかによる方法を使用して、式(VIA)の化合物を調製するステップと、
(b)式(VIA)の化合物を、酸触媒の存在下、アルコールR−OHで処理するステップと
を含む方法を提供する。
(a)式(VII)の化合物を調製するステップと、
(b)式(VII)の化合物を、化学量論酸の存在下、アルコールR−OHで処理するステップと
を含む方法を提供する。
(a)上記で定義した通りの実施形態A5E1、A5E2、A5E3およびA5E4のいずれかによる方法を使用して、式(VIA)の化合物を調製するステップと、
(b)式(VIA)の化合物を、酸塩化物R1−C(O)−Clまたは酸無水物(R1−C(O))2Oで処理するステップと
を含む方法を提供する。
(a)上記で定義した通りの実施形態A5E1、A5E2、A5E3およびA5E4のいずれかによる方法を使用して、式(VIA)の化合物を調製するステップと、
(b)式(VIA)の化合物をスルホニルクロリドR2−SO2−Clで処理するステップと
を含む方法を提供する。
(a)5−ヒドロキシ−4−(2−メチル−1−プロペニル)−5H−2−フラノン(VIA)
(b)前記5−ヒドロキシ−4−(2−メチル−1−プロペニル)−5H−2−フラノン(VIA)を、5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)−3,4−ジヒドロ−5H−2−フラノン(IA)
(c)前記5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)−3,4−ジヒドロ−5H−2−フラノン(IA)を、3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸(II)に変換するステップと
を含む方法を提供する。
(b1)5−ヒドロキシ−4−(2−メチル−1−プロペニル)−5H−2−フラノン(VIA)を、金属酸化物、水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩、アンモニア、モノ、ジもしくはトリ−(C1〜C3)アルキルアミン、またはテトラ−(C1〜C3)アルキルアンモニウムヒドロキシドで処理して、式(IX)の塩
nは1であり、M+は、Li+、Na+、K+、Rb+、NH4 +、((C1〜C3)アルキル)NH3 +、((C1〜C3)アルキル)2NH2 +、((C1〜C3)アルキル)3NH+および((C1〜C3)アルキル)4N+から選択されるか、または
nは2であり、M2+は、Mg2+、Ca2+およびZn2+から選択される]
を形成するステップと、
(b2)式(IX)の塩を水素化して、式(X)の塩
(b1)5−ヒドロキシ−4−(2−メチル−1−プロペニル)−5H−2−フラノン(VIA)を、実施形態A1E3で定義されている通りの式(VI)の化合物[式中、Rは、キラル(C5〜C15)炭化水素基である]に変換するステップと、
(b2)式(VI)の化合物を水素化して、式(XI)の化合物
を取得するステップと、
(b3)式(XI)の化合物を酸で処理して、((S)−IA)を得るステップと
を含む、実施形態A11E1、A11E2またはA11E3による方法を提供する。
(a)5−ヒドロキシ−4−(2−メチル−1−プロペニル)−5H−2−フラノン(VIA)
(d)式(XA)の塩を、トランスアミナーゼまたはアミンオキシダーゼ/イミンレダクターゼ酵素で処理して、3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸(II)を提供するステップと
を含む方法を提供する。
(a)3−イソブチリデン−2−オキソペンタン二酸(XIIA)またはその環化異性体(XIIB)
3−イソブチリデン−2−オキソペンタン二酸、
3−イソブチル−2−オキソペンタン二酸、および
3−ホルミル−5−メチル−3−ペンテン酸
から選択される化合物、またはその塩、(C1〜C6)アルキルエステルもしくは環化異性体を提供する。
(a)上記で定義した通りの実施形態A13E1、A13E2、A13E3、A13E4、A13E5またはA13E6のいずれか1つによる方法を使用して、5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)−3,4−ジヒドロ−5H−2−フラノン(IA)を製造するステップと、
(b)前記5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)−3,4−ジヒドロ−5H−2−フラノンを、(S)−3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸に変換するステップと
を含む方法を提供する。
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHX27RGTVVVTHGEGPYX41VDVX45GRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRX147NAYHGVTAVSASMTGX163PX165NSVFGLPLPGFVHLX180CPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELX304KRLETAIEAIEEFPHGFTAX324GHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSX401RIANTCX408DLGLICX415X416X417GQSVILX424PPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号1)
[ここで、
X27は、グルタミン(Q)およびグルタミン酸(E)から選択され、
X41は、イソロイシン(I)およびバリン(V)から選択され、
X45は、アスパラギン(N)およびヒスチジン(H)から選択され、
X147は、アスパラギン(N)およびグルタミン(Q)から選択され、
X163は、ロイシン(L)およびメチオニン(M)から選択され、
X165は、チロシン(Y)およびヒスチジン(H)から選択され、
X180は、トレオニン(T)、グリシン(G)およびセリン(S)から選択され、
X304は、アラニン(A)およびセリン(S)から選択され、
X324は、グリシン(G)およびセリン(S)から選択され、
X401は、リシン(K)およびグルタミン酸(E)から選択され、
X408は、トレオニン(T)およびグルタミン(Q)から選択され、
X415は、セリン(S)およびアラニン(A)から選択され、
X416は、プロリン(P)およびアラニン(A)から選択され、
X417は、ロイシン(L)およびメチオニン(M)から選択され、
X424は、システイン(C)およびセリン(S)から選択される]
と少なくとも95%相同性を有するアミノ酸配列を有する、トランスアミナーゼ酵素を提供する。
X27がグルタミン酸(E)であり、
X147がグルタミン(Q)であり、
X165がヒスチジン(H)であり、
X304がセリン(S)であり、
X324がグリシン(G)であり、
X401がリシン(K)であり、
X408がグルタミン(Q)であり、
X416がアラニン(A)であり、
X417がメチオニン(M)であり、
X424がセリン(S)である、
実施形態A18E1またはA18E2によるトランスアミナーゼ酵素を提供する。
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHQRGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRNNAYHGVTAVSASMTGLPYNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELAKRLETAIEAIEEFPHGFTASGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSERIANTCTDLGLICSPMGQSVILCPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号2);
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRNNAYHGVTAVSASMTGLPYNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSALGQSVILCPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号3);
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYVVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSALGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号4);
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGMPHNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPALSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号5);
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYVVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLGCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICAAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号6);および
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVHGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLSCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号7)
から選択されるアミノ酸配列を有する、実施形態A18E2によるトランスアミナーゼ酵素を提供する。
100×(er−1)/(er+1)
[式中、「er」は、より豊富な鏡像異性体対あまり豊富でない鏡像異性体の比率である]。
から、酸触媒の存在下、式(VII)の化合物を水で処理することによって調製され得る。好適な酸は、硫酸等の鉱酸を包含する。代替として、式(VII)の化合物を、アルコールR−OHで処理して、式(VI)の化合物[式中、Rは、アルキル、ハロアルキル、アルコキシアルキルアルケニル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アリールまたはアリール−アルキル基である]を直接提供することができる。
4−メチル−2−ペンテナールからの4−(2−メチル−1−プロペニル)−5−モルホリノ−5H−2−フラノンの調製
GC/MS: m/z=223
1H NMR: δ 6.0 (s, 1H); 5.9 (s, 1H); 5.5 (s, 1H), 3.7 (d, 4H), 2.7 (d, 4H),
2.00 (s, 3H), 1.95 (s, 3H).
4−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)モルホリンの調製
GC/MS: m/z=167
1H NMR: δ 6.01 (d, 1H); 5.69 (d, 1H); 5.31 (dd, 1H), 3.70 (m, 4H), 2.89 (m,
4H), 1.71 (s, 3H), 1. 63 (s, 3H).
粗製4−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)モルホリンからの4−(2−メチル−1−プロペニル)−5−モルホリノ−5H−2−フラノンの調製
GC/MS: m/z = 223
NMR: 実施例1の通り。
イソブチルアルデヒドおよびアセトアルデヒドからのワンポットでの4−(2−メチル−1−プロペニル)−5−モルホリノ−5H−2−フラノンの調製。
1,4−ビス−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)ピペラジンの調製
GC/MS: m/z=246.
1H NMR: δ 6.00 (d, 2H); 5.70 (d, 2H); 5.28 (dd, 2H); 2.92 (s, 8H); 1.73
(s,6H); 1.68 (s, 6H). 13C NMR (CDCl3): 140.6 (C), 126.3
(CH), 123.4 (CH), 100.2 (CH), 48.2 (CH2), 25.8 (CH3),
18.1 (CH3).
1,4−ビス−(4−メチル−1,3−ペンタジエン−1−イル)ピペラジンからの5,5’−(ピペラジン−1,4−ジイル)ビス(4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オン)の調製。
1H NMR: δ 5.96 (d, 2H), 5.87 (d, 2H), 5.56 (m, 2H), 2.71 (s, 8H), 2.07-1.90
(m,12H). 13C NMR (CDCl3): 172.3 (C), 159.2 (C), 150.9
(C), 116.6 (CH), 115.4 (CH), 99.2 (CH), 46.7 (CH2), 28.2 (CH3),
21.4 (CH3).
イソブチルアルデヒドおよびアセトアルデヒドからのワンポットでの5,5’−(ピペラジン−1,4−ジイル)ビス(4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オン)の調製。
5,5’−(ピペラジン−1,4−ジイル)ビス(4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オン)の溶媒フリー調製
イソブチルアルデヒド(79g、100mL、1.1mol)を三口丸底フラスコに投入し、アルゴンをシステムに通してフラッシュした。ピペラジン(43g、0.5mol)およびTsOH−H2O(4.4g、0.023mol)を、ピペラジン(10.75g)およびTsOH−H2O(1.1g)を含有する4等分に分けた。第一部のピペラジン(10.75g)の添加は、24℃から35℃までの発熱をもたらした。この後に、第一部のTsOH(1.1g)を続けた。反応物をすべてのピペラジンが溶解するまで(t=35℃)かき混ぜ、その後、第二部のピペラジン(10.75g)、続いてTsOH(1.1g)を添加した(t=41℃)。ピペラジンのすべてが溶解するまで撹拌を続け(t=41℃)、次いで、第三部のピペラジン(10.75g)、続いてTsOH(1.1g)を添加した。第三の投入の後、透明溶液が生成され、次いで、第四部のピペラジン(10.75g)およびTsOH−H2O、続いてTsOH(1.1g)を添加した(t=52℃)。添加が完了したら、反応物を50℃で30分間撹拌した。
両方のアルデヒドの同時添加による5,5’−(ピペラジン−1,4−ジイル)ビス(4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オン)の代替的調製
ピペラジン(236.6g)を、温度計、添加漏斗(100mL)および還流冷却器が装着された清浄な3Lの乾燥した容器に投入した。pTsOH(25.3g)、続いてアセトニトリル(550mL)を容器に投入した。かき混ぜ機を開始し、容器に窒素を挿入した(inerted)。イソブチルアルデヒド(150mL、全投入の27%)を、かき混ぜたピペラジン/pTsOHスラリーに投入し、約43℃への温度上昇が観察された。次いで、白色懸濁液を50℃(+/−5℃)に加熱した。イソブチルアルデヒド(400mL、全投入の73%)および冷やしたアセトアルデヒド(260mL)の予め混合し冷やした溶液を、清浄な乾燥した1Lの容器に投入し、この混合物を氷浴中に維持した。イソブチルアルデヒド/アセトアルデヒド混合物を、3L容器の内容物に、100mLアリコートで、50℃で5〜6時間かけて投入した。反応フラスコの内容物は、アセトアルデヒドの添加中に、白色懸濁液からワインレッド色の溶液、最終的には橙色懸濁液に変化した。添加完了後、懸濁液を50℃で約0.5から1.0時間かき混ぜた。
4−(2−メチル−1−プロペニル)−5−モルホリノ−2(5H)−フラノンまたは5,5’−(ピペラジン−1,4−ジイル)ビス(4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オン)からの5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オンの調製。
GC/MS: m/z=154
1H NMR
(CDCl3): δ 6.10 (s, 1H); 5.92 (s, 1H); 5.88
(s, 1H); 5.35 (bs, 1H, O-H); 1.98 (s,3H); 1.93 (s, 3H). 13C NMR
(CDCl3): 172.8 (C), 161.4 (C), 152.3 (C), 115.3 (CH), 114.9 (CH),
99.5 (CH), 28.2 (CH3), 21.4 (CH3).
イソブチルアルデヒドおよびアセトアルデヒドからのワンポットでの5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オンの調製。
5−メトキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オンの調製
m/z=168; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ
5.59 (1H, s) 5.88-5.86 (1H, m) 5.75 (1H, d, J=0.6) 3.53 (3H, s) 2.01-2.00 (3H,
m) 1.97-1.96 (3H, m). 13C NMR (CDCl3): 171.4 (C), 159.2
(C), 151.9 (C), 115.8 (CH), 115.2 (CH), 104.4 (CH), 56.1 (CH3), 28.2
(CH3), 21.4 (CH3).
5−(3−メチルブトキシ)−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オン
0.4mbar真空、沸点139〜140℃で蒸留した;GC/MS: m/z=224; 1H-NMR
(400MHz, CDCl3) δ 5.94 (1H, s) 5.87-5.84
(1H, m) 5.80 (1H, s) 3.86-3.80 (1H, m) 3.70-3.64 (1H, m) 2.00 (3H, s) 1.96 (3H,
s) 1.77-1.66 (1H, m) 1.57-1.50 (2H, m) 0.93-0.91 (3H, m) 0.91-0.89 (3H, m)
4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)−5−ペンチルオキシフラン−2(5H)−オン
0.08mbar真空、沸点123〜134℃で蒸留した;GC/MS: m/z=224;
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.94 (s,
1H); 5.86 (s, 1H); 5.80 (s, 1H); 3.84-3.75 (m, 1H); 3.68-3.59 (m, 1H); 2.01 (s,
3H); 1.95 (s, 3H); 1.69-1.59 (m, 2H); 1.38-1.29 (m, 4H); 0.95-0.85 (m, 3H)
5−ブトキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オン
0.05mbar真空、沸点136〜146℃で蒸留した;GC/MS: m/z=210;
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.94 (s,
1H); 5.86 (s, 1H); 5.80 (s, 1H); 3.85-3.76 (m, 1H); 3.69-3.60 (m, 1H); 2.00 (s,
3H); 1.95 (s, 3H); 1.68-1.58 (m, 2H); 1.45-1.32 (m, 2H); 0.93 (t, 3H, J=7.4Hz)
5−メトキシ−4−(2−メチルプロピル)−ジヒドロフラン−2(3H)−オンの調製
GC/MS: m/z=172
1H NMR
(400MHz, CDCl3) δ 5.25 (d, J=5.0Hz, 0.53 H, 主異性体), 5.04 (d, J=2.4Hz, 0.26H, 副異性体), 3.48 (s,
0.92H, 副異性体), 3.46 (s, 1.66H, 主異性体), 2.78 (dd, J=17.7, 8.6Hz, 0.33H), 2.59-2.42 (m, 1.27H, 主異性体), 2.42-2.34 (m, 0.33H, 副異性体), 2.29 (dd,
J=16.7, 11.8Hz, 0.63H, 主異性体), 2.15 (dd, J=17.7, 4.6Hz,
0.33H, 副異性体), 1.67-1.31 (m, 2.63H 両異性体), 1.28-1.19 (m, 0.33H, 副異性体), 0.95-0.86 (m,
6H 両異性体). 13C NMR (CDCl3): 177.7
(C, 主異性体), 176.04 (C, 副異性体),
110.1 (CH, 副異性体), 106.1 (CH, 主異性体), 57.0 (CH3, 副異性体), 56.6 (CH3,
主異性体), 41.2 (CH2, 副異性体), 39.1 (CH2, 副異性体), 38.3 (CH2,
主異性体), 37.1 (CH2, 主異性体), 33.9 (CH, 副異性体), 32.8 (CH, 主異性体), 26.0 (CH, 主異性体), 25.8 (CH, 副異性体), 23.0 (CH3, 主異性体), 22.9 (副異性体), 22.7 (主異性体), 22.6 (副異性体).
(実施例13A)
5−(3−メチルブトキシ)−4−(2−メチルプロピル)−ジヒドロフラン−2(3H)−オン
GC/MS: m/z=228; 1H-NMR (400MHz,
CDCl3) δ 5.35 (0.86H, d, J=5.0Hz) 5.13
(0.14H, d, J=2.7Hz) 3.87-3.79 (m, 1H) 3.57-3.45 (m, 1H) 2.58-2.37 (2H, m)
2.35-2.27 (0.79H, m) 2.20-2.11 (0.21H, m) 1.74-1.62 (1H, m) 1.61-1.44 (4H, m)
1.42-1.31 (1H, m) 0.95-0.86 (12H, m)
(実施例13B)
4−(2−メチルプロピル)−5−ペンチルオキシジヒドロフラン−2(3H)−オン
GC/MS: m/z=228; 1H-NMR (400MHz,
CDCl3) δ 5.35 (0.77H, d, J=5.0Hz) 5.13
(0.23H, d, J=2.6Hz,) 3.83-3.75 (1H, m) 3.55-3.40 (1H, m) 2.59-2.37 (2H, m) 2.32
(0.73H, dd, J=16.6, 11.8Hz) 2.15 (0.27H, dd, J=17.7, 5.0Hz) 1.67-1.45 (4H, m)
1.41-1.25 (5H, m) 0.96-0.86 (9H, m)
(実施例13C)
5−ブトキシ−4−(2−メチルプロピル)−ジヒドロフラン−2(3H)−オン
GC/MS: m/z=214; 1H-NMR (400MHz,
CDCl3) δ 5.35 (0.8H, d, J=5.0Hz) 5.13 (0.2H,
d, J=2.6Hz,) 3.85-3.75 (1H, m) 3.56-3.41 (1H, m) 2.59-2.38 (2H, m) 2.31 (0.76H,
dd, J=16.5, 11.7Hz) 2.15 (0.24H, dd, J=17.6, 5.0Hz) 1.66-1.45 (4H, m) 1.43-1.30
(3H, m) 0.95-0.87 (9H, m)
5−(L−メンチルオキシ)−4−(2−メチル−1−プロペニル)−2(5H)−フラノンの調製および水素化
5−アセトキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オンの調製
m/z: 196
5−アセトキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オンの水素化
アルカリ性溶液中での5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オンの水素化による5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)ジヒドロフラン−2(3H)−オン(IA)の調製
中性溶液中での5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オンの水素化
5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロペン−1−イル)−2−フラノンを、10%w/wのPd/C触媒を加えた出発材料1グラム当たり6mLの水中で水素化した(22時間、40℃、10bar)。濾過して、油性相を水から分離した。これは、5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)ジヒドロフラン−2(3H)−オン(IA)および4−(2−メチルプロピル)−ジヒドロフラン−2−オンの1:1混合物であった。化合物(IA)は、酸塩基抽出によって純粋なまま簡単に分離できる。この反応を、2−プロパノールを加えた有機溶媒中で繰り返して、比較的純粋な(IA)を得た。
ワンポットでの5,5’−(ピペラジン−1,4−ジイル)ビス(4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オン)からの5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)ジヒドロフラン−2(3H)−オン(IA)の調製
1H NMR
(D2O、K2CO3添加): δ 9.5 (1H), 2.8 (m, 2H), 2.40 (m,2H),
1.55 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 0.95 (m, 6H).
3−イソブチリデン−2−オキソペンタン二酸一カリウム塩の調製。
1H NMR
(D2O、pH 8-10, 400MHz) δ 6.4 (d, 1H), 3.3 (s, 2H), 2.7 (m, 1H), 0.96 (d, 6H). 13C
NMR (D2O、pH 8-10, 400MHz) δ 23 (2CH3), 31 (CH), 35 (CH2), 133 (C), 164
(CH), 170 (C), 176 (C), 182 (C).
3−(2−メチルプロピル)−2−オキソペンタン二酸一カリウム塩の調製
1H NMR
(D2O、pH 8-10, 400MHz) δ 3.5 (m, 1H), 2.5 (dd, 1H), 2.3 (dd, 1H), 1.6-1.5 (m, 2H) 1.3-1.2
(m, 1H) 0.9 (d, 6H). 13C NMR (D2O、pH 8-10, 400MHz) δ 21.7 (CH3),
22.2 (CH3), 25.5 (CH), 38.4 (CH2), 39.3 (CH2),
43.4 (CH), 167.8 (C), 170.6 (C), 180.7 (C).
大腸菌(E.coli)におけるデカルボキシラーゼ酵素の発現
PubMedを使用して、幅広い活性を持つデカルボキシラーゼ酵素についての文献を調査した。KEGG(京都遺伝子ゲノム百科事典)プログラムを使用して、3−(2−メチルプロピル)−2−オキソペンタン二酸または3−イソブチリデン−2−オキソペンタン二酸と構造が幾分類似している化合物に対して活性を持つ微生物のデカルボキシラーゼについて調査した。7つのクラスのデカルボキシラーゼを、いくらかの構造的類似性を持つ化合物に対する活性の報告に基づき、調査のために選択した。デカルボキシラーゼクラスは、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ、インドールピルビン酸デカルボキシラーゼ、分枝鎖α−ケト酸デカルボキシラーゼ、芳香族−L−アミノ−酸デカルボキシラーゼ、リシンデカルボキシラーゼおよびベンゾイルギ酸デカルボキシラーゼであった。証明された、または推定上のデカルボキシラーゼ酵素について、41配列の遺伝子を選択した。遺伝子は、GeneArt(Germany)、DNA2.0(Menlo Park、CA USA)、またはBlue Heron Biotechnology(Bothell、WA USA)によって合成された大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化し、発現ベクターpSTRC52(Pfizer Inc.、USA)にクローン化し、発現株大腸菌(E.coli)BDG62(Pfizer Inc.、USA)に入れた(以下の表1)。2つの遺伝子を、PCRによって適切な生物由来のゲノムDNAから増幅させ、同じ発現ベクターおよび大腸菌(E.coli)株にクローン化した。4つのデカルボキシラーゼ酵素をSigmaから購入し、3−(2−メチルプロピル)−2−オキソペンタン二酸に対する活性について試験した。
デカルボキシラーゼ酵素による3−(2−メチルプロピル)−2−オキソペンタン二酸カリウム塩および3−イソブチリデン−2−オキソペンタン二酸カリウム塩の脱炭酸
3−ホルミル−5−メチルヘキサ−3−エン酸の調製
1H NMR
(D2O、pH 8-10, 400MHz) δ 9.2 (s, 1H), 6.6 (d, 1H), 3.1 (s, 2H), 2.7 (m, 1H), 1 (d, 6H)
大腸菌(E.coli)におけるエノエートレダクターゼ同族体の発現
リコペルシコン・エスカレンタム(Lycopersicon esculentum)(トマト)12−オキソフィトジエン酸レダクターゼ1(OPR1)を表す遺伝子に対応するDNA配列を、ジーンバンクデータベース(受託番号AC Q9XG54)から呼び出し、GeneArt(Germany)によって合成した。配列を、大腸菌(E.coli)における発現のためにコドン最適化し、大腸菌(E.coli)発現プラスミドpSTRC18(Pfizer Inc.、USA)にサブクローン化した。タンパク質配列を以下に示す。OPR1発現構築物を、指示通りにBL21(DE3)大腸菌(E.coli)(Stratagene、Agilent Technologies、Santa Clara、CA、USA)に転換し、終夜培養物をLB+ストレプトマイシン培地中でインキュベートした。LB培養物を使用して、発現培養物(LB、M9YまたはTB)を植菌し、これを37℃(210rpm)でインキュベートした。培養物が好適なバイオマス濃度(A600でOD1)に到達した後、IPTGを添加し(1mM)、培養物をもう20時間インキュベートした(30℃、210rpm)。細胞を遠心分離(4000×g、30分、4℃)によって収集し、−20℃で貯蔵した。
MENKVVEEKQ VDKIPLMSPC KMGKFELCHR VVLAPLTRQR SYGYIPQPHA ILHYSQRSTN GGLLIGEATV ISETGIGYKD VPGIWTKEQV EAWKPIVDAV HAKGGIFFCQ IWHVGRVSNK DFQPNGEDPI SCTDRGLTPQ IRSNGIDIAH FTRPRRLTTD EIPQIVNEFR VAARNAIEAG FDGVEIHGAH GYLIDQFMKD QVNDRSDKYG GSLENRCRFA LEIVEAVANE IGSDRVGIRI SPFAHYNEAG DTNPTALGLY MVESLNKYDL AYCHVVEPRM KTAWEKIECT ESLVPMRKAY KGTFIVAGGY DREDGNRALI EDRADLVAYG RLFISNPDLP KRFELNAPLN KYNRDTFYTS DPIVGYTDYP FLETMT(配列番号8)
ATGGAAAACAAAGTTGTGGAAGAAAAACAGGTTGATAAAATCCCGCTGATGAGCCCGTGTAAAATGGGTAAATTCGAGCTGTGTCATCGCGTTGTACTGGCACCGCTGACTCGTCAGCGTTCTTATGGTTACATTCCGCAGCCGCACGCAATCCTGCATTACTCTCAGCGCAGCACCAACGGTGGCCTGCTGATCGGTGAAGCAACCGTGATCAGCGAAACTGGCATCGGTTACAAAGATGTGCCGGGTATCTGGACGAAAGAGCAGGTTGAGGCCTGGAAACCGATCGTCGACGCGGTGCATGCCAAAGGTGGTATTTTCTTTTGTCAGATCTGGCACGTTGGTCGTGTATCCAACAAAGATTTTCAGCCGAACGGCGAAGATCCGATTTCCTGTACTGACCGCGGCCTGACCCCGCAGATCCGTTCCAACGGCATTGACATTGCCCACTTCACCCGTCCACGTCGCCTGACTACTGACGAGATTCCGCAGATCGTGAACGAGTTCCGCGTTGCAGCGCGTAATGCTATTGAAGCGGGTTTCGATGGCGTCGAGATTCATGGTGCCCACGGTTACCTGATCGACCAATTCATGAAAGACCAAGTTAACGACCGCAGCGATAAGTATGGCGGTTCTCTGGAGAACCGTTGTCGCTTCGCGCTGGAAATCGTTGAAGCAGTAGCCAACGAGATTGGCTCCGACCGTGTTGGTATCCGTATCTCTCCATTCGCACACTACAACGAAGCGGGCGACACTAACCCGACCGCACTGGGCCTGTATATGGTGGAGAGCCTGAATAAATACGACCTGGCGTATTGTCACGTGGTCGAGCCGCGCATGAAAACCGCCTGGGAAAAGATTGAGTGCACCGAAAGCCTGGTGCCGATGCGTAAAGCCTACAAAGGCACCTTCATCGTAGCTGGTGGCTACGACCGTGAAGACGGTAACCGCGCTCTGATCGAAGACCGTGCCGACCTGGTTGCGTACGGTCGTCTGTTCATCAGCAACCCAGACCTGCCGAAGCGTTTTGAACTGAACGCTCCGCTGAACAAATACAACCGTGACACTTTCTACACTTCCGACCCGATCGTTGGTTACACCGATTACCCGTTTCTGGAAACTATGACTTAATAA(配列番号9)
組換えレダクターゼによる(E)−3−ホルミル−5−メチルヘキサ−3−エン酸の還元
組換えレダクターゼおよびホルメートデヒドロゲナーゼによる(E)−3−ホルミル−5−メチルヘキサ−3−エン酸の還元
組換えレダクターゼによる(E)−3−ホルミル−5−メチルヘキサ−3−エン酸の還元
3−ホルミル−5−メチルヘキサン酸の調製
反応容器に、7.5mLのリン酸カリウム緩衝液(0.1M、pH7.0)、8.4mgのNADP+、0.2mLのラクトバチルス・ブレビス(Lactobacillus brevis)アルコールデヒドロゲナーゼ(32U/mL、X−zyme)、0.3mLの2−プロパノール、四硝酸ペンタエリスリトールレダクターゼ(リン酸カリウム緩衝液中の大腸菌(E.coli)細胞の200mg/mL懸濁液2mL)、および156mgの(E)−3−ホルミル−5−メチルヘキサ−3−エン酸を投入し、40℃でかき混ぜた。6.75時間後、反応混合物を遠心分離し、上清を4N HClでpH2に調整し、酢酸エチル(2×10mL)で抽出した。酢酸エチル抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、141mgの無色油(89%収率)を得た。
1H NMR
(D2O、pH 8-10) δ
2.53-2.43 (m, 2 H), 2.34-2.28 (m, 1H), 1.53-1.42 (m, 1H), 1.41-1.34 (m, 1H),
1.20-1.12 (m, 1H), 0.76 (d, 3H), 0.74 (d, 3H).
組換えω−トランスアミナーゼによる3−ホルミル−5−メチルヘキサン酸からプレガバリンへの生体内変換
組換えω−トランスアミナーゼによる3−ホルミル−5−メチルヘキサン酸からプレガバリンへの生体内変換
(E)−3−ホルミル−5−メチルヘキサ−2−エン酸から3−ホルミル−5−メチルヘキサン酸への酵素的還元およびω−トランスアミナーゼによるプレガバリンへのインサイチュ変換
(E)−3−ホルミル−5−メチルヘキサ−2−エン酸から3−ホルミル−5−メチルヘキサン酸への酵素的還元およびV.フルビアリス(V.fluvialis)ω−トランスアミナーゼによるプレガバリンへのインサイチュ変換
ビブリオ・フルビアリス(Vibrio fluvalis)ω−トランスアミナーゼの代替的な変異体
ビブリオ・フルビアリス(Vibrio fluvialis)ω−トランスアミナーゼの下記のさらなる組換え変異体を、大腸菌(E.coli)において、次の通りに発現させた:pET28bω−トランスアミナーゼ発現構築物を、指示通りにBL21(DE3)大腸菌(E.coli)(Stratagene、Agilent Technologies、Santa Clara、CA、USA)に転換し、終夜培養物をLB+カナマイシン培地中で成長させた。LB培養物を使用して、オーバーナイト・エクスプレス・インスタントTB+カナマイシン培地(ノバジェン、EMD Chemicals、Gibbstown、NJ、USA)中で成長させた発現培養物を植菌した。培養物を30℃で20時間インキュベートし、細胞を遠心分離(4000×g、30分、4℃)によって収集し、−20℃で貯蔵した。
DNA配列:
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACgAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACATCGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTaacAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGTACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGACCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCggcGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCaaaCGTATCGCTAACACCTGTcagGACCTGGGCCTGATCTGTAGCgCGCTGGGTCAGTCCGTTATCCTGTGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA(配列番号11)
アミノ酸配列:
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRNNAYHGVTAVSASMTGLPYNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSALGQSVILCPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号3)
Vfat999
DNA配列:
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACGAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACGTGGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTCAAAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGCACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGACCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCGGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCAAACGTATCGCTAACACCTGTCAGGACCTGGGCCTGATCTGTAGCGCGCTGGGTCAGTCCGTTATCCTGAGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA(配列番号12)
アミノ酸配列:
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYVVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSALGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号4)
Vfat1010
DNA配列:
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACGAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACATCGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTCAAAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTATGCCGCACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGACCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGCACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCGGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCAAACGTATCGCTAACACCTGTCAGGACCTGGGCCTGATCTGTAGCGCGATGGGTCAGTCCGTTATCCTGAGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA(配列番号13)
アミノ酸配列:
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGMPHNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPALSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号5)
Vfat1020
DNA配列:
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACGAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACGTGGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTCAAAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGCACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGGGTTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCGGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCAAACGTATCGCTAACACCTGTCAGGACCTGGGCCTGATCTGTAGCGCGATGGGTCAGTCCGTTATCCTGAGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA(配列番号14)
アミノ酸配列:
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYVVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLGCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICAAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号6)
Vfat1030
DNA配列:
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACGAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACATCGTGGACGTCCACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTCAAAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGCACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGAGCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCGGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCAAACGTATCGCTAACACCTGTCAGGACCTGGGCCTGATCTGTAGCGCGATGGGTCAGTCCGTTATCCTGAGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA(配列番号15)
アミノ酸配列:
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVHGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLSCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号7)
3−イソブチリデン−2−オキソペンタン二酸からプレガバリンへの生体内変換
3−(2−メチルプロピル)−2−オキソペンタン二酸からプレガバリンへの生体内変換
5−メトキシ−4−(2−メチルプロピル)−ジヒドロフラン−2(3H)−オンの加水分解および酵素的アミノ基転移を介する(S)−プレガバリンの調製
5−ブトキシ−4−(2−メチルプロピル)−ジヒドロフラン−2(3H)−オンの加水分解および酵素的アミノ基転移を介する(S)−プレガバリンの調製
酵素的アミノ基転移を介する5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)−ジヒドロフラン−2(3H)−オンからの(S)−プレガバリンの調製
5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロパ−1−エン−1−イル)フラン−2(5H)−オンの還元的アミノ化を介する(R/S)−3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸の調製
トランスアミナーゼを使用するR−3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸から5−ヒドロキシ−4−(2−メチルプロピル)−3,4−ジヒドロ−5H−2−フラノンへの変換
トランスアミナーゼを使用するrac−プレガバリンの脱ラセミ化
一般的なVfat aa配列
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHX27RGTVVVTHGEGPYX41VDVX45GRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRX147NAYHGVTAVSASMTGX163PX165NSVFGLPLPGFVHLX180CPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELX304KRLETAIEAIEEFPHGFTAX324GHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSX401RIANTCX408DLGLICX415X416X417GQSVILX424PPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA
X27は、グルタミン(Q)およびグルタミン酸(E)から選択され、X41は、イソロイシン(I)およびバリン(V)から選択され、X45は、アスパラギン(N)およびヒスチジン(H)から選択され、X147は、アスパラギン(N)およびグルタミン(Q)から選択され、X163は、ロイシン(L)およびメチオニン(M)から選択され、X165は、チロシン(Y)およびヒスチジン(H)から選択され、X180は、トレオニン(T)、グリシン(G)およびセリン(S)から選択され、X304は、アラニン(A)およびセリン(S)から選択され、X324は、グリシン(G)およびセリン(S)から選択され、X401は、リシン(K)およびグルタミン酸(E)から選択され、X408は、トレオニン(T)およびグルタミン(Q)から選択され、X415は、セリン(S)およびアラニン(A)から選択され、X416は、プロリン(P)およびアラニン(A)から選択され、X417は、ロイシン(L)およびメチオニン(M)から選択され、X424は、システイン(C)およびセリン(S)から選択される。
配列番号2
Vfat888 aa配列
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHQRGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRNNAYHGVTAVSASMTGLPYNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELAKRLETAIEAIEEFPHGFTASGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSERIANTCTDLGLICSPMGQSVILCPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA
配列番号3
Vfat906 aa配列
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRNNAYHGVTAVSASMTGLPYNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSALGQSVILCPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA
配列番号4
Vfat999 aa配列
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYVVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSALGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA
配列番号5
Vfat1010 aa配列
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGMPHNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPALSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA
配列番号6
Vfat1020 aa配列
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYVVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLGCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICAAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA
配列番号7
Vfat1030 aa配列
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVHGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLSCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA
配列番号8
リコペルシコン・エスカレンタム(Lycopersicon esculentum)(トマト)12−オキソフィトジエン酸レダクターゼ1タンパク質配列:
MENKVVEEKQVDKIPLMSPCKMGKFELCHRVVLAPLTRQRSYGYIPQPHAILHYSQRSTNGGLLIGEATVISETGIGYKDVPGIWTKEQVEAWKPIVDAVHAKGGIFFCQIWHVGRVSNKDFQPNGEDPISCTDRGLTPQIRSNGIDIAHFTRPRRLTTDEIPQIVNEFRVAARNAIEAGFDGVEIHGAHGYLIDQFMKDQVNDRSDKYGGSLENRCRFALEIVEAVANEIGSDRVGIRISPFAHYNEAGDTNPTALGLYMVESLNKYDLAYCHVVEPRMKTAWEKIECTESLVPMRKAYKGTFIVAGGYDREDGNRALIEDRADLVAYGRLFISNPDLPKRFELNAPLNKYNRDTFYTSDPIVGYTDYPFLETMT
配列番号9
リコペルシコン・エスカレンタム(Lycopersicon esculentum)(トマト)12−オキソフィトジエン酸レダクターゼ1コドン最適化配列:
ATGGAAAACAAAGTTGTGGAAGAAAAACAGGTTGATAAAATCCCGCTGATGAGCCCGTGTAAAATGGGTAAATTCGAGCTGTGTCATCGCGTTGTACTGGCACCGCTGACTCGTCAGCGTTCTTATGGTTACATTCCGCAGCCGCACGCAATCCTGCATTACTCTCAGCGCAGCACCAACGGTGGCCTGCTGATCGGTGAAGCAACCGTGATCAGCGAAACTGGCATCGGTTACAAAGATGTGCCGGGTATCTGGACGAAAGAGCAGGTTGAGGCCTGGAAACCGATCGTCGACGCGGTGCATGCCAAAGGTGGTATTTTCTTTTGTCAGATCTGGCACGTTGGTCGTGTATCCAACAAAGATTTTCAGCCGAACGGCGAAGATCCGATTTCCTGTACTGACCGCGGCCTGACCCCGCAGATCCGTTCCAACGGCATTGACATTGCCCACTTCACCCGTCCACGTCGCCTGACTACTGACGAGATTCCGCAGATCGTGAACGAGTTCCGCGTTGCAGCGCGTAATGCTATTGAAGCGGGTTTCGATGGCGTCGAGATTCATGGTGCCCACGGTTACCTGATCGACCAATTCATGAAAGACCAAGTTAACGACCGCAGCGATAAGTATGGCGGTTCTCTGGAGAACCGTTGTCGCTTCGCGCTGGAAATCGTTGAAGCAGTAGCCAACGAGATTGGCTCCGACCGTGTTGGTATCCGTATCTCTCCATTCGCACACTACAACGAAGCGGGCGACACTAACCCGACCGCACTGGGCCTGTATATGGTGGAGAGCCTGAATAAATACGACCTGGCGTATTGTCACGTGGTCGAGCCGCGCATGAAAACCGCCTGGGAAAAGATTGAGTGCACCGAAAGCCTGGTGCCGATGCGTAAAGCCTACAAAGGCACCTTCATCGTAGCTGGTGGCTACGACCGTGAAGACGGTAACCGCGCTCTGATCGAAGACCGTGCCGACCTGGTTGCGTACGGTCGTCTGTTCATCAGCAACCCAGACCTGCCGAAGCGTTTTGAACTGAACGCTCCGCTGAACAAATACAACCGTGACACTTTCTACACTTCCGACCCGATCGTTGGTTACACCGATTACCCGTTTCTGGAAACTATGACTTAATAA
配列番号10
Vfat 888 DNA配列
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACCAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACATCGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTAACAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGTACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGACCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGGCGAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCAGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCGAGCGTATCGCTAACACCTGTACCGACCTGGGCCTGATCTGTAGCCCGATGGGTCAGTCCGTTATCCTGTGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA
配列番号11
Vfat 906 DNA配列
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACgAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACATCGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTaacAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGTACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGACCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCggcGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCaaaCGTATCGCTAACACCTGTcagGACCTGGGCCTGATCTGTAGCgCGCTGGGTCAGTCCGTTATCCTGTGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA
配列番号12
Vfat 999 DNA配列
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACGAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACGTGGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTCAAAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGCACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGACCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCGGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCAAACGTATCGCTAACACCTGTCAGGACCTGGGCCTGATCTGTAGCGCGCTGGGTCAGTCCGTTATCCTGAGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA
配列番号13
Vfat 1010 DNA配列
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACGAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACATCGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTCAAAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTATGCCGCACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGACCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGCACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCGGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCAAACGTATCGCTAACACCTGTCAGGACCTGGGCCTGATCTGTAGCGCGATGGGTCAGTCCGTTATCCTGAGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA
配列番号14
Vfat 1020 DNA配列
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACGAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACGTGGTGGACGTCAACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTCAAAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGCACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGGGTTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCGGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCAAACGTATCGCTAACACCTGTCAGGACCTGGGCCTGATCTGTAGCGCGATGGGTCAGTCCGTTATCCTGAGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA
配列番号15
Vfat 1030 DNA配列
ATGAATAAACCACAAAGCTGGGAAGCGCGTGCTGAAACTTACTCTCTGTACGGCTTCACTGATATGCCATCTCTGCACGAGCGTGGTACCGTGGTTGTCACCCACGGCGAGGGCCCATACATCGTGGACGTCCACGGTCGCCGTTACCTGGACGCAAACTCCGGCCTGTACAATATGGTTGCCGGCTTCGACCACAAGGGTCTGATCGACGCAGCAAAGGCCCAGTACGAACGCTTCCCGGGTTACCATAGCTTCTTCGGTCGTATGTCTGATCAAACTGTTATGCTGAGCGAGAAACTGGTAGAGGTGTCTCCATTCGACAGCGGTCGCGTGTTCTATACTAACTCCGGCTCCGAGGCTAACGATACTATGGTGAAAATGCTGTGGTTTCTGCACGCCGCAGAGGGCAAGCCGCAAAAACGCAAAATCCTGACTCGTCAAAACGCATACCACGGTGTAACTGCTGTTTCCGCTTCCATGACGGGTCTGCCGCACAACTCTGTATTCGGCCTGCCGCTGCCGGGTTTCGTTCACCTGAGCTGTCCGCACTATTGGCGTTACGGCGAAGAAGGTGAAACCGAAGAGCAGTTTGTTGCTCGTCTGGCCCGCGAGCTGGAGGAAACTATCCAACGTGAAGGCGCGGACACGATTGCGGGCTTCTTTGCTGAGCCGGTCATGGGCGCGGGCGGCGTAATCCCGCCGGCGAAAGGTTACTTCCAGGCGATCCTGCCGATTCTGCGTAAGTACGACATCCCGGTTATCTCTGATGAAGTTATCTGCGGCTTTGGTCGTACCGGTAATACTTGGGGTTGCGTTACCTATGACTTCACCCCGGATGCGATCATCTCCAGCAAAAATCTGACCGCCGGTTTCTTTCCGGTTGGTGCTGTGATTCTGGGTCCGGAACTGAGCAAACGCCTGGAAACGGCGATCGAAGCTATCGAAGAGTTCCCGCACGGCTTTACGGCCGGCGGTCACCCGGTGGGTTGCGCTATCGCTCTGAAAGCAATCGATGTTGTGATGAATGAGGGTCTGGCAGAGAACGTGCGCCGCCTGGCACCGCGTTTTGAGGAGCGTCTGAAACACATTGCCGAACGTCCGAACATCGGTGAATATCGTGGCATCGGTTTTATGTGGGCACTGGAGGCTGTGAAAGACAAAGCATCTAAAACCCCATTCGATGGTAATCTGTCTGTGAGCAAACGTATCGCTAACACCTGTCAGGACCTGGGCCTGATCTGTAGCGCGATGGGTCAGTCCGTTATCCTGAGCCCGCCGTTCATCCTGACCGAGGCGCAAATGGATGAGATGTTTGACAAACTGGAGAAGGCTCTGGACAAAGTCTTTGCGGAGGTGGCGTAA
Claims (38)
- 式(VI)による化合物
水素、
(C1〜C6)アルキル、
(C1〜C6)ハロアルキル、
(C1〜C3)アルコキシ(C2〜C6)アルキル、
(C2〜C6)アルケニル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル、
シクロアルキル基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル(C1〜C6)アルキル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール、
アリール基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール(C1〜C6)アルキル、
R1−C(O)−、ならびに
R2−SO2−
から選択され、
R1は、
水素、
(C1〜C6)アルキル、
(C1〜C6)ハロアルキル、
(C1〜C3)アルコキシ(C2〜C6)アルキル、
(C2〜C6)アルケニル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル、
シクロアルキル基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル(C1〜C6)アルキル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール、
アリール基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール(C1〜C6)アルキル
から選択され、
R2は、
(C1〜C6)アルキル、
(C1〜C6)ハロアルキル、
(C1〜C3)アルコキシ(C2〜C6)アルキル、
(C2〜C6)アルケニル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル、
シクロアルキル基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、(C3〜C10)シクロアルキル(C1〜C6)アルキル、
ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール、
アリール基が、ハロ、(C1〜C3)アルキルおよび(C1〜C3)アルキルオキシから独立に選択される1、2または3つの基で置換されていてもよい、アリール(C1〜C6)アルキル
から選択される]。 - R*が、(R)−または(S)−α−メチルベンジル、(R)−または(S)−1−(1−ナフチル)エチル、(R)−または(S)−1−(2−ナフチル)エチル、メンチルおよびボルニルから選択される、請求項3に記載の化合物。
- Rが、R1−C(O)−またはR2−SO2−であり、R1およびR2が、キラル(C5〜C15)炭化水素基である、請求項1に記載の化合物。
- nが1であり、M+が、NH4 +および((C1〜C3)アルキル)NH3 +から選択される、請求項6に記載の化合物。
- nが1であり、M+が、Li+、Na+およびK+から選択される、請求項6に記載の化合物。
- 4−(2−メチルプロペニル)−5−ピロリジン−1−イル−5H−フラン−2−オン;
4−(2−メチルプロペニル)−5−ピペリジン−1−イル−5H−フラン−2−オン;
4−(2−メチルプロペニル)−5−モルホリン−4−イル−5H−フラン−2−オン;および
1,4−ビス−(4−(2−メチルプロペニル)−5H−フラン−2−オン−5−イル)ピペラジン
から選択される、請求項9に記載の化合物。 - Rが、水素、R1−C(O)−およびR2−SO2−以外である、請求項1に記載の式(VI)の化合物の製造のための方法であって、式(VIA)の化合物を、酸触媒の存在下、アルコールR−OHで処理するステップを含む、方法。
- Rが、水素、R1−C(O)−およびR2−SO2−以外である、請求項1に記載の式(VI)の化合物の製造のための方法であって、式(VII)の化合物を、化学量論酸の存在下、アルコールR−OHで処理するステップを含む、方法。
- RがR1−C(O)−である、請求項1に記載の式(VI)の化合物の製造のための方法であって、式(VIA)の化合物を、酸塩化物R1−C(O)−Clまたは酸無水物(R1−C(O))2Oで処理するステップを含む、方法。
- RがR2−SO2−である、請求項1に記載の式(VI)の化合物の製造のための方法であって、式(VIA)の化合物を、スルホニルクロリドR2−SO2−Clで処理するステップを含む、方法。
- ステップ(a)が、請求項11に記載の方法を含む、請求項16または17に記載の方法。
- ステップ(b)が、
(b1)5−ヒドロキシ−4−(2−メチル−1−プロペニル)−5H−2−フラノン(VIA)を、金属酸化物、水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩、アンモニア、モノ、ジもしくはトリ−(C1〜C3)アルキルアミン、またはテトラ−(C1〜C3)アルキルアンモニウムヒドロキシドで処理して、式(IX)の塩
nは1であり、M+は、Li+、Na+、K+、Rb+、NH4 +、((C1〜C3)アルキル)NH3 +、((C1〜C3)アルキル)2NH2 +、((C1〜C3)アルキル)3NH+および((C1〜C3)アルキル)4N+から選択されるか、または
nは2であり、M2+は、Mg2+、Ca2+およびZn2+から選択される]
を形成するステップと、
(b2)式(IX)の塩を水素化して、式(X)の塩
(b3)式(X)の塩を酸で処理するステップと
を含む、請求項16から18のいずれか一項に記載の方法。 - 3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸(II)
(a)5−ヒドロキシ−4−(2−メチル−1−プロペニル)−5H−2−フラノン(VIA)
(b)5−ヒドロキシ−4−(2−メチル−1−プロペニル)−5H−2−フラノン(VIA)を、アンモニアまたはモノ−(C1〜C3)アルキルアミンで処理して、式(IXA)の塩
nは1であり、M+は、NH4 +および((C1〜C3)アルキル)NH3 +から選択される]
を形成するステップと、
(c)式(IXA)の塩を水素化して、式(XA)の塩
(d)式(XA)の塩を、トランスアミナーゼまたはアミンオキシダーゼ/イミンレダクターゼ酵素で処理して、3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸(II)を提供するステップと
を含む、方法。 - ステップ(a)が、請求項11に記載の方法を含む、請求項21または22に記載の方法。
- α−ケト酸官能基を脱炭酸し、同時に炭素−炭素二重結合を還元する、請求項24に記載の方法。
- 脱炭酸が、デカルボキシラーゼ酵素の存在下で行われる、請求項24から27のいずれか一項に記載の方法。
- 炭素−炭素二重結合の還元が、エノエートレダクターゼ酵素の存在下で行われる、請求項24から28のいずれか一項に記載の方法。
- 3−イソブチリデン−2−オキソペンタン二酸、
3−イソブチル−2−オキソペンタン二酸、および
3−ホルミル−5−メチル−3−ペンテン酸
から選択される化合物、
またはその塩、(C1〜C6)アルキルエステルもしくは環化異性体。 - (R)−3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸を(S)−3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸に変換するための方法であって、(R)−3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸を、トランスアミナーゼ酵素またはアミンデヒドロゲナーゼ/イミンレダクターゼ酵素で処理するステップを含む、方法。
- (R)−および(S)−3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸の混合物中における(S)−3−アミノメチル−5−メチルヘキサン酸の割合を増大させるための方法であって、混合物を、トランスアミナーゼ酵素またはアミンデヒドロゲナーゼ/イミンレダクターゼ酵素で処理するステップを含む、方法。
- アミノ酸配列
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHX27RGTVVVTHGEGPYX41VDVX45GRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRX147NAYHGVTAVSASMTGX163PX165NSVFGLPLPGFVHLX180CPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELX304KRLETAIEAIEEFPHGFTAX324GHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSX401RIANTCX408DLGLICX415X416X417GQSVILX424PPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号1)
[ここで、
X27は、グルタミン(Q)およびグルタミン酸(E)から選択され、
X41は、イソロイシン(I)およびバリン(V)から選択され、
X45は、アスパラギン(N)およびヒスチジン(H)から選択され、
X147は、アスパラギン(N)およびグルタミン(Q)から選択され、
X163は、ロイシン(L)およびメチオニン(M)から選択され、
X165は、チロシン(Y)およびヒスチジン(H)から選択され、
X180は、トレオニン(T)、グリシン(G)およびセリン(S)から選択され、
X304は、アラニン(A)およびセリン(S)から選択され、
X324は、グリシン(G)およびセリン(S)から選択され、
X401は、リシン(K)およびグルタミン酸(E)から選択され、
X408は、トレオニン(T)およびグルタミン(Q)から選択され、
X415は、セリン(S)およびアラニン(A)から選択され、
X416は、プロリン(P)およびアラニン(A)から選択され、
X417は、ロイシン(L)およびメチオニン(M)から選択され、
X424は、システイン(C)およびセリン(S)から選択される]
と少なくとも95%相同性を有するアミノ酸配列を有する、トランスアミナーゼ酵素。 - 配列番号1のアミノ酸配列を有する、請求項34に記載のトランスアミナーゼ酵素。
- X27がグルタミン酸(E)であり、
X147がグルタミン(Q)であり、
X165がヒスチジン(H)であり、
X304がセリン(S)であり、
X324がグリシン(G)であり、
X401がリシン(K)であり、
X408がグルタミン(Q)であり、
X416がアラニン(A)であり、
X417がメチオニン(M)であり、
X424がセリン(S)である、
請求項34または35に記載のトランスアミナーゼ酵素。 - MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHQRGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRNNAYHGVTAVSASMTGLPYNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELAKRLETAIEAIEEFPHGFTASGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSERIANTCTDLGLICSPMGQSVILCPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号2);
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRNNAYHGVTAVSASMTGLPYNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSALGQSVILCPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号3);
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYVVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSALGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号4);
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGMPHNSVFGLPLPGFVHLTCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPALSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号5);
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYVVDVNGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLGCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICAAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号6);および
MNKPQSWEARAETYSLYGFTDMPSLHERGTVVVTHGEGPYIVDVHGRRYLDANSGLYNMVAGFDHKGLIDAAKAQYERFPGYHSFFGRMSDQTVMLSEKLVEVSPFDSGRVFYTNSGSEANDTMVKMLWFLHAAEGKPQKRKILTRQNAYHGVTAVSASMTGLPHNSVFGLPLPGFVHLSCPHYWRYGEEGETEEQFVARLARELEETIQREGADTIAGFFAEPVMGAGGVIPPAKGYFQAILPILRKYDIPVISDEVICGFGRTGNTWGCVTYDFTPDAIISSKNLTAGFFPVGAVILGPELSKRLETAIEAIEEFPHGFTAGGHPVGCAIALKAIDVVMNEGLAENVRRLAPRFEERLKHIAERPNIGEYRGIGFMWALEAVKDKASKTPFDGNLSVSKRIANTCQDLGLICSAMGQSVILSPPFILTEAQMDEMFDKLEKALDKVFAEVA(配列番号7)
から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項35に記載のトランスアミナーゼ酵素。
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